KR101948931B1 - 천연 추출물을 포함하는 복부통증의 예방 또는 치료용 조성물 및 이의 제조방법 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 인삼 추출물, 백복령 추출물 및 진피 추출물을 유효성분으로 포함함으로써 연수에서 통증신호 전달 단백질의 발현을 억제하여서 복부통증을 예방 또는 치료하는데 뛰어난 효과가 있는 복부통증의 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것으로, 인삼 추출물, 백복령 추출물 및 진피 추출물을 유효성분으로 포함하는 것을 기술적 요지로 한다.
Description
본 발명은 천연 추출물을 포함하는 복부통증의 예방 또는 치료용 조성물 및 이의 제조방법에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 인삼 추출물, 백복령 추출물 및 진피 추출물을 유효성분으로 포함함으로써 연수에서 통증신호 전달 단백질의 발현을 억제하여서 복부통증을 예방 또는 치료하는데 뛰어난 효과가 있는 복부통증의 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것이다.
최근 들어 현대인들은 많은 만성적인 질병들로 고통 받고 있다. 특히, 현대인들은 과중한 스트레스와 식생활의 서구화 및 불규칙한 식생활로 많은 위장질병, 예를 들면 소화불량, 식욕부진, 구역, 구토, 복부창만, 동통, 장명설사, 발열, 두통, 어지럼증, 출혈 증상을 가지고 있다. 또한 이런 질병들이 만성화되고 있어서, 결국에는 사망에까지 이르게 하는 암 등을 유발시킬 수 있다는 것은 이미 알려진 사실들이다.
특히, 복부의 내장은 피부에 비하면 심한 통증을 일으키는 여러 자극에 민감하지 못하다. 그러나 염증, 허혈, 종양의 신경 침범 등의 여러 가지 이유로 복부의 통증이 발생할 수 있다. 복통은 말 그대로 복부의 통증을 말하며, 주로 소화기 질환에서 볼 수 있는 중요한 증세이다.
복부통증은 복부의 어떤 부위에서 근육수축 혹은 신경의 과다 흥분으로 인하여 발생하며 환자의 삶의 질을 현저하게 저하 시켜 통증유발과 함께 기능적으로 근육의 수축과 이완장애를 유발한다. 이 질환의 원인은 다양하며 심리적 요인으로 비롯하여 장과민 반응, 면역계의 활성화, 장내상재균등의 다양한 인자들이 복합적으로 작용하여 의학적 치료가 어려운 것으로 알려져 있다.
한편, 최근에 일반인들 사이에서 생약성분들에 대한 관심이 고조되고 있으며, 특히 천연재료를 이용한 건강식품에 많은 관심을 가지고 있다.
천연재료들 중 인삼은 오가피 나무과에 속하는 다년생 약초로서 각종 생리활성을 가지는 사포닌(Saponin)계 유도체 화합물이 주요 약효를 가지며, 한약처방에서는 건위소화약, 정장지사약, 진통진경약으로 되는 처방 등에 사용하며 약리작용으로는 혈당강하작용, 항암효과, 혈청단백합성 촉진작용, 항체생산 촉진작용, 중추 흥분 작용, 항피로작용 등이 있다.
백복령은 복령(Poria cocos WOLF.)의 균핵을 말린 것이고, 구멍장이 버섯과에 속하는 버섯의 일종으로 소나무 땅속뿌리에서 자생하여 예로부터 한방약제로 널리 이용되고 있으며, 비장을 보호하고 정신을 안정시켜주는 효능이 있다.
진피는 운향과(Rutaceae)에 속하는 귤의 성숙한 과실의 과피를 말하며, 이뇨작용, 해열작용, 진통작용, 항균작용, 비강 강화작용 등의 효능이 있다.
이에, 본 발명자는 화학적 합성 의약보다 인체에 부작용이 적고, 용이하게 제조 및 섭취할 수 있는 천연물 유래의 유효성분을 포함하면서 복부통증 예방 또는 치료효과를 나타낼 수 있는 조성물을 개발하고자 노력한 끝에, 인삼 추출물, 백복령 추출물 및 진피 추출물의 이러한 용도를 확인하고 본 발명을 완성하게 되었다.
본 발명은 상기와 같은 문제점을 해결하기 위해 안출된 것으로, 인삼 추출물, 백복령 추출물 및 진피 추출물을 유효성분으로 포함하는 복부통증의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것을 기술적 해결과제로 한다.
또한, 본 발명은 인삼 추출물, 백복령 추출물 및 진피 추출물을 유효성분으로 포함하는 복부통증 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공하는 것을 기술적 해결과제로 한다.
또한, 본 발명은 인삼, 백복령 및 진피를 이용하여 추출물을 수득하고, 인삼 추출물, 백복령 추출물 및 진피 추출물을 유효성분으로 포함하는 복부통증 예방 치료용 조성물의 제조방법을 제공하는 것을 기술적 해결과제로 한다.
한편, 본 발명의 목적은 이상에서 언급한 목적으로 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 목적들은 아래의 기재로부터 명확하게 이해될 수 있을 것이다.
상기 기술적 과제를 해결하기 위한 본 발명은 인삼 추출물, 백복령 추출물 및 진피 추출물을 유효성분으로 포함하는 복부통증의 예방 또는 치료용 약학적 조성물에 관한 것이다.
또한, 본 발명에 있어서 상기 인삼 추출물, 백복령 추출물 및 진피 추출물은, 연수에서 통증신호 전달 단백질 Notch 및 HES 1의 발현을 억제하는 것을 특징으로 한다.
또한, 상기 인삼 추출물, 백복령 추출물 및 진피 추출물은 물, 메탄올, 에탄올 프로판올, 이소프로판올, 부탄올 및 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나로부터 가용한 추출물인 것을 특징으로 한다.
또한, 상기 복부통증은 과민성 대장증후군, 염증성 장질환, 장염, 위염, 신경성 위경련, 위궤양, 위장장애, 췌장염으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나의 질환에 의해 유발되는 복부통증일 수 있다.
상기 다른 기술적 과제를 해결하기 위한 본 발명은 인삼 추출물, 백복령 추출물 및 진피 추출물을 유효성분으로 포함하는 복부통증의 예방 또는 개선용 식품 조성물에 관한 것이다.
상기 다른 기술적 과제를 해결하기 위한 본 발명은 인삼, 백복령 및 진피를 각각 분쇄하고, 동결건조하는 제1단계; 동결건조된 상기 시료들을 용매에 각각 투입하여 용해시키는 제2단계; 상기 용액들을 각각 원심분리하여 상층액만 분리하는 제3단계; 상기 상층액을 가열 농축시켜 인삼 추출물, 백복령 추출물 및 진피 추출물을 수득하는 제4단계; 및 상기 인삼 추출물, 백복령 추출물 및 진피 추출물을 혼합하는 제5단계;를 포함하는 복부통증의 예방 또는 치료용 조성물의 제조방법에 관한 것이다.
또한, 상기 제4단계에서의 상층액은 40 내지 60℃에서 가열 농축되는 것을 특징으로 한다.
상기 과제의 해결 수단에 의해, 본 발명의 복부통증의 예방 또는 치료용 조성물 및 이의 제조방법은 인삼 추출물, 백복령 추출물 및 진피 추출물을 유효성분으로 포함함으로써 연수에서 통증신호 전달 단백질의 발현을 억제하여서 복부통증을 예방 또는 치료하는데 뛰어난 효과가 있고, 천연물로서 인체에 부작용이 적고, 용이하게 제조 및 섭취할 수 있는 효과가 있다.
도 1은 본 발명의 일실시예에 따른 시험방법 및 계획을 모식화하여 나타낸 것이다.
도 2는 본 발명의 일실시예에 따른 천연 추출물의 항산화 활성 평가 실험 결과를 나타낸 것이다.
도 3은 본 발명의 일실시예에 따른 천연 추출물 경구투여시, 기계적 통각과민반응(Mechanical hyperalgesia reaction)을 분석한 결과를 나타낸 것이다.
도 4는 본 발명의 일실시에에 따른 천연 추출물 경구투여시 한냉통증반응(Cold allodynia reaction)을 분석한 결과를 나타낸 것이다.
도 5는 본 발명의 일실시예 따른 천연 추출물 경구투여시 연수에서 통증신호 전달 단백질의 발현을 분석한 결과를 나타낸 것이다.
도 2는 본 발명의 일실시예에 따른 천연 추출물의 항산화 활성 평가 실험 결과를 나타낸 것이다.
도 3은 본 발명의 일실시예에 따른 천연 추출물 경구투여시, 기계적 통각과민반응(Mechanical hyperalgesia reaction)을 분석한 결과를 나타낸 것이다.
도 4는 본 발명의 일실시에에 따른 천연 추출물 경구투여시 한냉통증반응(Cold allodynia reaction)을 분석한 결과를 나타낸 것이다.
도 5는 본 발명의 일실시예 따른 천연 추출물 경구투여시 연수에서 통증신호 전달 단백질의 발현을 분석한 결과를 나타낸 것이다.
본 발명의 이점 및 특징, 그리고 그것들을 달성하는 방법은 첨부되는 도면과 함께 상세하게 후술되어 있는 실시예들을 참조하면 명확해질 것이다. 그러나 본 발명은 이하 개시되는 실시예들에 한정되는 것이 아니라 서로 다른 다양한 형태로 구현될 것이며, 단지 본 실시예들은 본 발명의 개시가 완전하도록 하며, 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 발명의 범주를 완전하게 알려주기 위해 제공되는 것이다. 그리고 본 명세서에서 사용된 용어는 실시예들을 설명하기 위한 것이며, 본 발명을 제한하고자 하는 것이 아니다. 본 명세서에서 단수형은 문구에서 특별히 언급하지 않는 한 복수형도 포함한다.
이하, 첨부된 도면들을 참조하면서 본 발명의 바람직한 실시예에 대해 상세히 설명하기로 한다. 한편, 해당 기술분야의 통상적인 지식을 가진자로 부터 용이하게 알 수 있는 구성과 그에 대한 작용 및 효과에 대한 도시 및 상세한 설명은 간략히 하거나 생략하고 본 발명과 관련된 부분들을 중심으로 상세히 설명하도록 한다.
본 발명은 인삼 추출물, 백복령 추출물 및 진피 추출물을 유효성분으로 포함하는, 복부통증의 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것으로, 이하에서 본 발명에 대하여 자세히 설명하기로 한다.
먼저, 본 명세서에서 사용되는 용어 '추출물'은 당업계에서 조추출물(crude extract)로 통용되는 의미를 갖지만, 광의적으로 추출물을 추가적으로 분획(fractionation)한 분획물도 포함한다. 즉, 본 발명에서 이용되는 인삼 추출물, 백복령 추출물 및 진피 추출물은 추출용매를 이용하여 얻은 것뿐만 아니라 여기에 정제과정을 추가적으로 적용하여 얻은 것도 포함한다. 예컨대, 상기 추출물을 일정한 분자량 컷-오프 값을 갖는 한외 여과막을 통과시켜 얻은 분획, 다양한 크로마토크래피(크기, 전하, 소수성 또는 친화성에 따른 분리를 위해 제작된 것)에 의한 분리 등, 추가적으로 실시된 다양한 정제방법을 통해 얻어진 분획도 본 발명의 추출물에 포함되는 것이다. 또한, 본 발명에서 이용되는 인삼 추출물, 백복령 추출물 및 진피 추출물은 감압 증류 및 동결 건조 또는 분무 건조 등과 같은 추가적인 과정에 의해 분말 상태로 제조될 수 있다.
본 명세서에서 용어 '유효성분으로 포함하는'이란 하기의 인삼 추출물, 백복령 추출물 및 진피 추출물의 효능 또는 활성을 달성하는 데 충분한 양을 포함하는 것을 의미한다. 본 발명은 천연식물재료인 인삼, 백복령 및 진피로부터 추출한 조성물로서 과량 투여하여도 인체에 부작용이 없으므로 인삼 추출물, 백복령 추출물 및 진피 추출물이 본 발명의 조성물에 포함된 양적 상한은 당업자가 적절한 범위 내에서 선택하여 실시할 수 있다.
본 명세서에서 용어 '예방'이란 본 발명의 조성물의 투여로 복부통증을 유발하는 질환을 억제시키거나 진행을 지연시키는 모든 행위를 의미한다.
또한, 본 명세서에서 용어 '투여'란 용어는 임의의 적절한 방법으로 개체에 소정의 본 발명의 조성물을 제공하는 것을 의미한다.
본 발명의 일실시예에 따른 복부통증의 예방 또는 치료용 조성물은 인삼 추출물, 백복령 추출물 및 진피 추출물을 유효성분으로 포함한다.
또한, 상기 복부통증은 과민성 대장증후군, 염증성 장질환, 장염, 위염, 신경성 위경련, 위궤양, 위장장애, 췌장염으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나의 질환에 의해 유발될 수 있다. 바람직하게는, 상기 복부통증은 과민성 대장증후군, 염증성 장질환 또는 장염에 의해 유발될 수 있다.
Notch 신호전달경로를 살펴보면, Notch 신호는 중추신경계에서 시냅스 가소성 및 통증에 중요한 역할을 하고, Notch 신호전달체계는 진화에서 고도로 보존된 경로로 신경계의 발달에 관여하며, 신경 장해성 통증의 발병에 기여하는 것으로 알려져 있다.
Notch 신호전달체계는 수용체 역할을 하는 Notch (Notch-1, -2, -3, -4), 그 ligand인 Jagged (Jagged-1, -2) 및 Delta (Delta-1, -3, -4)를 포함하고, 이 ligand에는 공통적으로 Notch와 결합할 수 있는 DSLregion가 존재한다.
이러한 Notch 신호전달체계는 ligand와 Notch가 만났을때 발현된다. Notch 수용체는 single pass type Ⅰ transmembrane 단백질로 평소에는 세포막에 존재하는데, ligand와 결합하게 되면 Notch 수용체의 세포 외 도메인(extracellular domain, ECD)과 세포 내 도메인 (intracellular domain, ICD)에서 분열이 생기게 되고, Notch 수용체를 표지한 세포에서 세포 안을 자유롭게 이동할 수 있는 Notch ICD가 만들어진다. Notch ICD가 핵 안으로 들어가면 전사조절인자로서 작용하여 Notch의 작용 하에 존재하는 여러 목표 유전자의 발현에 영향을 주게 된다. 특히 HES1은 Notch가 세포질 영역에서 분리되어 핵 내로 translocation된 결과로 핵 내에서 발현된다.
본 발명의 일실시예에 따르면, 인삼 추출물, 백복령 추출물 및 진피 추출물의 혼합물은 연수에서 통증신호 전달 단백질 Notch와 HES 1의 농도 감소 효과를 확인하였는 바, 인삼 추출물, 백복령 추출물 및 진피 추출물의 혼합물은 통증신호 전달 단백질을 억제하여 복부통증에 효과가 있는 것으로 판단된다.
또한, 본 발명의 일실시예에 따르면 인삼 추출물, 백복령 추출물 및 진피 추출물과 함께, 산초 추출물을 더 포함할 수 있으며, 인삼 추출물, 백복령 추출물, 진피 추출물 및 산초 추출물의 혼합물 또한 연수에서 Notch와 HES 1의 발현이 유의하게 감소한 결과를 나타내었다.
따라서 본 발명에 따른 천연 추출물을 포함하는 조성물은 연수에서 통증신호 전달 단백질의 발현을 억제하여 염증작용을 조절하고 항산화 기능을 수행함으로써, 복부통증의 예방 또는 치료에 효과적으로 이용될 수 있다.
본 발명에 첨가되는 각 성분을 살펴보면, 먼저 인삼은 오가피 나무과에 속하는 여러해살이풀로서 각종 생리활성을 가지는 사포닌(Saponin)계 유도체 화합물이 주요 약효를 가지며, 신체적, 화학적, 생물학적 요인들의 유해한 영향에 대한 신체의 저항력을 높여주고, 비정상적인 생리기능의 방향성과 관계없이 신체의 항상성을 회복시켜 주는 것을 도와준다.
백복령은 복령(Poria cocos WOLF.)의 균핵을 말린 것으로, 흰솔풍령이라고도 하며 소나무를 베어 낸 곳에 자란다. 옛날부터 강장제로 사용되어 왔으며, 위·간·이자·신장 등의 질병에도 탁월한 효과가 있어 비장 보호작용, 이뇨작용과 혈당량을 낮추는 작용, 진정작용, 면역 부활작용의 효능이 있다.
진피는 운향과(Rutaceae)에 속하는 상록 소교목인 귤(Citrus unshiu, 중국에서는 Citrus reticulata)의 성숙한 과실의 과피를 말하며, 이뇨작용, 해열작용, 진통작용 및 항균작용 등을 가지는데, 특히 기가 뭉친 것을 풀어주고 비장의 기능을 강화시키는 효능이 있다.
덧붙여, 본 발명의 다른 실시예에 따른 복부통증의 예방 또는 치료용 조성물은 인삼 추출물, 백복령 추출물 및 진피 추출물과 함께, 산초 추출물을 더 포함할 수 있다.
산초는 운향과(Rutacease family)에 속하는 산초나무의 열매로서 약용과 식용으로 매우 유용하게 쓰이고 있으며, 산초의 성질은 매우 뜨거운 편이어서 몸을 따뜻하게 데워주는 작용을 하므로 손발이 차며 아랫배가 시릴 때에 산초를 복용하면 효과가 있다. 특히, 산초는 약용으로 위장을 자극하여 소화 및 신진대사의 기능을 촉진하여 급만성 위염, 위궤양, 위산과다, 복부냉증, 구토, 설사, 위하수, 위확장증, 건위, 식체, 소화불량 등의 소화기 질환에 효과가 뛰어나다.
상기 본 발명의 조성물에서 이용되는 추출물은 물, 메탄올, 에탄올 프로판올, 이소프로판올, 부탄올 및 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나로부터 가용한 추출물이다. 가장 바람직하게는, 물, 에탄올 또는 이들의 혼합물에 인삼, 백복령, 진피 및 산초를 처리하여 수득한 것일 수 있다.
상술한 바와 같이 본 발명의 조성물에 함유되는 인삼 추출물, 백복령 추출물, 진피 추출물 및 산초 추출물은 분말 혹은 추출액의 형태로 사용될 수 있으며 그 양 및 비율은 추출에 사용되는 인삼, 백복령, 진피 및 산초의 양, 추출 농축 정도 및 용도에 따라 다양하게 조절할 수 있다. 예를 들면, 상기 본 발명의 조성물은 인삼 추출물, 백복령 추출물 및 진피 추출물을 1:1:1 또는 1:1:2의 비율로 혼합된 상태로 사용될 수 있으며, 인삼 추출물, 백복령 추출물, 진피 추출물 및 산초 추출물을 1:1:1:1, 1:1:2:1 또는 1:1:1:2의 비율로 혼합된 상태로 사용될 수 있다.
덧붙이자면, 본 발명의 약학적 조성물 제조시, (a) 상술한 본 발명의 인삼 추출물, 백복령 추출물 및 진피 추출물의 약제학적 유효량; 및 (b) 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하여 제조될 수 있다. 다른 실시예로, (a) 상술한 본 발명의 인삼 추출물, 백복령 추출물, 진피 추출물 및 산초 추출물의 약제학적 유효량; 및 (b) 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하여 제조될 수도 있다. 상기 용어 '약제학적 유효량'은 상술한 인삼 추출물, 백복령 추출물, 진피 추출물 및 산초 추출물의 효능 또는 활성을 달성하는 데 충분한 양을 의미한다.
이때, 상기 약제학적으로 허용되는 담체는 제제에 통상적으로 이용되는 것으로서 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 전분, 아카시아 고무, 인산 칼슘, 알기네이트, 젤라틴, 규산 칼슘, 미세결정성 셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈, 셀룰로스, 물, 시럽, 메틸 셀룰로스, 메틸 히드록시벤조에이트, 프로필히드로시벤조에이트, 활석, 스테아르산 마그네슘 및 미네랄 오일 등을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 약학적 조성물은 상기 성분들 이외에 윤활제, 습윤제, 감미제, 향미제, 유화제, 현탁제, 보존제 등을 추가로 포함할 수 있다. 적합한 약제학적으로 허용되는 담체 및 제제는 Remington's Pharmaceutical Sciences (19th ed., 1995)에 상세히 기재되어 있다.
또한, 본 발명의 약학적 조성물은 경구 또는 비경구 투여할 수 있다. 이때 본 발명 약학적 조성물의 적합한 투여량은 제제화 방법, 투여 방식, 환자의 연령, 체중, 성, 병적 상태, 음식, 투여 시간, 투여 경로, 배설 속도 및 반응 감응성과 같은 요인들에 의해 다양하게 처방될 수 있다. 본 발명의 약학적 조성물의 일반적인 투여량은 성인 기준으로 0.001~100mg/kg 범위 내이다.
특별히 한정하는 것은 아니나, 본 발명의 약학적 조성물은 당해 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있는 방법에 따라, 약제학적으로 허용되는 담체 및/또는 부형제를 이용하여 제제화함으로써 단위 용량 형태로 제조되거나 또는 다용량 용기 내에 내입시켜 제조될 수 있다. 이때 제형은 오일 또는 수성 매질 중의 용액, 현탁액, 시럽제 또는 유화액 형태이거나 엑스제, 산제, 분말제, 과립제, 정제 또는 캅셀제 형태일 수도 있으며, 분산제 또는 안전화제를 추가적으로 포함할 수 있다.
한편, 본 발명의 다른 실시예로서, 본 발명은 인삼 추출물, 백복령 추출물 및 진피 추출물을 유효성분으로 포함하는 복부통증의 예방 또는 개선용 식품 조성물에 관한 것이다.
이때, 복부통증의 예방 또는 개선용 식품 조성물은, 상술한 복부통증의 예방 또는 치료용 약학적 조성물과 같이, 유효성분으로서 인삼 추출물, 백복령 추출물, 진피 추출물뿐만 아니라 산초 추출물을 더 포함할 수도 있다. 각 추출물에 관한 설명은 상기 약학적 조성물에서 설명한 바와 동일 또는 유사하다.
상기 식품 조성물은 영양소를 한 가지 또는 그 이상 함유하고 있는 천연물 또는 가공품을 의미하며, 바람직하게는 어느 정도의 가공 공정을 거쳐 직접 먹을 수 있는 상태가 된 것을 의미하며, 통상적인 의미로서, 건강기능식품, 음료, 식품 첨가제 및 음료 첨가제 등을 모두 포함한다.
구체적으로, 상기 식품 조성물은 유효성분으로서 인삼 추출물, 백복령 추출물 및 진피 추출물(산초 추출물이 더 포함될 수도 있음)뿐만 아니라, 식품 제조 시에 통상적으로 첨가되는 성분을 포함할 수 있다. 예를 들어 단백질, 탄수화물, 지방, 영양소, 조미제 및 향미제를 포함할 수 있다. 상술한 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등; 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스, 올리고당 등; 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 사이클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 향미제로서 천연 향미제 [타우마틴, 스테비아 추출물(예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진 등]) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 사용할 수 있다.
또한, 본 발명의 식품 조성물을 드링크제로 제조되는 경우에는 본 발명의 인삼 추출물, 백복령 추출물 및 진피 추출물(산초 추출물이 더 포함될 수도 있음) 이외에 구연산, 액상과당, 설탕, 포도당, 초산, 사과산, 과즙, 두충 추출액, 대추 추출액, 감초 추출액 등을 추가로 포함시킬 수 있다.
한편, 본 발명의 또 다른 실시예로서, 본 발명은 인삼, 백복령 및 진피를 각각 분쇄하고, 동결건조하는 제1단계; 동결건조된 상기 시료들을 용매에 각각 투입하여 용해시키는 제2단계; 상기 용액들을 각각 원심분리하여 상층액만 분리하는 제3단계; 상기 상층액을 가열 농축시켜 인삼 추출물, 백복령 추출물 및 진피 추출물을 수득하는 제4단계; 및 상기 인삼 추출물, 백복령 추출물 및 진피 추출물을 혼합하는 제5단계;를 포함하는 복부통증의 예방 또는 치료용 조성물의 제조방법에 관한 것이다.
이때, 인삼, 백복령 및 진피뿐만 아니라 산초를 더 분쇄하여 동결건조하고, 이를 용매에 용해시키고, 원심분리하여 분리된 상층액을 가열 농축시켜 산초 추출물을 제조함으로써, 복부통증의 예방 또는 치료용 조성물의 유효성분으로서 산초 추출물을 더 포함할 수도 있다. 각 추출물에 관한 설명은 상기 약학적 조성물에서 설명한 바와 동일 또는 유사하다.
또한, 상기 제4단계에서의 상층액은 40 내지 60℃에서 가열 농축되는 것을 특징으로 한다. 더욱 바람직하게는 45 내지 55℃에서 가열 농축할 수 있다. 상층액을 가열 농축하는 온도가 40℃ 미만일 경우 유효성분의 추출이 효과적이지 않고, 55℃를 초과할 경우 추출 공정의 시간이나 효율 면에서 바람직하지 않고 또한 유효성분이 파괴되거나 바람직하지 않은 성분이 혼합되어 맛이 변할 우려도 있다.
이하 실시예를 들어 본 발명을 상세히 설명하기로 하나, 본 발명의 권리범위가 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다.
<실시예>
실시예 1: 인삼(Ginseng) + 백복령(Poria cocos) + 진피(Citrus unshiu markovich) 추출 혼합물의 제조
인삼, 백복령 및 진피를 분쇄기를 이용하여 각각 분쇄하고 -20℃에서 동결건조한 후 건조된 시료 2g씩 70% 에탄올 10ml에 각각 투입하여 혼합기에서 24시간 동안 추출하였다. 추출한 다음 거름종이로 찌꺼기를 여과하였고, 3,000 rpm으로 각각 원심분리하여 상층액을 모은 뒤 50℃에서 중탕 증발하여 농축시켰으며, 최종적으로 -70℃에서 동결건조하였다.
동결건조된 인삼 추출물, 백복령 추출물 및 진피 추출물을 1:1:1의 비율로 혼합하여 인삼/백복령/진피 추출 혼합물(GCPE)을 제조하였다.
실시예 2: 인삼(Ginseng) + 백복령(Poria cocos) + 진피(Citrus unshiu markovich) + 산초(Zanthoxylum schinifolium) 추출 혼합물의 제조
인삼, 백복령, 진피 및 산초를 분쇄기를 이용하여 각각 분쇄하고 -20℃에서 동결건조한 후, 건조된 시료 2g씩 70% 에탄올 10ml에 각각 투입하여 혼합기에서 24시간 동안 추출하였다. 추출한 다음 거름종이로 찌꺼기를 여과하였고, 3,000 rpm으로 각각 원심분리하여 상층액을 모은 뒤 50℃에서 중탕 증발하여 농축시켰으며, 최종적으로 -70 ℃에서 동결건조하였다.
동결건조된 인삼 추출물, 백복령 추출물, 진피 추출물 및 산초 추출물을 1:1:1:1의 비율로 혼합하여 인삼/백복령/진피/산초 추출 혼합물(GZCPE)을 제조하였다.
비교예 1: 인삼(Ginseng) 및 백복령(Poria cocos) 추출 혼합물의 제조
진피 추출물을 제조하지 않고, 인삼 추출물 및 백복령 추출물을 1:1의 비율로 혼합한 것을 제외하고는 상기 실시예 1과 동일한 방법으로 인삼/백복령 추출 혼합물(GPE)을 제조하였다.
비교예 2: 진피 추출물(Citrus unshiu markovich)의 제조
인삼 추출물 및 백복령 추출물을 제조하지 않은 것을 제외하고는 상기 실시예 1과 동일한 방법으로 진피 추출물(CME)을 제조하였다.
<분석 조건>
분석대상
실험동물은 오리엔탈바이오(주)에서 구입한 Sprague-Dawely(SD)계 숫컷 랫으로 4주령 16마리를 사용하였으며, 사육장의 온도는 25℃, 습도 50%, 12시간의 light/dark 순환을 유지하였다. 구입한 랫은 반입후 1주일간의 적응기간을 주었으며 사료와 식수는 제한없이 자유로이 제공하였다.
과민성 대장증후군 유발 랫 모델의 준비
본 시험에서는 복부통증을 유발하는 대표적인 질환인 과민성 대장증후군을 랫 모델에 적용하였으며, 대장자극방법은 Zhu (2008)의 방법을 사용하였다. 구체적으로, SCALP vein set의 침 부위를 제거한 주입기를 사용하여 랫의 항문에서 S상 결장 입구까지 튜브를 삽입한 다음, 랫의 무게(g) 당 5% 아세트산을 5㎕/g 주입하였다. 약물의 급성효과와 만성효과를 보기 위해 약물 경구투여 3일에 한번씩 2회 실시하였다.
도 1에 도시한 방법으로 시험을 실시하였고, ① control: 정상군(n=4), ② vehicle: 과민성 대장증후군 유발군(n=4), ③ 과민성 대장증후군 + 인삼/백복령 추출 혼합물 경구투여군(n=4), ④ 과민성 대장증후군 + 진피 추출물 경구투여군(n=4), ⑤ 과민성 대장증후군 + 인삼/백복령/진피 추출 혼합물 경구투여군(n=4), ⑥ 과민성 대장증후군 + 인삼/백복령/진피/산초 추출 혼합물 경구투여군(n=4)로 시험군을 나누어 시험을 실시하였다.
분석방법 및 결과
(1) 항산화 활성 평가반응
비교예 1, 비교예 2, 실시예 1 및 실시예 2에 따른 천연 추출물의 항산화 활성을 평가하기 위해 자유라디칼을 제거하는 항산화 효능을 측정하는 DPPH(1,1-diphenyl-2-picryl hydrazyl) 라디칼 소거능 실험을 실시하였다. 이 실험은 DPPH를 이용하여 라디칼이 감소하는 정도를 분광광도계(Spectrophotometer)로 측정하여 간접적으로 시료의 항산화 활성을 측정하며, 라디칼이 항산화물질로 환원되면 고유의 보라색을 잃고 노란색으로 변하게 된다.
구체적으로, 비교예 1, 비교예 2, 실시예 1 및 실시예 2에 따른 천연 추출물을 10, 20, 40, 80, 160, 320, 640㎍/ml의 7가지 농도로 조제한 용액 0.1ml(control: 99.5% 에탄올)에 0.2mM DPPH 용액(control: 99.5% 에탄올) 1.9ml를 가하였다. Vortex mixer를 이용하여 10초간 진탕한 다음 37℃에서 30분동안 incubation시켰다. 이후 x-Mark micro spectrophotometer reacer를 이용하여 517nm에서 흡광도를 측정하였다.
양성대조약물로는 L-ascorbic acid를 10, 20, 40, 80, 160, 320, 640㎍/ml(control: 99.5% 에탄올)의 7가지 농도로 조제하여 측정하였다.
본 발명의 일실시예에 따른 천연추출물 및 양성대조약물의 항산화 작용은 DPPH에 대한 % Antioxidant activity (Electron donating ability)으로 나타내었다.
도 2는 본 발명의 일실시예에 따른 천연 추출물의 항산화 활성 평가 실험 결과를 나타낸 것으로서, 도 2a는 비교예 1, 도 2b는 비교예 2, 도 2c는 실시예 1, 도 2d는 실시예 2에 따른 천연 추출물의 DPPH 라디칼 소거능 실험 결과를 나타낸 것이다.
도 2a를 참조하면, 대조군인 L-ascorbic acid 및 비교예 1에 따른 인삼/백복령 추출 혼합물의 농도가 10ug/mL인 경우 항산화 활성이 각각 70.5±4.1%, 20.1±3.2%로 나타났고, 20ug/mL인 경우 각각 71.8±25.8%, 25.8±5.1%로 나타났으며, 40ug/mL인 경우 74.1±6.1%, 30.6±4.5%로 나타났다.
그리고 L-ascorbic acid 및 비교예 1에 따른 인삼/백복령 추출 혼합물의 농도가 80ug/mL인 경우 항산화 활성이 각각 77.8±8.8%, 36.8±5.8%로 나타났고, 160ug/mL인 경우 각각 80.6±3.6%, 40.1±6.1%로 나타났고, 320ug/mL인 경우 각각 83.2±11.5%, 46.5±7.0%로 나타났으며, 640ug/mL인 경우 각각 84.5±6.6%, 47.1±6.9%로 나타났다.
즉, 도 2a의 DPPH 라디칼 소거능 실험 결과로 나타난 바와 같이, 비교예 1의 인삼/백복령 추출 혼합물의 농도가 증가함에 따라 항산화 활성이 증가함을 알 수 있는데, 640ug/mL에서 약 50%의 활성을 확인할 수 있었다.
도 2b를 참조하면, 대조군인 L-ascorbic acid 및 비교예 2에 따른 진피 추출물의 농도가 10ug/mL인 경우 항산화 활성이 각각 70.5±1.2%, 10.5±4.1%로 나타났고, 20ug/mL인 경우 각각 71.8±2%, 16.5±10.5%로 나타났으며, 40ug/mL인 경우 각각 74.1±3.1%, 21.4±6.1%로 나타났다.
그리고 L-ascorbic acid 및 비교예 2에 따른 진피 추출물의 농도가 80ug/mL인 경우 항산화 활성이 각각 77.8±8.8%, 32.5±5.8%로 나타났고, 160ug/mL인 경우 각각 80.6±2.8%, 36.1±3.6%로 나타났고, 320ug/mL인 경우 각각 83.2±4.5%, 38.5±11.5%로 나타났으며, 640ug/mL인 경우 각각 84.5±5.4%, 39.9±6.6%로 나타났다.
즉, 도 2b의 DPPH 라디칼 소거능 실험 결과로 나타난 바와 같이, 비교예 2의 진피 추출물의 농도가 증가함에 따라 항산화 활성이 증가하였으며, 640ug/mL에서 약 48%의 활성을 확인할 수 있었다.
도 2c를 참조하면, 대조군인 L-ascorbic acid 및 실시예 1에 따른 인삼/백복령/진피 추출 혼합물의 농도가 10ug/mL인 경우 항산화 활성이 각각 70.5±1.1%, 17.6±4.1%로 나타났고, 20ug/mL인 경우 각각 71.8±2.3%, 22.8±10.5%로 나타났으며, 40ug/mL인 경우 각각 74.1±4.2%, 27.6±6.1%로 나타났다.
그리고 L-ascorbic acid 및 실시예 1에 따른 인삼/백복령/진피 추출 혼합물의 농도가 80ug/mL인 경우 항산화 활성이 각각 77.8±5.1%, 45.1±8.8%로 나타났고, 160ug/mL인 경우 각각 80.6±6.1%, 55.8±3.6%로 나타났고, 320ug/mL인 경우 각각 83.2±5.1%, 59.6±11.5%로 나타났으며, 640ug/mL인 경우 각각 84.5±3.6%, 60.4±6.6%으로 나타났다.
즉, 도 2c의 DPPH 라디칼 소거능 실험 결과로 나타난 바와 같이, 실시예 1의 인삼/백복령/진피 추출 혼합물의 농도가 증가함에 따라 항산화 활성이 증가하였고, 특히 농도 80ug/mL부터 비교예 1 및 2의 경우보다 더 많이 증가하였으며, 640ug/mL에서 약 71%의 활성을 확인할 수 있었다.
도 2d를 참조하면, 대조군인 L-ascorbic acid 및 실시예 2에 따른 인삼/백복령/진피/산초 추출 혼합물의 농도가 10ug/mL인 경우 항산화 활성이 각각 70.5±2.1%, 23.1±4.1%로 나타났고, 20ug/mL인 경우 각각 71.8±3.5%, 25.1±10.5%로 나타났으며, 40ug/mL인 경우 각각 74.1±2.8%, 32.6±6.1%로 나타났다.
그리고 L-ascorbic acid 및 실시예 2에 따른 인삼/백복령/진피/산초 추출 혼합물의 농도가 80ug/mL인 경우 항산화 활성이 각각 77.8±6.1%, 46.5±8.8%로 나타났고, 160ug/mL인 경우 각각 80.6±8.8%, 58.1±3.6%로 나타났고, 320ug/mL인 경우 각각 83.2±7.2%, 62.1±11.5%로 나타났으며, 640ug/mL인 경우 각각 84.5±9.1%, 63.5±6.6%로 나타났다.
즉, 도 2d의 DPPH 라디칼 소거능 실험 결과로 나타난 바와 같이, 실시예 2의 인삼/백복령/진피/산초 추출 혼합물의 농도가 증가함에 따라 항산화 활성이 증가하였고, 특히 80ug/mL부터 비교예 1 및 2의 경우보다 더 많이 증가하였으며, 640ug/mL에서 약 75%의 활성을 보여 가장 높은 항산화 능력을 확인할 수 있었다.
(2) 기계적 통각과민반응(mechanical hyperalgesia reaction) 분석
실시예 1 및 실시예 2에 따른 천연 추출물 경구투여시, 통증조절의 억제를 확인하기 위하여 electrical pain test를 실시하고 기계적 통각과민을 분석하였으며, electrical pain test는 4일 동안 오전 10시경에 동일한 시간에 실험을 진행하였다.
구체적으로 electrical pain test는 0.1ms, 1Hz로 0.0mA에서부터 전기자극을 주면서 서서히 자극강도를 증가시켰고, 최초로 꼬리가 움직이는 시점을 최소자극으로 판단하였으며, 최소자극에서 자극세기를 천천히 더 올리면서 전신이 움직이거나 비명을 지르는 시점을 최대자극으로 판단하였다.
본 발명의 일실시예에 따른 천연 추출물을 경구투여한 랫의 최대통증반응을 유발한 최대통증자극세기에서 복합근활동전위(Compound musle action potential, CMAP, 최소통증자극세기를 말함)를 뺀 값을 기계적 통각과민의 데이터 값으로 나타내었고, 이를 통해 통증이 억제되는 것을 확인하였다.
하기 표 1 및 표 2에서 실시예 1 및 실시예 2에 따른 천연 추출물 경구투여한 랫의 최소통증자극세기 및 최대통증자극세기를 측정한 값을 나타내었다.
또한, 도 3은 본 발명의 일실시예에 따른 천연 추출물 경구투여시, 기계적 통각과민반응(Mechanical hyperalgesia reaction)을 분석한 결과를 나타낸 것으로서, 도 3a는 실시예 1, 도 3b는 실시예 2에 따른 천연 추출물을 경구투여한 랫의 최소통증자극세기 및 최대통증자극세기의 변화를 나타낸 그래프이다.
|
Group | ||
Control (mA) Stimulus at 0.1 mV |
Vehicle (mA) Stimulus at 0.1 mV |
GCPE (mA) Stimulus at 0.1 mV |
|
CMAP 1st | 2.2±0.1 | 2.1±0.1 | 2.2±0.2 |
CMAP 2nd | 2.3±0.1 | 2.1±0.2 | 2.2±0.1 |
CMAP 3rd | 2.3±0.1 | 2.3±0.1 | 2.1±0.1 |
CMAP 4th | 2.3±0.1 | 2.3±0.1 | 2.1±0.1 |
Pain 1st | 5.1±0.3 | 5.3±0.4 | 6.4±0.4 |
Pain 2nd | 3.6±0.4 | 3.8±0.3 | 5.8±0.3 |
Pain 3rd | 3.4±0.3 | 3.5±0.4 | 5.3±0.4 |
Pain 4th | 3.2±0.2 | 3.4±0.4 | 5.0±0.2 |
상기 표 1 및 도 3a를 참조하면, CMAP는 Vehicle 군과, 실시예 1에 따른 인삼/백복령/진피 추출 혼합물 경구 투여군(이하, 실시예 1 경구 투여군이라 함)의 차이가 크게 보이지 않았다.
구체적으로 살펴보면, Vehicle 군 및 실시예 1 경구 투여군에 0.1mV의 자극을 준 결과, 첫번째 최대통증자극세기(Pain 1st)는 각각 5.3±0.4mV, 6.4±0.4mV로 측정되어 통증을 느끼는 강도가 약 1.1mV 증가하였고, 두번째 최대통증자극세기(Pain 2nd)는 각각 3.8±0.3mV, 5.8±0.3mV로 측정되어 통증을 느끼는 강도가 약 2.0mV 증가하였다.
그리고 세번째 최대통증자극세기(Pain 3rd)는 각각 3.5±0.4mV, 5.3±0.4mV로 측정되어 통증을 느끼는 강도가 약 1.8mV 증가하였고, 네번째 최대통증자극세기(Pain 4th)는 각각 3.4±0.4mV, 5.0±0.2mV로 측정되어 통증을 느끼는 강도가 약 1.6mV 증가한 것을 확인하였다.
즉, Control 군, 과민성 대장증후군이 유발된 Vehicle 군 및 실시예 1 경구 투여군 모두 최소통증자극세기는 큰 차이가 없으나, 최대통증자극세기는 실시예 1 경구 투여군이 통증을 느끼는 강도가 증가하여 통증을 억제하여 통증조절을 보였다.
|
Group | ||
Control (mA) Stimulus at 0.1 mV |
Vehicle (mA) Stimulus at 0.1 mV |
GZCPE (mA) Stimulus at 0.1 mV |
|
CMAP 1st | 2.2±0.1 | 2.1±0.1 | 2.1±0.2 |
CMAP 2nd | 2.3±0.1 | 2.1±0.2 | 2.1±0.1 |
CMAP 3rd | 2.3±0.1 | 2.3±0.1 | 2.2±0.1 |
CMAP 4th | 2.3±0.1 | 2.3±0.1 | 2.2±0.1 |
Pain 1st | 5.1±0.3 | 5.3±0.4 | 6.7±0.6 |
Pain 2nd | 3.6±0.4 | 3.8±0.3 | 6.1±0.4 |
Pain 3rd | 3.4±0.3 | 3.5±0.4 | 5.4±0.3 |
Pain 4th | 3.2±0.2 | 3.4±0.4 | 5.2±0.3 |
상기 표 2 및 도 3b를 참조하면, CMAP는 Vehicle 군 및 실시예 2에 따른 인삼/백복령/진피/산초 추출 혼합물 경구 투여군(이하, 실시예 2 경구 투여군이라 함)의 차이가 크게 보이지 않았다.
구체적으로 살펴보면, Vehicle 군 및 실시예 2 경구 투여군에 0.1mV의 자극을 준 결과, 첫번째 최대통증자극세기(Pain 1st)는 각각 5.3±0.4mV, 6.7±0.6mV로 측정되어 통증을 느끼는 강도가 약 1.4mV 증가하였고, 두번째 최대통증자극세기(Pain 2nd)는 각각 3.8±0.3mV, 6.1±0.4mV로 측정되어 약 2.3mV 증가하였다.
그리고 세번째 최대통증자극세기(Pain 3rd)는 각각 3.5±0.4mV, 5.4±0.4mV로 측정되어 통증을 느끼는 강도가 약 1.9mV 증가하였고, 네번째 최대통증자극세기(Pain 4th)는 각각 3.4±0.4mV, 5.2±0.2mV로 측정되어 통증을 느끼는 강도가 약 1.8mV 증가한 것을 확인하였다.
즉, Control 군, 과민성 대장증후군이 유발된 Vehicle 군 및 실시예 2 경구 투여군 모두 최소통증자극세기는 큰 차이가 없으나, 최대통증자극세기는 실시예 2 경구 투여군이 통증을 느끼는 강도가 증가하여 통증을 억제하여 통증조절을 보였다.
(3) 한냉통증반응(Cold allodynia reaction) 분석
실시예 1 및 실시예 2에 따른 천연 추출물 경구투여시, 한냉통증반응을 분석하기 위해 Cold allodynia behavior test를 실시하였다. 구체적으로, 본 발명의 일실시예에 따른 천연 추출물을 경구투여한 랫의 앞발 왼쪽 발바닥에 20㎕ 아세톤을 묻힌 다음 3분 내에 왼쪽 다리를 들거나 흔드는 시간을 측정하였다.
도 4는 본 발명의 일실시에 따른 천연 추출물 경구투여시 한냉통증반응(Cold allodynia reaction)을 분석한 결과를 나타낸 것으로, 도 4a는 실시예 1, 도 4b는 실시예 2에 따른 천연 추출물을 경구투여한 랫의 한냉통증반응을 분석한 결과를 나타낸 것이다.
도 4a를 참조하면, Control 군은 38.5±12.5초, Vehicle 군은 40.5±10.8초로 나타났으며, 실시예 1에 따른 인삼/백복령/진피 추출 혼합물 경구 투여군은 66.8±11.5초로 한냉통증반응의 시간이 약 60% 지연됨으로써 통증 유발시간이 증가한 것으로 확인되었다.
도 4b를 참조하면, Control 군은 38.5±12.5초, Vehicle 군은 40.5±10.8초로 나타났으며, 실시예 2에 따른 인삼/백복령/진피/산초 추출 혼합물 경구 투여군은 66.8±6.8초로 한냉통증반응의 시간이 약 60% 지연됨으로써 통증 유발시간이 증가한 것으로 확인되었다.
따라서 실시예 1 및 2에 따른 추출 혼합물 경구 투여군에서 통증 유발시간이 증가한 것은 본 발명의 천연 추출물을 포함하는 조성물이 중추성 통증경로를 저해하는 것을 확인할 수 있었다.
(4) 단백질 정량분석
약물을 5일간 경구 투여한 뒤 행동실험을 실시한 랫을 즉시 희생하여 연수를 적출하였다. 조직의 양에 맞게 적당한 양의 Lysis buffer (PRO-PrepTM, protein Extration solution)을 첨가하여 균질기 (Intron Biotechnology, Gyeonggi-do, Korea)로 고르게 균질화하고 Centrifuge (Hanil science, korea)을 이용하여 4℃, 13,000 rpm, 10분간 원심분리하여 세포 추출물을 얻었다. 세포 추출물을 Bradfod법으로 Bio-Rad Protein assay Kit (Bio-Rad Hercules,CA, USA)을 사용하여 595nm에서 흡광도를 측정하여 총 단백질량을 측정하였다. 각 시료를 동등한 단백질 양으로 정량한 뒤 95℃에서 10분간 가열, 3분간 -20℃에서 식혔으며, 10%~12% sodium dodecyl sulfate-polyacrylaminde gel에 18.5㎕의 샘플을 각 웰마다 로딩 후 70V에서 30분, 100V에서 1시간 30분, 110V에서 1시간 40분 동안 전기영동을 실시하였다. 전기영동된 단백질을 니트로셀룰로스 막에 100V 1시간 30분 동안 냉장하에 이동시켰다. 단백질의 이동여부를 확인하기 위해 Ponceau 용액으로 염색하였으며, 5% skim milk로 1시간씩 2번 블로킹 하였다. 1차 항체인 Notch1 및 HES1 은 각각 1:500 농도로 희석하여 24시간동안 4℃에서 반응시켰다. 1X PBST(10X PBST, D.W, 0.1% Tween 20)으로 7분당 한 번씩 총 5번 세척을 하였으며, 2차 항체(Notch는 rabbit, HES 1은 mouse)를 1차 항체의 종에 맞게 2시간 동안 반응시킨 뒤, 동일한 방법으로 세척을 실시하였다. ECL prime(Amersham Pharmacia Biotech, Buckinghamshire, UK)을 사용하여 암실 하에 단백질 발현량을 측정, 분석하였다.
도 5는 본 발명의 일실시예 따른 천연 추출물 경구투여시 연수에서 통증 신호전달 단백질의 발현을 분석한 결과를 나타낸 것으로서, 도 5a는 Notch signal 을 나타낸 것이고, 도 5b는 HES1 signal을 나타낸 것이다.
도 5a를 참조하면, HES1/GADDH ratio 값이 Control 군은 1±0.12, Vehicle 군은 2.36±0.08, 비교예 1 경구 투여군(GPE)은 1.59±0.15, 비교예 2 경구 투여군(CME)은 1.40±0.09, 실시예 1 경구 투여군(GCPE)은 1.15±0.14, 실시예 2 경구 투여군(GZCPE)은 0.72±0.09로 측정되었다. 실시예 1 경구 투여군의 경우 통증신호 전달 단백질인 Notch의 생성이 Control 군과 거의 유사하게 발현되었고, 실시예 2 경구 투여군의 경우 오히려 통계적 범위에서 Control 군 보다 더 통증신호 전달 단백질의 발현이 억제됨으로써 우수한 통증억제효과를 나타내었다.
도 5b를 참조하면, HES1/GADDH ratio 값이 Control 군은 1±0.08, Vehicle 군은 11.35±0.99, 비교예 1 경구 투여군(GPE)은 4.70±0.41, 비교예 2 경구 투여군(CME)은 6.76±0.59, 실시예 1 경구 투여군(GCPE)은 6.43±0.56, 실시예 2 경구 투여군(GZCPE)은 6.23±0.54로 측정되었다. HES1은 Notch가 세포질 영역에서 통증으로 인해 분리되어 핵 내로 translocation된 결과로 핵 내에서 발현된다. HES 1 또한 실시예 1 및 실시예 2 경구 투여군에서 발현이 억제되어 우수한 통증억제효과를 나타내었다.
상술한 바와 같이 본 실시예에서는, 인삼/백복령/진피 추출 혼합물이 DPPH 라디칼 소거능 실험을 통하여 항산화 활성을 분석하고, 과민성 대장증후군으로 유도된 복부통증 랫 모델에서 기계적 통각과민 실험, 한냉통증반응 실험과, 통증신호 전달 단백질인 Notch 및 HES1의 연수에서의 발현을 비교 측정하여 인삼/백복령/진피 추출 혼합물의 복부통증 예방 또는 치료의 효과를 평가하였다. 그 결과, 항산화 활성은 인삼/백복령/진피 추출 혼합물 경구투여군에서 높게 나타났고, 기계적 통각과민 실험에서도 통증을 느끼는 강도가 유의하게 증가하였으며, 한냉통증반응의 시간이 지연되어 유의한 통증 유발시간의 증가를 보여주었다. Notch 및 HES1의 발현 또한 유의하게 감소하였다. 이러한 결과는 인삼/백복령/진피 추출 혼합물이 통증신호 전달 단백질인 Notch 및 HES1의 발현의 억제를 통하여 염증반응의 조절 및 복부통증에 따른 예방 또는 치료 효과를 가지고 있음을 시사한다.
또한, 인삼/백복령/진피/산초 추출 혼합물에 대해서도 동일한 평가를 수행한 결과, 인삼/백복령/진피/산초 추출 혼합물 경구투여군에서 가장 높게 나타났고, 기계적 통각과민 실험에서도 통증을 느끼는 강도가 유의하게 증가하였으며, 한냉통증반응의 시간이 지연되어 유의한 통증 유발시간의 증가를 보였다. 이러한 결과는 인삼/백복령/진피 추출 혼합물과 마찬가지로 인삼/백복령/진피/산초 추출 혼합물의 경구투여가 Notch 및 HES1의 발현을 억제함으로써 염증반응의 조절 및 복부통증에 따른 예방 또는 치료 효과를 가지고 있음을 시사한다.
따라서 이러한 실시예의 결과로부터 본 발명의 인삼 추출물, 백복령 추출물 및 진피 추출물은 과민성 대장증후군을 포함하는 복부통증에 있어 염증반응의 조절 및 항산화 기능을 함으로써, 복부통증을 예방 또는 치료하는데 뛰어난 효과가 있는 것으로 판단된다.
전술한 내용은 후술할 발명의 청구범위를 더욱 잘 이해할 수 있도록 본 발명의 특징과 기술적 장점을 다소 폭넓게 상술하였다. 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 지식을 가진 자는 본 발명이 그 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 실시될 수 있다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해해야만 한다. 본 발명의 범위는 상기 상세한 설명보다는 후술하는 특허청구범위에 의하여 나타내어지며, 특허청구범위 그리고 그 균등 개념으로부터 도출되는 모든 변경 또는 변형된 형태가 본 발명의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 한다.
Claims (7)
- 인삼 추출물, 백복령 추출물, 진피 추출물 및 산초 추출물을 유효성분으로 포함하는 복부통증의 예방 또는 치료용 조성물.
- 제1항에 있어서,
상기 인삼 추출물, 백복령 추출물, 진피 추출물 및 산초 추출물은, 연수에서 통증신호 전달 단백질 Notch 및 HES 1의 발현을 억제하는 것을 특징으로 하는 조성물. - 제1항에 있어서,
상기 인삼 추출물, 백복령 추출물, 진피 추출물 및 산초 추출물은 물, 메탄올, 에탄올, 프로판올, 이소프로판올, 부탄올 및 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나로부터 가용한 추출물인 것을 특징으로 하는 조성물. - 제1항에 있어서,
상기 복부통증은 과민성 대장증후군, 염증성 장질환, 장염, 위염, 신경성 위경련, 위궤양, 위장장애, 췌장염으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나의 질환에 의해 유발되는 복부통증인 것을 특징으로 하는 조성물. - 인삼 추출물, 백복령 추출물, 진피 추출물 및 산초 추출물을 유효성분으로 포함하는 복부통증의 예방 또는 개선용 식품 조성물.
- 인삼, 백복령, 진피 및 산초를 각각 분쇄하고, 동결건조하는 제1단계;
동결건조된 상기 시료들을 용매에 각각 투입하여 용해시키는 제2단계;
상기 용액들을 각각 원심분리하여 상층액만 분리하는 제3단계;
상기 상층액을 가열 농축시켜 인삼 추출물, 백복령 추출물, 진피 추출물 및 산초 추출물을 수득하는 제4단계; 및
상기 인삼 추출물, 백복령 추출물, 진피 추출물 및 산초 추출물을 혼합하는 제5단계;를 포함하는 복부통증의 예방 또는 치료용 조성물의 제조방법. - 제6항에 있어서,
상기 제4단계에서의 상층액은 40 내지 55℃에서 가열 농축되는 것을 특징으로 하는 조성물의 제조방법.
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