KR20230151488A - 타겟 조직의 크기 또는 부피 축소용 조성물 또는 이를 포함하는 키트 - Google Patents
타겟 조직의 크기 또는 부피 축소용 조성물 또는 이를 포함하는 키트 Download PDFInfo
- Publication number
- KR20230151488A KR20230151488A KR1020230053644A KR20230053644A KR20230151488A KR 20230151488 A KR20230151488 A KR 20230151488A KR 1020230053644 A KR1020230053644 A KR 1020230053644A KR 20230053644 A KR20230053644 A KR 20230053644A KR 20230151488 A KR20230151488 A KR 20230151488A
- Authority
- KR
- South Korea
- Prior art keywords
- composition
- virus
- genetic material
- reducing
- size
- Prior art date
Links
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 106
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 208
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 174
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims abstract description 130
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims abstract description 67
- 208000008589 Obesity Diseases 0.000 claims abstract description 63
- 235000020824 obesity Nutrition 0.000 claims abstract description 63
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims abstract description 44
- 241000710799 Rubella virus Species 0.000 claims abstract description 36
- 208000007514 Herpes zoster Diseases 0.000 claims abstract description 33
- 208000003152 Yellow Fever Diseases 0.000 claims abstract description 23
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 131
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 claims description 123
- 241000710772 Yellow fever virus Species 0.000 claims description 62
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 51
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 50
- 210000000577 adipose tissue Anatomy 0.000 claims description 43
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 claims description 35
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 34
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 31
- 150000007523 nucleic acids Chemical group 0.000 claims description 30
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 29
- 108010065805 Interleukin-12 Proteins 0.000 claims description 24
- 102000013462 Interleukin-12 Human genes 0.000 claims description 24
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 claims description 21
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 claims description 21
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 claims description 17
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 claims description 17
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 claims description 17
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims description 16
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims description 15
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims description 15
- 101710172711 Structural protein Proteins 0.000 claims description 14
- 230000028993 immune response Effects 0.000 claims description 14
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 claims description 13
- 229940051021 yellow-fever virus Drugs 0.000 claims description 12
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 claims description 9
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 claims description 7
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 claims description 7
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 claims description 7
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 claims description 7
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 claims description 7
- 102000000589 Interleukin-1 Human genes 0.000 claims description 7
- 102000003814 Interleukin-10 Human genes 0.000 claims description 7
- 108090000174 Interleukin-10 Proteins 0.000 claims description 7
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 claims description 7
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 claims description 7
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 claims description 7
- 102000004388 Interleukin-4 Human genes 0.000 claims description 7
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 claims description 7
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 claims description 7
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 claims description 7
- 108010002616 Interleukin-5 Proteins 0.000 claims description 6
- 102000000743 Interleukin-5 Human genes 0.000 claims description 6
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 6
- 101710185720 Putative ethidium bromide resistance protein Proteins 0.000 claims description 5
- 238000012546 transfer Methods 0.000 claims description 5
- 239000000412 dendrimer Substances 0.000 claims description 4
- 229920000736 dendritic polymer Polymers 0.000 claims description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 4
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 claims description 4
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 claims description 4
- 101000807236 Human cytomegalovirus (strain AD169) Membrane glycoprotein US3 Proteins 0.000 claims description 3
- 101710125507 Integrase/recombinase Proteins 0.000 claims description 3
- 102000004083 Lymphotoxin-alpha Human genes 0.000 claims description 3
- 108090000542 Lymphotoxin-alpha Proteins 0.000 claims description 3
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 claims description 3
- 230000006872 improvement Effects 0.000 claims description 3
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 claims description 3
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 claims description 3
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 claims description 3
- 239000002502 liposome Substances 0.000 claims description 3
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 claims description 3
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 claims description 2
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 claims description 2
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 46
- 210000001789 adipocyte Anatomy 0.000 abstract description 19
- 230000022534 cell killing Effects 0.000 abstract description 2
- 235000009200 high fat diet Nutrition 0.000 description 43
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 37
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 36
- 241000701085 Human alphaherpesvirus 3 Species 0.000 description 33
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 33
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 33
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 29
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 26
- 229940117681 interleukin-12 Drugs 0.000 description 23
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 23
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 23
- 235000021590 normal diet Nutrition 0.000 description 22
- 229940021747 therapeutic vaccine Drugs 0.000 description 21
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 17
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 16
- 230000004580 weight loss Effects 0.000 description 15
- 108090000331 Firefly luciferases Proteins 0.000 description 14
- 230000008859 change Effects 0.000 description 13
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 13
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 13
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 13
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 12
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 12
- 210000004013 groin Anatomy 0.000 description 12
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 10
- 108010041986 DNA Vaccines Proteins 0.000 description 9
- 229940021995 DNA vaccine Drugs 0.000 description 9
- 102100040247 Tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 9
- 101900123149 Varicella-zoster virus Envelope glycoprotein E Proteins 0.000 description 9
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 9
- 108700021021 mRNA Vaccine Proteins 0.000 description 9
- 229940126582 mRNA vaccine Drugs 0.000 description 9
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 9
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 9
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 8
- 101000687026 Homo sapiens Peroxisome proliferator-activated receptor gamma coactivator-related protein 1 Proteins 0.000 description 8
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 8
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 8
- 238000012937 correction Methods 0.000 description 8
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 8
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 8
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 8
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 8
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 8
- 238000011888 autopsy Methods 0.000 description 7
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 7
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 7
- 230000037237 body shape Effects 0.000 description 7
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 7
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 6
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 6
- 210000004003 subcutaneous fat Anatomy 0.000 description 6
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 5
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 5
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 5
- -1 fatty acid esters Chemical class 0.000 description 5
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 5
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 4
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108091026898 Leader sequence (mRNA) Proteins 0.000 description 4
- 102100024620 Peroxisome proliferator-activated receptor gamma coactivator-related protein 1 Human genes 0.000 description 4
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 4
- 108091034057 RNA (poly(A)) Proteins 0.000 description 4
- 108091036066 Three prime untranslated region Proteins 0.000 description 4
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 4
- 108010053584 alpha-Globins Proteins 0.000 description 4
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 4
- 230000034994 death Effects 0.000 description 4
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 4
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 4
- 238000009021 pre-vaccination Methods 0.000 description 4
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 4
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 4
- 108090000565 Capsid Proteins Proteins 0.000 description 3
- 102100023321 Ceruloplasmin Human genes 0.000 description 3
- 101710091045 Envelope protein Proteins 0.000 description 3
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 101710188315 Protein X Proteins 0.000 description 3
- 108091081024 Start codon Proteins 0.000 description 3
- 102100021696 Syncytin-1 Human genes 0.000 description 3
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 3
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 description 3
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 3
- 210000003630 histaminocyte Anatomy 0.000 description 3
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 3
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 3
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 3
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 3
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 3
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 3
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 3
- 108020005345 3' Untranslated Regions Proteins 0.000 description 2
- 108020003589 5' Untranslated Regions Proteins 0.000 description 2
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 2
- 102000016911 Deoxyribonucleases Human genes 0.000 description 2
- 108010053770 Deoxyribonucleases Proteins 0.000 description 2
- 241000709661 Enterovirus Species 0.000 description 2
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101710114810 Glycoprotein Proteins 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 208000002606 Paramyxoviridae Infections Diseases 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101710167605 Spike glycoprotein Proteins 0.000 description 2
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 2
- 239000003125 aqueous solvent Substances 0.000 description 2
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 2
- 238000002716 delivery method Methods 0.000 description 2
- 230000006866 deterioration Effects 0.000 description 2
- 238000011038 discontinuous diafiltration by volume reduction Methods 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 2
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 2
- 230000006870 function Effects 0.000 description 2
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 2
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 2
- KWGKDLIKAYFUFQ-UHFFFAOYSA-M lithium chloride Chemical compound [Li+].[Cl-] KWGKDLIKAYFUFQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 210000003141 lower extremity Anatomy 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 208000030159 metabolic disease Diseases 0.000 description 2
- 206010033675 panniculitis Diseases 0.000 description 2
- WVDDGKGOMKODPV-ZQBYOMGUSA-N phenyl(114C)methanol Chemical compound O[14CH2]C1=CC=CC=C1 WVDDGKGOMKODPV-ZQBYOMGUSA-N 0.000 description 2
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 2
- 238000005549 size reduction Methods 0.000 description 2
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 2
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 2
- 230000004584 weight gain Effects 0.000 description 2
- 235000019786 weight gain Nutrition 0.000 description 2
- 239000013585 weight reducing agent Substances 0.000 description 2
- 230000037303 wrinkles Effects 0.000 description 2
- DXOFMKNITCKTIS-QXMHVHEDSA-N (z)-2-ethyloctadec-9-enoic acid Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCC(CC)C(O)=O DXOFMKNITCKTIS-QXMHVHEDSA-N 0.000 description 1
- QTWJRLJHJPIABL-UHFFFAOYSA-N 2-methylphenol;3-methylphenol;4-methylphenol Chemical compound CC1=CC=C(O)C=C1.CC1=CC=CC(O)=C1.CC1=CC=CC=C1O QTWJRLJHJPIABL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000701386 African swine fever virus Species 0.000 description 1
- 108091093088 Amplicon Proteins 0.000 description 1
- 241000712892 Arenaviridae Species 0.000 description 1
- 241000702628 Birnaviridae Species 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 208000024172 Cardiovascular disease Diseases 0.000 description 1
- 208000017667 Chronic Disease Diseases 0.000 description 1
- 241000709687 Coxsackievirus Species 0.000 description 1
- 241000725619 Dengue virus Species 0.000 description 1
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001115402 Ebolavirus Species 0.000 description 1
- 241001466953 Echovirus Species 0.000 description 1
- 241000991587 Enterovirus C Species 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- 208000000832 Equine Encephalomyelitis Diseases 0.000 description 1
- 241000711950 Filoviridae Species 0.000 description 1
- 241000710831 Flavivirus Species 0.000 description 1
- 208000005577 Gastroenteritis Diseases 0.000 description 1
- 241000856850 Goose coronavirus Species 0.000 description 1
- 206010061192 Haemorrhagic fever Diseases 0.000 description 1
- 241000150562 Hantaan orthohantavirus Species 0.000 description 1
- 241000700739 Hepadnaviridae Species 0.000 description 1
- 241000700721 Hepatitis B virus Species 0.000 description 1
- 241000709721 Hepatovirus A Species 0.000 description 1
- 241000700586 Herpesviridae Species 0.000 description 1
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 1
- 241000713772 Human immunodeficiency virus 1 Species 0.000 description 1
- 241000701377 Iridoviridae Species 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 241000712079 Measles morbillivirus Species 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000711386 Mumps virus Species 0.000 description 1
- 238000011887 Necropsy Methods 0.000 description 1
- 241000702259 Orbivirus Species 0.000 description 1
- 241000712464 Orthomyxoviridae Species 0.000 description 1
- 206010033307 Overweight Diseases 0.000 description 1
- 241001631646 Papillomaviridae Species 0.000 description 1
- 241000711504 Paramyxoviridae Species 0.000 description 1
- 241000701945 Parvoviridae Species 0.000 description 1
- 206010057249 Phagocytosis Diseases 0.000 description 1
- 241000713137 Phlebovirus Species 0.000 description 1
- 241000709664 Picornaviridae Species 0.000 description 1
- 241001505332 Polyomavirus sp. Species 0.000 description 1
- 241000700625 Poxviridae Species 0.000 description 1
- 241000125945 Protoparvovirus Species 0.000 description 1
- 241000711798 Rabies lyssavirus Species 0.000 description 1
- 241000702247 Reoviridae Species 0.000 description 1
- 241000702263 Reovirus sp. Species 0.000 description 1
- 241000725643 Respiratory syncytial virus Species 0.000 description 1
- 241000712907 Retroviridae Species 0.000 description 1
- 241000711931 Rhabdoviridae Species 0.000 description 1
- 241000702670 Rotavirus Species 0.000 description 1
- 241000710801 Rubivirus Species 0.000 description 1
- 241000700584 Simplexvirus Species 0.000 description 1
- DWAQJAXMDSEUJJ-UHFFFAOYSA-M Sodium bisulfite Chemical compound [Na+].OS([O-])=O DWAQJAXMDSEUJJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 206010041969 Steatorrhoea Diseases 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 102400000368 Surface protein Human genes 0.000 description 1
- 230000024932 T cell mediated immunity Effects 0.000 description 1
- 241000710924 Togaviridae Species 0.000 description 1
- 108010057266 Type A Botulinum Toxins Proteins 0.000 description 1
- 241000700618 Vaccinia virus Species 0.000 description 1
- 241000701067 Varicellovirus Species 0.000 description 1
- 241000700647 Variola virus Species 0.000 description 1
- 241000711975 Vesicular stomatitis virus Species 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 1
- 230000030741 antigen processing and presentation Effects 0.000 description 1
- 239000004599 antimicrobial Substances 0.000 description 1
- 239000002830 appetite depressant Substances 0.000 description 1
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 1
- 238000007681 bariatric surgery Methods 0.000 description 1
- 229960000686 benzalkonium chloride Drugs 0.000 description 1
- CADWTSSKOVRVJC-UHFFFAOYSA-N benzyl(dimethyl)azanium;chloride Chemical compound [Cl-].C[NH+](C)CC1=CC=CC=C1 CADWTSSKOVRVJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 229940089093 botox Drugs 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 235000019282 butylated hydroxyanisole Nutrition 0.000 description 1
- 201000011529 cardiovascular cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 229930003836 cresol Natural products 0.000 description 1
- 229940013361 cresol Drugs 0.000 description 1
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N d-alpha-tocopherol Natural products OC1=C(C)C(C)=C2OC(CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 206010014599 encephalitis Diseases 0.000 description 1
- 230000007368 endocrine function Effects 0.000 description 1
- 239000002532 enzyme inhibitor Substances 0.000 description 1
- 229940125532 enzyme inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 230000037433 frameshift Effects 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000036737 immune function Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000001571 immunoadjuvant effect Effects 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- 239000000568 immunological adjuvant Substances 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 230000002366 lipolytic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002479 lipoplex Substances 0.000 description 1
- 235000021266 loss of appetite Nutrition 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000007102 metabolic function Effects 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000004118 muscle contraction Effects 0.000 description 1
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 238000010979 pH adjustment Methods 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 230000001991 pathophysiological effect Effects 0.000 description 1
- 230000008782 phagocytosis Effects 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 229960003742 phenol Drugs 0.000 description 1
- PDTFCHSETJBPTR-UHFFFAOYSA-N phenylmercuric nitrate Chemical compound [O-][N+](=O)O[Hg]C1=CC=CC=C1 PDTFCHSETJBPTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 229940071643 prefilled syringe Drugs 0.000 description 1
- 230000002028 premature Effects 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 229940021993 prophylactic vaccine Drugs 0.000 description 1
- 235000013772 propylene glycol Nutrition 0.000 description 1
- 238000007634 remodeling Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 239000003161 ribonuclease inhibitor Substances 0.000 description 1
- 210000001991 scapula Anatomy 0.000 description 1
- HRZFUMHJMZEROT-UHFFFAOYSA-L sodium disulfite Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S(=O)S([O-])(=O)=O HRZFUMHJMZEROT-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229940079827 sodium hydrogen sulfite Drugs 0.000 description 1
- 235000010267 sodium hydrogen sulphite Nutrition 0.000 description 1
- 235000010262 sodium metabisulphite Nutrition 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 208000001162 steatorrhea Diseases 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 210000003207 subcutaneous adipocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L thimerosal Chemical compound [Na+].CC[Hg]SC1=CC=CC=C1C([O-])=O RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229940033663 thimerosal Drugs 0.000 description 1
- 235000010384 tocopherol Nutrition 0.000 description 1
- 229960001295 tocopherol Drugs 0.000 description 1
- 229930003799 tocopherol Natural products 0.000 description 1
- 239000011732 tocopherol Substances 0.000 description 1
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 1
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 description 1
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 description 1
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- GVJHHUAWPYXKBD-IEOSBIPESA-N α-tocopherol Chemical compound OC1=C(C)C(C)=C2O[C@@](CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C GVJHHUAWPYXKBD-IEOSBIPESA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/20—Rubella virus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/245—Herpetoviridae, e.g. herpes simplex virus
- A61K39/25—Varicella-zoster virus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/545—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the dose, timing or administration schedule
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55522—Cytokines; Lymphokines; Interferons
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/58—Medicinal preparations containing antigens or antibodies raising an immune response against a target which is not the antigen used for immunisation
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Virology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Child & Adolescent Psychology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Hematology (AREA)
- Obesity (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
본 발명은 황열, 대상포진, 및 풍진 바이러스로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 바이러스; 또는 상기 바이러스 유래 단백질을 코딩하는 유전물질을 포함하는, 비만 치료용 약학 조성물을 제공한다. 상기 약학 조성물은 바람직하게 백신 조성물이며, 상기 조성물은 타겟 조직, 바람직하게 지방 세포를 포함하는 조직의 축소, 또는 지방 세포 사멸 효과를 제공한다.
Description
본 발명은 타겟 조직의 크기 또는 부피 축소용 조성물 또는 이를 포함하는 키트, 이의 용도, 또는 이를 이용한 비만 치료, 또는 개선 방법에 관한 것으로, 상세하게는 비만 세포를 사멸, 비만 세포 축적 억제, 비만 세포 감소 효과를 갖는 타겟 조직의 크기 또는 부피 축소용 조성물 또는 이를 포함하는 키트, 이의 용도, 또는 이를 이용한 비만 치료, 또는 개선 방법에 관한 것이다.
비만은 단순히 체중이 많이 나가는 것을 의미하기보다 '체내에 과다하게 많은 양의 체지방이 쌓여 있는 상태'를 말하며, 당뇨를 포함한 대사질환, 심혈관 질환, 암 등 다양한 만성질환의 발병률을 높이는 위험인자로 인식되고 있다. 지방의 과도한 축적으로 정의되는 비만은 지방조직의 대사, 내분비 및 면역기능 상실을 동반하며, 이러한 지방조직의 병적 리모델링이 주요한 대사질환의 병태생리요인으로 주목을 받고 있다.
비만 치료를 위한 약물치료로는 지방분해효소 억제제인 '올리스타스'를 사용하는데, 이는 체내 있는 지방의 일부를 몸 밖으로 배출되도록 하는 역할을 하는데, 부작용으로는 설사 및 지방변 등이 나타난다. 또한, 비만 치료를 위한 약물의 경우 많은 부작용이 있을 뿐만 아니라 여성의 신체 중 원하지 않는 부위의 지방도 분해시킬 수 있다. 현재 안전하게 사용할 수 있는 식욕억제제는 없는 상황이며, 합병증이 있는 고도 비만 환자의 경우에는 위장관에 대한 비만 수술이 도움이 될 수는 있다.
한편, 지방의 생성을 방지하기 위한 기술들이 개발되고 있으나, 이미 생성된 지방세포, 지방조직 등의 크기를 감소시키거나 하는 기술은 아직까지 많은 연구가 필요한 분야이다.
상기와 같은 문제점을 해결하기 위해 본 발명은 타겟 조직에 투여하여 타겟 조직의 크기 또는 부피를 축소할 수 있는 새로운 방법 또는 약학 조성물을 제공하고자 한다. 본 발명이 해결하고자 하는 과제는 국소비만을 해소하고 매끄러운 바디라인을 완성할 수 있는 새로운 형태의 비만 치료제 또는 치료용 백신을 제공하고자 한다.
본 발명이 해결하고자 하는 과제는 면역시스템이 항원단백질을 발현하는 타겟 세포를 공격하여 타겟 세포 사멸을 도와, 타겟 세포가 사멸하나, 원하지 않는 부위의 다른 세포에는 영향을 미치지 않는 새로운 타겟 세포 감소용 조성물을 제공하고자 한다.
본 발명이 해결하고자 하는 과제는 외래 항원을 투여하여 원하는 세포 또는 조직의 크기를 축소, 감소, 또는 사멸할 수 있는 상기 조성물의 신규 용도를 제공하고자 한다.
본 발명의 일 구현예는 바이러스, 또는 이의 단편을 이용한 비만 치료용 조성물, 비만 치료용 백신, 치료 방법, 또는 비만 치료 용도를 제공하고자 한다. 본 발명의 일 구현예는 바이러스, 또는 상기 바이러스를 코딩하는 유전물질을 타겟 조직에 투여하고, 투여된 유전물질에 의해 상기 타겟 조직을 구성하는 세포에서 항원 유전자가 발현하면, 이에 대해 pre-existing immunity가 작용하여 해당 세포를 사멸하는, 새로운 개념의 조직 크기 또는 부피 축소용 약학 조성물 (바람직하게 백신 조성물), 비만 개선, 억제 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다. 더욱 구체적으로 본 발명은 바이러스 또는 바이러스를 코딩하는 유전물질을 포함하는 비만 예방 또는 치료용 약학 조성물, 피하 지방 세포 제거용 조성물, 조직 크기 또는 부피 축소용 약학 조성물 (바람직하게 백신 조성물), 비만 개선, 억제 또는 치료용 약학 조성물을 제공하고자 한다. 바람직하게 상기 조성물은 백신 조성물을 포함할 수 있다.
본 발명의 바이러스는 바이러스 그 자체, 바이러스 유래 단백질, 바이러스 유래 항원을 코딩하는 유전물질을 포함하며, 이들의 단편, 변이체, 또는 유도체를 포함할 수 있다. 바람직하게 상기 유전물질은 바이러스 유래 항원을 코딩하는 유전물질을 포함하는 것으로 이해될 수 있다. 특히 바람직하게 상기 바이러스는 황열 바이러스, 대상 포진 바이러스, 및 풍진 바이러스로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상을 포함할 수 있다. 한편, 본 발명의 목적을 저해하지 않는 범위 내에서 이들 바이러스가 포함된 상위 속 또는 상위 과에 속하는 바이러스도 본 발명에 포함될 수 있다.
본 발명의 일 구현예는 바이러스 또는 바이러스를 포함하는 조성물을 타겟 조직에 투여하고, 투여된 유전물질에 의해 상기 타겟 조직을 구성하는 세포에서 항원 유전자가 발현하여 지방, 특히 피하지방 세포크기를 줄일 수 있음을 확인하였다. 또한 상기 조성물이 투입된 후 기존에 존재하던 면역 반응 (pre-existing immunity)이 작용하여 해당 세포를 사멸하는, 새로운 개념의 조직 크기 또는 부피 축소 방법, 비만 개선, 억제, 또는 치료 방법을 제공한다.
본 발명의 일 구현예는 바이러스 또는 바이러스를 포함하는 조성물을 타겟 조직에 투여하고, 투여된 유전물질에 의해 상기 타겟 조직을 구성하는 세포에서 항원 유전자가 발현하여 지방, 특히 피하지방 세포크기를 줄일 수 있는, 상기 유전물질을 포함하는 약학 조성물의 신규 용도를 제공하고자 한다. 상기 용도는 상기 조성물이 투입된 후 기존에 존재하던 면역 반응 (pre-existing immunity)이 작용하여 해당 세포를 사멸하여 조직 크기 또는 부피를 축소하는 용도, 비만 개선, 억제, 또는 치료 용도를 제공한다.
본 발명의 발명자들은 바이러스에 의한 면역 반응을 이용하여 타겟 부위를 구성하는 세포를 사멸시켜 상기 세포가 구성하는 조직을 축소할 수 있음을 확인하고 본 발명을 완성하게 되었다. 특히 본 발명을 통해 타겟 세포의 효과적인 제거 및/또는 감소를 이룰 수 있고, 이를 통해 체형 교정 및 비만 치료 효과를 나타낼 수 있음을 실험을 통해 확인하게 되었다. 특히, 상기 바이러스는 황열, 대상포진, 및/또는 풍진 바이러스가 이용되었을 때, 본 발명의 효과 달성에 유리하였다.
본 발명의 일 실시예는 타겟 조직에 투여하여 상기 조직을 축소하기 위한 약학 조성물로, 상기 조성물은 바이러스, 바람직하게 황열, 대상포진, 및 풍진 바이러스로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 바이러스를 코딩하는 유전물질을 포함할 수 있다. 본 발명의 일 실시예는 바이러스를 코딩하는 유전물질의 타겟 세포 사멸, 타겟 조직 축소 용도를 제공하며, 더욱 구체적으로 상기 유전물질의 국소 지방 조직 축소 용도를 제공한다. 바람직하게 상기 바이러스를 코딩하는 유전물질은 황열 바이러스, 대상포진 바이러스, 및 풍진 바이러스로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 바이러스; 또는 이들의 에피토프를 포함한다. 일 구현예는 상기 바이러스 또는 이들의 에피토프의 타겟 세포 사멸 또는 타겟 조직 축소용도를 제공할 수 있다. 상기 조직은 지방세포를 포함하는 조직으로 이해될 수 있다. 본 발명의 면역작용은 지방세포 또는 지방조직의 크기를 감소시킬 수 있다. 예를 들어, 상기 지방세포 또는 지방조직은 더 바람직하게 피하 지방조직일 수 있다. 상기 조성물은 지방세포, 특히 피하지방에 분포된 지방세포의 감소, 축소 또는 사멸을 유도할 수 있다.
본 발명의 발명자들은 기존 지방제거 수술, 약물 등에 비해 부작용이 적고, 국소의 타겟 부위 (예를 들어, 특정 부위의 지방 조직)만을 타깃으로 하여 몸매 보정 효과를 기대할 수 있는 조성물, 또는 키트를 제공한다. 본 발명은 타겟 부위에 국소적으로 작용하며 면역요법을 이용해 타겟 조직의 크기 또는 부피 축소용 약학 조성물을 제공한다. 본 발명은 바람직하게 지방세포, 특히 피하 지방세포의 사멸을 유도하는 약학 조성물, 백신 조성물, 또는 치료용 백신 조성물을 제공할 수 있다. 본 발명은 타겟 부위에 국소적으로 작용하며 면역요법을 이용해 비만을 개선, 억제, 또는 치료용 약학 조성물, 백신 조성물, 또는 치료용 백신 조성물을 제공할 수 있다.
본 명세서에서 사용된 “타겟 조직 또는 타겟 부위”는 크기 또는 부피를 축소시키기 위한 같은 구조와 기능을 갖는 세포 집단을 의미한다. 상기 “몸매 보정 또는 체형 보정”은 원하지 않는 부위에 축적된 조직 (예를 들어, 지방 조직)을 구성하는 세포를 사멸 또는 감소시켜 조직의 크기나 부피가 축소되어 외형적으로 슬림 및 균형된 효과를 갖는 것을 의미한다. 본 명세서에서 사용된 “국소적으로 작용한다”는 것은 주사 투여 부위를 기준으로 반경 10cm, 9cm, 8cm, 7cm, 6cm, 5cm, 4cm, 3cm, 2cm, 1cm 이내에서 세포의 사멸 또는 조직의 크기 또는 부피 축소 효과를 가져오는 것을 의미하며, 바람직하게 3cm 이내의 범위에서 효과를 가져올 수 있다.
개체가 바이러스 유래 항원에 노출되었을 때, 면역세포가 기능적으로 식작용(Phagocytosis)과 항원제시(Antigen presenting)의 기능을 하게 된다. 일 실시예에서 면역 반응이 유도될 수 있도록 단백질 항원, 또는 이들의 에피토프 등과 같은 외래 물질을 의도적 또는 비의도적으로 체내에 침투하여 면역 환경이 조성된 후 본 발명의 약학 조성물을 투여할 수 있다. 또 다른 실시예를 통해, 상기 약학 조성물을 체내에 반복적으로 투여할 수도 있다. 다른 실시예에서 본 발명의 약학 조성물에 포함된 유전물질을 개체에 투여하여 pre-existing 면역을 유도하고, 이후 반복된 조성물의 투여로 인체 내의 단핵구(Monocyte), 호중구(Neutrophil), 림프구의 일종인 자연 살해 세포 (Natural killer cell), 세포독성 T 세포(Cytotoxic T cell) 면역세포, 생리 활성물질, 항체, 보체 등 면역작용으로 분비된 물질에 의해 상기 항원이 제시된 지방 세포는 사멸하여 지방 조직의 크기 또는 부피가 감소될 수 있다. 상기 조성물은 몸매 보정 또는 체형 보정 용도로 이용될 수 있으며, 국소 부위의 체형 보정 용도로 이용될 수 있다. 또한 상기 조성물은 근육 조직에 투여되어 보톡스와 같은 피부주름 개선 효과, 근육 수축을 통한 몸매 보정 용도 등으로 이용될 수도 있다. 뿐만 아니라, 양성 또는 악성 종양 제거, 또는 피부의 사마귀 제거에도 이용될 수 있다.
상기 약학 조성물은 적어도 하나 이상의 바이러스 유래 항원을 코딩하는 유전물질을 포함하며, 상기 유전물질은 DNA 및/또는 RNA를 포함할 뿐만 아니라, Viral vector도 포함할 수 있다. 또한 상기 유전물질과 연관된 안티센스 뉴클레오티드(antisense nucleotide), mRNA, ssRNA(Single-Stranded RNA), cDNA 등도 포함된다. 상기 항원은 면역 반응을 일으키는 항원의 에피토프도 포함할 수 있다.
본 발명의 발명자들은 바이러스 유래 항원, 바람직하게 비만과의 연관성이 알려지지 않았던 바이러스 유래 항원, 더 바람직하게 상기 바이러스 유래 항원의 유전물질, 더욱 더 바람직하게 상기 바이러스 유래 항원의 DNA 또는 RNA 를 투여하였을 때, 우수한 지방세포 수 감소, 또는 지방조직의 크기 축소, 지방 축적 억제 효과 등을 나타낸다는 것을 확인하였다. 특히 바이러스 중에서도, 기존에 비만과 어떤 연관성도 알려지지 않았던 황열, 대상포진, 및/또는 풍진 바이러스가 우수한 지방크기 감소 효과를 갖는다는 것을 확인하였다.
상기 바이러스 유래 유전물질은 바이러스의 펩타이드 또는 온전한 단백질 또는 그의 일부로서 발현될 수 있다. 예를 들어, 바이러스의 비제한적 예는 레트로비리대(Retroviridae)(예컨대 인간 면역결핍 바이러스, 예컨대 HIV-1; 피코르나비리대(Picornaviridae)(예컨대 폴리오 바이러스, A형 간염 바이러스; 엔테로바이러스, 인간 콕사키 바이러스, 리노바이러스, 에코바이러스); 칼시비리대(Calciviridae)(예컨대 위장염을 초래하는 균주); 토가비리대(Togaviridae)(예컨대 말 뇌염 바이러스, 루벨라 바이러스); 플라비리대(Flaviridae)(예컨대 뎅기 바이러스, 뇌염 바이러스, 황열 바이러스); 코로노비리대(Coronoviridae)(예컨대 코로나바이러스); 라브도비리대(Rhabdoviridae)(예컨대 수포성 구내염 바이러스, 광견병 바이러스); 필로비리대(Filoviridae)(예컨대 에볼라 바이러스); 파라믹소비리대(Paramyxoviridae)(예컨대 파라인플루엔자 바이러스, 파라인플루엔자 바이러스, 볼거리 바이러스, 홍역 바이러스, 호흡기 세포융합 바이러스); 오르토믹소비리대(Orthomyxoviridae)(예컨대 인플루엔자 바이러스); 분가비리대(Bungaviridae)(예컨대 한탄 바이러스, 분가 바이러스, 플레보바이러스 및 나이라 바이러스); 아레나 비리대(Arena viridae)(출혈열 바이러스); 레오비리대(Reoviridae)(예컨대 레오바이러스, 오르비바이러스 및 로타바이러스); 비르나비리대(Birnaviridae); 헤파드나비리대(Hepadnaviridae)(B형 간염 바이러스); 파르보비리대(Parvoviridae)(파르보바이러스); 파포바비리대(Papovaviridae)(파필로마 바이러스, 폴리오마 바이러스); 헤르페스비리대(Herpesviridae)(헤르페스 심플렉스 바이러스(HSV) 1 및 2, 바리셀라 조스터 바이러스, 사이토메갈로바이러스(CMV), 헤르페스 바이러스; 폭스비리대(Poxviridae)(바리올라 바이러스, 백시니아 바이러스, 폭스 바이러스); 및 이리도비리대(Iridoviridae)(예컨대 아프리카 돼지 열병 바이러스)를 포함할 수 있다. 바람직하게, 루비바이러스(Rubivirus)속, 더 바람직하게 루벨라 바이러스(Rubella virus, 풍진 바이러스라고도 함); 바람직하게 플라비바이러스(Flavivirus)속, 더 바람직하게 황열 바이러스(Yellow fever virus); 바람직하게 바리셀로바이러스(Varicellovirus)속, 더 바람직하게 대상포진 바이러스 (Varicella zoster virus)를 포함할 수 있다. 상기 바이러스를 투여했을 때 조직 크기 감소 효과가 탁월하였다. 또 상기 바이러스를 투여했을 때 부작용이 적었고, 안전하였다. 상기 바이러스는 제형화에 용이하였다. 상기 바이러스는 적은 양만 투입해도 기존에 pre-existing immunity 에 자극을 줄 수 있어 빠르게 지방 분해 효과를 가져올 수 있다.
바람직하게 상기 바이러스를 코딩하는 유전물질은 서열번호 1 내지 6으로 이루어진 군에서 선택된 폴리뉴클레오티드로 이루어진 핵산 서열을 가지는 핵산분자를 포함할 수 있다. 또는 상기 유전물질은 서열번호 12 내지 14 로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 펩타이드를 암호화하는 핵산분자를 포함할 수 있다.
본 발명의 일 구현예는 서열번호 2, 서열번호 4, 및 서열번호 6으로 이루어진 폴리뉴클레오티드를 포함하는 핵산 분자를 포함하는 약학 조성물, 백신 조성물, 또는 치료용 백신 조성물을 제공할 수 있다. 여기서 서열번호 2, 서열번호 4, 및 서열번호 6은 캡핑 서열,5'- UTR, 코작 서열 다음에 상기 황열 바이러스, 대상포진 바이러스, 및 풍진 바이러스로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 바이러스를 (또는 바이러스에서 기원한 단백질을) 암호화하는 폴리뉴클레오티드 서열을 포함할 수 있다. 상기 바이러스(또는 바이러스에서 기원한 단백질)을 암호화하는 폴리뉴클레오티드 서열 다음에 3'-UTR서열, 폴리 A Tail, 및 프라이머가 연결될 수 있으며, 이들은 특별한 언급이 없는 한 5' 에서 3'방향으로 이어진다. 도 16 내지 도 18을 참고할 수 있다.
또한 상기 유전물질은 서열번호 1 내지 6으로 이루어진 군에서 선택된 폴리뉴클레오티드로 이루어진 핵산 서열; 또는 상기 핵산 서열과 적어도 85% 이상의 서열 상동성을 갖고 타겟 조직 크기 또는 부피를 축소하거나 지방을 분해하거나 비만을 치료, 개선, 예방할 수 있는 (즉, 본 발명이 목적을 달성할 수 있는) 핵산 서열을 갖는 폴리뉴클레오티드를 포함할 수 있다. 상기 서열 상동성은 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 99% 이상의 서열 상동성을 포함할 수 있다. 또는 서열번호 12 내지 14로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 펩타이드를 암호화하는 핵산분자와 적어도 85% 이상의 서열 상동성을 갖고 타겟 조직 크기 또는 부피를 축소할 수 있는 (즉, 본 발명이 목적을 달성할 수 있는) 핵산 서열을 갖는 폴리뉴클레오티드를 포함할 수 있다. 상기 서열 상동성은 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 99% 이상, 또는 100%의 서열 상동성을 포함할 수 있다.
상기 조성물은 IL-12, IL-2, IL-4, IL-5, IFN-γ, IL-10, IL-1, IL-6, INF-알파, INF-베타, TNF-알파, 및 TNF-베타로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 사이토카인을 코딩하는 유전물질을 더 포함할 수 있으며, 상기 유전물질에 의해 발현되는 항원에 의한 면역 자극 효과를 더욱 극대화하기 위해 IL-12을 포함하는 것이 바람직하다. 예를 들어 상기 IL-12는 본원의 서열번호 7 및/또는 서열번호 8로 이루어진 DNA 서열을 포함할 수 있다.
상기 조성물은 상기 유전물질을 동물세포에서 전달하는 벡터에 포함시켜 제공될 수 있다. 상기 핵산은 발현 벡터, 예컨대 플라스미드 등에 포함되어 제공될 수 있으며, 바람직하게는, 핵산은 포유류 세포, 예컨대 인간 세포에서의 발현에 적합한 전사 요소들을 포함할 수 있다. 본 명세서에 사용되는 "벡터"는 투여하고자 하는 유전물질을 세포 내로 수송할 수 있다. 상기 벡터는 유전물질 전달을 위해 사용될 수 있다. 바람직하게는, 이러한 벡터는 발현 제어 서열에 작동가능하게 연결된 코딩 서열을 포함할 수도 있다.
바람직한 한 실시태양에서, 상기 바이러스 유래 유전물질은 바이러스의 구조 단백질에 해당하는 유전자가 동물세포에서 단백질 발현 가능하도록 하는 플라스미드 (예를 들어, gWizTM vector)에 포함시킬 수 있다.
바람직한 한 실시태양에서 상기 바이러스는 황열 바이러스를 포함할 수 있고, 예를 들어 상기 황열바이러스는 17D strain을 포함할 수 있으나, 이에 한정되지 않는다. 상기 플라스미드에는 바이러스를 암호화하는 핵산분자 또는 이의 또는 이의 단편, 변이체 또는 유사체를 포함할 수 있다. 예를 들어 서열번호 1 또는 서열번호 2; 또는 이의 단편, 변이체, 또는 유사체를 포함할 수 있다.
상기 바이러스를 암호화하는 핵산분자는 구조단백질을 암호화하는 핵산분자를 포함할 수 있다. 예를 들어, 서열번호 12의 단백질을 암호화하는 핵산분자 또는 이의 단편, 변이체 또는 유사체를 포함할 수 있다.
바람직한 한 실시태양에서, 상기 바이러스 유래 유전물질은 풍진 바이러스 (Rubella virus)의 구조 단백질에 해당하는 유전자가 동물세포에서 단백질 발현 가능하도록 하는 플라스미드 (예를 들어, gWizTM vector)에 포함시킬 수 있다. 상기 풍진 바이러스는 제한없이 사용될 수 있으며, 예를 들어 상기 풍진 바이러스는 RA27/3 strain을 포함할 수 있으나, 이에 한정되지 않는다. 상기 바이러스를 암호화하는 유전자는 스파이크 글라이코프로테인 (spike glycoproteins)을 암호화하는 유전자를 포함할 수 있다. 상기 플라스미드에는 바이러스를 암호화하는 핵산분자 또는 이의 또는 이의 단편, 변이체 또는 유사체를 포함할 수 있다. 예를 들어 서열번호 5 또는 서열번호 6; 또는 이의 단편, 변이체, 또는 유사체를 포함할 수 있다.
상기 스파이크 글라이코프로테인의 예로 E2-E1 이형접합체를 포함할 수 있다. 예를 들어, 서열번호 14의 단백질을 암호화하는 핵산분자 또는 이의 단편, 변이체 또는 유사체를 포함할 수 있다.
바람직한 한 실시태양에서, 상기 바이러스 유래 유전물질은 대상포진 바이러스 (varicella zoster virus)의 구조 단백질에 해당하는 유전자가 동물세포에서 단백질 발현 가능하도록 하는 플라스미드 (예를 들어, gWizTM vector)에 포함시킬 수 있다. 상기 대상포진 바이러스는 제한없이 사용될 수 있으며, 예를 들어 상기 대상포진 바이러스는 Oka strain 을 포함할 수 있으나, 이에 한정되지 않는다. 상기 플라스미드에는 바이러스를 암호화하는 핵산분자 또는 이의 또는 이의 단편, 변이체 또는 유사체를 포함할 수 있다. 예를 들어 서열번호 3 또는 서열번호 4; 또는 이의 단편, 변이체, 또는 유사체를 포함할 수 있다.
상기 바이러스를 암호화하는 핵산분자는 표면 단백질인 gE 단백질을 암호화하는 핵산분자를 포함할 수 있다. 예를 들어, 서열번호 13의 단백질을 암호화하는 핵산분자 또는 이의 단편, 변이체 또는 유사체를 포함할 수 있다.
여기서 '이의 단편, 변이체 또는 유사체'라 함은 본 발명의 단백질, 펩타이드, 핵산, 핵산분자, 또는 유전자들이 달성하고자 하는 목적을 달성하되 서열 상동성이 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 99% 이상일 수 있는 단백질, 펩타이드, 핵산, 핵산분자, 또는 유전자의 일부를 의미하는 것으로 이해될 수 있다. 예를 들어 상기 단편, 변이체 또는 유사체를 포함한다는 의미는 서열번호 1 내지 6으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 폴리뉴클레오티드로 이루어진 핵산 분자를 포함하면, 본 발명의 범위에서 제외되지 않는다는 의미로 이해할 수 있다.
상기 바이러스는 타겟 조직, 바람직하게 지방세포의 사멸, 조직의 크기 축소 효과가 우수할 수 있다. 또한 효과가 빠르게 나타날 수 있고, 부작용이 적다. 뿐만 아니라 주사제로 장기간 보관하더라도 변질될 우려가 적을 수 있다.
다른 실시태양에서 상기 조성물은 세포성 면역반응을 증진시킬 수 있는 면역 증진제를 포함함으로써 지방세포 사멸, 또는 타겟 조직 축소 효과를 더욱 증진시킬 수 있다. 상기 조성물은 면역 증강 효과를 향상시킬 수 있는 면역 증강제를 코딩하는 유전물질, 예를 들어 인터루킨 12(IL-12)를 코딩하는 보조 유전물질을 더 포함할 수 있다. 상기 보조 유전물질은 예를 들어, pSF-CMV-CMV-Sbfl 벡터에 코딩 영역을 삽입하여 제공할 수 있다.
본 발명의 조성물은 상기 사이토카인, 이를 코딩하는 유전자 또는 다른 면역보조제 뿐만 아니라, 당업계에서 널리 사용되는 바와 같은 약제학적 담체 또는 부형제와 함께 사용될 수 있다. 상기 조성물은 인체 또는 수의용으로 제형화되어. 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여 경로는 경구, 경피, 근육, 복막, 정맥, 피하, 비강 경로를 이용할 수 있지만 이에 국한되지는 않는다. 보다 바람직하게는 경피, 근육, 복막, 피하 경로를 이용할 수 있다. 또한 상기 조성물은 활성 물질이 표적 세포로 이동할 수 있는 임의의 장치 또는 경로에 의해 투여될 수 있으며, 타겟 조직 또는 조직을 구성하는 세포에 본 발명의 조성물, 또는 상기 조성물에 포함되는 유전물질이 전달될 수 있다면 투여 방법은 특별히 제한되지 않는다. 예를 들어, 주사, 미세바늘 패치 등으로 제형화되어 제공될 수 있다. 예를 들어 주사로 사용될 경우 주사제는 상기 유전물질의 효과를 저해하지 않는 범위 내에서, 생리식염액, 링겔액 등의 수성 용제, 식물유, 고급 지방산 에스텔(예, 올레인산에칠 등), 알코올류(예, 에탄올, 벤질알코올, 프로필렌글리콜, 글리세린 등) 등의 비수성 용제 등을 이용하여 제조할 수 있고, 변질 방지를 위한 안정화제(예, 아스코르빈산, 아황산수소나트퓸, 피로아황산나트륨, BHA, 토코페롤, EDTA 등), 유화제, pH 조절을 위한 완충제, 미생물 발육을 저지하기 위한 보존제(예, 질산페닐수은, 치메로살, 염화벤잘코늄, 페놀, 크레솔, 벤질알코올 등) 등의 약제학적 담체를 포함할 수 있다. 미세바늘 패치로 사용될 경우 상기 미세바늘은 불용해성 및 용해성 미세바늘이 모두 포함될 수 있다.
또한 상기 조성물에 포함되는 유전물질 및/또는 보조 유전물질은 업계의 통상적인 유전자 전달 방법에 따라 체내로 전달될 수 있다. 비 제한적인 예로 유전자 전달 방법인 전기천공법이나 유전자총과 같은 물리적 전달방법, 지질-유전자 결합체(Lipid-DNA complex: Lipoplex), 폴리머-유전자 결합체(Polymer-DNA complex: Polyplex), 리포좀, 덴드리머들(dendrimers), 나노입자들(nanoparticles), 또는 다른 적절한 이동(transfer) 벡터와 같은 화학적 전달방법 등이 모두 사용될 수 있다.
본 발명의 조성물은 약제학적 유효량으로 투여한다. 용어 "약제학적 유효량"이란 조성물이 치료, 개선, 또는 예방 효과를 나타낼 수 있거나, 백신효과를 나타낼 수 있을 정도의 충분한 양을 의미하며, 또한 부작용이나 심각한 또는 과도한 면역반응을 일으키지 않을 정도의 양을 의미한다. 본 발명의 조성물은 면역 반응을 유도하고, 세포 사멸을 유도하는 것을 목적으로 하는 특성상 유전물질을 투여할 수 있으며, 2-3일 간격으로 4-8회, 바람직하게 5회 투여하는 것이 바람직하다. 상기와 같이 투여하였을 때, 타겟 부위의 세포 사멸로 조직의 감소 또는 축소 효과를 얻을 수 있다. 상기 조성물은 다량 또는 다회 투여할수록 세포 사멸 효과에 차이가 있을 수 있으며, 부위별로 적절한 투여량을 조절하여 사용할 수 있다.
본 발명의 다른 구현예는 바이러스, 바람직하게는 황열, 대상포진 또는 풍진 바이러스를 코딩하는 유전물질, 상기 유전물질을 포함하는 벡터, 또는 이들을 포함하는 조성물을 개체의 타겟 조직에 투여하는 단계를 포함하는, 조직의 크기 또는 부피를 축소 또는 감소하는 방법을 제공한다. 상기 방법은 바람직하게 피하 지방 조직을 구성하는 세포를 사멸키거나, 지방 중량을 감소시키거나, 세포의 크기를 축소시킬 수 있다. 상기 i) 방법; 또는 ii) 상기 바이러스 또는 상기 바이러스 유래 단백질을 코딩하는 유전물질, 상기 유전물질을 포함하는 벡터, 또는 이들을 포함하는 조성물, 또는 이를 포함하는 키트는 개체의 비만증을 개선 또는 치료하기 위한 용도, 주름 개선 용도, 근육 축소 용도, 양성 또는 악성 종양 제거 또는 축소 용도, 사마귀 제거 용도 등으로 사용될 수 있고, 미용 목적으로 눈 밑의 지방 주머니를 제거하는 용도로 사용될 수도 있고, 이를 통해 다크서클을 완화하기 위한 용도로 사용될 수 있다.
상기 방법은 상기 유전물질, 상기 유전물질을 포함하는 벡터, 또는 이들을 포함하는 조성물을 타겟 조직에 투여하기 전에 체내의 면역 환경을 조성하는 단계를 더 포함할 수 있다. 상기 체내 면역 환경을 조성하는 단계는 면역 반응이 유도될 수 있는 외래 물질을 투여하는 단계를 포함할 수 있다. 상기 외래 물질은 단백질을 항원으로 이용하는 물질이면 제한없이 포함될 수 있다.
본 발명의 일 구현예는 다양한 적응증의 치료, 개선, 또는 예방 용도로 제공될 수 있을 뿐만 아니라, 외형의 개선을 위한 미용 목적으로도 제공될 수 있다.
본 발명의 일 구현예는 비만증 치료용 백신으로 제공될 수 있다. 상기 치료용 백신은 체내 면역 반응을 이용한다는 점에서 백신으로 정의할 수 있고, 이미 생성된 지방, 지방세포, 또는 지방조직에 영향을 주어 크기를 감소시키거나 세포를 사멸한다는 점에서 치료용으로 정의할 수 있다. 따라서 상기 비만증 치료용 백신은 단순히 지방세포의 생성을 억제하거나, 지방의 축적을 억제하는 예방용도와는 구별되는 개념으로 이해될 수 있다.
본 발명의 다른 실시예는 (a) 황열, 대상포진, 및 풍진 바이러스로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 바이러스; 상기 바이러스 유래 단백질; 또는 상기 바이러스 또는 단백질을 코딩하는 유전물질을 포함하는,
바람직하게 황열, 대상포진, 및 풍진 바이러스로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 바이러스 또는 상기 바이러스 유래 단백질을 코딩하는 유전물질을 포함하는, 타겟 조직 크기 또는 부피 축소용 백신 조성물; 및 (b) 상기 백신 투여를 위한 투여지침서를 포함하는, 키트를 제공한다. 상기 키트는 (c) 상기 (a) 조성물 투여 전에 면역 환경 조성을 위한 단백질 항원 또는 이의 에피토프를 포함하는 조성물이 더 포함될 수 있다. 여기서 상기 (c)는 적어도 1종 이상의 사전 백신(pre-vaccine) 또는 면역반응 유도를 위한 조성물로 이해될 수 있다.
본원에서 언급된 '사전 백신'은 pre-existing immunity를 얻기 위해 본원의 '비만 개선, 억제, 또는 치료용 약학 조성물', 또는 '타겟 조직 크기 또는 부피 축소용 조성물'이 투여되기 전에 투여되는 백신 조성물로 이해될 수 있다. 상기 사전 백신은 본원의 '비만 개선, 억제, 또는 치료용 약학 조성물', 또는 '타겟 조직 크기 또는 부피 축소용 조성물'에 포함되는 항원물질과 동일한 항원물질을 포함할 수 있으나, 이에 한정되지 않는다. 예를 들어, (a) 바이러스를, 바람직하게 황열, 대상포진, 및/또는 풍진 바이러스를 코딩하는 유전물질을 포함하는, '비만 개선, 억제, 또는 치료용 약학 조성물', 또는 '타겟 조직 크기 또는 부피 축소용 조성물'은 황열, 대상포진, 및 풍진 바이러스로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 바이러스를 포함할 수 있으며, (c)도 황열, 대상포진, 및 풍진 바이러스로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 바이러스를 포함할 수 있다. 또 다른 예를 들어, (a) 바이러스를, 바람직하게 황열, 대상포진, 및 풍진 바이러스로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 바이러스를 코딩하는 유전물질을 포함하는, '비만 개선, 억제, 또는 치료용 약학 조성물', 또는 '타겟 조직 크기 또는 부피 축소용 조성물'은 황열, 대상포진, 및 풍진 바이러스로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 바이러스를 포함할 수 있으며, (c)는 유아기에 접종하여 체내에 항체를 보유하도록 유도된 백신을 포함할 수 있다.
상기 (a) 조성물은 사이토카인을 코딩하는 유전물질을 더 포함할 수 있으며, 상기 (a) 조성물의 면역 효과 상승을 위해 사용될 수 있는 물질은 제한없이 포함될 수 있다. 상기 사이토카인을 코딩하는 유전물질은 상기 유전물질에 의해 발현된 단백질로 대체될 수 있다. 상기 사이토카인은 IL-12, IL-2, IL-4, IL-5, IFN-γ, IL-10, IL-1, IL-6, INF-알파, INF-베타, TNF-알파, 및 TNF-베타로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상을 포함할 수 있으며, 상기 사이토카인 외에도 업계에 알려진 사이토카인은 제한없이 포함될 수 있다.
본 발명의 키트에서, 약제학적 조성물, 항미생물제, DNase 억제제, RNase 억제제, 가용화제 등과 관련하여 본 명세서에 정의된 바와 같은 적어도 하나의 추가 제제를 포함할 수 있다. 키트는 예를 들어 1이상의 키트 부품 (예를 들어, 용기)으로 이루어질 수 있다. 예를 들어, 각 용기는 시린지, 프리필드 시린지, 바이알, 병, 단지, 밀봉된 슬리브, 엔벨로프 또는 파우치, 튜브 또는 블리스터 패키지 또는 용기가 구성 요소의 조기 혼합을 방지하도록 구성된 임의의 다른 적합한 형태일 수 있다. 상이한 구성 요소들 각각은 개별적으로 제공될 수 있거나, 또는 상이한 구성 요소들 중 일부가 함께 (즉, 동일한 용기 내에) 제공될 수 있다. 상기 키트는 또한 임의의 성분의 투여, 투여방법 및 투여량에 대한 정보를 갖는 투여지침서를 포함할 수 있다.
본 발명의 다른 실시예는 바이러스 또는 바이러스 유래 단백질을 코딩하는 유전물질을 포함하는, 비만 개선, 억제, 또는 치료용 조성물이, 바람직하게 백신 조성물이 충전된 시린지를 제공한다. 본 발명의 다른 실시예는 바이러스 또는 바이러스 유래 단백질을 코딩하는 유전물질을 포함하는, 타겟 조직 크기 또는 부피 축소용 약학 조성물, 바람직하게 백신 조성물이 충전된 시린지를 제공한다. 바람직하게 황열, 대상포진, 및 풍진 바이러스로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 바이러스; 또는 상기 바이러스 유래 단백질을 코딩하는 유전물질을 포함하는, 비만 개선, 억제, 또는 치료용 조성물; 또는 타겟 조직 크기 또는 부피 축소용 백신 조성물이 충전된 시린지를 제공한다. 상기 시린지는 사이토카인을 코딩하는 유전물질을 더 포함할 수 있다. 상기 사이토카인은 IL-12, IL-2, IL-4, IL-5, IFN-γ, IL-10, IL-1, IL-6, INF-알파, INF-베타, TNF-알파, 및 TNF-베타로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상을 포함할 수 있다.
본 발명의 일 구현예는 황열, 대상포진, 및 풍진 바이러스로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 바이러스; 또는 상기 바이러스 유래 단백질을 코딩하는 유전물질을 포함하는, 비만 개선, 억제, 또는 치료용 약학 조성물을 제공하고자 한다.
상기 약학 조성물은 타겟 조직의 크기 또는 부피를 축소할 수 있다.
상기 유전물질은 황열 바이러스의 구조 단백질, 대상포진 바이러스의 글리코단백질 E 및 풍진 바이러스의 E2 및 E1 단백질로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드일 수 있다.
상기 폴리뉴클레오티드는 DNA 또는 RNA이며, 바람직하게 DNA 또는 mRNA일 수 있다.
상기 유전물질은 서열번호 1 내지 6으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 폴리뉴클레오티드로 이루어진 핵산 분자를 포함할 수 있다.
상기 약학 조성물은 사이토카인을 코딩하는 유전물질을 더 포함할 수 있다.
상기 사이토카인은 IL-12, IL-2, IL-4, IL-5, IFN-γ, IL-10, IL-1, IL-6, INF-알파, INF-베타, TNF-알파, 및 TNF-베타로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상일 수 있다. 예를 들어, 상기 유전물질은 서열번호 7 및 8로 표현되는 폴리뉴클레오티드 DNA 서열을 포함할 수 있다.
상기 유전물질은 세포 내 면역 반응을 유발할 수 있다.
상기 조성물은 국소적으로 작용하며, 상기 조성물은 적어도 1종 이상의 면역 환경 조성을 위한 항원이 먼저 개체에 적용된 후에 적용될 수 있다.
상기 항원은 인체의 외로부터 유입된 바이러스, 단백질, 또는 이의 에피토프를 포함할 수 있다. 바람직하게 상기 유전물질은 경구투여, 경피, 근육, 복막, 정맥, 피하, 또는 비강 경로를 통한 주사, 또는 전기천공법, 유전자총, 리포좀, 덴드리머들(dendrimers), 나노입자들(nanoparticles), 또는 이동(transfer) 벡터를 통하여 타겟 조직에 투여될 수 있다.
상기 조성물에 포함된 유전물질의 투여량은 1회 접종 시 0.1~1000ug/site 일 수 있다.
상기 조성물은 지방 조직의 크기 감소, 축소 또는 사멸을 목적으로 하는 개체에 투여되며, 상기 조성물은 황열, 대상포진, 및 풍진 바이러스로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 바이러스 예방용 백신 투여 후 상기 바이러스 중 어느 하나 이상에 대한 항체 생성이 확인된 후, 지방 조직의 크기 감소, 축소 또는 사멸을 목적으로 하는 부위에 적어도 1회 이상 투여될 수 있다.
상기 조성물은 치료제, 치료용 백신, 또는 예방용 백신과 같은 백신으로 제공될 수 있다.
다른 구현예는 상기 조성물을 제공하기 위한 키트를 제공할 수 있다. 상기 키트는 상기 조성물 외에, 상기 조성물의 투여를 위한 투여지침서를 포함할 수 있다.
상기 키트는 상기 조성물을 투여하기 전에 체내에 면역 환경 조성을 위한 항원을 포함하는 추가 조성물을 더 포함할 수 있다. 상기 키트는 사이토카인을 코딩하는 유전물질을 더 포함할 수 있다.
다른 구현예는 황열, 대상포진, 및 풍진 바이러스로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 바이러스; 또는 상기 바이러스 유래 단백질을 코딩하는 유전물질을 포함하는, 타겟 조직의 크기 또는 부피 축소용 약학 조성물을 제공할 수 있다.
상기 약학 조성물은 지방세포의 수 또는 지방조직의 크기를 감소시키거나 상기 세포 또는 조직의 사멸을 유도할 수 있다.
일 구현예에 따르면, 본 발명은 상기 조성물을 이를 필요로 하는 개체에 투여하여 타겟 조직의 크기 또는 부피를 축소하는 방법을 제공한다. 또 다른 구현예는 상기 조성물을 이를 필요로 하는 개체에 투여하여 비만을 억제, 개선, 또는 치료하는 방법을 제공한다. 여기서 상기 개체는 포유류이면 제한없이 포함할 수 있으며, 예를 들어, 개, 소, 돼지, 말, 사람 등을 포함할 수 있으며, 바람직하게 사람을 포함할 수 있다.
일 구현예에서 상기 방법은 지방 조직의 크기 감소, 축소 또는 사멸을 목적으로 하는 개체에
i) 황열, 대상포진, 및 풍진 바이러스로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 바이러스 예방용 백신을 투여하는 단계,
ii) 상기 백신에 의한 항체 생성을 확인하는 단계, 및
iii) 황열, 대상포진, 및 풍진 바이러스로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 바이러스; 상기 바이러스 유래 단백질; 또는 상기 바이러스 또는 단백질을 코딩하는 유전물질을 포함하는 약학 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 비만 개선, 억제, 또는 치료 방법, 또는 지방 조직의 크기 감소, 축소 또는 사멸 방법을 제공할 수 있다.
상기 방법은 상기 iii) 단계를 1회 이상, 2회 이상, 3회 이상, 4회 이상, 5회 이상, 6회 이상, 7회 이상, 8회 이상, 9회 이상, 10회 이상 반복할 수 있으며, 바람직하게 2회 이상, 3회 이상, 4회 이상, 5회 이상, 6회 이상, 7회 이상, 8회 이상, 9회 이상, 10회 이상, 더 바람직하게 3회 이상, 4회 이상, 5회 이상, 6회 이상, 7회 이상, 8회 이상, 9회 이상, 10회 이상 실시할 수 있다. 바람직하게 iii) 단계는 1일 내지 10일 간격으로, 2일 내지 8일 간격으로, 3일 내지 7일 간격으로 반복실시할 수 있다.
상기의 iii) 단계에 사용되는 조성물은 하나 이상의 사이토카인을 더 포함할 수 있으며, 바람직하게 상기 사이토카인은 IL-12, IL-2, IL-4, IL-5, IFN-γ, IL-10, IL-1, IL-6, INF-알파, INF-베타, TNF-알파, 및 TNF-베타로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 사이토카인을 포함할 수 있다. 또 다른 대안으로 상기의 iii) 단계 후에 iv) 하나 이상의 사이토카인을 포함하는 조성물을 투여하는 단계를 포함할 수 있으며, 바람직하게 상기 사이토카인은 IL-12, IL-2, IL-4, IL-5, IFN-γ, IL-10, IL-1, IL-6, INF-알파, INF-베타, TNF-알파, 및 TNF-베타로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 사이토카인을 포함할 수 있다. 즉 상기 사이토카인은 본 원의 바이러스 또는 바이러스 유래 단백질의 유전물질을 포함하는 조성물과 함께 투여되거나 순차로 투여될 수 있다.
본 발명의 일 구현예는 황열, 대상포진, 및 풍진 바이러스로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 바이러스; 상기 바이러스 유래 단백질; 또는 상기 바이러스 또는 단백질을 코딩하는 유전물질을 포함하는 조성물의 비만 개선, 억제, 또는 치료용도를 제공한다. 또 다른 예는 황열, 대상포진, 및 풍진 바이러스로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 바이러스; 상기 바이러스 유래 단백질; 또는 상기 바이러스 또는 단백질을 코딩하는 유전물질을 포함하는 조성물의 타겟 조직의 크기 또는 부피 축소 용도를 제공한다.
상기 용도는 타겟 조직의 크기 또는 부피를 축소용도로 이용될 수 있다. 바람직하게 상기 타겟 조직은 지방세포를 포함하는 조직을 포함할 수 있다.
상기 유전물질은 황열 바이러스의 구조 단백질, 대상포진 바이러스의 글리코단백질 E 및 풍진 바이러스의 E2 및 E1 단백질로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드일 수 있다.
상기 폴리뉴클레오티드는 DNA 또는 RNA를 포함할 수 있으며, 상기 RNA는 바람직하게 mRNA를 포함할 수 있다.
상기 유전물질은 서열번호 1 내지 6으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 폴리뉴클레오티드로 이루어진 핵산 분자를 포함할 수 있다.
상기 유전물질은 세포 내 면역 반응을 유발하는데 사용될 수 있다.
상기 조성물은 국소적으로 작용하기 위해 투여될 수 있으며, 상기 조성물은 적어도 1종 이상의 면역 환경 조성을 위한 항원이 먼저 개체에 적용된 후에 적용될 수 있다.
일 구현예에서 상기 조성물은 지방 조직의 크기 감소, 축소 또는 사멸을 목적으로 하는 개체에 투여되며, 상기 조성물은 황열, 대상포진, 및 풍진 바이러스로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 바이러스 예방용 백신 투여 후 상기 바이러스 중 어느 하나 이상에 대한 항체 생성이 확인된 후, 지방 조직의 크기 감소, 축소 또는 사멸을 목적으로 하는 부위에 적어도 1회 이상 투여될 수 있다.
본 발명은 타겟으로 하는 특정 부위의 조직의 크기 또는 부피 축소 효과를 가져올 수 있다. 본 발명은 타겟 조직의 세포를 사멸시킬 수 있고, 조직의 크기 또는 부피를 축소 또는 감소할 수 있는 새로운 비만 개선 또는 치료용 조성물, 또는 치료용 백신 조성물을 제공한다. 상기 조성물을 투여하여 체형 보정 효과 또는 체형 개선 효과를 얻을 수 있다.
본 발명은 국소비만을 해소하고 매끄러운 바디라인을 완성할 수 있는 새로운 형태의 비만 치료제를 제공할 수 있다.
본 발명의 비만 개선, 억제, 또는 치료용 조성물은 원하는 부위의 조직만 선택적으로 감소시킬 수 있고, 원하지 않는 부위의 조직 또는 이를 구성하는 세포에는 영향을 미치지 않는, 선택적인 국소부위 축소에 효과적이다.
또한 본 발명의 조성물은 외형 개선을 위한 미용 목적으로도 사용될 수 있다.
도 1은 본 발명의 유전물질을 삽입하기 위한 gWizTM vector의 벡터맵을 보여준다. 유전자는 제한효소 SalI, NotI 부위에 삽입되었다.
도 2는 IL-12의 p35(GenBank: M86672.1)와 p40(GenBank: M86671.1)의 coding region(p35; 127~774bp, p40; 35~1042bp)에 해당하는 핵산 서열을 삽입하기 위한, pSF-CMV-CMV-Sbfl vector에 삽입한 벡터맵을 보여준다. IL-12 p35 는 MCS site I에서 제한효소; EcoRI 및 XhoI 부위에 삽입 되었고, IL-12 p40는 MCS site II에서 제한효소 ; SalI 및 SpeI 부위에 삽입되었다.
도 3은 In vitro transcription (IVT)용 벡터를 보여준다.
도 4는 마우스에 YFV 백신주 (약독화 생바이러스)를 투여하여 pre-existing immunity을 유도를 확인한 결과이다.
백신주를 2주 간격으로 3회 투여 후, 마지막 투여 후 2주 후 혈중의 YFV 특이적인 IgG 항체가를 측정하였다.
NC (negative control)는 배지가 투여된 정상 마우스, YFV-ND는 Normal diet을 급이한 YFV-immunized 정상 마우스, YFV-HFD는 High-fat diet을 급이한 YFV-immunized 비만유도마우스를 나타낸다.
도 5는 마우스에 YFV 백신주 (약독화 생바이러스)를 투여하여 pre-existing immunity을 유도를 확인한 결과이다. 백신주를 2일 간격으로 2회 투여 후 3주 후에 혈중의 YFV 특이적인 IgG 항체가를 측정하였다. Pre-vaccination은 YFV를 투여 하기 전의 일부 개체, Post-vaccination은 High-fat diet을 급이한 YFV-immunized 비만유도마우스를 나타낸다.
도 6 및 도 7은 마우스에 VZV 백신주 (약독화 생바이러스)를 투여하여 pre-existing immunity을 유도를 확인한 결과이다. 백신주를 4주 간격으로 2회 투여 후 3주 후에 혈중의 VZV gE protein 특이적인 IgG 항체가를 측정하였다. Pre-vaccination은 VZV를 투여 하기 전의 일부 개체, Post-vaccination은 High-fat diet을 급이한 VZV-immunized 비만유도마우스를 나타낸다.
도 8 및 도 9는 YFV의 DNA 백신 투여 후 결과를 보여준다.
도 8은 YFV의 유전물질 (DNA)을 포함하는 백신 투여 직전의 몸무게를 기준으로 투여 전과 후에 몸무게 변화를 측정한 결과이다.
도 9는 YFV의 유전물질 (DNA)을 포함하는 치료제 투여에 의한 Ing AT (inguinal adipose tissue) 및 Ins AT (interscapular adipose tissue)의 무게 감소 효과를 보여주는 결과이다.
도 10 및 도 11은 VZV DNA 백신 투여 후 결과를 보여준다.
도 10은 VZV의 유전물질 (DNA)을 포함하는 백신 투여 직전의 몸무게를 기준으로 투여 전과 후에 몸무게 변화를 측정한 결과이다.
도 11은 VZV의 유전물질 (DNA)을 포함하는 백신 투여에 의한 inguinal (서혜부) adipose tissue의 무게 감소 효과를 보여주는 결과이다.
도 12 및 도 13은 YFV의 mRNA 백신 투여 후 결과를 보여준다.
도 12는 YFV의 유전물질 (mRNA)을 포함하는 백신 투여 직전의 몸무게를 기준으로 투여 전과 후에 몸무게 변화를 측정한 결과이다.
도 13은 YFV의 유전물질 (mRNA)을 포함하는 백신 투여에 의한 inguinal (서혜부) adipose tissue의 무게 감소 효과를 보여주는 결과이다.
도 14 및 도 15는 VZV의 mRNA 백신 투여 후 결과를 보여준다.
도 14는 VZV의 유전물질 (mRNA)을 포함하는 백신 투여 직전의 몸무게를 기준으로 투여 전과 후에 몸무게 변화를 측정한 결과이다.
도 15는 VZV의 유전물질 (mRNA)을 포함하는 백신 투여에 의한 inguinal (서혜부) adipose tissue의 무게 감소 효과를 보여주는 결과이다.
도 16 내지 도 18은 본 발명의 서열번호 2, 4, 및 6의 mRNA 서열을 각각 보여준다. 여기서 1은 capping 서열을, 2는 5'-UTR 서열을, 3은 Kozak 서열을, 5는 3'-UTR 서열을, 6은 폴리 A 서열을, 7은 프라이머 서열을 의미한다. 표시되지 않은 부분(4)는 GOI (Gene Of Interest, 목적 유전자) 서열을 의미한다. 도 16은 황열 바이러스의 구조 단백질을, 서열번호 17은 대상포진 바이러스의 gE protein을, 서열번호 18은 RuV의 E2-E1 protein 을 암호화하는 유전자를 목적 유전자로 포함한다.
도 2는 IL-12의 p35(GenBank: M86672.1)와 p40(GenBank: M86671.1)의 coding region(p35; 127~774bp, p40; 35~1042bp)에 해당하는 핵산 서열을 삽입하기 위한, pSF-CMV-CMV-Sbfl vector에 삽입한 벡터맵을 보여준다. IL-12 p35 는 MCS site I에서 제한효소; EcoRI 및 XhoI 부위에 삽입 되었고, IL-12 p40는 MCS site II에서 제한효소 ; SalI 및 SpeI 부위에 삽입되었다.
도 3은 In vitro transcription (IVT)용 벡터를 보여준다.
도 4는 마우스에 YFV 백신주 (약독화 생바이러스)를 투여하여 pre-existing immunity을 유도를 확인한 결과이다.
백신주를 2주 간격으로 3회 투여 후, 마지막 투여 후 2주 후 혈중의 YFV 특이적인 IgG 항체가를 측정하였다.
NC (negative control)는 배지가 투여된 정상 마우스, YFV-ND는 Normal diet을 급이한 YFV-immunized 정상 마우스, YFV-HFD는 High-fat diet을 급이한 YFV-immunized 비만유도마우스를 나타낸다.
도 5는 마우스에 YFV 백신주 (약독화 생바이러스)를 투여하여 pre-existing immunity을 유도를 확인한 결과이다. 백신주를 2일 간격으로 2회 투여 후 3주 후에 혈중의 YFV 특이적인 IgG 항체가를 측정하였다. Pre-vaccination은 YFV를 투여 하기 전의 일부 개체, Post-vaccination은 High-fat diet을 급이한 YFV-immunized 비만유도마우스를 나타낸다.
도 6 및 도 7은 마우스에 VZV 백신주 (약독화 생바이러스)를 투여하여 pre-existing immunity을 유도를 확인한 결과이다. 백신주를 4주 간격으로 2회 투여 후 3주 후에 혈중의 VZV gE protein 특이적인 IgG 항체가를 측정하였다. Pre-vaccination은 VZV를 투여 하기 전의 일부 개체, Post-vaccination은 High-fat diet을 급이한 VZV-immunized 비만유도마우스를 나타낸다.
도 8 및 도 9는 YFV의 DNA 백신 투여 후 결과를 보여준다.
도 8은 YFV의 유전물질 (DNA)을 포함하는 백신 투여 직전의 몸무게를 기준으로 투여 전과 후에 몸무게 변화를 측정한 결과이다.
도 9는 YFV의 유전물질 (DNA)을 포함하는 치료제 투여에 의한 Ing AT (inguinal adipose tissue) 및 Ins AT (interscapular adipose tissue)의 무게 감소 효과를 보여주는 결과이다.
도 10 및 도 11은 VZV DNA 백신 투여 후 결과를 보여준다.
도 10은 VZV의 유전물질 (DNA)을 포함하는 백신 투여 직전의 몸무게를 기준으로 투여 전과 후에 몸무게 변화를 측정한 결과이다.
도 11은 VZV의 유전물질 (DNA)을 포함하는 백신 투여에 의한 inguinal (서혜부) adipose tissue의 무게 감소 효과를 보여주는 결과이다.
도 12 및 도 13은 YFV의 mRNA 백신 투여 후 결과를 보여준다.
도 12는 YFV의 유전물질 (mRNA)을 포함하는 백신 투여 직전의 몸무게를 기준으로 투여 전과 후에 몸무게 변화를 측정한 결과이다.
도 13은 YFV의 유전물질 (mRNA)을 포함하는 백신 투여에 의한 inguinal (서혜부) adipose tissue의 무게 감소 효과를 보여주는 결과이다.
도 14 및 도 15는 VZV의 mRNA 백신 투여 후 결과를 보여준다.
도 14는 VZV의 유전물질 (mRNA)을 포함하는 백신 투여 직전의 몸무게를 기준으로 투여 전과 후에 몸무게 변화를 측정한 결과이다.
도 15는 VZV의 유전물질 (mRNA)을 포함하는 백신 투여에 의한 inguinal (서혜부) adipose tissue의 무게 감소 효과를 보여주는 결과이다.
도 16 내지 도 18은 본 발명의 서열번호 2, 4, 및 6의 mRNA 서열을 각각 보여준다. 여기서 1은 capping 서열을, 2는 5'-UTR 서열을, 3은 Kozak 서열을, 5는 3'-UTR 서열을, 6은 폴리 A 서열을, 7은 프라이머 서열을 의미한다. 표시되지 않은 부분(4)는 GOI (Gene Of Interest, 목적 유전자) 서열을 의미한다. 도 16은 황열 바이러스의 구조 단백질을, 서열번호 17은 대상포진 바이러스의 gE protein을, 서열번호 18은 RuV의 E2-E1 protein 을 암호화하는 유전자를 목적 유전자로 포함한다.
이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 실시예 등을 들어 상세하게 설명하기로 한다. 그러나, 본 발명에 따른 실시예들은 여러 가지 다른 형태로 변형될 수 있으며, 본 발명의 범위가 하기 실시예들에 한정되는 것으로 해석되어서는 안 된다. 본 발명의 실시예들은 당업계에서 평균적인 지식을 가진 자에게 본 발명을 보다 완전하게 설명하기 위해 제공되는 것이다. 모든 서열은 특별한 언급이 없는 한, 5'에서 3' 방향으로 기술된다.
1. 지방 세포 분해용 백신 (치료제)의 제조
실험을 위해 Pre-existing immunity가 유도된 개체에 투여하기 위한 유전물질과 상기 유전물질과 함께 투여될 수 있는 면역증강제를 다음과 같이 제조하였다.
(1) 외래 항원 준비
1) 황열 바이러스 (Yellow fever virus (strain: 17D); YFV)의 유전물질 준비
먼저, YFV의 genome (GenBank: X03700.1)에서 구조 단백질 (capsid protein, prM protein, envelope protein, 119 ~ 2452 (2,334 bp))을 코딩하는 유전물질 (서열번호 1 및 2)을 준비하였다.
2) 대상포진 바이러스(Varicella zoster virus (strain: Oka); VZV)의 유전물질 준비
VZV의 genome에서 gE protein (1,872 bp)을 코딩하는 유전물질 (서열번호 3 및 4)을 준비하였다.
3) 풍진 바이러스(Rubella virus (strain: RA27/3); RuV)의 유전물질 준비
RuV의 E2-E1 protein (2,358 bp)을 코딩하는 유전물질 (서열번호 5 및 6)을 준비하였다.
4) Firefly luciferase (FLuc)를 코딩하는 유전물질 (서열번호 15)을 준비하였다.
(2) 동물세포에서 발현되는 벡터 (DNA 백신 치료제) 준비
동물세포에서 단백질 발현 가능한 gWizTM vector에 YFV의 유전물질을 삽입하였다. 유전자의 앞에 Kozak sequence(GCCACC)를, 유전자의 마지막에 stop codon을 추가하였다. 동물세포에서 단백질 발현 가능한 gWizTM vector에 VZV의 유전물질을 삽입하였다. 유전자의 앞에 Kozak sequence를 추가하였다. 동물세포에서 단백질 발현 가능한 gWizTM vector에 RuV의 유전물질을 삽입하였다. 유전자의 앞에 Kozak sequence(GCCACC) 및 start codon (ATG)을 추가하였다.
벡터맵은 도 1에 나타냈다. 유전자는 제한효소 SalI, NotI 부위에 삽입되었다.
Cloning된 YFV-antigen plasmid (vector backbone: gWizTM), VZV-antigen plasmid (vector backbone: gWizTM) 및 RuV-antigen plasmid (vector backbone: gWizTM)를 DH5a competent cell에 transformation하였다. 해당 세포를 대량 배양하고 plasmid prep kit를 이용하여 plasmid를 회수하였다.
(3) 보조 유전물질 준비
다음으로, 보조 유전물질로 면역증강제를 준비하였다. IL-12의 p35(GenBank: M86672.1)와 p40(GenBank: M86671.1)의 coding region(p35; 127~774 (648 bp), p40; 35~1042 (1,008 bp))의 유전자 서열 (서열번호 7 및 8)을 kozak sequence와 함께 pSF-CMV-CMV-Sbfl vector에 삽입하였으며, P35는 EcoRI, XhoI 부위에, p40은 SalI, SpeI 부위에 삽입되었다. 벡터맵은 도 2에 나타냈다.
Cloning된 IL-12 plasmid (vector backbone: pSF-CMV-CMV-Sbfl)를 DH5a competent cell에 transformation하였다. 해당 세포를 대량 배양하고 plasmid prep kit를 이용하여 plasmid를 회수하였다.
(4) In vitro transcription (
IVT
)용 벡터 준비
Cloning을 통해 pcDNATM3.1(+)의 T7 promoter 서열과 bGH poly(A) signal 서열 사이에 YFV의 유전물질을 삽입하였다. 유전자의 앞에 Homo sapiens PPARG related coactivator 1 (PPRC1) gene의 5' untranslated region 서열과 Kozak sequence를, 유전자의 마지막에 stop codon (TGA), Homo sapience alpha-1-globin gene의 3' untranslated region 서열, poly A 서열 및 Esp3i enzyme cut site 서열을 추가하였다. 벡터맵은 도 3에 나타냈다. stop codon은 서열번호 24로 나타냈다.
Cloning을 통해 pcDNA3.1TM(+)의 T7 promoter 서열과 bGH poly(A) signal 서열 사이에 VZV의 유전물질을 삽입하였다. 유전자의 앞에 Homo sapiens PPARG related coactivator 1 (PPRC1) gene의 5' untranslated region 서열과 Kozak sequence를, 유전자의 마지막에 Homo sapience alpha-1-globin gene의 3' untranslated region 서열, poly A 서열 및 Esp3i enzyme cut site 서열을 추가하였다.
Cloning을 통해 pcDNA3.1TM(+)의 T7 promoter 서열과 bGH poly(A) signal 서열 사이에 RuV의 유전물질을 삽입하였다. 유전자의 앞에 Homo sapiens PPARG related coactivator 1 (PPRC1) gene의 5' untranslated region 서열과 Kozak sequence 및 start codon를, 유전자의 마지막에 Homo sapience alpha-1-globin gene의 3' untranslated region 서열, poly A 서열 및 Esp3i enzyme cut site 서열을 추가하였다.
Cloning을 통해 pcDNATM3.1(+)의 T7 promoter 서열과 bGH poly(A) signal 서열 사이에 FLuc을 코딩하는 유전물질을 삽입하였다. 유전자의 앞에 Homo sapiens PPARG related coactivator 1 (PPRC1) gene의 5' untranslated region 서열과 Kozak sequence를, 유전자의 마지막에 stop codon, Homo sapience alpha-1-globin gene의 3' untranslated region 서열, poly A 서열 및 Esp3i enzyme cut site 서열을 추가하였다.
Cloning된 YFV-antigen plasmid (vector backbone: pcDNATM3.1(+)), VZV-antigen plasmid (vector backbone: pcDNATM3.1(+)), RuV-antigen plasmid (vector backbone: pcDNATM3.1(+)) 및 FLuc plasmid (vector backbone: pcDNATM3.1(+))을 DH5a competent cell에 transformation 하였다. 해당 세포를 대량 배양하고 plasmid prep kit를 이용하여 plasmid를 회수하였다.
(4)
IVT를
통한 동물세포에서 발현되는 유전물질 (
mRNA
백신 치료제) 준비
YFV-antigen plasmid (vector backbone: pcDNA3.1TM(+)), VZV-antigen plasmid (vector backbone: pcDNATM3.1(+)) 및 RuV-antigen plasmid (vector backbone: pcDNATM3.1(+))를 주형으로 PCR을 실시하여 linearized DNA를 준비하였다. (서열번호 9, 서열번호 10 및 서열번호 11) 프라이머 정보는 하기 표 1에 나타냈다.
| 방향 | oligo name | 서열번호 | 설명 |
| F | F_T7_M4AG | 서열번호 17 | PCR (linearized DNA준비)에 사용된 primers (GOI 종류에 무관하게 사용할 수 있는 universal primer를 디자인하여 사용함) |
| R | R_esp3i+11bp | 서열번호 18 |
FLuc plasmid (vector backbone: pcDNATM3.1(+))를 주형으로 PCR을 실시하여 start codon의 12 bp-downstream에 frameshift를 유도하였고, stop codon이 발생한 linearized DNA를 준비하였다. (서열번호 15) 프라이머 정보는 하기 표 2에 나타냈다.
| 방향 | oligo name | sequence | 설명 |
| F | f_fluc | 서열번호 19 | 2단계로 PCR을 실시하여 FLuc에 stop codon을 유도함 1. 1st PCR - template: FLuc plasmid (vector backbone: pcDNATM3.1(+); 서열번호 15) - primers: (F) f_fluc, (R) r_fluc_2 2. 2nd PCR - template: amplicon of 1st PCR - primers: (F) F_t7_fluc_shift, (R) r_fluc2 |
| R | r_fluc_2 | 서열번호 20 | |
| F | F_t7_fluc_shift | 서열번호 21 |
Linearized DNA를 주형으로 IVT를 실시하였다. 연이어 DNase 처리 후 LiCl을 이용하여 mRNA를 침전, 정제하였다. 준비된 mRNA는 Vero E6 cell line에 transfection 하여 항원 발현 여부를 확인하였다. Stop codon을 포함하는 FLuc mRNA는 단백질 발현이 되지 않는 것을 확인 후 사용하였다.
2. 지방세포 사멸 확인
(1) 실험 방법
1) Diet induced obese(DIO) 마우스 생산
C57BL/6J, 3w, female 마우스를 일반 사료 및 고지방 사료(high fat diet with 60% kcal from fat)를 각각 급이 하였다. 매 1주 간격으로 몸무게를 측정하고 10~15주간 사육하여 체중 증가를 확인한 후 실험에 사용하였다.
C57BL/6J, 4w, male 마우스를 고지방 사료(high fat diet with 60% kcal from fat)를 급이하였다. 매 1주 간격으로 몸무게를 측정하고 10~15주간 사육하여 체중 증가를 확인한 후 실험에 사용하였다.
2) Pre-existing immunity 유도 및 항체가 측정
백신주 바이러스인 약독화 생바이러스 이용하여 pre-existing immune response를 유도하였다. 상기 백신주 바이러스로 YFV (strain: 17D, GenBank: X03700.1) 및 VZV (strain: Oka, 스카이조스터주 (에스케이바이오사이언스))를 이용하였다.
(i) YFV 면역: 마우스의 왼쪽 뒷다리 근육에 YFV 백신주 (약독화 생바이러스)를 2E5 pfu/1회당 농도로 2주간격 3회 주사하였다. 마지막 주사 후 2주 후에 채혈하여 혈청을 분리하였다.
항체가 확인: 분리한 혈청은 ELISA 분석을 통해 YFV에 특이적인 항체를 검출하였다. ELISA 분석을 위해, 주사에 사용된 YFV를 5E4 pfu/well 농도로 plate에 coating하고, 분석 샘플(혈청)을 희석하여 2h 반응시켰다. 세척 후 anti-mouse IgG-HRP secondary antibody를 1/4000 희석하여 처리한 후 2h 반응시켰다. 세척 후 발색액을 넣고 10min간 반응시켜 O.D 값을 측정하였다.
결과: YFV 백신주 투여에 의해 정상적인 면역 유도 (항체반응)이 일어났다.
결과는 도 4에 나타냈다. 배지를 투여한 negative control (NC)군에 비해 YFV를 투여한 YFV-ND, YFV-HFD그룹에서 YFV 특이적인 항체가 상승이 확인되었다.
치료제 투여를 위한 YFV 특이적인 pre-existing immunity 유도가 확인되었다.
(ii) YFV 면역 (2): 마우스의 왼쪽 뒷다리 근육에 YFV (약독화 생바이러스)를 치료제 투여 시작 3주 전에 2일 간격으로 2회 면역하였다. (근육주사, 1st shot: 2E4 pfu/injection, 2nd shot: 4E4 pfu/injection) 치료제 투여 2~3일 전, 즉 1st shot으로부터 3주 후에 추가로 1회 YFV를 면역하였다. (근육주사, 3rd shot: 1E5 pfu/injection)
항체가 확인: YFV 투여 전 및 1st shot 투여 후 3주 후에 채혈하여 혈청을 분리하였다. 분리한 혈청은 ELISA 분석을 통해 YFV에 특이적인 항체를 검출하였다. ELISA 분석을 위해, 주사에 사용된 YFV를 1E4 pfu/well 농도로 plate에 coating하고, 2% skim milk로 blocking 한 후에 희석한 혈청을 항원과 1h 반응시켰다. 세척 후 anti-mouse IgG-HRP secondary antibody를 1/1000 희석하여 1h 반응시켰다. 세척 후 발색액을 넣고 10min간 반응시켜 OD 값을 측정하였다.
결과: YFV 백신주 투여에 의해 정상적인 면역 유도 (항체반응)이 일어났다. 결과는 도 5에 나타냈다. YFV 면역 전 혈청 (pre-vaccination)과 비교했을 때 YFV 2회 면역한 후 샘플링한 혈청 (post-vaccination)에서 YFV 특이적인 항체가 상승이 확인되었다. 치료제 투여를 위한 YFV 특이적인 pre-existing immunity 유도가 확인되었다.
(iii) VZV 면역: 마우스에 VZV (약독화 생바이러스)를 4주 간격으로 2회 면역하였다. (피하주사, 1st shot: 9E3 pfu/injection, 2nd shot: 9E3 pfu/injection) 치료제 투여 1주 전에 추가로 1회 VZV를 면역하였다. (피하주사, 3rd shot: 9E3 pfu/injection)
항체가 확인: VZV 투여 전 및 2nd shot 투여 후 3주 후에 채혈하여 혈청을 분리하였다. 분리한 혈청은 ELISA 분석을 통해 VZV gE protein 특이적인 항체를 검출하였다. ELISA 분석을 위해, recombinant VZV gE protein을 100 ng/well 농도로 plate에 coating하고, 2% skim milk로 blocking 한 후에 희석한 혈청을 항원과 1h 반응시켰다. 세척 후 anti-mouse IgG-HRP secondary antibody를 1/1000 희석하여 1h 반응시켰다. 세척 후 발색액을 넣고 10min간 반응시켜 OD 값을 측정하였다.
결과: VZV 백신주 투여에 의해 정상적인 면역 유도 (항체반응)이 일어났다. 결과는 도 6 및 도 7에 나타냈다. VZV면역 전 혈청 (pre-vaccination)과 비교했을 때 VZV를 2회 면역한 후 샘플링한 혈청 (post-vaccination)에서 VZV gE protein 특이적인 항체가 상승이 확인되었다. 치료제 투여를 위한 VZV 특이적인 pre-existing immunity 유도가 확인되었다.
(iv) RuV 면역: 실험동물에 MMR 백신주 (RuV 약독화 생바이러스를 포함하는 백신주)를 4주 간격으로 2~3회 면역하였다. (피하주사)
항체가 확인: MMR 투여 전 및 2nd shot 투여 후 3주 후에 채혈하여 혈청을 분리하였다. 분리한 혈청은 ELISA 분석을 통해 RuV E1 protein 특이적인 항체를 검출하였다. ELISA 분석을 위해, recombinant RuV E1 protein을 100 ng/well 농도로 plate에 coating하고, 2% skim milk로 blocking 한 후에 희석한 혈청을 항원과 1h 반응시켰다. 세척 후 anti-mouse IgG-HRP secondary antibody를 1/1000 희석하여 1h 반응시켰다. 세척 후 발색액을 넣고 10min간 반응시켜 OD 값을 측정하였다.
결과: YFV, VZV 투여와 마찬가지로 치료제 투여를 위한 RuV 특이적인 pre-existing immunity 유도가 확인되었다.
3) 치료용 백신 투여 및 지방조직 감소 효과 확인
(i) DNA 백신 투여 (1) (YFV-immunized group)
방법: 정상 마우스 혹은 비만이 유도된 마우스 중에서 각각 YFV 백신주가 투여된 그룹과 투여되지 않은 그룹으로 나누어 실험에 사용하였다. 치료용 백신 투여 3일전부터 모든 마우스는 Normal diet (ND; 정상식이)를 제공하였다. DNA 백신 (치료제)은 마우스의 inguinal (견갑골) adipose tissue와 inguinal (서혜부) adipose tissue에 투여하였다. 각 조직의 좌 또는 우측 한쪽에 2 군데씩, 2~3일 간격으로 5회 치료제를 투여하였다. 치료제는 YFV-antigen-encoding DNA 100 μg/tissue, IL-12-encoding DNA 50 μg/tissue 농도로 총 150 μg/1회 투여하였고, 투여된 DNA 백신 총량과 동일한 양의 empty vector가 mock 그룹에 투여되었다.
치료용 백신 투여 전과 후에 몸무게를 측정하였다. 마지막 치료용 백신 투여 후 7일 후에 마우스의 부검을 실시했다. 좌/우 inguinal adipose tissue와 interscapular adipose tissue를 분리하고 각각의 무게를 측정하였다.
| Group | 구분 | Diet 1 | Diet 2 (치료제 투여 3일전~부검) |
Pre-existing immunity 유도 (3차) |
치료제 정보 | 치료제 투여횟수 | 개체수 |
| Control 1 | Normal | ND | ND | 배지 | - | - | 5 |
| Control 2 | YFV 백신주 | - | - | 5 | |||
| Mock | DIO | HFD | YFV 백신주 | Empty vector | 2일 간격 5회 | 10 | |
| 치료제 1 | YFV 백신주 | YFV-antigen DNA | 2일 간격 5회 | 10 | |||
| 치료제 2 | YFV 백신주 | YFV-antigen DNA, IL-12 DNA | 2일 간격 5회 | 10 |
(DIO: Diet-induced obesity, ND: Normal diet, HFD: High-fat diet; YFV-antigen DNA: 서열번호 1, IL-12 DNA: 서열번호 5 및 6의 조합)
결과: 상기 표 3의 각 그룹의 치료제 투여 후 몸무게 평균 변화율과 지방조직 감소 효과를 각각 확인하여 도 8 및 도 9에 나타냈다.
도 8을 참고하면, 치료제 투여 전과 후에 몸무게 측정하였고, 투여 직전의 몸무게를 기준으로 몸무게 변화를 측정하였다. 아무것도 처리되지 않는 그룹(control 1)의 경우 몸무게가 서서히 증가하였으나 Mock, 치료제 1, 및 치료제 2 그룹은 모두 몸무게 감소 효과를 보였으며, Mock 그룹 대비 치료제 1 및 치료제 2 투여 그룹이 더 크게 감소하였다. 치료제 1 그룹의 경우도 뛰어난 몸무게 감소효과를 보였고, IL-12가 함께 투여된 치료제 2 그룹의 경우 몸무게 감소가 가장 크게 나타났다. 이러한 결과를 통해 치료제 1 만으로도 뛰어난 몸무게 감소 효과를 보였다는 것을 알 수 있다.
도 9에 치료제 투여에 의한 지방 무게 감소 효과를 나타냈다. 치료제는 좌 또는 우측 한쪽에만 투여되었고 치료제 5회 투여 후 7일차에 마우스의 좌측과 우측의 inguinal AT(adipose tissue)와 interscapular AT를 분리하여 AT의 무게 측정하였다. 도 9의 결과는 동일 개체 내에서 좌측과 우측 AT 무게를 비교하여 지방 무게 감소 효과를 산출하여 그룹 별로 나타낸 것이다. Control그룹 (치료제 투여 없음)과 Mock 군 (empty vector 투여)을 비교하였을 때, 치료제 1 및 치료제 2를 투여하여 지방조직 무게가 감소한 것을 알 수 있다.
이러한 결과는 본 발명의 치료제가 단순히 체중 감소에만 효과적인 것이 아니라, 지방조직의 무게를 감소시키는 효과가 있음을 보여준다. Mock 군과 비교했을 때, 지방조직 무게의 평균값이 현저히 감소한 것으로 나타났다. IL-12를 함께 투여한 치료제 2 투여그룹에서 지방조직 무게 변화가 훨씬 더 큰 것을 알 수 있다.
(ii) DNA 백신 투여 (2) (VZV-immunized group)
방법: 고지방 식이 (HFD)로 비만이 유도된 마우스 중, 치료제 투여를 위한 VZV 특이적인 pre-existing immunity 유도가 확인된 마우스를 대상으로 DNA 백신 (치료제)를 투여하였다. 치료제 투여 전까지 HFD를 급이 하였고, 치료제 투여 당일부터 3일씩 ND와 HFD를 번갈아 급이 하였다.
마우스의 inguinal (서혜부) adipose tissue에 치료제를 투여하였다. 각 조직의 좌 또는 우측 한쪽에 4 군데씩, 2일 간격으로 5회 치료제를 투여하였다. 치료제는 VZV-antigen-encoding DNA 100 μg/tissue 농도로 총 100 μg/1회 투여하였고, 투여된 치료제의 DNA 총량과 동일한 양의 empty vector가 mock 그룹에 투여되었다.
치료용 백신 투여 전과 후에 몸무게를 측정하였다. 마지막 치료용 백신 투여 후 12~14일 후에 마우스의 부검을 실시했다. 좌/우 inguinal adipose tissue를 분리하고 각각의 무게를 측정하였다.
| Group | 구분 | Diet 1 | Diet 2 (치료제 투여 당일~부검) |
Pre-existing immunity 유도 (3차) |
치료제 정보 | 치료제 투여량 | 치료제 투여횟수 | 개체수 |
| Control | DIO | HFD | ND, HFD 3일간격 번갈아 급이 |
VZV 백신주 | - | - | - | 9 |
| Mock | VZV 백신주 | Empty vector | 100 μg/tissue | 2일간격 5회 | 10 | |||
| 치료제 | VZV 백신주 | VZV-antigen DNA | 100 μg/tissue | 2일간격 5회 | 9 |
(DIO: Diet-induced obesity, ND: Normal diet, HFD: High-fat diet; 치료제 VZV-antigen DNA: 서열번호: 3)
결과: 상기 표 4의 각 그룹의 치료제 투여 후 몸무게 평균 변화율과 지방조직 감소 효과를 각각 확인하여 도 10 및 도 11에 나타냈다. 도 10을 참고하면, 치료제 투여 전과 후에 몸무게 측정하였고, 투여 직전의 몸무게를 기준으로 몸무게 변화율을 산출하였다. 치료제 투여 당일부터 3일씩 ND와 HFD를 번갈아 급이한 모든 그룹에서 체중 감소가 관찰되었다. 특히 control그룹 (치료제 투여 없음) 대비해서 DNA를 투여한 mock, treatment (치료제) 군에서 더욱 큰 체중감소가 확인되었다. Mock그룹, treatment그룹의 투여 전 (day 0), 투여 후 부검직전의 체중감소율은 유사한 수준이었다.
도 11에 치료제 투여에 의한 지방 무게 감소 효과를 나타냈다. 치료제는 좌 또는 우측 한쪽에만 투여되었고 치료제 5회 투여 후 12~14일차에 마우스의 좌측과 우측의 inguinal (서혜부) adipose tissue를 분리하여 그 무게 측정하였다. 도 11의 결과는 동일 개체로부터 분리한 좌측과 우측 지방조직의 무게를 비교하여 지방조직 감소율을 산출하여 그룹 별로 나타낸 것이다. Control그룹 (치료제 투여 없음) 대비해서 DNA를 투여한 mock그룹, treatment (치료제) 그룹에서 지방조직의 감소가 확인되었다. 특히 Mock 그룹 대비 treatment 그룹에서 더 큰 감소율이 확인되었다.
| Control | Mock | Treatment | |
| 1 | 4.6 | -31.9 | -44.3 |
| 2 | 12.3 | -28.9 | -41.3 |
| 3 | 8.6 | -20.2 | -32.9 |
| 4 | -12.4 | -26.9 | -34.3 |
| 5 | -6.1 | -21.4 | -23.0 |
| 6 | 0.2 | -47.5 | -37.2 |
| 7 | -10.5 | -33.2 | -44.9 |
| 8 | -9.7 | -30.1 | -34.9 |
| 9 | -12.2 | -39.6 | -49.8 |
| 10 | - | -37.1 | - |
| (mean) | -2.80 | -31.69 | -38.05 |
| (SD) | 9.47 | 8.26 | 8.02 |
상기 표 5 및 도 11에서 확인할 수 있듯이, 본 발명의 치료제 투여군의 지방조직 감소 값의 평균은 Control 군 대비 큰 폭으로 감소하였다. 그리고 Mock 군과 비교했을 때, 지방조직 감소 정도가 더 우수하였다. 지방조직의 무게와 크기를 생각했을 때, 상기와 같은 감소 효과를 달성한 것은 매우 뛰어난 성과임을 알 수 있다.
(iii) mRNA 백신 투여 (3) (YFV-immunized group)
방법: 고지방 식이 (HFD)로 비만이 유도된 마우스 중, 치료제 투여를 위한 YFV 특이적인 pre-existing immunity 유도가 확인된 마우스를 대상으로 mRNA 백신 (치료제)를 투여하였다. 치료제 투여 전까지 HFD를 급이 하였고, 치료제 투여 당일부터 3일씩 ND와 HFD를 번갈아 급이 하였다.
마우스의 inguinal (서혜부) adipose tissue에 치료제를 투여하였다. 각 조직의 좌 또는 우측 한쪽에 4 군데씩, 2일 간격으로 5회 치료제를 투여하였다. 치료제는 1회당 YFV-antigen-encoding mRNA 10 μg/tissue 농도로 투여하였다. Stop codon을 포함하는 FLuc-encoding mRNA는 단백질 발현이 되지 않는 유전물질로서, 투여된 치료제의 mRNA 총량과 동일한 양이 mock 그룹에 투여되었다.
치료용 백신 투여 전과 후에 몸무게를 측정하였다. 마지막 치료용 백신 투여 후 12~14일 후에 마우스의 부검을 실시했다. 좌/우 inguinal adipose tissue를 분리하고 각각의 무게를 측정하였다.
| Group | 구분 | Diet 1 | Diet 2 (치료제 투여 당일~부검) |
Pre-existing immunity 유도 (3차) |
치료제 정보 | 치료제 투여량 | 치료제 투여횟수 | 개체수 |
| Control | DIO | HFD | ND, HFD 3일간격 번갈아 급이 |
VZV 백신주 | - | - | - | 9 |
| Mock | YFV 백신주 | Fluc mRNA (with stop codon) |
10 μg/tissue | 2일간격 5회 | 9 | |||
| 치료제 | YFV 백신주 | YFV-antigen mRNA | 10 μg/tissue | 2일간격 5회 | 10 |
(DIO: Diet-induced obesity, ND: Normal diet, HFD: High-fat diet; 치료제 서열번호: 2)
결과: 상기 표 6의 각 그룹의 치료제 투여 후 몸무게 평균 변화율과 지방조직 감소 효과를 각각 확인하여 도 12 및 도 13에 나타냈다.
도 12를 참고하면, 치료제 투여 전과 후에 몸무게 측정하였고, 투여 직전의 몸무게를 기준으로 몸무게 변화율을 산출하였다. 치료제 투여 당일부터 3일씩 ND와 HFD를 번갈아 급이한 모든 그룹에서 체중 감소가 관찰되었다. 특히 control그룹 (치료제 투여 없음) 대비해서 mRNA를 투여한 mock, treatment (치료제) 군에서 더욱 큰 체중감소가 확인되었다. 특히 투여 전 (day 0), 투여 후 부검직전의 체중감소율을 확인한 결과 mock그룹 대비해서 treatment그룹에서 더욱 높은 감소율이 확인되었다.
| (%) | Day 0 | Day 2 | Day 4 | Day 6 | Day 8 | Day 11 | Day 13 | Day 15 | Day 19 | Day 22 |
| control | 0.00 | -10.17 | -7.90 | -8.13 | -11.91 | -5.20 | -10.68 | -5.75 | -7.40 | - |
| mock | 0.00 | -3.56 | 0.23 | -3.50 | -6.71 | 0.57 | -5.15 | -1.22 | -4.02 | -7.81 |
| treatment | 0.00 | -6.46 | -2.23 | -6.91 | -11.06 | -4.15 | -9.67 | -5.29 | -9.17 | -11.30 |
도 13에 치료제 투여에 의한 지방 무게 감소 효과를 나타냈다. 치료제는 좌 또는 우측 한쪽에만 투여되었고 치료제 5회 투여 후 12~14일차에 마우스의 좌측과 우측의 inguinal (서혜부) adipose tissue를 분리하여 그 무게 측정하였다. 도 13의 결과는 동일 개체로부터 분리한 좌측과 우측 지방조직의 무게를 비교하여 지방조직 감소율을 산출하여 그룹 별로 나타낸 것이다. Control그룹 (치료제 투여 없음) 대비해서 mRNA를 투여한 mock그룹, treatment (치료제) 그룹에서 지방조직의 감소가 확인되었다. 특히 Mock 그룹 대비 treatment 그룹에서 더 큰 감소율이 확인되었다. 결과를 표 8에 나타냈다.
| Control | Mock | Treatment | |
| 1 | 4.6 | 6.6 | -35.4 |
| 2 | 12.3 | -7.0 | -28.7 |
| 3 | 8.6 | -9.9 | -17.6 |
| 4 | -12.4 | 3.4 | -24.1 |
| 5 | -6.1 | -31.9 | -28.3 |
| 6 | 0.2 | -14.3 | -35.4 |
| 7 | -10.5 | -24.1 | -41.9 |
| 8 | -9.7 | -20.8 | -43.5 |
| 9 | -12.2 | -25.4 | -32.6 |
| 10 | - | - | -37.3 |
| (mean) | -2.80 | -13.7 | -32.5 |
| (SD) | 9.47 | 13.2 | 8.0 |
(iv) mRNA 백신 투여 (4) (VZV-immunized group) 방법: 고지방 식이 (HFD)로 비만이 유도된 마우스 중, 치료제 투여를 위한 VZV 특이적인 pre-existing immunity 유도가 확인된 마우스를 대상으로 mRNA 백신 (치료제)를 투여하였다. 치료제 투여 전까지 HFD를 급이 하였고, 치료제 투여 당일부터 3일씩 ND와 HFD를 번갈아 급이 하였다.
마우스의 inguinal (서혜부) adipose tissue에 치료제를 투여하였다. 각 조직의 좌 또는 우측 한쪽에 4 군데씩, 2일 간격으로 5회 치료제를 투여하였다. 치료제는 1회당 VZV-antigen-encoding mRNA 10 μg/tissue 농도로 투여하였다. Stop codon을 포함하는 FLuc-encoding mRNA는 단백질 발현이 되지 않는 유전물질로서, 투여된 치료제의 mRNA 총량과 동일한 양이 mock 그룹에 투여되었다.
치료용 백신 투여 전과 후에 몸무게를 측정하였다. 마지막 치료용 백신 투여 후 12~14일 후에 마우스의 부검을 실시했다. 좌/우 inguinal adipose tissue를 분리하고 각각의 무게를 측정하였다.
| Group | 구분 | Diet 1 | Diet 2 (치료제 투여 당일~부검) |
Pre-existing immunity 유도 (3차) |
치료제 정보 | 치료제 투여량 | 치료제 투여횟수 | 개체수 |
| Control | DIO | HFD | ND, HFD 3일간격 번갈아 급이 |
VZV 백신주 | - | - | - | 9 |
| Mock | VZV 백신주 | Fluc mRNA (with stop codon) |
10 μg/tissue | 2일간격 5회 | 10 | |||
| 치료제 | VZV 백신주 | VZV-antigen mRNA | 10 μg/tissue | 2일간격 5회 | 9 |
(DIO: Diet-induced obesity, ND: Normal diet, HFD: High-fat diet; VZV-antigen mRNA: 서열번호: 4)
결과: 상기 표 9의 각 그룹의 치료제 투여 후 몸무게 평균 변화율과 지방조직 감소 효과를 각각 확인하여 도 14 및 도 15에 나타냈다.
도 14를 참고하면, 치료제 투여 전과 후에 몸무게 측정하였고, 투여 직전의 몸무게를 기준으로 몸무게 변화율을 산출하였다. 치료제 투여 당일부터 3일씩 ND와 HFD를 번갈아 급이한 모든 그룹에서 체중 감소가 관찰되었다. 특히 control그룹 (치료제 투여 없음) 대비해서 mRNA를 투여한 mock, treatment (치료제) 군에서 더욱 큰 체중감소가 확인되었다. Mock그룹, treatment그룹의 투여 전 (day 0), 투여 후 부검직전의 체중감소율은 유사한 수준이었다. 값을 하기 표 10에 나타냈다.
| (%) | Day 0 | Day 2 | Day 4 | Day 6 | Day 8 | Day 11 | Day 13 | Day 15 | Day 20 |
| control | 0 | -10.17 | -7.90 | -8.13 | -11.91 | -5.20 | -10.68 | -5.75 | -7.40 |
| mock | 0 | -5.63 | -1.61 | -6.18 | -10.24 | -4.00 | -9.74 | -6.15 | -10.75 |
| treatment | 0 | -6.44 | -1.65 | -7.14 | -10.77 | -3.09 | -9.36 | -4.89 | -10.09 |
도 15에 치료제 투여에 의한 지방 무게 감소 효과를 나타냈다. 치료제는 좌 또는 우측 한쪽에만 투여되었고 치료제 5회 투여 후 12~14일차에 마우스의 좌측과 우측의 inguinal (서혜부) adipose tissue를 분리하여 그 무게 측정하였다. 도 15의 결과는 동일 개체로부터 분리한 좌측과 우측 지방조직의 무게를 비교하여 지방조직 감소율을 산출하여 그룹 별로 나타낸 것이다. Control그룹 (치료제 투여 없음) 대비해서 mRNA를 투여한 mock, treatment (치료제) 그룹에서 지방조직의 감소가 확인되었다. 특히 Mock 그룹 대비 treatment 그룹에서 더 큰 감소율이 확인되었다.
(v) DNA 백신 투여 (5) (MMR-immunized group)
방법: 고지방 식이 (HFD)로 비만이 유도된 마우스 중, 치료제 투여를 위한 RuV 특이적인 pre-existing immunity 유도가 확인된 마우스를 대상으로 mRNA 백신 (치료제)를 투여하였다. 치료제 투여 전까지 HFD를 급이 하였고, 치료제 투여 당일부터 3일씩 ND와 HFD를 번갈아 급이 하였다.
마우스의 inguinal (서혜부) adipose tissue에 치료제를 투여하였다. 각 조직의 좌 또는 우측 한쪽에 4 군데씩, 2일 간격으로 5회 치료제를 투여하였다. 치료제는 RuV-antigen-encoding DNA 100 μg/tissue 농도로 총 100 μg/1회 투여하였고, 투여된 치료제의 DNA 총량과 동일한 양의 empty vector가 mock 그룹에 투여되었다.
치료용 백신 투여 전과 후에 몸무게를 측정하였다. 마지막 치료용 백신 투여 후 12~14일 후에 마우스의 부검을 실시했다. 좌/우 inguinal adipose tissue를 분리하고 각각의 무게를 측정하였다.
결과: YFV, VZV 투여 군과 유사하게 치료제 투여군에서 체중 감소, 및 지방조직 감소 효과가 확인되었다.
(vi) mRNA 백신 투여 (6) (MMR-immunized group)
방법: 고지방 식이 (HFD)로 비만이 유도된 마우스 중, 치료제 투여를 위한 RuV 특이적인 pre-existing immunity 유도가 확인된 마우스를 대상으로 mRNA 백신 (치료제)를 투여하였다. 치료제 투여 전까지 HFD를 급이 하였고, 치료제 투여 당일부터 3일씩 ND와 HFD를 번갈아 급이 하였다.
마우스의 inguinal (서혜부) adipose tissue에 치료제를 투여하였다. 각 조직의 좌 또는 우측 한쪽에 4 군데씩, 2일 간격으로 5회 치료제를 투여하였다.
치료제는 1회당 RuV-antigen-encoding mRNA 10 μg/tissue 농도로 투여하였다. Stop codon을 포함하는 FLuc-encoding mRNA는 단백질 발현이 되지 않는 유전물질로서, 투여된 치료제의 mRNA 총량과 동일한 양이 mock 그룹에 투여되었다.
치료용 백신 투여 전과 후에 몸무게를 측정하였다. 마지막 치료용 백신 투여 후 12~14일 후에 마우스의 부검을 실시했다. 좌/우 inguinal adipose tissue를 분리하고 각각의 무게를 측정하였다.
결과: YFV, VZV 투여 실험과 유사하게, 치료제 투여군에서 체중 감소, 및 지방조직 감소 효과가 확인되었다.
| 서열번호 | 설명 | 참고번호 및 참고사항 |
| 서열번호 1 | YFV의 구조 단백질(119 ~ 2452 위치 (2,334 bp))를 암호화하는 DNA 서열 | 서열번호 1a YFV의 구조 단백질 (capsid protein, prM protein, envelope protein, 119 ~ 2452 (2,334 bp)) DNA 서열 |
| 서열번호 2 | YFV의 구조 단백질(119 ~ 2452 위치 (2,334 bp))를 암호화하는 mRNA 서열 | 서열번호 7b 서열번호 7a를 주형으로 IVT 하여 준비된 YFV-antigen-expressing mRNA |
| 서열번호 3 | VZV gE protein (1,872 bp)을 코딩하는 DNA 서열 | 서열번호 2a VZV gE protein (1,872 bp) DNA 서열 |
| 서열번호 4 | VZV gE protein (1,872 bp)을 암호화하는 mRNA 서열 | 서열번호 8b 서열번호 8a를 주형으로 IVT 하여 준비된 VZV-antigen-expressing mRNA |
| 서열번호 5 | RuV의 E2-E1 protein (2,358 bp)을 암호화하는 DNA 서열 | 서열번호 3a RuV의 E2-E1 protein (2,358 bp) DNA 서열 |
| 서열번호 6 | RuV의 E2-E1 protein (2,358 bp)을 암호화하는 mRNA 서열 | 서열번호 9b 서열번호 9a를 주형으로 IVT 하여 준비된 RuV-antigen-expressing mRNA |
| 서열번호 7 | IL-12의 p35의 DNA 서열 | 서열번호 5 IL-12 p35 (GenBank: M86672.1; 127~774 (648 bp)) |
| 서열번호 8 | IL-12의 p40의 DNA 서열 | 서열번호 6 IL-12 p40 (GenBank: M86671.1; 35~1042 (1,008 bp)) |
| 서열번호 9 | 서열번호 2의 주형 DNA | 서열번호 7a YFV-antigen plasmid (vector backbone: pcDNA3.1TM(+))를 주형으로 PCR을 실시하여 준비된 linearized DNA |
| 서열번호 10 | 서열번호 4의 주형 DNA | 서열번호 8a VZV-antigen plasmid (vector backbone: pcDNA3.1TM(+))를 주형으로 PCR을 실시하여 준비된 linearized DNA |
| 서열번호 11 | 서열번호 6의 주형 DNA | 서열번호 9a RuV-antigen plasmid (vector backbone: pcDNA3.1TM(+))를 주형으로 PCR을 실시하여 준비된 linearized DNA |
| 서열번호 12 | YFV의 구조 단백질의 아미노산 서열 | 서열번호 1b YFV의 구조 단백질 (capsid protein, prM protein, envelope protein): 발현된 단백질의 Amino acid 서열 |
| 서열번호 13 | VZV gE protein의 아미노산 서열 | 서열번호 2b VZV gE protein: 발현된 단백질의 Amino acid 서열 |
| 서열번호 14 | RuV의 E2-E1 protein의 아미노산 서열 | 서열번호 3b RuV의 E2-E1 protein: 발현된 단백질의 Amino acid 서열 |
| 서열번호 15 | Firefly luciferase를 코딩하는 유전물질 | 서열번호 4a Firefly luciferase (FLuc) (1,653 bp) |
| 서열번호 16 | Firefly luciferase의 아미노산 서열 | 서열번호 4b Firefly luciferase (FLuc): 발현된 단백질의 Amino acid 서열 |
| 서열번호 17 | F_T7_M4AG 프라이머 | |
| 서열번호 18 | R_esp3i+11bp 프라이머 | |
| 서열번호 19 | f_fluc 프라이머 | |
| 서열번호 20 | r_fluc_2 프라이머 | |
| 서열번호 21 | F_t7_fluc_shift 프라이머 |
Claims (19)
- 황열, 대상포진, 및 풍진 바이러스로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 바이러스;
상기 바이러스 유래 단백질; 또는
상기 바이러스 또는 단백질을 코딩하는 유전물질을 포함하는,
비만 개선, 억제, 또는 치료용 또는 타겟 조직의 크기 또는 부피의 축소용 약학 조성물. - 제1항에 있어서, 상기 약학 조성물은 타겟 조직의 크기 또는 부피를 축소하는 것을 특징으로 하는 비만 개선, 억제, 또는 치료용 또는 타겟 조직의 크기 또는 부피의 축소용 약학 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 유전물질은 황열 바이러스의 구조 단백질, 대상포진 바이러스의 글리코단백질 E 및 풍진 바이러스의 E2 및 E1 단백질로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드인 것을 특징으로 하는, 비만 개선, 억제, 또는 치료용 또는 타겟 조직의 크기 또는 부피의 축소용 약학 조성물.
- 제3항에 있어서, 상기 폴리뉴클레오티드는 DNA 또는 RNA인 것을 특징으로 하는, 비만 개선, 억제, 또는 치료용 또는 타겟 조직의 크기 또는 부피의 축소용 약학 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 유전물질은 서열번호 1 내지 6로 이루어진 군에서 선택된 폴리뉴클레오티드로 이루어진 핵산 서열을 포함하는 비만 개선, 억제, 또는 치료용 또는 타겟 조직의 크기 또는 부피의 축소용 약학 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 약학 조성물은 사이토카인을 코딩하는 유전물질을 더 포함하는 비만 개선, 억제, 또는 치료용 또는 타겟 조직의 크기 또는 부피의 축소용 약학 조성물.
- 제6항에 있어서, 상기 사이토카인은 IL-12, IL-2, IL-4, IL-5, IFN-γ, IL-10, IL-1, IL-6, INF-알파, INF-베타, TNF-알파, 및 TNF-베타로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상인 것을 특징으로 하는 비만 개선, 억제, 또는 치료용 또는 타겟 조직의 크기 또는 부피의 축소용 약학 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 유전물질은 세포 내 면역 반응을 유발하는 것을 특징으로 하는, 비만 개선, 억제, 또는 치료용 또는 타겟 조직의 크기 또는 부피의 축소용 약학 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 조성물은 국소적으로 작용하며,
상기 조성물은 적어도 1종 이상의 면역 환경 조성을 위한 항원이 먼저 개체에 적용된 후에 적용되는 것을 특징으로 하는, 비만 개선, 억제, 또는 치료용 또는 타겟 조직의 크기 또는 부피의 축소용 약학 조성물. - 제9항에 있어서, 상기 항원은 인체의 외부로부터 유입된 바이러스, 단백질, 또는 이의 에피토프를 포함하는 비만 개선, 억제, 또는 치료용 또는 타겟 조직의 크기 또는 부피의 축소용 약학 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 유전물질은
경구투여,
경피, 근육, 복막, 정맥, 피하, 또는 비강 경로를 통한 주사, 또는
전기천공법, 유전자총, 리포좀, 덴드리머들(dendrimers), 나노입자들(nanoparticles), 또는 이동(transfer) 벡터를 통하여 타겟 조직에 투여되는 것을 특징으로 하는, 비만 개선, 억제, 또는 치료용 또는 타겟 조직의 크기 또는 부피의 축소용 약학 조성물. - 제1항에 있어서, 상기 조성물에 포함된 유전물질의 투여량은 1회 접종 시 0.1~1000ug/site 되는 것을 특징으로 하는 비만 개선, 억제, 또는 치료용 또는 타겟 조직의 크기 또는 부피의 축소용 약학 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 조성물은 지방 조직의 크기 감소, 축소 또는 사멸을 목적으로 하는 개체에 투여되며,
상기 조성물은 황열, 대상포진, 및 풍진 바이러스로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 바이러스 예방용 백신 투여 후 상기 바이러스 중 어느 하나 이상에 대한 항체 생성이 확인된 후, 지방 조직의 크기 감소, 축소 또는 사멸을 목적으로 하는 부위에 적어도 1회 이상 투여되는 비만 개선, 억제, 또는 치료용 또는 타겟 조직의 크기 또는 부피의 축소용 약학 조성물. - 제1항에 있어서, 상기 조성물은 백신인 것을 특징으로 하는 비만 개선, 억제, 또는 치료용 또는 타겟 조직의 크기 또는 부피의 축소용 약학 조성물.
- (a) 제1항 내지 제14항 중 어느 하나의 항에 따른 조성물; 및
(b) 상기 조성물의 투여를 위한 투여지침서를 포함하는, 키트. - 제15항에 있어서,
상기 키트는 (c) 상기 (a) 조성물 투여 전에 면역 환경을 조성하는 항원을 포함하는 조성물이 더 포함된, 키트. - 제15항에 있어서, 상기 (a) 조성물은 사이토카인을 코딩하는 유전물질을 더 포함하는 키트.
- 황열, 대상포진, 및 풍진 바이러스로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 바이러스; 또는
상기 바이러스 유래 단백질을 코딩하는 유전물질을 포함하는, 타겟 조직의 크기 또는 부피 축소용 백신 조성물이 충전된 시린지. - 제18항에 있어서, 상기 시린지는 사이토카인을 코딩하는 유전물질을 더 포함하는 시린지.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR20220050367 | 2022-04-22 | ||
| KR1020220050367 | 2022-04-22 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| KR20230151488A true KR20230151488A (ko) | 2023-11-01 |
Family
ID=88420324
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| KR1020230053644A KR20230151488A (ko) | 2022-04-22 | 2023-04-24 | 타겟 조직의 크기 또는 부피 축소용 조성물 또는 이를 포함하는 키트 |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| KR (1) | KR20230151488A (ko) |
| WO (1) | WO2023204693A1 (ko) |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| BR122018075729B8 (pt) * | 2002-01-15 | 2021-07-27 | Acambis Inc | flavivírus na preparação de uma composição de vacina |
| KR100639397B1 (ko) * | 2004-03-18 | 2006-10-26 | (주)에스제이바이오메드 | 항비만용 면역원성 하이브리드 폴리펩타이드 및 이를포함하는 항비만 백신 조성물 |
| CA3150417C (en) * | 2009-07-31 | 2023-09-12 | Pnuvax Inc. | High yield yellow fever virus strain with increased propagation in cells |
| KR101656931B1 (ko) * | 2014-07-07 | 2016-09-12 | 계명대학교 산학협력단 | Idh2를 유효성분으로 함유하는 비만 또는 비만 매개 대사성 질환의 예방 또는 치료용 조성물 |
| KR102201147B1 (ko) * | 2015-08-11 | 2021-01-11 | 카리디 바이오테라퓨틱스, 인크. | 암 치료에 사용하기 위한 천연두 백신 |
| CN116635060A (zh) * | 2020-10-23 | 2023-08-22 | Sk生物科学株式会社 | 包含编码外来抗原的遗传物质的用于减小靶组织的尺寸或体积的疫苗组合物或药盒 |
-
2023
- 2023-04-24 KR KR1020230053644A patent/KR20230151488A/ko not_active Application Discontinuation
- 2023-04-24 WO PCT/KR2023/005580 patent/WO2023204693A1/ko unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO2023204693A1 (ko) | 2023-10-26 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN105473158B (zh) | 呼吸道合胞病毒(rsv)疫苗 | |
| ES2344078T3 (es) | Arnm estabilizado con un contenido de g/c aumentado para la terapia genetica. | |
| JPH06508039A (ja) | 抗腫瘍治療のためのサイトカインを発現する組換え型欠損アデノウイルス | |
| JP2007509607A5 (ko) | ||
| JP2020505444A (ja) | ジカウイルスに対する免疫応答を誘導するためのヌクレオシド改変ｒｎａ | |
| CN113164484A (zh) | 具有降低的神经毒性的hsv载体 | |
| JP2021509107A (ja) | Ｂ型肝炎ウイルス（ｈｂｖ）ワクチンおよびその使用 | |
| CA2198462A1 (en) | Genetic therapy of diseases caused by the immune system, said therapy using a cell-specific active substance regulated by the cell cycle | |
| US20130345295A1 (en) | Targeted oncolytic adenovirus for treatment of human tumors, constrcution method and application thereof | |
| WO2014063601A1 (zh) | 诱导肿瘤特异性免疫的疫苗及其应用 | |
| WO2021178661A1 (en) | Compositions containing a pathogenic antigen and an immune stimulator | |
| BR112020012273A2 (pt) | métodos e composições para induzir uma resposta imune contra o vírus da hepatite b (hbv) | |
| EP4233897A1 (en) | Vaccine composition or kit for reducing size or volume of target tissue, containing genetic material that encodes foreign antigen | |
| JP2021511048A (ja) | 組換えワクシニアウイルスおよびそれを含む医薬組成物 | |
| KR20230151488A (ko) | 타겟 조직의 크기 또는 부피 축소용 조성물 또는 이를 포함하는 키트 | |
| JP7413629B2 (ja) | Ｉｇｆ－１異型体を発現させるｄｎａコンストラクトを用いた神経病症の治療 | |
| WO2023279771A1 (zh) | 一种抗多发性硬化的重组蛋白及其制备方法和用途 | |
| ES2267560T3 (es) | Secuencias de adn para mejorar la eficacia de alimentacion y la tasa de crecimiento en cerdos. | |
| JP2007534664A5 (ko) | ||
| KR20230017640A (ko) | Her2 백신 조성물 | |
| KR100825984B1 (ko) | 조사된 인간 ｂ형 간염 표면 항원을 발현하는 암세포를이용하여 종양을 치료하는 방법 및 상기 암세포를 포함하는종양치료용 약학적 조성물 | |
| WO2024139837A1 (en) | Recombinant nucleic acids, kits comprising the same, and uses thereof in treating coronavirus infection | |
| CN106999572A (zh) | 用于诱导对单纯疱疹病毒2型(hsv‑2)的免疫应答的治疗组合物和方法 | |
| CN101642462B (zh) | 一种肿瘤抑制剂nrn1sr42 | |
| CN117651561A (zh) | 用于治疗骨与软组织肿瘤的药物组合物 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| E902 | Notification of reason for refusal |