WO2020158840A1 - 抗がん剤 - Google Patents

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WO2020158840A1
WO2020158840A1 PCT/JP2020/003310 JP2020003310W WO2020158840A1 WO 2020158840 A1 WO2020158840 A1 WO 2020158840A1 JP 2020003310 W JP2020003310 W JP 2020003310W WO 2020158840 A1 WO2020158840 A1 WO 2020158840A1
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WO
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group
substituent
formula
cancer
carbon atoms
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PCT/JP2020/003310
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English (en)
French (fr)
Inventor
菜月 深澤
泰斗 西野
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Nissan Chemical Corp
Original Assignee
Nissan Chemical Corp
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Publication date
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Ceased legal-status Critical Current

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    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/16—Amides, e.g. hydroxamic acids
    • A61K31/165—Amides, e.g. hydroxamic acids having aromatic rings, e.g. colchicine, atenolol, progabide
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/16—Amides, e.g. hydroxamic acids
    • A61K31/17—Amides, e.g. hydroxamic acids having the group >N—C(O)—N< or >N—C(S)—N<, e.g. urea, thiourea, carmustine
    • A61K31/175—Amides, e.g. hydroxamic acids having the group >N—C(O)—N< or >N—C(S)—N<, e.g. urea, thiourea, carmustine having the group, >N—C(O)—N=N— or, e.g. carbonohydrazides, carbazones, semicarbazides, semicarbazones; Thioanalogues thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
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    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00

Definitions

  • the present invention relates to a novel cancer therapeutic agent and a cancer treatment method using the same.
  • Non-Patent Document 1 Non-Patent Document 1
  • the present invention aims to provide a novel means for treating cancer.
  • the present invention is as follows.
  • X is —NHCO—
  • R 1 is —Y—NH—Z—Ar
  • Y and Z each independently have a single bond or a substituent. Which is an optionally substituted alkylene group having 1 to 6 carbon atoms, Ar is an aryl group which may have a substituent or a heteroaryl group which may have a substituent), and R 2 is Is an alkyl group having 1 to 6 carbon atoms which may have a substituent, R 3 is a hydroxyl group, and n is an integer of 0, 1 or 2. ⁇ .
  • R 2 is a methyl group, an ethyl group, or an isobutyl group, n is 0,
  • Ar is a halogeno group, a phenyl group which may be substituted with a hydroxyl group or a methyl group, or a pyridyl group, Y is a methylene group optionally substituted with a methyl group or an ethyl group,
  • [3] The agent according to [1] or [2], wherein the compound represented by the formula (I) is a compound shown below or a salt thereof.
  • a method for treating cancer which comprises administering an effective amount of a compound represented by the following formula (I) or a salt thereof to a subject in need thereof:
  • X is —NHCO—
  • R 1 is —Y—NH—Z—Ar
  • Y and Z each independently have a single bond or a substituent. Which is an optionally substituted alkylene group having 1 to 6 carbon atoms, Ar is an aryl group which may have a substituent or a heteroaryl group which may have a substituent), and R 2 is Is an alkyl group having 1 to 6 carbon atoms which may have a substituent, R 3 is a hydroxyl group, and n is an integer of 0, 1 or 2.
  • [7] The method according to [6], wherein the method is used in combination with a ferrotosis inducer.
  • X is —NHCO—
  • R 1 is —Y—NH—Z—Ar
  • Y and Z may have a single bond or a substituent. It is an alkylene group having 1 to 6 carbon atoms
  • Ar is an aryl group which may have a substituent.
  • R 2 is an alkyl group having 1 to 6 carbon atoms which may have a substituent.
  • R 3 is a hydroxyl group, and n is 0, 1 or 2.
  • R 2 is a methyl group, an ethyl group, or an isobutyl group, n is 0,
  • Ar is a phenyl group which may be substituted with a hydroxyl group or a methyl group, Y is a methylene group optionally substituted with a methyl group or an ethyl group,
  • [3A] The agent according to [1A] or [2A], wherein the compound represented by the formula (I) is a compound shown below.
  • [5A] The agent according to any of [1A] to [4A], wherein the cancer is breast cancer.
  • [6A] A method for treating cancer, which comprises administering an effective amount of a compound represented by the following formula (I) or a salt thereof to a subject in need thereof:
  • X is —NHCO—
  • R 1 is —Y—NH—Z—Ar
  • Y and Z may have a single bond or a substituent. It is an alkylene group having 1 to 6 carbon atoms
  • Ar is an aryl group which may have a substituent.
  • R 2 is an alkyl group having 1 to 6 carbon atoms which may have a substituent.
  • R 3 is a hydroxyl group, and n is 0, 1 or 2.
  • cancer it is possible to efficiently suppress the growth of tumors or cancer cells. Therefore, according to the present invention, cancer can be treated.
  • n- means normal, i- means iso, sec- means secondary, and tert- means tertiary.
  • o- means ortho, m- means meta, and p- means para.
  • Halogen atom is a fluorine atom, a chlorine atom, a bromine atom, or an iodine atom.
  • the “halogeno group” is fluoro, chloro, bromo or iodo.
  • alkyl group having 1 to 6 carbon atoms means a linear or branched alkyl group having 1 to 6 carbon atoms, and specifically, methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl, n-butyl, Examples include groups such as isobutyl, sec-butyl, tert-butyl, n-pentyl, isopentyl, tert-pentyl, neopentyl, 2-pentyl, 3-pentyl, n-hexyl and 2-hexyl.
  • a lower alkyl group having 1 to 4 carbon atoms, particularly a methyl group and an ethyl group are preferable.
  • the "aryl group” includes monocyclic, bicyclic, tricyclic and tetracyclic carbocyclic groups in which at least one ring is aromatic and each ring has 5 to 8 ring atoms. Specifically, phenyl, indenyl, naphthyl, fluorenyl and the like can be mentioned. In particular, the aryl group may be a C 6-10 aromatic phenyl, indenyl, naphthyl.
  • heteroaryl group is a C 2-6 monocyclic heterocyclic group having from 1 to 3 atoms, which can contain 1 to 3 atoms of oxygen atom, nitrogen atom, and sulfur atom alone or in combination, and the number of constituent atoms. Means a C 5-9 fused bicyclic heterocyclic group of 8 to 10, and when it contains a nitrogen atom, it also includes an N-oxide form.
  • alkylene group having 1 to 6 carbon atoms means a straight carbon chain having 1 to 6 carbon atoms, and specific examples thereof include groups such as methylene, ethylene, propylene, butylene, pentylene and hexylene. ..
  • alkyl group having 1 to 6 carbon atoms may have a substituent.
  • substituent for the “alkyl group having 1 to 6 carbon atoms” include the following (1) to (40).
  • Aryl group “heteroaryl group” and “alkylene group having 1 to 6 carbon atoms”
  • the following (1) to (41) are mentioned as the substituents for (1) halogeno group, (2) hydroxyl group, (3) cyano group, (4) nitro group, (5) carboxyl group, (6) Alkenyl group (C 2-10 alkenyl group; eg, vinyl, allyl, propenyl, butenyl, pentenyl, hexenyl, heptenyl, butadienyl, hexatrienyl, and each isomer thereof), (7) alkynyl group (C 2-10 alkynyl group; eg, ethynyl, propynyl, butynyl, pentynyl, hexynyl, and each isomer thereof), (8) halogenoalkyl group (eg, monofluoromethyl, difluoromethyl, trifluoromethyl, monofluoroe
  • -Pentyl isopentyl, tert-pentyl, neopentyl, 2-pentyl, 3-pentyl, n-hexyl, 2-hexyl and the like.
  • carbamoyl group (28) a carbamoyl group mono- or di-substituted with an alkyl group (synonymous with the “alkyl group” in (26) above (eg, methylcarbamoyl, ethylcarbamoyl, dimethylcarbamoyl, diethylcarbamoyl, ethylmethylcarbamoyl))
  • sulfamoyl group (30) A sulfamoyl group mono- or di-substituted with an alkyl group (synonymous with the “alkyl group” in the above (26)) (eg, methylsulfamoyl, ethylsulfamo
  • the “C 1-6 alkyl group” is an “alkyl group” having 1 to 6 carbon atoms
  • the “C 6-10 aryl group” is the above “aryl group”. Among them, those having 6 to 10 carbon atoms.
  • the acyl group specifically, acetyl group, propionyl group, butyroyl group, isobutyroyl group, valeroyl group, isovaleroyl group, pivaloyl group, hexanoyl group, acryloyl group, methacryloyl group, crotonoyl group, isocrotonoyl group, benzoyl group, naphthoyl group. Groups and the like.
  • an alkoxycarbonylamino group eg, a carbonylamino group substituted with an alkoxy group (as defined above (12))
  • an alkylsulfonyl group eg, a sulfonyl group substituted with an alkyl group (synonymous with the “alkyl group” in the above (26))
  • an alkylsulfinyl group eg, a sulfinyl group substituted with an alkyl group (synonymous with the “alkyl group” in the above (26))
  • (40) alkoxycarbonyl group eg, methoxycarbonyl group, ethoxycarbonyl group
  • X is —NHCO—
  • R 1 is —Y—NH—Z—Ar
  • Y and Z each independently have a single bond or a substituent. Which is an optionally substituted alkylene group having 1 to 6 carbon atoms
  • Ar is an aryl group which may have a substituent or a heteroaryl group which may have a substituent
  • R 2 is Is an alkyl group having 1 to 6 carbon atoms which may have a substituent
  • R 3 is a hydroxyl group
  • n is an integer of 0, 1 or 2.
  • the compound represented by the formula (I) may be in the form of salt.
  • the salt of the compound represented by the formula (I) include salts with inorganic acids such as hydrochloric acid and hydrobromic acid, and acetic acid, propionic acid, tartaric acid, fumaric acid, maleic acid, malic acid, oxalic acid, Examples thereof include salts with organic acids such as succinic acid, citric acid and benzoic acid. These salts are produced by a method known per se.
  • the compound represented by the formula (I) may have geometrical isomers of E isomer having an E configuration and Z isomer having a Z configuration depending on the kind of the substituent.
  • the present invention includes these E-form, Z-form or a mixture containing E-form and Z-form at an arbitrary ratio.
  • the compound represented by the formula (I) may have an optically active substance due to the presence of one or two or more asymmetric carbon atoms, but all the compounds represented by the formula (I) are It includes an optically active substance or a racemate.
  • the compound represented by the formula (I) includes a ketone compound and H 2 N—X—R 1 (wherein X and R 1 have the above meanings, for example, a hydrazide compound, Semicarbazide compounds, etc.), each in an amount of 1 equivalent, and reacted in a solvent such as toluene, 1,4-dioxane, N,N-dimethylformamide, dimethylsulfoxide at a temperature range of 100° C. or higher for 1 hour to 3 days. Is preferred.
  • the reaction mixture can be precipitated by adding distilled water, or if it is not precipitated, the target compound can be obtained by subjecting it to a usual post-treatment such as extraction with an organic solvent and concentration. Further, when purification is required, it can be separated and purified by any purification method such as recrystallization, column chromatography, thin layer chromatography, liquid chromatography fractionation and the like.
  • optically active substance due to the presence of one or two or more asymmetric carbon atoms is present among the compounds represented by the formula (I), for example, the above-mentioned Synthesis Example using a raw material of the optically active substance
  • the optically active compound can be obtained by synthesizing according to the method described in 1 above or by performing optical resolution from the racemate of the compound by liquid chromatography using a chiral column, supercritical fluid chromatography, or the like.
  • the present invention provides an anticancer agent (hereinafter sometimes referred to as “the anticancer agent of the present invention” or the like) containing the compound represented by the formula (I) or a salt thereof described below.
  • X is —NHCO—
  • R 1 is —Y—NH—Z—Ar
  • Y and Z each independently have a single bond or a substituent. Which is an optionally substituted alkylene group having 1 to 6 carbon atoms, Ar is an aryl group which may have a substituent or a heteroaryl group which may have a substituent), and R 2 is Is an alkyl group having 1 to 6 carbon atoms which may have a substituent, R 3 is a hydroxyl group, and n is an integer of 0, 1 or 2. ⁇ .
  • Z is an alkylene group which may have a substituent (more preferably, an alkylene group having no substituent, particularly preferably a methylene group).
  • Ar is an aryl group which may have a substituent (more preferably a halogen atom, a methyl group, a hydroxyl group or a methoxy group) (more preferably, an aryl group having a hydroxyl group or a substituent).
  • R 2 is an alkyl group having 1 to 6 carbon atoms which may have a substituent (more preferably has a substituent).
  • n is an integer of 0, 1 or 2 and n is preferably 0.
  • Y is an alkylene group having 1 to 6 carbon atoms which may have a substituent (more preferably, an alkylene group having 1 to 6 carbon atoms having a substituent, particularly preferably a methyl group or When it is a methylene group substituted with an ethyl group, Z is a single bond and Ar is an aryl group which may have a substituent (more preferably, an aryl group having a substituent).
  • a halogeno group a methyl group, a hydroxyl group or an ethoxy group, a phenyl group or a naphthyl group
  • an optionally substituted heteroaryl group more preferably, a hetero group having a substituent
  • An aryl group particularly preferably a halogeno group, a methyl group, a hydroxyl group or a pyridyl group having an ethoxy group
  • R 2 is an alkyl group having 1 to 6 carbon atoms which may have a substituent (more preferably, , An alkyl group having 1 to 6 carbon atoms which does not have a substituent, particularly preferably a methyl group, an ethyl group, or an isobutyl group), and n is an integer of 0, 1 or 2, and preferably, n is 0.
  • the compound represented by formula (I) is as follows.
  • (A) X is -NHCO-;
  • R 1 is -Y-NH-Z-Ar;
  • Y and Z each independently represent a single bond or an alkylene group having 1 to 6 carbon atoms which may have a substituent selected from a C 1-6 alkyl group (eg, methyl, ethyl) (eg, Methylene);
  • Ar represents an aryl group (eg, phenyl) which may have a substituent selected from a halogen atom (eg, fluorine atom) and a hydroxyl group, or a substituent selected from a halogen atom (eg, fluorine atom, chlorine atom).
  • a heteroaryl group which may have eg, pyridyl
  • R 2 is an alkyl group having 1 to 6 carbon atoms (eg ethyl)
  • R 3 is a hydroxyl group
  • n is 0;
  • X is -NHCO-;
  • R 1 is -Y-NH-Z-Ar;
  • Y is an alkylene group having 1 to 6 carbon atoms (eg methylene) which may have a substituent selected from C 1-6 alkyl groups (eg methyl, ethyl);
  • Z is a single bond;
  • Ar is an aryl group optionally having a hydroxyl group (eg, phenyl) or a heteroaryl group optionally having a substituent selected from a halogen atom (eg, fluorine atom, chlorine atom) (eg, pyridyl)
  • R 2 is an alkyl group having 1 to 6 carbon atoms (eg ethyl);
  • R 3 is a hydroxyl group;
  • n is 0;
  • the specific compound used in the present invention may be any of the following compounds.
  • the application target of the anticancer agent of the present invention is not particularly limited as long as it is an animal that may suffer from cancer, but the application target of the anticancer agent of the present invention is usually a mammal, human, dog. , Cat, cow, sheep, pig, horse, mouse, rat and the like.
  • the subject to which the anticancer agent of the present invention is applied is a human.
  • the anticancer agent of the present invention may be in any shape when provided or stored.
  • the anticancer agent of the present invention may be in a solid form, a liquid form, a gel form or the like.
  • the anticancer agent of the present invention can be usually administered as an oral administration agent such as tablets, capsules, powders, granules, pills and syrups, a rectal administration agent, a transdermal absorption agent or an injection agent.
  • the agent can be administered as a single therapeutic agent or as a mixture with other therapeutic agents. Although they may be administered alone, they are generally administered in the form of pharmaceutical compositions. These preparations can be manufactured by a conventional method with addition of pharmacologically and pharmaceutically acceptable additives.
  • Oral solutions may be in the form of aqueous or oily suspensions, solutions, emulsions, syrups, elixirs, etc., or may be presented as a dry syrup prepared in water or another suitable solvent before use. Good.
  • the solutions may contain conventional additives such as suspending agents, flavoring agents, diluents or emulsifiers. When administered rectally, it can be administered as a suppository.
  • cocoa butter, laurin butter, macrogol, glycerogelatin, witepsol, sodium stearate or a mixture thereof may be used as a base, and an appropriate emulsifier, suspending agent or preservative may be used as necessary.
  • Etc. can be added. Injections include distilled water for injection, physiological saline, 5% glucose solution, solubilizers or solubilizers such as propylene glycol, pH adjusters, etc. to form an aqueous dosage form or a dissolution-type dosage form at the time of use. Pharmaceutical components such as tonicity agents and stabilizers are used.
  • formulation examples of the anticancer agent of the present invention and methods for preparing the same will be illustrated, but the invention is not limited thereto.
  • Formulation example 1 A granule containing the following ingredients is produced. 10 mg of a compound represented by the component formula (I) Lactose 700mg Corn starch 274mg HPC-L 16 mg 1000 mg in total
  • Formulation example 2 A powder for filling capsules containing the following ingredients is produced. 10 mg of a compound represented by the component formula (I) Lactose 79mg Corn starch 10mg Magnesium stearate 1 mg 100 mg in total
  • Formulation example 3 A granule for filling a capsule containing the following ingredients is manufactured. 15 mg of a compound represented by the component formula (I) Lactose 90mg Corn starch 42mg HPC-L 3 mg 150 mg in total
  • Formulation example 4 A tablet is prepared containing the following ingredients. 10 mg of a compound represented by the component formula (I) Lactose 90mg Microcrystalline cellulose 30mg Magnesium stearate 5 mg CMC-Na 15mg 150 mg in total
  • Formulation example 5 The intravenous preparation is manufactured as follows. 100 mg of the compound represented by the formula (I) Saturated fatty acid glyceride 1000mL
  • a compound represented by formula (I) is added to saturated fatty acid glyceride to obtain an intravenous preparation. Solutions of the above ingredients are usually administered intravenously to a patient at a rate of 1 mL per minute.
  • the dose is determined according to the age, sex, and condition of the patient, but in the case of a normal adult, generally, the active ingredient per 1 kg of the patient's body weight per day is The dose is about 0.01 mg to about 500 mg.
  • Administration can be a single dose or multiple doses.
  • the dosage of active ingredient is from about 0.1 mg/kg to about 250 mg/kg per day, more preferably from about 0.5 mg/kg to about 100 mg/kg per day.
  • the dosage of active ingredient is from about 0.01 mg/kg to about 250 mg/kg per day, from about 0.05 mg/kg to about 100 mg/kg per day, or from about 0.1 mg/kg to about daily.
  • the dosage of active ingredient may be 0.05 mg/kg to 0.5 mg/kg, 0.5 mg/kg to 5 mg/kg, or 5 mg/kg to 50 mg/kg per day.
  • the active ingredient is orally administered in an amount of 1 mg to 1000 mg, particularly 1 mg, 5 mg, 10 mg, 15 mg, 20 mg, 25 mg, 50 mg, 75 mg, 100 mg, 150 mg, 200 mg, 250 mg, 300 mg, Formulations containing dosages of 400 mg, 500 mg, 600 mg, 750 mg, 800 mg, 900 mg, or 1000 mg can be provided.
  • the anticancer agent of the present invention can be administered on a schedule of 1 to 4 times a day, preferably once or twice a day. These numerical values are merely examples, and the dose is determined according to the patient's symptoms.
  • the anticancer agent of the present invention can be administered in combination with an existing anticancer agent to enhance its anticancer effect.
  • existing anti-cancer agents include ferrotosis inducers, and examples thereof include sulfasalazine, elastin, Imidazole ketone elastin (IKE), simvastatin, artesunate, sorafenib, and the like.
  • prodrugs Derivatives of specific compounds used in the invention having a chemically or metabolically degradable group that produce a pharmacologically active compound of the invention by solvolysis or in vivo under physiological conditions are prodrugs. Can be used as Methods for selecting and producing appropriate prodrugs are described, for example, in Design of Prodrugs (Elsevier, Amsterdam 1985).
  • an acyloxy derivative obtained by reacting the compound with a suitable acyl halide or a suitable acid anhydride is exemplified as a prodrug.
  • acyloxy as a prodrug is -OCOC 2 H 5 , -OCO(t-Bu), -OCOC 15 H 31 , -OCO(m-CO 2 Na-Ph), -OCOCH 2 CH 2 CO 2 Na, -. OCOCH(NH 2 )CH 3 , -OCOCH 2 N(CH 3 ) 2 and the like can be mentioned.
  • an amide derivative produced by reacting the compound having an amino group with a suitable acid halide or a suitable mixed acid anhydride is exemplified as a prodrug. .
  • Particularly preferable amides as a prodrug include —NHCO(CH 2 ) 20 OCH 3 and —NHCOCH(NH 2 )CH 3 .
  • the cancer types to which the anticancer agent of the present invention can be applied include bladder cancer, breast cancer, colon cancer, colon cancer, kidney cancer, liver cancer, lung cancer, small cell lung cancer, non-small cell lung cancer, Head and neck cancer, esophageal cancer, gallbladder cancer, ovarian cancer, fallopian tube cancer, pancreatic cancer, gastric cancer, cervical cancer, thyroid cancer, prostate cancer, squamous cell cancer Including skin cancer, fibrosarcoma, rhabdomyosarcoma, astrocytoma, neuroblastoma, glioma, schwannoma, melanoma, uveal melanoma, ocular melanoma, metastatic brain tumor, seminoma, Examples include solid tumors such as genitourinary tumors, teratocarcinoma, osteosarcoma, xeroderma pigmentosum, keratoacanthoma, thyroid follicular carcinoma, and Kaposi's sarcom
  • the present invention also provides a method for treating cancer (hereinafter referred to as “method of the present invention”), which comprises administering an effective amount of a compound represented by the following formula (I) or a salt thereof to a subject in need thereof. Sometimes referred to as):
  • the compound represented by the formula (I), the subject to be treated, the dose, the administration route, the number of administrations, applicable cancer types, etc. are described in [1. The same as those described in [Anticancer agent].
  • the ketone of 2′,4′-dihydroxy-3′-methylpropiophenone (also referred to as “k-1”) can be synthesized by a method known per se (Sum TH et al., Tetrahedron. 2015 Jul 1;71(26-27): 4557-4564.).
  • hydrazine of 2-(phenylamino)acetohydrazide (also referred to as “H-1”) can be synthesized by a method known per se (Samal RP et al., Chem Biol Drug Des. 2013). Jun;81(6):715-29.).
  • the reaction solution was ice-cooled, water (1.5 mL), 15% aqueous sodium hydroxide solution (1.5 mL) and water (4.5 mL) were sequentially added, and the mixture was stirred at room temperature for 3 hours.
  • the obtained solid was washed by suspension with IPE and dried under reduced pressure to give 3-(aminomethyl)phenol (149) (477 mg, 3.87 mmol, yield 73%) as a white solid.
  • D-alanine methyl hydrochloride (157) (1.40 g, 10.0 mmol), 3-benzyloxyphenylboronic acid (158) (3.43 g, 15.1 mmol), copper(II) acetate monohydrate (3 (0.000 g, 15.1 mmol) and molecular sieve 4A (MS4A; 20 g) were suspended in methylene chloride (200 mL), triethylamine (4.17 mL, 30.1 mmol) was added, and the mixture was stirred under an oxygen atmosphere at room temperature for 23 hours.
  • MS4A molecular sieve 4A
  • the compound represented by the formula (I) can be synthesized according to the above Synthesis Examples 1 and 2.
  • Table 1 shows examples of the compound represented by the formula (I) synthesized by the above-mentioned synthesis example, but the specific compound used in the present invention is not limited thereto.
  • R 5 is a substituent of the aryl group, and the substituent of the aryl group is the same as described above.
  • the description of "-" in (R 3 ) n and (R 5 ) m represents no substitution.
  • the number described in the structural formula represents the substitution position of (R 3 ) n or (R 5 ) m . n is 0, 1 or 2 and m is 0, 1, 2, 3, 4 or 5. When a plurality of R 5's are present, the R 5's may be the same or different.
  • the proton nuclear magnetic resonance chemical shift value was measured at 270 MHz or 400 MHz in heavy dimethyl sulfoxide, with the value of heavy dimethyl sulfoxide being 2.49 ppm.
  • the symbols in the table have the following meanings. s: singlet, brs: broad singlet, d: doublet, dd: double doublet, t: triplet, q: quartet, m: multiplet.
  • Example 1 Antitumor test by orthotopic transplantation model using mouse cancer cells (Mouse cancer cell culture) Mouse breast cancer cell line 4T1 (American Type Culture Collection) was used as the cells. RPMI-1640 medium (manufactured by Fujifilm Wako Pure Chemical Industries) containing 10% FBS (manufactured by BioSera) and 1 mM sodium pyruvate solution (manufactured by Fujifilm Wako Pure Chemical Industries) was used for cell culture. The cells were statically cultivated for 2 days or more using a petri dish (medium 10 mL) having a diameter of 10 cm in a state of maintaining a 5% carbon dioxide concentration in a 37° C./CO 2 incubator.
  • a petri dish medium 10 mL
  • the cells were washed with 5 ml of PBS, then 5 mL of 0.5 mM EDTA/PBS solution (manufactured by Nacalai Tesque, Inc.) was added, and the cells were peeled off and suspended.
  • This suspension was centrifuged (Tomy Seiko Co., Ltd., model number LC-200, 1000 rpm/3 minutes, room temperature), the supernatant was removed, and ice-cooled DMEM (Fujifilm Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) was added.
  • a cell suspension was prepared.
  • a part of the cells was suspended in trypan blue (manufactured by Fujifilm Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) and counted by counting the number of viable cells with TC-20 (manufactured by BIO-RAD).
  • the cells were diluted and prepared with ice-cold DMEM so as to be 5 ⁇ 10 6 cells/mL, and used as a cell suspension for mouse transplantation.
  • the individuals in which tumor engraftment was observed were indiscriminately divided into groups of five. From immediately after grouping to 7 days after, the administration liquid containing the specific compound used in the present invention was administered to the mice once a day. The dose was 100 mg/10 mL/kg, compound k-1:B-1 was intraperitoneally administered, and compound k-1:J-1 was subcutaneously administered to the back. On the other hand, the control group was administered with only 0.5 w/v% methylcellulose 400 solution at a dose of 10 mL/kg.
  • the major axis, minor axis and thickness of the tumor were measured using a digital caliper (manufactured by Mitutoyo Co., Ltd.) to obtain a calculation formula (major axis ⁇ minor axis ⁇ thickness ⁇ /6). ) was used to calculate the approximate tumor volume.
  • Example 2 Cell survival test under induction of ferrocytosis (human cancer cell culture) Human sarcoma cell line HT-1080 (manufactured by ATCC) was used as the cells.
  • An E-MEM medium manufactured by FUJIFILM Wako Pure Chemical Industries, Ltd.
  • FBS manufactured by BioSera
  • the cells were statically cultivated for 2 days or more using a petri dish (medium 10 mL) having a diameter of 10 cm in a state of maintaining a 5% carbon dioxide concentration in a 37° C./CO 2 incubator.
  • the HT-1080 cell suspension was prepared at 6.25 ⁇ 10 4 cells/mL, and seeded in a 96-well U-bottom plate (Sumitomo Bakelite Co., Ltd.) at 5000 cells/80 ⁇ L/well.
  • IKE Imidazole ketone elastin
  • DMSO dimethyl sulfoxide
  • Fer-1 ferrostatin-1
  • the diluted solution was added to the cells in an amount of 20 ⁇ L/well so that the final concentration of IKE was 0.05 ⁇ M, the final concentration of Fer-1 was 1 ⁇ M, and the final concentration of the specific compound used in the present invention was 1 ⁇ M or 5 ⁇ M.
  • An equal amount of DMSO manufactured by FUJIFILM Wako Pure Chemical Industries, Ltd. was added to the specific compound and the Fer-1 non-added group used in the present invention. After adding the compound, the cells were cultured for 24 hours in a 37° C./CO 2 incubator.
  • the number of viable cells was measured using an ATP reagent (Promega, CellTiter-Glo (registered trademark) Luminescent Cell Viability Assay). 100 ⁇ L/well of the ATP reagent was added to and suspended in the culture medium 24 hours after the compound treatment, and 100 ⁇ L/well of the suspension was transferred to a white plate for assay (Corning, #3912). After standing at room temperature for 10 minutes, the amount of luminescence was measured using a plate reader (Perkin Elmer, EnSpire).
  • the cell viability was inhibited by 50% or 70% or more by adding the following compound.
  • the reduced survival rates were all recovered to 90% or more by the simultaneous addition of the ferrotosis inhibitor. That is, the induction of ferrotosis was promoted by the addition of the following compounds. From this, it was shown that the specific compound used in the present invention has an effect of enhancing the anticancer action by ferrocytosis.
  • Example 3 Cell survival test under induction of ferrocytosis (human cancer cell culture) Human sarcoma cell line HT-1080 (manufactured by ATCC) was used as the cells.
  • An E-MEM medium manufactured by FUJIFILM Wako Pure Chemical Industries, Ltd.
  • FBS manufactured by BioSera
  • the cells were statically cultivated for 2 days or more using a petri dish (medium 10 mL) having a diameter of 10 cm in a state of maintaining a 5% carbon dioxide concentration in a 37° C./CO 2 incubator.
  • the HT-1080 cell suspension was prepared at 6.25 ⁇ 10 4 cells/mL, and seeded in a 96-well U-bottom plate (Sumitomo Bakelite Co., Ltd.) at 5000 cells/80 ⁇ L/well.
  • Sorafenib manufactured by Selleck Chemicals
  • DMSO a ferrotosis inhibitor Ferrostatin-1
  • Fer-1 a ferrotosis inhibitor Ferrostatin-1
  • the final concentration of sorafenib was 1.0 ⁇ M
  • the final concentration of Fer-1 was 1 ⁇ M
  • the final concentration of the specific compound used in the present invention was 1 ⁇ M or 5 ⁇ M.
  • An equal amount of DMSO manufactured by FUJIFILM Wako Pure Chemical Industries, Ltd. was added to the specific compound and the Fer-1 non-added group used in the present invention. After adding the compound, the cells were cultured for 24 hours in a 37° C./CO 2 incubator.
  • the number of viable cells was measured using an ATP reagent (Promega, CellTiter-Glo (registered trademark) Luminescent Cell Viability Assay). 100 ⁇ L/well of the ATP reagent was added to and suspended in the culture medium 24 hours after the compound treatment, and 100 ⁇ L/well of the suspension was transferred to a white plate for assay (Corning, #3912). After standing at room temperature for 10 minutes, the amount of luminescence was measured using a plate reader (Perkin Elmer, EnSpire).
  • the cell viability was inhibited by 50% or more by adding the following compound.
  • the reduced survival rates were all recovered to 90% or more by the simultaneous addition of the ferrotosis inhibitor. That is, the induction of ferrotosis was promoted by the addition of the following compounds. From this, it was shown that the specific compound used in the present invention has an effect of enhancing the anticancer action by ferrocytosis.
  • the malignant tumor can be reduced by administering the anticancer agent of the present invention. Therefore, the anticancer agent of the present invention can be suitably used for the treatment of various cancers and is extremely useful in the medical field.

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Abstract

新規のがん治療手段の提供。下記、式（Ｉ）で示される化合物またはその塩を含む、抗がん剤：｛式中、各記号は明細書中で定義される通りである。｝。

Description

抗がん剤
　本発明は、新規のがん治療剤およびそれを用いたがんの治療方法に関する。
　がんは、主要な死因として世界中の人々の健康を脅かしている。がんを治療するための重要な方法の一つとして、抗がん剤を用いた化学療法が挙げられる。化学療法は有効な治療手段の一つとして、多くのがん種の治療において採用されている。しかしながら、化学療法によりあらゆる種のがんが治療できるわけではない。また、化学療法を用いることができるがん種の場合に、既存の化学療法の治療効果が十分とは言い難い。従って、適用し得るがん種が拡張され、及び／又は、より高い腫瘍退縮効果を有する、新規抗がん剤の開発が強く求められている（非特許文献１）。
Kumar S et al, Med. Chem. 2015 5 (3):115-123
　本発明は、がん治療の新規手段を提供することを目的とする。
　本発明者らは、上記課題に対して鋭意検討した結果、特定の化合物の投与が、マウスに移植されたがん細胞の体積を減少させ得ることを見出し、かかる知見に基づいてさらに研究を進めることによって本発明を完成するに至った。すなわち、本発明は以下の通りである。
［１］下記、式（Ｉ）で示される化合物またはその塩を含む、抗がん剤：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000013
｛式中、Ｘは、－ＮＨＣＯ－であり、Ｒ１は、－Ｙ－ＮＨ－Ｚ－Ａｒであり（式中、ＹおよびＺは、それぞれ独立して、単結合、または置換基を有していてもよい炭素数１～６のアルキレン基であり、Ａｒは、置換基を有していてもよいアリール基または置換基を有していてもよいヘテロアリール基である。）、Ｒ２は、置換基を有していてもよい炭素数１～６のアルキル基であり、Ｒ３は、水酸基であり、ｎは、０、１または２の整数である。｝。
［２］Ｒ２が、メチル基、エチル基、またはイソブチル基であり、
　ｎが０であり、
　Ａｒが、それぞれハロゲノ基、水酸基またはメチル基で置換されていてもよいフェニル基またはピリジル基であり、
　Ｙが、メチル基またはエチル基で置換されていてもよいメチレン基である、
［１］記載の剤。
［３］式（Ｉ）で示される化合物が、以下で示される化合物またはその塩である、［１］又は［２］記載の剤。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000014
または、
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000015
または、
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000016
または、
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000017
または、
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000018
または、
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000019
または、
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000020
または、
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000021
［４］式（Ｉ）で示される化合物が、以下で示される化合物またはその塩である、［１］記載の剤。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000022
または、
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000023
［５］がんが、乳がんまたは肉腫である、［１］～［４］のいずれかに記載の剤。
［６］有効量の下記式（Ｉ）で示される化合物またはその塩を、それを必要とする対象に投与することを含む、がんの治療方法：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000024
｛式中、Ｘは、－ＮＨＣＯ－であり、Ｒ１は、－Ｙ－ＮＨ－Ｚ－Ａｒであり（式中、ＹおよびＺは、それぞれ独立して、単結合、または置換基を有していてもよい炭素数１～６のアルキレン基であり、Ａｒは、置換基を有していてもよいアリール基または置換基を有していてもよいヘテロアリール基である。）、Ｒ２は、置換基を有していてもよい炭素数１～６のアルキル基であり、Ｒ３は、水酸基であり、ｎは、０、１または２の整数である。｝。
［７］フェロトーシス誘導剤との併用を特徴とする［６］記載の方法。
　本発明はまた、以下の通りである。
［１Ａ］下記、式（Ｉ）で示される化合物またはその塩を含む、抗がん剤：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000025
｛式中、Ｘは、－ＮＨＣＯ－であり、Ｒ１は、－Ｙ－ＮＨ－Ｚ－Ａｒであり（式中、Ｙ、およびＺは、単結合、または置換基を有していてもよい炭素数１～６のアルキレン基であり、Ａｒは、置換基を有していてもよいアリール基である。）、Ｒ２は、置換基を有していてもよい炭素数１～６のアルキル基であり、Ｒ３は、水酸基であり、ｎは、０、１または２である。｝。
［２Ａ］Ｒ２が、メチル基、エチル基、またはイソブチル基であり、
　ｎが０であり、
　Ａｒが、水酸基またはメチル基で置換されていてもよいフェニル基であり、
　Ｙが、メチル基またはエチル基で置換されていてもよいメチレン基である、
［１Ａ］記載の剤。
［３Ａ］式（Ｉ）で示される化合物が、以下で示される化合物である、［１Ａ］又は［２Ａ］記載の剤。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000026
［４Ａ］式（Ｉ）で示される化合物が、以下で示される化合物である、［１Ａ］記載の剤。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000027
［５Ａ］がんが、乳がんである、［１Ａ］～［４Ａ］のいずれかに記載の剤。
［６Ａ］有効量の下記式（Ｉ）で示される化合物またはその塩を、それを必要とする対象に投与することを含む、がんの治療方法：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000028
｛式中、Ｘは、－ＮＨＣＯ－であり、Ｒ１は、－Ｙ－ＮＨ－Ｚ－Ａｒであり（式中、Ｙ、およびＺは、単結合、または置換基を有していてもよい炭素数１～６のアルキレン基であり、Ａｒは、置換基を有していてもよいアリール基である。）、Ｒ２は、置換基を有していてもよい炭素数１～６のアルキル基であり、Ｒ３は、水酸基であり、ｎは、０、１または２である。｝。
　本発明によれば、腫瘍或いはがん細胞の増殖を効率的に抑制することができる。従って、本発明によれば、がんを治療することができる。
　本明細書において使用する用語を以下に定義する。
　本明細書において、ｎ－はノルマル、ｉ－はイソ、ｓｅｃ－はセカンダリー及びｔｅｒｔ－はターシャリーを各々意味する。また、本明細書において、ｏ－はオルト、ｍ－はメタ及びｐ－はパラを各々意味する。
　「ハロゲン原子」とは、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子である。「ハロゲノ基」とは、フルオロ、クロロ、ブロモ、ヨードである。
　「炭素数１～６のアルキル基」とは、炭素数１～６の直鎖または分岐状のアルキル基を意味し、具体的には、メチル、エチル、ｎ－プロピル、イソプロピル、ｎ－ブチル、イソブチル、ｓｅｃ－ブチル、ｔｅｒｔ－ブチル、ｎ－ペンチル、イソペンチル、ｔｅｒｔ－ペンチル、ネオペンチル、２－ペンチル、３－ペンチル、ｎ－ヘキシル、２－ヘキシル等の基が挙げられる。かかるアルキル基としては、炭素数１～４の低級アルキル基、特にメチル基及びエチル基が好ましい。
　「アリール基」とは、少なくとも１つの環が芳香族であり、各環が５～８の環原子を有する単環式、二環式、三環式および四環式炭素環式基が挙げられ、具体的には、フェニル、インデニル、ナフチル、フルオレニル等が挙げられる。特に、アリール基は、Ｃ６－１０の芳香族のフェニル、インデニル、ナフチルであり得る。
　「ヘテロアリール基」とは、酸素原子、窒素原子、硫黄原子を１～３原子単独若しくは組み合わせて含むことができる５～７員環までのＣ２-６単環式複素環基及び構成原子数が８～１０までのＣ５-９縮合二環式複素環基を意味し、窒素原子を含む場合はＮ－オキシド体も含む。
　「炭素数１～６のアルキレン基」とは、炭素数１～６の直鎖の炭素鎖を意味し、具体的には、メチレン、エチレン、プロピレン、ブチレン、ペンチレン、ヘキシレン等の基が挙げられる。
　「炭素数１～６のアルキル基」、「アリール基」、「ヘテロアリール基」及び「炭素数１～６のアルキレン基」は、それぞれ置換基を有していてもよく、そのような置換基としては、例えば以下が挙げられる。尚、「炭素数１～６のアルキル基」に対する置換基としては下記（１）～（４０）が挙げられ、「アリール基」、「ヘテロアリール基」及び「炭素数１～６のアルキレン基」に対する置換基としては下記（１）～（４１）が挙げられる。
(1)ハロゲノ基、
(2)水酸基、
(3)シアノ基、
(4)ニトロ基、
(5)カルボキシル基、
(6)アルケニル基（Ｃ２－１０アルケニル基；例、ビニル、アリル、プロペニル、ブテニル、ペンテニル、へキセニル、ヘプテニル、ブタジエニル、ヘキサトリエニル、およびその各異性体）、
(7)アルキニル基（Ｃ２－１０アルキニル基；例、エチニル、プロピニル、ブチニル、ペンチニル、ヘキシニル、および、その各異性体）、
(8)ハロゲノアルキル基（例、モノフルオロメチル、ジフルオロメチル、トリフルオロメチル、モノフルオロエチル、ジフルオロエチル、トリフルオロエチル、クロロメチル、クロロエチル、ジクロロエチル、およびその各異性体）、
(9)環状アルキル基（環中にヘテロ原子を含んでもよい）（例、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロピラニル、アジリジニル、アゼチジニル、ピロリジニル、ピペリジニル、モルホリニル）、
(10)アリール基（例、フェニル、ナフチル）、
(11)ヘテロアリール基（例、ピリジル、ピリダジニル、ピリミジニル、ピラジニル、フリル、チオフェニル、ピロリル、ピラゾリル、イミダゾリル、トリアゾリル（例、１，２，３－トリアゾリル、１，２，４－トリアゾリル）、テトラゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、オキサジアゾリル（例、１，２，３－オキサジアゾリル、１，２，４－オキサジアゾリル、１，３，４－オキサジアゾリル）、チアジアゾリル（例、１，２，３－チアジアゾリル、１，２，４－チアジアゾリル、１，３，４－チアジアゾリル）、ベンゾフリル、ベンゾチオフェニル、インドリル、イソインドリル、ベンゾオキサゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンズイミダゾリル、インダゾリル、ベンズイソオキサゾリル、ベンズイソチアゾリル、ベンゾオキサジアゾリル、ベンゾチアジアゾリル、プリニル、キノリニル、イソキノリニル、シンノリニル、フタラジニル、キナゾリニル、キノキサリニル、プテリジニル、イミダゾオキサゾリル、イミダゾチアゾリル、イミダゾイミダゾリル）、
(12)アルコキシ基（例、メトキシ、エトキシ、ｎ－プロポキシ、イソプロポキシ、ｎ－ブトキシ、イソブトキシ、ｓｅｃ－ブトキシ、ｔｅｒｔ－ブトキシ、ｎ－ペンチルオキシ、イソペンチルオキシ、ｔｅｒｔ－ペンチルオキシ、ネオペンチルオキシ、２－ペンチルオキシ、３－ペンチルオキシ、ｎ－ヘキシルオキシ、２－ヘキシルオキシ）、
(13)アルキルチオ基（例、メチルチオ、エチルチオ、ｎ－プロピルチオ、イソプロピルチオ、ｎ－ブチルチオ、イソブチルチオ、ｓｅｃ－ブチルチオ、ｔｅｒｔ－ブチルチオ、ｎ－ペンチルチオ、イソペンチルチオ、ｔｅｒｔ－ペンチルチオ、ネオペンチルチオ、２－ペンチルチオ、３－ペンチルチオ、ｎ－ヘキシルチオ、２－ヘキシルチオ）、
(14)アリール基（上記(10)と同義）で置換された、アルコキシ基（上記(12)と同義）、
(15)アリール基（上記(10)と同義）で置換された、アルキルチオ基（上記(13)と同義）、
(16)ヘテロアリール基（上記(11)と同義）で置換された、アルコキシ基（上記(12)と同義）、
(17)ヘテロアリール基（上記(11)と同義）で置換された、アルキルチオ基（上記(13)と同義）、
(18)環状アルキル（環中にヘテロ原子を含んでもよい）オキシ基（例、シクロプロピルオキシ、シクロブチルオキシ、シクロペンチルオキシ、シクロヘキシルオキシ、テトラヒドロフラニルオキシ、テトラヒドロピラニルオキシ、アジリジニルオキシ、アゼチジニルオキシ、ピロリジニルオキシ、ピペリジニルオキシ、モルホリニルオキシ）、
(19)アリールオキシ基（例、アリール基（上記(10)と同義）が酸素原子に結合した基）、
(20)ヘテロアリールオキシ基（例、ヘテロアリール基（上記(11)と同義）が酸素原子に結合した基）、
(21)ハロゲノアルコキシ基（例、ハロゲノアルキル基（上記(8)と同義）が酸素原子に結合した基）、
(22)ハロゲノアルキルチオ基（例、ハロゲノアルキル基（上記(8)と同義）が硫黄原子に結合した基）、
(23)水酸基で置換された、アルコキシ基（上記(12)と同義）、
(24)アルコキシ基（上記(12)と同義）で置換された、アルコキシ基（上記(12)と同義）、
(25)アミノ基、
(26)アルキル基でモノまたはジ置換されたアミノ基、
　ここで、「アルキル基」とは、Ｃ１－６アルキル基が挙げられ、具体的には、メチル、エチル、ｎ－プロピル、イソプロピル、ｎ－ブチル、イソブチル、ｓｅｃ－ブチル、ｔｅｒｔ－ブチル、ｎ－ペンチル、イソペンチル、ｔｅｒｔ－ペンチル、ネオペンチル、２－ペンチル、３－ペンチル、ｎ－ヘキシル、２－ヘキシル等が挙げられる。
(27)カルバモイル基、
(28)アルキル基（上記(26)における「アルキル基」と同義）でモノまたはジ置換されたカルバモイル基（例、メチルカルバモイル、エチルカルバモイル、ジメチルカルバモイル、ジエチルカルバモイル、エチルメチルカルバモイル）、
(29)スルファモイル基、
(30)アルキル基（上記(26)における「アルキル基」と同義）でモノまたはジ置換されたスルファモイル基（例、メチルスルファモイル、エチルスルファモイル、ジメチルスルファモイル、ジエチルスルファモイル、エチルメチルスルファモイル）、
(31)アルカノイル基（例、水素原子若しくはアルキル基（上記(26)における「アルキル基」と同義）が炭素原子に結合したカルボニル基）、
(32)アロイル基（例、アリール基（上記（10）と同義）が炭素原子に結合したカルボニル基）、
(33)アルキルスルホニルアミノ基（例、アルキル基（上記(26)における「アルキル基」と同義）で置換されたスルホニルアミノ基）、
(34)アリールスルホニルアミノ基（例、アリール基（上記（10）と同義）で置換されたスルホニルアミノ基）、
(35)へテロアリールスルホニルアミノ基（例、ヘテロアリール基（上記（11）と同義）で置換されたスルホニルアミノ基）、
(36)アシルアミノ基（例、アシル基で置換されたアミノ基）、
　ここで、「アシル基」とは、Ｃ１－６アルキル基、またはＣ６－１０アリール基を有するアシル基である。ここで、「Ｃ１－６アルキル基」とは、上記「アルキル基」のうち、炭素数が１～６のものであり、「Ｃ6－１０アリール基」とは、上記「アリール基」のうち、炭素数が６～１０のものである。アシル基としては、具体的には、アセチル基、プロピオニル基、ブチロイル基、イソブチロイル基、バレロイル基、イソバレロイル基、ピバロイル基、ヘキサノイル基、アクリロイル基、メタクリロイル基、クロトノイル基、イソクロトノイル基、ベンゾイル基、ナフトイル基等が挙げられる。
(37)アルコキシカルボニルアミノ基（例、アルコキシ基（上記(12)と同義）で置換されたカルボニルアミノ基）、
(38)アルキルスルホニル基（例、アルキル基（上記(26)における「アルキル基」と同義）で置換されたスルホニル基）、
(39)アルキルスルフィニル基（例、アルキル基（上記(26)における「アルキル基」と同義）で置換されたスルフィニル基）、
(40)アルコキシカルボニル基（例、メトキシカルボニル基、エトキシカルボニル基）、
(41)アルキル基（Ｃ1－６アルキル基；例、メチル、エチル、ｎ－プロピル、イソプロピル、ｎ－ブチル、イソブチル、ｓｅｃ－ブチル、ｔｅｒｔ－ブチル、ｎ－ペンチル、イソペンチル、ｔｅｒｔ－ペンチル、ネオペンチル、２－ペンチル、３－ペンチル、ｎ－ヘキシル、２－ヘキシル等）等が挙げられる。
　置換基が２以上存在する場合は、それらは同一でも異なっていてもよい。
　本発明において用いられる特定化合物は、下記式（Ｉ）に示される。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000029
｛式中、Ｘは、－ＮＨＣＯ－であり、Ｒ１は、－Ｙ－ＮＨ－Ｚ－Ａｒであり（式中、ＹおよびＺは、それぞれ独立して、単結合、または置換基を有していてもよい炭素数１～６のアルキレン基であり、Ａｒは、置換基を有していてもよいアリール基または置換基を有していてもよいヘテロアリール基である。）、Ｒ２は、置換基を有していてもよい炭素数１～６のアルキル基であり、Ｒ３は、水酸基であり、ｎは、０、１または２の整数である。｝で表される化合物、またはその塩である（以下、式（Ｉ）で示される化合物またはその塩を総称して、単に「本発明に用いられる特定化合物」等と称する場合がある）。
　式（Ｉ）で示される化合物は、塩の形態であってもよい。前記式（Ｉ）で表される化合物の塩としては、例えば、塩酸及び臭化水素酸等の無機酸との塩ならびに酢酸、プロピオン酸、酒石酸、フマル酸、マレイン酸、リンゴ酸、シュウ酸、コハク酸、クエン酸及び安息香酸等の有機酸との塩が挙げられる。これらの塩は、自体公知の方法によって製造される。
　式（Ｉ）で示される化合物は、置換基の種類によってはＥの立体配置を有するＥ体及びＺの立体配置を有するＺ体の幾何異性体が存在する場合がある。本発明はこれらＥ体、Ｚ体またはＥ体およびＺ体を任意の割合で含む混合物を包含するものである。
　また、式（Ｉ）で示される化合物は、１個又は２個以上の不斉炭素原子の存在に起因する光学活性体が存在する場合があるが、式（Ｉ）で示される化合物は全ての光学活性体又はラセミ体を包含する。
［式（Ｉ）で示される化合物の合成］
　式（Ｉ）で示される化合物は、下記式で表されるように、ケトン化合物とＨ２Ｎ－Ｘ－Ｒ１（式中、Ｘ及びＲ１は前記の意味を表し、例えば、ヒドラジド化合物、セミカルバジド化合物等）、それぞれを１当量ずつ用い、トルエン、１,４－ジオキサン、Ｎ、Ｎ－ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド等の溶媒中、１００℃以上の温度範囲で、１時間から３日間反応を行なうのが好ましい。
［反応式１］
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000030
　反応終了後の反応混合物は、蒸留水を加えて析出させる、又は析出しない場合は、有機溶媒抽出後濃縮といった通常の後処理を行なうことで、目的の化合物を得ることができる。また、精製の必要が生じたときには、再結晶、カラムクロマトグラフ、薄層クロマトグラフ、液体クロマトグラフ分取等の任意の精製方法によって分離、精製することができる。また、式（Ｉ）で示される化合物のうち、１個又は２個以上の不斉炭素原子の存在に起因する光学活性体が存在する場合、例えば、光学活性体の原料を用いて前記合成例に準じた方法により合成するか、当該化合物のラセミ体より、キラルカラムを用いた液体クロマトグラフィー、超臨界流体クロマトグラフィー等による光学分割を行うことにより、光学活性体を得ることができる。
［1.抗がん剤］
　本発明は、下記、式（Ｉ）で示される化合物またはその塩を含む、抗がん剤（以下、「本発明の抗がん剤」等と称することがある）を提供する。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000031
｛式中、Ｘは、－ＮＨＣＯ－であり、Ｒ１は、－Ｙ－ＮＨ－Ｚ－Ａｒであり（式中、ＹおよびＺは、それぞれ独立して、単結合、または置換基を有していてもよい炭素数１～６のアルキレン基であり、Ａｒは、置換基を有していてもよいアリール基または置換基を有していてもよいヘテロアリール基である。）、Ｒ２は、置換基を有していてもよい炭素数１～６のアルキル基であり、Ｒ３は、水酸基であり、ｎは、０、１または２の整数である。｝。
　一態様において、Ｙが、単結合である場合は、Ｚは、置換基を有していてもよいアルキレン基（より好ましくは、置換基を有していないアルキレン基、特に好ましくは、メチレン基）であり、Ａｒは置換基（より好ましくは、ハロゲン原子、メチル基、水酸基、またはメトキシ基）を有していてもよいアリール基（より好ましくは、水酸基を有するアリール基または置換基を有していないアリール基、特に好ましくはフェニル基または水酸基を有するフェニル基）であり、Ｒ２は、置換基を有していてもよい炭素数１～６のアルキル基（より好ましくは、置換基を有していない炭素数１～６のアルキル基、特に好ましくは、エチル基）であり、ｎは、０、１または２の整数であり、好ましくは、ｎは０である。
　また、Ｙが、置換基を有していてもよい炭素数１～６のアルキレン基（より好ましくは、置換基を有している炭素数１～６のアルキレン基、特に好ましくは、メチル基またはエチル基で置換されたメチレン基）である場合は、Ｚは、単結合であり、Ａｒは、置換基を有していてもよいアリール基（より好ましくは、置換基を有しているアリール基、特に好ましくは、ハロゲノ基、メチル基、水酸基もしくはエトキシ基を有する、フェニル基またはナフチル基）または置換基を有していてもよいヘテロアリール基（より好ましくは、置換基を有しているヘテロアリール基、特に好ましくは、ハロゲノ基、メチル基、水酸基もしくはエトキシ基を有するピリジル基）であり、Ｒ２は、置換基を有していてもよい炭素数１～６のアルキル基（より好ましくは、置換基を有していない炭素数１～６のアルキル基、特に好ましくは、メチル基、エチル基、またはイソブチル基）であり、ｎは、０、１または２の整数であり、好ましくは、ｎは０である。
　本発明の別の好ましい態様において、式（Ｉ）で示される化合物は以下の通りである。
　（Ａ）
　Ｘが－ＮＨＣＯ－であり；
　Ｒ１が－Ｙ－ＮＨ－Ｚ－Ａｒであり；
　ＹおよびＺが、それぞれ独立して、単結合、またはＣ1－６アルキル基（例、メチル、エチル）から選ばれる置換基を有していてもよい炭素数１～６のアルキレン基（例、メチレン）であり；
　Ａｒが、ハロゲン原子（例、フッ素原子）および水酸基から選ばれる置換基を有していてもよいアリール基（例、フェニル）またはハロゲン原子（例、フッ素原子、塩素原子）から選ばれる置換基を有していてもよいヘテロアリール基（例、ピリジル）であり；
　Ｒ２が炭素数１～６のアルキル基（例、エチル）であり；
　Ｒ３が水酸基であり；
　ｎが０である；
式（Ｉ）で示される化合物。
　（Ｂ）
　Ｘが－ＮＨＣＯ－であり；
　Ｒ１が－Ｙ－ＮＨ－Ｚ－Ａｒであり；
　ＹがＣ1－６アルキル基（例、メチル、エチル）から選ばれる置換基を有していてもよい炭素数１～６のアルキレン基（例、メチレン）であり；
　Ｚが単結合であり；
　Ａｒが、水酸基を有していてもよいアリール基（例、フェニル）またはハロゲン原子（例、フッ素原子、塩素原子）から選ばれる置換基を有していてもよいヘテロアリール基（例、ピリジル）であり；
　Ｒ２が炭素数１～６のアルキル基（例、エチル）であり；
　Ｒ３が水酸基であり；
　ｎが０である；
式（Ｉ）で示される化合物。
　（Ｃ）
　Ｘが－ＮＨＣＯ－であり；
　Ｒ１が－Ｙ－ＮＨ－Ｚ－Ａｒであり；
　Ｙが単結合であり；
　Ｚが炭素数１～６のアルキレン基（例、メチレン）であり；
　Ａｒが、ハロゲン原子（例、フッ素原子）および水酸基から選ばれる置換基を有していてもよいアリール基（例、フェニル）であり；
　Ｒ２が炭素数１～６のアルキル基（例、エチル）であり；
　Ｒ３が水酸基であり；
　ｎが０である；
式（Ｉ）で示される化合物。
　好ましい一態様において、本発明に用いられる特定化合物は、以下のいずれかの化合物であり得る。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000032
または、
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000033
または、
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000034
または、
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000035
または、
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000036
または、
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000037
または、
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000038
または、
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000039
または、
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000040
または、
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000041
　本発明の抗がん剤の適用対象は、がんを罹患する可能性のある動物であれば特に限定されないが、本発明の抗がん剤の適用対象は通常哺乳動物であり、ヒト、イヌ、ネコ、ウシ、ヒツジ、ブタ、ウマ、マウス、ラット等が例示される。好ましくは、本発明の抗がん剤の適用対象はヒトである。
　本発明の抗がん剤は、提供時あるいは保存時に任意の形状であり得る。本発明の抗がん剤は、固形状、液体状、及びゲル状等の形状であり得る。本発明の抗がん剤は、通常錠剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤、丸剤、シロップ剤などの経口投与剤、直腸投与剤、経皮吸収剤あるいは注射剤として投与できる。本剤は１個の治療薬として、あるいはほかの治療薬との混合物として投与できる。それらは単体で投与してもよいが、一般的には医薬組成物の形態で投与する。それらの製剤は、薬理的、製剤学的に許容しうる添加物を加え、常法により製造することができる。すなわち、経口剤には通常の賦形剤、滑沢剤、結合剤、崩壊剤、湿潤剤、可塑剤、コーティング剤などの添加物を使用することができる。経口用液剤は、水性または油性懸濁液、溶液、乳濁液、シロップ、エリキシルなどの形態であってもよく、あるいは使用前に水またはほかの適当な溶媒で調製するドライシロップとして供されてもよい。前記の液剤は、懸濁化剤、香料、希釈剤あるいは乳化剤のような通常の添加剤を含むことができる。直腸内投与する場合は座剤として投与することができる。座剤はカカオ脂、ラウリン脂、マクロゴール、グリセロゼラチン、ウィテップゾール、ステアリン酸ナトリウムまたはそれらの混合物など、適当な物質を基剤として用い、必要に応じて乳化剤、懸濁化剤、保存剤などを加えることができる。注射剤は、水性剤形あるいは用時溶解型剤形を形成するために、注射用蒸留水、生理食塩水、5%ブドウ糖溶液、プロピレングリコールなどの溶解剤ないし溶解補助剤、ｐＨ調節剤、等張化剤、安定化剤などの製剤成分が使用される。以下に、本発明の抗がん剤の製剤例およびその調製方法を例示するが、これらに限定されるものではない。
製剤例１
　以下の成分を含有する顆粒剤を製造する。
成分
式（Ｉ）で表される化合物　　　１０ｍｇ
　　　　　　　　　　乳糖　　７００ｍｇ
　　　　　コーンスターチ　　２７４ｍｇ
　　　　　　　ＨＰＣ－Ｌ　　　１６ｍｇ
　　　　　　　　　　　計　１０００ｍｇ
　式（Ｉ）で表される化合物と乳糖を６０メッシュのふるいに通す。コーンスターチを１２０メッシュのふるいに通す。これらをＶ型混合機にて混合する。混合末に低粘度ヒドロキシプロピルセルロース（ＨＰＣ－Ｌ）水溶液を添加し、練合、造粒（押し出し造粒　孔径０．５～１ｍｍ）した後、乾燥する。得られた乾燥顆粒を振動ふるい（12/60メッシュ）で篩過し顆粒剤を得る。
製剤例２
　以下の成分を含有するカプセル充填用散剤を製造する。
成分
式（Ｉ）で表される化合物　　　１０ｍｇ
　　　　　　　　　　乳糖　　　７９ｍｇ
　　　　　コーンスターチ　　　１０ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム　　　　１ｍｇ
　　　　　　　　　　　計　　１００ｍｇ
　式（Ｉ）で表される化合物と乳糖を６０メッシュのふるいに通す。コーンスターチを１２０メッシュのふるいに通す。これらとステアリン酸マグネシウムをＶ型混合機にて混合する。１０倍散１００ｍｇを5号硬ゼラチンカプセルに充填する。
製剤例３
　以下の成分を含有するカプセル充填用顆粒剤を製造する。
成分
式（Ｉ）で表される化合物　　　１５ｍｇ
　　　　　　　　　　乳糖　　　９０ｍｇ
　　　　　コーンスターチ　　　４２ｍｇ
　　　　　　　ＨＰＣ－Ｌ　　　　３ｍｇ
　　　　　　　　　　　計　　１５０ｍｇ
　式（Ｉ）で表される化合物と乳糖を６０メッシュのふるいに通す。コーンスターチを１２０メッシュのふるいに通す。これらをＶ型混合機にて混合する。混合末に低粘度ヒドロキシプロピルセルロース（HPC-L）水溶液を添加し、練合、造粒した後、乾燥する。得られた乾燥顆粒を振動ふるい（12/60メッシュ）で篩過し整粒し、その１５０ｍｇを４号硬ゼラチンカプセルに充填する。
製剤例４
　以下の成分を含有する錠剤を製造する。
成分
式（Ｉ）で表される化合物　　　１０ｍｇ
　　　　　　　　　　乳糖　　　９０ｍｇ
　　　　微結晶セルロース　　　３０ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム　　　　５ｍｇ
　　　　　　　　　CMC-Na　　　１５ｍｇ
　　　　　　　　　　　計　　１５０ｍｇ
　式（Ｉ）で表される化合物と乳糖と微結晶セルロース、CMC-Na(カルボキシメチルセルロース ナトリウム塩)を６０メッシュのふるいに通し、混合する。混合末にステアリン酸マグネシウムを添加し、製剤用混合末を得る。本混合末を直打し錠剤を得る。
製剤例５
　静脈用製剤は次のように製造する。
式（Ｉ）で表される化合物　　　１００ｍｇ
　　飽和脂肪酸グリセリド　　１０００ｍＬ
　式（Ｉ）で表される化合物を飽和脂肪酸グリセリドに添加し、静脈用製剤を得る。上記成分の溶液は通常、1分間に１ｍＬの速度で患者に静脈内投与される。
　本発明の抗がん剤をヒトに投与する場合は、その投与量を患者の年齢、性別、状態により決定するが、通常成人の場合は、一般に、１日当たり、患者の体重１ｋｇ当たり有効成分が約０．０１ｍｇから約５００ｍｇとなるように投与される。投与は、単回投与又は複数回投与であり得る。好ましくは、有効成分の投与量は、１日当たり約０．１ｍｇ／ｋｇから約２５０ｍｇ／ｋｇ、さらに好ましくは１日当たり約０．５ｍｇ／ｋｇから約１００ｍｇ／ｋｇである。一態様において、有効成分の投与量は、１日当たり約０．０１ｍｇ／ｋｇから約２５０ｍｇ／ｋｇ、１日当たり約０．０５ｍｇ／ｋｇから約１００ｍｇ／ｋｇ、又は１日当たり約０．１ｍｇ／ｋｇから約５０ｍｇ／ｋｇとすることができる。この範囲内において、有効成分の投与量は１日当たり０．０５ｍｇ／ｋｇから０．５ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇから５ｍｇ／ｋｇ、又は５ｍｇ／ｋｇから５０ｍｇ／ｋｇであってもよい。治療対象の患者の症状を調節するために、経口投与において、有効成分を１ｍｇから１０００ｍｇ、特に１ｍｇ、５ｍｇ、１０ｍｇ、１５ｍｇ、２０ｍｇ、２５ｍｇ、５０ｍｇ、７５ｍｇ、１００ｍｇ、１５０ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇ、３００ｍｇ、４００ｍｇ、５００ｍｇ、６００ｍｇ、７５０ｍｇ、８００ｍｇ、９００ｍｇ、又は１０００ｍｇの用量で含有する製剤を提供することができる。本発明の抗がん剤は、１日当たり１から４回の計画、好ましくは１日当たり１回又は２回の計画で投与可能である。これらの数値はあくまでも例示であり、投与量は患者の症状にあわせて決定されるものである。
　また、本発明の抗がん剤は既存の抗がん剤と組み合わせて投与し、その抗がん効果を強化することができる。既存の抗がん剤の例としては、フェロトーシス誘導剤が挙げられ、その例としては、スルファサラジン、エラスチン、Ｉｍｉｄａｚｏｌｅ　ｋｅｔｏｎｅ　ｅｒａｓｔｉｎ（ＩＫＥ）、シンバスタチン、アルテスナート、ソラフェニブなどが挙げられる。
　加溶媒分解によりまたは生理的条件下のインビボにおいて本発明の薬理学的に活性な化合物を生成する、化学的または代謝的に分解できる基を有する本発明に用いられる特定化合物の誘導体を、プロドラッグとして利用し得る。適当なプロドラッグを選択する方法および製造する方法は、例えばＤｅｓｉｇｎ　ｏｆ　Ｐｒｏｄｒｕｇｓ（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，Ａｍｓｔｅｒｄａｍ　１９８５）に記載されている。本発明において、水酸基を有する化合物である場合は、該化合物と適当なアシルハライドまたは適当な酸無水物とを反応させることによって得られるアシルオキシ誘導体がプロドラッグとして例示される。プロドラッグとして特に好ましいアシルオキシとしては－ＯＣＯＣ２Ｈ５、－ＯＣＯ（ｔ－Ｂｕ）、－ＯＣＯＣ１５Ｈ３１、－ＯＣＯ（ｍ－ＣＯ２Ｎａ－Ｐｈ）、－ＯＣＯＣＨ２ＣＨ２ＣＯ２Ｎａ、－ＯＣＯＣＨ（ＮＨ２）ＣＨ３、－ＯＣＯＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２などが挙げられる。本発明を形成する化合物がアミノ基を有する場合は、アミノ基を有する化合物と適当な酸ハロゲン化物または適当な混合酸無水物とを反応させることにより製造されるアミド誘導体がプロドラッグとして例示される。プロドラッグとして特に好ましいアミドとしては、－ＮＨＣＯ（ＣＨ２）２０ＯＣＨ３、－ＮＨＣＯＣＨ（ＮＨ２）ＣＨ３等が挙げられる。
　本発明の抗がん剤が適用され得るがん種としては、膀胱がん、乳がん、大腸がん、結腸がん、腎臓がん、肝臓がん、肺がん、小細胞肺がん、非小細胞肺がん、頭部および頸部のがん、食道がん、胆嚢がん、卵巣がん、卵管がん、膵臓がん、胃がん、子宮頚がん、甲状腺がん、前立腺がん、扁平上皮がんを含む皮膚のがん、線維肉腫、横紋筋肉腫、星状細胞腫、神経芽細胞腫、神経膠腫、神経鞘腫、黒色腫、ブドウ膜メラノーマ、眼メラノーマ、転移性脳腫瘍、精上皮腫、泌尿生殖器腫瘍、奇形がん、骨肉腫、色素性乾皮症、角化棘細胞腫、甲状腺濾胞状癌、カポジ肉腫等の固形がんが挙げられる。一態様において、がんは乳がん、肉腫であり得る。
［2.がんの治療方法］
　本発明はまた、有効量の下記式（Ｉ）で示される化合物またはその塩を、それを必要とする対象に投与することを含む、がんの治療方法（以下、「本発明の方法」と称することがある）を提供する：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000042
　本発明の方法における、式（Ｉ）で示される化合物、治療対象、投与量、投与経路、投与回数、適用し得るがん種等は、[1．抗がん剤]に記載したものと同様である。
　以下の実施例において本発明を更に具体的に説明するが、本発明はこれらの例によってなんら限定されるものではない。
［化合物の合成例］
　本明細書において２’，４’－ジヒドロキシ－３’－メチルプロピオフェノン（「ｋ－１」とも称することがある。）のケトンについては自体公知の方法により合成が可能である（Sum TH et al., Tetrahedron. 2015 Jul 1;71(26-27): 4557-4564.）。また、２－（フェニルアミノ)アセトヒドラジド（「Ｈ－１」とも称することがある。）のヒドラジンも、自体公知の方法により合成が可能である（Samal RP et al., Chem Biol Drug Des. 2013 Jun;81(6):715-29.）。
［合成例１］ｋ－１：Ｂ－１の合成法
　２－ブロモプロピオン酸メチル（５００ｍｇ、３．０ｍｍｏｌ）をＤＭＳＯ（６ｍＬ）に溶解させ、アニリン（０．３６ｍＬ、３．９ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム（０．５４ｇ、３．９ｍｍｏｌ）を加えて室温で２１時間撹拌した。酢酸エチル（３０ｍＬ）、水（５０ｍＬ）を加えて分液し、有機層を飽和食塩水（３０ｍＬ）で洗浄、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。ろ過、減圧下濃縮して得られた残渣を中圧シリカゲルクロマトグラフィー（シリカゲル３０ｇ、酢酸エチル／ヘキサン＝２／９８～１５／８５）で精製し、Ｎ-フェニルアラニン　メチル　エステル（１１０）（３４３ｍｇ、１．９１ｍｍｏｌ、収率６４％）を薄黄色液体として得た。
　上記のようにして得られた１１０（３４０ｍｇ、１．９ｍｍｏｌ）をメタノール（３．８ｍＬ）に溶解させ、ヒドラジン一水和物（０．１８ｍＬ、３．８ｍｍｏｌ）を加えて６０℃で２４時間撹拌した。ヒドラジン一水和物（０．３６ｍＬ、７．４ｍｍｏｌ）を追加して６０℃で更に１７時間撹拌した。反応溶液を減圧下濃縮して得られた残渣を中圧シリカゲルクロマトグラフィー（アミンシリカゲル１０ｇ、酢酸エチル／塩化メチレン＝０／１００～２０／８０）で精製し、２－（フェニルアミノ）プロパンヒドラジド（１１１）（３２１ｍｇ、１．７９ｍｍｏｌ、収率９４％）を白色固体として得た。
　上記のようにして得られた１１１（１６８ｍｇ、０．９３７ｍｍｏｌ）、２’，４’－ジヒドロキシ－３’－メチルプロピオフェノン（ｋ－１）（１３０ｍｇ、０．７２ｍｍｏｌ）をＤＭＳＯ（１．４ｍＬ）に溶解させ１００℃で１９時間撹拌した。放冷後、蒸留水（１５ｍＬ）を加え、析出した固体をろ取、乾燥して得られた黄色固体を塩化メチレンで懸濁洗浄後、減圧下乾燥し、ｋ－１：Ｂ－１（１７３ｍｇ、０．５０７ｍｍｏｌ、収率７０％）を薄黄色固体として得た。
［合成例２］ｋ－１：Ｊ－１の合成法
　氷冷したＴＨＦ（１０ｍＬ）に水素化アルミニウム（１．０ｇ、２６ｍｍｏｌ）、３－シアノフェノール（０．６３ｇ、５．３ｍｍｏｌ）を順次加え、室温で１．５時間、６０℃で３．５時間撹拌した。放冷後、水素化アルミニウム（１．０ｇ、２６ｍｍｏｌ）、ＴＨＦ（１０ｍＬ）を追加して６０℃で更に１６時間撹拌した。反応溶液を氷冷し、水（１．５ｍＬ）、１５％水酸化ナトリウム水溶液（１．５ｍＬ）、水（４．５ｍＬ）を順次加えて室温で３時間撹拌した。懸濁溶液をセライトろ過し、ろ液を減圧下濃縮して得られた残渣を中圧シリカゲルカラムクロマトグラフィー（アミンシリカゲル１０ｇ、メタノール／塩化メチレン＝０／１００～８／９２）にて精製した。得られた固体をＩＰＥで懸濁洗浄後、減圧下乾燥し、３－（アミノメチル）フェノール（１４９）（４７７ｍｇ、３．８７ｍｍｏｌ、収率７３％）を白色固体として得た。
　上記のようにして得られた１４９（２００ｍｇ、１．６ｍｍｏｌ）を塩化メチレン（２ｍＬ）、水（２ｍＬ）に溶解させ、炭酸水素ナトリウム（０．２７ｇ、３．２ｍｍｏｌ）を加えて氷冷下クロロギ酸フェニル（１３６）（０．２２ｍＬ、１．７ｍｍｏｌ）をゆっくり滴下した。室温で２０時間撹拌し、酢酸エチル（２０ｍＬ）、水（２０ｍＬ）を加えて分液した。有機層を飽和食塩水（２０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥、ろ過、減圧下濃縮して得られた残渣を中圧シリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル１０ｇ、酢酸エチル／ヘキサン＝５／９５～３５／６５）にて精製しフェニル　（３－ヒドロキシベンジル）カーバメート（１５０）（３６９ｍｇ、１．５２ｍｍｏｌ、収率９５％）を無色液体として得た。
　上記のようにして得られた１５０（３６５ｍｇ、１．５０ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（３．８ｍＬ）に懸濁させ、ヒドラジン一水和物（０．１８ｍＬ、３．８ｍｍｏｌ）を加えて室温で２．５時間、ヒドラジン一水和物（０．１８ｍＬ、３．８ｍｍｏｌ）を追加して５５℃で更に２０時間撹拌した。反応溶液を減圧下濃縮し、得られた固体をＩＰＥ／塩化メチレン（３／１）で懸濁洗浄後、減圧下乾燥し、Ｎ－（３－ヒドロキシベンジル）ヒドラジンカルボキシアミド（１５１）（２３３ｍｇ、１．２９ｍｍｏｌ、収率８６％）を白色固体として得た。
　上記のようにして得られた１５１（１３０ｍｇ、０．７２ｍｍｏｌ）、２’，４’－ジヒドロキシ－３’－メチルプロピオフェノン（ｋ－１）（１００ｍｇ、０．５５ｍｍｏｌ）をＤＭＳＯ（１．１ｍＬ）に溶解させ１００℃で１５時間撹拌した。放冷後、反応溶液をそのまま中圧シリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル１０ｇ、酢酸エチル／塩化メチレン＝１０／９０～５５／４５）にて精製した。得られた精製物に水を加えて析出した固体をろ取後、減圧下乾燥し、ｋ－１：Ｊ－１（１０２ｍｇ、０．２９７ｍｍｏｌ、収率５４％）を白色固体として得た。
［合成例３］ＧＡ－００２Ａの合成法
　前述の合成例１で合成したｋ－１：Ｂ－１（ラセミ体）を下記分取条件に従ってＷａｔｅｒｓ社製超臨界流体クロマトグラフィー（ＳＦＣ）にて光学分割を行い、エナンチオマーを取得した。本エナンチオマーの比旋光度は、旋光度計Ｐ－１０２０（日本分光社製）を用いて測定した。また、エナンチオマーの立体配置（Ｒ体、Ｓ体）は、Ｘ線結晶構造解析によって決定した。
化合物ＧＡ－００２Ａ（ｋ－１：Ｂ－１の左旋性エナンチオマー）；保持時間１１．９５分、分取量４７５．１ｍｇ、光学純度９９．９ｅｅ％、純度９９．０％、比旋光度[α]２２Ｄ　－１０．５（ｃ＝０．１０１９、エタノール）、立体配置Ｒ体
＜分取条件＞
　カラム：ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ　ＩＡ＜ダイセル社製、２０＊２５０ｍｍ、５μｍ＞、弱溶媒：ＣＯ２（７０％）、強溶媒：ＭｅＯＨ（３０％）、カラム温度：４０℃、総チャージ量：１ｇ、流速：１５ｍＬ／分
［合成例４］ＧＡ－００５Ａの合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000043
（式中、Ｂｎはベンジル基を示す）
　Ｄ－アラニンメチル塩酸塩（１５７）（１．４０ｇ、１０．０ｍｍｏｌ）、３－ベンジルオキシフェニルボロン酸（１５８）（３．４３ｇ、１５．１ｍｍｏｌ）、酢酸銅（ＩＩ）一水和物（３．００ｇ、１５．１ｍｍｏｌ）、モレキュラーシーブ４Ａ（ＭＳ４Ａ；２０ｇ）を塩化メチレン（２００ｍＬ）に懸濁させ、トリエチルアミン（４．１７ｍＬ、３０．１ｍｍｏｌ）を加えて酸素雰囲気下室温で２３時間撹拌した。反応溶液をセライトろ過し、ろ液を半分まで減圧下濃縮、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（５０ｍＬ）を加えて分液した。有機層を飽和食塩水（２０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥、ろ過、減圧下濃縮した。得られた残渣を中圧シリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル３０ｇ、酢酸エチル／ヘキサン＝１／９９～１０／９０）にて精製し、１５９（５９５ｍｇ、２．０９ｍｍｏｌ、収率２１％）を黄色液体として得た。
　上記のようにして得られた１５９（５９５ｍｇ、２．０９ｍｍｏｌ）をメタノール（２１ｍＬ）に溶解させ、パラジウム炭素エチレンジアミン複合体（２４１ｍｇ）を加えて水素雰囲気下、室温で３．５時間撹拌した。パラジウム炭素をろ別し、ろ液を減圧下濃縮して得られた残渣を中圧シリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル３０ｇ、酢酸エチル／ヘキサン＝１０／９０～３０／７０）にて精製し、１６０（４１３ｍｇ、２．１２ｍｍｏｌ、ｑｕａｎｔ．）を黄色液体として得た。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000044
　上記のようにして得られた１６０（４１３ｍｇ、２．１２ｍｍｏｌ）をメタノール（４．２ｍＬ）に溶解させ、ヒドラジン一水和物（１．０ｍＬ、２１ｍｍｏｌ）を加えて６０℃で３．５時間撹拌した。反応溶液を減圧下濃縮、トルエン共沸して得られた残渣を中圧シリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル１０ｇ、メタノール／塩化メチレン＝１／９９～１０／９０）にて精製し、１６１（３９１ｍｇ、２．００ｍｍｏｌ、収率９５％）を褐色アモルファスとして得た。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000045
　上記のようにして得られた１６１（７２ｍｇ、０．３７ｍｍｏｌ）、２’，４’－ジヒドロキシ－３’－メチルプロピオフェノン（１００）（６０ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ）をＤＭＳＯ（０．６７ｍＬ）に溶解させ１００℃で３日撹拌した。放冷後、反応溶液をそのまま中圧シリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル１０ｇ、酢酸エチル／塩化メチレン＝５／９５～５０／５０）にて精製し、得られた精製物を蒸留水、イソプロピルアルコール（ＩＰＡ）／ヘキサン、蒸留水で順次懸濁洗浄して、ＧＡ－００５Ａ（ＺＸ－０１－Ｒ（４０．５ｍｇ、０．１１３ｍｍｏｌ、収率３４％））を薄茶色固体として得た。比旋光度は、旋光度計Ｐ－１０２０（日本分光社製）を用いて測定した。
化合物ＧＡ－００５Ａ；光学純度９９．９ｅｅ％、純度９９．２％、比旋光度[α]２２Ｄ　－１１．４（ｃ＝０．０２６４、エタノール）、立体配置Ｒ体
　式（Ｉ）に示される化合物は、前記の合成例１～２に準じて合成することができる。前記の合成例により合成した式（Ｉ）に示される化合物の例を第１表に示すが、本発明に用いられる特定化合物はこれらのみに限定されるものではない。
　表中、Ｍｅとの記載はメチルを表し、以下同様に、Ｅｔとの記載はエチルを表す。また、Ｒ５は、アリール基の置換基であり、アリール基の置換基は前記したものと同様である。なお、（Ｒ３）ｎおよび（Ｒ５）ｍにおける「－」との記載は無置換を表す。構造式に記載された番号は、（Ｒ３）ｎまたは（Ｒ５）ｍの置換位置を表す。ｎは、０、１または２であり、ｍは、０、１、２、３、４または５である。Ｒ５が複数存在する場合、Ｒ５は、それぞれ同一であってもよく、または異なっていてもよい。
　〔第１表〕
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000046
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000047
　式（Ｉ）に示される化合物のうち、第１表に記載の化合物の１Ｈ－ＮＭＲデータを以下に示す。
　プロトン核磁気共鳴ケミカルシフト値は、重ジメチルスルホキシドの値を２．４９ｐｐｍとして、重ジメチルスルホキシド中で、２７０ＭＨｚまたは４００ＭＨｚにて測定した。尚、表中の記号は下記の意味を表す。ｓ：シングレット、ｂｒｓ：ブロードシングレット、ｄ：ダブレット、ｄｄ：ダブルダブレット、ｔ：トリプレット、ｑ：カルテット、ｍ：マルチプレット。
k-1:B-1; 400MHz
δ10.82(s, 1H), 9.71(s, 1H), 7.25(d, J=8.0Hz, 1H), 7.07(t, J=8.0Hz, 2H), 6.63(d, J=8.0Hz, 2H), 6.56(t, J=8.0Hz, 1H), 6.39(d, J=8.0Hz, 1H), 5.93(d, J=12Hz, 1H), 4.28(m, 1H), 2.80(q, J=8.0Hz, 2H), 1.95(s, 3H), 1.40(d, J=8.0Hz, 3H)1.03(t, J=8.0Hz, 3H).(NHの一つのシグナルは観測されなかった。)
k-1:J-1; 270MHz
δ13.45(br, 1H), 9.57(s, 1H), 9.53(s, 1H), 9.36(s, 1H), 7.17(d, J=8.1Hz, 1H), 7.11(d, J=8.1Hz, 1H), 6.80-6.70(m, 3H), 6.64(br, NH), 6.37(d, J=8.1Hz, 1H), 4.25(d, J=5.4Hz, 2H), 2.65(q, J=8.1Hz, 2H), 1.97(s, 3H), 1.08(t, J=8.1Hz, 3H).
k-1:D-1; 270MHz
δ 13.66(s, 1H), 10.76(s, 1H), 9.70(s, 1H), 8.98(s, 1H), 7.25(d, J=10.8Hz, 1H), 6.86(t, J=10.8Hz, 1H), 6.40(d, J=8.1Hz, 1H), 6.20-5.95(m, 3H), 5.87(t, J=5.4Hz, NH), 3.88(d, J=5.4Hz, 2H), 2.78(q, J=8.0Hz, 2H), 1.97(s, 3H), 1.05(t, J=8.1Hz, 3H).
GA-005A; 270MHz
δ13.65(s, 1H), 10.75(s, 1H), 9.70(s, 1H), 8.97(s, 1H), 7.25(d, J=8.1Hz, 1H), 6.83(t, J=8.1Hz, 1H), 6.39(d, J=8.1Hz, 1H), 6.15-5.95(m, 3H), 5.81(d, J=8.1Hz, 1H), 4.18(m, 1H), 2.78(q, J=8.1Hz, 2H), 1.95(s, 3H), 1.37(d, J=8.1Hz, 3H), 1.03(t, J=8.1Hz, 3H).
A-005; 270MHz
δ13.67(s, 1H), 10.95(s, 1H), 9.75(brs, 1H), 8.05(brs, 1H), 7.77(brs, 1H), 7.27(d, J=8.1Hz, 1H), 7.08(d, J=8.1Hz, 1H), 7.00(d, J=8.1Hz, 1H), 6.40(d, J=8.1Hz, 1H), 6.21(d, J=8.1Hz, 1H), 5.77(s, 1H), 4.21(m, 1H), 2.82(q, J=8.1Hz, 2H), 1.95(s,3H), 1.78(m, J=8.1Hz, 2H), 1.06(t, J=8.1Hz, 3H), 0.99(t, J=8.1Hz, 3H).
A-007R; 270MHz
δ13.63(s, 1H), 10.97(s, 1H), 9.73(s, 1H), 7.91(brs, 1H), 7.73(brs, 1H), 7.28(d,J=8.1Hz, 1H), 6.81(d, J=13.5Hz, 1H), 6.69(d, J=8.1Hz, 1H), 6.40(d, J=8.1Hz, 1H), 4.35(m, 1H), 2.84(q, J=8.1Hz, 2H), 1.95(s, 3H), 1.42(d, J=5.4Hz, 3H) , 1.07(t, J=8.1Hz, 3H).
A-010; 270MHz
δ13.64(s, 1H), 10.93(s, 1H), 9.72(s, 1H), 7.53(brs, 1H), 7.27(d, J=8.1Hz, 1H), 7.19(m, 1H), 6.92(m, 1H), 6.40(d, J=8.1Hz, 1H), 6.23(d, J=8.1Hz, 1H), 4.31(m, 1H), 2.81(q, J=8.1Hz, 2H), 1.95(s, 3H), 1.41(d, J=8.1Hz, 3H) , 1.06(m, 3H).
A-012; 270MHz
δ13.63(s, 1H), 10.95(s, 1H), 9.72(s, 1H), 7.79(d, J=2.7Hz, 1H), 7.27(d, J=8.1Hz, 1H), 7.20(d, J=8.1Hz, 1H), 7.06(m, 1H), 6.48(d, J=8.1Hz, 1H), 6.40(d, J=8.1Hz, 1H), 4.33(m, 1H), 2.82(q, J=5.4Hz, 2H), 1.95(s, 3H), 1.41(d, J=5.4Hz, 3H) , 1.07(t, J=8.1Hz, 3H).
CE-001; 270MHz
δ 13.41(s, 1H), 9.87(s, 1H), 9.61(s, 1H), 9.54(s, 1H), 7.17(d, J=8.1Hz, 1H), 6.84(t, J=8.1Hz, 1H), 6.60-6.50(m, 2H), 6.45-6.35(m, 2H), 4.26(d, J=8.1Hz, 2H), 2.66(q, J=8.0Hz, 2H), 1.97(s, 3H), 1.08(t, J=8.1Hz, 3H).
［実施例１］マウスがん細胞を用いた同所性移植モデルによる抗腫瘍性試験
（マウスがん細胞培養）
　細胞は、マウス乳がん細胞株４Ｔ１（Ａｍｅｒｉｃａｎ　Ｔｙｐｅ　Ｃｕｌｔｕｒｅ　Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ社製）を用いた。細胞の培養には、１０％ＦＢＳ（ＢｉｏＳｅｒａ社製）と１ｍＭピルビン酸ナトリウム溶液（富士フイルム和光純薬社製）を含むＲＰＭＩ－１６４０培地（富士フイルム和光純薬社製）を用いた。細胞は、３７℃／ＣＯ２インキュベーター内にて５％二酸化炭素濃度を保った状態で、直径１０ｃｍのシャーレ（培地１０ｍＬ）を用いて２日間以上静置培養した。引き続き、本細胞をＰＢＳ５ｍｌで洗浄した後、０．５ｍＭのＥＤＴＡ／ＰＢＳ溶液（ナカライテスク社製）５ｍＬを添加し、細胞を剥がして懸濁した。本懸濁液を遠心分離（株式会社トミー精工製、型番ＬＣ－２００、１０００ｒｐｍ／３分、室温）後、上清を除き、氷冷したＤＭＥＭ（富士フイルム和光純薬社製）を添加して細胞懸濁液を調製した。一部をトリパンブルー（富士フイルム和光純薬社製）で懸濁してＴＣ－２０（ＢＩＯ－ＲＡＤ社製）にて生細胞数をカウントすることで計測した。５×１０６ｃｅｌｌｓ／ｍＬになるように、氷冷ＤＭＥＭにて希釈、調製し、マウス移植用の細胞懸濁液とした。
（同所性移植モデルマウスの作製）
　４Ｔ１細胞懸濁液２．５×１０５ｃｅｌｌｓ／５０μＬを３０Ｇの注射針付き注射筒（ＢＤ社製）に充填し、６週齢の雌のＢＡＬＢ／ｃＡｊｃｌマウス（日本クレア社より購入）の左右の乳房脂肪組織に対して注入した。
（本発明に用いられる特定化合物を含有する投与液の調製）
　各化合物（k-1:B-1又はk-1:J-1）１００ｍｇを秤量し、メノウ製の乳鉢と乳棒を用いて破砕し、次いで１０ｍＬの０．５ｗ／ｖ％メチルセルロース４００溶液（富士フイルム和光純薬社製）へ懸濁させ、投与液とした。
（本発明に用いられる特定化合物の投与および腫瘍体積の評価）
　がん細胞の移植から４日目の時点で、腫瘍の生着が認められた個体を無差別に５匹ずつ群分けした。群分け直後から７日後まで、１日１回、本発明に用いられる特定化合物を含有する投与液をマウスに投与した。用量は１００ｍｇ／１０ｍＬ／ｋｇで、化合物ｋ－１：Ｂ－１は腹腔内、化合物ｋ－１：Ｊ－１は背部皮下へそれぞれ投与した。一方、対照群には１０ｍＬ／ｋｇの用量で０．５ｗ／ｖ％メチルセルロース４００溶液のみを投与した。本発明に用いられる特定化合物の投与から７日目に、デジタルノギス（ミツトヨ社製）を用いて腫瘍の長径、短径、厚みを計測し、計算式（長径×短径×厚み×π／６）を用いて概算腫瘍体積を算出した。
　化合物投与７日目の時点における、各群の概算腫瘍体積を表２に示す（表中、＊：Ｐ＜０．０５（対照群に対するｔ検定））。表２に示されるように、化合物投与群では、対照群と比較して概算腫瘍体積が有意に減少した。したがって、本発明に用いられる特定化合物の抗がん効果が認められた。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000048
［実施例２］フェロトーシス誘導下における細胞生存試験
（ヒトがん細胞培養）
　細胞は、ヒト肉腫細胞株ＨＴ－１０８０（ＡＴＣＣ社製）を用いた。細胞の培養には、１０％ＦＢＳ（ＢｉｏＳｅｒａ社製）を含むＥ－ＭＥＭ培地（富士フイルム和光純薬社製）を用いた。細胞は、３７℃／ＣＯ２インキュベーター内にて５％二酸化炭素濃度を保った状態で、直径１０ｃｍのシャーレ（培地１０ｍＬ）を用いて２日間以上静置培養した。引き続き、本細胞をＰＢＳ５ｍｌで洗浄した後、０．２５ｗ／ｖ％トリプシン－１ｍＭ　ＥＤＴＡ・４Ｎａ溶液（富士フイルム和光純薬社製）１ｍＬを添加して細胞を剥がし、培養培地９ｍｌを加えて懸濁した。本懸濁液を遠心分離（株式会社トミー精工製、型番ＬＣ－２００、１０００ｒｐｍ／３分、室温）後、上清を除き、培養培地を添加して細胞懸濁液を調製した。一部をトリパンブルー（富士フイルム和光純薬社製）で懸濁してＴＣ－２０（ＢＩＯ－ＲＡＤ社製）にて生細胞数をカウントすることで細胞数を計測した。
（フェロトーシスの誘導）
　ＨＴ－１０８０細胞懸濁液を６．２５×１０４ｃｅｌｌｓ／ｍＬとなるよう調製し、９６ウェルＵ底プレート（住友ベークライト社製）へ５０００ｃｅｌｌｓ／８０μＬ／ウェルで播種した。ＤＭＳＯに溶解したＩｍｉｄａｚｏｌｅ　ｋｅｔｏｎｅ　ｅｒａｓｔｉｎ（以下、ＩＫＥ）（ＭｅｄＣｈｅｍ　Ｅｘｐｒｅｓｓ社製）、フェロトーシス阻害剤Ｆｅｒｒｏｓｔａｔｉｎ－１（以下、Ｆｅｒ－１）（ＳｅｌｌｅｃｋＣｈｅｍｉｃａｌｓ社製）、本発明に用いられる特定化合物を、培養培地を用いて希釈した。引き続き、希釈溶液を２０μＬ／ウェルずつ細胞へ添加することによりＩＫＥの終濃度を０．０５μＭ、Ｆｅｒ－１の終濃度を１μＭ、本発明に用いられる特定化合物の終濃度を１μＭまたは５μＭとした。本発明に用いられる特定化合物ならびにＦｅｒ－１非添加群には、それぞれ等量のＤＭＳＯ（富士フイルム和光純薬社製）を添加した。化合物を添加した後２４時間、３７℃／ＣＯ２インキュベーターで培養した。
（細胞生存率評価）
　ＡＴＰ試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ社製，ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（登録商標）Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ　Ｃｅｌｌ　Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ　Ａｓｓａｙ）を用いて生細胞数を計測した。化合物処置２４時間後の培養液に対してＡＴＰ試薬を１００μＬ／ウェル添加し懸濁させ、懸濁液１００μＬ／ウェルをアッセイ用白色プレート（コーニング社，＃３９１２）へ移した。１０分間室温で静置した後、プレートリーダー（パーキンエルマー社，ＥｎＳｐｉｒｅ）を用いて発光量を測定した。
　測定した発光量について、ＩＫＥのみを添加した対照群に対する相対値を算出したところ、下記の化合物を添加することで細胞生存率を５０％または７０％以上阻害した。また減少した生存率はフェロトーシス阻害剤の同時添加により全て９０％以上に回復した。すなわち、下記の化合物の添加によりフェロトーシスの誘導が促進された。このことから本発明に用いられる特定化合物はフェロトーシスによる抗がん作用の亢進効果を有していることが示された。
０．０５μＭのＩＫＥとの同時添加により細胞生存率を５０％以上阻害した化合物：
ｋ－１：Ｂ－１（５μＭ）、ＧＡ－００２Ａ（５μＭ）、ｋ－１：Ｄ－１（５μＭ）、ｋ－１：Ｊ－１（５μＭ）、Ａ－００５（５μＭ）、ＧＡ－００５Ａ（５μＭ）、Ａ－００７Ｒ（５μＭ）、Ａ－０１０（５μＭ）、Ａ－０１２（１μＭ）、ＣＥ－００１（１μＭ）
０．０５μＭのＩＫＥとの同時添加により細胞生存率を７０％以上阻害した化合物：
ｋ－１：Ｂ－１（５μＭ）、ＧＡ－００２Ａ（５μＭ）、Ａ－００５（５μＭ）、ＧＡ－００５Ａ（５μＭ）、Ａ－００７Ｒ（５μＭ）、Ａ－０１０（５μＭ）
［実施例３］フェロトーシス誘導下における細胞生存試験
（ヒトがん細胞培養）
　細胞は、ヒト肉腫細胞株ＨＴ－１０８０（ＡＴＣＣ社製）を用いた。細胞の培養には、１０％ＦＢＳ（ＢｉｏＳｅｒａ社製）を含むＥ－ＭＥＭ培地（富士フイルム和光純薬社製）を用いた。細胞は、３７℃／ＣＯ２インキュベーター内にて５％二酸化炭素濃度を保った状態で、直径１０ｃｍのシャーレ（培地１０ｍＬ）を用いて２日間以上静置培養した。引き続き、本細胞をＰＢＳ５ｍｌで洗浄した後、０．２５ｗ／ｖ％トリプシン－１ｍＭ　ＥＤＴＡ・４Ｎａ溶液（富士フイルム和光純薬社製）１ｍＬを添加して細胞を剥がし、培養培地９ｍｌを加えて懸濁した。本懸濁液を遠心分離（株式会社トミー精工製、型番ＬＣ－２００、１０００ｒｐｍ／３分、室温）後、上清を除き、培養培地を添加して細胞懸濁液を調製した。一部をトリパンブルー（富士フイルム和光純薬社製）で懸濁してＴＣ－２０（ＢＩＯ－ＲＡＤ社製）にて生細胞数をカウントすることで細胞数を計測した。
（フェロトーシスの誘導）
　ＨＴ－１０８０細胞懸濁液を６．２５×１０４ｃｅｌｌｓ／ｍＬとなるよう調製し、９６ウェルＵ底プレート（住友ベークライト社製）へ５０００ｃｅｌｌｓ／８０μＬ／ウェルで播種した。ＤＭＳＯに溶解したソラフェニブ（ＳｅｌｌｅｃｋＣｈｅｍｉｃａｌｓ社製）、フェロトーシス阻害剤Ｆｅｒｒｏｓｔａｔｉｎ－１（以下、Ｆｅｒ－１）（ＳｅｌｌｅｃｋＣｈｅｍｉｃａｌｓ社製）、本発明に用いられる特定化合物を、培養培地を用いて希釈した。引き続き、希釈溶液を２０μＬ／ウェルずつ細胞へ添加することによりソラフェニブの終濃度を１．０μＭ、Ｆｅｒ－１の終濃度を１μＭ、本発明に用いられる特定化合物の終濃度を１μＭまたは５μＭとした。本発明に用いられる特定化合物ならびにＦｅｒ－１非添加群には、それぞれ等量のＤＭＳＯ（富士フイルム和光純薬社製）を添加した。化合物を添加した後２４時間、３７℃／ＣＯ２インキュベーターで培養した。
（細胞生存率評価）
　ＡＴＰ試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ社製，ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（登録商標）Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ　Ｃｅｌｌ　Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ　Ａｓｓａｙ）を用いて生細胞数を計測した。化合物処置２４時間後の培養液に対してＡＴＰ試薬を１００μＬ／ウェル添加し懸濁させ、懸濁液１００μＬ／ウェルをアッセイ用白色プレート（コーニング社，＃３９１２）へ移した。１０分間室温で静置した後、プレートリーダー（パーキンエルマー社，ＥｎＳｐｉｒｅ）を用いて発光量を測定した。
　測定した発光量について、ソラフェニブのみを添加した対照群に対する相対値を算出したところ、下記の化合物を添加することで細胞生存率を５０％以上阻害した。また減少した生存率はフェロトーシス阻害剤の同時添加により全て９０％以上に回復した。すなわち、下記の化合物の添加によりフェロトーシスの誘導が促進された。このことから本発明に用いられる特定化合物はフェロトーシスによる抗がん作用の亢進効果を有していることが示された。
１．０μＭのソラフェニブとの同時添加により細胞生存率を５０％以上阻害した化合物：
ＧＡ－００２Ａ（５μＭ）、Ａ－００５（５μＭ）、ＧＡ－００５Ａ（５μＭ）、Ａ－００７Ｒ（５μＭ）、Ａ－０１０（５μＭ）、Ａ－０１２（１μＭ）
　本発明の抗がん剤の投与により、悪性腫瘍を縮小させることができる。従って、本発明の抗がん剤は、各種がんの治療に好適に用いられ得、医療分野において極めて有益である。
　本出願は、日本で出願された特願２０１９－０１４８９６を基礎としており、その内容は本明細書にすべて包含されるものである。

Claims (7)

  1. 　下記、式（Ｉ）で示される化合物またはその塩を含む、抗がん剤：
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000001
     ｛式中、Ｘは、－ＮＨＣＯ－であり、Ｒ１は、－Ｙ－ＮＨ－Ｚ－Ａｒであり（式中、ＹおよびＺは、それぞれ独立して、単結合、または置換基を有していてもよい炭素数１～６のアルキレン基であり、Ａｒは、置換基を有していてもよいアリール基または置換基を有していてもよいヘテロアリール基である。）、Ｒ２は、置換基を有していてもよい炭素数１～６のアルキル基であり、Ｒ３は、水酸基であり、ｎは、０、１または２の整数である。｝。
  2. 　Ｒ２が、メチル基、エチル基、またはイソブチル基であり、
    　ｎが０であり、
    　Ａｒが、それぞれハロゲノ基、水酸基またはメチル基で置換されていてもよいフェニル基またはピリジル基であり、
    　Ｙが、メチル基またはエチル基で置換されていてもよいメチレン基である、
    請求項１記載の剤。
  3. 　式（Ｉ）で示される化合物が、以下で示される化合物またはその塩である、請求項１又は２記載の剤。
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000002
     または、
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000003
     または、
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000004
     または、
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000005
     または、
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000006
     または、
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000007
     または、
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000008
     または、
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000009
  4. 　式（Ｉ）で示される化合物が、以下で示される化合物またはその塩である、請求項１記載の剤。
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000010
     または、
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000011
  5. 　がんが、乳がんまたは肉腫である、請求項１～４のいずれか一項に記載の剤。
  6. 　有効量の下記式（Ｉ）で示される化合物またはその塩を、それを必要とする対象に投与することを含む、がんの治療方法：
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000012
     ｛式中、Ｘは、－ＮＨＣＯ－であり、Ｒ１は、－Ｙ－ＮＨ－Ｚ－Ａｒであり（式中、ＹおよびＺは、それぞれ独立して、単結合、または置換基を有していてもよい炭素数１～６のアルキレン基であり、Ａｒは、置換基を有していてもよいアリール基または置換基を有していてもよいヘテロアリール基である。）、Ｒ２は、置換基を有していてもよい炭素数１～６のアルキル基であり、Ｒ３は、水酸基であり、ｎは、０、１または２の整数である。｝。
  7. 　フェロトーシス誘導剤との併用を特徴とする請求項６記載の方法。
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