TWI664180B - 抑制病毒聚合酶之組合物及方法 - Google Patents

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Abstract

本發明提供如本文所述之式I化合物：
式I化合物可用於抑制病毒RNA聚合酶活性及病毒複製之方法中。本發明亦提供包含式I化合物之醫藥組合物以及使用式I化合物治療病毒感染之方法。

Description

抑制病毒聚合酶之組合物及方法 相關申請案
本申請案主張2012年4月18日申請之美國臨時專利申請案第61/625,994號之優先權。
病毒係動物(具體而言包括哺乳動物及人類)之許多感染性疾病之原因。與細菌感染不同，有效預防及治療病毒感染之藥劑相對較少。人們現已充分瞭解病毒性疾病之生物學，包括病毒基因組轉錄、轉譯及複製。在含RNA病毒中，一種重要的酶係RNA依賴性RNA聚合酶，其負責病毒基因組複製。RNA依賴性RNA聚合酶係於所有無具有負義RNA之DNA階段之含RNA病毒之基因組中編碼之基本蛋白。該酶催化與給定RNA模板互補之RNA股之合成。由於病毒複製取決於RNA聚合酶，故此酶係研發新穎抗病毒化合物之有前景的靶標。
本發明提供式I化合物(包括其醫藥上可接受之鹽)，其用於抑制病毒RNA聚合酶活性或病毒複製及治療病毒感染。該等化合物之特徵部分在於尤其與腸內投與(具體而言包括經口投與)結合時活性醫藥成份之有利藥物動力學。本發明亦提供包含一或多種式I化合物或其醫藥上可接受之鹽之醫藥組合物以及其製備方法。亦提供抑制病毒RNA聚合酶活性、病毒複製及治療病毒感染之方法。
圖1係繪示按單一劑量經口投與大鼠化合物12i(三角形，對照)及化合物30f(圓形，實驗)之化合物12i之血漿藥物動力學的圖形。N=4隻/組。
圖2係繪示化合物12i(化合物1)對感染黃熱病病毒之倉鼠之存活之影響的圖形。**，與安慰劑相比P<0.01。***，與安慰劑相比P<0.001。dpi，感染後天數。
本發明之一態樣係由式I代表之化合物或其醫藥上可接受之鹽：
其中：L1、L2、L3、L4、L5及L6各自獨立地係鍵或-C(R0)2-O-連接體；R0在每次出現時獨立地係H或(C1-C6)烷基；R1、R2及R3各自獨立地選自由H、胺醯基、胺基亞硫醯基、醯基、R10OC(O)-、磷醯基及胺基磷醯基組成之群；或R1與R2一起或R2與R3一起選自由羰基、硫羰基、磷醯基及(C1-C6)烷基磷醯基組成之群；R4、R5及R6各自獨立地選自由H、醯基、磷醯基、烷硫基、R10OC(O)-及胺基烷基組成之群；R7係H；或R6、R7及其所鍵結之氮一起代表-N=CR20R21；R10在每次出現時獨立地選自由H、(C1-C6)烷基、芳基、雜芳基、芳烷基及雜芳烷基組成之群；R20及R21各自獨立地選自由H、烷基、胺基、芳基、雜芳基、芳 烷基及雜芳烷基組成之群；條件係由式I代表之化合物不為
在某些實施例中，式I化合物係由式IA代表之化合物或其醫藥上可接受之鹽：
在前述中任一者之某些實施例中，L1-R1係H。
在前述中任一者之某些實施例中，L2-R2係H。
在前述中任一者之某些實施例中，L3-R3係H。
或者，在前述中任一者之某些實施例中，L2-R2與L3-R3相同。
在前述中任一者之某些實施例中，L2-R2及L3-R3中之每一者係H。
或者，在前述中任一者之某些實施例中，L1-R1與L3-R3相同。
在前述中任一者之某些實施例中，L1-R1與L2-R2相同。
在前述中任一者之某些實施例中，L1-R1及L2-R2中之每一者係H。
在前述中任一者之某些實施例中，L1-R1及L3-R3中之每一者係H。
或者，在前述中任一者之某些實施例中，L1-R1、L2-R2及L3-R3相同；且L1-R1、L2-R2及L3-R3中無一者係H。
在前述中任一者之某些實施例中，胺醯基在每次出現時獨立地係-C(=O)CH(NH2)(CH2)nCHR30R31，其中n係0或1；且R30及R31各自獨 立地選自由H、(C1-C6)烷基、芳基、雜芳基、芳烷基及雜芳烷基組成之群。
在某些實施例中，R30及R31各自獨立地選自由H及(C1-C6)烷基組成之群。
在某些實施例中，R30及R31各自獨立地係(C1-C6)烷基。
在某些實施例中，n係0；且R30及R31各自獨立地係甲基。
在前述中任一者之某些實施例中，胺基亞硫醯基在每次出現時獨立地係-C(=S)CH(NH2)(CH2)nCHR30R31，其中n係0或1；且R30及R31各自獨立地選自由H、(C1-C6)烷基、芳基、雜芳基、芳烷基及雜芳烷基組成之群。
在某些實施例中，R30及R31各自獨立地選自由H及(C1-C6)烷基組成之群。
在某些實施例中，R30及R31各自獨立地係(C1-C6)烷基。
在某些實施例中，n係0；且R30及R31各自獨立地係甲基。
在前述中任一者之某些實施例中，醯基在每次出現時獨立地係-C(=O)R40，其中R40係選自由H、(C1-C6)烷基、芳基、雜芳基、芳烷基及雜芳烷基組成之群。
在某些實施例中，R40係H。
在某些實施例中，R40係(C1-C6)烷基。
在前述中任一者之某些實施例中，R10在每次出現時獨立地係H。
或者，在前述中任一者之某些實施例中，R10在每次出現時獨立地係(C1-C6)烷基。
在前述中任一者之某些實施例中，胺基磷醯基在每次出現時獨立地係-P(=O)(OR50)NR51R52，其中R50係選自由H、(C1-C6)烷基、芳基、芳基烷基、雜芳基、雜芳 烷基及-(CH2)mSC(=O)C(CH3)2CH2OH組成之群；m係1或2；R51係H或(C1-C6)烷基；且R52係選自由H、(C1-C6)烷基、芳基、芳烷基、雜芳基、雜芳烷基及-CR60R61C(=O)OR62組成之群，其中R60及R61各自獨立地係H或(C1-C6)烷基；且R62係選自由H、(C1-C6)烷基、芳基、芳烷基、雜芳基、雜芳烷基組成之群。
在前述中任一者之某些實施例中，R50係H。
在前述中任一者之某些實施例中，R50係芳基。
在前述中任一者之某些實施例中，R50係-(CH2)mSC(=O)C(CH3)2CH2OH。
在前述中任一者之某些實施例中，m係2。
在前述中任一者之某些實施例中，R51係H。
在前述中任一者之某些實施例中，R52係芳烷基。
或者，在前述中任一者之某些實施例中，R52係-CR60R61C(=O)OR62。
在前述中任一者之某些實施例中，R60係H；R61係(C1-C6)烷基；且R62係(C1-C6)烷基。
在某些實施例中，式I化合物係由式IB代表之化合物或其醫藥上可接受之鹽：
在前述中任一者之某些實施例中，R7係H；L4、L5及L6中之每一 者係鍵；且R4、R5及R6中之任兩者各自係H。
在前述中任一者之某些實施例中，R4及R5中之每一者係H。
或者，在前述中任一者之某些實施例中，R5及R6中之每一者係H。
或者，在前述中任一者之某些實施例中，R4及R6中之每一者係H。
在前述中任一者之某些實施例中，R4、R5及R6中任一R10OC(O)-之R10係H或(C1-C6)烷基。
在前述中任一者之某些實施例中，R4、R5及R6中之任一胺基烷基係-CH2N(CH3)2。
在某些實施例中，L4、L5及L6中之每一者係鍵；且R6、R7及其所鍵結之氮一起代表-N=CR20R21。
在前述中任一者之某些實施例中，R20係H且R21係胺基。
在前述中任一者之某些實施例中，R4及R5中之每一者係H。
或者，在某些實施例中，R7係H；L4、L5及L6中之至少一者係-C(R0)2-O-連接體；且鍵結至該至少一個-C(R0)2-O-連接體之任一R4、R5或R6係磷醯基。
定義
本文所用術語「烷基」係業內術語且係指飽和脂肪族基團，包括直鏈烷基、具支鏈烷基、環烷基(脂環族)基團、經烷基取代之環烷基及經環烷基取代之烷基。在某些實施例中，直鏈或具支鏈烷基在其主鏈中具有約30個或更少個碳原子(例如，對於直鏈C1-C30、對於具支鏈C3-C30)，且或者，約20個或更少個。同樣，環烷基在其環結構中具有約3個至約10個碳原子，且或者在環結構中具有約5個、6個或7個碳。
術語「胺基」係業內術語且如本文所用係指未經取代及經取代之胺二者，例如，可由以下通式代表之部分： 其中Ra、Rb及Rc各自獨立地代表氫、烷基、烯基、-(CH2)x-Rd，或Ra及Rb連同其所附接之N原子一起完成在環結構中具有4至8個原子之雜環；Rd代表芳基、環烷基、環烯基、雜環基或多環基；且x係0或在1至8範圍內之整數。在某些實施例中，Ra或Rb中僅一者可為羰基，例如，Ra、Rb及氮一起不形成醯亞胺。在其他實施例中，Ra及Rb(及視情況Rc)各自獨立地代表氫、烷基、烯基或-(CH2)x-Rd。
術語「醯基」係業內術語且如本文所用係指RCO-形式之任一基團，其中R係任一有機基團，例如，烷基、芳基、雜芳基、芳烷基及雜芳烷基。代表性醯基包括乙醯基、苯甲醯基及丙二醯基。
本文所用術語「胺基烷基」係指經一或多個胺基取代之烷基。
術語「胺醯基」係業內術語且如本文所用係指經一或多個胺基取代之醯基。
本文所用術語「胺基亞硫醯基」係指胺醯基類似物，其中RC(O)-之O經硫替代，因此具有RC(S)-形式。
術語「磷醯基」係業內術語且如本文所用一般可由下式代表：
其中Q50代表S或O，且R59代表氫、低碳烷基或芳基；例如，-P(O)(OMe)-或-P(O)(OH)2。當用於取代(例如)烷基時，磷醯基烷基之磷醯基可由以下通式代表：
其中Q50及R59各自獨立地係如上文所定義，且Q51代表O、S或 N；例如，-O-P(O)(OH)OMe或-NH-P(O)(OH)2。當Q50係S時，磷醯基部分係「硫代磷酸酯」。
本文所用術語「胺基磷醯基」係指經至少一個如本文所定義胺基取代之磷醯基；例如，-P(O)(OH)NMe2。
本文所用術語「羰基」係指-C(O)-。
本文所用術語「硫羰基」係指-C(S)-。
本文所用術語「烷基磷醯基」係指經至少一個如本文所定義烷基取代之磷醯基；例如，-P(O)(OH)Me。
本文所用術語「烷硫基」係指烷基-S-。
術語「芳基」係業內術語且如本文所用係指包括單環、二環及多環芳族烴基，例如，苯、萘、蒽及芘。芳族環可在一或多個環位置處經一或多個取代基取代，例如鹵素、疊氮基、烷基、芳烷基、烯基、炔基、環烷基、羥基、烷氧基、胺基、硝基、氫硫基、亞胺基、醯胺基、膦酸酯基、亞膦酸酯基、羰基、羧基、矽基、醚基、烷硫基、磺醯基、磺醯胺基、酮基、醛基、酯基、雜環基、芳族或雜芳族部分、氟烷基(例如三氟甲基)、氰基或諸如此類。術語「芳基」亦包括具有兩個或更多個環狀環(其中兩個毗連環共用兩個或更多個碳)之多環狀環系統(該等環係「稠合環」)，其中該等環中之至少一者係芳族烴，例如，其他環狀環可為環烷基、環烯基、環炔基、芳基、雜芳基及/或雜環基。
術語「雜原子」為業內熟知，且包括除碳或氫以外之任一元素原子。說明性雜原子包括硼、氮、氧、磷、硫及硒，且或者氧、氮或硫。
術語「雜芳基」係業內術語且如本文所用係指在環結構中具有一或多個雜原子之單環、二環及多環芳族基團，例如，吡咯、呋喃、噻吩、咪唑、噁唑、噻唑、三唑、吡唑、吡啶、吡嗪、嗒嗪及嘧啶及諸 如此類。「雜芳基」可在一或多個環位置處經一或多個取代基取代，例如鹵素、疊氮基、烷基、芳烷基、烯基、炔基、環烷基、羥基、烷氧基、胺基、硝基、氫硫基、亞胺基、醯胺基、膦酸酯基、亞膦酸酯基、羰基、羧基、矽基、醚基、烷硫基、磺醯基、磺醯胺基、酮基、醛基、酯基、雜環基、芳族或雜芳族部分、氟烷基(例如三氟甲基)、氰基或諸如此類。術語「雜芳基」亦包括具有兩個或更多個環狀環(其中兩個毗連環共用兩個或更多個碳)之多環狀環系統(該等環係「稠合環」)，其中該等環中之至少一者係在環結構中具有一或多個雜原子之芳族基團，例如，其他環狀環可為環烷基、環烯基、環炔基、芳基、雜芳基及/或雜環基。
術語「芳烷基」係業內術語且如本文所用係指經芳基取代之烷基。
術語「雜芳烷基」係業內術語且如本文所用係指經雜芳基取代之烷基。
本發明組合物中所包含之某些化合物可以特定幾何或立體異構形式存在。另外，本發明化合物亦可具有光學活性。本發明涵蓋所有屬於本發明範圍內之化合物，包括順式-及反式-異構體、(R)-及(S)-對映異構體、非對映異構體、(D)-異構體、(L)-異構體、其外消旋混合物及其其他混合物。額外不對稱碳原子可存於取代基(例如烷基)中。本發明意欲包括所有該等異構體以及其混合物。
例如，若期望本發明化合物之特定對映異構體，則其可藉由不對稱合成或藉由與對掌性助劑衍生來製備，其中分離所得非對映混合物並解離輔助基團以提供純期望對映異構體。或者，若分子含有鹼性官能基(例如胺基)或酸性官能基(例如羧基)，則與適當光學活性酸或鹼形成非對映鹽，隨後藉由分段結晶或業內熟知之層析方式拆分由此形成之非對映異構體，且隨後回收純對映異構體。
應瞭解，「取代」或「經取代」包括以下隱含條件：該取代係按照取代原子及取代基之容許化合價，且該取代產生穩定化合物，例如，其無法藉由(例如)重排、環化、消去或其他反應自發地歷經轉變。
亦預計術語「經取代」包括有機化合物之所有可容許取代基。在廣泛態樣中，可容許取代基包括有機化合物之非環狀及環狀、具支鏈及不具支鏈、碳環及雜環、芳族及非芳族取代基。說明性取代基包括(例如)彼等上文所述者。適當有機化合物之可容許取代基可為一或多個且相同或不同。出於本發明之目的，雜原子(例如氮)可具有氫取代基及/或任何滿足雜原子化合價之本文所述有機化合物之可容許取代基。有機化合物之可容許取代基並非意欲以任一方式限制本發明。
出於本發明之目的，化學元素係根據元素週期表(CAS版本，Handbook of Chemistry and Physics，第67版，1986-87，內封面)來確定。
本文其他化學術語係按照業內習用用法使用，如The McGraw-Hill Dictionary of Chemical Terms(Parker,S.編輯，1985),McGraw-Hill,San Francisco所例示(其以引用方式併入本文中)。除非另有定義，否則本文所用所有技術及科學術語均具有與熟習本發明相關技術者通常所瞭解相同之含義。
本文所用術語「保護基團」係指保護潛在反應性官能基免於不期望化學轉變之臨時取代基。該等保護基團之實例包括羧酸酯及酸之酯基、醇之醚基、以及醛及酮之縮醛基及縮酮基。例如，本文所用片語「N-末端保護基團」或「胺基保護基團」係指可用於在合成程序期間保護胺基酸或肽之N-末端免於不合意反應之各種胺基保護基團。適宜基團之實例包括醯基保護基團，例如，甲醯基、丹磺醯基、乙醯基、苯甲醯基、三氟乙醯基、琥珀醯基及甲氧基琥珀醯基；芳族胺甲 酸乙酯保護基團，例如，苄氧基羰基(Cbz)；及脂肪族胺甲酸乙酯保護基團，例如第三丁氧基羰基(Boc)或9-茀基甲氧基羰基(Fmoc)。
術語「胺基保護基團」或「N-末端保護基團」係指彼等意欲在合成程序期間保護胺基酸或肽之α-N-末端或者保護胺基酸或肽之胺基免於不合意反應之基團。常用N-保護基團係揭示於Greene,Protective Groups In Organic Synthesis,(John Wiley & Sons,New York(1981))中，其特此以引用方式併入本文中。另外，保護基團可用作前藥，其藉由(例如)酶水解作用在活體內容易地解離以釋放生物活性母體。α-N-保護基團包含低碳烷醯基，例如甲醯基、乙醯基(「Ac」)、丙醯基、新戊醯基、第三丁基乙醯基及諸如此類；其他醯基包括2-氯乙醯基、2-溴乙醯基、三氟乙醯基、三氯乙醯基、鄰苯二甲醯基、鄰-硝基苯氧基乙醯基、氯丁醯基、苯甲醯基、4-氯苯甲醯基、4-溴苯甲醯基、4-硝基苯甲醯基及諸如此類；磺醯基，例如苯磺醯基、對-甲苯磺醯基及諸如此類；形成胺甲酸酯之基團，例如苄氧基羰基、對-氯苄氧基羰基、對-甲氧基苄氧基羰基、對-硝基苄氧基羰基、2-硝基苄氧基羰基、對-溴苄氧基羰基、3,4-二甲氧基苄氧基羰基、3,5-二甲氧基苄氧基羰基、2，4-二甲氧基苄氧基羰基、4-乙氧基苄氧基羰基、2-硝基-4,5-二甲氧基苄氧基羰基、3,4,5-三甲氧基苄氧基羰基、1-(對-聯苯)-1-甲基乙氧基羰基、α,α-二甲基-3,5-二甲氧基苄氧基羰基、二苯甲基氧基羰基、第三丁氧基羰基、二異丙基甲氧基羰基、異丙氧基羰基、乙氧基羰基、甲氧基羰基、烯丙氧基羰基、2,2,2-三氯乙氧基羰基、苯氧基羰基、4-硝基苯氧基羰基、茀基-9-甲氧基羰基、環戊氧基羰基、金剛烷基氧基羰基、環己氧基羰基、苯基硫羰基及諸如此類；芳基烷基，例如苄基、三苯基甲基、苄氧基甲基、9-茀基甲氧基羰基(Fmoc)及諸如此類；及矽基，例如三甲基矽基及諸如此類。又一些其他實例包括2,3-二甲基-2-丁基、琥珀醯基、甲氧基琥珀醯基、環庚 基、己二醯基、壬二醯基、丹磺醯基、苄氧基羰基、甲氧基壬二醯基、甲氧基己二醯基、甲氧基環庚基及2,4-二硝基苯基。
術語「羧基保護基團」或「C-末端保護基團」係指在實施涉及化合物之其他官能位點之反應時用於阻擋或保護羧酸官能性之羧酸保護酯基或醯胺基團。羧基保護基團係揭示於Greene,Protective Groups in Organic Synthesis第152至186頁(1981)中，其特此以引用方式併入本文中。另外，羧基保護基團可用作前藥，藉此羧基保護基團可藉由(例如)酶水解作用在活體內容易地解離以釋放生物活性母體。該等羧基保護基團為熟習此項技術者所熟知且在青黴素及頭孢菌素領域中已廣泛地用於保護羧基，如美國專利第3,840,556號及第3,719,667號中所述，其揭示內容特此以引用方式併入本文中。代表性羧基保護基團係C1-C8低碳烷基(例如，甲基、乙基或第三丁基及諸如此類)；芳基烷基，例如苯乙基或苄基及其經取代衍生物，例如烷氧基苄基或硝基苄基及諸如此類；芳基烯基，例如苯基乙烯基及諸如此類；芳基及其經取代衍生物，例如5-二氫茚基及諸如此類；二烷基胺基烷基，例如二甲基胺基乙基及諸如此類；烷醯氧基烷基，例如乙醯氧基甲基、丁醯氧基甲基、戊醯氧基甲基、異丁醯氧基甲基、異戊醯氧基甲基、1-(丙醯氧基)-1-乙基、1-(新戊醯氧基1)-1-乙基、1-甲基-1-(丙醯氧基)-1-乙基、新戊醯氧基甲基、丙醯氧基甲基及諸如此類；環烷醯氧基烷基，例如環丙基羰基氧基甲基、環丁基羰基氧基甲基、環戊基羰基氧基甲基、環己基羰基氧基甲基及諸如此類；芳醯氧基烷基，例如苯甲醯氧基甲基、苯甲醯氧基乙基及諸如此類；芳基烷基羰基氧基烷基，例如苄基羰基氧基甲基、2-苄基羰基氧基乙基及諸如此類；烷氧基羰基烷基或環烷基氧基羰基烷基，例如甲氧基羰基甲基、環己氧基羰基甲基、1-甲氧基羰基-1-乙基及諸如此類；烷氧基羰基氧基烷基或環烷基氧基羰基氧基烷基，例如甲氧基羰基氧基甲基、第三丁氧基羰基氧 基甲基、1-乙氧基羰基氧基-1-乙基、1-環己氧基羰基氧基-1-乙基及諸如此類；芳基氧基羰基氧基烷基，例如2-(苯氧基羰基氧基)乙基、2-(5-二氫茚基氧基羰基氧基)乙基及諸如此類；烷氧基烷基羰基氧基烷基，例如2-(1-甲氧基-2-甲基丙-2-醯氧基)乙基及諸如此類；芳基烷基氧基羰基氧基烷基，例如2-(苄氧基羰基氧基)乙基及諸如此類；芳基烯基氧基羰基氧基烷基，例如2-(3-苯基丙烯-2-基氧基羰基氧基)乙基及諸如此類；烷氧基羰基胺基烷基，例如第三丁氧基羰基胺基甲基及諸如此類；烷基胺基羰基胺基烷基，例如甲基胺基羰基胺基甲基及諸如此類；烷醯基胺基烷基，例如乙醯基胺基甲基及諸如此類；雜環羰基氧基烷基，例如4-甲基六氫吡嗪基羰基氧基甲基及諸如此類；二烷基胺基羰基烷基，例如二甲基胺基羰基甲基、二乙基胺基羰基甲基及諸如此類；(5-(低碳烷基)-2-側氧基-1,3-二氧雜環戊烯-4-基)烷基，例如(5-第三丁基-2-側氧基-1,3-二氧雜環戊烯-4-基)甲基及諸如此類；及(5-苯基-2-側氧基-1,3-二氧雜環戊烯-4-基)烷基，例如(5-苯基-2-側氧基-1,3-二氧雜環戊烯-4-基)甲基及諸如此類。代表性醯胺羧基保護基團係胺基羰基及低碳烷基胺基羰基。舉例而言，天冬胺酸可在α-C-末端處經酸不穩定基團(例如，第三丁基)保護且在β-C-末端處經氫化不穩定基團(例如，苄基)保護，然後在合成期間選擇性去保護。如上文所提及，經保護之羧基亦可為低碳烷基酯、環烷基酯或芳基烷基酯，例如，甲基酯、乙基酯、丙基酯、異丙基酯、丁基酯、第二丁基酯、異丁基酯、戊基酯、異戊基酯、辛基酯、環己基酯、苯基乙基酯及諸如此類，或烷醯氧基烷基酯、環烷醯氧基烷基酯、芳醯氧基烷基酯或芳基烷基羰基氧基烷基酯。
本文所用術語「胺基酸」係業內術語且係指α-胺基羧酸及β-胺基羧酸，包括所謂的天然存在α-胺基酸及非天然存在胺基酸。天然存在α-胺基酸特定而言包括丙胺酸(Ala)、精胺酸(Arg)、天冬醯胺酸 (Asn)、天冬胺酸(Asp)、半胱胺酸(Cys)、麩胺酸(Glu)、麩醯胺酸(Gln)、甘胺酸(Gly)、組胺酸(His)、異白胺酸(Ile)、白胺酸(Leu)、離胺酸(Lys)、甲硫胺酸(Met)、鳥胺酸(Orn)、苯丙胺酸(Phe)、脯胺酸(Pro)、硒代半胱胺酸、絲胺酸(Ser)、牛磺酸、蘇胺酸(Thr)、色胺酸(Trp)、酪胺酸(Tyr)及纈胺酸(Val)。極性天然存在α-胺基酸包括精胺酸、天冬醯胺酸、天冬胺酸、半胱胺酸、麩胺酸、麩醯胺酸、組胺酸、離胺酸、鳥胺酸、絲胺酸、蘇胺酸及酪胺酸。非極性天然存在α-胺基酸包括丙胺酸、甘胺酸、異白胺酸、白胺酸、甲硫胺酸、苯丙胺酸、脯胺酸、色胺酸及纈胺酸。
非天然存在胺基酸包括(但不限於)D-胺基酸(即，對掌性與天然存在形式相反之胺基酸)、N-α-甲基胺基酸、C-α-甲基胺基酸、β-甲基胺基酸、β-丙胺酸(β-Ala)、正纈胺酸(Nva)、正白胺酸(Nle)、4-胺基丁酸(γ-Abu)、2-胺基異丁酸(Aib)、6-胺基己酸(ε-Ahx)、鳥胺酸(orn)、羥基脯胺酸(Hyp)、肌胺酸、瓜胺酸、磺基丙胺酸、環己基丙胺酸、α-胺基異丁酸、第三丁基甘胺酸、第三丁基丙胺酸、3-胺基丙酸、2,3-二胺基丙酸(2,3-diaP)、D-或L-苯基甘胺酸、D-或L-2-萘基丙胺酸(2-Nal)、1,2,3,4-四氫異喹啉-3-羧酸(Tic)、D-或L-2-噻吩基丙胺酸(Thi)、D-或L-3-噻吩基丙胺酸、D-或L-1-、2-、3-或4-芘基丙胺酸、D-或L-(2-吡啶基)-丙胺酸、D-或L-(3-吡啶基)-丙胺酸、D-或L-(2-吡嗪基)-丙胺酸、D-或L-(4-異丙基)-苯基甘胺酸、D-(三氟甲基)-苯基甘胺酸、D-(三氟甲基)-苯丙胺酸、D-對-氟苯丙胺酸、D-或L-對-聯苯丙胺酸、D-或L-對-甲氧基聯苯丙胺酸、甲硫胺酸亞碸(MSO)及高精胺酸(Har)。其他實例包括D-或L-2-吲哚(烷基)丙胺酸及D-或L-烷基丙胺酸，其中烷基係經取代或未經取代之甲基、乙基、丙基、己基、丁基、戊基、異丙基、異丁基或異戊基；及磷酸化或硫酸化(例如，-SO3H)之非羧酸鹽胺基酸。
非天然存在胺基酸之其他實例包括3-(2-氯苯基)-丙胺酸、3-氯-苯丙胺酸、4-氯-苯丙胺酸、2-氟-苯丙胺酸、3-氟-苯丙胺酸、4-氟-苯丙胺酸、2-溴-苯丙胺酸、3-溴-苯丙胺酸、4-溴-苯丙胺酸、高苯丙胺酸、2-甲基-苯丙胺酸、3-甲基-苯丙胺酸、4-甲基-苯丙胺酸、2,4-二甲基-苯丙胺酸、2-硝基-苯丙胺酸、3-硝基-苯丙胺酸、4-硝基-苯丙胺酸、2,4-二硝基-苯丙胺酸、1,2,3,4-四氫異喹啉-3-甲酸、1,2,3,4-四氫β-哢啉-3-甲酸、1-萘基丙胺酸、2-萘基丙胺酸、五氟苯丙胺酸、2,4-二氯-苯丙胺酸、3,4-二氯-苯丙胺酸、3,4-二氟-苯丙胺酸、3,5-二氟-苯丙胺酸、2,4,5-三氟-苯丙胺酸、2-三氟甲基-苯丙胺酸、3-三氟甲基-苯丙胺酸、4-三氟甲基-苯丙胺酸、2-氰基-苯丙胺酸、3-氰基-苯丙胺酸、4-氰基-苯丙胺酸、2-碘-苯丙胺酸、3-碘-苯丙胺酸、4-碘-苯丙胺酸、4-甲氧基苯丙胺酸、2-胺基甲基-苯丙胺酸、3-胺基甲基-苯丙胺酸、4-胺基甲基-苯丙胺酸、2-胺基甲醯基-苯丙胺酸、3-胺基甲醯基-苯丙胺酸、4-胺基甲醯基-苯丙胺酸、間-酪胺酸、4-胺基-苯丙胺酸、苯乙烯基丙胺酸、2-胺基-5-苯基-戊酸、9-蒽基丙胺酸、4-第三丁基-苯丙胺酸、3,3-二苯基丙胺酸、4,4’-二苯基丙胺酸、苯甲醯基苯丙胺酸、α-甲基-苯丙胺酸、α-甲基-4-氟-苯丙胺酸、4-噻唑基丙胺酸、3-苯并噻吩基丙胺酸、2-噻吩基丙胺酸、2-(5-溴噻吩基)-丙胺酸、3-噻吩基丙胺酸、2-呋喃基丙胺酸、2-吡啶基丙胺酸、3-吡啶基丙胺酸、4-吡啶基丙胺酸、2,3-二胺基丙酸、2,4-二胺基丁酸、烯丙基甘胺酸、2-胺基-4-溴-4-戊烯酸、炔丙基甘胺酸、4-胺基環戊-2-烯甲酸、3-胺基環戊烷甲酸、7-胺基-庚酸、二丙基甘胺酸、六氫吡啶酸、氮雜環丁烷-3-甲酸、環丙基甘胺酸、環丙基丙胺酸、2-甲氧基-苯基甘胺酸、2-噻吩基甘胺酸、3-噻吩基甘胺酸、α-苄基-脯胺酸、α-(2-氟-苄基)-脯胺酸、α-(3-氟-苄基)-脯胺酸、α-(4-氟-苄基)-脯胺酸、α-(2-氯-苄基)-脯胺酸、α-(3-氯-苄基)-脯胺酸、α-(4-氯-苄基)-脯胺酸、α-(2- 溴-苄基)-脯胺酸、α-(3-溴-苄基)-脯胺酸、α-(4-溴-苄基)-脯胺酸、α-苯乙基-脯胺酸、α-(2-甲基-苄基)-脯胺酸、α-(3-甲基-苄基)-脯胺酸、α-(4-甲基-苄基)-脯胺酸、α-(2-硝基-苄基)-脯胺酸、α-(3-硝基-苄基)-脯胺酸、α-(4-硝基-苄基)-脯胺酸、α-(1-萘基甲基)-脯胺酸、α-(2-萘基甲基)-脯胺酸、α-(2,4-二氯-苄基)-脯胺酸、α-(3,4-二氯-苄基)-脯胺酸、α-(3,4-二氟-苄基)-脯胺酸、α-(2-三氟甲基-苄基)-脯胺酸、α-(3-三氟甲基-苄基)-脯胺酸、α-(4-三氟甲基-苄基)-脯胺酸、α-(2-氰基-苄基)-脯胺酸、α-(3-氰基-苄基)-脯胺酸、α-(4-氰基-苄基)-脯胺酸、α-(2-碘-苄基)-脯胺酸、α-(3-碘-苄基)-脯胺酸、α-(4-碘-苄基)-脯胺酸、α-(3-苯基-烯丙基)-脯胺酸、α-(3-苯基-丙基)-脯胺酸、α-(4-第三丁基-苄基)-脯胺酸、α-二苯甲基-脯胺酸、α-(4-聯苯甲基)-脯胺酸、α-(4-噻唑基甲基)-脯胺酸、α-(3-苯并[b]苯硫基甲基)-脯胺酸、α-(2-苯硫基甲基)-脯胺酸、α-(5-溴-2-苯硫基甲基)-脯胺酸、α-(3-苯硫基甲基)-脯胺酸、α-(2-呋喃基甲基)-脯胺酸、α-(2-吡啶基甲基)-脯胺酸、α-(3-吡啶基甲基)-脯胺酸、α-(4-吡啶基甲基)-脯胺酸、α-烯丙基-脯胺酸、α-丙炔基-脯胺酸、γ-苄基-脯胺酸、γ-(2-氟-苄基)-脯胺酸、γ-(3-氟-苄基)-脯胺酸、γ-(4-氟-苄基)-脯胺酸、γ-(2-氯-苄基)-脯胺酸、γ-(3-氯-苄基)-脯胺酸、γ-(4-氯-苄基)-脯胺酸、γ-(2-溴-苄基)-脯胺酸、γ-(3-溴-苄基)-脯胺酸、γ-(4-溴-苄基)-脯胺酸、γ-(2-甲基-苄基)-脯胺酸、γ-(3-甲基-苄基)-脯胺酸、γ-(4-甲基-苄基)-脯胺酸、γ-(2-硝基-苄基)-脯胺酸、γ-(3-硝基-苄基)-脯胺酸、γ-(4-硝基-苄基)-脯胺酸、γ-(1-萘基甲基)-脯胺酸、γ-(2-萘基甲基)-脯胺酸、γ-(2,4-二氯-苄基)-脯胺酸、γ-(3,4-二氯-苄基)-脯胺酸、γ-(3,4-二氟-苄基)-脯胺酸、γ-(2-三氟甲基-苄基)-脯胺酸、γ-(3-三氟甲基-苄基)-脯胺酸、γ-(4-三氟甲基-苄基)-脯胺酸、γ-(2-氰基-苄基)-脯胺酸、γ-(3-氰基-苄基)-脯胺酸、γ-(4-氰基-苄基)-脯胺酸、γ-(2-碘-苄基)-脯胺酸、γ-(3-碘-苄基)-脯胺酸、γ-(4- 碘-苄基)-脯胺酸、γ-(3-苯基-烯丙基-苄基)-脯胺酸、γ-(3-苯基-丙基-苄基)-脯胺酸、γ-(4-第三丁基-苄基)-脯胺酸、γ-二苯甲基-脯胺酸、γ-(4-聯苯甲基)-脯胺酸、γ-(4-噻唑基甲基)-脯胺酸、γ-(3-苯并噻吩基甲基)-脯胺酸、γ-(2-噻吩基甲基)-脯胺酸、γ-(3-噻吩基甲基)-脯胺酸、γ-(2-呋喃基甲基)-脯胺酸、γ-(2-吡啶基甲基)-脯胺酸、γ-(3-吡啶基甲基)-脯胺酸、γ-(4-吡啶基甲基)-脯胺酸、γ-烯丙基-脯胺酸、γ-丙炔基-脯胺酸、反式-4-苯基-吡咯啶-3-甲酸、反式-4-(2-氟-苯基)-吡咯啶-3-甲酸、反式-4-(3-氟-苯基)-吡咯啶-3-甲酸、反式-4-(4-氟-苯基)-吡咯啶-3-甲酸、反式-4-(2-氯-苯基)-吡咯啶-3-甲酸、反式-4-(3-氯-苯基)-吡咯啶-3-甲酸、反式-4-(4-氯-苯基)-吡咯啶-3-甲酸、反式-4-(2-溴-苯基)-吡咯啶-3-甲酸、反式-4-(3-溴-苯基)-吡咯啶-3-甲酸、反式-4-(4-溴-苯基)-吡咯啶-3-甲酸、反式-4-(2-甲基-苯基)-吡咯啶-3-甲酸、反式-4-(3-甲基-苯基)-吡咯啶-3-甲酸、反式-4-(4-甲基-苯基)-吡咯啶-3-甲酸、反式-4-(2-硝基-苯基)-吡咯啶-3-甲酸、反式-4-(3-硝基-苯基)-吡咯啶-3-甲酸、反式-4-(4-硝基-苯基)-吡咯啶-3-甲酸、反式-4-(1-萘基)-吡咯啶-3-甲酸、反式-4-(2-萘基)-吡咯啶-3-甲酸、反式-4-(2,5-二氯-苯基)-吡咯啶-3-甲酸、反式-4-(2,3-二氯-苯基)-吡咯啶-3-甲酸、反式-4-(2-三氟甲基-苯基)-吡咯啶-3-甲酸、反式-4-(3-三氟甲基-苯基)-吡咯啶-3-甲酸、反式-4-(4-三氟甲基-苯基)-吡咯啶-3-甲酸、反式-4-(2-氰基-苯基)-吡咯啶-3-甲酸、反式-4-(3-氰基-苯基)-吡咯啶-3-甲酸、反式-4-(4-氰基-苯基)-吡咯啶-3-甲酸、反式-4-(2-甲氧基-苯基)-吡咯啶-3-甲酸、反式-4-(3-甲氧基-苯基)-吡咯啶-3-甲酸、反式-4-(4-甲氧基-苯基)-吡咯啶-3-甲酸、反式-4-(2-羥基-苯基)-吡咯啶-3-甲酸、反式-4-(3-羥基-苯基)-吡咯啶-3-甲酸、反式-4-(4-羥基-苯基)-吡咯啶-3-甲酸、反式-4-(2,3-二甲氧基-苯基)-吡咯啶-3-甲酸、反式-4-(3,4-二甲氧基-苯基)-吡咯啶-3-甲酸、反式-4-(3,5-二甲氧基-苯基)-吡咯啶-3- 甲酸、反式-4-(2-吡啶基)-吡咯啶-3-甲酸、反式-4-(3-吡啶基)-吡咯啶-3-甲酸、反式-4-(6-甲氧基-3-吡啶基)-吡咯啶-3-甲酸、反式-4-(4-吡啶基)-吡咯啶-3-甲酸、反式-4-(2-噻吩基)-吡咯啶-3-甲酸、反式-4-(3-噻吩基)-吡咯啶-3-甲酸、反式-4-(2-呋喃基)-吡咯啶-3-甲酸、反式-4-異丙基-吡咯啶-3-甲酸、4-膦醯基甲基-苯丙胺酸、苄基-磷酸蘇胺酸、(1’-胺基-2-苯基-乙基)環氧乙烷、(1’-胺基-2-環己基-乙基)環氧乙烷、(1’-胺基-2-[3-溴-苯基]乙基)環氧乙烷、(1’-胺基-2-[4-(苄氧基)苯基]乙基)環氧乙烷、(1’-胺基-2-[3,5-二氟-苯基]乙基)環氧乙烷、(1’-胺基-2-[4-胺基甲醯基-苯基]乙基)環氧乙烷、(1’-胺基-2-[苄氧基-乙基])環氧乙烷、(1’-胺基-2-[4-硝基-苯基]乙基)環氧乙烷、(1’-胺基-3-苯基-丙基)環氧乙烷、(1’-胺基-3-苯基-丙基)環氧乙烷及/或其鹽及/或保護基團變體。
β-胺基酸包括(不限於)β-丙胺酸(3-胺基丙酸)。
本文所用術語「本發明化合物」意指式I化合物及其醫藥上可接受之鹽。
本文所用術語「醫藥上可接受之鹽」包括衍生自無機酸或有機酸之鹽，該等酸包括(例如)鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、高氯酸、磷酸、甲酸、乙酸、乳酸、馬來酸、富馬酸、琥珀酸、酒石酸、羥乙酸、水楊酸、檸檬酸、甲磺酸、苯磺酸、苯甲酸、丙二酸、三氟乙酸、三氯乙酸、萘-2-磺酸及其他酸。醫藥上可接受之鹽形式可包括包含該鹽之分子之比率不為1：1之形式。例如，該鹽可包含每分子鹼一個以上無機酸或有機酸分子，例如每分子式I化合物2個鹽酸分子。作為另一實例，該鹽可包含每分子鹼小於1個無機酸或有機酸分子，例如每分子酒石酸2分子式I化合物。
本文所用術語「載劑」及「醫藥上可接受之載劑」係指與化合物一起投與或經調配用於投與之稀釋劑、佐劑、賦形劑或媒劑。該等醫 藥上可接受之載劑之非限制性實例包括液體，例如水、鹽水及油；及固體，例如阿拉伯膠、明膠、澱粉糊、滑石粉、角蛋白、膠態二氧化矽、尿素及諸如此類。另外，可使用助劑、穩定劑、增稠劑、潤滑劑、矯味劑及著色劑。適宜醫藥載劑之其他實例闡述於E.W.Martin之Remington’s Pharmaceutical Sciences中，其全文以引用方式併入本文中。
本文所用術語「治療」意指預防、停止或減慢個體之疾病或病況之進程、或消除該疾病或病況。在一實施例中「治療」意指停止或減慢個體之疾病或病況之進程、或消除該疾病或病況。在一實施例中，「治療」意指降低疾病或病況之至少一個客觀表現。
本文所用術語「有效量」係指足以產生期望生物效應之量。
本文所用術語「抑制」意指降低客觀上可測量之量或程度。在各實施例中，「抑制」意指與相關對照相比降低至少5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%或95%。在一實施例中「抑制」意指降低100%，即，停止或消除。
本文所用術語「個體」係指哺乳動物。在各實施例中，個體係小鼠、大鼠、兔、貓、狗、豬、綿羊、馬、母牛或非人類靈長類。在一實施例中，個體係人類。
在某些實施例中，由式I代表之化合物係選自由下列組成之群： 、及其醫藥上可接受之鹽。
在某些實施例中，由式I代表之化合物係選自由下列組成之群：(S)-2-胺基-3-甲基丁酸((2R,3R,4S,5S)-5-(4-胺基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-3,4-二羥基吡咯啶-2-基)甲基酯；(2S,3S)-2-胺基-3-甲基戊酸((2R,3R,4S,5S)-5-(4-胺基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-3,4-二羥基吡咯啶-2-基)甲基酯；(S)-2-胺基-4-甲基戊酸((2R,3R,4S,5S)-5-(4-胺基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-3,4-二羥基吡咯啶-2-基)甲基酯；(2S,2’S)-雙(2-胺基-3-甲基丁酸)(2S,3S,4R,5R)-2-(4-胺基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-5-(羥基甲基)吡咯啶-3,4-二基酯；(S)-2-胺基-3-甲基丁酸(2R,3R,4S,5S)-5-(4-胺基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-4-羥基-2-(羥基甲基)吡咯啶-3-基酯；(S)-2-胺基-3-甲基丁酸(2S,3S,4R,5R)-2-(4-胺基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-4-羥基-5-(羥基甲基)吡咯啶-3-基酯；及其醫藥上可接受之鹽。
本發明化合物之一般製備方法：雜環及雜芳基可藉由如文獻中所報導之已知方法來製備(a.由美國化學學會(American Chemical Society)出版之Ring system handbook (1993版)及後續增刊。b. The Chemistry of Heterocyclic Compounds；Weissberger,A.編輯；Wiley：New York,1962。c. Nesynov,E.P.；Grekov,A.P.The chemistry of 1,3,4-oxadiazole derivatives.Russ.Chem.Rev. 1964,33,508-515。d. Advances in Heterocyclic Chemistry；Katritzky,A.R.、Boulton,A.J.編輯；學術出版社：New York,1966。e. In Comprehensive Heterocyclic Chemistry；Potts,K.T.編輯；格蒙出版社(Pergamon Press)：Oxford,1984。f. Eloy,F.A review of the chemistry of 1,2,4-oxadiazoles.Fortschr.Chem.Forsch. 1965,4，第807頁至第876頁。g. Adv.Heterocycl.Chem. 1976。h. Comprehensive Heterocyclic Chemistry；Potts,K.T.編輯；格蒙出版社：Oxford,1984。i. Chem.Rev. 1961 61,87-127。j. 1,2,4-Triazoles；John Wiley & Sons：New York,1981；第37卷)。在合成期間可能需要保護官能基且隨後去保護。適宜保護基團之實例可參見Greene及Wuts編輯之「Protective Groups in Organic Synthesis」(第4版)中。
用於製備本發明化合物之代表性方法及可用於製備其之中間體顯示於以下反應圖中。
反應圖1
反應圖3
反應圖6
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反應圖21
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反應圖23
製備(S)-5-側氧基吡咯啶-1,2-二甲酸1-第三丁基酯2-甲基酯(23c)之參考文獻：
1. 美國專利申請公開案2011/0237636 A1 (以引用方式併入)。
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反應圖27
反應圖29
反應圖31
反應圖33
反應圖35
反應圖36
反應圖39A
反應圖39B
反應圖40
(3aR,4R,6aR)-4-(((第三丁基二甲基矽基)氧基)甲基)-2,2-二甲基-6-側氧基二氫-3aH-[1,3]二氧雜環戊烯并[4,5-c]吡咯-5(4H)-甲酸第三丁基酯(40a)之製備之參考文獻：
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反應圖41
在一實施例中，式I化合物係選自由下列組成之群： 、及其醫藥上可接受之鹽。
在一實施例中，式I化合物係或其醫藥上可接受之鹽。
在一實施例中，式I化合物係選自由下列組成之群： 、及其醫藥上可接受之鹽，其中在每一情形下，「AA」代表胺基酸之胺基醯基，例如丙胺醯基、白胺醯基、甲硫胺醯基或纈胺醯基。
在一實施例中，式I化合物係選自由下列組成之群： 及、及其醫藥上可接受之鹽，其中在每一情形下，「AA」代表胺基酸之胺基醯基，例如，丙胺醯基、白胺醯基、甲硫胺醯基或纈胺醯基。
在一實施例中，式I化合物係選自由下列組成之群：及、及其醫藥上可接受之鹽。
在一實施例中，式I化合物係選自由下列組成之群： 及、及其醫藥上可接受之鹽。
在一實施例中，式I化合物係選自由下列組成之群：及、及其醫藥上可接受之鹽。
在一實施例中，式I化合物係或其醫藥上可接受之鹽。
在一實施例中，式I化合物係或其醫藥上可接受之鹽。
在一實施例中，式I化合物係選自由下列組成之群： 、及其醫藥上可接受之鹽。
在一實施例中，式I化合物係選自由下列組成之群： 、及其醫藥上可接受之鹽。
在一實施例中，式I化合物係選自由下列組成之群：及、及其醫藥上可接受之鹽。
在一實施例中，式I化合物係或其醫藥上可接受之鹽。
本發明之一態樣係包含本發明化合物或其醫藥上可接受之鹽及醫藥上可接受之載劑之醫藥組合物。
本發明之一態樣係製備醫藥組合物之方法。該方法包括將本發明化合物或其醫藥上可接受之鹽與醫藥上可接受之載劑組合之步驟。
本發明化合物可用於抑制某些病毒之核酸聚合酶活性。本發明化合物亦可用於抑制病毒複製或治療病毒感染。
動物RNA病毒基於其基因組及複製模式(及基於舊巴爾的摩分類(Baltimore classification)之數值組)劃分為三個不同組：雙股(ds)RNA病毒(巴爾的摩分類組III)含有1至12個不同RNA分子，每一RNA分子編碼一或多種病毒蛋白。dsRNA病毒之實例包括呼腸病毒科(reoviridae)。
正義單股(ss)RNA病毒(巴爾的摩分類組IV)之基因組如同mRNA一樣直接作用，從而產生單一蛋白，其經宿主及病毒蛋白修飾以形成複製所需之各種蛋白。該等蛋白中之一者包括RNA依賴性RNA聚合酶，其拷貝病毒RNA以形成雙股複製形式，進而引導新病毒粒子之形成。正義ssRNA病毒之實例包括黃熱病毒科(flaviviridae)、杯狀病毒科(caliciviridae)、冠狀病毒科(coronaviridae)、小RNA病毒科(picornaviridae)及披衣病毒科(togaviridae)。
負義ssRNA病毒(巴爾的摩分類組V)之基因組必須經RNA聚合酶拷貝以形成正義RNA。此意指病毒必須攜帶RNA依賴性RNA聚合酶酶。正義RNA分子則充當病毒mRNA，其經宿主核糖體轉譯為蛋白。所得蛋白繼續引導新病毒粒子(例如殼體蛋白及RNA複製酶，RNA複 製酶用於產生新的負義RNA分子)之合成。負義ssRNA病毒包括玻那病毒科(bornaviridae)、絲狀病毒科(filoviridae)、正黏液病毒科(orthomyxoviridae)、副黏液病毒科(paramyxoviridae)、彈狀病毒科(rhabdoviridae)、沙粒病毒科(arenaviridae)及本揚病毒科(bunyaviridae)。
反轉錄病毒(巴爾的摩分類組VI)具有單股RNA基因組，但其通常不視為RNA病毒，因為其使用DNA中間體進行複製。反轉錄酶(病毒在裸露後自身產生之病毒酶)將病毒RNA轉化成DNA之互補股，其經拷貝以產生雙股病毒DNA分子。在將此DNA整合後，編碼基因之表現可導致新病毒粒子形成。反轉錄病毒包括(但不限於)HIV-1及HIV-2。
本發明之態樣係抑制病毒之病毒核酸聚合酶活性之方法。該方法包括使病毒之病毒核酸聚合酶與有效量之本發明化合物或其醫藥上可接受之鹽接觸之步驟。
在一實施例中，病毒核酸聚合酶係DNA聚合酶。
在一實施例中，病毒核酸聚合酶係RNA聚合酶。
在一實施例中，病毒係選自由RNA病毒組成之群。
在一實施例中，病毒係選自由下列組成之群：正黏液病毒科、副黏液病毒科、沙粒病毒科、本揚病毒科、黃熱病毒科、絲狀病毒科、披衣病毒科、小RNA病毒科及冠狀病毒科。
在一實施例中，病毒係選自由下列組成之群：腺病毒、鼻病毒、A型肝炎病毒、C型肝炎病毒、小兒麻痺病毒、麻疹病毒、伊波拉病毒(Ebola virus)、柯薩奇病毒(Coxsackie virus)、西尼羅病毒(West Nile virus)、痘瘡病毒、黃熱病病毒、登革熱病毒(Dengue Fever virus)、A型流行性感冒病毒、B型流行性感冒病毒、賴薩病毒(lassa virus)、淋巴球性蜘蛛網膜腦膜炎病毒、胡寧病毒(Junin virus)、馬丘波病毒 (machuppo virus)、瓜奈瑞特病毒(guanarito virus)、漢他病毒(hantavirus)、裂谷熱病毒(Rift Valley Fever virus)、拉克羅斯病毒(La Crosse virus)、加州腦炎病毒(California encephalitis virus)、克裏米亞-剛果病毒(Crimean-Congo virus)、馬堡病毒(Marburg virus)、日本腦炎病毒(Japanese encephalitis virus)、科薩努爾森林病毒(Kyasanur Forest virus)、委內瑞拉馬腦炎病毒(Venezuelan equine encephalitis virus)、東部馬腦炎病毒(Eastern equine encephalitis virus)、西部馬腦炎病毒(Western equine encephalitis virus)、嚴重急性呼吸道症候群(SARS)病毒、副流行性感冒病毒、呼吸道細胞融合性病毒、龐塔托魯病毒(Punta Toro virus)、塔卡裏伯病毒(Tacaribe virus)及皮欽德病毒(Pichinde virus)。
在一實施例中，病毒係選自由下列組成之群：腺病毒、登革熱病毒、伊波拉病毒、馬堡病毒、A型流行性感冒病毒、B型流行性感冒病毒、胡寧病毒、麻疹病毒、副流行性感冒病毒、皮欽德病毒、龐塔托魯病毒、呼吸道細胞融合性病毒、鼻病毒、裂谷熱病毒、SARS病毒、塔卡裏伯病毒、委內瑞拉馬腦炎病毒、西尼羅病毒及黃熱病病毒。
在一實施例中，病毒係選自由下列組成之群：伊波拉病毒、黃熱病病毒、馬堡病毒、A型流行性感冒病毒及B型流行性感冒病毒。
本發明之一態樣係抑制病毒複製之方法。該方法包括使病毒與有效量之本發明化合物或其醫藥上可接受之鹽接觸之步驟：以抑制病毒複製。
在一實施例中，病毒係選自由RNA病毒組成之群。
在一實施例中，病毒係選自由下列組成之群：正黏液病毒科、副黏液病毒科、沙粒病毒科、本揚病毒科、黃熱病毒科、絲狀病毒科、披衣病毒科、小RNA病毒科及冠狀病毒科。
在一實施例中，病毒係選自由下列組成之群：腺病毒、鼻病毒、A型肝炎病毒、C型肝炎病毒、小兒麻痺病毒、麻疹病毒、伊波拉病毒、柯薩奇病毒、西尼羅病毒、痘瘡病毒、黃熱病病毒、登革熱病毒、A型流行性感冒病毒、B型流行性感冒病毒、賴薩病毒、淋巴球性蜘蛛網膜腦膜炎病毒、胡寧病毒、馬丘波病毒、瓜奈瑞特病毒、漢他病毒、裂谷熱病毒、拉克羅斯病毒、加州腦炎病毒、克裏米亞-剛果病毒、馬堡病毒、日本腦炎病毒、科薩努爾森林病毒、委內瑞拉馬腦炎病毒、東部馬腦炎病毒、西部馬腦炎病毒、嚴重急性呼吸道症候群(SARS)病毒、副流行性感冒病毒、呼吸道細胞融合性病毒、龐塔托魯病毒、塔卡裏伯病毒及皮欽德病毒。
在一實施例中，病毒係選自由下列組成之群：腺病毒、登革熱病毒、伊波拉病毒、馬堡病毒、A型流行性感冒病毒、B型流行性感冒病毒、胡寧病毒、麻疹病毒、副流行性感冒病毒、皮欽德病毒、龐塔托魯病毒、呼吸道細胞融合性病毒、鼻病毒、裂谷熱病毒、SARS病毒、塔卡裏伯病毒、委內瑞拉馬腦炎病毒、西尼羅病毒及黃熱病病毒。
在一實施例中，病毒係選自由下列組成之群：伊波拉病毒、黃熱病病毒、馬堡病毒、A型流行性感冒病毒及B型流行性感冒病毒。
本發明之一態樣係治療個體病毒感染之方法。該方法包括投與有需要的個體有效量之本發明化合物或其醫藥上可接受之鹽之步驟。
在一實施例中，病毒係選自由RNA病毒組成之群。
在一實施例中，病毒係選自由下列組成之群：正黏液病毒科、副黏液病毒科、沙粒病毒科、本揚病毒科、黃熱病毒科、絲狀病毒科、披衣病毒科、小RNA病毒科及冠狀病毒科。
在一實施例中，病毒係選自由下列組成之群：腺病毒、鼻病毒、A型肝炎病毒、C型肝炎病毒、小兒麻痺病毒、麻疹病毒、伊波拉病 毒、柯薩奇病毒、西尼羅病毒、痘瘡病毒、黃熱病病毒、登革熱病毒、A型流行性感冒病毒、B型流行性感冒病毒、賴薩病毒、淋巴球性蜘蛛網膜腦膜炎病毒、胡寧病毒、馬丘波病毒、瓜奈瑞特病毒、漢他病毒、裂谷熱病毒、拉克羅斯病毒、加州腦炎病毒、克裏米亞-剛果病毒、馬堡病毒、日本腦炎病毒、科薩努爾森林病毒、委內瑞拉馬腦炎病毒、東部馬腦炎病毒、西部馬腦炎病毒、嚴重急性呼吸道症候群(SARS)病毒、副流行性感冒病毒、呼吸道細胞融合性病毒、龐塔托魯病毒、塔卡裏伯病毒及皮欽德病毒。
在一實施例中，病毒係選自由下列組成之群：腺病毒、登革熱病毒、伊波拉病毒、馬堡病毒、A型流行性感冒病毒、B型流行性感冒病毒、胡寧病毒、麻疹病毒、副流行性感冒病毒、皮欽德病毒、龐塔托魯病毒、呼吸道細胞融合性病毒、鼻病毒、裂谷熱病毒、SARS病毒、塔卡裏伯病毒、委內瑞拉馬腦炎病毒、西尼羅病毒及黃熱病病毒。
在一實施例中，病毒係選自由下列組成之群：伊波拉病毒、黃熱病病毒、馬堡病毒、A型流行性感冒病毒及B型流行性感冒病毒。
本發明化合物可調配成醫藥組合物並以各種適於所選投與途徑(例如，經口或非經腸、藉由靜脈內、腹膜內、肌內、局部或皮下途徑)之形式投與哺乳動物主體(例如人類患者)。
因此，本發明化合物可與醫藥上可接受之媒劑(例如，惰性稀釋劑或可同化之食用載劑)組合全身投與(例如經口)。可將其裝入硬或軟殼明膠膠囊中，可壓縮成錠劑，或可直接與患者飲食之食物一起納入。對於經口治療投與，可將活性化合物與一或多種賦形劑組合並以可攝取錠劑、口含片、菱形錠劑、膠囊、酏劑、懸浮液、糖漿、糯米紙囊劑及諸如此類等形式使用。該等組合物及製劑應含有至少0.1%之活性化合物。當然，該等組合物及製劑之百分比可有所變化且可方便 地介於給定單位劑型重量之約2%至約60%之間。活性化合物在該等治療上有用組合物中之量應使得可獲得有效劑量。
錠劑、菱形錠劑、丸劑、膠囊及諸如此類亦可含有下列稀釋劑及載劑：黏合劑，例如黃蓍膠、阿拉伯膠、玉米澱粉或明膠；賦形劑，例如磷酸氫鈣；崩解劑，例如玉米澱粉、馬鈴薯澱粉、海藻酸及諸如此類；潤滑劑，例如硬脂酸鎂；及甜味劑，例如蔗糖、果糖、乳糖或阿斯巴甜(aspartame)；或矯味劑，例如薄荷、冬青油或櫻桃矯味劑。當單位劑型為膠囊時，除上述類型之物質外，其亦可含有流體載劑，例如，植物油或聚乙二醇。各種其他材料可作為包衣存在或其存在可另外改良固體單位劑型之物理形式。例如，可用明膠、蠟、蟲膠或糖及諸如此類包覆錠劑、丸劑或膠囊。糖漿或酏劑可含有活性化合物、蔗糖或果糖(作為甜味劑)、對羥基苯甲酸甲酯及對羥基苯甲酸丙酯(作為防腐劑)、染料及調料(例如，櫻桃味或橙味調味劑)。當然，用於製備任一單位劑型之任一材料皆應在醫藥上可接受且所採用之量應實質上無毒。另外，可將此等活性化合物納入緩釋製劑及裝置中。
活性化合物亦可藉由輸注或注射靜脈內或腹膜內投與。活性化合物或其鹽之溶液可在水或生理學上可接受之水溶液中製備，視情況與無毒表面活性劑混合。分散液亦可在甘油、液體聚乙二醇、三乙醯甘油酯及其混合物中及在油中製備。在普通儲存及使用條件下，該等製劑含有防腐劑以防止微生物生長。
適於注射或輸注之醫藥劑型可包括包含適於臨時製備無菌可注射或可輸注溶液或分散液且視情況囊封於脂質體中之活性成份之無菌水溶液或分散液或無菌粉劑。在所有情形下，最終劑型應無菌、流動且在製造及儲存條件下穩定。液體載劑或媒劑可為溶劑或液體分散介質，其包含(例如)水、乙醇、多元醇(例如、甘油、丙二醇、液體聚乙二醇及諸如此類)、植物油、無毒甘油酯及其適宜之混合物。可(例如) 藉由形成脂質體、藉由維持所需粒徑(在分散液之情形下)或藉由使用表面活性劑來維持適當流動性。可藉由各種抗細菌劑或抗真菌劑(例如，對羥基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、山梨酸、硫柳汞及諸如此類)來防止微生物作用。在許多情形下，其較佳應包括等滲劑，例如，糖、緩衝液或氯化鈉。可注射組合物之延遲吸收可藉由用於延遲吸收之試劑(例如，單硬脂酸鋁及明膠)之組合物中來達成。
無菌可注射溶液可藉由以下方式進行製備：將所需量活性化合物納入視需要具有上文所列舉其他成份之適當溶劑中，隨後進行過濾滅菌。在無菌粉劑製備無菌可注射溶液之情形下，製備方法可包括真空乾燥及冷凍乾燥技術，藉此產生存於先前經無菌過濾之溶液中之活性成份加上任一額外期望成份之粉劑。
對於局部投與而言，本發明化合物可以純淨形式施加(即，當其為液體時)。然而，一般期望將其以與皮膚病學上可接受之載劑(其可為固體或液體)組合之組合物或調配物形式投與至皮膚。
可用固體載劑包括精細固體，例如滑石粉、黏土、微晶纖維素、二氧化矽、氧化鋁及諸如此類。可用液體載劑包括水、醇或二醇或水-醇/二醇摻合物，其中本發明化合物可視情況借助無毒表面活性劑以有效濃度溶解或分散。可添加佐劑(例如芳香劑及其他抗微生物劑)以優化給定用途之性質。所得液體組合物可由用於浸透繃帶及其他敷料之吸收墊來施加或可使用幫浦型或氣溶膠噴霧器噴霧至受影響區域上。
亦可使用增稠劑與液體載劑來形成可塗抹膏糊、凝膠、軟膏、肥皂及諸如此類用以直接施加至使用者皮膚，該等增稠劑例如合成聚合物、脂肪酸、脂肪酸鹽及酯、經改質纖維素或經改質礦物質。
業內已知可用於將式I化合物遞送至皮膚之可用皮膚病學組合物之實例；例如，參見Jacquet等人(美國專利第4,608,392號；以引用方 式併入本文中)、Geria(美國專利第4,992,478號；以引用方式併入本文中)、Smith等人(美國專利第4,559,157號；以引用方式併入本文中)及Wortzman(美國專利第4,820,508號；以引用方式併入本文中)。
本發明化合物之可用劑量可藉由在動物模型中比較其活體外活性及活體內活性來確定。業內已知小鼠及其他動物至人類中有效劑量之外推方法；例如，參見美國專利第4,938,949號。
治療用途所需化合物或其活性鹽或衍生物之量不僅隨所選特定化合物或鹽變化，而且隨投用途徑、所治療病況之性質及患者的年齡及狀況變化，且將由主治醫師或臨床醫生最終判斷。
然而，一般而言，適宜劑量應在約0.5mg/kg體重接受者/天至約100mg/kg體重接受者/天範圍內，例如，約3mg/kg體重/天至約90mg/kg體重/天、約6mg/千克體重/天至約75mg/千克體重/天、約10mg/kg/天至約60mg/kg/天或約15mg/kg/天至約50mg/kg/天。
本發明化合物可以單位劑型方便地調配；舉例而言，每單位劑型含有5mg至1000mg、10mg至750mg或50mg至500mg活性成份。在一個實施例中，本發明提供包含以此一單位劑型調配之本發明化合物之組合物。期望劑量可方便地以單一劑量或分開劑量以適當間隔投與，例如每天2次、3次、4次或更多次分劑量。分劑量本身可進一步分成(例如)許多離散鬆散間隔投與；例如自吹入器吸入多次或藉由在眼睛內施加複數滴。
本發明化合物亦可與其他治療劑(例如，可用於治療病毒感染之其他試劑)組合投與。
本發明亦提供套組，其包含本發明化合物或其醫藥上可接受之鹽、至少一種其他治療劑、包裝材料及向動物投與本發明化合物或其醫藥上可接受之鹽及另一(些)治療劑以抑制該動物之病毒感染的說明書。在一實施例中，哺乳動物係人類。
現可藉由以下非限制性實例來說明本發明。
實例 實例1：(2S,3S,4R,5R)-2-(4-胺基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-5-(羥基甲基)吡咯啶-3,4-二醇二鹽酸鹽(12i)
將(2S,3S,4R,5R)-2-(4-胺基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-3,4-二羥基-5-(羥基甲基)吡咯啶-1-甲酸第三丁基酯(28f)以3個批次如下處理。
將批次1.(28f)溶解於HCl水溶液(1658.8mmol，118mL濃HCl及293mL水)中。
將批次2.(28f)溶解於HCl水溶液(239.6mmol，169mL濃HCl及421mL水)中。
將批次3.(28f)溶解於HCl水溶液(263.5mmol，186mL濃HCl及468mL水)中。
在室溫下將反應混合物攪拌30min(CO2氣體強烈逸出)且然後在真空中將每一批次濃縮至乾燥(80℃至90℃)。將批次2與3彙集，得到226g潮濕透明黃色產物。批次1得到91.4g深灰色產物。如下實施結晶：對於批次2及3濕產物：將226mL水添加至產物中，然後加熱至50℃，此時緩慢添加熱乙醇直至開始結晶。將混合物在50℃下保持10分鐘，然後使其達到25℃並強烈攪拌，隨後過濾，得到(2S,3S,4R,5R)-2-(4-胺基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-5-(羥基甲基)吡咯啶-3,4-二醇(12i)淺黃色粉末(88g,52%)。以相同方式純化批次1，得到33.0g(59%)淺灰色產物。在55℃及高真空下乾燥後，總產量為121.0g(53.5%)。對來自批次1及2重結晶之母液實施再處理，得到15.0g淺黃 色粉末產物(12i)；MP：238℃。1H NMR(300MHz,DMSO-d 6 )δ 14.60(s,1H),13.25(s,1H),10.23(s,1H),9.13(s,2H),8.84(s,1H),8.63(s,1H),8.11(d,J=3.1Hz,1H),5.55(s,2H),4.78(d,J=4.4Hz,1H),4.44(dd,J=8.8,5.0Hz,1H),4.14-4.02(m,1H),3.73(d,J=5.1Hz,2H),3.52(s,1H)；1H NMR(300MHz,D2O)δ 8.33(s,1H),7.94(s,1H),4.90(d,J=8.9Hz,1H),4.65(s,1H),4.37(dd,J=4.8,3.4Hz,1H),3.89(s,1H),3.88(s,1H),3.81(dd,J=8.1,4.5Hz,1H)；MS(ES+)266.3(M+1)；旋光度-52.69；(H2O,C=1.15)；對C11H15N5O3．2HCl.0.25H2O計算之分析值：C,38.55；H,5.15；Cl,20.44；N,20.69；實驗值：C,38.67；H,5.05；Cl,20.45；N,20.42。
自二乙酸(2R,3R,4S,5S)-2-(乙醯氧基甲基)-1-(第三丁氧基羰基)-5-(4-氯-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)吡咯啶-3,4-二基酯(28c)製備(2S,3S,4R,5R)-2-(4-胺基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-5-(羥基甲基)吡咯啶-3,4-二醇二鹽酸鹽(12i)之替代方法。
在-50℃下向二乙酸(2R,3R,4S,5S)-2-(乙醯氧基甲基)-1-(第三丁氧基羰基)-5-(4-氯-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-吡咯啶-3,4-二基酯(28c)(40g,78.29mmol)於乙醇(400mL)中之透明溶液中吹掃氨(相對於乙醇35體積%)。將經冷凍溶液小心地傾倒至高壓釜中並在100℃至105℃下加熱16h。檢查TLC以確保反應完成。使混合物冷卻至室溫。將溶劑蒸餾，提供38g呈深褐色黏稠團塊形式之(2S,3S,4R,5R)-2-(4-胺基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-3,4-二羥基-5-(羥基甲基)吡咯啶-1-甲酸第三丁基酯(28f)。
向(2S,3R,4S,5S)-5-(羥基甲基)-2-(4-胺基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-吡咯啶-3,4-二羥基甲酸第三丁基酯(28f)(292g,799.16mmol)於去離子水(584mL)中之經攪拌溶液中添加濃HCl(423mL)。在室溫下將所得透明溶液攪拌30min。然後將其濃縮至乾燥(80℃至90℃水 浴)，得到潮濕黃色固體。然後用去離子水(475mL)稀釋濕餅並在70℃下使其加熱，得到透明溶液並冷卻至50℃。緩慢添加熱乙醇(1.6L)以產生部分沈澱。在60℃下將混合物攪拌10min。使混合物冷卻至室溫並冷卻至10℃並在相同溫度下攪拌1h。藉由過濾來收集所獲得固體，在55℃至60℃下乾燥直至獲得恒重，提供呈淺黃色至灰白色固體形式之(2S,3S,4R,5R)-2-(4-胺基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-5-(羥基甲基)吡咯啶-3,4-二醇二鹽酸鹽(12i)(65g)；MP：255.5℃。1H NMR(300MHz,DMSO-d 6 )δ 14.64(s,1H),13.19(s,1H),10.20(s,1H),9.11(s,2H),8.83(s,1H),8.64(s,1H),8.11(d,J=3.1Hz,1H),5.99-5.20(bs,2H),4.78(s,1H),4.43(dd,J=8.9,4.9Hz,1H),4.11(t,J=4.2Hz,1H),3.73(d,J=5.1Hz,2H),3.51(s,2H)；MS(ES+)266.1(M+1)；旋光度-51.74(H2O,C=0.545)；對C11H15N5O3．2HCl．0.25H2O計算之分析值：C,38.55；H,5.15；Cl,20.69；N,20.44；實驗值：C,38.51；H,5.11；Cl,20.57；N,20.31。
二乙酸(2R,3R,4S,5S)-2-(乙醯氧基甲基)-1-(第三丁氧基羰基)-5-(4-氯-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)吡咯啶-3,4-二基酯(28c)及(2S,3R,4S,5S)-5-(羥基甲基)-2-(4-胺基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-吡咯啶-3,4-二羥基甲酸第三丁基酯(28f)之製備。
步驟1：D-核糖酸內酯(19b)之製備
用D-核糖(19a)(2.0kg,13.33mol)固體碳酸氫鈉(2.24kg，26.66莫耳)及水(12L)裝填安裝有機械攪拌器、1L均壓加料漏斗及高效冷凝器之22-L三頸燒瓶。在室溫下將反應混合物攪拌1h，此時大多數固體消失。將反應容器置於冰浴中並將內部溫度維持在5±1℃下。用溴(710mL,13.86mol)裝填加料漏斗並將溴以約5mL/min之速率添加至經劇烈攪拌之水溶液中以使得溫度維持在5℃至10℃之間。當完成添加時(約2.5h)，將所得橙色溶液再攪拌3h。向反應混合物中以小批 量添加亞硫酸氫鈉固體(約75g)直至橙色完全消失。將透明水溶液轉移至20-L蒸發燒瓶中，並在旋轉蒸發儀上在4h時間段內(80℃,10mm Hg)蒸發至乾燥，留下半固體殘餘物。向殘餘物中添加乙醇(約4L)並在40℃下攪拌1h。將混合物冷卻並經漏斗過濾以去除大多數不溶無機鹽。用乙醇(1L)洗滌固體殘餘物。將濾液轉移至20-L蒸發燒瓶中並在旋轉蒸發儀(50℃,10mm Hg)上濃縮至乾燥，提供固體殘餘物。向此殘餘物中添加乙醇(約3L)並在室溫下將漿液攪拌12h。藉由過濾來收集固體並用乙醇(750mL)洗滌。在真空烘箱中在40℃(0.1mm Hg)下乾燥產物D-核糖酸內酯(19b)。產量1.28kg(65%)；M.P.77℃至80℃；1H NMR(D2O)δ 4.72(d,1 H),4.57(t,1 H),4.42(d,1 H),3.80(m,2 H)。
步驟2：2,3-O-亞異丙基D-核糖酸-1,4-內酯(19c)之製備
用D-核糖酸-1,4-內酯(19b)(3.0kg,20.27mol)及30L ACS級丙酮裝填50-L夾套式反應容器。在室溫下將反應混合物攪拌1h。使反應容器之內部溫度降低至10℃並將濃硫酸(49mL)緩慢添加至反應混合物中。在添加硫酸時，使內部反應溫度緩慢升溫。在此溫度下將反應混合物攪拌2.5h至3h。藉由TLC(TLC；二氯甲烷：甲醇9：1，R f =0.75)來監測反應。藉由添加固體碳酸氫鈉(約500g)來中和反應混合物直至pH呈中性。經漏斗過濾反應混合物。用丙酮(3L)洗滌含有無機鹽之固體殘餘物。將濾液轉移至20-L蒸發燒瓶中並蒸發至乾燥(50℃,10mmHg)，得到半固體化合物。將殘餘物吸收於乙酸乙酯(3L)中並在室溫下在旋轉蒸發儀上攪拌4h。藉由過濾來收集固體2,3-O-亞異丙基D-核糖酸-1,4-內酯(19c)並在40℃(0.1mm Hg)下在真空烘箱中乾燥16h。產量：1.819kg(48%)；MP 136℃至140℃；1H NMR(CDCl3)δ 4.8(dd,2 H),4.6(s,1 H),3.85(dd,2 H),1.5(s,3 H),1.4(s,3 H)。
步驟3：2,3-O-亞異丙基5-O-甲磺醯基D核糖酸-1,4-內酯(26a)之製備
在室溫下在50L反應容器中將2,3-O-亞異丙基D-核糖酸-1,4-內酯(19c)(4.3kg,22.96mol)於ACS級吡啶(20L)中之溶液攪拌15min直至完成溶解。使反應容器之內部溫度降低至-15℃，隨後在2h時間段內緩慢添加甲磺醯氯(1.96L,25.26mol)。將內部溫度維持在0℃至5℃下。在0℃及惰性氣氛下將反應攪拌約2h直至反應TLC顯示無SM(TLC；乙酸乙酯：己烷7：3，R f =0.85)。在反應完成時添加DCM(10L)並用3N HCl(4次，pH=3)萃取，[每次用DCM(5L)反萃取水層]，隨後用飽和NaHCO3快速洗滌。經硫酸鈉乾燥有機流份，過濾並蒸發至糊漿。產量：4.89kg(80%)。產物2,3-O-亞異丙基5-O-甲磺醯基D核糖酸-1,4-內酯(26a)未經任何進一步純化即用於下一步驟；1H NMR(CDCl3)δ 4.8(m,3H),4.5(m,2H),3.08(s,3H),1.5(s,3H),1.4(s,3H)。
步驟4：2,3-O-亞異丙基L來蘇糖酸-1,4-內酯(26b)之製備
向2,3-O-亞異丙基5-O-甲磺醯基D核糖酸-1,4-內酯(26a)(3.04kg,11.37mol)中添加水(10L)，隨後緩慢添加固體KOH(1.83kg,32.77mol)。(注意：在添加固體KOH時化合物進入溶液中。在添加KOH時該反應放熱，故必須將反應容器置於冰浴中。)到完成KOH添加時，反應溫度已達到45℃。在約室溫(RT)下將反應混合物攪拌3h。再次將溶液在冰浴中冷卻且然後使用濃HCl溶液酸化至pH=3(精確)。將反應混合物蒸發，得到固體褐色殘餘物。將殘餘物與沸騰丙酮(約5L)攪拌兩次(1h)並對有機物實施傾析。然後將剩餘鹽溶解於最小量水中並使用濃HCl(約200mL)將pH調節至3。濃縮水溶液並用丙酮(約5L)萃取固體殘餘物。將有機層乾燥、過濾並蒸發，得到2,3-O-亞異丙基L來蘇糖酸-1,4-內酯(26b)白色針狀物。可在熱丙酮中實施結晶。產量：1.60kg(75%)；1H NMR(D2O)δ 5.00(m,2H),3.8(m,3H),1.5(s,3H),1.4(s,3H)。
步驟5：2,3-O-亞異丙基5-O-第三丁基二甲基矽基L來蘇糖酸-1,4-內酯(26c)之製備
向安裝有機械攪拌器之22-L 3頸燒瓶中添加2,3-O-亞異丙基L來蘇糖酸-1,4-內酯(26b)(2.0kg,10.63mol)、DMAP(約25g)、咪唑(1.60kg,23.40mol，2.2當量)並在ACS級DMF(8L)中攪拌1h。使用冰浴使反應溫度降低至0℃。在2h時間段內向反應混合物中緩慢添加TBDMSCl(2.08kg,13.81mol，1.3當量)。在室溫及惰性氣氛下將反應混合物攪拌14h。在反應完成時(如由TLC(EtOAc：己烷7：3，R f =0.80)指示)，將反應混合物傾倒於冰水中並用EtOAc(×2)萃取。分離有機層，乾燥並過濾，得到油狀殘餘物。將含有產物之反應容器置於冰浴中，隨後添加己烷(約3L)。使化合物在己烷中結晶。濾出晶體並用最小量己烷洗滌晶體並將產物置於在真空烘箱中於40℃下過夜，提供3.01kg(93%)2,3-O-亞異丙基5-O-第三丁基二甲基矽基L來蘇糖酸-1,4-內酯(26c)；1H NMR(CDCl3)δ 4.8(s,2H),4.5(m,1H),3.9(m,2H),1.5(s,3H),1.4(s,3H),0.9(s,9H),0.0(s,6H)。
步驟6：2-(第三丁基二甲基矽氧基)-1-(5-羥基甲基-2,2-二甲基-[1,3]二氧戊環-4-基)-乙醇(26d)之製備
在室溫下將2,3-O-亞異丙基5-O-第三丁基二甲基矽基L來蘇糖酸-1,4-內酯(26c)(3.00kg,9.93mol)於THF：MeOH(9：1 v/v混合物，15L)中之溶液攪拌0.5h直至觀察到完成溶解。使反應容器之內部溫度降低至-5℃。以小份添加硼氫化鈉(751g,19.86mol，2當量)以使得溫度不超過15℃至17℃。在1h時間段內完成試劑添加。在3h時間段內使反應達到室溫且然後在此溫度下繼續攪拌18h。藉由TLC(乙酸乙酯：己烷3：7，R f =0.15)來監測反應混合物。在反應完成時，用EtOAc(5L)稀釋溶液，並用1N HCl溶液(2次)洗滌。用水洗滌有機層，乾燥並蒸發，得到油狀殘餘物。向其中添加約3L己烷並在冰浴中冷卻蒸發燒 瓶。晶體將自溶液析出。濾出晶體並用約250mL己烷洗滌。在真空烘箱中在40℃下乾燥24h，提供2-(第三丁基二甲基矽氧基)-1-(5-羥基甲基-2,2-二甲基-[1,3]二氧戊環-4-基)-乙醇(26d)。產量：2.32kg(77%)；1H NMR(CDCl3)δ 4.2(m,2H),3.7(m,5H),1.5(s,3H),1.4(s,3H),0.9(s,9H),0.0(s,6H)。
步驟7：甲磺酸2-(第三丁基二甲基矽氧基)-1-1(5-甲磺醯氧基甲基-2,2-二甲基-[1,3]二氧戊環-4-基)-乙基酯(26e)之製備
用無水吡啶(20mL)、催化量之DMAP裝填500mL 3頸燒瓶，隨後在0℃下添加甲磺醯氯(4.98mL,64.4mmol，4.0當量)。將溶解於無水吡啶(20mL)中之2-(第三丁基二甲基矽氧基)-1-(5-羥基甲基-2,2-二甲基-[1,3]二氧戊環-4-基)-乙醇(26d)(5.0g,16.3mmol)緩慢添加至反應容器中。在此溫度及惰性氣氛下將反應攪拌4h。(TLC；乙酸乙酯：己烷1：9，R f =0.85)。在反應完成時，添加1mL水及100mL EtOAc並攪拌。用水萃取有機層，乾燥並蒸發，得到甲磺酸2-(第三丁基二甲基矽氧基)-1-1(5-甲磺醯氧基甲基-2,2-二甲基-[1,3]二氧戊環-4-基)-乙基酯(26e)糊漿。產量：8.7g(90%)。粗製物未經任何進一步純化即用於下一步驟。
步驟8：5-O-第三丁基二甲基矽基-1,4-N-苄基亞胺基-2,3-O-亞異丙基-D-核糖醇(26f)之製備
向甲磺酸2-(第三丁基二甲基矽氧基)-1-1(5-甲磺醯氧基甲基-2,2-二甲基-[1,3]二氧戊環-4-基)-乙基酯(26e)(8.6g)中添加純淨苄基胺(10mL)並將反應加熱至70℃，保持48h。TLC(己烷：EtOAc 4：1，R f =0.68)顯示反應完成。將反應混合物冷卻並將鹽水添加至反應混合物中。用二氯甲烷萃取反應混合物，用水洗滌，乾燥並蒸發，提供含有大量胺試劑之糊漿。將殘餘物吸收於甲苯中並向其中添加乾冰片以沈澱出鹽。濾出固體並蒸發濾液，提供期望產物5-O-第三丁基二甲基矽 基-1,4-N-苄基亞胺基-2,3-O-亞異丙基-D-核糖醇(26f)(5.6g,92%)。此產物未經任何進一步純化直接用於下一步驟。1H NMR(CDCl3)δ 7.2-7.4(m,5H),4.65(m,1H),4.55(dd,1H),4.0(d,1H),3.6-3.8(m,3H),3.1(dd,1H),3.0(m,1H),2.75(dd,1H),1.5(s,3H),1.34(s,3H),0.9(s,9H),0.0(s,6H)。
步驟9：5-O-第三丁基二甲基矽基-1,4-亞胺基-2,3-O-亞異丙基-D-核糖醇(20a)之製備
向存於EtOH(15mL)中之5-O-第三丁基二甲基矽基-1,4-N-苄基亞胺基-2,3-O-亞異丙基-D-核糖醇(26f)(5.93g,15.74mmol)中添加Pd/C(50mg)並在80psi下將反應氫化5h或直至TLC(己烷：EtOAc 3：2，R f =0.18)顯示完成反應。經矽藻土墊過濾反應混合物並用EtOH(25mL)洗滌矽藻土墊。使濾液通過Millipore過濾器(0.25μm)以去除痕量觸媒並蒸發，提供呈糊漿形式之5-O-第三丁基二甲基矽基-1,4-亞胺基-2,3-O-亞異丙基-D-核糖醇(20a)。產量：3.5g(各步驟共計75%)；1H NMR(CDCl3)δ 4.65(m,2H),3.60(dd,2H),3.24(t,1H),3.00(d,2H),1.5(s,3H),1.34(s,3H),0.9(s,9H),0.0(s,6H)。
步驟10：(3aR,4R,6aS)-4-(((第三丁基二甲基矽基)氧基)甲基)-2,2-二甲基-4,6a-二氫-3aH-[1,3]二氧雜環戊烯并[4,5-c]吡咯(20b)之製備
在17℃至23℃下在60至90分鐘時間段內將5-O-第三丁基二甲基矽基-1,4-亞胺基-2,3-O-亞異丙基-D-核糖醇(20a)(94g,327mmol)於甲苯(470mL)中之溶液添加至N-氯琥珀醯亞胺(54.6g,408.8mmol)於甲苯(470mL)中之懸浮液中。在17℃至23℃下將反應混合物攪拌1小時，冷凍至-3℃至3℃並再攪拌1小時。藉由過濾去除琥珀醯亞胺副產物並將經過濾溶液直接裝填至含有四丁基溴化銨(10.53g,32.7mmol)之60%氫氧化鉀溶液(458g，8175mmol存於305mL水中)中。在-5℃至5℃下將反應混合物攪拌17h。然後將水(700mL)添加至該兩相混合物 中以溶解無機沈澱並用乙酸銨緩衝液(pH約4.5)、緩衝鹽水溶液(700mL)洗滌甲苯產物溶液，並用三乙胺穩定，隨後藉由循環通過硫酸鎂且然後藉由將硫酸鎂裝填至反應器中進行乾燥。存於甲苯中之含有(3aR,4R,6aS)-4-(((第三丁基二甲基矽基)氧基)甲基)-2,2-二甲基-4,6a-二氫-3aH-[1,3]二氧雜環戊烯并[4,5-c]吡咯(20b)之經乾燥溶液原樣立即用於下一步驟。
步驟11：1S-5-O-第三丁基二甲基矽基-1,4-雙脫氧-1-C-[(4-甲氧基吡咯并[3,2-d]嘧啶-9-N-(苄基側氧基甲基)-7-基)]-1,4-亞胺基-2,3-O-亞異丙基-D-核糖醇(26g)之製備
在N2氣氛下將6-甲氧基-N-(苄氧基甲基)-9-脫氮次黃嘌呤(27f)(271.0g，0.775莫耳)添加至含有無水苯甲醚(1.7L)之22L 3頸圓底燒瓶中。將此混合物溫和地加熱直至混合物變均勻(45℃)。將混合物冷卻至環境溫度並添加無水醚(2.9L)。將反應燒瓶置於冷卻浴中並使用乾冰/丙酮冷卻至-70℃。在-20℃下，溴化物開始沈澱為細緻白色固體。經1.2h時間段經由滴液漏斗向懸浮液中添加nBuLi(1.6N,486mL,0.778mol)以維持內部溫度<-50℃。在最後一次添加後，TLC(30% EtOAc/己烷)分析指示剩餘<2%溴化物。經15分鐘時間段經由加料漏斗添加存於甲苯中之(3aR,4R,6aS)-4-(((第三丁基二甲基矽基)氧基)甲基)-2,2-二甲基-4,6a-二氫-3aH-[1,3]二氧雜環戊烯并[4,5-c]吡咯(20b)(183g，0.642莫耳)並維持內部溫度低於-50℃。反應混合物係淺琥珀色。將反應燒瓶自冷卻浴移除並使其升溫。使反應混合物升溫至-2℃且TLC(40% EtOAc/己烷，利用Ehrlichs試劑顯現)顯示無剩餘(3aR,4R,6aS)-4-(((第三丁基二甲基矽基)氧基)甲基)-2,2-二甲基-4,6a-二氫-3aH-[1,3]二氧雜環戊烯并[4,5-c]吡咯(20b)。用H2O(2L)淬滅反應並用醚(2×2L)萃取。將合併之有機層乾燥(MgSO4)並在真空中(在60℃下使用高真空去除苯甲醚)濃縮，得到1S-5-O-第三丁基二甲基矽 基-1,4-雙脫氧-1-C-[(4-甲氧基吡咯并[3,2-d]嘧啶-9-N-(苄基側氧基甲基)-7-基)]-1,4-亞胺基-2,3-O-亞異丙基-D-核糖醇(26g)粗製深色油狀物，其適用於下一步驟。產量284g(79%)。藉由急驟管柱層析(矽膠，利用存於己烷中之0至40%乙酸乙酯洗脫)來純化少量(5g)粗製物混合物，提供呈橙色糊漿形式之1S-5-O-第三丁基二甲基矽基-1,4-雙脫氧-1-C-[(4-甲氧基吡咯并[3,2-d]嘧啶-9-N-(苄基側氧基甲基)-7-基)]-1,4-亞胺基-2,3-O-亞異丙基-D-核糖醇(26g)(3.4g)；1H NMR(DMSO-d 6 )δ 0.02(s,3 H),0.03(s,3 H),0.8(s,9 H),1.25(s,3 H),1.48(s,3 H),3.11-3.20(m,1 H),3.60-3.71(m,2 H),4.05(s,3 H),4.26(d,1 H,J=4.7Hz),4.49(s,2 H),4.52-4.56(m,1 H),4.81-4.85(m,1 H),5.71(s,2 H),7.21-7.32(m,5 H),7.80(s,1 H),8.40(s,1 H)；13C NMR(CDCl3)δ -5.46,-5.43,18.30,25.53,25.88,27.63,53.43,61.59,62.54,66.14,70.14,76.93,82.32,86.40,114.43,116.22,116.56,127.67,127.93,128.43,130.55,136.93,149.61,149.82,156.16；IR 3420,1610cm-1；MS(ES+)m/z 555.3；對C29H42N4O5Si計算之分析值：C,62.79；H,7.63；N,10.10；實驗值：C,62.95；H,7.59；N,9.95。
步驟12：1S-N-第三丁氧基羰基-5-O-第三丁基二甲基矽基-1,4-雙脫氧-1-C-[(4-甲氧基吡咯并[3,2-d]嘧啶-9-N-(苄基側氧基甲基)-7-基)]-1,4-亞胺基-2,3-O-亞異丙基-D-核糖醇(26h)之製備
將粗製物1S-5-O-第三丁基二甲基矽基-1,4-雙脫氧-1-C-[(4-甲氧基吡咯并[3,2-d]嘧啶-9-N-(苄基側氧基甲基)-7-基)]-1,4-亞胺基-2,3-O-亞異丙基-D-核糖醇(26g)(275g，0.496莫耳)吸收於CH2Cl2(1.4L)中並在冰/水浴中冷卻至5℃。向此經冷卻混合物中以4份添加Boc2O(168.5g,0.772莫耳)以維持反應混合物溫度<10℃。在30min後，TLC(40%乙酸乙酯/己烷)顯示無起始材料剩餘。將粗製物混合物吸附於SiO2(700g)上並藉由急驟層析(矽膠1.5kg，利用存於己烷中之10%乙 酸乙酯洗脫)來純化。將適當流份彙集並在真空中濃縮，得到呈黃色糊漿形式之1S-N-第三丁氧基羰基-5-O-第三丁基二甲基矽基-1,4-雙脫氧-1-C-[(4-甲氧基吡咯并[3,2-d]嘧啶-9-N-(苄基側氧基甲基)-7-基)]-1,4-亞胺基-2,3-O-亞異丙基-D-核糖醇(26h)(272g,84%)；1H NMR(CDCl3)δ 0.02(s,3 H),0.03(s,3 H),0.82(s,9 H),1.31-1.58(m,15 H)2.05-2.09(m,1 H)；3.58-3.80(m,2 H),4.08(s,3 H),4.17-4.32(m,1 H),4.44(s,2 H),4.84-5.71(m,4 H),7.19-7.33(m,5 H),7.46(s,1 H),8.51(s,1 H)；13C NMR(CDCl3)δ -5.31,-5.20,14.10,14.20,18.32,21.01,22.64,25.56,25.93,27.46,28.46,31.58,53.44,60.34,62.48,70.08,76.96,79.84,111.69,115.89,127.67,127.93,128.43,136.90,148.62,149.90,154.38,156.19；IR 1692,1608cm-1；MS(ES+)m/z 655.3；對C34H50N4O7Si計算之分析值：C,62.43；H,7.65；N,8.56；實驗值：C,62.79；H,7.89；N,8.47。
步驟13：(3aR,4R,6S,6aS)-4-(((第三丁基二甲基矽基)氧基)甲基)-6-(4-甲氧基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基二氫-3aH-[1,3]二氧雜環戊烯并[4,5-c]吡咯-5(4H)-甲酸第三丁基酯(26i)之製備
將氫氧化鈀/炭(120g,50%濕型)裝填至2L圓錐形燒瓶中。將甲醇(7.60kg)稱量至20L聚乙烯桶中。將0.80kg此甲醇轉移至含有氫氧化鈀觸媒之圓錐形燒瓶中並旋動圓錐形燒瓶以製備均勻混合物。然後將此懸浮液傾倒至經氮氣吹掃之20L氫化容器中。用甲醇(25mL)將殘餘氫氧化鈀/炭自圓錐形燒瓶沖洗至氫化容器中。將1S-N-第三丁氧基羰基-5-O-第三丁基二甲基矽基-1,4-雙脫氧-1-C-[(4-甲氧基吡咯并[3,2-d]嘧啶-9-N-(苄基側氧基甲基)-7-基)]-1,4-亞胺基-2,3-O-亞異丙基-D-核糖醇(26h)(380g)裝填至10L聚乙烯桶中，隨後裝填來自20L聚乙烯桶之1.32kg甲醇。將此1S-N-第三丁氧基羰基-5-O-第三丁基二甲基矽基-1,4-雙脫氧-1-C-[(4-甲氧基吡咯并[3,2-d]嘧啶-9-N-(苄基側氧 基甲基)-7-基)]-1,4-亞胺基-2,3-O-亞異丙基-D-核糖醇(26h)甲醇溶液裝填至20L氫化容器中。經由10L聚乙烯桶將20L聚乙烯桶中之剩餘甲醇作為沖洗液裝填至容器中。量取氨於甲醇中之溶液(7.0M,0.68kg)於10L聚乙烯桶中並轉移至氫化容器中。用氫氣將容器加壓至5巴並將內含物加熱至35℃並攪動。將該等反應條件維持20h，視需要裝滿氫氣。此後，HPLC分析指示約2%起始材料剩餘，此表明反應充分完成。將容器之內含物轉移至20L聚乙烯桶中，然後藉助矽藻土床過濾。在此操作期間使氮氣在過濾漏斗上吹掃，並使用甲醇(1.50kg)洗滌濾餅。將濾液及洗液轉移至旋轉蒸發儀中並在減壓下濃縮至0.48kg重量。將甲醇(2.50kg)添加至旋轉蒸發儀燒瓶中並將溶液濃縮至恆定質量(0.340kg，約定量產量)。將額外甲醇(1.0kg)添加至產物(3aR,4R,6S,6aS)-4-(((第三丁基二甲基矽基)氧基)甲基)-6-(4-甲氧基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基二氫-3aH-[1,3]二氧雜環戊烯并[4,5-c]吡咯-5(4H)-甲酸第三丁基酯(26i)中以製備用於下一步驟之溶液。
步驟14：7-((2S,3S,4R,5R)-3,4-二羥基-5-(羥基甲基)吡咯啶-2-基)-3H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-4(5H)-酮鹽酸鹽(26j)之製備
用甲醇稀釋(3aR,4R,6S,6aS)-4-(((第三丁基二甲基矽基)氧基)甲基)-6-(4-甲氧基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基二氫-3aH-[1,3]二氧雜環戊烯并[4,5-c]吡咯-5(4H)-甲酸第三丁基酯(26i)溶液以產生2.5L總體積並裝填至安裝有機械攪拌器、回流冷凝器及內部溫度計之5L多頸圓底燒瓶中。使用油浴加熱溶液並同時經40分鐘裝填濃鹽酸(37%，2.18L或2.62kg)(在此時間期間內部溫度自43℃增加至58℃)。再繼續加熱6h，其中內部溫度達到68℃，此時使溶液冷卻至室溫並再攪拌15h。在旋轉蒸發儀上將褐色溶液濃縮至1.5L至2.0L體積，然後添加水(0.5L)。將懸浮液轉移回5L燒瓶中並加熱以重新溶 解固體。此係在已添加額外水(0.50L)後於50℃下達成。添加炭(95g)，並在50℃下將懸浮液攪拌1h。藉助矽藻土墊過濾來去除炭，用水(約1.0L)洗滌。在旋轉蒸發儀上將現已部分脫色之濾液及洗液濃縮至0.95L體積。將環境溫度溶液轉移至10L燒瓶中並在冰浴中冷卻並攪動。將乙醇(7.90L)逐份裝填至溶液中，使產物結晶。又經2h攪拌，將內部溫度降低至5℃。藉由在氮氣保護下過濾來收集固體產物，並用經預先冷凍之乙醇(3×250mL)洗滌。在過濾漏斗上對產物實施抽乾30分鐘，然後轉移至乾燥盤中。在70℃下對產物實施烘箱乾燥，過夜，得到呈灰白色固體形式之7-((2S,3S,4R,5R)-3,4-二羥基-5-(羥基甲基)吡咯啶-2-基)-3H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-4(5H)-酮鹽酸鹽(26j)(101.2g,58%)。將7-((2S,3S,4R,5R)-3,4-二羥基-5-(羥基甲基)吡咯啶-2-基)-3H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-4(5H)-酮鹽酸鹽(26j)(101.2g)裝填至20L夾套式容器中。添加水(1.52L)並攪動懸浮液直至固體溶解。裝填濃鹽酸(37%,63.6mL)並在25℃下攪拌溶液。在均勻後，將溶液倒入聚乙烯桶中並用水(506mL)將容器沖洗乾淨。作為淨化步驟，在聚丙烯過濾漏斗上藉助濾紙過濾7-((2S,3S,4R,5R)-3,4-二羥基-5-(羥基甲基)吡咯啶-2-基)-3H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-4(5H)-酮鹽酸鹽(26j)溶液且然後裝填回容器中。亦以此方式過濾洗液，然後裝填回容器中。在約15℃下將溶液攪拌45分鐘。經15分鐘將乙醇(1.0L)添加至經攪拌溶液中。添加7-((2S,3S,4R,5R)-3,4-二羥基-5-(羥基甲基)吡咯啶-2-基)-3H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-4(5H)-酮鹽酸鹽(26j)晶種(2.0g)以誘導結晶。在70分鐘後，添加乙醇(1.0L)並在15℃下將懸浮液再攪拌19.5h。將額外乙醇(8.0L)添加至懸浮液中，並在15℃下再繼續攪拌5h。將夾套溫度設定為0℃並再繼續攪拌2h。此時，將懸浮液倒入聚乙烯桶中並在聚丙烯過濾漏斗中藉助濾紙過濾。用經冷凍乙醇(1.0L，然後0.5L)洗滌濾餅並在過濾漏斗上抽乾30分鐘。然後將固體轉移至乾燥盤中並在70℃ 下實施烘箱乾燥，過夜，得到呈灰白色固體形式之7-((2S,3S,4R,5R)-3,4-二羥基-5-(羥基甲基)吡咯啶-2-基)-3H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-4(5H)-酮鹽酸鹽(26j)(176.9g，收率87%)。
步驟15：(2R,3R,4S,5S)-3,4-二羥基-2-(羥基甲基)-5-(4-側氧基-4,5-二氫-3H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)吡咯啶-1-甲酸第三丁基酯(28a)之製備
在室溫下向7-((2S,3S,4R,5R)-3,4-二羥基-5-(羥基甲基)吡咯啶-2-基)-3H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-4(5H)-酮(26j)(446.19gm,1.47mol)於水：甲醇混合物(1：1,10.4L)中之懸浮液中添加三乙胺(621mL,4.42mol，3.0當量)，隨後添加(Boc)2O(987g,4.53mol，3.1當量)。在添加(Boc)2O後，反應混合物變成透明色溶液且內部溫度自28℃略微增加至33℃。在攪拌1小時後溶液開始顯示一些濁度。在室溫下將溶液攪拌過夜。藉由過濾來收集固體產物並用水(5.0L)洗滌，在50℃及高真空下乾燥，提供呈灰白色固體形式之(2R,3R,4S,5S)-3,4-二羥基-2-(羥基甲基)-5-(4-側氧基-4,5-二氫-3H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)吡咯啶-1-甲酸第三丁基酯(28a)(482g,89%)；1H NMR(300MHz,DMSO-d 6 )δ 11.92(s,2H),7.81(s,1H),7.32(d,J=22.7Hz,1H),5.73-5.20(m,1H),5.05-4.91(m,1H),4.87-4.76(m,1H),4.74-4.49(m,1H),4.33-4.17(m,1H),4.09-3.86(m,2H),3.64-3.48(m,2H),1.39-1.00(m,9H)；MS(ES+)755.1(2M+Na),(ES-)731.7(2M-1)；對C16H22N4O6計算之分析值：C,52.45；H,6.05；N,15.29；實驗值：C,52.24；H,6.02；N,15.05。
步驟16：二乙酸(2R,3R,4S,5S)-2-(乙醯氧基甲基)-1-(第三丁氧基羰基)-5-(4-側氧基-4,5-二氫-3H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)吡咯啶-3,4-二基酯(28b)之製備
在室溫下向(2R,3R,4S,5S)-3,4-二羥基-2-(羥基甲基)-5-(4-側氧基-4,5-二氫-3H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)吡咯啶-1-甲酸第三丁基酯(28a) (482g，1.32莫耳，1.0當量)於吡啶(740mL，9.21莫耳，7當量)中之懸浮液中添加DMAP(3.22g,26.32mmol,0.02當量)及乙酸酐(435mL,4.61mmol，3.5當量)。在添加乙酸酐時內部溫度開始升高，因此需要冰水浴冷卻。在酸酐全部添加時溫度升高至67℃，然後降低至室溫。在反應達到25℃後移除冰水浴。懸浮液未得到透明溶液，觀察到懸浮液稍渾濁。在室溫下將反應混合物攪拌14h，得到不透明溶液。經處理等份試樣顯示再無起始材料且TLC(氯仿：甲醇9：1)僅存在兩個主斑點，MS顯示兩個主峰，產物(493.0,M+1)及四乙醯化產物(M+1=535)。用3.0L氯仿稀釋反應混合物，攪拌10分鐘，然後添加2.0L去離子水。在水性有機相界面中形成蠟狀白色未知產物。在實施分配後此未知產物留在水相中。分離出有機相並再用2.0L水洗滌。隨後用1.0L氯仿萃取合併之水層。用2.0N HCl水溶液(2×1.0L)、水(2×1.0L)、飽和碳酸氫鈉(2×1.0L)及鹽水(2×1.0L)洗滌合併有機相。經MgSO4乾燥有機層，過濾並在真空及50℃至55℃水浴下濃縮至乾燥。將真空切換至高真空油幫浦直至不再看到蒸餾物，提供稠密糊漿產物。將圓底燒瓶在高真空油幫浦下放置14h以最小化殘餘吡啶。獲得固體泡沫狀物之組合(715，產率110%)，其變成潔白固體及二乙酸(2R,3R,4S,5S)-2-(乙醯氧基甲基)-1-(第三丁氧基羰基)-5-(4-側氧基-4,5-二氫-3H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)吡咯啶-3,4-二基酯(28b)稠密殘餘物。此百分比反映四乙醯化化合物之量。該產物足夠純可原樣用於下一步驟。藉由使用急驟管柱層析(矽膠，利用存於己烷中之0至100%(9：1)乙酸乙酯/甲醇洗脫)純化混合物來製備分析樣品，提供呈白色固體形式之二乙酸(2R,3R,4S,5S)-2-(乙醯氧基甲基)-1-(第三丁氧基羰基)-5-(4-側氧基-4,5-二氫-3H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)吡咯啶-3,4-二基酯(28b)；1H NMR(300MHz,DMSO-d 6 )δ 12.13(s,1H,D2O可交換)，11.98(s,1H,D2O可交換)，7.82(s,1H),7.29(s,1H),5.76(s, 1H),5.37(t,J=4.5Hz,1H),4.99(s,1H),4.55(dd,J=11.3,6.6Hz,1H),4.34(d,J=8.3Hz,1H),4.03(q,J=7.1Hz,1H),2.01(d,J=12.6Hz,9H),1.23(dd,J=39.9,32.8Hz,9H)；MS(ES+)493.0(M+1)；(ES-)526.7(M+Cl)；對C22H28N4O9計算之分析值：C,53.65；H,5.73；N,11.38；實驗值：C,53.18；H,5.89；N,11.10。
步驟17：二乙酸(2R,3R,4S,5S)-2-(乙醯氧基甲基)-1-(第三丁氧基羰基)-5-(4-氯-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)吡咯啶-3,4-二基酯(28c)之製備
在室溫下向二乙酸(2R,3R,4S,5S)-2-(乙醯氧基甲基)-1-(第三丁氧基羰基)-5-(4-側氧基-4,5-二氫-3H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)吡咯啶-3,4-二基酯(28b)(622g,1.26mol，1.0當量)於乙腈(2.75L)中之溶液中添加苄基三乙基氯化銨(575g,2.5mol，2.0當量)、二甲基苯胺(240mL,1.9mol，1.5當量)，隨後添加POCl3(706mL,7.58mol，6.0當量)。獲得透明淺黃色溶液。將反應混合物緩慢加熱直至80℃並在此溫度下保持10分鐘。TLC(氯仿：甲醇9：1)顯示反應完成>98%。將黑色均勻溶液冷卻至50.0℃並在真空下(70℃至73℃水浴)濃縮以去除POCl3；將殘餘物放置於油幫浦高真空下直至不再看到餾出物。將殘餘物溶解於3.0L氯仿中並小心地用飽和碳酸氫鈉水溶液迅速洗滌直至獲得中性pH。分離出有機層，用水(2L)、鹽水(2L)洗滌，經MgSO4乾燥，過濾並在真空中(50℃至53℃水浴)濃縮至乾燥。二乙酸(2R,3R,4S,5S)-2-(乙醯氧基甲基)-1-(第三丁氧基羰基)-5-(4-氯-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)吡咯啶-3,4-二基酯(28c)黑色產物未經純化原樣用於下一步驟。藉由使用急驟管柱層析(矽膠12g，利用存於己烷中之0至50%乙酸乙酯/甲醇(9：1)洗脫)純化0.5g產物來製備分析樣品，將所獲得相關產物溶解於醚/己烷中，放置過夜。藉由過濾來收集所形成晶體(301mg)，提供呈白色固體形式之二乙酸(2R,3R,4S,5S)-2-(乙醯氧基甲基)-1-(第三丁氧基羰基)-5-(4-氯-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)吡咯啶-3,4-二基酯 (28c)；1H NMR(300MHz,DMSO-d 6 )δ 12.55(s,1H,D2O可交換)，8.65(s,1H),7.87(bs,1H),5.79(bs,1H),5.44(t,J=4.0Hz,1H),5.10(bs,1H),4.56(dd,J=11.5,6.8Hz,1H),4.38(dd,J=11.4,4.1Hz,1H),4.08(bs,1H),2.07(s,3H),2.00(s,6H),1.38(s,4H),1.13(s,5H)；MS(ES+)510.865(M+1),(ES-)508.717(M-1)；對C22H27ClN4O8計算之分析值：C,51.72；H,5.33；Cl,6.94；N,10.97；實驗值：C,51.91；H,5.32；Cl,6.76；N,10.90。
步驟18：二乙酸(2R,3R,4S,5S)-2-(乙醯氧基甲基)-5-(4-疊氮基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-1-(第三丁氧基羰基)吡咯啶-3,4-二基酯(28d)之製備
向二乙酸(2R,3R,4S,5S)-2-(乙醯氧基甲基)-1-(第三丁氧基羰基)-5-(4-氯-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)吡咯啶-3,4-二基酯(28c)(622g,1.26mol，1當量)於DMF(1.5L)中之溶液中添加疊氮化鈉(411g,6.32mol，5當量)並在60℃下加熱10h並攪拌，此時反應已進行至完成(TLC：氯仿甲醇9：1及己烷：乙酸乙酯1：1)。將反應冷卻至25℃，傾倒於冰(2L)中並用氯仿(2×1L)萃取。合併氯仿層，用水(2×2L)、鹽水(2L)洗滌，乾燥，過濾並在真空中濃縮(70℃至80℃水浴)，得到黑色泥狀物。藉由管柱層析(987g黑色泥狀物，8×30英吋管柱，½全矽膠，洗脫曲線己烷：乙酸乙酯；9：1(40.0L)；7：3(20.0L)；6：4(20.0L)；1：1(20L)；4：6(20.0L)及2：8(20.0L))來達成泥狀物之純化。將適當流份彙集並在真空中濃縮(50.0℃水浴)，提供呈稠密淡紅色蜂蜜狀產物形式之二乙酸(2R,3R,4S,5S)-2-(乙醯氧基甲基)-5-(4-疊氮基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-1-(第三丁氧基羰基)吡咯啶-3,4-二基酯(28d)(407.05g，兩個步驟之產率為62.3%)。藉由急驟管柱層析(存於己烷中之0至100%乙酸乙酯)純化混合物來製備分析樣品，提供呈橙色固體形式之二乙酸(2R,3R,4S,5S)-2-(乙醯氧基甲基)-5-(4-疊氮基- 5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-1-(第三丁氧基羰基)吡咯啶-3,4-二基酯(28d)。1H NMR(300MHz,DMSO-d 6 )δ 13.08(d,J=155.6Hz,1H,D2O可交換)，9.86(s,1H),7.61(d,J=76.8Hz,1H),5.78(t,J=4.5Hz,1H),5.41(t,J=4.3Hz,1H),5.21(s,1H),4.55(dd,J=11.4,6.4Hz,1H),4.41(dd,J=11.4,3.9Hz,1H),4.07(d,J=16.5Hz,1H),2.06(s,3H),2.01(d,J=9.9Hz,6H),1.23(dd,J=39.8,32.7Hz,9H)；MS(ES+)518.0(M+1),540(M+23)；(ES-)516.4(M-1)；對C22H27N7O8計算之分析值：C,51.06；H,5.26；N,18.95；實驗值：C,50.97；H,5.30；N,18.62。
步驟19：二乙酸(2R,3R,4S,5S)-2-(乙醯氧基甲基)-5-(4-胺基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-1-(第三丁氧基羰基)吡咯啶-3,4-二基酯(28e)之製備
二乙酸(2R,3R,4S,5S)-2-(乙醯氧基甲基)-5-(4-疊氮基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-1-(第三丁氧基羰基)吡咯啶-3,4-二基酯(28d)係以三個不同批次如下還原。
批次1：向2.0L Parr氫化器(聚四氟乙烯插入件)中添加二乙酸(2R,3R,4S,5S)-2-(乙醯氧基甲基)-5-(4-疊氮基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-1-(第三丁氧基羰基)吡咯啶-3,4-二基酯(28d)(108.01g，300mmol存於甲醇中，800mL)、Pd(OH)2(21.6g,20% w/w)。
批次2：向2.0L Parr氫化器(聚四氟乙烯插入件)中添加二乙酸(2R,3R,4S,5S)-2-(乙醯氧基甲基)-5-(4-疊氮基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-1-(第三丁氧基羰基)吡咯啶-3,4-二基酯(28d)(140.70g，271.9mmol存於甲醇中，1.0L)、Pd(OH)2(28.14g,20% w/w)。
批次3：向2.0L Parr氫化器(聚四氟乙烯插入件)中添加二乙酸(2R,3R,4S,5S)-2-(乙醯氧基甲基)-5-(4-疊氮基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-1-(第三丁氧基羰基)吡咯啶-3,4-二基酯(28d)(140.7g，271.9 mmol存於甲醇中，1.0L)、Pd(OH)2(28.14g,20% w/w)。
在150psi下將反應混合物氫化15h至18h。藉助矽藻土過濾反應混合物以去除觸媒。在真空中濃縮濾液(60℃至70℃水浴)直至恒重，提供深色產物二乙酸(2R,3R,4S,5S)-2-(乙醯氧基甲基)-5-(4-胺基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-1-(第三丁氧基羰基)吡咯啶-3,4-二基酯(28e)(328.8g,89%)。產物足夠純可原樣用於下一步驟。藉由使用急驟管柱層析(存於氯仿中之0至10%甲醇)純化混合物來製備分析樣品。1H NMR(300MHz,DMSO-d 6 )δ 11.06(s,1H),8.12(s,1H),7.49(s,1H),6.94(s,2H),5.86(s,1H),5.44(t,J=4.2Hz,1H),5.02(s,1H),4.56(dd,J=11.3,6.9Hz,1H),4.40(dd,J=11.3,4.2Hz,1H),4.16-3.98(m,1H),2.09-1.94(m,9H),1.48-1.14(m,9H)；MS(ES+)492.1(M+1)；(ES-)526.4(M+Cl)；對C22H29N5O8.1.25H2O計算之分析值：C,51.41；H,6.18；N,13.62；實驗值：C,51.24；H,5.92；N,13.33。
步驟20：(2S,3S,4R,5R)-2-(4-胺基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-3,4-二羥基-5-(羥基甲基)吡咯啶-1-甲酸第三丁基酯(28f)之製備
批次1.在室溫下向二乙酸(2R,3R,4S,5S)-2-(乙醯氧基甲基)-5-(4-胺基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-1-(第三丁氧基羰基)吡咯啶-3,4-二基酯(28e)(81.5g,165.8mmol)中添加無水甲醇(370mL)，隨後添加NaOMe(甲醇鈉，存於甲醇中之25wt.%溶液，4.49g,20.76mmol)。在室溫下攪拌反應混合物直至TLC(氯仿：甲醇9：1)顯示所有起始材料均已反應。
批次2.在室溫下向二乙酸(2R,3R,4S,5S)-2-(乙醯氧基甲基)-5-(4-胺基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-1-(第三丁氧基羰基)吡咯啶-3,4-二基酯(28e)(117.8g,239.6mmol)中添加無水甲醇(530mL)，隨後添加NaOMe(甲醇鈉，存於甲醇中之25wt.%溶液，6.58g,30.45mmol)。 在室溫下攪拌反應混合物直至TLC(氯仿：甲醇9：1)顯示所有起始材料均已反應。
批次3.在室溫下向二乙酸(2R,3R,4S,5S)-2-(乙醯氧基甲基)-5-(4-胺基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-1-(第三丁氧基羰基)吡咯啶-3,4-二基酯(28e)(129.5g,263.5mmol)中添加無水甲醇(584mL)，隨後添加NaOMe(甲醇鈉，存於甲醇中之25wt.%溶液，6.99g,32.35mmol)。在室溫下攪拌反應混合物直至TLC(氯仿：甲醇9：1)顯示所有起始材料均已反應(7h至8h)。
將上文溶液濃縮(65℃至75℃水浴)，提供(2S,3S,4R,5R)-2-(4-胺基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-3,4-二羥基-5-(羥基甲基)吡咯啶-1-甲酸第三丁基酯(28f)，其足夠純可原樣用於下一步驟。藉由使用急驟管柱層析(存於氯仿中之0至10%甲醇)純化混合物來製備分析樣品。1H NMR(300MHz,DMSO-d 6 )δ 10.77(s,1H),8.01(s,1H),7.40(s,1H),6.82(s,3H),5.04-4.91(m,1H),4.87-4.74(m,1H),4.56-4.35(m,2H),4.04-3.90(m,2H),3.72-3.63(m,1H),3.59-3.41(m,1H),1.15(2s,9H)；MS(ES+)366.1(M+1)；(ES-)400.3(M+Cl)；對C16H23N5O5.0.25H2O計算之分析值：C,51.33；H,6.46；N,18.71；實驗值：C,51.04；H,6.43；N,18.48。
甲氧基-N-(苄氧基甲基)-9-溴-9-脫氮次黃嘌呤(27f)之製備
步驟1：3-胺基-1H-吡咯-2,4-二甲酸二甲基酯(27b)之製備
在室溫下向胺基丙二酸二乙基酯(370.4g,1.75mol)於甲醇(3.6L)中之溶液中一次性添加5.4M NaOMe(975mL,5.25mol)溶液(反應混合物顏色為淺褐色)。向反應混合物中以三份添加(乙氧基亞甲基)氰基乙酸乙基酯(27a)(296g,1.75mol)(在添加期間未觀察到過大溫度變化，變化約1℃，反應顏色自淺褐色變化至深褐色)。在回流下將反應混合物加熱48h(實施TLC分析(存於己烷中之50%乙酸乙酯)以檢查起 始材料之消失)。藉由添加AcOH(210mL，3.5莫耳)將反應混合物中和至pH 6。在真空中濃縮反應混合物，提供褐色殘餘物。用水(3L)研磨殘餘物，過濾，用水(500mL)及己烷洗滌。將其風乾48h並在真空烘箱中於60℃下乾燥，提供287g(83%)呈褐色固體形式之3-胺基-1H-吡咯-2,4-二甲酸二甲基酯(27b)。其原樣用於下一步驟。
步驟2：3H,5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-4-酮(27c)之製備
在回流下將3-胺基-1H-吡咯-2,4-二甲酸二甲基酯(27b)(286g，1.44莫耳)及乙酸甲脒(451g,4.33莫耳)於乙醇(2.8L，2mL/毫莫耳)中之混合物加熱過夜。反應混合物開始不均勻，但回流2h後看似均勻且顏色為深褐色(隨著固體開始自溶液析出，攪拌變得困難)。等份試樣(存於己烷中之50%乙酸乙酯)之TLC分析指示仍存在一些未反應起始材料。在回流下將反應混合物再繼續加熱24h並冷卻至室溫。藉由過濾來收集所獲得固體，用水及己烷洗滌並在真空中乾燥，提供呈淺褐色固體形式之3H,5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-4-酮(27c)(223g,80%)。該材料未經純化原樣使用。
步驟3：3H,5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-4-酮(22a)之製備
在溫和回流下將3H,5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-4-酮(27c)(130.4g，0.675莫耳)於2N KOH(1.35L，2.7莫耳)中之混合物加熱40h。將反應混合物冷卻至60℃並小心地用冰乙酸(162mL，2.7莫耳)中和至pH 6(觀察到因脫羧而起泡且反應混合物顏色係黑色)。將反應混合物冷卻至室溫並藉由過濾來收集所獲得固體，用水(2×250mL)洗滌，風乾並在高真空下在P2O5上乾燥，提供呈淺黑灰色固體形式之產物(145g,159%)。產物之NMR指示大量乙酸或其鹽，故產率更高。使用CMA-80作為溶劑系統之TLC在基線處顯示純淨產物加一些產物。將產物用水(400mL)研磨並用飽和NaHCO3水溶液中和直至不冒泡且pH為約7至8。藉由過濾來收集淺黑灰色固體並用水洗滌，在風乾48h後提供 67.62g(74%)產物。在真空中在乙醇回流溫度下進一步乾燥產物，得到呈淺黑灰色粉末形式之3H,5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-4-酮(22a)；分析純樣品之MP>250℃；1H NMR(360MHz,DMSO-d 6 )δ 12.05(s，D2O可交換，1H),11.82(s，D2O可交換，1H),7.77(s,1H),7.36(s,1H),6.35(s,1H)。13C-NMR(DMSO-d6)153.88,144.80,141.66,127.51,117.92,103.10；IR(KBr)3107cm-1、3030cm-1及1674cm-1；MS(ES+)136.2(M+1)；對C6H5N3O計算之分析值：C,53.33；H,3.73；N,31.10；實驗值：C,53.38；H,3.77；N,31.11。
步驟4：4-氯吡咯并[3,2-d]嘧啶(27d)之製備
在N2下向3H,5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-4-酮(22a)樣品(31.08g,230mmol)中添加磷醯氯(60mL,644mol，2.8當量)。在回流下將混合物加熱1h，在此時間期間，反應變為黑色均勻。在冰水浴中冷卻反應且然後傾倒至碎冰(775mL)中並攪拌。用濃NH4OH(225mL)將水溶液之pH緩慢調節至約pH 8並繼續冷卻混合物。藉由真空過濾來收集所得沈澱物並用水洗滌。將固體轉移至乾燥盤中並在110℃及真空下乾燥，提供呈深灰色固體形式之4-氯吡咯并[3,2-d]嘧啶(27d)(31.48g,89%)。藉由實施管柱層析(矽膠，EtOAc-己烷，35：65)隨後蒸發相關流份來獲得分析樣品。用EtOAc-MeOH研磨固體，提供呈灰白色固體形式之4-氯吡咯并[3,2-d]嘧啶(27d)，MP>150℃(dec)；1H NMR(DMSO-d 6 )δ 12.43(s，D2O可交換，1H),8.61(s,1H),7.97(dd,J=2.8,2.8Hz；D2O交換塌陷至d,1H),6.72(dd,J=1.7,3.5Hz；D2O交換塌陷至d，1H)。13C-NMR(DMSO-d6)151.30,149.58,142.12,134.83,124.32,102.70；IR(純淨)3128,3078,2979,1621cm-1；MS(ES+)154.01(100%,M+1)及156.01(33%)；對C6H4N3Cl計算之分析值：C,46.93；H,2.63；N,27.36；Cl,23.09；實驗值：C,47.10；H,2.79；N,27.15；Cl,22.93。
步驟5：6-甲氧基-N-(苄氧基甲基)-9-脫氮次黃嘌呤(27e)之製備
向冷卻至4℃之經預先洗滌之NaH(20g,500mmol，1.25當量，60%油懸浮液，用己烷洗滌2次)於無水THF(1.0L)中之懸浮液中小心地逐份添加固體4-氯吡咯并[3,2-d]嘧啶(27d)(61.4g,400mmol)並在N2下經10min至15min分批攪拌以控制H2氣體逸出。在約1小時後，氣體逸出停止並在4℃下經45min逐滴添加苄基氯甲醚(61mL,440mmol，1.1當量)(觀察到額外氣體逸出)。使所得混合物升溫至環境溫度並攪拌1h。將反應混合物冷卻至4℃並小心地用甲醇鈉(93mL，存於甲醇中之5.4M溶液，500mmol)淬滅。使混合物升溫至環境溫度，過夜，並用冰乙酸(30mL,500mmol)中和至pH 6。將混合物濃縮並用水(2×400mL)研磨殘餘物。對水層實施傾析並在真空中乾燥殘餘物。將殘餘物吸收於乙酸乙酯(250mL)中並煮沸至回流並藉助槽狀濾紙過濾。使殘餘物與乙酸乙酯(2×100mL)共沸並過濾(留下的殘餘物係不期望化合物且在TLC分析(存於己烷中之50%乙酸乙酯)中未去除)。合併濾液，在真空中濃縮至250mL並在冰箱中保持過夜。藉由過濾來收集所獲得褐色晶體，用冰冷乙酸乙酯/己烷(2×100mL)洗滌並在真空中乾燥，提供呈橙色褐色固體形式之6-甲氧基-N-(苄氧基甲基)-9-脫氮次黃嘌呤(27e)(46.64g,43%)。藉由自乙酸乙酯重結晶來製備分析樣品；MP 123℃至127℃；1H NMR(DMSO-d 6 )δ 8.44(s,1H),7.86(d,J=3.1Hz,1 H),7.31-7.22(m,5 H),6.62(d,J=3.6Hz,1 H),5.75(s,2 H),4.49(s,2 H),4.05(s,3 H)；13C-NMR(DMSO-d6)156.11,151.59,150.09,137.82,134.80,128.53,127.87,127.77,114.99,103.08,77.55,69.95,53.73；IR(KBr)1602cm-1；MS(ES+)269.97(M+1)；對C15H15N3O2計算之分析值：C,66.90；H,5.61；N,15.60；實驗值：C,67.09；H,5.60；N,15.60。
步驟6：6-甲氧基-N-(苄氧基甲基)-9-溴-9-脫氮次黃嘌呤(27f)之製備
在N2下經30min向冷卻至4℃之6-甲氧基-N-(苄氧基甲基)-9-脫氮次黃嘌呤(27e)(59.81g,222mmol)於二氯甲烷(225mL)中之溶液(均勻反應混合物)中逐份添加NBS(40.3g,224mol，1.01當量)以維持反應溫度低於15℃。在0℃下將混合物攪拌15min並經15min使其升溫至室溫(TLC分析：存於己烷中之50%乙酸乙酯)。對反應混合物實施真空過濾以去除不溶琥珀醯亞胺。用水(2×250mL)及鹽水(200mL)洗滌濾液，乾燥(Na2SO4)，過濾並在真空中濃縮，提供呈淺褐色固體形式之產物。藉由在乙酸乙酯(200mL)中煮沸來溶解固體並用己烷(200mL)稀釋。將溶液煮沸至回流並極迅速地趁熱過濾(以避免固體結晶出來)。然後將濾液煮沸並以200mL增量添加己烷(己烷總體積為1600mL)。視需要對熱溶液實施傾析以去除不溶殘餘物(產物可溶於熱存於己烷中之10%乙酸乙酯中)。使熱濾液冷卻至室溫且然後在冷凍器中保持過夜。藉由過濾來收集所獲得固體並用己烷洗滌並在室溫下在真空中乾燥以提供呈淺黃色固體形式之6-甲氧基-N-(苄氧基甲基)-9-溴-9-脫氮次黃嘌呤(27f)(59.6g,77%)：MP 103℃至108℃；1H NMR(DMSO-d 6 )δ 8.51(s,1H),8.12(s,1H),7.31-7.22(m,5H),5.74(s,2H),4.52(s,2H),4.07(s,3H)。13C-NMR(DMSO-d6)156.19,150.66,148.14,137.59,133.45,128.38,127.80,127.67,115.02,90.90,77.79,70.25,54.07；IR(KBr)3078,1602,1542cm-1；MS(ES+)348.27(100%),350.28(98%)；對C15H14N3O2Br計算之分析值：C,51.74；H,4.05；N,12.07；實驗值：C,51.72；H,4.04；N,12.06。
實例2：(S)-2-胺基-3-甲基丁酸((2R,3R,4S,5S)-5-(4-胺基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-3,4-二羥基吡咯啶-2-基)甲基酯鹽酸鹽(30f)
方法A：
在室溫下將(3aS,4S,6R,6aR)-4-(4-胺基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-6-(((2-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)氧基)甲基)-2,2-二甲基二氫-3aH-[1,3]二氧雜環戊烯并[4,5-c]吡咯-5(4H)-甲酸第三丁基酯(30e)(600mg,1mmol)於TFA(10mL)中之溶液攪拌1h並在真空中濃縮至乾燥。將殘餘物溶解於10mL AcOH中並添加BCl3溶液(3.6mL,3.6mmol，1M存於二氯甲烷中)，在室溫下攪拌4min並用水(5mL)淬滅。將反應混合物濃縮至乾燥。將殘餘物冷涷乾燥，得到呈白色固體形式之(S)-2-胺基-3-甲基丁酸((2R,3R,4S,5S)-5-(4-胺基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-3,4-二羥基吡咯啶-2-基)甲基酯鹽酸鹽(30f)(400mg,76%)；1H NMR(300MHz,DMSO-d 6 /D2O)δ 8.64(s,1H),8.21(s,1H),4.83(d,J=8.4Hz,1H),4.63-4.49(m,3H),4.27-4.19(m,1H),3.94(d,J=4.8Hz,1H),3.82-3.70(m,1H),2.33-2.18(m,1H),0.99(d,J=6.9Hz,6H)；MS(ES+)365.1(M+1)；對C16H27Cl3N6O4.3HCl.2.5H2O計算之分析值：C,37.17；H,6.07；Cl,20.16；N,16.09；實驗值：C,37.04；H,6.22；Cl,20.50；N,16.20。
方法B：
向(3aS,4S,6R,6aR)-4-(4-胺基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-6-(((2-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)氧基)甲基)-2,2-二甲基二氫-3aH-[1,3]二氧雜環戊烯并[4,5-c]吡咯-5(4H)-甲酸第三丁基酯(30e)(0.151g,0.25mmol)於丙酮(2mL)中之溶液中添加濃硫酸(18N,0.139mL,2.5mmol)並在室溫下攪拌過夜。對反應混合物實施傾析並向殘餘 物中添加煮沸並冷卻至室溫之丙酮(10mL)。藉由過濾來收集所獲得固體，提供呈白色固體形式之2-胺基-3-甲基丁酸((2R,3R,4S,5S)-5-(4-胺基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-3,4-二羥基吡咯啶-2-基)甲基酯硫酸鹽(30f)；1H NMR(300MHz,D2O)δ 8.42(s,1H),8.04(s,1H),5.05(d,J=8.1Hz,1H),4.79(d,J=4.9Hz,1H),4.62(dd,J=12.6,7.5Hz,1H),4.55(t,J=5.2Hz,1H),4.20-4.08(m,3H),2.45-2.28(m,1H),1.06(t,J=7.3Hz,6H)。
方法C：
向(3aS,4S,6R,6aR)-4-(4-胺基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-6-(((2-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)氧基)甲基)-2,2-二甲基二氫-3aH-[1,3]二氧雜環戊烯并[4,5-c]吡咯-5(4H)-甲酸第三丁基酯(30e)(0.302g,0.5mmol)於MTBE(2.5mL)中之溶液中添加水(0.046mL)及濃硫酸(0.138mL,5.00mmol)，隨後在15min後添加MTBE(2.5mL)並在室溫下攪拌4h。對TBDME實施傾析，添加水(0.5mL)並攪拌以溶解固體，然後添加乙醇(9.5mL)並劇烈攪拌2h。藉由過濾來收集所獲得細緻固體，用乙醇洗滌，得到呈白色固體形式之2-胺基-3-甲基丁酸((2R,3R,4S,5S)-5-(4-胺基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-3,4-二羥基吡咯啶-2-基)甲基酯硫酸鹽(30f)(0.288g，產率103%)；1H NMR(300MHz,DMSO-d 6 /D2O)δ 8.26(s,1H),7.81(s,1H),4.67(d,J=6.7Hz,1H),4.59-4.41(m,3H),4.27(t,J=5.6Hz,1H),3.91(d,J=4.6Hz,1H),3.81-3.69(m,1H),2.28-2.10(m,1H),0.97(d,J=6.9Hz,6H)。
方法D：
向(3aS,4S,6R,6aR)-4-(4-胺基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-6-(((2-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)氧基)甲基)-2,2-二甲基二氫-3aH-[1,3]二氧雜環戊烯并[4,5-c]吡咯-5(4H)-甲酸第三丁基酯(30e)(0.302g,0.5mmol)於MTBE(2.5mL)中之溶液中添加水(0.138mL)及 濃硫酸(0.138mL,5.00mmol)，隨後在15min後添加MTBE(2.5mL)並在室溫下攪拌4h。對TBDME實施傾析，添加乙醇(9.5mL)並攪拌2h，藉由過濾來收集固體，在真空中乾燥，提供2-胺基-3-甲基丁酸((2R,3R,4S,5S)-5-(4-胺基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-3,4-二羥基吡咯啶-2-基)甲基酯硫酸鹽白色固體(30f)(0.160g,0.285mmol，產率57.1%)。
(3aS,4S,6R,6aR)-4-(4-胺基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-6-(((2-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)氧基)甲基)-2,2-二甲基二氫-3aH-[1,3]二氧雜環戊烯并[4,5-c]吡咯-5(4H)-甲酸第三丁基酯(30e)之製備
步驟1：(2S,3S,4R,5R)-2-(4-氯-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-3,4-二羥基-5-(羥基甲基)吡咯啶-1-甲酸第三丁基酯(30a)之製備
在室溫下向溶解於甲醇(200mL)中之二乙酸(2R,3R,4S,5S)-2-(乙醯氧基甲基)-1-(第三丁氧基羰基)-5-(4-氯-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)吡咯啶-3,4-二基酯(28c)(25.8g,50.5mmol)溶液中添加25% wt存於甲醇中之甲醇鈉(3.6mL,16.66mmol)。在室溫下將反應混合物攪拌過夜。將反應混合物濃縮至乾燥並利用600g管柱純化，得到呈無色泡沫狀物形式之(2S,3S,4R,5S)-2-(4-氯-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-3,4-二羥基-5-(羥基甲基)吡咯啶-1-甲酸第三丁基酯(30a)(17.7g,46mmol，產率91%)；1H NMR(300MHz,DMSO-d 6 )δ 12.34(s,1H),8.62(s,1H),7.94(s,1H),5.40-5.02(m,2H),4.96-4.70(m,2H),4.41-4.25(m,1H),4.13-3.93(m,2H),3.69-3.51(m,2H),1.35(s,3H),1.01(s,6H)；MS(ES+)384.9(M+1),792.6(2M+Na)；(ES-)382.6(M-1)。
步驟2：(3aS,4S,6R,6aR)-4-(4-氯-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-6-(羥基甲基)-2,2-二甲基二氫-3aH-[1,3]二氧雜環戊烯并[4,5-c]吡咯-5(4H)-甲 酸第三丁基酯(30b)之製備
向(2S,3S,4R,5R)-2-(4-氯-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-3,4-二羥基-5-(羥基甲基)吡咯啶-1-甲酸第三丁基酯(30a)(16.3g,42.4mmol)於丙酮(400mL)中之溶液中添加2,2-二甲氧基丙烷(11.17mL,89mmol)及4-甲基苯磺酸水合物(0.41g,2.12mmol)。在室溫下將反應攪拌過夜。用TEA(590μL,4.24mmol)淬滅反應混合物並濃縮至乾燥。藉由急驟管柱層析(矽膠500g)來純化殘餘物，得到呈無色泡沫狀物形式之(3aS,4S,6R,6aR)-4-(4-氯-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-6-(羥基甲基)-2,2-二甲基二氫-3aH-[1,3]二氧雜環戊烯并[4,5-c]吡咯-5(4H)-甲酸第三丁基酯(30b)(10.7g,25.2mmol，產率59.5%)；1H NMR(300MHz,DMSO-d 6 )δ 12.45(s,1H),8.67(s,1H),7.81(s,1H),5.09(d,J=36.7Hz,3H),4.82(d,J=5.7Hz,1H),4.00(s,1H),3.53(s,1H),3.34(s,1H),1.47(s,3H),1.40(bs,4H),1.29(bs,4H),1.20(bs,4H)；MS(ES+)426.9(M+1)；422.6(M-1)。
步驟3：(3aS,4S,6S,6aR)-4-(4-疊氮基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-6-(羥基甲基)-2,2-二甲基二氫-3aH-[1,3]二氧雜環戊烯并[4,5-c]吡咯-5(4H)-甲酸第三丁基酯(30c)之製備
向(3aS,4S,6R,6aR)-4-(4-氯-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-6-(羥基甲基)-2,2-二甲基二氫-3aH-[1,3]二氧雜環戊烯并[4,5-c]吡咯-5(4H)-甲酸第三丁基酯(30b)(5.1g,12mmol)於DMF(30mL)中之溶液中添加疊氮化鈉(3.9g,60mmol)，在80℃下將所得溶液攪拌4h。在真空中濃縮反應混合物以去除大多數DMF並將所獲得殘餘物溶解於氯仿中。用水洗滌有機層，用MgSO4乾燥並在真空中濃縮，得到(3aS,4S,6R,6aR)-4-(4-疊氮基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-6-(羥基甲基)-2,2-二甲基二氫-3aH-[1,3]二氧雜環戊烯并[4,5-c]吡咯-5(4H)-甲酸第三丁基酯(30c)(5g,97%)；1H NMR(300MHz,DMSO-d 6 )δ 13.22 (bs,1H),9.87(s,1H),7.69-7.47(m,1H),5.28(m,1H),5.05(m,2H),4.81(d,J=5.9,1H),4.06-3.91(m,1H),3.57(m,1H),3.51-3.38(m,1H),1.48(s,3H),1.41-1.23(bs,9H),1.30(s,3H)；MS(ES+)454(M+Na),863.1(2M+1),885.2(2M+Na)；(ES-)429.7(M-1)。
步驟4：(3aS,4S,6R,6aR)-4-(4-疊氮基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-6-((((S)-2-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)氧基)甲基)-2,2-二甲基二氫-3aH-[1,3]二氧雜環戊烯并[4,5-c]吡咯-5(4H)-甲酸第三丁基酯(30d)之製備
向(3aS,4S,6R,6aR)-4-(4-疊氮基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-6-(羥基甲基)-2,2-二甲基二氫-3aH-[1,3]二氧雜環戊烯并[4,5-c]吡咯-5(4H)-甲酸第三丁基酯(30c)(1.088g,2.5mmol)及(S)-2-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-甲基丁酸(L-Boc纈胺酸，0.543g,2.5mmol)於DMF(20mL)中之溶液中添加EDCI(1.198g,6.25mmol)及DMAP(92mg,0.75mmol)。在室溫下將反應混合物攪拌10天並用水(60mL)淬滅，用乙酸乙酯(3×50mL)萃取。將有機層合併，用水、鹽水(2×50mL)洗滌，乾燥並在真空中濃縮。藉由急驟管柱層析將所獲得殘餘物純化兩次，得到呈白色固體形式之(3aS,4S,6R,6aR)-4-(4-疊氮基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-6-((((S)-2-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)氧基)甲基)-2,2-二甲基二氫-3aH-[1,3]二氧雜環戊烯并[4,5-c]吡咯-5(4H)-甲酸第三丁基酯(30d)(0.75g,47%)；1H NMR(300MHz,DMSO-d 6 )δ 13.30(s,1H),9.88(s,1H),7.60(s,1H),7.10(s,1H),5.34(s,1H),5.20(dd,J=5.7,1.5Hz,1H),4.82(d,J=5.8Hz,1H),4.34-4.14(m,2H),3.80(dd,J=8.0,5.9Hz,1H),3.34(s,1H),1.97-1.84(m,1H),1.47(s,3H),1.43-1.31(m,21H),0.80(dd,J=6.9,5.2Hz,6H)；MS(ES-)629.1(M-1)；IR(KBr)2315cm-1。
步驟5：(3aS,4S,6R,6aR)-4-(4-胺基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-6- ((((S)-2-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)氧基)甲基)-2,2-二甲基二氫-3aH-[1,3]二氧雜環戊烯并[4,5-c]吡咯-5(4H)-甲酸第三丁基酯(30e)之製備
向(3aS,4S,6R,6aR)-4-(4-疊氮基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-6-((((S)-2-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)氧基)甲基)-2,2-二甲基二氫-3aH-[1,3]二氧雜環戊烯并[4,5-c]吡咯-5(4H)-甲酸第三丁基酯(30d)(0.72g,1.19mmol)於甲醇(20mL)中之溶液中添加Pd/C(200mg，5% wt存於C上)並在氫氣氣氛下氫化2h。藉助矽藻土過濾來去除觸媒並在真空中濃縮濾液。利用管柱來純化所獲得殘餘物，提供呈白色固體形式之(3aS,4S,6R,6aR)-4-(4-胺基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-6-((((S)-2-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)氧基)甲基)-2,2-二甲基二氫-3aH-[1,3]二氧雜環戊烯并[4,5-c]吡咯-5(4H)-甲酸第三丁基酯(30e)(600mg,83%)。1H NMR(300MHz,DMSO-d 6 )δ 11.97(s,1H),10.87(s,1H),8.09(s,1H),7.36(s,1H),6.78(s,2H),5.30-5.22(m,1H),5.19-5.07(m,1H),4.88(d,J=5.9Hz,1H),4.18-4.07(m,2H),3.87-3.79(m,1H),3.44(qd,J=7.0,5.1Hz,1H),2.01-1.92(m,1H),1.44-1.32(m,21H),1.28(s,3H),0.82(d,J=6.7Hz,6H)；MS(ES+)605.1(M+1)。
實例3：2-胺基-3-甲基戊酸(2S,3S)-((2R,3R,4S,5S)-5-(4-胺基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-3,4-二羥基吡咯啶-2-基)甲基酯鹽酸鹽(31c)
在室溫下將(3aS,4S,6R,6aR)-4-(4-胺基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-6-((((2S,3S)-2-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-甲基戊醯基)氧基)甲基)- 2,2-二甲基二氫-3aH-[1,3]二氧雜環戊烯并[4,5-c]吡咯-5(4H)-甲酸第三丁基酯(31b)(0.398g,0.643mmol)於三氟乙酸(10mL)中之溶液攪拌1h並在真空中濃縮至乾燥。用甲苯(20mL)研磨殘餘物，在真空中濃縮至乾燥。將所獲得殘餘物溶解於AcOH(10mL)中並向其中添加三氯化硼溶液(2.32mL,2.32mmol)，在室溫下攪拌4min並用水(5mL)淬滅。在真空中將反應混合物濃縮至乾燥。將所獲得膠黏固體溶解於水(5mL)中並過濾。將濾液冷涷乾燥，得到呈白色固體形式之2-胺基-3-甲基戊酸(2S,3S)-((2R,3R,4S,5S)-5-(4-胺基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-3,4-二羥基吡咯啶-2-基)甲基酯(31c)(0.275g，產率88%)。
1H NMR(300MHz,D2O)δ 8.24(s,1H),7.87(s,1H),4.89(d,J=8.0Hz,1H),4.61-4.43(m,3H),4.41(t,J=5.0Hz,1H),4.04(d,J=3.9Hz,1H),3.98(dt,J=6.7,4.2Hz,1H),2.00-1.88(m,1H),1.41-1.10(m,2H),0.88(d,J=7.0Hz,3H),0.79(t,J=7.4Hz,3H)；1H NMR(300MHz,DMSO-d 6 /D2O)δ 8.61(s,1H),8.17(s,1H),4.85(d,J=8.3Hz,1H),4.62(dd,J=12.2,4.2Hz,1H),4.57-4.46(m,2H),4.24(t,J=5.0Hz,1H),4.01(d,J=4.1Hz,1H),2.01-1.94(m,1H),1.56-1.39(m,1H),1.36-1.22(m,1H),0.96(d,J=6.9Hz,3H),0.90(t,J=7.3Hz,3H)；MS(ES+)379.1(M+1),(ES-)412.5(M+Cl)；HPLC[Restek Pinnacle DB C18,150×4.6mm,5μm，流速：在40℃下1.0mL/分鐘。「A」緩衝液=將4.3g 1-辛烷磺酸鈉一水合物溶解於900mLHPLC級水中。添加10mL乙酸及100mL乙腈。「B」緩衝液=將4.3g 1-辛烷磺酸鈉一水合物溶解於600mL HPLC級水中。添加10mL乙酸及400mL乙腈，UV吸光度=260nM；(A：B,85/15(0min)至A：B 0/100(25min)至A：B 0/100(40min)至A：B 85/15(50min))Rt=22.79(97.26%)]；對C17H26N6O4．3HCl．2.25H2O．2B(OH)3計算之分析值：C,31.84；H,6.21；Cl,16.59；N,13.11；實驗值：C,31.99；H,6.13； Cl,16.33；N,12.80。
(3aS,4S,6R,6aR)-4-(4-胺基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-6-((((2S,3S)-2-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-甲基戊醯基)氧基)甲基)-2,2-二甲基二氫-3aH-[1,3]二氧雜環戊烯并[4,5-c]吡咯-5(4H)-甲酸第三丁基酯(31b)之製備
步驟1：(3aS,4S,6R,6aR)-4-(4-疊氮基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-6-((((2S,3S)-2-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-甲基戊醯基)氧基)甲基)-2,2-二甲基二氫-3aH-[1,3]二氧雜環戊烯并[4,5-c]吡咯-5(4H)-甲酸第三丁基酯(31a)之製備
向(3aS,4S,6R,6aR)-4-(4-疊氮基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-6-(羥基甲基)-2,2-二甲基二氫-3aH-[1,3]二氧雜環戊烯并[4,5-c]吡咯-5(4H)-甲酸第三丁基酯(30c)(1.079g,2.5mmol)、(2S,3S)-2-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-甲基戊酸(Boc-L-異白胺酸)(0.578g,2.5mmol)於DMF(20mL)中之溶液中添加N1-((乙基亞胺基)亞甲基)-N3,N3-二甲基丙烷-1,3-二胺鹽酸鹽(EDCI,1.20g,6.25mmol)及N,N-二甲基吡啶-4-胺(DMAP,0.092g,0.75mmol)。在室溫下將反應混合物攪拌5天，用1N HCl水溶液(5.00mL)及水(60mL)淬滅。用乙酸乙酯(3×50mL)萃取反應混合物。將有機層合併，用水(2×25mL)、鹽水洗滌，乾燥並在真空中濃縮。藉由急驟管柱層析(矽膠，25g，利用0至100%存於己烷中之乙酸乙酯洗脫)來純化所獲得殘餘物，得到呈白色固體形式之(3aS,4S,6R,6aR)-4-(4-疊氮基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-6-((((2S,3S)-2-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-甲基戊醯基)氧基)甲基)-2,2-二甲基二氫-3aH-[1,3]二氧雜環戊烯并[4,5-c]吡咯-5(4H)-甲酸第三丁基酯(31a)(0.683g，產率42%)；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ 13.29(s,1H，D2O可交換)，9.86(s,1H),7.59(s,1H),7.11(d,J=7.0Hz,1H),5.32(s,1H),5.20(d,J=5.8Hz,1H),4.81(d,J=5.7Hz,1H), 4.28(bs,2H),4.08-3.93(m,1H),3.90-3.77(m,1H),1.62(s,1H),1.52-1.21(m,26H),0.84-0.66(m,6H)；MS(ES+)645.2(M+1),667.2(M+Na),(ES-)643.1(M-1)。
步驟2：(3aS,4S,6R,6aR)-4-(4-胺基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-6-((((2S,3S)-2-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-甲基戊醯基)氧基)甲基)-2,2-二甲基二氫-3aH-[1,3]二氧雜環戊烯并[4,5-c]吡咯-5(4H)-甲酸第三丁基酯(31b)之製備
向(3aS,4S,6R,6aR)-4-(4-疊氮基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-6-((((2S,3S)-2-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-甲基戊醯基)氧基)甲基)-2,2-二甲基二氫-3aH-[1,3]二氧雜環戊烯并[4,5-c]吡咯-5(4H)-甲酸第三丁基酯(31a)(0.625g,0.969mmol)於甲醇(20mL)中之溶液中添加(10%)鈀碳(206mg)且在60psi下氫化3.5h。TLC分析顯示(乙酸乙酯/甲醇(9：1)1：1存於己烷中)完成反應。藉助矽藻土過濾來去除觸媒並在真空中濃縮濾液。藉由急驟管柱層析(矽膠12g，利用0至100%存於己烷中之乙酸乙酯/甲醇(9：1)洗脫)來純化所獲得殘餘物，提供呈白色固體形式之(3aS,4S,6R,6aR)-4-(4-胺基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-6-((((2S,3S)-2-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-甲基戊醯基)氧基)甲基)-2,2-二甲基二氫-3aH-[1,3]二氧雜環戊烯并[4,5-c]吡咯-5(4H)-甲酸第三丁基酯(31b)(0.418g，產率70%)；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ 10.86(bs,1H,D2O可交換)，8.09(s,1H),7.36(d,J=2.8Hz,1H),7.14(s,1H),6.77(s,2H),5.25(s,1H),5.14(bs,1H),4.88(d,J=5.9Hz,1H),4.18(s,1H),4.05(s,3H),3.90(s,1H),1.68(bs,1H),1.42(s,3H),1.38(s,18H),1.28(s,3H),1.17(s,1H),0.78(m,6H)；MS(ES+)619.2(M+1),(ES-)653.2(M+Cl)；對C30H46N6O8．0.25H2O計算之分析值：C,57.82；H,7.52；N,13.48，實驗值：C,57.56；H,7.42；N,13.40。
實例4：(S)-2-胺基-4-甲基戊酸((2R,3R,4S,5S)-5-(4-胺基-5H-吡咯并 [3,2-d]嘧啶-7-基)-3,4-二羥基吡咯啶-2-基)甲基酯鹽酸鹽(32c)
在室溫下將(3aS,4S,6R,6aR)-4-(4-胺基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-6-((((S)-2-((第三丁氧基羰基)胺基)-4-甲基戊醯基)氧基)甲基)-2,2-二甲基二氫-3aH-[1,3]二氧雜環戊烯并[4,5-c]吡咯-5(4H)-甲酸第三丁基酯(32b)(0.243g,0.393mmol)於三氟乙酸(10mL)中之溶液攪拌1h並在真空中濃縮至乾燥。用甲苯(20mL)研磨殘餘物並在真空中濃縮至乾燥。將殘餘物溶解於AcOH(10mL)中並添加三氯化硼溶液(1.4mL,1.4mmol)，在室溫下攪拌4min並用水(5mL)淬滅。將反應混合物濃縮至乾燥。用水(5mL)溶解膠黏固體並過濾。將濾液冷涷乾燥以獲得固體(201mg)。將固體溶解於0.37mL水中並溫和地加熱直至形成透明溶液，再添加0.13mL水，然後用9.0mL2-丙醇(IPA)稀釋，然後添加0.25mL水(現總計為0.75mL)，對溶液實施傾析以去除不溶物。在此階段，溶液係透明的，加熱並添加5.5mLIPA，溶液變渾濁並使其靜置1h。藉由過濾來收集所獲得固體，得到呈白色固體形式之(S)-2-胺基-4-甲基戊酸((2R,3R,4S,5S)-5-(4-胺基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-3,4-二羥基吡咯啶-2-基)甲基酯鹽酸鹽(32c)(73mg，產率49%)；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ 8.47(s,1H),8.03(s,1H),4.77(d,J=7.5Hz,1H),4.60-4.45(m,3H),4.29(t,J=5.0Hz,1H),4.03(t,J=6.4Hz,1H),3.80-3.71(m,1H),1.83-1.58(m,3H),0.90(d,J=5.2Hz,6H)；MS(ES+)379.1(M+1),(ES-)412.7(M+Cl)；HPLC[Restek Pinnacle DB C18,150×4.6mm，5μm管柱，流速：在40℃下1.0mL/分鐘。「A」緩衝液=將4.3g 1-辛烷磺酸鈉一水合物溶解於900 mL HPLC級水中。添加10mL乙酸及100mL乙腈。「B」緩衝液=將4.3g 1-辛烷磺酸鈉一水合物溶解於600mL HPLC級水中。添加10mL乙酸及400mL乙腈，UV吸光度=260nM；(A：B,85/15(0min)至A：B 0/100(25min)至A：B 0/100(40min)至A：B 85/15(50min))Rt=22.79(96.3027%)]；對C17H26N6O4 2.75 H2O 2.5HCl計算之分析值：C,39.33；H,6.60；Cl,17.07；N,16.19；實驗值：C,39.04；H,6.32；Cl,17.46；N,15.96。
(3aS,4S,6R,6aR)-4-(4-胺基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-6-((((S)-2-((第三丁氧基羰基)胺基)-4-甲基戊醯基)氧基)甲基)-2,2-二甲基二氫-3aH-[1,3]二氧雜環戊烯并[4,5-c]吡咯-5(4H)-甲酸第三丁基酯(32b)之製備
步驟1：(3aS,4S,6R,6aR)-4-(4-疊氮基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-6-((((S)-2-((第三丁氧基羰基)胺基)-4-甲基戊醯基)氧基)甲基)-2,2-二甲基二氫-3aH-[1,3]二氧雜環戊烯并[4,5-c]吡咯-5(4H)-甲酸第三丁基酯(32a)之製備
向(3aS,4S,6R,6aR)-4-(4-疊氮基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-6-(羥基甲基)-2,2-二甲基二氫-3aH-[1,3]二氧雜環戊烯并[4,5-c]吡咯-5(4H)-甲酸第三丁基酯(30c)(1.088g,2.52mmol)及(S)-2-((第三丁氧基羰基)胺基)-4-甲基戊酸(Boc-L-白胺酸)(0.583g,2.52mmol)於DMF(20mL)中之溶液中添加N1-((乙基亞胺基)亞甲基)-N3,N3-二甲基丙烷-1,3-二胺鹽酸鹽(EDCI,1.21g,6.30mmol)及N,N-二甲基吡啶-4-胺(DMAP,0.092g,0.757mmol)。在室溫下將反應混合物攪拌96h，用水(60mL)淬滅並用EtOAc(3×50mL)萃取。用水(2×50mL)、鹽水(50mL)洗滌合併之有機層，經MgSO4乾燥，並在真空中濃縮至乾燥。藉由急驟管柱層析(矽膠25g)來純化所獲得殘餘物，提供呈白色泡沫狀物形式之(3aS,4S,6R,6aR)-4-(4-疊氮基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶- 7-基)-6-((((S)-2-((第三丁氧基羰基)胺基)-4-甲基戊醯基)氧基)甲基)-2,2-二甲基二氫-3aH-[1,3]二氧雜環戊烯并[4,5-c]吡咯-5(4H)-甲酸第三丁基酯(32a)(633mg，產率39%)；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ 13.28(s,1H),9.86(s,1H),7.56(s,1H),7.19(d,J=7.4Hz,1H),5.31(s,1H),5.16(d,J=6.8Hz,1H),4.80(d,J=5.8Hz,1H),4.23(s,2H),3.86(t,J=11.4Hz,1H),1.39(m,27H),0.86(dd,J=11.7,6.0Hz,1H),0.75(dd,J=13.6,6.5Hz,6H)；MS(ES+)645.19(M+1),667.17(M+Na)；(ES-)643.20(M-1),679.18(M+Cl)。
步驟2：(3aS,4S,6R,6aR)-4-(4-胺基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-6-((((S)-2-((第三丁氧基羰基)胺基)-4-甲基戊醯基)氧基)甲基)-2,2-二甲基二氫-3aH-[1,3]二氧雜環戊烯并[4,5-c]吡咯-5(4H)-甲酸第三丁基酯(32b)
向(3aS,4S,6R,6aR)-4-(4-疊氮基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-6-((((S)-2-((第三丁氧基羰基)胺基)-4-甲基戊醯基)氧基)甲基)-2,2-二甲基二氫-3aH-[1,3]二氧雜環戊烯并[4,5-c]吡咯-5(4H)-甲酸第三丁基酯(32a)(584mg,0.91mmol)於甲醇(20mL)中之溶液中添加10%鈀碳(193mg)並在50psi下氫化2h。藉助矽藻土墊過濾觸媒，並在真空中濃縮濾液。藉由急驟管柱層析(矽膠，4g)來純化所獲得殘餘物，提供呈白色固體形式之(3aS,4S,6R,6aR)-4-(4-胺基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-6-((((S)-2-((第三丁氧基羰基)胺基)-4-甲基戊醯基)氧基)甲基)-2,2-二甲基二氫-3aH-[1,3]二氧雜環戊烯并[4,5-c]吡咯-5(4H)-甲酸第三丁基酯(32b)(300mg，產率53.5%)；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ 10.86(s,1H，可交換)，8.09(d,J=5.0Hz,1H),7.34(d,J=2.4Hz,1H),7.22(s,1H),6.78(s,2H，可交換)，5.23(d,J=5.3Hz,1H),5.14(s,1H),4.87(d,J=5.7Hz,1H),4.22-4.05(m,3H),3.99-3.86(m,1H),3.17(d,J=5.2Hz,1H),1.55(dd,J=12.5,6.0Hz,1H),1.46-1.34(m, 22H),1.28(s,3H),0.81(dd,J=9.1,6.7Hz,6H)；MS(ES+)619.13(M+1),642.15(M+Na)；(ES-)617.18(M-1),653.27(M+Cl)；對C30H44N8O8.0.5H2O計算之分析值：C,57.40；H,7.55；N,13.39；實驗值：C,57.46；H,7.53；N,13.13。
實例5：(2S,2’S)-雙(2-胺基-3-甲基丁酸)(2S,3S,4R,5R)-2-(4-胺基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-5-(羥基甲基)吡咯啶-3,4-二基酯(38c)
向(2S,2’S)-雙2-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-甲基丁酸(2S,3S,4R,5R)-2-(4-胺基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-1-(第三丁氧基羰基)-5-((三苯甲基氧基)甲基)吡咯啶-3,4-二基酯(38b)(715mg,0.711mmol)於丙酮(25mL)中之溶液中添加9M硫酸(0.395mL,3.55mmol)並在室溫下攪拌過夜。對丙酮層實施傾析並用丙酮處理殘餘物並傾析(3次)。藉由急驟管柱層析(矽膠12g，利用0至100%存於CMA-80中之CMA-50洗脫)來純化所獲得殘餘物，提供呈白色固體形式之(2S,2’S)-雙(2-胺基-3-甲基丁酸)(2S,3S,4R,5R)-2-(4-胺基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-5-(羥基甲基)吡咯啶-3,4-二基酯(38c)(188mg,57%)；1H NMR(300MHz,DMSO-d 6 )δ 10.84(bs,1H，D2O可交換)，8.06(s,1H),7.51(d,J=2.3Hz,1H),6.77(s,2H，D2O可交換)，5.33(dd,J=7.6,5.6Hz,1H),5.24(dd,J=5.7,3.8Hz,1H),4.39(d,J=7.6Hz,1H),3.64-3.51(m,2H),3.17(dd,J=4.5,2.9Hz,2H),3.06(d,J=4.9Hz,1H),2.01-1.88(m,1H),1.87-1.75(m,1H),0.91(d,J=6.8Hz,3H), 0.84(d,J=6.7Hz,3H),0.79(d,J=6.8Hz,3H),0.73(d,J=6.8Hz,3H)；MS(ES+)928.2(2M+1)；(ES-)462.0(M-1),925.1(2M-1)。
(2S,2’S)-雙2-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-甲基丁酸(2S,3S,4R,5R)-2-(4-胺基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-1-(第三丁氧基羰基)-5-((三苯甲基氧基)甲基)吡咯啶-3,4-二基酯(38b)之製備
步驟1：(2S,3S,4R,5R)-2-(4-氯-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-3,4-二羥基-5-(羥基甲基)吡咯啶-1-甲酸第三丁基酯(34a)
在室溫下向二乙酸(2R,3R,4S,5S)-2-(乙醯氧基甲基)-1-(第三丁氧基羰基)-5-(4-氯-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)吡咯啶-3,4-二基酯(28c)(25.8g,50.5mmol)於甲醇(200mL)中之溶液中添加25% w存於甲醇中之甲醇鈉(3.6mL,16.66mmol)。在室溫下將反應混合物攪拌過夜。在真空中將反應混合物濃縮至乾燥並藉由急驟管柱層析(矽膠600g)來純化，提供呈無色泡沫狀物形式之(2S,3S,4R,5R)-2-(4-氯-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-3,4-二羥基-5-(羥基甲基)吡咯啶-1-甲酸第三丁基酯(34a)(17.7g，產率91%)；1H NMR(300MHz,DMSO-d 6 )δ 12.34(s,1H),8.62(s,1H),7.94(s,1H),5.40-5.02(m,2H),4.96-4.70(m,2H),4.41-4.25(m,1H),4.13-3.93(m,2H),3.69-3.51(m,2H),1.35(s,3H),1.01(s,6H)；MS(ES+)384.9(M+1),792.6(2M+Na)；(ES-)382.6(M-1)。
步驟2：(2S,3S,4R,5R)-2-(4-疊氮基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-3,4-二羥基-5-(羥基甲基)吡咯啶-1-甲酸第三丁基酯(34b)之製備
向(2S,3S,4R,5R)-2-(4-氯-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-3,4-二羥基-5-(羥基甲基)吡咯啶-1-甲酸第三丁基酯(34a)(4g,10.39mmol)於DMF(80mL)中之溶液中添加疊氮化鈉(3.38g,52.0mmol)並在80℃下加熱10h並攪拌。將反應冷卻至25℃，傾倒於冰中並用乙酸乙酯萃取。分離出乙酸乙酯層，用水、鹽水洗滌，乾燥，過濾並在真空中濃 縮至乾燥(水浴50℃)。藉由急驟管柱層析(矽膠120g，利用0至100%存於氯仿中之甲醇洗脫)純化來獲得粗製殘餘物，提供呈白色固體形式之(2S,3S,4R,5R)-2-(4-疊氮基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-3,4-二羥基-5-(羥基甲基)吡咯啶-1-甲酸第三丁基酯(34b)(1.28g，產率31%)；1H NMR(300MHz,DMSO-d 6)δ 13.05(bs,1H，D2O可交換)，9.84(s,1H),7.81(m,1H),5.13(m,1H),5.05-4.83(m,3H，D2O可交換)，4.24(m,1H),4.09(m,1H),4.03(m,1H),3.59(m,2H),1.38(對於Boc為s,4H)及1.05(對於Boc為s,5H)；MS(ES+)782.8(2M+1),(ES-)389.6(M-1)。
步驟3：(2S,3S,4R,5R)-2-(4-疊氮基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-3,4-二羥基-5-((三苯甲基氧基)甲基)吡咯啶-1-甲酸第三丁基酯(35a)之製備
向(2S,3S,4R,5R)-2-(4-疊氮基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-3,4-二羥基-5-(羥基甲基)吡咯啶-1-甲酸第三丁基酯(34b)(1.0g,2.55mmol)於吡啶(5.0mL,62.06mmol)中之溶液中添加三苯基氯甲烷(0.85g,3.07mmol)。在50℃下將所得混合物攪拌4h，此時反應進行至完成(TLC，氯仿：甲醇9：1)。將反應混合物冷卻至25℃，傾倒於冰水(80mL)中並用乙酸乙酯(100mL,2×60mL)萃取。將有機層合併，用水、鹽水洗滌，乾燥，過濾並在真空中濃縮至產生灰白色固體。用5%存於正己烷中之EtOAc研磨固體並藉由過濾來收集，提供呈淺黃色固體形式之(2S,3S,4R,5R)-2-(4-疊氮基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-3,4-二羥基-5-((三苯甲基氧基)甲基)吡咯啶-1-甲酸第三丁基酯(35a)(1.47g，產率90.74%)；1H NMR(300MHz,DMSO-d 6 ,370K)δ 12.82(s,1H),9.48(s,1H),7.44(s,1H),7.36(d,J=8.0Hz,5H),7.29-7.19(m,9H),4.96(d,J=4.6Hz,1H),4.72(d,J=5.3Hz,1H),4.59(d,J=5.0Hz,1H),4.54-4.46(m,1H),4.38-4.30(m,1H),4.08-3.99(m,1H),3.93-3.84(m,1H),3.46(dd,J=9.1,6.4Hz,1H),3.37(dd,J= 9.2,4.2Hz,1H),1.19(s,9H)；MS(ES+)655.85(M+Na),(ES-)632.55(M-1)。IR(KBr)2133cm-1。
步驟4：(2S,3S,4R,5R)-2-(4-疊氮基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-3-(((S)-2-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)氧基)-4-羥基-5-((三苯甲基氧基)甲基)吡咯啶-1-甲酸第三丁基酯(39a)之製備；(2S,3S,4R,5R)-2-(4-疊氮基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-4-(((S)-2-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)氧基)-3-羥基-5-((三苯甲基氧基)甲基)吡咯啶-1-甲酸第三丁基酯(39b)及(2S,2’S)-雙2-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-甲基丁酸(2S,3S,4R,5R)-2-(4-疊氮基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-1-(第三丁氧基羰基)-5-((三苯甲基氧基)甲基)吡咯啶-3,4-二基酯(38a) 方法1：
在室溫下向(2S,3S,4R,5R)-2-(4-疊氮基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-3,4-二羥基-5-((三苯甲基氧基)甲基)吡咯啶-1-甲酸第三丁基酯(35a)(1g,1.578mmol)及(S)-2-(第三丁氧基羰基胺基)-3-甲基丁酸(L-Boc纈胺酸0.343g,1.58mmol)於DMF(10mL)中之溶液中添加N1-((乙基亞胺基)亞甲基)-N3,N3-二甲基丙烷-1,3-二胺鹽酸鹽(EDCI,0.756g,3.95mmol)及N,N-二甲基吡啶-4-胺(DMAP,0.193g,1.578mmol)。在室溫下將反應混合物攪拌過夜。TLC分析(10%存於甲醇中之氯仿)顯示一些(2S,3S,4R,5R)-2-(4-疊氮基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-3,4-二羥基-5-((三苯甲基氧基)甲基)吡咯啶-1-甲酸第三丁基酯(35a)未反應。用水(50mL)淬滅反應並用乙酸乙酯(3×100mL)萃取。將有機層合併，用水、鹽水(100mL)洗滌，乾燥，過濾並在真空中濃縮。藉由急驟管柱層析(矽膠40g)來純化所獲得粗製殘餘物，提供：呈白色固體形式之2-(4-疊氮基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-3,4-二羥基-5-((三苯甲基氧基)甲基)吡咯啶-1-甲酸酯(35a)(196mg, 19.6%)；呈白色固體形式之(2S,3S,4R,5R)-2-(4-疊氮基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-3-(((S)-2-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)氧基)-4-羥基-5-((三苯甲基氧基)甲基)吡咯啶-1-甲酸第三丁基酯(39a)(511mg,38.9%)；1H NMR(300MHz,DMSO-d 6 ,370K)δ 12.86(s,1H),9.39(s,1H),7.47(s,1H),7.38(d,J=7.9Hz,6H),7.31-7.18(m,9H),6.57(d,J=7.3Hz,1H),5.46(s,1H),5.05(d,J=6.2Hz,1H),4.94(d,J=6.3Hz,1H),4.78-4.69(m,1H),4.13-4.05(m,2H),3.53-3.36(m,2H),2.19-2.04(m,1H),1.42(s,9H),1.17(s,9H),0.92(t,J=6.7Hz,6H)；IR(KBr)2133cm-1；MS(ES-)831.1(M-1)；呈白色固體形式之(2S,3S,4R,5R)-2-(4-疊氮基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-4-(((S)-2-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)氧基)-3-羥基-5-((三苯甲基氧基)甲基)吡咯啶-1-甲酸第三丁基酯(39b)(250mg,19%)；1H NMR(300MHz,DMSO-d 6 ,370K)δ 12.84(s,1H),9.49(s,1H),7.51(s,1H),7.36-7.28(m,6H),7.25-7.17(m,9H),6.48(d,J=7.6Hz,1H),5.81-5.71(m,1H),5.22(d,J=4.2Hz,1H),5.00(d,J=6.0Hz,1H),4.71(t,J=8.1Hz,1H),3.91(m,2H),3.56-3.32(m,2H),2.10-2.00(m,1H),1.32(s,9H),1.22(s,9H),0.88(dd,J=6.6,3.4Hz,6H)；IR(KBr)2134cm-1；MS(ES-)831.1(M-1)；及呈白色固體形式之(2S,2’S)-雙2-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-甲基丁酸(2S,3S,4R,5R)-2-(4-疊氮基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-1-(第三丁氧基羰基)-5-((三苯甲基氧基)甲基)吡咯啶-3,4-二基酯(38a)(18mg,1.1%)；1H NMR(300MHz,DMSO,370K)δ 12.94(s,1H,N-H),9.38(s,1H),7.54(s,1H),7.38-7.14(m,15H),6.51(s,1H,N-H),6.37(s,1H,N-H),5.97(d,J=17.2Hz,1H),5.76(s,1H),5.22(t,J=11.3Hz,1H),4.19-3.98(m,2H),3.91(d,J=5.3Hz,1H),3.55(d,J=18.8Hz, 1H),3.35(m,1H),2.06(m,2H),1.37(s,,9H),1.24(s,9H),1.21(s,9H),0.94-0.78(m,12H)。
方法2：
在室溫下向(2S,3S,4R,5R)-2-(4-疊氮基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-3,4-二羥基-5-((三苯甲基氧基)甲基)吡咯啶-1-甲酸第三丁基酯(35a)(1.0g,1.58mmol)及(S)-2-(第三丁氧基羰基胺基)-3-甲基丁酸(L-Boc纈胺酸，0.720g,3.31mmol)於DMF(10mL)中之溶液中添加N1-((乙基亞胺基)亞甲基)-N3,N3-二甲基丙烷-1,3-二胺鹽酸鹽(EDCI,0.756g,3.95mmol)及N,N-二甲基吡啶-4-胺(DMAP,0.193g,1.578mmol)。在室溫下將反應混合物攪拌過夜並用水(30mL)淬滅。用乙酸乙酯(3×60mL)萃取反應混合物。將有機層合併，用水、鹽水(50mL)洗滌，乾燥，過濾並在真空中濃縮。藉由急驟管柱層析(矽膠25g，利用0至50%存於己烷中之乙酸乙酯洗脫)來純化所獲得粗製殘餘物，提供呈白色泡沫狀物形式之(2S,2’S)-雙2-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-甲基丁酸(2S,3S,4R,5R)-2-(4-疊氮基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-1-(第三丁氧基羰基)-5-((三苯甲基氧基)甲基)吡咯啶-3,4-二基酯(38a)(670mg，產率41.2%)以及呈白色泡沫狀物形式之含有(2S,3S,4R,5R)-2-(4-疊氮基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-3-(((S)-2-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)氧基)-4-羥基-5-((三苯甲基氧基)甲基)吡咯啶-1-甲酸第三丁基酯(39a)及(2S,3S,4R,5R)-2-(4-疊氮基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-4-(((S)-2-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)氧基)-3-羥基-5-((三苯甲基氧基)甲基)吡咯啶-1-甲酸第三丁基酯(39b)之混合物(610mg,47.9%)；MS(ES-)831.5(M-1)。
步驟5：(2S,2’S)-雙2-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-甲基丁酸(2S,3S,4R,5R)-2-(4-胺基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-1-(第三丁氧基羰基)-5-((三苯甲基氧基)甲基)吡咯啶-3,4-二基酯(38b)之製備
向(2S,2’S)-雙2-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-甲基丁酸(2S,3S,4R,5R)-2-(4-疊氮基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-1-(第三丁氧基羰基)-5-((三苯甲基氧基)甲基)吡咯啶-3,4-二基酯(38a)(964mg,0.934mmol)於乙醇(25mL)中之溶液中添加Pd/C(10%)(150mg)並在50psi下氫化過夜。藉助矽藻土墊過濾來去除觸媒並在真空中濃縮濾液。藉由急驟管柱層析(矽膠4g，利用0至100%存於己烷中之乙酸乙酯/甲醇(9：1)洗脫)來純化所獲得殘餘物，提供呈白色固體形式之(2S,2’S)-雙2-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-甲基丁酸(2S,3S,4R,5R)-2-(4-胺基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-1-(第三丁氧基羰基)-5-((三苯甲基氧基)甲基)吡咯啶-3,4-二基酯(38b)(765mg，產率81%)；1H NMR(300MHz,DMSO-d 6 ,370K)δ 10.61(s,1H,N-H),7.86(d,J=2.2Hz,1H),7.37-7.17(m,16H),6.38(m,2H,N-H),6.30(s,2H,N-H),6.16(t,J=5.1Hz,1H),5.87(t,J=3.8Hz,1H),5.06(d,J=5.9Hz,1H),4.12-4.00(m,2H),3.98-3.86(m,1H),3.78(dd,J=9.7,6.9Hz,1H),3.20(m,1H),2.05(m,2H),1.40(s,9H),1.31(s,9H),1.23(d,J=2.0Hz,9H),0.90-0.80(m,12H)；對C55H71N7O11.H2O計算之分析值：C,64.50；H,7.18；N,9.57；實驗值：C,64.36；H,7.11；N,9.38。
實例6：(S)-2-胺基-3-甲基丁酸(2R,3R,4S,5S)-5-(4-胺基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-4-羥基-2-(羥基甲基)吡咯啶-3-基酯(35e)及(S)-2-胺基-3-甲基丁酸(2S,3S,4R,5R)-2-(4-胺基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-4-羥基-5-(羥基甲基)吡咯啶-3-基酯(34f)之製備
方法1：
自(2S,3S,4R,5R)-2-(4-胺基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-3-(((S)-2-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)氧基)-4-羥基-5-((三苯甲基氧基)甲基)吡咯啶-1-甲酸第三丁基酯(39d)及(2S,3S,4R,5R)-2-(4-胺基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-4-(((S)-2-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)氧基)-3-羥基-5-((三苯甲基氧基)甲基)吡咯啶-1-甲酸第三丁基酯(39e)
向(2S,3S,4R,5R)-2-(4-胺基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-3-(((S)-2-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)氧基)-4-羥基-5-((三苯甲基氧基)甲基)吡咯啶-1-甲酸第三丁基酯(39d)及(2S,3S,4R,5R)-2-(4-胺基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-4-(((S)-2-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)氧基)-3-羥基-5-((三苯甲基氧基)甲基)吡咯啶-1-甲酸第三丁基酯(39e)(744mg,0.922mmol)於丙酮(15mL)中之溶液中添加9M硫酸(0.512mL,4.61mmol)並在室溫下攪拌過夜。對溶劑實施傾析並用丙酮洗滌白色固體並攪拌30min，隨後再次傾析。將相同程序重複3至4次，藉由過濾來收集所獲得固體，用丙酮洗滌，在35℃及真空下乾燥，得到呈白色固體形式之(S)-2-胺基-3-甲基丁酸(2R,3R,4S,5S)-5-(4-胺基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-4-羥基-2-(羥基甲基)吡咯啶-3-基酯(35e)與(S)-2-胺基-3-甲基丁酸(2S,3S,4R,5R)-2-(4-胺基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-4-羥基-5-(羥基甲基)吡咯啶-3-基酯(34f)(呈硫酸鹽形式)之混合物(500mg,1.081mmol，產率97%)。使用急驟管柱層析(233mg樣品混合物，利用0至100%存於CMA-80中之CMA-50實施矽膠洗脫)進行純化，提供呈白色固體形式之(S)-2-胺基-3-甲基丁酸(2R,3R,4S,5S)-5-(4-胺基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-4-羥基-2-(羥基甲基)吡咯啶-3-基酯(35e)與(S)-2-胺基-3-甲基丁酸(2S,3S,4R,5R)-2-(4-胺基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-4-羥基-5-(羥基甲基)吡咯啶-3-基酯 (34f)之混合物(74mg,48%)；1H NMR(300MHz,DMSO-d 6 )δ[8.08(s,0.65H),8.07(s,0.35H)1H],[7.49(s,0.35H),7.48(s,0.65H)1H],[5.09(t,J=6.4Hz,0.35H),5.01(dd,J=5.7,3.7Hz,0.65H)1H],[4.35(d,J=6.7Hz,0.35H),4.21(d,J=5.6Hz,0.35H),4.18(d,J=5.7Hz,0.65H),4.14-4.09(m,1.65H)3H],[3.63-3.48(m,1H)1H],[3.25(d,J=5.1Hz,0.7H),3.20-3.10(m,1.3H)2H],[2.05-1.82(m,1H)],[0.93(d,J=6.8Hz,1.95H),0.88(d,J=6.8Hz,1.95H),0.81(d,J=6.9Hz,1.05H),0.77(d,J=6.8Hz,1.05H)6H]；MS(ES+)365.0(M+1)。
方法2：
自(6aR,8S,9S,9aR)-8-(4-胺基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-9-(((S)-2-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)氧基)-2,2,4,4-四異丙基四氫-[1,3,5,2,4]三氧雜二矽雜環辛烷並[7,6-b]吡咯-7(8H)-甲酸第三丁基酯(34e)
在室溫下向(6aR,8S,9S,9aR)-8-(4-胺基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-9-(((S)-2-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)氧基)-2,2,4,4-四異丙基四氫-[1,3,5,2,4]三氧雜二矽雜環辛烷並[7,6-b]吡咯-7(8H)-甲酸第三丁基酯(34e)(0.843g,1.04mmol)於丙酮(10mL)中之經攪拌溶液中添加濃硫酸(存於水中之50%溶液，1.16mL,10.44mmol)並攪拌18h。用丙酮(30mL)稀釋反應混合物並攪拌。對丙酮實施傾析並重複此操作兩次。藉由過濾來收集所分離固體，在真空中乾燥，提供呈白色固體形式之(S)-2-胺基-3-甲基丁酸(2R,3R,4S,5S)-5-(4-胺基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-4-羥基-2-(羥基甲基)吡咯啶-3-基酯(35e)與(S)-2-胺基-3-甲基丁酸(2S,3S,4R,5R)-2-(4-胺基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-4-羥基-5-(羥基甲基)吡咯啶-3-基酯硫酸鹽(34f)之混合物(0.4g,68%)。藉由急驟管柱層析(矽膠4g，利用0至100%存於CMA-80中之CMA-50洗脫)來純化固體，提供(S)-2-胺基-3-甲基丁酸(2R,3R,4S,5S)-5-(4-胺 基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-4-羥基-2-(羥基甲基)吡咯啶-3-基酯(35e)與(S)-2-胺基-3-甲基丁酸(2S,3S,4R,5R)-2-(4-胺基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-4-羥基-5-(羥基甲基)吡咯啶-3-基酯(34f)之混合物；NMR分析顯示化合物35e與34f之混合物；MS(ES+)365.1(M+1),(ES-)362.9(M-1)。
(2S,3S,4R,5R)-2-(4-胺基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-3-(((S)-2-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)氧基)-4-羥基-5-((三苯甲基氧基)甲基)吡咯啶-1-甲酸第三丁基酯(39d)及(2S,3S,4R,5R)-2-(4-胺基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-4-(((S)-2-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)氧基)-3-羥基-5-((三苯甲基氧基)甲基)吡咯啶-1-甲酸第三丁基酯(39e)之製備
方法1：
自(2S,3S,4R,5R)-2-(4-疊氮基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-3-(((S)-2-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)氧基)-4-羥基-5-((三苯甲基氧基)甲基)吡咯啶-1-甲酸第三丁基酯(39a)
向(2S,3S,4R,5R)-2-(4-疊氮基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-3-(((S)-2-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)氧基)-4-羥基-5-((三苯甲基氧基)甲基)吡咯啶-1-甲酸第三丁基酯(39a)(1.319g,1.584mmol)於乙醇(50mL)中之溶液中添加10% Pd/C(200mg)並在50psi下氫化8h。藉助矽藻土墊過濾反應混合物來去除觸媒。在真空中濃縮濾液並藉由急驟管柱層析來純化所獲得殘餘物，提供呈白色固體形式之(2S,3S,4R,5R)-2-(4-胺基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-3-(((S)-2-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)氧基)-4-羥基-5-((三苯甲基氧基)甲基)吡咯啶-1-甲酸第三丁基酯(39d)及(2S,3S,4R,5R)-2-(4-胺基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-4-(((S)-2-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)氧基)-3-羥基-5-((三苯甲基氧基)甲基)吡咯啶-1-甲酸第三丁基酯(39e) (945mg,1.171mmol，產率74.0%)之3：2混合物(藉由NMR分析)；MS(ES+)806.9(M+1)；(ES-)805.0(M-1),841.2(M+Cl)。
方法2：
自(2S,3S,4R,5R)-2-(4-疊氮基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-4-(((S)-2-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)氧基)-3-羥基-5-((三苯甲基氧基)甲基)吡咯啶-1-甲酸第三丁基酯(39b)
向(2S,3S,4R,5R)-2-(4-疊氮基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-4-(((S)-2-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)氧基)-3-羥基-5-((三苯甲基氧基)甲基)吡咯啶-1-甲酸第三丁基酯(39b)(634mg,0.761mmol)於乙醇(25mL)中之溶液中添加10% Pd/C(100mg)並在50psi下氫化8h。藉助矽藻土墊過濾反應混合物來去除觸媒。在真空中濃縮濾液並藉由急驟管柱層析來純化所獲得殘餘物，提供呈白色固體形式之(2S,3S,4R,5R)-2-(4-胺基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-3-(((S)-2-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)氧基)-4-羥基-5-((三苯甲基氧基)甲基)吡咯啶-1-甲酸第三丁基酯(39d)與(2S,3S,4R,5R)-2-(4-胺基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-4-(((S)-2-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)氧基)-3-羥基-5-((三苯甲基氧基)甲基)吡咯啶-1-甲酸第三丁基酯(39e)之3：2混合物(474mg,0.587mmol，產率77%)；NMR譜與使用化合物39a之程序獲得之產物匹配；MS(ES+)806.9(M+1)；(ES-)805.7(M-1)。
(6aR,8S,9S,9aR)-8-(4-胺基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-9-(((S)-2-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)氧基)-2,2,4,4-四異丙基四氫-[1,3,5,2,4]三氧雜二矽雜環辛烷並[7,6-b]吡咯-7(8H)-甲酸第三丁基酯(34e)之製備
步驟1：(6aR,8S,9S,9aR)-8-(4-疊氮基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-9-羥基-2,2,4,4-四異丙基四氫-[1,3,5,2,4]三氧雜二矽雜環辛烷並[7,6-b]吡 咯-7(8H)-甲酸第三丁基酯(34c)之製備
向(2S,3S,4R,5R)-2-(4-疊氮基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-3,4-二羥基-5-(羥基甲基)吡咯啶-1-甲酸第三丁基酯(34b)(5g,12.78mmol)於DMF(25mL)中之經攪拌溶液中添加N,N-二甲基吡啶-4-胺(DMAP,0.078g,0.639mmol)、1H-咪唑(3.48g,51.1mmol)及1,3-二氯-1,1,3,3-四異丙基二矽氧烷(4.63mL,14.05mmol)。在室溫下將反應混合物攪拌過夜並用水(300mL)稀釋。藉由過濾來收集所分離固體並用水洗滌。藉由急驟管柱層析(矽膠，利用0至35%存於己烷中之乙酸乙酯洗脫)來純化固體，提供呈白色固體形式之(6aR,8S,9S,9aR)-8-(4-疊氮基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-9-羥基-2,2,4,4-四異丙基四氫-[1,3,5,2,4]三氧雜二矽雜環辛烷並[7,6-b]吡咯-7(8H)-甲酸第三丁基酯(34c)(5.02g，產率62.0%)；1H NMR(300MHz,DMSO-d 6)δ 13.26(s,1H，D2O可交換)，9.85(s,1H),7.49(s,1H),5.52(d,J=3.2Hz,1H，D2O可交換)，5.10(s,1H),4.63-4.24(m,2H),4.18-3.82(m,1H),3.67(dt,J=8.2,2.9Hz,1H),1.37(d,J=45.1Hz,10H),1.08-0.99(m,14H),0.86(m,14H)；MS(ES+)633.9(M+1)；(ES-)632.2(M-1)；對C28H47N7O6Si2計算之分析值：C,53.05；H,7.47；N,15.47；實驗值：C,53.00；H,7.55；N,15.15。
步驟2：(6aR,8S,9S,9aR)-8-(4-疊氮基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-9-(((S)-2-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)氧基)-2,2,4,4-四異丙基四氫-[1,3,5,2,4]三氧雜二矽雜環辛烷並[7,6-b]吡咯-7(8H)-甲酸第三丁基酯(34d)之製備
向(6aR,8S,9S,9aR)-8-(4-疊氮基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-9-羥基-2,2,4,4-四異丙基四氫-[1,3,5,2,4]三氧雜二矽雜環辛烷並[7,6-b]吡咯-7(8H)-甲酸第三丁基酯(34c)(2g,3.16mmol)於DMF(20mL)中之經攪拌溶液中添加(S)-2-(第三丁氧基羰基胺基)-3-甲基丁酸(L-Boc纈 胺酸，1.03g,4.73mmol)並冷卻至0℃。在0℃下添加N1-((乙基亞胺基)亞甲基)-N3,N3-二甲基丙烷-1,3-二胺鹽酸鹽(EDCI,1.51g,7.89mmol)及N,N-二甲基吡啶-4-胺(DMAP,0.385g,3.16mmol)並使反應達到室溫，過夜。用水(100mL)稀釋反應並用乙酸乙酯(2×100mL)萃取。將乙酸乙酯層合併，用水(2×50mL)、鹽水(50mL)洗滌，乾燥，過濾並在真空中濃縮。藉由急驟管柱層析(矽膠80g，利用0至35%存於己烷中之乙酸乙酯洗脫)來純化所獲得殘餘物，得到呈白色固體形式之(6aR,8S,9S,9aR)-8-(4-疊氮基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-9-(((S)-2-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)氧基)-2,2,4,4-四異丙基四氫-[1,3,5,2,4]三氧雜二矽雜環辛烷並[7,6-b]吡咯-7(8H)-甲酸第三丁基酯(34d)(2.1g,80%)；1H NMR(300MHz,DMSO-d 6 )δ 13.40(s,1H，D2O可交換)，9.85(d,J=5.7Hz,1H),7.57(s,1H),7.23(d,J=8.2Hz,1H),5.84(d,J=3.7Hz,1H),5.24(d,J=10.7Hz,1H),4.82-4.58(m,1H),4.41(d,J=12.4Hz,1H),4.03-3.93(m,2H),3.67(s,1H),2.08(dt,J=13.5,6.8Hz,1H),1.49-1.33(m,18H),1.15-0.67(m,35H)；MS(ES+)856.0(M+Na),832.4(M-1)。分析：C38H64N8O9Si2計算值：C,54.77；H,7.74；N,13.45；實驗值：C,54.86；H,7.78；N,13.13。
步驟3：(6aR,8S,9S,9aR)-8-(4-胺基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-9-(((S)-2-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)氧基)-2,2,4,4-四異丙基四氫-[1,3,5,2,4]三氧雜二矽雜環辛烷並[7,6-b]吡咯-7(8H)-甲酸第三丁基酯(34e)之製備
向鈀碳(10%,0.262g)於乙醇(50mL)中之懸浮液中添加(6aR,8S,9S,9aR)-8-(4-疊氮基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-9-(((S)-2-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)氧基)-2,2,4,4-四異丙基四氫-[1,3,5,2,4]三氧雜二矽雜環辛烷並[7,6-b]吡咯-7(8H)-甲酸第三丁基酯 (34d)(2.05g,2.46mmol)並在60psi下氫化12h。藉助矽藻土墊過濾來去除觸媒並在真空中濃縮濾液。藉由急驟管柱層析(矽膠25g，利用0至100%存於氯仿中之CMA 80洗脫)來純化所獲得殘餘物，提供呈無色固體形式之(6aR,8S,9S,9aR)-8-(4-胺基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-9-(((S)-2-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)氧基)-2,2,4,4-四異丙基四氫-[1,3,5,2,4]三氧雜二矽雜環辛烷並[7,6-b]吡咯-7(8H)-甲酸第三丁基酯(34e)(1.9g，產率96%)；1H NMR(300MHz,DMSO-d 6 )δ 10.94(s,1H，D2O可交換)，8.05(s,1H),7.46-7.30(m,1H),7.17(d,J=8.0Hz,1H),6.82(s,2H，D2O可交換)，5.86(d,J=4.0Hz,1H),5.16(d,J=25.0Hz,1H，D2O可交換)，5.00(d,J=8.2Hz,1H),4.17(dd,J=12.2,5.1Hz,1H),3.98-3.88(m,1H),3.61(s,1H),2.16-1.92(m,1H),1.41(bs,18H),1.01-0.83(m,35H)；MS(ES+)806.921(M+1),830.1(M+Na),(ES-)805.289(M-1),842.0(M+Cl)。
實例7：化合物30f在經口投與大鼠後之藥物動力學
將健康8至10週齡雄性史-道二氏(Sprague-Dawley)大鼠隨機指配於對照組及實驗組，N=4隻/組。所有動物均係以標準方式圈養及進食。在實驗當天，將所有動物隔離並禁食約15小時，隨後於代謝籠中給藥。在投用對照藥劑或實驗藥劑2小時後給與動物食物。隨意遞送水。在投與前立即將對照化合物(2S,3S,4R,5R)-2-(4-胺基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-5-(羥基甲基)吡咯啶-3,4-二醇二鹽酸鹽(12i)溶解於水中以達到1mg/mL之濃度。將實驗化合物30f以類似方式溶解於水中以達到相當濃度(就化合物12i而言1mg/mL)。在稱量每一動物後，在時間0時藉由經口管飼法對所有對照動物投與10mg/kg體重化合物12i，同時在時間0時藉由經口管飼法對所有實驗動物投與10mg/kg體重化合物30f。在時間0、15min、30min、1小時、2小時、4小時、8小時、12小時及24小時時獲得連續血液樣品。將所有樣品轉移至微量 離心管中並以14,000rpm離心3min。自每一管去除血漿並轉移至經預先標記之微量離心管中並放置於乾冰中直至將樣品轉移至-80℃冷凍器中儲存直至分析。然後分析個別樣品之化合物12i。藉由非房室方法使用WinNonlin軟體程式來分析血漿濃度-對-時間數據。獲得藥物動力學參數Tmax、Cmax、T½、AUC(0-last)、AUC(0-inf)、MRT(0-inf)及血漿濃度與肝濃度對時間曲線之圖形。結果顯示於圖1中。
如圖1中所繪示，實驗組及對照組之藥物動力學顯示巨大差異。而該兩個組之Tmax相同(0.5h)，實驗組之Cmax為527ng/mL，而對照組之Cmax僅為123ng/mL，且實驗組之AUC(0-inf)為1076ng．h，而對照組之AUC(0-inf)僅為219ng．H。基於該等結果，化合物30f之生體可用率比化合物12i大約4倍，且血漿酯酶快速地將化合物30f水解為化合物12i。
實例8：病毒RNA聚合酶抑制劑(化合物12i)在非洲綠猴腎細胞中對麻疹病毒複製之影響
材料及方法：Vero-76細胞(非洲綠猴腎細胞)係自美國菌種保存中心(American Type Culture Collection)(ATCC,Manassas,VA)獲得。使細胞在補充有5%胎牛血清(FBS,Hyclone)之最低必需培養基(具有0.15% NaHCO3之MEM；Hyclone實驗室，Logan,UT,USA)中常規傳代。當評估化合物時，將血清降低至2.5%最終濃度，並將建它黴素添加至測試培養基中至50μg/mL最終濃度。麻疹病毒(MV)(芝加哥菌株)係自疾病控制中心(Centers for Disease Control,Atlanta,GA)獲得。
抗病毒測試程序： 細胞病變作用抑制分析(目測分析)
將細胞以適當細胞濃度(0.2mL/孔)接種於96孔平底組織培養板(Corning Glass Works,Corning,NY)中，並在37℃下培育過夜以建立細胞單層。當建立單層時，對生長培養基實施傾析並將測試化合物之 各稀釋液添加至每一孔中(3個孔/稀釋液，0.1mL/孔)。將化合物稀釋劑介質添加至細胞孔及病毒對照孔中(0.1mL/孔)。將稀釋於測試培養基中之病毒以0.1mL/孔添加至化合物測試孔(3個孔/化合物之稀釋液)及病毒對照孔(6個孔)中。病毒(病毒MOI=0.001)係在化合物後約5min添加。將不含病毒之測試培養基以0.1mL/孔添加至所有毒性對照孔(2個孔/每一測試化合物之稀釋液)及細胞對照孔(6個孔)中。在具有5% CO2、95%空氣氣氛之加濕培育箱中在37℃下培育板直至病毒對照孔具有適當細胞病變作用(CPE)讀數(80%至100%細胞破壞)。此係在病毒暴露於細胞後4至11天達成，此視病毒而定。然後用顯微鏡檢測細胞之CPE，自0(正常細胞)至4(最大，100%,CPE)進行評分。用顯微鏡觀察到毒性對照孔中之細胞之形態學變化，此歸因於細胞毒性。亦以100%毒性、80%細胞毒性、60%細胞毒性、40%細胞毒性、20%細胞毒性及0(正常細胞)對此細胞毒性(細胞破壞及/或形態變化)進行分級。分別藉由病毒CPE數據及毒性對照數據之回歸分析計算50%有效劑量(EC50)及50%細胞毒性劑量(IC50)。使用下式計算每一化合物測試之選擇性指數(SI)：SI=CC50/EC50。
CPE抑制之中性紅(NR)攝取分析
基於Smee等人之發現(Virol.Methods 2002,106：71-79；其全文以引用方式併入本文中)，選擇NR攝取作為評估抗病毒藥物之染料定量方法。在與上文所述相同之CPE抑制測試板上實施此分析以目測觀察驗證觀察到之抑制活性及細胞毒性。使用Cavenaugh等人之修飾方法(Invest.New Drugs 1990,8：347-354；其全文以引用方式併入本文中)來實施NR分析，如Barnard等人所述(Antiviral Chem.Chernother.2001,12：220-231；其全文以引用方式併入本文中)。簡言之，自經CPE抑制分析進行CPE評分之板之每一孔去除培養基，將0.034% NR添加至板之每一孔中並在37℃下在黑暗中將板培育2小時。然後自孔 去除NR溶液。在沖洗(有時細胞自板脫落，從而導致中性紅之錯誤升高)並抽吸至乾燥後，在室溫下在黑暗中使用經Sorenson檸檬酸鹽緩衝液緩衝之無水乙醇自細胞萃取剩餘染料30min。利用微板讀數器(Opsys MRTM,Dynex Technologies,Chantilly,VA,USA)對540nm/405nm下之吸光度進行讀數。吸光度值係以未經處理之對照之百分比表示且EC50、CC50及SI值係如上文所述計算。
病毒產量減少分析：
使用基本上如先前所述之50%細胞培養感染劑量(CCID50)分析來實施病毒產量減少分析(Antimicrob.Agents Chemother.1992,3：1837-1842；其全文以引用方式併入本文中)。簡言之，將每一孔之上清液一式三份連續稀釋於96孔板中含有Vero-76細胞之孔中。將板培育6天且然後檢查病毒誘導之CPE。藉由Reed及Muench之終點方法對病毒產量滴度進行定量(Am.J.Hyg.1938,27：493-498；其全文以引用方式併入本文中)。使用線性回歸計算EC90值以估算抑制病毒產量90%或病毒滴度降低1 log10所需之濃度。
結果及討論：
化合物12i高效地抑制麻疹病毒(表1)。目測分析及NR分析抗麻疹病毒之EC50值分別為0.6μg/mL及1.4μg/mL。在目測或NR分析中該化合物不具有任何細胞毒性(IC50>100)。因此，該兩個分析之選擇性指數表明化合物12i對麻疹病毒(MV)具有高度活性。藉由病毒產量減少分析來證實對MV之高效抑制活性，其中EC90=0.36μg/mL，代表在受感染細胞中產生之病毒降低1 log10。
結論：
化合物12i顯示高效選擇性抑制活性。藉由病毒產量減少分析，化合物12i亦係MV之高效抑制劑(EC90=0.37μg/mL)。因此，已發現化合物12i係許多RNA病毒之高效抑制劑且表明在活體外及活體內評 估中化合物12i進一步保證作為所選RNA病毒之廣譜抑制劑。
實例9：病毒RNA聚合酶抑制劑(化合物12i)對各種RNA病毒複製之影響 材料及方法 細胞及病毒
非洲綠猴腎細胞(MA-104)係自Whitaker MA Bioproducts,(Walkersville,MD,USA)獲得。所有Vero細胞(非洲綠猴腎細胞)、人類喉癌細胞(A-549)及Madin-Darby犬腎細胞均係自美國菌種保存中心(ATCC,Manassas,VA)獲得。在補充有0.15% NaHCO3(Hyclone實驗室，Logan,UT,USA)及10%胎牛血清(FBS,Hyclone)之杜爾貝科氏最低必需培養基(Dulbecco’s minimal essential medium,DMEM)中培育A-549細胞。使剩餘細胞在補充有5%胎牛血清(FBS,Hyclone)之最低必需培養基(具有0.15% NaHCO3之MEM；Hyclone實驗室，Logan,UT,USA)中常規傳代。
當評估化合物時，將血清降低至2.5%最終濃度，並將建它黴素添加至測試培養基中至50μg/mL最終濃度。用於流行性感冒分析之測 試培養基由不含血清之MEM、0.18% NaHCO3、20μg胰蛋白酶/mL、2.0μg EDTA/mL及50μg建它黴素/mL組成。
為評估在活性生長細胞中之毒性，藉由在暴露於若干濃度之化合物3天後測定細胞總數(如藉由NR攝取分析所反映)來評估細胞毒性。為對在存在或不存在藥物下在72h時之細胞生長進行定量，用1×103 MDCK細胞接種板，且在4h後(使所有細胞黏附板孔)暴露於所選濃度之存於MEM中之藥物或MEM。在72h後，如上文針對NR分析所述處理板。吸光度值係以未經處理之對照之百分比表示且CC50值係藉由回歸分析來計算。
登革熱病毒2(DV-2)(新幾內亞菌株)、呼吸道細胞融合性病毒(RSV)A2、鼻病毒2(RV-2)(HOP菌株)、塔卡裏伯病毒(TCV)(TRVL11573菌株)、委內瑞拉馬腦炎病毒(VEE)及黃熱病病毒(YFV)(17D菌株)全部係自美國菌種保存中心(ATCC；Manassas,VA)購得。所有流行性感冒病毒、麻疹病毒(MV)(芝加哥菌株)、SARS冠狀病毒(SARS-CoV)(烏爾巴尼菌株)及西尼羅病毒(WNV)(原型1999年紐約分離株，稱為菌株996625)係自疾病控制中心(Atlanta,GA)獲得。龐塔托魯病毒(Punta Toro virus,PTV)(亞當斯菌株)係自美國陸軍傳染病醫學研究所(U.S.Army Medical Research Institute for Infectious Diseases,Ft.Detrick(Frederick,MD))Dominique Pifat博士獲得。裂谷熱病毒(RVFV)疫苗菌株MP-12及Junin病毒(JUNV)疫苗菌株Candid 1由Robert Tesh博士(World Reference Center for Emerging and Viruses and Arboviruses,University of Texas Medical Branch,Galveston,TX)友情提供。皮欽德病毒(Pichinde virus,PICV)(An 4763菌株)由David Gangemi博士(Clemson University,Clemson,South Carolina)提供。3型副流行性感冒病毒(PIV-3)(14702/5/95菌株)係自Jacquelin Boivin(Hospitale St.Justin,Montreal,Canada)獲得。1型腺病毒(AV-1)(芝加 哥/95菌株)係自小兒患者之氣管洗液分離且由M.F.Smaron(Department of Medicine,University of Chicago,Chicago IL)提供。
抗病毒測試程序： 細胞病變作用抑制分析(目測分析)
將細胞以適當細胞濃度(0.2mL/孔)接種於96孔平底組織培養板(Corning Glass Works,Corning,NY)中，並在37℃下培育過夜以建立細胞單層。當建立單層時，對生長培養基實施傾析並將測試化合物之各稀釋液添加至每一孔中(3個孔/稀釋液，0.1mL/孔)。將化合物稀釋劑介質添加至細胞孔及病毒對照孔中(0.1mL/孔)。將稀釋於測試培養基中之病毒以0.1mL/孔添加至化合物測試孔(3個孔/化合物之稀釋液)及病毒對照孔(6個孔)中。病毒(病毒MOT=0.001)係在化合物後約5min添加。將不含病毒之測試培養基以0.1mL/孔添加至所有毒性對照孔(2個孔/每一測試化合物之稀釋液)及細胞對照孔(6個孔)中。在具有5% CO2、95%空氣氣氛之加濕培育箱中在37℃下培育板直至病毒對照孔具有適當細胞病變作用(CPE)讀數(80%至100%細胞破壞)。此係在病毒暴露於細胞後4至11天達成，此視病毒而定。然後用顯微鏡檢測細胞之CPE，自0(正常細胞)至4(最大，100%)CPE對其進行評分。用顯微鏡觀察到毒性對照孔中之細胞之形態學變化，此歸因於細胞毒性。亦以100%毒性、80%細胞毒性、60%細胞毒性、40%細胞毒性、20%細胞毒性及0(正常細胞)對此細胞毒性(細胞破壞及/或形態變化)進行分級。分別藉由病毒CPE數據及毒性對照數據之回歸分析計算50%有效劑量(EC50)及50%細胞毒性劑量(IC50)。使用下式計算每一化合物測試之選擇性指數(SI)：SI=CC50/EC50。
CPE抑制及化合物細胞毒性之中性紅(NR)攝取分析
基於Smee等人之發現(見上文)，選擇NR攝取作為評估抗病毒藥物之染料定量方法。在與上文所述相同之CPE抑制測試板上實施此分 析以目測觀察驗證觀察到之抑制活性及細胞毒性。使用Cavenaugh等人之經修改方法(見上文)來實施NR分析，如Barnard等人所述(見上文)。簡言之，自經CPE抑制分析進行CPE評分之板之每一孔去除培養基，將0.034% NR添加至板之每一孔中並在37℃下在黑暗中將板培育2小時。然後自孔去除NR溶液。在沖洗(有時細胞自板脫落，從而導致中性紅之錯誤升高)並抽吸至乾燥後，在室溫下在黑暗中使用經Sorenson檸檬酸鹽緩衝液緩衝之無水乙醇自細胞萃取剩餘染料30min。利用微板讀數器(Opsys MRTM,Dynex Technologies,Chantilly,VA,USA)對540nm/405nm下之吸光度進行讀數。吸光度值係以未經處理之對照之百分比表示且EC50、CC50及SI值係如上文所述計算。
視為化合物12i顯著抑制(SI>10)之其他病毒係DV-2(EC50=15,13μg/mL)、JUNV(EC50=29,16μg/mL)、YFV(EC50=8.3,8.3μg/mL)(表1)。以下病毒受化合物12i略微抑制(3<SI<10)：PIV-3(EC50=7.1,10μg/mL)、SARS-CoV(EC50=14,16μg/mL)、PICV(EC50=61,28μg/mL)及RVFV(EC50=75,64μg/mL)。化合物12i經測試抗流行性感冒病毒菌株子集(表2)，且展示抗多種菌株之廣譜抗流行性感冒活性。
結論
化合物12i顯示抗所測試之所有流行性感冒病毒之高效活性。發現化合物12i係流行性感冒病毒複製之高效抑制劑且表明化合物12i有效作為所選RNA病毒(包括所有流行性感冒病毒)之廣譜抑制劑。
實例10：化合物12i之活體外抗病毒活性
針對抗病毒活性在若干病毒中在活體外評價化合物12i之抗病毒活性。抗馬堡病毒(絲狀病毒科)、Junin Candid 1(沙粒病毒科)、皮欽德病毒(沙粒病毒科)、屈公熱病毒(Chikungunya)181/25(披衣病毒科)及NYCBH牛痘病毒(痘病毒科(poxviridae))之EC50值係在約10μg/mL至約>300μg/mL範圍內。
實例11：化合物12i與神經胺糖酸苷酶抑制劑在MDCK細胞中之協同抗病毒活性
用流行性感冒病毒H3N2(A/Victoria/3/75)病毒感染Madin Darby犬腎(MDCK)細胞並用化合物12i與帕拉米韋(peramivir)之各種組合治療72h。使用中性紅染料攝取分析來測定細胞病變作用。數據顯示於表3中。
藉由使用Mac Synergy IITM軟體程式實施三維分析來評估實驗數 據(Prichard and Shipman,1990；其全文以引用方式併入本文中)。該軟體自個別藥物之劑量-反應曲線計算理論加性相互作用。然後自實驗表面減去所計算加性表面(其代表預測加性相互作用)以展現比預期相互作用更大(協同作用)或更小(拮抗作用)之區域。帕拉米韋與化合物12i之組合在細胞培養研究中顯示協同抗病毒作用，其中協同作用體積等於92μM2單位%。
實例12：化合物12i肌內(IM)注射在鼠類流行性感冒模型中之療效
6至8週齡BALB/c小鼠適於H3N2病毒(A/Victoria/3/75)。在感染前1h開始藉由肌內(IM)注射給與0mg/kg/d qd、30mg/kg/d qd、100mg/kg/d qd及300mg/kg/d qd之劑量5天。N=50隻動物。對所有動物均隨訪16天。終點包括致死率、死亡平均天數及重量損失。
在小鼠流行性感冒模型病毒中之化合物12i(IM)結果顯示於表4中。化合物12i在感染流行性感冒病毒之小鼠中展示IM改良之存活及重量損失。
與媒劑-受感染組相比*P<0.001(對數等級檢定)
與媒劑-受感染組相比**P<0.001(t檢定)
實例13：經口投與化合物12i在鼠類流行性感冒模型中之療效
6至8週齡BALB/c小鼠適於H3N2病毒(A/Victoria/3/75)。經口給與0mg/kg/d qd、30mg/kg/d qd、100mg/kg/d qd及300mg/kg/d qd及100mg/kg/d bid之劑量。N=60隻動物。對所有動物均隨訪16天。終點包括致死率、死亡平均天數及重量損失。在感染H3N2 A/Vic/3/75流行性感冒病毒之小鼠中經口投與化合物12i對重量損失之影響顯示於表5中。經口給與化合物12i改良感染流行性感冒病毒之小鼠之存活及重量損失。
與媒劑-受感染組相比*P<0.001(對數等級檢定)
與媒劑-受感染組相比**P<0.001(t檢定)
實例14：在小鼠中之藥物動力學研究
對雌性BALB/c小鼠(N=30)以100mg/kg經口投用化合物12i。在t=0.17h、0.5h、1.0h、3h、6h及24h時對小鼠進行後眼竇採血(每一時間點5隻小鼠)，離心並將血漿儲存於-80℃下。經由LC/MS/MS分析來量測血漿藥物濃度。
在經口投與後化合物12i之小鼠血漿濃度顯示於表6中。
實例15：伊波拉病毒小鼠預防研究
腹腔內、肌內及經口投與8至12週齡C57BL/6小鼠化合物12i(300mg/kg/天，BID)(N=10隻/組，4組一1個鹽水組及3個藥物治療組)。在感染前4h開始8天治療。對適應伊波拉病毒(Zaire)激發之小鼠實施腹膜內投與。監測感染後14天之死亡率及重量。
截至第8天，經鹽水治療之感染伊波拉病毒之小鼠全部死亡。所有經化合物12i腹膜內或肌內治療之小鼠在研究終點(第14天)時均存活。在研究終點(第14天)時，80%經化合物12i經口治療之小鼠存活。
直至第8天，經鹽水治療之感染伊波拉病毒之小鼠全部展示重量損失(截至第8天，所有對照小鼠均死亡)。在第12天時，經化合物12i腹膜內或肌內治療之小鼠保持開始重量的95%以上。在第12天時，經化合物12i經口治療之小鼠保持開始重量的80%以上。在第12天後，所有經藥物治療之小鼠均繼續增加重量。
實例16：伊波拉病毒小鼠預防研究
肌內及經口投與8至12週齡C57BL/6小鼠化合物12i。將研究個體分成6組(N=10隻/組)。第1組係鹽水對照，第2組投用150mg/kg化合物12i(經口，BID)；第3組投用250mg/kg化合物12i(經口，BID)；第4組投用150mg/kg化合物12i(肌內，BID)。第5組係經鹽水治療之未 受感染小鼠(經口，BID)，且第6組係經250mg/kg化合物12i治療之未受感染小鼠(經口，BID)。在感染前4h開始9天治療。對適應伊波拉病毒(Zaire)激發之小鼠實施腹膜內投與(1,000pfu)。監測感染後14天之死亡率及重量。
截至第8天，經鹽水治療之感染伊波拉病毒之小鼠全部死亡。在研究終點時，所有經化合物12i肌內治療之小鼠均存活，此指示化合物12i之肌內劑量具有完全保護性。在研究終點時，80%或以上經化合物12i經口治療之小鼠存活。
直至第7天，經鹽水治療之感染伊波拉病毒之小鼠全部展示重量損失(截至第8天，所有對照小鼠均死亡)。在第11天時，經化合物12i肌內治療之小鼠展示與未受感染對照組類似之重量增加。經化合物12i經口治療之小鼠展示可逆重量損失，且在第11天時保持開始重量的100%以上。
實例17：黃熱病病毒(YFV)時間窗金倉鼠研究
將黃熱病病毒(Jimenez菌株)以每隻倉鼠20 CCID50(約6.25×LD50)腹腔內注射至雌性Syrian金倉鼠(99g)中。如下進行分組：1)-4h開始投與化合物12i(N=15)；2)1dpi(感染後天數)開始投與化合物12i(N=10)；3)2dpi開始投與化合物12i(N=10)；4)3dpi投與化合物12i(N=10)；5)4dpi投與化合物12i(N=10)；6)-4h開始投與利巴韋林(ribavirin)(N=10)；7)-4h開始投與鹽水媒劑(N=16)；8)-4h開始投與化合物12i之未受感染倉鼠(N=3)；9)-4h開始投與鹽水媒劑之未受感染倉鼠(N=3)；及10)未受感染未經處理之正常對照(N=3)。治療劑量係100mg/kg，腹腔內，BID，共計7天。研究終點係在21天時之死亡率、在第0天、第3天、第5天及第6天量測之重量；血清及肝病毒滴度(第4天，在-4h時化合物12i及在-4h時媒劑)及在第6天時之ALT及AST。
結果顯示，與安慰劑相比，延遲治療提高對化合物12i之存活(圖2)。指示感染YFV且在病毒激發後不同時間開始經化合物12i每日兩次治療共計7天之倉鼠之存活(***P<0.001，**P<0.1，如與安慰劑相比)。開始感染前對化合物12i之存活率為100%，且感染後至多3天延遲治療。開始感染後4天對化合物12i之存活率為80%，此指示在延遲治療組中顯著高於安慰劑。相比而言，開始感染前利巴韋林提供90%存活，且開始感染前媒劑提供12.5%存活。大多數死亡發生在感染10天內。在感染後21天用YFV重新激發存活動物。
感染YFV且自感染前至感染後4天經化合物12i治療之倉鼠顯示重量增長超過感染前投與之安慰劑及利巴韋林。
實例18：化合物12i之馬堡病毒研究
在以適應MARV-Ravn之小鼠1000pfu激發(腹膜內)之10至12週齡BALB/c小鼠中肌內投用化合物12i。將該研究分成10組(N=10隻/組)。投用方案、途徑及劑量顯示於表7中。在投與前將化合物12i溶解於0.9%鹽水中，並監測感染後14天之健康情況及重量。
*第0天治療在感染前4h開始，第6組除外。
第6組治療在第0天感染後4h開始。
PI=感染後。
在此研究中至第12天10組之存活%包括於表8中。僅經媒劑(0.9%鹽水)治療之小鼠之存活率在第7天為60%且在第8天至第12天為30%。顯示在所有劑量下在第7天化合物12i使存活增加至至少90%，且在第8天至第12天至少80%。
實例19：醫藥劑型
以下說明含有式I化合物(「化合物X」)之代表性醫藥劑型在人類中之治療性或預防性用途。
以上調配物可藉由醫藥業內熟知之習用程序來獲得。
所有出版物、專利及專利文件皆以引用方式併入本文中，如同單獨地以引用方式併入一般。上文已參照各具體且較佳之實施例及技術闡述本發明。然而，應瞭解，可作出許多變化及修改，同時仍保持處於本發明精神及範圍內。

Claims (40)

  1. 一種由式(I)代表之化合物或其醫藥上可接受之鹽，
    Figure TWI664180B_C0001
    其中：L1、L2及L3各自獨立地係鍵或-C(R0)2-O-；其中當L1、L2或L3為-C(R0)2-O-時，該-C(R0)2-O-基團之-C(R0)2-部分附接至該吡咯啶環上之氧，且該-C(R0)2-O-基團之-O-原子分別附接至R1、R2或R3；L4、L5及L6各為鍵；R0在每次出現時獨立地係H或(C1-C6)烷基；R1、R2及R3各自獨立地選自由H、胺醯基、胺基亞硫醯基、醯基、R10OC(O)-、磷醯基及胺基磷醯基組成之群；或R1與R2一起或R2與R3一起可選自由羰基、硫羰基、磷醯基及(C1-C6)烷基磷醯基組成之群；R4、R5及R6各為H；R7係H；R10在每次出現時獨立地選自由H、(C1-C6)烷基、芳基、雜芳基、芳烷基及雜芳烷基組成之群；條件係該由式(I)代表之化合物不為
    Figure TWI664180B_C0002
  2. 如請求項1之化合物，其中L1-R1與L2-R2相同。
  3. 如請求項2之化合物，其中L1-R1及L2-R2中之每一者係H。
  4. 如請求項2之化合物，其中L3-R3係H。
  5. 如請求項1之化合物，其中L2-R2與L3-R3相同。
  6. 如請求項5之化合物，其中L2-R2及L3-R3中之每一者係H。
  7. 如請求項5之化合物，其中L1-R1係H。
  8. 如請求項1之化合物，其中L1-R1與L3-R3相同。
  9. 如請求項8之化合物，其中L1-R1及L3-R3中之每一者係H。
  10. 如請求項8之化合物，其中L2-R2係H。
  11. 如請求項1之化合物，其中L1-R1、L2-R2及L3-R3相同。
  12. 如請求項1至11中任一項之化合物，其中胺醯基在每次出現時獨立地係-C(=O)CH(NH2)(CH2)nCHR30R31，其中n係0或1；且R30及R31各自獨立地選自由H、(C1-C6)烷基、芳基、雜芳基、芳烷基及雜芳烷基組成之群。
  13. 如請求項12之化合物，其中R30及R31各自獨立地選自由H及(C1-C6)烷基組成之群。
  14. 如請求項13之化合物，其中R30及R31各自獨立地係(C1-C6)烷基。
  15. 如請求項14之化合物，其中n係0；且R30及R31各自獨立地係甲基。
  16. 如請求項1至11中任一項之化合物，其中胺基亞硫醯基在每次出現時獨立地係-C(=S)CH(NH2)(CH2)nCHR30R31，其中n係0或1；且R30及R31各自獨立地選自由H、(C1-C6)烷基、芳基、雜芳基、芳烷基及雜芳烷基組成之群。
  17. 如請求項1至11中任一項之化合物，其中醯基在每次出現時獨立地係-C(=O)R40，其中R40係選自由H、(C1-C6)烷基、芳基、雜芳基、芳烷基及雜芳烷基組成之群。
  18. 如請求項17之化合物，其中R40係H。
  19. 如請求項17之化合物，其中R40係(C1-C6)烷基。
  20. 如請求項1至11中任一項之化合物，其中R10在每次出現時獨立地係H。
  21. 如請求項1至11中任一項之化合物，其中R10在每次出現時獨立地係(C1-C6)烷基。
  22. 如請求項1至11中任一項之化合物，其中胺基磷醯基在每次出現時獨立地係-P(=O)(OR50)NR51R52，其中R50係選自由H、(C1-C6)烷基、芳基、芳基烷基、雜芳基、雜芳烷基及-(CH2)mSC(=O)C(CH3)2CH2OH組成之群；m係1或2；R51係H或(C1-C6)烷基；且R52係選自由H、(C1-C6)烷基、芳基、芳烷基、雜芳基、雜芳烷基及-CR60R61C(=O)OR62組成之群，其中R60及R61各自獨立地係H或(C1-C6)烷基；且R62係選自由H、(C1-C6)烷基、芳基、芳烷基、雜芳基、雜芳烷基組成之群。
  23. 如請求項22之化合物，其中R50係H。
  24. 如請求項22之化合物，其中R50係芳基。
  25. 如請求項22之化合物，其中R50係-(CH2)mSC(=O)C(CH3)2CH2OH。
  26. 如請求項25之化合物，其中m係2。
  27. 如請求項22之化合物，其中R51係H。
  28. 如請求項22之化合物，其中R52係芳烷基。
  29. 如請求項22之化合物，其中R52係-CR60R61C(=O)OR62。
  30. 如請求項29之化合物，其中R60係H；R61係(C1-C6)烷基；且R62係(C1-C6)烷基。
  31. 如請求項1之化合物，其選自由下列組成之群：
    Figure TWI664180B_C0003
    Figure TWI664180B_C0004
    及
    Figure TWI664180B_C0005
    ，及其醫藥上可接受之鹽。
  32. 如請求項1之化合物，其由
    Figure TWI664180B_C0006
    代表，或其醫藥上可接受之鹽。
  33. 一種醫藥組合物，其包含如請求項1至32中任一項之化合物或其醫藥上可接受之鹽及醫藥上可接受之載劑。
  34. 一種如請求項1至32中任一項之化合物或其醫藥上可接受之鹽在製造藥劑中之用途，該藥劑用於抑制病毒複製。
  35. 一種如請求項1至32中任一項之化合物或其醫藥上可接受之鹽在製造藥劑中之用途，該藥劑用於治療病毒感染。
  36. 如請求項34或35之用途，其中該病毒係選自由RNA病毒組成之群。
  37. 如請求項36之用途，其中該病毒係選自由下列組成之群：正黏液病毒科(orthomyxoviridae)、副黏液病毒科(paramyxoviridae)、沙粒病毒科(arenaviridae)、本揚病毒科(bunyaviridae)、黃熱病毒科(flaviviridae)、絲狀病毒科(filoviridae)、披衣病毒科(togaviridae)、小RNA病毒科(picornaviridae)及冠狀病毒科(coronaviridae)。
  38. 如請求項35之用途，其中該病毒係選自由下列組成之群：腺病毒、鼻病毒、A型肝炎病毒、C型肝炎病毒、小兒麻痺病毒、麻疹病毒、伊波拉病毒(Ebola virus)、柯薩奇病毒(Coxsackie virus)、西尼羅病毒(West Nile virus)、痘瘡病毒、黃熱病病毒、登革熱病毒(Dengue Fever virus)、A型流行性感冒病毒、B型流行性感冒病毒、賴薩病毒(lassa virus)、淋巴球性蜘蛛網膜腦膜炎病毒、胡寧病毒(Junin virus)、馬丘波病毒(machuppo virus)、瓜奈瑞特病毒(guanarito virus)、漢他病毒(hantavirus)、裂谷熱病毒(Rift Valley Fever virus)、拉克羅斯病毒(La Crosse virus)、加州腦炎病毒(California encephalitis virus)、克裏米亞-剛果病毒(Crimean-Congo virus)、馬堡病毒(Marburg virus)、日本腦炎病毒(Japanese encephalitis virus)、科薩努爾森林病毒(Kyasanur Forest virus)、委內瑞拉馬腦炎病毒(Venezuelan equine encephalitis virus)、東部馬腦炎病毒(Eastern equine encephalitis virus)、西部馬腦炎病毒(Western equine encephalitis virus)、嚴重急性呼吸道症候群(SARS)病毒、副流行性感冒病毒、呼吸道細胞融合性病毒、龐塔托魯病毒(Punta Toro virus)、塔卡裏伯病毒(Tacaribe virus)及皮欽德病毒(Pichinde virus)。
  39. 如請求項38之用途，其中該病毒係選自由下列組成之群：腺病毒、登革熱病毒、馬堡病毒、A型流行性感冒病毒、B型流行性感冒病毒、胡寧病毒、麻疹病毒、副流行性感冒病毒、皮欽德病毒、龐塔托魯病毒、呼吸道細胞融合性病毒、鼻病毒、裂谷熱病毒、SARS病毒、塔卡裏伯病毒、委內瑞拉馬腦炎病毒、西尼羅病毒及黃熱病病毒。
  40. 如請求項38之用途，其中該病毒係選自由下列組成之群：伊波拉病毒、黃熱病病毒、馬堡病毒、A型流行性感冒病毒及B型流行性感冒病毒。
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