WO2021033280A1

WO2021033280A1 - 雰囲気ガス細胞輸送用セット

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Publication number: WO2021033280A1
Application number: PCT/JP2019/032572
Authority: WO
Inventors: 学司加藤; 順一桑原
Original assignee: 株式会社サンプラテック
Priority date: 2019-08-21
Filing date: 2019-08-21
Publication date: 2021-02-25

Abstract

雰囲気ガス細胞輸送用セット（Ａ１）は、細胞を培養するための培養容器（１）と、保持体（２）と、袋状密封容器（３）と、ガス容器（４）と、を備える。培養容器（１）は、内部に液体を密閉可能であり、かつガスを透過し得るガス透過部（１３４）を有する。保持体（２）は、培養容器（１）を所定の姿勢で保持する。袋状密封容器（３）は、ガスを透過しない袋状の収容体（３１）、収容体（３１）の内部にガスを注入可能なガス注入部（３２）、および収容体（３１）の内部を気密状態に維持するためのシール手段（３３，３４）、を有する。収容体（３１）は、培養容器（１）および保持体（２）を内部に入れるための開口部（３１０）を有する。ガス容器（４）は、所定のガスが充填された容器本体（４１）、および当該容器本体（４１）の内部のガスを噴出可能な噴射ノズル（４３）、を有する。袋状密封容器（３）の内部にガスを注入することで、保持体（２）が収容体（３１）の内面に押圧保持される。

Description

雰囲気ガス細胞輸送用セット

　本発明は、細胞や生体組織を凍結させずに培養状態を維持しながら輸送するための技術に関する。

　細胞や生体組織の培養に際しては、例えばシャーレ（ディッシュ）、ウェルプレート、プローブなどの培養容器が広く用いられている。これら培養容器は通気状態で培養を行うことを目的に設計されたものである。培養容器を用いた細胞培養は、一般的に当該培養容器をインキュベータに入れて行う。インキュベータの内部は、ガス濃度、温度や湿度等の環境が、細胞培養に適するように調整される。

　培養細胞を輸送する場合、インキュベータを用いることができないので、従来は凍結輸送が主流であった。凍結輸送の場合、培養容器から凍結保存用の専用容器に培養細胞を移し替えて凍結させた上で輸送、その後に解凍し再び培養容器に移して細胞が活性化するようにコンディショニングをする必要がある。容器を移し替えることによるコンタミネーションや凍結・解凍などによる細胞損失のリスクがあった。近年では、細胞を凍結させず培養に適した温度を保ちながら輸送することが定温輸送技術の進歩によって可能となっている。凍結させずに培養状態を維持しながら、あるいは温度調整によって休眠状態で輸送することで、届け先においてすぐに試験や移植等に利用できる。培養細胞の定温輸送に関する技術は、例えば特許文献１に開示されている。

　特許文献１において、培養容器を輸送するためのセットが記載されている。同文献に記載された培養容器輸送用セットは、培養容器（１）、カバー（２）、押さえ部材（３）、クッション材（４）、ガス発生剤（５）および収納容器（６）を備える。カバーは、ゴム成形品であり、培養容器の開口を塞ぐとともに、ガスを透過し得る薄肉部（ガス透過部）を有する。押さえ部材は、カバーの上に積載される硬質部材である。クッション材は、形状復元性を有する弾性部材である。収納容器は、培養容器、カバー、押さえ部材、クッション材およびガス発生剤を密閉状態で収納するものである。収納容器は、有底箱状のベース部材（６１）、当該ベース部材に被せられる蓋体（６２）、およびこれらの間に介在するパッキン（６３）を備える。ベース部材（６１）および蓋体（６２）は、硬質な合成樹脂材料からなる樹脂成形品である。

　収納容器は、培養容器、カバー、押さえ部材およびクッション材を重ね合わせたアセンブリ状態でこれらを収納可能である。これらの収納時にはクッション材が圧縮変形し、クッション材の弾性復元力により、積層された培養容器、カバー、押さえ部材は、互いに押圧された状態になる。そして、このとき、培養容器（１）、カバー（２）、押さえ部材（３）、クッション材（４）は、互いが積層されたアセンブリ状態でベース部材（６１）および蓋体（６２）によって上下から押圧されており、収納容器によって一体的に保持される。

　ガス発生剤（５）は、収納容器（６）の内部空間のガスについて、所定のガス成分の濃度を調整するためのものである。ガス発生剤は、使用前において袋内に封入されている。ガス発生剤は、例えばアスコルビン酸類を含み、ＣＯ₂（二酸化炭素）ガスを発生する。ガス発生剤（５）の袋を開封した後に収納容器（６）内に収納することにより、収納容器（６）内のガス濃度（ＣＯ₂濃度）を調整することができる。ガス発生剤（５）を用いることにより、収納容器（６）のガス濃度について、例えば、ＣＯ₂（二酸化炭素）濃度が５～１０％程度に調整される。

　しかしながら、ガス発生剤は、上記収納容器の所定の容量において所望のガス濃度となるように予め計算された量が袋内に封入されているため、異なる容量の収納容器には使用することができなかった。また、上記の樹脂成形品からなる収納容器（ベース部材および蓋体）を用いた構成では、樹脂成形品を作製するための金型コストが高くつき、これが容器価格に反映されるためワンウェイのディスポーザブル容器としては採用しにくかった。さらに、樹脂成形品からなる収納容器では、当該収納容器の内部に収納する培養容器について様々な種類に対応するのが困難となっていた。

　また、ガス発生剤を用いた手法では、例えばＣＯ₂ガスの発生とともに熱や副生成物であるアルデヒドが発生する。収納容器内において熱やアルデヒドが生成されると、培養容器での細胞培養に悪影響を及ぼすおそれがあった。

国際公開ＷＯ２０１８／００３０７３号公報

　本発明は、このような事情のもとで考え出されたものであって、培養状態を維持しながら、培養容器を所望のガス雰囲気下で効率よく輸送するのに適した雰囲気ガス細胞輸送用セットを提供することを主たる課題とする。

　上記の課題を解決するため、本発明では、次の技術的手段を採用した。

　本発明によって提供される雰囲気ガス細胞輸送用セットは、内部に液体を密閉可能であり、かつガスを透過し得るガス透過部を有し、細胞を培養するための培養容器と、上記培養容器を所定の姿勢で保持する保持体と、上記培養容器および上記保持体を内部に入れるための開口部を有し、ガスを透過しない袋状の収容体、上記収容体の内部にガスを注入可能なガス注入部、および上記収容体の内部を気密状態に維持するためのシール手段、を有する袋状密封容器と、所定のガスが充填された容器本体、および当該容器本体の内部のガスを噴出可能な噴出ノズル、を有するガス容器と、を備え、上記袋状密封容器の内部にガスを注入することで上記保持体が上記収容体の内面に押圧保持される。

　好ましい実施の形態においては、上記収容体は、厚さ方向において互いに重なる所定形状の第１および第２のフィルムを有し、当該第１および第２のフィルムの周縁どうしが接合された構成であり、上記保持体は、上記第１および第２のフィルムと対応する形状を有する板状体である。

　好ましい実施の形態においては、上記第１および第２のフィルム、ならびに上記保持材は、それぞれ長矩形状である。

　好ましい実施の形態においては、上記保持体には、厚さ方向に貫通する取付孔が形成されており、上記培養容器は上記取付孔に嵌挿される。

　好ましい実施の形態においては、上記保持材は、クッション性を有する材料からなる。

　好ましい実施の形態においては、上記ガス容器の上記容器本体に充填されるガスは、ＣＯ₂濃度５～１０％の調整ガスである。

　好ましい実施の形態においては、上記培養容器に流路接続される培養液容器および培養液回収体をさらに備える。

　好ましい実施の形態においては、上記培養液回収体は真空容器である。

　本発明のその他の特徴および利点は、添付図面を参照して以下に行う詳細な説明によって、より明らかとなろう。

本発明に係る雰囲気ガス細胞輸送用セットの一例を示す分解斜視図である。図１に示す雰囲気ガス細胞輸送用セットを用いて、培養容器および保持体を袋状密封容器に収納してガスを注入した状態を示す平面図である。図２の正面図である。図２のＩＶ－ＩＶ線に沿う拡大断面図である。シール手段の構造例を示す断面図である。培養容器の一例を示す縦断面図である。収容体の内部に噴射ノズルの先端を挿入した状態を示す部分拡大平面図である。灌流培養が可能な構成例を示し、保持体に培養容器等が保持された態様を表す平面図である。図８に示した保持体の平面図である。保持体の他の例を示す平面図である。図１０に示す保持体およびこれに保持された培養容器を袋状密封容器に収納してガスを注入した状態を示す、図４と同様の断面図である。

　以下、本発明の好ましい実施の形態を図面を参照しつつ具体的に説明する。

　図１～図４は、本発明に係る雰囲気ガス細胞輸送用セットの一例を示している。本実施形態の雰囲気ガス細胞輸送用セットＡ１は、培養容器１と、保持体２と、袋状密封容器３と、ガス容器４と、を備えている。詳細は後述するが、図１は、雰囲気ガス細胞輸送用セットＡ１の使用前における分解斜視図である。図２～図４は、培養容器１の輸送時における培養容器１、保持体２、および袋状密封容器３の使用状態を示している。

　図４、図６に示すように、培養容器１は、容器体１１、第１蓋部材１２および第２蓋部材１３を備える。容器体１１は、上端に開口１１０を有する有底容器状とされている。筒状内部に液体を密閉可能とされている。容器体１１の上部外周面には雄ネジ１１１が形成されている。また、本実施形態において、容器体１１の下端の適所には、延出片１１２が設けられている。延出片１１２は、容器体１１につながって径方向外方に延びる部分である。

　第１蓋部材１２および第２蓋部材１３は、容器体１１の開口１１０を閉塞し容器体１１を密閉するためのものである。第１蓋部材１２は、頂板部１２１および筒状部１２３を有する。頂板部１２１は、概略円環状とされており、後述する、第２蓋部材１３のフランジ１３１を容器体１１の上端部との間に挟み付ける部分である。頂板部１２１の径方向内側には、貫通孔１２２が形成されている。貫通孔１２２は、頂板部１２１の厚さ方向視において当該頂板部１２１に囲まれている。筒状部１２３は、頂板部１２１の周縁から当該頂板部１２１の厚さ方向（図中下方）に延びており、概略円筒状とされている。筒状部１２３の内周面には、雌ネジ１２４が形成されており、当該雌ネジ１２４は、容器体１１の雄ネジ１１１に螺合可能である。

　容器体１１は、例えば半透明または透明のプラスチック材料により形成されている。当該プラスチック材料としては、例えばポリスチレンやメチルペンテンのほか、ポリカーボネート、シクロオレフィンポリマー、シクロオレフィンコポリマーなどの、好適には透明性を有する材料が用いられるが、これらに限定されない。第１蓋部材１２の構成材料としては、例えば摺動性に優れるポリエチレン、ポリプロピレンなどが用いられる。

　第２蓋部材１３は、例えばゴム成形品であり、図６に示すように、フランジ１３１と、傾斜部１３２と、中央厚肉部１３３と、薄肉部１３４と、を有する。フランジ１３１は、概略円環状とされており、頂板部１２１の厚さ方向視において当該頂板部１２１と重なっている。フランジ１３１は、適度な厚さを有し、厚さ方向の荷重に対して適度な弾性復元力を有する。図６に示したアセンブリ状態において、フランジ１３１は、容器体１１における開口１１０の周縁部と第１蓋部材１２における頂板部１２１との間に介在している。

　傾斜部１３２は、フランジ１３１の内周縁につながって径方向内方に延びている。傾斜部１３２は、径方向内方に向かうにつれて下方に変位するように傾斜している。本実施形態において、傾斜部１３２の厚さは、フランジ１３１の厚さと同程度とされている。中央厚肉部１３３は、傾斜部１３２の内周縁につながって径方向内方に延びており、概略円環状とされている。本実施形態において、中央厚肉部１３３の厚さは、フランジ１３１の厚さと同程度とされている。

　薄肉部１３４は、第２蓋部材１３の中央に設けられている。薄肉部１３４は、中央厚肉部１３３（フランジ１３１）の径方向内側を塞いでいる。図６によく表れているように、薄肉部１３４は、他の部位に比べて厚さが薄くされた部分である。薄肉部１３４は、上下方向視において、略円形をなしている。薄肉部１３４の厚さは、例えば０．２～０．３ｍｍ程度である。本実施形態において、この薄肉部１３４は、ガス透過性を有する。薄肉部１３４は、本発明で言うガス透過部の一例に相当する。本実施形態においてまた、薄肉部１３４は、透明である。薄肉部１３４は、頂板部１２１の厚さ方向視において当該頂板部１２１に囲まれた貫通孔１２２と重なっている。

　上記の第２蓋部材１３は、可撓性、弾力性を有する素材によって構成されている。第２蓋部材１３を構成する素材としては、例えば、シリコーンゴム、エラストマー樹脂などが挙げられる。詳細は後述するが第２蓋部材１３と、内容物（例えば培地）との接触を考慮すると、第２蓋部材１３の素材としては、細胞毒性が無く、かつ生体適合性を有する医療用シリコーンゴムがより好ましい。また、第２蓋部材１３の硬さについては、例えばゴム硬度が２０度～４０度程度であるのが好ましい。

　保持体２は、培養容器１を所定の姿勢で保持するためのものである。本実施形態において、保持体２は、長矩形状の板状体であり、一対の長縁２０１および一対の短縁２０２からなる外周縁を有する。保持体２の適所には、厚さ方向に貫通する取付孔２１が形成されている。取付孔２１には、培養容器１が嵌挿される。図４に示すように、取付孔２１に培養容器１（容器体１１）を嵌挿することで、当該培養容器１は所定姿勢で保持体２に保持される。本実施形態では、保持体２の長手方向において複数（図示した例では３つ）の取付孔２１が間隔を隔てて形成されている。これにより、保持体２は、複数（図示した例では３つ）の培養容器１を保持することが可能である。

　保持体２は、定形性を有する材料により構成される。その一方、保持体２は、好ましくは硬質でなく適度なクッション性を有する材料により形成される。当該クッション性を有する材料としては、例えば発泡ポリエチレン、発泡ポリプロピレンなどの発泡プラスチック材料が挙げられる。但し、保持体２の構成材料は、上記の材料に限定されない。なお、保持体２は、培養容器１を保持することができるように、適度な厚さを有する。

　袋状密封容器３は、培養容器１および保持体２を収納可能な袋状容器である。袋状密封容器３は、収容体３１、筒状通気口３２、逆止弁３３、およびチャックテープ３４を有する。

　収容体３１は、袋状とされている。収容体３１は、開口部３１０を有する。開口部３１０は、培養容器１および保持体２を当該収容体３１の内部に入れるための挿入口である。本実施形態において、収容体３１は、所定形状の第１のフィルム３１１および第２のフィルム３１２を有する。第１および第２のフィルム３１１，３１２は、それぞれ長矩形状とされており、厚さ方向において互いに重なる。第１および第２のフィルム３１１，３１２は、これらの周縁どうしの適所が接合されており、周縁部３１３が形成されている。

　開口部３１０は、第１および第２のフィルム３１１，３１２の長矩形状をなす一つの短辺に相当する部位に形成されている。周縁部３１３は、上記の開口部３１０を除き、第１および第２のフィルム３１１，３１２の長矩形状をなす一対の長辺と一つの短辺に沿って形成される。収容体３１（第１および第２のフィルム３１１，３１２）は、ガスを透過しない材料からなる。第１および第２のフィルム３１１，３１２は、例えばポリエチレンやポリプロピレン、ナイロンなどからなる合成樹脂製フィルムである。周縁部３１３は、例えば第１および第２のフィルム３１１，３１２周縁どうしが熱溶着によって一体化されたヒートシール部である。上記のような第１のフィルム３１１および第２のフィルム３１２からなる袋状の収容体３１において、第１および第２のフィルム３１１，３１２は、それぞれ互いに対向する内面３１１ａおよび内面３１２ａを有する。

　保持体２と、収容体３１を構成する第１および第２のフィルム３１１，３１２とは、互いに対応する形状（長矩形状）とされる。第１および第２のフィルム３１１，３１２の短辺の長さは、保持体２の短縁２０２に沿う長さよりも大である。これにより、保持体２は、開口部３１０を通じて収容体３１の内部に挿入可能である。また、第１および第２のフィルム３１１，３１２の長辺の長さは、保持体２の長縁２０１に沿う長さよりも大であり、保持体２を収容体３１の内部に収納可能である。

　なお、第１および第２のフィルム３１１，３１２の短辺の長さは、保持体２の短縁２０２に沿う長さよりも少し大きくされる。これにより、詳細は後述するが、図４に示すように、収容体３１の内部へのガス注入により収容体３１が膨らんだときには、第１および第２のフィルム３１１，３１２の短辺の長さが小さくなる。そして、第１および第２のフィルム３１１，３１２の内面３１１ａ，３１２ａが、保持体２の一対の短縁２０２に当接しうる。

　筒状通気口３２は、収容体３１の内部にガスを注入するための通路である。逆止弁３３は、収容体３１の内部のガスが筒状通気口３２から抜け出るのを防止し、収容体３１の内部を気密状態に維持するものである。本実施形態において、筒状通気口３２および逆止弁３３は、例えば一連の筒状体によって構成される。筒状通気口３２および逆止弁３３は、例えば合成樹脂製フィルムからなる。具体的には、筒状通気口３２（逆止弁３３）は、長矩形状の２枚のフィルムの長手方向に沿う周縁どうしが互いに熱溶着によって接合されたものである。筒状通気口３２の長手方向の両端部は閉塞されていない。筒状通気口３２は、例えば第１のフィルム３１１および第２のフィルム３１２の適所に挟まれた状態で当該第１および第２のフィルム３１１，３１２と熱溶着される。筒状通気口３２の長手方向一方の端部３２１は、収容体３１の外部に位置する。筒状通気口３２の長手方向他方の端部３２２は、収容体３１の内部に位置する。当該端部３２２付近は、２枚のフィルムの自己粘着性が高められた部分である。筒状通気口３２の端部３２２付近が、逆止弁３３に相当する。収容体３１の内部へのガス注入により収容体３１が膨らんだ状態において、逆止弁３３は閉じる。収容体３１の内部にガスを注入する際、例えば筒状通気口３２の一方の端部３２１から他方の端部３２２に向けて細筒状のノズルを差し込み、当該ノズルを介して収容体３１の内部にガスを送り込む。ガス注入を終えた後に上記ノズルを筒状通気口３２から引き抜くと、逆止弁３３（端部３２２付近）は、上記の自己粘着性により密着して閉じる。上記構成の筒状通気口３２は、本発明で言うガス注入部の一例に相当する。逆止弁３３は、本発明で言うシール手段の一例に相当する。

　チャックテープ３４は、収容体３１の開口部３１０を閉塞し、収容体３１の内部を気密状態に維持するものである。図５に示すように、本実施形態において、チャックテープ３４は、帯状凹部３４１および帯状凸部３４２を含む。帯状凹部３４１は、第１のフィルム３１１に設けられている。より具体的には、第１のフィルム３１１は、その端部を折り返すことで形成された折り返し部３１４を有しており、帯状凹部３４１は折り返し部３１４に設けられる。帯状凸部３４２は、第２のフィルム３１２に設けられている。帯状凹部３４１および帯状凸部３４２は、開口部３１０に対応する位置に設けられている。帯状凹部３４１および帯状凸部３４２は、第１および第２のフィルム３１１，３１２の長矩形状をなす短辺の略全長にわたって設けられる。これら帯状凹部３４１および帯状凸部３４２が互いに凹凸嵌合されることによって、開口部３１０が閉塞される。また、チャックテープ３４（帯状凹部３４１）は、第１のフィルム３１１の折り返し部３１４に設けられている。このような構成によれば、収容体３１の内部のガス圧力が高められる場合においても、折り返し部３１４の内側にガス圧力が作用するので、帯状凹部３４１および帯状凸部３４２の嵌合状態が維持される。チャックテープ３４を具備する構成によれば、収容体３１の気密状態での耐圧性が高まる。チャックテープ３４は、本発明で言うシール手段の一例に相当する。

　ガス容器４は、所定成分のガスが加圧状態で充填された耐圧容器である。より具体的には、ガス容器４は、容器本体４１、噴射ボタン４２、および噴射ノズル４３を有する。容器本体４１にはガスが充填されている。噴射ボタン４２には噴射ノズル４３が取り付けられている。噴射ボタン４２を押し込むと、容器本体４１内のガスは、容器本体４１のガス出口に介在する逆止弁（図示せず）および噴射ノズル４３を通過し、当該噴射ノズル４３の先端から噴出される。

　ガス容器４（容器本体４１）に充填されるガスは、例えばＣＯ₂濃度５～１０％の調整ガスである。上記調整ガスの残余の成分は例えば空気であり、調整ガスに占める空気の割合は、例えば９０～９５％である。ガス容器４（容器本体４１）に充填されたこのような調整ガスは、細胞培養の際に雰囲気ガスとして使用するのに適する。

　次に、雰囲気ガス細胞輸送用セットＡ１の使用方法および作用について説明する。

　雰囲気ガス細胞輸送用セットＡ１は、培養細胞あるいは生体組織や培地を培養容器１（容器体１１）に収容し、培養状態を維持しながら輸送（培養状態維持輸送）するのに使用される。容器体１１に収容される培養細胞、生体組織や培地については、特に限定されるものではない。

　培養容器１および保持体２を袋状密封容器３に収納し、袋状密封容器３（収容体３１）の内部に調整ガスを注入する手順について図７を参照して説明する。まず、培養容器１（容器体１１）を保持体２の取付孔２１に嵌挿し、培養容器１を保持体２に保持させる。本実施形態では、３つの培養容器１が保持体２に形成された３つの取付孔２１それぞれに嵌挿され、保持体２に保持される。次に、３つの培養容器１を保持した状態の保持体２を、袋状密封容器３の開口部３１０を通じて収容体３１の内部に収納する。次いで、チャックテープ３４を閉じる。

　次に、図７に示すように、筒状通気口３２、逆止弁３３にガス容器４の噴射ノズル４３を差し込み、当該噴射ノズル４３の先端を収容体３１の内部に挿入する。そして、ガス容器４の噴射ボタン４２を押し込み、ガス容器４（容器本体４１）内部の調整ガスを、噴射ノズル４３を介して袋状密封容器３（収容体３１）の内部に注入する。ここで、逆止弁３３と噴射ノズル４３との間には僅かな隙間があり、収容体３１の内部に存在していた空気は当該隙間を通じて外部に放出される。

　収容体３１内への調整ガスの注入に伴い、収容体３１は、第１および第２のフィルム３１１，３１２が互いに離れるように膨らむ。そうすると、収容体３１（周縁部３１３）において、一対の長辺は、互いに近づく。そして、図４にも表れているように、保持体２の短手方向の両端（一対の長縁２０１に相当する部分）が、第１および第２のフィルム３１１，３１２の内面３１１ａ，３１２ａによって押圧保持される。

　収容体３１が十分に膨らんだ後、噴射ボタン４２を押し込んだまま噴射ノズル４３を筒状通気口３２から引き抜くと、逆止弁３３が閉じる。収容体３１（袋状密封容器３）の内部は、調整ガスが充満しており、気密状態となる。

　本実施形態の雰囲気ガス細胞輸送用セットＡ１において、培養容器１は、収容体３１（袋状密封容器３）の内部に収納される。図４を参照して説明したように、培養容器１は、保持体２を介して、袋状密封容器３により所定の姿勢で保持される。このような構成によれば、培養容器１の培養状態維持輸送を適切に行うことができる。また、培養容器１は、薄肉部１３４（ガス透過部）を有しており、収容体３１（袋状密封容器３）の内部は、細胞培養に適した調整ガスで満たされている。培養容器１の内容物については、薄肉部１３４（ガス透過部）を介して、収容体３１（袋状密封容器３）の内部空間との通気状態が維持される。したがって、本実施形態によれば、培養容器１の内容物について、袋状密封容器３の内部空間との通気状態を維持しながら、所望のガス雰囲気下での培養状態維持輸送が可能となる。

　雰囲気ガス細胞輸送用セットＡ１において、培養容器１を収納するための容器として、袋状の収容体３１（袋状密封容器３）が用いられる。このような構成によれば、従来の硬質な樹脂成形品からなる収納容器を用いる場合と比べて、樹脂成形用の金型が不要でコスト削減を図ることできる。また、袋状の収容体３１によれば、内部に収容する培養容器１の種類を変更する場合でも、当該収容体３１の形状や収容体３１に収納される保持体２の形状（取付孔２１の形状）を容易に変更することが可能である。したがって、様々な種類の培養容器について、所望のガス雰囲気下での培養状態維持輸送に容易に対応することができる。

　培養状態維持輸送時に袋状密封容器３（収容体３１）の内部に充満する調整ガスは、ガス容器４から注入されたものである。このような構成によれば、例えばガス発生剤を用いて収納容器の内部のガス濃度を調整する場合と異なり、袋状密封容器３（収容体３１）の容量が限定されることなく、また、熱や副生成物が発生することもない。したがって、雰囲気ガスが細胞培養に悪影響を及ぼすことはなく、所望のガス雰囲気下での培養状態維持輸送を適切に行うことができる。

　医療分野での培養状態維持輸送では、培養容器を収納するための容器や培養容器の姿勢を維持するために用いる部材は、廃棄可能なディスポーザブルタイプが好ましい。雰囲気ガス細胞輸送用セットＡ１において、培養容器１は袋状の容器（袋状密封容器３）に収納されており、板状体である保持体２を所定姿勢で保持される。このような構成の袋状密封容器３や保持体２は、硬質な樹脂成形品と異なり、ディスポーザブルに容易に対応可能である。したがって、雰囲気ガス細胞輸送用セットＡ１は、実験、研究等の分野の他、医療分野での使用にも適する。

　なお、ガス容器４において、噴射ノズル４３と噴射ボタン４２の間に調整ガスをろ過するメンブレンを内蔵したハウジングを取り付けてもよい。このような構成にすれば、よりクリーンな条件が担保でき医療分野等での利用に好適となる。

　なお、雰囲気ガス細胞輸送用セットＡ１を用いた培養状態維持輸送において、所定の温度条件を維持するため、例えば断熱性が高められた輸送かばんを用いてもよい。この場合、培養容器１を内部に収めた袋状密封容器３は、所定の温度範囲に調整された輸送かばんに収納される。

　雰囲気ガス細胞輸送用セットＡ１を用いた培養状態維持輸送において、所定の湿度条件を維持するため、例えば袋状密封容器３（収容体３１）の内部に加湿剤を収納してもよい。

　さらに、雰囲気ガス細胞輸送用セットＡ１を用いた培養状態維持輸送において、細胞培養状態を維持しながら培養液（培地）の交換（いわゆる灌流培養）を行うようにしてもよい。灌流培養を行う場合、袋状密封容器３（収容体３１）の内部には、例えば、培養液バッグおよび培養液回収体が追加で収納される。図８は、灌流培養が可能な構成の一例を示し、保持体２に、培養容器１、培養液バッグ５、および培養液回収体６が保持された態様を表す。なお、図８以降の図面においては、上記実施形態と同一または類似の要素には同一の符号を付しており、適宜説明を省略する。

　培養液バッグ５は、培養容器１に供給する新鮮な培養液が収容された培養液容器である。培養液回収体６は、培養容器１から排出される培養液を回収するものである。培養液バッグ５および培養液回収体６は、培養容器１と適切に流路接続される。具体的には、培養容器１と培養液バッグ５とが流路７１によって接続され、培養容器１と培養液回収体６とが流路７２によって接続される。流路７１にはジョイント部８１が設けられており、培養容器１と培養液バッグ５とは、ジョイント部８１によって分離可能に接続される。また、流路７２にはジョイント部８２が設けられており、培養容器１と培養液回収体６とは、ジョイント部８２によって分離可能に接続される。培養液回収体６としては、例えば真空容器が用いられる。培養液回収体６として真空容器を用いれば、負圧状態の培養液回収体の吸引力により、培養容器１内の古い培養液が流路７２を介して培養液回収体６内に移動し、培養液バッグ５内の新しい培養液が流路７１を介して培養容器１内に移動する。なお、流路７１および流路７２の少なくともいずれか一方において、培養液の流量を調整する機能を持たせてもよい。図８に示した例では、流路７２に流量調整部８３が設けられている。

　図９は、図８に示した保持体２の平面図である。同図においては、培養容器１、培養液バッグ５や培養液回収体６などの部材を保持させる前の状態を表す。図８、図９に示した保持体２は、図１等に示した上記実施形態の保持体２と同様の材料によって構成され、適度な厚さを有する板状体である。即ち、図８、図９に示した保持体２は、定形性を有するとともに、適度なクッション性を有する。図９に示すように、本実施形態の保持体２は、培養容器１を嵌挿するための取付孔２１の他に、孔２２、長孔２３、一対の切れ込み２４、切れ込み２５１、切れ込み２５２、および孔２５３が形成されている。

　孔２２は、保持体２の厚さ方向に貫通する円形孔であり、培養液バッグ５が嵌挿される。図８に表れているように、長孔２３は、培養液回収体６が保持体２上に横たわる状態で培養液回収体６の鍔状部分を挿し込む部位である。一対の切れ込み２４は、略Ｕ字状とされており、互いが略一定間隔に形成される。一対の切れ込み２４で囲まれた切れ込み形成部位２４１は、保持体２の厚さ方向と直角である方向に起こすことが可能である。図８に示すように、切れ込み形成部位２４１を起こした状態で切れ込み形成部位２４１の内側に培養液回収体６の容器部が挿し込まれる。切れ込み２５１は、略Ｕ字状とされている。孔２５３は、切れ込み２５１で囲まれた切れ込み形成部位２５４に形成された貫通孔である。切れ込み２５２は、一端が切れ込み２５１に通じており、他端が孔２５３に通じている。切れ込み形成部位２５４は、保持体２の厚さ方向と直角である方向に起こすことが可能である。また、切れ込み２５２を挟んだ両側部分を互いに引き離することで、切れ込み２５２を通じて孔２５３の内側に物を配置することができる。図８から理解されるように、切れ込み形成部位２５４が保持体２の厚さ方向に起こされた状態で、孔２５３に培養液回収体６の筒状部分が通される。このようにして、培養液回収体６は、保持体２に適切に保持される。なお、流路７１、流路７２、ジョイント部８１、ジョイント部８２および流量調整部８３は、保持体２上の空いたスペースに置かれており、これらを粘着テープ等によって保持体２に止めてもよい。

　本実施形態では、灌流培養を行うために必要な培養容器１、培養液バッグ５や培養液回収体６等を保持体２に適切に保持させることが可能である。そして、図１～図７を参照して説明した雰囲気ガス細胞輸送用セットＡ１の場合と同様に、培養容器１等を保持した状態の保持体２を袋状密封容器３に収納し、袋状密封容器３（収容体３１）の内部を調整ガスで充満させる。これにより、培養容器１の内容物について、袋状密封容器３の内部空間との通気状態を維持しながら、所望のガス雰囲気下で、灌流培養による培養状態維持輸送が可能となる。

　袋状密封容器３（収容体３１）の内部に加湿剤を追加で収納する場合、例えば保持体２に加湿剤を保持するための孔を形成すれば、当該孔に加湿剤を嵌挿して保持させることができる。また、加湿剤、培養液バッグや培養液回体は、粘着テープ等を用いて保持体２に保持させてもよい。

　以上、本発明の実施形態を説明したが、本発明の範囲は上記した実施形態に限定されるものではなく、各請求項に記載した事項の範囲内でのあらゆる変更は、すべて本発明の範囲に包摂される。

　上記実施形態において、培養容器１を保持体２の取付孔２１に嵌挿させることで当該保持体２に培養容器１が保持されていたが、培養容器１を保持体２によって所定の姿勢で保持する手法としては、種々変更が可能である。培養容器の形状に対応させて、保持体や袋状密封容器の形状を変更することも可能である。また、例えば、培養容器が比較的細長い形状である場合、板状体である保持体にＵ字状の切れ込みを形成し、当該切れ込みの内側に貫通孔を形成する。そして、当該切れ込み形成部位を保持体の厚さ方向と直角である方向に起こし、上記貫通孔に培養容器を嵌挿させる。これにより、培養容器は、その長手方向が保持体の面内方向に沿うような姿勢で保持体に保持される。したがって、保持体に保持された培養容器が保持体の厚さ方向に嵩張ることは、防止される。

　上記実施形態において、保持体２は適度な厚さを有する板状体であり、クッション性を有する構成とされていたが、保持体２の具体的な構成は種々変更可能である。図１０は、保持体２の他の例を示す平面図である。同図に示した保持体２は、いわゆるブリスターパックであり、互いに分離可能な第１部材２６および第２部材２７によって構成されている。第１部材２６および第２部材２７は、それぞれ、ポリ塩化ビニル（ＰＶＣ）やポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）などの透明樹脂からなる板状体であり、真空成形によって適宜凹凸形状が設けられている。図１１は、保持体２およびこれに保持された培養容器１を袋状密封容器３（収容体３１）に収納してガスを注入した状態を示し、図４と同様の断面図である。

　第１部材２６および第２部材２７は、概略長矩形状とされている。第１部材２６は、嵌合部２６１、容器形状部２６２、および孔２６３を有する。嵌合部２６１は、第１部材２６の周縁に形成されている。容器形状部２６２は、培養容器１を収容する部分であり、第１部材２６の厚さ方向に見て嵌合部２６１の内側に形成されている。孔２６３は、容器形状部２６２の中央に形成された貫通孔である。第２部材２７は、嵌合部２７１を有する。嵌合部２７１は、第２部材２７の周縁に形成されている。第２部材２７の厚さ方向に見て嵌合部２７１の内側は、平板状部分によって塞がれている。

　図１０に示すように、第１部材２６には複数（図示した例では３つ）の容器形状部２６２が形成されている。これら容器形状部２６２は、第１部材２６の長手方向において間隔を隔てて設けられる。これにより、保持体２は、複数（図示した例では３つ）の培養容器１を保持することが可能である。

　図１１に表れているように、第１部材２６の容器形状部２６２に培養容器１を収容し、かつ第１部材２６および第２部材２７の嵌合部２６１，２７１どうしを互いに嵌合すると、培養容器１は保持体２（第１部材２６および第２部材２７）により所定の姿勢で適切に保持される。図１１は、培養状態維持輸送を行うときの断面図である。培養容器１および保持体２は、袋状密封容器３に収納され、袋状密封容器３（収容体３１）の内部に調整ガスが充満している。ここで、収容体３１は、第１および第２のフィルム３１１，３１２が互いに離れるように膨らんでいる。そして、保持体２（第１部材２６）の短手方向の両端（一対の長縁に相当する部分）が、第１および第２のフィルム３１１，３１２の内面３１１ａ，３１２ａによって押圧保持される。培養容器１の内容物については、薄肉部１３４（ガス透過部）および第１部材２６の孔２６３を介して、収容体３１（袋状密封容器３）の内部空間との通気状態が維持される。したがって、図１１に示す場合においても、培養容器１の内容物について、袋状密封容器３の内部空間との通気状態を維持しながら、所望のガス雰囲気下での培養状態維持輸送が可能である。なお、ブリスターパックからなる保持体２としては、図１０、図１１に示した嵌合タイプの構成に代えて、ヒンジ部により回動可能なクラムシェル式を採用してもよい。また、保持体２は、容器形状部が形成された１枚の板状体からなるブリスタートレイによって構成してもよい。

　上記実施形態において、袋状密封容器３に筒状通気口３２（ガス注入部）および逆止弁３３（シール手段）を１つずつ設けた場合について説明したが、袋状密封容器３に２つずつの筒状通気口（ガス注入部）および逆止弁（シール手段）を互いに離れた位置に設けてもよい。この場合、収容体３１の内部に調整ガスを注入する際、追加的に設けた筒状通気口および逆止弁にガス排出用のノズルを差し込む。そうすると、収容体３１の内部に存在していた空気を、当該排出用ノズルを介して外部に排出することが可能である。

　上記実施形態では、袋状密封容器３（収容体３１）の開口部３１０を閉塞するシール手段の具体例としてチャックテープ３４を採用する場合について説明したが、これに限定されない。チャックテープ３４を設けない場合、開口部３１０を通じて培養容器１および保持体２を収容体３１の内部に収納した後、ヒートシールにより開口部３１０を閉塞するように構成してもよい。

Ａ１：雰囲気ガス細胞輸送用セット、１：培養容器、１１：容器体、１１０：開口、１１１：雄ネジ、１１２：延出片、１２：第１蓋部材、１２１：頂板部、１２２：貫通孔、１２３：筒状部、１２４：雌ネジ、１３：第２蓋部材、１３１：フランジ、１３２：傾斜部、１３３：中央厚肉部、１３４：薄肉部（ガス透過部）、２：保持体、２０１：長縁、２０２：短縁、２１：取付孔、２２：孔、２３：長孔、２４：切れ込み、２４１：切れ込み形成部位、２５１：切れ込み、２５２：切れ込み、２５３：孔、２５４：切れ込み形成部位、２６：第１部材、２６１：嵌合部、２６２：容器形状部、２６３：孔、２７：第２部材、２７１：嵌合部、３：袋状密封容器、３１：収容体、３１０：開口部、３１１：第１のフィルム、３１１ａ：内面（第１のフィルムの内面）、３１２：第２のフィルム、３１２ａ：内面（第２のフィルムの内面）、３１３：周縁部、３１４：折り返し部、３２：筒状通気口（ガス注入部）、３２１，３２２：端部、３３：逆止弁（シール手段）、３４：チャックテープ（シール手段）、３４１：帯状凹部、３４２：帯状凸部、４：ガス容器、４１：容器本体、４２：噴射ボタン、４３：噴射ノズル、５：培養液バッグ（培養液容器）、６：培養液回収体、７１，７２：流路、８１，８２：ジョイント部、８３：流量調整部

Claims

　内部に液体を密閉可能であり、かつガスを透過し得るガス透過部を有し、細胞を培養するための培養容器と、
　上記培養容器を所定の姿勢で保持する保持体と、
　上記培養容器および上記保持体を内部に入れるための開口部を有し、ガスを透過しない袋状の収容体、上記収容体の内部にガスを注入可能なガス注入部、および上記収容体の内部を気密状態に維持するためのシール手段、を有する袋状密封容器と、
　所定のガスが充填された容器本体、および当該容器本体の内部のガスを噴出可能な噴出ノズル、を有するガス容器と、を備え、
　上記ガス容器内のガスを上記袋状密封容器の内部に注入することで上記収容体が膨らみ、上記保持体が上記収容体の内面に押圧保持される、雰囲気ガス細胞輸送用セット。
　上記収容体は、厚さ方向において互いに重なる所定形状の第１および第２のフィルムを有し、当該第１および第２のフィルムの周縁どうしが接合された構成であり、
　上記保持体は、上記第１および第２のフィルムと対応する形状を有する板状体である、請求項１に記載の雰囲気ガス細胞輸送用セット。
　上記第１および第２のフィルム、ならびに上記保持材は、それぞれ長矩形状である、請求項２に記載の雰囲気ガス細胞輸送用セット。
　上記保持体には、厚さ方向に貫通する取付孔が形成されており、
　上記培養容器は上記取付孔に嵌挿される、請求項２または３に記載の雰囲気ガス細胞輸送用セット。
　上記保持材は、クッション性を有する材料からなる、請求項１ないし４のいずれかに記載の雰囲気ガス細胞輸送用セット。
　上記ガス容器の上記容器本体に充填されるガスは、ＣＯ₂濃度５～１０％の調整ガスである、請求項１ないし５のいずれかに記載の雰囲気ガス細胞輸送用セット。
　上記培養容器に流路接続される培養液容器および培養液回収体をさらに備える、請求項１ないし６のいずれかに記載の雰囲気ガス細胞輸送用セット。
　上記培養液回収体は真空容器である、請求項７に記載の雰囲気ガス細胞輸送用セット。