BG106460A - Използване на доцетаксел за лечение на хепатоцелуларен карцином - Google Patents
Използване на доцетаксел за лечение на хепатоцелуларен карцином Download PDFInfo
- Publication number
- BG106460A BG106460A BG06460A BG10646002A BG106460A BG 106460 A BG106460 A BG 106460A BG 06460 A BG06460 A BG 06460A BG 10646002 A BG10646002 A BG 10646002A BG 106460 A BG106460 A BG 106460A
- Authority
- BG
- Bulgaria
- Prior art keywords
- docetaxel
- cells
- hours
- paclitaxel
- treatment
- Prior art date
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
- A61K31/337—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having four-membered rings, e.g. taxol
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Epoxy Compounds (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Steroid Compounds (AREA)
Abstract
Изобретението се отнася до използване на доцетаксел или на негов хидрат при получаването на лекарствено средство за лечение на хепатоцелуларен карцином.
Description
ИЗПОЛЗУВАНЕ НА ДОЦЕТАКСЕЛ ЗА ЛЕЧЕНИЕ НА ХЕПАТОЦЕЛУЛАРЕН КАРЦИНОМ
ОБЛАСТ НА ТЕХНИКАТА
Това изобретение се отнася до лечение на хепатоцелуларен карцином.
ПРЕДШЕСТВУВАЩО СЪСТОЯНИЕ НА ТЕХНИКАТА
Хепатоцелуларният карцином (НСС) е един от най-общите ракови заболявания в страните от Южна Азия и Африка. В Тайван, НСС е главната причина за смъртност при пациенти от мъжки пол с раково заболяване. Степента на преживяемост от НСС е много ниска. Това се дължи главно на липсата на ефективни лечения. Лъчевото лечение и химиотерапията не са доказали, че са задоволителни; хирургията е най-ефективното лечение за НСС. Обаче, хирургията е подходяща само за пациенти с малки тумори, податливи на резекция.
В последно време, антимитотични лекарства, такива като паклитаксел, се оказаха с подновен интерес. Паклитаксел беше изолиран по оригинален начин от кората на тисовото дърво.
Антитуморният ефект на паклитаксел е известен от 1971 година. Паклитакселът инхибира деленето на туморните клетки, като действува на микротубуларната система. Анализите in vitro, използуващи туморни клетки, разкриха, че паклитакселът задържа клетките главно във G2/M фазата от клетъчния цикъл (Schiff РВ and Horwitz SB, Proc. Natl. Acad. Sci 77, 1561 - 1565, 1980). Нови изследвания показват, че паклитакселът е ефективен срещу различни злокачествени туморни клетки, такива като мозъчни тумори, рак на стомаха и рак на простатата, рак на ©гърдата, меланома и рак на яйчниците.
Обаче, паклитаксел не е ефективен срещу хепатоцелуларен карцином. За фаза II на клинични изследвания на паклитаксел за НСС пациенти се докладва в Britiah Journal of Cancer, 78 (1), 34-39, 1998. Този раздел заключава, че паклитаксел няма значителен противо-раков ефект при пациенти с НСС.
Както е обяснено по-горе, за цитотоксичния ефект на паклитаксел е установено, че зависи от клетъчния цикъл, като задържането на клетъчния цикъл се появява главно във G2/M фазата. Обаче, понастоящем се установи, че доцетаксел може ♦ да упражни цитотоксичност в НСС клетки, не-зависеща от клетъчния цикъл. Това показва, че цитотоксичният ефект върху НСС клетки се постига посредством механизъм, различен от този на паклитаксел. Освен това, активността in vitro на доцетаксел срещу НСС клетки е значително по-висока от тази на паклитаксел при концентрации от порядъка на до 1 μΜ. Имайки предвид високата цитотоксична природа на таксоиди, повишена активност при ниска концентрация подсказва, че доцетаксел, за разлика от паклитаксел, трябва да има практическо приложение при клинично лечение на хепатоцелуларен карцином.
ТЕХНИЧЕСКА СЪЩНОСТ НА ИЗОБРЕТЕНИЕТО
Имайки предвид всичко това, настоящето изобретение предоставя използуването на доцетаксел, или на негов хидрат, при получаването на лекарствено средство за използуване при лечението на хепатоцелуларен карцином.
Също така предоставя метод за лечение на пациенти, страдащи от хепатоцелуларен карцином, който метод се състои в приложение върху посочените пациенти на ефективно количество от доцетаксел, или на негов хидрат. Изобретението също така предоставя метод за подобряване състоянието на пациенти, страдащи от хепатоцелуларен карцином, който метод се състои в приложение върху посочените пациенти на ефективно количество от доцетаксел, или на негов хидрат.
Доцетакселът е известно съединение. Той има формулата
Методи за получаването на доцетаксел са описани в ЕР-А-253738 и ЕР-А-336841.
Доцетаксел може да се използува, например, в безводна форма, или под формата на хидрат. Така, както се използуват тук, референциите за доцетаксел включват референциите за неговите хидрати.
Хидрати на доцетаксел могат да се получат чрез разтваряне на безводен доцетаксел в органичен разтворител, такъв като ацетон, етанол, ацетонитрил, или Ν,Ν-диметилформамид, и чрез прекристализиране на доцетаксел хидрат, като така полученият разтвор се излива във вода. Доцетаксел хидрат е характерно дихидрат, трихидрат, или тетрахидрат. По-специално, за трихидрата е установено, че е особено стабилен, и поради това доцетаксел трихидрата е предпочитан. Доцетаксел трихидрат може да се получи посредством метода, описан в ©ЕР-А-770070.
Доцетаксел е неочаквано активен срещу хепатоцелуларни карциноми. По-специално, той може да се използува за лечение на чернодробни карциномни клетки, фиброламелозни разновидности, и смесени хепатоцелуларни холангиокарциноми.
Съгласно настоящето изобретение, доцетаксел може да се прилага чрез който и да е конвенционален начин за приложение на доцетаксел. Така, например, той може да се прилага парентерално. Характерно, той се прилага интравенозно, за предпочитане чрез интравенозно инфузиране.
Съгласно настоящето изобретение, характерно за лекарствена форма на доцетаксел за приложение, е, че се приготвя като фармацевтично приемлив състав, съдържащ доцетаксел и фармацевтично приемлив носител, или разредител. Подходящите носители и разредители включват среди от не-токсични разтворители и суспензии, например, стерилна водна среда. За предпочитане, съставите са под формата на водни разтвори или суспензии, например, разтвори подходящи за инжектиране, или за Инфузиране, които могат да съдържат емулгиращи средства, оцветители, консерванти, или стабилизатори.
Фармацевтичните състави, подходящи за парентерално приложение включват стерилни водни, или не-водни разтвори, или суспензии. Подходящите не-водни разтвори и суспензии включват разтвори в природни растителни масла, такива като маслинено масло, сусамово масло, или нефт, или в инжектируеми органични естери, такива като етил олеат. Подходящите стерилни водни разтвори включват разтвори на доцетаксел във вода. Характерно, pH на стерилни водни разтвори, подходящи за парентерално приложение, се регулира по подходящ начин. Освен това, такива стерилни водни разтвори обикновенно се правят изотонични с достатъчно количество натриев хлорид, или глюкоза. Особено предпочитано е, разтвори, подходящи за приложение чрез инфузиране да имат pH подобно на това на кръвта, и се правят изотонични.
Стерилизирането може да се осъществи чрез нагряване, или чрез други начини, които не влияят неблагоприятно върху състава.
Фармацевтичните състави, съдържащи доцетаксел, подходящи за използуване съгласно настоящето изобретение, могат, също така, да съдържат повърхностно активно вещество. Предпочитани повърхностно активни вещества са полисорбати, полиоксиетилен гликолови естери, и естер-етери на полиетилен гликол и рицинови масла. Примери за подходящи повърхностно активни вещества и за фармацевтични състави, съдържащи повърхностно активни вещества, могат да се намерят в AU-A-666859.
Доцетаксел може също така да се приготвя като лекарствена форма за използуване съгласно настоящето изобретение, като лиофилизйран състав. Такива лиофилизирани състави имат добра физична и химична стабилност, и поради това могат да се съхраняват на склад в продължение на продължителни периоди от време. Лиофилизирани състави, съдържащи доцетаксел могат да се получат чрез лиофилизиране на воден разтвор на доцетаксел чрез стандартни техники. Те могат, освен това, да съдържат увеличаващи обема средства, такива като лактоза. Те могат, също така, да съдържат средства, редуциращи тоничността, такива като захари и полимери. Примери за подходящи средства, редуциращи тоничността, включват • глюкоза, декстроза и манитол и полимери, например, поливинилпиролидон.
Лиофилизпраният състав може да се разтвори отново, когато ще се използува, в която и да е съвместима, и фармацевтично приемлива инжекционна среда. Лиофилизатът може много благоприятно да се разтвори в двойно дестилирана вода за инжекции, в обем, еквивалентен на началния обем на разтвора, който е лиофилизиран.
Фармацевтичен състав, съдържащ доцетаксел, подходящ за използуване съгласно настоящето изобретение, характерно ф съдържа най-малко 0,01 % тегловно терапевтично активен продукт. Обикновенно, фармацевтичният състав съдържа от 0,01 до 1000 mg, за предпочитане от 0,1 до 500 mg, терапевтично активен продукт.
За предпочитане, разтвор, подходящ за интравенозно инжектиране съдържа от 38 до 42, по-предпочитано приблизително 40 mg/ml активен продукт. Характерно, такива разтвори се предоставят в ампули, съдържащи 20 mg, или 80 mg терапевтично активен продукт.
За предпочитане, разтвор, подходящ за инфузиране съдържа от 0,1 до 11, за предпочитане от 0,1 до 10, по-предпочитано от 0,3 до 0,9 mg/ml активен продукт.
Терапевтичното третиране с доцетаксел съгласно настоящето изобретение може да се осъществи конкурентно с други терапевтични третирания, включващи лечение с други антинеопластични лекарствени средства, моноклонални антибиотици, имунотерапия, или лъчева терапия, или средства, модифициращи биологичния отговор. Подходящите средства, променящи био-логичния отговор включват лимфокини и цитокини, такива като интерлевкини, ентерферони (α, β, или δ) и TNF. Други химио-терапевтични средства, които се използуват при лечение на заболявания, дължащи се на ненормалното пролифериране на клетката, включват алкилиращи средства, например, nitrogen mustards, такива като мехлоретамин, циклофосфамид, мелфалан и хлорамбуцил, алкил сулфонати, такива като бусулфан, нитрозауреаз, такива като кармустин, ломустин, семустин и стрептозоцин, триазени, такива като дакарбазин, антиметаболити, такива като аналози на фолиева киселина, например, метотрексат, пиримидинови аналози, такива като флуорурацил и цитарабин, пуринови аналози, такива като меркаптопурин и тиогуанин, природни продукти, например, vinca алкалоиди, такива като винбластин, винкристин, и виндезин, епиподофилотоксини, такива като етопозид и тенипозид, антибиотици, такива като дактиномицин, даунорубицин, доксорубицин, блеомицин, пликамицин и митомицин, ензими, такива като L-аспарагиназа, различни средства, такива като координационни комплекси на платина, например, циспл£7йна, замес-тени карбамиди, такива като хидроксикарбамид, метилхидразинови производни, такива
като прокарбазин, адренокортикал супресанти, такива като митотан и аминоглутетимид, хормони и антагонисти, такива като адренокортикостероиди, такива като преднизон, прогестини, такива като хидроксипрогестерон капроат, метоксипрогестерон ацетат и мегестрол ацетат, естрогени, такива като диетилстилбоестрол и етинил-естрадиол, антиестрогени, такива като тамоксифен, и андроге-ни, такива като тестостерон пропионат и флуоксиместерон.
Конкурентно лечение с циклофосфамид, 5-флуорурацил, атопозид, винорелбин, или метотрексат се предпочита, като може да се осъществи синергизъм между тези съединения и доцетаксел. Освен това, 2-метоксиестрадиол е активно средство срещу хепатоцелуларни карциноми, и се установи, че се понася добре след 1 месец ежедневно лечение при мишки (Klauber et al., Cancer Research, 57, 81-86,1997).
Конкурентно лечение c 2-метоксиестрадиол поради това е също така предпочитано, по-специално, когато се изисква хронично лечение.
Съгласно настоящето изобретение, доцетаксел се прилага при единична форма за еднократно дозиране, която позволява лечението на хепатоцелуларен карцином. Единичната форма за еднократно дозиране варира, в зависимост от начина на приложение, и от физическите характеристики на пациента. Подходящите единични форми за еднократно дозиране включват тези, които са терапевтично ефективни за лечението на заболявания, дължащи се на ненормалното пролифериране на клетките. Доцетаксел може да се прилага толкова често, колкото е необходимо, за да се получи желания терапевтичен ефект.
вии»м им
Характерната доза доцетаксел за лечение на човек е от 50 до 150, за предпочитане 60 до 100, по-предпочитано приблизително 100 mg доцетаксел/m2 от повърхността на кожата на пациента. Когато доцетаксел се прилага чрез инфузиране, скоростта на инфузиране е характерно от 1 до 200, за предпочитане приблизително 100 mg/m2 доцетаксел на час.
Горната доза може да се повтори, ако е необходимо. Характерно, тя се повтаря през дни, или през седмици. За предпочитане, тя се повтаря на всеки 3 седмици. Например, доцетаксел може да се прилага в доза от приблизително 100 mg/m2 като интравенозно инфузиране в продължение на 1 час на всеки 3 седмици.
Следващите примери илюстрират изобретението.
ПРИМЕРИ ЗА ИЗПЪЛНЕНИЕ НА ИЗОБРЕТЕНИЕТО
Материали и методи
С изключение на случаите, когато се посочва друго, използуваните методи са стандартни биохимични техники. Всичките използувани клетъчни линии са достъпни чрез търговската мрежа.
Клетъчна култура
Подробно изложените експерименти по-долу обхващат човешки хепатома клетъчни линии НерЗВ (АТСС означение НВ 8064), HepG2 (АТСС означение НВ 8065), и НА22Т/ VGH, и миша хепатома клетъчна линия Нера 1-6. Тези клетки се култивират в DMEM (GIBCO, BRL), съдържаща 10 % серум от говежди зародиш (Hyclone), 0,01 mg/ml гентамицин и 0,1 mM не-есенциална амино киселина. Клетките прорастват в СО2 инкубатор при 37°С, с 5 % СО2 и 95 % филтриран въздух.
Третиране с лекарствени средства
В подробно изложените експерименти по-долу, на горните хепатома клетки се действува с различни концентрации на паклитаксел (0,001 - 10 μΜ) и доцетаксел (0,001 - 10 μΜ) в продължение на 24 часа и на 72 часа. Паклитаксел се разтваря в диметилсулфоксид (DMSO), а доцетаксел се разтваря в етанол като разтвори за съхранение на склад. Крайната концентрация на вехикулума е по-ниска от 0,1 %.
Изследване жизнеспособността на клетките: МТТ изследване
Клетките се култивират в 96 ямков грозд от клетъчна култура (COSTAR) при плътност 4 х 104 клетки/ml. След третиране с лекарствено средство в продължение на 24 часа, или на 72 часа, средата се отстранява и се замества с равен обем (100 μΙ) пресно приготвена среда, съдържаща МТТ (0,456 mg/ml; 3-[4,5-диметилтиазол-2-ил]-2,5-дифенил-тетразол бромид) и се инкубира в продължение на 1,5 час при 37°С. След това пресно приготвената среда се отстранява, и се прибавят 100 μΙ DMSO. Жизнеспособността на клетките се определя чрез колориметрично сравнение с отчитане OD стойности от устройство за отчитане на микроблюда (SPECTRA МАХ 250) при абсорбционна дължина на малната 570 nm.
Резултатите са показани на фигура 1, където запълнените кръгове представляват данни след третиране в продължение на 24 часа, а свободните кръгове представляват данни след третиране в продължение на 72 часа. Данните са средни стойности ± стандартна грешка на средната стойност от двойните проби на три независими експерименти.
Изследване за изключване на пропидиев йодид (PI)
Клетките растат на 5-ст2 флакони (CPRNING) и им се действува с паклитаксел и доцетаксел, както е описано по-горе. След това се прибавя пропидиев йодид (10 pg/ml) в продължение на 15 минути инкубиране при 37°С. След това средата се прибира преди събирането на полепналите клетки. И суспендираните, и прикрепените клетки се събират, и се суспендират отново с 500 μΙ PBS за струен цитометричен анализ, както е описано по-долу. Разложени сигнали се отстраняват чрез FSC-SSC събиране.
Струен цитометричен анализ за ДНК съдържание
Лизиращ буфер (0,5 % Triton Х-100, 0,2 pg/ml
Na2EDTA.2H2O, и 1 % говежди серуен албумин в PBS) се прибавя към клетъчните топчета, които след това се поставят в лед за 15 минути. След това към сместа се прибавя 100 % метанол предварително охладен до -20°С, която след това се центрофугира при 300 хд в продължение на 5 минути. Супернатантата се отстранява и клетъчните топчици се промиват с PBS. Промитите топчици се оцветяват с разтвор за оцветяване на ДНК (50 pg/ml пропидиев йодид и 5 kunitz/ml RNa3a А) в продължение на 30 минути при 4°С на тъмно. ДНК съдържанието на всяка клетка се измерва, използувайки Becton Dickinson FACSCalibur flow cytometer (струен цитометър), както е посочено по-долу.
Струен цитометричен анализ
Клетки (10000) се анализират с Becton Dickinson FACSCalibur flow cytometer (струен цитометър), използувайки аргон-йон лазер (15 mWatt), с енергия на бомбардиращия лъч 488 nm. За PI изключващо изследване, червена флуоресценция се събира посредством 585 nm филтър, и остатъци от клетъчни сигнали се отстраняват чрез FSC-SSC пропускане. Натрупват се данни и се анализират, използувайки FACS/CELLQuest софтуер на Power Macintosh 7600/120 компютър. Апоптозни (apoptotic) клетки и клетки в специфични фази на цикъла се определят чрез Mod Fit LT софтуер.
Резултатите от струйния цитометричен анализ са показани на таблици 1 и 2, и на фигура 2. Таблица 1 дава фигури за пермеабилитет на клетъчна мембрана на хепатома клетки, след третиране с паклитаксел и доцетаксел. Таблица 2 дава подробно проценти на апоптозни (apoptotic) (sub-G0/G1) клетки, открити след третиране с паклитаксел и доцетаксел. Фигура 2 показва ДНК хистограмен анализ, даващ подробно ефекта от паклитаксел и доцетаксел върху прогресирането на клетъчен цикъл.
Таблица 1
Пермеабилитет на клетъчна мембрана на хепатома клетки след лечение с паклитаксел и доцетаксел
Паклитаксел (μΜ) | Доцетаксел (μΜ) | |||||
0,01 | 0,1 | 1 | 0,01 | 0,1 | 1 | |
Hep G2 24 час 72 час | 93,63±1,1 56,58±28,7 | 85,71±6,8 43,79+11,7 | 66,71 ±7,2 13,27±4,3 | 94,86±1,3 61,06±9,6 | 85,49±1,2 40,03±9,0 | 81,24+3,2 27,42±8,8 |
Hep ЗВ 24 час 72 час | 77,35±11,7 57,00±7,9 | 63,50±4,0 8,09±0,3 | 52,28±4,1 1,90±0,3 | 93,80±10,7 36,81±14,7 | 57,41+6,8 36,25±13,5 | 57,39+4,3 20,25±14,4 |
НА22Т/ VGH 24 час 72 час | 94,08±18,6 92,58±21,3 | 40,03±7,8 93,38±32,5 | 34,24±8,3 49,32±8,3 | 98,66±9,0 55,44±5,6 | 38,71±11,2 21,24±0,4 | 40,79±5,0 22,03±3,1 |
Нера 1-6 24 час 72 час | 93,17±3,8 62,95±5,6 | 67,20±4,4 27,79±1,3 | 62,65±7,6 15,51±1,0 | 94,45±1,9 77,18±1,4 | 83,35±7,2 43,94±3,4 | 81,88±8,7 38,90±4,2 |
Данните са средни ± стандартна грешка на средно от двойни проби на най-малко три независими експеримента. На клетките се действува с лекарствени средства в продължение на 24 - 72 часа, и пермеабилитета на мембраната се измерва чрез струен цитометричен анализ с изключване на пропидий в жизнеспособни хепатома клетки. Данните са процент клетки с цялостна клетъчна мембрана, сравнени с контролата.
i
Таблица 2
Апоптоза индуцирана от паклитаксел и доцетаксел
Паклитаксел (тМ) | Доцетаксел (тМ) | |||||
0,01 | 0,1 | 1 | 0,01 | 0,1 | 1 | |
Hep G2 24 час 72 час | 45,24 42,45 | 38,77 42,44 | 28,33 56,66 | |||
Hep ЗВ 24 час 72 час | 38,37 | 47,01 | 59,14 64,12 | 58,67 81,66 | 65,74 79,33 | |
НА22Т/ VGH 24 час 72 час | 0 | 0 | 41,75 56,64 | 18,61 58,61 | 22,94 60,98 | |
Нера 1-6 24 час 72 час | 24,02 | 55,64 N/A | 64,38 N/A | 32,81 31,25 | 50,76 53,95 | 53,80 62,49 |
Фигурите са % на апоптозни (sub-G0/G1) клетки, съгласно определянето чрез струен цитометричен анализ.
Анализ чрез електрофорезе на ДНК фрагментиране
Определянето на ДНК фрагментиране е съгласно метода на herrman et al, Nucleic Acids Res., 22, 5506-5507,1994.
Накратко, на клетки HEP G2 (2 x 107) се действува в продължение на 72 часа с паклитаксел и доцетаксел, както е описано по-горе, и се центрофугират. Така получените клетъчни топчета се суспендират повторно в NP-40 лизиращ буфер (1 % NP-40 в 20 mM EDTA, 50 тМ Tris-HCI, pH 7,5). След лизиране на клетките в продължение на някалко секунди, супернатантите се събират (5 минути на 1600 х д). Екстрахирането се повтаря със същия лизиращ буфер. Към супернатантите се прибавят SDS (крайна концентрация 1 %) и RNa3a (крайна концентрация 2,5 pg/μΙ), и се инкубират в продължение на 2 часа при 56°С, последвано от усвояване с протеиназа К (2,5 pg/μΙ) в продължение на 2 часа при 37°С. След това смесите се прибавят към 10 М амониев ацетат преди утаяване със ф
100 % етанол в продължение на 30 минути при -20°С . ДНК се събира чрез центрофугиране (10 минути при 1200 х д), последвано от електрофореза на 1,5 % агарозен гел.
Резултатите са показани на фигура 3. На фигура 3, М е 100 базисна двойка маркер. Lane 1 показва средна контрола. Lanes 2 и 3 показват средно третирани с паклитаксел (0,1 и 1 μΜ) групи. Lanes 4 и 5 показват средно третирани с доцетаксел (0,1 и 1 μΜ) групи.
Ф Резултати
Изследване жизнеспособността на клетките
Фигура 1 показва зависещият от дозата ефект на паклитаксел и доцетаксел върху жизнеспособността на клетките при хепатома клетъчни линии (Hep G2, Hep ЗВ, НА22Т/ VGH и Нера 1-6). Както се вижда на фигура 1, доцетаксел упражнява понижаване на жизнеспособността при 0,01 и 0,1 μΜ почти във всички случаи.
При Hep G2 клетки, клетъчната жизнеспособност показва тенденция на понижение след третиране с паклитаксел, или доцетаксел. Жизнеспособността на Hep G2 клетки е 61,81 % и 39,45 % спрямо контролата за групи с пакпитаксел (10 μΜ) на 24 и 72 час, съответно. За третирани с доцетаксел Hep G2 клетки, максимално редуциране на жизнеспособността се наблюдава при 1 μΜ доцетаксел, не се установява по-нататъшно понижаване на жизнеспособността при 10 μΜ доцетаксел. За третирани с 1 μΜ доцетаксел клетки жизнеспособността е 65,03 % и 48,99 % на 24 и 72 час, съответно.
За Hep ЗВ клетки, трябва да се отбележи, че значително редуциране на жизнеспособността (37,06 %) се наблюдава след третиране с 0,01 μΜ доцетаксел в продължение на 72 часа.
При третирани с доцетаксел Нера 1-6 клетки, максималната цитотоксичност (65,34 % и 30,71 %) се установява при групи третирани с 1 μΜ доцетаксел на 24 и 72 час, съответно.
Анализ за изключване на пропидиев йодид (ΡΙ)
Таблица 1 показва, че мембранният пермеабилитет на Hep G2 клетки и Нер ЗВ клетки след третиране с пакпитаксел и доцетаксел е зависим от дозата и от времето.
За HA22TA/GH клетки, по-малко повишаване на мембранния пермеабилитет се наблюдава след третиране с пакпитаксел (0,01 - 1 μΜ) в продължение на 72 часа, в сравнение с това на групите с доцетаксел. Трябва да се отбележи, че само 55,44 % от клетките имат цялостни мембрани след третиране с 0,01 μΜ доцетаксел в продължение на 72 часа, докато, след същата доза паклитаксел, 92,58 % от третираните клетки имат имат цялостни мембрани.
tWoMfei
Анализ на клетъчен цикъл
Фигура 2 показва, че при Hep G2 клетки, третирани с 1 μΜ паклитаксел в продължение на 24 часа се достига до явно задържане на G2/M фазата. Подобни ДНК хистограми се наблюдават на 72 час след третирането.
Както е показано на таблица 2, апоптозни клетки (sub-G0/G1) се откриват след третиране с 0,001 μΜ, 0,01 μΜ, 0,1 μΜ и 1 μΜ доцетаксел в продължение на 24 часа с апоптозни проценти 31,02 %, 45,24 %, 38,77 % и 28,33 %, съответно. На 72 час след третиране с доцетаксел (0,001 - 1 μΜ), апоптозните
V проценти са 21,92 %, 42,45 %, 42,44 % и 56,66 %, съответно.
При Hep ЗВ клетки, третиране с 0,1 μΜ, или 1 μΜ паклитаксел в продължение на 24 часа води до задържане при G2/M и инкубиране с 0,1 μΜ, или 1 μΜ паклитаксел в продължение на 72 часа води до повишаване на sub-G0/G1 процентите до 38,37 %, или 47,01 %, съответно. Противно на това, третирани с 0,1 μΜ, 0,1 μΜ, или 1 μΜ доцетаксел Hep ЗВ клетки в продължение на 24 часа, или на 72 часа, дават достигане на високи нива на sub-G0/G1 популации с 59,14 %, 58,69 % и 65,74 % за 24 ® часа, и 64,12 %, 81,66 % и 79,33 % за 72 часа.
При HA22T/VGH клетки, повишаването на концентрациите на паклитаксел (0,001 μΜ до 0,1 μΜ) е във функционална зависимост с повишениото процентно съдържание на G2/M клетки на 24 час. Не се наблюдава значителна sub-G0/G1 популация в групите, третирани с 0,1 μΜ, или 1 μΜ паклитаксел на 72 час. Противно на това, знаменателно е, че третирани с 0,01 μΜ доцетаксел клетки HA22T/VGH на 24 час имат по-високо sub-G0/G1 процентно съдържание (41,75 %), отколкото 0,1 μΜ (18,61 %), или 1 μΜ (22,94 %) групите с доцетаксел.
Когато на клетките се действува с доцетаксел в продължение на 72 часа, значителни sub-G0/G1 процентни съдържания се откриват в HA22T/VGH клетки, третирани с доцетаксел 0,01 μΜ (56,64 %), 0,1 μΜ (58,61 %) и 1 μΜ (60,98 %).
За Нера 1-6 клетки, третиране с паклитаксел (0,01, 0,1, или 1 μΜ) в продължение на 24 часа води до повишаване на формирането на sub-G0/G1 популации (24,02 %, 55,64 %, или 64,38 %, съответно), и се наблюдава задържане на G2/M фазата в групите, третирани с 0,1 μΜ и 1 μΜ паклитаксел. Когато на Нера 1-6 клетки се действува с 0,1 μΜ и 1 μΜ паклитаксел в продължение на 72 часа, по-голямата част от клетките умират, и няма явен профил на клетъчния цикъл. Третирането на Нера 1-6 клетки с доцетаксел (0,01 μΜ, 0,1 μΜ и 1 μΜ) води до формиране на sub-G0/G1 клетки (52,8 %, 50,76 % и 53,8 % на 24 час, и 31,25 %, 53,95 % и 62,49 % на 72 час, съответно).
Анализ на ДНК фрагментиране
Фигура 3 показва, че третиране с паклитаксел (0,1 μΜ и 1 μΜ) и доцетаксел (0,1 μΜ и 1 μΜ) индуцират ДНК фрагментиране в Hep G2 клетки.
Claims (5)
- Патентни претенции1. Състав за използване при лечението на хепатоцелуларен карцином включващ, като активен компонент, доцетаксел или негов хидрат.
- 2. Състав съгласно претенция 1, където β хидратът е трихидрат.
- 3. Състав съгласно претенция 1 или 2, който е за парентерално прилагане.
- 4. Състав съгласно претенция 3, който е подходящ за интраперитоенеално, подкожно, интравенозно или интрастернално приложение и съдържа от 38 до 42 mg/ml активно съединение.
- 5. Състав съгласно претенция 3, който е подходящ за прилагане чрез инфузия и съдържа от 0.1 до 11 mg/ml активно съединение.
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
GBGB9920548.6A GB9920548D0 (en) | 1999-08-31 | 1999-08-31 | Treatment of hepatocellular carcinoma |
PCT/EP2000/008782 WO2001015675A2 (en) | 1999-08-31 | 2000-08-29 | Use of docetaxel for treating hepatocellular carcinoma |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
BG106460A true BG106460A (bg) | 2002-09-30 |
BG65913B1 BG65913B1 (bg) | 2010-05-31 |
Family
ID=10860081
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
BG106460A BG65913B1 (bg) | 1999-08-31 | 2002-02-28 | Използване на доцетаксел за лечение на хепатоцелуларен карцином |
Country Status (34)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US20030158249A1 (bg) |
EP (1) | EP1214061B1 (bg) |
JP (1) | JP4866522B2 (bg) |
KR (1) | KR100670416B1 (bg) |
CN (1) | CN1174748C (bg) |
AT (1) | ATE269700T1 (bg) |
AU (1) | AU777583B2 (bg) |
BG (1) | BG65913B1 (bg) |
BR (1) | BR0013625A (bg) |
CA (1) | CA2382294C (bg) |
CZ (1) | CZ301378B6 (bg) |
DE (1) | DE60011794T2 (bg) |
DK (1) | DK1214061T3 (bg) |
EA (1) | EA004804B1 (bg) |
EE (1) | EE05124B1 (bg) |
ES (1) | ES2218223T3 (bg) |
GB (1) | GB9920548D0 (bg) |
HK (1) | HK1048944B (bg) |
HR (1) | HRP20020171A2 (bg) |
HU (1) | HU228861B1 (bg) |
IL (2) | IL147489A0 (bg) |
ME (1) | MEP7809A (bg) |
MX (1) | MXPA02002041A (bg) |
NO (1) | NO328527B1 (bg) |
NZ (1) | NZ517604A (bg) |
PL (1) | PL212612B1 (bg) |
PT (1) | PT1214061E (bg) |
RS (1) | RS50148B (bg) |
SI (1) | SI1214061T1 (bg) |
SK (1) | SK286378B6 (bg) |
TW (1) | TW589180B (bg) |
UA (1) | UA72927C2 (bg) |
WO (1) | WO2001015675A2 (bg) |
ZA (1) | ZA200201408B (bg) |
Families Citing this family (15)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1268619C (zh) | 2003-05-08 | 2006-08-09 | 上海迪赛诺化学制药有限公司 | 多烯紫杉醇三水化合物的制备方法 |
ATE427943T1 (de) * | 2003-12-12 | 2009-04-15 | Quiral Quimica Do Brasil | Verfahren zur herstellung von wasserfreien und hydratisierten pharmazeutischen wirkstoffen (apis); aus diesen hergestellte stabile pharmazeutische zusammensetzungen und anwendungen fur diese zusammensetzungen |
US7449196B2 (en) * | 2004-07-09 | 2008-11-11 | Robert Sabin | Anti tumor compositions and methods of use |
NZ592132A (en) * | 2005-08-31 | 2012-12-21 | Abraxis Bioscience Llc | Composition comprising nanoparticles of docitaxel and a citrate |
EP2404594B1 (en) * | 2005-08-31 | 2017-12-20 | Abraxis BioScience, LLC | Compositions comprising docetaxel with increased stability |
US9839667B2 (en) | 2005-10-14 | 2017-12-12 | Allergan, Inc. | Prevention and treatment of ocular side effects with a cyclosporin |
US20080081051A1 (en) * | 2006-09-28 | 2008-04-03 | Robert Sabin | Method of manufacturing anti-tumor and anti-viral compositions |
EP2146695A4 (en) * | 2007-04-23 | 2010-05-19 | Sun Pharmaceuticals Ind Ltd | PHARMACEUTICAL COMPOSITIONS |
FR2917088B1 (fr) * | 2007-06-08 | 2009-09-04 | Aventis Pharma Sa | Dissolution directe du docetaxel dans un solvant dans le polysorbate 80 |
US8541360B2 (en) * | 2008-11-19 | 2013-09-24 | Ben Venue Laboratories, Inc. | Parenteral formulations comprising sugar-based esters and ethers |
ES2675212T3 (es) | 2010-03-26 | 2018-07-09 | Abraxis Bioscience, Llc | Métodos de tratamiento de carcinoma hepatocelular |
WO2011139899A2 (en) * | 2010-05-03 | 2011-11-10 | Teikoku Pharma Usa, Inc. | Non-aqueous taxane pro-emulsion formulations and methods of making and using the same |
US8842114B1 (en) | 2011-04-29 | 2014-09-23 | Nvidia Corporation | System, method, and computer program product for adjusting a depth of displayed objects within a region of a display |
JO3685B1 (ar) | 2012-10-01 | 2020-08-27 | Teikoku Pharma Usa Inc | صيغ التشتيت الجسيمي للتاكسين غير المائي وطرق استخدامها |
WO2016134066A1 (en) * | 2015-02-17 | 2016-08-25 | Mallinckrodt Llc | Modified docetaxel liposome formulations and uses thereof |
Family Cites Families (20)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
FR2601675B1 (fr) * | 1986-07-17 | 1988-09-23 | Rhone Poulenc Sante | Derives du taxol, leur preparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent |
FR2629819B1 (fr) * | 1988-04-06 | 1990-11-16 | Rhone Poulenc Sante | Procede de preparation de derives de la baccatine iii et de la desacetyl-10 baccatine iii |
US5543154A (en) * | 1991-12-27 | 1996-08-06 | Merck & Co., Inc. | Controlled release nifedipine delivery device |
CA2150372C (en) * | 1993-01-19 | 2002-08-20 | Nancy L. Mills | Stable oral ci-981 formulation and process of preparing same |
US5801029A (en) * | 1993-02-16 | 1998-09-01 | Onyx Pharmaceuticals, Inc. | Cytopathic viruses for therapy and prophylaxis of neoplasia |
US5436243A (en) * | 1993-11-17 | 1995-07-25 | Research Triangle Institute Duke University | Aminoanthraquinone derivatives to combat multidrug resistance |
FR2718963B1 (fr) * | 1994-04-25 | 1996-05-24 | Rhone Poulenc Rorer Sa | Nouvelle composition pharmaceutique à base de taxoïdes. |
FR2722191B1 (fr) * | 1994-07-08 | 1996-08-23 | Rhone Poulenc Rorer Sa | Procede de preparation du trihydrate du (2r,3s)-3-tertbutoxycarbonylamino-2-hydroxy-3-phenylpropionate de 4-acetoxy2alpha-benzoyloxy-5beta,20epoxy-1,7beta,10beta trihydroxy-9-oxo-tax-11-en-13alpha-yle |
US5968972A (en) | 1995-10-26 | 1999-10-19 | Baker Norton Pharmaceuticals, Inc. | Method for increasing the oral bioactivity of pharmaceutical agents |
US6245805B1 (en) * | 1995-10-26 | 2001-06-12 | Baker Norton Pharmaceuticals, Inc. | Method, compositions and kits for increasing the oral bioavailability of pharmaceutical agents |
FR2742751B1 (fr) * | 1995-12-22 | 1998-01-30 | Rhone Poulenc Rorer Sa | Nouveaux taxoides, leur preparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent |
US6503893B2 (en) * | 1996-12-30 | 2003-01-07 | Bone Care International, Inc. | Method of treating hyperproliferative diseases using active vitamin D analogues |
DE69737510T2 (de) * | 1996-12-30 | 2007-12-06 | Battelle Memorial Institute, Columbus | Verwendung eines unverkapselten Antikrebs-Arzneimittels zur Herstellung einer Zubereitung zur Behandlung von Neoplasmen durch Inhalation |
CA2294981C (en) * | 1997-06-27 | 2012-04-03 | Vivorx Pharmaceuticals, Inc. | Novel formulations of pharmacological agents, methods for the preparation thereof and methods for the use thereof |
ATE233104T1 (de) * | 1997-09-18 | 2003-03-15 | Janssen Pharmaceutica Nv | Kondensierte imidazolderivate zur erhöhung der oralen bioverfügbarkeit von pharmazeutika |
AU1289899A (en) * | 1997-10-31 | 1999-05-24 | Arch Development Corporation | Methods and compositions for regulation of 5-alpha reductase activity |
UA73092C2 (uk) * | 1998-07-17 | 2005-06-15 | Брістол-Майерс Сквібб Компані | Таблетка з ентеросолюбільним покриттям і спосіб її приготування |
JP2002533387A (ja) * | 1998-12-23 | 2002-10-08 | ジー.ディー.サール & カンパニー | 腫瘍治療の複合療法としてインテグリン拮抗物質と一つ以上の抗腫瘍剤を使用する方法 |
GB9909925D0 (en) * | 1999-04-29 | 1999-06-30 | Pharmacia & Upjohn Spa | Combined preparations comprising anthracycline derivatives |
BRPI0610344A2 (pt) * | 2005-12-13 | 2016-11-29 | Teva Pharma | forma cristalizada do atorvastatin hemi-calcium, processo para sua preparação, produto famacêutico derivado e seu uso medicinal |
-
1999
- 1999-08-31 GB GBGB9920548.6A patent/GB9920548D0/en not_active Ceased
- 1999-09-22 TW TW088115041A patent/TW589180B/zh not_active IP Right Cessation
-
2000
- 2000-08-29 PL PL353198A patent/PL212612B1/pl unknown
- 2000-08-29 WO PCT/EP2000/008782 patent/WO2001015675A2/en active IP Right Grant
- 2000-08-29 SK SK271-2002A patent/SK286378B6/sk not_active IP Right Cessation
- 2000-08-29 PT PT00964144T patent/PT1214061E/pt unknown
- 2000-08-29 EA EA200200313A patent/EA004804B1/ru not_active IP Right Cessation
- 2000-08-29 ES ES00964144T patent/ES2218223T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2000-08-29 DK DK00964144T patent/DK1214061T3/da active
- 2000-08-29 NZ NZ517604A patent/NZ517604A/en not_active IP Right Cessation
- 2000-08-29 MX MXPA02002041A patent/MXPA02002041A/es active IP Right Grant
- 2000-08-29 AT AT00964144T patent/ATE269700T1/de active
- 2000-08-29 CN CNB008114501A patent/CN1174748C/zh not_active Expired - Fee Related
- 2000-08-29 IL IL14748900A patent/IL147489A0/xx active IP Right Grant
- 2000-08-29 HU HU0203197A patent/HU228861B1/hu not_active IP Right Cessation
- 2000-08-29 SI SI200030478T patent/SI1214061T1/xx unknown
- 2000-08-29 EE EEP200200087A patent/EE05124B1/xx not_active IP Right Cessation
- 2000-08-29 RS YUP-114/02A patent/RS50148B/sr unknown
- 2000-08-29 EP EP00964144A patent/EP1214061B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-08-29 AU AU75168/00A patent/AU777583B2/en not_active Ceased
- 2000-08-29 CA CA002382294A patent/CA2382294C/en not_active Expired - Fee Related
- 2000-08-29 KR KR1020027002446A patent/KR100670416B1/ko not_active IP Right Cessation
- 2000-08-29 JP JP2001519889A patent/JP4866522B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2000-08-29 BR BR0013625-5A patent/BR0013625A/pt not_active Application Discontinuation
- 2000-08-29 CZ CZ20020739A patent/CZ301378B6/cs not_active IP Right Cessation
- 2000-08-29 DE DE60011794T patent/DE60011794T2/de not_active Expired - Lifetime
- 2000-08-29 ME MEP-78/09A patent/MEP7809A/xx unknown
- 2000-08-29 UA UA2002021546A patent/UA72927C2/uk unknown
-
2002
- 2002-01-06 IL IL147489A patent/IL147489A/en not_active IP Right Cessation
- 2002-02-19 ZA ZA200201408A patent/ZA200201408B/xx unknown
- 2002-02-20 NO NO20020829A patent/NO328527B1/no not_active IP Right Cessation
- 2002-02-26 HR HR20020171A patent/HRP20020171A2/hr not_active Application Discontinuation
- 2002-02-27 US US10/083,565 patent/US20030158249A1/en not_active Abandoned
- 2002-02-28 BG BG106460A patent/BG65913B1/bg unknown
-
2003
- 2003-02-18 HK HK03101197.6A patent/HK1048944B/zh not_active IP Right Cessation
-
2007
- 2007-06-12 US US11/761,512 patent/US20080045584A1/en not_active Abandoned
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US20080045584A1 (en) | Use of Docetaxel for Treating Hepatocellular Carcinoma | |
KR100334051B1 (ko) | 탁산유도체를함유하는항종양조성물 | |
KR101502533B1 (ko) | 우수한 안정성을 갖는 택산 유도체 함유 주사제용동결건조 조성물 및 이의 제조방법 | |
US20090197821A1 (en) | Compositions and methods for the delivery of poorly water soluble drugs and methods of treatment | |
JP2005515202A (ja) | プラチナ誘導体の薬学的調合物 | |
Leung et al. | Polymeric micellar paclitaxel phosphorylates Bcl‐2 and induces apoptotic regression of androgen‐independent LNCaP prostate tumors | |
RU2398578C2 (ru) | Фармацевтическая композиция, содержащая производное таксана, которая предназначена для приготовления инфузионного раствора, способ его приготовления и использование | |
KR100468271B1 (ko) | 피페라진옥시란유도체를포함하는약제학적조성물 | |
CN109568313B (zh) | 一种抗肿瘤联合用药物及其在制备抗癌药物中的应用 | |
US8580847B2 (en) | Antrocin containing pharmaceutical compositions for inhibiting cancer cells | |
WO1995029677A1 (en) | Lactone stable formulation of camptothecin or 7-ethyl camptothecin | |
US20110263700A1 (en) | Antrocin containing pharmaceutical compositions for inhibiting cancer cells | |
JPH11209283A (ja) | 抗癌剤 | |
Nassier | Protein undernutrition in tumor-bearing mice, response and toxicity to paclitaxel | |
KR20000031849A (ko) | 데옥시포도필로톡신을 유효성분으로 함유하는 혈관 신생 억제용조성물 및 그를 이용한 혈관 신생 억제방법 |