WO2022086300A1 - 외래 항원을 코딩하는 유전물질을 포함하는, 타겟 조직의 크기 또는 부피 축소용 백신 조성물 또는 키트 - Google Patents

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서기원
홍승혜
권태우
김훈
이수진
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Definitions

  • the present invention relates to a pharmaceutical composition for reducing the size or volume of a target tissue by inducing an immune response including a genetic material encoding a foreign antigen, and more particularly, to a therapeutic vaccine composition for preventing and/or treating obesity will be. More particularly, it relates to a composition that induces cell death constituting a target site by immunotherapy with an antigen gene.
  • Obesity does not simply mean being overweight, but rather refers to a condition in which an excessive amount of body fat is accumulated in the body. is becoming Obesity, defined as excessive accumulation of fat, is accompanied by loss of adipose tissue metabolism, endocrine and immune function, and this pathological remodeling of adipose tissue is attracting attention as a pathophysiological factor of major metabolic diseases.
  • a lipolytic enzyme inhibitor As a drug treatment for obesity, 'olistas', a lipolytic enzyme inhibitor, is used, which causes some of the fat in the body to be discharged out of the body, and side effects such as diarrhea and fatty stools appear.
  • side effects such as diarrhea and fatty stools appear.
  • side effects as well as decomposition of fat in unwanted parts of a woman's body.
  • appetite suppressants that can be safely used, and bariatric surgery for the gastrointestinal tract may be helpful for highly obese patients with complications.
  • the present invention is to provide a new method or pharmaceutical composition capable of reducing the size or volume of the target tissue by administration to the target tissue. More specifically, the method or pharmaceutical composition may be administered locally to a desired site to kill mast cells. Another embodiment is to provide a novel anti-obesity therapeutic agent or vaccine for treatment. The vaccine composition may be applied after at least one preliminary vaccine has been applied to the subject.
  • the problem to be solved by the present invention is to provide a new type of anti-obesity therapeutic agent or vaccine for resolving only local obesity and completing a smooth body line.
  • the problem to be solved by the present invention is that the immune system attacks adipocytes expressing antigenic protein and helps to kill adipocytes, thereby killing adipocytes, but not affecting adipocytes in unwanted areas. would like to provide
  • One embodiment of the present invention administers a genetic material encoding an antigen derived outside the human body to a target tissue, and when the antigen gene is expressed in cells constituting the target tissue by the administered genetic material, pre-existing for this
  • a pharmaceutical composition preferably a vaccine composition
  • reducing tissue size or volume of a new concept, in which immunity acts to kill the cells and more specifically to provide a vaccine for preventing or treating obesity or a composition for removing subcutaneous fat cells do.
  • One embodiment of the present invention administers a genetic material encoding an antigen derived outside the human body to a target tissue, and when the antigen gene is expressed in cells constituting the target tissue by the administered genetic material, pre-existing for this It provides a method of reducing tissue size or volume of a new concept, in which immunity acts to kill the cell.
  • the inventors of the present invention have completed the present invention by confirming that the tissue constituting the cells can be reduced by killing the cells constituting the target site using an immune response.
  • the present invention it was confirmed through an experiment that it is possible to achieve effective removal and/or reduction of fat cells, and through this, body shape correction and obesity treatment effects can be exhibited.
  • One embodiment of the present invention is a pharmaceutical composition for reducing the tissue by administration to a target tissue, wherein the composition includes a genetic material encoding a foreign antigen.
  • One embodiment of the present invention provides the use of target cell death and target tissue reduction of a genetic material encoding a foreign antigen, and more specifically, the use of the genetic material for local adipose tissue reduction.
  • the genetic material encoding the foreign antigen is any one or more viruses selected from the group consisting of yellow fever virus, herpes zoster virus, and rubella virus; or an epitope thereof.
  • One embodiment may provide the use of target cell death or target tissue reduction of the virus or its epitope.
  • the tissue is not particularly limited, and for example, includes a tissue consisting of any one or more cells selected from the group consisting of adipocytes, muscle cells, bone cells, chondrocytes, skin cells, secretory cells, and blood cells, preferably the The tissue may be adipose tissue or muscle tissue, and more preferably subcutaneous adipose tissue.
  • the composition may induce reduction or death of adipocytes, particularly adipocytes distributed in subcutaneous fat.
  • the inventors of the present invention have fewer side effects compared to conventional fat removal surgery and drugs, and provide a composition or kit that can be expected to have a body correction effect by targeting only a local target area (eg, adipose tissue in a specific area) .
  • the present invention provides a pharmaceutical composition for reducing the size or volume of a target tissue by using immunotherapy that acts locally on a target site.
  • the present invention preferably provides a pharmaceutical composition, a vaccine composition, or a therapeutic vaccine composition that induces apoptosis of adipocytes, particularly subcutaneous adipocytes.
  • target tissue or target region refers to a cell population having the same structure and function to reduce size or volume.
  • body correction or body shape correction means that the size or volume of the tissue is reduced by killing or reducing the cells constituting the tissue (eg, adipose tissue) accumulated in the unwanted area to have an externally slim effect. it means.
  • locally acting means apoptosis or tissue size or It means bringing a volume reduction effect, and preferably can bring the effect within a range of 3 cm.
  • the immune cells When an individual is exposed to an antigen, the immune cells function as phagocytosis and antigen presenting.
  • the pharmaceutical composition of the present invention may be administered after an immune environment is created by intentionally or unintentionally infiltrating a foreign material such as a protein antigen, or an epitope thereof, into the body so that an immune response can be induced.
  • the pharmaceutical composition may be repeatedly administered into the body.
  • pre-existing immunity is induced by administering the genetic material contained in the pharmaceutical composition of the present invention to an individual, and then repeated administration of the composition results in monocytes, neutrophils, and lymphocytes in the human body. Natural killer cells, cytotoxic T cells, immune cells, physiologically active substances, antibodies, complement, etc.
  • Adipose cells presented with the antigen by the substances secreted by the immune action die and the size of the adipose tissue Or the volume may be reduced.
  • the composition may be used for body shape correction or body shape correction, and may be used for body shape correction in a local area.
  • the composition may be administered to muscle tissue and used for skin wrinkle improvement effects such as Botox, body shape correction through muscle contraction, and the like.
  • it can be used to remove benign or malignant tumors, or to remove warts on the skin.
  • the pharmaceutical composition includes a genetic material encoding at least one antigen, and the genetic material includes not only DNA and/or RNA, but also antisense nucleotides, mRNA, ssRNA (single- stranded RNA) and cDNA.
  • the antigen is a substance that causes an immune response to produce an antibody, and may include a tumor antigen, a virus, a bacteria, a protein, or an antigenic epitope.
  • the antigen may be included without limitation as long as it can induce immunity, and the antigen includes, but is not limited to, non-human antigens, virus-derived antigens, bacterial-derived antigens, fungal-derived antigens, protozoan-derived antigens, It may be any one or more selected from the group consisting of avian-derived antigen, parasite-derived antigen, mycoplasma-derived antigen, and plant-derived antigen, and the antigen may be expressed as a peptide or an intact protein or a part thereof.
  • Retroviridae eg human immunodeficiency virus such as HIV-1; Picornaviridae (eg polio virus, hepatitis A virus; enterovirus, human coxsackie) Viruses, rhinoviruses, echoviruses); Calciviridae (such as strains causing gastroenteritis); Togaviridae (such as equine encephalitis virus, rubella virus); Flaviridae (such as Dengue virus, encephalitis virus, yellow fever virus); Coronoviridae (eg coronavirus); Rhabdoviridae (eg bullous stomatitis virus, rabies virus); Filoviridae (eg Ebola) Virus); Paramyxoviridae (such as parainfluenza virus, parainfluenza virus, mumps virus, measles virus, respiratory syncytial virus); Orthomyxoviridae (such as influenza virus); Bungavirid
  • Non-limiting examples of bacterial-derived antigens include Pasteurella, Staphylococci, Streptococcus, Escherichia coli, Pseudomonas spp., and Salmonella spp. include Non-limiting examples of infectious bacteria include Helicobacter pyloris, Borelia burgdorferi, Legionella pneumophilia, Mycobacteria spp (such as M. tuberculosis). (tuberculosis), M. avium, M. intracellulare, M. kansaii, M.
  • Non-limiting examples of bacterial pathogens used in the present invention include: Streptococcus pneumoniae, Moraxella catarrhalis, Mycoplasma pneumoniae, Klebsiella pneumoniae, Haemophilus influenzae, Staphylococcus aureus, Chlamydia pneumoniae, Legionella pneumophila, or Bordatella pertussis or any bacteria that are pathogenic in the lungs.
  • Non-limiting examples of fungal-derived antigens include: Aspergillus fumigatus, Blastomyces sp., Coccidiodes immitis, Coccidiodes posadasi, Cryptococcus neoformans, Cryptococcus gatii, Fusarium.
  • Sestodes wormworm
  • Taenia saginata Taeniasolium
  • Diphyllobotrium spp. Hymenolepis nana
  • Hymenolepis diminuta examples of which include: Sestodes (wormworm), Taenia saginata, Taeniasolium, Diphyllobotrium spp.
  • Hymenolepis nana Hymenolepis diminuta.
  • Diphyllidium caninum Diphyllidium caninum, Nematodes (roundworm), A Ascaris rumbricoides, Stronggilloides stercoralis, Necator americanus, Ansilostoma duodenale, Ansilostomacaninium, Tichuli Stricura, Capilaria philippinensis, Trichostongilus spp., Tricinella spp., Necator americanus, Anisakis and related species, Angiostrongilus costarisensis, Enterobius vermicularis, Tremato Death (fluke), Faciolopsis buski, Heterophies species, Echinostoma species, Clonorchis sinensis, Officetorchis species, Fasiola species, Metagonimus yoko scissors, Shistozoma mansoni, Shisto and antigens derived from Zoma japonicum, Systozoma mekonggi, Systozoma intercal
  • the tissue size reduction aspect may include any one or more viruses selected from the group consisting of yellow fever virus, herpes zoster virus, rubella virus, influenza virus, mumps virus, and measles virus, preferably measles virus.
  • the genetic material encoding the antigen may include a nucleic acid molecule having the nucleic acid sequence represented by SEQ ID NO: 1.
  • the genetic material may include a nucleic acid molecule encoding a peptide having SEQ ID NO: 5 or 6.
  • the genetic material may include a polynucleotide having a nucleic acid sequence having at least 85% sequence homology with SEQ ID NO: 1 and capable of reducing the target tissue size or volume (ie, capable of achieving the object of the present invention).
  • the sequence homology may include 85% or more, 90% or more, 95% or more, 99% or more sequence homology.
  • the sequence homology may include 85% or more, 90% or more, 95% or more, 99% or more sequence homology.
  • the composition comprises IL-12, IL-2, IL-4, IL-5, IFN- ⁇ , IL-10, IL-1, IL-6, INF-alpha, INF-beta, TNF-alpha, and TNF- It may further include a genetic material encoding any one or more cytokines selected from the group consisting of beta, and it is preferable to include IL-12 in order to further maximize the immune stimulation effect by the antigen expressed by the genetic material. .
  • the composition may be provided by including the genetic material in a vector for delivery in animal cells.
  • the nucleic acid may be provided in an expression vector, such as a plasmid, etc.
  • the nucleic acid may include transcription elements suitable for expression in a mammalian cell, such as a human cell.
  • a "vector" can transport a genetic material to be administered into a cell.
  • the vector can be used for genetic material delivery.
  • such vectors may also comprise coding sequences operably linked to expression control sequences.
  • the composition can be included in a plasmid (eg, gWiz TM vector) that enables protein expression in animal cells of a gene corresponding to a structural protein of the yellow fever virus (17D) gene.
  • a plasmid eg, gWiz TM vector
  • the yellow fever virus may be used without limitation, for example, the yellow fever virus may include the 17D strain, but is not limited thereto.
  • the plasmid may include a nucleic acid molecule encoding a virus, or a fragment, variant or analog thereof. for example, SEQ ID NO: 1 or a fragment, variant, or analog thereof.
  • the composition may include a gene corresponding to the structural protein of the rubella virus gene in a plasmid (eg, gWiz TM vector) that enables protein expression in animal cells.
  • a plasmid eg, gWiz TM vector
  • the rubella virus may be used without limitation, for example, the rubella virus may include, but is not limited to, strain RA27/3.
  • the gene encoding the virus may include a gene encoding spike glycoproteins. Examples of the spike glycoprotein may include an E2-E1 heterozygote. For example, it may include a nucleic acid molecule encoding the protein of SEQ ID NO: 5 or a fragment, variant or analog thereof.
  • the composition may include a plasmid (eg, gWiz TM vector) that allows a gene corresponding to a structural protein of a varicella zoster virus gene to be expressed in animal cells.
  • a plasmid eg, gWiz TM vector
  • the herpes zoster virus may be used without limitation, for example, the herpes zoster virus may include Oka strain, but is not limited thereto.
  • the nucleic acid molecule encoding the virus may include a nucleic acid molecule encoding the surface protein gE protein. For example, it may include a nucleic acid molecule encoding the protein of SEQ ID NO: 6 or a fragment, variant or analog thereof.
  • fragment, variant or analog thereof' means that the protein, peptide, nucleic acid, nucleic acid molecule, or gene of the present invention achieves the purpose to be achieved, but the sequence homology is 85% or more, 90% or more, 95% or more, It may be understood to mean a part of a protein, peptide, nucleic acid, nucleic acid molecule, or gene, which may be greater than or equal to 99%.
  • including the fragment, variant or analog is meant to include a nucleic acid molecule of SEQ ID NO: 1, a nucleic acid molecule encoding SEQ ID NO: 5, or a nucleic acid molecule encoding SEQ ID NO: 6; Or, if the protein encoded by the nucleic acid molecule can achieve the objective, it can be understood as meaning that it is not excluded from the scope of the present invention.
  • the foreign genetic material of the present application may preferably include genetic material derived from a virus, and the virus may preferably include yellow fever virus, rubella virus, and/or herpes zoster virus.
  • the virus may be excellent in the effect of killing target tissue, preferably adipocytes, and reducing the size of the tissue. In addition, the effect can appear quickly and there are few side effects. In addition, even if stored for a long time as an injection, there is little risk of deterioration.
  • the composition may further enhance the effect of apoptosis of adipocytes or target tissue shrinkage by including an immune enhancer capable of enhancing a cellular immune response.
  • the composition may further include a genetic material encoding an immune enhancer capable of enhancing the immune enhancing effect, for example, an auxiliary genetic material encoding interleukin 12 (IL-12).
  • the auxiliary genetic material may be provided by, for example, inserting a coding region into the pSF-CMV-CMV-Sbfl vector.
  • the composition of the present invention may be used together with the above cytokines, genes encoding them or other adjuvants, as well as pharmaceutical carriers or excipients widely used in the art.
  • the composition is formulated for human or veterinary use. It can be administered by various routes.
  • the route of administration may be, but is not limited to, oral, transdermal, intramuscular, peritoneal, intravenous, subcutaneous, and nasal routes. More preferably, transdermal, muscle, peritoneal, or subcutaneous routes may be used.
  • the composition may be administered by any device or route through which the active material can move to the target cell, and the composition of the present invention or the genetic material contained in the composition may be delivered to the target tissue or cells constituting the tissue.
  • the administration method is not particularly limited.
  • it may be formulated and provided as an injection, a microneedle patch, or the like.
  • the injection is an aqueous solvent such as physiological saline solution and Ringel's solution, vegetable oil, higher fatty acid esters (eg, ethyl oleate), alcohols (
  • it can be prepared using a non-aqueous solvent such as ethanol, benzyl alcohol, propylene glycol, glycerin, etc.) , tocopherol, EDTA, etc.), emulsifiers, buffers for pH control, and preservatives to inhibit the growth of microorganisms (eg, phenylmercuric nitrate, thimerosal, benzalkonium chloride, phenol, cresol, benzyl alcohol, etc.) may include
  • the microneedle may include both insoluble and soluble microneeds
  • the genetic material and/or auxiliary genetic material included in the composition may be delivered into the body according to a conventional gene delivery method in the art.
  • gene delivery methods include physical delivery methods such as electroporation or gene guns, lipid-DNA complexes (Lipoplex), polymer-DNA complexes (Polyplex), liposomes, and dendrimers. Chemical delivery methods such as dendrimers, nanoparticles, or other suitable transfer vectors may all be used.
  • composition of the present invention is administered in a pharmaceutically effective amount.
  • pharmaceutically effective amount refers to an amount sufficient for the composition to exhibit therapeutic, ameliorating, or preventive effects, or to exhibit a vaccine effect, and not to cause side effects or serious or excessive immune response. it means.
  • the composition of the present invention may be administered with a genetic material due to its purpose of inducing an immune response and inducing apoptosis, and it is preferable to administer it 4-8 times, preferably 5 times, with an interval of 2-3 days. When administered as described above, it is possible to obtain the effect of tissue reduction or shrinkage by apoptosis of the target site. As the composition is administered in large amounts or multiple times, there may be a difference in the apoptosis effect, and an appropriate dosage may be adjusted for each site.
  • Another embodiment of the present invention reduces or reduces the size or volume of a tissue comprising administering a genetic material encoding a protein antigen, a vector comprising the genetic material, or a composition comprising them to a target tissue of an individual provides a way to The method is preferably capable of killing cells constituting the subcutaneous adipose tissue.
  • the i) method or ii) the genetic material encoding the protein antigen, the vector comprising the genetic material, or a composition comprising them, or a kit comprising the same is used for improving or treating obesity in an individual, wrinkle improvement use , for muscle reduction, for removing or reducing benign or malignant tumors, for removing warts, etc., for cosmetic purposes, for removing fat pockets under the eyes, and for alleviating dark circles.
  • wrinkle improvement use for muscle reduction, for removing or reducing benign or malignant tumors, for removing warts, etc.
  • cosmetic purposes for removing fat pockets under the eyes, and for alleviating dark circles.
  • the method may further include the step of creating an immune environment in the body before administering the genetic material, the vector including the genetic material, or a composition including them to the target tissue.
  • the step of creating an immune environment in the body may include administering a foreign substance capable of inducing an immune response.
  • the foreign material may be included without limitation as long as it is a material using a protein as an antigen.
  • One embodiment of the present invention may be provided not only for treatment, improvement, or prevention of various indications, but also for cosmetic purposes for improvement of appearance.
  • kits for reducing the target tissue size or volume, comprising a genetic material encoding a foreign antigen; And (b) provides a kit comprising an administration instruction for administering the vaccine.
  • the kit (c) may further include a composition comprising a protein antigen or an epitope thereof for the composition of an immune environment prior to administration of the composition (a).
  • (c) may be understood as at least one or more pre-vaccine or a composition for inducing an immune response.
  • the 'pre-vaccine' mentioned herein may be understood as a vaccine administered before the vaccine composition for reducing the target tissue size or volume of the present application is administered, and a vaccine for reducing the target tissue size or volume of the present application to obtain pre-existing immunity It may be understood as a vaccine composition administered before the composition is administered.
  • the prior vaccine may contain the same antigenic material as the antigenic material included in the vaccine composition for reducing the target tissue size or volume of the present application.
  • a vaccine composition for reducing target tissue size or volume, including genetic material encoding a foreign antigen may include yellow fever virus, rubella virus, and/or herpes zoster virus, (c) also yellow fever virus, rubella virus, and/or herpes zoster virus.
  • the (a) vaccine composition may further include a genetic material encoding a cytokine, and materials that can be used to increase the immune effect of the (a) composition may be included without limitation.
  • the cytokines are IL-12, IL-2, IL-4, IL-5, IFN- ⁇ , IL-10, IL-1, IL-6, INF-alpha, INF-beta, TNF-alpha, and TNF - May include any one or more selected from the group consisting of beta.
  • kits of the present invention may comprise at least one additional agent as defined herein in relation to the pharmaceutical composition, antimicrobial agent, DNase inhibitor RNase inhibitor, solubilizer and the like.
  • a kit may, for example, consist of one or more kit parts (eg, a container).
  • each container may be in a syringe, prefilled syringe, vial, bottle, jar, sealed sleeve, envelope or pouch, tube or blister package or any other suitable form in which the container is configured to prevent premature mixing of the components.
  • Each of the different components may be provided separately, or some of the different components may be provided together (ie, in the same container).
  • the kit may also include administration instructions having information on administration, administration method and dosage of any component.
  • Another embodiment of the present invention provides a syringe filled with a vaccine composition for reducing the size or volume of a target tissue, including a genetic material encoding a foreign antigen.
  • the syringe may further include a genetic material encoding a cytokine.
  • the cytokines are IL-12, IL-2, IL-4, IL-5, IFN- ⁇ , IL-10, IL-1, IL-6, INF-alpha, INF-beta, TNF-alpha, and TNF - May include any one or more selected from the group consisting of beta.
  • the present invention provides a novel composition for improving or treating obesity, which can kill cells of a specific target region, and can reduce or reduce the size or volume of a tissue.
  • a body shape correction effect or a body shape improvement effect can be obtained.
  • the present invention can provide a new type of anti-obesity treatment capable of resolving only topical obesity and completing a smooth body line.
  • the therapeutic agent for obesity of the present invention can selectively reduce only the tissue of a desired site, and does not affect the tissue of the unwanted site or cells constituting the same, and is effective for selective reduction of the local area.
  • composition of the present invention can be used for cosmetic purposes for improving the appearance.
  • NC denotes a normal mouse to which nothing was administered
  • ND Normal diet
  • HFD High fat diet
  • Adipose tissue (AT) after administration of a therapeutic vaccine.
  • FIG. 4 shows a statistical analysis result of a weight change rate of adipose tissue (AT).
  • MOCK/therapeutic agent therapeutic vaccine
  • MOCK/therapeutic agent + IL-12 was P-VALUE 0.0005.
  • 5 is a structural protein (capsid protein, prM protein, envelope protein, 119 ⁇ 2452 bp (2334 bp)) in the genome (GenBank: X03700.1) of Yellow fever virus (17D) encoding a genetic material (SEQ ID NO: 1) Shows the vector map inserted into gWiz TM vector. tga (stop codon) was added at the end.
  • IL-12 p35 is a restriction enzyme at MCS site I; It was inserted into EcoRI and XhoI sites, and IL-12 p40 was a restriction enzyme at MCS site II; It was inserted at the SalI and SpeI sites.
  • a genetic material for administration to an individual from which pre-existing immunity is induced and an immune enhancer that can be administered together with the genetic material were prepared as follows.
  • a genetic material encoding SEQ ID NO: 5, encoding E1-E2 protein of RA27/3 strain of Rubella virus was prepared.
  • a genetic material encoding the gE protein in the Oka strain of Varicella zoster virus encoding SEQ ID NO: 6 was prepared.
  • the vector map is shown in FIG. 5 .
  • SEQ ID NOs: 2 and 3 which are nucleic acid sequences corresponding to the coding regions (p35; 127-774bp, p40; 35-1042bp) of p35 (GenBank: M86672.1) and p40 (GenBank: M86671.1) of IL-12, respectively It was inserted into the pSF-CMV-CMV-Sbfl vector together with the kozak sequence.
  • the vector map is shown in FIG. 6 .
  • the kozak sequence is inserted at the front of each IL-12 synthesis.
  • the cloned YF-antigen plasmid and mIL12-plasmid are transformed into DH5a competent cells.
  • the cells were mass-cultured and plasmids were recovered using a plasmid prep kit.
  • Formation of pre-existing immunity was induced using live attenuated virus, a vaccine strain virus. 17D virus was used as the vaccine strain virus.
  • 17D virus live attenuated virus
  • 17D virus live attenuated virus
  • blood was collected and serum was isolated.
  • Antibodies specific for YFV were detected from the separated serum through ELISA analysis.
  • 17D virus used for injection was coated on a plate at a concentration of 5 x 10 4 pfu/well, and the assay sample (serum) was diluted and reacted for 2 h. After washing, the anti-mouse IgG-HRP secondary antibody was diluted 1/4000 and the reaction was carried out for 2 h. After washing, a coloring solution was added and reacted for 10 min to measure the OD value.
  • mice or obese-induced mice were divided into a group to which yellow fever vaccine was administered and a group to which they were not administered, respectively, and used in the experiment. All mice were given a normal diet from 3 days before administration of the therapeutic vaccine.
  • mice were divided into left and right and injected into two sites: inguinal adipose tissue and interscapular adipose tissue on one side. It was administered 5 times with an interval of 2-3 days, and the antigen DNA was 100ug/site, and the IL-12 DNA was 50ug/site, and a total of 150ug/site was used, and an empty vector was used according to the total amount of antigen DNA administered.
  • Body weights were measured before and after administration of the therapeutic vaccine. Seven days after the last therapeutic vaccine administration, mice were dissected, inguinal adipose tissue and interscapular adipose tissue were separated, and each weight was measured.
  • ND Normal diet
  • HFD 60% high fat diet
  • the average change rate of body weight and the effect of reducing adipose tissue after administration of the treatment for each group in Table 1 were confirmed, respectively, and shown in FIGS. 2 to 4 .
  • the body weight was measured before and after administration of the therapeutic vaccine (therapeutic agent, treatment), and the change in body weight was measured based on the body weight immediately before administration.
  • Both the vaccine 1 and therapeutic vaccine 2 groups showed an effect of reducing body weight, and the groups administered with the therapeutic vaccine 1 and 2 decreased significantly.
  • the weight loss was the greatest.
  • Figure 3 shows the weight of AT by separating inguinal AT (adipose tissue) and interscapular AT from the left and right sides of the mouse on the 7th day after administration of the therapeutic vaccine 5 times, and the empty vector or therapeutic vaccine is not administered in the same subject Shows the results of comparing the amount of fat weight loss based on AT. It can be seen that adipose tissue weight decreased when treated with therapeutic vaccines 1 and 2 when compared with the control and empty vector administration groups to which nothing was administered. In particular, it can be seen that the change in adipose tissue weight was much larger in the treatment vaccine 2 treatment group administered with IL-12.
  • the present invention may prevent and/or treat obesity.
  • the present invention provides a method for preventing and/or treating obesity by local injection.

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Abstract

본 발명은 외래 항원을 코딩하는 유전물질을 포함하는, 타겟 조직 크기 또는 부피 축소용 백신 조성물로, 바람직하게 상기 조성물은 비만 치료 또는 예방을 위한 백신 조성물로 제공될 수 있다. 상기 백신 조성물은 피하 지방 세포 제거용 조성물로 제공될 수 있다.

Description

외래 항원을 코딩하는 유전물질을 포함하는, 타겟 조직의 크기 또는 부피 축소용 백신 조성물 또는 키트
본 출원은 2020년 10월 23일에 출원된 한국특허출원 제10-2020-0138615호에 기초한 우선권을 주장하며, 해당 출원의 명세서 및 도면에 개시된 모든 내용은 본 출원에 원용된다. 본 발명은 외래 항원을 코딩하는 유전물질을 포함하여 면역반응을 유도해, 타겟 조직의 크기 또는 부피를 축소하기 위한 약학 조성물로, 상세하게는 비만을 예방 및/또는 치료하는 치료용 백신 조성물에 관한 것이다. 보다 상세하게는 항원 유전자에 의한 면역 요법으로 타겟 부위를 구성하는 세포의 사멸을 유도하는 조성물에 관한 것이다.
비만은 단순히 체중이 많이 나가는 것을 의미하기보다 '체내에 과다하게 많은 양의 체지방이 쌓여 있는 상태'를 말하며, 당뇨를 포함한 대사질환, 심혈관 질환, 암 등 다양한 만성질환의 발병률을 높이는 위험인자로 인식되고 있다. 지방의 과도한 축적으로 정의되는 비만은 지방조직의 대사, 내분비 및 면역기능 상실을 동반하며, 이러한 지방조직의 병적 리모델링이 주요한 대사질환의 병태생리요인으로 주목을 받고 있다.
비만 치료를 위한 약물치료로는 지방분해효소 억제제인 '올리스타스'를 사용하는데, 이는 체내 있는 지방의 일부를 몸 밖으로 배출되도록 하는 역할을 하는데, 부작용으로는 설사 및 지방변 등이 나타난다. 또한, 비만 치료를 위한 약물의 경우 많은 부작용이 있을 뿐만 아니라 여성의 신체 중 원하지 않는 부위의 지방도 분해시킬 수 있다. 현재 안전하게 사용할 수 있는 식욕억제제는 없는 상황이며, 합병증이 있는 고도 비만 환자의 경우에는 위장관에 대한 비만 수술이 도움이 될 수는 있다.
상기와 같은 문제점을 해결하기 위해 본 발명은 타겟 조직에 투여하여 타겟 조직의 크기 또는 부피를 축소할 수 있는 새로운 방법 또는 약학 조성물을 제공하고자 한다. 더욱 구체적으로 상기 방법 또는 약학 조성물은 원하는 부위에 국소적으로 투여되어 비만 세포를 사멸시킬 수 있다. 다른 구현예는 새로운 비만 치료제 또는 치료용 백신을 제공하고자 한다. 상기 백신 조성물은 적어도 1종 이상의 예비 백신이 개체에 적용된 후에 적용될 수 있다.
본 발명이 해결하고자 하는 과제는 국소비만을 해소하고 매끄러운 바디라인을 완성할 수 있는 새로운 형태의 비만 치료제 또는 치료용 백신을 제공하고자 한다.
본 발명이 해결하고자 하는 과제는 면역시스템이 항원단백질을 발현하는 지방세포를 공격하여 지방 세포 사멸을 도와, 지방 세포가 사멸하나, 원하지 않는 부위의 지방 세포에는 영향을 미치지 않는 새로운 지방 세포 감소용 조성물을 제공하고자 한다.
본 발명의 일 구현예는 인체 외부에서 유래된 항원을 코딩하는 유전물질을 타겟 조직에 투여하고, 투여된 유전물질에 의해 상기 타겟 조직을 구성하는 세포에서 항원 유전자가 발현하면, 이에 대해 pre-existing immunity가 작용하여 해당 세포를 사멸하는, 새로운 개념의 조직 크기 또는 부피 축소용 약학 조성물 (바람직하게 백신 조성물)을 제공하며, 더욱 구체적으로 비만 예방 또는 치료용 백신 또는 피하 지방 세포 제거용 조성물을 제공하고자 한다.
본 발명의 일 구현예는 인체 외부에서 유래된 항원을 코딩하는 유전물질을 타겟 조직에 투여하고, 투여된 유전물질에 의해 상기 타겟 조직을 구성하는 세포에서 항원 유전자가 발현하면, 이에 대해 pre-existing immunity가 작용하여 해당 세포를 사멸하는, 새로운 개념의 조직 크기 또는 부피 축소 방법을 제공한다.
본 발명의 발명자들은 면역 반응을 이용하여 타겟 부위가 구성하는 세포를 사멸시켜 상기 세포가 구성하는 조직을 축소할 수 있음을 확인하고 본 발명을 완성하게 되었다. 특히 본 발명을 통해 지방 세포의 효과적인 제거 및/또는 감소를 이룰 수 있고, 이를 통해 체형 교정 및 비만 치료 효과를 나타낼 수 있음을 실험을 통해 확인하게 되었다.
본 발명의 일 실시예는 타겟 조직에 투여하여 상기 조직을 축소하기 위한 약학 조성물로, 상기 조성물은 외래 항원을 코딩하는 유전물질을 포함한다. 본 발명의 일 실시예는 외래 항원을 코딩하는 유전물질의 타겟 세포 사멸, 타겟 조직 축소 용도를 제공하며, 더욱 구체적으로 상기 유전물질의 국소 지방 조직 축소 용도를 제공한다. 바람직하게 상기 외래 항원을 코딩하는 유전물질은 황열 바이러스, 대상포진 바이러스, 및 풍진 바이러스로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 바이러스; 또는 이들의 에피토프를 포함한다. 일 구현예는 상기 바이러스 또는 이들의 에피토프의 타겟 세포 사멸 또는 타겟 조직 축소용도를 제공할 수 있다. 상기 조직은 특별히 제한되지 않으며, 예를 들어, 지방세포, 근육세포, 골세포, 연골세포, 피부세포, 분비세포 및 혈세포로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 세포로 이루어진 조직을 포함하며, 바람직하게 상기 조직은 지방조직 또는 근육조직일 수 있으며, 더 바람직하게 피하 지방조직일 수 있다. 상기 조성물은 지방세포, 특히 피하지방에 분포된 지방세포의 감소 또는 사멸을 유도할 수 있다.
본 발명의 발명자들은 기존 지방제거 수술, 약물 등에 비해 부작용이 적고, 국소의 타겟 부위 (예를 들어, 특정 부위의 지방 조직)만을 타깃으로 하여 몸매 보정 효과를 기대할 수 있는 조성물, 또는 키트를 제공한다. 본 발명은 타겟 부위에 국소적으로 작용하며 면역요법을 이용해 타겟 조직의 크기 또는 부피 축소용 약학 조성물을 제공한다. 본 발명은 바람직하게 지방세포, 특히 피하 지방세포의 사멸을 유도하는 약학 조성물, 백신 조성물, 또는 치료용 백신 조성물을 제공한다.
본 명세서에서 사용된 “타겟 조직 또는 타겟 부위”는 크기 또는 부피를 축소시키기 위한 같은 구조와 기능을 갖는 세포 집단을 의미한다. 상기 “몸매 보정 또는 체형 보정”은 원하지 않는 부위에 축적된 조직 (예를 들어, 지방 조직)을 구성하는 세포를 사멸 또는 감소시켜 조직의 크기나 부피가 축소되어 외형적으로 슬림한 효과를 갖는 것을 의미한다. 본 명세서에서 사용된 “국소적으로 작용한다”는 것은 주사 투여 부위를 기준으로 반경 10cm, 9cm, 8cm, 7cm, 6cm, 5cm, 4cm, 3cm, 2cm, 1cm 이내에서 세포의 사멸 또는 조직의 크기 또는 부피 축소 효과를 가져오는 것을 의미하며, 바람직하게 3cm 이내의 범위에서 효과를 가져올 수 있다.
개체가 항원에 노출되었을 때, 면역세포가 기능적으로 식작용(Phagocytosis)과 항원표출(Antigen presenting)의 기능을 하게 된다. 일 실시예에서 면역 반응이 유도될 수 있도록 단백질 항원, 또는 이들의 에피토프 등과 같은 외래 물질을 의도적 또는 비의도적으로 체내에 침투하여 면역 환경이 조성된 후 본 발명의 약학 조성물을 투여할 수 있다. 또 다른 실시예를 통해, 상기 약학 조성물을 체내에 반복적으로 투여할 수도 있다. 다른 실시예에서 본 발명의 약학 조성물에 포함된 유전물질을 개체에 투여하여 pre-existing 면역을 유도하고, 이후 반복된 조성물의 투여로 인체 내의 단핵구(Monocyte), 호중구(Neutrophil), 림프구의 일종인 자연 살해 세포 (Natural killer cell), 세포독성 T 세포(Cytotoxic T cell) 면역세포, 생리 활성물질, 항체, 보체 등 면역작용으로 분비된 물질에 의해 상기 항원이 제시된 지방 세포는 사멸하여 지방 조직의 크기 또는 부피가 감소될 수 있다. 상기 조성물은 몸매 보정 또는 체형 보정 용도로 이용될 수 있으며, 국소 부위의 체형 보정 용도로 이용될 수 있다. 또한 상기 조성물은 근육 조직에 투여되어 보톡스와 같은 피부주름 개선 효과, 근육 수축을 통한 몸매 보정 용도 등으로 이용될 수도 있다. 뿐만 아니라, 양성 또는 악성 종양 제거, 또는 피부의 사마귀 제거에도 이용될 수 있다.
상기 약학 조성물은 적어도 하나 이상의 항원을 코딩하는 유전물질을 포함하며, 상기 유전물질은 DNA 및/또는 RNA를 포함할 뿐만 아니라, 상기 유전물질과 연관된 안티센스 뉴클레오티드(antisense nucleotide), mRNA, ssRNA(Single-Stranded RNA), cDNA 등도 포함된다. 상기 항원은 면역 반응을 일으켜 항체를 생산하게끔 만드는 물질로, 종양 항원, 바이러스, 박테리아, 단백질, 또는 항원의 에피토프를 포함할 수 있다. 상기 항원은 면역을 유도할 수 있다면 제한없이 포함될 수 있으며, 상기 항원은 이에 한정되지는 않지만, 이미 업계에서 잘 알려진 비인간 유래 항원, 바이러스 유래 항원, 세균 유래 항원, 진균 유래 항원, 원생동물 유래 항원, 조류 유래 항원, 기생충 유래 항원, 마이코플라즈마 유래 항원, 및 식물 유래 항원으로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나 이상일 수 있으며, 항원은 펩타이드 또는 온전한 단백질 또는 그의 일부로서 발현될 수 있다. 구체적으로 바이러스의 비제한적 예는 레트로비리대(Retroviridae)(예컨대 인간 면역결핍 바이러스, 예컨대 HIV-1; 피코르나비리대(Picornaviridae)(예컨대 폴리오 바이러스, A형 간염 바이러스; 엔테로바이러스, 인간 콕사키 바이러스, 리노바이러스, 에코바이러스); 칼시비리대(Calciviridae)(예컨대 위장염을 초래하는 균주); 토가비리대(Togaviridae)(예컨대 말 뇌염 바이러스, 루벨라 바이러스); 플라비리대(Flaviridae)(예컨대 뎅기 바이러스, 뇌염 바이러스, 황열 바이러스); 코로노비리대(Coronoviridae)(예컨대 코로나바이러스); 라브도비리대(Rhabdoviridae)(예컨대 수포성 구내염 바이러스, 광견병 바이러스); 필로비리대(Filoviridae)(예컨대 에볼라 바이러스); 파라믹소비리대(Paramyxoviridae)(예컨대 파라인플루엔자 바이러스, 파라인플루엔자 바이러스, 볼거리 바이러스, 홍역 바이러스, 호흡기 세포융합 바이러스); 오르토믹소비리대(Orthomyxoviridae)(예컨대 인플루엔자 바이러스); 분가비리대(Bungaviridae)(예컨대 한탄 바이러스, 분가 바이러스, 플레보바이러스 및 나이라 바이러스); 아레나 비리대(Arena viridae)(출혈열 바이러스); 레오비리대(Reoviridae)(예컨대 레오바이러스, 오르비바이러스 및 로타바이러스); 비르나비리대(Birnaviridae); 헤파드나비리대(Hepadnaviridae)(B형 간염 바이러스); 파르보비리대(Parvovirida)(파르보바이러스); 파포바비리대(Papovaviridae)(파필로마 바이러스, 폴리오마 바이러스); 아데노비리대(Adenoviridae)(대부분의 아데노바이러스); 헤르페스비리대(Herpesviridae)(헤르페스 심플렉스 바이러스(HSV) 1 및 2, 바리셀라 조스터 바이러스, 사이토메갈로바이러스(CMV), 헤르페스 바이러스; 폭스비리대(Poxviridae)(바리올라 바이러스, 백시니아 바이러스, 폭스 바이러스); 및 이리도비리대(Iridoviridae)(예컨대 아프리카 돼지 열병 바이러스)를 포함한다. 세균 유래 항원의 비제한적 예는 파스네우렐라(Pasteurella), 스타필로코커스(Staphylococci), 스트렙토코커스(Streptococcus), 에스세리키아 콜라이(Escherichia coli), 슈도모나스(Pseudomonas) 종, 및 살모넬라(Salmonella)종을 포함한다. 감염성 박테리아의 비제한적인 예는 헬리코박터 파일로리스(Helicobacter pyloris), 보렐리아 버그도르페리(Borelia burgdorferi), 레지오넬라 뉴모필리아(Legionella pneumophilia), 마이코박테리아 속(Mycobacteria spp)(예컨대 M. 투베르쿨로시스(tuberculosis), M. 아비움(avium), M. 인트라셀룰라레(intracellulare), M. 칸사이이(kansaii), M. 고르도니(gordonae)), 스타필로코커스 아루에우스(Staphylococcus aureus), 네이세리아 고노레아(Neisseria gonorrhoeae), 네이세리아 메닌지티데스(meningitides), 리스테리아 모노사이토게네스(Listeria monocytogenes), 스트렙토코커스 피오게네스(스트렙토코커스 pyogenes)(그룹 A 스트렙토코커스), 스트렙토코커스 아갈락티이(agalactiae)(그룹 B 스트렙토코커스), 스트렙토코커스(비리단스 그룹), 스트렙토코커스 패칼리스(faecalis), 스트렙토코커스 보비스(bovis), 스트렙토코커스(아나에로빅 종), 스트렙토코커스 뉴모니애(pneumonia), 병원성 캄필로박터 속(Campylobacter sp.), 엔테로코커스 속(Enterococcus sp.), 해모필러스 인플루엔재(Haemophilus influenzae), 바실러스 안트라시스(Bacillus antracis), 코리네박테리움 디프테리애(corynebacterium diphtheria), 코리네박테리움 속, 에리시펠로트릭스 루시오파티애(Erysipelothrix rhusiopathiae), 클로스트리디움 페르프린저스(Clostridium perfringers), 클로스트리디움 테타니(tetani), 엔테로박터 애로게네스(Enterobacter aerogenes), 클레브시엘라 뉴모니애(Klebsiella pneumoniae), 파스투렐라 멀토시다(Pasturella multocida), 박테리오이데스 속(Bacteroides sp.), 푸소박테리움 누클레아툼(Fusobacterium nucleatum), 스트렙토바실러스 모닐리포르미스(Streptobacillus moniliformis), 트레포네마 팔리디움(Treponema pallidium), 트레포네마 페르테누에(pertenue), 렙토스피라(Leptospira), 리케치아(Rickettsia), 및 악티노마이세스 이스라엘리(Actinomyces israelli)로부터 유래된 항원을 비제한적으로 포함할 수 있다. 본 발명에서 사용되는 세균성 병원체의 비제한적인 예로는: 스트렙토코쿠스뉴모니아에, 모락셀라 카타랄리스, 미코플라즈마뉴모니아에, 클렙시엘라 뉴모니아에, 헤모필루스 인플루엔자, 스타필로코쿠스아우레우스, 클라미디아 뉴모니아에, 레지오넬라 뉴모필라, 또는 보르다텔라퍼투시스 또는 폐에서 병원성인 모든 세균을 들 수 있다. 진균 유래 항원의 비제한적인 예로는: 아스퍼질러스푸미가투스, 블라스토마이세스sp., 콕시디오데스임미티스, 콕시디오데스 포사다시이, 크립토코쿠스 네오포르만스, 크립토코쿠스 가티이, 푸사리움sp., 히스토플라즈마캅슐라툼, 파에실로마이세스sp., 파라콕시디오데스브라질리엔시스, 페니실리움 마르네페이, 뉴모시스티스지로베치, 슈달레체리아보이디이, 세도스포리움아피오스퍼뭄, 리조푸스sp., 뮤코sp., 앱시디아sp., 쿠닝가멜라sp., 세도스포리움프롤리피칸스, 스타키보트리스챠타룸, 트리코더마롱기브라키아티움, 트리코스포론sp.등으로부터 유래된 항원일 수 있다. 기생충 유래의 항원성 성분들을 포함할 수 있으며, 이의 예로는: 세스토데스 (총충), 타에니아사기나타, 타에니아솔리움, 디필로보트리움 종, 히메놀레피스 나나, 히메놀레피스디미누타, 디필리디움 카니눔, 네마토데스 (회충), A아스카리스룸브리코이데스, 스트롱길로이데스스테르코랄리스, 네카토르아메리카누스, 안실로스토마듀오데날레, 안실로스토마카니늄, 티추리스트리추라, 카필라리아필리피넨시스, 트리코스트롱길루스 종, 트리치넬라 ㅈ조종, 네카토르아메리카누스, 아니사키스 및 관련 종, 안지오스트롱길루스코스타리센시스, 엔테로비우스베르미쿨라리스, 트레마토데스 (흡충), 파시올롭시스부스키, 헤테로피에스 종, 에키노스토마 종, 클로노르치스시넨시스, 오피스토르치스 종, 파시올라 종, 메타고니무스요코가위, 쉬스토조마만소니, 쉬스토조마 자포니쿰, 쉬스토조마메콩기, 쉬스토조마인터칼라툼, 에치노스토마 종 및 파라고니무스 종으로부터 유래된 항원을 포함할 수 있다. 바람직하게 조직 크기 감소 측면을 고려하여 황열 바이러스, 대상포진 바이러스, 풍진 바이러스, 인플루엔자 바이러스, 유행성이하선염 바이러스, 및 홍역 바이러스로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 바이러스를 포함할 수 있으며, 바람직하게 홍역 바이러스가 포함될 수 있다. 바람직하게 상기 항원을 코딩하는 유전물질은 서열번호 1로 표현되는 핵산 서열을 가지는 핵산분자를 포함할 수 있다. 또는 상기 유전물질은 서열번호 5 또는 6을 갖는 펩타이드를 암호화하는 핵산분자를 포함할 수 있다.
또한 상기 유전물질은 서열번호 1과 적어도 85% 이상의 서열 상동성을 갖고 타겟 조직 크기 또는 부피를 축소할 수 있는 (즉, 본 발명이 목적을 달성할 수 있는) 핵산 서열을 갖는 폴리뉴클레오티드를 포함할 수 있다. 상기 서열 상동성은 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 99% 이상의 서열 상동성을 포함할 수 있다. 또는 서열번호 5 또는 6의 펩타이드를 암호화하는 핵산분자와 적어도 85% 이상의 서열 상동성을 갖고 타겟 조직 크기 또는 부피를 축소할 수 있는 (즉, 본 발명이 목적을 달성할 수 있는) 핵산 서열을 갖는 폴리뉴클레오티드를 포함할 수 있다. 상기 서열 상동성은 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 99% 이상의 서열 상동성을 포함할 수 있다.
상기 조성물은 IL-12, IL-2, IL-4, IL-5, IFN-γ, IL-10, IL-1, IL-6, INF-알파, INF-베타, TNF-알파, 및 TNF-베타로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 사이토카인을 코딩하는 유전물질을 더 포함할 수 있으며, 상기 유전물질에 의해 발현되는 항원에 의한 면역 자극 효과를 더욱 극대화하기 위해 IL-12을 포함하는 것이 바람직하다.
상기 조성물은 상기 유전물질을 동물세포에서 전달하는 벡터에 포함시켜 제공될 수 있다. 상기 핵산은 발현 벡터, 예컨대 플라스미드 등에 포함되어 제공될 수 있으며, 바람직하게는, 핵산은 포유류 세포, 예컨대 인간 세포에서의 발현에 적합한 전사 요소들을 포함할 수 있다. 본 명세서에 사용되는 "벡터"는 투여하고자 하는 유전물질을 세포 내로 수송할 수 있다. 상기 벡터는 유전물질 전달을 위해 사용될 수 있다. 바람직하게는, 이러한 벡터는 발현 제어 서열에 작동가능하게 연결된 코딩 서열을 포함할 수도 있다.
바람직한 한 실시태양에서, 상기 조성물은 황열 바이러스 (Yellow fever virus(17D)) 유전자의 구조 단백질에 해당하는 유전자를 동물세포에서 단백질 발현 가능하도록 하는 플라스미드 (예를 들어, gWizTM vector)에 포함시킬 수 있다. 상기 황열 바이러스는 제한없이 사용될 수 있으며, 예를 들어 상기 황열바이러스는 17D strain을 포함할 수 있으나, 이에 한정되지 않는다. 상기 상기 플라스미드에는 바이러스를 암호화하는 핵산분자 또는 이의 또는 이의 단편, 변이체 또는 유사체를 포함할 수 있다. 예를 들어 서열번호 1 또는 이의 단편, 변이체, 또는 유사체를 포함할 수 있다.
바람직한 한 실시태양에서, 상기 조성물은 풍진 바이러스 (Rubella virus) 유전자의 구조 단백질에 해당하는 유전자를 동물세포에서 단백질 발현 가능하도록 하는 플라스미드 (예를 들어, gWizTM vector)에 포함시킬 수 있다. 상기 풍진 바이러스는 제한없이 사용될 수 있으며, 예를 들어 상기 풍진 바이러스는 RA27/3 strain을 포함할 수 있으나, 이에 한정되지 않는다. 상기 바이러스를 암호화하는 유전자는 스파이크 글라이코프로테인 (spike glycoproteins)을 암호화하는 유전자를 포함할 수 있다. 상기 스파이크 글라이코프로테인의 예로 E2-E1 이형접합체를 포함할 수 있다. 예를 들어, 서열번호 5의 단백질을 암호화하는 핵산분자 또는 이의 단편, 변이체 또는 유사체를 포함할 수 있다.
바람직한 한 실시태양에서, 상기 조성물은 대상포진 바이러스 (varicella zoster virus) 유전자의 구조 단백질에 해당하는 유전자를 동물세포에서 단백질 발현 가능하도록 하는 플라스미드 (예를 들어, gWizTM vector)에 포함시킬 수 있다. 상기 대상포진 바이러스는 제한없이 사용될 수 있으며, 예를 들어 상기 대상포진 바이러스는 Oka strain 을 포함할 수 있으나, 이에 한정되지 않는다. 상기 바이러스를 암호화하는 핵산분자는 표면 단백질인 gE 단백질을 암호화하는 핵산분자를 포함할 수 있다. 예를 들어, 서열번호 6의 단백질을 암호화하는 핵산분자 또는 이의 단편, 변이체 또는 유사체를 포함할 수 있다.
여기서 '이의 단편, 변이체 또는 유사체'라 함은 본 발명의 단백질, 펩타이드, 핵산, 핵산분자, 또는 유전자들이 달성하고자 하는 목적을 달성하되 서열 상동성이 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 99% 이상일 수 있는 단백질, 펩타이드, 핵산, 핵산분자, 또는 유전자의 일부를 의미하는 것으로 이해될 수 있다. 예를 들어 상기 단편, 변이체 또는 유사체를 포함한다는 의미는 서열번호 1의 핵산 분자, 서열번호 5을 암호화하는 핵산 분자, 또는 서열번호 6을 암호화하는 핵산 분자; 또는 상기 핵산 분자가 암호화하는 단백질이 달성할 수 있는 목적을 달성할 수 있다면, 본 발명의 범위에서 제외되지 않는다는 의미로 이해할 수 있다.
본 원의 외래 유전물질은 바람직하게 바이러스로부터 유래한 유전물질을 포함할 수 있으며, 상기 바이러스는 바람직하게 황열 바이러스, 풍진 바이러스, 및/또는 대상포진 바이러스를 포함할 수 있다. 상기 바이러스는 타겟 조직, 바람직하게 지방세포의 사멸, 조직의 크기 축소 효과가 우수할 수 있다. 또한 효과가 빠르게 나타날 수 있고, 부작용이 적다. 뿐만 아니라 주사제로 장기간 보관하더라도 변질될 우려가 적다.
다른 실시태양에서 상기 조성물은 세포성 면역반응을 증진시킬 수 있는 면역 증진제를 포함함으로써 지방세포 사멸, 또는 타겟 조직 축소 효과를 더욱 증진시킬 수 있다. 상기 조성물은 면역 증강 효과를 향상시킬 수 있는 면역 증강제를 코딩하는 유전물질, 예를 들어 인터루킨 12(IL-12)를 코딩하는 보조 유전물질을 더 포함할 수 있다. 상기 보조 유전물질은 예를 들어, pSF-CMV-CMV-Sbfl 벡터에 코딩 영역을 삽입하여 제공할 수 있다.
본 발명의 조성물은 상기 사이토카인, 이를 코딩하는 유전자 또는 다른 면역보조제 뿐만 아니라, 당업계에서 널리 사용되는 바와 같은 약제학적 담체 또는 부형제와 함께 사용될 수 있다. 상기 조성물은 인체 또는 수의용으로 제형화되어. 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여 경로는 경구, 경피, 근육, 복막, 정맥, 피하, 비강 경로를 이용할 수 있지만 이에 국한되지는 않는다. 보다 바람직하게는 경피, 근육, 복막, 피하 경로를 이용할 수 있다. 또한 상기 조성물은 활성 물질이 표적 세포로 이동할 수 있는 임의의 장치 또는 경로에 의해 투여될 수 있으며, 타겟 조직 또는 조직을 구성하는 세포에 본 발명의 조성물, 또는 상기 조성물에 포함되는 유전물질이 전달될 수 있다면 투여 방법은 특별히 제한되지 않는다. 예를 들어, 주사, 미세바늘 패치 등으로 제형화되어 제공될 수 있다. 예를 들어 주사로 사용될 경우 주사제는 상기 유전물질의 효과를 저해하지 않는 범위 내에서, 생리식염액, 링겔액 등의 수성 용제, 식물유, 고급 지방산 에스텔(예, 올레인산에칠 등), 알코올류(예, 에탄올, 벤질알코올, 프로필렌글리콜, 글리세린 등) 등의 비수성 용제 등을 이용하여 제조할 수 있고, 변질 방지를 위한 안정화제(예, 아스코르빈산, 아황산수소나트퓸, 피로아황산나트륨, BHA, 토코페롤, EDTA 등), 유화제, pH 조절을 위한 완충제, 미생물 발육을 저지하기 위한 보존제(예, 질산페닐수은, 치메로살, 염화벤잘코늄, 페놀, 크레솔, 벤질알코올 등) 등의 약제학적 담체를 포함할 수 있다. 미세바늘 패치로 사용될 경우 상기 미세바늘은 불용해성 및 용해성 미세바늘이 모두 포함될 수 있다.
또한 상기 조성물에 포함되는 유전물질 및/또는 보조 유전물질은 업계의 통상적인 유전자 전달 방법에 따라 체내로 전달될 수 있다. 비 제한적인 예로 유전자 전달 방법인 전기천공법이나 유전자총과 같은 물리적 전달방법, 지질-유전자 결합체(Lipid-DNA complex: Lipoplex), 폴리머-유전자 결합체(Polymer-DNA complex: Polyplex), 리포좀, 덴드리머들(dendrimers), 나노입자들(nanoparticles), 또는 다른 적절한 이동(transfer) 벡터와 같은 화학적 전달방법 등이 모두 사용될 수 있다.
본 발명의 조성물은 약제학적 유효량으로 투여한다. 용어 "약제학적 유효량"이란 조성물이 치료, 개선, 또는 예방 효과를 나타낼 수 있거나, 백신효과를 나타낼 수 있을 정도의 충분한 양을 의미하며, 또한 부작용이나 심각한 또는 과도한 면역반응을 일으키지 않을 정도의 양을 의미한다. 본 발명의 조성물은 면역 반응을 유도하고, 세포 사멸을 유도하는 것을 목적으로 하는 특성상 유전물질을 투여할 수 있으며, 2-3일 간격으로 4-8회, 바람직하게 5회 투여하는 것이 바람직하다. 상기와 같이 투여하였을 때, 타겟 부위의 세포 사멸로 조직의 감소 또는 축소 효과를 얻을 수 있다. 상기 조성물은 다량 또는 다회 투여할수록 세포 사멸 효과에 차이가 있을 수 있으며, 부위별로 적절한 투여량을 조절하여 사용할 수 있다.
본 발명의 다른 구현예는 단백질 항원을 코딩하는 유전물질, 상기 유전물질을 포함하는 벡터, 또는 이들을 포함하는 조성물을 개체의 타겟 조직에 투여하는 단계를 포함하는, 조직의 크기 또는 부피를 축소 또는 감소하는 방법을 제공한다. 상기 방법은 바람직하게 피하 지방 조직을 구성하는 세포를 사멸시킬 수 있다. 상기 i) 방법 또는 ii) 상기 단백질 항원을 코딩하는 유전물질, 상기 유전물질을 포함하는 벡터, 또는 이들을 포함하는 조성물, 또는 이를 포함하는 키트는 개체의 비만증을 개선 또는 치료하기 위한 용도, 주름 개선 용도, 근육 축소 용도, 양성 또는 악성 종양 제거 또는 축소 용도, 사마귀 제거 용도 등으로 사용될 수 있고, 미용 목적으로 눈 밑의 지방 주머니를 제거하는 용도로 사용될 수도 있고, 이를 통해 다크서클을 완화하기 위한 용도로 사용될 수 있다.
상기 방법은 상기 유전물질, 상기 유전물질을 포함하는 벡터, 또는 이들을 포함하는 조성물을 타겟 조직에 투여하기 전에 체내의 면역 환경을 조성하는 단계를 더 포함할 수 있다. 상기 체내 면역 환경을 조성하는 단계는 면역 반응이 유도될 수 있는 외래 물질을 투여하는 단계를 포함할 수 있다. 상기 외래 물질은 단백질을 항원으로 이용하는 물질이면 제한없이 포함될 수 있다.
본 발명의 일 구현예는 다양한 적응증의 치료, 개선, 또는 예방 용도로 제공될 수 있을 뿐만 아니라, 외형의 개선을 위한 미용 목적으로도 제공될 수 있다.
본 발명의 다른 실시예는 (a) 외래 항원을 코딩하는 유전물질을 포함하는, 타겟 조직 크기 또는 부피 축소용 백신 조성물; 및 (b) 상기 백신 투여를 위한 투여지침서를 포함하는, 키트를 제공한다. 상기 키트는 (c) 상기 (a) 조성물 투여 전에 면역 환경 조성을 위한 단백질 항원 또는 이의 에피토프를 포함하는 조성물이 더 포함될 수 있다. 여기서 상기 (c)는 적어도 1종 이상의 사전 백신(pre-vaccine) 또는 면역반응 유도를 위해 조성물로 이해될 수 있다.
본원에서 언급된 '사전 백신'은 본원의 타겟 조직 크기 또는 부피 축소용 백신 조성물이 투여되기 전에 투여되는 백신으로 이해될 수 있으며, pre-existing immunity를 얻기 위해 본원의 타겟 조직 크기 또는 부피 축소용 백신 조성물이 투여되기 전에 투여되는 백신 조성물로 이해될 수 있다. 상기 사전 백신은 본원의 타겟 조직 크기 또는 부피 축소용 백신 조성물에 포함되는 항원물질과 동일한 항원물질을 포함할 수 있다. 예를 들어, (a) 외래 항원을 코딩하는 유전물질을 포함하는, 타겟 조직 크기 또는 부피 축소용 백신 조성물은 황열 바이러스, 풍진 바이러스, 및/또는 대상포진 바이러스를 포함할 수 있으며, (c)도 황열 바이러스, 풍진 바이러스, 및/또는 대상포진 바이러스를 포함할 수 있다.
상기 (a) 백신 조성물은 사이토카인을 코딩하는 유전물질을 더 포함할 수 있으며, 상기 (a) 조성물의 면역 효과 상승을 위해 사용될 수 있는 물질은 제한없이 포함될 수 있다. 상기 사이토카인은 IL-12, IL-2, IL-4, IL-5, IFN-γ, IL-10, IL-1, IL-6, INF-알파, INF-베타, TNF-알파, 및 TNF-베타로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상을 포함할 수 있다.
본 발명의 키트에서, 약제학적 조성물, 항미생물제, DNase 억제제 RNase 억제제, 가용화제 등과 관련하여 본 명세서에 정의된 바와 같은 적어도 하나의 추가 제제를 포함할 수 있다. 키트는 예를 들어 1이상의 키트 부품 (예를 들어, 용기)으로 이루어질 수 있다. 예를 들어, 각 용기는 시린지, 프리필드 시린지, 바이알, 병, 단지, 밀봉된 슬리브, 엔벨로프 또는 파우치, 튜브 또는 블리스터 패키지 또는 용기가 구성 요소의 조기 혼합을 방지하도록 구성된 임의의 다른 적합한 형태일 수 있다. 상이한 구성 요소들 각각은 개별적으로 제공될 수 있거나, 또는 상이한 구성 요소들 중 일부가 함께 (즉, 동일한 용기 내에) 제공될 수 있다. 상기 키트는 또한 임의의 성분의 투여, 투여방법 및 투여량에 대한 정보를 갖는 투여지침서를 포함할 수 있다.
본 발명의 다른 실시예는 외래 항원을 코딩하는 유전물질을 포함하는, 타겟 조직 크기 또는 부피 축소용 백신 조성물이 충전된 시린지를 제공한다. 상기 시린지는 사이토카인을 코딩하는 유전물질을 더 포함할 수 있다. 상기 사이토카인은 IL-12, IL-2, IL-4, IL-5, IFN-γ, IL-10, IL-1, IL-6, INF-알파, INF-베타, TNF-알파, 및 TNF-베타로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상을 포함할 수 있다.
본 발명은 타겟으로 하는 특정 부위의 세포를 사멸시킬 수 있고, 조직의 크기 또는 부피를 축소 또는 감소할 수 있는 새로운 비만 개선 또는 치료용 조성물을 제공한다. 상기 조성물을 투여하여 체형 보정 효과 또는 체형 개선 효과를 얻을 수 있다.
본 발명은 국소비만을 해소하고 매끄러운 바디라인을 완성할 수 있는 새로운 형태의 비만 치료제를 제공할 수 있다.
본 발명의 비만 치료제는 원하는 부위의 조직만 선택적으로 감소시킬 수 있고, 원하지 않는 부위의 조직 또는 이를 구성하는 세포에는 영향을 미치지 않는, 선택적인 국소부위 축소에 효과적이다.
또한 본 발명의 조성물은 외형 개선을 위한 미용 목적으로도 사용될 수 있다.
도 1은 Yellow fever 백신주인 17D 바이러스를 투여하여 pre-existing immunity을 유도한 결과를 보여준다. 면역 환경 조성을 확인하기 위해 상기 백신주 투여 2주 후에 blood 혈청을 분리하여 Yellow fever virus에 대한 IgG 항체가를 측정한 결과이다. NC는 아무것도 투여되지 않은 정상 마우스, ND(Normal diet)는 일반 식이가 적용된 마우스, HFD(High fat diet)는 고열량 식이가 적용된 비만 유도 마우스를 각각 나타낸다.
도 2는 치료용 백신 투여 직전의 몸무게를 기준으로 투여 전과 후에 몸무게 변화를 측정한 결과이다.
도 3은 치료용 백신 투여 후 AT(Adipose tissue)의 무게 변화 정도를 보여주는 결과이다.
도 4는 AT(Adipose tissue)의 무게 변화율 통계 분석 결과를 보여준다. 통계 분석 결과, MOCK/치료제 (치료용 백신)는 P-VALUE 0.03007, MOCK/치료제 + IL-12 는 P-VALUE 0.0005로 통계학적으로 MOCK에 비하여 치료제 단독 처리 및 치료제 + IL-12에서 각각 유의미한 차이를 볼 수 있었다. 치료제 단독처리와 치료제와 IL-12 동시 처리의 2 그룹 모두에서 유의미한 차이를 볼 수 있었음을 알 수 있다.
도 5는 Yellow fever virus(17D)의 genome(GenBank: X03700.1) 에서 구조 단백질(capsid protein, prM protein, envelope protein, 119 ~ 2452 bp (2334bp))을 코딩하는 유전물질 (서열번호 1)를 gWizTM vector에 삽입한 벡터맵을 보여준다. tga (stop codon)을 마지막에 추가하였다.
도 6은 IL-12의 p35(GenBank: M86672.1)와 p40(GenBank: M86671.1)의 coding region(p35; 127~774bp, p40; 35~1042bp)에 해당하는 핵산 서열인 서열번호 2 및 3을 각각 kozak sequence와 함께 pSF-CMV-CMV-Sbfl vector에 삽입한 벡터맵을 보여준다. IL-12 p35 는 MCS site I에서 제한효소; EcoRI 및 XhoI 부위에 삽입 되었고, IL-12 p40는 MCS site II에서 제한효소 ; SalI 및 SpeI 부위에 삽입되었다.
이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 실시예 등을 들어 상세하게 설명하기로 한다. 그러나, 본 발명에 따른 실시예들은 여러 가지 다른 형태로 변형될 수 있으며, 본 발명의 범위가 하기 실시예들에 한정되는 것으로 해석되어서는 안 된다. 본 발명의 실시예들은 당업계에서 평균적인 지식을 가진 자에게 본 발명을 보다 완전하게 설명하기 위해 제공되는 것이다.
1. 지방 세포 분해용 백신의 제조
실험을 위해 Pre-existing immunity가 유도된 개체에 투여하기 위한 유전물질과 상기 유전물질과 함께 투여될 수 있는 면역증강제를 다음과 같이 제조하였다.
(1) 외래 항원 준비
1) 황열 바이러스의 유전물질 준비
먼저, Yellow fever virus(17D)의 genome(GenBank: X03700.1) 에서 구조 단백질(capsid protein, prM protein, envelope protein, 119 ~ 2452 bp (2334bp))을 코딩하는 유전물질 (서열번호 1)를 준비하였다.
2) 풍진 바이러스(Rubella virus)의 유전물질 준비
서열번호 5를 암호화하는, Rubella virus의 RA27/3 strain의 E1-E2 protein을 코딩하는 유전물질을 준비하였다.
3) 대상포진 바이러스(Varicella zoster virus)의 유전물질 준비
서열번호 6을 암호화하는 Varicella zoster virus의, Oka strain 중 gE protein을 코딩하는 유전물질을 준비하였다.
(2) 동물세포에서 발현되는 벡터 준비
동물세포에서 단백질 발현 가능한 gWizTM vector에 황열바이러스의 유전물질을 삽입하하여 대표적으로 지방세포 사멸 결과를 확인하였다. 벡터맵은 도 5에 나타냈다.
(3) 보조 유전물질 준비
다음으로, 보조 유전물질로 면역증강제를 준비하였다. IL-12의 p35(GenBank: M86672.1)와 p40(GenBank: M86671.1)의 coding region(p35; 127~774bp, p40; 35~1042bp)에 해당하는 핵산 서열인 서열번호 2 및 3을 각각 kozak sequence와 함께 pSF-CMV-CMV-Sbfl vector에 삽입하였다. 벡터맵은 도 6에 나타냈다.
그리고 각각의 IL-12 합성시에 맨앞에 kozak sequence가 삽입되어 있다.
Cloning된 YF-antigen plasmid와 mIL12- plasmid는 DH5a competent cell 에 transformation 한다. 해당 세포를 대량 배양하고 plasmid prep kit를 이용하여 plasmid를 회수하였다.
2. 지방세포 사멸 확인
(1) 실험 방법
1) Diet induced obese(DIO) 마우스 생산
C57BL/6J, 3w, female 마우스를 일반 사료 및 60% 고지방 사료(high fat diet)로 각각 공급하였다. 매 1주 간격으로 몸무게를 측정하고 10~15주간 사육 후 정상 마우스의 25% 이상 몸무게 증가하면 비만 유도 마우스로 간주하여 실험에 사용하였다.
2) Pre-existing immunity 유도와 항체가 측정
백신주 바이러스인 약독화 생바이러스를 이용하여 pre-existing immunity 형성을 유도하였다. 상기 백신주 바이러스로 17D 바이러스를 이용하였다.
마우스의 왼쪽 뒷다리 근육에 17D 바이러스 (약독화 생바이러스)를 2 x 105 pfu/1회당 농도로 2주간격 3회 주사하였다. 마지막 주사 후 2주 후에 blood를 수집하고 혈청을 분리하였다. 분리한 혈청은 ELISA 분석을 통해 YFV에 특이적인 항체를 검출하였다. ELISA 분석을 위해, 주사에 사용된 17D virus를 5 x 104 pfu/well 농도로 plate에 coating하고, 분석 샘플(혈청)을 희석하여 2h 반응시켰다. 세척 후 anti-mouse IgG-HRP secondary antibody를 1/4000 희석하여 처리한 후 2h 반응 시켰다. 세척 후 발색액을 넣고 10min간 반응시켜 O.D 값을 측정하였다.
Yellow fever 백신주인 17D 바이러스를 투여한 후 2주 후에 blood 혈청을 분리하여 YFV에 대한 IgG 항체가를 측정하였고, 정상적인 면역 유도(항체)가 일어났다.
결과는 도 3에 나타냈다. 마우스 체내 항체 생성을 확인 하기 위하여 우선적으로 YFV 특이적인 IgG 총 항체가 분석을 진행하였다. 항체가 형성 정도를 ELISA 분석법을 이용하여 흡광도(OD 값)로 나타내었다. NC군에 비해 ND, HFD그룹에서 1정도의 OD값을 보이며 항체가 생성되었음을 확인 할 수 있었다. 따라서 면역 유도가 일어났음을 확인할 수 있다.
3) 치료용 백신 투여 및 지방 무게 측정
정상 마우스 혹은 비만이 유도된 마우스에서 각각 yellow fever vaccine이 투여된 그룹과 투여되지 않은 그룹으로 나누어 실험에 사용하였다. 치료용 백신 투여 3일전부터 모든 마우스는 정상식이를 제공하였다. 치료용 백신은 마우스를 좌와 우로 나누어 한쪽의 inguinal adipose tissue와 interscapular adipose tissue 의 2 site에 주사하였다. 2~3일 간격으로 5회 투여되었으며, 항원 DNA는 100ug/site, IL-12 DNA는 50ug/site 농도로 총 150ug/site하였고, 투여된 항원 DNA 총량에 맞게 empty vector가 사용되었다. 치료용 백신 투여 전과 후에 몸무게를 측정하였다. 마지막 치료용 백신 투여 후 7일에 마우스를 해부하고, inguinal adipose tissue와 interscapular adipose tissue를 분리하고 각각의 무게를 측정하였다.
ND: Normal diet, HFD: 60% 고지방 사료(High fat diet)
그룹 Obesity Diet 1 Diet 2 Basal immunity(3차) Obese vaccine(5차) Interval 개체 수
Control 1 Normal ND ND 배지 - - 5
Control 2 Normal ND ND YF vaccine 접종 - - 5
Mock DIO HFD ND YF vaccine 접종 Empty vector 2일 10
치료용 백신 1 HFD ND YF vaccine 접종 항원 DNA (서열번호 1) 2일 10
치료용 백신 2 HFD ND YF vaccine 접종 항원 DNA (서열번호 1) + IL12 DNA (서열번호 2 및 3) 2일 10
상기 표 1의 각 그룹의 치료제 투여 후 몸무게 평균 변화율과 지방 조직 감소 효과를 각각 확인하여 도 2 내지 4에 나타냈다. 도 2를 참고하면, 치료용 백신 (치료제, treatment) 투여 전과 후에 몸무게 측정하였고, 투여 직전의 몸무게를 기준으로 몸무게 변화를 측정하였고, 아무것도 처리되지 않는 그룹의 경우 몸무게가 서서히 증가하였으나 Mock, 치료용 백신 1, 치료용 백신 2 그룹은 모두 몸무게 감소 효과를 보였으며, 치료용 백신 1과 2의 투여 그룹이 더 크게 감소하였다. 또한, IL-12가 함께 투여된 그룹의 경우 몸무게 감소가 가장 크게 나타났다. 도 3은 5차례 치료용 백신 투여 후 7일차에 마우스의 좌측과 우측의 inguinal AT(adipose tissue)와 interscapular AT를 분리하여 AT의 무게 측정하고, 동일 개체에서 empty vector 혹은 치료용 백신이 투여되지 않는 AT를 기준으로 지방 무게 감소량을 비교한 결과를 보여준다. 아무것도 투여되지 않는 Control과 empty vector 투여 그룹과 비교하였을 때, 치료용 백신 1 및 2를 처리하였을 때 지방조직 무게가 감소한 것을 알 수 있다. 특히 IL-12를 함께 투여한 치료용 백신 2 처리군에서 지방조직 무게 변화가 훨씬 더 큰 것을 알 수 있다.
본 발명은 비만을 예방 및/또는 치료할 수 있다. 본 발명은 국소부위에 주사하여 비만을 예방 및/또는 치료할 수 있는 방법을 제공한다.

Claims (23)

  1. 외래 항원을 코딩하는 유전물질을 포함하는, 타겟 조직 크기 또는 부피 축소용 백신 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 상기 타겟 조직은 지방세포, 근육세포, 골세포, 연골세포, 피부세포, 분비세포 및 혈세포로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 세포로 이루어진 조직인 것을 특징으로 하는, 타겟 조직 크기 또는 부피 축소용 백신 조성물.
  3. 제1항에 있어서, 상기 약학 조성물은 지방 세포의 감소 또는 사멸을 유도하는 타겟 조직 크기 또는 부피 축소용 백신 조성물.
  4. 제1항에 있어서, 상기 조성물에 포함되는 외래 항원은 비인간 유래 항원, 바이러스 유래 항원, 세균 유래 항원, 진균 유래 항원, 원생동물 유래 항원, 조류 유래 항원, 기생충 유래 항원, 마이코플라즈마 유래 항원, 및 식물 유래 항원으로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나 이상인 것을 특징으로 하는, 타겟 조직 크기 또는 부피 축소용 백신 조성물.
  5. 제4항에 있어서, 상기 외래 항원은 황열 바이러스, 대상포진 바이러스, 및 풍진 바이러스로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 바이러스; 또는 이들의 에피토프인 것을 특징으로 하는, 타겟 조직 크기 또는 부피 축소용 백신 조성물.
  6. 제1항에 있어서, 상기 유전물질은 DNA 또는 RNA인 것을 특징으로 하는, 타겟 조직 크기 또는 부피 축소용 백신 조성물.
  7. 제1항에 있어서, 상기 유전물질은 서열번호 1의 핵산분자; 및 서열번호 5 또는 6의 펩타이드를 암호화하는 핵산분자로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상을 포함하는 타겟 조직 크기 또는 부피 축소용 백신 조성물.
  8. 제1항에 있어서, 상기 백신 조성물은 사이토카인을 코딩하는 유전물질을 더 포함하는 타겟 조직 크기 또는 부피 축소용 백신 조성물.
  9. 제8항에 있어서, 상기 사이토카인은 IL-12, IL-2, IL-4, IL-5, IFN-γ, IL-10, IL-1, IL-6, INF-알파, INF-베타, TNF-알파, 및 TNF-베타로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상인 것을 특징으로 하는 타겟 조직 크기 또는 부피 축소용 백신 조성물.
  10. 제1항에 있어서, 상기 외래 항원은 세포 내 면역 반응을 유발하는 것을 특징으로 하는, 타겟 조직 크기 또는 부피 축소용 백신 조성물.
  11. 제1항에 있어서, 상기 조성물은 국소적으로 작용하며,
    상기 백신 조성물은 적어도 1종 이상의 면역 환경 조성을 위한 단백질 또는 이의 에피토프가 먼저 개체에 적용된 후에 적용되는 것을 특징으로 하는, 타겟 조직 크기 또는 부피 축소용 백신 조성물.
  12. 제1항에 있어서, 상기 유전물질은 경구, 경피, 근육, 복막, 정맥, 피하, 또는 비강 경로를 통한 주사, 또는
    전기천공법, 유전자총, 리포좀, 덴드리머들(dendrimers), 나노입자들(nanoparticles), 또는 이동(transfer) 벡터를 통하여 타겟 조직에 투여되는 것을 특징으로 하는, 타겟 조직 크기 또는 부피 축소용 백신 조성물.
  13. 제1항에 있어서, 상기 조성물에 포함된 유전물질의 투여량은 1회 접종 시 0.1~1000ug/site 되는 것을 특징으로 하는 타겟 조직 크기 또는 부피 축소용 백신 조성물.
  14. (a) 외래 항원을 코딩하는 유전물질을 포함하는, 타겟 조직 크기 또는 부피 축소용 백신 조성물; 및
    (b) 상기 백신 투여를 위한 투여지침서를 포함하는, 키트.
  15. 제14항에 있어서,
    상기 키트는 (c) 상기 (a) 조성물 투여 전에 면역 환경 조성을 위한 단백질 항원 또는 이의 에피토프를 포함하는 조성물이 더 포함된, 키트.
  16. 제14항에 있어서, 상기 (a) 백신 조성물은 사이토카인을 코딩하는 유전물질을 더 포함하는 키트.
  17. 외래 항원을 코딩하는 유전물질을 포함하는, 타겟 조직 크기 또는 부피 축소용 백신 조성물이 충전된 시린지.
  18. 제17항에 있어서, 상기 시린지는 사이토카인을 코딩하는 유전물질을 더 포함하는 시린지.
  19. 적어도 하나의 외래 항원을 코딩하는 유전물질을 포함하는 피하 지방 세포 제거용 조성물.
  20. 제19항에 있어서, 상기 조성물은 사이토카인을 코딩하는 유전물질을 더 포함하는 피하 지방 세포 제거용 조성물.
  21. 개체의 타겟 조직 크기 또는 부피의 축소 방법으로,
    외래 항원을 코딩하는 유전물질을 개체의 타겟 조직에 투여하는 단계를 포함하는 방법.
  22. 제21항에 있어서, 상기 방법은 개체의 지방 세포의 감소 또는 사멸을 유도하는 것을 특징으로 하는 방법.
  23. 제21항에 있어서, 상기 방법은 IL-12, IL-2, IL-4, IL-5, IFN-γ, IL-10, IL-1, IL-6, INF-알파, INF-베타, TNF-알파, 및 TNF-베타로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 사이토카인을 동시에 또는 순차적으로 투입하는 단계를 포함하는 방법.
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