TW202037379A

TW202037379A - 醫藥等級的家塵蟎過敏原萃取物

Info

Publication number: TW202037379A
Application number: TW108112377A
Authority: TW
Inventors: 凱瑟琳錫爾維斯特爾森; 吉特浪德; 勞爾斯哈德克利斯登森
Original assignee: 丹麥商Ａｌｋ阿貝羅公司
Priority date: 2019-04-09
Filing date: 2019-04-09
Publication date: 2020-10-16
Also published as: TWI721403B

Abstract

本發明係關於適於藉由免疫療法治療過敏之醫藥等級的家塵蟎過敏原萃取物及其藥劑。該等萃取物及藥劑包含受控量之蛋白質，其在較高百分數的家塵蟎過敏性個體中誘導Th2免疫細胞反應，但不在或僅在極低百分數之家塵蟎過敏性個體中誘導IgE介導之免疫反應。

Description

醫藥等級的家塵蟎過敏原萃取物

本發明係關於醫學領域，詳言之係關於針對蟎過敏之免疫治療藥劑，該藥劑包含家塵蟎之過敏原萃取物。

過敏原特異性免疫療法（Allergen-specific immunotherapy，AIT）係一種致病性的疾病改善方法，該方法包含將一定劑量之致病性過敏原重複地投予致敏個體，以便達到針對後續過敏原暴露之臨床耐受性狀態。

典型地，AIT係用包含過敏原源材料（例如家塵蟎）之過敏原萃取物的免疫治療藥劑進行，該過敏原萃取物視需要可以進一步改質成具有較低或無IgE介導之反應性的含類過敏原之萃取物。

當今基於臨床功效第3期方案獲得銷售許可的大部分免疫治療藥劑係基於過敏原萃取物之藥劑，而非僅包含一種或多種單一過敏原之藥劑，不過實情是此類單組分產品更易於製造為醫藥等級的藥劑，該藥劑必須在活性藥物物質之含量方面具有高一致性及可再現性。基於過敏原萃取物之藥劑包含多種免疫活性物質，需要仔細的標準化以便符合關於醫藥等級藥劑之一致性、可再現性及低批料間變化之要求。

當今，醫藥等級的過敏原萃取物係藉由使用經過驗證且嚴格限定之製造方法獲得，其中該過敏原萃取物中主要過敏原之效力（總體IgE結合能力）及含量受到控制。

用於治療家塵蟎（house dust mite，HDM）過敏之適合免疫治療藥劑可以包含表皮蟎屬（Dermatophagoides ）兩個HDM物種（（屋塵蟎（Dermatophagoides pteronyssinus ，「Der p」）及粉塵蟎（Dermatophagoides farinae ，「Der f」））之過敏原萃取物，因為該等物種係全世界最常見的室內過敏原來源且為常年性哮喘及鼻炎之強效誘導劑。

漢瑪（Henmar）等人(2016)及國際專利申請案WO2011/151449係關於用於獲得醫藥等級的家塵蟎過敏原萃取物之製造方法，該等過敏原萃取物係用於治療家塵蟎過敏之藥劑，例如以品牌名稱ACARIZAX®、Miticure®及Odactra®出售之藥劑中的活性藥物物質。此類過敏原萃取物含有預定量之主要家塵蟎過敏原，該等量在該製造方法期間應小心地控制。該方法包含分別萃取來自「Der p蟎」以及來自「Der f」蟎之「蟎軀體」及「蟎糞便粒子」。隨後，將「蟎軀體」萃取物及「蟎糞便粒子」萃取物合併以便分別獲得「Der p」蟎及「Der f」蟎之物種特異性過敏原萃取物。在製造最終免疫治療產品時，將該兩種物種特異性過敏原萃取物合併以提供同時含有「Der p」蟎及「Der f」蟎之過敏原萃取物且具有預定量之主要家塵蟎過敏原的產品。

由於超過80%的HDM過敏性患者具有能夠結合至第1組過敏原（亦即，Der p 1及Der f 1）或第2組過敏原（亦即，Der p 2及Der f 2）之特異性IgE抗體，故當今將該等第1組過敏原及該等第2組過敏原視為臨床上最重要的家塵蟎過敏原。因此，該等第1組過敏原及該等第2組過敏原被認為是「Der p」蟎及「Der f」蟎之主要過敏原。

已有超過約37個不同組的「Der p」蟎及/或「Der f」蟎過敏原得到特徵界定，且得到IUIS過敏原命名小組委員會（IUIS Allergen Nomenclature, Subcommittee）認可（http\www.allergen.org ）。舉例而言，已報導Der p蟎之23組過敏原：Der p 1、Der p 2、Der p 3、Der p 4、Der p 5、Der p 6、Der p 7、Der p 8、Der p 9、Der p 10、Der p 11、Der p 13、Der p 14、Der p 15、Der p 18、Der p 20、Der p 21、Der p 23、Der p 24、Der p 25、Der p 36、Der p 37及Der p 38，同時已報導粉塵蟎之32組過敏原：Der f 1、Der f 2、Der f 3、Der f 4、Der f 6、Der f 7、Der f 8、Der f 10、Der f 11、Der f 13、Der f 14、Der f 15、Der f 16、Der f 17、Der f 18、Der f 20、Der f 21、Der f 22、Der f 23、Der f 24、Der f 25、Der f 26、Der f 27、Der f 28、Der f 29、Der f 30、Der f 31、Der f 32、Der f 33、Der f 34、Der f 35及Der f 36。

巴塔德（Batard）等人於2016年之科學論文揭示針對「Der p」蟎及「Der f」蟎之第1組或第2組過敏原具有陽性IgE反應以及針對「Der p」蟎之第4組、第5組、第7組、第13組、第15組、第21組及第23組過敏原具有陽性IgE反應之HDM過敏性患者的患病率。

博達斯-勒弗洛奇V（Bordas-Le Floch V）等人於2017年之科學論文係關於藉由「Der p」蟎及「Der f」蟎之組合轉錄組及蛋白質組分析進行的33組不同HDM過敏原（自IUIS可知）之偵測。

國際專利申請案WO2017/203057 A1係關於在藉由用中性緩衝水溶液短期萃取（最長10分鐘）HDM蟎糞便粒子及軀體所製造之HDM蟎萃取物中鑑別的新穎蛋白質。

本發明之目的

本發明之具體實例的目的係提供一種醫藥等級的家塵蟎過敏原萃取物及其藥劑，其在該過敏原萃取物之蛋白質多樣性方面符合要求且對家塵蟎過敏具有免疫影響。本發明之概述

本發明人已意外地鑑別出由家塵蟎的屋塵蟎（「Der p」蟎）及粉塵蟎（「Der f」蟎）之六個HDM蛋白質組（在本文中命名為第a)-f)組）構成之亞群，相對於圖1、圖2及圖3中繪示之多種其他蟎蛋白質，該等蛋白質組在較高百分數之HDM過敏性患者中誘導Th2免疫細胞反應而非IgE介導之反應（資料概述於圖4中）。

因此，本發明人發現，一系列蟎蛋白質在HDM蟎過敏性患者中具有不同於IgE抗體結合過敏原的免疫模式（immunological profile），且可能被視為在調節AIT治療之HDM蟎過敏性患者之過敏反應方面具有同等重要性，因為該等蛋白質能夠干擾Th2免疫細胞。有利的是，該等蛋白質不會引起通常用IgE抗體結合過敏原所觀察到的不良事件。

本發明人現提供標準化過敏原萃取物及其醫藥組成物，其適於藉由免疫療法治療HDM過敏且包含一致且可靠量的有免疫重要作用之HDM過敏原及Th2免疫細胞反應誘導蛋白質。

該六個HDM組之子群a)-f)各自包含「Der p」蟎之蛋白質及其「Der f」蟎之同源蛋白質，且各蛋白質可以呈具有相同生物功能且具有高胺基酸序列一致性（例如超過80%，諸如超過85%、90%或更高百分比序列一致性）之不同同功異構物形式存在。

該等HDM蛋白質組中之三組a)-c)包含「Der p」之蛋白質以及其「Der f」蟎之同源物，在本文中以ID號：A0010、A0013及A0022命名。該等HDM蛋白質組之蛋白質已藉由家塵蟎之組合轉錄組及蛋白質組分析偵測且先前在國際專利申請案WO2017/203057中有描述。三個HDM蛋白質組d)-f)包含報導為IUIS過敏原（Der f 34、Der p 35及Der p 38)之蛋白質，其中其他蟎物種之同源蛋白質已藉由「Der p」蟎或「Der f」蟎之組合轉錄組及蛋白質組分析偵測。Der p 38及其「Der f」蟎同源物之結構亦自國際專利申請案WO2017/203057以具有ID No:A0019之蛋白質所知。

總體而言，該六個HDM蛋白質組a)-f)可以呈現如下： a) SEQ ID No: 1（A0010，「Der p」）及SEQ ID No: 2（A0010，「Der f」）， b) SEQ ID No: 3（A0013，「Der p」）及SEQ ID No: 4（A0013，「Der f」）， c) SEQ ID No: 5（A0022，「Der p」）及SEQ ID No: 6（A0022，「Der f」）， d) SEQ ID No: 7（「Der p」蟎中Der f 34之同源物）及SEQ ID No: 8（Der f 34）， e) SEQ ID No: 9（「Der p」蟎中Der f 35之同源物）及SEQ ID No: 10（Der f 35），及 f) SEQ ID No: 11（Der p 38）及SEQ ID No: 12（「Der f」蟎中Der p 38之同源物）。

本發明之第一態樣係關於一種適於治療由家塵蟎的屋塵蟎及/或粉塵蟎引起之過敏性病症的組成物（例如醫藥組成物），該組成物包含 - 包含過敏原Der p 1及Der p 2以及具有SEQ ID No: 1、3、5、7、9及11之蛋白質之家塵蟎的屋塵蟎之過敏原萃取物（過敏原萃取物(i)）；以及 -包含過敏原Der f 1及Der f 2以及具有SEQ ID No: 2、4、6、8、10及12之蛋白質之家塵蟎的粉塵蟎之過敏原萃取物（過敏原萃取物(ii)），其中該組成物包含至少一對獨立地以受控量存在的成對蛋白質，其中該對蛋白質選自由以下者組成之組a)-f)：a) SEQ ID No: 1及SEQ ID No: 2；b) SEQ ID No: 3及SEQ ID No: 4；c) SEQ ID No: 5及SEQ ID No: 6；d) SEQ ID No: 7及SEQ ID No: 8；e) SEQ ID No: 9及SEQ ID No: 10；以及f) SEQ ID No: 11及SEQ ID No: 12。

本發明之第二態樣係關於一種製備根據本發明之第一態樣之組成物的方法，該方法包含以下步驟： i)分別萃取自家塵蟎的屋塵蟎獲得的蟎軀體及蟎糞便粒子，隨後混合該等分開的蟎軀體及蟎糞便萃取物，以獲得包含過敏原Der p 1以重量計之量與過敏原Der p 2以重量計之量相比範圍在0.67-1.43內之過敏原萃取物(i)（視需要其中該範圍係自0.71-1.25，或自0.77-1.11）且其中該過敏原萃取物(i)還包含具有SEQ ID No: 1、3、5、7、9及11之蛋白質； ii)分別萃取自家塵蟎的粉塵蟎獲得的蟎軀體及蟎糞便粒子，隨後混合該等分開的蟎軀體及蟎糞便萃取物以獲得包含過敏原Der f 1以重量計之量與過敏原Der f 2以重量計之量相比範圍在0.67-1.43內之過敏原萃取物(ii)（視需要其中該範圍係自0.71-1.25，或自0.77-1.11）且其中該過敏原萃取物(ii)還包含具有SEQ ID No: 2、4、6、8、10及12之蛋白質； iii)控制過敏原萃取物(i)中該等具有SEQ ID No: 1、3、5、7、9及11之蛋白質中之至少一種的量與包含所需量的該（該等）具有SEQ ID No: 1、3、5、7、9及11之蛋白質的參照樣品中相同蛋白質之量相比，範圍在0.7-1.3； iii)控制過敏原萃取物(ii)中該等具有SEQ ID No: 2、4、6、8、10及12之蛋白質中之至少一種的量與包含所需量的該（該等）具有SEQ ID No: 2、4、6、8、10及12之蛋白質的參照樣品中相同蛋白質之量相比，範圍在0.7-1.3；以及 iv)隨後，將一部分過敏原萃取物(i)與一部分過敏原萃取物(ii)混合以獲得包含該等過敏原Der p 1及Der f 1以重量計之量與該等過敏原Der p 2及Der f 2以重量計之量相比範圍在0.67-1.43內的組成物（視需要其中該範圍係自0.71-1.25，或自0.77-1.11），其中至少一隊成對蛋白質中獨立地以受控量存在，該對蛋白質選自由以下者組成的組a)-f)：a) SEQ ID No: 1及SEQ ID No:2；b) SEQ ID No:3及SEQ ID No:4；c) SEQ ID No:5及SEQ ID No:6；d) SEQ ID No:7及SEQ ID No:8；e)SEQ ID No:9及SEQ ID No:10；以及f) SEQ ID No:11及SEQ ID No:12。

本發明之第三態樣係關於本發明之第一態樣之組成物或可藉由本發明之第二態樣獲得的組成物，其係用於治療家塵蟎過敏，例如用於緩解或減少由暴露於該等蟎或蟎過敏原引發之免疫反應。

在一個相關態樣中，本發明係關於本發明之第一態樣的組成物或可藉由本發明之第二態樣獲得的組成物在製造用於治療家塵蟎過敏，例如用於緩解或減少由暴露於該等蟎或蟎過敏原引發之免疫反應之藥劑中的用途。

定義

術語「Th2免疫細胞反應誘導蛋白質」在本文中意圖表示如例如藉由活體外刺激來自HDM蟎過敏性個體之PBMC所識別，在較高百分數之該等過敏性個體中誘導細胞介素IL-5反應之蛋白質。

術語「IgE介導之反應」意圖表示如例如藉由自HDM蟎過敏性個體獲得的新鮮血液中嗜鹼性球活化所識別，當IgE抗體結合至蛋白質（過敏原）時所引發之免疫反應。

術語「過敏原」在本文中係指引起IgE抗體製造，能夠結合至IgE抗體且誘導易感個體中肥大細胞組胺釋放的一種蛋白質。胺基酸序列

該六個HDM蛋白質組之蛋白質的胺基酸序列如下： SEQ ID No: 1 - ID：屋塵蟎之A0010

SEQ ID No: 2 - ID：粉塵蟎之A0010

SEQ ID No: 3 - ID：屋塵蟎之A0013

SEQ ID No:4 - 粉塵蟎之A0013

SEQ ID No: 5 - ID：屋塵蟎之A0022

SEQ ID No: 6 - ID：粉塵蟎之A0022

SEQ ID No: 7 - ID：屋塵蟎之第34組過敏原

SEQ ID No: 8 - ID：Der f 34，粉塵蟎之第34組過敏原

SEQ ID NO: 9-ID：屋塵蟎之第35組過敏原

SEQ ID No: 10 - ID：Der f 35，粉塵蟎之第35組過敏原

SEQ ID No: 11 - ID：Der p 38，屋塵蟎之第38組過敏原

SEQ ID No: 12 - ID：粉塵蟎之第38組過敏原

在下文中分別顯示「Der p」蟎及「Der f」蟎之第23組過敏原的胺基酸序列。蛋白質Der p 1、Der f 1、Der p 2及Der f 2之胺基酸序列可以見於IUIS首頁。每一過敏原可以呈具有相同生物功能及較高胺基酸序列一致性（例如超過80%，諸如超過85%、90%或更高百分比）之不同同功異構物形式存在。 SEQ ID No: 13 - ID：Der p 23，屋塵蟎之第23組過敏原

SEQ ID No: 14 - ID：粉塵蟎之第23組過敏原

具體實例

本發明之第一態樣係關於一種組成物（例如醫藥組成物)，該組成物包含 - 包含過敏原Der p 1及Der p 2以及具有SEQ ID No: 1、3、5、7、9及11之蛋白質之家塵蟎的屋塵蟎之過敏原萃取物（過敏原萃取物(i)）；以及 - 包含過敏原Der f 1及Der f 2以及具有SEQ ID No: 2、4、6、8、10及12之蛋白質之家塵蟎的粉塵蟎之過敏原萃取物（過敏原萃取物(ii)），其中該組成物包含至少一對獨立地以受控量存在的成對蛋白質，其中該對蛋白質選自由以下者組成之組a)-f)：a) SEQ ID No: 1及SEQ ID No: 2；b) SEQ ID No: 3及SEQ ID No: 4；c) SEQ ID No: 5及SEQ ID No: 6；d) SEQ ID No: 7及SEQ ID No: 8；e) SEQ ID No: 9及SEQ ID No: 10；以及f) SEQ ID No: 11及SEQ ID No: 12。

此類組成物適於治療由家塵蟎的屋塵蟎及/或粉塵蟎引起之過敏性病症。

在本發明之具體實例中，過敏原萃取物(i)包含受控量的該等具有SEQ ID No: 1、3、5、7、9及/或11之蛋白質中之至少一種，且過敏原萃取物(ii)包含受控量的該等具有SEQ ID No: 2、4、6、8、10及/或12之蛋白質中之至少一種。

由於在兩個蟎物種中偵測到同源蛋白質之免疫交叉反應，故較佳地，當打算控制給定「Der p」蛋白質（例如具有SEQ ID No.1之蛋白質）時，則必須同時控制其「Der f」蟎之同源蛋白質（亦即，具有SEQ ID No:2之蛋白質）。因此，在較佳具體實例中，該組成物包含至少一對獨立地以受控量存在的成對蛋白質，其中該對蛋白質選自由以下者組成之組a)-f)：a) SEQ ID No:1及SEQ ID No:2；b)SEQ ID No:3及SEQ ID No:4；c) SEQ ID No:5及SEQ ID No:6；d) SEQ ID No:7及SEQ ID No:8；e) SEQ ID No:9及SEQ ID No:10；以及f) SEQ ID No:11及SEQ ID No:12。

片語「受控量」係指可以藉由使用適合分析方法定量測定的給定蛋白質或過敏原之量。該量可以為絕對量，例如以重量或莫耳濃度計之量。然而，由於過敏原萃取物很複雜且具有多種組分，使得難以確定該等過敏原萃取物之絕對量。或者，給定蛋白質或過敏原之量可以為相對量，例如可以相對於限定參照樣品，諸如包含所需量之所關注蛋白質的樣品測定之量。

在本發明之一些具體實例中，給定蛋白質之受控量可藉由串聯質量標籤（tandem mass tag，TMT）質譜（mass spectrometric，MS）法測定。此方法可以鑑別並定量在藉由MS分析之前合併成一份測試樣品的不同樣品中之相同蛋白質。此方法允許測定不同樣品中相同蛋白質之相對量，或關於不同樣品中相同蛋白質之平均量。

舉例而言，過敏原萃取物(i)中具有SEQ ID No: 1、3、5、7、9或11之蛋白質中之任一種的受控量可以藉由對過敏原萃取物(i)及包含所需量的該（該等）具有SEQ ID No: 1、3、5、7、9及/或11之蛋白質的參照樣品進行串聯質量標籤（TMT）質譜法，並相對於該參照樣品中相同蛋白質之定量結果測定過敏原萃取物(i)中具有SEQ ID No: 1、3、5、7、9及/或11之蛋白質的定量結果來控制。

同樣，過敏原萃取物(ii)中具有SEQ ID No: 2、4、6、8、10或12之蛋白質中之任一種的受控量可以藉由對過敏原萃取物(ii)及包含所需量的該（該等）具有SEQ ID NO: 2、4、6、8、10及/或12之蛋白質的參照樣品進行串聯質量標籤（TMT）質譜法，並相對於該參照樣品中相同蛋白質之定量結果測定過敏原萃取物(ii)中具有SEQ ID No:2、4、6、8、10及/或12之蛋白質的定量結果來控制。

應理解，術語「定量結果」意圖表示可以變換為給定蛋白質之定量量測值的MS分析之結果。舉例而言，一種蛋白質之定量結果可以為所鑑別肽之報告TMT離子的強度，該所鑑別肽表示一種蛋白質。

因此，過敏原萃取物(i)中具有SEQ ID NO: 1、3、5、7、9及11之蛋白質中之任一種的受控量或過敏原萃取物(ii)中具有SEQ ID No: 2、4、6、8、10或12之蛋白質中之任一種的受控量可以藉由串聯質量標籤（TMT）質譜法，相對於包含所需量該（該等）蛋白質之參照樣品中相同蛋白質之量測定所需蛋白質之受控量進行控制。

在本發明之一些具體實例中，過敏原萃取物(i)中具有SEQ ID NO: 1、3、5、7、9或11之蛋白質中之任一種的受控量與包含所需量的該（該等）具有SEQ ID NO: 1、3、5、7、9及/或11之蛋白質的參照樣品中相同蛋白質之受控量相比，範圍可以在0.7至1.3，視需要其中該範圍係自0.75至1.25或自0.8至1.2。

在本發明之一些具體實例中，過敏原萃取物(ii)中具有SEQ ID NO: 2、4、6、8、10或12之蛋白質中之任一種的受控量與包含所需量的該（該等）具有SEQ ID NO: 2、4、6、8、10及/或12之蛋白質的參照樣品中相同蛋白質之受控量相比，範圍可以在0.7至1.3，視需要其中該範圍係自0.75至1.25或自0.8至1.2。

在較佳的具體實例中，蛋白質對a)至f)中之兩種蛋白質均可以受控量存在。相應地，在一些具體實例中，蛋白質對a)係以受控量存在。因此，在一些具體實例中，過敏原萃取物(i)至少包含受控量的具有SEQ ID No: 1之蛋白質且過敏原萃取物(ii)至少包含受控量的具有SEQ ID No: 2之蛋白質。

在一些具體實例中，蛋白質對b)可以受控量存在。因此，在一些具體實例中，過敏原萃取物(i)至少包含受控量的具有SEQ ID No: 3之蛋白質且過敏原萃取物(ii)至少包含受控量的具有SEQ ID No: 4之蛋白質。

在一些具體實例中，蛋白質對c)可以受控量存在。因此，在一些具體實例中，過敏原萃取物(i)至少包含受控量的具有SEQ ID No: 5之蛋白質且過敏原萃取物(ii)至少包含受控量的具有SEQ ID No: 6之蛋白質。

在一些具體實例中，蛋白質對d)可以受控量存在。因此，在一些具體實例中，過敏原萃取物(i)至少包含受控量的具有SEQ ID No: 7之蛋白質且過敏原萃取物(ii)至少包含受控量的具有SEQ ID No: 8之蛋白質。

在一些具體實例中，蛋白質對e)可以受控量存在。因此，在一些具體實例中，過敏原萃取物(i)至少包含受控量的具有SEQ ID No: 9之蛋白質且過敏原萃取物(ii)至少包含受控量的具有SEQ ID No: 10之蛋白質。

在一些具體實例中，蛋白質對f)可以受控量存在。因此，在一些具體實例中，過敏原萃取物(i)至少包含受控量的具有SEQ ID No: 11之蛋白質且過敏原萃取物(ii)至少包含受控量的具有SEQ ID No: 12之蛋白質。

在較佳的具體實例中，蛋白質對a)-f)中之至少兩對、至少三對或至少四對可以受控量存在。舉例而言，以下蛋白質對之蛋白質可至少以受控量存在：a)及b)；a)及c)；a)及f)；b)及c)；b)及f)；或c)及f)，諸如至少以下蛋白質對之蛋白質以受控量存在：a)、b)及c)；a)、b)及f)；a)、c)及f)；或b)、c)及f)。

根據當前用於控制過敏原萃取物之實踐，可以控制主要過敏原。

因此，在其他具體實例中，該組成物包含至少一對獨立地以受控量存在的成對過敏原，其中該對過敏原選自由以下者組成之群：g) Der p 1及Der f 1；h) Der p 2及Der f 2；以及i) Der p 23及Der f 23。

在一些具體實例中，第1組、第2組、視需要第23組之蟎過敏原可以受控量存在。舉例而言，過敏原萃取物(i)中過敏原Der p 1、Der p 2或視需要Der p 23中之任一種的受控量與包含所需量的該Der p 1、Der p 2及/或視需要Der p 23之參照樣品中相同過敏原之受控量相比範圍可以在0.7至1.3內。視需要，該範圍係自0.75至1.25，或自0.8至1.2。

同樣，在一些具體實例中，過敏原萃取物(ii)中過敏原Der f 1、Der f 2或視需要Der f 23中之任一種的受控量與包含所需量的該Der f 1、Der f 2及/或視需要Der f 23之參照樣品中相同過敏原之受控量相比範圍在0.7至1.3內。視需要，該範圍係自0.75至1.25，或自0.8至1.2。

過敏原萃取物i)中過敏原Der p 1、Der p 2、視需要Der p 23各自之受控量以及過敏原萃取物ii)中過敏原Der f 1、Der f 2、視需要Der f 23各自之受控量可以藉由該用於控制Th2免疫細胞反應誘導蛋白質之方法，例如串聯質量標籤（TMT）質譜法及藉由使用相同參考樣品控制。

因此，在一些具體實例中，過敏原萃取物(i)中過敏原Der p 1、Der p 2及視需要Der p 23中之任一種的受控量可以藉由對過敏原萃取物(i)及包含所需量該（該等）過敏原之參照樣品進行串聯質量標籤（TMT）質譜法，並相對於該參照樣品中相同過敏原之定量結果測定過敏原Der p 1、Der p 2及/或視需要Der p 23之定量結果來控制。

同樣，過敏原萃取物(ii)中過敏原Der f 1、Der f 2及視需要Der f 23中之任一種的受控量可以藉由對過敏原萃取物(ii)及包含所需量該（該等）過敏原之參照樣品進行串聯質量標籤（TMT）質譜法，並相對於該參照樣品中相同過敏原之定量結果測定過敏原Der f 1、Der f 2及/或視需要Der f 23之定量結果來控制。

應理解，包含所需量之給定蛋白質或過敏原之參照樣品可以為包含已知或未知量之所討論蛋白質/過敏原中之每一種的任何樣品。

具有已知量之給定蛋白質或過敏原的參照樣品可以藉由使用重組製造之蛋白質/過敏原提供。在一些具體實例中，參照樣品係藉由與用於製造過敏原萃取物(i)或過敏原萃取物(ii)相同之製造方法製造的過敏原萃取物。視需要，以重量或莫耳濃度計所需蛋白質/過敏原各自之量可以藉由適合方法定量，例如藉由使用AQUA-肽之定量MS分析或藉由使用針對所討論蛋白質/過敏原產生之單株抗體或多株抗體之ELISA方法定量。

在一些具體實例中，包含所需量的過敏原萃取物(i)中具有SEQ ID NO: 1、3、5、7、9或11之蛋白質中之任一種或過敏原Der p 1、Der p 2或Der p 23的參照樣品係藉由與用於製造過敏原萃取物(i)相同之製造方法製造的樣品，視需要其中將一個或多個製造批料（例如三個批料）混合成一份參照樣品。

同樣，包含所需量的過敏原萃取物(ii)中具有SEQ ID NO: 2、4、6、8、10或12之蛋白質中之任一種或過敏原Der f 1、Der f 2或Der f 23的參照樣品係藉由與用於製造過敏原萃取物(ii)相同之製造方法製造的樣品，視需要其中將一個或多個製造批料（例如三個批料）混合成一份參照樣品。

因此，參照樣品係代表過敏原萃取物(i)或過敏原萃取物(ii)之樣品。舉例而言，該參照樣品可以為該過敏原萃取物(i)或該過敏原萃取物(ii)之批料，該批料係用於證明醫藥組成物之臨床功效的臨床階段開發方案中，或其可以為出於穩定性測試目的而製造的批料。

典型地，出於控制過敏原萃取物(i)或過敏原萃取物(ii)中給定蛋白質或過敏原之量的目的，不必定量參照樣品中給定蛋白質的以重量或莫耳濃度計之絕對量。

在其他具體實例中，過敏原萃取物(i)包含預定比率的過敏原Der p 1以重量計之量比過敏原Der p 2以重量計之量，該預定比率係在0.67-1.43之範圍內，視需要其中該範圍係自0.71-1.25，或自0.77-1.11。

在其他具體實例中，過敏原萃取物(ii)包含預定比率的過敏原Der f 1以重量計之量比過敏原Der f 2以重量計之量，該預定比率係在0.67-1.43之範圍內，視需要其中該範圍係自0.71-1.25，或自0.77-1.11。

在又其他具體實例中，該組成物包含預定比率的過敏原Der p 1及Der f 1以重量計之量比過敏原Der p 2及Der f 2以重量計之量，該預定比率係在0.67-1.43之範圍內，視需要其中該範圍係自0.71-1.25，或自0.77-1.11。

術語預定比率意圖表示過敏原萃取物或其組成物包含所需可定量之量的某些組分，例如一種過敏原或蛋白質以重量計之量比另一過敏原或蛋白質以重量計之量。

根據本發明，該組成物可以為用於治療HDM過敏之藥物物質，例如該組成物可以為兩種過敏原萃取物(i)及(ii)之混合物，其視需要以液體形式、冷凍液滴形式或凍乾形式提供。在一些具體實例中，該組成物係醫藥組成物，其視需要包含醫藥學上可接受之成分。該醫藥組成物可以配製成各種劑型，例如適於舌下投予之快速分散錠劑。該快速分散錠劑可以為凍乾物。

如所提及的，根據本發明之組成物包含兩種不同的過敏原萃取物(i)及(ii)，其各自由不同HDM蟎物種獲得。在本發明之一些具體實例中，過敏原萃取物(i)係「Der p」蟎之「蟎軀體」及「蟎糞便粒子」之獨立萃取物的組合，且過敏原萃取物(ii)係「Der f」蟎之「蟎軀體」及「蟎糞便粒子」之獨立萃取物的組合。

因此，本發明之第二態樣係關於一與製備根據本發明之第一態樣之組成物的方法，或可藉由該第二態樣之方法獲得的組成物，該方法包含以下步驟： i)分別萃取自家塵蟎的屋塵蟎獲得的蟎軀體及蟎糞便粒子，隨後混合該等分開的蟎軀體及蟎糞便萃取物，以獲得包含過敏原Der p 1以重量計之量與過敏原Der p 2以重量計之量範圍在0.67-1.43內之過敏原萃取物(i)（視需要其中該範圍係自0.71-1.25，或自0.77-1.11）且其中該過敏原萃取物(i)還包含具有SEQ ID No: 1、3、5、7、9及11之蛋白質； ii)分別萃取自家塵蟎的粉塵蟎獲得的蟎軀體及蟎糞便粒子，隨後混合該等分開的蟎軀體及蟎糞便萃取物，以獲得包含過敏原Der f 1以重量計之量與過敏原Der f 2以重量計之量相比範圍在0.67-1.43內之過敏原萃取物(ii)（視需要其中該範圍係自0.71-1.25，或自0.77-1.11）且其中該過敏原萃取物(ii)還包含具有SEQ ID No: 2、4、6、8、10及12之蛋白質； iii)控制過敏原萃取物(i)中該等具有SEQ ID No: 1、3、5、7、9及11之蛋白質中之至少一種的量與包含所需量的該（該等）具有SEQ ID No: 1、3、5、7、9及11之蛋白質之參照樣品中相同蛋白質之量相比，範圍在0.7-1.3； iii)控制過敏原萃取物(ii)中該等具有SEQ ID No: 2、4、6、8、10及12之蛋白質中之至少一種的量與包含所需量的該（該等）具有SEQ ID No: 2、4、6、8、10及12之蛋白質的參照樣品中相同蛋白質之量相比，範圍在0.7-1.3；以及 iv)隨後，將一部分過敏原萃取物(i)與一部分過敏原萃取物(ii)混合以獲得包含該等過敏原Der p 1及Der f 1以重量計之量與該等過敏原Der p 2及Der f 2以重量計之量相比範圍在0.67-1.43內的組成物（視需要其中該範圍係自0.71-1.25，或自0.77-1.11），其中至少一對成對蛋白質獨立地以受控量存在，該對蛋白質選自由以下者組成的組a)-f)：a) SEQ ID No: 1及SEQ ID No:2；b) SEQ ID No:3及SEQ ID No:4；c) SEQ ID No:5及SEQ ID No:6；d) SEQ ID No:7及SEQ ID No:8；e)SEQ ID No:9及SEQ ID No:10；以及f) SEQ ID No:11及SEQ ID No:12。

在其他具體實例中，該方法進一步包含步驟v)，在該步驟中，將步驟iv)中混合的過敏原萃取物(i)及(ii)與醫藥學上可接受之載劑、媒劑、稀釋劑及/或賦形劑混合，例如以獲得醫藥組成物。在其他具體實例中，該方法進一步包含步驟vi)，在該步驟中，將步驟v)之混合物凍乾，例如以獲得凍乾錠。

在一些具體實例中，可以在步驟iv)中進行過敏原萃取物(i)及過敏原萃取物(ii)之混合以獲得包含Der p 1以重量計之量與過敏原Der f 1以重量計之量相比範圍在0.67-1.43內的組成物（視需要其中該範圍係自0.71-1.25，或自0.77-1.11）。

在一些具體實例中，可以在步驟iv)中進行過敏原萃取物(i)及過敏原萃取物(ii)之混合以獲得包含Der p 1及Der f 1以重量計之量與過敏原Der p 2及Der f 2以重量計之量相比範圍在0.67-1.43內的組成物（視需要其中該範圍係自0.71-1.25，或自0.77-1.11）。

在一些具體實例中，可以在步驟iv)中進行過敏原萃取物(i)及過敏原萃取物(ii)之混合以獲得包含過敏原萃取物(i)以重量計之量與過敏原萃取物(ii)以重量計之量相比範圍在0.67-1.43內的組成物（視需要其中該範圍係自0.71-1.25，或自0.77-1.11）。

在一些具體實例中，可以在步驟iv)中進行過敏原萃取物(i)及過敏原萃取物(ii)之混合以獲得包含過敏原萃取物(i)以乾物質重量計之量與過敏原萃取物(ii)以乾物質重量計之量相比範圍在0.67-1.43內的組成物（視需要其中該範圍係自0.71-1.25，或自0.77-1.11）。

應理解，本發明第一態樣之具體實例亦為本發明第二態樣之具體實例且反之亦然。

本發明進一步係關於本發明之第一態樣的組成物或可藉由本發明之第二態樣獲得的組成物，其係用於治療家塵蟎過敏，例如用於緩解或減少由暴露於該等蟎或蟎過敏原引發之免疫反應。在一個相關態樣中，本發明係關於本發明之第一態樣的組成物或可藉由本發明之第二態樣獲得的組成物在製造用於治療家塵蟎過敏，例如用於緩解或減少由暴露於該等蟎或蟎過敏原引發之免疫反應之藥劑中的用途。

因此，本發明之組成物可以用於治療過敏，例如緩解或減少由暴露於HDM蟎或HDM蟎之蟎過敏原引發之免疫反應，例如緩解由暴露於「Der p」蟎或「Der f」蟎引發之免疫反應的一種或多種症狀或病徵，例如緩解與過敏性鼻炎有關之一種或多種症狀或病徵（諸如降低鼻癢之強度、減少在給定時間段（例如每天、每週、每月）內打噴嚏之次數、降低鼻塞（充血）之強度、減少鼻液之量、減少鼻液中之嗜伊紅血球計數、降低鼻液中或血清中特異性IgE抗體水準（力價）及/或減少血液中之嗜鹼性球組胺釋放），例如緩解與過敏性哮喘有關之一種或多種症狀或病徵（諸如降低給定時間段（例如每天、每週、每月）內咳嗽之強度及/或次數；降低氣喘之強度；改善呼吸短促；改善肺功能；降低肺液中或血清中之特異性IgE抗體水準（力價）；及/或減少血液中之嗜鹼性球組胺釋放）。

該等組成物可以藉由皮下注射或藉由舌下投予進行投予，典型地藉由免疫療法治療過敏。參考文獻

Batard et al. Patterns of IgE sensitization in house dust mite-allergic patients: implications for allergen immunotherapy.Allergy ; 71: 220-229, 2016。

Bordas-Le Floch V et al. A combined transcriptome and proteome analysis extends the allergome of house dust miteDermatophagoides species. PLoS ONE 12(10), 2017: e0185830。

Henmar H. et al. Fractionation of Source Materials Leads to a High Reproducibility of theSQ House Dust Mite SLIT-Tablets. Int Arch Allergy Immunol;169:23-32, 2016 DOI: 10.1159/000444016。實施例1

本實施例係關於藉由屋塵蟎及粉塵蟎各自之物種特異性醫藥等級HDM過敏原萃取物之質譜進行的分析。目的係驗證該等萃取物包含可偵測水準的藉由家塵蟎之組合轉錄組及蛋白質組分析發現且揭示於國際專利申請案WO2017/203057中的IUIS報導之過敏原以及蛋白質。方法

醫藥等級的「Der p」蟎及「Der f」蟎之過敏原萃取物分別藉由漢瑪H.等人(2016)之科學論文中所揭示之製造方法獲得。簡言之：藉由篩分來分離兩種蟎培養物各自之軀體級分及糞便粒子級分。利用水性緩衝液萃取該四種級分以分別獲得HDM軀體及糞便粒子之物種特異性萃取物。隨後，將每個物種之軀體及糞便粒子萃取物合併以便分別獲得「Der p」蟎及「Der f」蟎過敏原之物種特異性過敏原萃取物。每當合併兩種萃取物時，控制第1組過敏原及第2組過敏原之量以便獲得具有目標量的第1組過敏原及第2組過敏原中之每一種的萃取物。

該兩種獨立的物種特異性過敏原萃取物可以組合以便獲得包含該兩種物種特異性過敏原萃取物且具有分別為目標量之第1組過敏原及第2組過敏原的組成物。

分別將兩種物種特異性過敏原萃取物蒸發並使50 µg各乾燥樣品再懸浮於5 µl水中。接著，使該等樣品變性（6 M尿素、0.3 M NH₄ HCO₃ ），還原（9 mM DTT，56℃下保持15分鐘），烷基化（17 mM碘乙醯胺)且最後進行胰蛋白酶消化（5 µg胰蛋白酶，在37℃下保持過夜）。接著，藉由液相層析串聯質譜法（LC-MS/MS）分離並分析所得肽。

逆相液相層析法（Ultimate 3000 RSLC nano，Thermo）係使用C18預管柱及分析管柱以300 nl/min之流動速率進行。施加之梯度由溶劑B經220分鐘自4%線性增加至55%組成，其中溶劑A = 0.05% v/v甲酸且溶劑B = 80%v/v乙腈/0.04% v/v甲酸。

將自LC洗提之肽直接噴射至ESI-QTOF質譜儀（MaXis, Bruker）中。獲取在2 Hz下質量範圍為50-2200 m/z且以4-16 Hz之光譜速率進行MS/MS測序的光譜。

資料處理（化合物發現及電荷解卷積）係使用DataAnalysis 4.2（Bruker）進行。藉由使用MASCOT 2.2（Matrix Science）及X! Tandem搜索引擎在以下參數下針對資料庫搜索MS/MS光譜資料來鑑別蛋白質（參見以下部分）：酶=胰蛋白酶，最大漏裂解數=2，固定修飾=脲甲基（C），可變修飾=氧化（M），肽質量容差=10 ppm，片段質量容差≤ 0.1 Da。假髮現率（False discovery rate，FDR）＜ 2%（平均值為0.54%）。

用於蛋白質鑑別之資料庫係基於該兩個HDM物種「Der p」及「Der f」之內部轉錄組以及基於由Sequest搜索引擎支持之2.2版Proteome DiscovererTM電腦軟體組提供的已知胺基序列編輯。在IUIS僅報導一個物種之某一過敏原，例如過敏原Der f 35的情況下，可使用另一物種之轉錄組鑑別同源物Der p 35過敏原。IUIS報導之過敏原的胺基酸序列亦可見於IUIS首頁且額外免疫原之胺基酸序列可見於國際專利申請案WO2017/203057中。結果

總體而言，偵測所有IUIS報導的「Der p」蟎及「Der f」蟎過敏原，且在未報導兩個物種之過敏原的情況下偵測另一物種之同源物過敏原。因此，偵測兩種物種特異性過敏原萃取物中的第1組、第2組、第3組、第4組、第6組、第7組、第8組、第9組、第10組、第11組、第13組、第14組、第15組、第16組、第18組、第20組、第21組、第23組、第24組、第26組、第26組、第27組、第28組、第29組、第30組、第31組、第32組、第34組、第35組、第36組、第37組及第38組過敏原。此外，亦偵測國際專利申請案WO2017/203057中報導的「Der p」以及「Der f」形式之以下蛋白質：ID編號A0001、A0003、A0007、A0008、A0009、A0010、A0011、A0012、A0014、A0015、A0016、A0017、A0018、A0020、A0022、A0023、A0024、A0025、A0029及A0031。實例2

本實施例係關於IUIS報導之HDM過敏原及在實施例1之物種特異性萃取物中鑑別的其他蛋白質之免疫原性及過敏原性的評價。免疫原性係針對其在自HDM過敏性個體及非過敏性個體之新鮮血液分離之PBMC中誘導細胞介素IL-5反應的能力評價（活體外細胞刺激分析）且過敏原性係針對活化來自HDM過敏性供體（n=21）之新鮮全血中的嗜鹼性球細胞的能力評價。方法

藉由使用已知之重組蛋白製造技術，在細菌（大腸桿菌）中或在昆蟲細胞（Hek細胞）中表現蛋白質，製造出測試蛋白質。當在兩個物種中偵測測試蛋白質時，除了第1組蛋白質及第2組蛋白質外，僅製造出一種蛋白質（「Der p」形式或「Der f」形式），該第1組蛋白質及該第2組蛋白質在「Der p」形式或「Der f」形式中均有製造。

自經臨床驗證有過敏症狀且經CAP®分析測定針對過敏原Der p 1或Der f 2之IgE力價＞ 0.7kU/L的家塵蟎過敏性患者以及非過敏性個體獲得新鮮血液。

藉由在恆溫箱中，在37℃及5% CO₂ 下，將新鮮分離之PBMC（5×10⁶ 個/毫升）與測試蛋白質（10 μg/ml）一起培養五天，實施刺激活體外細胞介素IL-5製造之能力，接著收集細胞上清液並在-80℃下儲存。根據製造商之方案，使用ProcartaPlex多路複用免疫分析（ProcartaPlex Multiplex Immunoassays），用MAGPIX多路複用讀取器量測上清液中之細胞介素IL-5。

藉由在37℃下，用1 ng/ml或100 ng/ml濃度之測試蛋白質刺激全血1小時，實施嗜鹼性球活化測試（Basophil Activation Test，BAT）。隨後，藉由流動式細胞測量術量測嗜鹼性球之細胞表面上嗜鹼性球活化標記物（CD63）之表現。結果

所有測試蛋白質之結果示於圖1、圖2及圖3中且研究結果概述於圖4中。

值得注意的是，較高百分數（超過30%-50%）的HDM過敏性個體具有可偵測的活體外細胞介素IL-5誘導作用，但在BAT活化測試中針對六種測試蛋白質無可偵測反應：A0010（「Der f」）- SEQ ID No: 2；A0013（「Der p」）- SEQ ID No: 3；A0022（「Der p」）- SEQ ID No: 5；Der p 35 - SEQ ID NO: 7；Der f 34 - SEQ ID NO: 8及Der p 38 - SEQ ID NO: 9。

此與以下測試蛋白質形成對比：Der p 1、Der f 1、Der p 2、Der f 2及Der p 23，其中較高百分數（超過30%-50%）的HDM過敏性個體具有可偵測的活體外細胞介素IL-5誘導作用以及在BAT活化測試中可偵測之反應。

此外，此亦與其餘測試蛋白質形成對比，其中無或極低百分數之HDM過敏性個體具有可偵測的活體外細胞介素IL-5誘導作用以及在BAT活化測試中可偵測之反應。實施例3

本實施例係關於藉由「Der p」蟎及「Der f」蟎各自之物種特異性過敏原萃取物的三個不同製造批料之間實施例3之測試蛋白質之相對定量含量的質譜進行評價。方法

將每批過敏原萃取物溶解於6M尿素中，還原並用二硫蘇糖醇（Dithiothreitol，DTT）及碘乙醯胺（iodoacetamid，IAA）烷基化，並藉由消化酶胰蛋白酶裂解成肽。

接著，用特有的串聯質量標籤（TMT）標記每一批料，由此允許基於每一批料之肽中報告離子的強度進行相對定量。TMT試劑可以用於標記多達十種不同的肽樣品。對於每一樣品，使用MS/MS譜圖之低質量區域中特有的報告子質量（亦即，TMT6 126-131Da）量測肽斷裂期間之相對蛋白質表現水準。蛋白質定量係藉由比較報告離子之強度實現。

在分析（HPLC分離及MS鑑別/定量）之前，將該三個批料的經胰蛋白酶消化且TMT標記之肽合併成一份樣品。

所有質譜儀實驗均在連接至配備奈米電噴霧源（Thermo Fisher Scientific）之Orbitrap HF-X Q-Exactive的奈米級HPLC系統（來自Thermo Scientific之EASY-nLC 1000）上進行。每種肽樣品係自動進樣且在內部裝填有1.9 mm C18珠粒（Reprosil Pur-AQ, Dr Maisch）之15 cm分析管柱（50 µm內徑）上，利用範圍自5至40%乙腈/0.5%乙酸之1小時梯度分離。來自HPLC之流出物直接電噴霧至質譜儀中。Q-Exactive質譜儀係以資料依賴性採集模式操作。記錄下肽離子之全掃描（MS）及肽片段離子之片段掃描（MS/MS掃描）。所有原始資料分析均由Sequest搜索引擎作為用於肽鑑別之資料庫搜索引擎所支持的2.2版Proteome DiscovererTM電腦軟體組，利用更新的「Der p」蛋白質及「Der f」蛋白質之級聯目標/誘餌（正向及反向）資料庫進行。搜索之質量容差設定成對於肽質量為最大10 ppm且對於HCD片段離子質量為最大0.02 Da。用脲甲基化作為固定修飾且用蛋白質N末端乙醯化、甲硫胺酸氧化及必要時K、T及N末端上之TMT報告離子作為可變修飾來搜索資料。在嚴格的胰蛋白酶特異性下，允許最多兩個誤裂解。在貝氏模型（Bayesian model）中，基於序列長度及Sequest分數以統計方式評價肽鑑定。僅基於可接受的反向命中（reverse hit）次數估計假髮現率為1%之肽及蛋白質係可接受的且最少藉由2種特有肽鑑別。

該三個不同批料中蛋白質之定量結果係藉由比較所鑑別肽之報告TMT離子的相對強度提供，該所鑑別肽表示蛋白質。圖5（Der p蟎過敏原萃取物）及圖6（Der f蟎過敏原萃取物）繪示三個獨立製造批料中Th2免疫細胞反應誘導蛋白質以及第1組、第2組及第23組過敏原相對於該三個批料之正規化平均值（平均值設定為100%）的定量之量。*Der f 23及*A0022已鑑別，但未得到定量資料。

無

圖1及圖2：繪示響應於測試蛋白質而自PBMC分泌可偵測之活體外IL-5細胞介素的供體（分別為HDM過敏性患者及非過敏性個體）之百分比，該測試蛋白質係IUIS報導的「Der p」蟎及「Der f」蟎過敏原或「Der p」蟎及「Der f」蟎之蟎蛋白質，該等過敏原在國際專利申請案WO2017/203057中有揭示。

圖3：繪示響應於測試蛋白質具有陽性BAT活化的HDM過敏性患者之百分比。

圖4.繪示測試蛋白質之選擇，該等測試蛋白質能夠分別在超過50%及30%之HDM過敏性患者中誘導活體外細胞介素IL-5反應或BAT活化反應。

圖5：繪示在三個獨立的「Der p」蟎製造批料中相對於該三個批料之正規化平均值（平均值設定為100%）的Th2免疫細胞反應誘導蛋白質以及第1組、第2組及第23組過敏原之定量的量。

圖6：繪示在三個獨立的「Der f」蟎製造批料中Th2免疫細胞反應誘導蛋白質以及第1組、第2組及第23組過敏原相對於該三個批料之正規化平均值（平均值設定為100%）的定量之量。*Der f 23及*A0022已鑑別，但未得到定量資料。

Claims

一種組成物，其包含 - 包含過敏原Der p 1及Der p 2以及具有SEQ ID No: 1、3、5、7、9及11之蛋白質之家塵蟎（house dust mite）的屋塵蟎（Dermatophagoides pteronyssinus ）之過敏原萃取物（過敏原萃取物(i)）；以及 - 包含過敏原Der f 1及Der f 2以及具有SEQ ID No: 2、4、6、8、10及12之蛋白質之家塵蟎的粉塵蟎（Dermatophagoides farinae ）之過敏原萃取物（過敏原萃取物(ii)），其中該組成物包含至少一對獨立地以受控量存在的成對蛋白質，其中該成對蛋白質選自由以下者組成之組a)-f)：a) SEQ ID No: 1及SEQ ID No: 2；b) SEQ ID No: 3及SEQ ID No: 4；c) SEQ ID No: 5及SEQ ID No: 6；d) SEQ ID No: 7及SEQ ID No: 8；e) SEQ ID No: 9及SEQ ID No: 10；以及f) SEQ ID No: 11及SEQ ID No: 12。
如請求項1所述之組成物，其中該過敏原萃取物(i)中該（該等）具有SEQ ID NO: 1、3、5、7、9或11之蛋白質中之任一種的受控量與包含所需量的該（該等）具有SEQ ID NO: 1、3、5、7、9及/或11之蛋白質的參照樣品中相同蛋白質之受控量相比，範圍在0.7至1.3。
如前述請求項中任一項所述之組成物，其中該過敏原萃取物(ii)中該（該等）具有SEQ ID NO: 2、4、6、8、10或12之蛋白質中之任一種的受控量與包含所需量的該（該等）具有SEQ ID NO: 2、4、6、8、10及/或12之蛋白質的參照樣品中相同蛋白質之受控量相比，範圍在0.7至1.3。
如前述請求項中任一項所述之組成物，其中該受控量係藉由串聯質量標籤（tandem mass tag；TMT）質譜法測定。
如前述請求項中任一項所述之組成物，其中該過敏原萃取物(i)至少包含受控量的該具有SEQ ID No: 1之蛋白質且該過敏原萃取物(ii)至少包含受控量的該具有SEQ ID No: 2之蛋白質。
如前述請求項中任一項所述之組成物，其中該過敏原萃取物(i)至少包含受控量的該具有SEQ ID No: 3之蛋白質且該過敏原萃取物(ii)至少包含受控量的該具有SEQ ID No: 4之蛋白質。
如前述請求項中任一項所述之組成物，其中該過敏原萃取物(i)至少包含受控量的該具有SEQ ID No: 5之蛋白質且該過敏原萃取物(ii)至少包含受控量的該具有SEQ ID No: 6之蛋白質。
如前述請求項中任一項所述之組成物，其中該過敏原萃取物(i)至少包含受控量的該具有SEQ ID No: 11之蛋白質且該過敏原萃取物(ii)至少包含受控量的該具有SEQ ID No: 12之蛋白質。
如前述請求項中任一項所述之組成物，其中該等HDM蛋白質對a)-f)中至少兩對、至少三對或至少四對係以受控量存在。
如請求項2至18中任一項所述之組成物，其中包含所需量的過敏原萃取物(i)中該等具有SEQ ID NO: 1、3、5、7、9或11之蛋白質中之任一種，或過敏原Der p 1、Der p 2或Der p 23的參照樣品係藉由與該過敏原萃取物(i)相同之製造方法製造的樣品，且其中包含所需量的過敏原萃取物(ii)中該等具有SEQ ID NO: 2、4、6、8、10或12之蛋白質中之任一種，或過敏原Der f 1、Der f 2或Der f 23的參照樣品係藉由與該過敏原萃取物(ii)相同之製造方法製造的樣品。
一種製備如請求項1至10中任一項所述之組成物的方法，其包含以下步驟： i)分別萃取自家塵蟎的屋塵蟎獲得的蟎軀體及蟎糞便粒子，隨後混合該等分開的蟎軀體及蟎糞便萃取物，以獲得包含過敏原Der p 1以重量計之量與過敏原Der p 2以重量計之量相比範圍在0.67-1.43內之過敏原萃取物(i)（視需要其中該範圍係自0.71-1.25，或自0.77-1.11）且其中該過敏原萃取物(i)還包含具有SEQ ID No: 1、3、5、7、9及11之蛋白質； ii)分別萃取自家塵蟎的粉塵蟎獲得的蟎軀體及蟎糞便粒子，隨後混合該等分開的蟎軀體及蟎糞便萃取物以獲得包含過敏原Der f 1以重量計之量與過敏原Der f 2以重量計之量相比範圍在0.67-1.43內之過敏原萃取物(ii)（視需要其中該範圍係自0.71-1.25，或自0.77-1.11）且其中該過敏原萃取物(ii)還包含具有SEQ ID No: 2、4、6、8、10及12之蛋白質； iii)控制過敏原萃取物(i)中該等具有SEQ ID No: 1、3、5、7、9及11之蛋白質中之至少一種的量與包含所需量的該（該等）具有SEQ ID No: 1、3、5、7、9及11之蛋白質的參照樣品中相同蛋白質之量相比範圍在0.7-1.3內； iii)控制過敏原萃取物(ii)中該等具有SEQ ID No: 2、4、6、8、10及12之蛋白質中之至少一種的量與包含所需量的該（該等）具有SEQ ID No: 2、4、6、8、10及12之蛋白質的參照樣品中相同蛋白質之量相比範圍在0.7-1.3內；以及 iv)隨後，將一部分過敏原萃取物(i)與一部分過敏原萃取物(ii)混合以獲得包含該等過敏原Der p 1及Der f 1以重量計之量與該等過敏原Der p 2及Der f 2以重量計之量相比範圍在0.67-1.43內的組成物，其中至少一對成對蛋白質獨立地以受控量存在，所述成對蛋白質選自由以下者組成的組a)-f)：a) SEQ ID No: 1及SEQ ID No:2；b) SEQ ID No:3及SEQ ID No:4；c) SEQ ID No:5及SEQ ID No:6；d) SEQ ID No:7及SEQ ID No:8；e) SEQ ID No:9及SEQ ID No:10；以及f) SEQ ID No:11及SEQ ID No:12。