BE565719A

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Publication number: BE565719A
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Description


   <Desc/Clms Page number 1> 
 



   La présente invention a trait à un nouvel antibiotique, que la demanderesse a appelé FI 1163, et au prooédé pour sa pro duotion. 



   Plus particulièrement, elle concerne sa production par la fermentation d'une nouvelle souche de Streptomyoes (Streptomyces   lucansis),   son obtention des bouillons de      fermentation, et sa purification ultérieure. 

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   La présente invention a pour objet l'antibiotique et ses sels, aussi bien à l'état solide qu'en solution. 



   L'antibiotique obtenu selon la présente invention exerce une action spécifique sur les   champignons   et sur les levures pathogènes pour   l'homme,   les animaux et les plantes. On connaît déjà différentes autres substances ayant une action antifongique, obtenues soit par synthèse, soit par fermentation de   microorganismes.     Cependant,   on sait bien que ces substances présentent généralement une toxi- cité élevée pour les organismes supérieurs, ce qui en limite fortement l'emploi pratique.   Parmi   celles-ci on peut citer, par exemple, la   candidine,   l'ascosine, les actino- mycines, la steptotricine, la géomycine, etc..., qui sont des produits du métabolisme d'autres streptomycètes.

   , 
Comme on l'a dit, l'antibiotique FI 1163 est produit par fermentation d'un nouvel organisme appartenant au genre Streptomyces; il a été isolé d'un échantillon de terrain prélevé dans le territoire de   Lucques   (Toscane),   moyennant   suspension-terre en plaque sur terrain glycérine-glycocolle et incubation dans un thermostat à 37 C pendant 5 jours. 



  Au microscope optique, la souche présente des hyphes rami- fiées avec des ramifications à forme de spirale, fréquemment crochues à leurs extrémités. 



  Agar pomme de terre : développement excellent, mycélium végétatif jaune citron pâle, mycélium aérien gris chamois ou brun-clair, poudreux, avec des mèches ou zones répandues, plus claires. Pigment soluble gris-cendre après trois jours, gris-brun par la suite. 



  Agar Czapek : développement assez   considérable,   mycélium végétatif incolore coaleur miel, mycélium aérien blanc à blanc opaque, poudreux. Il ne produit pas de pigment 

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 soluble ; revers incolore à jaune-citron très pâle. 



  Agar carotte : développement bon, mycélium végétatif inco- lore, mycélium aérien gris chamois, poudreux; pas de produc- tion de pigment soluble; revers incolore à ocre. 



    Agar amidon:   développement excellent; mycélium végétatif incolore à couleur miel; mycélium aérien gris chamois couleur chamois à brun-clair, poudreux, parfois avec de petites mèches blanches; il prend parfois aussi une tonalité mauve ; absence de pigment soluble et revers incolore à jaune très pâle. Il hydrolyse assez bien l'amidon. 



  Agar levure: développement bon; mycélium végétatif brun, mycélium aérien peu   développe,   gris-brun, pousse en petites colonies relevées; pigment soluble brun. 



  Agar   glycérine-glycocolle:   développement excellent, mycélium végétatif jaune-citron, revers jaunâtre, mycélium aériejn   gris-brun poudreux ; ilproduit un pigment soluble.   



  Gélatine : développement abondant; mycélium végétatif brun; mycélium aérien blanc d'abord, gris-brun par la suite. Tort brunissement du substratum déjà après trois jours. Aucune fluidification, même après 25 jours. 



  Bouillon de viande : après 20 jours, développement très léger en flocons, ou alors flottant en surface, fort bru- nissement du bouillon. 



   La couche présente une activité très faible sur les germes gram-positifs, pas d'activité   sur   les   germes   gram- -négatifs et sur myco-bactéries, une bonne activité, par contre, sur les levures, une activité excellente sur les champignons, soit pathogènes végétaux ou animaux, soit saprophytes en général. 

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   Sur la base des caractéristiques citées, la souche de Streptomyces isolée par la demanderesse et appelée   Streptomyces   lucensis ne correspond à aucune autre espèce trouvée par la demanderesse dans la bibliographie (1) et en particulier dans le "Manual of General Microbiology" de Bergey. 



   La souche se conserve bien sur un terrain solide contenant des hydrates de carbone (tels que l'amidon, le glucose,   etc...),   des substances azotées telles que les amino-acides et des substances plus complexes, ainsi que   ' des   sels. La sporification, de cette façon, est toujours très abondante. La période d'incubation est de 10 jours environ à des températures comprises entre 26 et 37 C la meilleure à 28 C. 



   Sur un terrain solide, la souche se conserve par conséquent jusqu'à 3 mois à une température d'environ 0 C 
Elle se conserve d'autre part tout aussi bien dans la terre stérile lyophilisée. 



   La production de l'antibiotique est effectuée selon un procédé général consistant à cultiver le streptomycète caractérisé ci-dessus, en contact avec un liquide stérile contenant une ou plusieurs sources de carbone et d'azote assimilable, ainsi que des sels. Comme source de carbone assimilable, on peut employer la dextrose, la saccharose, des dextrines ou un autre polysaccharide assimilable. 



   Comme source d'azote assimilable, on peut employer des subs- tances protéiques comme la caséine, la peptone ou des subs- tances azotées plus simples,'   comme   les amino-acides, ou alors des extraits végétaux, des extraits de viande et d'autres produits tels que le oorn-steep ou des produits d'hydrolyse des protéines. 

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   La   fermentation   peut s'effectuer dans un   Erlenmeyer   de 100-500 cm3 dans des conditions de bonne aération et à une température optimum de   25-35 C.   L'.activité se manifeste déjà après environ 30 heures, et elle se maintient haute et constante jusqu'à 70 heures environ. 



   La culture de l'organisme producteur peut aussi être conduite en effectuant une fermentation submergée dans les conditions d'agitation, d'aération et de température les plus convenables, selon le mode opératoire et avec les appareillages bien connus par les experts en matière de ces   :procédés.   



   L'activeité antibiotique de ces cultures est essayée sur un organisme test qui, dans le présent cas, est le Debaremyces   marylandii   op 52   L.C.I.   Une suspension appro- priée de cet organisme est ajoutée à un agar   Saboaraud   (refroidi à 50 C), les plaques sont soumises à une incuba- tion pendant environ 48 heures à 25-29 C, après quoi on lit les halos formés. 



   La présente invention concerne aussi l'extraction et la purification du nouvel antibiotique des cultures du   Streptomyoes   lucentsis d'où il est produit. L'obtention de préparations actives et suffisamment purifiées de   l'antibio-   tiqua, selon la présente invention, a lieu d'après une méthode générale consistant en l'extraction des filtrats des cultures et   'du   mycélium séparément, ou du bouillon total non filtré, à l'aide de différents solvants, tels que le chloroforme ou des alcools non miscibles ou par- tiellement miscibles à l'eau;   pari;,1   ceux-ci on a préféré l'alcool butylique normal, et on a effectué l'extraction avec ce solvant du filtrat de culture et du mycélium,   séparément.   



   L'extraction séparée du mycélium peut être effectuée avec ces   solvants,   ou bien avec d'autres, dans lesquels 

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 l'antibiotique présente une solubilité suffisante (par exemple des alcools inférieurs, anhydres ou aqueux, acétone aqueuse). Le pH des cultures, avant la filtration et l'ex- traction, est réglé à environ   7.   



   Les extraits obtenus sont concentrés ensuite dans le vide et le produit actif est précipité à l'aide d'un solvant dans lequel il est insoluble, comme l'éther de pétrole. 



   Ce précipité, séché et pulvérisé, se présente sous forme d'une poudre d'une couleur jaune clair, jaune crème ou légèrement brune. 



   Le produit brut peut être purifié en utilisant les propriétés de l'antibiotique d'être soluble dans l'eau (sous forme de sel sodique dans une solution de tampon phosphate pH 7 ou de bicarbonate de sodium), d'une part, et d'être peu soluble dans l'eau ayant un pH compris entre 4 et 5, d'autre part. On a préféré un procédé fondé sur cette propriété, de sorte que le produit brut est extrait aveo une solution de tampon phosphate pH 7 ou de bicarbonate de' sodium, la suspension obtenue est soumise à un essorage pour séparer une matière résiduaire inactive, les solutions claires sont portées au pH 4,5 avec un aoide minéral. Le précipité obtenu est essoré et séché. Les opérations sont effectuées, autant que possible, dans un milieu d'azote, à l'abri de la lumière'et à basse température. 



   Une purification ultérieure du produit peut être obtenue par des procédés bien connus d'extraction et de lavage avec des solvants dans lesquels le FI 1163 soit respectivement soluble ou insoluble, 
En tout oas, aussi bien le produit obtenu de la façon susmentionnée que celui ultérieurement purifié montrent constamment les caractéristiques biologiques que la deman- 

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 deresse a indiquées, qui en justifient l'emploi pratique. 



   Le nouvel antibiotique est une substance azotée de- caractère acide, peu soluble dans l'eau, mais soluble dans l'eau sous forme de sel sodique; elle ne contient pas de soufre, Elle est, en outre, très soluble dans le chloroforme et l'éthylcellosolve, soluble dans le méthanol, l'éthanol, le butanol normal, la pyridine, la diméthylformanmide; peu soluble dans l'acétone et dans l'acétate d'éthyle; inso- luble dans l'éther, l'essence et l'éther de pétrole. Avec l'acide sulfurique concentré, elle donne une coloration rouge-brun. Les solutions dans l'alcool méthylique de l'Fi 1163 présentent dans l'ultraviolet trois maxima d'ab- sorption correspondant aux longueurs d'ondes suivantes : 290, 304 et 318 millimicrons. 



   Le spectre d'absorption dans l'infrarouge en KBr est représenté sur le dessin annexé, dont les ordonnées indiquent la transmission   en %   et les abscisses les longueurs d'onde en microns. 



   Afin de réaliser une caractérisation plus complète du nouveau produit, on donnera ci-après les Rf obtenus dans des essais de ohromatographie sur papier   Whatman   n  1 avec le développement ascendant et la révélation à l'aide d'une bioautographie sur plaques ensemencées avec de la "Candida   albicans" :   
 EMI7.1 
 
<tb> Système <SEP> solvant <SEP> Rf
<tb> 
<tb> 1) <SEP> Butanol-aeide <SEP> acétique-eau <SEP> 2:1:1 <SEP> 0,75
<tb> 
<tb> 2) <SEP> Benzène-acide <SEP> acétique-eau <SEP> 2 <SEP> :1:1 <SEP> 0,21
<tb> 
<tb> 3) <SEP> Butanol-pyridine-eau <SEP> 1:0,6:

  1 <SEP> 0,60
<tb> 
<tb> 4) <SEP> Butanol <SEP> saturé <SEP> d'eau <SEP> + <SEP> 2 <SEP> % <SEP> d'hydrate
<tb> 
<tb> d'ammonium <SEP> 0,06
<tb> 
 L'FI 1163 à l'état solide est -très stable, surtout s'il 

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 est conservé à l'abri   de   la lumière et de l'air. 



   Ses solutions aqueuses neutres, conservées à + 5 ,   gardant   luur activité inaltérée pendant plusieurs jours; au contraire, l'activité diminue rapidement si les   munies   solutions sont conservées à   température     ambiants.   
 EMI8.1 
 



  Comme il ressort des caractéristiques sus-m. ntionnées, la substance obtenue par la demanderesse appartient au 
 EMI8.2 
 groupe des antibiotiques poliéniques avec un chrornophore tétraénique. De ce groupe, les deux premiers représentants ont été décrits en 1951, la nistatine (2) et la rimocydine (3), produites respectivement par le Streptomyces noursei et par le S.   rimosus,   (souche qui produit de la   Terramyoine).   
 EMI8.3 
 On a décrit par la suite l'antimycéine (4), substance très semblable à la nistatine et produite par le Strepto- 
 EMI8.4 
 myces aureus, et la chrorrine, obtenue par la culture d'une souche semblable au S. antibioticus (5). 



   Un chromophore tétraénique se trouve enfin dans l'amphotéricine A, obtenue récemment par le Streptomyoes M-4575 (6). 



   Le Streptomyces   lucensis   représente, avec ses carac- téristiques morphologiques et de culture, une espèce nette- ment   différenciable   de celles produisant d'autres antibio- 
 EMI8.5 
 tiques antifonsiques, et en particulier du noursei, rimosus, aureus, antibioticus, M-4575 
 EMI8.6 
 La substance produiue par l'FI 1163 présente dans propriétés chimiques et physico-chimiques .qui en permettent la différenciation sûre des substances sus-#antionnées. 



  L'activité antifongique de 1'FI 1163 est confirmée 
 EMI8.7 
 par les propriétés bioloi-cilies suivantes de la. substance : Les données conce:rn<::l1t l'activité antibiotique "in vitro" de 1T1'I 1163 sont consi nées dans 1 taaleau I. 



  Les essais sur 1-,s blastomycètes et les schizoinycètos 

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 ont été effectués dans un bouillon de viande additionné de glucose; ceux pour les hyphomycètes proprement dits, dans un terrain Sabouraud liquide. 



   Les lectures ont été effectuées après 8 jours à 30 C 
Tableau 1 
 EMI9.1 
 Dose inhibitrice minima en mioro5rammes/ml 
 EMI9.2 
 
<tb> 1 <SEP> Actinomyces <SEP> bostrëmi <SEP> A <SEP> > <SEP> 100 <SEP> 
<tb> 
 
 EMI9.3 
 2 TSocardia asteroides > 100 
 EMI9.4 
 
<tb> 3 <SEP> Candida <SEP> albicans <SEP> 0,8
<tb> 
<tb> 4 <SEP> Candida <SEP> albicans <SEP> val <SEP> . <SEP> 0,7
<tb> 
<tb> 5 <SEP> Debaryomyces <SEP> hudeloi <SEP> 0,7
<tb> 
 
 EMI9.5 
 6 'r neoormans 0,6 7 " tyrocola 8 8 " marylandii 2 9 " guillermondii 3 
 EMI9.6 
 
<tb> 10 <SEP> " <SEP> oannensis <SEP> 0,5
<tb> 
 
 EMI9.7 
 11 Torulopsis noofonnanx 0,3 
 EMI9.8 
 
<tb> 12 <SEP> Saccharomyoes <SEP> oerevisiae <SEP> 2
<tb> 
<tb> 13 <SEP> Eremothecium <SEP> hashbyii <SEP> 25
<tb> 
<tb> 14 <SEP> Pénicillium <SEP> sp. <SEP> 20
<tb> 
 
 EMI9.9 
 15 Aspergil1 L1S sp.

   (T) ' .{. 10 
 EMI9.10 
 
<tb> 16 <SEP> " <SEP> niger <SEP> 20
<tb> 
<tb> 17 <SEP> Glenospora <SEP> graphii <SEP> 100
<tb> 
 
 EMI9.11 
 18 Glenosporel1a dermatitidis 10 ' 19 Pseudomyooderma rr.atalense 1 20 Trichophyton faviforrne ochracetxm 30 
 EMI9.12 
 
<tb> 21 <SEP> Trichophyton <SEP> maggini <SEP> 30
<tb> 
<tb> 22 <SEP> " <SEP> radians <SEP> 30
<tb> 
<tb> 
<tb> 23 <SEP> " <SEP> rhodainii <SEP> 30
<tb> 
 
 EMI9.13 
 24 " plicatile <.", 10 

 <Desc/Clms Page number 10> 

 
 EMI10.1 
 
<tb> 25 <SEP> Trichophyton <SEP> mentagrophytes <SEP> 30
<tb> 
<tb> 26 <SEP> Epidermophyton <SEP> floccosum <SEP> #10
<tb> 
<tb> 27 <SEP> Saboaraadites <SEP> gypesus <SEP> # <SEP> 10
<tb> 
<tb> 28 <SEP> Histoplasma <SEP> capsulatum
<tb> 
<tb> (phase <SEP> du <SEP> mycélium) <SEP> # <SEP> 10
<tb> 
 Inoculation : 1000 cellules environ pour les blastomycètes et les schizomycètes.

   Fragment de culture jeune pour les hyphomycètes proprement dits. 



   On a trouvé, en outre, que la présence de 10% de sérum dans le terrain de culture détermine seulement de légères modifications de la valeur de la DIM. 



  Toxicité - L'aspect toxicolgoique aigu de l'FI   1163   se présente favorable, car les DE .50, déterminées sur la soeris par les différentes voies d'administration, sont   Iras   loin des doses thérapeutiques. 



   Les exemples ci-après serviront à mieux illustrer l'invention, mais on spécifie que celle-ci ne se limite pas aux substances ou aux quantités particulières indiquées dans les exemples et dans le résumé qui les suit. 



   Il est entendu que l'invention comprend toutes les matières, toutes les quantités et toutes les opérations équivalentes . 



  Exemple 1. 



   On prépare   40     Erlenmeyers   de 300 cm3, contenant cha- cun 60 om3 de terrain de la composition suivante (parties    pour mille): sucres (dextrine) 20 ; cornsteep 10; caséine 5;   carbonate de calcium 4; sulfate   d'ammonium   1 ; phosphate bipotassique 0,1 (pH du terrain   6,7).   Ces ballons, stérili- sés à 120 C pendant 20 minutes, sont inoculés avec une suspension de spore obtenue en lavant une culture en tube 

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 à bec de flûte ayant un diamètre de 25 mmm, âgée de 20 jours environ, avec 10 cm3 d'eau distillée stérile, à raison de 0,2 cm3 par ballon. 



   Les ballons sont maintenus à une température de 20 C et agités selon un mouvement rotatif alternatif d'environ 220 tours par minute, pendant 60 heures. Comme on le voit des données indiquées ci-après, l'activité atteint sa valeur maximum après   40   heures environ : 
 EMI11.1 
 
<tb> Heures <SEP> de <SEP> pH <SEP> du <SEP> bouillon <SEP> Diamètre <SEP> du <SEP> halo
<tb> fermenta- <SEP> de <SEP> culture <SEP> d'inhibition <SEP> sur <SEP> Debar.
<tb> tion <SEP> mâryl. <SEP> en <SEP> mm <SEP> (méthodes
<tb> des <SEP> plaques <SEP> d'agar)
<tb> 
<tb> 
<tb> 38 <SEP> 6,4 <SEP> 33
<tb> 
<tb> 41 <SEP> 6,6 <SEP> 34,5
<tb> 
<tb> 47 <SEP> 7,8 <SEP> 31,5
<tb> 
<tb> . <SEP> 54 <SEP> 7,8 <SEP> 30,25
<tb> 
<tb> 61 <SEP> 7,0 <SEP> 28
<tb> 
 Exemple 2. 



  3000 cm3 d'un terrain ayant la composition suivante : 
 EMI11.2 
 
<tb> Dextrine <SEP> 20 <SEP> %.
<tb> 
<tb> Corn <SEP> steep <SEP> 3 <SEP> %.
<tb> 
 
 EMI11.3 
 CACO3 4 %Éa 
 EMI11.4 
 
<tb> (NH4)2SO4 <SEP> technique <SEP> 1 <SEP> %.
<tb> Caséine <SEP> 5 <SEP> %.
<tb> 
<tb> K2HPO4 <SEP> 0,1 <SEP> %.
<tb> 
 



   Après stérilisation à   120 C   pendant 60 minutes   (pH   après stérilisation   7,10),   dans un récipient de fermenta- tion de laboratoire de 5 litres, on effectue l'inoculation avec une suspension de spores obtenue du lavare de demi-col- 

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 les. Les conditions de la fermentation sont les suivantes : Agitation 400 tours par   minute   aération lt,   l/lt/m   température 27 c durée 24 heures. 



   Pour la phase de production, on emploie des récipients de fermentation de 10 litres avec 6000 cm3 de terrain ayant la composition suivante : 
 EMI12.1 
 
<tb> Saccharose <SEP> , <SEP> 20 <SEP> %.
<tb> 
<tb> 



  Dextrose <SEP> 10 <SEP> %
<tb> 
<tb> Dextrine <SEP> 10 <SEP> %
<tb> 
<tb> Corn <SEP> steep <SEP> 10 <SEP> %
<tb> 
<tb> CaCO3 <SEP> 4 <SEP> %
<tb> 
<tb> K2HPO4 <SEP> 0,1 <SEP> %
<tb> 
 
 EMI12.2 
 (NH4)2S04 teohnique l %0 
 EMI12.3 
 
<tb> Silicone <SEP> fluide <SEP> 1 <SEP> %
<tb> 
 
La stérilisation du terrain est effectuée à 120 C pendant 90 minutes. La saccharose et la dextrose sont sté- rilisées à part à 120 C pendant 20 minutes. Le pH après stérilisation est   7,04.   



   Le terrain est inoculé avec   2,5 %   de mycélium végé- tatif de 24 heures. 



   Les conditions de fermentation sont les suivantes : Agitation 450 tours par minute Aération lt.   1/lt/m   Température 27 C Marche de la fermentation : 
 EMI12.4 
 Age pH Titre en mioro;rammes/m1 
 EMI12.5 
 
<tb> DS <SEP> 7,0
<tb> 
<tb> 24 <SEP> 6,6 <SEP> 200
<tb> 
<tb> 
<tb> 48 <SEP> 7,0 <SEP> 580
<tb> 
<tb> 
<tb> 55 <SEP> 7,0 <SEP> 1020
<tb> 
 

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 Exemple 3 
On effectue une fermentation comme dans l'exemple      précédent, en remplaçant le terrain de la phase de   produc-   tion par un terrain ayant la même composition que celui de 
 EMI13.1 
 la phase végétative. Titre maximum : 280 microgranmes/ml à 48 heure s. 



  Exemple4. 



   On effectue une fermentation comme dans les exemples 2 et 3, en remplaçant le terrain de 'la phase de production par un terrain de la composition suivante : 
 EMI13.2 
 
<tb> Saccharose <SEP> 20 <SEP> %
<tb> 
<tb> Dextrose <SEP> 10 <SEP> %
<tb> 
<tb> NaCo <SEP> 3 <SEP> %
<tb> 
<tb> Corn <SEP> steep <SEP> 20 <SEP> %.
<tb> 
 
 EMI13.3 
 (NH4)2S04 tecimique 3 %o 
 EMI13.4 
 
<tb> CaCo3 <SEP> 10 <SEP> %
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> Silicone <SEP> fluide <SEP> 1 <SEP> %
<tb> 
 
 EMI13.5 
 Titre maximum : 230 miorogrammés/ml après 24 heures. 



    Exemple   5. 



   On effectue une fermentation comme dans les exemples 2,3 et 4 en employant-, pour la phase de production, un terrain ayant la composition suivante : 
 EMI13.6 
 
<tb> Dextrose <SEP> 20 <SEP> %
<tb> 
<tb> NaCl <SEP> 3 <SEP> %
<tb> 
<tb> 
<tb> Corn <SEP> steep <SEP> 20 <SEP> %
<tb> 
 
 EMI13.7 
 . (NNjS04-echnique 3%, 
 EMI13.8 
 
<tb> CaCO3 <SEP> 10%
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> Silicone <SEP> fluide <SEP> 1 <SEP> %
<tb> 
   Tit re   maximum : 170 micregrammes /m1 après   24     heures.   

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  Exemple 6.      



   18 litres d'un bouillon de fermentation obtenu comme dans l'exemple 2 sont filtrés à l'aide d'un   supercel   comme co- adjuvant . Le Mycélium obtenu est extrait par agitation avec trois portions successives d'alcool butylique normal   rnesu-   rant respectivement 2-1, 5-1,5 litres. Le bouillon filtré   (17.100   litres) est extrait avec trois portions de butanol (total = 6,600 litres). Tous les extraits réunis et lavés à l'eau (2 litres) sont évaporés sous vide à une température inférieure à 40 C Du liquide concentré obtenu, on préci- pite l'antibiotique par addition d'éther de pétrole. 



  Rendement : 16,6 g. 



    Exemple 7*    
128 g d'antibiotique brut, obtenus selon un procédé analogue à celui de l'exemple 6, sont dissous dans 1250 cm3 d'une solution saturée de bicarbonate de .sodium. 



   Cette opération est effectuée en faisant passer un courant d'azote dans le   liquide ..   



   Après dilution avec un volume égal   d'eau,   la suspens sion est essorée et la solution brune obtenue est portée à pH 4,5 avec HCl 6 N (270 cm3). 



   L'antibiotique précipite sous forme d'acide libre, est séparé par essorage et séché. Rendement : 95   Bibliographie.   



   1) S.A. Waksman et H.A. Lechevalier, "Actionomyces and their antibiotics" - 1953. 



   2)   E.L.   Hazen et R. Brown, proc.Soc.Exptil Biol.lied. 76 
93 (1951). 



   3) J.w. Davisson et   al. :   Antibiotics of   Chemotherapy   1, 
289 (1951).      



   4)   F.Raubitschek   et al. Ibid. 2, 179 (1952). 

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  5)   S.Wakaki   et al.   J.Antibiotios   (Japon) 5 677   (1952).

Claims

6) J.Vandeputte et al.Antibiotics Annual 1955-56-p. 587. t RESUME.

L'invention vise : 1.- Un procédé pour la production d'un antibiotique ayant une action antifongique, comprenant l'emploi d'un Streptomycète de l'espèce Streptomyoes luconsis, décrite ci-dessus, ou d'une espèce dérivée de celui-ci par mutation, sa culture dans un terrain de nutrition contenant des sources de carbone assimilable, d'azote assimilable et des sels,'et l'isolement'de l'antibiotique antifongique du terrain de culture.

Ce procédé peut, en outre, comporter les caractéris- tiques suivantes, prises séparément ou en combinaisons : a) Il comprend l'accomplissement,d'une fermentation submergée, aérée et agitée du S. lucencis, ou d'une espèce dérivée de celui-ci par mutation, à une -température comprise entre 24 et 30 C et d'une durée de 2 à 6. juurs, et l'isole- ment consécutif de l'antibiotique produit dans le liquide de culture et dans le mycélium. b) L'antibiotique produit par le S. lucencis (FI 1163) est extrait avec de l'alcool butylique normal du terrain de culture, ou du mycélium, ou de tous les deux en même temps,- à un pH compris entre 2 et 8. c) Pour l'extraction de l'antibiotique, on emploie des solvants dans lesquels celui-ci présente une solubilité suffisante, comme les alcools, le chloroforme, les alcools aqueux, l'acétone aqueuse.

d) Le procédé comprend la solubilisation de prépara- tions de FI 1163-peu solubles ou partiellement solubles dans l'eau moyennant la formation du sel sodique de l'antibiotique. <Desc/Clms Page number 16> e) Le procédé comprend l'obtention de l' antibiotique de ses solutions aqueuses neutres ou légèrement alcalines par réglage du pH à une valeur comprise entre 3 et 6 et séparation du précipité obtenu, par essorage ou filtration.

2. - Comme nouvel antibiotique, un composé obtenu selon les points précédents (FI 1163), exerçant une action inhibitrice efficace sur le développement de champignons et de levures pathogènes, capables de former avec les métaux alcalins des sels solubles dans l'eau, qui est peu soluble dans l'eau sous forme d'acide libre, non salifiée, et dans cette dernière forme rapidement soluble dans l'alcool méthy- lique, éthylique, butylique, dans le chloroforme et dans des mélanges d'alcool ou d'acétone avec l'eau, qui présente des maxima d'absorption dans l'ultraviolet à 290, 304 et 318 millimicrons, le spectre d'absorption dans l'infrarouge représenté sur le dessin annexé, et qui est différent des autres produits connus exerçant une action antifongique,

parmi lesquels l'amphotérioine A, l'antimyooine, la chromine, la nistatine et la rimocidine, 3.- L'emploi du nouvel antibiotique antifongique FI 1163 pour obtenir des préparations commerciales destinées à la cure des maladies de l'homme, des animaux ou des plan- tes, provoquées par des organismes pathogènes sensibles à cet antibiotique.

4.- Comme composé nouveau, une nouvelle substance de caractère acide, exempte de soufre, appartenant au groupe des antibiotiques poliéniques aveo un chromophore tétraé- ayant, les propriétés chimiques, physiques et biolo- giques indiquées au point 2.