WO2019225981A1 - 한약 추출물을 유효성분으로 포함하는 수면 장애의 예방, 개선 또는 치료용 조성물 - Google Patents

한약 추출물을 유효성분으로 포함하는 수면 장애의 예방, 개선 또는 치료용 조성물 Download PDF

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sleep
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이미영
김유리
박보경
김영화
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한국 한의학 연구원
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Definitions

  • the present invention relates to a composition for the prevention, improvement or treatment of sleep disorders, including herbal extracts as an active ingredient.
  • Sleep is a state in which the conscious activity is closed with eyes closed and is an important process of replenishing the energy we used during the day and restoring the fatigue caused by physical activity. Sleep is not only a time to recover energy and fatigue, but also a time when the growth hormone is essential for human growth.
  • the brain In our body, the brain is responsible for all the physiological functions that maintain life. The brain needs rest in order to balance proper activity. The number of patients diagnosed and treated for sleep problems has increased in recent years and is expected to continue to increase in the past due to the exhausting and busy daily pace of modern life, increased prevalence of obesity, and aging population.
  • insomnia is a very common sleep disorder, which is defined as difficulty in sleeping, difficulty in sleeping, fast waking up, and poor sleep quality. Regardless of the degree of insomnia, 3 out of 10 adults suffer from sleep disorders, with higher rates reported among women and the elderly.
  • insomnia causes poor quality of life, increases the incidence of depression by more than 10 times, and sleep disorders caused by insomnia cause problems such as high blood pressure, blood sugar control problems, and obesity, and increase the prevalence of various diseases.
  • Increasing medical expenses, increasing the risk of accidents during the week, and reducing the ability to perform work at work also have an impact on the social aspects of patients.
  • the root of the root of the name is the name of the hibiscus ( Hibiscus syriacus L.), the name of the root of the roots of the neck ( ⁇ ⁇ , ⁇ ⁇ ⁇ ), mokgieun ( ⁇ ⁇ ), mokgija ( ⁇ ⁇ ).
  • Mugunghwa is a deciduous shrub belonging to the Malvaceae family and is planted in Pyeongnam and Gangwon-do in Korea. It is prescribed. According to the consent record, 'weakness is mild, non-toxic, long winds and bloodstains, diarrhea after diarrhea severely drunk when you drink is effective, and sleep well.
  • Chinese Patent Publication No. 106360532 discloses an insomnia effect of a chrysanthemum, including a rose of sharon and petals, and a complex containing 16 kinds of medicinal herbs in addition to the root of the skin.
  • a Chinese Patent No. 105194490 which is disclosed to have an effect of treating insomnia, but it has not been disclosed as a composition for the prevention, improvement or treatment of sleep disorders including the herbal extract of the present invention as an active ingredient.
  • the present invention is derived from the above requirements, the present invention provides a composition for the prevention, improvement or treatment of sleep disorders comprising the herbal extract as an active ingredient, the root extract of the Chinese medicine extract as an active ingredient by stress
  • the present invention has been shown to have an effect of improving sleep, lowering the amount of corticosteroids in the blood, increasing the content of serotonin, and increasing the expression of GABAR A ⁇ 1 in the cerebral cortex. Was completed.
  • the present invention provides a health functional food composition for the prevention or improvement of sleep disorders, including the extract of Hibiscus syriacus as an active ingredient.
  • the present invention provides a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of sleep disorders, including the extract of Hibiscus syriacus as an active ingredient.
  • the present invention relates to a composition for preventing, improving or treating sleep disorders comprising herbal extracts as an active ingredient, as well as reducing wake during sleep in animal models of sleep disorders caused by stress, as well as REM (rapid eye movement; REM).
  • REM rapid eye movement
  • NonREM has an effect of improving sleep disorders, lowering the amount of corticosteroids in the blood increased by stress, and increasing the content of serotonin.
  • the expression of reduced GABAR A ⁇ 1 in the cerebral cortex by stress has a significant increase in the group administered the root extract.
  • 1 is a chart showing the progress of the sleep disorder experiment due to stress.
  • FIG. 2 shows 5 days of 50, 100, and 200 mg / kg of myocardium extract and 200 mg / kg St. John's wort, which is a positive control (PC) in SD rats induced by sleep shock.
  • PC positive control
  • FIG. 3 shows 5 days of 50, 100 and 200 mg / kg of myocardium extract and 200 mg / kg St. John's wort, which is a positive control (PC) in SD rats induced by sleep shock. It is the result of measuring the rapid eye movement sleep (REM) sleep time by administering during the administration and measuring the EEG. ** means that the REM time of the stress group (Stress) compared to the normal group (Nor) statistically significantly means that p ⁇ 0.01, # # compared to the stress group (Stress) to the extract of the myopia root of the present invention There was a statistically significant increase in REM sleep time in the experimental group administered, p ⁇ 0.05.
  • FIG. 4 shows 5 days of 50, 100 and 200 mg / kg of myocardium extract and 200 mg / kg of St. John's wort, which is a positive control (PC), in SD rats induced by sleep shock. It is a result of measuring the non-Rapid eye movement sleep (Non-Rapid eye movement sleep) time by administering while the EEG was measured. * Indicates that the nonREM time of the stress group (Stress) was statistically significant compared to the normal group (Nor), which means p ⁇ 0.05.
  • FIG. 5 shows 50, 100, and 200 mg / kg of myocardium extract and 200 mg / kg St. John's wort, which is a positive control (PC), in SD rats in which sleep disorders were induced by plantar electric shock stress. Is measured by enzyme immunoassay.
  • **** is the statistically significant increase in the content of corticosterone in the stress group (normal) compared to the normal group (p ⁇ 0.0001, meaning that # #, # # # # in the stress group Compared with the positive control group or the myocardium extract administration group of the present invention, the content of corticosterone in the blood was statistically significantly decreased, ## is p ⁇ 0.01, and ### is p ⁇ 0.001.
  • FIG. 6 shows 5 days of 50, 100, and 200 mg / kg of myocardium extract and 200 mg / kg St. John's wort, a positive control (PC), in SD rats induced by sleep shock. And the serotonin content in the blood was measured by enzyme immunoassay. # Is a statistically significant increase in the serotonin content in the blood of the group administered with the myocardium extract of the present invention compared to the stress group, p ⁇ 0.05.
  • FIG. 7 shows 50, 100, and 200 mg / kg of myocardium extract and 200 mg / kg St. John's wort, a positive control group, in SD rats induced by sleep shock.
  • the expression level of GABAR A ⁇ 1 in the cerebral cortex was measured by protein detection assay. ## is a statistically significant increase in the expression level of GABAR A ⁇ 1 in the cerebral cortex of the group treated with the myocardium extract of the present invention compared to the stress group, p ⁇ 0.01.
  • the present invention relates to a health functional food composition for the prevention or improvement of sleep disorders comprising the extract of Hibiscus syriacus as an active ingredient.
  • the extraction solvent of the root of the root extract is preferably at least one selected from water, C 1 ⁇ C 4 lower alcohol, acetone, ethyl acetate, butyl acetate, 1,3-butylene glycol and hexane, more preferably water, C Although lower alcohols of 1 to C 4 or mixtures thereof are used, still more preferably ethanol, but not always limited thereto.
  • the extraction method conventional methods in the art such as filtration, hot water extraction, dipping extraction, reflux cooling extraction, and ultrasonic extraction may be used.
  • the extraction solvent is preferably extracted by adding 2 to 40 times the amount of dried root.
  • the extraction temperature is preferably 20 ⁇ 100 °C, most preferably 80 ⁇ 95 °C but not limited thereto.
  • the extraction time is preferably 0.5 to 10 hours, more preferably 1 to 4 hours, and most preferably 3 hours, but not always limited thereto.
  • Concentration is preferably reduced pressure concentration using a vacuum vacuum concentrator or vacuum rotary evaporator, but is not limited thereto.
  • the drying is preferably reduced pressure drying, vacuum drying, boiling drying, spray drying or freeze drying, but is not limited thereto.
  • the root extract may be extracted using an outpost or a specific part of the root (neck root, root, root), preferably extract the flower of the root. But it is not limited to this.
  • the sleep disorder is preferably insomnia caused by stress, but is not limited thereto.
  • the dietary supplement composition containing the root extract of the present invention as an active ingredient may be added to food as it is or used with other foods or food ingredients, and may be appropriately used according to a conventional method.
  • the mixing amount of the active ingredient can be suitably determined according to the purpose of use (prevention or improvement).
  • the amount of the root extract contained in the dietary supplement can be added to 0.1 to 90 parts by weight of the total dietary supplement weight.
  • the amount may be below the above range, and the active ingredient may be used in an amount above the above range because there is no problem in terms of safety. .
  • nutraceutical composition of the present invention When the nutraceutical composition of the present invention is used as a beverage, there are no special limitations on the other ingredients except for containing the above-mentioned root extract of the active ingredient as an essential ingredient in the indicated ratio, and various flavors or natural ingredients such as ordinary drinks Carbohydrates and the like may be included as additional components.
  • natural carbohydrates include monosaccharides such as glucose, fructose and the like; Disaccharides such as maltose, sucrose and the like; And conventional sugars such as polysaccharides such as dextrin, cyclodextrin, and sugar alcohols such as xylitol, sorbitol, and erythritol.
  • natural flavoring agents tauumatin, stevia extract (e.g., Rebaudioside A, glycyrrhizin, etc.) and synthetic flavoring agents (saccharin, aspartame, etc.) can be advantageously used. have.
  • the health functional food composition of the present invention in addition to the active ingredient, in addition to nutritional agents, vitamins, electrolytes, flavors, coloring agents, enhancers, pectic acid and salts thereof, alkonic acid and salts thereof, organic acids, protective colloid thickeners, pH regulators, At least one selected from stabilizers, preservatives, glycerin, alcohols and carbonation agents used in carbonated beverages may be further added.
  • the health functional food composition of the present invention may contain a flesh for the production of natural fruit juices and vegetable drinks. The pulp may be used independently or in combination.
  • the ratio of the various additives is not critical, but is generally selected in the range of 0.1 to 20 parts by weight per 100 parts by weight of the root of the root of the present invention.
  • the dietary supplement composition of the present invention is preferably made of any one of powder, granules, pills, tablets, capsules, candy, syrups and beverages, but is not limited thereto.
  • the present invention provides a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of sleep disorders, including the extract of Hibiscus syriacus as an active ingredient.
  • the pharmaceutical composition of the present invention may further comprise a carrier, excipient or diluent.
  • the pharmaceutical compositions of the present invention may be in various oral or parenteral formulations. When formulating the composition, it may be prepared using conventional diluents or excipients such as fillers, extenders, binders, wetting agents, disintegrating agents, surfactants, but is not limited thereto.
  • Solid preparations for oral administration include tablets, pills, powders, granules, capsules, and the like, which may comprise at least one excipient such as starch, calcium carbonate, sucrose or lactose (at least one compound). lactose) and gelatin. In addition to simple excipients, lubricants such as magnesium stearate, talc and the like are also used.
  • Liquid preparations for oral administration include suspensions, solutions, emulsions or syrups, and include various excipients such as wetting agents, sweeteners, fragrances or preservatives, in addition to the commonly used simple diluents such as water and liquid paraffin. Can be.
  • Formulations for parenteral administration include sterile aqueous solutions, non-aqueous solvents, suspensions, emulsions, lyophilized preparations or suppositories.
  • non-aqueous solvent and the suspension solvent propylene glycol, polyethylene glycol, vegetable oil such as olive oil, injectable ester such as ethyl oleate, and the like can be used.
  • injectable ester such as ethyl oleate, and the like
  • suppositories witepsol, macrogol, tween 61, cacao butter, laurin butter, glycerol, gelatin, and the like may be used.
  • the pharmaceutical composition of the present invention may be administered orally or parenterally, and it is preferable to select externally or intraperitoneally, rectally, intravenously, intramuscularly, subcutaneously, intradural dural or cerebrovascular injection methods for parenteral administration. I never do that.
  • the pharmaceutical composition of the present invention is administered in a pharmaceutically effective amount.
  • the pharmaceutically effective amount means an amount sufficient to treat the disease at a reasonable benefit / risk ratio applicable to the medical treatment, and the effective dose level refers to the type, severity, drug activity, and drug of the patient. Sensitivity, time of administration, route of administration and rate of release, duration of treatment, factors including concurrent use of drugs, and other factors well known in the medical arts.
  • the compositions of the present invention may be administered as individual therapeutic agents or in combination with other therapeutic agents, may be administered sequentially or simultaneously with conventional therapeutic agents, and may be single or multiple doses. Taking all of the above factors into consideration, it is important to administer an amount that can achieve the maximum effect with a minimum amount without side effects, which can be readily determined by one skilled in the art.
  • the dosage of the composition of the present invention varies depending on the weight, age, sex, health condition, diet, time of administration, administration method, excretion rate and severity of the disease of the patient, the daily dosage is based on the amount of the root extract 0.01 to 1000mg / kg, preferably 30 ⁇ 500mg / kg, more preferably 50 ⁇ 300mg / kg, can be administered 1 to 6 times a day, the route of administration, the severity of obesity, sex
  • the dosage may be increased or decreased depending on the weight, age, and the like, and the above dosage does not limit the scope of the present invention by any method.
  • the roots of the roots were placed in a 30% (v / v) ethanol solvent of 10-15 times and refluxed for 3 hours.
  • the extracted solvent was concentrated by a secondary cotton filter after the primary sieve filter and lyophilized to powder.
  • the drug was orally administered 0.1 ml, and the normal group and the stress control group were orally administered 0.1 ml of the solvent.
  • the experiment was divided into six groups (normal, control (stress), positive control (PC, St. John's wort), 50%, 100mg, 200mg / kg of the root extract) and 36 animals, 6 in each group.
  • the experiment proceeded as shown in FIG. 1, and the sole shock test was performed every day for a total of 5 days.
  • the rats were randomly shocked at the intensity of 1mA for 5 minutes (10 times every 3 seconds) to the soles of the feet.
  • the content of corticosterone was measured in serum isolated from each experimental animal.
  • 100 ⁇ l of ELISA buffer was added to non-specific binding wells of goat anti-mouse IgG coated microplate according to the manual of Corticosterone ELISA Kit (Cayman Chemical Company, Ann Arbor, MI, USA), and 50 to B 0 well.
  • ⁇ l of ELISA buffer was added.
  • 50 ⁇ l of each prepared sample was added to the standard and sample wells, and 50 ⁇ l of the diluted corticosteroid AChE tracer was injected into all wells except the blank wells and the total activity wells.
  • serotonin was measured in serum isolated from each experimental animal.
  • 150 ⁇ l of non-specific binding wells of goat anti-rabbit IgG microplate and 100 ⁇ l of B 0 well were added to the serotonin ELISA kit (Abcam Inc, Cambridge, UK).
  • 50 ⁇ l of serotonin Alkaline Phosphase Conjugate was injected except for total activity wells and blank wells. Except for blank wells, total active wells, and non-specific binding wells, B0 and standard, and serotonin antibodies were added to the experimental group.
  • the extracted cerebral cortical tissues were placed in 300 ⁇ l of lysis buffer, and then homogenized. After centrifugation at 13000 rpm for 20 minutes, lysates were obtained. The lysate was separated from the SDS-PAGE Gel, transferred to the membrane and blocked, and the GABAR A ⁇ 1 antibody was reacted at 4 ° C. for 16 hours. HRP-linked secondary antibody was reacted for 1 hour at room temperature and developed by LAS-3000 image analyzer (Fuji Photo Film Co., Tokyo, Japan).
  • results were expressed as mean ⁇ standard deviation, and statistical comparison between the experimental groups was carried out by one-way measures analysis of variance (ANONA) through Tukey honestly Significant Difference (HSD), and p ⁇ 0.05 Considered significant.
  • ANONA one-way measures analysis of variance
  • HSD Tukey honestly Significant Difference
  • Example 1 SD causing sleep disorder caused by stress In rats Determine the Effect of Root Extract on Wake Time During Sleep
  • the normal group and the stress control group that were not stressed by the oral administration method according to the above test method were used.
  • Solvent was administered, and 200 mg / kg St. John's wort extract and the root extract extract group of the present invention was administered 50, 100, 200mg / kg of the root extract.
  • SD rats were applied to the soles of the rats except the normal group, causing stress disturbance due to stress, and the wake time of the rats was measured.
  • SD rats were applied to the soles of the rats, except for the normal group, to induce sleep disturbance due to stress, and the REM time of the rats was measured.
  • REM time during sleep was statistically significantly reduced in the stress control group compared to the normal group, and the extract of the root and St.
  • the John's wort group was increased compared to the stress control group, and the 100 mg / kg root extract group was statistically significant.
  • SD rats were applied to the soles of the rats except the normal group to induce sleep disturbances due to stress, and the rat NonREM time was measured.
  • GABAR GABAAR
  • the rat cerebral cortex was examined during 5 days of sample administration and post-stress necropsy. After recovery and centrifugation with the buffer solution, the expression level of GABAR A ⁇ 1 was measured by protein detection assay in the lysate.

Abstract

본 발명은 한약 추출물을 유효성분으로 포함하는 수면 장애의 예방, 개선 또는 치료용 조성물에 관한 것으로, 상세하게는 목근 추출물을 유효성분으로 포함하는 수면 장애의 예방, 개선 또는 치료용 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 목근 추출물은 스트레스에 의한 수면 시간을 개선하는 효과가 있으며, 혈액 내 스트레스에 의해 증가된 혈액 내 코르티코스테론의 함량을 낮추며, 세로토닌의 함량은 증가시키는 효과가 있다. 또한, 스트레스에 의해 대뇌피질에서의 감소된 GABAR A α1의 발현이 목근 추출물을 투여한 군에서 유의하게 증가하는 효과가 있다. 따라서 목근 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물은 수면장애의 예방, 개선 또는 치료용 건강기능식품 조성물 또는 약학 조성물로 유용하게 사용할 수 있다.

Description

한약 추출물을 유효성분으로 포함하는 수면 장애의 예방, 개선 또는 치료용 조성물
본 발명은 한약 추출물을 유효성분으로 포함하는 수면 장애의 예방, 개선 또는 치료용 조성물에 관한 것이다.
수면이란 눈이 감긴 채 의식 활동이 쉬는 상태를 말하며 우리가 낮 동안에 활동하느라 사용한 에너지를 보충하고 신체활동으로 인해 쌓인 피로를 회복하는 중요한 과정이다. 수면은 에너지와 피로 회복을 하는 시간일 뿐 아니라 사람의 성장에 꼭 필요한 성장호르몬이 가장 많이 분비되는 시간이다.
우리 몸에서 뇌는 생명 유지를 위한 모든 생리적 기능을 총괄하는 곳으로 이 뇌가 적절한 활동의 균형을 유지하기 위해서는 휴식이 필요하며 이러한 휴식은 대부분 수면 시간에 이루어진다. 현대 생활의 소모적이고 바쁜 일상 속도, 비만 유병률의 증가, 인구의 고령화 등으로 수면 문제로 진단받고 치료받는 환자의 숫자는 최근 수년간 증가해왔으며 향후에도 지속적으로 증가할 것으로 예상된다.
여러가지 수면장애 중 불면증은 매우 흔한 수면장애로 수면의 어려움을 호소하는 증상으로 잠드는 것이 어렵거나, 잠을 유지하는 것의 어려움, 빨리 깨는 것, 수면의 질이 좋지 않은 것으로 정의되고 있다. 불면증의 정도와 상관없이 성인 10명 중 3명이 수면장애에 시달리고 있으며, 여성이나 노인에서는 그 비율이 더 높은 것으로 보고된 바 있다.
현대인의 수면시간이 크게 줄어든 이유는 장래에 대한 불안, 우울증, 불안장애, 스트레스와 같은 심리적 이유에 의한 정신질환 증가, 직업과 사회적 다변화에 따른 주야간 교대 근무, 그리고 바르지 못한 생활습관 등 다양한 원인에 기인한다. 즉, 사회가 복잡해짐에 따라 할 일이 많아지고 스트레스도 늘어나면서 만성적 수면부족이 생겨난 것이다. 또한, 커피 등 카페인이 함유된 음료를 더 많이 섭취하는 것도 이유 중 하나로 꼽히고 있다. 일시적인 스트레스, 수면습관의 변화로 인한 불규칙한 수면습관 등으로 인하여 일시적인 급성불면증이 쉽게 발생하게 되며, 이러한 급성불면증은 규칙적인 수면습관을 유지하고, 불면증을 유발한 스트레스나 원인인자를 제거하게 되면 정상적인 수면습관으로 돌아오게 된다. 하지만, 잘못된 수면습관을 유지하거나 왜곡된 불면증에 대한 대처는 매일 잠을 못자는 만성불면증을 일으키게 된다. 만성불면증상은 삶의 질을 떨어뜨리고, 우울증의 발생을 10배 이상 증가시키며, 또한, 불면증으로 인한 수면장애는 고혈압이나 혈당 조절 문제, 비만 등의 문제를 야기해 각종 질병의 유병률을 높일 뿐만 아니라, 의료비 지출의 증가, 주간의 사고 위험성 증가, 직장에서의 업무수행능력 저하 등 환자의 사회적인 부분에서도 영향을 미치고 있다.
한편, 목근은 무궁화( Hibiscus syriacus L.)의 이명으로, 목근피(木槿皮), 목근화(木槿花), 목근근(木槿根), 목근자(木槿子)를 생약명으로 사용하고 있다. 무궁화는 아욱과(Malvaceae)에 속한 낙엽관목으로서 대한민국에서는 평남 및 강원도 이남에서 재식하고 있으며, 대한민국 약전외 한약(생약)규격집에서는 무궁화의 줄기껍질 및 뿌리껍질을 목근피(木槿皮. Hibisci Cortex)'로 규정하고 있다. 동의보감의 기록에 의하면, '약성은 순하고, 독이 없으며 장풍과 사혈을 멎게 하고 설사한 후 갈증이 심할 때 달여 마시면 효과가 있고, 잠을 잘 자게 한다. 꽃은 약성이 차고 독이 없으며, 적 이질, 백 이질을 고치고 장풍, 사혈이 있을 때 볶아서 먹거나 또는 차로 달여서 먹는다고 기재되어 있으며, 본초강목에는 부인들의 적 대하증, 백 대하증 치료에 종기의 통증을 멎게 하고, 옴 치료제로 사용하고 달인 물로 눈을 씻으면 눈이 맑아지고, 혈액순환을 돕는 것으로 기재되어 있다.
현재까지 알려진 목근에 대한 수면장애 관련 기술로는, 무궁화 꽃잎, 및 무궁화 꽃즙을 포함하는 국화장의 불면증 해소 효과를 개시하고 있는 중국공개특허 제106360532호가 있고, 목근피 외에 16종의 한약재를 포함하는 복합물이 불면증 치료효과가 있다고 개시되어 있는 중국등록특허 105194490호가 있으나, 아직까지는 본 발명의 한약 추출물을 유효성분으로 포함하는 수면 장애의 예방, 개선 또는 치료용 조성물로 개시된 바 없다.
본 발명은 상기와 같은 요구에 의해 도출된 것으로서, 본 발명은 한약 추출물을 유효성분으로 포함하는 수면 장애의 예방, 개선 또는 치료용 조성물을 제공하고, 유효성분인 한약재 추출물인 목근 추출물이 스트레스에 의해 저하된 수면을 개선하는 효과가 있으며, 혈액 내 코르티코스테론의 함량을 낮추고, 세로토닌의 함량을 증가시키는 효과가 있으며, 대뇌피질에서 GABAR A α1의 발현을 증가시키는 효과가 있다는 것을 확인함으로써, 본 발명을 완성하였다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 목근( Hibiscus syriacus) 추출물을 유효성분으로 포함하는 수면장애의 예방 또는 개선용 건강기능성식품 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 목근( Hibiscus syriacus) 추출물을 유효성분으로 포함하는 수면장애의 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.
본 발명은 한약추출물을 유효성분으로 포함하는 수면 장애 예방, 개선 또는 치료용 조성물에 관한 것으로, 스트레스에 의한 수면장애 동물모델에서 수면 중 각성(wake)를 감소시킬 뿐만 아니라 REM(rapid eye movement; REM) 및 NonREM 수면을 증가시켜 수면장애를 개선하는 효과가 있고, 스트레스에 의해 증가된 혈액 내 코르티코스테론의 함량을 낮추며, 세로토닌의 함량은 증가시키는 효과가 있다. 또한, 스트레스에 의해 대뇌피질에서의 감소된 GABAR A α1의 발현이 목근 추출물을 투여한 군에서 유의하게 증가하는 효과가 있다.
도 1은 스트레스에 의한 수면장애 실험의 진행과정을 도표로 나타낸 것이다.
도 2는 발바닥 전기충격 스트레스에 의해 수면장애가 유발된 SD 랫트에게 50, 100 및 200mg/kg의 목근화 추출물 및 양성대조군(PC)인 200mg/kg의 세인트존스워트(St. John's wort)를 5일 동안 투여하고 EEG를 측정하여 각성(wake) 시간을 측정한 결과이다. ***은 정상군(Nor)에 비해 스트레스군(Stress)의 각성(wake) 시간이 통계적으로 유의미하게 증가하였다는 것으로 p<0.001임을 의미하고, #는 스트레스 군에 비해 본 발명의 목근화 추출물을 투여한 실험군에서 유의미하게 각성 시간이 감소하였다는 것으로, p<0.05이다.
도 3은 발바닥 전기충격 스트레스에 의해 수면장애가 유발된 SD 랫트에게 50, 100 및 200mg/kg의 목근화 추출물 및 양성대조군(PC)인 200mg/kg의 세인트존스워트(St. John's wort)를 5일 동안 투여하고 EEG를 측정하여 REM(Rapid eye movement sleep) 수면 시간을 측정한 결과이다. **은 정상군(Nor)에 비해 스트레스군(Stress)의 REM 시간이 통계적으로 유의미하게 감소하였다는 것으로 p<0.01임을 의미하고, #는 스트레스 군(Stress)에 비해 본 발명의 목근화 추출물을 투여한 실험군에서 유의미하게 REM 수면 시간이 통계적으로 유의미하게 증가하였다는 것으로, p<0.05이다.
도 4는 발바닥 전기충격 스트레스에 의해 수면장애가 유발된 SD 랫트에게 50, 100 및 200mg/kg의 목근화 추출물 및 양성대조군(PC)인 200mg/kg의 세인트존스워트(St. John's wort)를 5일 동안 투여하고 EEG를 측정하여 NonREM(Non-Rapid eye movement sleep) 시간을 측정한 결과이다. *은 정상군(Nor)에 비해 스트레스군(Stress)의 nonREM 시간이 통계적으로 유의미하게 감소하였다는 것으로 p<0.05임을 의미한다.
도 5는 발바닥 전기충격 스트레스에 의해 수면장애가 유발된 SD 랫트에게 50, 100 및 200mg/kg의 목근화 추출물 및 양성대조군(PC)인 200mg/kg의 세인트존스워트(St. John's wort)를 5일 동안 투여하고 혈액에서 코르티코스테론의 함량을 효소면역측정법으로 측정한 결과이다. ****은 정상군(normal)에 비해 스트레스군(stress)의 코르티코스테론의 함량이 통계적으로 유의미하게 증가하였다는 것으로, p<0.0001임을 의미하고, ##, ###는 스트레스 군에 비해 양성대조군 또는 본 발명의 목근화 추출물 투여군의 혈액 내 코르티코스테론의 함량이 통계적으로 유의미하게 감소하였다는 것으로, ##는 p<0.01이고, ###는 p<0.001이다.
도 6은 발바닥 전기충격 스트레스에 의해 수면장애가 유발된 SD 랫트에게 50, 100 및 200mg/kg의 목근화 추출물 및 양성대조군(PC)인 200mg/kg의 세인트존스워트(St. John's wort)를 5일 동안 투여하고 혈액에서 세로토닌(serotonin)의 함량을 효소면역측정법으로 측정한 결과이다. #는 스트레스 군에 비해 본 발명의 목근화 추출물 투여군의 혈액 내 세로토닌의 함량이 통계적으로 유의미하게 증가하였다는 것으로, p<0.05이다.
도 7은 발바닥 전기충격 스트레스에 의해 수면장애가 유발된 SD 랫트에게 50, 100 및 200mg/kg의 목근화 추출물 및 양성대조군(PC)인 200mg/kg의 세인트존스워트(St. John's wort)를 5일 동안 투여하고 대뇌피질에서 GABAR A α1의 발현량을 단백질 검출 실험법으로 측정한 결과이다. ##는 스트레스 군에 비해 본 발명의 목근화 추출물 투여군의 대뇌피질에서 GABAR A α1의 발현량이 통계적으로 유의미하게 증가하였다는 것으로, p<0.01이다.
본 발명은 목근( Hibiscus syriacus) 추출물을 유효성분으로 포함하는 수면장애의 예방 또는 개선용 건강기능성식품 조성물에 관한 것이다.
상기 목근 추출물의 추출용매는 물, C 1~C 4의 저급 알코올, 아세톤, 에틸아세테이트, 부틸아세테이트, 1,3-부틸렌 글리콜 및 헥산 중에서 선택된 하나 이상인 것이 바람직하며, 더 바람직하게는 물, C 1~C 4의 저급 알코올 또는 이들의 혼합물을 사용하는 것이지만, 더욱더 바람직하게는 에탄올이지만, 이에 한정하지 않는다.
본 발명의 목근 추출물의 제조 방법에 있어서, 추출 방법으로는 여과법, 열수 추출, 침지 추출, 환류 냉각 추출 및 초음파 추출 등 당업계의 통상적인 방법을 이용할 수 있다. 상기 추출용매는 건조된 목근 분량의 2~40배 첨가하여 추출하는 것이 바람직하다. 추출온도는 20~100℃인 것이 바람직하며, 80 내지 95℃인 것이 가장 바람직하나 이에 한정하지 않는다. 또한, 추출시간은 0.5~10시간인 것이 바람직하며, 1~4시간이 더욱 바람직하고, 3시간인 것이 가장 바람직하지만 이에 한정하는 것은 아니다. 농축은 진공감압농축기 또는 진공회전증발기를 이용하는 감압농축인 것이 바람직하나 이에 한정하지 않는다. 또한, 건조는 감압건조, 진공건조, 비등건조, 분무건조 또는 동결건조하는 것이 바람직하나 이에 한정하지 않는다.
상기 목근 추출물은 목근의 전초 또는 특정 부위(목근피, 목근근, 목근화 등)를 사용하여 추출할 수 있으나, 바람직하게는 목근의 꽃을 추출하는 것이 바람직하다. 하지만 이에 한정하는 것은 아니다.
상기 수면장애는 스트레스에 의한 불면증인 것이 바람직하지만 이에 한정하지 않는다.
본 발명의 목근 추출물을 유효성분으로 함유하는 건강기능식품 조성물은 식품에 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효성분의 혼합량은 그의 사용 목적(예방 또는 개선용)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 건강기능식품 중에 포함되는 상기 목근 추출물의 양은 전체 건강기능식품 중량의 0.1~90 중량부로 가할 수 있다. 하지만, 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있다.
본 발명의 건강기능식품 조성물이 음료로 사용되는 경우, 지시된 비율로 필수 성분으로서 상기 유효성분인 목근 추출물을 함유하는 것 외에는 다른 성분에는 특별한 제한이 없으며 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등; 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스 등; 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당, 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 상술한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제(타우마틴, 스테비아 추출물(예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진 등)) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다.
본 발명의 건강기능식품 조성물은 상기 유효성분 이외에 추가로, 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 증진제, 펙트산 및 그의 염, 알킨산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올 및 탄산음료에 사용되는 탄산화제 중에서 선택된 하나 이상을 더 첨가하여 함유할 수 있다. 이외에도 본 발명의 건강기능식품 조성물은 천연 과일 쥬스 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 상기 과육은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 상기 다양한 첨가제의 비율은 중요하진 않지만, 본 발명의 목근 추출물 100 중량부 당 0.1~20 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.
본 발명의 건강기능식품 조성물은 분말, 과립, 환, 정제, 캡슐, 캔디, 시럽 및 음료 중에서 선택된 어느 하나의 제형으로 제조되는 것이 바람직하지만 이에 한정하는 것은 아니다.
또한, 본 발명은 목근( Hibiscus syriacus) 추출물을 유효성분으로 포함하는 수면장애의 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.
본 발명의 약학 조성물은 담체, 부형제 또는 희석제를 추가로 포함할 수 있다. 본 발명의 약학 조성물은 경구 또는 비경구의 여러 가지 제형일 수 있다. 상기 조성물을 제제화할 경우에는 통상적으로 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제할 수 있으나 이에 한정하는 것은 아니다.
경구투여를 위한 고형 제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형 제제는 하나 이상의 화합물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 탄산칼슘, 수크로오스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한, 단순한 부형제 이외에 스테아린산 마그네슘, 탈크 등과 같은 윤활제들도 사용된다. 경구투여를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제 또는 시럽제 등이 해당되는데, 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제 또는 보존제 등이 포함될 수 있다.
비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁용제, 유제, 동결건조제제 또는 좌제 등이 포함된다. 비수성용제 및 현탁용제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제(base)로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세롤, 젤라틴 등이 사용될 수 있다.
본 발명의 약학 조성물은 경구 또는 비경구로 투여될 수 있으며, 비경구 투여시 피부 외용 또는 복강 내, 직장, 정맥, 근육, 피하, 자궁 내 경막 또는 뇌혈관 내 주사 방식을 선택하는 것이 바람직하지만 이에 제한하지 않는다.
본 발명의 약학 조성물은 약학적으로 유효한 양으로 투여한다. 본 발명에 있어서, 약학적으로 유효한 양은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 유효용량 수준은 환자의 질환의 종류, 중증도, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. 본 발명의 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고 종래의 치료제와는 순차적 또는 동시에 투여될 수 있으며, 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기한 요소들을 모두 고려하여 부작용없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 이는 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.
본 발명의 조성물의 투여량은 환자의 체중, 연령, 성별, 건강상태, 식이, 투여시간, 투여방법, 배설률 및 질환의 중증도에 따라 그 범위가 다양하며, 일일 투여량은 목근 추출물의 양을 기준으로 0.01~1000㎎/㎏이고, 바람직하게는 30~500㎎/㎏이고, 더욱 바람직하게는 50~300㎎/㎏이며, 하루 1~6회 투여될 수 있으나, 투여 경로, 비만의 중증도, 성별, 체중, 연령 등에 따라서 증감될 수 있으므로 상기 투여량이 어떠한 방법으로도 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.
이하, 실시예를 이용하여 본 발명을 더욱 상세하게 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로 본 발명의 범위가 이들에 의해 제한되지 않는다는 것은 당해 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어 자명한 것이다.
<실험 방법>
1. 시료의 제조 및 준비
목근 꽃잎을 10~15배의 30%(v/v) 에탄올 용매에 넣고 3시간 동안 환류추출을 실시하였다. 추출된 용매는 1차 거름망 필터 후 2차 솜 필터하여 농축하였으며 동결건조하여 분말화하였다.
2. 시료의 투여 및 실험군 분류
스트레스를 가하기 30분 전에 약물을 0.1㎖씩 경구투여하였고, 정상군(normal)과 스트레스 대조군(stress)은 용매 0.1㎖씩 경구투여하였다. 실험을 총 6그룹[normal, control(stress), positive control (PC, St. John's wort), 목근 추출물 50, 100, 200mg/kg]으로 나누어 진행하였고 각 그룹당 6마리씩 총 36마리로 진행하였다.
3. 뇌파 전위 기록술(electroencephalography, EEG)을 위한 수술
수컷 7주령의 랫트는 실험 당일까지 고형사료와 물을 적정하게 공급하고, 온도 23~25℃, 습도 45~60%, 조명 200~300LUX, 12 시간 명암 주기의 환경을 유지하며 1주 동안 적응시킨 후 실험에 사용하였다. 수술을 위해 7주령의 SD(Sprague Dawley) 랫트의 복강 내에 40mg/kg의 펜토바르비탈(pentobarbital)을 주사하여 마취하여 입체 고정기(stereotaxic instrument, Stoelting CO, USA)에 위치시키고 정수리점(bregma) 및 시옷점(lambda)이 수평이 되게 고정하였다. 두피 하에 출혈을 억제한 다음, 털을 깎고 두피 절개 및 골막(periosteum)을 제거하여 두개골(skull)을 노출시켰다. Paxinos & Watson의 해부도에 따라 드릴로 구멍을 내고 전극(electrode)을 경막에 닿도록 삽입하고 근전도 기록을 위해 목 근육에 두 가닥의 은선 전극을 삽입하였다. 뇌파 기록 전극 및 근전도 기록 전극이 연결된 핀들을 소뇌상부 두개골 위에 위치시키고 치과용 시멘트를 발라서 두개골 상부에 고정하였다. 수술이 끝난 랫트를 사육실의 사육 상자에 1마리씩 넣고 1주일 동안 회복시켰다.
4. 스트레스에 의한 수면장애 유발 모델
수술 회복 후, 실험은 도 1과 같이 진행되었고, 총 5일 동안 매일 발바닥 전기충격 스트레스 실험을 실시하였다. 수면장애를 유발하기 위해 랫트를 발바닥에 5분(3초당 10회씩) 동안 랜덤하게 1mA의 세기로 전기충격을 주었다.
5. 뇌파 전위 기록술(EEG) 측정
5일의 스트레스 후, 랫트에 경구투여로 각각의 약물을 투여하고 30분 후 빛이 차단된 아크릴로 제작된 실린더에서 EEG 레코딩(PM 8:00~AM 8:00)을 진행하였다. 각성(Wake) 시간 및 수면(REM, Non-REM) 시간은 동물수면 전문분석 프로그램인 SleepSign Ver. 3 소프트웨어(Kissei Comtec, Nagano, Japan)로 기록하였다.
6. 혈청 내 코르티코스테론(corticosterone) 측정
실험 종료 후 각 실험동물로부터 분리한 혈청에서 코르티코스테론의 함량을 측정하였다. 먼저 코르티코스테론 ELISA Kit(Cayman Chemical Company, Ann Arbor, MI, USA)의 매뉴얼에 따라 goat anti-mouse IgG coated microplate의 non-specific binding 웰에 100㎕의 ELISA 완충용액을 가하고, B 0 웰에는 50㎕의 ELISA 완충용액을 넣었다. 표준 및 시료 웰에 각각의 준비한 시료를 50㎕를 가하고, 블랭크 웰(Blank well), 총 활성 웰(Total activity well)을 제외한 모든 웰에 희석한 코르티코스테론 AChE Tracer를 50㎕를 주입하였다. Blank well, Total activity well, non-specific binding well를 제외한 웰에 희석한 50㎕의 코르티코스테론 ELISA 항 혈청을 첨가하였다. 4℃에서 overnight 반응한 후 5번의 세척과정을 거친 뒤, 희석한 200㎕의 Ellman's 시약을 각 웰에 반응시키고, Total activity well에는 5㎕의 Ellman's Reagent를 더해서 총량을 맞춰주었다. 90~120분 동안 orbital shaker를 이용하여 교반, 반응시킨 후 405nm의 파장에서 흡광도를 측정하였다.
7. 혈청 내 세로토닌 측정
실험 종료 후 각 실험동물로부터 분리한 혈청에서 세로토닌 양을 측정하였다. 먼저 세로토닌 ELISA kit (Abcam Inc, Cambridge, UK)의 메뉴얼대로 goat anti-rabbit IgG microplate의 non-specific binding well에 150㎕, B 0 well에 100㎕의 분석 버퍼를 넣고, 스탠다드와 샘플 웰에는 각각 100㎕를 넣은 후, 총 활성 웰(Total activity well)과 블랭크 웰을 제외하고, 세로토닌 Alkaline Phosphase Conjugate를 50㎕씩 주입하였다. 블랭크 웰, 총 활성 웰, 비특이적 결합 웰(non-specific binding well)을 제외하고 B0와 스탠다드, 실험군에는 세로토닌 항체를 넣어주었다. 상온에서 500rpm으로 2시간 교반하고 3번의 세척 후, 총 활성 웰에만 세로토닌 Alkaline Phosphase Conjugate을 20배 희석하여, 5㎕ 넣었다. 최종적으로 200㎕씩 pNpp 기질 용액을 넣고, 교반 없이 1시간 동안 상온에 반응시켰다. 50㎕의 정지 용액으로 발색반응을 중지시킨 후 반응을 종료하여 microplate reader로 405nm의 파장에서 흡광도를 측정하였다.
8. 웨스턴 블랏
적출한 대뇌피질 조직을 300㎕의 분해 완충용액(lysis buffer)에 넣고 조직파쇄(homogenization)한 후, 13000rpm으로 20분 동안 원심분리한 후 용해물을 얻었다. 이 용해물을 SDS-PAGE Gel에서 분리하고 멤브레인에 옮겨서 blocking한 후 GABAR A α1 항체를 16시간 동안 4℃에서 반응시켰다. HRP가 링크된 2차 항체를 1시간 동안 실온에서 반응시키고 LAS-3000 image analyzer (Fuji Photo Film Co., Tokyo, Japan)로 현상하여 분석하였다.
9. 통계처리
결과는 평균±표준편차(standard deviation)로 표기하였으며, 실험군 사이의 통계학적 비교는 Tukey honestly Significant Difference (HSD)을 통해 one-way measures analysis of variance (ANONA)를 시행하였으며, p < 0.05는 통계적으로 유의하다고 간주하였다.
실시예 1. 스트레스에 의한 수면장애가 유발된 SD 랫트에서 목근 추출물이 수면 중 Wake 시간에 미치는 효과 확인
SD 랫트에 스트레스(stress)를 가하여 수면장애를 유발시킨 SD 랫트에서 목근 추출물이 수면 중 Wake 시간에 미치는 영향을 확인하기 위하여, 상기 실험법에 따라 경구투여 방법으로 스트레스를 가하지 않은 정상군과 스트레스 대조군에는 용매를 투여하였고, 양성대조군에는 200mg/kg의 St. John's wort 추출물 및 본 발명의 목근 추출물 투여군에는 50, 100, 200mg/kg의 목근 추출물을 투여하였다.
5일 동안 각 그룹에 해당하는 물질을 경구 투여한 30분 후, 정상군을 제외한 SD 랫트에 발바닥 전기충격을 가하여 스트레스에 의한 수면장애를 유발하였으며, 랫트의 Wake 시간을 측정하였다.
그 결과 도 2에 나타난 바와 같이, 수면 중 Wake 시간은 정상군과 비교하여 스트레스 대조군에서 통계적으로 유의미하게 증가하는 것으로 나타났고, 목근 추출물과 St. John's wort를 투여한 군에서는 스트레스 대조군에 대비하여 감소하는 것으로 나타났으며, 100mg/kg의 목근 추출물을 투여한 군에서는 통계적으로 유의미하게 감소하였다.
실시예 2. 스트레스에 의한 수면장애가 유발된 SD 랫트에서 목근 추출물이 수면 중 REM 시간에 미치는 효과 확인
SD 랫트에 스트레스(stress)를 가하여 수면장애를 유발시킨 SD 랫트에서 목근 추출물이 수면 중 REM 시간에 미치는 영향을 확인하기 위하여, 상기 실험법에 따라 경구투여 방법으로 스트레스를 가하지 않은 정상군과 스트레스 대조군에는 용매를 투여하였고, 양성대조군에는 200mg/kg의 St. John's wort 추출물 및 본 발명의 목근 추출물 투여군에는 50, 100, 200mg/kg의 목근 추출물을 투여하였다.
5일 동안 각 그룹에 해당하는 물질을 경구 투여한 30분 후, 정상군을 제외한 SD 랫트에 발바닥 전기충격을 가하여 스트레스에 의한 수면장애를 유발하였으며, 랫트의 REM 시간을 측정하였다.
그 결과 도 3에 나타난 바와 같이, 수면 중 REM 시간은 정상군과 비교하여 스트레스 대조군에서 통계적으로 유의미하게 감소하는 것으로 나타났고, 목근 추출물과 St. John's wort를 투여한 군에서는 스트레스 대조군에 대비하여 증가하는 것으로 나타났으며, 100mg/kg의 목근 추출물을 투여한 군에서는 통계적으로 유의미하게 증가하였다.
실시예 3. 스트레스에 의한 수면장애가 유발된 SD 랫트에서 목근 추출물이 수면 중 NonREM 시간에 미치는 효과 확인
SD 랫트에 스트레스(stress)를 가하여 수면장애를 유발시킨 SD 랫트에서 목근 추출물이 수면 중 NonREM 시간에 미치는 영향을 확인하기 위하여, 상기 실험법에 따라 경구투여 방법으로 스트레스를 가하지 않은 정상군과 스트레스 대조군에는 용매를 투여하였고, 양성대조군에는 200mg/kg의 St. John's wort 추출물 및 본 발명의 목근 추출물 투여군에는 50, 100, 200mg/kg의 목근 추출물을 투여하였다.
5일 동안 각 그룹에 해당하는 물질을 경구 투여한 30분 후, 정상군을 제외한 SD 랫트에 발바닥 전기충격을 가하여 스트레스에 의한 수면장애를 유발하였으며, 랫트의 NonREM 시간을 측정하였다.
그 결과 도 4에 나타난 바와 같이, 수면 중 NonREM 시간은 정상군과 비교하여 스트레스 대조군에서 통계적으로 유의미하게 감소하는 것으로 나타났고, 목근 추출물과 St. John's wort를 투여한 군에서는 스트레스 대조군에 대비하여 증가하는 것으로 나타났다.
실시예 4. 수면장애가 유발된 SD 랫트에서 목근 추출물이 혈중 코르티코스 테론(corticosterone)에 미치는 효과
수면장애가 유발된 SD 랫트에서 목근 추출물이 혈액 내에서 코르티코스테론의 함량에 미치는 영향을 확인하기 위하여, 상기 실험방법에 따라 5일 동안의 시료투여 및 스트레스 후 부검 시 랫트의 혈액을 회수하여 원심분리한 후, 혈장(plasma)에서 효소면역측정법으로 코르티코스테론의 함량을 측정하였다
그 결과 도 5에 나타난 바와 같이, 코르티코스테론의 함량은 스트레스 대조군에 비교하여 목근 추출물을 투여한 군에서 유의미하게 감소하는 것으로 나타났다.
실시예 5. 수면장애가 유발된 SD 랫트에서 목근 추출물이 혈중 세로토닌(serotonin)에 미치는 효과
수면장애가 유발된 SD 랫트에서 목근 추출물이 혈액 내에서 세로토닌의 농도에 미치는 영향을 확인하기 위하여, 상기 실험방법에 따라 5일 동안의 시료투여 및 스트레스 후 부검 시 랫트의 혈액을 회수하여 원심분리한 후, 혈장에서 효소면역측정법으로 세로토닌의 함량을 측정하였다.
그 결과 도 6에 나타난 바와 같이, 세로토닌의 함량은 스트레스 대조군에 비교하여 목근 추출물을 투여한 군에서 유의미하게 증가하는 것으로 나타났다.
실시예 6. 수면장애가 유발된 SD 랫트에서 목근 추출물이 대뇌피질의 GABAR A α1 발현에 미치는 효과
수면장애가 유발된 SD 랫트에서 목근 추출물이 대뇌피질의 GABAR(GABA receptor) A α1 발현에 미치는 영향을 확인하기 위하여, 상기 실험방법에 따라 5일 동안의 시료투여 및 스트레스 후 부검 시 랫트의 대뇌피질을 회수하여 완충용액과 원심분리한 후, 용해물에서 단백질 검출 실험법으로 GABAR A α1의 발현 양을 측정하였다.
그 결과 도 7에 나타난 바와 같이, GABAR A α1의 발현은 스트레스 대조군에 비교하여 목근 추출물을 투여한 군에서 유의하게 증가하는 것으로 나타났다.

Claims (7)

  1. 목근( Hibiscus syriacus) 추출물을 유효성분으로 포함하는 수면장애의 예방 또는 개선용 건강기능성식품 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 상기 목근 추출물의 추출용매는 물, C 1~C 4의 저급 알코올 또는 이들의 혼합물인 것을 특징으로 하는 수면장애의 예방 또는 개선용 건강기능성식품 조성물.
  3. 제1항에 있어서, 상기 목근 추출물은 목근의 꽃 추출물인 것을 특징으로 하는 수면장애의 예방 또는 개선용 건강기능성식품 조성물.
  4. 제1항에 있어서, 상기 수면장애는 스트레스에 의한 불면증인 것을 특징으로 하는 수면 장애의 예방 또는 개선용 건강기능성식품 조성물.
  5. 제1항에 있어서, 상기 조성물은 분말, 과립, 환, 정제, 캡슐, 캔디, 시럽 및 음료 중에서 선택된 어느 하나의 제형으로 제조되는 것을 특징으로 하는 수면 장애의 예방 또는 개선용 건강기능성식품 조성물.
  6. 목근( Hibiscus syriacus) 추출물을 유효성분으로 포함하는 수면장애의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
  7. 제6항에 있어서, 상기 목근 추출물 이외에 약학적으로 허용 가능한 담체, 부형제 또는 희석제를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 수면장애의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
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Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20070002718A (ko) * 2005-06-30 2007-01-05 (주)아모레퍼시픽 천연 연화 꽃잎을 함유하는 화장료 조성물
US8454943B2 (en) * 2011-04-06 2013-06-04 Mary Kay Inc. Topical skin care formulations comprising plant extracts
CN105194490A (zh) 2015-09-08 2015-12-30 江锋 治疗失眠的中药制剂及制备方法
CN106360532A (zh) 2016-08-31 2017-02-01 安徽国丰农业科技发展有限公司 一种改善睡眠质量的菊花酱
KR20170096586A (ko) * 2016-02-16 2017-08-24 한국 한의학 연구원 한약재 추출물을 유효성분으로 함유하는 스트레스 또는 우울증의 예방, 개선 또는 치료용 조성물
JP2018158891A (ja) * 2017-03-22 2018-10-11 日光ケミカルズ株式会社 自律神経調整剤

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR101079120B1 (ko) * 2009-03-02 2011-11-07 전현철 무궁화꽃 차의 제조방법
KR101303713B1 (ko) * 2011-04-27 2013-09-04 한국식품연구원 백하수오, 구절초 또는 측백엽 추출물을 포함하는 수면 장애의 예방 또는 치료용 조성물

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20070002718A (ko) * 2005-06-30 2007-01-05 (주)아모레퍼시픽 천연 연화 꽃잎을 함유하는 화장료 조성물
US8454943B2 (en) * 2011-04-06 2013-06-04 Mary Kay Inc. Topical skin care formulations comprising plant extracts
CN105194490A (zh) 2015-09-08 2015-12-30 江锋 治疗失眠的中药制剂及制备方法
KR20170096586A (ko) * 2016-02-16 2017-08-24 한국 한의학 연구원 한약재 추출물을 유효성분으로 함유하는 스트레스 또는 우울증의 예방, 개선 또는 치료용 조성물
CN106360532A (zh) 2016-08-31 2017-02-01 安徽国丰农业科技发展有限公司 一种改善睡眠质量的菊花酱
JP2018158891A (ja) * 2017-03-22 2018-10-11 日光ケミカルズ株式会社 自律神経調整剤

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
VANZELLA, C. ET AL.: "Antidepressant-like effects of methanol extract of Hibiscus tiliaceus flowers in mice", BMC COMPLEMENTARY AND ALTERNATIVE MEDICINE, vol. 12, 2012, pages 1 - 6, XP021126598 *

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