CN116601168A - 靶抗原的测定方法以及用于其的不溶性粒子及靶抗原测定用试剂盒 - Google Patents
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Abstract
不溶性粒子，其含有粒状担载体、和担载于上述粒状担载体的针对靶抗原的抗体，上述抗体的重链上未结合糖链。
Description
技术领域
本发明涉及靶抗原的测定方法以及用于其的不溶性粒子及靶抗原测定用试剂盒。
背景技术
作为利用免疫反应的靶抗原的测定方法，有利用胶乳等粒状担载体的方法(例如，专利文献1)。结合有靶抗原特异性的抗体的粒状担载体在靶抗原存在时发生抗原抗体反应。然后，通过其特异性及亲和力将靶抗原桥接而相互结合并凝集。根据产生的凝集块的有无、凝集的程度来测定靶抗原的有无、存在量。
利用这样的免疫反应的测定方法有时会产生检测灵敏度不充分的问题，例如，专利文献2中公开了为了使测定的灵敏度不下降而减少非特异性吸附发生的多糖修饰复合粒子。
现有技术文献
专利文献
专利文献1：日本特开2017-83440号公报
专利文献2：日本特开2009-162537号公报
发明内容
发明所要解决的课题
但是，上述的检测灵敏度仍有改善的余地。在此，认为若结合有靶抗原特异性的抗体的粒状担载体(含有其的不溶性粒子)的凝集性高，则即使是微量的靶抗原也能够检测到，因此有检测灵敏度提高的可能性。
本发明的课题在于，提供凝集能力高的不溶性粒子、使用其的靶抗原测定用试剂盒及靶抗原的测定方法。
用于解决课题的手段
本申请的发明人发现与担载有重链上结合着糖链的抗体的粒状担载体相比，担载有重链上未结合糖链的抗体的粒状担载体容易凝集，从而完成了本发明。
本发明涉及不溶性粒子，其含有粒状担载体、和担载于上述粒状担载体的针对靶抗原的抗体，其中，上述抗体的重链上未结合糖链。
本发明涉及靶抗原测定用试剂盒，其包含上述不溶性粒子，或包含用于制备上述不溶性粒子的抗体及粒状担载体。
本发明还涉及靶抗原的测定方法，其中，使用上述不溶性粒子。
发明效果
根据本发明，可以提供抗原抗体反应发生时的凝集能力优异的不溶性粒子。通过使用凝集能力优异的不溶性粒子，从而能够期待靶抗原的高灵敏度的检测。
附图说明
[图1]为示出抗IgE抗体致敏胶乳的凝集反应的结果的图。
[图2]为示出抗CRP抗体致敏胶乳的凝集反应的结果的图。
[图3]为示出TMV载体(pICH56122)及PVX载体(pICH56131)的T-DNA区域的示意图。
具体实施方式
以下，对本发明的实施方式进行详细说明。
一个实施方式涉及的不溶性粒子含有粒状担载体、和担载于粒状担载体的针对靶抗原的抗体，其中，抗体的重链上未结合糖链。就针对靶抗原的抗体而言，可以不仅是重链上未结合糖链的形态，而且是轻链上也未结合糖链的形态。
靶抗原例如可举出CRP(C反应蛋白)、前列腺特异性抗原、铁蛋白、β-2微球蛋白、肌红蛋白、血红蛋白、白蛋白、肌酐等蛋白标志物、IgG、IgE、IgA、IgM等免疫球蛋白、各种肿瘤标志物、LDL、HDL、TG等脂蛋白、A型流感病毒、B型流感病毒、RS病毒(RSV)、鼻病毒、轮状病毒、诺如病毒、腺病毒、星状病毒、HAV、HBs、HCV、HIV、EBV等病毒抗原、沙眼衣原体、溶血性链球菌、百日咳杆菌、幽门螺杆菌、钩端螺旋体、梅毒螺旋体、刚地弓形虫、疏螺旋体、军团菌属菌、炭疽杆菌、MRSA等细菌抗原、细菌等产生的毒素、支原体脂质抗原、人绒毛膜促性腺激素等肽类激素、类固醇激素等类固醇、肾上腺素、吗啡等生理活性胺类、维生素B类等维生素类、前列腺素类、四环素等抗生素、农药、环境激素等，但不限定于此。
粒状担载体可举出胶乳粒子、陶瓷粒子、氧化铝粒子、二氧化硅-氧化铝粒子、炭黑粒子等粒子。在这些粒子之中，优选胶乳粒子。胶乳的材质例如可举出聚苯乙烯、二乙烯基苯等，优选聚苯乙烯。粒状担载体的平均粒径可设为0.1～5μm。需要说明的是，粒状担载体的粒径能够通过动态光散射法进行测定。本说明书中，“平均粒径”是指在通过动态光散射法得到的体积基准的粒径的分布曲线中，从小粒径开始的累积值达到整体的50％时的粒径(中值粒径)。
抗体只要能够与靶抗原特异性地结合，则没有特别限制，可以是IgG、IgM、IgA、IgD及IgE中的任一种，优选IgG。IgG由2条重链(H链)及2条轻链(L链)构成。重链从N末端起依次由可变区(VH)、第一恒定区(CH1)、第二恒定区(CH2)及第三恒定区(CH3)构成。轻链从N末端起依次由可变区(VL)及恒定区(CL)构成。由CH2及CH3构成的部分为Fc区域。1条重链与1条轻链通过CH1中存在的半胱氨酸残基及CL中存在的半胱氨酸残基的二硫键而结合。另外，重链彼此通过位于CH1与CH2之间的铰链区中存在的半胱氨酸残基彼此的二硫键而结合。抗体可以是存在重链的IgG的片段，可以是由1条重链及1条轻链构成的rIgG(还原型IgG)，可以是由2条重链构成的片段，也可以是由1条重链构成的片段。在存在2条重链的抗体中，只要至少一条重链上未结合糖链即可，也可以两条重链上未结合糖链。
在抗体为IgG的情况下，其Fc区域优选具有与序列号1～13中的任一个氨基酸序列具有90％以上的同一性的氨基酸序列，但不存在糖链结合基序Asn-Xaa-Ser/Thr(Xaa为任意的氨基酸)。
在此，序列号1为蛋白登录号P01857(人Igγ-1C区)，序列号2为蛋白登录号P01859(人Igγ-2C区)，序列号3为蛋白登录号P01860(人Igγ-3C区)，序列号4为蛋白登录号P01861(人Igγ-4C区)，序列号5为蛋白登录号P01868(小鼠Igγ-1C区)，序列号6为蛋白登录号P01863(小鼠Igγ-2a C区)，序列号7为蛋白登录号P01867(小鼠Igγ-2b C区)，序列号8为蛋白登录号P03987(小鼠Igγ-3C区)，序列号9为蛋白登录号P20759(大鼠Igγ-1C区)，序列号10为蛋白登录号P20760(大鼠Igγ-2a C区)，序列号11为蛋白登录号P20761(大鼠Igγ-2b C区)，序列号12为蛋白登录号P20762(大鼠Igγ-2c C区)，序列号13为蛋白登录号P01870(兔IgγC区)。
在抗体为IgG的情况下，其Fc区域可以具有下述氨基酸序列：序列号14～26的氨基酸序列或与序列号14～26的氨基酸序列具有90％以上的同一性的氨基酸序列，并且序列号14的第180位的Asp、序列号15的第176位的Asp、序列号16的第227位的Asp、序列号17的第177位的Asp、序列号18的第174位的Asp、序列号19的第180位的Asp、序列号20的第185位的Asp、序列号21的第179位的Asp、序列号22的第176位的Asp、序列号23的第172位的Asp、序列号24的第183位的Asp、序列号25的第179位的Asp、或序列号26的第173位的Asp未突变的氨基酸序列。
在此，序列号14为序列号1的第180位的Asn被取代为Asp的序列；序列号15为序列号2的第176位的Asn被取代为Asp的序列；序列号16为序列号3的第227位的Asn被取代为Asp的序列；序列号17为序列号4的第177位的Asn被取代为Asp的序列；序列号18为序列号5的第174位的Asn被取代为Asp的序列；序列号19为序列号6的第180位的Asn被取代为Asp的序列；序列号20为序列号7的第185位的Asn被取代为Asp的序列；序列号21为序列号8的第179位的Asn被取代为Asp的序列；序列号22为序列号9的第176位的Asn被取代为Asp的序列；序列号23为序列号10的第172位的Asn被取代为Asp的序列；序列号24为序列号11的第183位的Asn被取代为Asp的序列；序列号25为序列号12的第179位的Asn被取代为Asp的序列；序列号26为序列号13的第173位的Asn被取代为Asp。
在抗体为IgG的情况下，其Fc区域可以具有下述氨基酸序列：序列号27～39的氨基酸序列或与序列号27～39的氨基酸序列具有90％以上的同一性的氨基酸序列，并且序列号27的第180位的Gln、序列号28的第176位的Gln、序列号29的第227位的Gln、序列号30的第177位的Gln、序列号31的第174位的Gln、序列号32的第180位的Gln、序列号33的第185位的Gln、序列号34的第179位的Gln、序列号35的第176位的Gln、序列号36的第172位的Gln、序列号37的第183位的Gln、序列号38的第179位的Gln、或序列号39的第173位的Gln未突变的氨基酸序列。
在此，序列号27为序列号1的第180位的Asn被取代为Gln的序列；序列号28为序列号2的第176位的Asn被取代为Gln的序列；序列号29为序列号3的第227位的Asn被取代为Gln的序列；序列号30为序列号4的第177位的Asn被取代为Gln的序列；序列号31为序列号5的第174位的Asn被取代为Gln的序列；序列号32为序列号6的第180位的Asn被取代为Gln的序列；序列号33为序列号7的第185位的Asn被取代为Gln的序列；序列号34为序列号8的第179位的Asn被取代为Gln的序列；序列号35为序列号9的第176位的Asn被取代为Gln的序列；序列号36为序列号10的第172位的Asn被取代为Gln的序列；序列号37为序列号11的第183位的Asn被取代为Gln的序列；序列号38为序列号12的第179位的Asn被取代为Gln的序列；序列号39为序列号13的第173位的Asn被取代为Gln的序列。
在抗体为IgG的情况下，其Fc区域可以具有下述氨基酸序列：序列号40～52的氨基酸序列或与序列号40～52的氨基酸序列具有90％以上的同一性的氨基酸序列，并且序列号40的第182位的Ala、序列号41的第178位的Ala、序列号42的第229位的Ala、序列号43的第179位的Ala、序列号44的第176位的Ala、序列号46的第182位的Ala、序列号45的第187位的Ala、序列号47的第181位的Ala、序列号48的第178位的Ala、序列号49的第174位的Ala、序列号50的第185位的Ala、序列号51的第181位的Ala、或序列号52的第175位的Ala未突变的氨基酸序列。
在此，序列号40为序列号1的第182位的Thr被取代为Ala的序列；序列号41为序列号2的第178位的Thr被取代为Ala的序列；序列号42为序列号3的第229位的Thr被取代为Ala的序列；序列号43为序列号4的第179位的Thr被取代为Ala的序列；序列号44为序列号5的第176位的Thr被取代为Ala的序列；序列号45为序列号6的第182位的Thr被取代为Ala的序列；序列号46为序列号7的第187位的Thr被取代为Ala的序列；序列号47为序列号8的第181位的Thr被取代为Ala的序列；序列号48为序列号9的第178位的Thr被取代为Ala的序列；序列号49为序列号10的第174位的Thr被取代为Ala的序列；序列号50为序列号11的第185位的Thr被取代为Ala的序列；序列号51为序列号12的第181位的Thr被取代为Ala的序列；序列号52为序列号13的第175位的Thr被取代为Ala的序列。
重链上未结合糖链的抗体能够通过使用植物瞬时表达系统来制作，也能够通过使用转基因植物来制作。作为植物瞬时表达系统，例如能够利用日本专利第5015012号公报中记载的方法。另外，重链上未结合糖链的抗体也能够以使用哺乳动物细胞作为表达宿主的基因重组体的形式而得到。作为该情况下的哺乳动物细胞，可举出CHO(中国仓鼠卵母细胞Chinese Hamster Ovary)细胞、HEK293(人胚肾细胞Human Embryonic Kidney cells 293)细胞等，但不限定于此。此外，关于作为基因重组体获得的方法，没有特别限定，可举出：使用了缺乏自主复制能力的质粒载体、病毒载体的瞬时(transient)表达系统；使用了赋予核定位信号且具有自主复制能力的游离型载体(episomal vector)的半稳定(semi-stable)表达系统；以及将目标基因插入表达宿主的基因组的稳定(stable)表达系统；等等。
粒状担载体与重链上未结合糖链的抗体的结合能够使用一般的方法、例如物理吸附法及化学结合法等。
一个实施方式的靶抗原的测定方法使用上述不溶性粒子。该测定方法能够用于定性地评价受试试样中有无靶抗原，或用于定量地评价受检试样中的靶抗原的浓度。
一个实施方式中，上述测定方法包括：使不溶性粒子与可能含有靶抗原的受试试样接触的工序；以及对由上述抗体与上述靶抗原的抗原抗体反应引起的上述不溶性粒子的凝集反应进行测定的工序。不溶性粒子可以使用已制备的不溶性粒子，也可以在测定时使粒状担载体与重链上未结合糖链的抗体结合来制备不溶性粒子。
通过混合包含不溶性粒子的悬浮液和受检试样，能够使不溶性粒子与可能含有靶抗原的受试试样接触。当使两者接触时，不溶性粒子因受检试样中包含的靶抗原与担载于粒状担载体的抗体之间的相互作用而凝集，悬浮液的吸光度发生变化。测定该吸光度的变化量(终点法)或变化率(速率法)。测定优选使用比浊法或比色法。例如，从比色池外部照射可见光至近红外区的光(通常为300nm～1000nm、优选为500nm～900nm的光)，通过检测吸光度变化或散射光的强度变化来测定不溶性粒子的凝集反应。
进行凝集反应的时间可设为1分钟～30分钟，优选为1分钟～10分钟，但不限定于此。进行凝集反应的温度可设为35℃～40℃，也可设为36～38℃，但不限定于此。
准备以各种已知浓度包含待测定的靶抗原的多个标准试样，通过上述方法对它们测定吸光度的变化量或变化率。将标准试样中的待测定的抗原的浓度设为横轴、将所测得的吸光度的变化量或变化率设为纵轴进行绘图来绘制标准曲线。对未知的受检试样也通过同样的方法测定吸光度的变化量或变化率，将测定结果代入上述标准曲线，由此能够定量地评价受检试样中的靶抗原。另外，预先设定吸光度的变化量或变化率的阈值，在大于阈值的情况下，能够定性地评价为在受试试样中存在靶抗原。
受试试样只要可能含有靶抗原，则没有特别限定，可举出血液、血清、血浆、尿、大便、唾液、组织液、脑脊液、拭子液等体液等或其稀释物，优选血液、血清、血浆、尿、大便、脑脊液或它们的稀释物。
一个实施方式涉及的靶抗原测定用试剂盒包含上述不溶性粒子。靶抗原测定用试剂盒能够用于定性地评价受试试样中有无靶抗原，或用于定量地评价受检试样中的靶抗原的浓度，更具体而言，能够用于上述靶抗原的测定方法。
一个实施方式中，靶抗原测定用试剂盒也可以是下述形态：包含粒状担载体和重链上未结合糖链的抗体，在测定时使两者结合来制备担载重链上未结合糖链的抗体的粒状担载体。
靶抗原测定用试剂盒可以还包含阳性对照或用于制作标准曲线的靶抗原，也可以包含稀释受试试样的缓冲液、用于混合不溶性粒子与受检试样的缓冲液、用于使重链上未结合糖链的抗体与粒状担载体结合的缓冲液等。
实施例
<抗IgE抗体(Anti-IgE Ab-Wild)的制作>
通过以下的方法制作重链的恒定区包含序列号5的抗体。
利用日本专利第5015012号公报中记载的植物瞬时表达系统来进行制备。通过BsaI打开烟草花叶病毒(TMV)载体pICH56122(图3)及包含抗IgE抗体重链编码序列及Bsa I位点的合成DNA，与T4 DNA连接酶于37℃反应过夜进行连接。将连接反应液加入大肠杆菌感受态细胞，通过热休克法进行转化，于37℃培养过夜。使用QIAprep Spin Miniprep Kit(QIAGEN公司制)，从培养液得到抗IgE抗体重链编码载体。同样地，使用马铃薯X病毒(PVX)载体pICH56131(图3)及包含抗IgE抗体轻链编码序列及Bsa I位点的合成DNA，得到抗IgE抗体轻链编码载体。将这些载体分别加入各自的农杆菌感受态细胞(AgrobacteriumCompetent Cells)，通过电穿孔法进行转化，于28℃培养3天。分别将培养液以成为1/1000的方式与一种浸润缓冲液(10mM MES 10mM MgSO4 pH5.5)混合，浸润本氏烟草(Nicotianabenthamiana)的叶，在1周左右收获。将收获的叶(感染叶)冷冻。
称取冷冻的感染叶200g，利用剪切搅拌机(Cutter Mixers)进行粉碎。向粉碎物中添加提取溶液(100mM Tris、250mM NaCl、40mM抗坏血酸钠)200mL，对感染叶反复进行粉碎。离心分离并回收上清液。利用0.22μm过滤器过滤经回收的液体。通过对滤液进行蛋白A柱层析来除去杂质。
<不存在糖链结合基序的抗IgE抗体(Anti-IgE Ab-N-Q)的制作>
通过与重链的恒定区包含序列号5的抗体(Anti-IgE Ab-Wild)同样的方法制作重链的恒定区包含序列号31的抗体。
<不存在糖链结合基序的抗IgE抗体(Anti-IgE Ab-T-A)的制作>
通过与重链的恒定区包含序列号5的抗体(Anti-IgE Ab-Wild)同样的方法制作重链的恒定区的序列为序列号44的抗体。
通过α1,3-岩藻糖抗体的western印迹法来确认Anti-IgE Ab-Wild的重链上结合着糖链、和Anti-IgE Ab-N-Q及Anti-IgE Ab-T-A各自的重链上未结合糖链。
<抗IgE抗体的胶乳凝集试验>
(1)试剂的制备
使用针对IgE的抗体，如下制备基于免疫凝集法的测定试剂。
i)通过将0.07mg的抗体添加于聚苯乙烯胶乳浮游液1mL来制作使抗体担载于聚苯乙烯胶乳粒子而成的不溶性粒子。将该不溶性粒子以成为0.125质量％的方式悬浮于缓冲液(甘氨酸，pH7.3)中来制备不溶性粒子浮游液。
ii)制备缓冲液(甘氨酸，pH8.3)。
(2)利用自动分析装置进行的测定
自动分析装置使用日立公司制7180型自动分析装置，以光透射率来测定介由各浓度的靶抗原(IgE)试样与(1)记载的担载于聚苯乙烯胶乳粒子的抗体的抗原抗体反应的不溶性粒子的凝集状态。具体而言，相对于IgE溶液3.5μL而言，添加上述(1)(ii)中制备的缓冲液140μL，将该混合液于37℃进行搅拌混合。放置5分钟后，添加不溶性粒子浮游液70μL，然后于37℃进行搅拌混合。以吸光度变化量的形式测定约5分钟的凝集反应。
针对上述(1)中制备的Anti-IgE Ab-Wild、Anti-IgE Ab-N-Q及Anti-IgE Ab-T-A的不溶性粒子，评价基于与靶抗原的反应的凝集度，结果确认到Anti-IgE Ab-N-Q及Anti-IgE Ab-T-A的不溶性粒子与Anti-IgE Ab-Wild相比，凝集度大，能够进行高灵敏度的测定。
<抗CRP抗体(Anti-CRP Ab-Wild)的制作>
通过以下的方法制作重链的恒定区包含序列号1的抗体。
利用日本专利第5015012号公报中记载的植物瞬时表达系统来进行制备。通过BsaI打开烟草花叶病毒(TMV)载体pICH56122(图3)及包含抗CRP抗体重链编码序列及Bsa I位点的合成DNA，与T4 DNA连接酶于37℃反应过夜进行连接。将连接反应液加入大肠杆菌感受态细胞，通过热休克法进行转化，于37℃培养过夜。使用QIAprep Spin Miniprep Kit(QIAGEN公司制)，从培养液得到抗CRP抗体重链编码载体。同样地，使用马铃薯X病毒(PVX)载体pICH56131(图3)及包含抗CRP抗体轻链编码序列及Bsa I位点的合成DNA，得到抗CRP抗体轻链编码载体。将这些载体分别加入各自的农杆菌感受态细胞，通过电穿孔法进行转化，于28℃培养3天。分别将培养液以成为1/1000的方式与一种浸润缓冲液(10mM MES 10mMMgSO4 pH5.5)混合，浸润本氏烟草的叶，在1周左右收获。将收获的叶(感染叶)冷冻。
称取冷冻的感染叶200g，利用剪切搅拌机进行粉碎。向粉碎物中添加提取溶液(100mM Tris、250mM NaCl、5mM EDTA、40mM抗坏血酸钠)200mL，对感染叶反复进行粉碎。离心分离并回收上清液。利用0.22μm过滤器过滤经回收的液体。通过对滤液进行蛋白A柱层析来除去杂质。
<不存在糖链结合基序的抗CRP抗体(Anti-CRP Ab-T-A)的制作>
通过与重链的恒定区包含序列号1的抗体(Anti-CRP Ab-Wild)同样的方法制作重链的恒定区的序列包含序列号40的抗体。
通过α1,3-岩藻糖抗体的western印迹法来确认Anti-CRP Ab-Wild的重链上结合着糖链、和Anti-CRP Ab-T-A的重链上未结合糖链。
<抗CRP抗体的胶乳凝集试验>
(1)试剂的制备
使用针对CRP的抗体，如下制备基于免疫凝集法的测定试剂。
i)通过将0.06mg的抗体添加于聚苯乙烯胶乳浮游液1mL来制作使抗体担载于聚苯乙烯胶乳粒子而成的不溶性粒子。将该不溶性粒子以成为0.110质量％的方式悬浮于缓冲液(甘氨酸、pH7.3)中来制备不溶性粒子浮游液。
ii)制备缓冲液(甘氨酸，pH8.3)。
(2)利用自动分析装置进行的测定
自动分析装置使用日立公司制3500型自动分析装置，以光透射率来测定介由各浓度的靶抗原(CRP)试样与(1)记载的担载于聚苯乙烯胶乳粒子的抗体的抗原抗体反应的不溶性粒子的凝集状态。具体而言，相对于CRP溶液2.0μL而言，添加上述(1)(ii)中制备的缓冲液100μL，将该混合液于37℃进行搅拌混合。放置5分钟后，添加不溶性粒子浮游液100μL，然后于37℃进行搅拌混合。以吸光度变化量的形式测定约5分钟的凝集反应。
针对上述(1)中制备的Anti-CRP Ab-Wild及Anti-CRP Ab-T-A的不溶性粒子，评价基于与靶抗原的反应的凝集度，结果确认到Anti-CRP Ab-T-A的不溶性粒子与Anti-CRPAb-Wild相比，凝集度大，能够进行高灵敏度的测定。
Claims (12)
1.不溶性粒子，其含有粒状担载体、和担载于所述粒状担载体的针对靶抗原的抗体，其中，所述抗体的重链上未结合糖链。
2.如权利要求1所述的不溶性粒子，其中，所述粒状担载体为胶乳粒子。
3.如权利要求1或2所述的不溶性粒子，其中，所述抗体为IgG。
4.如权利要求3所述的不溶性粒子，其中，所述IgG的Fc区域具有与序列号1～13中的任一个氨基酸序列具有90％以上的同一性的氨基酸序列，但不存在糖链结合基序Asn-Xaa-Ser/Thr。
5.如权利要求3所述的不溶性粒子，其中，所述IgG的Fc区域具有下述氨基酸序列：
序列号14的氨基酸序列或与序列号14的氨基酸序列具有90％以上的同一性、且第180位的Asp未突变的氨基酸序列；
序列号15的氨基酸序列或与序列号15的氨基酸序列具有90％以上的同一性、且第176位的Asp未突变的氨基酸序列；
序列号16的氨基酸序列或与序列号16的氨基酸序列具有90％以上的同一性、且第227位的Asp未突变的氨基酸序列；
序列号17的氨基酸序列或与序列号17的氨基酸序列具有90％以上的同一性、且第177位的Asp未突变的氨基酸序列；
序列号18的氨基酸序列或与序列号18的氨基酸序列具有90％以上的同一性、且第174位的Asp未突变的氨基酸序列；
序列号19的氨基酸序列或与序列号19的氨基酸序列具有90％以上的同一性、且第180位的Asp未突变的氨基酸序列；
序列号20的氨基酸序列或与序列号20的氨基酸序列具有90％以上的同一性、且第185位的Asp未突变的氨基酸序列；
序列号21的氨基酸序列或与序列号21的氨基酸序列具有90％以上的同一性、且第179位的Asp未突变的氨基酸序列；
序列号22的氨基酸序列或与序列号22的氨基酸序列具有90％以上的同一性、且第176位的Asp未突变的氨基酸序列；
序列号23的氨基酸序列或与序列号23的氨基酸序列具有90％以上的同一性、且第172位的Asp未突变的氨基酸序列；
序列号24的氨基酸序列或与序列号24的氨基酸序列具有90％以上的同一性、且第183位的Asp未突变的氨基酸序列；
序列号25的氨基酸序列或与序列号25的氨基酸序列具有90％以上的同一性、且第179位的Asp未突变的氨基酸序列；或者
序列号26的氨基酸序列或与序列号26的氨基酸序列具有90％以上的同一性、且第173位的Asp未突变的氨基酸序列。
6.如权利要求3所述的不溶性粒子，其中，所述IgG的Fc区域具有下述氨基酸序列：
序列号27的氨基酸序列或与序列号27的氨基酸序列具有90％以上的同一性、且第180位的Gln未突变的氨基酸序列；
序列号28的氨基酸序列或与序列号28的氨基酸序列具有90％以上的同一性、且第176位的Gln未突变的氨基酸序列；
序列号29的氨基酸序列或与序列号29的氨基酸序列具有90％以上的同一性、且第227位的Gln未突变的氨基酸序列；
序列号30的氨基酸序列或与序列号30的氨基酸序列具有90％以上的同一性、且第177位的Gln未突变的氨基酸序列；
序列号31的氨基酸序列或与序列号31的氨基酸序列具有90％以上的同一性、且第174位的Gln未突变的氨基酸序列；
序列号32的氨基酸序列或与序列号32的氨基酸序列具有90％以上的同一性、且第180位的Gln未突变的氨基酸序列；
序列号33的氨基酸序列或与序列号33的氨基酸序列具有90％以上的同一性、且第185位的Gln未突变的氨基酸序列；
序列号34的氨基酸序列或与序列号34的氨基酸序列具有90％以上的同一性、且第179位的Gln未突变的氨基酸序列；
序列号35的氨基酸序列或与序列号35的氨基酸序列具有90％以上的同一性、且第176位的Gln未突变的氨基酸序列；
序列号36的氨基酸序列或与序列号36的氨基酸序列具有90％以上的同一性、且第172位的Gln未突变的氨基酸序列；
序列号37的氨基酸序列或与序列号37的氨基酸序列具有90％以上的同一性、且第183位的Gln未突变的氨基酸序列；
序列号38的氨基酸序列或与序列号38的氨基酸序列具有90％以上的同一性、且第179位的Gln未突变的氨基酸序列；或者
序列号39的氨基酸序列或与序列号39的氨基酸序列具有90％以上的同一性、且第173位的Gln未突变的氨基酸序列。
7.如权利要求3所述的不溶性粒子，其中，所述IgG的Fc区域具有下述氨基酸序列：
序列号40的氨基酸序列或与序列号40的氨基酸序列具有90％以上的同一性、且第182位的Ala未突变的氨基酸序列；
序列号41的氨基酸序列或与序列号41的氨基酸序列具有90％以上的同一性、且第178位的Ala未突变的氨基酸序列；
序列号42的氨基酸序列或与序列号42的氨基酸序列具有90％以上的同一性、且第229位的Ala未突变的氨基酸序列；
序列号43的氨基酸序列或与序列号43的氨基酸序列具有90％以上的同一性、且第179位的Ala未突变的氨基酸序列；
序列号44的氨基酸序列或与序列号44的氨基酸序列具有90％以上的同一性、且第176位的Ala未突变的氨基酸序列；
序列号45的氨基酸序列或与序列号45的氨基酸序列具有90％以上的同一性、且第182位的Ala未突变的氨基酸序列；
序列号46的氨基酸序列或与序列号46的氨基酸序列具有90％以上的同一性、且第187位的Ala未突变的氨基酸序列；
序列号47的氨基酸序列或与序列号47的氨基酸序列具有90％以上的同一性、且第181位的Ala未突变的氨基酸序列；
序列号48的氨基酸序列或与序列号48的氨基酸序列具有90％以上的同一性、且第178位的Ala未突变的氨基酸序列；
序列号49的氨基酸序列或与序列号49的氨基酸序列具有90％以上的同一性、且第174位的Ala未突变的氨基酸序列；
序列号50的氨基酸序列或与序列号50的氨基酸序列具有90％以上的同一性、且第185位的Ala未突变的氨基酸序列；
序列号51的氨基酸序列或与序列号51的氨基酸序列具有90％以上的同一性、且第181位的Ala未突变的氨基酸序列；或者
序列号52的氨基酸序列或与序列号52的氨基酸序列具有90％以上的同一性、且第175位的Ala未突变的氨基酸序列。
8.靶抗原测定用试剂盒，其包含权利要求1～7中任一项所述的不溶性粒子，或包含用于制备权利要求1～7中任一项所述的不溶性粒子的抗体及粒状担载体。
9.如权利要求8所述的试剂盒，其用于定性地评价受试试样中有无靶抗原，或用于定量地评价受检试样中的靶抗原的浓度。
10.靶抗原的测定方法，其使用权利要求1～7中任一项所述的不溶性粒子。
11.靶抗原的测定方法，所述测定方法包括：
使权利要求1～7中任一项所述的不溶性粒子与可能含有靶抗原的受试试样接触的工序；及
对由所述抗体与所述靶抗原的抗原抗体反应引起的所述不溶性粒子的凝集反应进行测定的工序。
12.如权利要求10或11所述的方法，其用于定性地评价受试试样中有无靶抗原，或用于定量地评价受检试样中的靶抗原的浓度。
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