WO2020111172A1 - 抗菌ペプチド産生促進用組成物 - Google Patents

抗菌ペプチド産生促進用組成物 Download PDF

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slp
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英史 小畠
冠木　敏秀
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    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/225—Lactobacillus

Definitions

  • the present invention relates to a composition for promoting antimicrobial peptide production.
  • it relates to a composition for promoting the production of antibacterial peptides containing lactic acid bacteria of the genus Lactobacillus.
  • the antibacterial peptide is one of the defense systems possessed by the living body, and has broad antibacterial activity against bacteria, fungi, viruses and the like. Since the preventive and therapeutic effects against infection can be expected by inducing the expression of the antibacterial peptide, some means for increasing the antibacterial peptide production have been disclosed so far.
  • Patent Document 1 aims to stimulate ⁇ -defensin production in skin cells using a non-pathogenic bacterium, and as a means for solving the problem, an extract containing cells of heat-treated Lactobacillus plantarum and an active fraction thereof are provided.
  • a composition including is disclosed.
  • Patent Document 2 aims to provide a safe and side-effect-free antibacterial peptide inducer, and discloses an antibacterial peptide inducer containing lactic acid bacteria as an active ingredient as a means for solving the problem.
  • Patent Document 3 aims to provide a substance that induces secretion of an antibacterial peptide, and to provide a therapeutic agent for diseases caused by bacteria or viruses, and an antibacterial peptide containing a branched chain amino acid as an active ingredient as a means for solving the problem. A secretagogue is disclosed. However, the solution provided by the present application is neither disclosed nor suggested in any document.
  • An object of the present invention is to provide a novel material having an infection preventive effect by increasing the production of antimicrobial peptides from epithelial cells.
  • the present invention includes the following configurations.
  • S-layer protein which is a component derived from Lactobacillus cells, and a degradation product of the S-layer protein (S-layer protein), as an active ingredient
  • a composition for promoting the production of an antimicrobial peptide which comprises: [2] Lactobacillus helveticus fungus containing S-layer protein (S-layer protein) which is a component derived from a bacterium of the genus Lactobacillus and a degradation product of the S-layer protein, or a culture thereof is effective.
  • a composition for promoting the production of antimicrobial peptides which is included as a component.
  • [3] The composition for promoting antibacterial peptide production according to [1] or [2], wherein the lactobacillus of the genus Lactobacillus is Lactobacillus helveticus, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus amybolus, or Lactobacillus bufneri.
  • [5] The composition for promoting antibacterial peptide production according to any one of [1] to [4], wherein the promotion of antibacterial peptide production is promotion of antibacterial peptide production in epithelial cells.
  • a food or drink for promoting the production of antimicrobial peptides which comprises the composition for promoting the production of antimicrobial peptides according to any one of [1] to [5].
  • a food or drink for infection prevention which comprises the composition for promoting antimicrobial peptide production according to any one of [1] to [5].
  • S-layer protein (S-layer protein, sometimes referred to as SLP hereinafter) derived from Lactobacillus lactic acid bacteria and its degradation product, or antibacterial peptide production of Lactobacillus lactic acid bacteria containing SLP and its culture, etc.
  • SLP S-layer protein
  • FIG. 1 It is a photograph showing the result of subjecting the purified SLP to SDS-PAGE.
  • 6 is a photograph showing the results of SDS-PAGE of SLP, heated SLP, and SLP degradation product.
  • 2 is a graph showing the expression level of the hBD2 gene when Lactobacillus helveticus lactic acid bacterial cells or SLPs of the lactic acid bacteria are added to Caco-2 cells.
  • 6 is a graph showing the expression level of the hBD2 gene when SLP of Lactobacillus helveticus, heated SLP, and SLP degradation product were added to Caco-2 cells.
  • FIG. 6 is a graph showing the expression level of the hBD2 gene when SLPs prepared from Lactobacillus helveticus SBT2171, Lactobacillus acidophilus JCM1132, Lactobacillus amylovoras JCM1126, and Lactobacillus bufneri JCM1115 were added to Caco-2 cells.
  • 1 is a graph showing the expression level of the hBD2 gene when Lactobacillus helveticus lactic acid bacterial cells or SLPs of the lactic acid bacteria are added to HSC-4 cells.
  • composition for promoting antibacterial peptide production provides a novel composition for promoting antibacterial peptide production.
  • the composition for promoting antimicrobial peptide production of the present invention will be described in detail below.
  • S-layer protein (hereinafter sometimes simply referred to as SLP) is a protein found in the outer layer of the cell wall of various bacteria and characterized by exhibiting a regular crystal structure. Since SLPs are non-covalently bound to cell wall components, they are extracted from bacterial cells by a chaotropic reagent such as lithium chloride. In addition, the extracted SLP re-forms a regular crystal structure by removing the chaotropic reagent. Utilizing this feature, purification from bacterial cells becomes possible.
  • S-layer is expressed in the genus Lactobacillus, and in the report of Mukai et al. (Japanease Journal of Lactic Acid Bacteria, 19(1):21-29, 2008), Lactobacillus. -The expression of SLP has been confirmed or estimated in 13 strains including lactic acid bacteria of the L. acidophilus group.
  • the SLPs expressed by these lactic acid bacteria have in common that they are basic proteins with an isoelectric point of 9 to 10 and have a signal peptide sequence consisting of 23 to 30 amino acid residues in the N-terminal region. ..
  • the SLP used in the composition for promoting antibacterial peptide production of the present invention is derived from the genus Lactobacillus, and any compound having such an action can be used, but Lactobacillus helveticus, Lactobacillus acidophilus , Lactobacillus amylobora or Lactobacillus bufneri are preferred. Among Lactobacillus helveticus, SBT2171 (FERM BP-5445) is the most preferable. Further, the SLP does not have to be purified from the bacterial cells and can be used as the bacterial cells containing SLP itself or as a culture, but the purified SLP is more preferable. The cells themselves may be live cells or dead cells.
  • antibacterial peptide examples include defensin family ( ⁇ -defensin, ⁇ -defensin, etc.), cathelicidin (LL-37), dermicidin, LEAP-1 (hepcidin), LEAP-2, lactoferrin, Reg peptide, and the like.
  • defensin family is preferred, and ⁇ -defensin is more preferred.
  • SLP is purified from lactic acid bacterium according to the following method.
  • the lactic acid bacterium of the genus Lactobacillus is sufficiently cultured in a liquid medium such as an MRS liquid medium or skim milk, and then the cells are collected and washed if necessary.
  • the bacterial cells may be recovered from a colony grown on an agar medium or the like.
  • the obtained microbial cells are, as they are, or after freeze-drying, suspended and stirred with a chaotropic reagent solution such as lithium chloride, urea, guanidine hydrochloride to solubilize SLP on the cell surface layer.
  • the chaotropic reagent is removed by dialysis or the like to precipitate SLP. After collecting the precipitated SLP, it is washed as necessary to obtain a purified SLP.
  • the SLP used in the composition for promoting antibacterial peptide production of the present invention may be heated because the antibacterial peptide promoting action is maintained even when heated.
  • the SLP degradation product is prepared according to the following method. Various proteases are added to the SLP suspension at an appropriate concentration and reacted appropriately. The type of protease and the degree of protease degradation are not limited. As an example, the conditions for the decomposition treatment with proteinase K are desirably 2 hours to 24 hours at 37° C., and more preferably 3 hours to 20 hours.
  • the purified SLP does not lose its antibacterial peptide production promoting action by heat treatment, it can be incorporated into foods, pharmaceuticals, and feeds according to a conventional method.
  • Food and drink containing the composition for promoting antibacterial peptide production of the present invention is useful as a food and drink for promoting antibacterial peptide production, and by ingesting the food and drink, promoting antibacterial peptide production from epithelial cells, It is possible to prevent from various infections, and even if it is infected, it can be suppressed to mild disease, and a quick recovery can be expected. When included in animal feed, similar effects can be expected in animals that ingest it.
  • the medicament containing the composition for promoting antibacterial peptide production of the present invention can be used for diseases that can be treated or prevented by promoting the production of antibacterial peptide. For example, various infectious diseases caused by pathogenic bacteria can be mentioned.
  • the antibacterial peptide production promoting action means an action of promoting production of antibacterial peptide in a subject, and means that the antibacterial peptide is expressed by inducing expression of a gene for expressing the antibacterial peptide. Therefore, in the present specification, the antibacterial peptide production promoting action and the antibacterial peptide inducing action are used synonymously.
  • the antimicrobial peptide-inducing action of the SLP of the present invention is evaluated by the method described below. SLP or its degradation product is added to the cultured cells, allowed to act for a predetermined time, and then the expression level of the antimicrobial peptide gene is measured.
  • epithelial cells that are supposed to come into contact with the outside of the body are particularly preferable.
  • the antimicrobial peptide to be measured is not limited, but the defensin family is preferable, and ⁇ -defensin secreted from epithelial cells is particularly preferable.
  • Lactobacillus cells SLPs, and SLP degradation products used in this test are shown below.
  • Example of preparation of Lactobacillus lactic acid bacteria After culturing Lactobacillus helveticus SBT2171 in 100 mL of MRS liquid medium at 37° C. for 16 hours, cells were collected by centrifugation (8,000 ⁇ g, 4° C., 10 minutes) and sterilized twice with physiological saline. It was washed once with MilliQ water and then freeze-dried (lyophilized cells). Lyophilized cells were used in the following tests.
  • Example of SLP preparation After culturing Lactobacillus helveticus SBT2171 in 100 mL of MRS liquid medium at 37° C. for 16 hours, cells were collected by centrifugation (8,000 ⁇ g, 4° C., 10 minutes) and washed once with sterile MilliQ water. .. The obtained bacterial cells were suspended in 10 mL of a 1M LiCl solution containing cOmplete TM Protease Inhibitor Cocktail (Roche) and stirred at room temperature for 30 minutes. The suspension after stirring was centrifuged (10,000 ⁇ g, 4° C., 20 minutes), and the supernatant was collected.
  • the precipitate was 5M LiCl with the addition of cOmplete TM Protease Inhibitor Cocktail (Roche). Resuspend in 10 mL of solution and stir again at room temperature for 30 minutes. The suspension after stirring was centrifuged (10,000 ⁇ g, 4° C., 20 minutes), and the supernatant was collected. The collected supernatants were combined, passed through a 0.2 ⁇ m filter, and then dialyzed against sterile MilliQ water with Slide-A-Lyzer G2 10K (Pierce) to precipitate SLP. The solution after dialysis was centrifuged (12,000 ⁇ g, 4° C., 20 minutes) to collect the precipitated SLP.
  • the recovered SLP was washed with 1 mL of sterile MilliQ water, suspended in 500 ⁇ L of 1 M LiCl solution, and kept on ice for 15 minutes while appropriately stirring.
  • the LiCl solution was removed by centrifugation, washed again with 1 mL of sterile MilliQ water, resuspended in sterile MilliQ water, and freeze-dried to obtain purified SLP. It was confirmed by SDS-PAGE method that the purified SLP had a band around the target size of 43 kDa (FIG. 1). Moreover, the obtained SLP was 3 mg.
  • the concentration of the extracted total RNA was measured with NanoDrop2000 (Thermo Fisher Scientific). From the extracted total RNA solution, cDNA was synthesize
  • 384-well plates (Life Technologies, Cat#4309849) were used for the reaction, and ViiA TM 7 (Life Technologies) was used.
  • Test Example 2 Evaluation of antibacterial peptide inducing activity (2) Evaluation of SLP degradation product 1. Test method: Caco-2 cells were seeded and the medium was exchanged in the same manner as in "Test Example 1 (1) Comparison with bacterial cells", and then SLP of Lactobacillus helveticus SBT2171 was heated as it was at 96°C for 10 minutes, Alternatively, the products decomposed by the proteinase K treatment were added to each to have a concentration of 50 ⁇ g/mL, and cultured for 6 hours. Then, as described above, total RNA extraction, cDNA synthesis, and hBD2 gene expression analysis by real-time PCR were performed.
  • Test Example 3 Evaluation of antimicrobial peptide inducing activity (3) Strain comparison 1. Test method After seeding Caco-2 cells and exchanging the medium in the same manner as in "Test Example 1 (1) Comparison with bacterial cells" above, Lactobacillus helveticus SBT2171, Lactobacillus acidophilus JCM1132, Lactobacillus amylovoras JCM1126, lacto SLPs each purified from Bacillus bufneri JCM1115 were added to a concentration of 10 ⁇ g/mL and cultured for 6 hours. Then, as described above, total RNA extraction, cDNA synthesis, and hBD2 gene expression analysis by real-time PCR were performed. In addition, the case where SLP was not added was evaluated as a relative expression level with respect to a positive control as a negative control.
  • test results As a result of the evaluation, as in the case of Caco-2 cells, an increase in hBD2 gene expression was observed in both bacterial cells and SLP. In addition, higher hBD2 gene expression was observed by the addition of SLP as compared with the bacterial cells (Fig. 6). This result was similar to that of Caco-2 cells, and it was considered that SLP has a stronger antibacterial peptide-inducing action than bacterial cells.
  • Example of blending with food To 10 mg of SLP purified from Lactobacillus helveticus SBT2171, 30 g of skim milk powder, 40 g of an equal mixture of vitamin C and citric acid, 100 g of granulated sugar, and 60 g of an equal amount mixture of corn starch and lactose were mixed. The mixture was packed in a stick bag to produce the stick health food of the present invention for promoting antibacterial peptide production.
  • Example of compounding into pharmaceutical products A liquid culture of Lactobacillus helveticus SBT2171 was centrifuged at 4° C. and 7,000 rpm for 15 minutes, followed by washing with sterile water and centrifugation three times to obtain washed bacterial cells. The washed bacterial cells were freeze-dried to obtain bacterial cell powder. 1 part of this bacterial cell powder was mixed with 4 parts of skim milk powder, and 1 g of this mixed powder was tabletted by a tableting machine by a conventional method to prepare the antibacterial peptide production promoting tablet of the present invention.
  • SLP and SLP degradation products derived from Lactobacillus lactic acid bacteria, or LLP of Lactobacillus genus Lactobacillus containing SLP and cultures thereof and the like are ingested with a material that induces the production of antibacterial peptides. Can be expected to improve.

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Abstract

本発明の課題は、上皮細胞からの抗菌ペプチド産生を上昇させ、感染予防効果を有する新規な素材を提供することである。 本発明は、ラクトバチルス属の乳酸菌を有効成分とする抗菌ペプチド産生促進用組成物を提供する。また、ラクトバチルス属の菌体由来成分を有効成分とする抗菌ペプチド産生促進用組成物を提供する。さらには、前記菌体由来成分がＳ層タンパク質（Ｓ－ｌａｙｅｒ　ｐｒｏｔｅｉｎ）及びＳ層タンパク質（Ｓ－ｌａｙｅｒ　ｐｒｏｔｅｉｎ）の分解物からなる群から選択される１つ以上である抗菌ペプチド産生促進用組成物を提供する。

Description

抗菌ペプチド産生促進用組成物
　本発明は、抗菌ペプチド産生促進用組成物に関する。特に、ラクトバチルス属乳酸菌を含む抗菌ペプチド産生促進用組成物に関する。
　抗菌ペプチドは生体が有する防御システムの一つであり、細菌、真菌、ウイルスなどに対して広い抗菌活性を有する。抗菌ペプチドの発現を誘導することにより、感染に対する予防、治療効果が期待できることから、これまでにいくつかの抗菌ペプチド産生を上昇させるための解決手段が開示されている。
　特許文献１は、非病原性細菌を用いて皮膚細胞におけるβディフェンシン産生を刺激することを課題とし、その解決手段として加熱処理したラクトバチルス・プランタルムの細胞を含む抽出物、およびその活性画分を含む組成物を開示している。
　特許文献２は、安全で副作用のない抗菌ペプチドの誘導剤を提供することを課題とし、その解決手段として乳酸菌を有効成分として含む抗菌ペプチド誘導剤を開示している。
　特許文献３は、抗菌ペプチドの分泌を誘発させる物質を提供し、細菌またはウイルスに起因する疾患に対する治療剤を提供することを課題とし、その解決手段として分岐鎖アミノ酸を有効成分として含有する抗菌ペプチド分泌誘発剤を開示している。
　しかしながら、本願の提供する解決手段はいずれの文献にも開示も示唆もされていない。
特許第５２２４８０７号公報 ＷＯ２０１５／０８７９１９パンフレット 特開２００３－９５９３８号公報
　本発明の課題は、上皮細胞からの抗菌ペプチド産生を上昇させ、感染予防効果を有する新規な素材を提供することである。
　上記課題を解決するため、本発明には以下の構成が含まれる。
〔１〕ラクトバチルス属の菌体由来成分であるＳ層タンパク質（Ｓ－ｌａｙｅｒ　ｐｒｏｔｅｉｎ）及び前記Ｓ層タンパク質（Ｓ－ｌａｙｅｒ　ｐｒｏｔｅｉｎ）の分解物からなる群から選択される１つ以上を有効成分として含むことを特徴とする抗菌ペプチド産生促進用組成物。
〔２〕ラクトバチルス属の菌体由来成分であるＳ層タンパク質（Ｓ－ｌａｙｅｒ　ｐｒｏｔｅｉｎ）及び前記Ｓ層タンパク質（Ｓ－ｌａｙｅｒ　ｐｒｏｔｅｉｎ）の分解物を含むラクトバチルス・ヘルベティカス菌体又はその培養物を有効成分として含む抗菌ペプチド産生促進用組成物。
〔３〕前記ラクトバチルス属の乳酸菌がラクトバチルス・ヘルベティカス、ラクトバチルス・アシドフィルス、ラクトバチルス・アミロボラス又はラクトバチルス・ブフネリである〔１〕又は[２]に記載の抗菌ペプチド産生促進用組成物。
〔４〕抗菌ペプチドがβ‐ディフェンシンである〔１〕～〔３〕のいずれかに記載の抗菌ペプチド産生促進用組成物。
〔５〕抗菌ペプチド産生促進が、上皮細胞における抗菌ペプチドの産生促進である〔１〕～〔４〕のいずれかに記載の抗菌ペプチド産生促進用組成物。
〔６〕〔１〕から〔５〕のいずれか１つに記載の抗菌ペプチド産生促進用組成物を含む抗菌ペプチド産生促進用飲食品。
〔７〕〔１〕から〔５〕のいずれか１つに記載の抗菌ペプチド産生促進用組成物を含む感染予防用飲食品。
　ラクトバチルス属乳酸菌に由来するＳ層タンパク質（Ｓ－ｌａｙｅｒ　ｐｒｏｔｅｉｎ、以下ＳＬＰということがある）およびその分解物、もしくはＳＬＰを含むラクトバチルス属乳酸菌菌体およびその培養物などの抗菌ペプチド産生を誘導する素材を体内に摂取することにより、種々の感染に対する防御能の向上が期待できる。
精製したＳＬＰをＳＤＳ－ＰＡＧＥにかけた結果を示す写真である。 ＳＬＰ、加熱したＳＬＰ、ＳＬＰ分解物をＳＤＳ－ＰＡＧＥにかけた結果を示す写真である。 Ｃａｃｏ－２細胞にラクトバチルス・ヘルベティカス乳酸菌菌体又は当該乳酸菌のＳＬＰを添加した場合のｈＢＤ２遺伝子の発現量を示すグラフである。 Ｃａｃｏ－２細胞にラクトバチルス・ヘルベティカスのＳＬＰ、加熱したＳＬＰ、ＳＬＰ分解物を添加した場合のｈＢＤ２遺伝子の発現量を示すグラフである。 Ｃａｃｏ－２細胞にラクトバチルス・ヘルベティカスＳＢＴ２１７１、ラクトバチルス・アシドフィルスＪＣＭ１１３２、ラクトバチルス・アミロボラスＪＣＭ１１２６、ラクトバチルス・ブフネリＪＣＭ１１１５から調製したＳＬＰを添加した場合のｈＢＤ２遺伝子の発現量を示すグラフである。 ＨＳＣ－４細胞にラクトバチルス・ヘルベティカス乳酸菌菌体又は当該乳酸菌のＳＬＰを添加した場合のｈＢＤ２遺伝子の発現量を示すグラフである。
　本発明は、新規な抗菌ペプチド産生促進用組成物を提供するものである。
　本発明の抗菌ペプチド産生促進用組成物について以下に詳細に説明する。
（抗菌ペプチド産生促進用組成物）
　Ｓ－ｌａｙｅｒ　ｐｒｏｔｅｉｎ（以下、単にＳＬＰということがある）は種々の細菌の細胞壁外層で認められ、規則的な結晶構造を呈することを特徴とするタンパク質である。ＳＬＰは細胞壁成分に非共有的に結合していることから、塩化リチウムなどのカオトロピック試薬によって菌体から抽出される。また、抽出されたＳＬＰはカオトロピック試薬を除くことで規則的な結晶構造を再形成する。この特徴を利用し、菌体からの精製が可能となる。
　乳酸菌の中ではラクトバチルス属においてＳ－ｌａｙｅｒを発現していることが見出されており、向井らの報告（Ｊａｐａｎｅｓｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｌａｃｔｉｃ　Ａｃｉｄ　Ｂａｃｔｅｒｉａ，１９（１）：２１－２９，２００８）ではラクトバチルス・アシドフィルス（Ｌ．ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ）グループ乳酸菌をはじめとする１３菌種でＳＬＰの発現が確認もしくは推定されている。これらの乳酸菌が発現しているＳＬＰには、等電点が９～１０の塩基性タンパク質であること、Ｎ末端領域に２３～３０アミノ酸残基からなるシグナルペプチド配列を持つことといった共通点がある。本発明の抗菌ペプチド産生促進用組成物に用いるＳＬＰは、ラクトバチルス属に由来し、当該作用を有するものであればどのようなものでも用いることができるが、ラクトバチルス・ヘルベティカス、ラクトバチルス・アシドフィルス、ラクトバチルス・アミロボラス又はラクトバチルス・ブフネリが好ましい。ラクトバチルス・ヘルベティカスのうちではＳＢＴ２１７１（ＦＥＲＭ　ＢＰ－５４４５）が最も好ましい。　
　また、ＳＬＰは菌体から精製されたものである必要はなく、ＳＬＰを含む菌体自体や培養物としても用いることができるが、精製したＳＬＰがより好ましい。菌体自体は、生菌体でも死菌体でもよい。
　抗菌ペプチドとしては、ディフェンシンファミリー（α－ディフェンシン、β－ディフェンシンなど）、カセリシジン（ＬＬ－３７）、ダームシジン、ＬＥＡＰ－１（ヘプシジン）、ＬＥＡＰ－２、ラクトフェリン、Ｒｅｇペプチドなどが挙げられ、このうちでもディフェンシンファミリーが好ましく、β－ディフェンシンがさらに好ましい。
（抗菌ペプチド産生促進用組成物の製造方法）
　ＳＬＰは以下の方法に従って乳酸菌菌体より精製する。対象とするラクトバチルス属乳酸菌をＭＲＳ液体培地などの液体培地、もしくは脱脂乳で十分に培養した後に菌体を回収し、必要に応じて洗浄を行う。菌体は、寒天培地などに生育させたコロニーから回収してもよい。得られた菌体をそのまま、もしくは凍結乾燥した後に、塩化リチウム、尿素、塩酸グアニジンなどのカオトロピック試薬溶液で懸濁、攪拌して菌体表層のＳＬＰを可溶化する。可溶化したＳＬＰを含む溶液から固形物を除いた後、透析などによってカオトロピック試薬を除き、ＳＬＰを析出させる。析出したＳＬＰを回収後、必要に応じて洗浄を行い、精製ＳＬＰとする。本発明の抗菌ペプチド産生促進用組成物に用いるＳＬＰは加熱しても抗菌ペプチド促進作用が維持されることから加熱されたものであってもよい。
（ＳＬＰ分解物）
　ＳＬＰ分解物は以下の方法に従って調製する。ＳＬＰの懸濁液に対して種々のプロテアーゼを適当な濃度で添加し、適宜反応させる。プロテアーゼの種類およびプロテアーゼ分解の程度は限定されるものではない。一例としてプロティナーゼＫで分解処理する条件としては、３７℃で２時間～２４時間が望ましく、３時間～２０時間がより好ましい。
（摂取量）
　ＳＬＰによる抗菌ペプチド産生促進作用は分解物の状態でも発揮されることから、経口的に摂取した後に胃酸による分解を受けても作用への影響は小さいものと考えられる。このことから、ＳＬＰを食品に添加して経口的に摂取することが望ましい。摂取量については特に制限しないが、ラクトバチルス・ヘルベティカスＳＢＴ２１７１の場合、概算でＳＬＰ１ｍｇ／日を継続的に摂取することで抗菌ペプチドの誘導が期待できると考えられる。
（食品、医薬品、飼料への配合）
　精製したＳＬＰは加熱処理によって抗菌ペプチド産生促進作用を失わないことから、常法に従って食品、医薬品、飼料に配合することが可能である。
　本発明の抗菌ペプチド産生促進用組成物を含む飲食品は、抗菌ペプチド産生促進用飲食品としての利用価値があり、本飲食品を摂取することにより、上皮細胞からの抗菌ペプチド産生を促進し、様々な感染からの予防ができ、また感染した場合でも軽症に抑えられ、また早い回復が期待できる。動物用飼料に含まれる場合は、これを摂取した動物に同様の効果が期待できる。
　また、本発明の抗菌ペプチド産生促進用組成物を含む医薬は、抗菌ペプチドの産生が促進されることにより治療または予防できる疾患に使うことができる。例えば、病原菌による各種の感染症などが挙げられる。
（評価方法）
　抗菌ペプチド産生促進作用とは、対象における抗菌ペプチドの産生が促進される作用をいい、抗菌ペプチドを発現するための遺伝子の発現が誘導されることにより抗菌ペプチドが発現されることをいう。したがって、本明細書中、抗菌ペプチド産生促進作用と抗菌ペプチド誘導作用とは同義で用いられる。
　本発明のＳＬＰによる抗菌ペプチド誘導作用は以下に示す方法で評価する。培養細胞に対してＳＬＰもしくはその分解物を添加し、所定の時間作用させた後に抗菌ペプチド遺伝子の発現量を測定する。評価には種々の細胞を用いることができるが、特に生体外との接触が想定される上皮細胞が好ましい。また、測定される抗菌ペプチドは限定されるものではないが、ディフェンシンファミリーが好ましく、上皮細胞から分泌されるβ‐ディフェンシンが特に好ましい。
　以下、本発明の実施例を詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
　本試験に用いたラクトバチルス属の菌体、ＳＬＰ、ＳＬＰ分解物の調製例を以下に示す。
（ラクトバチルス属乳酸菌菌体の調製例）
　ラクトバチルス・ヘルベティカスＳＢＴ２１７１をＭＲＳ液体培地１００ｍＬで３７℃、１６時間培養後、遠心分離（８，０００×ｇ、４℃、１０分間）にて菌体を回収し、生理食塩水で２回、滅菌ＭｉｌｌｉＱ水で１回洗浄し、さらに凍結乾燥を実施した（凍結乾燥菌体）。
　以下の試験では、凍結乾燥菌体を用いた。
（ＳＬＰの調製例）
　ラクトバチルス・ヘルベティカスＳＢＴ２１７１をＭＲＳ液体培地１００ｍＬで３７℃、１６時間培養後、遠心分離（８，０００×ｇ、４℃、１０分間）にて菌体を回収し、滅菌ＭｉｌｌｉＱ水で１回洗浄した。得られた菌体はｃＯｍｐｌｅｔｅTM　Ｐｒｏｔｅａｓｅ　Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ　Ｃｏｃｋｔａｉｌ（Ｒｏｃｈｅ）を添加した１Ｍ　ＬｉＣｌ溶液１０ｍＬで懸濁し、室温で３０分間攪拌した。攪拌後の懸濁液を遠心分離（１０，０００×ｇ、４℃、２０分間）し、上清を回収した。沈殿はｃＯｍｐｌｅｔｅTMＰｒｏｔｅａｓｅ　Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ　Ｃｏｃｋｔａｉｌ（Ｒｏｃｈｅ）を添加した５Ｍ　ＬｉＣｌ
溶液１０ｍＬで再懸濁し、室温で再度３０分間攪拌した。攪拌後の懸濁液は遠心分離（１０，０００×ｇ、４℃、２０分間）し、上清を回収した。回収した上清をまとめ、０．２μｍフィルターを通した後にＳｌｉｄｅ－Ａ－Ｌｙｚｅｒ　Ｇ２　１０Ｋ（Ｐｉｅｒｃｅ）で滅菌ＭｉｌｌｉＱ水に対して透析することでＳＬＰを析出させた。透析後の溶液を遠心分離（１２，０００×ｇ、４℃、２０分間）し、析出したＳＬＰを回収した。回収したＳＬＰは滅菌ＭｉｌｌｉＱ水１ｍＬで洗浄後、１Ｍ　ＬｉＣｌ溶液５００μＬに懸濁し、適宜攪拌しながら氷上で１５分間保持した。遠心分離によってＬｉＣｌ溶液を除き、再度滅菌ＭｉｌｌｉＱ水１ｍＬで洗浄、滅菌ＭｉｌｌｉＱ水に再懸濁して凍結乾燥したものを精製ＳＬＰとした。
　精製後のＳＬＰは、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ法によって目的サイズの４３ｋＤａ付近にバンドが認められることを確認した（図１）。また、得られたＳＬＰは３ｍｇであった。
（ＳＬＰ分解物の調製例）
　５ｍｇ／ｍＬとなるようにＰＢＳで懸濁したＳＬＰに、ｐｒｏｔｅｉｎａｓｅＫ（ｆｒｏｍ　Ｔｒｉｔｉｒａｃｈｉｕｍ　ａｌｂｕｍ，Ｐ６５５６：Ｓｉｇｍａ）（１０ｍｇ／ｍＬ）を終濃度１００μｇ／ｍＬとなるように添加し、３７℃で一晩反応させた。反応後のＳＬＰを９６℃で１０分間加熱してｐｒｏｔｅｉｎａｓｅＫを不活化し、ＳＬＰ分解物とした。比較のため、ＰＢＳで懸濁したＳＬＰ、ＰＢＳで懸濁して９６℃で１０分間加熱したＳＬＰ、ｐｒｏｔｅｉｎａｓｅＫで分解したＳＬＰについてＳＤＳ－ＰＡＧＥ法でバンドの確認を行った（図２）。加熱したＳＬＰはＳＬＰと同様の４３ｋＤａ付近のほかに３７ｋＤａ付近、５ｋＤａ付近にもバンドが見られた。また、ＳＬＰ分解物は５ｋＤａ以上の明確なバンドは見られなかった。
〔試験例１〕抗菌ペプチド誘導活性の評価（１）菌体との比較
１．試験方法
　継代培養したＣａｃｏ－２細胞（ヒト腸管上皮細胞）を２．０×１０５ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌとなるよう１２ｗｅｌｌプレートに播種し、５％ＣＯ２インキュベーターにて３７℃で一晩培養した。培養には、ＤＭＥＭ－ｈｉｇｈ　ｇｌｕｃｏｓｅ（Ｄ５７９６：Ｓｉｇｍａ）にＦＢＳ（ｆｉｎａｌ　ｃｏｎｃ．１０％）（Ｌｏｔ．１１Ｄ２６４：Ｓｉｇｍａ）、ＮＥＡＡ（ｆｉｎａｌ　ｃｏｎｃ．１×）（Ｍ７１４５：Ｓｉｇｍａ）、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｎ－Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｉｎ（ｆｉｎａｌ　ｃｏｎｃ．１００Ｕ－１００μｇ／ｍＬ）（１５１４０－１２２：Ｌｉｆｅ　ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を添加して使用した。培養後、細胞が７０～８０％コンフルエントに達していることを確認するとともに、培地を除きＦＢＳおよび抗生物質を添加していない培地（ＤＭＥＭ－ｈｉｇｈ　ｇｌｕｃｏｓｅ＋１×ＮＥＡＡ）に交換、３７℃でさらに２４時間培養した。培養後の１２ｗｅｌｌプレートから培地を除き、ラクトバチルス・ヘルベティカスＳＢＴ２１７１菌体もしくはラクトバチルス・ヘルベティカスＳＢＴ２１７１から精製したＳＬＰを１０もしくは５０μｇ／ｍＬ含む培地を添加、６時間培養した。培養後の１２ｗｅｌｌプレートから培地を除き、ＰＢＳで洗浄した後、ＲＮｅａｓｙ　Ｍｉｎｉ　Ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ）を用いて細胞からトータルＲＮＡを抽出した。抽出したトータルＲＮＡは、ＮａｎｏＤｒｏｐ２０００（Ｔｈｅｒｍｏ　Ｆｉｓｈｅｒ　Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）で濃度を測定した。
　抽出したトータルＲＮＡ溶液から、ＲｅｖｅｒＴｒａ　Ａｃｅ　ｑＰＣＲ　ＲＴ　Ｍａｓ　ｔｅｒ　Ｍｉｘ　ｗｉｔｈ　ｇＤＮＡ　Ｒｅｍｏｖｅｒ（東洋紡）を用いてｃＤＮＡを合成した。逆転写反応には、ＴａＫａＲａ　ＰＣＲ　Ｔｈｅｒｍａｌ　Ｃｙｃｌｅｒ　Ｄｉｃｅ(登録商標）Ｇｒａｄｉｅｎｔ（タカラバイオ）を使用した。得られた逆転写反応液をｔｅｍｐｌａｔｅ　ｃＤＮＡとしてリアルタイムＰＣＲに供した。
　リアルタイムＰＣＲにはＴａｑＭａｎ(登録商標）Ｆａｓｔ　Ａｄｖａｎｃｅｄ　Ｍａｓｔｅｒ　Ｍｉｘ（Ｌｉｆｅ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｃａｔ＃４４４４５５６）およびＴａｑＭａｎＧｅｎｅ　Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　Ａｓｓａｙ（ｈＢＤ２：Ｈｓ００１７５４７４＿ｍ１、ＧＡＰＤＨ：Ｈｓ０３９２９０９７＿ｇ１）（Ｌｉｆｅ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用した。反応には３８４ウェルプレート（Ｌｉｆｅ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｃａｔ＃４３０９８４９）を用い、ＶｉｉＡTM７（Ｌｉｆｅ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用した。ポジティブコントロール（ｐｏｓｉｔｉｖｅ　ｃｏｎｔｒｏｌ）としてＬＰＳを１０μｇ／ｍＬの濃度で添加し、各水準の遺伝子発現はΔΔＣｔ法によってポジティブコントロールに対する相対発現量として評価した。試験はｎ＝３で実施し、増幅が認められなかったサンプルを含む水準は非検出（ｎ．ｄ．：ｎｏｔ　ｄｅｔｅｃｔｅｄ）とした。
２．試験結果
　評価の結果、ＳＢＴ２１７１菌体およびＳＬＰ共にｈＢＤ２遺伝子の発現上昇が認められた（図３）。ＳＢＴ２１７１菌体では添加濃度１０μｇ／ｍＬでポジティブコントロールの約３倍、添加濃度５０μｇ／ｍＬで約２８倍のｈＢＤ２遺伝子発現が認められた。一方、ＳＬＰでは添加濃度１０μｇ／ｍＬで約１９倍、５０μｇ／ｍＬで約４５倍の遺伝子発現が認められた。この結果より、ＳＢＴ２１７１から精製したＳＬＰは、ＳＢＴ２１７１菌体よりも強い抗菌ペプチド誘導作用を有すると考えられた。図中、ａ、ｂ、ｃ、ｄの記号はそれぞれ異なる記号間で有意な差（Ｐ＜０．０５）があること
を示す（以下、図４～６において同じ）。
〔試験例２〕抗菌ペプチド誘導活性の評価（２）ＳＬＰ分解物の評価
１．試験方法
　上記「試験例１（１）菌体との比較」と同様にＣａｃｏ－２細胞を播種、培地交換した後、ラクトバチルス・ヘルベティカスＳＢＴ２１７１のＳＬＰをそのままで、９６℃１０分間加熱したもの、もしくはｐｒｏｔｅｉｎａｓｅＫ処理によって分解したものをそれぞれ５０μｇ／ｍＬの濃度となるよう添加し、６時間培養した。その後、上記の通りトータルＲＮＡ抽出、ｃＤＮＡ合成、リアルタイムＰＣＲによるｈＢＤ２遺伝子発現解析を行った。
２．試験結果
　評価の結果、何も処理していないＳＬＰだけでなく、加熱処理したＳＬＰおよびｐｒｏｔｅｉｎａｓｅＫで分解処理したＳＬＰでもポジティブコントロールと比較して顕著に高いｈＢＤ２遺伝子発現が認められた（図４）。この結果より、精製したＳＬＰは分解物の状態でも抗菌ペプチド誘導作用を有すると考えられた。
〔試験例３〕抗菌ペプチド誘導活性の評価（３）菌株比較
１．試験方法
　上記「試験例１（１）菌体との比較」と同様にＣａｃｏ－２細胞を播種、培地交換した後、ラクトバチルス・ヘルベティカスＳＢＴ２１７１、ラクトバチルス・アシドフィルスＪＣＭ１１３２、ラクトバチルス・アミロボラスＪＣＭ１１２６、ラクトバチルス・ブフネリＪＣＭ１１１５からそれぞれ精製したＳＬＰを１０μｇ／ｍＬの濃度となるよう添加、６時間培養した。その後、上記の通りトータルＲＮＡ抽出、ｃＤＮＡ合成、リアルタイムＰＣＲによるｈＢＤ２遺伝子発現解析を行った。なお、ＳＬＰ無添加の場合をネガティブコントロール（ｎｅｇａｔｉｖｅ　ｃｏｎｔｒｏｌ）としてポジティブコントロールに対する相対発現量として評価した。
２．試験結果
　評価の結果、いずれの菌株から精製したＳＬＰでもネガティブコントロールと比較して高いｈＢＤ２遺伝子発現が認められ、また、ポジティブコントロールと同等あるいはそれ以上のｈＢＤ２遺伝子発現が認められた（図５）。この結果より、精製したＳＬＰによる抗菌ペプチド誘導作用はラクトバチルス属に広く共通するものと考えられた。
　乳酸菌が産生するＳＬＰの分子量は菌種間で大きな開きがあり、さらにその遺伝子構造は同一菌種内においても多様性に富むことが示されていたところ、本発明のＳＬＰによる抗菌ペプチド誘導作用がラクトバチルス属に広く見出されたことは意外なものであった。
〔試験例４〕抗菌ペプチド誘導活性の評価（４）口腔上皮細胞での評価
１．試験方法
　継代培養したＨＳＣ－４細胞（ヒト舌上皮細胞）を１．０×１０５ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌとなるよう２４ｗｅｌｌプレートに播種し、５％ＣＯ２インキュベーターにて３７℃で一晩培養した。培養には、ＤＭＥＭ－ｈｉｇｈ　ｇｌｕｃｏｓｅ（Ｄ５７９６：Ｓｉｇｍａ）にＦＢＳ（ｆｉｎａｌ　ｃｏｎｃ．１０％）（Ｌｏｔ．４２Ｆ４１６０Ｋ：Ｇｉｂｃｏ）、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｎ－Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｉｎ（ｆｉｎａｌ　ｃｏｎｃ．１００Ｕ－１００μｇ／ｍＬ）（１５１４０－１２２：Ｌｉｆｅ　ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ
）を添加して使用した。培養後、細胞が７０～８０％コンフルエントに達していることを確認するとともに、培地を除きＦＢＳおよび抗生物質を添加していない培地（ＤＭＥＭ－ｈｉｇｈ　ｇｌｕｃｏｓｅ）に交換、３７℃でさらに２４時間培養した。培養後の２４ｗｅｌｌプレートから培地を除き、ラクトバチルス・ヘルベティカスＳＢＴ２１７１菌体もしくはラクトバチルス・ヘルベティカスＳＢＴ２１７１から精製したＳＬＰを１０もしくは５０μｇ／ｍＬ含む培地を添加、６時間培養した。その後、上記の通りトータルＲＮＡ抽出、ｃＤＮＡ合成、リアルタイムＰＣＲによるｈＢＤ２遺伝子発現解析を行った。
２．試験結果
　評価の結果、Ｃａｃｏ－２細胞の場合と同様に菌体、ＳＬＰ共にｈＢＤ２遺伝子発現の上昇が認められた。また、菌体と比較してＳＬＰ添加によって高いｈＢＤ２遺伝子発現が認められた（図６）。この結果はＣａｃｏ－２細胞の場合と同様であり、ＳＬＰは菌体よりも強い抗菌ペプチド誘導作用を有すると考えられた。
（食品への配合例）
　ラクトバチルス・ヘルベティカスＳＢＴ２１７１から精製したＳＬＰ１０ｍｇに、脱脂粉乳３０ｇ、ビタミンＣとクエン酸の等量混合物４０ｇ、グラニュー糖１００ｇ、コーンスターチと乳糖の等量混合物６０ｇを加えて混合した。混合物をスティック状袋に詰め、本発明の抗菌ペプチド産生促進用スティック状健康食品を製造した。
（飼料への配合例）
　ラクトバチルス・ヘルベティカス　ＳＢＴ２１７１から精製したＳＬＰ２ｇを３９９８ｇの脱イオン水に懸濁し、４０℃まで加熱後、ＴＫホモミクサー（ＭＡＲＫ　ＩＩ　１６０型；特殊機化工業社製）にて、３，６００ｒｐｍで２０分間撹拌混合して２ｇ／４ｋｇのＳＬＰ溶液を得た。このＳＬＰ溶液２ｋｇに大豆粕１ｋｇ、脱脂粉乳１ｋｇ、大豆油０．４ｋｇ、コーン油０．２ｋｇ、パーム油２．３ｋｇ、トウモロコシ澱粉１ｋｇ、小麦粉０．９ｋｇ、ふすま０．２ｋｇ、ビタミン混合物０．５ｋｇ、セルロース０．３ｋｇ、ミネラル混合物０．２ｋｇを配合し、１２０℃、４分間加熱殺菌して、本発明の抗菌ペプチド産生促進用飼料１０ｋｇを製造した。
（医薬品への配合例）
　ラクトバチルス・ヘルベティカスＳＢＴ２１７１の液体培養物を、４℃、７，０００ｒｐｍで１５分間遠心分離した後、滅菌水による洗浄と遠心分離を３回繰り返して行い、洗浄菌体を得た。この洗浄菌体を凍結乾燥処理して菌体粉末を得た。この菌体粉末１部に脱脂粉乳４部を混合し、この混合粉末を打錠機により１ｇずつ常法により打錠して、本発明の抗菌ペプチド産生促進用錠剤を調製した。
　ラクトバチルス属乳酸菌に由来するＳＬＰおよびＳＬＰ分解物、もしくはＳＬＰを含むラクトバチルス属乳酸菌菌体およびその培養物などの抗菌ペプチド産生を誘導する素材を体内に摂取することにより、種々の感染に対する防御能の向上が期待できる。
 
[規則26に基づく補充 19.12.2019]　
Figure WO-DOC-FIGURE-RO134

Claims (7)

  1. ラクトバチルス属の菌体由来成分であるＳ層タンパク質（Ｓ－ｌａｙｅｒ　ｐｒｏｔｅｉｎ）及び前記Ｓ層タンパク質（Ｓ－ｌａｙｅｒ　ｐｒｏｔｅｉｎ）の分解物からなる群から選択される１つ以上を有効成分として含むことを特徴とする抗菌ペプチド産生促進用組成物。
  2. ラクトバチルス属の菌体由来成分であるＳ層タンパク質（Ｓ－ｌａｙｅｒ　ｐｒｏｔｅｉｎ）及び前記Ｓ層タンパク質（Ｓ－ｌａｙｅｒ　ｐｒｏｔｅｉｎ）の分解物を含むラクトバチルス・ヘルベティカス菌体又はその培養物を有効成分として含む抗菌ペプチド産生促進用組成物。
  3. 前記ラクトバチルス属の乳酸菌がラクトバチルス・ヘルベティカス、ラクトバチルス・アシドフィルス、ラクトバチルス・アミロボラス又はラクトバチルス・ブフネリである請求項１又は２に記載の抗菌ペプチド産生促進用組成物。
  4. 抗菌ペプチドがβ‐ディフェンシンである請求項１～３のいずれかに記載の抗菌ペプチド産生促進用組成物。
  5. 上皮細胞における抗菌ペプチドの産生促進である請求項１～４のいずれかに記載の抗菌ペプチド産生促進用組成物。
  6. 請求項１から請求項５のいずれか１つに記載の抗菌ペプチド産生促進用組成物を含む抗菌ペプチド産生促進用飲食品。
  7. 請求項１から請求項５のいずれか１つに記載の抗菌ペプチド産生促進用組成物を含む感染予防用飲食品。
     
     
     
     
     
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Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2003095938A (ja) 2001-09-21 2003-04-03 Masami Moriyama 抗菌ペプチド分泌誘発剤
JP5224807B2 (ja) 2004-03-04 2013-07-03 イーエルシー マネージメント エルエルシー ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）抽出物による皮膚の処置方法
JP2015083547A (ja) * 2013-10-25 2015-04-30 雪印メグミルク株式会社 口腔内疾患予防剤
WO2015087919A1 (ja) 2013-12-10 2015-06-18 株式会社明治 抗菌ペプチド誘導剤
JP2015151385A (ja) * 2014-02-18 2015-08-24 学校法人福岡大学 経口感染症の予防治療剤、及び該予防治療剤を含有する医薬品、機能性食品または飲食品添加物

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8895062B2 (en) * 2006-01-24 2014-11-25 University Of Maryland, Baltimore Surface-layer protein coated microspheres and uses thereof
WO2015182470A1 (ja) * 2014-05-29 2015-12-03 カルピス株式会社 腸管における物質取り込み促進剤

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2003095938A (ja) 2001-09-21 2003-04-03 Masami Moriyama 抗菌ペプチド分泌誘発剤
JP5224807B2 (ja) 2004-03-04 2013-07-03 イーエルシー マネージメント エルエルシー ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）抽出物による皮膚の処置方法
JP2015083547A (ja) * 2013-10-25 2015-04-30 雪印メグミルク株式会社 口腔内疾患予防剤
WO2015087919A1 (ja) 2013-12-10 2015-06-18 株式会社明治 抗菌ペプチド誘導剤
JP2015151385A (ja) * 2014-02-18 2015-08-24 学校法人福岡大学 経口感染症の予防治療剤、及び該予防治療剤を含有する医薬品、機能性食品または飲食品添加物

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
KOBATAKE, E. ET AL.: "S-Layer Protein of Lactobacillus helveticus SBT2171 Promotes Human beta- Defensin 2 Expression via TLR2-JNK Signaling", FRONT. MICROBIOL., vol. 10, no. 2414, 18 October 2019 (2019-10-18), pages 1 - 12, XP055712697 *
MARTINEZ, M. G. ET AL.: "S-layer proteins of Lactobacillus acidophilus inhibits JUNV infection", BIOCHEM. BIOPHYS. RES. COMMUN., vol. 422, no. 4, 15 June 2012 (2012-06-15), pages 590 - 595, XP055712692 *
MUKAI ET AL., JAPANESE JOURNAL OF LACTIC ACID BACTERIA, vol. 19, no. 1, 2008, pages 21 - 29
PRADO ACOSTA, M. ET AL.: "S-layer proteins from Lactobacillus sp. inhibit bacterial infection by blockage of DC-SIGN cell receptor", INT. J. BIOL. MACROMOL., vol. 92, November 2016 (2016-11-01), pages 998 - 1005, XP029755328, DOI: 10.1016/j.ijbiomac.2016.07.096 *
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