JPH10262649A - 培養容器アセンブリ、これに用いる蓋およびこれを用いた細胞培養方法 - Google Patents
培養容器アセンブリ、これに用いる蓋およびこれを用いた細胞培養方法Info
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- JPH10262649A JPH10262649A JP10071053A JP7105398A JPH10262649A JP H10262649 A JPH10262649 A JP H10262649A JP 10071053 A JP10071053 A JP 10071053A JP 7105398 A JP7105398 A JP 7105398A JP H10262649 A JPH10262649 A JP H10262649A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 培養容器アセンブリを出入りするガスの拡散
速度を変化させるための手段および生物学的汚染物の出
入りを実質的に最低限にするための手段を備えたインビ
トロで細胞成長または組織培養するための培養容器アセ
ンブリ、これを用いる蓋およびこれを用いた組織培養方
法を提供すること。 【解決手段】 開放端３２およびプレートの外縁を形成
する直立した側壁２８を有する複数のウェル２６を備え
たプレート２０と、ガス透過性膜７４をそれぞれ取り付
けた複数のオリフィス７２を有する平らなカバー５２に
さらに取り外しできるようにガス不透過性フィルムを備
えた蓋５０から組織培養アセンブリ１０を作製する。そ
の際、各オリフィス７２を各ウェル２６に位置合わせし
て配列することによりガスの交換を改善することがで
き、ガス不透過性フィルムを完全にまたは部分的に引き
剥がすことによってガスの拡散を調節することができ
る。
速度を変化させるための手段および生物学的汚染物の出
入りを実質的に最低限にするための手段を備えたインビ
トロで細胞成長または組織培養するための培養容器アセ
ンブリ、これを用いる蓋およびこれを用いた組織培養方
法を提供すること。 【解決手段】 開放端３２およびプレートの外縁を形成
する直立した側壁２８を有する複数のウェル２６を備え
たプレート２０と、ガス透過性膜７４をそれぞれ取り付
けた複数のオリフィス７２を有する平らなカバー５２に
さらに取り外しできるようにガス不透過性フィルムを備
えた蓋５０から組織培養アセンブリ１０を作製する。そ
の際、各オリフィス７２を各ウェル２６に位置合わせし
て配列することによりガスの交換を改善することがで
き、ガス不透過性フィルムを完全にまたは部分的に引き
剥がすことによってガスの拡散を調節することができ
る。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明はインビトロ（in vit
ro）で細胞成長または組織培養するのための装置および
方法に関する。より詳述すると、本発明はアセンブリを
出入りするガスの拡散速度を変化させるための手段、お
よびそのアセンブリ内の細胞または組織培養に関して生
物学的汚染を実質的に最低限にするための手段を有する
培養容器アセンブリ、これに用いる蓋およびこれを用い
た細胞培養方法に関するものである。
ro）で細胞成長または組織培養するのための装置および
方法に関する。より詳述すると、本発明はアセンブリを
出入りするガスの拡散速度を変化させるための手段、お
よびそのアセンブリ内の細胞または組織培養に関して生
物学的汚染を実質的に最低限にするための手段を有する
培養容器アセンブリ、これに用いる蓋およびこれを用い
た細胞培養方法に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】培養容器は、米国特許第4,495,289 号、
第5,026 ，649 号、第5,358,871 号および第5,366,893
号ならびにヨーロッパ特許出願公開第0 483 620 A2号お
よび英国特許出願公開第GB 2 268 187 A号に記載されて
いる。培養容器は、ウェル（wells ）を備えており、そ
れらのウェルは一般的に円形の形状をしているとともに
細胞の付着、成長、および分化がその上で起こる膜を有
する細胞培養挿入部（cell culture insert ）をそれら
のウェル内に導入できるサイズを有する。ウェルを含ん
だ培養容器は、典型的には矩形であり、標準の分析装置
に適合するように標準サイズを有する。培養容器に使用
される細胞培養挿入部は、米国特許第4,871,674 号、第
5,026,649 号および第5,366,893 号に記載されている
（これは引用することで本明細書の一部とする）。
第5,026 ，649 号、第5,358,871 号および第5,366,893
号ならびにヨーロッパ特許出願公開第0 483 620 A2号お
よび英国特許出願公開第GB 2 268 187 A号に記載されて
いる。培養容器は、ウェル（wells ）を備えており、そ
れらのウェルは一般的に円形の形状をしているとともに
細胞の付着、成長、および分化がその上で起こる膜を有
する細胞培養挿入部（cell culture insert ）をそれら
のウェル内に導入できるサイズを有する。ウェルを含ん
だ培養容器は、典型的には矩形であり、標準の分析装置
に適合するように標準サイズを有する。培養容器に使用
される細胞培養挿入部は、米国特許第4,871,674 号、第
5,026,649 号および第5,366,893 号に記載されている
（これは引用することで本明細書の一部とする）。
【０００３】細胞の培養は、細胞損傷が生じることなく
細胞に充分に酸素を供給する能力に依存する。細胞呼吸
用の酸素は、細胞の上にある上部空間中の大気から液体
培養培地を通って供給される。
細胞に充分に酸素を供給する能力に依存する。細胞呼吸
用の酸素は、細胞の上にある上部空間中の大気から液体
培養培地を通って供給される。
【０００４】例えば、スパージング、表面のエアレーシ
ョン、培地灌流といった培養の通気は、酸素の利用性を
増加することができる。しかしながら、かかる方法では
細胞損傷が起こる可能性がある。シリコーンゴム製の管
を用いてウェルと大気の間の配管（tubing）を行うこと
により細胞培養におけるガス交換を改善することがなさ
れているが、かかる方法は不便であり、細胞懸濁液が汚
染されることがある。
ョン、培地灌流といった培養の通気は、酸素の利用性を
増加することができる。しかしながら、かかる方法では
細胞損傷が起こる可能性がある。シリコーンゴム製の管
を用いてウェルと大気の間の配管（tubing）を行うこと
により細胞培養におけるガス交換を改善することがなさ
れているが、かかる方法は不便であり、細胞懸濁液が汚
染されることがある。
【０００５】多数の培養容器が市販され、特許公報に記
載されているけれども、培養容器アセンブリを出入する
ガスの拡散速度を変化させるための手段を提供するにも
かかわらず、依然として密閉系を提供し、それにより容
器に対する生物学的汚染物の出入口が実質的に最低限に
されるような培養容器は入手可能ではないと思われる。
載されているけれども、培養容器アセンブリを出入する
ガスの拡散速度を変化させるための手段を提供するにも
かかわらず、依然として密閉系を提供し、それにより容
器に対する生物学的汚染物の出入口が実質的に最低限に
されるような培養容器は入手可能ではないと思われる。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】従って、本発明の目的
は、培養容器アセンブリを出入りするガスの拡散速度を
変化させるための手段および生物学的汚染物の出入りを
実質的に最低限にするための手段をを有する培養容器ア
センブリ、これに用いる蓋およびこれを用いた細胞培養
方法を提供することにある。
は、培養容器アセンブリを出入りするガスの拡散速度を
変化させるための手段および生物学的汚染物の出入りを
実質的に最低限にするための手段をを有する培養容器ア
センブリ、これに用いる蓋およびこれを用いた細胞培養
方法を提供することにある。
【０００７】
【課題を解決するための手段】請求項１に記載のアセン
ブリは、組織培養培地を受け入れるための開口部を有す
る複数のウェルおよび前記プレートの外縁を形成する直
立した側壁を備える試験プレート、前記プレート上に置
かれる取り外しできる蓋であって、前記ウェルをおおっ
て広がる、上面および下面を有する、本質的に平らなカ
バーと、前記カバーを包囲し、複数の角部を形成し、か
つ下向きに延びて、内面および外面を有する側壁を形成
するスカートを備える蓋、前記平らなカバーに設けられ
たオリフィス、およびガス透過性膜を前記オリフィスに
連結したガス透過性膜を備えることを特徴とする。
ブリは、組織培養培地を受け入れるための開口部を有す
る複数のウェルおよび前記プレートの外縁を形成する直
立した側壁を備える試験プレート、前記プレート上に置
かれる取り外しできる蓋であって、前記ウェルをおおっ
て広がる、上面および下面を有する、本質的に平らなカ
バーと、前記カバーを包囲し、複数の角部を形成し、か
つ下向きに延びて、内面および外面を有する側壁を形成
するスカートを備える蓋、前記平らなカバーに設けられ
たオリフィス、およびガス透過性膜を前記オリフィスに
連結したガス透過性膜を備えることを特徴とする。
【０００８】請求項２に記載のアセンブリは、請求項１
において、前記オリフィスおよび前記ガス透過性膜をお
おって前記アセンブリを出入りするガスの拡散を補助で
きるように前記カバーに完全にまたは部分的に取り外し
できるように取り付けられたガス不透過性フィルムをさ
らに備えることを特徴とする。
において、前記オリフィスおよび前記ガス透過性膜をお
おって前記アセンブリを出入りするガスの拡散を補助で
きるように前記カバーに完全にまたは部分的に取り外し
できるように取り付けられたガス不透過性フィルムをさ
らに備えることを特徴とする。
【０００９】請求項３に記載のアセンブリは、請求項１
において、さらに前記試験プレートは前記プレートの前
記側壁から内方に離隔しかつ前記側壁と前記ウェルの間
で前記プレートの周りに延びている棚を備えており、前
記側壁は棚の上方位置まで延び、それによって前記棚の
周辺にリムを形成していることを特徴とする。
において、さらに前記試験プレートは前記プレートの前
記側壁から内方に離隔しかつ前記側壁と前記ウェルの間
で前記プレートの周りに延びている棚を備えており、前
記側壁は棚の上方位置まで延び、それによって前記棚の
周辺にリムを形成していることを特徴とする。
【００１０】請求項４に記載の組織培養プレートと関連
して用いる蓋は、上面と下面を備えている本質的に平ら
なカバー、前記カバー上に複数の角部を形成し、かつ下
向きに延びて、側壁を形成する前記カバーの周囲のスカ
ート、ガス透過性膜を備えた前記カバーに設けたオリフ
ィス、および前記オリフィスと前記ガス透過性膜をおお
った前記カバーに完全にまたは部分的に取り外しできる
ように取り付けたガス不透過性フィルムを備えているこ
とを特徴とする。
して用いる蓋は、上面と下面を備えている本質的に平ら
なカバー、前記カバー上に複数の角部を形成し、かつ下
向きに延びて、側壁を形成する前記カバーの周囲のスカ
ート、ガス透過性膜を備えた前記カバーに設けたオリフ
ィス、および前記オリフィスと前記ガス透過性膜をおお
った前記カバーに完全にまたは部分的に取り外しできる
ように取り付けたガス不透過性フィルムを備えているこ
とを特徴とする。
【００１１】請求項５に記載の蓋は、請求項４におい
て、さらに前記スカートから内方に離隔しかつ前記カバ
ーの前記下面から下向きに延びたフランジを備えること
を特徴とする。
て、さらに前記スカートから内方に離隔しかつ前記カバ
ーの前記下面から下向きに延びたフランジを備えること
を特徴とする。
【００１２】請求項６に記載のインビトロにおける細胞
成長または組織培養のための装置は、本体と取り外しで
きる蓋を備えた装置であって、前記本体は上面、下面、
本質的に前記上面および下面の間に配置された複数のウ
ェル、ならびに前記本体の外縁を形成する直立した側壁
を備え、前記取り外しできる蓋は上壁および前記上壁か
ら延びた周囲のスカートを備え、前記装置を出入するガ
スの拡散を許容する手段を備えることを特徴とする。
成長または組織培養のための装置は、本体と取り外しで
きる蓋を備えた装置であって、前記本体は上面、下面、
本質的に前記上面および下面の間に配置された複数のウ
ェル、ならびに前記本体の外縁を形成する直立した側壁
を備え、前記取り外しできる蓋は上壁および前記上壁か
ら延びた周囲のスカートを備え、前記装置を出入するガ
スの拡散を許容する手段を備えることを特徴とする。
【００１３】請求項７に記載の装置は、請求項６におい
て、装置を出入りするガスの拡散を許容する前記手段
が、オリフィスおよび前記オリフィスと連結したガス透
過性膜であることを特徴とする。
て、装置を出入りするガスの拡散を許容する前記手段
が、オリフィスおよび前記オリフィスと連結したガス透
過性膜であることを特徴とする。
【００１４】請求項８に記載の装置は、請求項６におい
て、前記オリフィスをおおって、ガスの拡散を補助する
ことができるように前記カバーに対して部分的にまたは
完全に取り外しできるように取り付けられたガス不透過
性フィルムをさらに備えることを特徴とする。
て、前記オリフィスをおおって、ガスの拡散を補助する
ことができるように前記カバーに対して部分的にまたは
完全に取り外しできるように取り付けられたガス不透過
性フィルムをさらに備えることを特徴とする。
【００１５】請求項９に記載の装置は、請求項６におい
て、前記本体の前記側壁は上の区分および下の区分を備
えた２段階の区分を含み、さらに環状肩部を備え、前記
下の区分は前記環状肩部により前記上の区分から段状に
なっていることを特徴とする。
て、前記本体の前記側壁は上の区分および下の区分を備
えた２段階の区分を含み、さらに環状肩部を備え、前記
下の区分は前記環状肩部により前記上の区分から段状に
なっていることを特徴とする。
【００１６】請求項１０に記載の細胞培養方法は、下記
工程を備えることを特徴とする： （ａ）組織培養培地を受け入れるための開口部を有する
複数のウェルおよび当該プレートの外縁を形成する直立
した側壁を備える試験プレート、前記プレート上に取り
外しできるように置かれ、前記ウェルをおおって広がる
本質的に平らなカバーを備える蓋、前記カバーの複数の
角部を形成し、かつ前記プレートに関連して離隔して下
向きに延びるスカート、平らなカバーにおける複数のオ
リフィス、および前記オリフィスに連結し前記膜をカバ
ーするガス透過性膜を備える培養容器を用意し、（ｂ）
前記培養容器から前記蓋を取り外し、（ｃ）前記培養容
器の前記ウェル内に、膜を備える細胞挿入部を置き、
（ｄ）前記培養容器内の前記細胞挿入部のそれぞれの膜
の上に細胞の層を沈着し、（ｅ）細胞の層を成長培地で
覆い、（ｆ）前記ウェルをカバーするために前記プレー
トの上に前記蓋を置き、（ｇ）前記オリフィスをおおっ
た前記ラベルを完全にまたは部分的に取り外し、再び取
り付けることで、前記培養容器の前記蓋におけるオリフ
ィスを通って空気が押し入って到達することができるよ
うにすることにより、細胞挿入部の膜を換気する。
工程を備えることを特徴とする： （ａ）組織培養培地を受け入れるための開口部を有する
複数のウェルおよび当該プレートの外縁を形成する直立
した側壁を備える試験プレート、前記プレート上に取り
外しできるように置かれ、前記ウェルをおおって広がる
本質的に平らなカバーを備える蓋、前記カバーの複数の
角部を形成し、かつ前記プレートに関連して離隔して下
向きに延びるスカート、平らなカバーにおける複数のオ
リフィス、および前記オリフィスに連結し前記膜をカバ
ーするガス透過性膜を備える培養容器を用意し、（ｂ）
前記培養容器から前記蓋を取り外し、（ｃ）前記培養容
器の前記ウェル内に、膜を備える細胞挿入部を置き、
（ｄ）前記培養容器内の前記細胞挿入部のそれぞれの膜
の上に細胞の層を沈着し、（ｅ）細胞の層を成長培地で
覆い、（ｆ）前記ウェルをカバーするために前記プレー
トの上に前記蓋を置き、（ｇ）前記オリフィスをおおっ
た前記ラベルを完全にまたは部分的に取り外し、再び取
り付けることで、前記培養容器の前記蓋におけるオリフ
ィスを通って空気が押し入って到達することができるよ
うにすることにより、細胞挿入部の膜を換気する。
【００１７】
【発明の実施の形態】本発明は、インビトロで細胞成長
または組織培養するためのアセンブリに関するものであ
る。そのアセンブリは、組織培養挿入部のような挿入部
にまたは組織培養培地を受け入れるのに適用した形状の
ウェルおよび取り外しできる蓋を有する試験プレートを
備えたものである。
または組織培養するためのアセンブリに関するものであ
る。そのアセンブリは、組織培養挿入部のような挿入部
にまたは組織培養培地を受け入れるのに適用した形状の
ウェルおよび取り外しできる蓋を有する試験プレートを
備えたものである。
【００１８】好適には、試験プレートは、上面、下面、
および複数のウェルを備えている。各ウェルは、本質的
に試験プレートの上面および下面の間に配置される。
および複数のウェルを備えている。各ウェルは、本質的
に試験プレートの上面および下面の間に配置される。
【００１９】アセンブリは、さらに試験プレートの上面
をおおって置くことができる取り外しできる蓋を含んで
いる。その蓋は、ウェルの上壁および上壁から下向きに
延びた、周縁スカート（peripheral skirt）を含んでい
る。その蓋は、ウェルの内部からのサンプルの損失を防
ぎ、周囲からアセンブリ内の内容物を保護し、有害な物
質または潜在的に有害な物質が含まれていればアセンブ
リ内の内容物から使用者を保護するのに役立つ。
をおおって置くことができる取り外しできる蓋を含んで
いる。その蓋は、ウェルの上壁および上壁から下向きに
延びた、周縁スカート（peripheral skirt）を含んでい
る。その蓋は、ウェルの内部からのサンプルの損失を防
ぎ、周囲からアセンブリ内の内容物を保護し、有害な物
質または潜在的に有害な物質が含まれていればアセンブ
リ内の内容物から使用者を保護するのに役立つ。
【００２０】試験プレートおよびこれと関連する取り外
しできる蓋は、異なるサイズおよび形状に形成して異な
るサイズおよび形状の細胞培養挿入部を使用するように
してもよい。プレートの上面をおおって蓋の位置を変え
る場合に、ウェルの間の相互汚染を減少させるために、
取り外しできる蓋は、一つの方向でプレートの上面をお
おって置かれるように形成してもよい。プレートおよび
取り外しできる蓋は、ウェルおよび細胞培養挿入部が容
易に見えるように、光学的に透明なプラスチックから製
造されたものが好ましい。
しできる蓋は、異なるサイズおよび形状に形成して異な
るサイズおよび形状の細胞培養挿入部を使用するように
してもよい。プレートの上面をおおって蓋の位置を変え
る場合に、ウェルの間の相互汚染を減少させるために、
取り外しできる蓋は、一つの方向でプレートの上面をお
おって置かれるように形成してもよい。プレートおよび
取り外しできる蓋は、ウェルおよび細胞培養挿入部が容
易に見えるように、光学的に透明なプラスチックから製
造されたものが好ましい。
【００２１】蓋は、プレートのウェルを出入してガスが
拡散できるようにするための手段を備えていることが好
ましい。プレートのウェルを出入してガスが拡散できる
ようにする手段には、少なくとも１つの出入口（ポー
ト）があり、さらに出入口はガスが透過できる膜と連結
していることが最も望ましい。このガス透過性膜は液体
に対して不透過性であることが最も望ましい。最も好適
には、蓋は相方のプレート中にあるウェルと同じ数の出
入口を備えている。さらに、最も好適には、出入口はウ
ェルに合わせて位置づけるかまたは整列させる。したが
って、蓋がプレートをおおって置かれたとき、各ウェル
は蓋の上の出入口と連結している。ウェルに合わせて出
入口を位置づけると、直接にそのウェルのガス交換が改
善されるという利点が得られる。さらに、ガス交換はウ
ェル毎により直接的に調節することができるが、この場
合、各ウェルには、使用者によってガス交換について個
別的に配慮がなされるようにしてもよい。
拡散できるようにするための手段を備えていることが好
ましい。プレートのウェルを出入してガスが拡散できる
ようにする手段には、少なくとも１つの出入口（ポー
ト）があり、さらに出入口はガスが透過できる膜と連結
していることが最も望ましい。このガス透過性膜は液体
に対して不透過性であることが最も望ましい。最も好適
には、蓋は相方のプレート中にあるウェルと同じ数の出
入口を備えている。さらに、最も好適には、出入口はウ
ェルに合わせて位置づけるかまたは整列させる。したが
って、蓋がプレートをおおって置かれたとき、各ウェル
は蓋の上の出入口と連結している。ウェルに合わせて出
入口を位置づけると、直接にそのウェルのガス交換が改
善されるという利点が得られる。さらに、ガス交換はウ
ェル毎により直接的に調節することができるが、この場
合、各ウェルには、使用者によってガス交換について個
別的に配慮がなされるようにしてもよい。
【００２２】さらに、蓋に結びつけられているのは、試
験プレートから蓋を取り外すことなしに、ガス透過性膜
を選択的に閉塞するための手段である。膜を選択的に閉
塞する手段としては、薄い不透過性のフィルムが好適で
ある。薄いフィルムを出入口をおおう蓋の上に取り外し
できるように取り付けて、ガス透過性膜を大気にさらす
ことを制限するようにしてもよい。蓋を試験プレートか
ら持ち上げたりまたは取り外したりする必要がないの
で、薄い不透過性のフィルムは、ウェル内環境の生物学
的な安全性を維持するのを助ける。
験プレートから蓋を取り外すことなしに、ガス透過性膜
を選択的に閉塞するための手段である。膜を選択的に閉
塞する手段としては、薄い不透過性のフィルムが好適で
ある。薄いフィルムを出入口をおおう蓋の上に取り外し
できるように取り付けて、ガス透過性膜を大気にさらす
ことを制限するようにしてもよい。蓋を試験プレートか
ら持ち上げたりまたは取り外したりする必要がないの
で、薄い不透過性のフィルムは、ウェル内環境の生物学
的な安全性を維持するのを助ける。
【００２３】最も好適には、選択的に膜を閉塞するため
の手段は、剥ぎ取り式ガス不透過性ラベル（label ）で
ある。最も好適には、ラベルはプラスチックである。好
適なラベルの材料としては、ガスおよび液体に不透過性
のポリマー性基質樹脂（polymeric substrate resins）
があるが、これらに限定はされない。ラベルは透明でも
または色を指定してもよい。さらに、ラベルの表面は、
追加の情報をラベルの上に手書きできるようにすること
もできる。
の手段は、剥ぎ取り式ガス不透過性ラベル（label ）で
ある。最も好適には、ラベルはプラスチックである。好
適なラベルの材料としては、ガスおよび液体に不透過性
のポリマー性基質樹脂（polymeric substrate resins）
があるが、これらに限定はされない。ラベルは透明でも
または色を指定してもよい。さらに、ラベルの表面は、
追加の情報をラベルの上に手書きできるようにすること
もできる。
【００２４】円形であるラベルを提供することは本発明
の範囲内であるけれども、異なる形状のラベルを提供す
ることもできる。
の範囲内であるけれども、異なる形状のラベルを提供す
ることもできる。
【００２５】このラベルを用いると使用者は試験プレー
ト中のガス交換を調節できるので、試験プレート中で細
胞培養の所望の成長を得るのが容易になるが、同時に試
験プレートのウェル内に微生物または他の汚染物が侵入
するのを本質的に防ぐ密封系を依然として提供すること
ができる。ラベルは、ガス交換をほぼ最大にする一方
で、試験プレートのウェルにおける汚染の可能性を最小
にする。さらなる利点としては、蓋を取り外すかまたは
部分的に開く必要なしにもっぱら膜を通してガス交換が
起こり、それゆえウェル中の滅菌性が失われることおよ
び漏出を実質的に最小にすることである。
ト中のガス交換を調節できるので、試験プレート中で細
胞培養の所望の成長を得るのが容易になるが、同時に試
験プレートのウェル内に微生物または他の汚染物が侵入
するのを本質的に防ぐ密封系を依然として提供すること
ができる。ラベルは、ガス交換をほぼ最大にする一方
で、試験プレートのウェルにおける汚染の可能性を最小
にする。さらなる利点としては、蓋を取り外すかまたは
部分的に開く必要なしにもっぱら膜を通してガス交換が
起こり、それゆえウェル中の滅菌性が失われることおよ
び漏出を実質的に最小にすることである。
【００２６】ラベルは、試験プレートの滅菌性を弱めた
りまたは漏出を招来するものではない。ラベルは再利用
できるので製造かつ経済的に引き合うということは他の
利点である。
りまたは漏出を招来するものではない。ラベルは再利用
できるので製造かつ経済的に引き合うということは他の
利点である。
【００２７】最も著しいのは、本発明のアセンブリが以
降の利点を提供することである。すなわち、（１）通気
口がある閉じた環境で滅菌性を維持し、かつガス交換を
調節していること、（２）潜在的に有害なサンプルを収
容すること、および（３）酵母、バクテリア、および／
またはウィルスのような環境内の／外因性の汚染物でア
センブリ内の試料が汚染されることを最小限にすること
である。
降の利点を提供することである。すなわち、（１）通気
口がある閉じた環境で滅菌性を維持し、かつガス交換を
調節していること、（２）潜在的に有害なサンプルを収
容すること、および（３）酵母、バクテリア、および／
またはウィルスのような環境内の／外因性の汚染物でア
センブリ内の試料が汚染されることを最小限にすること
である。
【００２８】さらに、本発明が特に有利なのは、無菌お
よびガス交換が制御された条件において皮膚移植のため
のケラチン生成細胞を複数層生成することが望ましい皮
膚の培養のように、複数層の細胞を培養する場合であ
る。
よびガス交換が制御された条件において皮膚移植のため
のケラチン生成細胞を複数層生成することが望ましい皮
膚の培養のように、複数層の細胞を培養する場合であ
る。
【００２９】さらに、本発明は、細胞挿入部（cell ins
ert ）の膜の表面にある分裂中の細胞に対して直接に酸
素を制御して通過することを可能にする。
ert ）の膜の表面にある分裂中の細胞に対して直接に酸
素を制御して通過することを可能にする。
【００３０】本発明のアセンブリの原理にしたがって、
現在知られておりかつ入手可能であるマルチウェル（mu
ltiwell ）組織培養アセンブリに対して著しい改善が提
供される。最も重要なのは、本発明は、アセンブリを出
入りするガスの拡散を本質的に改善するが、同時にマル
チウェルプレートの内容物の滅菌性を維持し、かつウェ
ルと外部の環境との間で充分なガス交換が起こるように
している。従って、本発明のアセンブリは、細胞培養方
法のための条件を最適にするために生物学的に密閉され
た環境を提供するものであり、その際生物学的な汚染
物、ガスおよび／または液体の出入りは、本質的に最小
にされる。
現在知られておりかつ入手可能であるマルチウェル（mu
ltiwell ）組織培養アセンブリに対して著しい改善が提
供される。最も重要なのは、本発明は、アセンブリを出
入りするガスの拡散を本質的に改善するが、同時にマル
チウェルプレートの内容物の滅菌性を維持し、かつウェ
ルと外部の環境との間で充分なガス交換が起こるように
している。従って、本発明のアセンブリは、細胞培養方
法のための条件を最適にするために生物学的に密閉され
た環境を提供するものであり、その際生物学的な汚染
物、ガスおよび／または液体の出入りは、本質的に最小
にされる。
【００３１】添付図面に図示し以下に詳細に説明するの
は好適な本発明の実施態様である。本発明は多くの異な
る形態の実施態様によって具現化されるけれども、本開
示は、本発明の原理の一例であり、本発明を例示した実
施態様に限定することを意図するものではない。種々の
他の変形は、本発明の範囲および精神からそれることな
しに当業者によって理解されおよび容易になされる。本
発明の範囲は、添付された請求項およびそれらの均等物
によって判断される。
は好適な本発明の実施態様である。本発明は多くの異な
る形態の実施態様によって具現化されるけれども、本開
示は、本発明の原理の一例であり、本発明を例示した実
施態様に限定することを意図するものではない。種々の
他の変形は、本発明の範囲および精神からそれることな
しに当業者によって理解されおよび容易になされる。本
発明の範囲は、添付された請求項およびそれらの均等物
によって判断される。
【００３２】図１および図２に示したように組織培養を
成長させるための装置１０は、培養容器プレート２０お
よび蓋５０を備えている。図２に示したように、培養容
器プレート２０は、上面２２および下面２４を含んでい
る。さらに培養容器プレートは、プレートの上面２２か
らプレートの下面２４まで延びた側壁２８を各々備えた
多数のウェル２６を含んでいる。各ウェルは、上部３０
および底部３６を備えている。上部３０は、開放端３２
を備えており、それは閉塞端３８を備えた底部３６に向
かって延びている。
成長させるための装置１０は、培養容器プレート２０お
よび蓋５０を備えている。図２に示したように、培養容
器プレート２０は、上面２２および下面２４を含んでい
る。さらに培養容器プレートは、プレートの上面２２か
らプレートの下面２４まで延びた側壁２８を各々備えた
多数のウェル２６を含んでいる。各ウェルは、上部３０
および底部３６を備えている。上部３０は、開放端３２
を備えており、それは閉塞端３８を備えた底部３６に向
かって延びている。
【００３３】６個、１２個、２４個、４８個、および９
６個のウェルプレートは一般に知られており、かつ入手
可能であるけれども、プレート２０におけるウェル２６
の数はいくつでもよい。図１では、単に例示的な目的の
ために６個のウェルを有するプレートが例示されてい
る。最も標準的なマルチウェルプレートは、使用される
個々のウェルを明らかに同定できるようにするために直
交した列と行に配置されたウェルを有する。もちろん、
本発明により、いかなるウェルの配置も考えられるの
で、プレート２０におけるウェルの配置は、本質的に本
発明を限定するものではない。
６個のウェルプレートは一般に知られており、かつ入手
可能であるけれども、プレート２０におけるウェル２６
の数はいくつでもよい。図１では、単に例示的な目的の
ために６個のウェルを有するプレートが例示されてい
る。最も標準的なマルチウェルプレートは、使用される
個々のウェルを明らかに同定できるようにするために直
交した列と行に配置されたウェルを有する。もちろん、
本発明により、いかなるウェルの配置も考えられるの
で、プレート２０におけるウェルの配置は、本質的に本
発明を限定するものではない。
【００３４】図に例示したようにプレート２０は、典型
的には、透明であって、かつ例えば、ポリビニルクロラ
イドまたはポリスチレンから成る成形品でもよい。
的には、透明であって、かつ例えば、ポリビニルクロラ
イドまたはポリスチレンから成る成形品でもよい。
【００３５】ウェルを囲み、プレート２０の外側の縁取
り（border）を形成しているのが側壁４０である。本発
明の実施態様において、プレート２０は６個の側壁を有
する。組織培養プレートが矩形または四辺形の形である
ことは周知であるが、本発明の目的のためには、プレー
トは任意の実用的な形状に作製することができる。
り（border）を形成しているのが側壁４０である。本発
明の実施態様において、プレート２０は６個の側壁を有
する。組織培養プレートが矩形または四辺形の形である
ことは周知であるが、本発明の目的のためには、プレー
トは任意の実用的な形状に作製することができる。
【００３６】プレートの側壁４０の内側に、かつプレー
ト２０の上の区分の周りに設けられているのは、埋め込
み式の棚（recessed ledge）２１であり、これは図１お
よび図２に関連した図３および図４でより明らかに分か
る。棚２１は、プレート２０の上面のウェルを囲んで縁
取りを形成し、さらにそこで側壁４０は棚の上に高くし
た位置まで伸び、それによって棚の周辺にリム（rim ）
を形成している。
ト２０の上の区分の周りに設けられているのは、埋め込
み式の棚（recessed ledge）２１であり、これは図１お
よび図２に関連した図３および図４でより明らかに分か
る。棚２１は、プレート２０の上面のウェルを囲んで縁
取りを形成し、さらにそこで側壁４０は棚の上に高くし
た位置まで伸び、それによって棚の周辺にリム（rim ）
を形成している。
【００３７】側壁４０は、上の区分４２および下の区分
４６を備えた２段階の区分から成る。下の区分４６は、
上と下の区分の間の環状肩部４４によって上の区分４２
から段状になったものである。それ故、上の区分４２
は、上面２２から環状肩部４４まで延びており、下の区
分４６は、環状肩部４４から下面２４の底面４８まで延
びている。
４６を備えた２段階の区分から成る。下の区分４６は、
上と下の区分の間の環状肩部４４によって上の区分４２
から段状になったものである。それ故、上の区分４２
は、上面２２から環状肩部４４まで延びており、下の区
分４６は、環状肩部４４から下面２４の底面４８まで延
びている。
【００３８】本発明のマルチウェル組織培養アセンブリ
が使用中のときは、下の区分４６は、プレート２０に対
して環状の基板として働く。
が使用中のときは、下の区分４６は、プレート２０に対
して環状の基板として働く。
【００３９】蓋５０は独立していて、プレートのウェル
の全てをカバーする取り外しできる部材である。図面の
全てに蓋５０が例示されているけれども、蓋５０の詳細
は、図２および図３に最もよく例示されている。蓋５０
は、プレートのウェルの全てをおおって広がるのに充分
に大きい、本質的に平らなカバー５２を有している。平
らなカバー５２は、上面５４および底面５６を有する。
カバー５２の形状は、プレート２０の形状に合致する。
最も好適なのは、図１に示したように、蓋５０は、使用
者がプレートをおおった蓋を再度置こうとした場合に、
ウェルの間の相互汚染を減少させるために一つの方向で
プレートの上面をおおって置かれるように形成すること
である。
の全てをカバーする取り外しできる部材である。図面の
全てに蓋５０が例示されているけれども、蓋５０の詳細
は、図２および図３に最もよく例示されている。蓋５０
は、プレートのウェルの全てをおおって広がるのに充分
に大きい、本質的に平らなカバー５２を有している。平
らなカバー５２は、上面５４および底面５６を有する。
カバー５２の形状は、プレート２０の形状に合致する。
最も好適なのは、図１に示したように、蓋５０は、使用
者がプレートをおおった蓋を再度置こうとした場合に、
ウェルの間の相互汚染を減少させるために一つの方向で
プレートの上面をおおって置かれるように形成すること
である。
【００４０】カバー５２の周りに延びた部分は、垂れ下
がったスカート（skirt ）５８であり、これは蓋５０の
周りに縁取りを形成する。スカート５８は、内壁面６０
および外壁面６２、ならびに各々がカバーから底止め面
６４まで下向きに延びている６個の側面を有している。
内部に向かって、スカート５８から配列され、かつ平ら
なカバーの底面５６から下向きに延びているのがリブ
（rib ）６６である。かかるリブは、本質的にスカート
５８の各々の側面に対して平行に横たわっており、プレ
ート中の埋め込み式の棚２１に下向きに付属するように
カバーの上に位置する。
がったスカート（skirt ）５８であり、これは蓋５０の
周りに縁取りを形成する。スカート５８は、内壁面６０
および外壁面６２、ならびに各々がカバーから底止め面
６４まで下向きに延びている６個の側面を有している。
内部に向かって、スカート５８から配列され、かつ平ら
なカバーの底面５６から下向きに延びているのがリブ
（rib ）６６である。かかるリブは、本質的にスカート
５８の各々の側面に対して平行に横たわっており、プレ
ート中の埋め込み式の棚２１に下向きに付属するように
カバーの上に位置する。
【００４１】図１から図３に示したように、多数のオリ
フィス７２をカバー５２上に設置する。ガス透過性であ
り、液体不透過性である膜７４は、図１から図３に示し
たように各オリフィスと連結している。ガス透過性膜の
材料は、試験プレートに酸素および二酸化炭素のような
ガスを自由に通過するけれども、バクテリアおよび真菌
のような微生物の通過を防ぐ限りにおいて、任意の適当
なガス透過性材料から作成することができる。
フィス７２をカバー５２上に設置する。ガス透過性であ
り、液体不透過性である膜７４は、図１から図３に示し
たように各オリフィスと連結している。ガス透過性膜の
材料は、試験プレートに酸素および二酸化炭素のような
ガスを自由に通過するけれども、バクテリアおよび真菌
のような微生物の通過を防ぐ限りにおいて、任意の適当
なガス透過性材料から作成することができる。
【００４２】図４に示したように、蓋５０がプレート２
０をおおって置かれるとき、スカート５８はプレートの
環状肩部４４に向かって延びており、それによって環状
肩部４４と底止め面６４のその間に空間６８が残る。そ
れ故、図４に示したように、スカート５８の内壁面６０
とプレートの側壁の上の区分４２との間に第２の空間７
０がある。
０をおおって置かれるとき、スカート５８はプレートの
環状肩部４４に向かって延びており、それによって環状
肩部４４と底止め面６４のその間に空間６８が残る。そ
れ故、図４に示したように、スカート５８の内壁面６０
とプレートの側壁の上の区分４２との間に第２の空間７
０がある。
【００４３】図５に示したように、本発明の他の実施態
様としては、図１の構成要素と本質的に同一である多く
の構成要素を含んでいる。従って、同様の機能を果たす
同様の構成要素は、図５においてそれらの同様の構成要
素を同定するのに接尾辞“ａ”を用いることを除いて
は、図１におけるそれらの構成要素と全く同じに番号を
つける。
様としては、図１の構成要素と本質的に同一である多く
の構成要素を含んでいる。従って、同様の機能を果たす
同様の構成要素は、図５においてそれらの同様の構成要
素を同定するのに接尾辞“ａ”を用いることを除いて
は、図１におけるそれらの構成要素と全く同じに番号を
つける。
【００４４】図５に示されたように、任意的な剥ぎ取り
式の薄いフィルムのラベル（以下、薄膜ラベルともい
う）７６は、カバー５２ａに取り外しできるように取り
付けられてオリフィス７２ａの膜７４ａを選択的に閉塞
する。フィルムは、特定な培養の要求にしたがって、完
全にまたは部分的に取り外すか、あるいは置いたままに
しておくことができる。
式の薄いフィルムのラベル（以下、薄膜ラベルともい
う）７６は、カバー５２ａに取り外しできるように取り
付けられてオリフィス７２ａの膜７４ａを選択的に閉塞
する。フィルムは、特定な培養の要求にしたがって、完
全にまたは部分的に取り外すか、あるいは置いたままに
しておくことができる。
【００４５】慣用的な方法を用いて、カバーに対して剥
ぎ取り式の薄膜ラベルを適用する。これらの方法は、感
圧接着材料のような接着材料を含んでおり、そこで薄膜
ラベルは、必要に応じてカバーから部分的にまたは完全
に取り外すことが容易にでき、そして必要に応じて適用
することができる。薄膜ラベル材料はポリエチレンまた
はポリエチレンテレフタレートから作成してもよく、接
着材料はアクリル系接着剤を含んでなるものであっても
よい。
ぎ取り式の薄膜ラベルを適用する。これらの方法は、感
圧接着材料のような接着材料を含んでおり、そこで薄膜
ラベルは、必要に応じてカバーから部分的にまたは完全
に取り外すことが容易にでき、そして必要に応じて適用
することができる。薄膜ラベル材料はポリエチレンまた
はポリエチレンテレフタレートから作成してもよく、接
着材料はアクリル系接着剤を含んでなるものであっても
よい。
【００４６】図５に示したように、任意の剥ぎ取り式薄
膜ラベル７６は、円形であり、かつ使用しやすいように
つまみ７７を有する。円形の剥ぎ取り式薄膜を提供する
ことは、本発明の範囲内であるけれども、異なる形状お
よび寸法にしてもよい。
膜ラベル７６は、円形であり、かつ使用しやすいように
つまみ７７を有する。円形の剥ぎ取り式薄膜を提供する
ことは、本発明の範囲内であるけれども、異なる形状お
よび寸法にしてもよい。
【００４７】図６に示したように本発明の他の実施態様
としては、図２の構成要素と本質的に同一である多くの
構成要素を含んでいる。従って、同様の機能を果たす同
様の構成要素は、図６においてそれらの同様の構成要素
を同定するのに接尾辞“ｂ”を用いることを除いては、
図２におけるそれらの構成要素と全く同じ番号をつけ
る。
としては、図２の構成要素と本質的に同一である多くの
構成要素を含んでいる。従って、同様の機能を果たす同
様の構成要素は、図６においてそれらの同様の構成要素
を同定するのに接尾辞“ｂ”を用いることを除いては、
図２におけるそれらの構成要素と全く同じ番号をつけ
る。
【００４８】図６に示すようにラベル７９は、アセンブ
リ１０ｂに使用できるラベルの他の実施態様である。図
６に示したように本発明のこの実施態様は、蓋５０ｂの
平面的な被覆表面の全体をカバーするラベル７９であ
る。
リ１０ｂに使用できるラベルの他の実施態様である。図
６に示したように本発明のこの実施態様は、蓋５０ｂの
平面的な被覆表面の全体をカバーするラベル７９であ
る。
【００４９】図７に示したように本発明の他の実施態様
としては、図２の構成要素と本質的に同一である多くの
構成要素を含んでいる。従って、同様の機能を果たす同
様の構成要素は、図７においてそれらの同様の構成要素
を同定するのに接尾辞“ｃ”を用いることを除いては、
図２におけるそれらの構成要素と全く同じ番号をつけ
る。
としては、図２の構成要素と本質的に同一である多くの
構成要素を含んでいる。従って、同様の機能を果たす同
様の構成要素は、図７においてそれらの同様の構成要素
を同定するのに接尾辞“ｃ”を用いることを除いては、
図２におけるそれらの構成要素と全く同じ番号をつけ
る。
【００５０】図７に示したように蓋５０ｃは、アセンブ
リ１０ｃに使用することができる蓋の他の実施態様であ
る。図７に示したように本発明の他の実施態様は、平ら
なカバーに設置された２つのオリフィス９０であり、各
々は液体不透過性フィルム９２を有し、これらは連結し
ている。図７では２つのオリフィスのみを示している
が、平らなカバーに２つ以上のオリフィスを有すること
も十分に本発明の範囲内である。
リ１０ｃに使用することができる蓋の他の実施態様であ
る。図７に示したように本発明の他の実施態様は、平ら
なカバーに設置された２つのオリフィス９０であり、各
々は液体不透過性フィルム９２を有し、これらは連結し
ている。図７では２つのオリフィスのみを示している
が、平らなカバーに２つ以上のオリフィスを有すること
も十分に本発明の範囲内である。
【００５１】使用の際には、本発明は以下のように細胞
の培養に使用することができる。すなわち、 ａ．培養容器から蓋を取り除き、 ｂ．培養容器内で細胞挿入部の膜の上に細胞の層を沈着
させ、 ｃ．細胞の層を成長培地で覆い、 ｄ．プレートをおおって蓋を置き、そして ｅ．オリフィスをおおったラベルを取り外したりまたは
部分的に取り外したりおよび再び取り付けることによっ
て、培養容器の蓋のオリフィスを通って空気が押し入っ
て到達することができるようにして各細胞挿入部の膜を
直接的に換気する。
の培養に使用することができる。すなわち、 ａ．培養容器から蓋を取り除き、 ｂ．培養容器内で細胞挿入部の膜の上に細胞の層を沈着
させ、 ｃ．細胞の層を成長培地で覆い、 ｄ．プレートをおおって蓋を置き、そして ｅ．オリフィスをおおったラベルを取り外したりまたは
部分的に取り外したりおよび再び取り付けることによっ
て、培養容器の蓋のオリフィスを通って空気が押し入っ
て到達することができるようにして各細胞挿入部の膜を
直接的に換気する。
【００５２】当業者に理解されるように、本発明の培養
容器アセンブリは、単純な成形できる部品から作製する
ことができ、それは、例えば、ポリエチレン、ポリスチ
レン、ポリエチレンテレフタレートおよびポリプロピレ
ンを含む種々の材料から大量生産が可能である。さら
に、当業者に理解されるように、材料は、成長した培養
細胞を引き続き検査するのに、使用しやすいように僅か
な弾性度を与える物質を選ぶことが望ましい。
容器アセンブリは、単純な成形できる部品から作製する
ことができ、それは、例えば、ポリエチレン、ポリスチ
レン、ポリエチレンテレフタレートおよびポリプロピレ
ンを含む種々の材料から大量生産が可能である。さら
に、当業者に理解されるように、材料は、成長した培養
細胞を引き続き検査するのに、使用しやすいように僅か
な弾性度を与える物質を選ぶことが望ましい。
【００５３】
【発明の効果】以上により、オリフィスとカバー上のガ
ス透過性膜を連結させることで蓋を取り外すことなく直
接的に膜をガス交換することができ、ガス透過性膜をお
おったカバーに完全にまたは部分的に取り外しできるよ
うにガス不透過性フィルムを取り付けることでガス透過
性膜を選択的に閉塞することができる。このことによ
り、培養容器アセンブリを出入りするガスの拡散を本質
的に改善し、同時にマルチウェルプレートの内容物の滅
菌性を維持し、かつウェルと外部の環境との間で充分な
ガス交換が起こるようにすることができる。また、生物
学的な汚染物、ガスおよび／または液体の出入りを最低
限にすることができ、細胞培養の条件に最適な生物学的
に密閉された環境を提供することができる。
ス透過性膜を連結させることで蓋を取り外すことなく直
接的に膜をガス交換することができ、ガス透過性膜をお
おったカバーに完全にまたは部分的に取り外しできるよ
うにガス不透過性フィルムを取り付けることでガス透過
性膜を選択的に閉塞することができる。このことによ
り、培養容器アセンブリを出入りするガスの拡散を本質
的に改善し、同時にマルチウェルプレートの内容物の滅
菌性を維持し、かつウェルと外部の環境との間で充分な
ガス交換が起こるようにすることができる。また、生物
学的な汚染物、ガスおよび／または液体の出入りを最低
限にすることができ、細胞培養の条件に最適な生物学的
に密閉された環境を提供することができる。
【図１】本発明のアセンブリの透視図である。
【図２】蓋を取り外した本発明のアセンブリの透視図で
ある。
ある。
【図３】図１の線３−３に沿って分けたアセンブリの断
面図である。
面図である。
【図４】図３のアセンブリの部分断面図を拡大した図で
ある。
ある。
【図５】各オリフィス（orifice ）をカバーするラベル
を有する本発明の他の実施態様に関する透視図である。
を有する本発明の他の実施態様に関する透視図である。
【図６】全ての蓋をカバーするラベルを有する本発明の
他の実施態様に関する透視図である。
他の実施態様に関する透視図である。
【図７】蓋に１以上のオリフィスを示した本発明の他の
実施態様に関する透視図である。
実施態様に関する透視図である。
１０、１０ａ、１０ｂ 培養容器アセンブリ、装置 ２０ 培養容器プレート ２１ 埋め込み式棚 ２２ 上面 ２４ 下面 ２６ ウェル ２８ 側壁 ３０ 上部 ３２ 開放端、開口部 ３６ 底部 ３８ 閉塞端 ４０ 側壁 ４２ 上の区分 ４４ 環状肩部 ４６ 下の区分 ４８ 底面 ５０、５０ｂ 蓋 ５２ カバー ５４ 上面 ５６ 底面 ５８ スカート ６０ 内壁面 ６２ 外壁面 ６４ 底止め面 ６６ リブ ６８ 空間 ７０ 第２の空間 ７２、７２ａ オリフィス、出入口（ポート） ７４、７４ａ 膜 ７６ 剥ぎ取り式薄膜ラベル ７７ つまみ ７９ ラベル ９０ オリフィス ９２ 液体不透過性フィルム
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (71)出願人 595117091 １ ＢＥＣＴＯＮ ＤＲＩＶＥ， ＦＲＡ ＮＫＬＩＮ ＬＡＫＥＳ， ＮＥＷ ＪＥ ＲＳＥＹ 07417−1880， ＵＮＩＴＥＤ ＳＴＡＴＥＳ ＯＦ ＡＭＥＲＩＣＡ (72)発明者 ティモシィー エイ．スティーヴンス アメリカ合衆国 10990 ニューヨーク州 ウォーウィック ビッグ アイランド ロード 63 (72)発明者 スーザン エル．バーカー アメリカ合衆国 07670 ニュージャージ ー州 テナフライ ハイウッド アヴェニ ュ 152
Claims (10)
- 【請求項１】 組織培養培地を受け入れるための開口部
を有する複数のウェルおよび前記プレートの外縁を形成
する直立した側壁を備える試験プレート、 前記プレート上に置かれる取り外しできる蓋であって、
前記ウェルをおおって広がる、上面および下面を有す
る、本質的に平らなカバーと、前記カバーを包囲し、複
数の角部を形成し、かつ下向きに延びて、内面および外
面を有する側壁を形成するスカートを備える蓋、 前記平らなカバーに設けられたオリフィス、およびガス
透過性膜を前記オリフィスに連結したガス透過性膜を備
えることを特徴とするアセンブリ。 - 【請求項２】 前記オリフィスおよび前記ガス透過性膜
をおおって前記アセンブリを出入りするガスの拡散を補
助できるように前記カバーに完全にまたは部分的に取り
外しできるように取り付けられたガス不透過性フィルム
をさらに備えることを特徴とする請求項１に記載のアセ
ンブリ。 - 【請求項３】 さらに前記試験プレートは前記プレート
の前記側壁から内方に離隔しかつ前記側壁と前記ウェル
の間で前記プレートの周りに延びている棚を備えてお
り、前記側壁は棚の上方位置まで延び、それによって前
記棚の周辺にリムを形成していることを特徴とする請求
項１に記載のアセンブリ。 - 【請求項４】 上面と下面を備えている本質的に平らな
カバー、 前記カバー上に複数の角部を形成し、かつ下向きに延び
て、側壁を形成する前記カバーの周囲のスカート、 ガス透過性膜を備えた前記カバーに設けたオリフィス、
および前記オリフィスと前記ガス透過性膜をおおった前
記カバーに完全にまたは部分的に取り外しできるように
取り付けたガス不透過性フィルムを備えていることを特
徴とする組織培養プレートと関連して用いる蓋。 - 【請求項５】 さらに前記スカートから内方に離隔しか
つ前記カバーの前記下面から下向きに延びたフランジを
備えることを特徴とする請求項４に記載の蓋。 - 【請求項６】 本体と取り外しできる蓋を備えた装置で
あって、 前記本体は上面、下面、本質的に前記上面および下面の
間に配置された複数のウェル、ならびに前記本体の外縁
を形成する直立した側壁を備え、 前記取り外しできる蓋は上壁および前記上壁から延びた
周囲のスカートを備え、前記装置を出入するガスの拡散
を許容する手段を備えることを特徴とするインビトロに
おける細胞成長または組織培養のための装置。 - 【請求項７】 装置を出入りするガスの拡散を許容する
前記手段が、オリフィスおよび前記オリフィスと連結し
たガス透過性膜であることを特徴とする請求項６に記載
の装置。 - 【請求項８】 前記オリフィスをおおって、ガスの拡散
を補助することができるように前記カバーに対して部分
的にまたは完全に取り外しできるように取り付けられた
ガス不透過性フィルムをさらに備えることを特徴とする
請求項６に記載の装置。 - 【請求項９】 前記本体の前記側壁は上の区分および下
の区分を備えた２段階の区分を含み、さらに環状肩部を
備え、前記下の区分は前記環状肩部により前記上の区分
から段状になっていることを特徴とする請求項６に記載
の装置。 - 【請求項１０】 下記工程を備えることを特徴とする細
胞培養方法： （ａ）組織培養培地を受け入れるための開口部を有する
複数のウェルおよび当該プレートの外縁を形成する直立
した側壁を備える試験プレート、 前記プレート上に取り外しできるように置かれ、前記ウ
ェルをおおって広がる本質的に平らなカバーを備える
蓋、 前記カバーの複数の角部を形成し、かつ前記プレートに
関連して離隔して下向きに延びるスカート、 平らなカバーにおける複数のオリフィス、および前記オ
リフィスに連結し前記膜をカバーするガス透過性膜を備
える培養容器を用意し、 （ｂ）前記培養容器から前記蓋を取り外し、 （ｃ）前記培養容器の前記ウェル内に、膜を備える細胞
挿入部を置き、 （ｄ）前記培養容器内の前記細胞挿入部のそれぞれの膜
の上に細胞の層を沈着し、 （ｅ）細胞の層を成長培地で覆い、 （ｆ）前記ウェルをカバーするために前記プレートの上
に前記蓋を置き、 （ｇ）前記オリフィスをおおった前記ラベルを完全にま
たは部分的に取り外し、再び取り付けることで、前記培
養容器の前記蓋におけるオリフィスを通って空気が押し
入って到達することができるようにすることにより、細
胞挿入部の膜を換気する。
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