WO2022138758A1 - 標的抗原の測定方法並びにそれに用いる不溶性粒子及び標的抗原測定用キット - Google Patents

標的抗原の測定方法並びにそれに用いる不溶性粒子及び標的抗原測定用キット Download PDF

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昌子 下本
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デンカ株式会社
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    • C07K16/4291—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against immunoglobulins against an allotypic or isotypic determinant on Ig against IgE
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    • G01N33/545—Synthetic resin

Definitions

  • the present invention relates to a method for measuring a target antigen, insoluble particles used therein, and a kit for measuring the target antigen.
  • a method for measuring a target antigen using an immune reaction there is a method using a granular carrier such as latex (for example, Patent Document 1).
  • a granular carrier to which an antibody specific to the target antigen is bound causes an antigen-antibody reaction in the presence of the target antigen. Then, due to its specificity and affinity, the target antigens are bridged to bind to each other and aggregate. The presence / absence and abundance of the target antigen are measured by the presence / absence of the generated agglomerates and the degree of agglutination.
  • the measurement method using such an immune reaction may have a problem that the detection sensitivity is insufficient.
  • the occurrence of non-specific adsorption is reduced so as not to reduce the measurement sensitivity.
  • polysaccharide-modified composite particles are also disclosed.
  • the detection sensitivity may be improved.
  • An object of the present invention is to provide insoluble particles having high agglutination ability, a kit for measuring a target antigen using the insoluble particles, and a method for measuring a target antigen.
  • the present inventors have stated that a granular carrier carrying an antibody in which a sugar chain is not bound to a heavy chain is more likely to aggregate than a granular carrier in which an antibody in which a sugar chain is bound to a heavy chain is carried. The finding led to the present invention.
  • the present invention relates to insoluble particles containing a granular carrier and an antibody against a target antigen carried on the granular carrier, wherein no sugar chain is bound to the heavy chain of the antibody.
  • the present invention relates to a kit for measuring a target antigen, which comprises the insoluble particles or contains an antibody and a granular carrier for preparing the insoluble particles.
  • the present invention also relates to a method for measuring a target antigen using the above-mentioned insoluble particles.
  • INDUSTRIAL APPLICABILITY it is possible to provide insoluble particles having excellent agglutination ability when an antigen-antibody reaction occurs. By using insoluble particles with excellent agglutination ability, highly sensitive detection of the target antigen can be expected.
  • the insoluble particles contain a granular carrier and an antibody against a target antigen supported on the granular carrier, and no sugar chain is bound to the heavy chain of the antibody.
  • the antibody against the target antigen may be in an embodiment in which not only the sugar chain is not bound to the heavy chain but also the sugar chain is not bound to the light chain.
  • Target antigens include, for example, protein markers such as CRP (C-reactive protein), prostate-specific antigen, ferritin, ⁇ -2 microglobulin, myoglobin, hemoglobin, albumin, creatinine, and immunoglobulins such as IgG, IgE, IgA, and IgM.
  • protein markers such as CRP (C-reactive protein), prostate-specific antigen, ferritin, ⁇ -2 microglobulin, myoglobin, hemoglobin, albumin, creatinine, and immunoglobulins such as IgG, IgE, IgA, and IgM.
  • Various tumor markers lipoproteins such as LDL, HDL, TG, influenza A virus, influenza B virus, RS virus (RSV), rhinovirus, rotavirus, norovirus, adenovirus, astrovirus, HAV, HBs, HCV, Viral antigens such as HIV and EBV, Chlamydia trachomatis, lytic bacteria, pertussis, Helicobacter pylori, Leptspira, Treponema paridam, Toxoplasma gondii, Borrelia, Regionella spp., Charcoal spp., MRSA and other bacterial antigens, bacteria, etc.
  • Viral antigens such as HIV and EBV, Chlamydia trachomatis, lytic bacteria, pertussis, Helicobacter pylori, Leptspira, Treponema paridam, Toxoplasma gondii, Borrelia, Regionella spp., Charcoal spp.
  • Produced toxins mycoplasma lipid antigens, peptide hormones such as human villous gonadotropin, steroids such as steroid hormones, physiologically active amines such as epinephrine and morphine, vitamins such as vitamin B, prostaglandins, antibiotics such as tetracycline Substances, pesticides, environmental hormones, etc., but are not limited to these.
  • the granular carrier examples include particles such as latex particles, ceramic particles, alumina particles, silica-alumina particles, and carbon black particles. Among these particles, latex particles are preferable.
  • the material of the latex include polystyrene, divinylbenzene and the like, and polystyrene is preferable.
  • the average particle size of the granular carrier can be 0.1 to 5 ⁇ m.
  • the particle size of the granular carrier can be measured by a dynamic light scattering method. In the present specification, the "average particle size" is the particle size when the integrated value from the small particle size reaches 50% of the total in the volume-based particle size distribution curve obtained by the dynamic light scattering method. It means (median diameter).
  • the antibody is not particularly limited as long as it can specifically bind to the target antigen, and may be any of IgG, IgM, IgA, IgD and IgE, but IgG is preferable.
  • IgG is composed of two heavy chains (H chain) and two light chains (L chain).
  • the heavy chain is composed of a variable region (VH), a first constant region (CH1), a second constant region (CH2), and a third constant region (CH3) in order from the N-terminal.
  • the light chain is composed of a variable region (VL) and a constant region (CL) in order from the N-terminal.
  • the portion composed of CH2 and CH3 is the Fc region.
  • the antibody may be a fragment of IgG in which a heavy chain is present, or may be rIgG (reduced IgG) composed of one heavy chain and one light chain, and may be from two heavy chains. It may be a fragment composed of one heavy chain.
  • the sugar chain may not be bound to at least one heavy chain, and the sugar chain may not be bound to both heavy chains.
  • the antibody When the antibody is IgG, its Fc region has an amino acid sequence having 90% or more identity with the amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 1 to 13, but the sugar chain binding motif Asn-Xaa-Ser / Thr. Those in which (Xaa is an arbitrary amino acid) are not present are preferable.
  • SEQ ID NO: 1 is Protein Accession No. P01857 (human Ig gamma-1 C region), and SEQ ID NO: 2 is Protein Accession No. P01859 (human Ig gamma-2 C region), and SEQ ID NO: 3 Is Protein Accession No. P01860 (human Ig gamma-3 C region), SEQ ID NO: 4 is Protein Accession No. P01861 (human Ig gamma-4 C region), and SEQ ID NO: 5 is Protein Accession No. P01868 (mouse Ig gamma-1 C region), SEQ ID NO: 6 is Protein Accession No. P01863 (mouse Ig gamma-2a C region), and SEQ ID NO: 7 is Protein Accession No.
  • SEQ ID NO: 8 is Protein Accession No. P03987 (mouse Ig gamma-3 C region)
  • SEQ ID NO: 9 is Protein Accession No. P20759 (rat Ig gamma-1 C region).
  • SEQ ID NO: 10 is Protein Accession No. P20760 (rat Ig gamma-2a C region)
  • SEQ ID NO: 11 is Protein Accession No. P20761 (rat Ig gamma-2b C region)
  • SEQ ID NO: 12 is Protein Accession No. P20762 (rat Ig gamma-2c C region)
  • SEQ ID NO: 13 is Protein Accession No. P01870 (rabbit Ig gamma C region).
  • the Fc region thereof is an amino acid sequence having 90% or more identity with the amino acid sequence of SEQ ID NO: 14 to 26 or the amino acid sequence of SEQ ID NO: 14 to 26, and SEQ ID NO: 14 is the 180th.
  • SEQ ID NO: 15 is 176th
  • SEQ ID NO: 16 is 227th
  • SEQ ID NO: 17 is 177th
  • SEQ ID NO: 18 is 174th
  • SEQ ID NO: 19 is 180th
  • SEQ ID NO: 20 is 185th.
  • SEQ ID NO: 21 is the 179th
  • SEQ ID NO: 22 is the 176th
  • SEQ ID NO: 23 is the 172nd
  • SEQ ID NO: 24 is the 183rd
  • SEQ ID NO: 25 is the 179th
  • SEQ ID NO: 26 is the 173rd Asp. It may have an amino acid sequence that is not mutated.
  • SEQ ID NO: 14 is the 180th of SEQ ID NO: 1
  • SEQ ID NO: 15 is the 176th of SEQ ID NO: 2
  • SEQ ID NO: 16 is the 227th of SEQ ID NO: 3
  • SEQ ID NO: 17 is the 177th of SEQ ID NO: 4.
  • SEQ ID NO: 18 is the 174th of SEQ ID NO: 5
  • SEQ ID NO: 19 is the 180th of SEQ ID NO: 6
  • SEQ ID NO: 20 is the 185th of SEQ ID NO: 7
  • SEQ ID NO: 21 is the 179th sequence of SEQ ID NO: 8.
  • SEQ ID NO: 22 is the 176th of SEQ ID NO: 9
  • SEQ ID NO: 23 is the 172nd of SEQ ID NO: 10
  • SEQ ID NO: 24 is the 183rd of SEQ ID NO: 11
  • SEQ ID NO: 25 is the 179th of SEQ ID NO: 26. Is the 173rd sequence of SEQ ID NO: 13, in which Asn is replaced with Asp.
  • the Fc region thereof is an amino acid sequence having 90% or more identity with the amino acid sequence of SEQ ID NO: 27 to 39 or the amino acid sequence of SEQ ID NO: 27 to 39, and SEQ ID NO: 27 is the 180th.
  • SEQ ID NO: 28 is 176th
  • SEQ ID NO: 29 is 227th
  • SEQ ID NO: 30 is 177th
  • SEQ ID NO: 31 is 174th
  • SEQ ID NO: 32 is 180th
  • SEQ ID NO: 33 is 185th.
  • SEQ ID NO: 34 is the 179th
  • SEQ ID NO: 35 is the 176th
  • SEQ ID NO: 36 is the 172nd
  • SEQ ID NO: 37 is the 183rd
  • SEQ ID NO: 38 is the 179th
  • SEQ ID NO: 39 is the 173rd Gln. It may have an amino acid sequence that is not mutated.
  • SEQ ID NO: 27 is the 180th of SEQ ID NO: 1
  • SEQ ID NO: 28 is the 176th of SEQ ID NO: 2
  • SEQ ID NO: 29 is the 227th of SEQ ID NO: 3
  • SEQ ID NO: 30 is the 177th of SEQ ID NO: 4.
  • SEQ ID NO: 31 is the 174th of SEQ ID NO: 5
  • SEQ ID NO: 32 is the 180th of SEQ ID NO: 6
  • SEQ ID NO: 33 is the 185th of SEQ ID NO: 7
  • SEQ ID NO: 34 is the 179th of SEQ ID NO: 8.
  • SEQ ID NO: 35 is the 176th of SEQ ID NO: 9
  • SEQ ID NO: 36 is the 172nd of SEQ ID NO: 10
  • SEQ ID NO: 37 is the 183rd of SEQ ID NO: 11
  • SEQ ID NO: 38 is the 179th of SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 39. Is the 173rd sequence of SEQ ID NO: 13, in which Asn is replaced with Gln.
  • the Fc region is an amino acid sequence having 90% or more identity with the amino acid sequence of SEQ ID NO: 40 to 52 or the amino acid sequence of SEQ ID NO: 40 to 52, and SEQ ID NO: 40 is the 182nd.
  • SEQ ID NO: 41 is 178th
  • SEQ ID NO: 42 is 229th
  • SEQ ID NO: 43 is 179th
  • SEQ ID NO: 44 is 176th
  • SEQ ID NO: 46 is 182nd
  • SEQ ID NO: 45 is 187th.
  • SEQ ID NO: 47 is 181st
  • SEQ ID NO: 48 is 178th
  • SEQ ID NO: 49 is 174th
  • SEQ ID NO: 50 is 185th
  • SEQ ID NO: 51 is 181st
  • SEQ ID NO: 52 is 175th Ala. It may have an amino acid sequence that is not mutated.
  • SEQ ID NO: 40 is the 182nd of SEQ ID NO: 1
  • SEQ ID NO: 41 is the 178th of SEQ ID NO: 2
  • SEQ ID NO: 42 is the 229th of SEQ ID NO: 3
  • SEQ ID NO: 43 is the 179th of SEQ ID NO: 4.
  • SEQ ID NO: 44 is the 176th of SEQ ID NO: 5
  • SEQ ID NO: 45 is the 182nd of SEQ ID NO: 6
  • SEQ ID NO: 46 is the 187th of SEQ ID NO: 7
  • SEQ ID NO: 47 is the 181st of SEQ ID NO: 8.
  • SEQ ID NO: 48 is the 178th of SEQ ID NO: 9
  • SEQ ID NO: 49 is the 174th of SEQ ID NO: 10
  • SEQ ID NO: 50 is the 185th of SEQ ID NO: 11
  • SEQ ID NO: 51 is the 181st of SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 52. Is the 175th sequence of SEQ ID NO: 13, in which Thr is replaced with Ala.
  • An antibody in which a sugar chain is not bound to a heavy chain can be produced by using a plant transient expression system, or can be produced by using a genetically modified plant.
  • the plant transient expression system for example, the method described in Japanese Patent No. 5015012 can be used.
  • an antibody in which a sugar chain is not bound to a heavy chain can also be obtained as a gene recombinant using a mammalian cell as an expression host.
  • Examples of the mammalian cell in that case include, but are not limited to, CHO (Chinese Hamster Ovaly) cells and HEK293 (Human Embryonic Kidney cells 293) cells.
  • a transient expression system using a plasmid vector lacking self-sustaining replication ability and a virus vector, and an episomal vector imparting a nuclear translocation signal and having self-sustaining replication ability were used.
  • examples thereof include a plasmid expression system in which a target gene is inserted into the genome of an expression host, and the like is not particularly limited.
  • a general method for example, a physical adsorption method or a chemical binding method can be used.
  • the above-mentioned insoluble particles are used as the method for measuring the target antigen of one embodiment.
  • Such a measuring method can be performed to qualitatively evaluate the presence or absence of the target antigen in the test sample, or to quantitatively evaluate the concentration of the target antigen in the test sample.
  • the measuring method comprises contacting an insoluble particle with a test sample that may contain a target antigen, and measuring the agglutination reaction of the insoluble particle by the antigen-antibody reaction between the antibody and the target antigen.
  • a test sample that may contain a target antigen
  • the insoluble particles prepared particles may be used, or insoluble particles may be prepared by binding a granular carrier and an antibody in which a sugar chain is not bound to a heavy chain at the time of measurement.
  • the insoluble particles and the test sample that can contain the target antigen can be brought into contact with each other.
  • the insoluble particles are aggregated by the interaction between the target antigen contained in the test sample and the antibody carried on the granular carrier, and the absorbance of the suspension changes.
  • the amount of change in absorbance (endpoint method) or rate of change (rate method) is measured.
  • the turbidity method or the colorimetric method is preferably used for the measurement.
  • an aggregation reaction of insoluble particles can be caused. Be measured.
  • the time for performing the agglutination reaction can be 1 minute to 30 minutes, preferably 1 minute to 10 minutes, but is not limited to these.
  • the temperature at which the agglutination reaction is carried out can be 35 ° C. to 40 ° C., and can be 36 to 38 ° C., but is not limited thereto.
  • a calibration curve is drawn by plotting the concentration of the antigen to be measured in the standard sample on the horizontal axis and the amount or rate of change in the measured absorbance on the vertical axis.
  • the test sample is not particularly limited as long as it can contain a target antigen, and examples thereof include body fluids such as blood, serum, plasma, urine, stool, saliva, interstitial fluid, spinal fluid, and swabs, or dilutions thereof. Blood, serum, plasma, urine, stool, spinal fluid or dilutions thereof are preferred.
  • the target antigen measurement kit according to the embodiment contains the above-mentioned insoluble particles.
  • the target antigen measurement kit can be used to qualitatively evaluate the presence or absence of the target antigen in the test sample, or to quantitatively evaluate the concentration of the target antigen in the test sample, and more specifically. Can be used in the method for measuring the target antigen.
  • the target antigen measurement kit comprises a granular carrier and an antibody in which a sugar chain is not bound to a heavy chain, and both are bound at the time of measurement to obtain an antibody in which a sugar chain is not bound to the heavy chain. It may be in the form of preparing a granular carrier to be carried.
  • the target antigen measurement kit may further contain a target antigen for use in positive control or calibration line preparation, a buffer for diluting the test sample, a buffer for mixing the insoluble particles with the test sample.
  • a buffer solution for binding an antibody to which a sugar chain is not bound to a heavy chain and a granular carrier may be contained.
  • An antibody having a heavy chain constant region consisting of SEQ ID NO: 5 was prepared by the following method.
  • an anti-IgE antibody light chain coding vector was obtained using the potato virus X (PVX) vector pICH56131 (FIG. 3) and synthetic DNA containing the anti-IgE antibody light chain coding sequence and the BsaI site.
  • PVX potato virus X
  • pICH56131 FIG. 3
  • synthetic DNA containing the anti-IgE antibody light chain coding sequence and the BsaI site.
  • Each of these vectors was added to separate Agrobacterium competent cells, transformed by electroporation, and cultured at 28 ° C. for 3 days. Mix each infiltration buffer (10 mM MES 10 mM ⁇ 4 pH 5.5) so that the culture solution becomes 1/1000, infiltrate the leaves of Nicotiana vensamiana, and harvest in about one week. did. The harvested leaves (infected leaves) were frozen.
  • Anti-IgE Ab-TA ⁇ Preparation of anti-IgE antibody (Anti-IgE Ab-TA) in which no sugar chain binding motif is present>
  • An antibody having a heavy chain constant region sequence of SEQ ID NO: 44 was prepared in the same manner as an antibody (Anti-IgE Ab-Wid) having a heavy chain constant region consisting of SEQ ID NO: 5.
  • the sugar chain is bound to the heavy chain of Anti-IgE Ab-Wid, and the sugar chain is not bound to the heavy chains of Anti-IgE Ab-NQ and Anti-IgE Ab-TA. This was confirmed by Western blotting of ⁇ 1,3-fucose antibody.
  • ⁇ Latex agglutination test of anti-IgE antibody> Preparation of Reagents Using an antibody against IgE, a measurement reagent by the immunoagglutination method was prepared as follows. i) 0.07 mg of the antibody was added to 1 mL of the polystyrene latex suspension to prepare insoluble particles in which the antibody was carried on the polystyrene latex particles. The insoluble particles were suspended in a buffer solution (glycine, pH 7.3) so as to be 0.125% by mass, and an insoluble particle suspension was prepared. ii) A buffer solution (glycine, pH 8.3) was prepared.
  • a buffer solution glycine, pH 8.3
  • the automatic analyzer uses a Hitachi 7180 automatic analyzer, and the antigen of the target antigen (IgE) sample of each concentration and the antibody carried on the polystyrene latex particles according to (1).
  • the aggregated state of the insoluble particles via the antibody reaction was measured by the light transmittance. Specifically, 140 ⁇ L of the buffer solution prepared in (1) and (ii) above was added to 3.5 ⁇ L of the IgE solution, and this mixed solution was stirred and mixed at 37 ° C. After standing for 5 minutes, 70 ⁇ L of the insoluble particle suspension was added, and the mixture was further stirred and mixed at 37 ° C. The agglutination reaction for about 5 minutes was measured as the amount of change in absorbance.
  • Anti-CRP Ab-Wid An antibody having a heavy chain constant region consisting of SEQ ID NO: 1 was prepared by the following method.
  • an anti-CRP antibody light chain coding vector was obtained using the potato virus X (PVX) vector pICH56131 (FIG. 3) and synthetic DNA containing the anti-CRP antibody light chain coding sequence and the BsaI site.
  • PVX potato virus X
  • pICH56131 FIG. 3
  • synthetic DNA containing the anti-CRP antibody light chain coding sequence and the BsaI site.
  • Each of these vectors was added to separate Agrobacterium competent cells, transformed by electroporation, and cultured at 28 ° C. for 3 days. Mix each infiltration buffer (10 mM MES 10 mM ⁇ 4 pH 5.5) so that the culture solution becomes 1/1000, infiltrate the leaves of Nicotiana vensamiana, and harvest in about one week. did. The harvested leaves (infected leaves) were frozen.
  • Anti-CRP Ab-TA ⁇ Preparation of anti-CRP antibody (Anti-CRP Ab-TA) in which no sugar chain binding motif is present>
  • An antibody having a heavy chain constant region sequence consisting of SEQ ID NO: 40 was prepared in the same manner as an antibody having a heavy chain constant region consisting of SEQ ID NO: 1 (Anti-CRP Ab-Wild).
  • ⁇ Latex agglutination test of anti-CRP antibody> (1) Preparation of reagent Using the antibody against CRP, the measurement reagent by the immunoaggregation method was prepared as follows. i) 0.06 mg of the antibody was added to 1 mL of the polystyrene latex suspension to prepare insoluble particles in which the antibody was carried on the polystyrene latex particles. The insoluble particles were suspended in a buffer solution (glycine, pH 7.3) so as to be 0.110% by mass to prepare an insoluble particle suspension. ii) A buffer solution (glycine, pH 8.3) was prepared.
  • a buffer solution glycine, pH 8.3
  • the automatic analyzer uses a Hitachi 3500 type automatic analyzer, and the antigen of the target antigen (CRP) sample of each concentration and the antibody carried on the polystyrene latex particles described in (1).
  • the aggregated state of the insoluble particles via the antibody reaction was measured by the light transmittance. Specifically, 100 ⁇ L of the buffer solution prepared in (1) and (ii) above was added to 2.0 ⁇ L of the CRP solution, and this mixed solution was stirred and mixed at 37 ° C. After standing for 5 minutes, 100 ⁇ L of the insoluble particle suspension was added, and the mixture was further stirred and mixed at 37 ° C. The agglutination reaction for about 5 minutes was measured as the amount of change in absorbance.

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Abstract

粒状担体と、上記粒状担体に担持された、標的抗原に対する抗体と、を含有する不溶性粒子であって、上記抗体の重鎖に糖鎖が結合していない、不溶性粒子。

Description

標的抗原の測定方法並びにそれに用いる不溶性粒子及び標的抗原測定用キット
　本発明は、標的抗原の測定方法並びにそれに用いる不溶性粒子及び標的抗原測定用キットに関する。
　免疫反応を利用した標的抗原の測定方法として、ラテックスなどの粒状担体を利用する方法がある（例えば特許文献１）。標的抗原に特異的な抗体が結合された粒状担体は、標的抗原が存在すると、抗原抗体反応を生じる。そして、その特異性及び親和力により、標的抗原を橋渡しにして互いに結合し、凝集する。生じた凝集塊の有無や凝集の程度により、標的抗原の有無や存在量が測定される。
　このような免疫反応を利用した測定方法は、検出感度が不十分であるという問題が生じることがあり、例えば特許文献２には、測定の感度が低下しないよう非特異的吸着の発生が低減された多糖修飾複合粒子が開示される。
特開２０１７－８３４４０号公報 特開２００９－１６２５３７号公報
　しかしながら、上述の検出感度には、未だ改善の余地がある。ここで、標的抗原に特異的な抗体が結合された粒状担体（を含有する不溶性粒子）の凝集性が高いと、微量の標的抗原であっても検出することができるようになると考えられるため、検出感度が向上する可能性がある。
　本発明の課題は、凝集能の高い不溶性粒子、これを用いた標的抗原測定用キット及び標的抗原の測定方法を提供することである。
　本発明者らは、重鎖に糖鎖が結合していない抗体が担持された粒状担体が、重鎖に糖鎖が結合している抗体が担持された粒状担体に比べて凝集しやすいことを見出し、本発明に至った。
　本発明は、粒状担体と、上記粒状担体に担持された、標的抗原に対する抗体と、を含有する不溶性粒子であって、上記抗体の重鎖に糖鎖が結合していない、不溶性粒子に関する。
　本発明は、上記不溶性粒子を含む、又は、上記不溶性粒子を調製するための抗体及び粒状担体を含む、標的抗原測定用キットに関する。
　本発明は、また、上記不溶性粒子を用いる、標的抗原の測定方法に関する。
　本発明により、抗原抗体反応が生じたときの凝集能に優れた不溶性粒子を提供することができる。凝集能に優れた不溶性粒子を使用することで、標的抗原の高感度な検出が期待できる。
抗ＩｇＥ抗体感作ラテックスの凝集反応の結果を示すグラフである。 抗ＣＲＰ抗体感作ラテックスの凝集反応の結果を示すグラフである。 ＴＭＶベクター（ｐＩＣＨ５６１２２）及びＰＶＸベクター（ｐＩＣＨ５６１３１）のＴ－ＤＮＡ領域を示す模式図である。
　以下、本発明の実施形態について詳細に説明する。
　一実施形態に係る不溶性粒子は、粒状担体と、粒状担体に担持された、標的抗原に対する抗体と、を含有しており、抗体の重鎖に糖鎖が結合していない。標的抗原に対する抗体は、重鎖に糖鎖が結合していないだけでなく、軽鎖にも糖鎖が結合していない態様でもよい。
　標的抗原は、例えば、ＣＲＰ（Ｃ反応性蛋白質）、前立腺特異抗原、フェリチン、β－２マイクログロブリン、ミオグロビン、ヘモグロビン、アルブミン、クレアチニン等のタンパク質マーカー、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＡ、ＩｇＭ等の免疫グロブリン、各種腫瘍マーカー、ＬＤＬ、ＨＤＬ、ＴＧ等のリポ蛋白、Ａ型インフルエンザウイルス、Ｂ型インフルエンザウイルス、ＲＳウイルス（ＲＳＶ）、ライノウイルス、ロタウイルス、ノロウイルス、アデノウイルス、アストロウイルス、ＨＡＶ、ＨＢs、ＨＣＶ、ＨＩＶ、ＥＢＶ等のウイルス抗原、クラミジア・トラコマティス、溶連菌、百日咳菌、ヘリコバクター・ピロリ、レプトスピラ、トレポネーマ・パリダム、トキソプラズマ・ゴンディ、ボレリア、レジオネラ属菌、炭疽菌、ＭＲＳＡ等の細菌抗原、細菌等が産生する毒素、マイコプラズマ脂質抗原、ヒト絨毛製ゴナドトロピン等のペプチドホルモン、ステロイドホルモン等のステロイド、エピネフリンやモルヒネ等の生理活性アミン類、ビタミンＢ類等のビタミン類、プロスタグランジン類、テトラサイクリン等の抗生物質、農薬、環境ホルモン等が挙げられるがこれらに限定されるものではない。
　粒状担体は、ラテックス粒子、セラミック粒子、アルミナ粒子、シリカ－アルミナ粒子、カーボンブラック粒子等の粒子が挙げられる。これらの粒子の中ではラテックス粒子が好ましい。ラテックスの材質は、例えば、ポリスチレン、ジビニルベンゼン等が挙げられ、ポリスチレンであることが好ましい。粒状担体の平均粒径は０．１～５μｍとすることができる。なお、粒状担体の粒径は、動的光散乱法によって測定することができる。本明細書において「平均粒径」とは、動的光散乱法によって得られた体積基準の粒径の分布曲線において、小粒径からの積算値が全体の５０％に達した時の粒径（メディアン径）を意味する。
　抗体は、標的抗原に特異的に結合し得るものであれば特に制限されず、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ及びＩｇＥのいずれであってもよいが、ＩｇＧであることが好ましい。ＩｇＧは２本の重鎖（Ｈ鎖）及び２本の軽鎖（Ｌ鎖）から構成される。重鎖はＮ末端から順に、可変領域（ＶＨ）、第一定常領域（ＣＨ１）、第二定常領域（ＣＨ２）及び第三定常領域（ＣＨ３）から構成されている。軽鎖はＮ末端から順に、可変領域（ＶＬ）及び定常領域（ＣＬ）から構成されている。ＣＨ２及びＣＨ３から構成される部分がＦｃ領域である。１本の重鎖と１本の軽鎖は、ＣＨ１に存在するシステイン残基及びＣＬに存在するシステイン残基のジスルフィド結合により結合している。また、重鎖同士は、ＣＨ１とＣＨ２の間に位置するヒンジ領域に存在するシステイン残基同士のジスルフィド結合により結合している。抗体は、重鎖が存在するＩｇＧの断片であってもよく、１本の重鎖及び１本の軽鎖から構成されるｒＩｇＧ（還元型ＩｇＧ）であってもよく、２本の重鎖から構成される断片であってもよく、１本の重鎖から構成される断片であってよい。２本の重鎖が存在する抗体において、少なくとも一方の重鎖に糖鎖が結合していなければよく、両方の重鎖に糖鎖が結合していなくてもよい。
　抗体がＩｇＧである場合、そのＦｃ領域は、配列番号１～１３のいずれか一つのアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を有するが、糖鎖結合モチーフＡｓｎ－Ｘａａ－Ｓｅｒ／Ｔｈｒ（Ｘａａは任意のアミノ酸である）が存在しないものが好ましい。
　ここで、配列番号１は、Protein Accession No. P01857 (human Ig gamma-1 C region)であり、配列番号２は、Protein Accession No. P01859 (human Ig gamma-2 C region)であり、配列番号３は、Protein Accession No. P01860 (human Ig gamma-3 C region)であり、配列番号４は、Protein Accession No. P01861 (human Ig gamma-4 C region)であり、配列番号５は、Protein Accession No. P01868 (mouse Ig gamma-1 C region)であり、配列番号６は、Protein Accession No. P01863 (mouse Ig gamma-2a C region)であり、配列番号７は、Protein Accession No. P01867 (mouse Ig gamma-2b C region)であり、配列番号８は、Protein Accession No. P03987 (mouse Ig gamma-3 C region)であり、配列番号９は、Protein Accession No. P20759 (rat Ig gamma-1 C region)であり、配列番号１０は、Protein Accession No. P20760 (rat Ig gamma-2a C region)であり、配列番号１１は、Protein Accession No. P20761 (rat Ig gamma-2b C region)であり、配列番号１２は、Protein Accession No. P20762 (rat Ig gamma-2c C region)であり、配列番号１３は、Protein Accession No. P01870 (rabbit Ig gamma C region)である。
　抗体がＩｇＧである場合、そのＦｃ領域は、配列番号１４～２６のアミノ酸配列又は配列番号１４～２６のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列であって、配列番号１４は１８０番目の、配列番号１５は１７６番目の、配列番号１６は２２７番目の、配列番号１７は１７７番目の、配列番号１８は１７４番目の、配列番号１９は１８０番目の、配列番号２０は１８５番目の、配列番号２１は１７９番目の、配列番号２２は１７６番目の、配列番号２３は１７２番目の、配列番号２４は１８３番目の、配列番号２５は１７９番目の、又は配列番号２６は１７３番目のＡｓｐが変異していないアミノ酸配列を有するものであってよい。
　ここで、配列番号１４は配列番号１の１８０番目の、配列番号１５は配列番号２の１７６番目の、配列番号１６は配列番号３の２２７番目の、配列番号１７は配列番号４の１７７番目の、配列番号１８は配列番号５の１７４番目の、配列番号１９は配列番号６の１８０番目の、配列番号２０は配列番号７の１８５番目の、配列番号２１は配列番号８の１７９番目の、配列番号２２は配列番号９の１７６番目の、配列番号２３は配列番号１０の１７２番目の、配列番号２４は配列番号１１の１８３番目の、配列番号２５は配列番号１２の１７９番目の、配列番号２６は配列番号１３の１７３番目の、ＡｓｎがＡｓｐに置換されたものである。
　抗体がＩｇＧである場合、そのＦｃ領域は、配列番号２７～３９のアミノ酸配列又は配列番号２７～３９のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列であって、配列番号２７は１８０番目の、配列番号２８は１７６番目の、配列番号２９は２２７番目の、配列番号３０は１７７番目の、配列番号３１は１７４番目の、配列番号３２は１８０番目の、配列番号３３は１８５番目の、配列番号３４は１７９番目の、配列番号３５は１７６番目の、配列番号３６は１７２番目の、配列番号３７は１８３番目の、配列番号３８は１７９番目の、又は配列番号３９は１７３番目のＧｌｎが変異していないアミノ酸配列を有するものであってよい。
　ここで、配列番号２７は配列番号１の１８０番目の、配列番号２８は配列番号２の１７６番目の、配列番号２９は配列番号３の２２７番目の、配列番号３０は配列番号４の１７７番目の、配列番号３１は配列番号５の１７４番目の、配列番号３２は配列番号６の１８０番目の、配列番号３３は配列番号７の１８５番目の、配列番号３４は配列番号８の１７９番目の、配列番号３５は配列番号９の１７６番目の、配列番号３６は配列番号１０の１７２番目の、配列番号３７は配列番号１１の１８３番目の、配列番号３８は配列番号１２の１７９番目の、配列番号３９は配列番号１３の１７３番目の、ＡｓｎがＧｌｎに置換されたものである。
　抗体がＩｇＧである場合、そのＦｃ領域は、配列番号４０～５２のアミノ酸配列又は配列番号４０～５２のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列であって、配列番号４０は１８２番目の、配列番号４１は１７８番目の、配列番号４２は２２９番目の、配列番号４３は１７９番目の、配列番号４４は１７６番目の、配列番号４６は１８２番目の、配列番号４５は１８７番目の、配列番号４７は１８１番目の、配列番号４８は１７８番目の、配列番号４９は１７４番目の、配列番号５０は１８５番目の、配列番号５１は１８１番目の、又は配列番号５２は１７５番目のＡｌａが変異していないアミノ酸配列を有するものであってよい。
　ここで、配列番号４０は配列番号１の１８２番目の、配列番号４１は配列番号２の１７８番目の、配列番号４２は配列番号３の２２９番目の、配列番号４３は配列番号４の１７９番目の、配列番号４４は配列番号５の１７６番目の、配列番号４５は配列番号６の１８２番目の、配列番号４６は配列番号７の１８７番目の、配列番号４７は配列番号８の１８１番目の、配列番号４８は配列番号９の１７８番目の、配列番号４９は配列番号１０の１７４番目の、配列番号５０は配列番号１１の１８５番目の、配列番号５１は配列番号１２の１８１番目の、配列番号５２は配列番号１３の１７５番目の、ＴｈｒがＡｌａに置換されたものである。
　重鎖に糖鎖が結合していない抗体は、植物一過性発現系を用いることで作製することができ、遺伝子組換え植物を用いることで作製することもできる。植物一過性発現系としては、例えば、特許第５０１５０１２号公報に記載の方法を利用することができる。また、重鎖に糖鎖が結合していない抗体は、哺乳動物細胞を発現宿主に用いた遺伝子組換え体としても得る事が可能である。その場合の哺乳動物細胞としては、ＣＨＯ（Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｈａｍｓｔｅｒ　Ｏｖａｒｙ）細胞やＨＥＫ２９３（Ｈｕｍａｎ　Ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ　Ｋｉｄｎｅｙ　ｃｅｌｌｓ　２９３）細胞等が挙げられるが、この限りではない。更に遺伝子組換え体として得る手法に関しても、自立複製能を欠いたプラスミドベクターやウイルスべクターを用いたｔｒａｎｓｉｅｎｔ発現系や、核移行性シグナルを付与し且つ自立複製能を有したｅｐｉｓｏｍａｌ　ｖｅｃｔｏｒを用いたｓｅｍｉ－ｓｔａｂｌｅ発現系、また目的遺伝子を発現宿主のゲノムへ挿入したｓｔａｂｌｅ発現系等が挙げられ、特に限定されるものではない。
　粒状担体と重鎖に糖鎖が結合していない抗体の結合は、一般的な手法、例えば、物理吸着法及び化学結合法などを用いることができる。
　一実施形態の標的抗原の測定方法は、上記不溶性粒子を用いる。かかる測定方法は、被験試料中の標的抗原の有無を定性的に評価するために、又は被検試料中の標的抗原の濃度を定量的に評価するために行うことができる。
　一実施形態において、上記測定方法は、不溶性粒子と標的抗原を含有し得る被験試料を接触させる工程、並びに上記抗体及び上記標的抗原の抗原抗体反応による上記不溶性粒子の凝集反応を測定する工程、を含む。不溶性粒子は、調製済みのものを用いてもよく、測定に際して、粒状担体と重鎖に糖鎖が結合していない抗体とを結合させて、不溶性粒子を調製してもよい。
　不溶性粒子を含む懸濁液と被検試料とを混合することで、不溶性粒子と標的抗原を含有し得る被験試料を接触させることができる。両者を接触させると、被検試料中に含まれる標的抗原と粒状担体に担持された抗体との間の相互作用によって不溶性粒子が凝集され、懸濁液の吸光度が変化する。この吸光度の変化量（エンドポイント法）又は変化率（レート法）を測定する。測定は、比濁法又は比色法が好適に用いられる。例えば、セル外部より可視光から近赤外域の光、通常３００ｎｍ～１０００ｎｍ、好ましくは５００ｎｍ～９００ｎｍの光を照射し、吸光度変化又は散乱光の強度変化を検出することにより、不溶性粒子の凝集反応が測定される。
　凝集反応を行う時間は、１分～３０分とすることができ、好ましくは１分～１０分であるが、これらに限られない。凝集反応を行う温度は、３５℃～４０℃とすることができ、３６～３８℃とすることもできるが、これらに限られない。
　測定すべき標的抗原を種々の既知濃度で含む複数の標準試料を準備し、それらについて上記方法により吸光度の変化量又は変化率を測定する。標準試料中の測定すべき抗原の濃度を横軸、測定された吸光度の変化量又は変化率を縦軸にプロットして検量線を描く。未知の被検試料についても同じ方法により吸光度の変化量又は変化率を測定し、測定結果を上記検量線に当てはめることにより、被検試料中の標的抗原を定量的に評価することができる。また、あらかじめ吸光度の変化量又は変化率の閾値を設定しておき、閾値を超えた場合に被験試料中に標的抗原が存在すると定性的に評価することができる。
　被験試料は、標的抗原を含有し得るものであれば特に限定されないが、血液、血清、血漿、尿、便、唾液、組織液、髄液、ぬぐい液等の体液等又はその希釈物が挙げられ、血液、血清、血漿、尿、便、髄液又はこれらの希釈物が好ましい。
　一実施形態に係る標的抗原測定用キットは、上記不溶性粒子を含む。標的抗原測定用キットは、被験試料中の標的抗原の有無を定性的に評価するため、又は被検試料中の標的抗原の濃度を定量的に評価するために用いることができ、より具体的には、上記標的抗原の測定方法に用いることができる。
　一実施形態において、標的抗原測定用キットは、粒状担体と重鎖に糖鎖が結合していない抗体とを含み、測定に際して両者を結合させて、重鎖に糖鎖が結合していない抗体を担持する粒状担体を調製する形態であってもよい。
　標的抗原測定用キットは、さらに、陽性対照又は検量線作成に用いるための標的抗原を含んでいてもよく、被験試料を希釈する緩衝液、不溶性粒子と被検試料とを混合するための緩衝液、重鎖に糖鎖が結合していない抗体と粒状担体とを結合させるための緩衝液などを含んでいてもよい。
＜抗ＩｇＥ抗体（Ａｎｔｉ－ＩｇＥ　Ａｂ－Ｗｉｌｄ）の作製＞
　重鎖の定常領域が配列番号５からなる抗体を以下の方法で作製した。
　特許第５０１５０１２号公報に記載の植物一過性発現系で調製した。タバコモザイクウイルス（ＴＭＶ）ベクター　ｐＩＣＨ５６１２２（図３）および抗ＩｇＥ抗体重鎖コーディング配列およびＢｓａＩ部位を含む合成ＤＮＡをＢｓａＩによって開き、Ｔ４　ＤＮＡ　Ｌｉｇａｓｅと３７℃で一晩反応させてライゲーションした。ライゲーション反応液を大腸菌コンピテントセルに加え、ヒートショック法により形質転換し、３７℃で一晩培養した。ＱＩＡｐｒｅｐ　Ｓｐｉｎ　Ｍｉｎｉｐｒｅｐ　Ｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ社製）を用いて培養液から抗ＩｇＥ抗体重鎖コーディングベクターを得た。同様に、ジャガイモウイルスＸ（ＰＶＸ）ベクターｐＩＣＨ５６１３１（図３）および抗ＩｇＥ抗体軽鎖コーディング配列およびＢｓａＩ部位を含む合成ＤＮＡを用いて抗ＩｇＥ抗体軽鎖コーディングベクターを得た。これらのベクターをそれぞれ別々のアグロバクテリウムコンピテントセルに加え、エレクトロポレーション法により形質転換し、２８℃で３日間培養した。ひとつのインフィルトレーションバッファー（１０　ｍＭ　ＭＥＳ　１０　ｍＭ　ＭｇＳＯ４　ｐＨ５．５）にそれぞれ培養液が１／１０００となるように混合し、ニコチアナベンサミアーナの葉にインフィルトレーションし、１週間ほどで収穫した。収穫した葉（感染葉）を凍結した。
　凍結した感染葉２００ｇを量りとり、カッターミキサーで粉砕した。粉砕物に抽出溶液（１００ｍＭ　Ｔｒｉｓ、２５０ｍＭ　ＮａＣｌ、４０ｍＭ　アスコルビン酸ナトリウム）２００ｍＬを添加し、感染葉を繰り返し粉砕した。遠心分離して上清を回収した。回収した液を０．２２μｍフィルターで濾過した。濾過液をＰｒｏｔｅｉｎ　Ａカラムクロマトグラフィーにかけることで不純物を除去した。
＜糖鎖結合モチーフが存在しない抗ＩｇＥ抗体（Ａｎｔｉ－ＩｇＥ　Ａｂ－Ｎ－Ｑ）の作製＞
　重鎖の定常領域が配列番号３１からなる抗体を、重鎖の定常領域が配列番号５からなる抗体（Ａｎｔｉ－ＩｇＥ　Ａｂ－Ｗｉｌｄ）と同様の方法で作製した。
＜糖鎖結合モチーフが存在しない抗ＩｇＥ抗体（Ａｎｔｉ－ＩｇＥ　Ａｂ－Ｔ－Ａ）の作製＞
　重鎖の定常領域の配列が配列番号４４である抗体を、重鎖の定常領域が配列番号５からなる抗体（Ａｎｔｉ－ＩｇＥ　Ａｂ－Ｗｉｌｄ）と同様の方法で作製した。
　Ａｎｔｉ－ＩｇＥ　Ａｂ－Ｗｉｌｄの重鎖に糖鎖が結合していることと、Ａｎｔｉ－ＩｇＥ　Ａｂ－Ｎ－Ｑ及びＡｎｔｉ－ＩｇＥ　Ａｂ－Ｔ－Ａのそれぞれの重鎖に糖鎖が結合していないことは、α１，３－ｆｕｃｏｓｅ抗体のウエスタンブロッティングによって確認した。
＜抗ＩｇＥ抗体のラテックス凝集試験＞
（１）試薬の調製
ＩｇＥに対する抗体を用いて、以下の通りに免疫凝集法による測定試薬を調製した。
ｉ）０．０７ｍｇの抗体をポリスチレンラテックス浮遊液１ｍＬに添加することにより、抗体をポリスチレンラテックス粒子に担持させてなる不溶性粒子を作製した。この不溶性粒子が０．１２５質量％となるように緩衝液（グリシン、ｐＨ７．３）中で懸濁し、不溶性粒子浮遊液を調製した。
ｉｉ）緩衝液（グリシン、ｐＨ８．３）を調製した。
（２）自動分析装置による測定
自動分析装置は日立社製７１８０型自動分析装置を用いて、各濃度の標的抗原（ＩｇＥ）試料と（１）記載のポリスチレンラテックス粒子に担持された抗体との抗原抗体反応を介した不溶性粒子の凝集状態を光透過率で測定した。具体的には、ＩｇＥ溶液３．５μＬに対し、上記（１）（ｉｉ）で調製した緩衝液１４０μＬを添加し、この混合液を３７℃で撹拌混合した。５分間放置後、不溶性粒子浮遊液７０μＬを添加し、更に３７℃で撹拌混合した。約５分間の凝集反応を吸光度変化量として測定した。
　上記（１）で調製したＡｎｔｉ－ＩｇＥ　Ａｂ－Ｗｉｌｄ、Ａｎｔｉ－ＩｇＥ　Ａｂ－Ｎ－Ｑ及びＡｎｔｉ－ＩｇＥ　Ａｂ－Ｔ－Ａの不溶性粒子について、標的抗原との反応による凝集度を評価した結果、Ａｎｔｉ－ＩｇＥ　Ａｂ－Ｎ－Ｑ及びＡｎｔｉ－ＩｇＥ　Ａｂ－Ｔ－Ａの不溶性粒子はＡｎｔｉ－ＩｇＥ　Ａｂ－Ｗｉｌｄと比べて凝集度が大きく、高感度な測定が可能であることを確認した。
＜抗ＣＲＰ抗体（Ａｎｔｉ－ＣＲＰ　Ａｂ－Ｗｉｌｄ）の作製＞
　重鎖の定常領域が配列番号１からなる抗体を以下の方法で作製した。
　特許第５０１５０１２号公報に記載の植物一過性発現系で調製した。タバコモザイクウイルス（ＴＭＶ）ベクター　ｐＩＣＨ５６１２２（図３）および抗ＣＲＰ抗体重鎖コーディング配列およびＢｓａＩ部位を含む合成ＤＮＡをＢｓａＩによって開き、Ｔ４　ＤＮＡ　Ｌｉｇａｓｅと３７℃で一晩反応させてライゲーションした。ライゲーション反応液を大腸菌コンピテントセルに加え、ヒートショック法により形質転換し、３７℃で一晩培養した。ＱＩＡｐｒｅｐＳｐｉｎ　Ｍｉｎｉｐｒｅｐ　Ｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ社製）を用いて培養液から抗ＣＲＰ抗体重鎖コーディングベクターを得た。同様に、ジャガイモウイルスＸ（ＰＶＸ）ベクターｐＩＣＨ５６１３１（図３）および抗ＣＲＰ抗体軽鎖コーディング配列およびＢｓａＩ部位を含む合成ＤＮＡを用いて抗ＣＲＰ抗体軽鎖コーディングベクターを得た。これらのベクターをそれぞれ別々のアグロバクテリウムコンピテントセルに加え、エレクトロポレーション法により形質転換し、２８℃で３日間培養した。ひとつのインフィルトレーションバッファー（１０　ｍＭ　ＭＥＳ　１０　ｍＭ　ＭｇＳＯ４　ｐＨ５．５）にそれぞれ培養液が１／１０００となるように混合し、ニコチアナベンサミアーナの葉にインフィルトレーションし、１週間ほどで収穫した。収穫した葉（感染葉）を凍結した。
　凍結した感染葉２００ｇを量りとり、カッターミキサーで粉砕した。粉砕物に抽出溶液（１００ｍＭ　Ｔｒｉｓ、２５０ｍＭ　ＮａＣｌ、５ｍＭ　ＥＤＴＡ、４０ｍＭ　アスコルビン酸ナトリウム）２００ｍＬを添加し、感染葉を繰り返し粉砕した。遠心分離して上清を回収した。回収した液を０．２２μｍフィルターで濾過した。濾過液をＰｒｏｔｅｉｎ　Ａカラムクロマトグラフィーにかけることで不純物を除去した。
＜糖鎖結合モチーフが存在しない抗ＣＲＰ抗体（Ａｎｔｉ－ＣＲＰ　Ａｂ－Ｔ－Ａ）の作製＞
　重鎖の定常領域の配列が配列番号４０からなる抗体を、重鎖の定常領域が配列番号１からなる抗体（Ａｎｔｉ－ＣＲＰ　Ａｂ－Ｗｉｌｄ）と同様の方法で作製した。
　Ａｎｔｉ－ＣＲＰ　Ａｂ－Ｗｉｌｄの重鎖に糖鎖が結合していることと、Ａｎｔｉ－ＣＲＰ　Ａｂ－Ｔ－Ａの重鎖に糖鎖が結合していないことは、α１，３－ｆｕｃｏｓｅ抗体のウエスタンブロッティングによって確認した。
＜抗ＣＲＰ抗体のラテックス凝集試験＞
（１）試薬の調製
　ＣＲＰに対する抗体を用いて、以下の通りに免疫凝集法による測定試薬を調製した。
ｉ）０．０６ｍｇの抗体をポリスチレンラテックス浮遊液１ｍＬに添加することにより、抗体をポリスチレンラテックス粒子に担持させてなる不溶性粒子を作製した。この不溶性粒子が０．１１０質量％となるように緩衝液（グリシン、ｐＨ７．３）中で懸濁し、不溶性粒子浮遊液を調製した。
ｉｉ）緩衝液（グリシン、ｐＨ８．３）を調製した。
（２）自動分析装置による測定
　自動分析装置は日立社製３５００型自動分析装置を用いて、各濃度の標的抗原（ＣＲＰ）試料と（１）記載のポリスチレンラテックス粒子に担持された抗体との抗原抗体反応を介した不溶性粒子の凝集状態を光透過率で測定した。具体的には、ＣＲＰ溶液２．０μＬに対し、上記（１）（ｉｉ）で調製した緩衝液１００μＬを添加し、この混合液を３７℃で撹拌混合した。５分間放置後、不溶性粒子浮遊液１００μＬを添加し、更に３７℃で撹拌混合した。約５分間の凝集反応を吸光度変化量として測定した。
　上記（１）で調製したＡｎｔｉ－ＣＲＰ　Ａｂ－Ｗｉｌｄ及びＡｎｔｉ－ＣＲＰ　Ａｂ－Ｔ－Ａの不溶性粒子について、標的抗原との反応による凝集度を評価した結果、Ａｎｔｉ－ＣＲＰ　Ａｂ－Ｔ－Ａの不溶性粒子はＡｎｔｉ－ＣＲＰ　Ａｂ－Ｗｉｌｄと比べて凝集度が大きく、高感度な測定が可能であることを確認した。

Claims (12)

  1. 　粒状担体と、前記粒状担体に担持された、標的抗原に対する抗体と、を含有する不溶性粒子であって、前記抗体の重鎖に糖鎖が結合していない、不溶性粒子。
  2. 　前記粒状担体はラテックス粒子である、請求項１に記載の不溶性粒子。
  3. 　前記抗体はＩｇＧである、請求項１又は２に記載の不溶性粒子。
  4. 　前記ＩｇＧのＦｃ領域は、配列番号１～１３のいずれか一つのアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を有するが、糖鎖結合モチーフＡｓｎ－Ｘａａ－Ｓｅｒ／Ｔｈｒが存在しない、請求項３に記載の不溶性粒子。
  5. 　前記ＩｇＧのＦｃ領域は、
    配列番号１４のアミノ酸配列又は配列番号１４のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列であって１８０番目のＡｓｐが変異していないアミノ酸配列を有する、
    配列番号１５のアミノ酸配列又は配列番号１５のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列であって１７６番目のＡｓｐが変異していないアミノ酸配列を有する、
    配列番号１６のアミノ酸配列又は配列番号１６のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列であって２２７番目のＡｓｐが変異していないアミノ酸配列を有する、
    配列番号１７のアミノ酸配列又は配列番号１７のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列であって１７７番目のＡｓｐが変異していないアミノ酸配列を有する、
    配列番号１８のアミノ酸配列又は配列番号１８のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列であって１７４番目のＡｓｐが変異していないアミノ酸配列を有する、
    配列番号１９のアミノ酸配列又は配列番号１９のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列であって１８０番目のＡｓｐが変異していないアミノ酸配列を有する、
    配列番号２０のアミノ酸配列又は配列番号２０のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列であって１８５番目のＡｓｐが変異していないアミノ酸配列を有する、
    配列番号２１のアミノ酸配列又は配列番号２１のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列であって１７９番目のＡｓｐが変異していないアミノ酸配列を有する、
    配列番号２２のアミノ酸配列又は配列番号２２のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列であって１７６番目のＡｓｐが変異していないアミノ酸配列を有する、
    配列番号２３のアミノ酸配列又は配列番号２３のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列であって１７２番目のＡｓｐが変異していないアミノ酸配列を有する、
    配列番号２４のアミノ酸配列又は配列番号２４のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列であって１８３番目のＡｓｐが変異していないアミノ酸配列を有する、
    配列番号２５のアミノ酸配列又は配列番号２５のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列であって１７９番目のＡｓｐが変異していないアミノ酸配列を有する、
    又は
    配列番号２６のアミノ酸配列又は配列番号２６のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列であって１７３番目のＡｓｐが変異していないアミノ酸配列を有する、
    請求項３に記載の不溶性粒子。
  6. 　前記ＩｇＧのＦｃ領域は、
    配列番号２７のアミノ酸配列又は配列番号２７のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列であって１８０番目のＧｌｎが変異していないアミノ酸配列を有する、
    配列番号２８のアミノ酸配列又は配列番号２８のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列であって１７６番目のＧｌｎが変異していないアミノ酸配列を有する、
    配列番号２９のアミノ酸配列又は配列番号２９のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列であって２２７番目のＧｌｎが変異していないアミノ酸配列を有する、
    配列番号３０のアミノ酸配列又は配列番号３０のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列であって１７７番目のＧｌｎが変異していないアミノ酸配列を有する、
    配列番号３１のアミノ酸配列又は配列番号３１のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列であって１７４番目のＧｌｎが変異していないアミノ酸配列を有する、
    配列番号３２のアミノ酸配列又は配列番号３２のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列であって１８０番目のＧｌｎが変異していないアミノ酸配列を有する、
    配列番号３３のアミノ酸配列又は配列番号３３のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列であって１８５番目のＧｌｎが変異していないアミノ酸配列を有する、
    配列番号３４のアミノ酸配列又は配列番号３４のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列であって１７９番目のＧｌｎが変異していないアミノ酸配列を有する、
    配列番号３５のアミノ酸配列又は配列番号３５のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列であって１７６番目のＧｌｎが変異していないアミノ酸配列を有する、
    配列番号３６のアミノ酸配列又は配列番号３６のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列であって１７２番目のＧｌｎが変異していないアミノ酸配列を有する、
    配列番号３７のアミノ酸配列又は配列番号３７のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列であって１８３番目のＧｌｎが変異していないアミノ酸配列を有する、
    配列番号３８のアミノ酸配列又は配列番号３８のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列であって１７９番目のＧｌｎが変異していないアミノ酸配列を有する、
    又は
    配列番号３９のアミノ酸配列又は配列番号３９のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列であって１７３番目のＧｌｎが変異していないアミノ酸配列を有する、
    請求項３に記載の不溶性粒子。
  7. 　前記ＩｇＧのＦｃ領域は、
    配列番号４０のアミノ酸配列又は配列番号４０のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列であって１８２番目のＡｌａが変異していないアミノ酸配列を有する、
    配列番号４１のアミノ酸配列又は配列番号４１のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列であって１７８番目のＡｌａが変異していないアミノ酸配列を有する、
    配列番号４２のアミノ酸配列又は配列番号４２のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列であって２２９番目のＡｌａが変異していないアミノ酸配列を有する、
    配列番号４３のアミノ酸配列又は配列番号４３のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列であって１７９番目のＡｌａが変異していないアミノ酸配列を有する、
    配列番号４４のアミノ酸配列又は配列番号４４のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列であって１７６番目のＡｌａが変異していないアミノ酸配列を有する、
    配列番号４５のアミノ酸配列又は配列番号４５のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列であって１８２番目のＡｌａが変異していないアミノ酸配列を有する、
    配列番号４６のアミノ酸配列又は配列番号４６のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列であって１８７番目のＡｌａが変異していないアミノ酸配列を有する、
    配列番号４７のアミノ酸配列又は配列番号４７のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列であって１８１番目のＡｌａが変異していないアミノ酸配列を有する、
    配列番号４８のアミノ酸配列又は配列番号４８のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列であって１７８番目のＡｌａが変異していないアミノ酸配列を有する、
    配列番号４９のアミノ酸配列又は配列番号４９のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列であって１７４番目のＡｌａが変異していないアミノ酸配列を有する、
    配列番号５０のアミノ酸配列又は配列番号５０のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列であって１８５番目のＡｌａが変異していないアミノ酸配列を有する、
    配列番号５１のアミノ酸配列又は配列番号５１のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列であって１８１番目のＡｌａが変異していないアミノ酸配列を有する、
    又は
    配列番号５２のアミノ酸配列又は配列番号５２のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列であって１７５番目のＡｌａが変異していないアミノ酸配列を有する、
    請求項３に記載の不溶性粒子。
  8. 　請求項１～７のいずれか一項に記載の不溶性粒子を含む、又は、請求項１～７のいずれか一項に記載の不溶性粒子を調製するための抗体及び粒状担体を含む、標的抗原測定用キット。
  9. 　被験試料中の標的抗原の有無を定性的に評価するための、又は被検試料中の標的抗原の濃度を定量的に評価するための、請求項８に記載のキット。
  10. 　請求項１～７のいずれか一項に記載の不溶性粒子を用いる、標的抗原の測定方法。
  11. 　請求項１～７のいずれか一項に記載の不溶性粒子と標的抗原を含有し得る被験試料を接触させる工程、並びに
    　前記抗体及び前記標的抗原の抗原抗体反応による前記不溶性粒子の凝集反応を測定する工程、
    を含む、標的抗原の測定方法。
  12. 　被験試料中の標的抗原の有無を定性的に評価するための、又は被検試料中の標的抗原の濃度を定量的に評価するための、請求項１０又は１１に記載の方法。
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