FR1465395A - Composé nouveau, la décoyinine et son procédé de fabrication - Google Patents

Description

Composé nouveau, la décoyinine et son procédé de fabrication.

La présente invention se rapporte à un composé et à ecn procédé de production. Elle concerne plus particulièrement un composé nouveau, la décoyinine (antibiotique a14) et son procédé de production.

La décoyinine est un produit d'élaboration de
Streptomyces hygroscopicus, var. decoyicus ayant la propriété de faire obstacle au développement de divers organismes, en particulier des bactéries et des mycètes. Elle se distingue des agents antibactériens et antibiotiques connus par ses spectres caractéristiques aux infra-rouges et aux ultraviolets, qui sont montrés respectivement sur les figures 1 et 2, par sa constitution élémentaire et par ses propriétés physiques et chimiques. La décoyinine a pour formule brute C11H13N5O4 et pour formule développée

TABLEAU I. - Comparaison Ektachrome

<tb> <SEP> Streptomyces <SEP> hygroscopicus
<tb> <SEP> Streptomyces <SEP> endus <SEP> Streptomyces <SEP> hydroscopicus
<tb> var. <SEP> decoyicus
<tb> NRRI <SEP> 2 <SEP> 339 <SEP> CBS(*)
<tb> <SEP> Milieu <SEP> NRRL <SEP> 2666 <SEP> NRRL <SEP> 2330 <SEP> CBS(A) <SEP>
<tb> <SEP> Surfaee <SEP> Envers <SEP> Surface <SEP> Envers <SEP> Surfaee <SEP> Envers
<tb> <SEP> Bennet............... <SEP> ..| <SEP> Blanc <SEP> gris <SEP> Beige <SEP> miel <SEP> Blanc <SEP> gris <SEP> Beige <SEP> miel <SEP> Gris <SEP> tâcheté <SEP> Beige <SEP> miel
<tb> <SEP> foncé <SEP> avec <SEP> blanc <SEP> foncé
<tb> <SEP> Czapek............... <SEP> Blanc <SEP> gris <SEP> Beige <SEP> miel <SEP> Blanc <SEP> gris <SEP> net <SEP> Beige <SEP> miel <SEP> pâle <SEP> Blanc <SEP> gris <SEP> net <SEP> Beige <SEP> miel <SEP> pâle
<tb> <SEP> avec <SEP> gris <SEP> tâcheté <SEP> de <SEP> gris <SEP> tâcheté <SEP> de <SEP> gris
<tb> <SEP> Maltose <SEP> tryptone....... <SEP> Blanc <SEP> gris <SEP> Beige <SEP> miel <SEP> Blanc <SEP> tacheté <SEP> Beige <SEP> miel <SEP> Blanc <SEP> gris <SEP> Beige <SEP> foneé <SEP>
<tb> <SEP> avec <SEP> gris <SEP> de <SEP> gris
<tb> <SEP> Peptone <SEP> fer <SEP> Blanc <SEP> Beige <SEP> miel <SEP> Blanc <SEP> Beige <SEP> miel <SEP> Blanc <SEP> Beige <SEP> miel
<tb> <SEP> Tyrosine <SEP> de <SEP> Waksman.. <SEP> Blanc <SEP> Incolore <SEP> Blanc <SEP> Beige <SEP> miel <SEP> pale <SEP> Blanc <SEP> Beige <SEP> miel <SEP> pale
<tb> <SEP> Caséine <SEP> amidon <SEP> Gris <SEP> Beige <SEP> miel <SEP> pille <SEP> Blanc <SEP> Beige <SEP> miel <SEP> pâle <SEP> Gris <SEP> tacheté <SEP> Beige <SEP> miel <SEP> pâle
<tb> <SEP> de <SEP> blanc <SEP> tâeheté <SEP> de <SEP> gris
<tb>
(*) CBS désigne le Central bureau voor Schimmelculture, Baarn, Hollande. Dans le tableau II ces microorganismes sont comparés d'après leur aptitude à utiliser les composés carbonés par le procédé de PRIDHAM et GOTTLIEB, J. Bact. 56 ; 107-114 (1948) avec les variantes notées dans le brevet de la République fédérale d'Allemagne n 1.042.841 du 23 avril 1959.

TABLEAU II
Assimilation duo carbone

<tb> 9 <SEP> 'a'
<tb> <SEP> Composés <SEP> carbonés <SEP> n
<tb> <SEP> 'O.
<tb> <SEP> ll <SEP> 'O <SEP>
<tb> <SEP> frZ
<tb> <SEP> Contril <SEP> témoin <SEP> (-) <SEP> (- > <SEP> (-)
<tb> <SEP> 1. <SEP> d-xylose <SEP> (+) <SEP> + <SEP> +
<tb> <SEP> 2. <SEP> 1-Arabinose <SEP> (+) <SEP> + <SEP> +
<tb> <SEP> 3. <SEP> Bhamnose <SEP> () <SEP> + <SEP> +
<tb> <SEP> 4. <SEP> d-Fraetose <SEP> .... <SEP> (+) <SEP> + <SEP> +
<tb> <SEP> 5. <SEP> diGalactose <SEP> . <SEP> . <SEP> . <SEP> (+) <SEP> + <SEP> +
<tb> <SEP> 6. <SEP> < 1-ElsItose <SEP> .. <SEP> (+) <SEP> + <SEP> +
<tb> <SEP> 7. <SEP> d-Manaose <SEP> . <SEP> . <SEP> + <SEP> + <SEP> +
<tb> <SEP> 8. <SEP> AGlaeose <SEP> (+) <SEP> + <SEP> +
<tb> <SEP> 9. <SEP> sacésrose- <SEP> (+) <SEP> (+) <SEP> (+)
<tb> <SEP> 10. <SEP> Lactose <SEP> + <SEP> + <SEP> . <SEP> +
<tb> <SEP> 11. <SEP> Ccllobioae <SEP> . <SEP> . <SEP> . <SEP> (+) <SEP> + <SEP> +
<tb> <SEP> 12. <SEP> R <SEP> ffinose <SEP> + <SEP> . <SEP> + <SEP> +
<tb> <SEP> 13. <SEP> Dextrine <SEP> . <SEP> . <SEP> + <SEP> + <SEP> +
<tb> <SEP> 14. <SEP> Innilue <SEP> + <SEP> (+) <SEP> (+)
<tb> <SEP> 15. <SEP> Amidon <SEP> soluble <SEP> + <SEP> (+) <SEP> (+)
<tb> <SEP> 16. <SEP> Glyeerine <SEP> () <SEP> + <SEP> +
<tb> <SEP> 17. <SEP> Dulcite <SEP> (+) <SEP> (+) <SEP> (+)
<tb> <SEP> 18. <SEP> d-lU <SEP> ..... <SEP> (+) <SEP> + <SEP> +
<tb> <SEP> 19. <SEP> ctSorbite <SEP> ... <SEP> ... <SEP> (+) <SEP> (+) <SEP> +
<tb> <SEP> 20. <SEP> d1nosite <SEP> ....... <SEP> (+) <SEP> (+) <SEP> (+)
<tb> 21. <SEP> S;dicine.......~... <SEP> Flirineo <SEP> (+) <SEP> (+) <SEP> (+)
<tb> <SEP> 22. <SEP> Phénol <SEP> - <SEP> - <SEP>
<tb> <SEP> 23. <SEP> Crésot <SEP> - <SEP> - <SEP>
<tb> <SEP> 24. <SEP> Formiate <SEP> de <SEP> sodimn <SEP> (-) <SEP> (-) <SEP> (-)
<tb> <SEP> 25. <SEP> OxaIatedesodi <SEP> (-) <SEP> (-) <SEP> (-)
<tb> <SEP> 26. <SEP> Tartrate <SEP> de <SEP> sodium <SEP> () <SEP> (-) <SEP> c-)
<tb> <SEP> 27. <SEP> Sdie <SEP> SaEsalate <SEP> de <SEP> sodann <SEP> - <SEP>
<tb> <SEP> 28. <SEP> Acétate <SEP> de <SEP> aodi <SEP> aaL <SEP> (+) <SEP> + <SEP> (+)
<tb> <SEP> 29. <SEP> Citrate <SEP> de <SEP> sodenin <SEP> (+) <SEP> + <SEP> +
<tb> <SEP> 30. <SEP> Slleemate <SEP> de <SEP> sodisn <SEP> (+) <SEP> (+) <SEP> +
<tb> + =assimilation positive.

-=assimilation négative.

(-)=assimilation négative, mais seulement légère croissance.

(+)=assimilation positive, mais seulement croissance légère.

Une culture du microorganisme vivant, ci-après identifié sous le nom de Streptomyces hygroscopicus, var. decoyicus, a été déposé à la Fermentation division, Northern Utilization Research Branch,
U.S. Department of Agriculture, Peoria, Illinois et inscrite à sa collection permanente sous la désignation de NRRL-2666.

Streptomyces hygroscopicus, var. decoyicus, est une variété nouvelle d'un actinomycète connu qui a été isolé d'un échantillon de terre prélevé à
Verdugo City, Californie. Ses cultures ont des mycélium aériens ramifiés, donnent des conidies en hyphes à enroulement serré provenant du mycelium aérien et forment des taches noires humides dans les zones de sporulation à mesure que la culture vieillit.

Streptomyces hygroscopicus, var. decoyicus montre d'étroites analogies avec Streptomyces enduis et
Streptomyces hygroscopicus CBS combine le montrent les tableaux I et 11. Dans le tableau I ces microorganismes sont comparés par la technique Dietz
Ektachrome (transparences sur pellicule positive en couleurs), notée dans Annals of the New York
Academy of Science, vol. 60, art. 1, p. 152 et 154, 29 octobre 1954.

(Voir tableau I, page précédente)
(Voir tableau ir, cotonne ci-contre)
Ni S. endus, ni S. hygroscopicus CBS dans des conditions propres à la production de décoyinine ne produisent cet antibiotique.

D'autres caractéristiques de Streptomyces hygroscopicus, var. décoyicus, sont énumérées dans le tableau m, qui montre le développement caractéristique du miero-organisme à 28 OC sur seize milieux normalisés.

(Voir tableau III, page suivante)
Sur saccharose-agar de Bennett et de Czapek
S. Hygroscopicus, var. decoyicus montre un bon développement végétatif et aérien à 18-28 C. A 37 OC le développement végétatif est bon mais plissé et pâteux avec des traces de mycelium aérien.

La culture ne se développe plus à 55 C.

S. hygroscopicus var. decoyicus est nettement différent des variantes de S. hygroscopicus dans la littérature à la fois pour ce qui concerne les caractéristiques du microorganisme et les antibiotiques produits. Ainsi3 bien que des variantes ou souches de S. hygroscopicus aient été signalées comme produisant d'autres antibiotiques, savoir les hygromycines, la marcomycine, la carbomycine, les hygroscopines et les angusmyeines, ces antibiotiques sont nettement differents de la décoyinine, comme le montre la comparaison suivante.

TABLEAU IV

<tb> Hygroscopine <SEP> A <SEP> C13H24H2O3
<tb> Hygroscopine <SEP> B <SEP> C15H28N2O3
<tb> <SEP> Carbomycine <SEP> C42H67NO16
<tb> <SEP> Hygromicine <SEP> C12H29NO12
<tb> <SEP> Hygromicine <SEP> B <SEP> C15H28N2O9 <SEP> - <SEP> 10
<tb> <SEP> Marcomycine <SEP> C15H30N2O9
<tb> Angustmycine <SEP> A <SEP> C15H18T20N6O5
<tb> Angustmycine <SEP> C <SEP> C11H15N5O5
<tb> <SEP> Decoyinine <SEP> C11H13N5O4
<tb>
Les angustmycines A et C qui sont signalées
TABLEAU III
Caractéristiques de développement

<tb> <SEP> milieu <SEP> (*) <SEP> Développement <SEP> Développement <SEP> <SEP> Autre <SEP>
<tb> <SEP> 1. <SEP> Agar <SEP> de <SEP> Bennett........................................ <SEP> Bon <SEP> Bon. <SEP> Tacheté <SEP> blanc <SEP> Envers
<tb> <SEP> à <SEP> gris, <SEP> à <SEP> noir <SEP> jaune <SEP> et <SEP> pigment
<tb> <SEP> 2. <SEP> Agar-saccharose <SEP> de <SEP> Czakep.............................. <SEP> Bon <SEP> Bon. <SEP> Deux <SEP> sortes <SEP> Envers <SEP> crème.
<tb> <SEP> de <SEP> colonies <SEP> Pigment <SEP> jaune <SEP> pâle
<tb> <SEP> a.avec <SEP> dév. <SEP> aérien <SEP> gris
<tb> <SEP> b. <SEP> blanc <SEP> craquelé
<tb> <SEP> 3. <SEP> Maltose-agar-tryptose................................... <SEP> Bon <SEP> Bon. <SEP> Deux <SEP> sortes <SEP> Envers <SEP> jaune <SEP> à <SEP> gris.
<tb> <SEP> de <SEP> colonies <SEP> Pigment <SEP> jaune
<tb> <SEP> a. <SEP> avec <SEP> dév.aérien <SEP> gris
<tb> <SEP> b. <SEP> blanc <SEP> craquelé
<tb> <SEP> 4. <SEP> Peptone-fer-agar....................................... <SEP> Assez <SEP> bon <SEP> Néant <SEP> Envers <SEP> et <SEP> pigment
<tb> <SEP> à <SEP> trace <SEP> blanche <SEP> jaunes
<tb> <SEP> 5. <SEP> 0,1 <SEP> % <SEP> tyrosine-agar..................................... <SEP> Assez <SEP> bon <SEP> Gris-blanc <SEP> net <SEP> Envers <SEP> et <SEP> pigment
<tb> <SEP> beige
<tb> <SEP> 6. <SEP> Caséine-amidon-agar................................... <SEP> Assez <SEP> bon <SEP> Traces <SEP> blanc-gris <SEP> Envers <SEP> incolore.
<tb>

<SEP> Bonne <SEP> hydrolyse
<tb> <SEP> de <SEP> l'amidon <SEP>
<tb> <SEP> 7. <SEP> Amidon <SEP> nutritif-agar.................................... <SEP> Assez <SEP> bon <SEP> Blanc <SEP> net <SEP> Envers <SEP> crème.
<tb>

<SEP> Bonne <SEP> hydrolyse
<tb> <SEP> de <SEP> l'amidon
<tb> <SEP> 8. <SEP> Lait <SEP> écrémé-agar....................................... <SEP> Bon <SEP> Blanc <SEP> net <SEP> Envers <SEP> crème.
<tb>

<SEP> Bonne <SEP> hydrolyse
<tb> <SEP> de <SEP> la <SEP> caséine
<tb> <SEP> 9. <SEP> Malate <SEP> de <SEP> calcium-agar.................................. <SEP> Assez <SEP> bon <SEP> Traces <SEP> blanc-gris <SEP> Envers <SEP> incolore
<tb> 10. <SEP> Glucose-asparagine-agar................................. <SEP> Assez <SEP> bon <SEP> Néant <SEP> Envers <SEP> incolore
<tb> 11. <SEP> Plaque <SEP> gélatine <SEP> simple..................................| <SEP> Assez <SEP> bon <SEP> | <SEP> Néant <SEP> | <SEP> Pigment <SEP> jaune.
<tb>

<SEP> Très <SEP> légère
<tb> <SEP> liquéfaction
<tb> 12. <SEP> Géatine <SEP> nutritive <SEP> simple................................. <SEP> Assez <SEP> bon <SEP> Néant <SEP> Pigment <SEP> jaune.
<tb>

<SEP> Très <SEP> légère
<tb> <SEP> liquéfaction
<tb> 13. <SEP> Bouillon <SEP> de <SEP> tryptone.................................... <SEP> Assez <SEP> bon <SEP> flo- <SEP> Néant
<tb> <SEP> culant <SEP> àlabase <SEP>
<tb> 14. <SEP> Lait <SEP> de <SEP> tournesol....................................... <SEP> Assez <SEP> bon <SEP> Traces <SEP> blanc-gris <SEP> Pas
<tb> <SEP> de <SEP> peptonisation.
<tb>

<SEP> Pas <SEP> de <SEP> changement
<tb> 15. <SEP> Bouillon <SEP> nutritif <SEP> nitrate.................................. <SEP> Assez <SEP> bon <SEP> flo- <SEP> Néant <SEP> Pas <SEP> de <SEP> réduction
<tb> <SEP> culant <SEP> à <SEP> la <SEP> base
<tb> 16. <SEP> Bouillon <SEP> nitraté <SEP> synthétique.............................. <SEP> Assez <SEP> bon. <SEP> Très <SEP> légères <SEP> Pas <SEP> de <SEP> réduction
<tb> <SEP> Peu <SEP> de <SEP> colonies <SEP> traces <SEP> blanches <SEP>
<tb> <SEP> superfloculant
<tb> <SEP> à <SEP> la <SEP> base
<tb> (*) Les milieux sont notés dans le brevet de la République fédérale d'Allemagne n 1.042.841 précité. comme produites par S. hygroscopicus 6A-704 par
H. Yuntsen et autres, dans Japan Journal of Antibiotics, série A, vol. 7, n 4, août 1954, p. 113 et 116
Japan Journal of Antibiotics, série A, décembre 1956, p. 195 et Bull. Chem. Soc. Japan, voL 21, n0 4, p. 261-262, 1957, diffèrent également par d'autres aspects signifieatifs comme le montre le tableau V suivant.

TABLEAU V

<SEP> Composé <SEP> caractéristique <SEP> Decoyinine <SEP> Angustmycine <SEP> A <SEP> Angustmycine <SEP> B
<tb> <SEP> Formule <SEP> empirique................ <SEP> ....... <SEP> ........... <SEP> C11H13N5O4 <SEP> C14H18-20N6O5 <SEP> C11H15N5O5
<tb> <SEP> % <SEP> d'azote <SEP> dans <SEP> cristaux <SEP> anhydres <SEP> .. <SEP> .| <SEP> 25.03 <SEP> 23.60 <SEP> 23.19
<tb> <SEP> Point <SEP> de <SEP> fusion <SEP> des <SEP> cristaux <SEP> anhydres..... <SEP> .......... <SEP> 183-186 C <SEP> 169.5-171 C <SEP> 202-204 C
<tb> <SEP> Propriétés <SEP> optiques..... <SEP> . <SEP> .......... <SEP> ............. <SEP> actif <SEP> actif <SEP> actif
<tb> <SEP> Équivalent <SEP> de <SEP> titrage <SEP> .......... <SEP> <SEP> ......... <SEP> <SEP> 283 <SEP> 340 <SEP> 307 <SEP>
<tb> <SEP> Poids <SEP> moléculaire <SEP> déterminé.............. <SEP> .. <SEP> ........ <SEP> 215-216 <SEP> 350-352 <SEP> 297
<tb> <SEP> Portion <SEP> probable <SEP> de <SEP> sucre.... <SEP> ...... <SEP> ..... <SEP> .... <SEP> C6H12O5 <SEP> C8H19O5 <SEP> inconnu <SEP> ou <SEP> non <SEP> cité
<tb> <SEP> Formes <SEP> à <SEP> l'acétylation..... <SEP> . <SEP> .................... <SEP> Pentacétyle <SEP> Triacétyle, <SEP> inconnues
<tb> <SEP> pt.f. <SEP> = <SEP> 152 <SEP> - <SEP> 153 C <SEP> pt. <SEP> f. <SEP> 188-188.5 C <SEP> ou <SEP> non <SEP> citées
<tb> <SEP> Tétraeétyle, <SEP> Tétracétyle,
<tb> <SEP> pt. <SEP> f. <SEP> 65 C <SEP> pt. <SEP> f. <SEP> 188-189 C
<tb> <SEP> Triacétyle,
<tb> <SEP> pt. <SEP> f. <SEP> 188-189 C
<tb> <SEP> Formes <SEP> à <SEP> l'hydrogénisation........ <SEP> ........ <SEP> ........ <SEP> Dihydro. <SEP> Forme
<tb> <SEP> pt. <SEP> f. <SEP> 205-208 C <SEP> dihydro <SEP> seulement
<tb> pt. <SEP> f. <SEP> 153-154 C
<tb> <SEP> Désoxydihydro,
<tb> <SEP> pt. <SEP> f. <SEP> 150-153 C
<tb> <SEP> Les <SEP> deux <SEP> formes
<tb>
Le microorganisme dit S. hygroscopicus n 6A-706 qui donne les angustmycines est également nettement différent de S. hygroscopicus var. decoyicus.

Les différences d'assimilation du earbone sont indiquées par le tableaulVi.

TABLEAU VI
Assimilation du carbone

<tb> <SEP> S. <SEP> hygroscopicus <SEP> S. <SEP> hygroscopicus
<tb> <SEP> var. <SEP> 6 <SEP> A-704(*) <SEP> var. <SEP> decoyicus <SEP> (**)
<tb> Témoin............... <SEP> - <SEP> (-)
<tb> d-xylose....... <SEP> ... <SEP> - <SEP> (+)
<tb> 1-arabinose........... <SEP> - <SEP> (+)
<tb> Rhamnose <SEP> ........- <SEP> (-)
<tb> d-galactose............ <SEP> # <SEP> <SEP> (+)
<tb> d-glucose............. <SEP> + <SEP> (+)
<tb> Saccharose........... <SEP> # <SEP> <SEP> (+)
<tb> Lactose.... <SEP> ........ <SEP> # <SEP> <SEP> +
<tb> Raffinose.............. <SEP> + <SEP> (-) <SEP> +
<tb> d-mannite... <SEP> ....... <SEP> + <SEP> (+)
<tb> dI-inosite... <SEP> ..... <SEP> - <SEP> (+)
<tb> Salicine... <SEP> ..... <SEP> .... <SEP> - <SEP> (+)
<tb> (*)++=croissance bonne et utilisation positive.

+=croissance assez bonne et assimilation positive
#=croissance faible, assimilation probablement positive
(-)=parfois pas croissance, utilisation non définie
-=pas de croissance ni d'utilisation (**)+=assimilation positive
-=assimilation négative, pas de croissance
(-)=légère croissance, pas d'assimilation
(+) assimilation positive, legère croissance seulement
Les différences dans les caractéristiques de crois sance sont montrées dans le tableau VII.

(Voir tableau vii, page suivante)
Le spectre antibactérien in vivo de la décoyinine est monté dans le tableau VIII.

(Voir tableau Vln; page suivante)
La décoyinlne possède également une activité prononcée contre les microorganismes suivants
Bactéries
Mycobacterium ranae;
Mycobacterium phlei;
Diplococcus pneumoniae;
Streptoccus hemolyticus;
Staphylococcus aureus;
Pseudomonas aeruginosa.

Actinomycètes:
Nocardia asteroïdes.

Mycètes
Trichophyton rnbrum;
Histoplasma capsulatum;
Blastomyces dermatitidis.

On peut produire la décoyinine par culture de
S. hygroscopicus, var. decoyicus ou d'une de ses variantes produisant de la décoyinine dans un milieu nutritif aqueux dans des conditions aérobies submergées et de préférence dans un milieu nutritif contenant un hydrate de carbone assimilable et un
TABLEAU VII

<tb> <SEP> Microorgsnisme <SEP> S. <SEP> hygroscopiew <SEP> S. <SEP> hpgroscopicus
<tb> <SEP> var. <SEP> decoyicus
<tb> <SEP> s <SEP> sar. <SEP> decogieus
<tb> <SEP> Milieu <SEP> NRRL2 <SEP> 666 <SEP> var, <SEP> 6 <SEP> A
<tb> Glucosgpsrae-qar <SEP> ........ <SEP> Pasdecroissanceaérienne <SEP> Croissance <SEP> aérienne <SEP> blanc <SEP> poudreux
<tb> Tyrosiabagar....... <SEP> ...... <SEP> - <SEP> Pigment <SEP> Pas <SEP> de <SEP> pigment <SEP> soluble
<tb> Plaque <SEP> gélatine........... <SEP> ................... <SEP> gélatine <SEP> Pigment <SEP> jaune <SEP> Pas <SEP> de <SEP> pigment <SEP> soluble <SEP> formé
<tb> Agar <SEP> de <SEP> Bennett............ <SEP> ................ <SEP> Bennett <SEP> Envers <SEP> et <SEP> pigment <SEP> jaunes <SEP> Croissance <SEP> brune,
<tb> <SEP> pas <SEP> de <SEP> pigment <SEP> soluble
<tb>
TABLEAU VIII Efficacité thérapeutique de la décoyinine sur des souris infectées expérimentalement

<tb> <SEP> Microorganisme <SEP> Voie <SEP> d'administration <SEP> CD50 <SEP> de <SEP> décoyinine
<tb> <SEP> mg/kg
<tb> S. <SEP> Hemolyticus....................................... <SEP> Sub <SEP> Q <SEP> 22,5 <SEP> (14,8 <SEP> - <SEP> 30,2)
<tb> <SEP> Orale <SEP> 50,0 <SEP> (39,0 <SEP> - <SEP> 61,0) <SEP>
<tb> S. <SEP> Aureus............................................| <SEP> Sub <SEP> Q <SEP> | <SEP> 200
<tb> <SEP> Orale <SEP> 83 <SEP> (57 <SEP> - <SEP> 109)
<tb> D. <SEP> Pneumoniae.......................................| <SEP> Sub <SEP> Q <SEP> | <SEP> 400
<tb> <SEP> Orale <SEP> 800
<tb> D. <SEP> Pneumoniae <SEP> III....................................| <SEP> Sub <SEP> Q <SEP> | <SEP> 400
<tb> <SEP> Orale <SEP> 800
<tb> K. <SEP> Pneumoniae.......................................| <SEP> Sub <SEP> Q <SEP> | <SEP> 400
<tb> <SEP> Orale <SEP> 800
<tb> P. <SEP> Multocida.........................................| <SEP> Sub <SEP> Q <SEP> |305 <SEP> (225 <SEP> - <SEP> 385)
<tb> <SEP> Orale <SEP> 238 <SEP> (163 <SEP> - <SEP> 313)
<tb> P. <SEP> Vulgaris..........................................| <SEP> Sub <SEP> Q <SEP> | <SEP> 400
<tb> <SEP> Orale <SEP> 800
<tb> P. <SEP> Aeruginosa........................................ <SEP> Sub <SEP> Q <SEP> 355(287 <SEP> -423) <SEP>
<tb> <SEP> Orale <SEP> 161 <SEP> (96 <SEP> - <SEP> 226)
<tb> S. <SEP> Paratyhi <SEP> B........................................| <SEP> Sub <SEP> Q <SEP> | <SEP> 482
<tb> <SEP> Orale <SEP> 404
<tb> S. <SEP> Typhi............................................| <SEP> Sub <SEP> Q <SEP> | <SEP> 400
<tb> <SEP> Orale <SEP> 800
<tb> E. <SEP> Coli..............................................| <SEP> Sub <SEP> Q <SEP> | <SEP> 119
<tb> <SEP> Orale <SEP> 86 <SEP>
<tb> composé azoté ou une matière protéique. Bien qu'on dispose d'un certain nombre de milieux appropriés (certains milieux de culture sont préférables), pour des raisons d'économie de production, de maximum
de rendement et de facilité d'isolement, les sources
actuellement préférées d'hydrates de carbone sont le glycose, la dextrine, les mélasses, la farine de
mais (raffinée et brute) et l'amidon (bluté et soluble)
ainsi que leurs mélanges. D'autres sources appro
priées de carbone sont le maltose, le galactose, la
mannite, l'huile de soja, les huiles animales et végétales, etc. Les sources preférées d'azote sont les
sources de protéines comme la farine de graine de coton, la farine de soja, la farine de poisson, la farine de soja dégraissée, la peptone, etc. D'autres
sources appropriées sont la farine d'arachide, la levure de bière (cellules de levure sèches obtenues d'une liqueur de fermentation) ou l'extrait de mals, la farine de gluten de mais, Ia liqueur de trempage du mais, l'extrait de poisson, les extraits animaux, les produits solubles des distilleries, la trypticase, la tryptone, l'extrait de boeuf, la N-Zamine A, la N-Z-amine B, le lait et les produits de l'oeuf protéolisés, etc. On peut avantageusement utiliser des mélanges de deux ou plusieurs de ces sources d'azote.

On peut avantageusement incorporer dans le milieu des sels minéraux nutritifs tels que les phosphates, sulfates, etc. de sodium, de potassium et de calcium. On peut également introduire des traces d'éléments essentiels comme le zinc, le magnésium, le manganèse, le cobalt, le fer, etc. pour le développement de Streotomyoes hygroscopicus decoyicus. Ces traces d'éléments sont commu nément apportées sous forme d'impuretés accidentelles par les constituants ajoutés au milieu.

Dans un procédé préféré de fermentation du microorganisme S. hygroscopicus var. decoyicus le milieu de culture est maintenu à une température comprise entre environ 24 et 37 OC. L'inoculum est de préférence soumis à l'incubation à environ 28 OC et la cuve de fermentation ensemencée soumise à une incubation à environ 28-32 OC pendant une période d'environ deux à sept jours jusqu'à ce qu'il y ait dans le bouillon de culture assez de décoyinine pour qu'on la recueille.

Pour fournir la croissance et le développement maxima de S. hygroscopicus var. decoyicus, le milieu de culture, avant ensemencement au moyen du microorganisme, doit être réglé à un pH d'environ 6,5 à 7,6. Le pH est avantageusement réglé très proche de Ia neutralité au cours de la fermentation.

Les conditions de culture aérobie submergées sont celles de choix pour la production de grandes
quantités de décoyinine. Pour la préparation de
quantités limitées on peut utiliser des fioles et des
bouteilles de cultures secouées. Quand on effectue la culture dans de grands récipients et réservoirs,
il est préférable d'utiliser la forme végétative du
microorganisme pour l'ensemencement de manière
à éviter un trou important dans la production
de décoyinine et ainsi une utilisation déficiente de l'installation. Il est ainsi désirable de produire
d'abord un inqculum végétatif du microorganisme en ensemençant une quantité relativement petite de milieu de culture, au moyen d'une matière obtenue par grattage d'une plaque d'agar nutritif ou d'une partie aliquote d'une culture sur terre et, quand on a obtenu un inoculera végétatif jeune et actif, transférant cet moculum végétatif de manière aseptique dans de grandes cuves ou de grands récipients. Le milieu dans lequel l'inoculum végétatif est produit peut être identique ou différent de celui utilisé pour la production de la décoyinine.

La vitesse de production de la décoyinine et sa concentration dans le milieu de culture sont facilement suivies au cours de la période de développe. ment du micro organisme en essayant des échantillons du milieu de culture pour déterminer leur activité antibactérienne contre un microorganisme connu pour être susceptible à la décoyinine, savoir Mycobactertum phlei, par diffusion normale sur agar, par essai turbidimétrique ou par essai chroma tographique sur papier suivi d'essai aux ultraviolets. En général la production maximum de décoyinine après ensemencement du milieu de culture se produit en deux à dix jours quand on opère en culture aérobie submergée.

S. hygroscopicus var. decoyicus, par fermentation, produit de la décoyinine, de la psicofuranine et de l'adénine. L'adénine est un composé ancien connu qui ne possède pas d'activité antibiotique. La psico. furanine est une matière antibiotique nouvelle ayant un pouvoir rotatoire (ot)25 dans le diméthylformamide de - 680 et la formule développée sui vante

En raison de l'activité biologique de la décoyinine à la fois in vitro et in vivo l'antibiotique est utile dans de nombreuses affections humaines.

La décoyinine peut être utilisée pour prévenir le développement ou réduire le nombre de microorganismes présents dans divers milieux. Par exemple les solutions de lavage contenant de la décoyinine sont intéressantes à des is hygiéniques comme le lavage des mains et le nettoyage d'installations, de sols ou d'ameublement de pièces ou de laboratoires infestés. On peut également l'utiliser comme agent industriel de préservation, par exemple comme agent bactériostatique de rincage des vêtements lavés ou pour imprégner des papiers et des étoffes.

La décoyinine peut également être utilisée à titre de supplément alimentaire pour activer le développement des animaux et des volailles, seule ou en association avec d'autres antibiotiques. Son utilisation est également indiquée à titre d'additif pour les milieux pyélographiques, dans les chambres de tuberculeux, dans la stérilisation des instruments et l'utilisation dans les milieux biologiques. La décoyinine peut être également utilisée dans l'enseignement, la recherche et l'analyse.

La dose léthale pour 50 % des cas, ou DL50, chez la souris, par voie orale et par voie hypodermique, est supérieure à 2 500 mg/kg. La dose maximum tolérée par voie orale est supérieure à 800 mg/kg et par jour pendant au moins une période de quatre jours.

La décoyinine, y compris ses dérivés ici décrits, est utile pour combattre les maladies causées par les infections bactériennes et cryptogamiques chez les animaux. Pour l'utiliser, on associe l'antibiotique à un véhicule pharmaceutique qui peut être une matière solide, une poudre ou un liquide. Les compositions peuvent être sous forme de comprimés, de comprimés effervescents, de poudres, de granules, de capsules (en gélatine dure ou molle), de suspensions dans des huiles comestibles, de suspensions aqueuses ou autres formes dosées particulièrement propres à l'administration par voie orale. On utilise des diluants liquides dans des conditions stériles pour l'utilisation par voie parentérale.

En raison de son activité bactéricide prononcée et de sa faible toxicité la décoyinine et ses dérivés sont utiles comme agents dans le traitement de diverses maladies, spécialement celles qui sont provoquées par les streptocoques et les staphylo. coques.

La décoyinine peut être enlevée du milieu de culture par des techniques d'extraction ou d'adsorption comme l'adsorption par le carbone ou autre adsorbant capillaire suivie d'élution par un solvant approprié. On donne la préférence aux procédés d'extraction par solvant pour la production indus. trille étant donné qu'ils sont moins longs et moins coûteux et fournissent des rendements plus élevés.

Dans un procédé d'extraction en vue de la récupération de la décoyinine du milieu nutritif fermenté, on filtre le bouillon entier à un pH acide, de préfé rente d'environ 2. On règle le fdtrat limpide du côté alcalin, de préférence à pH 10 environ et on procède à son adsorption sur un adsorbant tel que le carbone, de préférence activé à environ 1%. On délaye le gâteau dans un solvant organique, comme l'acétone, on sépare le solvant du gâteau et on distille le solvant sous forme d'un concentré aqueux qu'on filtre, qu'on neutralise et sèche par congélation.

On redissout la matière ainsi séchée dans l'eau

dans laquelle R est un groupe acyle d'un acide hydrocarboné carboxylique de 2 à 12 atomes de carbone inclus, un groupe acyle d'un acide hydrocarboné carboxylique de 2 à 12 atomes de carbone à substituant halo, nitro, hydroxy, amino, cyano, thiocyano ou alcoxy inférieur ou un groupe alcoxycarbonyle inférieur.

Les dérivés tétra- et penta-acylés peuvent être représentés par Ia formule

dans laquelle R est un groupe acyle d'un acide hydrocarboné carboxylique de 2 à 12 atomes de carbone inclus, un groupe acyle d'un acide hydrocarboné carboxylique de 2 à 12 atomes de carbone inclus à substituants - halo, nitro, hydroxy, amino, cyano, tbiocyano ou alcoxy inférieur ou alcoxycarbonyle inférieur et R' est de l'hydrogène ou un radical acyle d'un acide hydro-carboné carboxylique de 2 à 12 atomes de carbone inclus, un groupe acyle d'un acide hydrocarboné carboxylique de 2 à 12 atomes de carbone inclus à substituants halo, nitro-hydroxy, amino, cyano, thiocyano ou alcoxy inférieur ou un groupe alcoxycarbonyle inférieur.

Le triacylate de décoyinine peut être désacylé au moyen d'ammoniac de manière à produire une décoyinine purifiée, et hydrogéné pour produire du triacylate de dihydrodécoyinine qui peut être représenté par la formule développée

dans laquelle R a la même signification que celle donnée précédemment pour le triacylate de décoyi- nine. En même temps que le triacylate de dihydro. décoyinine, se forme le diacylate de, anhydrodihy. drodecoyinine de formule développée.

dans laquelle R a la même signification que celle précédemment donnée pour le triacylate de décoyinine. On a des preuves que l'hydrogénolyse inter- vient en position 4 sans qu'il y ait impossibilité qu'elle intervienne en position 1 ou 3. Le triacylate de dihydrodécoyinine et le diacylate de anhydro dihydrodecoyimne peuvent être désacylés au moyen d'ammoniac en donnant la dihydrodécoyinine et la anhydrodihydrodecoyinine. On peut éventuellement acyler la dihydrodécoyinine et la anhydrodihydrodecoyinine de la manière précédemment indiquée pour Ia décoyinine en produisant des tri-, tétra- et penta-dihydrodécoyinines et des di-, tri- et tétraacylates de anhydrodihydrodecoyinine.

Les acylates décrits ci-dessus sont intéressants pour améliorer la qualité de la décoyinine et de la déhydro- et anhydrodihydrodecoyinine. Par exemple les acétates peuvent être séparés des composés originaux par distribution en contre-courant en raison de la différence dans les valeurs K. Après séparation les acétates peuvent être convertis à nouveau en composés originaux comme décrit ci-dessus, ce qui purifie le composé original.

L'expression de K groupe acyle d'acide hydrocarboné carboxylique de 2 à 12 atomes de carbone utilisée dans Ia présente description désigne un groupe acyle correspondant à un acide hydrocarboné carboxylique de deux à douze atomes de carbone incIus. Des acides appropriés de ce type comprennent (a) un acide carboxylique aliphatique saturé ou non-saturé à chaine droite ou ramifiée tel que les acides acétique, propionique, butyrique, isobutyrique, butylacétique tertiaire, valérique, isovaIé- rique, caprotque, caprylique, déeanoique, do dé ca- noique, acrylique, crotonique, hexynolque, hepty nolque, octynoique, etc.; (b) un acide carboxylique cycloaliphatique saturé ou non-saturé tel que les acides cyclobutane-carboxyllque, cyclopentane-car. boxylique, méthylcyclopentène-carboxylique, cy clohexanesarboxylique, diméthylcyclohesène-ear- boxylique, dipropyl-cyclohexane-carboxylique, etc.; (c) un acide carboxylique aliphatique saturé ou non-saturé à substituant cycloaliphatique, par exempie les acides cyclopentane-acétique, cyclopentanepropionique, cyclopentèneacétique, cyclohexanebutyrique, méthylcyclohexane-acétique, etc.; (d) un acide carboxylique aromatique comme les acides benzoique, toluique, naphtoique, éthylben zoSque, isobutylbenzoïque, méthylbutylbenzoique, etc. et (e) un acide carboxylique aromatique-alipha- tique comme les acides phénylacétique, phénylpropionique, phénylvalérique, cinnamique, phénylpropiolique, naphtylacétique, etc.

L'expression de a groupe acyle d'un acide hydrocarboné carboxylique 2 à 12 atomes de carbone inclus à substituant halo, nitro, hydroxy, amino, cyano, thiocyano et alxocy inférieur désigne un groupe acyle d'acide carboxylique comme ci-dessus défini portant comme substituants un ou plusieurs atomes d'halogène ou groupes nitro-hydroxy, amino, cyano, thiocyano ou alcoxy inférieur. On entend par groupe alcoxy inférieur un groupe alcoxy d'un à six atomes de carbone inclus tel que méthoxy, éthoxy, propoxy, butoxy, pentyloxy, hexyloxy et leurs formes isomères. Des exemples de groupes acyle d'acides hydrocabonés carboxyli- ques substitués entrant dans la définition ci-dessus sont les groupes acyle correspondant aux acides chioracétique, chloropropionique, bromobutyrique, iodovalérique, chloro.cyclohexane.carboxylique, o-, m- et p-chlorobenzoïque, ainsi que, salicylique, p-hydroxybenzolque, o-, m- et p.nitrobenzotque, cyanoacétique, thiocyanoacétique, cyanopropionique, lactique, la glycine, l'acide éthoxyformique (hémicarbonate d'éthyle), etc.

L'hydrolyse de la décoyinine, la dihydrodécoyinine et la désoxydécoyinine provoque le clivage de la portion sucre. La portion sucre séparée de la décoyinine possède trois hydroxyles acylables, celle qui est séparée de la dihydrodécoyinine en contient également trois et celle qui est séparée de la anhydrodihydrodecoyinine deux seulement. Ces sucres nouveaux peuvent être acylés de la manière décrite ci-dessus pour la décoyinine en fournissant des esters propres à l'amélioration de la qualité des sucres ou la protection des groupes hydroxyle quand le sucre est utilisé comme intermédiaire par exemple dans la préparation d'autres N-glucosides.

On obtient des polyols nouveaux en hydrogénant la portion sucre de la décoyinine, la dihydrodé coyinine et la anhydrodihydrodecoyinine à l'aide de nickel de Raney à titre de catalyseur. Ces polyols nouveaux peuvent être utilisés à la place de substances telles que la sorbite, la mannite et la pentaérythrite comme agents de pulvérisation dans les compositions pharmaceutiques, agents humectant et édulcorant pour le tabac, la colle, des lotions et des crèmes, etc., et comme plastifiants. Comme les polyols antérieurs ces polyols nouveaux sont également convertis en agents surfactifs utiles comme détersifs et comme agents mouillants par monoacylation à l'aide de radicaux acides gras à chaine longue comme les acides laurique, palmitique, stéarique et oléique. De même les polyacylates comme le distéarate peuvent être utilisés comme bases d'onguents. Le monoester de l'acide caprique, préparé et formulé selon les brevets des États
Unis d'Amérique nO 2.357.077 du 29 août 1944 et nO 2.357.078 du 29 août 1944 est utile comme insecticide. Les esters formés à l'aide des acides des huiles siccatives comme l'huile de lin, préparés selon Industrial and Engineering Chemistry, 37, 809-812 (1945) sont intéressants comme huiles siccatives dans les vernis et analogues.

La méthanolyse provoque la séparation d'adénine de la décoyinine. Les essais effectués montrent que la portion sucre de la décoyinine a pour formule C6H12Os alors que l'angustmycine A donne C5X10O5.

Le borohydrure de sodium ne réduit pas la décoyi nine ce qui montre l'absence d'un sucre aldo-cétose comme on le trouve dans l'hygromycine.

La décoyinine se présente sous forme d'un hydrate cristallin, préparation 2e, ayant un point de fusion de 124-128 OC et de cristaux anhydres, préparation 2f, ayant un point de fusion de 183-186 OC. La décoyinine est également caractérisée par un maximum aux ultra-violets à 258 millîmicrons, a = 56, de la matière cristalline anhydre dans une solution alcoolique d'acide sulfurique N/100 comme il est montré dans la figure 2. (o = + 180 6 dans le diméthylformamide et + 370 dans le sulfoxyde de diméthyle.

Le spectre des infra-rouges montre des bandes multiples OH/NH ainsi qu'une série de bandes indiquant une structure du noyau de la purine comme il est montré sur la décoyinine cristalline anhydre dans la figure 1. Le spectre d'absorption des infra-rouges de la décoyinine dans une suspension dans l'huile minérale montre des bandes d'adsorption caractéristiques exprimées par les fréquences : 3 420, 3 390, 3 300, 3 170, 3 070, 2 710, 2 640, 1 690, 1 672, 1 655, 1 645, 1 605, 1 573, 1 565, 1 515, 1 420, 1 335, 1 310, 1 300, 1 280, 1 238, 1 218, 1 181, 1 143, 1 102, 1 094, 1 085, 1 073, 1 060, 1 047, 1 013, 985, 965, 915, 883, 838, 815, 790, 772, 746 et 725 cm-1.

Il est bien entendu que le présent brevet ne couvre pas les applications thérapeutiques des produits obtenus.

Les exemples suivants illustrent le procédé et les produits selon l'invention mais ne sont pas limitatifs. Tous les pourcentages sont exprimés en poids et toutes les proportions des mélanges de solvants en volumelvolume, sauf indication contraire
Exemple 1. - A. Fermentation au laboratoire.

On cultive S. hygroscopicus var. decoyicus
NRRL 2 666 à 28 C sur des plaques stériles du milieu suivant.

Maltose, 10 g;
Tryptone, 5 g;
Phosphate dipotassique, 0,5 g;
Chlorure de sodium, 0,5 g;
Sulfate de fer hydraté, traces;
Agar-agar, 15 g;
Eau distillée, q.s.p., 1 litre.

La durée de la culture est de sept jours; la sporulation est alors complète. On utilise les spores provenant d'une telle plaque d'agar pour ensemencer 100 mi du milieu suivant placé dans un ballon de 500 ml.

Glucose, 25 g;
Peptone du soja, 10 g
Extrait soluble du mais, 3 g;
Extrait de levure, 3 g;
N-Z-amine A* (produit de digestion enzymique de la caséine), 2 g;
Sulfate d'ammonium, 3 g;
Sulfate de magnésium, 0,2 g;
Chlorure de sodium, 0,1 g;
Sulfate de fer hydraté, 0,02 g;
Sulfate de manganèse hydraté, 0,003 g;
Sulfate de zinc hydraté, 0,004 g;
Phosphate monopotassique, 1,9 g;
Phosphate dipotassique, 1,1 g;
Eau, q.s.p., 1 litre;
Réglage à pH 7,2 avant stérilisation.

* Produit de digestion enzymique de la caséine.

On soumet à l'incubation pendant soixantedouze heures à 28 OC sur un appareil rotatif de secouage à 250 trlmn.

On utilise la culture ainsi obtenue pour ensemen cer le milieu de fermentation stérile suivant
Kay-soy* , 30 g;
Sulfate d'ammonium, 5 g;
Glycérine, 40 g;
Cérélose, 20 g;
Carbonate de calcium, 4 g;
Eau, q.s,p., titre;
pH ajusté à 7,2 avant stérilisation.

* (Farine de soja dégraissée, finement broyée puis soumise à l'incub ation dans des portions aliquotes de 100 mi dans des erlenmeyers de 500 mi pendant cinq jours (à 30 OC) sur un appareil rotatif (250 trlmn) de secouage.

On fractionne une partie aliquote du bouillon entier par chromatographie sur papier. On situe la zone de décoyinine par bio-autographie à l'aide de
Mycobacterium phlei. Les zones de la psicofuranine et de l'adénine qui figurent également dans le bouillon entier, sont déterminées au moyen d'un spectrophotomètre de Cary par leur absorption à 262 m.

Les mobilités relatives (Rf) des fractions dans un système Solvant consistant en 81 % de n-butanol, 2 % de pipéridine et 17 % d'eau sont de 0,37 pour la décoyinine, 0,13 pour la psicofuranine et de 0,25 pour l'adénine.

Exemple 2. - A. Fermentation industrielle.

Le milieu ensemencé dans un ballon de 500 mi comme il a été dit dans l'exemple 1 est soumis à l'incubation pendant quarante-huit heures à 30 OC.

On en prélève 75 mi pour ensemencer 12 litres de même milieu dans une fiole. On agite cette fiole au moyen d'un agitateur tournant à 280 trlmn en envoyant 6 litres d'air par minute et on fait fermenter à 30 OC pendant deux jours et on utilise le bouillon comme inoculum pour 250 litres d'un milieu final de fermentation stérile ayant la même composition que celui utiIisé dans l'exemple 1, dans un réservoir de 380 litres. On règle le milieu de pH 7,2 au moyen de NaOH puis on stérilise. Le pH après stérilisation est de 7,8. Qn agite la cuve de fermentation à l'aide d'une turbine ouverte à 280 trime en aérant à raison de 100 litres d'air par minute et laissant fermenter à 30 OC pendant quatre jours; on récolte alors la décoyinine.

B. Extraction de la décoyinine cristallisée brute.

On règle le bouillon entier, soit 250 litres, à pH 2,0 au moyen d'acide sulfurique, on ajoute 10 kg de diatomite et on filtre la matière. On mélange le filtrat avec 0,5 kg de carbone activé et 0,725 kg de diatomite et on filtre le mélange. On rejette le filtrat limpide; la décoyinine se trouve dans le carbone activé. On soumet le gâteau de carbone à l'éluvion à trois reprises à l'aide de 19 litres chaque fois d'acétone pour enlever la décoyinine. On concentre la solution acétonique à 38-48 OC en une solution aqueuse de 4 litres. On règle la solution aqueuse au moyen de 13 mi d'acide sulfurique concentré à pH 7,0 puis on sèche par congélation, ce qui donne 414 g de décoyinine brute solide. On dissout la matière séchée par congélation dans 2 litres d'eau à 50 OC et on laisse refroidir à la température ambiante pour effectuer la cristallisation de la décoyinine cristallisée brute, préparation 2a, dont le point de fusion est de 198-200 OC.

C. Fractionnement de la décoyinine cristallisée brute,
On fractionne 1 g de la préparation 2a par distribution en eontre-courant de Craig en utilisant un système solvant formé de parties égales de n-butanol et d'eau dans 150 transferts. On obtient trois fractions qui par évaporation du solvant donnent les produits cristallisés indiqués dans le tableau X.

(Voir tableau X, page suivante)
D. Autres fractionnements de la décoyinine cristallisée brute.

Une partie aliquote de 1 g de décoyinine cristanisée brute cristallisée préparée par le procédé de
TABLEAU X

<tb> <SEP> Psicofuranine <SEP> | <SEP> Décoyinine <SEP> | <SEP> Adénine
<tb> <SEP> Préparation <SEP> 2 <SEP> b <SEP> Préparation <SEP> 2 <SEP> e <SEP> Préparation <SEP> 2 <SEP> d
<tb> Fraction....................................................... <SEP> 1 , <SEP> K <SEP> = <SEP> 0,282 <SEP> 2 , <SEP> K <SEP> = <SEP> 0,705 <SEP> 3 , <SEP> K <SEP> = <SEP> 1,5
<tb> Poids <SEP> récupéré, <SEP> mg.............................................. <SEP> 388 <SEP> 260 <SEP> 110
<tb> Calculé <SEP> % <SEP> de <SEP> préparation <SEP> 2 <SEP> a..................................... <SEP> 44 <SEP> 34 <SEP> 22
<tb> Pt. <SEP> f. <SEP> C....................................................... <SEP> 209-210 <SEP> 124-125 <SEP> 292-295
<tb> Maximum <SEP> à <SEP> 262 <SEP> m <SEP> <SEP> dans <SEP> l'eau, <SEP> U.V............................. <SEP> a <SEP> = <SEP> 61 <SEP> a <SEP> = <SEP> 57 <SEP> a <SEP> = <SEP> 105
<tb> (&alpha;)D25 <SEP> <SEP> dans <SEP> l'eau................................................. <SEP> - <SEP> 46 <SEP> -41 <SEP>
<tb> Analyse <SEP> élémentaire:
<tb> <SEP> C <SEP> 45,82 <SEP> 44,32
<tb> <SEP> H..........................................................| <SEP> 5,18 <SEP> | <SEP> 4,94
<tb> <SEP> O <SEP> 28,63 <SEP> 26,67
<tb> <SEP> N <SEP> 23,04 <SEP> 23,55 <SEP> 49,5
<tb> la partie B est fractionnée dans une machine de distribution en contre-courant de Craig à 200 tubes pour 200 transferts dans le même système solvant que dans la partie C.

La détermination des solides indique trois fractions maximum : K = 0,29, psicofuranine; k 0,73, décoyinine; K 1,69, adénine. On évapore chacune de ces fractions à siccité. On fait recristalliser la décoyinine au sein d'eau, ce qui donne 210 mg de décoyinine hydratée, préparation 2e, fondant à 124-126 C. L'analyse élémentaire de la préparation 2e après séchage à 60 OC est la suivante.

Calculé pour C11H13N504 %:
C : 46,97; H = 5,38; N = 22,75; 0=24,92.

Trouvé (O/o):
C : 46,02; H : 5,16; N : 23,29; = : 24,90 (directe).

Le spectre des ultra-violets de la préparation 2e montre un maximum à 261 mp, a = 53,2 dans l'hydroxyde de potassium N/100 et 259 m ; a = 50,8 dans l'acide sulfurique N/100.

Dans un autre fractionnement 40 g de décoyinine brute préparée selon la partie B donnent 7,8 g de décoyinine cristallisée hydratée similaire de la préparation 2e dont 1 g recristallisé au sein de 40 mi d'éthanol absolu donne la décoyinine anhydre cristallisée, préparation 2f qui fond à 183-186 OC.

Après séchage à 60 OC la préparation 2f montre l'analyse élémentaire suivante : C : 47,11; H : 5,03;
N : 25,03; O : 23,0l(directe)%. Le spectre d'absorp tion des infra-rouges et le spectre des ultra-violets de la préparation 2f sont montrés respectivement dans les figures 1 et 2 du dessin.

E. Fractionnement par extraction liquidelliquide.

On soumet à l'extraction à contre-courant liquide/ liquide de la décoyinine cristallisée brute selon la partie B. Le système solvant consiste en parties égales de n-butanol et d'eau. On dissout 100 g de
décoyinine cristallisée brute dans 1 litre de chacune
des phases supérieure et inférieure du système solvant. On utilise cette solution comme charge de la colonne. L'effluent de la colonne d'extraction à contre-courant liquidelliquide est suivi par analyse aux ultra-violets, des solides et bio-essai. Il cristallise de la fraction bioactive de l'effluent 22,5 g de décoyinine, préparation 2g, qui fond à 125-130 C et possède un pouvoir rotatoire de (o-i = + 350 6 (1 % dans l'eau).

Exemple 3. - A une solution de 2 g de préparation 2f dans 50 mi de pyridine on ajoute 25 mi d'anhydride acétique. On conserve le mélange pendant sept jours à 25 OC. On ajoute 18 g de glace pilée au mélange qu'on agite pendant une heure et demie après quoi on le concentre en un sirop épais sous vide élevé. On dissout de sirop dans le chloroforme, on le lave à l'eau et au moyen d'acide sulfurique 0,03 N, on sèche sur sulfate de sodium et on évapore à siccité. On dissout le sirop sec dans l'éther et on précipite par addition d'hexane, ce qui donne 1,7 d'un solide blanc, préparation 3a. On purifie ensuite la préparation 3a par distribution à contrecourant de Craig dans laquelle le système solvant est formé d'eau/éthanol/acétate/cyclohexane dans les proportions en volume de 30/20/25/25. Au bout de 1 000 transferts on obtient deux fractions. La permière, à K = 1,86, est cristallisée au sein d'eau et donne 420 mg d'une matière, préparation 3b, dont le point de fusion est de 152-153 OC. Sa composition élémentaire correspond au pentacétate de décoyinine.

Calculé pour C21H23N5O9 (%) C : 51,32; H : 5,13; N : 14,25; O : 29,32.

Trouvé (%) :
C : 51,80; H : 4,71; N : 13,84; O : 30,50 (directe).

La seconde fraction à K = 0,5, est recristallisée au sein d'acétate d'éthyle/hexane ce qui donne 600 mg d'une matière, préparation 3c, ayant un
point de fusion de 65 OC environ et une composition élémentaire correspondant au tétracétate de décoyinine.

Calculé pour C19H21N5O8 (%)
C : 50,76; H : 5,16; N 15,58; O : 28,48.

Trouvé :
C : 50,95; H : 4,59; N : 15,24; O : 28,81 (directe)
D'une manière analogue on peut procéder à d'autres acylations de la décoyinine, en particulier à l'aide d'agents acylants d'acides hydrocarbonés carboxyliques inférieurs, par réaction de l'anhydride ou de l'halogénure d'acide approprié comme l'anhydride propionique, l'anhydride acrylique, l'anhydride butyrique, l'anhydride benzoïque, le chlorure de benzoyle, le chlorure d'acétyle, le bromure de caproyle, avec la décoyinine, en solution pyridinique.

Les acylates d'acides hydrocarbonés carboxyliques inférieurs peuvent être utilisés à la place de la décoyinine.

Le procédé d'acylation est applicable aux préparations brutes de décoyinine de manière avantageuse pour améliorer la qualité de la décoyinine.

Ainsi la décoyinine acylée peut être séparée du mélange réactionnel, purifiée puis hydrolysée à l'aide d'une base aqueuse étendue pour donner la décoyinine purifiée. De cette manière la décoyinine est facilement séparée des impuretés non-acylables en tirant parti du changement de propriétés physi
ques dû à l'acylation.

Exemple 4. - Triacétate de décoyinine.

A une solution de 2,5 g de décoyinine (préparation 2f, décrite dans l'exemple 2, partie D) dans 20 mi de pyridine, à 4 C, on ajoute 8 mi d'anhydride acétique. On laisse reposer le mélange à la tempéra. ture ambiante pendant seize heures environ. L'addition de 3 volumes d'eau glacée (1 à 3 C) au mélange donne ainsi 1,65 g de triacétate de décoyinine sous forme -de cristaux ayant une gamme de points de fusion de 171 à 185 OC. La recristallisation au sein de 25 mi d'éthanol donne 1,05 g de cristaux de triacétate de décoyinine ayant un point de fusion de 188-190 OC; maximum aux ultra-violets à 258 m , a = 56 en solution alcoolique d'acide sulfurique
N/100.

Analyse : C17H1N5O7.

Calculé ( O) C : 50,37; H 4,72 N 17,28; O : 27,63.

Trouvé (%):
C : 50,47; H : 4,62; N : 17,59; O : 27,50.

Exemple 5. - Triacétate de dihydrodécoyinine.

On secoue pendant deux heures sous pression d'hydrogène de 2,8 kg/cm2 16,7 g de triacétate de décoyinine (préparé comme dans l'exemple 5) et 2 g d'oxyde de platine comme catalyseur dans 200 mi d'éthanol. La perte de charge est de 0,245 à 0,28 kg/cm2. On filtre le mélange et on évapore le filtrat à siccité, puis on le dissout dans environ 50 mi d'acétate d'éthyle. L'addition d'environ 5 ml de Skellysolve B (mélange d'hexanes isomères) provoque la cristallisation du triacétate de dihydrodécoyinine. On recueille les cristaux par filtration et on obtient 6 g de triacétate de dihydrodécoyinine fondant à 102-105 OC.

La recristallisation au sein du même mélange solvant donne la triacétate de dihydrodécoyinine fondant à 147.149 OC.

Exemple 6. - Dihydrodécoyinine et anhydrodihydrodecoyinine.

On dissout 3,5 g de triacétate de dihydrodécoyinine (préparé comme dans l'exemple 5) dans 100 mi de méthanol froid saturé d'ammoniac. On met la solution au réfrigérateur pendant seize heures environ. On recueille les cristaux précités par filtration, ce qui donne 820 mg de produit ayant un point de fusion de 149-157 OC (préparation 1).

On évapore le filtrat sous vide à siccité ce qui donne 650 mg de produit (préparation 2). La chromatographie sur papier des deux préparations montre que chacune d'elles contient au moins deux constituants. Les préparations 1 et 2 sont mélangées de manière à donner la préparation 3, dont on soumet 1,25 g à une distribution dans l'appareil à contrecourant de Craig pour effectuer 200 transferts en utilisant un système solvant n-butanol-eau (1!1).

On récupère deux fractions. La fraction A a une valeur K de 1,57 (680 mg) qu'on identifie comme étant la anhydrodihydrodecoyinine et possède un point de fusion de 150-153 OC et la composition élémentaire suivante.

Analyse : C11H13N5O3.

Calculé (%) :
C : 50,18; H : 4,98; N : 26,61; O 18,23.

Trouvé : C : 49,64; H 5,16 N : 26,10; O : 19,78.

La fraction B a une valeur K de 0,64 (200 mg) identifiée comme étant la dihydrodécoyinine, possède un point de fusion de 205-208 OC et possède la composition élémentaire suivante Calculé pour C11H15N5O4 :
C : 49,97; H : 5,38; N 24,90; O : 22,76.

Trouvé ( /O) C 46,89; H 5,52; N: 24,90; O : 23,50.

Bien entendu 15invention n'est pas limitée aux détails opératoires précis non-plus qu'aux composés précis décrits et est susceptible de variantes et de modifications sans qu'on s'écarte pour autant de son cadre et de son esprit.

Légende des dessins
Figure 1:
A. Spectre d'absorption des infra-rouges. Décoyi
nine.

B. Longueur d'ondes cm-1;
C. Transmission %;
D. Longueur d'ondes en microns.

Figure 2:
E. Spectre des ultra-violets de la décoyinine.

F. Pouvoir d'absorption;
G. Longueur d'ondes (m.

RÉSUMÉ
A. A titre de produits industriels nouveaux
10 Un composé de la formule

dans laquelle R est un radical acyle d'un acide hydrocarboné carboxylique de 2 à 12 atomes de carbone
nclus, un radical acyle d'un acide hydrocarboné carboxylique de 2 à 12 atomes de carbone inclus portant des substituants halo, nitro, hydroxy, amino, cyano, thiocyano et alcoxy inférieur ou un radical alcoxy-, carbonyle inférieur, en particulier
a. Le tri-alcanoate inférieur de décoyinine;
b. Le triacétate de décoyinine;
20 Une dihydrodécoyinine de formule

30 Une désoxy-dihydrodécoyinine de formule

4 Composé de formule

dans laquelle R a la signification précédemment indiquée, en particulier
a. Le trialcanoate inférieur de dihydrodécoy inine;
b. La triacétate de dihydrodécoyinine;
5 Un composé de formule

dans laquelle R a la signification précédemment indiquée et R' a la même signification que R en particulier
a. La tétraalcanoate inférieure de dihydrodé coyinine;
b. La pentaalcanoate inférieure de dihydrodécoy inine;
60 Un composé de formule

dans laquelle R a la signification précédemment indiquée, en particulier:
La di-alcanoate inférieure de anhydrodihydrodecoyinine;

**ATTENTION** fin du champ DESC pe

Claims (3)

1. **ATTENTION** debut du champ CLMS peut contenir fin de DESC **.

   E. Spectre des ultra-violets de la décoyinine.

   F. Pouvoir d'absorption;

   G. Longueur d'ondes (m.

   RÉSUMÉ

   A. A titre de produits industriels nouveaux

   10 Un composé de la formule

   dans laquelle R est un radical acyle d'un acide hydrocarboné carboxylique de 2 à 12 atomes de carbone

   nclus, un radical acyle d'un acide hydrocarboné carboxylique de 2 à 12 atomes de carbone inclus portant des substituants halo, nitro, hydroxy, amino, cyano, thiocyano et alcoxy inférieur ou un radical alcoxy-, carbonyle inférieur, en particulier

   a. Le tri-alcanoate inférieur de décoyinine;

   b. Le triacétate de décoyinine;

   20 Une dihydrodécoyinine de formule

   30 Une désoxy-dihydrodécoyinine de formule

   4 Composé de formule

   dans laquelle R a la signification précédemment indiquée, en particulier

   a. Le trialcanoate inférieur de dihydrodécoy inine;

   b. La triacétate de dihydrodécoyinine;

   5 Un composé de formule

   dans laquelle R a la signification précédemment indiquée et R' a la même signification que R en particulier

   a. La tétraalcanoate inférieure de dihydrodé coyinine;

   b. La pentaalcanoate inférieure de dihydrodécoy inine;

   60 Un composé de formule

   dans laquelle R a la signification précédemment indiquée, en particulier:

   La di-alcanoate inférieure de anhydrodihydrodecoyinine; 70 Composé de formule

   dans laquelle R et R' ont la signification précédem- ment donnée, en particulier

   a. Le tri-alconoate inférieur de anhydrodihydro- decoyinine;

   b. Le tétra-alconoate inférieur de anhydrodihy- drodecoyinine;

   B. Procédé de préparation de dérivés de composés d'élaboration de Streptomyces hygroscopicus var. decoyicus caractérisé par les points suivants, séparément ou en combinaisons

   10 On soumet à l'hydrogénation un triacylate de décoyinine dans lequel le groupe acyle est un groupe acyle provenant d'un acide hydrocarboné carboxylique de 2 à 12 atomes de carbone inclus, un groupe acyle provenant d'un acide hydrocarboné carboxylique de 2 à 12 atomes de carbone inclus à substituants tels que halo, nitre, hydroxy, amino, cyano, thiocyano ou alcoxy inféneur ou un halogénure d'alcoxycarbonyle inférieur en présence d'un catalyseur de manière à former du triacylate de dihydrodécoyinine;
2. 2 On soumet à l'hydrogenation et l'hydrogéno. lyse un triacylate de décoyinine de manière à produire un triacylate de dihydrodécoyinine et de la anhydrodihydrodecoyinine;
3. 3 On soumet à la désacylation un triacylate de dihydrodécoyinine au moyen de méthanol saturé d'ammoniac de manière à obtenir la dihydrodécoyinine;

   40 On soumet à la désacylation le produit obtenu en B (2) au moyen de méthanol saturé d'ammoniac de manière à obtenir la dihydrodécoyinine et la anhydrodihydrodecoyinine;

   5 Pour préparer des composés de formule

   On fait réagir la décoyinine avec environ trois moles d'un agent acylant formé d'anhydrides ou d'halogénures d'acides hydrocarbonés carbone liques comme précédemment défini à une température d'environ 4 OC pendant environ dix à vingtquatre heures, en particulier de triacétate de décoyinine ayant un point de fusion de 188 à 190 OC.