AT404940B

AT404940B - Isochinoline

Info

Publication number: AT404940B
Application number: AT0204894A
Authority: AT
Original assignee: Novartis Erfind Verwalt Gmbh
Priority date: 1993-11-05
Filing date: 1994-11-04
Publication date: 1999-03-25
Also published as: NZ264851A; EP0664289A2; GB2283488B; ITRM940706A1; ATA204894A; FI945191A0; ITRM940706A0; GB9322828D0; RU2144027C1; IL111518A0; GB9421985D0; GB2283488A; PL305705A1; CZ269894A3; HU9403184D0; AU7761094A; NO944187L; FI945191A; ZA948738B; NO944187D0

Description

AT 404 940 B

Die vorliegende Erfindung betrifft neue Isochinoline, Verfahren zu ihrer Herstellung, ihre Verwendung als Pharmazeutika und pharmazeutische Zusammensetzungen, die sie umfassen.

Insbesondere liefert die vorliegende Erfindung in einen ersten Aspekt eine Verbindung der Formel I

worin R für Ethyl oder n-Propyl steht, oder einen physiologisch hydrolysierbaren und annehmbaren Ester hiervon, oder Säureadditionssalze einer solchen Verbindung oder eines solchen Esters. R steht in Formel I vorzugsweise für Ethyl.

Mit "physiologisch hydrolysierbarer und annehmbarer Ester” wie es hierin verwendet wird, ist ein Ester gemeint, in dem die Hydroxygruppe der Verbindung der Formel I verestert ist und der unter physiologischen Bedingungen unter Bildung einer Säure, die ihrerseits physiologisch tolerierbar ist in zu verabreichenden Dosen hydrolysiert. Der Ausdruck ist so als Definition von regulären Prodrugformen zu verstehen. Beispiele für solche Ester sind unter anderem die Acetate und Benzoate der Verbindungen der Formel I.

Die Verbindungen der Formel I und ihre vorher erwähnten Ester existieren sowohl in freier Form als auch in Säureadditionssalzform. Geeignete erfindungsgemäße pharmazeutisch annehmbare Säureadditionssalzformen zur pharmazeutischen Verwendung sind beispielsweise die Hydrochlorid-, Hydrogenfumarat-, Hydrogenmaleat- und Hydrogenoxalatsalze.

Verbindungen, Ester und Salze dar vorliegenden Erfindung liegen innerhalb des Umfangs der Erfindung, die in der GB-B 2 213 482, US-A 4 980 359 und den entsprechenden weltweiten Patenten und Anwendungen beschrieben und definiert ist. Die erfindungsgemäßen Verbindungen, Ester und Salze sind neu und zeigen, verglichen mit Verbindungen, Estern und Salzen, die spezifisch in den vorangehenden Patenten beschrieben sind, überraschend vorteilhafte Eigenschaften, insbesondere in Bezug auf ihre beabsichtigte pharmazeutische Verwendung, beispielsweise wie hierin später beschrieben.

In einem weiteren Aspekt liefert die vorliegende Erfindung ein Verfahren zur Herstellung einer Verbindung der wie oben definierten Formel I oder eines physiologisch hydrolysierbaren und annehmbaren Esters hiervon oder eines Säureadditionssalzes einer solchen Verbindung oder Esters, wobei das Verfahren gekennzeichnet ist durch

a) zur Herstellung einer Verbindung der Formel I, Abspalten von Schutzgruppen und/oder Dehydrierung von einer Verbindung der Formel II

Ri

R r2 O(iC3H7) (II) worin R die für formel I angegebene Bedeutung hat und entweder X, R, und R2 jeweils für Wasserstoff 2

AT 404 940 B stehen, oder X für eine Hydroxyschutzgruppe steht und Ri und R2 jeweils für Wasserstoff stehen oder für eine zusätzlicne Bindung stehen, wie dies durch die gepunktete Linie angedeutet ist, b) zur Herstellung eines physiologisch hydrolysierbaren und annehmbaren Esters einer Verbindung der Formel I, Veresterung einer Verbindung der Formel I, und Gewinnung des Produkts von Schritt a) oder b) in freier Form oder Säureadditionssalzform.

Die Entfernung von Hydroxyschutzgruppen/Dehydrierung gemäß Verfahrensschritt a) kann gemäß in der Technik bekannter Verfahrer ausgeführt werden. Bequemerweise beinhaltet der Verfahrensschritt a) sowohl das Abspalten der Schutzgruppen, als auch die Dehydrierung, beispielsweise durch Verwendung einer Verbindung der Formel II, worin X für eine Benzylschutzgruppe steht und Rt und R2 jeweils für Wasserstoff stehen und Bewirken der Abspaltung der Benzylgruppe und Dehydrierung in einer Eintopfreaktion, beispielsweise durch Behandlung mit einem Palladium/Aktivkohle-Kata-lysator bei erhöhter Temperatur unter einer inerten Atmosphäre in einem inerten Lösemittel oder Verdünnungsmittel, wie dies beispielsweise später in Beispiel 1 beschrieben ist.

Die Veresterung gemäß Verfahrensschritt (b) kann ebenfalls gemäß Standardverfahren ausgeführt werden, beispielsweise durch Umsetzung einer Verbindung der Formel I mit einem geeigneten Säurehalogenid oder Säureanhydrid in Gegenwart einer Base, beispielsweise eines Amins oder Alkalimetallcarbonats. Die Reaktion wird geeigneterweise in einem inerten Lösemittel oder Verdünnungsmittel ausgeführt, beispielsweise bei einer Temperatur von 0*C bis 120*C unter einer inerten Atmosphäre.

Die Ausgangsmaterialien für den obigen Verfahrensschritt (a) können gemäß dem folgenden Reaktionsschema hergestellt werden

3 ΑΤ 404 940 Β (VI)

COY

(£>

<g) worin X' für eine Hydroxyschutzgruppe, beispielsweise Benzyl steht, die Gruppen Y1 und Y2 jeweils Abgangsgruppen sind und R die für die Formel I angegebene Bedeutung hat. Geeignete Abgangsgruppen, wie Y' sind beispielsweise lod oder Tosyl, wobei Tosyl für eine Produktion im größeren Maßstab bevorzugt sein kann. Y2 steht vorzugsweise für Chlor. Die Schritte (c) bis (g) können gemäß Standardverfahren ausgeführt werden, wie dies beispielsweise in den Beispielen beschrieben ist. Das Abspalten der Schutzgruppen von den Verbindungen der Formel lla liefert Verbindungen der Formel II, worin X für Wasserstoff steht. Die Dehydrierung der Verbindungen der Formel lla liefert Verbindungen der Formel II, worin Ri und R2 zusammen für eine zusätzliche Bindung stehen. Die Verbindungen der Formeln lila, lllb und VII sind im Handel erhältlich, in der Technik bekannt oder können analog zu den bekannten Verbindungen hergestellt werden. Daher können Verbindungen der Formel VII ausgehend vom 3,5-Dihydroxybenzoesäuremethylester zuerst durch dessen Alkylierung mit Isopropyliodid in Gegenwart einer Base, wie K2C03 beispielsweise mittels Methylethylketon als Lösemittel, Hydrolyse des erhaltenen 3,5-Diisopropoxyberzoesäuremethyle-sters beispielsweise durch Behandlung mit NaOH in Methanol als Lösemittel und danach durch Umwandlung der erhaltenen 3,5-Diisopropoxybenzoesäure beispielsweise in ein entsprechendes Säurehalogenid, wie das Säurechlorid, beispielsweise durch Umsetzung mit SOCI2 hergestellt werden.

Die folgenden Beispiele erläutern das erfindungsgemäße Verfahren. 4

AT 404 940 B

Beispiel 1

Herstellung von 1-(3,5-Diisopropoxyphenyl)-3-ethyl-6-(2-hydroxyethoxy)-7-methoxy-isochinolin (Formel I: R = -C2H5) i) Verfahrensschritt (a) - Abspalten von Schutzgruppen und Dehydrierung: 13.5 g cBenzyloxyethoxy-1 -(3,5-diisopropoxyphenyl)-3-ethyl-7-methoxy-3,4-dihydro-isochinolin (Formel lla: X1 = Benzyl, R = Ethyl), 1,3 g Pd/C (10 %) und 500 ml Decahydronaphthalin werden für 5 Stunden bei 200 * C unter Argon gerührt. Das Reaktionsgemisch wird auf Raumtemperatur abgekühlt, über Hyflo filtriert und mit Ethylacetat gewaschen. Das Decahydronaphthalin wird bei 50‘C unter Vakuum abdestilliert und das erhaltene Produkt wird chromatographisch auf Fieselgel (Korngröße 0,04-0.06 mm) unter Bildung der Titelverbindung gereinigt:

Smp. freie Base = 116-118 * C

Hydrochlorid = 218-222 *C Hydrogenfumarat = 82,5 *C Hydrogenoxalat = 106-107 *C Hydrogenmaleat = 87-96 *C.

Die Ausgangsmaterialien für das obige Verfahren können folgendermaßen hergestellt werden: ii) 3-(2-Benzyloxyethoxy)-4-methoxy-benzaldehyd (Formel IV: Χί = Benzyl) 20 g Isovanillin (Formel lila), 41,3 g 2-Benzyloxyethyliodid (Formel lllb) und 21,8 g Kaliumcarbonat werden in 200 ml Ethyimethylketon für 12 Stunden unter Rückfluß gerührt. Die erhaltene Suspension wird auf Raumtemperatur gekühlt und das Präzipitat abfiltriert, mit Aceton gewaschen und eingedampft. Der Rückstand wird in Ethylacetat aufgenommen und mit H20 (3x) und Kochsalzlösung (1x) extrahiert. Die organische Phase wird getrocknet, filtriert und unter Bildung der Titelverbindung als Öl eingedampft. iii) 3-((2-Benzyloxyethoxy)-4-methoxybenzylethylketon (Formel V: X- = Benzyl, R = Ethyl) 24 g des Produkts von Schritt (ii), 21,5 g Brombuttersäureethylester und 30 ml tert-Butylmethylether werden tropfenweise über 50 Minuten bei 5*C zu einer vorher hergestellten Suspension von Natriummethy-lat in 25 ml tert-Butylmethylether gegeben. Das Reaktionsgemisch wird für 45 Minuten bei etwa 5*C gerührt und dann für 12 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Der pH wird durch die Zugabe von Eisessig auf 5 eingestellt und die erhaltene Suspension wird mit H2Ö verdünnt und 3x mit tert-Butylmethylether extrahiert. Die organische Phase wird mit NaHC03 (1 x) und Kochsalzlösung (1x) extrahiert und auf etwa 100 ml eingedampft. 13,5 ml 50 %ige wäßrige NaOH werden tropfenweise zugegeben und das Ganze wird für 2 Stunden bei 40’C gerührt, mit 50 ml H20 verdünnt und für weitere 30 Minuten bei Raumtemperatur gerührt. Die organische Phase wird abgetrennt und die wäßrige Phase bei maximal 40 *C mit 15 ml konzentrierter HCl auf pH 1 eingestellt. Das Reaktionsgemisch wird bei 40 *C für weitere 1,5 Stunden gerührt, auf Raumtemperatur abgekühlt und mit Toluol extrahiert. Die organische Phase wird mit NaHCÖ3 und Kochsalzlösung gewaschen, über Na2S04 getrocknet, filtriert und unter Bildung der Titelverbindung als Öl eingedampft. iv) 1-[3-(2-Benzyloxyethoxy)-4-methoxyphenyl]-2-aminobutan (Formel VI: Xl = Benzyl, R = Ethyl) 20.6 g des Produkts von Schritt (iii), 48,4 g Ammoniumacetat und 3,9 g Natriumcyanoborhydrid werden in 235 ml CH3OH in Gegenwart von 12,1 g 0,4 mm (4 Angström) Molekularsieb über Nacht bei Raum temperatur unter einer inerten Atmosphäre gerührt. Das Reaktionsgemisch wird über Hyflo filtriert und mit CH3OH gewaschen. Das Filtrat wird konzentriert, der Rückstand in Ethylether aufgenommen und mit 15 % NaOH, H20 und Kochsalzlösung extrahiert. Die organische Phase wird über Na2S04 getrocknet, filtriert und unter Bildung der Titelverbindung als Öl eingedampft. 5

AT 404 940 B v) N-(3,5-Diisopropoxybenzoyl)-1 -[3-(2-benzyloxyethoxy)-4-methoxyphenyl]-2-aminobutan (Formel VIII: X-Benzyl, R = Ethyl) 19,9 g 3,5-Diisopropoxybenzoylchlorid werden in 100 ml CH2CI2 tropfenweise über 1,5 Stunden zu 17,0 g des Produkts von Schritt (iv), 15,6 g Triethylamin und 630 mg Ν,Ν-Dimethylaminopyridin in 150 ml CH2CI2 gegeben und das Reaktionsgemisch wird für 12 Stunden bei etwa 0*C bis Raumtemperatur gerührt. Das erhaltene Gemisch wird konzentriert, der Rückstand wird in Ethylacetat aufgenommen und mit 1 N HCl, 10 % NaHC03 Lösung und Kochsalzlösung extrahiert. Die organische Phase wird über Na2S04 getrocknet, filtriert und konzentriert. Der Rückstand, der zu kristallisieren beginnt, wird mit Ethylether verdünnt und unter Bildung der Titelverbindung filtriert. Diese wird zur weiteren Reaktion ohne zusätzliche Reinigung verwendet. vi) 6-Benzyloxyethoxy-1-(3,5-diisopropoxyphenyl)-3-ethyl-7-methoxy-3,4-dihydroisochinolin 15,3 g des Produkts von Schritt (v) und 12,4 g POCI3 werden in 250 ml Acetonitril für 5 Stunden unter Rückfluß gerührt. Das Reaktionsgemisch wird konzentriert, der Rückstand in Ethylacetat aufgenommen und mit Na2C03 Lösung und Kochsalzlösung extrahiert. Die organische Phase wird über Na2S04 getrocknet, filtriert und eingedampft, und der Rückstand wird auf Kieselgel (Korngröße 0,04-0,63 mm) chromatographisch unter Bildung der Titelverbindung als Öl gereinigt.

Beispiel 2

Herstellung von 1-(3,5-Diisopropoxyphenyl)-6-(2-hydroxyethoxy)-7-methoxy-3-n-propyl-isochinolin (Formel I: R = n-Propyl)

Die Titelverbindung wird analog zu Beispiel 1 hergestellt; Die freie Base wird als Schaum erhalten: Hydrogenoxalat Smp. = 154-156’C.

Die Verbindungen der Formel I, physiologisch hydrolysier-bare und annehmbare Ester hiervon und pharmazeutisch annehmbare Säureadditionssalze dieser Verbindungen und Ester (hierin im folgenden gemeinsam: AGENTIEN DER ERFINDUNG) zeigen pharmakologische Aktivität und sind zur Verwendung als Pharmazeutika indiziert, beispielsweise zur Therapie bei der Behandlung von Krankheiten und Zuständen wie sie später beschrieben werden.

Insbesondere zeigen die AGENTIEN DER ERFINDUNG eine hemmende Aktivität für das Phosphodie-steraseisoenzym cyclischer Nukleotide (PDE), selektiv für das Typ IV-lsoenzym und mit deutlich und überraschend größerer Typ IV-Spezifität, als bekannte Verbindungen, wie sie beispielsweise in der vorher erwähnten GB-B 2 213 482 und US-A 4 980 359 beschrieben sind.

Die AGENTIEN DER ERFINDUNG besitzen antiinflammatorische, Anti-Atemwegshyperreaktivitäts- und Bronchodilatationseigenschaften. Sie besitzen ferner immunsuppressive, TNFa-Sekretionshemmungs- und andere pharmakologische Aktivitäten, wie dies beispielsweise in folgenden Standardtestverfahren gezeigt werden kann: [Alle im folgenden beschriebenen Experimente werden geeigneterweise mittels dem Hydrogenoxalatsalz der Testverbindung ausgeführt, wie der Verbindung von Beispiel 1. Im Fall der Verbindung von Beispiel 1 kann eine stabile 30 mM Stammlösung des Hydrogenoxalatsalzes mit 10 % Tween in 80 % absolutem C2H5OH hergestellt werden. Für pharmakologische Experimente sollte sie midestens 1:10 000 verdünnt werden.] PDE Isoenzymhemmung TEST A: Hemmungsassay für das humane PDE Isoenzym

Alle Isoenzympräparationen stammen aus humanen Quellen. Typ III und IV Präparationen erhält man, indem man das Vorherrschen des Typ III Isoenzyms in Blutplättchen und des Typ IV Isoenzyms in Neutrophilen unter Anwendung der folgenden Techniken ausnutzt:

Zellen und Gewebe werden auf Eis in Tris-HCI 10 mM pH 7,4 homogenisiert, worin enthalten sind: Saccharose (250 mM), EDTA 1 mM, Dithiothreit (1 mM), Leupeptin und Pepstatin A (jeweils 1 ug/ml) und Phenylmethylsulfonylfluorid (PMSF, 0,17 mg/ml erst direkt vor dem Homogenisieren zugegeben). Neutrophile (Typ IV) und Blutplättchen (Typen II und III) werden aus humanem Blut erhalten und ultrabeschallt (Bransonsonde, 4 x 15 Sekunden). Eine humane Lunge (Typen I und V) wird von Patienten erhalten, die 6

AT 404 940 B einer Operation unterzogen werden und mittels eines Polytronhomogenisators (zwei Durchgänge mit 30 Sekunden) homogenisiert.

Isoenzympräparationen: PDE III und PDE IV präparationen (Substrat cAMP 1 uM) bestehen jeweils aus niedrigtourigen Überständen der Blutplättchen- und Neutrophilenhomogenate. Die Typen I (Substrat cAMP 1 uM, Ca2+ 0,5 mM, Calmodulin 125 nM), II (cAMP 100 uM) und V (cGMP 1 U-M) werden durch Anionenaustauschchromotographie (Q-Sepharose) mittels eines NaCI-Gradienten in Homogenisierungspuffer ohne Saccharose und PMSF getrennt ( 0 bis 0,1 M NaCI in 2,5 Säulenvolumina, 0,1 bis 0,45 M in 24 Säulenvolumina). PDE I: Fraktionen, bei denen die Hydrolyse von 1 uM cAMP durch Ca2+ + Calmodulin (jeweils 0,5 mM und 125 nM) stimuliert werden kann, eluieren bei 0,17-0,18 M NaCI. PDE II: Fraktionen, die eine wesentliche cAMP Hydrolyseaktivität bei 100 uM aber nicht bei 1 uM zeigen, eluieren bei 0,31-0,32 M NaCI. PDE V: Fraktionen, die selektiv cGMP bei 1 uM vor cAMP bei 1 uM hydrolysieren, eluieren bei 0,20-0,24 M NaCI.

Die PDE Aktivität wird in Gegenwart und Abwesenheit der Testsubstanz bei verschiedenen Konzentrationen mittels des von Thompson et al., Nucleotide Res., 10, 69-92 (1979) beschriebenen lonenaustausch-säulenverfahrens mit 1 uM [3H]-cyclischem AMP als Substrat getestet.

In diesem Testverfahren hemmen die AGENTIEN DER ERFINDUNG vornehmlich PDE Isoenzyme der Typen III, IV und V mit einer relativ geringen Wirkung auf die Typen I und II. Innerhalb der Gruppe III, IV, V zeigen die AGENTIEN DER ERFINDUNG eine deutlich erhöhte Selektivität bei der Hemmung von PDE Isoenzymen des Typs IV im Vergleich zu anderen bekannten Inhibitoren der PDE Isoenzyme und sind als Typ IV isoenzymspezifisch zu charakterisieren. So wird bei einem Test festgestellt, daß die Verbindung von Beispiel 1 in der Hydrogenoxalatform eine zumindest 180 fach größere Aktivität bei der Hemmung des Typ IV Isoenzyms aufweist, als bei den anderen getesteten Isoenzympräparationen.

Antiinflammatorische Aktivität TEST B: Hemmung der Aktivität der Eosinophilen durch Formyl-Met-LeuPhe (fMLP)

Gereinigte humane Eosinophile (104/Vertiefung in 0,2 ml HBSS) werden mit fMLP (1 uM) in Gegenwart von Lucigenin (25 uM) stimuliert. Die Hemmumg des oxidativen Burst (gemessen als Veränderung in der Chemolumineszenz) wird aus Dosis-Antwort-Kurven mittels der logistischen Gleichung bestimmt.

Die AGENTIEN DER ERFINDUNG sind im obigen Testverfahren bei Konzentrationen in der Größenordnung von 0,001 bis 0,5 uM aktiv. TEST C: Hemmung der TNFq Sekretion 900 ul THP-1 Zellen (0,5 x 106 Zellen zusammen mit 100 Einheiten gamma-lnterferon/0,9 ml) werden gefolgt von 100 ul Testsubstanz in Kulturschalen mit 24 Vertiefungen pipettiert. Nach 3 Stunden bei 37’C in 5 % CO2/95 % Luft werden 10 ul LPS mit 5 ug/ml zugegeben und die Inkubation wird für weitere 40 Stunden fortgesetzt. Geeignete Kontrollen werden ebenfalls miteinbezogen. Die Medien werden dann entfernt und durch Zentrifugation bei 1000 x g für 10 Minuten geklärt. Man gibt 1,0 ml 0,01 % Digitonin in die Vertiefungen, um die Zellen zu lysieren, die durch Schaben mit einem Gummischaber abgelöst wurden und läßt sie bei 4*C für 10 Minuten stehen. Dann werden umgehend Lactasedehydrogenasemessungen durchgeführt und die Proben werden bei -20 *C gelagert, bis die anderen Bestimmungen durchgeführt werden können. Die Tests sind: IL-1/3 (Medium), TNF-α (Medium) und DNA (Lysate). IL-1 jS und TNF-a Tests werden mittels im Handel erhältlicher ELISA Kits bestimmt.

Das Verfahren von Kapuscinski et al Anal. Biochem. (83, 252-257 (1977)) wird zur Bestimmung von DNA verwendet. 300 ul Proben Zellysat in 0,01 % Digitonin werden mit 750 ul Tris-HCI Puffer pH 7,0 (enthält 13,2 mM Na2S04), 300 ul H20 und 150 ul 2mg/ml DAPI (4',6-Diamino-2-phenylindol · 2HCI) gemischt. Dann wird die Fluoreszenz bei 372 nm (Anregung) und 454 nm (Emission) mittels eines Perkin Eimer 3000 Fluorimeter gemessen. Die Proben werden mit einer Standardkurve mit Kälberthymus DNA (0,5 bis 10 ug/ml), die gleichzeitig erstellt wird, verglichen.

Die Lactatdehydrogenase wird folgendermaßen getestet: 50 ul Proben (Medium oder Zellysat in 0,01 % Digitonin) werden in Mikrotiterplatten mit 96 Vertiefungen gefolgt von 200 ul 0,3 mM NADH / 1 mM Natriumpyruvat in 62 mM Natriumphosphatpuffer pH 7,5 gegeben. Die Platte wird sanft mittels eines mechanischen Mikrotiterplattenschüttlers gemischt und in ein Twinreader-Spektrophotometer (Flow Laboratories) gestellt. Die Extinktionswerte werden bei 340 nm automatisch in 1 Minutenintervallen über eine Zeitspanne von 11 Minuten gemessen und die Enzymgeschwindigkeit automatisch mittels eines Computerprogramms berechnet. Da die Enzymaktivität beim Einfrieren und Auftauen verloren geht, werden die Tests 7

AT 404 940 B mit frischen Proben durchgeführt.

Die Testverbindungen werden mit dem gamma-IFN in verschiedenen Konzentrationen zugegeben und verbleiben während dem Experiment bei den Zellen.

Bei den obigen Testverfahren zeigen die AGENTIEN DER ERFINDUNG eine starke Hemmung der TNFa Konzentrationen in der Größenordnung von 0,001 bis 0,5 uM. Die Hemmung von IL-1/S wird nur bei einer deutlich höheren Konzentration beobachtet. TEST D: Hemmung der SRS-A Bildung

Meerschweinchen werden 24 Stunden vor dem Austesten durch i.v. Verabreichung von 1 ml homologem Anti-Ovalbumin-Antiserum passiv sensibilisiert. Vor der Antigenprovokation werden die Testtiere mit 0,32 mg/kg Propanolol i.v. (Hemmung der endogenen Catecholamine), 3,2 mg/kg i.v. Mepyramin (Hl Rezeptorantagonismus) und 3,2 mg/kg i.v. Indomethacin (Hemmung der Cyclooxygenase) vorbehandelt. Die Allergenprovokation wird durch Verabreichung von 32 ug/kg Ovalbumin i.v. bewirkt und die entstehende Konstriktionsreaktion auf den Atemwegswiderstnd wird als funktionelle Größe der SRS-A Aktivität verwendet. Getrennte Testgruppen erhalten 10 mg/kg i.v. FPL 55712 (ein Antagonist des LTD4 Rezeptors) 1 Minute vor der Provokation oder eine Testsubstanz in unterschiedlicher Dosis i.v. durch Infusion, die 16 Minuten vor der Provokation beginnt. Gruppen, die FPL 55712 erhalten, zeigen eine Aufhebung der Bronchokonstrik-tion, was die Wirkung von SRS-A als Mediator in der Reaktion bestätigt.

Bei dem obigen Testverfahren zeigen die AGENTIEN DER ERFINDUNG eine Hemmung der SRS-A Bildung bei i.v. infundierten Dosierungen in der Größenordnung von 5 bis 100 ug/kg/min, wie dies aus der Verringerung der Konstriktionsreaktion hervorgeht. TEST E: Bakterielles Endotoxin [LPS] ruft beim Meerschweinchen den Tod hervor

Meerschweinchen werden durch intraperitoneale Injektion von Natriumphenobarbiton (100 mg/kg), das mit Natriumpentobarbiton (30 mg/kg) versetzt ist betäubt und durch intramuskuläre Injektion von Gailamin (10 mg/kg) paralysiert. Die Tiere werden mit einem Gemisch aus Luft und Sauerstoff (40 : 60 V/V) (8 ml/kg, 1 Hz) über eine tracheale Kanüle beatmet. Die Beatmung wird an der Luftröhre mit einem Pneumatographen gemessen, der an einen Differentialdruckumwandler angeschlossen ist. Gleichzeitige Druckänderungen innerhalb des Thorax werden über eine intrathorakale Kanüle mittels eines Differentialdruckumwandlers gemessen, so daß die Druckdifferenz zwischen der Thrachea und dem Thorax gemessen und angezeigt werden kann. Der Blutdruck und die Herzfrequenz werden von der Carotisarterie mittels eines Druckum-wandlers aufgezeichnet und eine Kanüle wird in die rechte Jugularvene eingeführt, um eine intravenöse Infusion der Testsubstanz vor und gleichzeitig mit der Infusion von LPS bei einer konstanten Geschwindigkeit (3,0 ml/h, um 10 mg/kg/h zu erreichen) aus einer Infusionspumpe zu ermöglichen. Die linke Jugularvene wird zur Verabreichung von (±) Propanolol (1 mg/kg) mit einer Kanüle versehen, das als intravenöser Bolus injiziiert wird. Aus Messungen des Luftstroms und des transpulmonalen Drucks werden sowohl RL als auch Cdyn nach jedem Respirationszyklus mittels eines digitalen elektronischen Lungenüberwachungssystems errechnet, das den Blutdruck, den intrathorakalen Druck und Luftstrom anzeigt und RL und Cdyn in Echtzeit für die Anzeige auf einer visuellen Anzeigeeinheit errechnet. Die experimentellen Daten werden kontinuierlich gespeichert und bei der Beendigung eines Experiments werden der experimentelle Verlauf oder die prozessierten Daten ausgedruckt.

Die Infusion von [tPropanolol] stellt die bestehende Empfindlichkeit gegenüber LPS sicher. Bei betäubten Tieren, die mit [t] Propanolol vorbehandelt sind, induziert die Infusion von LPS im obigen Modell eine progressive Atemwegsobstruktion. Der Tod aufgrund des Endotoxinschocks tritt im allgemeinen innerhalb etwa 1 Stunde nach Beendigung der LPS Infusion ein.

Im obigen Testmodell schützt die i.v. Verabreichung der AGENTIEN DER ERFINDUNG in Dosen in der Größenordung von 1 bis 500 ug/kg/min die Tiere gegen durch Endotoxin (LPS) induzierte Atemwegsobstruktion während des experimentellen Verlaufs, wie auch gegen LPS induzierten Tod. TEST F: Arachidonsäure induzierte Reizkontaktdermatitis bei der Maus

Weibliche NMRI Mäuse (etwa 30 g) weren topisch sowohl auf der Innenseite als auch auf der Außenseite des rechten Ohrs mit 10 ul Dimethylsulfoxid: Aceton: Ethanol (2:4:4) topisch behandelt, worin die Testverbindung in unterschiedlichen Konzentrationen enthalten ist. Nach 30 Minuten wird das rechte Ohr topisch innen und außen mit 1 mg Arachidonsäure in 10 ul Aceton behandelt. Die Tiere werden nach 30 Minuten getötet, die Ohren an der Knorpellinie amputiert und gewogen. Der Gewichtsunterschied 8

AT 404 940 B zwischen dem linken und dem rechten Ohr wird berechnet und die % Hemmung wird relativ zu einer Kontrollgruppe berechnet, die nur die Arachidonsäurebehandlung erhält.

Die AGENTIEN DER ERFINDUNG hemmen die Kontaktdermatitis im obigen Testmodell bei Anwendung in einer Konzentration in der Größenordung von 3,0 bis 300 mM.

BRONCHODILATATORISCHE AKTIVITÄT TEST G: Relaxation des humanen Bronchus

Proben von humanen Lungen, die während einer Krebsoperation entgenommen wurden, erhält man innerhalb von 3 Tagen nach der Entfernung. Die kleinen Brochien (innerer Durchmesser etwa 2 bis 5 mm werden herausgeschnitten, in kleine Segmente geschnitten und in 2 ml Flüssigstickstofflagerampullen gegeben, die mit fetalem Kälberserum (FCS) gefüllt sind, worin 1,8 M Dimethylsulfoxid (DMSO) und 0,1 M Saccharose als Gefrierschutzmittel enthalten sind. Die Ampullen werden in eine Polystyrolbox (11 x 11 x 22 cm) gegeben und langsam mit einer mittleren Kühlungsgeschwindigkeit von 0,6 · C/min in einem auf -70 * C gehaltenen Gefrierschrank eingefroren. Nach 3-15 h werden die Ampullen in Flüssigstickstoff (-196*C) überführt, wo sie bis zur Verwendung gelagert werden. Vor der Verwendung werden die Gewebe für 30-60 min -70 "C ausgesetzt, bevor sie innerhalb von 2,5 min durch Hineinstellen der Ampullen in ein 37 *C Wasserbad aufgetaut werden. Danach werden die Bronchialsegmente durch Einlegen in eine Schale bei 37 *C gewaschen, die Krebs-Henseleit-Lösung enthält (Zusammensetzung mM: NaCI 118, KCl 4,7, MgS04 1,2, CaCI2 1,2, KH2P04 1,2, NaHC03 25, Glucose 11, EDTA 0,03), in Ringe geschnitten und in 10 ml Organbädern zur isometrischen Spannungsaufzeichnung bei einer Beladung von etwa 1g suspendiert. Konzentrations-Antwort-Kurven werden durch kummulative Additionen erzeugt, wobei jede Konzentration zugegeben wird, wenn der maximale Effekt durch die vorhergehende Konzentration hervorgerufen wurde. Dann wird am Ende der Konzentrations-Antwort-Kurve Papaverin (300 uM) zugegeben, um eine vollständige Relaxation der Bronchialringe zu induzieren. Dieser Effekt wird als 100 % Relaxation genommen.

Im obigen Testmodell rufen die AGENTIEN DER ERFINDUNG eine konzentrationsbezogene Relaxation von humanen Bronchusringpräparationen bei Konzentrationen von 0,001 bis 1,0 U.M hervor. TEST H: Unterdrückung der SRS-A induzierten Bronchokonstriktion

Meerschweinchen (Dunkin-Hartley, männlich, 400-600 g) werden mit Phenobarbital (100 mg/kg i.p.) und Pentobarbital (30 mg/kg i.p.) betäubt und mit Gailamin (100 mg/kg i.m.) paralysiert. Die Tiere werden über eine tracheale Kanüle mit einem Gemisch aus Luft und Sauerstoff (45:55 V/V) (8 ml/kg, 1 Hz) beatmet. Der Blutdruck und die Herzfrequenz werden an der Carotisarterie aufgezeichnet. Die Beatmung wird mit einem Fleisch-Luftstromumwandler im Einatmungskreislauf aufgezeichnet. Wenn Luftstrommessungen durchgeführt werden, werden gleichzeitige Druckveränderungen im Thorax direkt über einen intrathorakalen Trochar aufgezeichnet, der die Anzeige des Differentialdrucks relativ zur Luftröhre erlaubt. Aus dieser Information in Relation zum Luftstrom und Differentialdruck, werden der Widerstand [R,] und die Compliance [Cdyn] mittels eines digitalen Atmungsanalysegeräts für jeden Atmungszyklus berechnet.

Die Testtiere werden 24 h vor dem Testen passiv durch eine Verabreichung von homologem Anti-Ovalbumin-Antiserum (1 ml i.v.) sensibilisiert. Vor der Antigenprovokation werden die Tiere vorbehandelt mit Propanolol (0,32 mg/kg i.v.), um die Wirkungen von endogenen Catecholaminen zu hemmen, Mepyramin (3,2 mg/kg i.v.), um die Histamin H, Rezeptoren zu blockieren und Indomethacin (3,2 mg/kg i.v.), um die Gyclooxygenase zu hemmen. Die Allergenprovokation wird durch Verabreichung von Ovalbumin (OA) erreicht und die entstehende Bronchokonstriktionsreaktion wird als funktionelle Größe der SRS-A Aktivität verwendet.

Zwei Experimente werden durchgeführt: 1) Im ersten Experiment werden die Tiere mit OA (32 mg/kg i.v.) provoziert und die Wirkungen des Antagonisten FLP 55712 für den Leukotrien D4 Rezeptor (10 mg/kg i.v., 1 min vor der OA Provokation) und der Testverbindung (1, 10 und 100 mg/kg/min als i.v. Infusion verabreicht, die 15 Minuten vor der OA Provokation beginnt) untersucht. 2) Im zweiten Experiment werden die Tiere mit OA provoziert (1,0 oder 1,8 mg/ml über 60 Atemzüge inhaliert) und die Wirkung der Testverbindung wird gemessen, die in unterschiedlichen Dosierungen direkt in die Lunge durch tracheale Einbringung verabreicht wird. 9

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Im Experiment 1) wird die bronchokonstriktorische Wirkung von OA nach der Verabreichung von FPL 55712 aufgehoben, die mit der Mediation der Reaktion durch SRS-A in Einklang steht. Die AGENTIEN DER ERFINDUNG zeigen eine dosisabhängige Hemmung der Bronchokonstriktionsreaktion.

Im Experiment 2) zeigen die AGENTIEN DER ERFINDUNG eine hemmende Aktivität bei Dosierungen in der Größenordnung von 0,001 bis 10 mg/kg/min über tracheale Einbringung. TEST I: Unterdrückung der durch Bombesin induzierten Bronchokonstriktion

Die Tiere (Meerschweinchen) werden wie oben für TEST H beschrieben präpariert.

Bombesin wird durch konstante i.v. Infusion mit 100 mg/kg/min verabreicht, wobei man einen anhaltenden Bronchospasmus hervorruft. Die Testsubstanz wird i.v. in Kochsalzlösung oder i.d. in Etha-nol/Kochsalzlösung (1 % V/G) verabreicht. Der bronchodilatatorische Effekt wird bei 1 Minute und 3 Minuten nach i.v. Verabreichung oder bei 16 und 64 Minuten nach i.d. Verabreichung gemessen und wird als % Hemmung der anfänglichen Reaktion mittels RL als Index der Lungenfunktion ausgedrückt.

Im obigen Testmodell zeigen die AGENTIEN DER ERFINDUNG eine deutliche bronchodilatatorische Aktivität bei Dosierungen in der Größenordnung von 0,001 bis 0,1 mg/kg i.v. oder 0,1 bis 5,0 mg/kg i.d.. TEST J: Unterdrückung der durch Methacholin (MeCH) induzierten Bronchokonstriktion im Rhesusaffen Männliche Rhesusaffen (Körpergewicht 10,3-13,2 kg) werden mit Ketamin (20 mg/kg im., anfänglich) betäubt und mit Thiopental (8 mg/kg/h i.v.) über einen Dauerkatheter in der linken saphenavene während des experimentellen Verfahrens betäubt gehalten. Die Tiere läßt man spontan atmen und legt sie in die linke lateral liegende Position. Larynx, Epiglottis und Pharynx werden betäubt (topisch Xylocain), was die Einführung und Plazierung eines 4,5 mm pediatrischen endotrachealen Schlauchs mit Cuff erlaubt.

MeCH wird als Aerosol (Kochsalzlösung als Träger: Aerosol durch einen Vernebler erzeugt, der mit einem Luftstrom von 6 l/min arbeitet, mittlere Partikelgröße von 3,5 um) mit einer zweiminütigen Verabreichung bei Ein- und Ausatmen verabreicht. Alle Tests verwenden eine 0,6 mg/ml Lösung oder 2,5 mg/ml Lösung im Fall von schlecht auf MeCH ansprechenden Fällen. MeCH Bronchokonstriktions-tests liegen 30 Minuten auseinander, wobei die Testsubstanz 15 Minuten vor der MeCH Provokation verabreicht wird (in einer Lactoseträgerlösung, 1 mg/ml, 1 ml unter bronchoskopischer Kontrolle verabreicht, 1 cm über der Carina).

Die Testsubstanz wird auf kumulative Art verabreicht. Die bronchodilatatorische Aktivität wird als % Hemmung der Bronchokonstriktionsreaktion auf MeCH gegen den Widerstand berechnet. Die AGENTIEN DER ERFINDUNG sind im obigen Testmodell bei Verabreichung in Dosierungen in der Größenordnung von 10 bis 500 ng/kg wirksam.

UNTERDRÜCKUNG DER ATEMWEGSHYPERREAKTIVITÄT TEST K: Immunkomplex-induzierte Hyperreaktivität im Meerschweinchen

Meerschweinchen werden betäubt und zur Aufzeichnung der Lungenfunktion präpariert, wie für den obigen TEST F. Die allergische Reaktion wird durch i.v. Verabreichung von vorgeformten Immunkomplexen (hergestellt durch Zugabe von 30 ug Rindergammaglobulin in 0,05 ml Kochsalzlösung zu 0,05 ml Meerschweinchen-anti-Rindergammaglobulin-Antiserum) 3x in 10 Minuten Intervallen hervorgerufen. Anschließende i.v. Verabreichung von Histamin (1-3,7 ug/kg in 10 Minuten Intervallen) ermöglicht die Definition der Empfindlichkeit der Atemwege vor und nach der Verabreichung des Immunkomplexes. Die Atemwegshyperreaktivität wird als Differenzpaar für den maximalen Wert von RL bei der Reaktion auf Histamin vor und nach der Verabreichung des Immunkomplexes ausgedrückt. Die Testverbindungen werden intratracheal (i.t.) in unterschiedlicher. Dosierungen anschließend an das Hervorrufen der Hyperreaktivität verabreicht.

Die AGENTIEN DER ERFINDUNG sind bei der Aufhebung oder Beschränkung der Atemwegshyperreaktivität im obigen Testmodell bei Verabreichung in Dosierungen in der Größenordnung von 0,5 bis 50,0 ug/kg i.t. wirksam. 10

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IMMUNSUPPRESSIVE AKTIVITÄT TEST L: Gemischte Lymphocytenkultur der Maus

Etwa 0,5 x 106 Lymphocyten aus der Milz von weiblichen (8-10 Wochen) Balb/c Mäusen werden für 5 Tage in 0,2 ml Zellwachstumsmedium mit etwa 0,5 x 106 Lymphocyten aus der Milz von weiblichen (8-10 Wochen) CBA Mäusen inkubiert. Die Testsubstanz wird zum Medium in unterschiedlichen Konzentrationen gegeben. Die Aktivität wird durch die Fähigkeit ermittelt, die-mit der Proliferation zusammenhängende DNA Synthese zu unterdrücken, wie dies durch Einbau von radioaktiv markiertem Thymidin bestimmt wird.

Die AGENTIEN DER ERFINDUNG hemmen den Tyhmidineinbau bei Konzentrationen in der Größenordnung von 0,1 bis 50,0 nM.

Die AGENTIEN DER ERFINDUNG können auch die in vitro Proliferationsreaktionen von humanen peripheren mononukleären Blutzellen beispielsweise gegenüber Tuberkulin hemmen und insbesondere einen synergistischen Effekt in Zusammnehang mit immunsuppressiv wirksamen Agentien zeigen, beispielsweise immunsuppressive Cyclosporine, wie Cyclosporin A, und Corticosteroide.

Zusätzlich zum Vorangehenden zeigt ein allgemeines pharmakologisches Testen, daß die AGENTIEN DER ERFINDUNG ein deutlich und überraschend verbessertes Profil in Bezug auf die beabsichtigte therapeutische Verwendung zeigen, wie dies später erläutert ist, verglichen mit vorher bekannten Verbindungen, beispielsweise verringerten Einfluß auf eine Verhaltensreaktion und/oder insbesondere verringerte cardiovaskuläre Wirkung in Bezug auf hämodynamische Parameter (Einfluß auf Herzfrequenz, Auslösung von Vasokonstriktion usw.)

So stellt man in einer Experimentenreihe mittels des Aortaflußtests von Doppler im Kaninchen [J. Pharmacol. Meth. 24, 263-267 (1990)] fest, daß die Verbindung von Beispiel 1 in Hydrogenoxalatsäureadditionssalzform keine cardiovaskulären Nebenwirkungen bei Dosierungen beispielsweise bis zu einer Größe-nordung von 0,3 mg/kg und nur eine geringe Abnahme der Herzfrequenz (aufgrund von Vasokonstriktion) bei Dosierungen in der Größenordnung von 1 mg/kg zeigt. Ähnlich zeigt sich, daß dieselbe Verbindung in Hydrogenoxalatsäureadditionssalzform keine oder nur eine minimale Veränderung des mittleren Arteriendrucks, der Herzfrequenz und der Plasmaglucosekonzentrationen hervorruft, beispielsweise bei Verabreichung an nicht-betäubte Hunde in Dosierungen bis zu 0,3 mg/kg i.v. oder 0,6 mg/kg p.o., was eine wesentliche und langanhaltende Hemmung der zum Plasma gegebenen PDE IV ergibt. Alle Dosierungen werden im allgemienen auch gut toleriert.

Wie bereits erwähnt, sind die AGENTIEN DER ERFINDUNG auch gekennzeichnet als Typ IV PDE Isoenzyminhibitoren mit deutlicher und erhöhter Spezifität. Sie sind ebenfalls durch eine erwähnenswert verlängerte metabolische Halbwertszeit/Wirkdauer gekennzeichnet.

Unter Berücksichtigung ihrer antiinflammatorischen Aktivität, ihrem Einfluß auf die Atemwegshyperreaktivität und ihrem Profil in Bezug auf die PDE Isoenzymhemmung, insbesondere als selektive Typ IV Inhibitoren, sind die AGENTIEN DER ERFINDUNG zur Verwendung bei der Behandlung, insbesondere der prophylaktischen Behandlung von obstruktiven oder inflammatorischen Atemwegserkrankungen indiziert, beispielsweise durch kontinuierliche und regelmäßige Verabreichung über ausgedehnte Zeiträume, um einen vorzeitigen Schutz gegen das erneute Auftreten einer Bronchokonstriktion oder anderen symptomatischen Attacken aufgrund einer obstruktiven oder inflammatorischen Atemwegserkrankung bereitzustellen, oder um eine solche Krankheit zu kontrollieren, zu verbessern oder den Ausgangszustand wiederherzustellen.

Unter Berücksichtigung inrer bronchodilatatorischen Aktivität sind die AGENTIEN DER ERFINDUNG zur Verwendung als Brönchodilatantien indiziert, beispielsweise zur Behandlung von chronischer oder akuter Bronchokonstriktion, beispielsweise zur symptomatischen Behandlung einer obstruktiven oder inflammatorischen Atemwegserkrankung.

Die Worte "Behandlung" und "behandeln", wie sie bei der vorliegenden Beschreibung und in den Patentansprüchen in Bezug auf obstruktive oder inflammatorische Atemwegserkrankungen verwendet werden, sind demnach so zu verstehen, daß sie sowohl prophylaktische als auch symptomatische Therapieformen umfassen.

Obstruktive oder inflammatorische Atemwegserkrankungen beinhalten Asthma, Pneumoconiose, chronisch obstruktive Atemwegs- oder Lungenerkrankung (COAD oder COPD) und das Atemnotsyndrom beim Erwachsenen (ARDS), wie auch die Verschlimmerung der Atemwegshyperreaktivität aufgrund einer anderen Arzneimitteltherapie, beispielsweise einer Therapie mit Aspirin oder einem 0-Agonisten.

Die Verbindungen vorliegender Erfindung sind auf die Behandlung von Asthma jedes Typs oder jeder Genese anwendbar, einschliesslich intrinsischem und speziell extrinsischem Asthma. Sie sind auf die Behandlung von allergischem (atopisch/lgE-vermitteltem) Asthma anwendbar. Sie sind auch auf die Behänd- 11 ΑΤ 404 940 Β lung von nicht-atopischem Asthma anwendbar, einschliesslich beispielsweise bronchitisches, anstrengungsinduziertes und berufliches Asthma, Asthma, das nach einer bakteriellen Infektion induziert wurde und andere nicht-allergische Asthmaarten. Sie sind ferner auf die Behandlung des kindlichen Keuchsyndroms (kindliches, beginnendes Asthma) anwendbar.

Die Verbindungen der Erfindung sind auf die Behandlung von Pneumoconiose jedes Typs oder jeder Genese anwendbar, einschliesslich beispielsweise Aluminose, Anthracose, Asbestose, Chalicose, Ptilose, Siderose, Silicose, Tabacose und Byssinose.

Die Verbindungen der Erfindung sind auf die Behandlung von COPD oder COAD einschliesslich chronischer Bronchitis, Lungenemphysem oder hiermit verbundener Atemnot anwendbar.

Die Verbindungen der Erfindung sind auch auf die Behandlung von Bronchitis jedes Typs oder jeder Genese anwendbar, einschliesslich beispielsweise akuter, arachidischer catarrhalischer, chronischer, kruppähnlicher oder phthinoider Bronchitis usw..

In Anbetracht ihrer Aktivität als selektive Hemmstoffe der THF-α Freisetzung sind die AGENTEN DER ERFINDUNG ebenfalls zur Verwendung bei der Herunterregulierung oder Hemmung der TNF-α Freisetzung indiziert, beispielsweise zur Behandlung von Krankheiten oder Zuständen, bei denen eine TNF-α Freisetzung impliziert ist oder eine vermittelnde Rolle spielt, beispielsweise Krankheiten oder Zustände mit einer Aetiologie, die eine krankhafte, beispielsweise unerwünschte, übermäßige oder unregulierte TNF-α Freisetzung beinhalten oder umfassen, insbesondere zur Behandlung von Kachexie oder Endotoxinschock und bei der Behandlung von AIDS [cf. Sharief et al., Mediators of Inflammation, 1,323-338 (1992)].

Die Verbindungen der vorliegenden Erfindung sind auf die Behandlung von Kachexie anwendbar, die mit einer krankhaften TNF-α Freisetzung oder TNF-a Blutserumspiegeln irgendeines Ursprungs zusammenhängt, einschließlich Kachexie aufgrund einer bakteriellen, viralen oder parasitischen Infektion oder aufgrund eines Mangels oder einer Verschlechterung einer humoralen oder anderen organischen Funktion, beispielsweise Nierenfunktion. Es ist beispielsweise auf die Behandlung von Krebs-, Malaria- und Vermalkachexie, Kachexie aufgrund von Störung der Hypophyse, Schilddrüse oder Thymusdrüse, wie auch urämische Kachexie. Es ist insbesondere anwendbar auf die Behandlung von AIDS-bezogener Kachexie, das heißt Kachexie aufgrund oder in Zusammenhang mit einer HIV Infektion.

Sie sind auch auf die Behandlung eines Endotoxinschocks anwendbar. Unter diesem Gesichtspunkt ist es erwähnenswert, dass die vorliegende Erfindung ein Verfahren zur Behandlung eines Endotoxinschocks liefert, wie auch von Zuständen, die auf einem Endotoxinschock beruhen oder hierfür symptomatisch sind, beispielsweise ARDS (Atemnotsyndrom beim Erwachsenen).

Sie sind ferner auf die Behandlung einer auf einer HIV Infektion beruhenden Krankheit, beispielsweise AIDS, sowie die Verbesserung oder Kontrolle des Fortschreit einer solchen Krankheit anwendbar.

In Anbetracht ihres Profils in Bezug auf die Hemmung der PDE Isoenzyme und/oder der Hemmung der THFa Freisetzung, wie auch ihrer immunsuppressiven Aktivität sind die AGENTIEN DER ERFINDUNG auch zur Verwendung als immunsuppressive Agentien indiziert, beispielsweise zur Behandlung von Autoimmunerkrankungen, insbesondere zur Behandlung von Autoimmunerkrankungen, bei denen Entzündungsprozesse beteiligt sind oder die eine inflammatorische Komponente oder Aetiologie aufweisen, oder als antiinflammatorische Agentien zur Behandlung einer Entzündungskrankheit, insbesondere zur Behandlung einer entzündlichen Erkrankung, bei der Autoimmunreaktionen beteiligt sind oder die eine autoimmune Komponente oder Aetiologie aufweisen.

Beispiele für solche Kranheiten, auf die die vorliegende Erfindung anwendbar ist, beeinhalten autoimmune hämatologische Störungen (beispielsweise hämolytische Apämie, apiastische Anämie, reine Erythro-cytenanämie und idiopathische Thrombocytopenie), systemischen Lupus erythematodes, Polychondritis, Sclerodermien, Wegenersche Granulomatose, Dermatomyositis, chronische aktive Hepatitis, Myasthenia gravis, Steven-Johnson Syndrom, idiopathische Sprue, autoimmune entzündliche Darmerkrankung (beispielsweise Colitis ulcerosa und Morbus Crohn), endokrine Ophthalmopathie, Morbus Grave, Sarcoidose, Alveolitis, chronische hypersensitive Pneumonie, Multiple Sklerose, primäre biläre Zirrhose, juvenilen Diabetes (Diabetes mellitus Typ I), Uveitis (anteriore und posteriore), Keratoconjunktivitis sicca und vernaler Keratoconjunktivitis, interstitielle Lungenfibrose, psoriatische Arthritis und Glomerulonephritis (mit und ohne nephrotischem Syndrom, beispielsweise einschließlich idiopathischem nephrotischen Syndrom oder mini-mal-change Nephropathie), wie auch inflammatorische und/oder hyperproliferative Hautkrankheiten, wie Psoriasis, atopische Dermatitis, Pemphigus und insbesondere Kontaktdermatitis, beispielsweise allergische Kontaktdermatitis.

Die AGENTIEN DER ERFINDUNG sind insbesondere zur Verwendung bei der Behandlung von Arthritis und anderen rheumatischen oder inflammatorischen Krankheiten indiziert, speziell zur Behandlung von rheumatischer Arthritis. 12

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Als Immunsuppressiva sind die AGENTIEN DER ERFINDUNG ferner zur Prävention der Transplantatabstoßung indiziert, beispielsweise zur Erhaltung von allogenen Organtransplantaten oder dergleichen, beispielsweise in Bezug auf ein Nieren-, Leber-, Lunge-, Her2-, Herz-Lunge-, Darm-, Knochenmark-, Haut- oder Corneatransplantat.

In Anbetracht ihrer antiinflammatorischen Aktivität, insbesondere in Bezug auf die Hemmung der Aktivierung der Eosinophilen, sind die AGENTIEN DER ERFINDUNG auch zur Verwendung bei der Be handlung von Störungen, die mit Eosinophilen Zusammenhängen indiziert, beispielsweise Eosinophilie, insbesondere mit Eosinophilen zusammenhängende Störungen der Atemwege einschließlich (beispielsweise krankhafter Eosinophileninfiltration der Lungengewebe) einschließlich Hypereosinophilie, soweit sie die Atemwege und/oder Lungen betrifft, wie auch beispielsweise mit Eosinophilen zusammenhängende Störungen der Atemwege aufgrund oder zusammenhängend mit dem Löffler Syndrom, Eosinophilenpneumonie, parasitischer (insbesondere metazoischer) Befall (einschließlich tropischer Eosinophilie), bronchopulmonale Aspergillose, Polyarteritis nodosa (einschließlich des Churg-Strauss Syndroms), eosinophile Granulome und mit Eosinophilen zusammenhängende Störungen, die die Atemwege betreffen und durch eine Arzneimittelreaktion verursacht werden.

In Anbetracht ihres Profils in Bezug auf die Hemmung der PDE Isoenzyme, insbesondere ihres Profils als selektive Typ IV Inhibitoren, sind die AGENTIEN DER ERFINDUNG ferner als Typ IV PDE-Inhibitoren indiziert, beispielsweise zur Behandlung von Krankheiten, die einen Calciumentzug im Gewebe beinhalten, insbesondere degenerative Krankheiten der Knochen und Gelenke, die einen Calciumentzug beinhalten, speziell Osteoporose. Unter diesem Gesichtspunkt sind sie ferner zur Verwendung bei der Behandlung von allergischen inflammatorischen Krankheiten, wie Rhinitis, Conjunktivitis, atopische Dermatitis, Urticaria und gastrointestinalen Allergien, als Vasodilatatoren, beispielsweise zur Behandlung von Angina, Bluthochdruck, kongestivem Herzversagen und Multiinfarktdemenz und zur Behandlung von anderen Zuständen, bei denen die Hemmung der PDE IV indiziert ist, beispielsweise Depression, Zustände und Krankheiten, die durch verminderte Wahrnehmungsfunktion charakterisiert sind, einschließlich Alzheimersche Krankheit, Parkinson Krankheit und Schlaganfall.

In Anbetracht ihrer Fähigkeit, synergistisch mit immunsuppressiven und/oder antiinflammatorischen Arzneimittelsubstanzen wechselzuwirken, sind die AGENTIEN DER ERFINDUNG auch zur Verwendung als cotherapeutische Mittel zur gemeinsamen Verwendung mit solchen Arzneimitteln indiziert, beispielsweise als Verstärker der therapeutischen Wirkung solcher Arzneimittel oder als Mittel zur Reduzierung der erforderlichen Dosierung oder von potentiellen Nebenwirkungen solcher Arzneimittel. Arzneimittelsubstanzen, mit denen die AGENTIEN DER ERFINDUNG geeignet zusammen verabreicht werden können, beinhalten beispielsweise Cyclopeptide, Cyclopeptolide, oder Macrolide, immunsuppressive oder antiinflammatorische Arzneimittelsubstanzen, beispielsweise Arzneimittel, die zur Cyclosporinklasse gehören, wie die Cyclosporine A oder G, die Arzneimittelsubstanzen Tacrolimus (auch bekannt als FK 506), Ascomycin und Rapamycin und ihre verschiedenen bekannten Entsprechungen und Derivate, wie auch Glucocorticosteroi-darzneimittel. Krankheiten, auf die eine solche gemeinsame Therapie angewendet werden kann, beinhalten beispielsweise jede Krankheit oder jeden Zustand, die eine immunsuppressive oder antiinflammatorische Arzneimitteltherapie erfordern, wie sie vorher angeführt wurden. Insbesondere sind die AGENTIEN DER ERFINDUNG zur Verwendung in der gemeinsamen Therapie wie oben erwähnt geeignet, beispielsweise zum Zweck der immunsuppressiven, antiinflammatorischen oder antiasthmatischen Behandlung, um beispielsweise eine Cyclosporin-, beispielsweise Cyclosporin A-, Macrolid- oder Steroid-sparende Wirkung zu erreichen.

Gemäß dem Vorangehenden liefert die vorliegende Erfindung auch: B. Ein AGENS DER ERFINDUNG zur Verwendung als Pharmazeutikum, beispielsweise zur Verwendung in jedem Verfahren oder in jeder Behandlung jeder Krankheit oder jedem Zustand, wie sie vorher beschrieben wurden, beispielsweise wie oben unter A definiert.

Die verwendeten Dosierungen variieren in Abhängigkeit von beispielsweise der zu behandelnden bestimmten Krankheit oder des zu behandelnden bestimmten Zustands, des bestimmten verwendeten AGENS DER ERFINDUNG, der Verabreichungsart und der gewünschten Therapie. Im allgemeinen werden befriedigende Ergebnisse jedoch beispielsweise zur Behandlung der vorher beschriebenen Krankheiten bei einer oralen Verabreichung bei Dosierungen in der Größenordung von etwa 0,01 bis 2,0 mg/kg erhalten und eine indizierte Tagesdosis für eine orale Verabreichung liegt demnach im Bereich von etwa 0,75 bis 150 mg, welche bequemerweise 1x oder in verteilten Dosen 2 bis 4x täglich oder in verzögerter Freisetzungsform verabreicht wird. Einheitsdosierungsformen zur oralen Verabreichung umfassen daher etwa 0,2 bis 75 oder 150, beispielsweise etwa 0,2 oder 2,0 bis 50, 75 oder 100 mg AGENS DER ERFINDUNG zusammen mit einem pharmazeutisch annehmbaren Verdünnungsmittel oder Träger hierfür. 13

Claims

AT404 940 B Zur Verwendung bei der Behandlung von chronischen oder obstruktiven Atemwegserkrankungen, beispielsweise Asthma, werden die AGENTEN DER ERFINDUNG vorzugsweise auf dem Inhalationsweg verabreicht. Erneut variieren die verwendeten Dosierungen, beispielsweise in Abhängigkeit der bestimmten Krankheit oder des bestimmten Zustands, des bestimmten verwendeten AGENS DER ERFINDUNG, der bestimmten Verabreichungsart (ob beispielsweise durch Inhalation eines trockenen Pulvers oder auf andere Weise) und der gewünschten Wirkung. Im allgemeinen liegt jedoch eine indizierte inhalierte Tagesdosis in der Größenordnung von etwa 2,5 bis etwa 130,0 ug/kg/Tag, beispielsweise von etwa 13,0 bis etwa 60,0 ug/kg/Tag und eine indizierte Tagesdosis zur Verabreichung durch Inhalation, beispielsweise bei der Behandlung von Asthma, liegt im Bereich von etwa 0,2 bis etwa 10,0 mg, beispielsweise etwa 1 bis etwa 5 mg, die bequemerweise als einzelne Verabreichung oder 2 oder 3 getrennte Verabreichungen während des Tages gegeben werden. Eine geeignete Dosierung pro Verabreichung liegt daher in der Größenordung von etwa 200 ug bis etwa 3,3 mg mit einer Verabreichung bis zu 3 Mal täglich, geeignet verabreicht aus einer Trockenpulverinhalationsverabreichungseinheit in einer Serie von 2 bis 8 Sprühstößen bei jeder Verabreichung. Die AGENTEN DER ERFINDUNG können auch über jeden anderer Weg verabreicht werden, beispielsweise durch Infusion, wie zur Behandlung eines Endotoxinschocks, nasal, wie zur Behandlung der Rhinitis, okular, wie zur Behandlung der Autoimmunkrankheiten des Auges, dermal, das heißt topisch auf der Haut, wie zur Behandlung von Dermatosen oder Psoriasis, oder rektal, beispielsweise über Klistier oder Zäpfchen, wie zur Behandlung der inflammatorischen Darmerkrankung. Geeignete Dosierungen zur Verabreichung über solche Wege sind im allgemeinen in der Größenordung von 10 bis 100x niedriger, als jene, die für orale Verabreichung erforderlich sind. Pharmazeutische Zusammensetzungen, die die AGENTEN DER ERFINDUNG umfassen, können mittels herkömmlicher Verdünnungsmittel oder Hilfsstoffe und Techniken hergestellt werden, die im Fachgebiet der Galenik bekannt sind. Daher beinhalten orale Dosierungsformen Tabletten, Kapseln, und dergleichen. Formulierungen zur dermalen Verabreichung können in Form von Cremen, Salben, Gelen oder transdermalen Verabreichungssystemen, beispielsweise Pflastern vorliegen und zusätzlich zu inerten Verdünnungsmitteln oder Trägem geeigneterweise Hautpenetrations-fördernde Mittel enthalten, wie sie in der Technik bekannt sind. Zusammensetzungen zur Inhalation umfassen Aerosol oder andere atomisierbare Formulierungen, wie auch inhalierbare Trockenpulverformulierungen mit oder ohne Verdünnungsmittel zur Verabreichung über jedes geeignete Trockenpulverinhalationssystem, das in der Technik bekannt ist. Zur Herstellung von Trockenpulverformen zur Inhalation werden die Verbindungen der Formel I oder physiologisch hydrolysierbare und annehmbare Ester hiervon geeigneterweise in pharmazeutisch annehmbarer Säureadditionssalzform verwendet. Im Fall der Verbindung von Beispiel 1 ist das Hydrochloridsalz (Smp. 218-222 “ C besonders geeignet. Dieses Salz wird geeignet gemahlen, beispielsweise mittels eines Luftstroms oder einer keramischen Mühle, um ein fein zerteiltes inhalierbares Pulver bereitzustellen, das beispielsweise einen mittleren Partikeldurchmesser von etwa 2-3 um aufweist. Mindestens etwa 90 % des Materials haben einen mittleren Partikeldurchmesser von weniger als 7,8 um, insbesondere von weniger als 4,8 um. Um die Zerteilung eines geeigneten und konsistent partikulären Produkts sicherzustellen, das zu Verabreichung durch Inhalation in trockener Pulverform geeignet ist, kann es bevorzugt sein, das Mahlen des Wirkstoffs, beispielsweise des Hydrochloridsalzes des Produkts von Beispiel 1 vorgemischt mit einem geeigneten inhalierbaren Trägermedium, beispielsweise Lactose unter Bedingungen verringerter Temperatur auszuführen. Gemäß dem Vorangegangenen liefert die vorliegende Erfindung auch eine pharmazeutische Zusammensetzung, die ein AGENS DER ERFINDUNG zusammen mit einem pharmazeutisch annehmbaren Verdünnungsmittel oder Träger hierfür enthält, beispielsweise zur Verwendung in jedem vorher definierten Verfahren. AGENTEN DER ERFINDUNG, die pharmazeutisch annehmbare Säureadditionssalze sind, zeigen größenordnungsmäßig dieselbe Wirkung und Verträglichkeit, wie die vorher definierten Verbindungen der Formel I oder physiologisch hydrolysierbare und annehmbare Ester hiervon. Patentansprüche 1. Verbindung der Formel I 14 AT 404 940 B

worin R für Ethyl oder n-Propyl steht, oder ein physiologisch hydrolysierbarer und annehmbarer Ester hiervon, oder Säureadditionssalze einer solchen Verbindung oder eines solchen Esters.
2. Verbindung der Formel I nach Anspruch 1, worin R für Ethyl steht oder ein Säureadditionssalz hiervon.
3. Verbindung der Formel I nach Anspruch 1, worin R für n-Propyl steht oder ein Säureadditionssalz hiervon.
4. Pharmazeutische Zusammensetzung, die eine Verbindung der Formel I nach einem der Ansprüche 1 bis 3 oder einen physiologisch hydrolysierbaren und annehmbaren Ester hiervon oder ein physiologisch annehmbares Säureadditionssalz einer solchen Verbindung oder eines Esters zusammen mit einem pharmazeutisch annehmbaren Verdünnungsmittel oder Träger hierfür umfaßt.
5. Verbindung der Formel I nach einem der Ansprüche 1 bis 3 oder ein physiologisch hydrolysierbarer und annehmbarer Ester hiervon oder ein pharmazeutisch annehmbares Säureadditionssalz einer solchen Verbindung oder eines Esters zur Verwendung als Pharmazeutikum.
6. Verbindung, Ester oder Salz nach Anspruch 5 zur Verwendung bei der Behandlung einer obstruktiven oder inflammatorischen Atemwegserkrankung.
7. Verbindung, Ester oder Salz nach Anspruch 5 zur Verwendung bei der Behandlung von Psoriasis.
8. verfahren zur Herstellung einer Verbindung, eines Esters oder Salzes nach Anspruch 1, gekennzeichnet durch: a) zur Herstellung einer Verbindung der Formel I, Abspalten von Schutzgruppen und/oder Dehydrierung von einer Verbindung der Formel II

worin R die in Anspruch 1 angegebene Bedeutung hat und entweder X, R, und R2 jeweils für Wasserstoff stehen, oder X für eine Hydroxyschutzgruppe steht und R, und R2 jeweils für Wasserstoff stehen oder für eine zusätzliche Bindung stehen, wie dies durch die gepunktete Linie angedeutet ist, 15 AT 404 940 B b) zur Herstellung eines physiologisch hydrolysierbaren und annehmbaren Esters einer Verbindung der Formel I, Veresterung einer Verbindung der Formel I, und Gewinnung des Produkts von Schritt a) oder b) in freier Form oder Säureadditionssalzform. 16