WO2020032154A1 - アセチルコリンエステラーゼ阻害剤 - Google Patents

アセチルコリンエステラーゼ阻害剤 Download PDF

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WO2020032154A1
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nmr
chalcone
acetylcholinesterase
active ingredient
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PCT/JP2019/031299
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谷口　雅彦
能庸 村上
きみ江 馬場
正章 吾妻
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株式会社東洋マテリアル
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    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/105—Plant extracts, their artificial duplicates or their derivatives
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    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00

Definitions

  • the present invention relates to an acetylcholinesterase inhibitor that is useful for preventing dementia by inhibiting the activity of acetylcholinesterase.
  • Dementia includes Alzheimer's type, vascularity, Lewy body type, frontotemporal type, etc., but the number of patients with Alzheimer's type dementia is the largest, and it is said to account for 60% or more of the total.
  • Alzheimer-type dementia acetylcholine in the brain is reduced, and therefore, an inhibitor of acetylcholinesterase (hereinafter sometimes abbreviated as “AChE”) involved in acetylcholine reduction is used as a therapeutic agent.
  • AChE acetylcholinesterase
  • AChE inhibitors At present, three drugs of donepezil hydrochloride, galantamine, and rivastigmine are currently in clinical use as AChE inhibitors. Each of these drugs has its own characteristics, but there are also development issues such as drugs with fewer side effects and drugs with different inhibition sites.
  • An object of the present invention is to provide a novel AChE inhibitor that is useful for preventing dementia by inhibiting the activity of acetylcholinesterase.
  • the present inventors have found an AChE inhibitory effect on chalcones, which are the main components of yellow juice oozing from cut ends of stems and roots of Ashitaba (Angelica keiskei), a Japanese endemic species of the genus Umbelliferae.
  • a close examination of the in vitro enzyme inhibition experiments showed that the 2 ', 4-dihydrochalcone skeleton plays a major role in the AChE inhibitory effect, and that the geranyl group at the 3'-position and the alkoxy group at the 4'-position enhance the effect. I understood.
  • the AChE inhibitor according to the present invention has a 2 ', 4-dihydroxychalcone skeleton as a basic skeleton, and has a geranyl group at the 3'-position and / or a lower alkoxy group at the 4'-position in the basic skeleton.
  • the chalcones which have it as an active ingredient.
  • the AChE inhibitor according to the present invention contains chalcones in Ashitaba as an active ingredient.
  • the AChE inhibitor of the present invention is useful for preventing dementia by inhibiting the activity of acetylcholinesterase.
  • the active ingredient can be obtained from Ashitaba, it can be used as an AChE inhibitory food that can be taken continuously in daily eating habits.
  • xanthoangelol F exhibits a high AChE inhibitory action comparable to galanthamine hydrobromide clinically applied.
  • ⁇ ⁇ Chalcones as active ingredients of the AChE inhibitor according to the present invention have a 2 ', 4-dihydroxychalcone skeleton represented by the following formula (1) as a basic skeleton.
  • the AChE inhibitor according to the present invention contains, as an active ingredient, a chalcone having a geranyl group at the 3'-position and / or a lower alkoxy group at the 4'-position in the above basic skeleton.
  • the AChE inhibitory activity is greatly affected by the 2 ′, 4-dihydroxychalcone skeleton, and the AChE inhibitory activity is enhanced by the geranyl group at the 3′-position and the lower alkoxy group at the 4′-position.
  • the chalcones have these characteristics, hydrogen on the benzene ring in the above basic skeleton may be further substituted as long as the effects of the present invention are not impaired.
  • the lower alkoxy group at the 4'-position is, for example, a linear or branched alkoxy group having 1 to 6 carbon atoms, and a methoxy group is preferable.
  • 4-hydroxyderricin, xanthoangelol and xanthoangelol F can be preferably exemplified.
  • '4-hydroxyderricin is represented by the following formula (2) and has a methoxy group at the 4'-position in the chalcone skeleton.
  • Xanthoangelol is represented by the following formula (3) and has a geranyl group at the 3'-position in the chalcone skeleton.
  • Xanthoangelol F is represented by the following formula (4) and has a geranyl group at the 3'-position and a methoxy group at the 4'-position in the chalcone skeleton. As described above, since the compound has both a geranyl group and a methoxy group at a predetermined substitution position, the AChE inhibitory activity is particularly high.
  • the chalcone in the present invention may be obtained by chemical synthesis, or may be obtained from natural products.
  • Ashitaba contains various chalcones, including chalcones satisfying the conditions of the present invention.
  • it contains a large amount of 4-hydroxyderricin and xanthoangelol, and also contains xanthoangelol F.
  • the present invention also includes an acetylcholinesterase inhibitor containing chalcones in Ashitaba as an active ingredient.
  • Ashitaba Asuka leaf, Angelica keiskei
  • Ashitaba is a plant of the genus Umbelliferae belonging to the Apiaceae family. It is native to Japan and grows on the Pacific coast of the Boso Peninsula, Kii Peninsula and Izu Islands.
  • chalcones in Ashitaba are used as an active ingredient, whole plants may be used, or a part of stems, roots, leaves, fruits, seeds, seed coats, flowers and the like may be used.
  • the stem, root and leaves of Ashitaba contain a large amount of yellow substance, and the characteristic is that yellow juice oozes out from the cut surface. This yellow juice contains a large amount of chalcone that satisfies the conditions of the present invention, and can be suitably used in the present invention.
  • ⁇ Whole grass of Ashitaba a part thereof or yellow juice may be used as it is, or may be used after being subjected to processing.
  • processing include grinding, drying, crushing, crushing, extraction, and concentration.
  • chalcones can be obtained by using a raw material such as a whole plant of Ashitaba, a part thereof, a crushed product thereof, and yellow juice, and extracting with a solvent.
  • the solvent used in the above extraction is not particularly limited as long as it is a solvent capable of extracting the target chalcone, and examples thereof include water, methanol, ethanol, propanol, acetone, ethyl acetate, and methyl acetate. , Ethyl acetate is preferred.
  • the extraction solvent may be used alone or in combination of two or more.
  • the extract may be separated and purified by a known purification method such as chromatography. Further, the extract may be dried to a solid state by a known method such as freeze drying, reduced pressure drying, and spray drying.
  • the AChE inhibitor of the present invention may be used by any administration route of oral administration and parenteral administration, and may be used as a raw material for health foods (including beverages), food additives, supplements, and pharmaceutical compositions. it can.
  • health foods including beverages
  • food additives, supplements and pharmaceutical compositions.
  • it can.
  • whole grass of Ashitaba a part thereof, their crushed products, yellow juice, and extracts from them (the use form is not limited, such as a liquid containing an extraction solvent, a concentrate thereof, or a dried solid thereof).
  • the AChE inhibitor of the present invention When used as a raw material for various applications, it can be formulated in combination with a substrate or a drug commonly used for various applications.
  • 4-hydroxyderricin is represented by the following formula (2).
  • xanthoangelol is represented by the following formula (3).
  • Xanthoangelol F is represented by the following formula (4) as described above.
  • Isobaba chalcone is represented by the following formula (5).
  • Prostratel F is represented by the following equation (7).
  • AChE inhibitory activity Using 4-hydroxyderricin, xanthoangelol, xanthoangelol F, isobabachalcone, 4′-O-geranylnaringenin, and prostritol F obtained as above as samples, the AChE inhibitory activity of each sample was measured.
  • the negative control sample was dimethyl sulfoxide (DMSO) and the positive control sample was galantamine hydrobromide.
  • DMSO dimethyl sulfoxide
  • AChE inhibitory activity was also measured for naringenin (purchased from LKT Laboratories, Inc.) and geraniol (purchased from Wako Pure Chemical Industries, Ltd.).
  • the sample was dissolved in dimethyl sulfoxide (DMSO).
  • DMSO dimethyl sulfoxide
  • a 50 mM Tris-HCl buffer pH 8.8 was used as a buffer for the reaction. 180 ⁇ l of the buffer solution was placed in a 96-well microplate, and 5 ⁇ l of the sample was added thereto. Further, 10 ⁇ l of electric eel-derived acetylcholinesterase (2 units / ml) adjusted with a buffer and 10 ⁇ l of 1-naphthyl acetate (18 mM) dissolved in DMSO were added, and the mixture was reacted at 37 ° C. for 1 hour.
  • DMSO dimethyl sulfoxide
  • Inhibition rate (%) 100- ⁇ [(absorbance with sample / with enzyme)-(absorbance with sample / without enzyme)] / [(absorbance with negative control sample / with enzyme)-(negative control sample / with enzyme) Without absorbance)] x 100 mm
  • Xanthoangelol F which has a geranyl group at the 3′-position and a methoxy group at the 4′-position and exhibits the highest inhibitory activity, was as potent as galantamine hydrobromide used clinically. .

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Abstract

本発明は、アセチルコリンエステラーゼの活性を阻害することにより認知症予防に有用である新規なアセチルコリンエステラーゼ阻害剤を提供することを課題とする。　本発明のアセチルコリンエステラーゼ阻害活性剤は、２'，４－ジヒドロキシカルコン骨格を基本骨格とし、当該基本骨格における３'位にゲラニル基を有するか、及び／又は、４'位に低級アルコキシ基を有するカルコン類を有効成分とする。好ましくは、４－ヒドロキシデリシン、キサントアンゲロール及びキサントアンゲロールＦからなる群より選ばれる少なくとも１種のカルコン類を有効成分とし、特に好ましくは、キサントアンゲロールＦを有効成分とする。本発明のアセチルコリンエステラーゼ阻害活性剤は、また、アシタバ中のカルコン類を有効成分とする。

Description

アセチルコリンエステラーゼ阻害剤
　本発明は、アセチルコリンエステラーゼの活性を阻害することにより認知症予防に有用なアセチルコリンエステラーゼ阻害剤に関する。
　内閣府の平成２９年版高齢社会白書によると、６５歳以上の認知症高齢者数と有病率の将来推計では、平成２４（２０１２）年は認知症高齢者数が４６２万人と、６５歳以上の高齢者の約７人に１人（有病率１５．０％）であったが、平成３７（２０２５）年には患者数は約７００万人と、６５歳以上の高齢者の約５人に１人になるとされている。
　認知症にはアルツハイマー型、血管性、レビー小体型、前頭側頭型などのタイプがあるが、アルツハイマー型認知症の患者数が最も多く、全体の６割以上を占めるとされる。
　アルツハイマー型認知症では、脳内のアセチルコリンが減少するため、アセチルコリンの減少に関与するアセチルコリンエステラーゼ（以下、「ＡＣｈＥ」と略記することがある）の阻害剤が治療薬として用いられている。
　現在、ＡＣｈＥ阻害剤として、ドネペジル塩酸塩（ｄｏｎｅｐｅｚｉｌ　ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）、ガランタミン（ｇａｌａｎｔａｍｉｎｅ）、リバスチグミン（ｒｉｖａｓｔｉｇｍｉｎｅ）の３剤が臨床使用されている。
　これらの薬剤にはそれぞれの特徴があるが、より副作用が少ない薬剤や阻害部位の異なる薬剤などの開発課題もある。
　一方、日常の食習慣から、認知症予防を目指す研究開発も進められており、緑茶を習慣的に摂取することによる予防効果の研究事例がある。この緑茶の摂取と認知症予防の関係については様々な視点から研究されており、近年、緑茶中にＡＣｈＥ阻害作用があることが報告され、ＡＣｈＥ阻害作用の高い茶の品種の同定がなされている（非特許文献１参照。）。このように、認知症予防に対するひとつのアプローチとして、日常の食習慣の中での継続的なＡＣｈＥ阻害作用食品の摂取が考えられており、現在、そのような食品の探索が行われている。
日本製紙株式会社、"高機能茶「サンルージュ」の「加齢による認知機能の低下抑制効果」を動物試験で確認"［online］、平成２８年１１月１８日、［平成３０年８月６日検索］、インターネット＜URL：https://www.nipponpapergroup.com/news/year/2016/news161118003566.html＞
　本発明は、アセチルコリンエステラーゼの活性を阻害することにより認知症予防に有用である新規なＡＣｈＥ阻害剤を提供することを課題とする。
　本発明者らは、セリ科シシウド属の日本の固有種であるアシタバ（Ａｎｇｅｌｉｃａ　ｋｅｉｓｋｅｉ）の茎や根の切り口から滲み出た黄汁の主成分であるカルコン類に、ＡＣｈＥ阻害作用を見出した。イン・ビトロの酵素阻害実験での精査の結果、ＡＣｈＥ阻害作用には、２’，４－ジヒドロカルコン骨格が大きく働き、３’位のゲラニル基および４’位のアルコキシ基が効果を増強させることが分かった。
　本発明は上記知見に基づき完成されたものである。
　すなわち、本発明にかかるＡＣｈＥ阻害剤は、２’，４－ジヒドロキシカルコン骨格を基本骨格とし、当該基本骨格における３’位にゲラニル基を有するか、及び／又は、４’位に低級アルコキシ基を有するカルコン類を有効成分とする。
　本発明にかかるＡＣｈＥ阻害剤は、また、アシタバ中のカルコン類を有効成分とする。
　本発明のＡＣｈＥ阻害剤は、アセチルコリンエステラーゼの活性を阻害することにより認知症予防に有用である。特に、有効成分はアシタバから得ることができるので、日常の食習慣の中で継続的に摂取可能なＡＣｈＥ阻害作用食品として利用することができる。
　中でも、キサントアンゲロールＦは、臨床応用されているガランタミン臭化水素酸塩に匹敵する高いＡＣｈＥ阻害作用を発揮する。
　以下、本発明にかかるＡＣｈＥ阻害剤について詳しく説明するが、本発明の範囲はこれらの説明に拘束されることはなく、以下の例示以外についても、本発明の趣旨を損なわない範囲で適宜変更実施し得る。
　本発明にかかるＡＣｈＥ阻害剤の有効成分となるカルコン類は、基本骨格として、下式（１）で表される２’，４－ジヒドロキシカルコン骨格を有する。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000001
　そして、本発明にかかるＡＣｈＥ阻害剤は、上記基本骨格における３’位にゲラニル基を有するか、及び／又は、４’位に低級アルコキシ基を有するカルコン類を有効成分とする。
　本発明者の検討した結果によれば、ＡＣｈＥ阻害作用には、２’，４－ジヒドロキシカルコン骨格が大きく働き、３’位のゲラニル基及び４’位の低級アルコキシ基によってＡＣｈＥ阻害活性が増強されることが分かった。そして、これらの両方、すなわち、３’位にゲラニル基を有し、かつ、４’位に低級アルコキシ基を有する場合に、極めて高いＡＣｈＥ阻害活性が発揮されることが分かった。
　これらの特徴を備えるカルコン類であれば、本発明の効果を害しない限度で、上記基本骨格におけるベンゼン環上の水素がさらに置換されていても良い。
　上記において、４’位の低級アルコキシ基は、例えば、炭素数１～６の直鎖又は分岐のアルコキシ基であり、メトキシ基が好ましい。
　上記条件を満たすカルコン類として、４－ヒドロキシデリシン、キサントアンゲロール、キサントアンゲロールＦが好ましく例示できる。
　４－ヒドロキシデリシンは、下式（２）で表され、カルコン骨格における４’位にメトキシ基を有する。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000002
　キサントアンゲロールは、下式（３）で表され、カルコン骨格における３’位にゲラニル基を有する。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000003
　キサントアンゲロールＦは、下式（４）で表され、カルコン骨格における３’位にゲラニル基を有し、４’位にメトキシ基を有する。このように、所定の置換位置にゲラニル基及びメトキシ基の両方を有するものであるから、特にＡＣｈＥ阻害活性が高い。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000004
　本発明におけるカルコン類は、化学合成によって得られたものであっても良いが、天然物から得られたものであっても良い。
　例えば、アシタバには種々のカルコン類が含まれていることが分かっており、その中には、本発明の条件を満たすカルコン類も含まれる。特に、４－ヒドロキシデリシン及びキサントアンゲロールが多く含まれており、キサントアンゲロールＦも含まれる。
　従って、アシタバ中のカルコン類を有効成分とするアセチルコリンエステラーゼ阻害剤も本発明に含まれる。
　なお、アシタバ（明日葉、Ａｎｇｅｌｉｃａ　ｋｅｉｓｋｅｉ）は、セリ科シシウド属の植物である。日本原産で、房総半島から紀伊半島と伊豆諸島の太平洋岸に自生する。
　アシタバ中のカルコン類を有効成分として利用する場合、全草を使用してもよいし、茎、根、葉、果実、種子、種皮、花などの一部を使用してもよい。
　また、アシタバの茎、根、葉には多量の黄色物質が含まれており、その破切面から黄汁が滲出するのが特徴である。この黄汁には、本発明の条件を満たすカルコン類が多く含まれており、本発明に好適に利用できる。
　アシタバの全草、その一部または黄汁は、そのまま使用してもよいが、加工処理を施して用いても良い。加工処理としては、例えば、磨砕、乾燥、粉砕、破砕、抽出、濃縮等が挙げられる。
　具体的には、例えば、アシタバの全草、その一部、それらの粉砕物、黄汁などの原料を用い、溶媒で抽出することにより、カルコン類を得ることができる。
　上記抽出に用いられる溶媒としては、目的とするカルコン類を抽出することのできる溶媒であれば特に制限されず、例えば、水、メタノール、エタノール、プロパノール、アセトン、酢酸エチル、酢酸メチル等が挙げられ、酢酸エチルが好ましい。抽出溶媒は、単独で用いてもよいし、２種以上を組み合わせて使用してもよい。
　抽出後は、必要に応じてろ過、遠心分離、濃縮等を行っても良い。
　さらに、抽出液を、クロマトグラフィーなどの公知の精製法により分離・精製しても良い。
　また、抽出液を、凍結乾燥、減圧乾燥、噴霧乾燥などの公知の方法により乾燥させて固体状としても良い。
　本発明のＡＣｈＥ阻害剤は、経口投与、非経口投与のいずれの投与経路で用いても良く、健康食品（飲料も含む）、食品添加剤、サプリメント、医薬用組成物などの原料として用いることができる。
　例えば、アシタバの全草、その一部、それらの粉砕物、黄汁、それらからの抽出物（抽出溶媒を含む液状、その濃縮物又はそれらを乾燥した固体状等、使用形態は問わない）などを健康食品、食品添加剤、サプリメント、医薬用組成物などの原料として用いることができる。
　本発明のＡＣｈＥ阻害剤を各種用途の原料として用いる場合、各種用途に常用される基材や薬剤と組み合わせて処方することができる。
　以下、実施例を用いて、本発明にかかるＡＣｈＥ阻害剤について詳しく説明するが、本発明はこれら実施例に限定されるものではない。
〔アシタバエキスの抽出〕
　アシタバの茎の破切面から出てくる黄汁（１ｋｇ）を酢酸エチル（３Ｌ）で３回抽出後、減圧濃縮を行い、アシタバの酢酸エチル抽出エキス（２２１．１ｇ）を得た。
　得られたエキスは、シリカゲル（２ｋｇ）のカラムクロマトグラフィー（ｎ－ヘキサン－酢酸エチル系）により分離を行い、各成分の粗分画を得た。
　得られた粗分画はシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＣＨ2Ｃｌ2－メタノール系およびｎ－ヘキサン－酢酸エチル系）およびオクタデシル化シリカゲルカラムクロマトグラフィー（９０％メタノール）にて繰り返し精製を行い、カルコン類として４－ヒドロキシデリシン（１２．８ｇ）、キサントアンゲロール（１２．３ｇ）、キサントアンゲロールＦ（１．４ｇ）、イソババカルコン（０．３ｇ）、フラバノン類として４’－Ｏ－ゲラニルナリンゲニン（１．８ｇ）、プロストラトールＦ（０．３ｇ）を得た。
　得られた化合物については、ＮＭＲを初めとするスペクトルデータの解析によりそれぞれの化合物の構造を決定した。
　ＮＭＲスペクトルは、Ａｇｉｌｅｎｔ－ＮＭＲ－ｖｎｍｒ６００を用いて測定し、確認を行った。下記にそれぞれの化合物の1Ｈ－ＮＭＲおよび13Ｃ－ＮＭＲのスペクトルデータを示す。
＜４－ヒドロキシデリシン＞
　４－ヒドロキシデリシンは、上述のとおり、下式（２）で表される。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000005
　1Ｈ－ＮＭＲおよび13Ｃ－ＮＭＲのスペクトルデータは以下のとおりである。
　1Ｈ－ＮＭＲ（δｐｐｍ，ＣＤＣｌ3）：１３．５（１Ｈ，ｓ），７．８４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５．４Ｈｚ），７．８０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ），７．５７（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ），７．４８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５．４Ｈｚ），６．８９（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ），６．５０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ），５．７８（１Ｈ，ｂｒｓ），５．２３（１Ｈ，ｔｍ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），３．９２（３Ｈ，ｓ），３．４０（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），１．８０（３Ｈ，ｓ），１．６９（３Ｈ，ｓ）．
　13Ｃ－ＮＭＲ（δｐｐｍ，ＣＤＣｌ3）：１９３．４（ｓ），１６４．０（ｓ），１６３．５（ｓ），１５９．２（ｓ），１４５．０（ｓ），１３２．６（ｓ），１３１．２（ｄ）×２，１２９．９（ｄ），１２７．８（ｓ），１２２．５（ｄ），１１８．３（ｄ），１１８．０（ｓ），１１６．６（ｄ）×２，１１５．１（ｓ），１０２．８（ｄ），５６．１（ｑ），２６．０（ｑ），２１．９（ｑ），１８．０（ｑ）．
＜キサントアンゲロール＞
　キサントアンゲロールは、上述のとおり、下式（３）で表される。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000006
　1Ｈ－ＮＭＲおよび13Ｃ－ＮＭＲのスペクトルデータは以下のとおりである。
　1Ｈ－ＮＭＲ（δｐｐｍ，ＣＤＣｌ3）：１３．８１（１Ｈ，ｓ），９．１６（１Ｈ，ｂｒｓ），８．８５（１Ｈ，ｂｒｓ），７．８１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５．４Ｈｚ），７．６６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ），７．５２（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ），７．４３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５．４Ｈｚ），６．８９（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ），６．４７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ），５．３０（１Ｈ，ｔｍ，Ｊ＝７．０Ｈｚ），５．０７（１Ｈ，ｍ），３．４１（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ），２．０５（２Ｈ，ｍ），２．０１（２Ｈ，ｍ），１．８１（３Ｈ，ｓ），１．６５（３Ｈ，ｓ），１．５７（３Ｈ，ｓ）．
　13Ｃ－ＮＭＲ（δｐｐｍ，ＣＤＣｌ3）：１９３．２（ｓ），１６４．５（ｓ），１６２．６（ｓ），１５９．０（ｓ），１４５．１（ｄ），１４０．０（ｓ），１３２．６（ｓ），１３１．２（ｄ）×２，１２９．９（ｄ），１２８．０（ｓ），１２４．３（ｄ），１２１．５（ｄ），１１８．３（ｄ），１１６．６（ｄ）×２，１１４．８（ｓ），１１４．４（ｓ），１０８．６（ｄ），４０．０（ｔ），２６．６（ｔ），２５．９（ｑ），２１．９（ｔ），１７．９（ｑ），１６．５（ｑ）．
＜キサントアンゲロールＦ＞
　キサントアンゲロールＦは、上述のとおり、下式（４）で表される。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000007
　1Ｈ－ＮＭＲおよび13Ｃ－ＮＭＲのスペクトルデータは以下のとおりである。
　1Ｈ－ＮＭＲ（δｐｐｍ，ＣＤＣｌ3）：１３．５０（１Ｈ，ｓ），７．８２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５．４Ｈｚ），７．７８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ），７．５２（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ），７．４５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５．４Ｈｚ），６．８７（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ），６．４９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ），６．１０（１Ｈ，ｂｒｓ），５．２４（１Ｈ，ｔｍ，Ｊ＝６．９Ｈｚ），５．０７（１Ｈ，ｍ），３．９０（３Ｈ，ｓ），３．４０（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ），２．０５（２Ｈ，ｍ），２．０１（２Ｈ，ｍ），１．７９（３Ｈ，ｓ），１．６３（３Ｈ，ｓ），１．５６（３Ｈ，ｓ）．
　13Ｃ－ＮＭＲ（δｐｐｍ，ＣＤＣｌ3）：１９３．３（ｓ），１６４．０（ｓ），１６３．６（ｓ），１５８．９（ｓ），１４４．８（ｄ），１３６．０（ｓ），１３１．７（ｓ），１３１．１（ｄ）×２，１２９．８（ｄ），１２８．１（ｓ），１２５．０（ｄ），１２２．４（ｄ），１１８．５（ｄ），１１８．５（ｓ），１１６．５（ｄ）×２，１１５．１（ｓ），１０２．７（ｄ），５６．２（ｑ），４０．１（ｔ），２６．９（ｔ），２５．９（ｑ），２１．９（ｔ），１７．９（ｑ），１６．３（ｑ）．
＜イソババカルコン＞
　イソババカルコンは下式（５）で表される。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000008
　1Ｈ－ＮＭＲおよび13Ｃ－ＮＭＲのスペクトルデータは以下のとおりである。
　1Ｈ－ＮＭＲ（δｐｐｍ，ＣＤＣｌ3）：１３．８６（１Ｈ，ｓ），７．８４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５．２Ｈｚ），７．７３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ），７．５６（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ），７．４６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５．２Ｈｚ），６．８８（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ），６．４２（１Ｈ，ｂｒｓ），５．５１（１Ｈ，ｂｒｓ），５．３０（１Ｈ，ｔｍ，Ｊ＝７．１Ｈｚ），３．４８（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．１Ｈｚ），１．８４（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．５Ｈｚ），１．７７（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．５Ｈｚ）．
　13Ｃ－ＮＭＲ（δｐｐｍ，ＣＤＣｌ3）：１９２．２（ｓ），１６３．９（ｓ），１６１．５（ｓ），１５８．０（ｓ），１４４．０（ｄ），１３５．９（ｓ），１３０．５（ｄ）×２，１２９．２（ｄ），１２７．７（ｓ），１２１．１（ｄ），１１８．１（ｄ），１１６．０（ｄ）×２，１１４．１（ｓ），１１４．０（ｓ），１０７．７（ｄ），２５．８（ｑ），２１．８（ｔ），１７．９（ｑ）．
＜４’－Ｏ－ゲラニルナリンゲニン＞
　４’－Ｏ－ゲラニルナリンゲニンは下式（６）で表される。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000009
　1Ｈ－ＮＭＲおよび13Ｃ－ＮＭＲのスペクトルデータは以下のとおりである。
　1Ｈ－ＮＭＲ（δｐｐｍ，ＣＤＣｌ3）：１２．０４（１Ｈ，ｓ），７．３６（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ），６．９６（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ），６．２４（１Ｈ，ｂｒｓ），６．００（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ），５．９７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ），５．４９（１Ｈ，ｔｍ，Ｊ＝６．６Ｈｚ），５．３６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１３．０，３．１Ｈｚ），５．０９（１Ｈ，ｔｍ，Ｊ＝６．９Ｈｚ），４．５６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ），３．１０（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１７．２，１３．０Ｈｚ），２．７８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１７．２，３．１Ｈｚ），２．０６－２．１６（２Ｈ，ｍ），１．７４（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．４Ｈｚ），１．６８（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．４Ｈｚ），１．６０（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．４Ｈｚ）．
　13Ｃ－ＮＭＲ（δｐｐｍ，ＣＤＣｌ3）：１９６．２（ｓ），１６４．７（ｓ），１６４．３（ｓ），１６３．３（ｓ），１５９．３（ｓ），１４１．６（ｓ），１３１．８（ｓ），１３０．１（ｓ），１２７．７（ｄ）×２，１２３．７（ｄ），１１９．１（ｄ），１１５．０（ｄ）×２，１０３．１（ｓ），９６．７（ｄ），９５．５（ｄ），７９．０（ｄ），６５．０（ｔ），４３．０（ｔ），３９．５（ｔ），２６．３（ｔ），２５．７（ｑ），１７．７（ｑ），１６．７（ｑ）．
＜プロストラトールＦ＞
　プロストラトールＦは下式（７）で表される。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000010
　1Ｈ－ＮＭＲおよび13Ｃ－ＮＭＲのスペクトルデータは以下のとおりである。
　1Ｈ－ＮＭＲ（δｐｐｍ，ＣＤＣｌ3）：７．４５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ），７．３１（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ），６．９０（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ），６．７９（１Ｈ，ｂｒｓ），６．５６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ），６．３８（１Ｈ，ｂｒｓ），５．３９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１２．９，２．９Ｈｚ），５．２４（１Ｈ，ｔｍ，Ｊ＝７．０Ｈｚ），５．０４（１Ｈ，ｔｍ，Ｊ＝６．９Ｈｚ），３．４２（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ），３．０２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１７．０，１２．９Ｈｚ），２．８３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１７．０，２．９Ｈｚ），２．０７（１Ｈ，ｍ），２．０１（１Ｈ，ｍ），１．７１（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．２Ｈｚ），１．６５（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．２Ｈｚ），１．５７（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．２Ｈｚ）．
　13Ｃ－ＮＭＲ（δｐｐｍ，ＣＤＣｌ3）：１９２．７（ｓ），１６２．１（ｓ），１６１．１（ｓ），１５６．２（ｓ），１３８．７（ｓ），１３１．９（ｓ），１３０．８（ｓ），１２７．７（ｄ）×２，１２６．５（ｄ），１２３．８（ｄ），１２０．９（ｄ），１１５．６（ｄ）×２，１１４．８（ｓ），１１４．６（ｓ），１１０．８（ｄ），７９．３（ｄ），４３．７（ｔ），３９．７（ｔ），２６．４（ｄ），２５．６（ｑ），２２．２（ｔ），１７．７（ｑ），１６．２（ｑ）．
〔ＡＣｈＥ阻害活性の測定〕
　上記で得た４－ヒドロキシデリシン、キサントアンゲロール、キサントアンゲロールＦ、イソババカルコン、４’－Ｏ－ゲラニルナリンゲニン、プロストラトールＦを試料として、各試料のＡＣｈＥ阻害活性を測定した。陰性対照試料はジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、陽性対照試料はガランタミン臭化水素酸塩とした。また、その他の参考データとして、ナリンゲニン（ＬＫＴ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．より購入）及びゲラニオール（和光純薬工業株式会社より購入）についてもＡＣｈＥ阻害活性を測定した。
　具体的な測定方法を以下に示す。
　試料をジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶解した。反応のための緩衝液は、５０ｍＭトリス塩酸緩衝液（ｐＨ＝７．８）を用いた。
　９６穴マイクロプレートに緩衝液１８０μｌを入れ、そこに試料５μｌを加えた。さらに、緩衝液で調整した電気ウナギ由来アセチルコリンエステラーゼ（２ｕｎｉｔｓ／ｍｌ）を１０μｌと、ＤＭＳＯに溶解した酢酸１－ナフチル（１８ｍＭ）を１０μｌ加え、３７℃で１時間反応させた。
　反応後、５％ドデシル硫酸ナトリウム水溶液２５μｌを加え反応を停止し、さらに２ｍＭのＦａｓｔ　Ｂｌｕｅ　Ｂ水溶液２５μｌを加え、５９５ｎｍの吸光度をマイクロプレートリーダーにて測定した。
　阻害率（％）は、以下の式で求めた。
　阻害率（％）＝１００－｛［（試料あり・酵素ありの吸光度）－（試料あり・酵素なしの吸光度）］／［（陰性対照試料・酵素ありの吸光度）－（陰性対照試料あり・酵素なしの吸光度）］×１００｝
＜結果及び考察＞
　上記測定の結果を下表１に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000011
　上記試験結果を見ると、２’，４－ジヒドロカルコン骨格が阻害活性に大きく影響を与えていることが分かる。
　もっとも、イソババカルコンの結果を見ると、２’，４－ジヒドロカルコン骨格を有するだけで十分な阻害活性が得られるわけではないことが分かる。
　すなわち、４－ヒドロキシデリシン、キサントアンゲロール、キサントアンゲロールＦの結果にみるように、２’，４－ジヒドロカルコン骨格を有するとともに、３’位のゲラニル基を有するか、４’位のメトキシ基を有することで効果が増強される。そして、特に両要素を同時に満たすことで、その効果が一段と増強される。
　３’位のゲラニル基および４’位のメトキシ基を有し、最も高い阻害活性を示すキサントアンゲロールＦは、臨床応用されているガランタミン臭化水素酸塩に匹敵するほど阻害効果が強かった。

Claims (4)

  1. 　２’，４－ジヒドロキシカルコン骨格を基本骨格とし、当該基本骨格における３’位にゲラニル基を有するか、及び／又は、４’位に低級アルコキシ基を有するカルコン類を有効成分とする、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤。
  2. 　４－ヒドロキシデリシン、キサントアンゲロール及びキサントアンゲロールＦからなる群より選ばれる少なくとも１種のカルコン類を有効成分とする、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤。
  3. 　キサントアンゲロールＦを有効成分とする、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤。
  4. 　アシタバ中のカルコン類を有効成分とする、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤。
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