CN115598337A - 检测屋尘螨过敏原组分的芯片、试剂盒及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本申请提供了一种检测屋尘螨过敏原组分的芯片、试剂盒及其制备方法，其中，所述芯片包括基体，所述基体上具有多个相互独立的过敏原区，每个所述过敏原区内固定有32种屋尘螨过敏原组分中的一种，至少有两个所述过敏原区的过敏原组分不同。本申请的芯片能够实现定量地、同时检测多个屋尘螨过敏原组分，具有简单、快速、成本低等特点。

Description

检测屋尘螨过敏原组分的芯片、试剂盒及其制备方法
技术领域
本申请涉及生物技术领域，特别是涉及一种检测屋尘螨过敏原组分的芯片、试剂盒及其制备方法。
背景技术
尘螨分布广泛，普遍存在于人类居住环境中；是人类最常见的过敏原，也是我国最主要的致敏原之一。尘螨在过敏性疾病患者的特异性免疫诊断中阳性率约为70％。与人类过敏性疾病有关的螨类包括屋尘螨和粉尘螨，其中屋尘螨是引起过敏性哮喘的主要过敏原之一，在变态反应性疾病中占有重要的地位。
屋尘螨的变应原大部分都是生物酶，致敏性很强。屋尘螨过敏原蛋白组分的命名是以国际动物分类为依据：种属拉丁文名称的前三个字母、空一格、种类别首字母、空一格、发现顺序(阿拉伯数字)，如屋尘螨(Dermatophagoides pteronyssinus)第一组分可缩写成Der p1。目前已发现并被世界卫生组织(World Health Organization，WHO)/国际免疫联合会(International Union of Immunological Societies，IUIS)命名的屋尘螨致敏组分有32种。
目前，我国屋尘螨过敏原体外诊断常用的指标是屋尘螨提取物的sIgE(SpecificIgE，过敏原特异性IgE)。然而，屋尘螨提取物包含了多种致敏成分和非致敏成分，可引起交叉反应导致诊断不准确。使用屋尘螨提取物进行屋尘螨过敏原检测仅能明确患者是否对其过敏，并不能确定真正的致敏组分；且屋尘螨提取物因其来源和提取方式存在差异，会导致提取物含量不同，进而造成提取物成分不稳定。此外，传统的屋尘螨组分检测多为定性检测，不能实现定量检测。
发明内容
基于此，有必要提供一种定量检测屋尘螨过敏原组分的芯片、试剂盒及其制备方法。
根据本申请的一个方面，提供了一种检测屋尘螨过敏原组分的芯片，所述芯片包括基体，所述基体上具有多个相互独立的过敏原区，每个所述过敏原区内固定有如下过敏原组分中的一种：Der p 1、Der p 2、Der p 3、Der p 4、Der p 5、Der p 6、Der p 7、Der p8、Der p 9、Der p 10、Der p 11、Der p 13、Der p 14、Der p 15、Der p 18、Der p 20、Derp 21、Der p 23、Der p 24、Der p 25、Der p 26、Der p 28、Der p 29、Der p 30、Der p 31、Der p 32、Der p 33、Der p 36、Der p 37、Der p 38、Der p 39和Der p 40，至少有两个所述过敏原区的过敏原组分不同。
在其中一个实施例中，所述基体上还具有质控区，所述质控区与所述过敏原区相互独立，所述质控区内固定有质控品。
在其中一个实施例中，多个所述过敏原区呈矩阵分布；
和/或，所述质控区还包括阳性质控区和阴性质控区，所述阳性质控区、所述阴性质控区和所述过敏原区相互独立。
在其中一个实施例中，所述基体为玻璃片黑玻片、聚苯乙烯塑料片、酸纤维素膜和聚偏二氟乙烯膜中的一种。
本申请提供了一种检测屋尘螨过敏原组分的试剂盒，包括如上述的芯片。
在其中一个实施例中，试剂盒还包括反应试剂和检测试剂，所述反应试剂包括标记有标记物的第二抗体；所述检测试剂包括鲁米诺、Tris和过氧化氢中的一种或多种。
本申请提供了一种检测屋尘螨过敏原组分的芯片的制备方法，包括如下步骤：
对基体进行预处理，以使基体能够与生物大分子偶联；及
在预处理后的基体上间隔地点入不同的过敏原组分，所述过敏原组分选自Der p1、Der p 2、Der p 3、Der p 4、Der p 5、Der p 6、Der p 7、Der p 8、Der p 9、Der p 10、Der p 11、Der p 13、Der p 14、Der p 15、Der p 18、Der p 20、Der p 21、Der p 23、Der p24、Der p 25、Der p 26、Der p 28、Der p 29、Der p 30、Der p 31、Der p 32、Der p 33、Der p 36、Der p 37、Der p 38、Der p 39和Der p 40中的一种；及
对点有过敏原组分的基体进行封闭，制备检测屋尘螨过敏原组分的芯片。
在其中一个实施例中，所述封闭步骤包括如下步骤：
将点样后的黑玻片没入封闭液中1h～4h，取出黑玻片，离心去除残余封闭液，制得所述芯片。
在其中一个实施例中，所述封闭液为含有封闭蛋白的缓冲液。
在其中一个实施例中，所述封闭蛋白为牛血清白蛋白或卵清蛋白，所述缓冲液为PBS缓冲液、Tris缓冲液、HEPS缓冲液、MOPS缓冲液中的一种或多种。
与现有技术相比，本申请具有如下有益效果：
本申请的检测屋尘螨过敏原组分的芯片，只需少量患者血清，即可定量地检测屋尘螨过敏原全部组分。根据屋尘螨过敏原组分的定量检测结果，能够在临床上辅助诊断患者的过敏组分，实现对屋尘螨过敏患者的精准脱敏治疗；同时能够定期对脱敏治疗患者的治疗进程进行有效监测。
附图说明
图1为本申请的芯片示意图。
附图标记说明：
101、阳性质控区；102、过敏原区；103、阴性质控区。
具体实施方式
为使本申请的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，对本申请的具体实施方式做详细的说明。在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本申请。但是本申请能够以很多不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本申请内涵的情况下做类似改进，因此本申请不受下面公开的具体实施例的限制。
除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本申请的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本申请的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本申请。除非另有特别说明，本申请中用到的各种原材料、试剂、仪器和设备等均可通过市场购买得到或者可通过现有方法制备得到。
术语“IgE”指免疫球蛋白E，是过敏性疾病的重要标志，在过敏性疾病的炎症反应中起着重要的作用。
请参阅图1，本申请提供了一种检测屋尘螨过敏原组分的芯片，包括具有多个相互独立的过敏原区102的基体，每个独立的过敏原区102内固定有如下过敏原组分中的一种：Der p 1、Der p 2、Der p 3、Der p 4、Der p 5、Der p 6、Der p 7、Der p 8、Der p 9、Der p10、Der p 11、Der p 13、Der p 14、Der p 15、Der p 18、Der p 20、Der p 21、Der p 23、Der p 24、Der p 25、Der p 26、Der p 28、Der p 29、Der p 30、Der p 31、Der p 32、Der p33、Der p 36、Der p 37、Der p 38、Der p 39和Der p 40，至少有两个过敏原区102的过敏原组分不同。
随着DNA技术的发展和应用，过敏原分子不断被识别和克隆，提高了对过敏原特征的认识，确定了许多过敏性疾病的致病因素。其中，过敏原分子诊断，又称组分解析诊断，是在过敏原分子水平，通过纯化的天然提取物或重组过敏原分子来识别对患者致敏的单个致敏组分，避免了因过敏原提取而导致的问题。
在其中一些实施方式中，上述基体为黑玻片、聚苯乙烯塑料片、酸纤维素膜(NC膜)和聚偏二氟乙烯膜(PDVF膜)中的一种。
可以理解的是，上述基体的本体及杂质不会溶出而对反应体系产生影响；基体表面平整光滑，非特异性吸附作用较弱，容易清洗，背景低；基体表面浸润作用小，点样后液滴不会润开，集成优势大、点样所需抗原量少。
上述基体材料质地均一，无气泡，表面光滑，无划痕，无油污，无折断，侧边光滑，无毛糙缺损等。
在一些实施例中，基体为片状、或长条状。可以理解的是，在其他实施例中，基体的形状不限于上述，还可以是其他形状。
在一些实施例中，基体还具有1个可以作为基体正反面标识的单边倒角，及2个双边倒角。
在一些具体示例中，单边倒角的斜边长为0.8mm～2.0mm，双边倒角的斜边长为0.6mm～1.8mm。
在一些实施例中，基体的长度为29.95mm～30.05mm，基体的宽度为3.95mm～4.05mm，基体的厚度为0.75mm～0.85mm。
在图示的实施方式中，各个独立的过敏原区102呈矩阵分布。可以理解的是，在其他实施例中，各个独立的过敏原区102的分布不限于上述，还可以是其他分布，例如以芯片的中心为圆心的环状分布，又例如随机分布。
在其中一些实施方式中，基体上还具有与过敏原区102相互独立的质控区，质控区内固定有质控品。
在一些实施例中，如图1所示，上述质控区还包括阳性质控区101和阴性质控区103中的至少一种。
在其中一个实施例中，上述质控区还包括阳性质控区101和阴性质控区103，阳性质控区101、阴性质控区103和过敏原区102相互独立。
在图示的实施例中，阳性质控区101有4个，4个阳性质控区101排成一列；阴性质控区103有4个，4个阴性质控区103排成一列，过敏原区102有32个，32个过敏原区102排成8列。可以理解的是，在其他实施例中，阳性质控区101、阴性质控区103、过敏原区102的数量不限于上述，还可以根据实际情况进行调整，例如3个阳性质控区101，3个阴性质控区103，20个过敏原区102。
可以理解的是，阳性质控区101和阴性质控区103与过敏原区102的排布也不限于上述。
上述的芯片检测过敏原抗体的免疫学方法为间接法，在玻璃芯片基体上固定有过敏原组分(抗原)，这些抗原可以捕获被测样本中特异性的抗体，被捕获的抗体与标记有标记物的第二抗体相结合，酶催化化学发光底物，产生化学发光。其光信号通过CCD(ChargeCoupled Device，电荷耦合器件)摄像头采集，并进行智能分析。根据信号浓度定量曲线，通过光信号的强弱计算被测样本中过敏原特异性抗体的浓度，进一步判定结果为阴性或阳性。
一方面，上述芯片仅需少量患者血清，即可实现定量地、同时检测多个屋尘螨过敏原组分，明确对患者致敏的具体组分；具有效率高、成本低、耗时短等优点。另一方面，上述芯片结合全自动化的芯片阅读仪，能够实现高速、简便地检测过敏原组分，适合大批量样品检测。根据定量检测结果，进一步推断患者的过敏严重程度。
可以理解的是，上述芯片还可以用于过敏患者脱敏治疗的过程监测，及时反映治疗效果。
可以理解的是，上述芯片也可以用于预测患者出现过敏症状的风险。
针对病患做出屋尘螨过敏原组分的定量检测，能够帮助医生明确患者的过敏组分，为患者注射哪种屋尘螨组分提供指导，评估过敏反应风险，实现对屋尘螨过敏患者的精准治疗。同时实现定期对脱敏治疗患者的治疗进程进行有效监测，进而推动我国脱敏治疗的进一步发展。
屋尘螨过敏的常规治疗包括药物治疗和变应原特异性免疫治疗，即脱敏治疗，脱敏治疗是目前唯一的对因治疗。脱敏治疗的原理是让患者由低剂量开始接触特异性变应原制剂、耐受后逐渐增加剂量，达到有效维持量后再治疗足疗程，以刺激机体免疫系统产生对某特定变应原的耐受；使患者再次接触该变应原时，过敏症状明显减轻或消失。屋尘螨脱敏治疗目前尚处于发展阶段，治疗成功率较低，存在两大问题：(1)不同的过敏患者的过敏组分不尽相同，可能是多重组分过敏，或某个特定组分引起的过敏反应。传统的脱敏治疗产品中，所包含的屋尘螨组分有限，不能确定对患者致敏的具体组分。(2)脱敏治疗持续时间长，在此过程中尚无有效的监测治疗进程的诊断产品，导致很多患者在坚持脱敏治疗一段时间后，因未见疗效而放弃。这不仅造成患者身心疲惫和经济损失，也阻碍了脱敏治疗在国内的发展。
本申请还提供了一种检测屋尘螨过敏原组分的试剂盒，包括上述任一实施例的检测屋尘螨过敏原组分的芯片。
在其中一些实施方式中，上述试剂盒还包括反应试剂和检测试剂，反应试剂包括标记有标记物的第二抗体；检测试剂包括鲁米诺、Tris和过氧化氢中的一种或多种。
在一些实施例中，反应试剂包括标记有辣根过氧化物酶的第二抗体。
在其中一些实施方式中，第二抗体为鼠抗人IgE抗体。
在其中一些实施方式中，上述检测试剂包括试剂A和试剂B；其中，试剂A包括质量分数为0.8％～1.2％的鲁米诺和质量分数为1.5％～2.5％的Tris，试剂B包括质量分数为0.8％～1.2％的过氧化氢。
在一些实施例中，试剂A包括质量分数为1.0％的鲁米诺和质量分数为2.0％的Tris，试剂B包括质量分数为1.0％的过氧化氢。
上述试剂盒至少具有以下优点：能够定量地、同时检测多个屋尘螨过敏原组分；使用简便、省时。
本申请的一些实施方式还提供了一种检测屋尘螨过敏原组分的芯片的制备方法，包括步骤S100～S300：
步骤S100：使用氢氧化钠溶液和硅烷溶液对基体进行预处理，以使基体能够与生物大分子偶联。
在其中一些实施方式中，使用巯基标记的生物分子直接和基体表面作用，以使基体能够与生物大分子偶联。
步骤S200：在预处理后的基体上间隔地分别点入不同的过敏原组分，过敏原组分选自Der p 1、Der p 2、Der p 3、Der p 4、Der p 5、Der p 6、Der p 7、Der p 8、Der p 9、Der p 10、Der p 11、Der p 13、Der p 14、Der p 15、Der p 18、Der p 20、Der p 21、Der p23、Der p 24、Der p 25、Der p 26、Der p 28、Der p 29、Der p 30、Der p 31、Der p 32、Der p 33、Der p 36、Der p 37、Der p 38、Der p 39和Der p 40中的一种。
步骤S300：对点有过敏原组分的基体进行封闭，制备检测屋尘螨过敏原组分的芯片。
在其中一些实施方式中，步骤S100中，基体预处理包括步骤S101～S103。
步骤S101：将基体置于4wt％～6wt％的氢氧化钠溶液中浸泡16h～24h，再用纯水冲洗2～8次。
步骤S102：将基体置于质量浓度为0.05wt％～1wt％的硅烷溶液中浸泡20min～60min。
步骤S103：将浸泡后的基体使用氮气吹扫，放入烘箱中于100℃～180℃烘烤0.2h～0.6h。
在一些实施例中，步骤S101中，氢氧化钠的浓度为4.5wt％～5.5wt％。
在一些具体示例中，步骤S101中，氢氧化钠的浓度为5％。
在一些实施例中，步骤S102中，硅烷溶液的质量浓度为0.5wt％～1wt％。
在其中一些实施方式中，步骤S102中，硅烷溶液的介质为20％～30％乙醇(体积分数)。
在一些实施例中，步骤S102中，硅烷溶液的介质为25％乙醇(体积分数)。
在其中一些实施方式中，步骤S200中，由机器自动化点样，各个过敏原区102分别点入不同的屋尘螨过敏原组分。
在其中一些实施方式中，步骤S200中，各个过敏原区102的排列方式如图1所示。
在其中一些实施方式中，步骤S300中，将点样后的黑玻片没入封闭液中1h～4h，取出黑玻片，离心去除残余封闭液，制得所述芯片。
在其中一些实施方式中，上述封闭液为含有封闭蛋白的缓冲溶液。
在其中一些实施方式中，上述封闭蛋白为牛血清白蛋白或卵清蛋白，上述缓冲液为PBS缓冲液、Tris缓冲液、HEPS缓冲液、MOPS缓冲液中的一种或多种。
上述芯片的制备方法至少具有操作简单、成本低等特点。
具体实施例
下面将结合具体实施例和对比例对本申请作进一步说明，但不应将其理解为对本申请保护范围的限制。
实施例1
(1)制备芯片：
①预处理：将黑玻片(基体)置于5wt％氢氧化钠溶液中浸泡16h，之后采用纯水清洗2～8次；将黑玻片置于质量浓度为1wt％的硅烷溶液(介质为25％乙醇)中浸泡20min；浸泡好的黑玻片使用氮气吹扫后放入烘箱中，于180℃条件下烘烤0.2h。
②点样：如图1所示的排列方式，采用机器自动化点样，在黑玻片上形成4×8的矩阵；每个点为一种过敏原蛋白溶液；所制得的芯片包括32种屋尘螨过敏原组分(Der p 1、Der p 2、Der p 3、Der p 4、Der p 5、Der p 6、Der p 7、Der p 8、Der p 9、Der p 10、Derp 11、Der p 13、Der p 14、Der p15、Der p 18、Der p 20、Der p 21、Der p 23、Der p 24、Der p 25、Der p 26、Der p 28、Der p 29、Der p 30、Der p 31、Der p 32、Der p 33、Der p36、Der p 37、Der p 38、Der p 39和Der p 40)。
③封闭：将点样后的黑玻片没入封闭液(含3wt％牛血清白蛋白的Tris缓冲液)中3h，之后取出黑玻片，离心去除残余封闭液，制得所述芯片。
(2)试剂盒：将步骤(1)中制得的芯片与标记有辣根过氧化物酶的第二抗体溶液(鼠抗人IgE)、检测液A(含有1wt％鲁米诺和2wt％Tris)、检测B(1％过氧化氢)共同包装成试剂盒。
实施例2
(1)制备芯片：
①预处理：将黑玻片置于5wt％氢氧化钠溶液中浸泡24h，之后采用纯水清洗2～8次；将黑玻片置于质量浓度为0.05wt％的硅烷溶液(介质为25％乙醇)中浸泡60min；浸泡好的黑玻片使用氮气吹扫后放入烘箱中，于140℃条件下烘烤0.4h。
②点样：如图1所示的排列方式，采用机器自动化点样，在黑玻片上形成4×8的矩阵；每个点为一种过敏原蛋白溶液；所制得的芯片包括32种屋尘螨过敏原组分(Der p 1、Der p 2、Der p 3、Der p 4、Der p 5、Der p 6、Der p 7、Der p 8、Der p 9、Der p 10、Derp 11、Der p 13、Der p 14、Der p 15、Der p 18、Der p 20、Der p 21、Der p 23、Der p 24、Der p 25、Der p 26、Der p 28、Der p 29、Der p 30、Der p 31、Der p 32、Der p 33、Der p36、Der p 37、Der p 38、Der p 39和Der p 40)。
③封闭：将点样后的黑玻片没入封闭液(含6wt％卵清蛋白的PBS缓冲液)中4h，之后取出黑玻片，离心去除残余封闭液，制得所述芯片。
(2)试剂盒：将步骤(1)中制得的芯片与标记有辣根过氧化物酶的第二抗体溶液(鼠抗人IgE)、检测液A(含有1wt％鲁米诺和2wt％Tris)、检测B(1％过氧化氢)共同包装成试剂盒。
实施例3
(1)制备芯片：
①预处理：将黑玻片置于5wt％氢氧化钠溶液中浸泡20h，之后采用纯水清洗2～8次；将黑玻片置于质量浓度为0.05wt％的硅烷溶液(介质为25％乙醇)中浸泡30min；将浸泡好的黑玻片使用氮气吹扫后放入烘箱中，于100℃条件下烘烤0.6h。
②点样：如图1所示的排列方式，采用机器自动化点样，在黑玻片上形成4×8的矩阵；每个点为一种过敏原蛋白溶液；所制得的芯片包括32种屋尘螨过敏原组分(Der p 1、Der p 2、Der p 3、Der p 4、Der p 5、Der p 6、Der p 7、Der p 8、Der p 9、Der p 10、Derp 11、Der p 13、Der p 14、Der p 15、Der p 18、Der p 20、Der p 21、Der p 23、Der p 24、Der p 25、Der p 26、Der p 28、Der p 29、Der p 30、Der p 31、Der p 32、Der p 33、Der p36、Der p 37、Der p 38、Der p 39和Der p 40)。
③封闭：将点样后的黑玻片没入封闭液(含4wt％牛血清白蛋白的MOPS缓冲液)中1h，之后取出黑玻片，离心去除残余封闭液，制得所述芯片。
(2)试剂盒：将步骤(1)中制得的芯片与标记有辣根过氧化物酶的第二抗体溶液(鼠抗人IgE)、检测液A(含有1wt％鲁米诺和2wt％Tris)、检测B(1％过氧化氢)共同包装成试剂盒。
实施例4
使用实施例1所制备的芯片对4份人的血清样本进行屋尘螨过敏原组分检测，其中样本1～3为屋尘螨过敏患者的样本，样本4为健康人的样本；配合江苏三联生物工程股份有限公司生产制造的全自动化芯片阅读仪进行自动化检测。
(1)待测血清样本分别与芯片反应，使芯片上固定的32种屋尘螨过敏原组分与样品中潜在的抗体结合。
(2)将芯片转移到预加了辣根过氧化物酶第二抗体溶液的反应杯中，进一步反应形成抗原-抗体复合物，反应结束后洗涤芯片并检测反应信号。
(3)将芯片转移到预加了发光底物的反应杯中，利用制冷CCD对芯片反应区进行成像，读取点阵灰度值。
(4)以不同浓度的校准品作为样本进行检测，作出灰度-浓度定量曲线，通过该标准曲线计算血清样本中不同指标的相应水平。
本实施例中4个待测样本的检测结果如表1所示。
表1待测样本的屋尘螨过敏原组分水平的检测结果(单位：IU/mL)
Figure BDA0003905712390000131
Figure BDA0003905712390000141
由上表可知，本申请的芯片能够同时对样本中32种屋尘螨过敏原特异性IgE的水平进行定量检测。与全自动芯片阅读仪相配合进行检测，具有简单、快速等特点，适用于临床上对大批量样本进行检测。此外，定量地检测所得的各个过敏原抗体浓度，能够为过敏原患者临床治疗提供参考，选择针对性的治疗方法。同时，本申请的芯片检测屋尘螨过敏原的结果与Phadia Immuno CAP试剂的检测结果相比，阳性检出率一致，准确性高。
以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。
以上所述实施例仅表达了本申请的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本申请构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本申请的保护范围。因此，本申请专利的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims (10)

1.一种检测屋尘螨过敏原组分的芯片，其特征在于，所述芯片包括基体，所述基体上具有多个相互独立的过敏原区，每个所述过敏原区内固定有如下过敏原组分中的一种：Der p1、Der p 2、Der p 3、Der p 4、Der p 5、Der p 6、Der p 7、Der p 8、Der p 9、Der p 10、Der p 11、Der p 13、Der p 14、Der p 15、Der p 18、Der p 20、Der p 21、Der p 23、Der p24、Der p 25、Der p 26、Der p 28、Der p 29、Der p 30、Der p 31、Der p 32、Der p 33、Der p 36、Der p 37、Der p 38、Der p 39和Der p 40，至少有两个所述过敏原区的过敏原组分不同。
2.根据权利要求1所述的芯片，其特征在于，所述基体上还具有质控区，所述质控区与所述过敏原区相互独立，所述质控区内固定有质控品。
3.根据权利要求2所述的芯片，其特征在于，多个所述过敏原区呈矩阵分布；
和/或，所述质控区还包括阳性质控区和阴性质控区，所述阳性质控区、所述阴性质控区和所述过敏原区相互独立。
4.根据权利要求1～3任一项所述的芯片，其特征在于，所述基体为玻璃片黑玻片、聚苯乙烯塑料片、酸纤维素膜和聚偏二氟乙烯膜中的一种。
5.一种检测屋尘螨过敏原组分的试剂盒，其特征在于，包括如权利要求1～4任一项所述的芯片。
6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，还包括反应试剂和检测试剂，所述反应试剂包括标记有标记物的第二抗体；所述检测试剂包括鲁米诺、Tris和过氧化氢中的一种或多种。
7.一种检测屋尘螨过敏原组分的芯片的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
对基体进行预处理，以使基体能够与生物大分子偶联；及
在预处理后的基体上间隔地点入不同的过敏原组分，所述过敏原组分选自Der p 1、Der p 2、Der p 3、Der p 4、Der p 5、Der p 6、Der p 7、Der p 8、Der p 9、Der p 10、Derp 11、Der p 13、Der p 14、Der p 15、Der p 18、Der p 20、Der p 21、Der p 23、Der p 24、Der p 25、Der p 26、Der p 28、Der p 29、Der p 30、Der p 31、Der p 32、Der p 33、Der p36、Der p 37、Der p 38、Der p 39和Der p 40中的一种；及
对点有过敏原组分的基体进行封闭，制备检测屋尘螨过敏原组分的芯片。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述封闭步骤包括如下步骤：
将点样后的黑玻片没入封闭液中1h～4h，取出黑玻片，离心去除残余封闭液，制得所述芯片。
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述封闭液为含有封闭蛋白的缓冲液。
10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述封闭蛋白为牛血清白蛋白或卵清蛋白，所述缓冲液为PBS缓冲液、Tris缓冲液、HEPS缓冲液、MOPS缓冲液中的一种或多种。
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