BG107139A

BG107139A - Инхибитор тип 1 (nнe-1) обменящ натрий - водород

Info

Publication number: BG107139A
Application number: BG107139A
Authority: BG
Inventors: Weichao Chen; Eric COX; - PEREZ Angel GUZMAN
Original assignee: Pfizer Products Inc.
Priority date: 2000-04-28
Filing date: 2002-09-23
Publication date: 2003-07-31
Also published as: OA12256A; HUP0300651A2; TR200202439T2; HN2001000042A; CZ20023408A3; IL152075A0; CO5221125A1; AR028375A1; EP1276737A1; UY26680A1; PL357765A1; MXPA02010600A; MY133842A; AU2001235896A1; CR6797A; YU79602A; NO20025132D0; EA004882B1; KR20020093079A; GT200100064A

Abstract

Изобретението се отнася до 2-(4-сулфонилфенил)пиран-4-онови производни с обща формула, в която заместителите имат значения, посочени в описанието, до метод за получаването им, до фармацевтични състави, които ги съдържат, и до използването им в медицината.

Description

ПРЕДШЕСТВАЩО СЪСТОЯНИЕ НА ТЕХНИКАТА

Мокардно исхемично поражение може да настъпи при пациент на амбулаторно лечение, също както и при периоперативни условия и може да доведе до внезапна смърт, инфаркт на миокарда или конгестивно сърдечно заболяване. Има неотложна медицинска необходимост от предотвратяване или свеждане до минимум на миокардното исхемично поражение, по-специално периоперативен инфаркт на миокарда. Такава терапия се предвижда като животоспасяваща и може да намали хоспитализации, да подобри качеството на живот и цялостно да намали средствата за здравеопазването на високо рискови пациенти.

Фармакологичната кардиозащита ще намали разпространението и напредъка на инфаркта на миокарда и дисфункция, настъпваща при тези хирургически състояния (периоперативни). Освен намаляване увреждане на миокарда и подобряване на пост изхемичната миокардна функция при пациенти с исхемично сърдечно заболяване, кардиозащитата също ще намали разпространението на сърдечно заболяване и смъртност, дължаща се на инфаркт на миокарда и дисфункция при рискови пациенти (такива над 65 години, провяващи нетърпимост, заболяване на коронарната артериа, захарен диабет, високо кръвно налягане), което не изисква сърдечна хирургическа намеса.

Механизмът, който е отговорен за поражението на миокарда след исхемия и повторна перфузия, не е напълно разгадан.

Различни публикации разкриват използването на гуанидинови производни като полезни за лечението, например, на аритмия.

Неотдавнашна публикувана патентна заявка, PCT/IB99/00206, публикувана като WO 99/43663, 2 септември, 1999, която тук е разгледана, разкрива различни NHE-1 инхибитори, включващи [5циклопропил-1 -(хинолин-5-ил)-1 Н-пиразол-4-карбонил]гуанидин. Публикацията допълнително разкрива, че предпочитани соли на непосредствено участващото съединение са моно- или ди-мезилатните соли. Една група от предпочитани съединения, която включва хидроксихинолинови съединения се описва в претенция 102 на публикуваната заявка. Разбира се, някои от тези хидроксихинолинови съединения могат да съществуват в няколко тавтомерни форми, като хинолоновата форма, описана в тази заявка за патент. В допълнение,

U.S. предварителна заявка сериен No 60/162,374, подадена на 29 октомври, 1999 се отнася до кристални форми на гореописания NHE-1 инхибитор.

Заявка PCT/JP97/04650, публикувана на 25 Юни, 1998, разкрива N[(заместен петчленен хетероарил)]гуанидинови съединения полезни като инхибитори на обмяна на Na⁺/H и следователно ефективни за лечението на различни заболявания, като хипертония, аритмия, ангина пекторис, инфаркт на миокарда, артериосклероза и усложнения при диабет.

Затова в тази област на науката непрекъснато се търсят съединения за лечението на периоперативна миокардна исхемия.

ТЕХНИЧЕСКА СЪЩНОСТ НА ИЗОБРЕТЕНИЕТО

Изобретението се отнася до съединение с формула I

негово пролекарство или фармацевтично приемлива сол на съединението или на споменатото пролекарство, при условието че [5циклопропил-1-(хинолин-5-ил)-1Н-пиразол-4-карбонил]гуанидин не се включва.

Така както се използва, терминът негово пролекарство, или фармацевтично приемлива сол на споменатото съединение или споменатото пролекарство включва условието, че [5-циклопропил-1(хинолин-5-ил)-1Н-пиразол-4-карбонил]гуанидин не се включва.

Изобретението също се отнася до фактически чист [5-циклопропил1-(2-хинолон-5-ил)-1 Н-пиразол-4-карбонил]гуанидин, или фармацевтично приемлива сол на споменатото съединение.

Алтернативно, горното съединение е именно [5-циклопропил-1-(2хинолон-5-ил)-1Н-пиразол-4-карбонил]гуанидин. Предпочитана сол е хидрохлоридната сол и най-добре, монохидрохлоридната сол.

Друг аспект на това изобретение е метод за лечение на млекопитаещо (например, човек), имащо заболяване или състояние, медиирано чрез NHE-1 посредством прилагане на терапевтично ефективно количество на съединение с формула I, негово пролекарство или фармацевтично приемлива сол на споменатото съединение или на споменатото пролекарство към млекопитаещо.

Друг аспект на изобретението се отнася до метод за намаляване тъканно увреждане (например, съществено предпазване на тъкан от увреждане, включващо предпазване на тъкан) предизвикано от исхемия, състоящ се от прилагане към млекопитаещо (например, мъж или жена) при необходимост от такова лечение на терапевтично ефективно количество от съединение с формула I, негово пролекарство или фармацевтично приемлива сол на споменатото съединение или на споменатото пролекарство.

Предпочитани исхемични тъкани, разглеждани поотделно или като група са сърдечна, мозъчна, бъбречна, белодробна, чревна, мускулна, панкреасна, нервна, на гръбначен стълб, на ретината, васкулатурната или интестиналната тъкан.

Особено предпочитана исхемична тъкан е сърдечната.

Специално се предпочита, съединението с формула I, негово пролекарство, или фармацевтично приемлива сол на споменатото съединение или на споменатото пролекарство да се прилага за предотвратяване от поражение при периоперативна миокардна исхемия.

За предпочитане, съединението с формула I, негово пролекарство, или фармацевтично приемлива сол на споменатото съединение или на споменатото пролекарство се прилага профилактично.

Исхемичното увреждане може да настъпи по време на трансплантация на орган или на органа, или на пациента.

За предпочитане, съединението с формула I, негово пролекарство, или фармацевтично приемлива сол на споменатото съединение или на споменатото пролекарство се прилага преди, по време на и/или за кратко време след сърдечна операция или не сърдечна операция.

В друг аспект на това изобретение съединението с формула I, негово пролекарство, или фармацевтично приемлива сол на споменатото съединение или на споменатото пролекарство се прилагала локално.

Предпочитана доза е около 0.01 до 100 mg/kg/ден от съединението с формула I, негово пролекарство, или фармацевтично приемлива сол на споменатото съединение, или на споменатото пролекарство. Специално предпочитана доза е около 0.01 до 50 mg/kg/ден от съединението с формула I, негово пролекарство, или фармацевтично приемлива сол на споменатото съединение, или на споменатото пролекарство.

Друг аспект на това изобретение е насочен към метод за намаляване на увреждането на тъканта на миокарда (например, съществено предпазване на тъканта от увреждане, въвеждайки тъканна защита) по време на операция (например, оперативни методи на поставяне на байпас на коронарна артерия (CABG), васкуларни операции, подкожна транслуминална коронарна ангиопластика (РТСА), трансплантация на орган, или други не сърдечни оперативни методи), състоящ се в прилагане към млекопитаещо (например, жена или мъж) на терапевтично ефективно количество от съединението с формула I, негово пролекарство, или фармацевтично приемлива сол на споменатото съединение, или на споменатото пролекарство.

Друг аспект на това изобретение е насочен към метод за намаляване на увреждането на тъканта на миокарда (например, съществено предпазване на тъканта от увреждане, въвеждайки тъканна защита) при пациенти, преживели сърдечни (акутни коронални синдроми, например, инфаркт на миокарда или нестабилна ангина ) или церебрални исхемични събития (например, удар), състоящ се в прилагане към млекопиаещи (например, мъж или жена) на терапевтично ефективно количество от съединението с формула I, негово пролекарство, или фармацевтично приемлива сол на споменатото съединение, или на споменатото пролекарство.

Друг аспект на това изобретение е насочен към постоянен метод за намаляване на тъканно увреждане на миокарда (например, съществено предпазване на тъканта от увреждане, въвеждайки тъканна защита) при пациенти с поставена диагноза на коронарно сърдечно заболяване (например, с предишен инфаркт на миокарда или нестабилна ангина) или пациенти, които са с висок риск към инфаркт на миокарда (например, възраст над 65 и два или повече рискови фактора към коронарно сърдечно заболяване), състоящ се в прилагане към млекопитаещо (например, мъж или жена) на терапевтично ефективно количество от съединението с формула I, негово пролекарство, или фармацевтично приемлива сол на споменатото съединение, или на споменатото пролекарство.

Друг аспект на това изобретение е насочен към метод за намаляване на увреждането на тъканта на миокарда, състоящ се от постояното орално прилагане към млекопитаещо, нуждаещо се от такова лечение, на терапевтично ефективно количество от съединението с формула I, негово пролекарство, или фармацевтично приемлива сол на споменатото съединение, или на споменатото пролекарство.

Друг аспект на това изобретение е насочен към метод за лечение на кардиоваскуларни заболявания, състоящ се от прилагане към млекопитаещо (например, мъж или жена) на терапевтично ефективно количество от съединението с формула I, негово пролекарство, или фармацевтично приемлива сол на споменатото съединение, или на споменатото пролекарство.

Друг аспект на това изобретение е насочен към метод за лечение на артериосклероза, състоящ се от прилагане към млекопитаещо (например, мъж или жена) на терапевтично ефективно количество от съединението с формула I, негово пролекарство, или фармацевтично приемлива сол на споменатото съединение, или на споменатото пролекарство.

Друг аспект на това изобретение е насочен към метод за лечение на високо кръвно налягане, състоящ се от прилагане към млекопитаещо (например, мъж или жена) на терапевтично ефективно количество от съединението с формула I, негово пролекарство, или фармацевтично приемлива сол на споменатото съединение, или на споменатото пролекарство.

Друг аспект на това изобретение е насочен към метод за лечение на аритмия, състоящ се от прилагане към млекопитаещо (например, мъж или жена) на терапевтично ефективно количество от съединението с формула I, негово пролекарство, или фармацевтично приемлива сол на споменатото съединение, или на споменатото пролекарство.

Друг аспект на това изобретение е насочен към метод за лечение на ангина пекторис, състоящ се от прилагане към млекопитаещо (например, мъж или жена) на терапевтично ефективно количество от съединението с формула I, негово пролекарство, или фармацевтично приемлива сол на споменатото съединение, или на споменатото пролекарство.

Друг аспект на това изобретение е насочен към метод за лечение на сърдечна хипертрофия, състоящ се от прилагане към млекопитаещо (например, мъж или жена) на терапевтично ефективно количество от съединението с формула I, негово пролекарство, или фармацевтично приемлива сол на споменатото съединение, или на споменатото пролекарство.

Друг аспект на това изобретение е насочен към метод за лечение на бъбречни заболявания, състоящ се от прилагане към млекопитаещо (например, мъж или жена) на терапевтично ефективно количество от съединението с формула I, негово пролекарство, или фармацевтично приемлива сол на споменатото съединение, или на споменатото пролекарство.

Друг аспект на това изобретение е насочен към метод за лечение на диабетни усложнения, състоящ се от прилагане към млекопитаещо (например, мъж или жена) на терапевтично ефективно количество от съединението с формула I, негово пролекарство, или фармацевтично приемлива сол на споменатото съединение, или на споменатото пролекарство.

Друг аспект на това изобретение е насочен към метод за лечение на рестеноза, състоящ се от прилагане към млекопитаещо (например, мъж или жена) на терапевтично ефективно количество от съединението с формула I, негово пролекарство, или фармацевтично приемлива сол на споменатото съединение, или на споменатото пролекарство.

Друг аспект на това изобретение е насочен към метод за лечение на заболявания на клетъчна пролиферация, състоящ се от прилагане към млекопитаещо (например, мъж или жена) на терапевтично ефективно количество от съединението с формула I, негово пролекарство, или фармацевтично приемлива сол на споменатото съединение, или на споменатото пролекарство.

Друг аспект на това изобретение е насочен към метод за лечение на ракови заболявания, състоящ се от прилагане към млекопитаещо (например, мъж или жена) на терапевтично ефективно количество от съединението с формула I, негово пролекарство, или фармацевтично приемлива сол на споменатото съединение, или на споменатото пролекарство.

Друг аспект на това изобретение е насочен към метод за лечение на фиброзни заболявания, състоящ се от прилагане към млекопитаещо (например, мъж или жена) на терапевтично ефективно количество от съединението с формула I, негово пролекарство, или фармацевтично приемлива сол на споменатото съединение, или на споменатото пролекарство.

Друг аспект на това изобретение е насочен към метод за лечение на гломеруларна нефросклероза, състоящ се от прилагане към млекопитаещо (например, мъж или жена) на терапевтично ефективно количество от съединението с формула I, негово пролекарство, или фармацевтично приемлива сол на споменатото съединение, или на споменатото пролекарство.

Друг аспект на това изобретение е насочен към метод за лечение на белодробна фиброза, състоящ се от прилагане към млекопитаещо (например, мъж или жена) на терапевтично ефективно количество от съединението с формула I, негово пролекарство, или фармацевтично приемлива сол на споменатото съединение, или на споменатото пролекарство.

Друг аспект на това изобретение е насочен към метод за лечение на церебрални исхемични разтройства, състоящ се от прилагане към млекопитаещо (например, мъж или жена) на терапевтично ефективно количество от съединението с формула I, негово пролекарство, или фармацевтично приемлива сол на споменатото съединение, или на споменатото пролекарство.

Друг аспект на това изобретение е насочен към метод за лечение на порок на миокарда, състоящ се от прилагане към млекопитаещо (например, мъж или жена) на терапевтично ефективно количество от съединението с формула I, негово пролекарство, или фармацевтично приемлива сол на споменатото съединение, или на споменатото пролекарство.

Друг аспект на това изобретение е насочен към метод за лечение на дисфункция на миокарда, състоящ се от прилагане към млекопитаещо (например, мъж или жена) на терапевтично ефективно количество от съединението с формула I, негово пролекарство, или фармацевтично приемлива сол на споменатото съединение, или на споменатото пролекарство.

Друг аспект на това изобретение е насочен към метод за лечение на цереброваскуларни заболявания, състоящ се от прилагане към млекопитаещо (например, мъж или жена) на терапевтично ефективно количество от съединението с формула I, негово пролекарство, или фармацевтично приемлива сол на споменатото съединение, или на споменатото пролекарство.

Друг аспект на това изобретение е насочен към метод за лечение хипертрофия и хиперплазия на орган, състоящ се от прилагане към млекопитаещо (например, мъж или жена) на терапевтично ефективно количество от съединението с формула I, негово пролекарство, или фармацевтично приемлива сол на споменатото съединение, или на споменатото пролекарство.

Това изобретение също е насочено към фармацевтични състави, които включват количество от съединението с формула I, негово пролекарство, или фармацевтично приемлива сол на споменатото съединение, или на споменатото пролекарство и фармацевтично приемлив носител, ексципиент или разредител.

Това изобретение също е насочено към фармацевтични състави за намаляване на тъканни увреждания, вследствие исхемия, които включват терапевтично ефективно количество от съединението с формула I, негово пролекарство, или фармацевтично приемлива сол на споменатото съединение, или на споменатото пролекарство и фармацевтично приемлив носител, ексципиент или разредител.

Терминът намаляване е предвиден да включва частична профилактика или профилактика, която въпреки че е по-добра от тази при която не се поема съединение или от поемане на плацебо, е по-ниска от 100%, в допълнение към фактическа обща профилактика.

Терминът увреждане вследствие исхемия, така както е използван тук, се отнася до състояния директно свързани с намален кръвен поток към тъканта, например, дължащо се на тромб или обструкция на кръвоносните съдове, които доставят кръв към съответната тъкан и в резултат на това, между другото, понижено пренасяне на кислород към тази тъкан, влошено действие на тъканта, тъканна дисфункция и/или некроза. Алтернативно, там където кръвен поток или органна перфузия могат да бъдат количествено съразмерни, кислородният обем на пренасяне на кръвта или перфузионна среда може да бъде намален, например, при хипоксични среда, тъй като доставянето на кислород към тъканта се понижава и от това произтича тъкан с влошено действие, тъканна дисфункция и/или некроза на тъканта.

Терминът лечение, лекувам или лекуване, използван тук, включва предпазно (например, профилактика) и палиативно лечение.

Терминът фармацевтично приемлива сол се отнася до нетоксични анионни соли, съдържащи аниони, като (но не се ограничават до тях) хлорид, бромид, йодид, сулфат, бисулфат, фосфат, ацетат, малеат, фумарат, оксалат, лактат, тартарат, цитрат, глюконат, метансулфонат (мезилат) и 4-толуен-сулфонат. Тъй като съществува повече от една основна група, терминът може да включва сложни соли (например, дисол). Терминът също се отнася до нетоксични катионни соли, като (но не се ограничават до тях), натрий, калий, калций, магнезий, амониев или протониран бензатин (Ν,Ν-дибензилетилендиамин), холин, етаноламин, диетаноламин, етилендиамин, мегламин (N-метил-глюкамин), бенетамин (N-бензилфенетиламин), пиперазин или трометамин (2-амино-2хидроксиметил-1,3-пропандиол).

Терминът пролекарство се отнася до съединения, които са лекарствени прекурсори, които след прилагане отделят лекарството in vivo посредством определен химически или физиологически процес (например, пролекарство, което се довежда до физиологичното pH или посредством ензимно действие се превръща до желаната лекарствена форма). Отново, съществува условието, че [5-циклопропил-1-(хинолин-5ил)-1Нпиразол-4-карбонил]гуанидин не се включва.

Чрез фармацевтично приемлива се означава носителя, разредителя, ексципиенти и/или сол, които трябва да бъдат съвместими с другите ингредиенти на рецептурата и безвредни за получаващия.

Терминът резтворител, инертен спрямо реакцията и инертен разтворител, така както се използва тук, се отнася до разтворител или смес от разтворители, който не взаимодействат със суровини, реагенти, междинни съединения или продукти по начин, който въздейства неблагоприятно върху добива на желания продукт.

Ще бъде прието, че съединението от това изобретение може да съществува в радиобелязана форма, т.е., съединението може да съдържа един или повече атома, съдържащи атомна маса или масов номер различен от атомната маса или масовия номер обичайно установен по характер. Радиоизотопи на водород и въглерод включват ²Н, ³Н и ¹⁴С, респективно. Съединение от изобретението, което съдържа тези радиоизотопи и/или други радиоизотопи на други атома са в обхвата на това изобретение. ³Н и въглерод-14, т.е., ¹⁴С, радиоизотопи са особено за предпочитане за тяхното лесно получаване и откриваемост. Радиобелязано съединение с формула I може общо да бъде получено чрез методи, които са добре известни на специалистите в областта на науката. Подходящо е такива радиобелязани съединения да могат да бъдат получавани чрез провеждане на методите, разкрити в Схемите и/или в Примерите, дадени по-долу чрез заместване на готов наличен радиобелязан реагент за нерадиобелязан реагент.

Други характеристики и предимства ще станат очевидни от описанието и претенциите, които описват изобретението.

ПОДРОБНО ОПИСАНИЕ НА ИЗОБРЕТЕНИЕТО

Съединението с формула I е човешки метаболит на [5-циклопропил1-(хинолин-5-ил)-1Н-пиразол-4-карбонил]гуанидин. Това беше установено от пробите на човешка плазма, получени след интравенозно прилагане на [5-цикпопропил-1-(хинолин-5-ил)-1Н-пиразол-4-карбонил]гуанидин към човек. Структурата на това съединение независимо се променя чрез химическа синтеза. В друг аспект на това изобретение [5-циклопропил-1(хинолон-5-ил)-1Н-пиразол-4-карбонил]гуанидин може да бъде получен чрез прилагане на [5-циклопропил-1-(хинолин-5-ил)-1Н-пиразол-4карбонил]гуанидин към човек и изолиране на желания метаболит от плазмата. Алтернативно, необходимият метаболит не се изолира от човека, тъй като той се получава in vivo.

Изобщо, съединението от това изобретение може да бъде получено чрез процеси, които включват процеси, които са аналози на онези известни в областите на химията, по-специално в светлината на даденото тук описание. Определени процеси за производството на съединението от това изобретение са предвидени като допълнителни характеристики на изобретението и са илюстрирани чрез следващата реакционна схема. Други процеси са описани в експерименталната част.

Подробно описание на синтезата, съгласно изобретението следва:

VI

V

Съгласно горната схема, съединението с формула IA (получени какта се описва в Capps.J.D.; Hamilton, C.S. J.Am.Chem.Soc. 1938, 60, 2104) се разтваря в протичен разтворител, като етанол и се обработва с подходящ редуциращ агент, като калаен хлорид дихидрат. Получената смес се разбърква при температура от около 0°С до около 115°С в продължение на около 30 минути до около 24 часа. Получената смес се охлажда до около 23°С и се филтрира. Полученото твърдо вещество се пречиства по подходящ начин, например чрез превръщане в прах със солна киселина (например 1 М воден разтвор) при около 100°С в продължение на 1 час, охлаждане до около 23°С и филтриране, за да се осигури съединението с формула II като негова хидрохлоридна сол. Алтернативно, съединението с формула II може да бъде изолирано от реакционната смес като свободната основа чрез алкализиране с неорганична основа и екстрахиране с подходящ органичен разтворител. Съединението с формула II може също да бъде изолирано като други соли. Други методи на редукция, които ще изпълняват тази редукция са известни на специалистите в науката, такива например като каталитично хидрогениране.

Съединението с формула II се диазотира в солна киселина и вода, използвайки натриев натрит при около 0°С в продължение на 15 минути до около 2 часа. Полученият разтвор на диазониева сол се редуцира с подходящ редуциращ агент, като калаен хлорид дихидрат в солна киселина и вода при около 0°С до около 23°С в продължение на около 30 минути до около 6 часа. Полученото твърдо вещество се събира чрез филтриране и се пречиства по подходящ начин, например чрез превръщане в прах със солна киселина (например 1М воден разтвор) при около 23°С в продължение на около 30 минути. Съединението с формула III се събира чрез филтриране, като негова хидрохлоридна сол.

Алтернативно, съединението с формула III може да бъде изолирано от реакционната смес като свободна основа чрез алкализиране с неорганична основа и екстрахиране с органичен разтворител. Съединението с формула III също може да бъде изолирано като други соли. Други редуциращи агенти, които ще изпълнят тази трансформация са известни на специалистите в областта.

Съединението с формула IV се получава чрез методи, известни на специалистите в науката, например чрез реакцията на Ν,Νдиалкилформамид диалкилацетал,например, Ν,Ν-диметилформамид диметилацетал с естер на З-циклопропил-З-оксопропанова киселина при температура от около 23°С до около 115°С в продължение на около 1 час до около 4 часа с или без кисел катализатор. Групата R¹ и R² обикновено са всеки алкил, циклоалкил, циклоалкилалкил или арилалкилова група. Следователно, двете R² групи могат да бъдат свързани заедно, за да образуват циклична единица.

Съединението с формула IV взаимодейства със съединението с формула III в алкохолен разтворител, като етанол при температура от около 23°С до около 115°С в продължение на около 15 минути до около 12 часа. Когато съединението с формула III се използва като негова хидрохлоридна сол, благоприятно е реакцията да се проведе в присъствието в излишък на ненуклеофилна основа, като триетиламин. Съединението с формула V се събира чрез филтриране. Алтернативно, съединението с формула V може да бъде изолирано чрез други методи, като концентриране последвано от добавяне на вода и екстрахиране с подходящ органичен разтворител. Алтернативно, съединението с формула V може да бъде получено, използвайки съединението с формула III и други съединения вместо съединението с формула IV, като съединение, в което групата (R²)₂N е заместена от група R²O.

Съединението с формула V се хидролизира с основа, като натриев или литиев хидроксид в разтворител, като вода, и/или метанол и/или THF обикновено при около 23°С или при повишена температура, като при температура на флегмата в продължение на около 30 минути до около 12 часа. След това, киселината с формула VI се изолира, например чрез отстраняване на органичните разтворители, подкисляване и филтриране. Алтернативно, съединението с формула VI може да бъде изолирано от реакционната смес чрез отстраняване на органичните разтворители, подкисляване и екстрахиране с подходящ органичен разтворител.

Киселината с формула VI се свързва с гуанидин в присъствието на подходящ свързващ агент. Подходящ свързващ агент е този, който трансформира карбоксилна киселина в реактивни проби, които образуват амидна връзка при взаимодействие с амин.

Свързващият агент може да бъде реагент, който постига тази концентрация в един тигел, когато се смеси заедно с карбоксилната киселина и гуанидина. Примерни свързващи агенти са 1-(3диметиламинопропил)-3-етилкарбодиимид хидрохлоридхидроксибензотриазол (EDC/HBT), дициклохексилкарбодиимид (ОСС)/хидроксибензотриазол (НВТ), 2-етоксикарбонил-1,2дихидрохинолин (EEDQ) и диетилфосфорилцианид. Свързването се осъществява в инертен разтворител, за предпочитане апротен разтворител при температура от около -20°С до около 50°С в продължение на около 48 часа в присъствието на излишък от гуанидин като основа. Примерни разтворители включват ацетонитрил, дихлорометан, диметилсулфоксид, диметилформамид, хлороформ и техни смеси.

Свързващият агент също може да бъде такъв агент, който превръща карбоксилната киселина до активирано междинно съединение, което се изолира и/или се образува в първи етап и след това има възможност да реагира с гуанидин във втори етап. Примери за такива свързващи агенти и активирани междинни съединения са тионил хлорид или оксалил хлорид, за да се образува киселия хлорид, флуорид на циануровата киселина, за да се образува кисел флуорид или алкил хлороформат, като изобутил или изопропенил хлороформат, или пропанфосфониев анхидрид (анхидрид на пропанфосфонова киселина, РРА) с основа на третичен амин, за да се образува смесен анхидрид на карбоксилната киселина, или карбонилдиимидазол, за да се образува ацилимидазол. Ако свързващият агент е оксалил хлорид е благоприятно да се използва малко количество диметилформамид като съразтворител с друг разтворител (като дихлорометан), за да се катализира образуването на киселия хлорид. Това активирано кисело производно може да бъде свързано чрез смесване с междинното съединение в подходящ разтворител заедно с подходяща основа. Подходящи комбинации разтворител/основа, например са дихлорометан, диметилформамид или ацетонитрил, или техни смеси в присъствието на гуанидин в излишък като основа. Други подходящи комбинации разтворител/основа включват вода или ((С₁-С₅)алкохол) или техни смеси заедно със съразтворител, като дихлорометан, тетрахидрофуран или диоксан и основа, като натрий, калий или литиев хидроксид в достатъчно количество, за да се изразходи освободената киселина при реакцията. Използване на тези свързващи агенти и подходящ избор на разтворители и температури са добре известни на специалистите в областта на науката и лесно могат да бъдат определени от литературата в светлината на това описание. Тези и други примерни условия, полезни за свързващи карбоксилни киселини са описани в Houben-Weyl, Vol. XV, ,drt II, E.Wunsch, Ed.G.Theime Verlag, 1974, Stuttgart.M. Bodansky, Principles of

Peptide Synthesis, Spinger-Verlag, Berlin, 1984; и The Peptides, Analysis, Synthesis and Biology (ed. E.Gross and J.Melenhofer) vols 1-5 (Academic Press, NY 1979-1983).

В едно предпочитано изпълнение на изобретението, киселината с формула VI се активира с излишък от тионил хлорид при температура от около температурата на флегмата в продължение на около 15 минути до около 3 часа и излишният тионил хлорид се отстранява чрез концентриране. Полученият кисел хлорид се събира с излишния гуанидин хидрохлорид и неорганична основа, като натриев хидроксид в тетрахидрофуран и вода. Реакционната смес се разбърква удобно при 23°С или при повишена температура, като например температура на флегмата, в продължение на около 30 минути до около 6 часа. Съединението с формула I се изолира от тази реакционна смес по различни начини. Например, реакционната смес се концентрира, за да се отстрани тетрахидрофурана; водният слой се подкислява до pH 9, а твърдото вещество се събира чрез филтриране. Алтернативно, съединението с формула I може да бъде изолирано чрез екстрахиране с органичен разтворител. Съединението с формула I може да бъде трансформирано до съответстващата хидрохлоридна сол чрез обработване на нейн разтвор в метанол с хлороводород в етер и събиране на полученото твърдо вещество чрез филтриране или концентриране.. Други соли могат да бъдат получени чрез аналогови методи.

За специалистите в областта ще бъде ясно, че също е възможно съединението с формула V да се трансформира директно до съединението с формула I чрез обработване на съединението с формула V с излишък от гуанидин в инертен разтворител, като алкохолен разтворител, например етанол или в отсъствието на разтворител, при около 60°С до около 150°С.

За специалистите в областта ще бъде ясно, че съединението с формула I може да съществува в няколко тавтомерни форми. Всички такива тавтомерни форми се считат като част от това изобретение. Например, всички тавтомерни форми на карбонилгуанидинова част на съединението с формула I са включени в това изобретение. Всички тавтомерни форми образуват 2-хинолоновата група на съединението с формула I, като 2-хидроксихинолинова форма , също се включват в това изобретение.

Изходните материали и реагенти за гореописаните съединения лесно се намират или могат лесно да бъдат синтезирани от специалистите в областта, използвайки конвенционални методи на органичен синтез.

В допълнение, когато съединението от това изобретение образува метаболити, хидрати или солвати, те също са в обхвата на изобретението.

Някои от съединенията (например, пролекарства) от това изобретение са кисели и те образуват сол с фармацевтично приемлив катион. Повечето от съединенията от това изобретение са основни и те образуват сол с фармацевтично приемлив анион. Всички такива соли, включващи ди-соли са в обхвата на това изобретение и те могат да бъдат получени чрез конвенционални методи. Например, те могат да бъдат получени просто чрез взаимодействие на киселите и основните групи, или във водна, безводна, или частично водна среда. Солите се регенерират или чрез филтриране, чрез утаяване с разтворител, последвано от филтриране, чрез изпаряване на разтворителя, или в случая на водни разтвори чрез лиофилизация, като подходяща.

Съединението с формула I, негово пролекарство, или фармацевтично приемлива сол на споменатото съединение или на споменатото пролекарство, инхибира преносна система за обмяна на натрий/протон (Na7H⁺) и поради това е полезно като терапевтично или профилактично средство за заболявания, причинени от ускоряването на обмяната на натрий/протон (Na⁺/H⁺) от преносната система, например, кардиоваскуларни заболявания (например, артериосклероза, хипертония, аритмия (например, исхемична аритмия, аритмия, дължаща се на инфаркт на миокарда, аритмия след РТСА или след тромболиза и т.н.), ангина пекторис, сърдечна хипертрофия, инфаркт на миокарда, разрушаване на сърцето (например, конгестивно сърдечно разрушаване, акутно сърдечно разрушаване, сърдечна хипертрофия, и др.), рестеноза след РТСА, удар (например, хеморагичен удар, ендотоксичен удар, и др.), бъбречни заболявания (например, захарен диабет, диабетна нефропатия, исхемично акутно разрушаване на бъбрека и др.), смущения на орган, свързани с исхемия или исхемична повторна перфузия [(например, смущения, свързани с исхемична повторна перфузия на сърдечнен мускул, акутно бъбречно разрушаване или смущения, индуцирани от хирургическа намеса, като опарации за поставяне на коронарен артериален байпас (CABG), васкуларни операции, органна трансплантация, несърдечни операции, подкожна транслуминална коронарна ангиопластика (РТСА)], цереброваскуларни заболявания (например, исхемичен удар, хеморагичен удар, т.н.), церебро исхемични смущения (например, смущения, свързани с церебрален инфаркт, смущения, причинени след церебрална апоплексия, като усложнения, или церебрална едема). Съединението с формула I, негово пролекарство или фармацевтично приемлива сол на споменатото съединение или на споменатото пролекарство могат съшо да бъдат използвани като миокардна защита по време на операции на поставяне байпас на коронарна артерия (CABG), васкуларни операции, подкожна транслуминална коронарна ангиопластика (РСТА), органна трансплантация или несърдечни операции.

За предпочитане, съединението с формула I, негово пролекарство, или фармацевтично приемлива сол на споменатото съединение или на споменатото пролекарство могат да бъдат използвани като средства за миокардна защита преди, по време на или след операции на поставяне на байпас на коронарна артериа (CABG), васкуларни операции, подкожна транслуминална ангиопластика (РСТА), органна трансплантация или несърдечни операции.

За предпочитане, съединението с формула I, негово пролекарство, или фармацевтично приемлива сол на споменатото съединение или на споменатото пролекарство могат да бъдат използвани като средства за миокардна защита при пациенти, преживяли сърдечни (акутни коронални синдроми, например, инфаркт на миокарда или нестабилна ангина) или церебрални исхемични събития (например, удар).

За предпочитане, съединението с формула I, негово пролекарство, или фармацевтично приемлива сол на споменатото съединение или на споменатото пролекарство могат да бъдат използвани като средства за постоянна миокардна защита при пациенти с поставена диагноза на коронарно сърдечно заболяване (например, с предишен инфаркт на миокарда или нестабилна ангина) или пациенти, които са с висок риск към инфаркт на миокарда (например, възраст над 65 и два или повече рискови фактора към коронарно сърдечно заболяване).

В допълнение към това, съединението с формула I, негово пролекарство, или фармацевтично приемлива сол на споменатото съединение или на споменатото пролекарство са забележителни заради техния силен инхибиторен ефект върху пролиферацията на клетки, например пролиферацията на фибробластни клетки и пролиферацията на гладките мускулни клетки на кръвоносни съдове. Поради тази причина, съединението с формула I, негово пролекарство, или фармацевтично приемлива сол на споменатото съединение или на споменатото пролекарство са ценни терапевтични средства за използване при заболявания, в които клетъчна пролиферация означава първична или вторична причина и следователно могат да бъдат използвани като антиатеросклеротични средства и като средства срещу диабетични късни усложнения, ракови заболявания, фибротични заболявания, като белодробна фиброза, хепатитна фиброза или бъбречна фиброза, гломеруларна нефросклероза, хипертрофии на орган или хиперплазия, по-специално хиперплазия на простатата, белодробна фиброза, диабетични усложнения или повторяща се стриктура след РТСА, или заболявания, причинени от ендотелно клетъчно увреждане.

Полезността на съединението с формула I, негово пролекарство, или фармацевтично приемлива сол на споменатото съединение или на споменатото пролекарство като лекарствени средства за лечението на заболявания, както са дадени тук при млекопитаещи (например, човек), а именно миокардна защита по време на операция, или миокардна защита при пациенти, преживяли сърдечни или церебрални исхемични събития, или постоянна кардиозащита при пациенти, диагностицирани с коронарно сърдечно заболяване, се демонстрира посредством активността на съединението с формула I или фармацевтично приемлива сол на споменатото съединение при конветционални in vitro и други предклинични кардиозащитни изследвания [ виж изследването in vivo в Klein,Н. et al., Circulation 92:912-917 (1995); изследването за изолирано сърце в Scholz, W. et al., Cardiovascular Research 29:260-268 (1995);

изследването за аритмия в Yasutake М. et al., Am.J.Physiol., 36:H24302440 (1994); NMR изследването в Koike et al., J.Thorac.Cardiovasc. Surg. 112:765-775 (19996)]. Такива изследвания също осигуряват средства, чрез които съединението с формула I, или фармацевтично приемлива сол на споменатото съединение или на споменатото пролекарство могат да бъдат сравнени с активностите на други известни съединения. Резултатите от тези сравнения са полезни за определяне на нивото на дозата при млекопитаещи, включващи човека, за лечението на такива заболявания.

Измерване на инхибиторната активност на човешки NHE-1

Методологиите за измерване на активност на човешки NHE-1 и мощност на инхибитор се основават на тези, които са публикувани от Watson et al., Am.J.Physiol., 24:G229-G238; (1991), където възстановяването на вътреклетъчното pH, медиирано от NHE се измерва след вътреклетъчно подкисляване. Така, фибробласти стабилно експресиращи човешки NHE-1 (Counillon,L. et al., Mol.Pharmacol., 44:10411045 (1993) се поставят върху 96 ямкови блюда, покрити с колаген (50,000/ямка) и се култивират, за да се слеят в средата на растежа (DMEM с високо съдържание на глюкоза, 10% серум от телешки зародиш, 50 u/ml пеницилин и стрептомицин). Събраните блюда се инкубират в продължение на 30 минути при 37°С с pH чувствителната флуоресцентна проба BCECF (5 цгп; Молекулни проби, Eugene, OR). BCECF запълнени клетки се инкубират в продължение на 30 минути при 37°С в кисела зареждаща среда (70 тМ холин хлорид, 50 тМ NHCI₄, 5 тМ KCI, 1 тМ MgCI₂, 1.8 тМ СаС1₂, 5 тМ глюкоза, 10 тМ HEPES, pH 7.5) и след това се поставят във Флуоресцентно визуализиращо отчитащо устройство (Молекулярни устройства, СА). BCECF флуоресценция се контролира, използвайки възбуждане и емисия на вълна с дължини от

485 пМ и 525 пМ, респективно. Вътреклетъчното подкисляване се инициира чрез бързо заместване на киселата зареждаща среда с регенерационна среда (120 mM NaCI, 5 тМ KCI, 1 тМ MgCI₂, 1.8 тМ СаС1₂, 5 тМ глюкоза, 10 тМ HEPES, pH 7.5) ± изпитвано съединение и възстановяване на вътреклетъчното pH, медиирано чрез NME се контролира както следващото увеличаване на BCECF флуоресценция, зависещо от времето. Мощността на човешките NHE-1 инхибитори се изчислява като концентрацията, която понижава възстановяването на вътреклетъчно pH с 50% (1С₅₀). При тези условия контролни NHE инхибитори амилорид и НОЕ-642 имат 1С₅₀ стойности за човешки NHE-1 от 50 μΜ и 0.5 μΜ, респективно. Съединението с формула I показва 1С₅₀стойност 200 пМ при горното изследване.

Беше съобщено, че кратки периоди на миокардна исхемия последвани от коронарна артериална повторна перфузия защитава сърцето от последваща силна миокардна исхемия (Murry et al., Circulation 74:1124-1136, 1986). Явлението е известно като исхемична предпоставка.

Терапевтичните ефекти на съединенията от това изобретение при предпазване на сърдечната тъкан от увреждане вследствие на исхемичен инсулт могат да бъдат демонстрирани in vitro по продължение на линии, представени в Liu et al., (Cardiovasc. Res., 28: 1057-1061, 1994), така както се описва специално тук. Кардиозащита, както се определя чрез намаляване инфаркта на миокарда, може да бъде включена, използвайки агонисти на аденозин рецептор в изолирани, ретроградно перфузни сърца на зайци, както в образец in vitro предварително поставен в условия на миокардна исхемия (Liu et al., (Cardiovasc. Res., 28: 1057-1061, 1994). Изпитването in vitro, описано по-нататък, показва, че активно изпитвано съединение може също да въведе фармакологична кардиозащита, т.е., намаляване размера на инфаркт на миокарда, когато се прилага към изолирано сърце на заек. Ефектите на изпитваното съединение се сравняват с предварително поставяне в условие на исхемия и адозиновия агонист А1/АЗ, APNEA (N⁶-[2-(4аминофенил)етил]аденозин), който показва фармакологична индуцирана кардиозащита в изолираното сърце на заек (Liu et al., (Cardiovasc. Res., 28: 1057-1061, 1994). Точната методология се описва по-долу.

Протоколът, използван за тези опити, точно следва този, описан от Liu et al., (Cardiovasc. Res., 28: 1057-1061, 1994. Мъжки New Zealand Бели зайци (3-4 kg) се анестизират c натриев фенобарбитал (30 mg/kg, i.v.). След достигането на дълбока анестезия (определена посредством отсъствието на рефлекс на мигане) животното се интубира и се пречиства с 100% О₂, използвайки вентилатор със надатмосферно налягане. Провежда се левостранна торакотомия, сърцето се открива и примка (2-0 коприна) се поставя свободно около издуто разклонение на лявата коронарна артерия, приблизително 2/3 от разстоянието в посока на върха на сърцето. Сърцето се отстранява от гръдния кош и бързо (<30 sec) и се поставя на апаратура Langendorff. Сърцето се перфузира ретроградно по начин без циркулация с модифициран разтвор на Krebs (NaCI 118.5 mM, KCI 4.7 тМ, MgSO₄1.2 тМ, КН₂РО₄ 1.2 тМ, NaHCO₃ 24.8 тМ, СаС1₂ 2.5 тМ и глюкоза 10 тМ), при постоянно налягане от 80 mmHg и температура 37°С. pH на перфузата се поддържа при 7.4-7.5 чрез барбутиране с 95% О₂/5% СО₂. Температурата на сърцето херметично се контролира чрез използване на нагрети резервоари за физиологичния разтвор и вода, обвивайки около перфузионен твъбопровод и изолираното сърце. Наляганията на скоростта на сърцето и лява камера се определят чрез латексов балон, който е вкаран в лявата камера и се свързва чрез твъбопровод от неръждаема стомана до преобразувателя на налягане. Балонът вътре в лявата камера се надува, за да осигури систолично налягане от 80-100 mmHg и диастолично налягане от < 10 mmHg. Общият коронарен поток също непрекъснато се контролира, използвайки включена течна проба и се нормализира за теглото на сърцето.

Сърцето се оставя да се уравновеси в продължение на 30 минути, след което време сърцето трябва да покаже стабилни налягания на лявата камера в обсега на изложените по-горе параметрите. Ако темпото на сърцето падне под 180 bpm при всяко време преди 30 минути периода на местна исхемия, сърцето се поставя на скорост при около 200 bpm за останалото време на експеримента. Предварително поставяне в условие на исхемия се въвежда посредством общо прекъсване на сърдечната перфузия (глобална исхемия) в продължение на 6 минути, последвано от повторна перфузия в продължение на 10 минути. Местната исхемия се получава чрез стягане на примката около разклонението на коронарната артерия. След местната исхемия, продължаваща 300 минути, примката се отделя и сърцето повторно се перфузира допълнително в продължение на 120 минути.

Фармакологична кардиозащита се въвежда чрез инфузия на изпитваното съединение при предварително определени концентрации, започвайки 30 минути преди 30 минутната местна исхемия и продължавайки до края на периода на повторна перфузия от 120 минути. Сърца, които получават изпитвано съединение не понасят периода на предварително поставяне в условие на исхемия. Еталонното съединение, APNEA (500 пМ) се перфузира през сърцата (които не са получили изпитваното съединение) в продължение на период от 5 минути, който свършва 10 минути преди 30 минутната местна исхемия.

В края на периода на повторна перфузия от 120 минути, примката на коронарната артериа се затяга и 0.5% суспензия от флуоресцентни цинк кадмиево сулфатни частици (1-10 μΜ) Duke Scientific Corp. (Palo Alto, СА) се перфузира през сърцето; това оцветява целия миокард, освен тази област, подложена на риск от развитие на инфаркт (рискова област). Сърцето се отстранява от апаратурата на Langendorff, попива се, увива се в алуминиево фолио и се съхрянава за една нощ при -20°С. На следващия ден сърцето се разрязва на напречни разрези от 2 mm от горе до долу на камерите. Тези разрези се оцветяват с 1% трифенил тетразолиев хлорид (ТТС) във физиологичен разтвор, буфериран с фосфат в продължение на 20 минути при 37°С. Тъй като ТТС w взаимодейства с жива тъкан (съдържаща NAD-зависими дехидрогенази), това петно се отличава между живата (червено оцветена) тъкан и мъртвата тъкан (неоцветена, претърпяла инфаркт тъкан). Инфактната област (без цвят) и рисковата област (без флуоресцентни частици) се изчисляват за всеки разрез от лявата камера, използвайки предварително калибриран образен анализатор. За да се нормализира изхемичното поражение за разлики в рисковата област между сърца, данните се изразяват като съотношението на инфарктна област спрямо рискова област (%IA/AAR). Всички данни се изразяват като средна ±SE и статистически се сравняват, използвайки Mann-Whitney непараметрично изпитване с Bonferroni корекция за многократни сравнения. Значение се счита като р < 0.05.

Резултатите от горното in vitro изпитване могат да бъдат използвани, за да се демонстрира, че съединенията, съгласно изобретението въвеждат забележителна кардиозащита спрямо контролната група.

Прилагането на съединението с формула I, негово пролекарство или фармацевтично приемлива сол на споменатото съединение, или на споменатото пролекарство може да се осъществи посредством всеки метод, който предоставя съединението с формула I, негово пролекарство или фармацевтично приемлива сол на споменатото съединение, или на споменатото пролекарство, предпочитаемо към желаната тъкан (например, чернодробна и/или сърдечна тъкани). Тези методи включват орални начини, парентерални, интрадуоденални начини и др. Изобщо, съединението с формула I, негово пролекарство или фармацевтично приемлива сол на споменатото съединение, или на споменатото пролекарство се прилага в единични (например, въднъж дневно) или многократни дози чрез постоянна инфузия, например изотоничен физиологичен разтвор.

Съединението с формула I, негово пролекарство или фармацевтично приемлива сол на споменатото съединение, или на споменатото пролекарство е полезно, например, за намаляване или свеждане до минимум на увреждане, осъществено директно на определена тъкан, която може да се поддава на исхемично/реперфузно увреждане (например, сърдечна, мозъчна, белодробна, бъбречна, чернодробна, червна, мускулна, на ретина), например посредством медииране от NHE-1, като резултат от исхемично събитие (например инфаркт на миокарда). Активното съединение, следователно е полезно за профилактична употреба да предотвратяване (например, очаквано или профилактично), да притъпи или да стопира увреждане на тъканта (например, миокардна тъкан) при пациенти, които са рискови по отношение на исхемия (например, исхемия на миокарда).

Общо, съединението с формула I, негово пролекарство или фармацевтично приемлива сол на споменатото съединение, или на споменатото пролекарство, съгласно изобретението, се прилага орално, или парентерално (например, венозно, мускулно, подкожно, или в гръбначния стълб). Местно прилагане също може да бъде назначено, например, където пациентът страда от стомашночревни нарушения или когато лечението се прилага най-добре върху повърхността на тъкан или орган, определен от лекуващия лекар.

Количеството и съгласуване по време на прилаганото съединение с формула I, негово пролекарство или фармацевтично приемлива сол на споменатото съединение, или на споменатото пролекарство, разбира се ще зависи от лекувания пациент, от остротата на болката, от начина на прилагане и от преценката на лекуващия лекар. Тъй като от пациент до пациент има разлика, дадените по-долу дози са водещи и лекарят може да титрува дозите на лекарството, за да се постигне лечението, което лекарят счита, че е подходящо за пациента. При обсъждане на степента на желаното лечение, лекарят трябва да балансира разнообразни фактори, като възраст на пациента, наличие на предварително съществуващо заболяване, както и наличието на други заболявания (например, кардиоваскуларно заболяване).

Обикновено количество на съединението с формула I, негово пролекарство или фармацевтично приемлива сол на споменатото съединение, или на споменатото пролекарство се използва, което да е ефективно за исхемична защита. Предпочитана доза е около 0.01 до 100 mg/kg/ден от съединението с формула I, негово пролекарство или фармацевтично приемлива сол на споменатото съединение, или на споменатото пролекарство, съгласно това изобретение. Особено предпочитана доза е около 0.01 до 50 mg/kg/ден от съединението с формула I, негово пролекарство или фармацевтично приемлива сол на споменатото съединение, или на споменатото пролекарство, съгласно това изобретение.

При един начин на прилагане на съединението с формула I, негово пролекарство или фармацевтично приемлива сол на споменатото съединение, или на споменатото пролекарство, може да бъде приложено точно преди сърдечна операция (например, в рамките на двадесет и четири часа преди операция), по време на или след сърдечна операция (например, в рамките на двадесет и четири часа след операция), където има риск от миокардна исхемия. При един специално предпочитан начин се прилага инфузия с натоварваща доза от около 1 mg до около 300 mg в продължение на около една минута до около един час преди операция, последвано от постоянна инфузия на около 1 mg/kg/ден до около 100 mg/kg/ден за оставащите предоператитивен, оперативен и пост f оперативен периоди, включващо, например около 2 до 7 дена след оперативно лечение. Съединението от това изобретение може също да бъде прилагано постоянно ежедневно.

Съединението с формула I, негово пролекарство или фармацевтично приемлива сол на споменатото съединение, или на споменатото пролекарство обичайно се прилага във формата на фармацевтичен състав, съдържащ съединението с формула I, негово пролекарство или фармацевтично приемлива сол на споменатото съединение, или на споменатото пролекарство заедно с фармацевтично приемлив ексципиент, носител или разредител. Така, съединението с формула I, негово пролекарство или фармацевтично приемлива сол на споменатото съединение, или на споменатото пролекарство могат да бъдат прилагани в каквато и да е конвеционална орална, парентерална, ректална или трансдермална дозирана форма.

За орално прилагане фармацевтичен състав може да бъде във формана на суспензии, таблети, хапчета, капсули, прахове и подобните. Таблетите, съдържащи различни ексципиенти, като натриев цитрат, калциев карбонат и калциев фосфат се използват заедно с различни дезинтегранти, като нишесте, за предпочитане картофено нишесте или тапиока и някои комплексни силикати, заедно със свързващи вещества, като поливинилпиролидон, сукроза, желатина и акация. Допълнително, смазващи вещества, като магнезиев стеарат, натриев лаурил сулфат и талк са много полезни за целите на таблетиране. Твърди състави от подобен вид също често се използват като пълнители в меки и плътно напълнени желатинови капсули; предпочитани материали в тази връзка също включват лактоза или млечна захар, също както и полиетилен гликоли с високо молекулно тегло. Когато се желаят водни суспензии и/или елексири за орално прилагане, съединенията от това изобретение могат да бъдат комбинирани с различни подслаждащи вещества, ароматизиращи вещества, оцветяващи вещества, емулгиращи вещества и/или суспендиращи вещества, също както такива разрезители като вода, етанол, пропилен гликол, глицерин и различни техни подобни комбинации.

За целите на парентерално прилагане, разтвори, например в сусамено или фастъчено масло или във воден пропиленов гликол, могат да бъдат използвани, също както стерилни водни разтвори на съответстващите водоразтворими соли. Такива водни разтвори могат подходящо да бъдат буферирани, ако е необходимо и течният разредител първо е изотоничен с достатъчно физиолигичен разтвор или глюкоза. Тези водни разтвори са особено подходящи за венозни, мускулни, подкожни и перитонеални инжекции. В тази връзка, използваните стерилни водни среди се получават лесно чрез стандартни методи, добре известни на специалистите в областта на науката.

За целите на трансдермално (например, местно) прилагане, разредени стерилни, водни или частично водни разтвори (обикновено около 0.1% до 5% концентрация) в друго отношение подобни на горните парентерални разтвори, се получават.

Методи за получаване на различни фармацевтични състави с определено количество активен ингредиент са известни, или ще бъдат очевидни в светлината на описанието на специалистите в областта на науката. Примери на методи за получаване на фармацевтични състави са дадени в Remingtons Pharmaceutical Science, Mack Publishing Company, Easter, Pa., 15th Edition (1975).

Фармацевтични състави, съгласно изобретението, могат да съдържат, например 0.0001 %-95% от съединението с формула I, негово пролекарство или фармацевтично приемлива сол на споменатото съединение, или на споменатото пролекарство. При всяко събитие, съединението или рецептурата, които ще се прилагат, ще съдържат ефективно количество за лечение на заболяването/състоянието на пациента, който се лекува.

Съединението с формула I, негово пролекарство или фармацевтично приемлива сол на споменатото съединение, или на споменатото пролекарство ще бъде прилагано в конвенционална рецептура. Следващите примери на рецептури са само илюстративни и не ограничават обхвата на настоящото изобретение.

В рецептурите, които следват активен ингредиент означава съединението с формула I, негово пролекарство или фармацевтично приемлива сол на споменатото съединение, или на споменатото пролекарство.

Рецептура 1: Желатинови капсули

Капсули от твърд желатин се проготвят, използвайки следното:

Ингредиент	Количество (mg/капсула)
Активен ингредиент Нишесте, NF Нишестен обтекаем прах Силиконова течност 350 сантистокс	0.25-100 0-650 0-50 0-15

Таблетна формулировка се приготвя, използвайки ингредиентите по-долу:

Рецептура 2: Таблети

Ингредиент	Количество (mg/таблетка)
Активен ингредиент Целулоза, микрокристална Силиконов диоксид, опушен Стеаринова киселина	0.25-100 200-650 10-650 5-15

Компонентите се смесват и пресоват, за да се образуват таблети.

Алтернативно, таблети, всяка от която съдържа 0.25-100 mg от активните ингредиенти, се получават както следва:

Рецептура 3: Таблети

Ингредиент Количество (mg/таблетка)
Активен ингредиент	0.25-100
Нишесте	46
Целулоза, микрокристална	35
Поливинилпиролидон (10% разтвор във вода	4
Натриева карбоксиметил целулоза	4.5
Магнезиев стеарат	0.5
Талк	1

Активният ингредиент, нишестето и целулозата се прекарват през U.S. сито с отвори № 45 и се смесват напълно. Разтворът на поливинилпиролидон се смесва с получените прахове, който след това се прекарва през U.S. сито с отвори № 14. Така получените гранули се изсушават при 50°С- 60°С и се прекарват през U.S. сито с отвори № 18. Натриев карбоксиметил нишесте, магнезиеви стеарат и талк, предварително преминали през U.S. сито с отвори № 60, се добавят след това към гранулите, които след смесване, се пресоват на машина за таблетиране като се получават таблетите.

Суспензии всяка съдържаща 0.25-100 mg от активния ингредиент 5 ml за доза се приготвят както следва:

Рецептура 4: Суспензии

Ингредиент

Количество (mg/5 mL)

Активен ингредиент 0.25-100 mg

Натриева карбоксиметил целулоза50 mg

Сироп 1.25 mg

Разтвор на бензоена киселина 0.10 mL

Ароматизаторq.v.

Оцветителq.v.

Пречистена вода до5 mL

Активният ингредиент се прекарва през през U.S. сито с отвори № 18 и се смесва с натриево карбоксиметил целулозата и сиропа, за да се образува гладка паста. Разтворът на бензоената киселина, ароматизаторът и оцветителят се разреждат с малко вода и се добавят при разбъркване. След това се добавя достатъчно вода, за да се получи искания обем. Аерозолен разтвор се приготвя, съдържащ следните ингредиенти:

Рецептура 5: Аерозол

Ингредиент	Количество(% от теглото)
Активен ингредиент	0.25
Етанол	25.75
Пропелент 22 (хлородифлуорометан)	74.00

Активният ингредиент се смесва с етанол и сместа се прибавя към част от пропелента 22, охлажда се до 30°С и се пренася към пълнещо устройство. Исканото количество след това се захранва към контейнер от неръждаема стомана и се разрежда с оставащия пропелент. Клапанните устройства след това се закрепват към контейнера.

Супозитории се приготвят както следва:

Рецептура 6: Супозитории

Ингредиент Количество (mg/супозитория)

Активен ингредиент 250

Глицериди на наситена мастна киселина 2,000

Активният ингредиент се прекарва през U.S. сито с отвори № 60 и се суспендира в глицериди на наситена мастна киселина предварително стопени, използвайки минимално необходимо нагряване. Сместа след това се излива в матрица за супозитория с номинален капацитет 2 g и се оставя да се охлади.

Рецептура за интравенозно прилагане се приготвя както следва: Рецептура 7: Интравенозен разтвор

Ингредиент	Количество
Активен ингредиент	25 mg
Изотоничен физиологичен разтвор	1.000 mL
Разтворът от горвите ингредиенти	се прилага интравенозно към

пациент.

ОБЩИ ЕКСПЕРИМЕНТАЛНИ ПРОЦЕДУРИ

300 и 400 MHz ¹NMR спектри се записват на Varian Unity* 300 или 400 спектрометър (Varian Co.,Palo Alto, СА), съоръжен с два RF канала, индиректно откриване и градиенти на пулсирана зона (само по Z-oc). Спектрите общо се постигат при температура близка до стайна температура (21 °C) и стандартни начини на автотоматичен осигурител и автоматична уплътнителна подложка се използват за образци, регулирани с помоща на подложка. Химически измествания се изразяват в части за милион понижено поле от триметилсилан. Пиковите конфикурации се отбелязват както следва: s, синглет; d, дублет; t, триплет; q, квартет; т, мултиплет; bs, широк синглет. Резонанси, обозначени като разменяеми, не се появяват в отделен NMR експеримент, където пробата се разклаща с няколко капки D₂O в същия разтворител. Химически йонизационни мас спектри под атмосферно налягане се получават на Fisons Platform II или Micromass ZMD спектрометър (Micromassq Manchester, U.K.). Където се описва интензитета на хлор или бром-съдържащи йони, очакваното съотношение на интензитета се наблюдава (приблизително 3:1 за ³⁵CI/³⁷CI -съдържащи йони и 1:1 за ⁷⁹Вг/⁸¹Вг-съдържащи йони) и М се основава на ³⁵С1 и ⁷⁹Вг. В някои случаи само характерни ¹Н NMR и APCIMS пикове се дават.

Колонна хроматография се провежда или с Baker Silica Gel (40 μίτι) (J.T.Baker, Phillipsburg, N.J.) или силикагел 60 (EM Science, Gibbstown, N.J.) в стъклени колони или в Flash 12, 40 или 75 (Biotage) (Charlottesville, VA) колони под ниско азотно налягане. Радиална хроматограхия се провежда, използвайки Chromatotron, (Harrison Research, Palo Alto, СА). Освен ако не е указано друго, реагенти се използват така както са получени от търговски източници. Диметилформамид, 2-пропанол, метанол, диметилсулфоксид, 1,2-дихлороетан, тетрахидрофуран, толуен, дихлорометан и други реакционни разтворители са безводни марки, доставени от Aldrich Chemical Company (Milwwaukee, Wisconsin). Микроанализи се извършват от Schwarzkopf Microanalitical Laboratory; Woodside, NY. Термините концентриран in vacuo и отстранен in vacuo се отнасят до отстраняване на разтворител при намалено налягане на ротационен изпарител с температура на на баня по-ниска от 90°С. Реакции, проведени при 0-20°С или 0-25°С се провеждат с първоначално охлаждане на съда в изолирана ледена баня, се оставят да се затоплят до стайна температура в продължение на няколко часа. Съкращението min и h сепоставя за минути и часове, респективно.

ПРИМЕРИ ЗА ИЗПЪЛНЕНИЕ НА ИЗОБРЕТЕНИЕТО

ПРИМЕР 1

5-амино-2-хинолон хидрохлорид

Разтвор на 5-нитро-2-хинолон (12.37 g,65 mmol) (приготвен така както се описва в Capps.J.D., Hamilton,C.S. J.Am.Chem.Soc. 1938, 60, 2104) в EtOH (176 mL) под азотна атмосфера се нагрява с SnCl2‘2H₂O (73.4 g, 325 mmol). Хетерогенната реакционна смес се оставя да се разбъква при 23°С в продължение на 2 часа и се нагрява на обратен хладник в продължение на 2 часа. Получената хетерогенна смес се охлажда до 23°С и се филтрира. Твърдият материал се разпрашава в солна киселина (1 М воден разтвор, 78 mL, 78 mmol) под обратен хладник в продължение на 1 час, охлажда се до 23°С и се филтрира до получаване на 10.08 g от желания продукт (78% добив).

¹Н NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 6.42 (d,J=10, 1 Η), 6.71 (d, J=7.6,1H),

6.81 (d,J=8,1H), 7.27 (d,J=8,1H), 8.04 (d,J=10,1H), 11.71 (bs,1H).

APCIMS 161[M+1]‘

ПРИМЕР 2

5-ХИДРОЗИНО-2-ХИНОЛОН хидрохлорид

Разтвор на 5-амино-2-хинолон хидрохлорид (10.08 д, 51.2 mmol) в солна киселина (концентрирана, 42.7 mL) и Н₂О (18.2 mL) при 0°С се обработва на капки с разтвор на NaNO₃ (3.53 д, 51.2 mmol) в Н₂О (26.4 mL) при поддържане на температурата под 5°С. Получената червена суспензия се оставя да се разбърка при 0°С в продължение на 1 час.

В отделна тригърлена облодънна колба, съоръжена с механическа бъркалка, утайка от SnCI₂*2H₂O (25.41 g, 112.6 mmol) в солна киселина (концентрирана, 34.2 mL) и Н₂О (93.9 mL) се охлажда до 0°С. Суспензията се обработва на капки със суспенцията на червена диазониева сол, получена по-горе, докато температурата се поддържа под 5°С. Реакционната смес се затопля до 23°С и се оставя да се разбърква в продължение на 3 часа. Получената суспензия се филтрира. Събраното твърдо вещество се разпрашава със солна киселина (1 М воден разтвор,

61.4 mL, 61.4 mmol) при 23°С в продължение на 30 минути. Твърдото вещество се събира чрез филтриране като се получава 7.88 g от желания продукт (73% добив).

¹Н NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 6.43 (d,J=10, 1H), 6.63 (d, J=8,1H), 6.88 (d,J=8,1H), 7.38 (t,J=8,1H), 7.98 (d,J=10,1H), 8.97 (bs,1H), 10.40 (bs,1H), 11.77 (bs,1H),

APCIMS 176[M+1]‘

ПРИМЕР 3

Метил 5-циклопропил-1 -(2-хинолон-5-ил)-1 Н-пиразол-4-карбоксилат

Разтвор на метил 3-циклопропил-2-(диметиламинометилен)-3оксопропаноат (7.85 д, 39.8 mmol) в EtOH (257 mL) се обработва под азотна атмосфера с триетиламин (7.77 mL, 55.8 mmol), последвано от 5хидразино-2-хинолон хидрохлорид (7.88 mL, 37.2 mmol). Получената хетерогенна реакционна смес се нагрява под обратен хладник в продължение на 4 часа и се охлажда до 23°С. Бледо жълто твърдо вещество се утаява и се събира чрез филтриране като се получава 5.06 g от желания продукт (44% добив).

¹Н NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ 0.59-0.73 (m, 4H), 1.87 (m, 1H), 3.79 (s,1H), 6.54 (d,J=10,1H), 7.17 (d,J=10,1H), 7.34 (d,J=7.5,1H), 7.49 (d,J=10,1H), 7.66 (t,J=8,1 H), 8.08 (s, 1H), 12.10 (bs, 1H).

APCIMS310[M+1]‘

ПРИМЕР 4

5-циклопропил-1 -(2-хинолон-5-ил)-1 Н-пиразол-4-карбоксилна киселина

Утайка на 5-циклопропил-1-(2-хинолон-5-ил)-1Н-пиразол-4карбоксилат (5.06 д, 16.4 mmol) в THF (81.8 mL) и МеОН (40.9 mL) се обработва с LiOH (1М воден разтвор, 81.8 mL, 81.8 mmol) и се нагрява под обратен хладник в продължение на 2.5 часа. Получената хетерогенна смес се охлажда до 23°С. МеОН и THF се отстраняват in vacuo. Получената утайка се охлажда до 0°С и се подкислява до pH 3-4, използвайки солна киселина (концентрирана). Сместа се филтрира. Твърдото вещество се изсушава като се получава 4.94 g от желания продукт (100 % добив).

¹Н NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 0.58 (d,J=4.4 ,1H), 0.64 (d,J=8, 2H),

1.82 (m,1H), 6.50 (d,J=10, 1H), 7.12 (d,J=10, 1H), 7.27 (d,J=7.5,1H), 7.44 (d,J=8.4, 1H), 7.60 (t, J=8, 1H), 7.97 (s, 1H), 12.03 (bs, 1H), 12.38 (bs, 1H).

APCIMS 296[M+1]‘

ПРИМЕР 5 [5-циклопропил-1-(2-хинолон-5-ил)-1Н-пиразол-4-карбонил1гуанидин хидрохлорид

Смес на 5-циклопропил-1-(2-хинолон-5-ил)-1Н-пиразол-4карбоксилна киселина в (13.27 д, 45.0 mmol) в SOCI₂ (60 mL) се нагрява под обратен хладник в продължение на 1 час. Излишният SOCI₂ се отстранява in vacuo. Остатъкът се обработва със сух толуен и се концентрира in vacuo. Разтвор на твърдия остатък в THF (50 mL) се обработва с разтвор на гуанидин хидрохлорид (15.47 д, 162 mmol) в w натриева основа (2 М воден разтвор, 162 mL, 324 mmol) под азотна атмосфера. Получената смес се разбърква при 23°С в продължение на 2 часа. След това реакционната смес се концентрира in vacuo, за да се отстрани THF. Водният слой се охлажда до 0°С и се подкислява до pH 9. Бледо жълто твърдо вещество се утаява, за да се получи 11.41 g от свободната база на желаното съединение. Разтвор на твърдото вещество в МеОН (700 mL) се обработва с HCI ( 1М в етер, 84.9 mL, 84.9 mmol). Обемът на разтвора се намалява in vacuo. Полученият бледо кафяв преципитат се охлажда, за да се получи 8.49 g (51 % добив). (Допълнителен продукт като свободната база може да бъде получен чрез екстракция на водния слой, използвайки EtOAc-THF (1:1).

¹Н NMR (400 MHz, DMSO-de) δ 0.51 (m ,2H), 0.70 (dd,J=2,8.4 2H), 1.92 (m,1H), 6.53 (dd,J=1.6,10 1H), 7.17 (d,J=10, 1H), 7.32 (d,J=7, 1H), 7.48 (d,J=8.4, 1H), 7.64 (t, J=8.2, 1H), 8.34 (bs, 2H), 8.60 (bs, 3H), 11.64 (s, 1H),

12.10 (s, 1H).

APCIMS 337[M+1]*

ПРИМЕР 6

Установяване на [5-циклопропил-1-(2-хинолон-5-ил)-1Н-пиразол-4карбонил1гуанидин в проби на човешка плазма чрез течна хроматография (L/Q/мас спектроскопия (MS)/MS и LC/NMR

Хора се дозират интравенозно с монохидрат на 5-циклопропил-1(хинолин-5-ил)-1 Н-пиразол-4-карбонил]гуанидин мотохидрохлорид. Проби на човешка плазма се обединяват заедно и протеини се утаяват до два пъти на ацетонитрил. След центруфугиране, супернатантът се концентрира във водна баня с N₂ при 40°С. Аликвотна част (100 μΙ_ или 50 μΙ_) от концентрираната проба се инжектира в LC/MS/MS уред, съоръжен с Zorbax Rx-C8 4.6 х 150 mm колона, анализира се на РЕ Sciex API 2000 или Finnigan LCQ мас спектрометър и се контролират чрез UV детектор при 254 nm. Елуентът от колоната се разделя, така че 5% от елуента се отклонява към мас спектрометъра, а остатъкът преминава към UV детектор. Анализът се провежда, използвайки скорост на подвижен фазов поток от 1 ml/минута, където подвижната фаза се състои от 5 тМ амониев формат (pH 3.0) като разтворител А и ацетонитрил като разтворител В. Градиентът включва 5/95 до 40/60 от В/А за период над 20 минути след първоначално задържане в продължение на 3 минути. При тези LC условия се открива метаболит при време на задържане 11.8 минути ([5-циклопропил-1 -(хинолин-5-ил)-1 Н-пиразол-4карбонил]гуанидин се открива при 13.7 минути). 16 масови единици разлика между 5-циклопропил-1-(хинолин-5-ил)-1Н-пиразол-4карбонил]гуанидин (m/z 321) и метаболит (m/z 337) в човешка плазма предполага, че тя се получава вследствие на окисляване. LC/MS/MS йонен спектър на протониран метаболит при m/z 337 ([М+Н]*) показва фрагментни йони при m/z 278, 260, 250, 236, 223 и 208.

Солите се отстраняват от горната концентрирана проба чрез ектракция на твърдата фаза. Пробата се концентрира да съдържа приблизително 5-10 pg от метаболита. 50 μΙ_ от тази проба се инжектира в LC/NMR уред, съаръжен с Zorbax Rx-C8 4.6 х 150 mm колона, атализира се на Bruker 500 MHz NMR спетрометър и се контролира чрез UV детектор при 235 nm. Анализът се провежда, използвайки скорост на подвижен фазов поток от 1 ml/минута, където подвижната фаза се състои от 15 тМ деутерирана водна мравчена киселина, регулирана до pH 3.3 с деутириран амониев хидроксид в D₂O като разтворител С и ацетонитрилd₃ като разтворител D. Градиентът включва 5/95 до 20/80 на D/С за период над 17 минути след първоначално задържане в продължение на 3 минути. Желаният метаболит се улавя в NMR пробата, използвайки метод за спиране на потока върху пика при 13-.6 минути. Протон NMR спектри и COSY спектри на човешкия метаболит съдържат два дублета (6.64 и 7.41 ppm), които се съединяват един друг, но не към някои други пикове. Липсата на пик на ниско ниво при 8.92 ppm, който присъства в [5циклопропил-1 -(хинол ин-5-ил )-1 Н-пиразол-4-карбонил]гуанидин предполага, че 2-позицията на пръстена на хинолина е мястото на окисление. Въз основа на тези данни структурата на метаболита се определя като [5-циклопропил-1-(хинолон-5-ил)-1Н-пиразол-4карбонил]гуанидин. Сравнение на спектъра ¹Н LC/NMR на метаболита към този на синтетичен еталон на [5-циклопропил-1-(хинолон-5-ил)-1Нпиразол-4-карбонил]гуанидин хидрохлорид, получен както се описва в Пример 5, потвърждава структурното определение.

Claims

ПАТЕНТНИ ПРЕТЕНЦИИ %

1. Съединение с формула негово пролекарство или фармацевтично приемлива сол на споменатото съединение или на споменатото пролекарство при условието, че [5-циклопропил-1-(хинолин-5-ил)-1Н-пиразол-4карбонил]гуанидин не е включен
2. [5-циклопропил-1 -(хинолон-5-ил)-1 Н-пиразол-4 карбонил]гуанидин или негова фармацевтично приемлива сол.
3. Използване на съединение, съгласно претенция 1 за получаване на фармацевтични състави за намаляване на тъканни увреждания, причинени от исхемия или хипоксия, включващо прилагане към млекопитаещо, при необходимост от такова лечение, на терапевтично ефективно количество от съединение, съгласно претенция 1, негово пролекарство или фармацевтично приемлива сол на споменатото съединение или на споменатото пролекарство..
4. Използване на съединение, съгласно претенция 3, където тъканта е на сърце, мозък, черен дроб, бъбреци, бели дробове, хранопровод, мускули, далак, панкреас, гръбначен стълб, ретина, васкуларната или чревната тъкан.
5. Използване, съгласно претенция 3, където количеството на съединението, съгласно претенция 1, негово пролекарство или фармацевтично приеемлива сол на споменатото съединение или на споменатото пролекарство е около 0.01 mg/kg/ден до около 50 mg/kg/ден.
6. Използване, съгласно претенция 5, където млекопитаещото е жена или мъж.
7. Използване, съгласно претенция 6, където споменатата тъкан е сърдечна тъкан .
8. Използване, съгласно претенция 6, където тъканта е мозъчна тъкан
9. Използване, съгласно претенция 6, където споменатата тъкан е чернодробна тъкан
10. Използване, съгласно претенция 6, където споменатата тъкан е бъбречна тъкан.
11. Използване, съгласно претенция 6, където споменатата тъкан е белодробна тъкан.
12. Използване, съгласно претенция 6, където споменатата тъкан е тъкан на хранопровод.
13. Използване, съгласно претенция 6, където споменатата тъкан е мускулна тъкан.
14. Използване, съгласно претенция 6, където споменатата тъкан е тъкан на дълак.
15. Използване, съгласно претенция 6, където споменатата тъкан е тъкан на панкреас.
16. Използване, съгласно претенция 6, където споменатата тъкан е тъкан на ретина.
17. Използване, съгласно претенция 6, където съединението се прилага профилактично.
18. Използване, съгласно претенция 6, където съединението се прилага преди операция.
19. Използване, съгласно претенция 6, където съединението се прилага преди сърдечна операция.
20. Използване, съгласно претенция 6, където съединението се прилага по време на операция.
21. Използване, съгласно претенция 6, където съединението се прилага по време на сърдечна операция.
22. Използване, съгласно претенция 6, където съединението се прилага двадесет и четири часа след операция.
23. Използване, съгласно претенция 6, където съединението се прилага двадесет и четири часа след сърдечна операция.
24. Използване, съгласно претенция 6, където увреждането на тъканта, причинено от исхемия е исхемично увреждане и настъпва по време на трансплантация на орган.
25. Използване, съгласно претенция 6, където съединението се прилага, за да предотврати периоперативна миокардно исхемично увреждане.
26. Фармацевтичен състав, характеризиращ се с това, че съдържа количество от съединението, съгласно претенция 1, негово пролекарство или фармацевтично приемлива сол на споменатото съединение или на споменатото пролекарство и фармацевтично приемлив носител, ексципиент, или разредител.
27. Фармацевтичен състав за намаляването на тъканни увреждания, причинени от исхемия или хипоксия, характеризиращ се с това, че съдържа терапевтично ефективно количество от съединението, съгласно претенция 1, негово пролекарство или фармацевтично приемлива сол на споменатото съединение или на споменатото пролекарство и фармацевтично приемлив носител, ексципиент, или разредител.
28. Използване, съгласно претенция 6, където съединението се прилага Сг преди, по време на или след операция.
29. Използване, съгласно претенция 6, където съединението се прилага преди, по време на или след сърдечна операция.
30. Метод за получаване [5-циклопропил-1-(2-хинолон-5-ил)-1Н- пиразол-4-карбонил]гуанидин характеризиращ се с това, че се прилага [5циклопропил-1 -(хинолин-5-ил)-1 Н-пиразол-4-карбонил]гуанидин към човек.
31. Доказано чист [5-циклопропил-1-(2-хинолон-5-ил)-1Н-пиразол-4карбонил]гуанидин, или фармацевтично приемлива сол на споменатото съединение.