WO2020158750A1 - イムノクロマト診断キット用吸収パッド - Google Patents

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WO2020158750A1
WO2020158750A1 PCT/JP2020/003029 JP2020003029W WO2020158750A1 WO 2020158750 A1 WO2020158750 A1 WO 2020158750A1 JP 2020003029 W JP2020003029 W JP 2020003029W WO 2020158750 A1 WO2020158750 A1 WO 2020158750A1
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immunochromatographic
diagnostic kit
absorbent pad
nonwoven fabric
pad
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大輔 城森
武志 松瀬
厚志 堀井
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旭化成株式会社
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Definitions

  • the present invention relates to an absorbent pad for an immunochromatographic diagnostic kit, and an immunochromatographic diagnostic kit using the absorbent pad.
  • POCT Point of care testing: immediate clinical examination
  • the POCT is an examination performed by a medical staff or the subject himself beside the subject, and has an advantage that not only the examination time can be shortened but also the subject can directly confirm the examination result.
  • POCT is steadily spreading not only in outpatient departments and wards of hospitals but also in clinics and home medical care.
  • POCT is different from the tests used in the central laboratory of hospitals and outsourced testing centers, and is a test performed in a clinic or home medical care. Therefore, some people who do not have sufficient knowledge of the test and are not familiar with measurement. I often handle it. For this reason, the POCT test reagent is required to have simple operability so that a reliable test result can be obtained by anyone receiving a simple explanation.
  • the kit is mainly composed of a chromatographic medium, a sample addition section (sample pad), a labeling reagent holding section (conjugate pad), an absorption section (absorption pad), etc.
  • the member is attached to a base material (backing sheet) and housed in the housing member.
  • the chromatographic medium made of nitrocellulose or the like has a function as a developing unit for the liquid sample and a function as a judging unit for the test result.
  • sample pad and a labeling reagent holding part (conjugate pad) containing a labeling reagent are installed at one end in the longitudinal direction of the chromatographic medium so that the liquid can pass through, and the other end has an excess.
  • An absorption portion (absorption pad) for absorbing a sample liquid is provided.
  • Testing with the immunochromatographic diagnostic kit is performed by adding various samples or sample liquids collected to the sample addition part.
  • the added sample or sample solution passes through the labeling reagent holding section, moves in the longitudinal direction in the chromatographic medium by a capillary phenomenon, passes through the determination section, and is absorbed by the absorption pad.
  • the substance to be detected in the sample solution uses the antigen-antibody reaction to form a complex with a colored labeling reagent such as gold colloid when passing through the labeling reagent holding part, and then the determination part on the chromatographic medium. Captured by.
  • the amount of the substance to be detected captured by the determination part of the chromatographic medium during the specified reaction time (10 to 15 minutes) is visually inspected using the intensity of coloring derived from the labeling reagent as an index. Determined by
  • an immunochromatographic diagnostic kit with a large variation in color development intensity it naturally leads to a misdiagnosis, and in the case of the above-mentioned diseases, the misdiagnosis may result in a risk of life. From these, it is one of the major issues in the development of immunochromatographic diagnostic kits to minimize the variation among the immunochromatographic diagnostic kit products.
  • the cause of the variation is considered to be the influence of each component of the kit, but especially since the absorption pad is the part that is responsible for absorbing the liquid, the variation in the color development intensity and color development time due to the variation in the liquid absorption speed of the sample. In addition, it causes variations in the coloring intensity due to problems such as background coloring.
  • the “background” is a phenomenon that occurs when the labeling reagent is clogged in the pores of the nitrocellulose membrane or is nonspecifically adsorbed and the nitrocellulose membrane is colored. If the background is poor, the contrast between the nitrocellulose membrane and the test line (TL) becomes poor, and the line in which TL is colored becomes difficult to see, making it difficult to make a judgment at the medical site. Furthermore, if the background is bad, it becomes difficult to judge a negative TL (that is, no color development). These phenomena can cause misdiagnosis.
  • the absorbent pad used in the immunochromatographic test kit cotton, non-woven fabric, filter paper, etc. made of fibers such as cellulose fiber, glass fiber, and pulp have been conventionally used.
  • the absorbent pad composed only of these materials has a problem that the water absorption is insufficient due to the influence of the structure, the constituent materials, and the manufacturing method, and that the absorption amount varies. ..
  • Patent Document 1 discloses an absorbent pad using super absorbent polymer particles
  • Patent Document 2 discloses an absorbent pad in which silica particles or the like are sprayed onto a nonwoven fabric material such as cellulose fiber. Is being considered.
  • these absorbent pads it is difficult to make the fiber density uniform and the spray amount uniform, and even if the water absorption is improved, variations in the water absorption rate easily occur between the products, and therefore variations in the products may occur. The current situation is that it will not improve.
  • the absorbent pad made of cellulose is uneven in thickness, when the immunochromatography kit is put into the housing which is the final product form, it does not close because it is thicker than the design value, it is too thin and the position in the housing Problems such as misalignment are likely to occur, resulting in large variations among immunochromatography diagnostic kit products.
  • the kit itself including the absorbent pad be made thinner and the width be made narrower in the trend of making the kit compact and automating the manufacture of the kit.
  • the conventional absorbent pad made of cellulose has a problem that it cannot be finely cut due to problems of thickness and elastic modulus.
  • the absorbent pad made of glass fiber has unevenness, when it is cut into small pieces, the amount of liquid absorption varies, which causes a problem that variation also occurs between immunochromatographic diagnostic kit products.
  • the problem to be solved by the present invention is to provide an absorption pad for an immunochromatographic diagnostic kit for use in an immunochromatographic diagnostic kit with excellent reproducibility with less variation in color development intensity. ..
  • the present inventors use a non-woven fabric composed of fibers of a thermoplastic resin having specific physical properties, which has been subjected to hydrophilic processing and hydrophilized, as an absorbent pad. It was unexpectedly found that the liquid absorption performance can be made uniform and the variation in the color development intensity of the immunochromatographic diagnosis kit can be greatly improved, and the present invention has been completed.
  • An absorbent pad for an immunochromatographic diagnosis kit which is composed of a non-woven fabric composed of thermoplastic resin fibers, the non-woven fabric has a basis weight of 20 to 200 g/m 2 , and a thickness of 0.06 mm to 1.20 mm.
  • An absorbent pad for an immunochromatographic diagnostic kit which has an average fiber diameter of 0.7 ⁇ m to 5.0 ⁇ m, an average pore diameter of 2.0 ⁇ m to 15.0 ⁇ m, and a hydrophilicity of 50 mm to 180 mm.
  • the non-woven fabric has a formation index of 90 or less and a pore size distribution of the following formula: Dmax/Dave ⁇ 2.00 Dmax/Dmin ⁇ 3.50 Where Dmax is the maximum pore size ( ⁇ m), Dave is the average pore size ( ⁇ m), and Dmin is the minimum pore size ( ⁇ m).
  • Dmax is the maximum pore size ( ⁇ m)
  • Dave is the average pore size ( ⁇ m)
  • Dmin is the minimum pore size ( ⁇ m).
  • the immunochromatographic diagnostic kit using the absorbent pad for immunochromatographic diagnostic kit of the present invention is excellent in reproducibility with little variation in color development intensity.
  • the basis weight of the nonwoven fabric composed of the thermoplastic resin fibers is 20 to 200 g/m 2
  • the thickness is 0.06 mm to 1.20 mm
  • the average fiber diameter is 0.7 ⁇ m to 5
  • the average pore size is 0.0 ⁇ m and the average pore size to be 2.0 ⁇ m to 15.0 ⁇ m, there are few variations in the coloring intensity and the reproducibility is excellent. Since the absorbent pad literally absorbs water, a hydrophilic material is used.
  • Conventional cellulose absorbent pads and glass fiber absorbent pads are hydrophilic materials, and the absorbent pads described in Patent Documents 1 and 2 are also the same. However, these absorbing pads do not show the effect of improving the variation in the coloring intensity in the immunochromatographic diagnostic kit.
  • the present inventors dare to form a uniform structure by using a hydrophobic thermoplastic nonwoven fabric as an absorbent pad for an immunochromatographic diagnostic kit in order to suppress variations in color development intensity, and further perform hydrophilic treatment. It was found that it is important to control the degree of hydrophilicity. Further, in order to increase the water absorption rate, it is not necessary to simply have high hydrophilicity.
  • the immunochromatographic diagnostic kit absorbent pad of the present embodiment is an immunochromatographic diagnostic kit absorbent pad made of a nonwoven fabric composed of thermoplastic resin fibers, and the nonwoven fabric has a basis weight of 20 to 200 g/m 2 and a thickness of 0.06 mm to 1.20 mm, average fiber diameter of 0.7 ⁇ m to 5.0 ⁇ m, average pore diameter of 2.0 ⁇ m to 15.0 ⁇ m, and hydrophilicity of 50 mm to 180 mm
  • immunochromatographic inspection methods performed using an immunochromatographic diagnostic kit generally include a flow-through method in which a solution containing an object to be measured is passed vertically to the membrane and a lateral flow method in which it is passed horizontally.
  • the absorbent pad for the immunochromatographic diagnostic kit of the present embodiment can be used in any of these methods.
  • the nonwoven fabric used for the absorbent pad for the immunochromatographic diagnosis kit of the present embodiment is not particularly limited, and examples thereof include spunbonded nonwoven fabric, meltblown nonwoven fabric, wet nonwoven fabric, dry nonwoven fabric, dry pulp nonwoven fabric, flash spun nonwoven fabric, opened fiber nonwoven fabric and the like. Particularly, as the nonwoven fabric made of ultrafine fibers, a melt blown nonwoven fabric or a flash spun nonwoven fabric is preferable.
  • the basis weight of the nonwoven fabric used for the absorbent pad for the immunochromatographic diagnosis kit of the present embodiment is 20 g/m 2 or more and 200 g/m 2 or less.
  • the basis weight exceeds 200 g/m 2 , it is not suitable because the thickness becomes too thick.
  • the basis weight is preferably 190 g/m 2 or less, more preferably 180 g/m 2 .
  • the basis weight is preferably 30 g/m 2 or more, more preferably 40 g/m 2 or more.
  • the thickness of the nonwoven fabric used for the absorbent pad for the immunochromatographic diagnosis kit of the present embodiment is 0.06 mm or more and 1.20 mm or less. Regarding the upper limit of the thickness, if a non-woven fabric having a thickness of more than 1.20 mm is produced, the basis weight and the fiber diameter deviate from a predetermined range, and in any case, the pore size distribution and the uniformity of texture are impaired.
  • the thickness is preferably 0.10 mm or less, more preferably 0.90 mm or less.
  • the thickness is less than 0.06 mm, the thickness becomes too thin to obtain a sufficient amount of liquid absorption as an absorbent pad and the strength cannot be ensured, which causes a problem in the drawing process of the kit. Further, since the texture is also deteriorated, the thickness is preferably 0.08 mm or more, more preferably 0.10 mm or more.
  • the average fiber diameter of the nonwoven fabric used for the absorbent pad for the immunochromatographic diagnosis kit of the present embodiment is 0.7 ⁇ m or more and 5.0 ⁇ m or less. If the average fiber diameter exceeds 5.0 ⁇ m, the average pore diameter becomes large, and at the same time, the uniformity of the pore diameter distribution decreases, resulting in large variations in TL color development intensity. Therefore, the average fiber diameter is preferably 4.0 ⁇ m or less, more preferably 3.0 ⁇ m or less. Moreover, although the finer and more uniform the average fiber diameter is, the denser and more uniform the pore diameter is formed, the fabric weight is too small when the fiber diameter is too thin, and the film thickness becomes thin, which is sufficient as an absorbent pad.
  • the average fiber diameter is preferably 0.9 ⁇ m or more, more preferably 1.0 ⁇ m or more.
  • the average pore diameter (Dave) of the nonwoven fabric used for the absorbent pad for the immunochromatographic diagnosis kit of the present embodiment is 2.0 ⁇ m or more and 15.0 ⁇ m or less.
  • the average pore diameter exceeds 15.0 ⁇ m, the liquid absorption rate is too fast for the absorption pad when considering the absorption of liquid due to the capillary phenomenon, and it does not absorb well depending on the composition of the developing liquid, resulting in uneven absorption. Therefore, the variation in TL color intensity becomes large. Therefore, the average pore diameter is preferably 13.5 ⁇ m or less, more preferably 12.0 ⁇ m or less.
  • the average pore diameter is preferably 2.5 ⁇ m or more, more preferably 3.5 ⁇ m or more.
  • the pore size distribution of the nonwoven fabric used in the absorbent pad for the immunochromatographic diagnostic kit of the present embodiment has the following formula: Dmax/Dave ⁇ 2.00 Dmax/Dmin ⁇ 3.50 Where Dmax is the maximum pore size ( ⁇ m), Dave is the average pore size ( ⁇ m), and Dmin is the minimum pore size ( ⁇ m). ⁇ It is preferable to satisfy. Dmax/Dave ⁇ 2.00 is more preferable, and Dmax/Dave ⁇ 1.50. Is more preferable.
  • Dmax/Dave ⁇ 2.00 When Dmax/Dave ⁇ 2.00, the pore size distribution is extremely non-uniform and the variation in TL color intensity becomes large, which is not suitable for use as an absorbent pad.
  • Dmax/Dmin ⁇ 3.00 is more preferable, and Dmax/Dmin ⁇ 2.50 is further preferable.
  • Dmax/Dmin ⁇ 3.50 the pore size distribution is extremely non-uniform, the variation in TL color intensity becomes large, and the possibility of misdiagnosis increases, which is not appropriate.
  • the formation index of the nonwoven fabric used for the absorbent pad for the immunochromatographic diagnosis kit of the present embodiment is preferably 90 or less.
  • the formation index can be adjusted by the unit weight and the thickness at the time of manufacturing the nonwoven fabric, and the press working after manufacturing the woven fabric.
  • the effect of the formation index on the performance of the absorbent pad if the formation index is large, the dispersion of the nonwoven fabric structure becomes large, and as a result, the dispersion of the TL color development intensity increases and the possibility of misdiagnosis increases. I will end up.
  • the non-woven fabric is cut into smaller pieces, which means non-uniformity of the non-woven fabric structure.
  • the difference between the tight and dense parts will greatly affect the performance. From these viewpoints, the formation index is more preferably 75 or less, and further preferably 60 or less.
  • thermoplastic resin The thermoplastic resin forming the fibers forming the nonwoven fabric used in the absorbent pad for the immunochromatographic diagnosis kit of the present embodiment has hydrophobicity, and examples thereof include polyolefin resin, polyester resin, and polyamide resin.
  • high-pressure low-density polyethylene that is a homopolymer or copolymer of ⁇ -olefin such as ethylene, propylene, 1-butene, 1-hexene, 4-methyl-1-pentene, and 1-octene, linear low Density polyethylene (LLDPE), high density polyethylene, polypropylene (propylene homopolymer), polypropylene random copolymer, poly 1-butene, poly 4-methyl-1-pentene, ethylene/propylene random copolymer, ethylene-1- Polyolefins such as butene random copolymers and propylene-1-butene random copolymers, polyesters (polyethylene terephthalate, polybutylene terephthalate, polyethylene naphthalate, etc.), polyamides (nylon-6, nylon-66, polymethaxylene adipamide) Etc.), polyvinyl chloride, polyimide, ethylene/vinyl acetate copolymer
  • the non-woven fabric used in the absorbent pad for the immunochromatographic diagnosis kit of the present embodiment is subjected to hydrophilization treatment and needs to have a hydrophilization degree in a predetermined range described below.
  • many thermoplastic resins are hydrophobic, and almost no one absorbs water even when the structure is formed as a nonwoven fabric.
  • the performance capable of reducing the variation in water absorption to an unlimited extent is achieved.
  • the method of hydrophilization is not particularly limited, and if it is a physical processing method, for example, hydrophilization by corona treatment or plasma treatment, chemical processing methods, for example, the introduction of a surface functional group, For example, introducing a sulfonic acid group, a carboxylic acid group, or the like by an oxidation treatment, a water-soluble polymer such as polyvinyl alcohol (PVA), a polyester resin, polystyrene sulfonic acid, or polyglutamic acid, and/or a surface active agent.
  • PVA polyvinyl alcohol
  • Nonionic surfactants such as nonionic surfactants, anionic surfactants, cationic surfactants, or amphoteric surfactants are used to impregnate and coat non-woven fabrics by the dip nip method or spray coating method.
  • a known method such as a method of Considering the water absorption required for the absorbent pad, an appropriate hydrophilic treatment method and conditions such as the amount of the treating agent used and the amount of the functional group introduced can be selected.
  • the degree of hydrophilicity is an index indicating the water absorption performance of the absorbent pad for immunochromatographic diagnostic kit, and can be evaluated by the Bayrek method, the dropping method, the sedimentation method or the liquid absorption test by immunochromatography, which is used for general water absorption tests. it can.
  • the hydrophilicity of the non-woven fabric used in the absorbent pad for the immunochromatographic diagnosis kit of the present embodiment is such that the water absorption height by the Bayrek method according to JIS-L1907 is 50 mm or more and 180 mm or less. When the degree of hydrophilicity is less than 50 mm, it is not possible to secure sufficient water absorption for spreading and holding a developing solution or the like as an absorbent pad.
  • the degree of hydrophilicity is preferably 60 mm or more, more preferably 70 mm or more.
  • the upper limit of the degree of hydrophilicity is not particularly limited, but is 180 mm or less. If the water absorption height is more than 180 mm, the water absorption speed may be too high, which may lead to a decrease in sensitivity, or the development and particle flow may become uneven. Therefore, the degree of hydrophilicity is preferably 165 mm or less, more preferably 150 mm or less.
  • the nonwoven fabric used in the absorbent pad for the immunochromatographic diagnosis kit of the present embodiment may be laminated according to various applications.
  • heat embossing heat fusion method such as ultrasonic fusion
  • mechanical entanglement method such as needle punch, water jet, hot melt adhesive
  • method by adhesive such as urethane adhesive
  • extrusion laminating can be adopted, and the method is not particularly limited.
  • the “diagnosis method” using the immunochromatographic diagnostic kit using the absorbent pad for immunochromatographic diagnostic kit of the present embodiment refers to various diagnoses performed using the immunochromatographic diagnostic kit.
  • the diagnostic target is not particularly limited, and it can be used for various diagnostic target tests such as human, animal, food, plant, and other environmental tests.
  • a sample sample is collected from the test object, if necessary, pre-processed such as extraction and filtration, dropped on the sample pad, wait for a predetermined time from the start of the test, and The diagnosis result is judged based on the color development that differs depending on the presence or absence.
  • it is not limited to this procedure, and it can be used for diagnosis of similar procedures and principles. It is preferable to filter the specimen sample in advance to remove extraneous substances and contaminants, which can be expected to further speed up diagnosis and improve diagnosis accuracy.
  • the immunochromatographic diagnostic kit of the present embodiment is for easily detecting the presence or absence of a test substance in various samples.
  • Types of diagnostic kits include lateral flow type and flow through type. It is not particularly limited as long as it uses a labeling reagent or an absorption pad, but a lateral flow type is preferable. Further, among the lateral flow type, there are a dip stick type and a cassette type, but those types are not particularly limited.
  • the configuration of the diagnostic kit is not particularly limited and may be any configuration commonly used in the art.
  • the member is not particularly limited as long as it is used in the field.
  • an absorption pad for example, (a) an absorption pad, (b) a nitrocellulose membrane, (c) a conjugate pad (an antibody sensitizing labeling reagent Include), (d) sample pad, and (e) mount. Further, some of these members may be omitted as necessary.
  • the absorption pad is a portion that finally absorbs the sample to be measured in the immunochromatography.
  • cellulose filter paper, paper, glass fiber, glass fiber and the like can be mentioned.
  • Chromatographic medium used in the immunochromatographic diagnostic kit is not particularly limited, and various commonly used chromatographic media can be used. Specific examples include (b) nitrocellulose membrane.
  • the conjugate pad is a portion where labeled particles such as an antibody-sensitized labeling reagent are dried and immobilized.
  • Examples of general conjugate pads include glass fibers, glass fibers, acrylic fibers, PET fibers alone or in combination, and non-woven fabrics and woven fabrics. Moreover, you may perform a pre-process as needed.
  • the sample pad is a part that first receives a sample to be measured in immunochromatography.
  • Examples of general sample pads include cellulose filter paper, paper, glass fiber, glass fiber, acrylic fiber, nylon fiber, and various woven fabrics.
  • the labeling reagent immobilized on the conjugate pad refers to a particulate substance that is insoluble in water, a buffer solution or the like and carries a dye or a dye.
  • the material constituting the particles is not particularly limited, examples of such labeling reagents include metal colloid particles such as gold colloid, platinum colloid, silver colloid, and selenium colloid, styrene latex such as polystyrene latex, and acrylic acid latex.
  • colored latex particles colored silica particles colored silica having a three-dimensional structure composed of silicon atoms and oxygen atoms, colored cellulose particles colored cellulose, and a labeling reagent in which coloring components such as carbon black are directly granulated. , Magnetic particles, and the like. Further, the labeling reagent may be fluorescent particles.
  • the labeling reagent needs to carry a substance such as an antibody that specifically binds to a substance to be detected, but the carrying method is not particularly limited.
  • a substance such as an antibody that specifically binds to a substance to be detected
  • the carrying method is not particularly limited.
  • supporting by physical adsorption, supporting by covalent bond, supporting by a combination thereof and the like can be mentioned.
  • the type and amount of the substance to be carried are not particularly limited.
  • Antibodies are the most common and preferred as the type of substance to be carried.
  • the supporting by physical adsorption is preferable from the viewpoint of easiness
  • the supporting by covalent bond is preferable from the viewpoint of stability and performance.
  • the subject that can be diagnosed by the immunochromatographic diagnostic kit of the present embodiment is not particularly limited, but specific examples include the following: cancer markers, hormones, infectious diseases, autoimmunity, plasma proteins, TDM, coagulation. ⁇ Fibrinolysis, amino acids, peptides, proteins, genes, cells, etc. More specifically, CEA, AFP, ferritillin, ⁇ 2micro, PSA, CA19-9, CA125, BFP, elastase 1, pepsinogen 1.2, fecal occult blood, urinary ⁇ 2micro, PIVKA-2, urinary BTA, insulin.
  • a dispersion liquid of the labeling reagent adjusted to a predetermined concentration is prepared, a buffer solution and an antibody are added, and the mixture is stirred for a certain period of time while adjusting the temperature to adsorb the antibody to the labeling reagent.
  • a blocking agent is further added and the mixture is stirred for a certain period of time while adjusting the temperature to block the colored cellulose particles.
  • the blocking agent various blocking agents can be used depending on the substance to be inspected, the sample, or the composition of the solution for diluting the sample.
  • centrifugation is performed to separate the supernatant containing the excess antibody and the blocking agent and the precipitated particles, and the supernatant is removed by decantation.
  • a liquid such as a buffer solution is added to the precipitated particles, and if necessary, ultrasonic waves are used for dispersion treatment. Washing is carried out a necessary number of times by a series of operations including sedimentation by centrifugation, removal of supernatant, and addition of liquid to prepare a dispersion liquid containing antibody-adsorbed/blocked particles at a predetermined concentration.
  • proteins, surfactants, sugars such as sucrose and trehalose are added to this dispersion, and a certain amount of the resulting solution is applied to a glass fiber conjugate pad and dried to prepare a detection reagent-containing part. ..
  • a buffer solution, surfactant, protein, reagent that traps contaminants in the sample, preservative, antibacterial agent, antioxidant, hygroscopic agent, etc. to the regenerated cellulose continuous long-fiber nonwoven fabric, and dry.
  • a sample pad Further, a chromatographic medium made of a nitrocellulose membrane having an antibody immobilized at a predetermined position and an absorbent pad made of cellulose filter paper for absorbing a sample are prepared.
  • An immunochromatographic diagnostic kit is produced by immobilizing them on a sheet having an adhesive site called a backing sheet and cutting the sheet into a predetermined size.
  • ⁇ Thickness (mm)> The thickness of the non-woven fabric was measured by a thickness test according to JIS-L1096 under a load of 1.96 kPa.
  • ⁇ Unit weight (g/m 2 )> A non-woven fabric having an area of 0.5 m 2 or more is dried at 105° C. until a constant weight is obtained, and then allowed to stand in a thermostatic chamber at 20° C. and 65% RH for 16 hours or more to measure its weight. The weight was measured and used as the basis weight of the nonwoven fabric.
  • the obtained non-woven fabric was cut into 10 cm ⁇ 10 cm, pressed on an iron plate at 60° C. above and below at a pressure of 0.30 MPa for 90 seconds, and then the non-woven fabric was deposited with platinum. Then, using the above SEM, an image was taken under the conditions of an acceleration voltage of 15 kV and a working distance of 21 mm.
  • the photographing magnification was 10,000 times for yarns having an average fiber diameter of less than 0.5 ⁇ m, 6000 times for yarns having an average fiber diameter of 0.5 ⁇ m or more and less than 1.5 ⁇ m, and 4000 times for yarns having an average fiber diameter of 1.5 ⁇ m or more.
  • the imaging visual field at each imaging magnification was 12.7 ⁇ m ⁇ 9.3 ⁇ m at 10000 ⁇ , 21.1 ⁇ m ⁇ 15.9 ⁇ m at 6000 ⁇ , and 31.7 ⁇ m ⁇ 23.9 ⁇ m at 4000 ⁇ .
  • 100 or more fibers were photographed at random and all fiber diameters were measured. At this time, the fibers fused in the yarn length direction were omitted from the measurement.
  • the weight average fiber diameter (Dw) determined by the above was used as the average fiber diameter ( ⁇ m).
  • the formation index can be calculated by standard deviation ⁇ average absorbance ⁇ 10.
  • the formation index has a very high correlation with visual observation, and most directly expresses the formation of the nonwoven fabric. Further, the formation index becomes smaller as the formation becomes better and becomes larger as the formation becomes worse.
  • the water absorption height was measured by the BYREC method according to JIS-L1907. Specifically, five test pieces each having a size of about 200 mm ⁇ 25 mm are collected. Next, after fixing the test piece to the horizontal bar supported on the water surface of the water tank filled with water with a pin or the like, lower the horizontal bar so that 20 mm ⁇ 2 mm at the lower end of the test piece is immersed in water. Adjust and leave for 10 minutes. After standing, the height at which water rises due to the capillary phenomenon is measured up to 1 mm on a scale. The average value of the water absorption heights of the five test pieces was taken as the degree of hydrophilicity.
  • BG coloring ⁇ Background of immunochromatographic diagnostic kit (BG coloring)> An immunochromatographic diagnostic kit cut to an appropriate width was placed in a plastic housing. Next, 66 mM of PBS containing 1 wt% BSA and pH 7.4 was prepared and used as a negative sample. Using the obtained diagnostic kit with a housing, 100 ⁇ L of a negative sample was dropped on the sample dropping portion of the diagnostic kit, and 5 minutes later, an immunochromatographic reader C10066-10 manufactured by Hamamatsu Photonics KK was used to measure 1 between TL and CL. The intensity of color development (unit: mABS) was measured. Here, it was determined that the BG was colored when the color development intensity was 20 mABS or more. Here, the reason why it is set to 20 mABS or more is that the coloring can be surely confirmed by visual observation when it is 20 mABS or more.
  • mABS intensity of color development
  • hCG human chorionic gonadotropin
  • BSA bovine serum albumin
  • TL color intensity ⁇ Test line (TL) color intensity>
  • 100 ⁇ l of the positive sample was dropped on the sample dropping part of the diagnostic kit in the same manner as above, and the color development intensity (mABS) of the test line after 5 minutes was measured by an immunochromatographic reader. This measurement was performed 30 times in total, and the average color development intensity (mABS) was taken as the TL color development intensity.
  • thermoplastic nonwoven fabric Using a polyethylene terephthalate resin, this resin was melted by an extruder and extruded from a spinneret nozzle having a nozzle diameter of 0.3 mm at a single hole discharge rate of 0.12 g/min.
  • the spinning gas was set to a spinning gas temperature of 370° C. and a spinning gas pressure of 0.075 MPa to produce a polyethylene terephthalate nonwoven fabric.
  • the resulting nonwoven fabric had a basis weight of 80 g/m 2 , a thickness of 0.22 mm, and an average fiber diameter of 1.9 ⁇ m.
  • Dmax 5.64 ⁇ m
  • Dave 4.10 ⁇ m
  • Dmin 3.23 ⁇ m
  • the formation index was 49.
  • the non-woven fabric produced as described above was hydrophilized using the dip nip method. Specifically, a hydrophilic finishing agent containing a mixture of an anionic surfactant and water is placed in a working bath, the prepared thermoplastic non-woven fabric is dipped, squeezed with a mangle at a predetermined squeezing ratio, and then a tenter type. It was dried and heat-treated with a dryer. After hydrophilic treatment, the degree of hydrophilicity was measured by the above Bayrec method and found to be 109 mm.
  • a glass fiber conjugate pad (#8951 manufactured by Ahlstrom) was cut into a shape having a height of 10 mm and a length of 300 mm. Thereafter, 1020 ⁇ l of the antibody-sensitized gold colloid particle dispersion was evenly applied, and dried at 50° C. for 60 minutes.
  • sample pad (Millipore, C048) was added to a PBS buffer solution containing a large excess of 2.0% by weight of BSA (Sigma Aldrich, A7906) and 2.0% by weight of Tween-20 (registered trademark). It was impregnated with (66 mM, pH 7.4), the excess liquid was removed, and then it was dried for 60 minutes at 50° C. Subsequently, it was cut into a shape having a height of 18 mm and a length of 300 mm.
  • BSA Sigma Aldrich, A7906
  • Tween-20 registered trademark
  • a nitrocellulose membrane manufactured by Millipore, SHF0900425 was cut into a shape having a height of 25 mm and a length of 300 mm.
  • a liquid coating device Musashi Engineering Co., Ltd., 300DS
  • 0.1 ⁇ l/mm of a PBS solution 66 mM, pH 7.4
  • 0.1% by weight of anti-hCG- ⁇ mouse antibody Medix Biochemica, Inc., 6601 was used. It was applied to a portion having a height of 7 mm in proportion.
  • a PBS solution (66 mM, pH 7.4) containing 0.1% by weight of anti-mouse-rabbit antibody (Z0259, manufactured by Daco) was applied to a 12 mm high portion at a rate of 0.1 ⁇ l/mm. Then, it was dried at 37° C. for 30 minutes.
  • ⁇ Preparation of immunochromatographic diagnostic kit> The prepared capture antibody-coated nitrocellulose membrane, absorption pad, conjugate pad containing a labeling reagent, and sample pad were attached to a backing card (AR9020, manufactured by Adhesives Research). Subsequently, it was cut into a width of 5 mm with a cutting machine to obtain an immunochromatographic diagnostic kit having a width of 5 mm and a height of 60 mm.
  • the immunochromatographic diagnostic kit has a width of 5 mm and a thickness of 0.2 mm or more is used for the absorbent pad.
  • the deployable amount of the developing solution is about 80 to 120 ⁇ l.
  • 100 ⁇ l was actually developed and evaluated.
  • the deployable volume of the developing solution is approximately 30 to 80 ⁇ l. Then, 50 ⁇ l was actually developed and evaluated.
  • Example 2 An immunochromatographic diagnostic kit was prepared in the same manner as in Example 1 except that the thermoplastic nonwoven fabric was manufactured so that the basis weight was 90 g/m 2 and the average fiber diameter was 2.1 ⁇ m, and its performance was evaluated. The results are shown in Table 1 below.
  • Example 3 An immunochromatographic diagnostic kit was prepared in the same manner as in Example 1 except that the thermoplastic nonwoven fabric was manufactured so that the average fiber diameter was 4.7 ⁇ m, and its performance was evaluated. The results are shown in Table 1 below.
  • Example 4 An immunochromatographic diagnostic kit was prepared in the same manner as in Example 1 except that the thermoplastic nonwoven fabric was manufactured to have a basis weight of 120 g/m 2 , and its performance was evaluated. The results are shown in Table 1 below.
  • Example 5 An immunochromatographic diagnostic kit was prepared in the same manner as in Example 1 except that the thermoplastic nonwoven fabric was manufactured to have a basis weight of 185 g/m 2 , and its performance was evaluated. The results are shown in Table 1 below.
  • Example 6 An immunochromatographic diagnostic kit was prepared in the same manner as in Example 1 except that the concentration of the hydrophilizing agent was adjusted so that the hydrophilicity of the thermoplastic nonwoven fabric was adjusted so that the degree of hydrophilization was 171 mm. did. The results are shown in Table 1 below.
  • Example 7 An immunochromatographic diagnostic kit was prepared in the same manner as in Example 1 except that the thermoplastic non-woven fabric was produced in the same manner as in Example 6 so that the degree of hydrophilicity was 72 mm, and its performance was evaluated. The results are shown in Table 1 below.
  • Example 8 An immunochromatographic diagnostic kit was prepared in the same manner as in Example 1 except that the basis weight and thickness of the thermoplastic nonwoven fabric were adjusted so that the formation index became 95, and the performance thereof was evaluated. The results are shown in Table 1 below.
  • Example 9 An immunochromatographic diagnostic kit was prepared in the same manner as in Example 1 except that a thermoplastic nonwoven fabric was produced using polypropylene, and its performance was evaluated. The results are shown in Table 1 below.
  • Example 10 An immunochromatographic diagnostic kit was prepared in the same manner as in Example 1 except that a laminated hydrophilic hydrophilic nonwoven fabric used in Example 2 was used and its performance was evaluated. The results are shown in Table 1 below.
  • Example 11 An immunochromatographic diagnostic kit was prepared in the same manner as in Example 1 except that the thermoplastic nonwoven fabric was manufactured to have a basis weight of 45 g/m 2 , a thickness of 0.14 mm, and an average fiber diameter of 1.6 ⁇ m. Was evaluated as 50 ⁇ l. The results are shown in Table 1 below.
  • Example 12 An immunochromatographic diagnostic kit was prepared in the same manner as in Example 1 except that the thermoplastic nonwoven fabric was manufactured so that the basis weight was 40 g/m 2 , the thickness was 0.10 mm, and the average fiber diameter was 1.0 ⁇ m. Similarly, its performance was evaluated. The results are shown in Table 1 below.
  • Example 13 An immunochromatographic diagnostic kit was prepared in the same manner as in Example 1 except that the thermoplastic nonwoven fabric was manufactured so that the basis weight was 20 g/m 2 , the thickness was 0.06 mm, and the average fiber diameter was 0.9 ⁇ m. Similarly, its performance was evaluated. The results are shown in Table 1 below.
  • Example 14 An immunochromatographic diagnostic kit was prepared in the same manner as in Example 2, and the kit was cut into a width of 2.5 mm, and its performance was evaluated in the same manner as in Example 11. The results are shown in Table 1 below.
  • Example 1 In each of Examples 1 to 14, by using as the absorbent pad a hydrophilized thermoplastic resin having physical properties within the predetermined range defined in claim 1, as shown in Table 1 below, after 5 minutes. It was possible to obtain an immunochromatographic diagnostic kit with no BG coloration (less than 20 mABS), little variation in TL color development intensity, and little variation between products.
  • thermoplastic nonwoven fabric was manufactured to have a basis weight of 220 g/m 2 and a thickness of 0.55 mm, and its performance was evaluated. The results are shown in Table 1 below. As is clear from the results shown in Table 1, the non-woven fabric is considerably clogged and water is not sufficiently absorbed, so that the BG is colored after 5 minutes, and the %CV of the TL coloring intensity is increased. I got it.
  • thermoplastic nonwoven fabric was manufactured to have a basis weight of 80 g/m 2 and a thickness of 1.30 mm, and its performance was evaluated.
  • the results are shown in Table 1 below. As is clear from the results shown in Table 1, since the thickness was too thick relative to the basis weight, a considerably rough structure was formed, so that the formation index was deteriorated and %CV of the TL coloring intensity was greatly increased.
  • Example 3 An immunochromatographic diagnostic kit was prepared in the same manner as in Example 1 except that the thermoplastic nonwoven fabric was manufactured so that the average fiber diameter was 5.5 ⁇ m, and its performance was evaluated. The results are shown in Table 1 below. As is clear from the results shown in Table 1, as in Comparative Example 2, the fiber diameter was too large, the formation index was poor, and the %CV of the TL color development intensity was greatly increased.
  • thermoplastic nonwoven fabric was manufactured to have a hydrophilicity of 48 mm, and its performance was evaluated.
  • BG coloring after 5 minutes as in Comparative Example 1, and the TL color development time was also significantly delayed. Further, the %CV of the TL color development intensity was greatly increased.
  • Example 5 An immunochromatographic diagnostic kit was prepared in the same manner as in Example 1 except that a thick cellulose absorbent pad was used, and its performance was evaluated. The results are shown in Table 1 below. As is clear from the results shown in Table 1, there was BG coloring after 5 minutes, and the %CV of the TL color development intensity also greatly increased.
  • Example 6 An immunochromatographic diagnostic kit was prepared in the same manner as in Example 1 except that a thin cellulose absorbent pad was used, and its performance was evaluated. The results are shown in Table 1 below. As is clear from the results shown in Table 1, there was BG coloring after 5 minutes, and the %CV of the TL color development intensity was also greatly increased.
  • Example 7 An immunochromatographic diagnostic kit was prepared in the same manner as in Example 1 except that the absorption pad made of glass fiber was used, and its performance was evaluated. The results are shown in Table 1 below. As is clear from the results shown in Table 1, there was BG coloring after 5 minutes as in Comparative Example 1, and the %CV of TL color development intensity also greatly increased. In addition, a clearly visible amount of dust was generated during the production of the immunochromatographic diagnostic kit, especially during the cutting process.
  • Example 8 An immunochromatographic diagnostic kit was prepared in the same manner as in Example 1 except that the thermoplastic nonwoven fabric was manufactured to have a basis weight of 15 g/m 2 and a thickness of 0.05 mm, and its performance was evaluated in the same manner as in Example 11. .. The results are shown in Table 1 below. As is clear from the results shown in Table 1, the amount of liquid absorbed by the absorbent pad was insufficient with respect to the amount of liquid developed, and the liquid did not develop.
  • Example 9 An immunochromatographic diagnostic kit was prepared in the same manner as in Example 1 except that the thermoplastic nonwoven fabric was produced so that the average fiber diameter was 0.6 ⁇ m, and its performance was evaluated in the same manner as in Example 11. The results are shown in Table 1 below. As is clear from the results shown in Table 1, as in Comparative Example 8, the liquid absorption amount was insufficient and did not develop.
  • Example 11 An immunochromatographic diagnostic kit was prepared using a thin cellulose absorbent pad with a kit width of 2.5 mm, and its performance was evaluated in the same manner as in Example 11. The results are shown in Table 1 below. As is clear from the results shown in Table 1, there was BG coloring after 5 minutes, and the %CV of the TL color intensity was greatly increased.
  • Comparative Example 12 An immunochromatographic diagnostic kit was prepared with a 2.5 mm width of the absorbent pad made of glass fiber, and its performance was evaluated in the same manner as in Example 11. The results are shown in Table 1 below. As is clear from the results shown in Table 1, as in Comparative Example 1, there was BG coloring after 5 minutes, the %CV of the TL color intensity was significantly increased, and the% CV in the case of a width of 5 mm was larger than that in Comparative Example 7 (Comparative Example 7). It got even worse. In addition, a clearly visible amount of dust was generated during the production of the immunochromatographic diagnostic kit, especially during the cutting process.
  • the immunochromatographic diagnostic kit using the absorbent pad for immunochromatographic diagnostic kit of the present invention has excellent reproducibility with little variation in color development intensity.
  • the absorbent pad for immunochromatographic diagnostic kit of the present invention can be suitably used as an absorbent pad for various immunochromatographic diagnostic kits.

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Abstract

発色強度のバラツキが少なく再現性にすぐれたイムノクロマト診断キットに用いるためのイムノクロマト診断キット用吸収パッドを提供する。本発明は、熱可塑性樹脂の繊維から構成される不織布からなるイムノクロマト診断キット用吸収パッドであって、該不織布の目付が２０～２００ｇ／ｍ２であり、厚みが０．０６ｍｍ～１．２０ｍｍであり、平均繊維径が０．７μｍ～５．０μｍであり、平均孔径が２．０μｍ～１５．０μｍであり、そして親水化度が５０ｍｍ～１８０ｍｍであることを特徴とするイムノクロマト診断キット用吸収パッド、及びこれを用いたイムノクロマト診断キットに関する。

Description

イムノクロマト診断キット用吸収パッド
　本発明は、イムノクロマト診断キット用の吸収パッド、及びそれを用いたイムノクロマト診断キットに関する。
　近年、医療情勢の変化とともにＰＯＣＴ（Point of care testing：臨床現場即時検査）の注目度が増している。ＰＯＣＴとは、被験者の傍らで医療従事者又は被験者自らが行う検査であり、検査時間を短縮できるだけでなく、検査結果を被験者が直接確認することができるという利点を有する検査である。これらの利点を活かして、ＰＯＣＴは、病院の外来や病棟で実施されるのみならず診療所や在宅医療の現場でも着実に普及している。一般にＰＯＣＴは、病院の中央検査室や外注検査センターで用いられる検査とは異なり、診療所や在宅医療で行われる検査であるため、検査そのものの知識が充分ではなく測定について習熟していない者が取扱うことが多い。そのために、ＰＯＣＴ用の検査試薬には、誰もが簡単な説明を受けただけで確実な検査結果が出せるような簡便な操作性が求められている。
　このような簡易迅速診断に用いられる試薬として、イムノクロマトグラフ法の測定原理を利用した検査キットが広く用いられている。そのキット構成としては、主としてクロマトグラフ媒体、試料添加部（サンプルパッド）、標識試薬保持部（コンジュゲートパッド）、及び吸収部（吸収パッド）などで構成されており、必要に応じて、これらの部材が基材（バッキングシート）に貼り付けられ、ハウジング部材に収められている。ニトロセルロースなどからなるクロマトグラフ媒体は、液体試料の展開部としての機能を有するとともに、検査結果の判定部としての機能も有する。クロマトグラフ媒体の長手方向の一端には、試料添加部（サンプルパッド）及び標識試薬が含有された標識試薬保持部（コンジュゲートパッド）が通液可能に設置され、反対側の端部には過剰な試料液を吸収するための吸収部（吸収パッド）が設けられている。
　イムノクロマト診断キットによる検査は、採取した各種検体又は試料液を試料添加部に添加することにより行われる。添加された検体や試料液は、標識試薬保持部を通過し、クロマトグラフ媒体中を毛細管現象により長手方向に移動し、判定部を通って、吸収パッドに吸収される。試料液中の被検出物質は、抗原－抗体反応を利用して、標識試薬保持部を通過する際に金コロイドなどの有色の標識試薬と複合体を形成した後、クロマトグラフ媒体上の判定部に捕捉される。イムノクロマト診断キットによる検査では、規定された反応時間（１０～１５分間）の間にクロマトグラフ媒体の判定部に捕捉された被検出物質の量を、標識試薬に由来する着色の強度を指標として目視により判定する。
　上記イムノクロマトグラフ法による検査では、疾患の判定を迅速且つ正確に行うことが従来から強く求められている。例えば、急性冠症候群の診断に有用な検査項目がいくつかある。急性冠症候群の中でも、急性心筋梗塞は，冠動脈が血栓で閉塞され，心筋組織が壊死に陥る疾患であり，発症早期における再灌流の成否が予後に大きく影響する。そのため，正確性の高い診断が重要となる。この場合、診断に必要なマーカーを定量的に検出する必要があり、当然、当該診断で使用されるイムノクロマト診断キットは、イムノクロマト診断キット製品間の発色強度のバラツキが限りなく小さいことが必須である。仮に、発色強度のバラツキが大きいイムノクロマト診断キットを用いた場合、当然、誤診断に繋がり、上記疾患の場合においては、誤診断により、命の危険にさらされる可能性もある。これらより、イムノクロマト診断キット製品間のバラツキを限りなく小さくすることは、イムノクロマト診断キット開発における大きな課題の一つとなっている。
　バラツキの原因としてはキットを構成する各部材の影響が考えられるが、特に吸収パッドに関しては吸液を担う部分であるが故に、試料の吸液速度のバラツキに起因する発色強度や発色時間のバラツキや、さらにはバックグラウンドの着色といった不具合による発色強度のバラツキの原因となっている。
　ここで「バックグラウンド」とは、標識試薬が、ニトロセルロース膜の細孔に詰まったり、非特異吸着したりすることで、ニトロセルロース膜が着色してしまい発生する現象である。バックグラウンドが悪いと、ニトロセルロース膜とテストライン（ＴＬ）とのコントラストが悪くなり、ＴＬの発色したラインが見えづらくなってしまい、医療現場で判定しにくくなる。更に、バックグラウンドが悪いと、陰性のＴＬ（すなわち、発色無し）の判断が困難になってしまう。これら現象は、誤診を引き起こしてしまう可能性がある。
　イムノクロマト法の検査キットに用いられる吸収パットとしては、従来、セルロース繊維、ガラス繊維、パルプなどの繊維からなる綿、不織布、ろ紙などが用いられてきた。しかしながら、これらの素材のみで構成される吸収パッドは、その構造や構成素材、製造方法の影響を受け、吸水性が不十分であり、また、吸収量のバラツキが生じることが問題となっていた。
　これらの問題を解決すべく、以下の特許文献１では、高吸水性ポリマー粒子を用いた吸収パッドを、そして以下の特許文献２では、シリカ粒子などをセルロース繊維などの不織布素材に噴霧した吸収パッドを用いることが検討されている。しかしながら、これらの吸収パッドの場合、繊維密度の均一化や噴霧量の均一化が困難であり、吸水性は改善されても製品間で吸水速度にバラツキが生じ易くなるため、製品間のバラツキの改善には至らないというのが現状である。
　また、従来の吸収パッドに起因するキット製造工程上の問題も報告されている。例えば、グラスファイバー製吸収パッドは、イムノクロマト診断キット生産工程における切断時に脱落繊維が粉塵として舞うことがある。これらグラスファイバーの粉塵は、吸い込んでしまうと気管支の炎症を起こす可能性があるが故に、製造作業員の健康被害の観点から、あまり使用を好まれないことがある。更には、カッティングモジュールの刃が欠けてしまうなどの不具合の報告も多い。これらの理由から、なるべくグラスファイバー製吸収パッドの使用は避けたい。
　他方、セルロース製の吸収パッドについては、その厚みのムラの為に、イムノクロマトグラフのキットを最終製品形態であるハウジングに収める際、設計値より厚すぎて閉まらない、薄すぎてハウジング内で位置がずれてしまうなどの不具合が起こりやすく、結果的にイムノクロマト診断キット製品間のバラツキが大きくなる。
　さらに近年では、キットのコンパクト化やキット製造の自動化などの流れの中で、吸収パッドを含むキット自体を薄くする、幅を狭くするといったことが強く求められている。しかしながら、従来のセルロース製の吸収パッドでは、厚みや弾性率の問題により、細かく切れないといった問題がある。更に、グラスファイバー製の吸収パッドはムラがあるので、細かく切った場合、吸液量にバラツキが生じるため、イムノクロマト診断キット製品間でもバラツキが生じるという問題もある。
　このように、バラツキを最大限に抑制しながら、コンパクト化に対応できる吸収パッドが強く求められている。
特許第６１３４６１５号公報 特開２０１２－１８９３４６号公報
　前記した従来技術の問題点に鑑み、本発明が解決しようとする課題は、発色強度のバラツキが少なく再現性にすぐれたイムノクロマト診断キットに用いるためのイムノクロマト診断キット用吸収パッドを提供することである。
　本発明者らは、前記課題を解決すべく鋭意検討し実験を重ねた結果、特定の物性を有する熱可塑性樹脂の繊維から構成される不織布に親水加工を施し親水化したものを吸収パッドとして用いることにより、吸液性能が均一化し、イムノクロマト診断キットの発色強度のバラツキが大きく改善することがすることを予想外に見出し、本発明を完成するに至ったものである。
　すなわち、本発明は以下の通りのものである。
　［１］熱可塑性樹脂の繊維から構成される不織布からなるイムノクロマト診断キット用吸収パッドであって、該不織布の目付が２０～２００ｇ／ｍ２であり、厚みが０．０６ｍｍ～１．２０ｍｍであり、平均繊維径が０．７μｍ～５．０μｍであり、平均孔径が２．０μｍ～１５．０μｍであり、そして親水化度が５０ｍｍ～１８０ｍｍであることを特徴とするイムノクロマト診断キット用吸収パッド。
　［２］前記不織布の地合指数が９０以下であり、かつ、孔径分布が以下の式：
　　　Ｄｍａｘ／Ｄａｖｅ＜２．００
　　　Ｄｍａｘ／Ｄｍｉｎ＜３．５０
｛式中、Ｄｍａｘは最大孔径(μｍ)であり、Ｄａｖｅは平均孔径(μｍ)であり、そしてＤｍｉｎは最小孔径(μｍ)である。｝
を満たす、前記［１］に記載のイムノクロマト診断キット用吸収パッド。
　［３］前記熱可塑性樹脂が、ポリエチレンテレフタレート、ポリブチレンテレフタレート、ポリプロピレン、及びポリエチレンのうちの1つからなるか又はそれらの複数が複合されてなる、前記［１］又は［２］に記載のイムノクロマト診断キット用吸収パッド。
　［４］前記不織布が、単層の不織布又は積層した不織布である、前記［１］～［３］のいずれかに記載のイムノクロマト診断キット用吸収パッド。
　［５］前記［１］～［４］のいずれかに記載のイムノクロマト診断キット用吸収パッドを用いたイムノクロマト診断キット。
　本発明のイムノクロマト診断キット用吸収パッドを用いたイムノクロマト診断キットは、発色強度のバラツキが少なく再現性に優れるものとなる。
　本発明のイムノクロマト診断キット用吸収パッドでは、熱可塑性樹脂の繊維から構成される不織布の目付を２０～２００ｇ／ｍ２、厚を０．０６ｍｍ～１．２０ｍｍ、平均繊維径を０．７μｍ～５．０μｍ、平均孔径を２．０μｍ～１５．０μｍにコントロールすることで、発色強度のバラツキが少なく、再現性に優れるものとなる。吸収パッドというのは、文字通り、水を吸収するものなので、親水性の素材が使用される。従来のセルロース製の吸収パッドや、グラスファイバー製の吸収パッドは親水性の素材であるし、特許文献１及び２に記載の吸収パッドも同様である。しかしながら、これらの吸収パッドでは、イムノクロマト診断キットにおける発色強度のバラツキの改善効果はみられない。
　他方、本願発明者らは、イムノクロマト診断キット用の吸収パッドとして、発色強度のバラツキを抑えるために、あえて疎水性である熱可塑性不織布を用いて均一な構造を形成し、更に親水化処理することで、親水化具合をコントロールすることが重要であることを見出した。また、吸水速度を上げるためには、単純に親水性が高ければいいという訳ではない。言い換えれば、吸水速度を改善するために親水性と疎水性のコントロールが必要となり、本願発明においては、疎水性の熱可塑性不織布を用いて親水化処理することで、本願発明の吸水力をコントロールでき、バックグラウンドの改善に繋がった。更に、イムノクロマト診断キットの製造工程においても、グラスファイバーと比較して脱離繊維が少なく、切断・整形も容易なことから、厚みや幅などのパッドやキットのサイズ設計について高い自由度をもち、かつ工程上の安定性の確保も可能である。
本発明の一実施形態としてのイムノクロマト診断キットの断面図である。
　以下、本発明の実施形態を詳細に説明する。
　本実施形態のイムノクロマト診断キット用吸収パッドは、熱可塑性樹脂の繊維から構成される不織布からなるイムノクロマト診断キット用吸収パッドであって、該不織布の目付が２０～２００ｇ／ｍ２であり、厚みが０．０６ｍｍ～１．２０ｍｍであり、平均繊維径が０．７μｍ～５．０μｍであり、平均孔径が２．０μｍ～１５．０μｍであり、そして親水化度が５０ｍｍ～１８０ｍｍであることを特徴とする。
　イムノクロマト診断キットを用いて実施するイムノクロマトグラフ法による検査方法には、一般的に、被測定物を含む溶液を膜に対して垂直方向に通過させるフロースルー方式と、水平方向に通過させるラテラルフロー方式の２種類があるが、本実施形態のイムノクロマト診断キット用吸収パッドは、これらのいずれの方式にも使用することができる。
＜不織布＞
［不織布構造］
　本実施形態のイムノクロマト診断キット用吸収パッドに用いる不織布としては、特に制限はなく、スパンボンド不織布、メルトブローン不織布、湿式不織布、乾式不織布、乾式パルプ不織布、フラッシュ紡糸不織布、開繊不織布等が挙げられる。特に、極細繊維からなる不織布として、メルトブローン不織布やフラッシュ紡糸不織布が好ましい。
［目付］
　本実施形態のイムノクロマト診断キット用吸収パッドに用いる不織布の目付は２０ｇ／ｍ２以上２００ｇ／ｍ２以下である。目付が２００ｇ／ｍ２を超えると、厚みが厚くなりすぎる点で不適である。また、そもそもキット構成上の影響や経済性の観点から目付が大きい必要は全くない。そのため、目付は、好ましくは１９０ｇ／ｍ２以下、より好ましくは１８０ｇ／ｍ２である。他方、目付が２０ｇ／ｍ２未満になると吸収パッドとして十分な吸液量を担保できず、なた、不織布構造として繊維の粗密のムラが顕著にあらわれ、地合いも悪くなってしまうため、ＴＬ発色強度のバラツキも大きくなってしまう。それゆえ、目付は、３０ｇ／ｍ２以上が好ましく、より好ましくは４０ｇ／ｍ２以上である。
［厚み］
　本実施形態のイムノクロマト診断キット用吸収パッドに用いる不織布の厚みは、０．０６ｍｍ以上１．２０ｍｍ以下である。厚みの上限については、１．２０ｍｍを超える厚みの不織布を製造しようとすると、目付や繊維径が所定範囲を外れてしまい、いずれの場合も孔径分布や地合いの均一性を損なう。厚みは、好ましくは０．１０ｍｍ以下、より好ましくは０．９０ｍｍ以下である。他方、０．０６ｍｍ未満となると厚みが薄くなってしまい吸収パッドとして十分な吸液量を得られず、また、強度を担保できないため、キットの製図工程上不具合が生じる。また、地合いも悪くなってしまうため、厚みは、好ましくは０．０８ｍｍ以上、より好ましくは０．１０ｍｍ以上である。
［平均繊維径］
　本実施形態のイムノクロマト診断キット用吸収パッドに用いる不織布の平均繊維径は０．７μｍ以上５．０μｍ以下である。平均繊維径が５．０μｍを超えると平均孔径が大きくなり、また、同時に孔径分布の均一性が低下することにより、ＴＬ発色強度のバラツキが大きくなってしまう。そのため、平均繊維径は、好ましくは４．０μｍ以下、より好ましくは３．０μｍ以下である。また、平均繊維径が細くかつ均一であるほど緻密で均一な孔径を構成するものの、繊維径が細すぎても製造の際目付が小さく、また、膜厚が薄くなってしまい、吸収パッドとして十分な吸液量や強度を保てず、かつ、目付について前記したように繊維の粗密のムラが顕著にあらわれ、ＴＬ発色強度のバラツキが大きくなってしまう。それゆえ、平均繊維径は０．９μｍ以上が好ましく、より好ましくは１．０μｍ以上である。
［平均孔径］
　本実施形態のイムノクロマト診断キット用吸収パッドに用いる不織布の平均孔径（Ｄａｖｅ）は、２．０μｍ以上１５．０μｍ以下である。平均孔径が１５．０μｍを超えると毛細管現象による液の吸収を考えた際に吸液速度が吸収パッドとしては速すぎ、展開する液の組成によってはうまく吸液せず、吸バラツキが生じる等のもため、ＴＬ発色強度のバラツキが大きくなってしまう。そのため、平均孔径は、１３．５μｍ以下が好ましく、１２．０μｍ以下がより好ましい。また、平均孔径が２．０μｍ未満では吸液速度が遅くなり、その分、ＴＬ発色時間が遅くなるため、判定時間の長時間化などのデメリットが大きい。よって、平均孔径は、２．５μｍ以上が好ましく、より好ましくは３．５μｍ以上である。
［孔径分布］
　本実施形態のイムノクロマト診断キット用吸収パッドに用いる不織布の孔径分布は、以下の式：
　　　Ｄｍａｘ／Ｄａｖｅ＜２．００
　　　Ｄｍａｘ／Ｄｍｉｎ＜３．５０
｛式中、Ｄｍａｘは最大孔径(μｍ)であり、Ｄａｖｅは平均孔径(μｍ)であり、そしてＤｍｉｎは最小孔径(μｍ)である。｝
を満たすことが好ましい。
　Ｄｍａｘ／Ｄａｖｅ＜２．００がより好ましく、Ｄｍａｘ／Ｄａｖｅ＜１．５０．がさらに好ましい。ここで、Ｄｍａｘ／Ｄａｖｅ＝１は、理論上で不織布を構成する繊維で形成される孔径が完全に同一である理想的な状態における孔径分布を意味する。Ｄｍａｘ／Ｄａｖｅ≧２．００では、孔径分布が極めて不均一であり、ＴＬ発色強度のバラツキが大きくなってしまい、吸収パッド用途として適切でない。
　Ｄｍａｘ／Ｄｍｉｎ＜３．００がより好ましく、Ｄｍａｘ／Ｄｍｉｎ＜２．５０がさらに好ましい。ここで、Ｄｍａｘ／Ｄｍｉｎ＝１は、理論上で不織布を構成する繊維で形成される孔径が完全に同一である理想的な状態における孔径分布を意味する。Ｄｍａｘ／Ｄｍｉｎ≧３．５０では、孔径分布が極めて不均一であり、ＴＬ発色強度のバラツキが大きくなってしまい、誤診の可能性が上がってしまうため適切でない。
［地合指数］
　本実施形態のイムノクロマト診断キット用吸収パッドに用いる不織布の地合指数が９０以下であることが好ましい。地合指数は値が小さい程、不織布の構造として均一であることを示し、逆に地合指数は値が大きい程、不織布の構造が不均一であることを示す。地合指数は不織布製造の際の目付と厚みや、織布製造後のプレス加工などで調整が可能である。吸収パッド性能に対し地合指数が与える影響については、地合指数の値が大きいと、不織布構造としてのバラツキが大きくなり、その結果、ＴＬ発色強度のバラツキが増大し誤診の可能性が上がってしまう。加えて、特に細幅のイムノクロマト診断キットを作製する場合（例えば、２．０～３．０ｍｍ幅のキット）には、より細かく不織布を切断することになり、不織布構造の不均一さ、言い換えると租の部分と密の部分の差がより大きく性能に影響してしまうことになる。これらの観点から、地合指数は、７５以下がより好ましく、さらに好ましくは６０以下である。
［熱可塑性樹脂］
　本実施形態のイムノクロマト診断キット用吸収パッドに用いる不織布を構成する繊維を構成する熱可塑性樹脂は疎水性を有しており、ポリオレフィン系樹脂、ポリエステル系樹脂、ポリアミド系樹脂が挙げられる。具体的には、エチレン、プロピレン、１－ブテン、１－ヘキセン、４－メチル－１－ペンテン、１－オクテン等のα－オレフィンの単独若しくは共重合体である高圧法低密度ポリエチレン、線状低密度ポリエチレン（ＬＬＤＰＥ）、高密度ポリエチレン、ポリプロピレン（プロピレン単独重合体）、ポリプロピレンランダム共重合体、ポリ１－ブテン、ポリ４－メチル－１－ペンテン、エチレン・プロピレンランダム共重合体、エチレン－１－ブテンランダム共重合体、プロピレン－１－ブテンランダム共重合体等のポリオレフィン、ポリエステル（ポリエチレンテレフタレート、ポリブチレンテレフタレート、ポリエチレンナフタレート等）、ポリアミド（ナイロン－６、ナイロン－６６、ポリメタキシレンアジパミド等）、ポリ塩化ビニル、ポリイミド、エチレン・酢酸ビニル共重合体、ポリカーボネート、ポリスチレン、アイオノマーあるいはこれらの混合物等を例示することができる。熱や水分に対する安定性や汎用性の点から、ポリエチレンテレフタレート、ポリブチレンテレフタレート、ポリプロピレン、ポリエチレンのいずれかが望ましい。また、それぞれの樹脂からなる不織布を複合させてもよい。
［親水化処理］
　本実施形態のイムノクロマト診断キット用吸収パッドに用いる不織布は、親水化処理されており、以下の述べる所定範囲の親水化度を有するものである必要がある。一般的に熱可塑性樹脂は疎水性のものが多く、不織布として構造形成しても吸水するものは、ほとんどない。本実施形態では、前記した疎水性の熱可塑性樹脂の繊維から構成される不織布を使用し、親水化処理を行うことで、吸水のバラツキを限りなく低減させることができる性能が達成されている。親水化の方法については特に限定せず、物理的な加工方法であれば、例えば、コロナ処理又はプラズマ処理による親水化が挙げられ、また、化学的な加工方法、例えば、表面官能基の導入、例えば、酸化処理等によりスルホン酸基、カルボン酸基等を導入することや、水溶性高分子、例えば、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ポリエステル系樹脂、ポリスチレンスルホン酸、若しくはポリグルタミン酸、及び／又は界面活性剤、例えば、ノニオン性界面活性剤、陰イオン性界面活性剤、陽イオン性界面活性剤、若しくは両イオン性界面活性剤等の処理剤を不織布にディップニップ法やスプレーコート法などで含浸、コーティングする方法など公知の方法が挙げられる。吸収パッドに必要な吸水性を考慮して、適切な親水化加工方法及び条件、例えば、処理剤の使用量及び官能基の導入量等を選択することができる。
［親水化度］
　親水化度は、イムノクロマト診断キット用吸収パッドの吸水性能を示す指標であり、一般的な吸水試験に用いられるバイレック法、滴下法、沈降法や、イムノクロマトによる吸液性試験などにより評価することができる。本実施形態のイムノクロマト診断キット用吸収パッドに用いる不織布の親水化度は、ＪＩＳ－Ｌ１９０７準拠のバイレック法による吸水高さが５０ｍｍ以上１８０ｍｍ以下である。親水化度が５０ｍｍ未満になると、吸収パッドとして展開液などを展開・保持するのに十分な吸水性を担保できない。そのため、親水化度は、好ましくは６０ｍｍ以上、より好ましくは７０ｍｍ以上である。また、親水化度の上限は、特に限定されるものではないが、１８０ｍｍ以下である。１８０ｍｍを超える吸水高さとなると吸水速度が速すぎて感度の低下を招いたり、展開、粒子の流れをむしろ不均一にしてしまうおそれがある。それゆえ、親水化度は、好ましくは１６５ｍｍ以下、より好ましくは１５０ｍｍ以下である。
［積層］
　本実施形態のイムノクロマト診断キット用吸収パッドに用いる不織布は、種々用途に応じて、積層してもよい。不織布を積層する場合は、熱エンボス加工、超音波融着等の熱融着法、ニードルパンチ、ウォータージェット等の機械的交絡法、ホットメルト接着剤、ウレタン系接着剤等の接着剤による方法、押出しラミネート等をはじめ、種々公知の方法を採用することができ、特に限定されるものではない。
＜イムノクロマト＞
　本実施形態のイムノクロマト診断キット用吸収パッドを用いるイムノクロマト診断キットを使用するところの「診断方法」とは、イムノクロマト診断キットを用いて行われる様々な診断を指す。診断対象は特に限定されるものではなく、人用、動物用、食品用、植物用、その他環境検査など様々な診断対象の検査に用いることができる。一般的な診断の手順では、検査対象から検体試料を採取し、必要であればそれを抽出やろ過などの前処理を行い、サンプルパッドに滴下し、検査開始から所定時間待ち、検査対象物質の有無によって異なる発色より診断結果を判断する。もちろんこの手順に限定されず、同じような手順、原理の診断にも用いることができる。好ましいのは、検体試料を予めろ過しておくことで余分な異物や夾雑物を除去でき、それによりより一層の診断の迅速化や、診断精度の向上が期待できる。
［イムノクロマト診断キット］
　本実施形態のイムノクロマト診断キットとは、様々な検体中の検査対象物質の有無を簡便に検出するためのものである。診断キットの種類としては、ラテラルフロー式やフロースルー式がある。標識試薬や吸収パッドを用いるものであれば特に限定されないが、好ましくはラテラルフロー式である。また、ラテラルフロー式の中でも、ディップスティックタイプとカセットタイプがあるが、それらのタイプは特に限定されない。診断キットの構成は、特に限定されるものではなく、当該分野で一般的に用いられる構成であればいずれでも構わない。部材としては、当該分野で用いられるものであれば特に限定されず、例えば、図１に示す（a）吸収パッド、(b)ニトロセルロース膜、(c)コンジュゲートパッド（抗体感作標識試薬を含む）、(d)サンプルパッド、及び(e)台紙が挙げられる。また、必要に応じそれら部材を一部省いていても構わない。
［(a)吸収パッド］
　図１に示すように、(a)吸収パッドとは、イムノクロマトにおいて測定対象である検体を最後に吸収する部分である。尚、前記したように、従来技術の一般的な吸収パッドとしては、セルロース濾紙、紙、ガラス繊維、グラスファイバーなどが挙げられる。
［クロマトグラフ媒体］
　イムノクロマト診断キットに用いられるクロマトグラフ媒体は特に限定されるものではなく、一般的に用いられる様々なクロマトグラフ媒体を用いることができる。具体的には、(b)ニトロセルロース膜が挙げられる。
［(c)コンジュゲートパッド］
　コンジュゲートパッドは、抗体感作標識試薬等の標識粒子を乾燥固定化しておく部分である。一般的なコンジュゲートパッドとしては、ガラス繊維、グラスファイバー、アクリル繊維、ＰＥＴ繊維単体又は複合した不織布、織布などが挙げられる。また、必要に応じて前処理を行っても構わない。
［(d)サンプルパッド］
　サンプルパッドは、イムノクロマトにおいて測定対象である検体を最初に受け取る部分である。一般的なサンプルパッドとしては、セルロース濾紙、紙、ガラス繊維、グラスファイバー、アクリル繊維、ナイロン繊維、各種織物などが挙げられる。また、必要に応じて前処理を行っても構わない。例えば、緩衝液、界面活性剤、タンパク、検体試料中の夾雑物をトラップする試薬、防腐剤、抗菌剤、酸化防止剤、吸湿剤、などを予め含ませるなどの処理を行っても構わない。
［標識試薬］
　コンジュゲートパッドに固定される標識試薬とは、水、緩衝液などに不溶性であり、色素や染料等が担持された粒子状物質を指す。粒子を構成する素材は特に限定されないが、このような標識試薬としては、例えば、金コロイド、白金コロイド、銀コロイド、セレンコロイドなどの金属コロイド粒子、ポリスチレンラテックス等のスチレン系ラテックスやアクリル酸系ラテックス等を着色した着色ラテックス粒子、ケイ素原子及び酸素原子からなる３次元構造体からなるシリカを着色した着色シリカ粒子、セルロースを着色した着色セルロース粒子、カーボンブラックなどの着色成分をそのまま粒子化した標識試薬、磁性粒子、などが挙げられる。また、前記標識試薬は蛍光発光性粒子でも構わない。
［担持物質］
　標識試薬は、抗体などの被検出物に特異的に結合する物質を担持する必要があるが、その担持方法は特に限定されない。例えば、物理的な吸着による担持、共有結合による担持、それらの組み合わせによる担持などが挙げられる。担持する物質の種類や量も特に限定されない。担持する物質の種類としては抗体が最も一般的であり好ましい。また、担持する方法としては、容易さの観点からは物理的な吸着による担持が、安定性や性能などの観点からは共有結合による担持が好ましい。
［診断対象］
　本実施形態のイムノクロマト診断キットで診断できる対象は、特に限定されるものではないが、具体例としては以下のものが挙げられる：癌マーカー、ホルモン、感染症、自己免疫、血漿蛋白、ＴＤＭ、凝固・線溶、アミノ酸、ペプチド、蛋白、遺伝子、細胞など。より具体的には、ＣＥＡ、ＡＦＰ、フェリチリン、β２マイクロ、ＰＳＡ、ＣＡ１９－９、ＣＡ１２５、ＢＦＰ、エラスターゼ１、ペプシノーゲン１・２、便潜血、尿中β２マイクロ、ＰＩＶＫＡ－２、尿中ＢＴＡ、インスリン、Ｅ３、ＨＣＧ、ＨＰＬ、ＬＨ、ＨＣＶ抗原、ＨＢｓ抗原、ＨＢｓ抗体、ＨＢｃ抗体、ＨＢｅ抗原、ＨＢｅ抗体、ＨＴＬＶ－１抗体、ＨＩＶ抗体、トキソプラズマ抗体、梅毒、ＡＳＯ、Ａ型インフルエンザ抗原、Ａ型インフルエンザ抗体、Ｂ型インフルエンザ抗原、Ｂ型インフルエンザ抗体、ロタ抗原、アデノウィルス抗原、ロタ・アデノウィルス抗原、Ａ群レンサ球菌、Ｂ群レンサ球菌、カンジダ抗原、ＣＤ菌、クリプトロッカス抗原、コレラ菌、髄膜炎菌抗原、顆粒菌エラスターゼ、ヘリコバクターピロリ抗体、Ｏ１５７抗体、Ｏ１５７抗原、レプトスピラ抗体、アスペルギルス抗原、ＭＲＳＡ、ＲＦ、総ＩｇＥ、ＬＥテスト、ＣＲＰ、ＩｇＧ，Ａ，Ｍ、ＩｇＤ、トランスフェリン、尿中アルブミン、尿中トランスフェリン、ミオグロビン、Ｃ３・Ｃ４、ＳＡＡ、ＬＰ（ａ）、α１－ＡＣ、α１－Ｍ、ハプトグロビン、マイクロトランスフェリン、ＡＰＲスコア、ＦＤＰ、Ｄダイマー、プラスミノーゲン、ＡＴ３、α２ＰＩ、ＰＩＣ、ＰＡＩ－１、プロテインＣ、凝固第Ｘ３因子、ＩＶ型コラーゲン、ヒアルロン酸、ＧＨｂＡ１ｃ、その他の各種抗原、各種抗体、各種ウィルス、各種菌、各種アミノ酸、各種ペプチド、各種蛋白質、各種ＤＮＡ、各種細胞、各種アレルゲン、各種残留農薬、各種有害物が挙げられる。
［イムノクロマト診断キットの作製方法］
　所定の濃度に調整した標識試薬の分散液を準備し、緩衝液、抗体を加え、温度調整を行いながら一定時間撹拌し、標識試薬に抗体を吸着させる。一定時間撹拌後、更にブロッキング剤を加え温度調整を行いながら一定時間撹拌することで、着色セルロース粒子のブロッキングを行う。ブロッキング剤としては、検査対象物質や検体又はそれを希釈する溶液の組成などに応じ様々なブロッキング剤を用いることができる。抗体吸着・ブロッキング後の標識試薬を洗浄するため、遠心分離を行い、余剰な抗体とブロッキング剤が含まれた上澄み液と沈降した粒子を分離し、上澄み液をデカンテーションにて除去する。沈降した粒子に緩衝液などの液体を加え、必要に応じ超音波などで分散処理を行う。この遠心分離による沈降、上澄みの除去、液体の添加という一連の操作による洗浄を必要回数行い、抗体吸着・ブロッキングを行った粒子を所定の濃度含有した分散液を調製する。この分散液に必要に応じタンパク質、界面活性剤、スクロースやトレハロースなどの糖を加え、得られた溶液をグラスファイバー製のコンジュゲートパッドに一定量塗布し、乾燥させ、検出試薬含有部を調製する。また再生セルロース連続長繊維不織布に必要に応じ緩衝液、界面活性剤、タンパク、検体試料中の夾雑物をトラップする試薬、防腐剤、抗菌剤、酸化防止剤、吸湿剤、などを塗布し、乾燥させ、サンプルパッドを調製する。更に所定の位置に抗体を固定化したニトロセルロース膜製のクロマトグラフ媒体、検体を吸収するためのセルロース濾紙製の吸収パッドを調製する。それらをバッキングシートと呼ばれる接着部位を有するシートに固定化し、所定のサイズに裁断することでイムノクロマト診断キットを作製する。
　以下、本発明を実施例、比較例により具体的に説明するが、本発明は実施例のみに限定されるものではない。また、特に記載のない全ての操作は温度２３℃、相対湿度５５％ＲＨの環境下で行った。
　まず、実施例等で用いた物性の測定方法を説明する。
＜厚み（ｍｍ）＞
　不織布の厚みを、ＪＩＳ－Ｌ１０９６準拠の厚み試験にて荷重を１．９６ｋＰａとして測定した。
＜目付（ｇ／ｍ２）＞
　０．５ｍ２以上の面積の不織布を、１０５℃で一定重量になるまで乾燥後、２０℃、６５％ＲＨの恒温室に１６時間以上放置してその重量を測定し、不織布の単位面積当たりの重量を測定し、不織布の目付とした。
＜平均繊維径（μｍ）＞
　装置型式：ＪＳＭ－６５１０　日本電子株式会社製を用いた。得られた不織布を１０ｃｍ×１０ｃｍにカットし、上下６０℃の鉄板に０．３０ＭＰａの圧力で９０秒間プレスした後、不織布を白金にて蒸着した。そして上記ＳＥＭを用いて、加速電圧１５ｋＶ、ワーキングディスタンス２１ｍｍの条件にて撮影した。撮影倍率は、平均繊維径が０．５μｍ未満の糸は１００００倍、平均繊維径が０．５μｍ以上１．５μｍ未満の糸は６０００倍、１．５μｍ以上の糸は４０００倍とした。それぞれの撮影倍率での撮影視野は、１００００倍では１２．７μｍ×９．３μｍ、６０００倍では２１．１μｍ×１５．９μｍ、４０００倍では３１．７μｍ×２３．９μｍであった。ランダムに繊維１００本以上を撮影し、全ての繊維径を測長した。この際に、糸長方向で融着している繊維同士は測定から省いた。以下の式：
　　　Ｄｗ＝ΣＷｉ・Ｄｉ＝Σ（Ｎｉ・Ｄｉ２）／（Ｎｉ・Ｄｉ）
｛式中、Ｗｉ＝繊維径Ｄｉの重量分率＝Ｎｉ・Ｄｉ／ΣＮｉ・Ｄｉである。｝
により求められる重量平均繊維径（Ｄｗ）を、平均繊維径（μｍ）とした。
＜Ｄｍａｘ、Ｄａｖｅ、Ｄｍｉｎの測定＞
　装置型式：Ａｕｔｏｍａｔｅｄ Ｐｅｒｍ Ｐｏｒｏｍｅｔｅｒ（多孔質材料自動細孔径分布測定システム）Ｐｏｒｏｕｓ Ｍａｔｅｒｉａｌｓ， Ｉｎｃ．社製を用いた。
　不織布サンプルを打ち抜き刃でφ２５ｍｍにカットし、ＧＡＬＷＩＣＫ試液に浸漬させ、１時間脱気する。その後サンプルをセットし、エア圧を加える。ＧＡＬＷＩＣＫ試液が毛細管内の液体表面張力に打ち勝ち、押し出される為、その時の圧力を測定することにより毛細管の式から導かれたＷａｓｈｂｕｒｎの式から、最大孔径Ｄｍａｘ(μｍ)、平均孔径Ｄａｖｅ(μｍ)、最小孔径Ｄｍｉｎ(μｍ)を求めた。
＜地合指数＞
　装置型式：ＦＭＴ－ＭIII　野村商事株式会社製を用いた。
　サンプルをセットしない状態で、光源点灯時／消灯時の透過光量をＣＣＤカメラでそれぞれ測定した。続いて、Ａ４サイズにカットした不織布をセットした状態で同様に透過光量を測定し、平均透過率、平均吸光度、標準偏差（吸光度のバラツキ）を求めた。地合指数は、標準偏差÷平均吸光度×１０で求めることができる。地合指数は、目視との相関が極めて高く、不織布の地合を最も端的にあらわしている。また、地合指数は、地合が良い程小さく、悪いもの程大きな値になる。
＜親水化度＞
　ＪＩＳ－Ｌ１９０７準拠のバイレック法により吸水高さを測定した。具体的には、大きさ約２００ｍｍ×２５ｍｍの試験片をそれぞれ５枚採取する。次に、水を入れた水槽の水面上に支えた水平棒上に試験片をピンなどで固定した後、水平棒を降下させて，試験片の下端の２０ｍｍ±２ｍｍが水に浸せきするように調整し、そのまま１０分間放置する。放置後、毛細管現象によって水が上昇した高さをスケールで１ｍｍまで測定する。５枚の試験片それぞれの吸水高さの平均値を親水化度とした。
＜イムノクロマト診断キットのバックグラウンド（ＢＧ着色）＞
　適切な幅にカットしたイムノクロマト診断キットをプラスチックのハウジングに入れた。次に、１重量％ＢＳＡを含む６６ｍＭ、ＰＨ７．４のＰＢＳを調製し、陰性検体とした。得られたハウジング入りの診断キットを用い、１００μＬの陰性検体を診断キットのサンプル滴下部に滴下し、５分後に、浜松ホトニクス社製のイムノクロマトリーダーＣ１００６６－１０を用い、ＴＬとＣＬの間の１点の発色強度（単位はｍＡＢＳ）を測定した。ここで発色強度が２０ｍＡＢＳ以上の場合をＢＧが着色していると判断した。ここで２０ｍＡＢＳ以上とした理由は、２０ｍＡＢＳ以上になれば目視で確実に着色を確認できるからである。
＜イムノクロマト診断キットのテストライン（ＴＬ）の発色時間＞
　ＴＬ発色時間の測定については、検査対象物質にヒト絨毛性ゴナドトロピン（以下「ｈＣＧ」という）を用い、ｈＣＧを、１重量％の牛血清アルブミン（以下「ＢＳＡ」という。）を含む６６ｍＭ、ＰＨ７．４のリン酸緩衝液（以下「ＰＢＳ」という）で希釈し、ｈＣＧ濃度が１０ｍＩＵ／ｍｌの陽性検体を調製した。その陽性検体１００μｌを診断キットのサンプル滴下部に滴下し、以降２０秒毎に前記同様イムノクロマトリーダーで測定を行い、ＴＬの経時変化を測定した。ここで２０秒毎とした理由は、測定１回につき２０秒弱が必要なためである。次に、イムノクロマトリーダーで得られるＴＬの発色強度が２０ｍＡＢＳ以上になった時間を測定した。ここで２０ｍＡＢＳとした理由は、２０ｍＡＢＳ以上になれば目視でもＴＬの存在を確認できるからである。この測定を計３０回行い、平均の時間（単位は秒）をＴＬ発色時間とした。
＜テストライン（ＴＬ）発色強度＞
　ＴＬ発色強度の測定については、上記と同じく陽性検体１００μｌを診断キットのサンプル滴下部に滴下し、５分後のテストラインの発色強度（ｍＡＢＳ）をイムノクロマトリーダーにより測定した。この測定を計３０回行い、平均の発色強度（ｍＡＢＳ）をＴＬ発色強度とした。
　また、同時にＴＬ発色強度の標準偏差を求め、再現性を表す指標％ＣＶは下記式：
　　　％ＣＶ＝（ＴＬ発色強度の標準偏差／ＴＬ発色強度）×１００
により算出した。
[実施例１]
＜熱可塑性不織布の作製＞
　ポリエチレンテレフタレート樹脂を使用し、本樹脂を押出機で溶融し、ノズル径０．３ｍｍの紡口ノズルから単孔吐出量０．１２ｇ／ｍｉｎで押し出した。上記の熱可塑性樹脂を押し出す際に、紡糸ガスは紡糸ガス温度３７０℃、紡糸ガス圧力０．０７５ＭＰａの条件に設定し、ポリエチレンテレフタレート製不織布を作製した。得られた不織布は、目付８０ｇ／ｍ２、厚み０．２２ｍｍ、平均繊維径：１．９μｍであった。また、孔径と地合指数を上記の方法で測定した結果、Ｄｍａｘ：５．６４μｍ、Ｄａｖｅ：４．１０μｍ、Ｄｍｉｎ：３．２３μｍで、地合指数は４９であった。
＜親水加工＞
　上記にように作製した不織布を、ディップニップ法を用いて親水化した。具体的には、陰イオン性界面活性剤と水とを混合した親水加工剤を加工浴に入れ、作製した熱可塑性不織布の原反を浸漬、マングルで所定の絞り率で絞った後、テンター型乾燥機で乾燥・熱処理を行った。親水加工後、上記のバイレック法にて親水化度を測定したところ１０９ｍｍであった。
　＜抗体感作金コロイド粒子の調製＞
　金コロイド粒子懸濁液（田中貴金属社製、平均粒子径４０ｎｍ、粒子濃度０．００６ｗｔ％、平均粒子径４０ｎｍ）２５００μｌに、リン酸緩衝液（５０ｍＭ、ｐＨ７．０）を６００μｌ加え、更に抗ｈＣＧ-αマウス抗体（Ｆｉｔｚｇｅｒａｌｄ社製、モノクローナル抗体）の０．１％水溶液を２００μｌ加えて、ボルテックスで攪拌する。続いて、２５℃で１０分間、温調しながら攪拌した。上記懸濁液に１％のＰＥＧ水溶液を３００μｌ、１０％のＢＳＡ水溶液（ｐＨ９．０、５０ｍＭホウ酸含有）を６００μｌ添加し、ボルテックスで攪拌した。その後、遠心分離操作（１００００ｇ、３０分間）を行い、上澄み液を除去した。その残渣に、１％ＢＳＡ水溶液（０．０５％ＰＥＧ、１５０ｍＭＮａＣｌ、ｐＨ８．２、２０ｍＭトリス含有）を１１０００μｌ添加し、ボルテックスで撹拌した。その後、遠心分離操作（１００００ｇ、３０分間）を行い、上澄み液を除去した。その残渣に、１％ＢＳＡ水溶液（０．０５％ＰＥＧ、１５０ｍＭＮａＣｌ、ｐＨ８．２、２０ｍＭトリス含有）を９００μｌ添加し、超音波処理を３０秒間行った。
＜コンジュゲートパッドへの標識試薬の含浸、乾燥＞
　グラスファーバー製コンジュゲートパッド（Ahlstrom社製、#8951）を高さ１０ｍｍ、長さ３００ｍｍの形状にカットした。その後、抗体感作金コロイド粒子分散液を１０２０μｌ均等に塗布し、５０℃で６０分乾燥させた。
＜サンプルパッドの前処理＞
　サンプルパッド（（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社製、Ｃ０４８）を、大過剰の２．０重量％のＢＳＡ（シグマアルドリッチ社製、Ａ７９０６）と２．０重量％のＴｗｅｅｎ－２０（登録商標）を含有するＰＢＳ緩衝液（６６ｍＭ、ｐＨ７．４）に含浸し、余分な液を取り除いたのちに５０℃で６０分乾燥させた。続いて高さ１８ｍｍ、長さ３００ｍｍの形状にカットした。
＜捕捉抗体塗布ニトロセルロース膜の調製＞
　ニトロセルロース膜（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社製、ＳＨＦ０９００４２５）を高さ２５ｍｍ、長さ３００ｍｍの形状にカットした。液体塗布装置（武蔵エンジニアリング社製、３００ＤＳ）を用い、０．１重量％抗ｈＣＧ-βマウス抗体（ＭｅｄｉｘＢｉｏｃｈｅｍｉｃａ社製、６６０１）を含むＰＢＳ溶液（６６ｍＭ、ｐＨ７．４）を０．１μｌ／ｍｍの割合で高さ７ｍｍの部分に塗布した。続いて０．１重量％の抗マウス-ウサギ抗体（Ｄａｃｏ社製、Ｚ０２５９）を含むＰＢＳ溶液（６６ｍＭ、ｐＨ７．４）を０．１μｌ／ｍｍの割合で高さ１２ｍｍの部分に塗布した。続いて３７℃で３０分乾燥させた。
＜イムノクロマト診断キットの調製＞
　バッキングカード（Ａｄｈｅｓｉｖｅｓ　Ｒｅｓｅｒｃｈ社製、ＡＲ９０２０）に、調製した捕捉抗体塗布ニトロセルロース膜、吸収パッド、標識試薬を含有したコンジュゲートパッド、サンプルパッドを張り合わせた。続いて裁断機にて５ｍｍの幅にカットし、幅５ｍｍ、高さ６０ｍｍのイムノクロマト診断キットを得た。
＜イムノクロマト診断キットの性能評価＞
　得られたイムノクロマト診断キットの性能を評価した。結果を以下の表１に示す。
　尚、実施例、比較例において、イムノクロマト診断キット幅を５ｍｍ、かつ、厚みが０．２ｍｍ以上の吸収パッドを用いたものの性能評価においては、展開液の展開可能量がおよそ８０～１２０μｌとなるため、表１に示すように、実際に１００μｌを展開し評価した。また、キット幅を２．５ｍｍにしたもの、又は厚みが０．２ｍｍ未満の吸収パッドを用いたものでは、展開液の展開可能量がおよそ３０～８０μｌとなるため、こちらも表１に示すように、実際に５０μｌを展開し評価した。
［実施例２］
　熱可塑性不織布の目付が９０ｇ／ｍ２、かつ、平均繊維径が２．１μｍになるように製造した以外は、実施例１と同様にイムノクロマト診断キットを調製し、その性能を評価した。結果を以下の表１に示す。
［実施例３］
　熱可塑性不織布の平均繊維径が４．７μｍになるように製造した以外は、実施例１と同様にイムノクロマト診断キットを調製し、その性能を評価した。結果を以下の表１に示す。
［実施例４］
　熱可塑性不織布の目付が１２０ｇ／ｍ２になるように製造した以外は、実施例１と同様にイムノクロマト診断キットを調製し、その性能を評価した。結果を以下の表１に示す。
［実施例５］
　熱可塑性不織布の目付が１８５ｇ／ｍ２になるように製造した以外は、実施例１と同様にイムノクロマト診断キットを調製し、その性能を評価した。結果を以下の表１に示す。
［実施例６］
　熱可塑性不織布を親水化処理する際の親水化剤の濃度を調整し、親水化度が１７１ｍｍになるように製造した以外は、実施例１と同様にイムノクロマト診断キットを調製し、その性能を評価した。結果を以下の表１に示す。
［実施例７］
　熱可塑性不織布を実施例６と同様に、親水化度が７２ｍｍになるように製造した以外は、実施例１と同様の方法でイムノクロマト診断キットを調製し、その性能を評価した。結果を以下の表１に示す。
[実施例８]
　熱可塑性不織布の目付と厚みを調整し、地合指数が９５になるように製造した以外は、実施例１と同様にイムノクロマト診断キットを調製し、その性能を評価した。結果を以下の表１に示す。
［実施例９］
　ポリプロピレンを用いて熱可塑性不織布を製造した以外は、実施例１と同様にイムノクロマト診断キットを調製し、その性能を評価した。結果を以下の表１に示す。
［実施例１０］
　実施例２で用いた親水化した熱可塑性不織布を積層させたものを用いたこと以外は実施例１と同様にイムノクロマト診断キットを調製し、その性能を評価した。結果を以下の表１に示す。
［実施例１１］
　熱可塑性不織布の目付が４５ｇ／ｍ２、厚みが０．１４ｍｍ、平均繊維径が１．６μｍになるように製造した以外は、実施例１と同様にイムノクロマト診断キットを調製し、各検体滴下量を５０μｌとしてその性能を評価した。結果を以下の表１に示す。
［実施例１２］
　熱可塑性不織布の目付が４０ｇ／ｍ２、厚みが０．１０ｍｍ、平均繊維径が１．０μｍになるように製造した以外は、実施例１と同様にイムノクロマト診断キットを調製し、実施例１１と同様にその性能を評価した。結果を以下の表１に示す。
［実施例１３］
　熱可塑性不織布の目付が２０ｇ／ｍ２、厚みが０．０６ｍｍ、平均繊維径が０．９μｍになるように製造した以外は、実施例１と同様にイムノクロマト診断キットを調製し、実施例１１と同様にその性能を評価した。結果を以下の表１に示す。
［実施例１４］
　実施例２と同様にイムノクロマト診断キットを調製し、それを２．５ｍｍ幅にカットしたものを、実施例１１と同様にその性能を評価した。結果を以下の表１に示す。
〔実施例１～１４の説明〕
　実施例１～１４においてはいずれも、請求項１に規定する所定範囲の物性をもつ熱可塑性樹脂を親水化したものを吸収パッドに用いることで、以下の表１に示すように、５分後には確実にＢＧ着色が無く（２０ｍＡＢＳ未満）、ＴＬ発色強度のバラツキが小さく、製品間バラツキの少ないイムノクロマト診断キットを得ることができた。
［比較例１］
　熱可塑性不織布の目付が２２０ｇ／ｍ２、敢えて厚みが０．５５ｍｍになるように製造した以外は、実施例１と同様にイムノクロマト診断キットを調製し、その性能を評価した。結果を以下の表１に示す。表１に示す結果から明らかなように、かなり目の詰まった不織布となってしまい、十分に吸水しないことから５分後のＢＧの着色が発生し、かつ、ＴＬ発色強度の％ＣＶが上昇してしまった。
［比較例２］
　熱可塑性不織布の目付が８０ｇ／ｍ２、敢えて厚みが１．３０ｍｍになるように製造した以外は、実施例１と同様の方法でイムノクロマト診断キットを調製し、その性能を評価した。結果を以下の表１に示す。表１に示す結果から明らかなように、目付に対して厚みが厚すぎるためかなり粗な構造となってしまったため地合指数が悪くなり、ＴＬ発色強度の％ＣＶが大きく上昇してしまった。
［比較例３］
　熱可塑性不織布の平均繊維径が５．５μｍになるように製造した以外は、実施例１と同様にイムノクロマト診断キットを調製し、その性能を評価した。結果を以下の表１に示す。表１に示す結果から明らかなように、比較例２と同じく繊維径が太すぎて地合指数が悪くなり、かつＴＬ発色強度の％ＣＶが大きく上昇してしまった。
［比較例４］
　熱可塑性不織布の親水化度が４８ｍｍになるように製造した以外は、実施例１と同様にイムノクロマト診断キットを調製し、その性能を評価した。表１に示す結果から明らかなように、比較例１と同様５分後のＢＧ着色があり、ＴＬ発色時間も大幅に遅くなった。また、ＴＬ発色強度の％ＣＶが大きく上昇してしまった。
［比較例５］
　厚手のセルロース製吸収パッドを用いたこと以外は、実施例１と同様にイムノクロマト診断キットを調製し、その性能を評価した。結果を以下の表１に示す。表１に示す結果から明らかなように、５分後のＢＧ着色があり、ＴＬ発色強度の％ＣＶも大きく上昇してしまった。
［比較例６］
　薄手のセルロース製吸収パッドを用いたこと以外は、実施例１と同様にイムノクロマト診断キットを調製し、その性能を評価した。結果を以下の表１に示す。表１に示す結果から明らかなように、５分後のＢＧ着色があり、ＴＬ発色強度の％ＣＶも大きく上昇してしまった。
［比較例７］
　グラスファイバー製吸収パッドを用いたこと以外は、実施例１と同様にイムノクロマト診断キットを調製し、その性能を評価した。結果を以下の表１に示す。表１に示す結果から明らかなように、比較例１と同じく５分後のＢＧ着色があり、ＴＬ発色強度の％ＣＶも大きく上昇してしまった。また、イムノクロマト診断キット作製時、とくに切断加工時に明らかに分かる量の粉塵が発生した。
［比較例８］
　熱可塑性不織布の目付が１５ｇ／ｍ２に、厚みが０．０５ｍｍになるように製造した以外は、実施例１と同様にイムノクロマト診断キットを調製し、実施例１１と同様にその性能を評価した。結果を以下の表１に示す。表１に示す結果から明らかなように、展開する液量に対し吸収パッドの吸液量が足りず展開しなかった。
［比較例９］
　熱可塑性不織布の平均繊維径が０．６μｍになるように製造した以外は、実施例１と同様にイムノクロマト診断キットを調製し、実施例１１と同様にその性能を評価した。結果を以下の表１に示す。表１に示す結果から明らかなように、比較例８と同様に吸液量が足りず展開しなかった。
［比較例１０］
　厚手のセルロース製吸収パッドを用いて、キット幅を２．５ｍｍ幅としてイムノクロマト診断キットを調製し、実施例１１と同様にその性能を評価しようとしたが、厚みが厚すぎて２．５ｍｍのような細幅には切断することができず、キットを作製できなかたため、性能評価もできなかった。
［比較例１１］
　薄手のセルロース製吸収パッドを用いて、キット幅を２．５ｍｍ幅としてイムノクロマト診断キットを調製し、実施例１１と同様にその性能を評価した。結果を以下の表１に示す。表１に示す結果から明らかなように、５分後のＢＧ着色があり、ＴＬ発色強度の％ＣＶが大きく上昇してしまった。
［比較例１２］
　グラスファイバー製吸収パッドを用いて、キット幅を２．５ｍｍ幅でイムノクロマト診断キットを調製し、実施例１１と同様にその性能を評価した。結果を以下の表１に示す。表１に示す結果から明らかなように、比較例１と同じく５分後のＢＧ着色があり、ＴＬ発色強度の％ＣＶが大きく上昇し、５ｍｍ幅のときの％ＣＶ（比較例７）よりもさらに悪化してしまった。また、イムノクロマト診断キット作製時、とくに切断加工時に明らかに分かる量の粉塵が発生した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000001
　本発明のイムノクロマト診断キット用吸収パッドを用いたイムノクロマト診断キットは、発色強度のバラツキが少なく再現性に優れるものとなる。本願発明においては、疎水性の熱可塑性不織布を用いて親水化処理することで、本願発明の吸水力をコントロールでき、バックグラウンドの改善に繋がり、更に、イムノクロマト診断キットの製造工程においても、グラスファイバーと比較して脱離繊維が少なく、切断・整形も容易なことから、厚みや幅などのパッドやキットのサイズ設計について高い自由度をもち、かつ工程上の安定性の確保も可能である。それゆえ、本発明のイムノクロマト診断キット用吸収パッドは、各種イムノクロマト診断キットの吸収パットとして好適に利用可能である。
　(a)　　吸収パッド
　(b)　　ニトロセルロース膜
　(c)　　コンジュゲートパッド（抗体感作標識試薬を含む）
　(d)　　サンプルパッド
　(e)　　台紙

Claims (5)

  1. 　熱可塑性樹脂の繊維から構成される不織布からなるイムノクロマト診断キット用吸収パッドであって、該不織布の目付が２０～２００ｇ／ｍ２であり、厚みが０．０６ｍｍ～１．２０ｍｍであり、平均繊維径が０．７μｍ～５．０μｍであり、平均孔径が２．０μｍ～１５．０μｍであり、そして親水化度が５０ｍｍ～１８０ｍｍであることを特徴とするイムノクロマト診断キット用吸収パッド。
  2. 　前記不織布の地合指数が９０以下であり、かつ、孔径分布が以下の式：
    　　　Ｄｍａｘ／Ｄａｖｅ＜２．００
    　　　Ｄｍａｘ／Ｄｍｉｎ＜３．５０
    ｛式中、Ｄｍａｘは最大孔径(μｍ)であり、Ｄａｖｅは平均孔径(μｍ)であり、そしてＤｍｉｎは最小孔径(μｍ)である。｝
    を満たす、請求項１に記載のイムノクロマト診断キット用吸収パッド。
  3. 　前記熱可塑性樹脂が、ポリエチレンテレフタレート、ポリブチレンテレフタレート、ポリプロピレン、及びポリエチレンのうちの1つからなるか又はそれらの複数が複合されてなる、請求項１又は２に記載のイムノクロマト診断キット用吸収パッド。
  4. 　前記不織布が、単層の不織布又は積層した不織布である、請求項１～３のいずれか１項に記載のイムノクロマト診断キット用吸収パッド。
  5. 　請求項１～４のいずれか１項に記載のイムノクロマト診断キット用吸収パッドを用いたイムノクロマト診断キット。
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