KR20220054225A - 외래 항원을 코딩하는 유전물질을 포함하는, 타겟 조직의 크기 또는 부피 축소용 백신 조성물 또는 키트 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 외래 항원을 코딩하는 유전물질을 포함하는, 타겟 조직 크기 또는 부피 축소용 백신 조성물로, 바람직하게 상기 조성물은 비만 치료 또는 예방을 위한 백신 조성물로 제공될 수 있다. 상기 백신 조성물은 피하 지방 세포 제거용 조성물로 제공될 수 있다.
Description
본 발명은 외래 항원을 코딩하는 유전물질을 포함하여 면역반응을 유도해, 타겟 조직의 크기 또는 부피를 축소하기 위한 약학 조성물로, 상세하게는 비만을 예방 및/또는 치료하는 치료용 백신 조성물에 관한 것이다. 보다 상세하게는 항원 유전자에 의한 면역 요법으로 타겟 부위를 구성하는 세포의 사멸을 유도하는 조성물에 관한 것이다.
비만은 단순히 체중이 많이 나가는 것을 의미하기보다 '체내에 과다하게 많은 양의 체지방이 쌓여 있는 상태'를 말하며, 당뇨를 포함한 대사질환, 심혈관 질환, 암 등 다양한 만성질환의 발병률을 높이는 위험인자로 인식되고 있다. 지방의 과도한 축적으로 정의되는 비만은 지방조직의 대사, 내분비 및 면역기능 상실을 동반하며, 이러한 지방조직의 병적 리모델링이 주요한 대사질환의 병태생리요인으로 주목을 받고 있다.
비만 치료를 위한 약물치료로는 지방분해효소 억제제인 '올리스타스'를 사용하는데, 이는 체내 있는 지방의 일부를 몸 밖으로 배출되도록 하는 역할을 하는데, 부작용으로는 설사 및 지방변 등이 나타난다. 또한, 비만 치료를 위한 약물의 경우 많은 부작용이 있을 뿐만 아니라 여성의 신체 중 원하지 않는 부위의 지방도 분해시킬 수 있다. 현재 안전하게 사용할 수 있는 식욕억제제는 없는 상황이며, 합병증이 있는 고도 비만 환자의 경우에는 위장관에 대한 비만 수술이 도움이 될 수는 있다.
상기와 같은 문제점을 해결하기 위해 본 발명은 타겟 조직에 투여하여 타겟 조직의 크기 또는 부피를 축소할 수 있는 새로운 방법 또는 약학 조성물을 제공하고자 한다. 더욱 구체적으로 상기 방법 또는 약학 조성물은 원하는 부위에 국소적으로 투여되어 비만 세포를 사멸시킬 수 있다. 다른 구현예는 새로운 비만 치료제 또는 치료용 백신을 제공하고자 한다. 상기 백신 조성물은 적어도 1종 이상의 예비 백신이 개체에 적용된 후에 적용될 수 있다.
본 발명이 해결하고자 하는 과제는 국소비만을 해소하고 매끄러운 바디라인을 완성할 수 있는 새로운 형태의 비만 치료제 또는 치료용 백신을 제공하고자 한다.
본 발명이 해결하고자 하는 과제는 면역시스템이 항원단백질을 발현하는 지방세포를 공격하여 지방 세포 사멸을 도와, 지방 세포가 사멸하나, 원하지 않는 부위의 지방 세포에는 영향을 미치지 않는 새로운 지방 세포 감소용 조성물을 제공하고자 한다.
본 발명의 일 구현예는 인체 외부에서 유래된 항원을 코딩하는 유전물질을 타겟 조직에 투여하고, 투여된 유전물질에 의해 상기 타겟 조직을 구성하는 세포에서 항원 유전자가 발현하면, 이에 대해 pre-existing immunity가 작용하여 해당 세포를 사멸하는, 새로운 개념의 조직 크기 또는 부피 축소용 약학 조성물 (바람직하게 백신 조성물)을 제공하며, 더욱 구체적으로 비만 예방 또는 치료용 백신 또는 피하 지방 세포 제거용 조성물을 제공하고자 한다.
본 발명의 일 구현예는 인체 외부에서 유래된 항원을 코딩하는 유전물질을 타겟 조직에 투여하고, 투여된 유전물질에 의해 상기 타겟 조직을 구성하는 세포에서 항원 유전자가 발현하면, 이에 대해 pre-existing immunity가 작용하여 해당 세포를 사멸하는, 새로운 개념의 조직 크기 또는 부피 축소 방법을 제공한다.
본 발명의 발명자들은 면역 반응을 이용하여 타겟 부위가 구성하는 세포를 사멸시켜 상기 세포가 구성하는 조직을 축소할 수 있음을 확인하고 본 발명을 완성하게 되었다. 특히 본 발명을 통해 지방 세포의 효과적인 제거 및/또는 감소를 이룰 수 있고, 이를 통해 체형 교정 및 비만 치료 효과를 나타낼 수 있음을 실험을 통해 확인하게 되었다.
본 발명의 일 실시예는 타겟 조직에 투여하여 상기 조직을 축소하기 위한 약학 조성물로, 상기 조성물은 외래 항원을 코딩하는 유전물질을 포함한다. 본 발명의 일 실시예는 외래 항원을 코딩하는 유전물질의 타겟 세포 사멸, 타겟 조직 축소 용도를 제공하며, 더욱 구체적으로 상기 유전물질의 국소 지방 조직 축소 용도를 제공한다. 상기 조직은 특별히 제한되지 않으며, 예를 들어, 지방세포, 근육세포, 골세포, 연골세포, 피부세포, 분비세포 및 혈세포로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 세포로 이루어진 조직을 포함하며, 바람직하게 상기 조직은 지방조직 또는 근육조직일 수 있으며, 더 바람직하게 피하 지방조직일 수 있다. 상기 조성물은 지방세포, 특히 피하지방에 분포된 지방세포의 감소 또는 사멸을 유도할 수 있다.
본 발명의 발명자들은 기존 지방제거 수술, 약물 등에 비해 부작용이 적고, 국소의 타겟 부위 (예를 들어, 특정 부위의 지방 조직)만을 타깃으로 하여 몸매 보정 효과를 기대할 수 있는 조성물, 또는 키트를 제공한다. 본 발명은 타겟 부위에 국소적으로 작용하며 면역요법을 이용해 타겟 조직의 크기 또는 부피 축소용 약학 조성물을 제공한다. 본 발명은 바람직하게 지방세포, 특히 피하 지방세포의 사멸을 유도하는 약학 조성물, 백신 조성물, 또는 치료용 백신 조성물을 제공한다.
본 명세서에서 사용된 “타겟 조직 또는 타겟 부위”는 크기 또는 부피를 축소시키기 위한 같은 구조와 기능을 갖는 세포 집단을 의미한다. 상기 “몸매 보정 또는 체형 보정”은 원하지 않는 부위에 축적된 조직 (예를 들어, 지방 조직)을 구성하는 세포를 사멸 또는 감소시켜 조직의 크기나 부피가 축소되어 외형적으로 슬림한 효과를 갖는 것을 의미한다. 본 명세서에서 사용된 “국소적으로 작용한다”는 것은 주사 투여 부위를 기준으로 반경 10cm, 9cm, 8cm, 7cm, 6cm, 5cm, 4cm, 3cm, 2cm, 1cm 이내에서 세포의 사멸 또는 조직의 크기 또는 부피 축소 효과를 가져오는 것을 의미하며, 바람직하게 3cm 이내의 범위에서 효과를 가져올 수 있다.
개체가 항원에 노출되었을 때, 면역세포가 기능적으로 식작용(Phagocytosis)과 항원표출(Antigen presenting)의 기능을 하게 된다. 일 실시예에서 면역 반응이 유도될 수 있도록 단백질 항원, 또는 이들의 에피토프 등과 같은 외래 물질을 의도적 또는 비의도적으로 체내에 침투하여 면역 환경이 조성된 후 본 발명의 약학 조성물을 투여할 수 있다. 또 다른 실시예를 통해, 상기 약학 조성물을 체내에 반복적으로 투여할 수도 있다. 다른 실시예에서 본 발명의 약학 조성물에 포함된 유전물질을 개체에 투여하여 pre-existing 면역을 유도하고, 이후 반복된 조성물의 투여로 인체 내의 단핵구(Monocyte), 호중구(Neutrophil), 림프구의 일종인 자연 살해 세포 (Natural killer cell), 세포독성 T 세포(Cytotoxic T cell) 면역세포, 생리 활성물질, 항체, 보체 등 면역작용으로 분비된 물질에 의해 상기 항원이 제시된 지방 세포는 사멸하여 지방 조직의 크기 또는 부피가 감소될 수 있다. 상기 조성물은 몸매 보정 또는 체형 보정 용도로 이용될 수 있으며, 국소 부위의 체형 보정 용도로 이용될 수 있다. 또한 상기 조성물은 근육 조직에 투여되어 보톡스와 같은 피부주름 개선 효과, 근육 수축을 통한 몸매 보정 용도 등으로 이용될 수도 있다. 뿐만 아니라, 양성 또는 악성 종양 제거, 또는 피부의 사마귀 제거에도 이용될 수 있다.
상기 약학 조성물은 적어도 하나 이상의 항원을 코딩하는 유전물질을 포함하며, 상기 유전물질은 DNA 및/또는 RNA를 포함할 뿐만 아니라, 상기 유전물질과 연관된 안티센스 뉴클레오티드(antisense nucleotide), mRNA, ssRNA(Single-Stranded RNA), cDNA 등도 포함된다. 상기 항원은 면역 반응을 일으켜 항체를 생산하게끔 만드는 물질로, 종양 항원, 바이러스, 박테리아, 단백질, 또는 항원의 에피토프를 포함할 수 있다. 상기 항원은 면역을 유도할 수 있다면 제한없이 포함될 수 있으며, 상기 항원은 이에 한정되지는 않지만, 이미 업계에서 잘 알려진 비인간 유래 항원, 바이러스 유래 항원, 세균 유래 항원, 진균 유래 항원, 원생동물 유래 항원, 조류 유래 항원, 기생충 유래 항원, 마이코플라즈마 유래 항원, 및 식물 유래 항원으로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나 이상일 수 있으며, 항원은 펩타이드 또는 온전한 단백질 또는 그의 일부로서 발현될 수 있다. 구체적으로 바이러스의 비제한적 예는 레트로비리대(Retroviridae)(예컨대 인간 면역결핍 바이러스, 예컨대 HIV-1; 피코르나비리대(Picornaviridae)(예컨대 폴리오 바이러스, A형 간염 바이러스; 엔테로바이러스, 인간 콕사키 바이러스, 리노바이러스, 에코바이러스); 칼시비리대(Calciviridae)(예컨대 위장염을 초래하는 균주); 토가비리대(Togaviridae)(예컨대 말 뇌염 바이러스, 루벨라 바이러스); 플라비리대(Flaviridae)(예컨대 뎅기 바이러스, 뇌염 바이러스, 황열 바이러스); 코로노비리대(Coronoviridae)(예컨대 코로나바이러스); 라브도비리대(Rhabdoviridae)(예컨대 수포성 구내염 바이러스, 광견병 바이러스); 필로비리대(Filoviridae)(예컨대 에볼라 바이러스); 파라믹소비리대(Paramyxoviridae)(예컨대 파라인플루엔자 바이러스, 파라인플루엔자 바이러스, 볼거리 바이러스, 홍역 바이러스, 호흡기 세포융합 바이러스); 오르토믹소비리대(Orthomyxoviridae)(예컨대 인플루엔자 바이러스); 분가비리대(Bungaviridae)(예컨대 한탄 바이러스, 분가 바이러스, 플레보바이러스 및 나이라 바이러스); 아레나 비리대(Arena viridae)(출혈열 바이러스); 레오비리대(Reoviridae)(예컨대 레오바이러스, 오르비바이러스 및 로타바이러스); 비르나비리대(Birnaviridae); 헤파드나비리대(Hepadnaviridae)(B형 간염 바이러스); 파르보비리대(Parvovirida)(파르보바이러스); 파포바비리대(Papovaviridae)(파필로마 바이러스, 폴리오마 바이러스); 아데노비리대(Adenoviridae)(대부분의 아데노바이러스); 헤르페스비리대(Herpesviridae)(헤르페스 심플렉스 바이러스(HSV) 1 및 2, 바리셀라 조스터 바이러스, 사이토메갈로바이러스(CMV), 헤르페스 바이러스; 폭스비리대(Poxviridae)(바리올라 바이러스, 백시니아 바이러스, 폭스 바이러스); 및 이리도비리대(Iridoviridae)(예컨대 아프리카 돼지 열병 바이러스)를 포함한다. 세균 유래 항원의 비제한적 예는 파스네우렐라(Pasteurella), 스타필로코커스(Staphylococci), 스트렙토코커스(Streptococcus), 에스세리키아 콜라이(Escherichia coli), 슈도모나스(Pseudomonas) 종, 및 살모넬라(Salmonella)종을 포함한다. 감염성 박테리아의 비제한적인 예는 헬리코박터 파일로리스(Helicobacter pyloris), 보렐리아 버그도르페리(Borelia burgdorferi), 레지오넬라 뉴모필리아(Legionella pneumophilia), 마이코박테리아 속(Mycobacteria spp)(예컨대 M. 투베르쿨로시스(tuberculosis), M. 아비움(avium), M. 인트라셀룰라레(intracellulare), M. 칸사이이(kansaii), M. 고르도니(gordonae)), 스타필로코커스 아루에우스(Staphylococcus aureus), 네이세리아 고노레아(Neisseria gonorrhoeae), 네이세리아 메닌지티데스(meningitides), 리스테리아 모노사이토게네스(Listeria monocytogenes), 스트렙토코커스 피오게네스(스트렙토코커스 pyogenes)(그룹 A 스트렙토코커스), 스트렙토코커스 아갈락티이(agalactiae)(그룹 B 스트렙토코커스), 스트렙토코커스(비리단스 그룹), 스트렙토코커스 패칼리스(faecalis), 스트렙토코커스 보비스(bovis), 스트렙토코커스(아나에로빅 종), 스트렙토코커스 뉴모니애(pneumonia), 병원성 캄필로박터 속(Campylobacter sp.), 엔테로코커스 속(Enterococcus sp.), 해모필러스 인플루엔재(Haemophilus influenzae), 바실러스 안트라시스(Bacillus antracis), 코리네박테리움 디프테리애(corynebacterium diphtheria), 코리네박테리움 속, 에리시펠로트릭스 루시오파티애(Erysipelothrix rhusiopathiae), 클로스트리디움 페르프린저스(Clostridium perfringers), 클로스트리디움 테타니(tetani), 엔테로박터 애로게네스(Enterobacter aerogenes), 클레브시엘라 뉴모니애(Klebsiella pneumoniae), 파스투렐라 멀토시다(Pasturella multocida), 박테리오이데스 속(Bacteroides sp.), 푸소박테리움 누클레아툼(Fusobacterium nucleatum), 스트렙토바실러스 모닐리포르미스(Streptobacillus moniliformis), 트레포네마 팔리디움(Treponema pallidium), 트레포네마 페르테누에(pertenue), 렙토스피라(Leptospira), 리케치아(Rickettsia), 및 악티노마이세스 이스라엘리(Actinomyces israelli)로부터 유래된 항원을 비제한적으로 포함할 수 있다. 본 발명에서 사용되는 세균성 병원체의 비제한적인 예로는: 스트렙토코쿠스뉴모니아에, 모락셀라 카타랄리스, 미코플라즈마뉴모니아에, 클렙시엘라 뉴모니아에, 헤모필루스 인플루엔자, 스타필로코쿠스아우레우스, 클라미디아 뉴모니아에, 레지오넬라 뉴모필라, 또는 보르다텔라퍼투시스 또는 폐에서 병원성인 모든 세균을 들 수 있다. 진균 유래 항원의 비제한적인 예로는: 아스퍼질러스푸미가투스, 블라스토마이세스sp., 콕시디오데스임미티스, 콕시디오데스 포사다시이, 크립토코쿠스 네오포르만스, 크립토코쿠스 가티이, 푸사리움sp., 히스토플라즈마캅슐라툼, 파에실로마이세스sp., 파라콕시디오데스브라질리엔시스, 페니실리움 마르네페이, 뉴모시스티스지로베치, 슈달레체리아보이디이, 세도스포리움아피오스퍼뭄, 리조푸스sp., 뮤코sp., 앱시디아sp., 쿠닝가멜라sp., 세도스포리움프롤리피칸스, 스타키보트리스챠타룸, 트리코더마롱기브라키아티움, 트리코스포론sp.등으로부터 유래된 항원일 수 있다. 기생충 유래의 항원성 성분들을 포함할 수 있으며, 이의 예로는: 세스토데스 (총충), 타에니아사기나타, 타에니아솔리움, 디필로보트리움 종, 히메놀레피스 나나, 히메놀레피스디미누타, 디필리디움 카니눔, 네마토데스 (회충), A아스카리스룸브리코이데스, 스트롱길로이데스스테르코랄리스, 네카토르아메리카누스, 안실로스토마듀오데날레, 안실로스토마카니늄, 티추리스트리추라, 카필라리아필리피넨시스, 트리코스트롱길루스 종, 트리치넬라 ㅈ조종, 네카토르아메리카누스, 아니사키스 및 관련 종, 안지오스트롱길루스코스타리센시스, 엔테로비우스베르미쿨라리스, 트레마토데스 (흡충), 파시올롭시스부스키, 헤테로피에스 종, 에키노스토마 종, 클로노르치스시넨시스, 오피스토르치스 종, 파시올라 종, 메타고니무스요코가위, 쉬스토조마만소니, 쉬스토조마 자포니쿰, 쉬스토조마메콩기, 쉬스토조마인터칼라툼, 에치노스토마 종 및 파라고니무스 종으로부터 유래된 항원을 포함할 수 있다. 바람직하게 조직 크기 감소 측면을 고려하여 황열 바이러스, 대상포진 바이러스, 풍진 바이러스, 인플루엔자 바이러스, 유행성이하선염 바이러스, 및 홍역 바이러스로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 바이러스를 포함할 수 있으며, 바람직하게 홍역 바이러스가 포함될 수 있다. 바람직하게 상기 항원을 코딩하는 유전물질은 서열번호 1로 표현되는 핵산 서열을 가지는 폴리뉴클레오티드를 포함할 수 있다. 또한 상기 유전물질은 서열번호 1과 적어도 85% 이상의 서열 상동성을 갖고 타겟 조직 크기 또는 부피를 축소할 수 있는 (즉, 본 발명이 목적을 달성할 수 있는) 핵산 서열을 갖는 폴리뉴클레오티드를 포함할 수 있다. 상기 서열 상동성은 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 99% 이상의 서열 상동성을 포함할 수 있다.
상기 조성물은 IL-12, IL-2, IL-4, IL-5, IFN-γ, IL-10, IL-1, IL-6, INF-알파, INF-베타, TNF-알파, 및 TNF-베타로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 사이토카인을 코딩하는 유전물질을 더 포함할 수 있으며, 상기 유전물질에 의해 발현되는 항원에 의한 면역 자극 효과를 더욱 극대화하기 위해 IL-12을 포함하는 것이 바람직하다.
상기 조성물은 상기 유전물질을 동물세포에서 전달하는 벡터에 포함시켜 제공될 수 있다. 상기 핵산은 발현 벡터, 예컨대 플라스미드 등에 포함되어 제공될 수 있으며, 바람직하게는, 핵산은 포유류 세포, 예컨대 인간 세포에서의 발현에 적합한 전사 요소들을 포함할 수 있다. 본 명세서에 사용되는 "벡터"는 투여하고자 하는 유전물질을 세포 내로 수송할 수 있다. 상기 벡터는 유전물질 전달을 위해 사용될 수 있다. 바람직하게는, 이러한 벡터는 발현 제어 서열에 작동가능하게 연결된 코딩 서열을 포함할 수도 있다.
바람직한 한 실시태양에서, 상기 조성물은 황열 바이러스 (Yellow fever virus(17D)) 유전자의 구조 단백질에 해당하는 유전자를 동물세포에서 단백질 발현 가능하도록 하는 플라스미드 (예를 들어, gWizTM vector)에 포함시킬 수 있다. 상기 황열 바이러스는 제한없이 사용될 수 있으며, 예를 들어 상기 황열바이러스는 17D strain을 포함할 수 있으나, 이에 한정되지 않는다. 상기 상기 플라스미드에는 바이러스를 암호화하는 핵산분자 또는 이의 또는 이의 단편, 변이체 또는 유사체를 포함할 수 있다. 예를 들어 서열번호 1 또는 이의 단편, 변이체, 또는 유사체를 포함할 수 있다.
바람직한 한 실시태양에서, 상기 조성물은 풍진 바이러스 (Rubella virus) 유전자의 구조 단백질에 해당하는 유전자를 동물세포에서 단백질 발현 가능하도록 하는 플라스미드 (예를 들어, gWizTM vector)에 포함시킬 수 있다. 상기 풍진 바이러스는 제한없이 사용될 수 있으며, 예를 들어 상기 풍진 바이러스는 RA27/3 strain을 포함할 수 있으나, 이에 한정되지 않는다. 상기 바이러스를 암호화하는 유전자는 스파이크 글라이코프로테인 (spike glycoproteins)을 암호화하는 유전자를 포함할 수 있다. 상기 스파이크 글라이코프로테인의 예로 E2-E1 이형접합체를 포함할 수 있다. 예를 들어, 서열번호 5의 단백질을 암호화하는 핵산분자 또는 이의 단편, 변이체 또는 유사체를 포함할 수 있다.
바람직한 한 실시태양에서, 상기 조성물은 대상포진 바이러스 (varicella zoster virus) 유전자의 구조 단백질에 해당하는 유전자를 동물세포에서 단백질 발현 가능하도록 하는 플라스미드 (예를 들어, gWizTM vector)에 포함시킬 수 있다. 상기 대상포진 바이러스는 제한없이 사용될 수 있으며, 예를 들어 상기 대상포진 바이러스는 Oka strain 을 포함할 수 있으나, 이에 한정되지 않는다. 상기 바이러스를 암호화하는 핵산분자는 표면 단백질인 gE 단백질을 암호화하는 핵산분자를 포함할 수 있다. 예를 들어, 서열번호 6의 단백질을 암호화하는 핵산분자 또는 이의 단편, 변이체 또는 유사체를 포함할 수 있다.
여기서 '이의 단편, 변이체 또는 유사체'라 함은 본 발명의 단백질, 펩타이드, 핵산, 핵산분자, 또는 유전자들이 달성하고자 하는 목적을 달성하되 서열 상동성이 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 99% 이상일 수 있는 단백질, 펩타이드, 핵산, 핵산분자, 또는 유전자의 일부를 의미하는 것으로 이해될 수 있다. 예를 들어 상기 단편, 변이체 또는 유사체를 포함한다는 의미는 서열번호 1의 핵산 분자, 서열번호 5을 암호화하는 핵산 분자, 또는 서열번호 6을 암호화하는 핵산 분자; 또는 상기 핵산 분자가 암호화하는 단백질이 달성할 수 있는 목적을 달성할 수 있다면, 본 발명의 범위에서 제외되지 않는다는 의미로 이해할 수 있다.
본 원의 외래 유전물질은 바람직하게 바이러스로부터 유래한 유전물질을 포함할 수 있으며, 상기 바이러스는 바람직하게 황열 바이러스, 풍진 바이러스, 및/또는 대상포진 바이러스를 포함할 수 있다. 상기 바이러스는 타겟 조직, 바람직하게 지방세포의 사멸, 조직의 크기 축소 효과가 우수할 수 있다. 또한 효과가 빠르게 나타날 수 있고, 부작용이 적다. 뿐만 아니라 주사제로 장기간 보관하더라도 변질될 우려가 적다.
다른 실시태양에서 상기 조성물은 세포성 면역반응을 증진시킬 수 있는 면역 증진제를 포함함으로써 지방세포 사멸, 또는 타겟 조직 축소 효과를 더욱 증진시킬 수 있다. 상기 조성물은 면역 증강 효과를 향상시킬 수 있는 면역 증강제를 코딩하는 유전물질, 예를 들어 인터루킨 12(IL-12)를 코딩하는 보조 유전물질을 더 포함할 수 있다. 상기 보조 유전물질은 예를 들어, pSF-CMV-CMV-Sbfl 벡터에 코딩 영역을 삽입하여 제공할 수 있다.
본 발명의 조성물은 상기 사이토카인, 이를 코딩하는 유전자 또는 다른 면역보조제 뿐만 아니라, 당업계에서 널리 사용되는 바와 같은 약제학적 담체 또는 부형제와 함께 사용될 수 있다. 상기 조성물은 인체 또는 수의용으로 제형화되어. 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여 경로는 경구, 경피, 근육, 복막, 정맥, 피하, 비강 경로를 이용할 수 있지만 이에 국한되지는 않는다. 보다 바람직하게는 경피, 근육, 복막, 피하 경로를 이용할 수 있다. 또한 상기 조성물은 활성 물질이 표적 세포로 이동할 수 있는 임의의 장치 또는 경로에 의해 투여될 수 있으며, 타겟 조직 또는 조직을 구성하는 세포에 본 발명의 조성물, 또는 상기 조성물에 포함되는 유전물질이 전달될 수 있다면 투여 방법은 특별히 제한되지 않는다. 예를 들어, 주사, 미세바늘 패치 등으로 제형화되어 제공될 수 있다. 예를 들어 주사로 사용될 경우 주사제는 상기 유전물질의 효과를 저해하지 않는 범위 내에서, 생리식염액, 링겔액 등의 수성 용제, 식물유, 고급 지방산 에스텔(예, 올레인산에칠 등), 알코올류(예, 에탄올, 벤질알코올, 프로필렌글리콜, 글리세린 등) 등의 비수성 용제 등을 이용하여 제조할 수 있고, 변질 방지를 위한 안정화제(예, 아스코르빈산, 아황산수소나트퓸, 피로아황산나트륨, BHA, 토코페롤, EDTA 등), 유화제, pH 조절을 위한 완충제, 미생물 발육을 저지하기 위한 보존제(예, 질산페닐수은, 치메로살, 염화벤잘코늄, 페놀, 크레솔, 벤질알코올 등) 등의 약제학적 담체를 포함할 수 있다. 미세바늘 패치로 사용될 경우 상기 미세바늘은 불용해성 및 용해성 미세바늘이 모두 포함될 수 있다.
또한 상기 조성물에 포함되는 유전물질 및/또는 보조 유전물질은 업계의 통상적인 유전자 전달 방법에 따라 체내로 전달될 수 있다. 비 제한적인 예로 유전자 전달 방법인 전기천공법이나 유전자총과 같은 물리적 전달방법, 지질-유전자 결합체(Lipid-DNA complex: Lipoplex), 폴리머-유전자 결합체(Polymer-DNA complex: Polyplex), 리포좀, 덴드리머들(dendrimers), 나노입자들(nanoparticles), 또는 다른 적절한 이동(transfer) 벡터와 같은 화학적 전달방법 등이 모두 사용될 수 있다.
본 발명의 조성물은 약제학적 유효량으로 투여한다. 용어 "약제학적 유효량"이란 조성물이 치료, 개선, 또는 예방 효과를 나타낼 수 있거나, 백신효과를 나타낼 수 있을 정도의 충분한 양을 의미하며, 또한 부작용이나 심각한 또는 과도한 면역반응을 일으키지 않을 정도의 양을 의미한다. 본 발명의 조성물은 면역 반응을 유도하고, 세포 사멸을 유도하는 것을 목적으로 하는 특성상 유전물질을 투여할 수 있으며, 2-3일 간격으로 4-8회, 바람직하게 5회 투여하는 것이 바람직하다. 상기와 같이 투여하였을 때, 타겟 부위의 세포 사멸로 조직의 감소 또는 축소 효과를 얻을 수 있다. 상기 조성물은 다량 또는 다회 투여할수록 세포 사멸 효과에 차이가 있을 수 있으며, 부위별로 적절한 투여량을 조절하여 사용할 수 있다.
본 발명의 다른 구현예는 단백질 항원을 코딩하는 유전물질, 상기 유전물질을 포함하는 벡터, 또는 이들을 포함하는 조성물을 개체의 타겟 조직에 투여하는 단계를 포함하는, 조직의 크기 또는 부피를 축소 또는 감소하는 방법을 제공한다. 상기 방법은 바람직하게 피하 지방 조직을 구성하는 세포를 사멸시킬 수 있다. 상기 i) 방법 또는 ii) 상기 단백질 항원을 코딩하는 유전물질, 상기 유전물질을 포함하는 벡터, 또는 이들을 포함하는 조성물, 또는 이를 포함하는 키트는 개체의 비만증을 개선 또는 치료하기 위한 용도, 주름 개선 용도, 근육 축소 용도, 양성 또는 악성 종양 제거 또는 축소 용도, 사마귀 제거 용도 등으로 사용될 수 있고, 미용 목적으로 눈 밑의 지방 주머니를 제거하는 용도로 사용될 수도 있고, 이를 통해 다크서클을 완화하기 위한 용도로 사용될 수 있다.
상기 방법은 상기 유전물질, 상기 유전물질을 포함하는 벡터, 또는 이들을 포함하는 조성물을 타겟 조직에 투여하기 전에 체내의 면역 환경을 조성하는 단계를 더 포함할 수 있다. 상기 체내 면역 환경을 조성하는 단계는 면역 반응이 유도될 수 있는 외래 물질을 투여하는 단계를 포함할 수 있다. 상기 외래 물질은 단백질을 항원으로 이용하는 물질이면 제한없이 포함될 수 있다.
본 발명의 일 구현예는 다양한 적응증의 치료, 개선, 또는 예방 용도로 제공될 수 있을 뿐만 아니라, 외형의 개선을 위한 미용 목적으로도 제공될 수 있다.
본 발명의 다른 실시예는 (a) 외래 항원을 코딩하는 유전물질을 포함하는, 타겟 조직 크기 또는 부피 축소용 백신 조성물; 및 (b) 상기 백신 투여를 위한 투여지침서를 포함하는, 키트를 제공한다. 상기 키트는 (c) 상기 (a) 조성물 투여 전에 면역 환경 조성을 위한 단백질 항원 또는 이의 에피토프를 포함하는 조성물이 더 포함될 수 있다. 여기서 상기 (c)는 적어도 1종 이상의 사전 백신(pre-vaccine) 또는 면역반응 유도를 위해 조성물로 이해될 수 있다.
본원에서 언급된 '사전 백신'은 본원의 타겟 조직 크기 또는 부피 축소용 백신 조성물이 투여되기 전에 투여되는 백신으로 이해될 수 있으며, pre-existing immunity를 얻기 위해 본원의 타겟 조직 크기 또는 부피 축소용 백신 조성물이 투여되기 전에 투여되는 백신 조성물로 이해될 수 있다. 상기 사전 백신은 본원의 타겟 조직 크기 또는 부피 축소용 백신 조성물에 포함되는 항원물질과 동일한 항원물질을 포함할 수 있다. 예를 들어, (a) 외래 항원을 코딩하는 유전물질을 포함하는, 타겟 조직 크기 또는 부피 축소용 백신 조성물은 황열 바이러스, 풍진 바이러스, 및/또는 대상포진 바이러스를 포함할 수 있으며, (c)도 황열 바이러스, 풍진 바이러스, 및/또는 대상포진 바이러스를 포함할 수 있다.
상기 (a) 백신 조성물은 사이토카인을 코딩하는 유전물질을 더 포함할 수 있으며, 상기 (a) 조성물의 면역 효과 상승을 위해 사용될 수 있는 물질은 제한없이 포함될 수 있다. 상기 사이토카인은 IL-12, IL-2, IL-4, IL-5, IFN-γ, IL-10, IL-1, IL-6, INF-알파, INF-베타, TNF-알파, 및 TNF-베타로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상을 포함할 수 있다.
본 발명의 키트에서, 약제학적 조성물, 항미생물제, DNase 억제제 RNase 억제제, 가용화제 등과 관련하여 본 명세서에 정의된 바와 같은 적어도 하나의 추가 제제를 포함할 수 있다. 키트는 예를 들어 1이상의 키트 부품 (예를 들어, 용기)으로 이루어질 수 있다. 예를 들어, 각 용기는 시린지, 프리필드 시린지, 바이알, 병, 단지, 밀봉된 슬리브, 엔벨로프 또는 파우치, 튜브 또는 블리스터 패키지 또는 용기가 구성 요소의 조기 혼합을 방지하도록 구성된 임의의 다른 적합한 형태일 수 있다. 상이한 구성 요소들 각각은 개별적으로 제공될 수 있거나, 또는 상이한 구성 요소들 중 일부가 함께 (즉, 동일한 용기 내에) 제공될 수 있다. 상기 키트는 또한 임의의 성분의 투여, 투여방법 및 투여량에 대한 정보를 갖는 투여지침서를 포함할 수 있다.
본 발명의 다른 실시예는 외래 항원을 코딩하는 유전물질을 포함하는, 타겟 조직 크기 또는 부피 축소용 백신 조성물이 충전된 시린지를 제공한다. 상기 시린지는 사이토카인을 코딩하는 유전물질을 더 포함할 수 있다. 상기 사이토카인은 IL-12, IL-2, IL-4, IL-5, IFN-γ, IL-10, IL-1, IL-6, INF-알파, INF-베타, TNF-알파, 및 TNF-베타로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상을 포함할 수 있다.
본 발명은 타겟으로 하는 특정 부위의 세포를 사멸시킬 수 있고, 조직의 크기 또는 부피를 축소 또는 감소할 수 있는 새로운 비만 개선 또는 치료용 조성물을 제공한다. 상기 조성물을 투여하여 체형 보정 효과 또는 체형 개선 효과를 얻을 수 있다.
본 발명은 국소비만을 해소하고 매끄러운 바디라인을 완성할 수 있는 새로운 형태의 비만 치료제를 제공할 수 있다.
본 발명의 비만 치료제는 원하는 부위의 조직만 선택적으로 감소시킬 수 있고, 원하지 않는 부위의 조직 또는 이를 구성하는 세포에는 영향을 미치지 않는, 선택적인 국소부위 축소에 효과적이다.
또한 본 발명의 조성물은 외형 개선을 위한 미용 목적으로도 사용될 수 있다.
도 1은 Yellow fever 백신주인 17D 바이러스를 투여하여 pre-existing immunity을 유도한 결과를 보여준다. 면역 환경 조성을 확인하기 위해 상기 백신주 투여 2주 후에 blood 혈청을 분리하여 Yellow fever virus에 대한 IgG 항체가를 측정한 결과이다. NC는 아무것도 투여되지 않은 정상 마우스, ND(Normal diet)는 일반 식이가 적용된 마우스, HFD(High fat diet)는 고열량 식이가 적용된 비만 유도 마우스를 각각 나타낸다.
도 2는 치료용 백신 투여 직전의 몸무게를 기준으로 투여 전과 후에 몸무게 변화를 측정한 결과이다.
도 3은 치료용 백신 투여 후 AT(Adipose tissue)의 무게 변화 정도를 보여주는 결과이다.
도 4는 AT(Adipose tissue)의 무게 변화율 통계 분석 결과를 보여준다. 통계 분석 결과, MOCK/치료제 (치료용 백신)는 P-VALUE 0.03007, MOCK/치료제 + IL-12 는 P-VALUE 0.0005로 통계학적으로 MOCK에 비하여 치료제 단독 처리 및 치료제 + IL-12에서 각각 유의미한 차이를 볼 수 있었다. 치료제 단독처리와 치료제와 IL-12 동시 처리의 2 그룹 모두에서 유의미한 차이를 볼 수 있었음을 알 수 있다.
도 5는 Yellow fever virus(17D)의 genome(GenBank: X03700.1) 에서 구조 단백질(capsid protein, prM protein, envelope protein, 119 ~ 2452 bp (2334bp))을 코딩하는 유전물질 (서열번호 1)를 gWizTM vector에 삽입한 벡터맵을 보여준다. tga (stop codon)을 마지막에 추가하였다.
도 6은 IL-12의 p35(GenBank: M86672.1)와 p40(GenBank: M86671.1)의 coding region(p35; 127~774bp, p40; 35~1042bp)에 해당하는 핵산 서열인 서열번호 2 및 3을 각각 kozak sequence(GCCACC)과 함께 pSF-CMV-CMV-Sbfl vector에 삽입한 벡터맵을 보여준다. IL-12 p35 는 MCS site I에서 제한효소; EcoRI (G/AATTC) / XhoI (C/TCGAG) 부위에 삽입 되었고, IL-12 p40는 MCS site II에서 제한효소 ; SalI (G/TCGAC) / SpeI (A/CTAGT) 부위에 삽입되었다.
도 2는 치료용 백신 투여 직전의 몸무게를 기준으로 투여 전과 후에 몸무게 변화를 측정한 결과이다.
도 3은 치료용 백신 투여 후 AT(Adipose tissue)의 무게 변화 정도를 보여주는 결과이다.
도 4는 AT(Adipose tissue)의 무게 변화율 통계 분석 결과를 보여준다. 통계 분석 결과, MOCK/치료제 (치료용 백신)는 P-VALUE 0.03007, MOCK/치료제 + IL-12 는 P-VALUE 0.0005로 통계학적으로 MOCK에 비하여 치료제 단독 처리 및 치료제 + IL-12에서 각각 유의미한 차이를 볼 수 있었다. 치료제 단독처리와 치료제와 IL-12 동시 처리의 2 그룹 모두에서 유의미한 차이를 볼 수 있었음을 알 수 있다.
도 5는 Yellow fever virus(17D)의 genome(GenBank: X03700.1) 에서 구조 단백질(capsid protein, prM protein, envelope protein, 119 ~ 2452 bp (2334bp))을 코딩하는 유전물질 (서열번호 1)를 gWizTM vector에 삽입한 벡터맵을 보여준다. tga (stop codon)을 마지막에 추가하였다.
도 6은 IL-12의 p35(GenBank: M86672.1)와 p40(GenBank: M86671.1)의 coding region(p35; 127~774bp, p40; 35~1042bp)에 해당하는 핵산 서열인 서열번호 2 및 3을 각각 kozak sequence(GCCACC)과 함께 pSF-CMV-CMV-Sbfl vector에 삽입한 벡터맵을 보여준다. IL-12 p35 는 MCS site I에서 제한효소; EcoRI (G/AATTC) / XhoI (C/TCGAG) 부위에 삽입 되었고, IL-12 p40는 MCS site II에서 제한효소 ; SalI (G/TCGAC) / SpeI (A/CTAGT) 부위에 삽입되었다.
이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 실시예 등을 들어 상세하게 설명하기로 한다. 그러나, 본 발명에 따른 실시예들은 여러 가지 다른 형태로 변형될 수 있으며, 본 발명의 범위가 하기 실시예들에 한정되는 것으로 해석되어서는 안 된다. 본 발명의 실시예들은 당업계에서 평균적인 지식을 가진 자에게 본 발명을 보다 완전하게 설명하기 위해 제공되는 것이다.
1. 지방 세포 분해용 백신의 제조
실험을 위해 Pre-existing immunity가 유도된 개체에 투여하기 위한 유전물질과 상기 유전물질과 함께 투여될 수 있는 면역증강제를 다음과 같이 제조하였다.
(1) 외래 항원 준비
1) 황열 바이러스의 유전물질 준비
먼저, Yellow fever virus(17D)의 genome(GenBank: X03700.1) 에서 구조 단백질(capsid protein, prM protein, envelope protein, 119 ~ 2452 bp (2334bp))을 코딩하는 유전물질 (서열번호 1)를 준비하였다.
2) 풍진 바이러스(Rubella virus)의 유전물질 준비
서열번호 5를 암호화하는, Rubella virus의 RA27/3 strain의 E1-E2 protein을 코딩하는 유전물질을 준비하였다.
3) 대상포진 바이러스(Varicella zoster virus)의 유전물질 준비
서열번호 6을 암호화하는 Varicella zoster virus의, Oka strain 중 gE protein을 코딩하는 유전물질을 준비하였다.
(2) 동물세포에서 발현되는 벡터 준비
동물세포에서 단백질 발현 가능한 gWizTM vector에 황열바이러스의 유전물질을 삽입하하여 대표적으로 지방세포 사멸 결과를 확인하였다. 벡터맵은 도 5에 나타냈다.
(3) 보조 유전물질 준비
다음으로, 보조 유전물질로 면역증강제를 준비하였다. IL-12의 p35(GenBank: M86672.1)와 p40(GenBank: M86671.1)의 coding region(p35; 127~774bp, p40; 35~1042bp)에 해당하는 핵산 서열인 서열번호 2 및 3을 각각 kozak sequence(GCCACC)과 함께 pSF-CMV-CMV-Sbfl vector에 삽입하였다. 벡터맵은 도 6에 나타냈다.
그리고 각각의 IL-12 합성시에 맨앞에 kozak sequence(GCCACC)가 삽입되어 있다.
Cloning된 YF-antigen plasmid와 mIL12- plasmid는 DH5a competent cell 에 transformation 한다. 해당 세포를 대량 배양하고 plasmid prep kit를 이용하여 plasmid를 회수하였다.
2. 지방세포 사멸 확인
(1) 실험 방법
1) Diet induced obese(DIO) 마우스 생산
C57BL/6J, 3w, female 마우스를 일반 사료 및 60% 고지방 사료(high fat diet)로 각각 공급하였다. 매 1주 간격으로 몸무게를 측정하고 10~15주간 사육 후 정상 마우스의 25% 이상 몸무게 증가하면 비만 유도 마우스로 간주하여 실험에 사용하였다.
2) Pre-existing immunity 유도와 항체가 측정
백신주 바이러스인 약독화 생바이러스를 이용하여 pre-existing immunity 형성을 유도하였다. 상기 백신주 바이러스로 17D 바이러스를 이용하였다.
마우스의 왼쪽 뒷다리 근육에 17D 바이러스 (약독화 생바이러스)를 2 x 105 pfu/1회당 농도로 2주간격 3회 주사하였다. 마지막 주사 후 2주 후에 blood를 수집하고 혈청을 분리하였다. 분리한 혈청은 ELISA 분석을 통해 YFV에 특이적인 항체를 검출하였다. ELISA 분석을 위해, 주사에 사용된 17D virus를 5 x 104 pfu/well 농도로 plate에 coating하고, 분석 샘플(혈청)을 희석하여 2h 반응시켰다. 세척 후 anti-mouse IgG-HRP secondary antibody를 1/4000 희석하여 처리한 후 2h 반응 시켰다. 세척 후 발색액을 넣고 10min간 반응시켜 O.D 값을 측정하였다.
Yellow fever 백신주인 17D 바이러스를 투여한 후 2주 후에 blood 혈청을 분리하여 YFV에 대한 IgG 항체가를 측정하였고, 정상적인 면역 유도(항체)가 일어났다.
결과는 도 3에 나타냈다. 마우스 체내 항체 생성을 확인 하기 위하여 우선적으로 YFV 특이적인 IgG 총 항체가 분석을 진행하였다. 항체가 형성 정도를 ELISA 분석법을 이용하여 흡광도(OD 값)로 나타내었다. NC군에 비해 ND, HFD그룹에서 1정도의 OD값을 보이며 항체가 생성되었음을 확인 할 수 있었다. 따라서 면역 유도가 일어났음을 확인할 수 있다.
3) 치료용 백신 투여 및 지방 무게 측정
정상 마우스 혹은 비만이 유도된 마우스에서 각각 yellow fever vaccine이 투여된 그룹과 투여되지 않은 그룹으로 나누어 실험에 사용하였다. 치료용 백신 투여 3일전부터 모든 마우스는 정상식이를 제공하였다. 치료용 백신은 마우스를 좌와 우로 나누어 한쪽의 inguinal adipose tissue와 interscapular adipose tissue 의 2 site에 주사하였다. 2~3일 간격으로 5회 투여되었으며, 항원 DNA는 100ug/site, IL-12 DNA는 50ug/site 농도로 총 150ug/site하였고, 투여된 항원 DNA 총량에 맞게 empty vector가 사용되었다. 치료용 백신 투여 전과 후에 몸무게를 측정하였다. 마지막 치료용 백신 투여 후 7일에 마우스를 해부하고, inguinal adipose tissue와 interscapular adipose tissue를 분리하고 각각의 무게를 측정하였다.
ND: Normal diet, HFD: 60% 고지방 사료(High fat diet)
그룹 | Obesity | Diet 1 | Diet 2 | Basal immunity(3차) | Obese vaccine(5차) | Interval | 개체 수 |
Control 1 | Normal | ND | ND | 배지 | - | - | 5 |
Control 2 | Normal | ND | ND | YF vaccine 접종 | - | - | 5 |
Mock | DIO | HFD | ND | YF vaccine 접종 | Empty vector | 2일 | 10 |
치료용 백신 1 | HFD | ND | YF vaccine 접종 | 항원 DNA (서열번호 1) | 2일 | 10 | |
치료용 백신 2 | HFD | ND | YF vaccine 접종 | 항원 DNA (서열번호 1) + IL12 DNA (서열번호 2 및 3) | 2일 | 10 |
상기 표 1의 각 그룹의 치료제 투여 후 몸무게 평균 변화율과 지방 조직 감소 효과를 각각 확인하여 도 2 내지 4에 나타냈다. 도 2를 참고하면, 치료용 백신 (치료제, treatment) 투여 전과 후에 몸무게 측정하였고, 투여 직전의 몸무게를 기준으로 몸무게 변화를 측정하였고, 아무것도 처리되지 않는 그룹의 경우 몸무게가 서서히 증가하였으나 Mock, 치료용 백신 1, 치료용 백신 2 그룹은 모두 몸무게 감소 효과를 보였으며, 치료용 백신 1과 2의 투여 그룹이 더 크게 감소하였다. 또한, IL-12가 함께 투여된 그룹의 경우 몸무게 감소가 가장 크게 나타났다. 도 3은 5차례 치료용 백신 투여 후 7일차에 마우스의 좌측과 우측의 inguinal AT(adipose tissue)와 interscapular AT를 분리하여 AT의 무게 측정하고, 동일 개체에서 empty vector 혹은 치료용 백신이 투여되지 않는 AT를 기준으로 지방 무게 감소량을 비교한 결과를 보여준다. 아무것도 투여되지 않는 Control과 empty vector 투여 그룹과 비교하였을 때, 치료용 백신 1 및 2를 처리하였을 때 지방조직 무게가 감소한 것을 알 수 있다. 특히 IL-12를 함께 투여한 치료용 백신 2 처리군에서 지방조직 무게 변화가 훨씬 더 큰 것을 알 수 있다.
<110> SK bioscience Co., Ltd.
<120> Vaccine composition for reducing the size or volume of the target
tissue comprising genetic material encoding for foreign antigen
or Kit
<130> PCT21-325
<150> KR 10-2020-0138615
<151> 2020-10-23
<160> 6
<170> KoPatentIn 3.0
<210> 1
<211> 2334
<212> DNA
<213> Yellow fever virus
<400> 1
atgtctggtc gtaaagctca gggaaaaacc ctgggcgtca atatggtacg acgaggagtt 60
cgctccttgt caaacaaaat aaaacaaaaa acaaaacaaa ttggaaacag acctggacct 120
tcaagaggtg ttcaaggatt tatctttttc tttttgttca acattttgac tggaaaaaag 180
atcacagccc acctaaagag gttgtggaaa atgctggacc caagacaagg cttggctgtt 240
ctaaggaaag tcaagagagt ggtggccagt ttgatgagag gattgtcctc aaggaaacgc 300
cgttcccatg atgttctgac tgtgcaattc ctaattttgg gaatgctgtt gatgacgggt 360
ggagtgacct tggtgcggaa aaacagatgg ttgctcctaa atgtgacatc tgaggacctc 420
gggaaaacat tctctgtggg cacaggcaac tgcacaacaa acattttgga agccaagtac 480
tggtgcccag actcaatgga atacaactgt cccaatctca gtccaagaga ggagccagat 540
gacattgatt gctggtgcta tggggtggaa aacgttagag tcgcatatgg taagtgtgac 600
tcagcaggca ggtctaggag gtcaagaagg gccattgact tgcctacgca tgaaaaccat 660
ggtttgaaga cccggcaaga aaaatggatg actggaagaa tgggtgaaag gcaactccaa 720
aagattgaga gatggttcgt gaggaacccc ttttttgcag tgacggctct gaccattgcc 780
taccttgtgg gaagcaacat gacgcaacga gtcgtgattg ccctactggt cttggctgtt 840
ggtccggcct actcagctca ctgcattgga attactgaca gggatttcat tgagggggtg 900
catggaggaa cttgggtttc agctaccctg gagcaagaca agtgtgtcac tgttatggcc 960
cctgacaagc cttcattgga catctcacta gagacagtag ccattgatag acctgctgag 1020
gtgaggaaag tgtgttacaa tgcagttctc actcatgtga agattaatga caagtgcccc 1080
agcactggag aggcccacct agctgaagag aacgaagggg acaatgcgtg caagcgcact 1140
tattctgata gaggctgggg caatggctgt ggcctatttg ggaaagggag cattgtggca 1200
tgcgccaaat tcacttgtgc caaatccatg agtttgtttg aggttgatca gaccaaaatt 1260
cagtatgtca tcagagcaca attgcatgta ggggccaagc aggaaaattg gaataccgac 1320
attaagactc tcaagtttga tgccctgtca ggctcccagg aagtcgagtt cattgggtat 1380
ggaaaagcta cactggaatg ccaggtgcaa actgcggtgg actttggtaa cagttacatc 1440
gctgagatgg aaacagagag ctggatagtg gacagacagt gggcccagga cttgaccctg 1500
ccatggcaga gtggaagtgg cggggtgtgg agagagatgc atcatcttgt cgaatttgaa 1560
cctccgcatg ccgccactat cagagtactg gccctgggaa accaggaagg ctccttgaaa 1620
acagctctta ctggcgcaat gagggttaca aaggacacaa atgacaacaa cctttacaaa 1680
ctacatggtg gacatgtttc ttgcagagtg aaattgtcag ctttgacact caaggggaca 1740
tcctacaaaa tatgcactga caaaatgttt tttgtcaaga acccaactga cactggccat 1800
ggcactgttg tgatgcaggt gaaagtgtca aaaggagccc cctgcaggat tccagtgata 1860
gtagctgatg atcttacagc ggcaatcaat aaaggcattt tggttacagt taaccccatc 1920
gcctcaacca atgatgatga agtgctgatt gaggtgaacc caccttttgg agacagctac 1980
attatcgttg ggagaggaga ttcacgtctc acttaccagt ggcacaaaga gggaagctca 2040
ataggaaagt tgttcactca gaccatgaaa ggcgtggaac gcctggccgt catgggagac 2100
accgcctggg atttcagctc cgctggaggg ttcttcactt cggttgggaa aggaattcat 2160
acggtgtttg gctctgcctt tcaggggcta tttggcggct tgaactggat aacaaaggtc 2220
atcatggggg cggtacttat atgggttggc atcaacacaa gaaacatgac aatgtccatg 2280
agcatgatct tggtaggagt gatcatgatg tttttgtctc taggagttgg ggcg 2334
<210> 2
<211> 648
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> the p35 subunit of interleukin 12
<400> 2
atgtgtcaat cacgctacct cctctttttg gccacccttg ccctcctaaa ccacctcagt 60
ttggccaggg tcattccagt ctctggacct gccaggtgtc ttagccagtc ccgaaacctg 120
ctgaagacca cagatgacat ggtgaagacg gccagagaaa aactgaaaca ttattcctgc 180
actgctgaag acatcgatca tgaagacatc acacgggacc aaaccagcac attgaagacc 240
tgtttaccac tggaactaca caagaacgag agttgcctgg ctactagaga gacttcttcc 300
acaacaagag ggagctgcct gcccccacag aagacgtctt tgatgatgac cctgtgcctt 360
ggtagcatct atgaggactt gaagatgtac cagacagagt tccaggccat caacgcagca 420
cttcagaatc acaaccatca gcagatcatt ctagacaagg gcatgctggt ggccatcgat 480
gagctgatgc agtctctgaa tcataatggc gagactctgc gccagaaacc tcctgtggga 540
gaagcagacc cttacagagt gaaaatgaag ctctgcatcc tgcttcacgc cttcagcacc 600
cgcgtcgtga ccatcaacag ggtgatgggc tatctgagct ccgcctga 648
<210> 3
<211> 1008
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> the p40 subunit of interleukin 12
<400> 3
atgtgtcctc agaagctaac catctcctgg tttgccatcg ttttgctggt gtctccactc 60
atggccatgt gggagctgga gaaagacgtt tatgttgtag aggtggactg gactcccgat 120
gcccctggag aaacagtgaa cctcacctgt gacacgcctg aagaagatga catcacctgg 180
acctcagacc agagacatgg agtcataggc tctggaaaga ccctgaccat cactgtcaaa 240
gagtttctag atgctggcca gtacacctgc cacaaaggag gcgagactct gagccactca 300
catctgctgc tccacaagaa ggaaaatgga atttggtcca ctgaaatttt aaaaaatttc 360
aaaaacaaga ctttcctgaa gtgtgaagca ccaaattact ccggacggtt cacgtgctca 420
tggctggtgc aaagaaacat ggacttgaag ttcaacatca agagcagtag cagttcccct 480
gactctcggg cagtgacatg tggaatggcg tctctgtctg cagagaaggt cacactggac 540
caaagggact atgagaagta ttcagtgtcc tgccaggagg atgtcacctg cccaactgcc 600
gaggagaccc tgcccattga actggcgttg gaagcacggc agcagaataa atatgagaac 660
tacagcacca gcttcttcat cagggacatc atcaaaccag acccgcccaa gaacttgcag 720
atgaagcctt tgaagaactc acaggtggag gtcagctggg agtaccctga ctcctggagc 780
actccccatt cctacttctc cctcaagttc tttgttcgaa tccagcgcaa gaaagaaaag 840
atgaaggaga cagaggaggg gtgtaaccag aaaggtgcgt tcctcgtaga gaagacatct 900
accgaagtcc aatgcaaagg cgggaatgtc tgcgtgcaag ctcaggatcg ctattacaat 960
tcctcatgca gcaagtgggc atgtgttccc tgcagggtcc gatcctag 1008
<210> 4
<211> 6
<212> DNA
<213> Unknown
<220>
<223> kozak sequence
<400> 4
gccacc 6
<210> 5
<211> 1063
<212> PRT
<213> Rubella virus
<400> 5
Met Ala Ser Thr Thr Pro Ile Thr Met Glu Asp Leu Gln Lys Ala Leu
1 5 10 15
Glu Thr Gln Ser Arg Ala Leu Arg Ala Glu Leu Ala Ala Gly Ala Ser
20 25 30
Gln Ser Arg Arg Pro Arg Pro Pro Arg Gln Arg Asp Ser Ser Thr Thr
35 40 45
Gly Asp Asp Ser Gly Arg Asp Ser Gly Gly Pro Arg Arg Arg Arg Gly
50 55 60
Asn Arg Gly Arg Gly Gln Arg Arg Asp Trp Ser Arg Ala Pro Pro Pro
65 70 75 80
Pro Glu Glu Arg Gln Glu Thr Arg Ser Gln Thr Pro Ala Pro Lys Pro
85 90 95
Ser Arg Ala Pro Pro Gln Gln Pro Gln Pro Pro Arg Met Gln Thr Gly
100 105 110
Arg Gly Gly Ser Ala Pro Arg Pro Glu Leu Gly Pro Pro Thr Asn Pro
115 120 125
Phe Gln Ala Ala Val Ala Arg Gly Leu Arg Pro Pro Leu His Asp Pro
130 135 140
Asp Thr Glu Ala Pro Thr Glu Ala Cys Val Thr Ser Trp Leu Trp Ser
145 150 155 160
Glu Gly Glu Gly Ala Val Phe Tyr Arg Val Asp Leu His Phe Thr Asn
165 170 175
Leu Gly Thr Pro Pro Leu Asp Glu Asp Gly Arg Trp Asp Pro Ala Leu
180 185 190
Met Tyr Asn Pro Cys Gly Pro Glu Pro Pro Ala His Val Val Arg Ala
195 200 205
Tyr Asn Gln Pro Ala Gly Asp Val Arg Gly Val Trp Gly Lys Gly Glu
210 215 220
Arg Thr Tyr Ala Glu Gln Asp Phe Arg Val Gly Gly Thr Arg Trp His
225 230 235 240
Arg Leu Leu Arg Met Pro Val Arg Gly Leu Asp Gly Asp Ser Ala Pro
245 250 255
Leu Pro Pro His Thr Thr Glu Arg Ile Glu Thr Arg Ser Ala Arg His
260 265 270
Pro Trp Arg Ile Arg Phe Gly Ala Pro Gln Ala Phe Leu Ala Gly Leu
275 280 285
Leu Leu Ala Ala Val Ala Val Gly Thr Ala Arg Ala Gly Leu Gln Pro
290 295 300
Arg Ala Asp Met Ala Ala Pro Pro Thr Leu Pro Gln Pro Pro Arg Ala
305 310 315 320
His Gly Gln His Tyr Gly His His His His Gln Leu Pro Phe Leu Gly
325 330 335
His Asp Gly His His Gly Gly Thr Leu Arg Val Gly Gln His His Arg
340 345 350
Asn Ala Ser Asp Val Leu Pro Gly His Trp Leu Gln Gly Gly Trp Gly
355 360 365
Cys Tyr Asn Leu Ser Asp Trp His Gln Gly Thr His Val Cys His Thr
370 375 380
Lys His Met Asp Phe Trp Cys Val Glu His Asp Arg Pro Pro Pro Ala
385 390 395 400
Thr Pro Thr Pro Leu Thr Thr Ala Ala Asn Ser Thr Thr Ala Ala Thr
405 410 415
Pro Ala Thr Ala Pro Ala Pro Cys His Ala Gly Leu Asn Asp Ser Cys
420 425 430
Gly Gly Phe Leu Ser Gly Cys Gly Pro Met Arg Leu Arg His Gly Ala
435 440 445
Asp Thr Arg Cys Gly Arg Leu Ile Cys Gly Leu Ser Thr Thr Ala Gln
450 455 460
Tyr Pro Pro Thr Arg Phe Gly Cys Ala Met Arg Trp Gly Leu Pro Pro
465 470 475 480
Trp Glu Leu Val Val Leu Thr Ala Arg Pro Glu Asp Gly Trp Thr Cys
485 490 495
Arg Gly Val Pro Ala His Pro Gly Thr Arg Cys Pro Glu Leu Val Ser
500 505 510
Pro Met Gly Arg Ala Thr Cys Ser Pro Ala Ser Ala Leu Trp Leu Ala
515 520 525
Thr Ala Asn Ala Leu Ser Leu Asp His Ala Leu Ala Ala Phe Val Leu
530 535 540
Leu Val Pro Trp Val Leu Ile Phe Met Val Cys Arg Arg Thr Cys Arg
545 550 555 560
Arg Arg Gly Ala Ala Ala Ala Leu Thr Ala Val Val Leu Gln Gly Tyr
565 570 575
Asn Pro Pro Ala Tyr Gly Glu Glu Ala Phe Thr Tyr Leu Cys Thr Ala
580 585 590
Pro Gly Cys Ala Thr Gln Ala Pro Val Pro Val Arg Leu Ala Gly Val
595 600 605
Arg Phe Glu Ser Lys Ile Val Asp Gly Gly Cys Phe Ala Pro Trp Asp
610 615 620
Leu Glu Ala Thr Gly Ala Cys Ile Cys Glu Ile Pro Thr Asp Val Ser
625 630 635 640
Cys Glu Gly Leu Gly Ala Trp Val Pro Thr Ala Pro Cys Ala Arg Ile
645 650 655
Trp Asn Gly Thr Gln Arg Ala Cys Thr Phe Trp Ala Val Asn Ala Tyr
660 665 670
Ser Ser Gly Gly Tyr Ala Gln Leu Ala Ser Tyr Phe Asn Pro Gly Gly
675 680 685
Ser Tyr Tyr Lys Gln Tyr His Pro Thr Ala Cys Glu Val Glu Pro Ala
690 695 700
Phe Gly His Ser Asp Ala Ala Cys Trp Gly Phe Pro Thr Asp Thr Val
705 710 715 720
Met Ser Val Phe Ala Leu Ala Ser Tyr Val Gln His Pro His Lys Thr
725 730 735
Val Arg Val Lys Phe His Thr Glu Thr Arg Thr Val Trp Gln Leu Ser
740 745 750
Val Ala Gly Val Ser Cys Asn Val Thr Thr Glu His Pro Phe Cys Asn
755 760 765
Thr Pro His Gly Gln Leu Glu Val Gln Val Pro Pro Asp Pro Gly Asp
770 775 780
Leu Val Glu Tyr Ile Met Asn His Thr Gly Asn Gln Gln Ser Arg Trp
785 790 795 800
Gly Leu Gly Ser Pro Asn Cys His Gly Pro Asp Trp Ala Ser Pro Val
805 810 815
Cys Gln Arg His Ser Pro Asp Cys Ser Arg Leu Val Gly Ala Thr Pro
820 825 830
Glu Arg Pro Arg Leu Arg Leu Val Asp Ala Asp Asp Pro Leu Leu Arg
835 840 845
Thr Ala Pro Gly Pro Gly Glu Val Trp Val Thr Pro Val Ile Gly Ser
850 855 860
Gln Ala Arg Lys Cys Gly Leu His Ile Arg Ala Gly Pro Tyr Gly His
865 870 875 880
Ala Thr Val Glu Met Pro Glu Trp Ile His Ala His Thr Thr Ser Asp
885 890 895
Pro Trp His Pro Pro Gly Pro Leu Gly Leu Lys Phe Lys Thr Val Arg
900 905 910
Pro Val Ala Leu Pro Arg Thr Leu Ala Pro Pro Arg Asn Val Arg Val
915 920 925
Thr Gly Cys Tyr Gln Cys Gly Thr Pro Ala Leu Val Glu Gly Leu Ala
930 935 940
Pro Gly Gly Gly Asn Cys His Leu Thr Val Asn Gly Glu Asp Leu Gly
945 950 955 960
Ala Phe Pro Pro Gly Lys Phe Val Thr Ala Ala Leu Leu Asn Thr Pro
965 970 975
Pro Pro Tyr Gln Val Ser Cys Gly Gly Glu Ser Asp Arg Ala Ser Ala
980 985 990
Arg Val Ile Asp Pro Ala Ala Gln Ser Phe Thr Gly Val Val Tyr Gly
995 1000 1005
Thr His Thr Thr Ala Val Ser Glu Thr Arg Gln Thr Trp Ala Glu Trp
1010 1015 1020
Ala Ala Ala His Trp Trp Gln Leu Thr Leu Gly Ala Ile Cys Ala Leu
1025 1030 1035 1040
Leu Leu Ala Gly Leu Leu Ala Cys Cys Ala Lys Cys Leu Tyr Tyr Leu
1045 1050 1055
Arg Gly Ala Ile Ala Pro Arg
1060
<210> 6
<211> 623
<212> PRT
<213> Unknown
<220>
<223> the gE protein of the Varicella zoster virus
<400> 6
Met Gly Thr Val Asn Lys Pro Val Val Gly Val Leu Met Gly Phe Gly
1 5 10 15
Ile Ile Thr Gly Thr Leu Arg Ile Thr Asn Pro Val Arg Ala Ser Val
20 25 30
Leu Arg Tyr Asp Asp Phe His Ile Asp Glu Asp Lys Leu Asp Thr Asn
35 40 45
Ser Val Tyr Glu Pro Tyr Tyr His Ser Asp His Ala Glu Ser Ser Trp
50 55 60
Val Asn Arg Gly Glu Ser Ser Arg Lys Ala Tyr Asp His Asn Ser Pro
65 70 75 80
Tyr Ile Trp Pro Arg Asn Asp Tyr Asp Gly Phe Leu Glu Asn Ala His
85 90 95
Glu His His Gly Val Tyr Asn Gln Gly Arg Gly Ile Asp Ser Gly Glu
100 105 110
Arg Leu Met Gln Pro Thr Gln Met Ser Ala Gln Glu Asp Leu Gly Asp
115 120 125
Asp Thr Gly Ile His Val Ile Pro Thr Leu Asn Gly Asp Asp Arg His
130 135 140
Lys Ile Val Asn Val Asp Gln Arg Gln Tyr Gly Asp Val Phe Lys Gly
145 150 155 160
Asp Leu Asn Pro Lys Pro Gln Gly Gln Arg Leu Ile Glu Val Ser Val
165 170 175
Glu Glu Asn His Pro Phe Thr Leu Arg Ala Pro Ile Gln Arg Ile Tyr
180 185 190
Gly Val Arg Tyr Thr Glu Thr Trp Ser Phe Leu Pro Ser Leu Thr Cys
195 200 205
Thr Gly Asp Ala Ala Pro Ala Ile Gln His Ile Cys Leu Lys His Thr
210 215 220
Thr Cys Phe Gln Asp Val Val Val Asp Val Asp Cys Ala Glu Asn Thr
225 230 235 240
Lys Glu Asp Gln Leu Ala Glu Ile Ser Tyr Arg Phe Gln Gly Lys Lys
245 250 255
Glu Ala Asp Gln Pro Trp Ile Val Val Asn Thr Ser Thr Leu Phe Asp
260 265 270
Glu Leu Glu Leu Asp Pro Pro Glu Ile Glu Pro Gly Val Leu Lys Val
275 280 285
Leu Arg Thr Glu Lys Gln Tyr Leu Gly Val Tyr Ile Trp Asn Met Arg
290 295 300
Gly Ser Asp Gly Thr Ser Thr Tyr Ala Thr Phe Leu Val Thr Trp Lys
305 310 315 320
Gly Asp Glu Lys Thr Arg Asn Pro Thr Pro Ala Val Thr Pro Gln Pro
325 330 335
Arg Gly Ala Glu Phe His Met Trp Asn Tyr His Ser His Val Phe Ser
340 345 350
Val Gly Asp Thr Phe Ser Leu Ala Met His Leu Gln Tyr Lys Ile His
355 360 365
Glu Ala Pro Phe Asp Leu Leu Leu Glu Trp Leu Tyr Val Pro Ile Asp
370 375 380
Pro Thr Cys Gln Pro Met Arg Leu Tyr Ser Thr Cys Leu Tyr His Pro
385 390 395 400
Asn Ala Pro Gln Cys Leu Ser His Met Asn Ser Gly Cys Thr Phe Thr
405 410 415
Ser Pro His Leu Ala Gln Arg Val Ala Ser Thr Val Tyr Gln Asn Cys
420 425 430
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Glu Pro Ser Phe Gly Leu Ile Leu His Asp Gly Gly Thr Thr Leu Lys
450 455 460
Phe Val Asp Thr Pro Glu Ser Leu Ser Gly Leu Tyr Val Phe Val Val
465 470 475 480
Tyr Phe Asn Gly His Val Glu Ala Val Ala Tyr Thr Val Val Ser Thr
485 490 495
Val Asp His Phe Val Asn Ala Ile Glu Glu Arg Gly Phe Pro Pro Thr
500 505 510
Ala Gly Gln Pro Pro Ala Thr Thr Lys Pro Lys Glu Ile Thr Pro Val
515 520 525
Asn Pro Gly Thr Ser Pro Leu Leu Arg Tyr Ala Ala Trp Thr Gly Gly
530 535 540
Leu Ala Ala Val Val Leu Leu Cys Leu Val Ile Phe Leu Ile Cys Thr
545 550 555 560
Ala Lys Arg Met Arg Val Lys Ala Tyr Arg Val Asp Lys Ser Pro Tyr
565 570 575
Asn Gln Ser Met Tyr Tyr Ala Gly Leu Pro Val Asp Asp Phe Glu Asp
580 585 590
Ser Glu Ser Thr Asp Thr Glu Glu Glu Phe Gly Asn Ala Ile Gly Gly
595 600 605
Ser His Gly Gly Ser Ser Tyr Thr Val Tyr Ile Asp Lys Thr Arg
610 615 620
Claims (20)
- 외래 항원을 코딩하는 유전물질을 포함하는, 타겟 조직 크기 또는 부피 축소용 백신 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 타겟 조직은 지방세포, 근육세포, 골세포, 연골세포, 피부세포, 분비세포 및 혈세포로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 세포로 이루어진 조직인 것을 특징으로 하는, 타겟 조직 크기 또는 부피 축소용 백신 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 약학 조성물은 지방 세포의 감소 또는 사멸을 유도하는 타겟 조직 크기 또는 부피 축소용 백신 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 조성물에 포함되는 외래 항원은 비인간 유래 항원, 바이러스 유래 항원, 세균 유래 항원, 진균 유래 항원, 원생동물 유래 항원, 조류 유래 항원, 기생충 유래 항원, 마이코플라즈마 유래 항원, 및 식물 유래 항원으로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나 이상인 것을 특징으로 하는, 타겟 조직 크기 또는 부피 축소용 백신 조성물.
- 제4항에 있어서, 상기 외래 항원은 황열 바이러스, 대상포진 바이러스, 및 풍진 바이러스로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 바이러스; 또는 이들의 에피토프인 것을 특징으로 하는, 타겟 조직 크기 또는 부피 축소용 백신 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 유전물질은 DNA 또는 RNA인 것을 특징으로 하는, 타겟 조직 크기 또는 부피 축소용 백신 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 유전물질은 서열번호 1; 및 서열번호 5 또는 6의 펩타이드를 암호화하는 핵산분자로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상을 포함하는 타겟 조직 크기 또는 부피 축소용 백신 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 백신 조성물은 사이토카인을 코딩하는 유전물질을 더 포함하는 타겟 조직 크기 또는 부피 축소용 백신 조성물.
- 제8항에 있어서, 상기 사이토카인은 IL-12, IL-2, IL-4, IL-5, IFN-γ, IL-10, IL-1, IL-6, INF-알파, INF-베타, TNF-알파, 및 TNF-베타로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상인 것을 특징으로 하는 타겟 조직 크기 또는 부피 축소용 백신 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 외래 항원은 세포 내 면역 반응을 유발하는 것을 특징으로 하는, 타겟 조직 크기 또는 부피 축소용 백신 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 조성물은 국소적으로 작용하며,
상기 백신 조성물은 적어도 1종 이상의 면역 환경 조성을 위한 단백질 또는 이의 에피토프가 먼저 개체에 적용된 후에 적용되는 것을 특징으로 하는, 타겟 조직 크기 또는 부피 축소용 백신 조성물. - 제1항에 있어서, 상기 유전물질은 경구, 경피, 근육, 복막, 정맥, 피하, 또는 비강 경로를 통한 주사, 또는
전기천공법, 유전자총, 리포좀, 덴드리머들(dendrimers), 나노입자들(nanoparticles), 또는 이동(transfer) 벡터를 통하여 타겟 조직에 투여되는 것을 특징으로 하는, 타겟 조직 크기 또는 부피 축소용 백신 조성물. - 제1항에 있어서, 상기 조성물에 포함된 유전물질의 투여량은 1회 접종 시 0.1~1000ug/site 되는 것을 특징으로 하는 타겟 조직 크기 또는 부피 축소용 백신 조성물.
- (a) 외래 항원을 코딩하는 유전물질을 포함하는, 타겟 조직 크기 또는 부피 축소용 백신 조성물; 및
(b) 상기 백신 투여를 위한 투여지침서를 포함하는, 키트. - 제14항에 있어서,
상기 키트는 (c) 상기 (a) 조성물 투여 전에 면역 환경 조성을 위한 단백질 항원 또는 이의 에피토프를 포함하는 조성물이 더 포함된, 키트. - 제14항에 있어서, 상기 (a) 백신 조성물은 사이토카인을 코딩하는 유전물질을 더 포함하는 키트.
- 외래 항원을 코딩하는 유전물질을 포함하는, 타겟 조직 크기 또는 부피 축소용 백신 조성물이 충전된 시린지.
- 제17항에 있어서, 상기 시린지는 사이토카인을 코딩하는 유전물질을 더 포함하는 시린지.
- 적어도 하나의 외래 항원을 코딩하는 유전물질을 포함하는 피하 지방 세포 제거용 조성물.
- 제19항에 있어서, 상기 조성물은 사이토카인을 코딩하는 유전물질을 더 포함하는 피하 지방 세포 제거용 조성물.
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