WO2022217732A1 - 一种用于检测尘螨组分特异性抗体的试剂盒 - Google Patents

一种用于检测尘螨组分特异性抗体的试剂盒 Download PDF

Info

Publication number
WO2022217732A1
WO2022217732A1 PCT/CN2021/099383 CN2021099383W WO2022217732A1 WO 2022217732 A1 WO2022217732 A1 WO 2022217732A1 CN 2021099383 W CN2021099383 W CN 2021099383W WO 2022217732 A1 WO2022217732 A1 WO 2022217732A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
dust mite
biotin
der
dust
solution
Prior art date
Application number
PCT/CN2021/099383
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
吴善东
沈华浩
刘奕
吴周杰
许素玲
雷薇
王溢飞
许普阳
周贤东
蔡伟跃
朱明芝
杨旭凯
Original Assignee
杭州浙大迪迅生物基因工程有限公司
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 杭州浙大迪迅生物基因工程有限公司 filed Critical 杭州浙大迪迅生物基因工程有限公司
Priority to US18/027,624 priority Critical patent/US20230258655A1/en
Publication of WO2022217732A1 publication Critical patent/WO2022217732A1/zh

Links

Images

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
    • G01N33/54306—Solid-phase reaction mechanisms
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
    • G01N33/544—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being organic
    • G01N33/545—Synthetic resin
    • G01N33/547—Synthetic resin with antigen or antibody attached to the carrier via a bridging agent
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6854—Immunoglobulins
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6893—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to diseases not provided for elsewhere
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/43504—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans from invertebrates
    • G01N2333/43552—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans from invertebrates from insects
    • G01N2333/43582—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans from invertebrates from insects from mites
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/24—Immunology or allergic disorders

Definitions

  • FIG. 2 is a graph showing the comparison result between the kit of the present invention and foreign reagents.
  • biotin (Sigma-Aldrich, Cat. No. B4501) was coated on nitrocellulose membrane strips using a high-precision automatic spotter, dried at 37°C, and then coated with polystreptavidin (Yisheng Biotechnology (Shanghai) Co., Ltd. ), Item No. 35101ES03), dried at 37°C, and then coated with biotin-labeled 14 dust mite protein components Der f 1, Der f 2, Der p 1, Der p 2, Der p 5, Der p 7, Der p 10, Der p 11, Der p 20, Der p 21, Der p 23, Blot 5, Blot 10, Blot 21, and 3 types of dust mite allergens, house dust mite, dust mite, and tropical claw mite. It was made to generate an enlarged structure of biotin-polystreptavidin-biotin-antigen. The concentration of dust mite antigen coating was 1-1000 ⁇ g/mL.
  • the colorimetric card is made in the same proportion according to the spotting position, and the preliminary position and color rendering can be compared.
  • the detection plate was prepared by removing the amplified structure of "biotin-polystreptavidin-biotin-antigen": 14 kinds of dust mite protein components and 3 kinds of dust mite antigens were directly coated using an automatic spotter On nitrocellulose membrane strips, other working solutions were prepared in the same way.
  • the detection plate prepared by this method detects the serum of patients with dust mite allergy together with the present invention, and the results are shown in Table 4:

Abstract

提供了一种用于检测尘螨组分特异性抗体的试剂盒，属于抗体检测试剂盒技术领域。所述试剂盒包括：包被有生物素-多聚链霉亲和素-生物素-尘螨抗原的硝酸纤维素膜、洗涤液、碱性磷酸酶标记的尘螨组分特异性抗体的二抗溶液和底物溶液。所述试剂盒可配合全自动仪器使用。

Description

一种用于检测尘螨组分特异性抗体的试剂盒
本申请要求于2021年04月16日提交中国专利局、申请号为202110409090.X、发明名称为“一种用于检测尘螨组分特异性抗体的试剂盒”的中国专利申请的优先权，其全部内容通过引用结合在本申请中。
技术领域
本发明涉及过敏源检测试剂盒技术领域，具体涉及一种用于检测尘螨组分特异性抗体的试剂盒。
背景技术
螨类(mites)是一种普遍存在的生物，由于它们体积很小，如果不用显微镜就看不到它们；实际上，在各种自然条件或人类的生活环境中都可出现它的踪迹。目前，在变态反应学中，最值得注意的螨是在人类居住环境中能诱导人体过敏反应的螨。随着人们居住环境的现代化，与螨类有关的过敏性疾病发病率迅速增加。这些螨主要是尘螨(house dustmites)和仓储螨(storage mites)。而尘螨主要包括粉尘螨、屋尘螨、埋内宇尘螨和粗脚粉螨。仓储螨中主要为热带无爪螨。全世界范围内，居室内最常见的螨类是粉尘螨和屋尘螨。尘螨过敏是最常见的过敏性疾病之一，尘螨过敏可表现为过敏性鼻炎、过敏性哮喘、特应性皮炎、过敏性结膜炎及胃肠道功能障碍等。
IgE抗体介导的I型超敏反应性疾病(即过敏性疾病)相当普遍。过敏性疾病是患者吸入或摄食入含有致敏成分的物质(称为过敏原或变应原，Allergen)后触发机体的B细胞产生免疫球蛋白E(Immunoglobulin E，IgE)，IgE以其Fc段与肥大细胞或嗜碱性粒细胞的表面相应的FcεRI结合，使机体处于对该过敏原的致敏状态。当相同过敏原再次进入致敏机体时，可与肥大细胞或嗜碱性粒细胞表面的IgE发生特异性结合，当过敏原与致敏细胞表面的两个或两个以上相邻的IgE结合时，发生FcεRI交联，使肥大细胞和嗜碱性粒细胞活化，导致细胞脱颗粒并释放储存在细胞浆颗粒里的炎性介质-组胺，并通过花生四烯酸途径合成新介质-白三烯、免疫反应性前列腺素和IL4、IL5等细胞因子及趋化因子，从而引发过敏反应 (或称变态反应，Allergy)的疾病症状，IgE抗体在过敏性疾病的发生过程中起关键作用。过敏性疾病的特征是患者体内循环血液中的过敏原特异性IgE(sIgE)抗体浓度较正常状况下高，sIgE抗体浓度越高，患过敏性疾病的概率越大。
近年来，变应原特异性免疫治疗(specific immunotherapy，SIT)被广泛用于治疗尘螨致敏的过敏性鼻炎、哮喘等过敏性疾病。SIT是唯一可以影响过敏性疾病自然进程的病因治疗方法(Jean,Bousquet,and,et al.Allergen immunotherapy:Therapeutic vaccines for allergic diseases A WHO position paper[J].Journal of Allergy&Clinical Immunology,1998)。SIT是指在确定患者发生过敏反应的过敏原后，使用高纯度的标准化变应原疫苗，从低浓度小剂量开始逐渐递增，增强患者对抗原的耐受力，使再次接触变应原时不再产生过敏反应或得以减轻的一种治疗方法。
IgG4是免疫球蛋白G(Immunoglobulin G,IgG)的一种亚型，sIgG/sIgG4在SIT作用过程中发挥“阻滞抗体”的作用。sIgG/sIgG4能阻碍IgE的合成，降低IgE的数量，还可与IgE竞争肥大细胞、嗜碱性粒细胞等表面的Fc受体，阻止IgE介导的肥大细胞脱颗粒反应的发生，减少组胺、白三烯等炎症介质的释放，使哮喘患儿的气道炎症得到改善，提高肺功能，降低气道的高反应性，改善哮喘的症状。经过一段时间的SIT治疗后，即使停止治疗仍对机体有长期的疗效。体外实验还表明这部分抗体能通过抑制致敏原IgE复合物与抗原递呈细胞的结合而降低致敏原特异性T细胞反应，成功的SIT通常伴随血清sIgG/sIgG4抗体的显著上升。有研究表明，不同人群对屋尘螨变应原组分变应原存在差异性，使用不同变应原组分进行特异性免疫治疗SIT时，其临床效果也不同(M Guimares Junqueir de Queirós,Silva D A O,Alves R,et al.Mite-specific immunotherapy using allergen and/or bacterial extracts in atopic patients in Brazil[J].J Investig Allergol Clin Immunol,2007,18(2):84-92.)。
过敏原组分诊断使用单体过敏原来鉴定引起过敏的特定分子，可以提高过敏诊断和脱敏治疗的准确性。在过敏原的鉴定、分子诊断方面我国目前的研究和产业化水平与欧美发达国家相比有一定差距，表现在深度和广 度上。迄今为止我国可工业化应用的过敏原组分非常少，用于组分诊断的试剂盒更是空白。目前，过敏原组分诊断产品在全球范围内数量很少、项目不全，且并未在国内批准上市，例如，赛默飞世尔(Thermo Fisher)公司的尘螨组分检测的ImmunoCAP仅有4种尘螨组分的产品：Der p 1、Der p 2、Der p 10、Der p 23，对于其他尘螨组分的特异性抗体无法检测出来；且其检测方式通量低，一个CAP只能检测一种组分。这些均不利于开展个体化尘螨组分SIT。
因此，检测多种尘螨组分特异性抗体sIgE能够确定过敏患者具体过敏的组分，有利于更精准的判断尘螨过敏；检测多种尘螨组分特异性抗体sIgG/sIgG4，有利于为患者实施精准的免疫治疗提供依据，并对后续的尘螨脱敏治疗起到指示性作用。但目前并没有一种高效的检测过敏原组分和尘螨组分特异性抗体的试剂盒。
发明内容
本发明的目的在于提供一种用于检测尘螨组分特异性抗体的试剂盒。本发明所述试剂盒性能可靠，灵敏度高，线性范围宽，可配合全自动仪器使用，能提高检测灵敏度及可靠性，并降低成本；本申请所述试剂盒能够高效、高通量地检测尘螨过敏原组分及多种尘螨组分特异性抗体，包括IgE、sIgG和sIgG4。
本发明提供了一种用于检测尘螨组分特异性抗体的试剂盒，所述试剂盒包括：包被有生物素-多聚链霉亲和素-生物素-尘螨抗原的硝酸纤维素膜、洗涤液、碱性磷酸酶标记的尘螨组分特异性抗体的二抗溶液和底物溶液；
所述生物素-多聚链霉亲和素-生物素-尘螨抗原的硝酸纤维素膜的结构为：硝酸纤维素膜上依次包被固化生物素，多聚链霉亲和素，和生物素标记的尘螨抗原；所述尘螨抗原包括：尘螨蛋白Der f 1、尘螨蛋白Der f 2、尘螨蛋白Der p 1、尘螨蛋白Der p 2、尘螨蛋白Der p 5、尘螨蛋白Der p 7、尘螨蛋白Der p 10、尘螨蛋白Der p 11、尘螨蛋白Der p 20、尘螨蛋白Der p 21、尘螨蛋白Der p 23、尘螨蛋白Blo t 5、尘螨蛋白Blo t 10、尘螨蛋白Blo t 21、屋尘螨、粉尘螨和热带无爪螨，每种尘螨抗原分别包被在硝酸 纤维素膜的不同位置上；
所述尘螨组分特异性抗体包括sIgE和sIgG，sIgG包括sIgG4。
优选的是，所述生物素-多聚链霉亲和素-生物素-尘螨抗原的硝酸纤维素膜的制备方法包括以下步骤：将生物素包被到硝酸纤维素膜上，干燥，再在生物素上偶联多聚链霉亲和素，干燥，再在多聚链霉亲和素上偶联生物素标记的尘螨抗原。
优选的是，所述洗涤液为含吐温-20的Tris-HCl缓冲液。
优选的是，所述洗涤液中吐温-20的质量百分含量为0.0004％～0.02％，所述洗涤液的pH值为7.2～7.6。
优选的是，所述碱性磷酸酶标记的尘螨组分特异性抗体的二抗溶液的制备方法包括：
将碱性磷酸酶与尘螨组分特异性抗体的二抗混合，得到碱性磷酸酶标记的尘螨组分特异性抗体的二抗溶液。
优选的是，所述尘螨组分特异性抗体的二抗溶液的质量浓度为0.1～10μg/mL。
优选的是，所述底物溶液为BCIP/NBT底物溶液。
本发明还提供了基于上述技术方案所述试剂盒的高通量检测尘螨抗原及单组分sIgE或sIgG的方法，sIgG包括IgG4，包括以下步骤：
将检测板用工作洗涤液润湿；加入待测血清，孵育；洗涤后加入碱性磷酸酶标记的尘螨组分特异性抗体的二抗溶液，孵育；洗涤后加入底物溶液，孵育，终止反应，干燥，使用扫描仪进行检测。
本发明提供了一种用于检测尘螨组分特异性抗体的试剂盒。本发明利用多种标准化的尘螨主要过敏原组分，并利用这些组分蛋白研制适合我国国情的尘螨组分特异性抗体IgE和IgG(包括IgG4)的检测试剂盒，所述试剂盒能够定量检测人血清中尘螨组分特异性抗体(sIgE和sIgG(包括sIgG4))的水平，且临床上能够用于I型超敏反应性疾病的体外辅助诊断和能够起到尘螨脱敏治疗的指示作用。本发明运用高通量蛋白芯片技术，将硝酸纤维素膜上包被尘螨过敏原蛋白：Der f 1、Der f 2、Der p 1、Der p 2、Der p 5、Der p 7、Der p 10、Der p 11、Der p 20、Der p 21、Der p  23、Blo t 5、Blo t 10、Blo t 21，以及3种尘螨过敏原：屋尘螨、粉尘螨、热带无爪螨，能够一次性检测14种尘螨过敏原单组分，共17个项目。
本发明所述试剂盒采用生物素-多聚链霉亲和素-生物素-抗原的放大结构，使抗原与抗体充分反应，能够提高检测灵敏度。本发明使用纯化的天然或重组尘螨过敏原单组分来鉴定引起过敏的特定分子，可以提高过敏诊断和预后的准确性；可以检测出患者具体过敏的组分，有利于更精准的判断尘螨过敏，为患者实施精准的免疫治疗提供依据；可以定量检测脱敏治疗期间人血清中尘螨组分特异性IgG(sIgG)和特异性IgG4(sIgG4)抗体的水平，临床上可用于体外辅助诊断机体对尘螨抗原暴露的免疫响应，检测出患者具体产生免疫响应的组分，有利于为患者实施精准的免疫治疗提供依据，对尘螨脱敏的后续治疗起到指示性作用。本发明所述试剂盒后续配合使用扫描分析软件，能够精准识别蛋白位点，有效分析出sIgE和sIgG(包括sIgG4)的浓度值，提高准确性。
说明书附图
图1为本发明提供的sIgG4抗体含量检测结果图；
图2为本发明试剂盒与国外试剂对比结果图。
具体实施方式
本发明提供了一种用于检测尘螨组分特异性抗体的试剂盒，所述试剂盒包括：包被有生物素-多聚链霉亲和素-生物素-尘螨抗原的硝酸纤维素膜、洗涤液、碱性磷酸酶标记的尘螨组分特异性抗体的二抗溶液和底物溶液；
所述生物素-多聚链霉亲和素-生物素-尘螨抗原的硝酸纤维素膜的结构为：硝酸纤维素膜上依次包被生物素，多聚链霉亲和素，和生物素标记的尘螨抗原；所述尘螨抗原包括：尘螨蛋白Der f 1、尘螨蛋白Der f 2、尘螨蛋白Der p 1、尘螨蛋白Der p 2、尘螨蛋白Der p 5、尘螨蛋白Der p 7、尘螨蛋白Der p 10、尘螨蛋白Der p 11、尘螨蛋白Der p 20、尘螨蛋白Der p 21、尘螨蛋白Der p 23、尘螨蛋白Blo t 5、尘螨蛋白Blo t 10、尘螨蛋白Blo t 21、屋尘螨、粉尘螨、热带无爪螨，每种尘螨抗原分别包被在硝酸纤维素膜的不同位置上；
所述尘螨组分特异性抗体包括sIgE和sIgG，sIgG包括sIgG4。
本发明对尘螨抗原的来源没有特殊限定，参考常规技术手段进行常规合成即可，如通过基因工程表达并纯化或天然纯化获得尘螨抗原。以Der p 23为例，本发明以屋尘螨Total RNA为模板，依据GenBank公布的序列设计并合成引物，RT-PCR扩增Der p 23编码基因，构建原核表达质粒，转化大肠杆菌，IPTG诱导表达，柱层析纯化收集目的蛋白并采用SDS-PAGE，Western blot鉴定[周鹰、吴美丽、朱晗婷、崔玉宝.过敏原Der p 23重组蛋白制备及其特异性IgE化学发光检测方法的建立[J].中国免疫学杂志,2020,v.36(20):65-68.]。
本发明对所述生物素标记的方法没有特殊限定，按照生物素产品说明书制备生物素标记尘螨抗原即可。本发明所述生物素优选购自Sigma-Aldrich，货号B4501。在本发明中，所述多聚链霉亲和素优选购自翌圣生物科技(上海)，货号35101ES03。
本发明所述生物素-多聚链霉亲和素-生物素-尘螨抗原的硝酸纤维素膜优选为生物素-多聚链霉亲和素-生物素-尘螨抗原的硝酸纤维素膜条，后文简称检测板。在本发明中，所述生物素-多聚链霉亲和素-生物素-尘螨抗原的硝酸纤维素膜的制备方法优选包括以下步骤：将生物素包被到硝酸纤维素膜上，干燥，再在生物素上偶联多聚链霉亲和素，干燥，再在多聚链霉亲和素上偶联生物素标记的尘螨抗原。本发明优选使用高精度自动点样仪将生物素包被到硝酸纤维素膜上。在本发明中，所述干燥的温度优选均为37℃。本发明包被生物素标记的尘螨抗原后，得到生物素-多聚链霉亲和素-生物素-抗原的放大结构。在本发明中，每种尘螨抗原包被浓度优选为1～1000μg/mL，更优选为20～400μg/mL，上述包被浓度为经过实验得到的最适合的浓度，能够保证结果的准确。
在本发明中，所述洗涤液优选为含吐温-20的Tris-HCl缓冲液，能减少非特异性吸附。在本发明中，所述洗涤液(指浓缩洗涤液)中吐温-20的质量百分含量优选为0.0004％～0.02％，更优选为0.002～0.01％，保证结果的准确性；所述洗涤液的pH值优选为7.2～7.6，更优选为7.4。本发明所述洗涤液为浓缩液，浓缩的倍数为25倍。本发明优选使用pH值为7.4 的Tris-HCl缓冲液，加入0.0004％～0.02％的吐温-20，制备得到洗涤液，即浓缩的洗涤液。本发明所述浓缩的洗涤液在使用前优选用蒸馏水或去离子水按照体积比为1：25稀释即可。
在本发明中，所述碱性磷酸酶标记的尘螨组分特异性抗体的二抗溶液的制备方法优选包括：
将碱性磷酸酶与尘螨组分特异性抗体的二抗混合，得到碱性磷酸酶标记的尘螨组分特异性抗体的二抗溶液。在本发明中，所述尘螨组分特异性抗体的二抗包括抗人IgE抗体和抗人IgG抗体(包括抗人IgG4抗体)。在本发明中，所述抗人IgE抗体优选购自美国Abcam，货号ab195580。在本发明中，所述抗人IgG抗体优选购自美国Abcam，货号ab109489。在本发明中，所述抗人IgG4抗体优选购自美国Abcam，货号ab238320。在本发明中，所述尘螨组分特异性抗体的二抗溶液的质量浓度优选分别为0.1～10μg/mL，更优选为0.1～5μg/mL，保证试验结果的准确。本发明所述抗人IgE抗体优选为兔抗人IgE抗体，即在宿主兔体内产生的能够与人IgE特异性结合的抗体。本发明所述抗人IgG抗体优选为兔抗人IgG抗体，即在宿主兔体内产生的能够与人IgG特异性结合的抗体。本发明所述抗人IgG4抗体优选为兔抗人IgG4抗体，即在宿主兔体内产生的能够与人IgG4特异性结合的抗体。
在本发明中，所述底物溶液优选为BCIP/NBT底物溶液，即所述底物溶液为硝基四氮唑兰和5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸的混合溶液(NBT/BCIP,Nitroblue Tetrazolium/5-Bromo-4-chloro-3-Indolyl Phosphate)。本发明对所述底物溶液的来源没有特殊限定，采用本领域技术人员熟知的常规市售产品即可。
本发明所述试剂盒能够一次性定量检测人血清中14种尘螨组分特异性IgE抗体的水平，临床上用于I型超敏反应性疾病的体外辅助诊断，也能够定量检测人血清中14种尘螨组分特异性IgG(包括IgG4)抗体的水平，在临床上起到尘螨脱敏治疗的指示作用，还可以检测出患者具体过敏的组分，为患者实施精准的免疫治疗提供依据。本发明所述试剂盒性能可靠，灵敏度高，线性范围宽，可配合全自动仪器(杭州浙大迪迅生物基因 工程有限公司，全自动免疫印迹仪，型号：DX-Blot45，DX-Blot45Ⅱ，DX-AutoBlot 50)使用，能提高检测灵敏度及可靠性，并降低成本。具体的，国内目前暂无多种尘螨组分检测试剂，检测尘螨组分只能依靠进口试剂，进口试剂价格昂贵，本发明相比于国外产品价格低很多；与进口试剂，如赛默飞世尔的产品相比，本发明方法不同，在硝酸纤维素膜上包被抗原蛋白用量远少于赛默飞世尔的产品，用量约是其1/1000；最后，检测时赛默飞世尔的产品一个项目需要用到一个CAP，每个CAP需要40μL待测血清，而本发明仅需300μL的待测血清就可以一次性检测17个项目，平均每个项目需要17.6μL血清。
本发明将生物素、多聚链霉亲和素、生物素偶联尘螨抗原包被到硝酸纤维素膜上，当含有尘螨sIgE或sIgG(包括IgG4)抗体的血清加入到检测板内，sIgE或sIgG(包括IgG4)抗体与膜上固定的抗原相结合，从而形成生物素-多聚链霉亲和素-生物素-抗原-sIgE或sIgG(包括IgG4)抗体的免疫复合物固定在膜上，其余没有结合上去的物质则通过洗涤的步骤而被除去。然后加入碱性磷酸酶-抗人sIgE或sIgG(包括IgG4)抗体复合物到检测板内，形成生物素-多聚链霉亲和素-生物素-抗原-sIgE抗体-抗人IgE抗体-碱性磷酸酶免疫复合物或生物素-多聚链霉亲和素-生物素-抗原-sIgG抗体-抗人IgG抗体-碱性磷酸酶免疫复合物(包括生物素-多聚链霉亲和素-生物素-抗原-sIgG4抗体-抗人IgG4抗体-碱性磷酸酶免疫复合物)，通过洗涤除去未结合的物质后加入底物溶液与酶发生显色反应，线条/点的颜色强度代表了血清中所含sIgE或sIgG(包括IgG4)抗体浓度。
利用本发明所述试剂盒高通量检测尘螨抗原及单组分sIgE或sIgG(包括IgG4)的方法优选包括以下步骤：
将检测板用工作洗涤液润湿；加入待测血清，孵育；洗涤后加入碱性磷酸酶标记的尘螨组分特异性抗体的二抗溶液，孵育；洗涤后加入底物溶液，孵育，终止反应，干燥，使用扫描仪进行检测。
本发明用工作洗涤液润湿。本发明优选取出检测板，加入工作洗涤液100～500μL，置于混匀器上充分润湿后，倒出。本发明所述工作洗涤液，优选为前文所述浓缩洗涤液稀释后得到的工作洗涤液。
润湿后，本发明加入待测血清，孵育。本发明优选将100～500μL血清加入检测板内，置于混匀器上室温孵育，孵育的时间优选为30～60min。
加入血清，孵育后，本发明洗涤后加入碱性磷酸酶标记的尘螨组分特异性抗体的二抗溶液，孵育。本发明优选倒出检测板内的液体，用工作洗涤液冲洗检测板3～5次，每次10～30s。本发明优选将100～500μL的二抗工作液加入检测板内，置于混匀器上室温孵育30～60min。
结合二抗后，本发明洗涤后加入底物溶液，孵育，终止反应，干燥，使用扫描仪进行检测。本发明优选倒出检测板内的液体，用工作洗涤液冲洗检测板3～5次，每次10～30s。本发明优选将100～500μL的底物溶液加入检测板内，置于混匀器上室温孵育10～30min。流水冲洗检测板，终止酶反应。将检测板干燥后，用扫描仪扫描膜条，用分析软件进行判读。本发明所述扫描分析软件优选为一款根据蛋白位点的显色度，可以分析计算出对应的sIgE或sIgG(包括IgG4)浓度值的应用软件(杭州浙大迪迅生物基因工程有限公司，过敏原半定量分析软件)。所述蛋白位点是指膜条上包被尘螨抗原的位点。所述浓度值是指血清中sIgE或sIgG(包括IgG4)的含量水平，国际单位为IU/mL或U/mL。
下面结合具体实施例对本发明所述的一种用于检测尘螨组分特异性抗体的试剂盒做进一步详细的介绍，本发明的技术方案包括但不限于以下实施例。
实施例1
基于抗人IgE抗体检测尘螨组分的试剂盒，包括以下试剂：
检测板：包被有生物素-多聚链霉亲和素-生物素-尘螨抗原的硝酸纤维素膜条；
浓缩洗涤液(25×)：浓缩的Tris缓冲液；
IgE二抗工作液：碱性磷酸酶标记的抗人IgE抗体溶液；
底物溶液：BCIP/NBT。
检测板的制备：
首先使用高精度自动点样仪将生物素(Sigma-Aldrich，货号B4501)包被到硝酸纤维素膜条上，37℃干燥，再包被多聚链霉亲和素(翌圣生物 科技(上海)，货号35101ES03)，37℃干燥，之后再包被生物素标记的14种尘螨蛋白组分Der f 1、Der f 2、Der p 1、Der p 2、Der p 5、Der p 7、Der p 10、Der p 11、Der p 20、Der p 21、Der p 23、Blo t 5、Blo t 10、Blo t 21，以及3种尘螨过敏原屋尘螨、粉尘螨、热带无爪螨。使其生成生物素-多聚链霉亲和素-生物素-抗原的放大结构。尘螨抗原包被浓度为1～1000μg/mL。
洗涤液的制备：
使用pH值为7.4的Tris-HCl缓冲液，加入0.008％的表面活性剂(吐温-20)，得到浓缩洗涤液。所述浓缩洗涤液使用前需用蒸馏水或去离子水按1:25稀释成工作洗涤液。
IgE二抗工作液的制备：
将碱性磷酸酶与抗人IgE抗体(美国Abcam，货号RM122)混合，得到碱性磷酸酶标记的抗人IgE抗体溶液，所述溶液浓度为4μg/mL。所述抗人IgE抗体为兔抗人IgE抗体。
底物溶液的配制：
底物溶液为硝基四氮唑兰和5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸的混合溶液(NBT/BCIP,Nitroblue Tetrazolium/5-Bromo-4-chloro-3-Indolyl Phosphate)。
实施例2
尘螨组分特异性抗体IgE检测试剂盒(蛋白芯片法)，包括如下组成：
(1)检测板：包被有生物素-多聚链霉亲和素-生物素-尘螨抗原的硝酸纤维素膜条，20人份。
(2)IgE二抗工作液：碱性磷酸酶标记的抗人IgE抗体溶液(碱性磷酸酶标记方法为常规标记方法)，规格8mL。
(3)底物溶液：BCIP/NBT，规格8mL。
(4)浓缩洗涤液(25×)：浓缩的Tris缓冲液，规格20mL。
(5)说明书：试剂盒基本信息、检测原理及操作流程。
(6)比色卡：比对蛋白位点。
所述比色卡是依据点样位置同比例制作，可进行初步的位置和显色度 比对。
实施例3
采集尘螨过敏患者的血清，使用本发明所述试剂盒进行以下检测步骤：
1.取出检测板，加入工作洗涤液300μL，置于混匀器上充分润湿后，倒出。
2.将300μL血清加入检测板内，置于混匀器上室温孵育30min。
3.倒出检测板内的液体，用工作洗涤液冲洗检测板5次，每次15s。
4.将300μL的IgE二抗工作液加入检测板内，置于混匀器上室温孵育30min。
5.倒出检测板内的液体，用工作洗涤液冲洗检测板5次，每次15s。
6.将300μL的底物溶液加入检测板内，置于混匀器上室温孵育15min。
7.流水冲洗检测板，终止酶反应。
8.将检测板干燥后，用扫描分析软件进行判读。
得出结果，如表1所示，尘螨过敏患者1其屋尘螨、粉尘螨和热带无爪螨sIgE均呈阳性，而尘螨蛋白组分Der f 1、Der f 2、Der p 1、Der p 2、Der p 10、Der p 21、Blo t 5呈阳性，其余尘螨蛋白组分呈阴性，因此，可以检测出患者具体过敏的组分，为患者实施精准的免疫治疗提供依据。尘螨过敏患者2屋尘螨检测成阳性，粉尘螨检测呈阴性，热带无爪螨检测呈阴性，但其尘螨蛋白组分仅有Der p 1、Der p 2呈阳性，因此在对其进行后期脱敏治疗时可采用仅含Der p 1、Der p 2组分的脱敏制剂针对性治疗。尘螨过敏患者3屋尘螨和粉尘螨sIgE均呈阳性，热带无爪螨检测呈阴性，但其尘螨组分Der p 2为弱阳性，尘螨组分Der p 10达到强阳性。由于Der p 10为纯化的单组分蛋白，所以其阳性级别高于屋尘螨、粉尘螨粗提物的阳性值，因此也说明了此患者尘螨过敏主要是由于尘螨蛋白组分Der p 10引起的。
表1尘螨过敏患者血清sIgE检测结果
Figure PCTCN2021099383-appb-000001
Figure PCTCN2021099383-appb-000002
上述检测结果参照国际上特异性IgE抗体浓度和定级标准的关系进行分级，检测结果≥0.35IU/mL表示过敏原sIgE抗体与过敏原结合，检测结果＜0.35IU/mL表示过敏原sIgE浓度不可检出或者非常低。
国际上特异性IgE抗体浓度和定级标准的关系如表2：
表2特异性IgE抗体浓度和定级标准的关系
国际特异性IgE浓度(IU/mL) 国际定级标准
<0.35 0(阴性)
0.35-0.70 1(弱阳性)
0.71-3.50 2(阳性)
3.51-17.50 3(较强阳性)
17.51-50.0 4(强阳性)
50.01-100.0 5(特强阳性)
>100.0 6(极强阳性)
实施例4
采集尘螨SIT治疗的过敏性哮喘伴鼻炎患者的血清，使用本发明所述试剂盒进行以下检测步骤：
1.取出检测板，加入工作洗涤液300μL，置于混匀器上充分润湿后，倒出。
2.将300μL血清加入检测板内，置于混匀器上室温孵育30min。
3.倒出检测板内的液体，用工作洗涤液冲洗检测板5次，每次15s。
4.将300μL的IgG4二抗工作液加入检测板内，置于混匀器上室温孵育30min。
5.倒出检测板内的液体，用工作洗涤液冲洗检测板5次，每次15s。
6.将300μL的底物溶液加入检测板内，置于混匀器上室温孵育15min。
7.流水冲洗检测板，终止酶反应。
8.将检测板干燥后，用扫描仪扫描膜条，分析软件进行判读。
结果如图1(图1为sIgG4抗体含量检测结果图)所示，进入维持阶段的Der p 1、Der p 2、Der f 1、Der f 2、Der p 5、Der p 10和Der p 23的sIgG4抗体含量均高于免疫治疗前。表明在免疫治疗期间，尘螨sIgG4水平在持续上升，因此，IgG4是评价免疫治疗临床反应的一个有用指标。
比较例1
本发明的尘螨组分特异性抗体IgE检测试剂盒(蛋白芯片法)与进口试剂赛默飞世尔(Thermo Fisher)公司的尘螨组分ImmunoCAP一同检测100例血清，得出以下结果(表3、图2)(图2为本发明试剂盒与国外试剂对比结果图)：
表3检测对比结果
Figure PCTCN2021099383-appb-000003
阳性符合率＝40/43＝93.02％(95％CI 79.88％-98.18％)
阴性符合率＝57/60＝95.00(95％CI 85.18％-98.70％)
总符合率＝(57+40)/103＝94.17％(95％CI 87.62％-97.55％)
相关系数r＝0.9665
由此结果可以看出，与现有尘螨组分产品相比较符合率较高，100例血清分别使用国外试剂和本发明的检测结果，可以看出相关性很高；但现有产品一个CAP仅能检测一种抗原，而本发明可一次性检测14种尘螨蛋 白组分和3种尘螨过敏原。
比较例2
采用去除“生物素-多聚链霉亲和素-生物素-抗原”放大结构的方法制备检测板：将14种尘螨蛋白组分以及3种尘螨抗原，使用自动点样仪直接包被于硝酸纤维素膜条上，其他工作液的制备方式不变。此方法制备的检测板与本发明一同检测尘螨过敏患者的血清，结果如表4：
表4尘螨过敏患者血清sIgG4检测结果
Figure PCTCN2021099383-appb-000004
本发明IgG4阴阳性参考值根据临床试验的ROC曲线确定临界值为250U/mL，检测结果≥250U/mL为阳性，＜250U/mL为阴性。由表4可看出，具有放大结构的本发明检测值均有所提高，尘螨过敏患者1的尘螨蛋白组分Der p 7检测结果在没有放大结果的膜条上出现了假阴性；尘螨过敏患者2的屋尘螨、Der p 1、Der p 2检测结果在没有放大结果的膜条上出现了假阴性。因此可以看出放大结构能够使抗原与抗体充分反应，能够提高检测灵敏度，减少假阴性的结果。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的 普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (8)

  1. 一种用于检测尘螨组分特异性抗体的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：包被有生物素-多聚链霉亲和素-生物素-尘螨抗原的硝酸纤维素膜、洗涤液、碱性磷酸酶标记的尘螨组分特异性抗体的二抗溶液和底物溶液；
    所述生物素-多聚链霉亲和素-生物素-尘螨抗原的硝酸纤维素膜的结构为：硝酸纤维素膜上依次包被固化生物素，多聚链霉亲和素，和生物素标记的尘螨抗原；所述尘螨抗原包括：尘螨蛋白Der f 1、尘螨蛋白Der f 2、尘螨蛋白Der p 1、尘螨蛋白Der p 2、尘螨蛋白Der p 5、尘螨蛋白Der p 7、尘螨蛋白Der p 10、尘螨蛋白Der p 11、尘螨蛋白Der p 20、尘螨蛋白Der p 21、尘螨蛋白Der p 23、尘螨蛋白Blo t 5、尘螨蛋白Blo t 10、尘螨蛋白Blo t 21、屋尘螨、粉尘螨和热带无爪螨，每种尘螨抗原分别包被在硝酸纤维素膜的不同位置上；
    所述尘螨组分特异性抗体包括sIgE和sIgG，sIgG包括sIgG4。
  2. 根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述生物素-多聚链霉亲和素-生物素-尘螨抗原的硝酸纤维素膜的制备方法包括以下步骤：将生物素包被到硝酸纤维素膜上，干燥，再在生物素上偶联多聚链霉亲和素，干燥，再在多聚链霉亲和素上偶联生物素标记的尘螨抗原。
  3. 根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述洗涤液为含吐温-20的Tris-HCl缓冲液。
  4. 根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述洗涤液中吐温-20的质量百分含量为0.0004％～0.02％，所述洗涤液的pH值为7.2～7.6。
  5. 根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述碱性磷酸酶标记的尘螨组分特异性抗体的二抗溶液的制备方法包括：
    将碱性磷酸酶与尘螨组分特异性抗体的二抗混合，得到碱性磷酸酶标记的尘螨组分特异性抗体的二抗溶液。
  6. 根据权利要求1或5所述的试剂盒，其特征在于，所述尘螨组分特异性抗体的二抗溶液的质量浓度为0.1～10μg/mL。
  7. 根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述底物溶液 为BCIP/NBT底物溶液。
  8. 基于权利要求1～7任一项所述试剂盒的高通量检测尘螨抗原及单组分sIgE或sIgG的方法，sIgG包括IgG4，包括以下步骤：
    将检测板用工作洗涤液润湿；加入待测血清，孵育；洗涤后加入碱性磷酸酶标记的尘螨组分特异性抗体的二抗溶液，孵育；洗涤后加入底物溶液，孵育，终止反应，干燥，使用扫描仪进行检测。
PCT/CN2021/099383 2021-04-16 2021-06-10 一种用于检测尘螨组分特异性抗体的试剂盒 WO2022217732A1 (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US18/027,624 US20230258655A1 (en) 2021-04-16 2021-06-10 Kit for detecting dust mite component-specific antibodies

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110409090.XA CN113125753B (zh) 2021-04-16 2021-04-16 一种用于检测尘螨组分特异性抗体的试剂盒
CN202110409090.X 2021-04-16

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2022217732A1 true WO2022217732A1 (zh) 2022-10-20

Family

ID=76777426

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/CN2021/099383 WO2022217732A1 (zh) 2021-04-16 2021-06-10 一种用于检测尘螨组分特异性抗体的试剂盒

Country Status (5)

Country Link
US (1) US20230258655A1 (zh)
CN (1) CN113125753B (zh)
NL (1) NL2030971B1 (zh)
WO (1) WO2022217732A1 (zh)
ZA (1) ZA202200483B (zh)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113683693B (zh) * 2021-08-10 2023-06-16 阳江市人民医院 一种屋尘螨变应原特异性IgG Fab抗体片段的制备方法及应用
CN115598337A (zh) * 2022-10-24 2023-01-13 江苏三联生物工程股份有限公司（Cn） 检测屋尘螨过敏原组分的芯片、试剂盒及其制备方法

Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2002076477A1 (en) * 2001-03-27 2002-10-03 Bioalletech Co., Ltd. Skin-test reagents and serum specific ige, igg subtypes detection kits, comprising crude extracts of spider mites such as citrus red mite, two-spotted spider mite and european red mite
US20030073249A1 (en) * 2001-07-07 2003-04-17 Lee Duen Allergen detection chip
CN101509920A (zh) * 2009-03-26 2009-08-19 杭州浙大迪迅生物基因工程有限公司 尘螨过敏原快速检测试剂盒及其制备方法
US20110275095A1 (en) * 2009-01-29 2011-11-10 Siemens Healthcare Diagnostics Inc. Microarrays for Allergen-Specific IgE
CN105044326A (zh) * 2015-09-11 2015-11-11 苏州浩欧博生物医药有限公司 高灵敏多项联检过敏原特异性IgE抗体的试剂盒及方法
US20160251403A1 (en) * 2013-12-23 2016-09-01 Alk-Abello A/S Peptide combinations and uses thereof in treating dust mite allergy
CN108614120A (zh) * 2018-05-03 2018-10-02 辽宁汇普源生物医学科技开发有限责任公司 基于IgG4抗体捕获气传过敏原的ELISA试剂盒

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4478914B1 (en) * 1980-01-24 1997-06-17 Roger W Giese Process for applying multiple layers of a protein and a ligand extender to a surface and to the multiple layer system
AU8267998A (en) * 1997-06-24 1999-01-04 Trustees Of Boston University High density streptavidin supports
US8246945B2 (en) * 2000-04-06 2012-08-21 University Of Arkansas Methods and reagents for decreasing clinical reaction to allergy
CN101256186A (zh) * 2008-03-28 2008-09-03 杭州浙大生科生物技术有限公司 食物过敏原特异性IgG4抗体ELISA检测试剂盒及其制备方法
US20140010845A1 (en) * 2010-10-15 2014-01-09 Alk-Abello A/S Suppression of a hypersensitivity immune response with unrelated antigen derived from allergen source material
CN102128937B (zh) * 2010-12-31 2014-05-28 江苏华冠生物技术股份有限公司 用于脱敏治疗效果评价的过敏原特异性IgG4抗体检测试剂盒的制备方法
CN104237527B (zh) * 2014-03-18 2016-09-28 杭州浙大迪迅生物基因工程有限公司 高灵敏检测过敏原特异性抗体IgE的试剂盒及方法
CN105403692A (zh) * 2015-11-17 2016-03-16 苏州浩欧博生物医药有限公司 检测屋尘螨过敏原特异性IgE抗体的试剂盒及方法

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2002076477A1 (en) * 2001-03-27 2002-10-03 Bioalletech Co., Ltd. Skin-test reagents and serum specific ige, igg subtypes detection kits, comprising crude extracts of spider mites such as citrus red mite, two-spotted spider mite and european red mite
US20030073249A1 (en) * 2001-07-07 2003-04-17 Lee Duen Allergen detection chip
US20110275095A1 (en) * 2009-01-29 2011-11-10 Siemens Healthcare Diagnostics Inc. Microarrays for Allergen-Specific IgE
CN101509920A (zh) * 2009-03-26 2009-08-19 杭州浙大迪迅生物基因工程有限公司 尘螨过敏原快速检测试剂盒及其制备方法
US20160251403A1 (en) * 2013-12-23 2016-09-01 Alk-Abello A/S Peptide combinations and uses thereof in treating dust mite allergy
CN105044326A (zh) * 2015-09-11 2015-11-11 苏州浩欧博生物医药有限公司 高灵敏多项联检过敏原特异性IgE抗体的试剂盒及方法
CN108614120A (zh) * 2018-05-03 2018-10-02 辽宁汇普源生物医学科技开发有限责任公司 基于IgG4抗体捕获气传过敏原的ELISA试剂盒

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
WU HONGJUAN;WU XUEMEI;CHEN XIAOCONG;LI JINYAN: "A survey on life quality and asthma control in children given desensitization therapy with Alutard", CHINESE JOURNAL OF LABORATORY DIAGNOSIS, vol. 19, no. 22, 31 December 2013 (2013-12-31), pages 3845 - 3847, XP055976561, ISSN: 1007-4287, DOI: 10.11655/zgywylc2019.22.004 *

Also Published As

Publication number Publication date
ZA202200483B (en) 2022-03-30
NL2030971B1 (en) 2022-12-22
US20230258655A1 (en) 2023-08-17
CN113125753B (zh) 2022-07-26
NL2030971A (en) 2022-10-25
CN113125753A (zh) 2021-07-16

Similar Documents

Publication Publication Date Title
WO2022217732A1 (zh) 一种用于检测尘螨组分特异性抗体的试剂盒
CN110862881A (zh) 一种全自动化学发光测定仪专用的清洗液或其稀释液及其制备方法
US8183004B2 (en) Determination of short-chain SRL alcohol dehydrogenase (DHRS4) as a biomarker for inflammations and infections
EP3063543A1 (en) Competitive ligand binding assay for detecting neutralizing antibodies
JPWO2013145767A1 (ja) インフルエンザａ型ウイルスの検出キット
WO2021169664A1 (zh) 新型冠状病毒抗原及其检测用途
EP2952896A1 (en) Method for reducing false negatives in immunoassay for assaying biomembrane-derived specimen
KR102648716B1 (ko) 아프리카 돼지 열병 바이러스 감염 진단을 위한 항원 단백질 조성물 및 이의 용도
CN107860914A (zh) 一种抗线粒体抗体IgG的检测试剂盒及其检测方法
CN110531085A (zh) 一种测定人体神经丝轻链蛋白含量的磁微粒化学发光检测试剂盒及其制备方法
AU2021104366A4 (en) KIT FOR DETECTING DUST MITE COMPONENT-SPECIFIC IMMUNOGLOBULIN E (sIgE)
Wen et al. Autoantibodies highly increased in patients with thyroid dysfunction
AU2021104383A4 (en) KIT FOR DETECTING DUST MITE COMPONENT-SPECIFIC IMMUNOGLOBULIN G (sIgG)
Van Steirteghem et al. Radioimmunoassay of creatine kinase isoenzymes in human serum: isoenzyme MM.
KR20080075285A (ko) 돼지혈청으로부터 일본뇌염바이러스 항체 검출을 위한면역크로마토그래피 진단 키트
JP2007520712A (ja) 患者サンプルにおけるＣｕ／Ｚｎスーパーオキシドジスムターゼ（Ｃｕ／ＺｎＳＯＤ）の濃度の選択的測定による敗血症の診断
CN110291037A (zh) 用于确定对象中的感染水平的组合物和方法
CN108254571A (zh) 一种抗双链DNA抗体IgG的检测试剂盒及其检测方法
WO2012100599A1 (zh) 过氧化物还原酶iv在制备类风湿关节炎体外诊断试剂中的应用
JP5857385B2 (ja) Ａｐｅ１／ｒｅｆ−１を含有する膀胱癌診断用組成物、及びこれを利用した膀胱癌診断キット
JPH07509058A (ja) ｄｓＤＮＡ抗体の化学発光アッセイ法
EP0085402B1 (en) Method of determination of human urine kallikrein and kit for the same
Hashimoto et al. Prevalence of IgE antibody to crude and purified allergens of Japanese cedar pollen among different troops of Japanese monkeys (Macaca fuscata)
CN101988925B (zh) 用于检测Hum j 3特异性IgE抗体的ELISA试剂盒
Cui et al. Establishment of two novel ELISA methods for Dermatophagoides farinae-specific IgE detection with recombinant group 2 allergen

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 21936604

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

122 Ep: pct application non-entry in european phase

Ref document number: 21936604

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1