WO2023002974A1 - 生体細胞処理作業用プレートおよび生体細胞凍結前処理作業用キット - Google Patents

生体細胞処理作業用プレートおよび生体細胞凍結前処理作業用キット Download PDF

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WO2023002974A1
WO2023002974A1 PCT/JP2022/028017 JP2022028017W WO2023002974A1 WO 2023002974 A1 WO2023002974 A1 WO 2023002974A1 JP 2022028017 W JP2022028017 W JP 2022028017W WO 2023002974 A1 WO2023002974 A1 WO 2023002974A1
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WO
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biological cell
plate
recess
lid
cell processing
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PCT/JP2022/028017
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English (en)
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太 井上
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株式会社北里コーポレーション
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    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12MAPPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M25/00Means for supporting, enclosing or fixing the microorganisms, e.g. immunocoatings
    • C12M25/06Plates; Walls; Drawers; Multilayer plates
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12MAPPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M23/00Constructional details, e.g. recesses, hinges
    • C12M23/02Form or structure of the vessel
    • C12M23/12Well or multiwell plates
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12MAPPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M23/00Constructional details, e.g. recesses, hinges
    • C12M23/38Caps; Covers; Plugs; Pouring means
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12MAPPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M45/00Means for pre-treatment of biological substances
    • C12M45/20Heating; Cooling

Definitions

  • the present invention provides various treatments of biological cells, for example, mammalian eggs, eggs such as embryos, sperm, hematopoietic stem cells, stem cells such as pluripotent stem cells.
  • the present invention relates to a biological cell processing working plate and a biological cell freezing pretreatment working kit used for cell thawing and the like.
  • Cryopreservation of mammalian embryos which are living cells, enables the preservation of genetic resources of specific strains and breeds. It is also effective in maintaining endangered animal species. Furthermore, it is also useful in treating human infertility.
  • a cryopreservation method for mammalian embryos in Japanese Patent Application Laid-Open No.
  • Patent Document 1 on the inner surface of a cryopreservation container such as a freezing straw, a cryovial or a cryotube in which mammalian embryos or eggs are sterilized, It has been proposed to patch the embryos or eggs with a minimal amount of vitrification fluid sufficient to envelop the cryopreservation container, seal the cryopreservation container, and rapidly cool the container by contacting it with liquid nitrogen.
  • Patent Document 2 Japanese Patent Application Laid-Open No. 2002-315573, WO 02-085110 A1.
  • the egg cryopreservation device 1 of Patent Document 2 includes a body portion 2 formed of a cold-resistant material, and an egg attachment holding device attached to one end of the body portion 2 and formed of a flexible, transparent, and liquid nitrogen-resistant material. and a cylindrical member 4 which is detachably attached to the main body 2 so as to enclose the strip 3 for retaining the adherence of eggs, and which is closed at one end and made of a cold-resistant material.
  • Patent Document 3 proposes a cell processing container for use in processing cells using a processing solution, such as processing embryos immediately before transplantation.
  • Patent Document 4 a working plate for cell freezing pretreatment in WO2021/025017.
  • Patent Document 5 Japanese Utility Model Registration No. 3226911
  • a cell manipulation instrument 1 used when manipulating cells which includes a main body portion 2 having a first well 8 filled with a first solution. and a sealing material 3 provided in a detachable state on the upper surface of the main body part 2, and the sealing material 3 is placed in the opening of the first well 8 in a state in which the first well 8 is filled with the first solution. 20, and the first well 8 is closed by the sealing material 3.
  • Patent Documents 1 to 4 are merely working plates, and the biological cell treatment liquid must be prepared by the operator. For biological cell processing operations, it is desired that preparations can be made quickly.
  • the device disclosed in Patent Document 5 does not require liquid preparation, but it is not easy to remove the sealing material.
  • a biological cell processing work plate comprising a recess, a biological cell treatment liquid filled in the recess, and a sealing sheet detachably provided at an opening of the recess
  • the working plate for biological cell processing includes a lid that encloses the recess,
  • the plate includes a base portion and an annular wall portion extending upward from the base portion.
  • the sealing sheet includes a sheet body portion for sealing the opening of the recess and a peeling grip portion extending from the sheet body portion,
  • the gripping portion for peeling separates the annular wall portion and the lid. passing through, resting on the top surface of the pedestal, pressed against the bottom edge of the lid, close to the top surface of the top surface, not grippable, and the lid being removed from the plate.
  • the peeling gripping part is lifted up and separated from the top surface of the top surface part so that the plate for biological cell processing operation can be gripped.
  • a biological cell freezing pretreatment kit wherein the biological cell freezing pretreatment kit comprises a biological cell processing plate for the first step and a biological cell processing plate for the second step,
  • the working plate for biological cell treatment for the first step has a recess, the recess is filled with the biological cell treatment liquid for the first step, and the opening of the recess is sealed with a peelable sealing sheet.
  • the biological cell processing working plate for the second step includes a first recess and a second recess, the first recess being filled with a first biological cell treatment liquid for the second step,
  • the biological cell freezing pretreatment work kit comprises: a first step biological cell processing plate lid for covering the concave portion of the first step biological cell processing plate; a lid for a biological cell processing plate for a second step that encloses the first and second recesses of the processing plate;
  • the biological cell processing plate for the first step and the biological cell processing plate for the second step each include a pedestal and an annular wall extending upward from the pedestal.
  • the recessed portion, and the pedestal portion includes an upper surface portion located between the annular wall portion and an outer edge of the pedestal portion;
  • the sealing sheet includes a sheet body that seals the opening of the recess, and a peeling grip that extends from the sheet body, In a state in which the lid covers the annular wall portion and the recess of the plate and is placed on the pedestal portion of the plate, the gripping portion for peeling separates the annular wall portion and the lid.
  • the peeling gripping part is raised, separated from the top surface of the top surface part, and can be gripped.
  • FIG. 1 is a plan view of a biological cell freezing pretreatment work kit according to an embodiment of the present invention.
  • 2 is a cross-sectional view taken along line AA of the biological cell processing plate (first step biological cell processing plate) of the present invention used in the biological cell freezing pretreatment kit of FIG. 1.
  • FIG. 3 is a cross-sectional view showing a state in which the cover is removed from the biological cell processing working plate (the biological cell processing working plate for the first step) shown in FIG.
  • FIG. 4 is a front view of a plate for biological cell processing work (plate for second step biological cell processing work) of the present invention used in the biological cell freezing pretreatment work kit of FIG.
  • FIG. 5 is a sectional view taken along the line BB of the biological cell processing plate (second step biological cell processing plate) shown in FIG.
  • FIG. 6 is a plan view of the plate body of the plate for biological cell processing (second step biological cell processing plate) shown in FIG. 7 is a front view of the plate main body of the plate for biological cell processing (second step biological cell processing plate) shown in FIG. 4.
  • FIG. 8 is a bottom view of the lid of the biological cell processing plate (second step biological cell processing plate) shown in FIG. 4.
  • FIG. 9 is a right side view of the lid of the biological cell processing plate (second step biological cell processing plate) shown in FIG. 4.
  • FIG. 10 is a plan view of an example of a sealing sheet used in the biological cell freezing pretreatment work kit and the biological cell processing work plate of the present invention.
  • FIG. 11 is a plan view of the plate for biological cell processing (second step biological cell processing plate) shown in FIG. 4 with the lid removed.
  • FIG. 12 is a front view of the plate for biological cell processing (second step biological cell processing plate) shown in FIG. 4 with the lid removed.
  • 13 is a cross-sectional view of the biological cell processing plate (second step biological cell processing plate) shown in FIG. 12 taken along the line CC.
  • FIG. 14 is a plan view of a biological cell processing plate (second step biological cell processing plate) according to another embodiment of the present invention.
  • 15 is a cross-sectional view of the working plate for biological cell processing shown in FIG.
  • FIG. 16 is a plan view of the plate body of the working plate for biological cell treatment shown in FIG. 14.
  • FIG. 17 is a cross-sectional view of a biological cell processing working plate (second step biological cell processing working plate) of another embodiment of the present invention.
  • the biological cell freezing pretreatment working kit and biological cell processing working plate of the present invention will be described with reference to the embodiments shown in the drawings.
  • the plate 1a for biological cell processing work of the present invention comprises a plate body 2a, the plate body 2a comprises a recess 8, the recess 8 is filled with a biological cell treatment liquid 9, and the recess 8 has an opening. The part is sealed by a sealing sheet 4 that can be peeled off.
  • the biological cell processing work plate 1a includes a lid 3a that encloses the recess 8.
  • the plate 1a includes a pedestal 5a and an annular wall 6a extending upward from the pedestal 5a.
  • the base portion 5a includes an annular wall portion 6a and an upper surface portion 52a positioned between the outer edge of the base portion 5a, and the lid 3a, when attached to the plate 1a, is fitted to the annular wall portion 6a and the recessed portion. 8 and placed on the base portion 5a of the plate 1a.
  • the sealing sheet 4 includes a sheet main body 41 for sealing the opening of the recess 8, and a peeling grip 42 extending from the sheet main body 41.
  • the lid 3a is attached to the annular wall of the plate 1a.
  • peeling grip portion 42 passes between annular wall portion 6a and lid 3a, and upper surface portion 52a of pedestal portion 5a. Positioned above, pressed by the lower end of the lid 3a, close to the upper surface of the upper surface portion 52a, and in a state where it cannot be gripped, and the lid 3a is removed from the plate, the peeling gripping portion 42 It rises and is separated from the upper surface of the upper surface portion 52a so that it can be gripped.
  • the biological cell freezing pretreatment kit 10 of the present invention includes a first step biological cell processing plate (biological cell processing plate) 1a and a second step biological cell processing plate (biological cell).
  • the first step biological cell processing plate 1a is provided with recesses 8, the recesses 8 are filled with the first step biological cell treatment liquid 9, and the recesses 8 are opened.
  • the portion is sealed with a peelable sealing sheet 4, and the plate 1b for biological cell processing work for the second step includes a flat plate portion 20b, a first concave portion 21 provided on the flat plate portion 20b, a second A concave portion 22 is provided, the first concave portion 21 is filled with the first biological cell-treated liquid 11 for the second step, and the second concave portion 22 is filled with the second biological cell-treated liquid 12 for the second step.
  • the opening of the first recess 21 and the opening of the second recess 22 are sealed by peelable sealing sheets 4a and 4b.
  • the plates 1a and 1b for biological cell processing work of this embodiment comprise plates (plate bodies) 2a and 2b and lids 3a and 3b for covering the flat plate portions including recesses of the plates (plate bodies) 2a and 2b.
  • Plates (plate bodies) 2a and 2b are provided with pedestals 5a and 5b and annular wall portions 6a and 6b extending upward from the pedestals 5a and 5b.
  • the pedestals 5a and 5b are provided with upper surface portions 52a and 52b located between the annular wall portions 6a and 6b and the outer edges of the pedestals 5a and 5b, and the lids 3a and 3b are plates (plate bodies ) When attached to 2a and 2b, it covers the annular walls 6a and 6b and the recesses 8, 21, 22 and 23 and is placed on the pedestals 5a and 5b of the plates (plate bodies) 2a and 2b.
  • the sealing sheet 4 (4a, 4b, 4c) includes a sheet body portion 41 that seals the openings of the recesses 8, 21, 22, 23, and a peeling sheet extending from the sheet body portion 41.
  • the lids 3a and 3b cover the annular walls 6a and 6b and the flat plate portions 20a and 20b of the plates (plate bodies) 2a and 2b, and the pedestals of the plates (plate bodies) 2a and 2b are provided.
  • the peeling gripper 42 passes between the annular wall portions 6a, 6b and the lids 3a, 3b, and the pedestals 5a .
  • the lids 3a, 3b are plates ( When removed from the plate main bodies 2a and 2b, the peeling gripping portion 42 rises and is separated from the upper surfaces of the upper surface portions 52a and 52b so that it can be gripped.
  • the biological cell freezing pretreatment work kit 10 is detachably attached to the biological cell processing work plate 1a for the first step, which is a biological cell processing work plate, and the biological cell processing work plate 1a for the first step ( a lid 3a to be fitted), a second step biological cell processing plate 1b that is a biological cell processing plate, and a second step biological cell processing plate 1b detachably mounted (fitted). ) and a lid 3b.
  • a first-step biological cell processing plate 1a which is a biological cell processing plate, includes a plate body 2a. As shown in FIGS. 1 to 3, the plate body 2a includes a pedestal portion 5a and an annular wall portion 6a extending upward from the pedestal portion 5a, and a flat plate portion 20a inside the annular wall portion 6a. . In the plate body 2a of this embodiment, the flat plate portion 20a is located inside the annular wall portion 6a and at the upper end of the annular wall portion 6a.
  • the pedestal portion 5a includes an upper surface portion 52a positioned between the annular wall portion 6a and the outer edge of the pedestal portion 5a, and the lid 3a covers the annular wall portion 6a and the flat plate portion 20a when attached to the plate body 2a. , is placed on the pedestal portion 5a (specifically, on the upper surface portion 52a) of the plate body 2a.
  • the base portion 5a has an annular leg portion 51a, and an upper surface portion 52a is provided at the upper end thereof.
  • the upper surface portion 52a includes a pressable portion that can be pressed with a finger when the sealing sheet 4 is peeled off using the peeling grip portion 42. As shown in FIG.
  • the upper surface portion 52a has a flat portion extending to the front side from the recess portion 8 when the sealing sheet 4 is peeled off, and this portion can be pressed with a finger. and can be used as a pressable portion (pressing portion). For this reason, for example, by pressing the upper surface portion 52a with the left finger and holding the plate down, the peeling grip portion 42 is grasped and pulled up, thereby preventing the liquid filled in the concave portion from flowing out. , the sealing sheet 4 can be peeled off.
  • the height of the base portion 5a is preferably 2 to 7 mm, particularly preferably 3 to 5 mm.
  • the height of the annular wall portion 6a is preferably 1 to 5 mm, particularly preferably 1.5 to 4 mm.
  • the recessed portion 8 is provided in the flat plate portion 20a.
  • the diameter of the opening of the concave portion 8 is preferably 15 to 45 mm, particularly preferably 20 to 40 mm.
  • the depth of the concave portion 8 is preferably 5 to 20 mm, particularly preferably 7 to 15 mm.
  • the recess 8 is a partially spherical recess.
  • the recess 8 is filled with the biological cell treatment liquid 9 .
  • the biological cell treatment liquid 9 a biological cell treatment liquid suitable for the purpose of cell treatment is used.
  • the plate 1a of this embodiment is the biological cell processing work plate for the first step of the biological cell freezing pretreatment work kit 10
  • the recesses 8 are filled with the cell membrane permeable cryoprotectant-free treatment liquid 9. be done.
  • the treatment solution (BS) that does not contain a cell membrane-permeable cryoprotectant one that has been conventionally used is preferably used.
  • a cell membrane-permeable cryoprotectant-free treatment solution a cell culture base solution (e.g., HEPES [4-(2-HydroxyEthyl)-1-PiperazineEthaneSulfonic acid]-containing cell culture solution) is added with a cell membrane-permeable cryoprotectant and does not contain any compound considered necessary, e.g. It is preferable to contain one or more cell membrane impermeable cryoprotectants selected from water-soluble celluloses and antibiotics such as gentamicin.
  • the sealing sheet 4 includes a sheet main body portion 41 for sealing the opening of the recess 8 and a peeling grip portion 42 extending from the sheet main body portion 41.
  • An adhesive substance 43 such as an adhesive substance or a pressure-sensitive adhesive is applied to the lower surface of the sheet main body portion 41 .
  • the adhesive substance may be provided only on the peripheral portion of the lower surface of the sheet main body portion 41 .
  • the seat main body 41 is larger than the opening of the recess 8 .
  • the outer periphery of the opening of the concave portion 8, which is part of the flat portion, is a flat surface, and the outer edge side portion of the sheet main body portion 41 of the sealing sheet 4 can be peeled off from the flat peripheral edge. affixed to.
  • the width of the adhered portion to the planar portion of the sealing sheet (sheet body portion 41) is preferably 0.7 mm or more, particularly preferably 1 mm or more.
  • an end display marker 44 is provided at the free end of the peeling grip portion 42 .
  • a gas-impermeable sheet is preferable for the sealing sheet 4 , particularly for the sheet body portion 41 . With such a structure, denaturation and concentration change of the biological cell treatment liquid 9 filled in the recess 8 can be suppressed.
  • the sealing sheet 4 is a flexible sheet including a peeling grip portion 42 .
  • the sealing sheet 4 preferably has a certain degree of strength, flexibility, and gas impermeability. Examples thereof include ethylene-vinyl acetate copolymer, polyvinyl alcohol, polyvinylidene chloride, polyamide, polyester, and polyacrylonitrile. , vinylidene chloride/acrylonitrile copolymer, acrylonitrile-based methyl methacrylate/butadiene copolymer, nylon 6, biaxially oriented nylon, biaxially oriented polyethylene terephthalate, biaxially oriented polypropylene, high density polyethylene, ionomer resin, metal deposition A film alone or a combination of these polymers is preferred.
  • the thickness of the sealing sheet 4 is preferably 5-300 ⁇ m, particularly 25-200 ⁇ m.
  • the sealing sheet 4 is grasped for peeling in a state where the lid 3a is mounted (placed) on the plate (plate main body) 2a (FIGS. 1 and 2).
  • the portion 42 is bent, passes through the annular wall portion (outer surface) 6a and the lid (inner surface) 3a, and is positioned on the upper surface portion 52a of the pedestal portion 5a. It is close to the top surface and cannot be grasped.
  • the lid 3a when the lid 3a is removed from the plate (plate main body) 2a, the state shown in FIG. and can be grasped.
  • the free end of the peeling grip portion 42 extends from the edge of the plate (plate main body) 2a, making it easier to grip. become a thing.
  • the second-step biological cell processing plate 1b which is a biological cell processing plate, includes a plate body 2b and a lid 3b attached (placed) on the plate body 2b.
  • the plate body 2b of the second step biological cell processing working plate includes a base portion 5b and an annular wall portion 6b extending upward from the base portion 5b.
  • a flat plate portion 20b is provided inside the wall portion 6b.
  • the flat plate portion 20b is located inside the annular wall portion 6b and below the upper end of the annular wall portion 6b. Therefore, the annular wall portion 6b protrudes upward from the flat plate portion 20b.
  • the pedestal portion 5b has an upper surface portion 52b positioned between the outer edge of the annular wall portion 6b and the pedestal portion 5b, and the lid 3b covers the annular wall portion 6b and the flat plate portion 20b when attached to the plate body 2b. , is placed on the pedestal portion 5b (specifically, on the upper surface portion 52b) of the plate body 2b.
  • the base portion 5b has an annular leg portion 51b, and an upper surface portion 52b is provided on the upper end thereof.
  • the height of the pedestal portion 5b (annular leg portion 51b) is preferably 1 to 5 mm, particularly preferably 1.5 to 4 mm.
  • the height of the annular wall portion 6b is preferably 1 to 5 mm, particularly preferably 1.5 to 4 mm.
  • the flat plate portion 20b is provided with not only the first recess 21, but also the second recess 22 and the third recess 23.
  • the number of recesses may be two, or four or more.
  • the diameter of the openings of the recesses 21, 22, 23 is preferably 5 to 20 mm, particularly preferably 7 to 15 mm.
  • the depth of the concave portions 21, 22, 23 is preferably 3 to 15 mm, particularly preferably 4 to 10 mm.
  • the recesses 21, 22, 23 are substantially hemispherical recesses.
  • the first concave portion 21, the second concave portion 22 and the third concave portion 23 are filled with the biological cell treatment liquids 11, 12 and 13.
  • the biological cell-processing liquid filled in the first concave portion and the biological cell-treated liquid filled in the second concave portion are preferably different.
  • one of the treated biological cell solutions preferably has a color distinguishable from the other treated biological cell solution.
  • the recess has the first recess, the second recess and the third recess
  • the three biological cell-treated liquids 11, 12 and 13 filled in the first recess 21, the second recess 22 and the third recess 23 At least one is preferably different from the other biological cell treatment liquids.
  • the different biological cell-treated liquid and the remaining two biological cell-treated liquids have colors that allow them to be distinguished from each other.
  • coloring agents include Red No. 2 (amaranth), Red No. 3 (erythrosine), Red No. 102 (new coccine), Yellow No. 4 (tartrazine), Yellow No. 5 (Sunset Yellow FCF), Green No. 3 (Fast Green FCF), Blue No. 1 (Brilliant Blue FCF), Blue No. 2 (Indigo Carmine) and their aluminum lakes.
  • biological cell treatment liquids 11, 12, and 13 biological cell treatment liquids suitable for the purpose of cell treatment are used.
  • the plate 1b of this embodiment is the biological cell processing working plate for the second step of the biological cell freezing pretreatment working kit 10
  • the first recesses 21 are filled with a treatment liquid containing a cell membrane permeable cryoprotectant.
  • a low-concentration treatment solution ES: Equilibration Solution
  • a cell membrane-permeable cryoprotectant at a low concentration is filled.
  • a low-concentration treatment solution (ES) containing a cell membrane-permeable cryoprotectant at a low concentration includes a cell culture base solution (e.g., HEPES [4-(2-HydroxyEthyl)-1-PiperazineEthaneSulfonic acid]-containing cell culture solution).
  • a cell culture base solution e.g., HEPES [4-(2-HydroxyEthyl)-1-PiperazineEthaneSulfonic acid]-containing cell culture solution.
  • a cell membrane permeable cryoprotectant such as glycerol, propylene glycol, dimethyl sulfoxide (DMSO), ethylene glycol, butanediol is added to a low concentration, and sucrose, trehalose, percoll, polyethylene glycol, polyvinylpyrrolidone , bovine serum albumin, ficoll, hydroxypropylcellulose, hydroxypropylmethylcellulose, hydroxyethylmethylcellulose, and the like.
  • this ES may also contain an antibiotic such as gentamicin.
  • the content of the cell membrane-permeable cryoprotectant in this ES is the content of the cell membrane-permeable cryoprotectant in the high-concentration treated solution (VS) containing the cell membrane-permeable cryoprotectant at a high concentration, which will be described later. It is preferably 20 to 70%, particularly preferably 30 to 60%.
  • the plate 1b of this embodiment is the biological cell processing work plate for the second step of the biological cell freezing pretreatment work kit 10
  • the second concave portion 22 and the third concave portion 23 are provided with a cell membrane permeable freezing agent.
  • a treatment liquid containing a protective substance is filled.
  • a high-concentration treatment solution VS: Vitrification Solution
  • a cell membrane-permeable cryoprotectant at a high concentration is filled.
  • Examples of the high-concentration treatment solution (VS) containing a cell membrane-permeable cryoprotectant at a high concentration include cell culture base solution (e.g., HEPES [4-(2-HydroxyEthyl)-1-PiperazineEthaneSulfonic acid]-containing cell culture solution), glycerol, propylene glycol, dimethyl sulfoxide (DMSO), ethylene glycol, butanediol and other cell membrane permeable cryoprotectants are added to a high concentration, and sucrose, trehalose, percol, polyethylene glycol, Preferred are those containing cell membrane impermeable cryoprotectants such as polyvinylpyrrolidone, bovine serum albumin, ficoll, hydroxypropylcellulose, hydroxypropylmethylcellulose, hydroxyethylmethylcellulose.
  • cell culture base solution e.g., HEPES [4-(2-HydroxyEthyl)-1-Piperazine
  • this VS may also contain an antibiotic such as gentamicin.
  • the content of the cell membrane-permeable cryoprotectant in this VS is the content of the cell membrane-permeable cryoprotectant in the above-mentioned "ES" (low-concentration treated solution containing the cell-membrane-permeable cryoprotectant at a low concentration). is preferably 1.5 to 3 times, particularly preferably 1.7 to 2.5 times.
  • the opening of the first recess 21 is sealed with a peelable sealing sheet 4a
  • the opening of the second recess 22 is sealed with a peelable sealing sheet 4b
  • the third recess 23 is sealed with a peelable sealing sheet 4c so that the liquid filled in each recess does not flow out.
  • the sealing sheets 4a, 4b and 4c shown in FIG. 10 and described above can be preferably used.
  • the lid 3b of the second step biological cell processing working plate covers the entire annular wall portion 6b and flat plate portion 20b.
  • the lid 3b of this embodiment has a top plate portion 31 and an annular side wall 32 extending downward from the top plate portion 31.
  • the annular side wall 32 is provided with laterally facing slits 33 .
  • the gripping part 42 for peeling rises up and faces upward. It is spaced apart from the upper surface of the portion 52b and obliquely protrudes from the upper edge of the annular wall portion 6b, so that it can be gripped.
  • the free end of the peeling grip portion 42 protrudes obliquely from the upper edge of the annular wall portion 6b of the plate (plate main body) 2b. , is easy to grasp.
  • the working plates 1a, 1b for biological cell processing and the lids 3a, 3b are made of a synthetic resin material. It is desirable that the working plate and lid for biological cell processing have high transparency, and a transparent hard synthetic resin is suitable.
  • transparent hard synthetic resins include styrene resins such as polystyrene and SBS, polycarbonates, acrylonitrile resins, polyolefins such as polypropylene and polyethylene, polyesters such as polyvinyl chloride, PMMA (polymethyl methacrylate) polyethylene terephthalate, and polybutylene terephthalate. It is preferable to use a resin or the like.
  • the biological cell processing plate 1c as shown in FIGS. 14 to 16 may be used as the biological cell processing plate.
  • the basic configuration of the biological cell processing working plate 1c of this embodiment is the same as that of the biological cell processing working plate 1b described above. The only difference is that annular ribs 26 are provided around the openings of the first, second, and third recesses 21, 22, and 23 of the plate body 2c.
  • the plate body 2c is provided with a working liquid storage portion 27 (waste liquid storage portion) formed by the flat portion 20b, the annular wall portion 6b, and the three annular ribs 26 on the flat portion 20b.
  • the sealing sheets 4 a , 4 b , 4 c are attached to the upper surface of the annular rib 26 . For this reason, the upper surface of the annular rib 26 is preferably flat as shown.
  • the shape of the recess is not limited to the above-described one.
  • the recess 28 in the plate body 2d of the biological cell processing work plate 1d shown in FIG. It may be an inverted truncated cone with 28a.
  • the biological cell processing work plate of the present invention includes a recess, a biological cell processing liquid filled in the recess, and a sealing sheet detachably provided at the opening of the recess.
  • the plate for biological cell processing work includes a lid that encloses the recess, the plate includes a pedestal and an annular wall extending upward from the pedestal, the annular wall has a recess inside, The pedestal has a top portion located between the annular wall and the outer edge of the pedestal, and the lid encloses the annular wall and the recess when attached to the plate and rests on the pedestal of the plate.
  • the sealing sheet includes a sheet main body portion for sealing the opening of the recess and a peeling grip portion extending from the sheet main body portion, and the lid is attached to the annular wall portion of the plate. and the recessed portion and placed on the pedestal portion of the plate, the peeling grip portion passes between the annular wall portion and the lid, is positioned on the upper surface portion of the pedestal portion, and is positioned on the lower end of the lid.
  • the peeling grip is raised, separated from the top surface of the top surface, and can be gripped. Become.
  • the lid when the lid is attached, peeling of the sealing sheet is substantially unnecessary, and thus unnecessary peeling of the sealing sheet is prevented. Since the part rises and is separated from the upper surface of the upper surface part and can be grasped, the peeling start part can be easily recognized, and the sealing sheet can be easily peeled, and the biological cell treatment liquid is filled. The opening of the recess can be opened quickly.
  • the working plate for biological cell processing of the present invention is as follows.
  • a biological cell processing work plate comprising a recess, a biological cell treatment liquid filled in the recess, and a sealing sheet detachably provided at an opening of the recess
  • the working plate for biological cell processing includes a lid that encloses the recess,
  • the plate includes a base portion and an annular wall portion extending upward from the base portion.
  • the sealing sheet includes a sheet body portion for sealing the opening of the recess and a peeling grip portion extending from the sheet body portion,
  • the gripping portion for peeling separates the annular wall portion and the lid. passing through, resting on the top surface of the pedestal, pressed against the bottom edge of the lid, close to the top surface of the top surface, not grippable, and the lid being removed from the plate.
  • the peeling gripping part is lifted up and separated from the top surface of the top surface part so that the plate for biological cell processing operation can be gripped.
  • This biological cell processing work plate includes a recess, a biological cell processing liquid filled in the recess, and a sealing sheet detachably provided at the opening of the recess.
  • the plate for biological cell processing work includes a lid that encloses the recess, the plate includes a pedestal and an annular wall extending upward from the pedestal, the annular wall has a recess inside, The pedestal has a top portion located between the annular wall and the outer edge of the pedestal, and the lid encloses the annular wall and the recess when attached to the plate and rests on the pedestal of the plate.
  • the sealing sheet includes a sheet main body portion for sealing the opening of the recess and a peeling grip portion extending from the sheet main body portion, and the lid is attached to the annular wall portion of the plate. and the recessed portion and placed on the pedestal portion of the plate, the peeling grip portion passes between the annular wall portion and the lid, is positioned on the upper surface portion of the pedestal portion, and is positioned on the lower end of the lid.
  • the peeling grip is raised, separated from the top surface of the top surface, and can be gripped. Become.
  • the lid when the lid is attached, peeling of the sealing sheet is substantially unnecessary, and thus unnecessary peeling of the sealing sheet is prevented. Since the part rises and is separated from the upper surface of the upper surface part and can be grasped, the peeling start part can be easily recognized, and the sealing sheet can be easily peeled, and the biological cell treatment liquid is filled. The opening of the recess can be opened quickly.
  • the above embodiments may be as follows. (2) The above (1), wherein the upper surface portion of the pedestal portion of the plate is provided with a pressable portion that can be pressed by a finger when peeling the sealing sheet using the projecting peeling grip portion. A working plate for biological cell processing according to . (3) The plate for biological cell processing work according to (1) or (2) above, wherein the plate includes a flat plate portion provided inside the annular wall portion, and the recess is provided in the flat plate portion. plate. (4) The working plate for biological cell processing according to (3) above, wherein the flat plate portion is located inside the annular wall portion and below the upper end of the annular wall portion.
  • the plate includes an annular rib provided on the periphery of the recess, a liquid retaining portion formed by the flat plate portion, the annular rib, and the annular wall portion, and further comprising the sealing portion.
  • the plate includes a first recess and a second recess, which are the recesses, the second recess is filled with a biological cell treatment liquid, and the opening of the second recess is a peeling part.
  • the biological cell-processing liquid filled in the first recess and the biological cell-processing liquid filled in the second recess are different, and one of the biological cell-processing liquids is the other biological cell-processing liquid.
  • the working plate for biological cell processing according to (6) above which has a color distinguishable from the liquid.
  • the plate includes a first recess, a second recess, and a third recess, which are the recesses, and the second recess and the third recess are filled with a biological cell treatment liquid;
  • At least one of the three biological cell-treated liquids filled in the first recess, the second recess, and the third recess is different from the other biological cell-treated liquids, and
  • the kit for pretreatment work for freezing biological cells of the present invention is as follows. (10) A biological cell pretreatment kit for freezing, wherein the biological cell pretreatment kit includes a first step biological cell processing plate and a second step biological cell processing plate. prepared, The working plate for biological cell treatment for the first step has a recess, the recess is filled with the biological cell treatment liquid for the first step, and the opening of the recess is sealed with a peelable sealing sheet.
  • the biological cell processing working plate for the second step includes a first recess and a second recess, the first recess being filled with a first biological cell treatment liquid for the second step,
  • the biological cell freezing pretreatment work kit comprises: a first step biological cell processing plate lid for covering the concave portion of the first step biological cell processing plate; a lid for a biological cell processing plate for a second step that encloses the first and second recesses of the processing plate;
  • the biological cell processing plate for the first step and the biological cell processing plate for the second step each include a pedestal and an annular wall extending upward from the pedestal.
  • the recessed portion, and the pedestal portion includes an upper surface portion located between the annular wall portion and an outer edge of the pedestal portion;
  • the sealing sheet includes a sheet body that seals the opening of the recess, and a peeling grip that extends from the sheet body, In a state in which the lid covers the annular wall portion and the recess of the plate and is placed on the pedestal portion of the plate, the gripping portion for peeling separates the annular wall portion and the lid.
  • the kit for pretreatment work for freezing biological cells of the present invention is as follows. (11) A biological cell pretreatment work kit for freezing, wherein the biological cell pretreatment work kit includes a first step biological cell processing plate and a first step biological cell processing plate lid.
  • the biological cell processing working plate for the first step includes a pedestal, an annular wall extending upward from the pedestal, and a recess provided inside the annular wall.
  • a sealing sheet having an upper surface portion located between outer edges of the wall portion and the pedestal portion, wherein the concave portion is filled with the biological cell treatment liquid for the first step, and the opening portion of the concave portion is peelable.
  • the sealing sheet includes a sheet body portion for sealing the recess and a peeling grip portion extending from the sheet body portion, and the biological cell treatment for the first step
  • the working plate lid covers the annular wall portion and the concave portion and is placed on the pedestal portion when attached to the biological cell processing working plate for the first step.
  • the peeling grip portion of the sealing sheet is formed between the annular wall portion and the first Passing between the lids for the biological cell processing working plate for steps, being positioned on the upper surface of the pedestal, pressed by the lower end of the lid for the biological cell processing working plate for the first step, the upper surface
  • the peeling The gripping part is lifted up and separated from the top surface of the top surface part so that it can be gripped
  • the biological cell processing working plate for the second step includes a pedestal, an annular wall extending upward from the pedestal, and first and second recesses provided inside the annular wall,
  • the first concave portion is filled with a first biological cell treatment liquid for the second step
  • the second concave portion is filled with a second biological cell treatment liquid for the second step
  • the lid for the plate for biological cell processing work for the second step is attached to the plate for the biological cell processing work for the second step wherein the lid for the plate for biological cell processing work for the second step encloses the annular wall portion, the first concave portion, and the second concave portion and is placed on the pedestal portion; , in the state of being placed on the pedestal, the gripping portion for peeling of the sealing sheet passes between the annular wall portion and the lid for the plate for biological cell processing work for the second step, and the pedestal is located on the top surface of the part, is pushed by the lower end of the lid for the biological cell processing work plate for the second step, is close to the top surface of the top surface, is ungraspable, and is the second When the lid for the biological cell processing plate for steps is removed from the biological cell processing plate for the second step, the gripping part for peeling rises, is separated from the upper surface of the upper surface part, and is gripped.
  • the biological cell treatment liquid for the first step is a treatment liquid that does not contain a cell membrane permeable cryoprotectant, and the first biological cell treatment liquid for the second step contains a cell membrane permeable cryoprotectant at a low concentration.
  • the biological cell freezing pretreatment work kit is a treatment liquid that does not contain a cell membrane permeable cryoprotectant, and the first biological cell treatment liquid for the second step contains a cell membrane permeable cryoprotectant at a low concentration.

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Abstract

生体細胞処理作業用プレート1aは、プレート本体2aと蓋3aを備える。プレート本体は、上面部52a備える台座部5a、台座部5aより上方に延びる環状壁部6a、環状壁部6aの内側に凹部8、凹部に細胞処理液、凹部を封止する封止シート4を備える。蓋は、プレートの環状壁部および凹部を被包し、台座部上に載置される。封止シート4は、凹部を封止するシート本体部41と、剥離用把持部42を備える。蓋装着状態において、剥離用把持部は、環状壁部と蓋間を通過し、台座部の上面部52a上に近接し、蓋非装着状態では、剥離用把持部は起き上がり、上面部52aより離間する。

Description

生体細胞処理作業用プレートおよび生体細胞凍結前処理作業用キット
 本発明は、生体細胞の各種処理、例えば、哺乳動物の卵子、胚などの卵、精子、造血幹細胞、多能性幹細胞等の幹細胞などの生体細胞を凍結のための前処理、凍結保存した生体細胞の融解処理などの際に使用する生体細胞処理作業用プレートおよび生体細胞凍結前処理作業用キットに関する。
 生体細胞である哺乳動物胚の凍結保存は、特定の系統や品種の遺伝資源の保存を可能とする。また、絶滅の危機に瀕している動物種の維持にも有効である。さらに、ヒトの不妊治療においても有用である。
 哺乳動物胚の凍結保存方法としては、特開2000-189155公報(特許文献1)において、哺乳動物胚または卵子を滅菌処理した凍結ストロー、凍結バイアルまたは凍結チューブ等の凍結保存用容器の内面に、これらの胚または卵子を包被するに充分な最少量のガラス化液で貼り付け、この凍結保存用容器を密封し、そしてこの容器を液体窒素に接触させて急速に冷却することが提案されている。
 また、本願発明者は、特許文献2(特開2002-315573、WO 02-085110 A1)を提案している。特許文献2の卵凍結保存具1は、耐寒性材料により形成された本体部2と、本体部2の一端に取り付けられ、可撓性かつ透明性かつ液体窒素耐性材料により形成された卵付着保持用ストリップ3と、卵付着保持用ストリップ3を被包可能に本体部2に着脱自在に取り付けられる一端が封鎖され、かつ耐寒性材料により形成された筒状部材4とからなるものである。
 特開2017-118884(特許文献3)には、移植直前の胚の処理等の、処理液を用いた細胞の処理に用いるための細胞処理容器が提案されている。
 また、本件出願人は、WO2021/025017(特許文献4)の細胞凍結前処理作業用プレートを提案している。
 また、登録実用新案3226911号公報(特許文献5)には、細胞を操作する際に使用する細胞操作用器具1であって、第一の溶液が充填される第一ウェル8を有する本体部2と、本体部2の上面に剥離可能な状態で設けられたシール材3とを備え、第一ウェル8に第一の溶液が充填された状態で、シール材3が第一ウェル8の開口部20の周縁部20Aに密着され、シール材3によって第一ウェル8が密閉されている構成をとるものが開示されている。
特開2000-189155 特開2002-315573(WO 02-085110 A1) 特開2017-118884(WO 2016-190322 A1) WO2021/025017 登録実用新案3226911号公報
 そして、上記の特許文献1ないし4のものは、単なる作業用プレートであり、生体細胞処理液は、作業者が準備する必要がある。生体細胞処理作業は、準備が迅速に行えるものが望まれている。特許文献5のものは、液体の準備は不要であるが、シール材の剥離作業が容易ではない。
 本発明の目的は、生体細胞処理液を準備することなく、かつ、生体細胞を投入するための準備作業が容易であり、生体細胞処理作業を迅速に開始することができる生体細胞処理作業用プレートおよび生体細胞凍結前処理作業用キットを提供するものである。
 上記目的を達成するものは、以下のものである。
 凹部と、前記凹部に充填された生体細胞処理液と、前記凹部の開口部に剥離可能に設けられた封止シートとを備える生体細胞処理作業用プレートであって、
 前記生体細胞処理作業用プレートは、前記凹部を被包する蓋を備え、
 前記プレートは、台座部と、前記台座部より上方に延びる環状壁部とを備え、前記環状壁部の内側に、前記凹部を備え、前記台座部は、前記環状壁部と前記台座部の外縁間に位置する上面部を備え、
 前記蓋は、前記プレートへの装着時において、前記環状壁部および前記凹部を被包し、前記プレートの前記台座部上に載置されるものとなっており、
 前記封止シートは、前記凹部の前記開口部を封止するシート本体部と、前記シート本体部より延出した剥離用把持部を備えており、
 前記蓋が、前記プレートの前記環状壁部および前記凹部を被包し、前記プレートの前記台座部上に載置された状態において、前記剥離用把持部は、前記環状壁部と前記蓋間を通過し、前記台座部の前記上面部上に位置するとともに、前記蓋の下端にて押され、前記上面部の上面に近接し、把持不能であり、かつ、前記蓋が、前記プレートより取り外された状態では、前記剥離用把持部は、起き上がり、前記上面部の前記上面より離間し、把持可能となる生体細胞処理作業用プレート。
 また、上記目的を達成するものは、以下のものである。
 生体細胞凍結前処理作業用キットであって、前記生体細胞凍結前処理作業用キットは、第1ステップ用生体細胞処理作業用プレートと、第2ステップ用生体細胞処理作業用プレートとを備え、
 前記第1ステップ用生体細胞処理作業用プレートは、凹部を備え、前記凹部には、第1ステップ用生体細胞処理液が充填され、前記凹部の開口部は、剥離可能である封止シートにより封止されており、前記第2ステップ用生体細胞処理作業用プレートは、第1凹部と第2凹部を備え、前記第1凹部には、第2ステップ用の第1生体細胞処理液が充填され,前記第2凹部には、第2ステップ用の第2生体細胞処理液が充填されており、かつ、前記第1凹部の開口部および前記第2凹部の開口部は、剥離可能である封止シートにより、封止されており、
 前記生体細胞凍結前処理作業用キットは、前記第1ステップ用生体細胞処理作業用プレートの前記凹部を被包する第1ステップ用生体細胞処理作業用プレート用蓋と、前記第2ステップ用生体細胞処理作業用プレートの前記第1および第2凹部を被包する第2ステップ用生体細胞処理作業用プレート用蓋とを備え、
 前記第1ステップ用生体細胞処理作業用プレートおよび前記第2ステップ用生体細胞処理作業用プレートは、台座部と、前記台座部より上方に延びる環状壁部とを備え、前記環状壁部の内側に、前記凹部を備え、前記台座部は、前記環状壁部と前記台座部の外縁間に位置する上面部を備え、
 前記蓋は、前記プレートへの装着時において、前記環状壁部および前記凹部を被包し、前記プレートの前記台座部上に載置されるものとなっており、
 前記封止シートは、前記凹部の前記開口部を封止するシート本体部と、前記シート本体部より、延出した剥離用把持部を備えており、
 前記蓋が、前記プレートの前記環状壁部および前記凹部を被包し、前記プレートの前記台座部上に載置された状態において、前記剥離用把持部は、前記環状壁部と前記蓋間を通過し、前記台座部の前記上面部上に位置するとともに、前記蓋の下端にて押され、前記上面部の上面に近接し、把持不能であり、かつ、前記蓋が、前記プレートより取り外された状態では、前記剥離用把持部は、起き上がり、前記上面部の前記上面より離間し、把持可能となる生体細胞凍結前処理作業用キット。
図1は、本発明の実施例の生体細胞凍結前処理作業用キットの平面図である。 図2は、図1の生体細胞凍結前処理作業用キットに使用されている本発明の生体細胞処理作業用プレート(第1ステップ用生体細胞処理作業用プレート)のA-A線断面図である。 図3は、図2に示されている生体細胞処理作業用プレート(第1ステップ用生体細胞処理作業用プレート)より蓋を取り外した状態の断面図である。 図4は、図1の生体細胞凍結前処理作業用キットに使用されている本発明の生体細胞処理作業用プレート(第2ステップ用生体細胞処理作業用プレート)の正面図である。 図5は、図4に示した生体細胞処理作業用プレート(第2ステップ用生体細胞処理作業用プレート)のB-B線断面図である。 図6は、図4に示した生体細胞処理作業用プレート(第2ステップ用生体細胞処理作業用プレート)のプレート本体の平面図である。 図7は、図4に示した生体細胞処理作業用プレート(第2ステップ用生体細胞処理作業用プレート)のプレート本体の正面図である。 図8は、図4に示した生体細胞処理作業用プレート(第2ステップ用生体細胞処理作業用プレート)の蓋の底面図である。 図9は、図4に示した生体細胞処理作業用プレート(第2ステップ用生体細胞処理作業用プレート)の蓋の右側面図である。 図10は、本発明の生体細胞凍結前処理作業用キットおよび生体細胞処理作業用プレートに使用される封止シートの一例の平面図である。 図11は、図4に示した生体細胞処理作業用プレート(第2ステップ用生体細胞処理作業用プレート)より蓋を取り外した状態の平面図である。 図12は、図4に示した生体細胞処理作業用プレート(第2ステップ用生体細胞処理作業用プレート)より蓋を取り外した状態の正面図である。 図13は、図12に示した生体細胞処理作業用プレート(第2ステップ用生体細胞処理作業用プレート)のC-C線断面図である。 図14は、本発明の他の実施例の生体細胞処理作業用プレート(第2ステップ用生体細胞処理作業用プレート)の平面図である。 図15は、図14に示した生体細胞処理作業用プレートのD-D線断面図である。 図16は、図14に示した生体細胞処理作業用プレートのプレート本体の平面図である。 図17は、本発明の他の実施例の生体細胞処理作業用プレート(第2ステップ用生体細胞処理作業用プレート)の断面図である。
 本発明の生体細胞凍結前処理作業用キットおよび生体細胞処理作業用プレートを図面に示す実施例を用いて説明する。
 本発明の生体細胞処理作業用プレート1aは、プレート本体2aを備え、プレート本体2aは、凹部8を備え、凹部8には、生体細胞処理液9が充填されており、さらに、凹部8の開口部は、剥離可能である封止シート4により、封止されている。
 生体細胞処理作業用プレート1aは、凹部8を被包する蓋3aを備え、プレート1aは、台座部5aと、台座部5aより上方に延びる環状壁部6aとを備え、環状壁部6aの内側に、凹部8を備え、台座部5aは、環状壁部6aと台座部5aの外縁間に位置する上面部52aを備え、蓋3aは、プレート1aへの装着時において、環状壁部6aおよび凹部8を被包し、プレート1aの台座部5a上に載置されるものとなっている。封止シート4は、凹部8の開口部を封止するシート本体部41と、シート本体部41より、延出した剥離用把持部42を備えており、蓋3aが、プレート1aの環状壁部6aおよび凹部8を被包し、プレート1aの台座部5a上に載置された状態において、剥離用把持部42は、環状壁部6aと蓋3a間を通過し、台座部5aの上面部52a上に位置するとともに、蓋3aの下端にて押され、上面部52aの上面に近接し、把持不能であり、かつ、蓋3aが、プレートより取り外された状態では、剥離用把持部42は、起き上がり、上面部52aの上面より離間し、把持可能となる。
 また、本発明の生体細胞凍結前処理作業用キット10は、第1ステップ用生体細胞処理作業用プレート(生体細胞処理作業用プレート)1aと、第2ステップ用生体細胞処理作業用プレート(生体細胞処理作業用プレート)1bとを備え、第1ステップ用生体細胞処理作業用プレート1aは、凹部8を備え、凹部8には、第1ステップ用生体細胞処理液9が充填され、凹部8の開口部は、剥離可能である封止シート4により封止されており、第2ステップ用生体細胞処理作業用プレート1bは、平板部20bと、平板部20bに設けられた第1凹部21、第2凹部22を備え、第1凹部21には、第2ステップ用の第1生体細胞処理液11が充填され,第2凹部22には、第2ステップ用の第2生体細胞処理液12が充填されており、かつ、第1凹部21の開口部および第2凹部22の開口部は、剥離可能である封止シート4a,4bにより、封止されている。
 また、この実施例の生体細胞処理作業用プレート1a、1bは、プレート(プレート本体)2a、2bと、プレート(プレート本体)2a、2bの凹部を含む平板部を被包する蓋3a,3bを備える。プレート(プレート本体)2a、2bは、台座部5a,5bと、台座部5a,5bより上方に延びる環状壁部6a,6bとを備え、環状壁部6a,6bの内側に、凹部8,21,22,23を備え、台座部5a、5bは、環状壁部6a,6bと台座部5a,5bの外縁間に位置する上面部52a,52bを備え、蓋3a,3bは、プレート(プレート本体)2a、2bへの装着時において、環状壁部6a,6bおよび凹部8,21,22,23を被包し、プレート(プレート本体)2a、2bの台座部5a,5b上に載置されるものとなっており、封止シート4(4a,4b,4c)は、凹部8,21,22,23の開口部を封止するシート本体部41と、シート本体部41より、延出した剥離用把持部42を備えており、蓋3a,3bがプレート(プレート本体)2a,2bの環状壁部6a,6bおよび平板部20a,20bを被包し、プレート(プレート本体)2a、2bの台座部5a,5b上に載置された状態において、剥離用把持部42は、環状壁部6a,6bと蓋3a,3b間を通過し、台座部5a.5bの上面部52a、52b上に位置するとともに、蓋3a,3bの下端32bにて押され、上面部52a,52bの上面に近接し、把持不能であり、かつ、蓋3a,3bがプレート(プレート本体)2a、2bより取り外された状態では、剥離用把持部42は、起き上がり、上面部52a,52bの上面より離間し、把持可能となる。
 生体細胞凍結前処理作業用キット10は、生体細胞処理作業用プレートである第1ステップ用生体細胞処理作業用プレート1aと、この第1ステップ用生体細胞処理作業用プレート1aに取り外し可能に装着(被嵌)される蓋3aと、生体細胞処理作業用プレートである第2ステップ用生体細胞処理作業用プレート1bと、この第2ステップ用生体細胞処理作業用プレート1bに取り外し可能に装着(被嵌)される蓋3bとを備える。
 生体細胞処理作業用プレートである第1ステップ用生体細胞処理作業用プレート1aは、プレート本体2aを備える。プレート本体2aは、図1ないし図3に示すように、台座部5aと、台座部5aより上方に延びる環状壁部6aとを備え、環状壁部6aの内側に、平板部20aを備えている。この実施例のプレート本体2aでは、平板部20aは、環状壁部6aの内側かつ環状壁部6aの上端に位置している。
 台座部5aは、環状壁部6aと台座部5aの外縁間に位置する上面部52aを備え、蓋3aは、プレート本体2aへの装着時において、環状壁部6aおよび平板部20aを被包し、プレート本体2aの台座部5a上(具体的には、上面部52a上)に載置されるものとなっている。台座部5aは、環状脚部51aを有し、その上端に上面部52aが設けられている。
 そして、上面部52aは、剥離用把持部42を用いた封止シート4の剥離作業時における、指による押圧が可能な押圧可能部を備えている。具体的には、上面部52aは、封止シート4の剥離作業時において、凹部8より手前側となる部分に手前側に延びる平面部を備えており、この部分は、指による押圧が可能であり、押圧可能部(押圧部位)として用いることができる。このため、例えば、左手指にて、上面部52aを押圧し、プレートを押さえた状態にて、剥離用把持部42を把持し、引き上げることにより、凹部に充填されている液体を流出させることなく、封止シート4を剥離できる。
 台座部5a(環状脚部51a)の高さとしては、2~7mmが好ましく、特に、3~5mmが好ましい。また、環状壁部6aの高さとしては、1~5mmが好ましく、特に、1.5~4mmが好ましい。
 そして、この実施例のプレート本体2aでは、平板部20aには、凹部8を備えている。なお、凹部8の開口部径としては、15~45mmが好ましく、特に、20~40mmが好ましい。また、凹部8の深さとしては、5~20mmが好ましく、特に、7~15mmが好ましい。この実施例では、凹部8は、部分球面状の凹部となっている。
 そして、凹部8には、生体細胞処理液9が充填されている。生体細胞処理液9としては、細胞処理目的に適合した生体細胞処理液が用いられる。この実施例のプレート1aが、生体細胞凍結前処理作業用キット10の第1ステップ用生体細胞処理作業用プレートである場合、凹部8には、細胞膜透過性凍結保護物質非含有処理液9が充填される。
 細胞膜透過性凍結保護物質非含有処理液(BS)としては、従来より用いられているものが好適に使用される。例えば、細胞膜透過性凍結保護物質非含有処理液としては、細胞培養基礎液(例えば、HEPES[4-(2-HydroxyEthyl)-1-PiperazineEthaneSulfonic acid]含有細胞培養液)に、細胞膜透過性凍結保護物質を含有させず、必要と考える化合物、例えば、シュークロース、トレハロース、パーコール、ポリエチレングリコール、ポリビニルピロリドン、ウシ血清アルブミン、フィコール、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシエチルメチルセルロースからなる群より選択された少なくとも一種の水溶性セルロースなどから選択される1種または2種以上の細胞膜非透過性凍結保護物質、ゲンタマイシンのような抗生物質を含有するものが好適である。
 そして、凹部8の開口部は、剥離可能である封止シート4により、封止されており、封止シート4により、凹部8に充填された液体は、流出しないものとなっている。この実施例では、封止シート4は、図10に示すように、凹部8の開口部を封止するシート本体部41と、シート本体部41より、延出した剥離用把持部42を備えている。シート本体部41の下面には、粘着性物質、感圧接着剤などの付着性物質43が塗布されている。なお、付着性物質は、シート本体部41の下面の周縁部にのみ設けてもよい。
 シート本体部41は、凹部8の開口部より大きいものとなっている。また、平面部の一部である凹部8の開口部の外側周縁部は、平坦面となっており、この平坦周縁部に、封止シート4のシート本体部41の外縁側部分が、剥離可能に貼着されている。封止シート(シート本体部41)の平面部との貼着部の幅は、0.7mm以上であることが好ましく、特に、1mm以上であることが好ましい。
 また、剥離用把持部42の自由端となっている先端には、端部表示マーカ44が設けられている。 封止シート4、特に、シート本体部41としては、ガス難透過性シートが好ましい。このようなものであれば、凹部8に充填されている生体細胞処理液9の変性、濃度変化を抑制できる。封止シート4は、剥離用把持部42を含み、可撓性シートとなっている。
 封止シート4としては、ある程度の強度と、可撓性と、ガス難透過性を有するものが好ましく、例えば、エチレン酢酸ビニル系共重合体、ポリビニルアルコール、ポリ塩化ビニリデン、ポリアミド、ポリエステル、ポリアクリロニトリル、塩化ビニリデン系・アクリロニトリル共重合体、アクリルニトリル系メチルメタアクリレート・ブタジジエン共重合体、ナイロン6、二軸延伸ナイロン、二軸延伸ポリエチレンテレフタレート、二軸延伸ポリプロピレン、高密度ポリエチレン、アイオノマー樹脂、金属蒸着フィルムの単独、もしくは、これら重合体の組み合わせたものが好適である。封止シート4の厚さとしては、5~300μmが好ましく、特に、25~200μmである。
 そして、この実施例の生体細胞処理作業用プレート1aでは、プレート(プレート本体)2aに蓋3aが装着(載置)された状態(図1、図2)において、封止シート4の剥離用把持部42は、折れ曲がり、環状壁部(外面)6aと蓋(内面)3aを通過し、台座部5aの上面部52a上に位置するとともに、蓋3aの下端32bにて押され、上面部52aの上面に近接し、把持不能となっている。
 さらに、この実施例の生体細胞処理作業用プレート1aでは、蓋3aをプレート(プレート本体)2aより取り外すと、図3の状態となり、剥離用把持部42は、起き上がり、上面部52aの上面より離間し、把持可能となる。特に、この実施例の生体細胞処理作業用プレート1aでは、剥離用把持部42の自由端である端部は、プレート(プレート本体)2aの端部より延出した状態となり、把持がより容易なものとなる。
 生体細胞処理作業用プレートである第2ステップ用生体細胞処理作業用プレート1bは、プレート本体2bと、プレート本体2bに装着(載置)される蓋3bを備える。第2ステップ用生体細胞処理作業用プレートのプレート本体2bは、図1、図4ないし図7に示すように、台座部5bと、台座部5bより上方に延びる環状壁部6bとを備え、環状壁部6bの内側に、平板部20bを備えている。この実施例のプレート本体2bでは、平板部20bは、環状壁部6bの内側かつ環状壁部6bの上端より下方に位置している。このため、環状壁部6bは、平板部20bより上方に突出したものとなっている。
 台座部5bは、環状壁部6bと台座部5bの外縁間に位置する上面部52bを備え、蓋3bは、プレート本体2bへの装着時において、環状壁部6bおよび平板部20bを被包し、プレート本体2bの台座部5b上(具体的には、上面部52b上)に載置されるものとなっている。台座部5bは、環状脚部51bを有し、その上端に上面部52bが設けられている。
 台座部5b(環状脚部51b)の高さとしては、1~5mmが好ましく、特に、1.5~4mmが好ましい。また、環状壁部6bの高さとしては、1~5mmが好ましく、特に、1.5~4mmが好ましい。
 そして、この実施例のプレート本体2bでは、平板部20bには、第1凹部21のみならず、第2凹部22、第3凹部23を備えている。なお、凹部は、2つでもよく、4以上であってもよい。凹部21,22,23の開口部径としては、5~20mmが好ましく、特に、7~15mmが好ましい。また、凹部21,22,23の深さとしては、3~15mmが好ましく、特に、4~10mmが好ましい。この実施例では、凹部21,22,23は、略半球状の凹部となっている。
 この実施例のプレート1bでは、第1凹部21、第2凹部22,第3凹部23には、生体細胞処理液11,12,13が充填されている。凹部が、第1凹部と第2凹部を有する場合、第1凹部に充填された生体細胞処理液と第2凹部に充填された生体細胞処理液は、異なるものであることが好ましい。さらに、一方の生体細胞処理液は、他方の生体細胞処理液と識別可能な色を有していることが好ましい。
 また、凹部が、第1凹部、第2凹部および第3凹部を有する場合、第1凹部21、第2凹部22および第3凹部23に充填された3つの生体細胞処理液11,12,13の少なくとも1つは、他の生体細胞処理液と異なるものであることが好ましい。さらに、異なる生体細胞処理液と残りの2つの生体細胞処理液は、両者を識別可能な色を有していることが好ましい。
 生体細胞処理液が識別可能な色を有するものとする方法としては、一方に着色剤を添加することが有効である。着色剤としては、通常、医薬品に添加することが許可されているものであれば、いずれも使用可能である。着色剤(色素)としては、例えば、赤色2号(アマランス)、赤色3号(エリスロシン)、赤色102号(ニューコクシン)、黄色4号(タートラジン)、黄色5号(サンセットイエローFCF)、緑色3号(ファストグリーンFCF)、青色1号(ブリリアントブルーFCF)、青色2号(インジゴカルミン)およびそれらのアルミニウムレーキが挙げられる。
 生体細胞処理液11,12,13としては、細胞処理目的に適合した生体細胞処理液が用いられる。この実施例のプレート1bが、生体細胞凍結前処理作業用キット10の第2ステップ用生体細胞処理作業用プレートである場合、第1凹部21には、細胞膜透過性凍結保護物質含有処理液が充填される。具体的には、細胞膜透過性凍結保護物質を低濃度にて含有する低濃度処理液(ES:Equilibration Solution)が充填される。
 細胞膜透過性凍結保護物質を低濃度にて含有する低濃度処理液(ES)としては、細胞培養基礎液(例えば、HEPES[4-(2-HydroxyEthyl)-1-PiperazineEthaneSulfonic acid]含有細胞培養液)に、グリセロール、プロピレングリコール、ジメチルスルホサイド(DMSO)、エチレングリコール、ブタンジオールなどの細胞膜透過性凍結保護物質を低濃度となるように添加するとともに、シュークロース、トレハロース、パーコール、ポリエチレングリコール、ポリビニルピロリドン、ウシ血清アルブミン、フィコール、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシエチルメチルセルロースなどの細胞膜非透過性凍結保護物質を含有するものが好適である。さらに、このESにおいても、ゲンタマイシンのような抗生物質を含有してもよい。
 なお、このESにおける細胞膜透過性凍結保護物質の含有率は、後述する、細胞膜透過性凍結保護物質を高濃度にて含有する高濃度処理液(VS)における細胞膜透過性凍結保護物質の含有率の20~70%であることが好ましく、特に、30~60%であることが好ましい。
 そして、この実施例のプレート1bが、生体細胞凍結前処理作業用キット10の第2ステップ用生体細胞処理作業用プレートである場合、第2凹部22,第3凹部23には、細胞膜透過性凍結保護物質含有処理液が充填される。具体的には、細胞膜透過性凍結保護物質を高濃度にて含有する高濃度処理液(VS:Vitrification Solution)が充填される。
 細胞膜透過性凍結保護物質を高濃度にて含有する高濃度処理液(VS)としては、例えば、細胞培養基礎液(例えば、HEPES[4-(2-HydroxyEthyl)-1-PiperazineEthaneSulfonic acid]含有細胞培養液)に、グリセロール、プロピレングリコール、ジメチルスルホサイド(DMSO)、エチレングリコール、ブタンジオールなどの細胞膜透過性凍結保護物質を高濃度となるように添加するとともに、シュークロース、トレハロース、パーコール、ポリエチレングリコール、ポリビニルピロリドン、ウシ血清アルブミン、フィコール、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシエチルメチルセルロースなどの細胞膜非透過性凍結保護物質を含有するものが好適である。
 さらに、このVSにおいても、ゲンタマイシンのような抗生物質を含有してもよい。なお、このVSにおける細胞膜透過性凍結保護物質の含有率は、上述した「ES」(細胞膜透過性凍結保護物質を低濃度にて含有する低濃度処理液)における細胞膜透過性凍結保護物質の含有率の1.5~3倍であることが好ましく、特に、1.7~2.5倍であることが好ましい。
 そして、第1凹部21の開口部は、剥離可能である封止シート4aにより封止され、第2凹部22の開口部は、剥離可能である封止シート4bにより封止され、第3凹部23の開口部は、剥離可能である封止シート4cにより封止され、それぞれの凹部に充填された液体は、流出しないものとなっている。
 この実施例では、封止シート4a,4b,4cとしては、図10に示し、上述したものが好適に使用できる。
 第2ステップ用生体細胞処理作業用プレートの蓋3bは、図1、図4、図5、図8および図9に示すように、上述した環状壁部6b、平板部20bの全体を被覆するものとなっており、蓋3bを被嵌した状態において、台座部5bの上面部52bの大半は、露出するものとなっている。このため、蓋3bは、上面部52bへの文字記載などの作業の障害とならない。また、この実施例の蓋3bは、天板部31と天板部31より下方に延びる環状側壁32を有する。環状側壁32には、側面に向かい合うスリット33を備えている。
 そして、この実施例の生体細胞処理作業用プレート1bでは、プレート(プレート本体)2bに蓋3bが装着(載置)された状態(図1、図4、図5)において、封止シート4a,4b,4cの剥離用把持部42は、折れ曲がり、環状壁部6bの内面を上方に延び、再び折れ曲がり、環状壁部6bの外面と蓋(内面)3bを通過し、台座部5bの上面部52b上に位置するとともに、蓋3bの下端32bにて押され、上面部52bの上面に近接し、把持不能となっている。
 さらに、この実施例の生体細胞処理作業用プレート1bでは、蓋3bをプレート(プレート本体)2bより取り外すと、図11,図12および図13の状態となり、剥離用把持部42は、起き上がり、上面部52bの上面より離間し、環状壁部6bの上縁より、斜めに突出する状態となり、把持可能となる。特に、この実施例の生体細胞処理作業用プレート1bでは、剥離用把持部42の自由端である端部は、プレート(プレート本体)2bの環状壁部6bの上縁より、斜めに突出するため、把持が容易である。
  生体細胞処理作業用プレート1a,1b、蓋3a、3bは、合成樹脂材料により形成される。生体細胞処理作業用プレートおよび蓋は、透明性が高いことが望ましく、透明性硬質合成樹脂が好適である。透明性硬質合成樹脂としては、ポリスチレン,SBSなどのスチレン系樹脂、ポリカーボネート、アクリロニトリル系樹脂、ポリプロピレン、ポリエチレンなどのポリオレフィン、ポリ塩化ビニル、PMMA(ポリメチルメタアクリレート)ポリエチレンテレフタレート、ポリブチレンテレフタレートなどのポリエステル樹脂等を用いることが好ましい。
 また、生体細胞処理作業用プレートとしては、図14ないし図16に示すような生体細胞処理作業用プレート1cであってもよい。この実施例の生体細胞処理作業用プレート1cの基本構成は、上述した生体細胞処理作業用プレート1bと同じである。相違点は、プレート本体2cの第1凹部21,第2凹部22,第3凹部23の開口部周縁部に、環状リブ26を有する点のみである。そして、この実施例では、プレート本体2cは、平面部20b上に、平面部20bと環状壁部6bと上記3つの環状リブ26により形成された作業使用液体収納部27(廃液収納部)を備えている。さらに、封止シート4a,4b,4cは、この環状リブ26の上面に貼り付けられている。このため、環状リブ26の上面は、図示するように、平坦面であることが好ましい。
 また、上述したすべての実施例において、凹部の形状は、上述したものに限定されるものではなく、図17に示す生体細胞処理作業用プレート1dのプレート本体2dにおける凹部28のように、平坦底面28aを有する逆円錐台状のものであってもよい。
 本発明の生体細胞処理作業用プレートは、凹部と、凹部に充填された生体細胞処理液と、凹部の開口部に剥離可能に設けられた封止シートとを備える。さらに、生体細胞処理作業用プレートは、凹部を被包する蓋を備え、プレートは、台座部と、台座部より上方に延びる環状壁部とを備え、環状壁部の内側に、凹部を備え、台座部は、環状壁部と台座部の外縁間に位置する上面部を備え、蓋は、プレートへの装着時において、環状壁部および凹部を被包し、プレートの台座部上に載置されるものとなっており、封止シートは、凹部の開口部を封止するシート本体部と、シート本体部より、延出した剥離用把持部を備えており、蓋が、プレートの環状壁部および凹部を被包し、プレートの台座部上に載置された状態において、剥離用把持部は、環状壁部と蓋間を通過し、台座部の上面部上に位置するとともに、蓋の下端にて押され、上面部の上面に近接し、把持不能であり、かつ、蓋が、プレートより取り外された状態では、剥離用把持部は、起き上がり、上面部の上面より離間し、把持可能となる。
 このため、蓋が装着されている状態では、封止シートの剥離が実質的に不要なため、不必要な封止シートの剥離が防止されており、かつ、蓋を取り外すことにより、剥離用把持部は、起き上がり、上面部の上面より離間し、把持可能となるため、剥離開始部の認識が容易であり、かつ、封止シートの剥離も容易であり、生体細胞処理液が充填されている凹部の開口部を開封作業を迅速に行うことができる。
 本発明の生体細胞処理作業用プレートは、以下のものである。
 (1) 凹部と、前記凹部に充填された生体細胞処理液と、前記凹部の開口部に剥離可能に設けられた封止シートとを備える生体細胞処理作業用プレートであって、
 前記生体細胞処理作業用プレートは、前記凹部を被包する蓋を備え、
 前記プレートは、台座部と、前記台座部より上方に延びる環状壁部とを備え、前記環状壁部の内側に、前記凹部を備え、前記台座部は、前記環状壁部と前記台座部の外縁間に位置する上面部を備え、
 前記蓋は、前記プレートへの装着時において、前記環状壁部および前記凹部を被包し、前記プレートの前記台座部上に載置されるものとなっており、
 前記封止シートは、前記凹部の前記開口部を封止するシート本体部と、前記シート本体部より延出した剥離用把持部を備えており、
 前記蓋が、前記プレートの前記環状壁部および前記凹部を被包し、前記プレートの前記台座部上に載置された状態において、前記剥離用把持部は、前記環状壁部と前記蓋間を通過し、前記台座部の前記上面部上に位置するとともに、前記蓋の下端にて押され、前記上面部の上面に近接し、把持不能であり、かつ、前記蓋が、前記プレートより取り外された状態では、前記剥離用把持部は、起き上がり、前記上面部の前記上面より離間し、把持可能となる生体細胞処理作業用プレート。
 この生体細胞処理作業用プレートは、凹部と、凹部に充填された生体細胞処理液と、凹部の開口部に剥離可能に設けられた封止シートとを備える。さらに、生体細胞処理作業用プレートは、凹部を被包する蓋を備え、プレートは、台座部と、台座部より上方に延びる環状壁部とを備え、環状壁部の内側に、凹部を備え、台座部は、環状壁部と台座部の外縁間に位置する上面部を備え、蓋は、プレートへの装着時において、環状壁部および凹部を被包し、プレートの台座部上に載置されるものとなっており、封止シートは、凹部の開口部を封止するシート本体部と、シート本体部より、延出した剥離用把持部を備えており、蓋が、プレートの環状壁部および凹部を被包し、プレートの台座部上に載置された状態において、剥離用把持部は、環状壁部と蓋間を通過し、台座部の上面部上に位置するとともに、蓋の下端にて押され、上面部の上面に近接し、把持不能であり、かつ、蓋が、プレートより取り外された状態では、剥離用把持部は、起き上がり、上面部の上面より離間し、把持可能となる。
 このため、蓋が装着されている状態では、封止シートの剥離が実質的に不要なため、不必要な封止シートの剥離が防止されており、かつ、蓋を取り外すことにより、剥離用把持部は、起き上がり、上面部の上面より離間し、把持可能となるため、剥離開始部の認識が容易であり、かつ、封止シートの剥離も容易であり、生体細胞処理液が充填されている凹部の開口部を開封作業を迅速に行うことができる。
 また、上記の実施態様は、以下のものであってもよい。
 (2) 前記プレートの前記台座部の前記上面部は、突出する前記剥離用把持部を用いた封止シート剥離作業時における、指による押圧が可能な押圧可能部を備えている上記(1)に記載の生体細胞処理作業用プレート。
 (3) 前記プレートは、前記環状壁部の内側に設けられた平板部を備え、前記凹部は、前記平板部に設けられている上記(1)または(2)に記載の生体細胞処理作業用プレート。
 (4)  前記平板部は、前記環状壁部の内側かつ前記環状壁部の上端より下方に位置している上記(3)に記載の生体細胞処理作業用プレート。
 (5) 前記プレートは、前記凹部の周縁部に設けられた環状リブを備え、前記平板部と前記環状リブと前記環状壁部により形成された液体保留部を備えており、さらに、前記封止シートは、前記環状リブの上面に剥離可能に固着されている上記(4)に記載の生体細胞処理作業用プレート。
 (6) 前記プレートは、前記凹部である第1凹部および第2凹部を備え、前記第2凹部には、生体細胞処理液が充填されており、さらに、前記第2凹部の開口部は、剥離可能である封止シートにより、封止されている上記(1)ないし(5)のいずれかに記載の生体細胞処理作業用プレート。
 (7) 前記第1凹部に充填された生体細胞処理液と前記第2凹部に充填された生体細胞処理液は、異なるものであり、かつ、一方の生体細胞処理液は、他方の生体細胞処理液と識別可能な色を有している上記(6)に記載の生体細胞処理作業用プレート。
 (8) 前記プレートは、前記凹部である第1凹部と、第2凹部と、第3凹部とを備え、前記第2凹部および前記第3凹部には、生体細胞処理液が充填されており、さらに、前記第2凹部、前記第3凹部の開口部は、剥離可能である封止シートにより、封止されている上記(1)ないし(5)のいずれかに記載の生体細胞処理作業用プレート。
 (9) 前記第1凹部、前記第2凹部および前記第3凹部に充填された3つの生体細胞処理液の少なくとも1つは、他の生体細胞処理液と異なるものであり、かつ、前記異なる生体細胞処理液と残りの2つの前記生体細胞処理液は、両者を識別可能な色を有している上記(8)に記載の生体細胞処理作業用プレート。
 また、本発明の生体細胞凍結前処理作業用キットは、以下のものである。
 (10) 生体細胞凍結前処理作業用キットであって、前記生体細胞凍結前処理作業用キットは、第1ステップ用生体細胞処理作業用プレートと、第2ステップ用生体細胞処理作業用プレートとを備え、
 前記第1ステップ用生体細胞処理作業用プレートは、凹部を備え、前記凹部には、第1ステップ用生体細胞処理液が充填され、前記凹部の開口部は、剥離可能である封止シートにより封止されており、前記第2ステップ用生体細胞処理作業用プレートは、第1凹部と第2凹部を備え、前記第1凹部には、第2ステップ用の第1生体細胞処理液が充填され,前記第2凹部には、第2ステップ用の第2生体細胞処理液が充填されており、かつ、前記第1凹部の開口部および前記第2凹部の開口部は、剥離可能である封止シートにより、封止されており、
 前記生体細胞凍結前処理作業用キットは、前記第1ステップ用生体細胞処理作業用プレートの前記凹部を被包する第1ステップ用生体細胞処理作業用プレート用蓋と、前記第2ステップ用生体細胞処理作業用プレートの前記第1および第2凹部を被包する第2ステップ用生体細胞処理作業用プレート用蓋とを備え、
 前記第1ステップ用生体細胞処理作業用プレートおよび前記第2ステップ用生体細胞処理作業用プレートは、台座部と、前記台座部より上方に延びる環状壁部とを備え、前記環状壁部の内側に、前記凹部を備え、前記台座部は、前記環状壁部と前記台座部の外縁間に位置する上面部を備え、
 前記蓋は、前記プレートへの装着時において、前記環状壁部および前記凹部を被包し、前記プレートの前記台座部上に載置されるものとなっており、
 前記封止シートは、前記凹部の前記開口部を封止するシート本体部と、前記シート本体部より、延出した剥離用把持部を備えており、
 前記蓋が、前記プレートの前記環状壁部および前記凹部を被包し、前記プレートの前記台座部上に載置された状態において、前記剥離用把持部は、前記環状壁部と前記蓋間を通過し、前記台座部の前記上面部上に位置するとともに、前記蓋の下端にて押され、前記上面部の上面に近接し、把持不能であり、かつ、前記蓋が、前記プレートより取り外された状態では、前記剥離用把持部は、起き上がり、前記上面部の前記上面より離間し、把持可能となる生体細胞凍結前処理作業用キット。
 また、本発明の生体細胞凍結前処理作業用キットは、以下のものである。
(11) 生体細胞凍結前処理作業用キットであって、前記生体細胞凍結前処理作業用キットは、第1ステップ用生体細胞処理作業用プレートと、第1ステップ用生体細胞処理作業用プレート用蓋と、第2ステップ用生体細胞処理作業用プレートと、第2ステップ用生体細胞処理作業用プレート用蓋を備え、
 前記第1ステップ用生体細胞処理作業用プレートは、台座部と、前記台座部より上方に延びる環状壁部と、前記環状壁部の内側に設けられた凹部を備え、前記台座部は、前記環状壁部と前記台座部の外縁間に位置する上面部を備え、かつ、前記凹部には、第1ステップ用生体細胞処理液が充填され、前記凹部の開口部は、剥離可能である封止シートにより封止されており、前記封止シートは、前記凹部を封止するシート本体部と、前記シート本体部より、延出した剥離用把持部を備えており、前記第1ステップ用生体細胞処理作業用プレート用蓋は、前記第1ステップ用生体細胞処理作業用プレートへの装着時において、前記環状壁部および前記凹部を被包し、前記台座部上に載置されるものとなっており、さらに、前記第1ステップ用生体細胞処理作業用プレート用蓋が、前記台座部上に載置された状態において、前記封止シートの前記剥離用把持部は、前記環状壁部と前記第1ステップ用生体細胞処理作業用プレート用蓋間を通過し、前記台座部の前記上面部上に位置するとともに、前記第1ステップ用生体細胞処理作業用プレート用蓋の下端にて押され、前記上面部の上面に近接し、把持不能であり、かつ、前記第1ステップ用生体細胞処理作業用プレート用蓋が、前記第1ステップ用生体細胞処理作業用プレートより取り外された状態では、前記剥離用把持部は、起き上がり、前記上面部の前記上面より離間し、把持可能となるものとなっており、
 前記第2ステップ用生体細胞処理作業用プレートは、台座部と、前記台座部より上方に延びる環状壁部と、前記環状壁部の内側に設けられた第1凹部と第2凹部を備え、前記第1凹部には、第2ステップ用の第1生体細胞処理液が充填され、前記第2凹部には、第2ステップ用の第2生体細胞処理液が充填されており、かつ、前記第1凹部の開口部および前記第2凹部の開口部は、剥離可能である封止シートにより封止されており、前記封止シートは、前記第1凹部または前記第2凹部を封止するシート本体部と、前記シート本体部より、延出した剥離用把持部を備えており、前記第2ステップ用生体細胞処理作業用プレート用蓋は、前記第2ステップ用生体細胞処理作業用プレートへの装着時において、前記環状壁部および前記第1凹部および前記第2凹部を被包し、前記台座部上に載置されるものとなっており、前記第2ステップ用生体細胞処理作業用プレート用蓋が、前記台座部上に載置された状態において、前記封止シートの前記剥離用把持部は、前記環状壁部と前記第2ステップ用生体細胞処理作業用プレート用蓋間を通過し、前記台座部の前記上面部上に位置するとともに、前記第2ステップ用生体細胞処理作業用プレート用蓋の下端にて押され、前記上面部の上面に近接し、把持不能であり、かつ、前記第2ステップ用生体細胞処理作業用プレート用蓋が、前記第2ステップ用生体細胞処理作業用プレートより取り外された状態では、前記剥離用把持部は、起き上がり、前記上面部の前記上面より離間し、把持可能となるものとなっている生体細胞凍結前処理作業用キット。
 また、上記の実施態様は、以下のものであってもよい。
 (12) 前記第1ステップ用生体細胞処理液は、細胞膜透過性凍結保護物質非含有処理液であり、前記第2ステップ用の第1生体細胞処理液は、細胞膜透過性凍結保護物質を低濃度にて含有する低濃度処理液であり、前記第2ステップ用の第2生体細胞処理液は、細胞膜透過性凍結保護物質を高濃度にて含有する高濃度処理液である上記(10)または(11)に記載の生体細胞凍結前処理作業用キット。

Claims (12)

  1. 凹部と、前記凹部に充填された生体細胞処理液と、前記凹部の開口部に剥離可能に設けられた封止シートとを備える生体細胞処理作業用プレートであって、
     前記生体細胞処理作業用プレートは、前記凹部を被包する蓋を備え、
     前記プレートは、台座部と、前記台座部より上方に延びる環状壁部とを備え、前記環状壁部の内側に、前記凹部を備え、前記台座部は、前記環状壁部と前記台座部の外縁間に位置する上面部を備え、
     前記蓋は、前記プレートへの装着時において、前記環状壁部および前記凹部を被包し、前記プレートの前記台座部上に載置されるものとなっており、
     前記封止シートは、前記凹部の前記開口部を封止するシート本体部と、前記シート本体部より延出した剥離用把持部を備えており、
     前記蓋が、前記プレートの前記環状壁部および前記凹部を被包し、前記プレートの前記台座部上に載置された状態において、前記剥離用把持部は、前記環状壁部と前記蓋間を通過し、前記台座部の前記上面部上に位置するとともに、前記蓋の下端にて押され、前記上面部の上面に近接し、把持不能であり、かつ、前記蓋が、前記プレートより取り外された状態では、前記剥離用把持部は、起き上がり、前記上面部の前記上面より離間し、把持可能となることを特徴とする生体細胞処理作業用プレート。
  2. 前記プレートの前記台座部の前記上面部は、突出する前記剥離用把持部を用いた封止シート剥離作業時における、指による押圧が可能な押圧可能部を備えている請求項1に記載の生体細胞処理作業用プレート。
  3. 前記プレートは、前記環状壁部の内側に設けられた平板部を備え、前記凹部は、前記平板部に設けられている請求項1または2に記載の生体細胞処理作業用プレート。
  4. 前記平板部は、前記環状壁部の内側かつ前記環状壁部の上端より下方に位置している請求項3に記載の生体細胞処理作業用プレート。
  5. 前記プレートは、前記凹部の周縁部に設けられた環状リブを備え、前記平板部と前記環状リブと前記環状壁部により形成された液体保留部を備えており、さらに、前記封止シートは、前記環状リブの上面に剥離可能に固着されている請求項4に記載の生体細胞処理作業用プレート。
  6. 前記プレートは、前記凹部である第1凹部および第2凹部を備え、前記第2凹部には、生体細胞処理液が充填されており、さらに、前記第2凹部の開口部は、剥離可能である封止シートにより、封止されている請求項1ないし5のいずれかに記載の生体細胞処理作業用プレート。
  7. 前記第1凹部に充填された生体細胞処理液と前記第2凹部に充填された生体細胞処理液は、異なるものであり、かつ、一方の生体細胞処理液は、他方の生体細胞処理液と識別可能な色を有している請求項6に記載の生体細胞処理作業用プレート。
  8. 前記プレートは、前記凹部である第1凹部と、第2凹部と、第3凹部とを備え、前記第2凹部および前記第3凹部には、生体細胞処理液が充填されており、さらに、前記第2凹部、前記第3凹部の開口部は、剥離可能である封止シートにより、封止されている請求項1ないし5のいずれかに記載の生体細胞処理作業用プレート。
  9. 前記第1凹部、前記第2凹部および前記第3凹部に充填された3つの生体細胞処理液の少なくとも1つは、他の生体細胞処理液と異なるものであり、かつ、前記異なる生体細胞処理液と残りの2つの前記生体細胞処理液は、両者を識別可能な色を有している請求項8に記載の生体細胞処理作業用プレート。
  10. 生体細胞凍結前処理作業用キットであって、前記生体細胞凍結前処理作業用キットは、第1ステップ用生体細胞処理作業用プレートと、第2ステップ用生体細胞処理作業用プレートとを備え、
     前記第1ステップ用生体細胞処理作業用プレートは、凹部を備え、前記凹部には、第1ステップ用生体細胞処理液が充填され、前記凹部の開口部は、剥離可能である封止シートにより封止されており、前記第2ステップ用生体細胞処理作業用プレートは、第1凹部と第2凹部を備え、前記第1凹部には、第2ステップ用の第1生体細胞処理液が充填され,前記第2凹部には、第2ステップ用の第2生体細胞処理液が充填されており、かつ、前記第1凹部の開口部および前記第2凹部の開口部は、剥離可能である封止シートにより封止されており、
     前記生体細胞凍結前処理作業用キットは、前記第1ステップ用生体細胞処理作業用プレートの前記凹部を被包する第1ステップ用生体細胞処理作業用プレート用蓋と、前記第2ステップ用生体細胞処理作業用プレートの前記第1および第2凹部を被包する第2ステップ用生体細胞処理作業用プレート用蓋とを備え、
     前記第1ステップ用生体細胞処理作業用プレートおよび前記第2ステップ用生体細胞処理作業用プレートは、台座部と、前記台座部より上方に延びる環状壁部とを備え、前記環状壁部の内側に、前記凹部を備え、前記台座部は、前記環状壁部と前記台座部の外縁間に位置する上面部を備え、
     前記蓋は、前記プレートへの装着時において、前記環状壁部および前記凹部を被包し、前記プレートの前記台座部上に載置されるものとなっており、
     前記封止シートは、前記凹部の前記開口部を封止するシート本体部と、前記シート本体部より、延出した剥離用把持部を備えており、
     前記蓋が、前記プレートの前記環状壁部および前記凹部を被包し、前記プレートの前記台座部上に載置された状態において、前記剥離用把持部は、前記環状壁部と前記蓋間を通過し、前記台座部の前記上面部上に位置するとともに、前記蓋の下端にて押され、前記上面部の上面に近接し、把持不能であり、かつ、前記蓋が、前記プレートより取り外された状態では、前記剥離用把持部は、起き上がり、前記上面部の前記上面より離間し、把持可能となることを特徴とする生体細胞凍結前処理作業用キット。
  11. 生体細胞凍結前処理作業用キットであって、前記生体細胞凍結前処理作業用キットは、第1ステップ用生体細胞処理作業用プレートと、第1ステップ用生体細胞処理作業用プレート用蓋と、第2ステップ用生体細胞処理作業用プレートと、第2ステップ用生体細胞処理作業用プレート用蓋を備え、
     前記第1ステップ用生体細胞処理作業用プレートは、台座部と、前記台座部より上方に延びる環状壁部と、前記環状壁部の内側に設けられた凹部を備え、前記台座部は、前記環状壁部と前記台座部の外縁間に位置する上面部を備え、かつ、前記凹部には、第1ステップ用生体細胞処理液が充填され、前記凹部の開口部は、剥離可能である封止シートにより封止されており、前記封止シートは、前記凹部を封止するシート本体部と、前記シート本体部より、延出した剥離用把持部を備えており、前記第1ステップ用生体細胞処理作業用プレート用蓋は、前記第1ステップ用生体細胞処理作業用プレートへの装着時において、前記環状壁部および前記凹部を被包し、前記台座部上に載置されるものとなっており、さらに、前記第1ステップ用生体細胞処理作業用プレート用蓋が、前記台座部上に載置された状態において、前記封止シートの前記剥離用把持部は、前記環状壁部と前記第1ステップ用生体細胞処理作業用プレート用蓋間を通過し、前記台座部の前記上面部上に位置するとともに、前記第1ステップ用生体細胞処理作業用プレート用蓋の下端にて押され、前記上面部の上面に近接し、把持不能であり、かつ、前記第1ステップ用生体細胞処理作業用プレート用蓋が、前記第1ステップ用生体細胞処理作業用プレートより取り外された状態では、前記剥離用把持部は、起き上がり、前記上面部の前記上面より離間し、把持可能となるものとなっており、
     前記第2ステップ用生体細胞処理作業用プレートは、台座部と、前記台座部より上方に延びる環状壁部と、前記環状壁部の内側に設けられた第1凹部と第2凹部を備え、前記第1凹部には、第2ステップ用の第1生体細胞処理液が充填され、前記第2凹部には、第2ステップ用の第2生体細胞処理液が充填されており、かつ、前記第1凹部の開口部および前記第2凹部の開口部は、剥離可能である封止シートにより封止されており、前記封止シートは、前記第1凹部または前記第2凹部を封止するシート本体部と、前記シート本体部より、延出した剥離用把持部を備えており、前記第2ステップ用生体細胞処理作業用プレート用蓋は、前記第2ステップ用生体細胞処理作業用プレートへの装着時において、前記環状壁部および前記第1凹部および前記第2凹部を被包し、前記台座部上に載置されるものとなっており、前記第2ステップ用生体細胞処理作業用プレート用蓋が、前記台座部上に載置された状態において、前記封止シートの前記剥離用把持部は、前記環状壁部と前記第2ステップ用生体細胞処理作業用プレート用蓋間を通過し、前記台座部の前記上面部上に位置するとともに、前記第2ステップ用生体細胞処理作業用プレート用蓋の下端にて押され、前記上面部の上面に近接し、把持不能であり、かつ、前記第2ステップ用生体細胞処理作業用プレート用蓋が、前記第2ステップ用生体細胞処理作業用プレートより取り外された状態では、前記剥離用把持部は、起き上がり、前記上面部の前記上面より離間し、把持可能となるものとなっていることを特徴とする生体細胞凍結前処理作業用キット。
  12. 前記第1ステップ用生体細胞処理液は、細胞膜透過性凍結保護物質非含有処理液であり、前記第2ステップ用の第1生体細胞処理液は、細胞膜透過性凍結保護物質を低濃度にて含有する低濃度処理液であり、前記第2ステップ用の第2生体細胞処理液は、細胞膜透過性凍結保護物質を高濃度にて含有する高濃度処理液である請求項10または11に記載の生体細胞凍結前処理作業用キット。
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