WO2019125014A1 - 항암제가 담지된 나노구조체를 유효성분으로 포함하는 간암 치료용 약학조성물 - Google Patents

항암제가 담지된 나노구조체를 유효성분으로 포함하는 간암 치료용 약학조성물 Download PDF

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liver
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윤승규
허원희
강병윤
김진환
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Definitions

  • the present invention relates to a pharmaceutical composition for treating liver cancer comprising a nanostructure carrying an anticancer agent.
  • 2001-0010393 discloses a polymer carrier for hydrophobic drug delivery, and in Korean Patent No. 10-1711127, cancer-targeted anticancer drug-bound iron oxide nanoparticles Complex, but the development of nanostructures as targets for hepatocarcinogenesis has not been developed yet.
  • phenylboronic acid is a molecule in which the R group of boronic acid is substituted with a benzene group, and can form a reversible covalent bond in a neutral state with a molecule having a cis-diol or catechol structure.
  • the maleic anhydride polymer has the advantage of easily reacting with a functional group that induces a nucleophilic substitution reaction such as amine or hydroxyl, and can introduce various monomers into the main chain of the polymer.
  • the present invention relates to a pharmaceutical composition for the treatment of liver cancer, comprising a nanostructure carrying an anticancer agent on a polymer (pPBA) formed by coupling phenylboronic acid to a maleic anhydride polymer as an active ingredient, It is expected to be widely used in the medical field because it has excellent inhibitory effect on tumor growth in liver cancer.
  • a pharmaceutical composition for the treatment of liver cancer comprising a nanostructure carrying an anticancer agent on a polymer (pPBA) formed by coupling phenylboronic acid to a maleic anhydride polymer as an active ingredient
  • Patent Document 1 Korean Published Patent Application No. 2012-0089892
  • Patent Document 2 Korean Patent Publication No. 2001-0010393
  • Patent Document 3 Korean Patent No. 10-1711127
  • an object of the present invention is to provide a pharmaceutical composition for treating liver cancer comprising a nanostructure on which an anticancer agent is supported.
  • the present invention relates to a pharmaceutical composition
  • a pharmaceutical composition comprising a maleic anhydride polymer to which an anti-cancer agent-carrying nanostructure, more preferably an anti-cancer agent-bearing phenylboronic acid, is bonded,
  • An anhydride polymer effectively transfers an anticancer drug to a target cancer cell, and thus has an excellent effect in inhibiting and treating cancer cell growth.
  • the polymer is preferably a maleic anhydride polymer containing a succinic anhydride moiety, and the phenylboronic acid may be combined with a succinic anhydride moiety to form a drug-binding site.
  • the polymer to which phenylboronic acid binds is preferably a polymer of (poly (methyl vinyl ether-alt-maleic anhydride), pMAnh) series, but it is not limited as long as it is a polymer containing a succinic anhydride moiety after water- Can be used.
  • the molecular weight of the polymer to which phenylboronic acid binds is not limited to 2 kDa to 1000 kDa, 10 kDa to 1000 kDa, 100 kDa to 800 kDa, 200 kDa to 600 kDa, 200 kDa to 500 kDa, 200 kDa to 400 kDa, and preferably 250 kDa to 350 kDa.
  • phenylboronic acid is bonded to polymethyl vinyl ether-alt-maleic anhydride (pMAnh) represented by the following formula (1) Can be synthesized.
  • pMAnh polymethyl vinyl ether-alt-maleic anhydride
  • an aminophenyboronic acid having an amine group bonded thereto may be used to bond a phenylboronic acid to a polymer containing a maleic anhydride moiety.
  • Aminophenylboronic acid is preferably 3-aminophenylboronic acid represented by the following formula (2), but is not limited thereto.
  • the amino group of the aminophenylboronic acid and the maleic anhydride moiety contained in the polymer can be bonded by a ring opening through hydrolysis.
  • a polyphenylboronic acid-maleic anhydride polymer of formula (3) is obtained by bonding aminophenylboronic acid of the maleic anhydride polymer of formula (1) co-maleic anhydride, pPBA) may be used as the polymer contained in the drug delivery system.
  • polymer synthesis can be accomplished by simply mixing the maleic anhydride polymer with aminophenylboronic acid in a solvent such as dimehyl sulfoxide (DMSO) or acetone at room temperature It is very simple and has excellent synthesis efficiency.
  • a solvent such as dimehyl sulfoxide (DMSO) or acetone
  • the polymers of the present invention may be conjugated with hydrophobic drugs comprising phenylboronic acid and comprising a diol or catechol.
  • cancer is characterized by uncontrolled cell growth.
  • Such abnormal cell growth results in the formation of a cell mass, called a tumor, which penetrates into surrounding tissues and, in severe cases, It is transferred to the organ. Academicly, it is also called neoplasia.
  • Cancer is a refractory chronic disease that, even if treated with surgery, radiation, and chemotherapy, often leads to pain, ultimately to death, that can not be healed in a fundamental way.
  • There are many factors that cause cancer but they are divided into internal factors and external factors. It is not known exactly how the normal cells transform into cancer cells, but at least 80 to 90% are known to be affected by external factors such as environmental factors.
  • Internal factors include genetic factors, immunological factors, and external factors include chemicals, radiation, and viruses.
  • Cancer occurs when the balance between them is destroyed by internal or external embryos as described above. Cancer can be classified into various types of cancers such as oral cancer, liver cancer, stomach cancer, colon cancer, breast cancer, lung cancer, bone cancer, pancreatic cancer, skin cancer, head cancer, cervical cancer, skin cancer, cervical cancer, ovarian cancer, Cancer, endometrioid cancer, thyroid cancer, pituitary cancer, adenocarcinoma, soft tissue sarcoma, urethral cancer, penile cancer, endometrioid cancer, endometrioid carcinoma, endometrial carcinoma, vulvar carcinoma, vulvar carcinoma, Hodgkin's disease, The present invention can be classified into prostatic cancer, chronic leukemia, acute leukemia, lymphocytic lymphoma, renal cancer, ureter cancer, renal cell carcinoma, renal pelvic carcinoma, central nervous system tumor, primary central nervous system lymphoma, spinal cord tumor, brainstem glio
  • the nanostructures carrying the anticancer agent of the present invention are effective for cancer treatment by efficiently delivering the anticancer agent to the target cancer cells and are more effective in treating cancer than the other anticancer drugs alone. Do.
  • the anticancer agent is a general term for a chemotherapeutic agent used for the treatment of malignant tumor.
  • Most anticancer drugs interfere with various metabolic pathways of cancer cells and inhibit the synthesis of nucleic acids and exhibit anticancer activity (anticancer activity).
  • anticancer drugs used for cancer treatment are classified into 6 categories according to biochemical mechanism of action.
  • Alkylating agents When acting on a cell with a highly reactive substance capable of introducing an alkyl group R-CH2 into a compound, most of it reacts with the N7 of guanine in DNA to modify the DNA structure, Cuts [chain truncation], and shows the anticancer effect and cytotoxic effect.
  • These drugs include: 1 nitrogene mustard type (system): nitrogene mustard, chlorambucil, melphalan, cyclophosphamide, etc. 2 ethylene imine type: thioether 3 alkyl sulfonate type: Azine and hydrazine systems: DTIC (Takabazin) and Procarbazine 5 Nitrogen Subtotal: BCNU, CCNU, and methyl-CCNU.
  • Antimetabolites Drugs belonging to this group have the action of inhibiting the metabolism necessary for the proliferation of cancer cells.
  • Antibiotics produced by bacteria include adriamycin, daunorubicin, bleomycin, mitomycin-C, and actinomycin-D.
  • Vinyl alkaloids These drugs are cleavage-time specific drugs that stop cell division in the metaphase of mitosis. Vincent Kristin, Vin Blastin, VP-16-213 and VM-26.
  • Hormones Some types of cancer can be treated by hormone therapy. Breast cancer, male hormone, prostate cancer, and progesterone are effective for endometrial cancer, and corticosteroids Is used for the treatment of acute lymphoblastic leukemia and lymphoma. For breast cancer, tamoxifen, an anti-female hormone, is used.
  • the anticancer agent of the present invention is a wide range of anticancer agents including the above-mentioned substrates, preferably a mitotic inhibitor, more preferably an anthracycline or polyphenol anticancer agent, more preferably doxorubicin, epirubicin at least one functional group selected from epirubicin or oleuropein, 1,2-cis-diol, 1,3-cis-diol, and catechol moiety,
  • the present invention is not limited to a particular series.
  • the anthracycline anticancer agent include doxorubicin or epirubicin.
  • Such anthracycline anticancer drugs kill cancer cells by inhibiting cell division by damaging RNA or DNA necessary for cell division.
  • an example of the polyphenolic anticancer agent is not particularly limited as long as it is a drug capable of reversible binding with oleoresin or phenylboronic acid.
  • the anticancer agent of the present invention can be reversibly bound to phenylboronic acid-conjugated maleic anhydride polymer, so that it can be released specifically to liver cancer tissue without affecting other organs by external stimulation or environmental change.
  • a polymer polymer to which a hydrophobic drug is bound to phenylboronic acid is self-assembled by the hydrophobic interaction of phenylboronic acid and a hydrophobic drug to form a nanostructure having a size of 100 to 150 nm .
  • the drug-containing nanostructures can release the drug efficiently into the tumor by changing the acidic conditions and the concentration of ATP.
  • at least 50% of the nanostructures are dissociated within 48 hours in weakly acidic pH and high concentration ATP while neutral pH or low concentration ATP hardly releases the drug in the nanostructure for at least 48 hours The drug can be released.
  • the phenylboronic acid of the nanostructure can specifically recognize and interact with N-acetylnuraminic acid on the surface of the tumor cell, thereby accumulating the drug specifically to the tumor without affecting other organs .
  • the nanostructure of the present invention can dissociate the drug at an acidic condition of pH 5.0 or less, pH 3 to 5, pH 4 to 5, and an ATP concentration of 10 to 100 mM.
  • the nanostructure of the present invention is formed by self-bonding of a polymer polymer to which phenylboronic acid is bonded, and thus may have a very high solubility even when a hydrophobic drug is included.
  • a hydrophobic drug is low in solubility in a water-soluble solvent, so that an organic solvent or a surfactant is used when the hydrophobic drug is dissolved or carried on a carrier for drug delivery.
  • Organic solvents and surfactants are useful for dissolving hydrophobic drugs, but they can cause hemolysis of red blood cells because of their very low blood compatibility, and they can act as toxic substances and cause chronic toxicity throughout the body.
  • the polymer of the present invention can be easily dissolved in a water-soluble solvent in combination with a hydrophobic drug, so that a solvent that can cause bio-toxicity may not be used.
  • poly (phenylboronic acid-co-maleic anhydride) pPBA
  • phenylboronic acid is bonded to polymethylvinylether-alt-maleic anhydride
  • Doxorubicin a hydrophobic anticancer drug
  • the drug delivery effect can be further enhanced by controlling the mole ratio between the drug contained in the nanostructure of the present invention and phenylboronic acid.
  • the molar ratio of phenylboronic acid to drug in the nanostructure is close to 1: 1, the tumor-specific drug delivery effect may be reduced.
  • the nanoblock structure contains more phenylboronic acid than the drug, and the molar ratio of phenylboronic acid to the drug is changed, the tumor-specific drug delivery effect can be further enhanced. It is believed that the higher the amount of phenylboronic acid that is not bound to the drug in the nanostructure, the better it can interact with the N-acetylnuraminic acid of the tumor cells. However, when more phenylboronic acid is contained, it may be difficult to form nanostructures by hydrophobic interaction.
  • the molar ratio of phenylboronic acid to drug in the nanostructure of the present invention is 1: 1 to 10: 1, preferably 1: 1 to 8: 1, more preferably 1: 1 to 6: 1, Is from 1: 1 to 4: 1, more preferably from 2: 1 to 4: 1, but is not limited thereto.
  • the pharmaceutical composition means a composition to be administered for a specific purpose.
  • the pharmaceutical composition of the present invention is a nano-structure which is used for the purpose of treating liver cancer, and which is an anticancer agent-supported nanostructure, more preferably a maleic anhydride polymer to which phenylboronic acid with an anticancer drug is bound, A protein, and a pharmaceutically acceptable carrier, excipient, or diluent.
  • pharmaceutically acceptable carrier or excipient as referred to above means approved by the regulatory agency of the government or listed in government or other generally approved pharmacopoeias for use in vertebrates, and more particularly in humans do.
  • the pharmaceutical compositions may be in the form of a suspension, solution or emulsion in an oily or aqueous carrier, and may be in the form of a solid or semi-solid, and may be in the form of a suspension, stabilizer, , ≪ / RTI >
  • This form can be sterilized and can be a liquid. It can be stable under the conditions of manufacture and storage and can be preserved against the contaminating action of microorganisms such as bacteria or fungi.
  • the pharmaceutical composition may be in the form of a sterile powder for reconstitution with a suitable carrier before use.
  • the pharmaceutical compositions may be presented in unit-dose form, in micro needle patches, in ampoules, or in other unit-dose containers, or in multi-dose containers.
  • the pharmaceutical composition may be stored in a freeze-dried (lyophilized) condition requiring only the addition of a sterile liquid carrier, e.
  • the injection solutions and suspensions may be prepared from sterile powders, granules or tablets.
  • the pharmaceutical compositions of the present invention may be formulated as a liquid, or may be included in the form of a microparticle in a liquid.
  • the pharmaceutical compositions of the present invention comprise the active ingredient of the present invention in a concentration of between 0.001 and 100,000 U / kg of a pharmaceutically acceptable compound and / or mixture.
  • suitable excipients for the pharmaceutical compositions of the present invention include preservatives, suspending agents, stabilizers, dyes, buffers, antimicrobial agents, antifungal agents, and isotonic agents, for example, sugars or sodium chloride.
  • the term "stabilizer” refers to a compound that is optionally used in a pharmaceutical composition of the invention to increase shelf life.
  • the stabilizing agent may be a sugar, an amino acid, a compound, or a polymer.
  • the pharmaceutical compositions may comprise one or more pharmaceutically acceptable carriers.
  • the carrier may be a solvent or a dispersion medium.
  • Non-limiting examples of pharmaceutically acceptable carriers include water, saline, ethanol, polyols (e.g., glycerol, propylene glycol and liquid polyethylene glycols), oils, and suitable mixtures thereof.
  • Parenteral formulations can also be sterilized.
  • sterilization techniques include filtration through a bacteria-inhibiting filter, sterilization of the terminals, incorporation of sterile preparations, irradiation, sterilization gas irradiation, heating, vacuum drying and freeze drying.
  • administration means introducing the composition of the present invention to a patient by any suitable method, and the administration route of the composition of the present invention is administered through any conventional route as long as it can reach the target tissue .
  • Intraperitoneal, intramuscular, subcutaneous, intradermal, intramuscular, intrapulmonary, intrathecal, intrathecal, intraperitoneal, and intradermal administration may be employed, but the anticancer drug of the present invention In the case of a pharmaceutical composition containing an nano-structure carrying thereon as an active ingredient, parenteral administration is preferable.
  • the method of treatment of the present invention may comprise administering the pharmaceutical composition in a pharmaceutically effective amount.
  • the effective amount may be determined depending on the kind of the disease, the severity of the disease, the kind and amount of the active ingredient and other ingredients contained in the composition, the type of the formulation and the age, body weight, general health condition, sex and diet, And the fraction of the composition, the duration of the treatment, the drug being co-administered, and the like.
  • a pharmaceutical composition for the treatment of liver cancer comprising, as an active ingredient, a maleic anhydride polymer having phenylboronic acid bound thereto with an anticancer agent, wherein the maleic anhydride polymer to which phenylboronic acid is conjugated is a maleic anhydride
  • the polymer is formed by the reaction of a succinic acid anhydride moiety of a polymer with an amine-bonded phenyl boronic acid.
  • the anticancer agent preferably comprises at least one functional group selected from 1,2-cis-diol, 1,3-cis-diol, and catechol moiety
  • the pharmaceutical composition for the treatment of liver cancer which is an anthracycline or polyphenolic anticancer agent is more preferably one or more selected from the group consisting of doxorubicin, epirubicin, and oleuropein It is an anticancer drug.
  • the liver cancer includes any one or more selected from the group consisting of hepatocellular carcinoma, biliary epithelial carcinoma, hepatoblastoma, intrahepatic sarcoma, and intrahepatic adenocarcinoma.
  • the above treatment can be used to inhibit the increase in the number of cancer cells, to inhibit the quantitative growth of cancer cells, to kill cancer cells, to maintain the size of cancer tissues, to decrease the size of cancer tissues, Inhibiting angiogenesis, or inhibiting the metastasis of cancer.
  • a method for treating liver cancer comprising the step of administering to a subject a pharmaceutical composition comprising, as an active ingredient, a maleic anhydride polymer having phenylboronic acid bound thereto with an anticancer agent.
  • a method for preparing a pharmaceutical composition comprising the steps of: (a) administering a pharmaceutical composition containing, as an active ingredient, a maleic anhydride polymer having phenylboronic acid bound thereto, (b) administering a combination of a pharmaceutical composition comprising a maleic anhydride polymer having a phenylboronic acid conjugated with an anticancer agent to a second liver cancer entity as an active ingredient, and a candidate substance for the treatment of liver cancer; (c) comparing the hepatocellular carcinoma treatment effect of the first and second entities; And (d) when the effect of the second individual is better than the hepatocarcinoma treatment effect of the first individual, the liver cancer candidate candidate is judged to be a therapeutic agent for liver cancer for the combined administration of the phenylboronic acid-coupled maleic anhydride polymer carrying the anticancer agent A method for screening a co-administered substance for the treatment of liver cancer.
  • composition for a cancer marker comprising a maleic anhydride polymer to which phenylboronic acid with an anti-cancer agent is bound, wherein the maleic anhydride polymer to which the phenylboronic acid is conjugated is a maleic anhydride polymer Wherein the polymer is formed by the reaction of a sulfonic acid anhydride moiety with an amine-bonded phenylboronic acid, wherein the polymer is labeled with a fluorescent probe.
  • the present invention relates to a pharmaceutical composition for the treatment of liver cancer comprising an anti-cancer agent-bearing nanostructure as an active ingredient, wherein the nanostructure carrying the anti-cancer agent on the polymer formed by coupling phenylboronic acid to the maleic anhydride polymer of the present invention is a cancer, It has excellent tumor growth inhibitory effect on liver cancer, excellent drug delivery effect to tumor site, and can specifically function as a tumor marker because it binds to cancer cells stably, and is stably metabolized in living body, .
  • FIG. 1 is a schematic view showing a process for synthesizing a maleic anhydride polymer (pPBA) to which phenylboronic acid is bonded, according to an embodiment of the present invention.
  • PBA maleic anhydride polymer
  • FIG. 2 is a graph showing the 1 H-NMR spectrum of pPBA according to an embodiment of the present invention.
  • FIG. 3 is a schematic view illustrating a process of forming and destroying a pPBA-DOX nanostructure according to an embodiment of the present invention.
  • 4 is a transmission electron micrograph of a nanostructure containing phenylboronic acid and doxorubicin in a molar ratio of 4: 1 according to an embodiment of the present invention.
  • FIG. 5 is a graph showing a cell inflow form of a nanostructure (pPBA-DOX) according to a molar ratio of phenylboronic acid and doxorubicin, according to an embodiment of the present invention.
  • FIG. 6 is a graph showing the cytotoxic effect of pPBA-DOX in liver cancer cell line according to an embodiment of the present invention.
  • FIG. 7 is a diagram showing the biodistribution of pPBA-DOX in a liver cancer mouse model according to an embodiment of the present invention.
  • FIG. 8 is a graph showing a change in tumor volume from a liver cancer mouse model to 15 days after administration of a drug, according to an embodiment of the present invention.
  • FIG. 9 is a diagram showing the actuality of a tumor after 15 days of drug administration in a liver cancer mouse model, according to an embodiment of the present invention.
  • FIG. 10 is a graph showing the results of measurement of alanine aminotransferase (ALT) and aspartate aminotransferase (AST) in serum after 15 days of drug administration in a liver cancer mouse model according to an embodiment of the present invention.
  • ALT alanine aminotransferase
  • AST aspartate aminotransferase
  • Amino-3-aminophenylboronic acid monohydrate (PBA-NH) was prepared by reacting maleic anhydride with phenyl boronic acid having a molecular weight of 80,000 and coupled with an amine group such as poly (methyl vinyl ether-alt-maleic anhydride) 2) was prepared., was synthesized in the same way as the boronic acid is a maleic anhydride polymer is 1 binding.
  • a pMAnh (3.2mmol include succinic anhydride) 500mg in DMSO (dimethyl sulfoxide).
  • Doxorubicin (DOX) was mixed with aqueous solution of DMSO at room temperature with poly (phenylboronic acid-co-maleic anhydride) and drug (anticancer agent). The drug was loaded through the binding of doxorubicin to the phenyl boronic acid of pPBA.
  • FIG. 3 shows a schematic diagram of the formation and destruction of the pPBA-DOX nanostructure.
  • Formation of the nanostructure is accomplished by charge sharing between the phenyl boronic acid of pPBA and the 1,3-diol of doxorubicin, and the formation of boronic acid esters.
  • the destruction of the nanostructures is induced by the weakening of the binding strength of the boronic esters, resulting in the release of doxorubicin.
  • the concentration of loaded doxorubicin and the molar ratio of phenylboronic acid and doxorubicin could be controlled by adjusting the amount of each of pPBA and doxorubicin added during doxorubicin loading.
  • 880 ⁇ l of DPBS was added to synthesize a nanostructure having a final concentration of doxorubicin of 5 mM and a mole ratio of phenylboronic acid to doxorubicin of 1: 1.
  • a nanostructure containing phenylboronic acid and doxorubicin in a molar ratio of 2: 1 or a molar ratio of 4: 1 could be prepared by the same method using 100 mM pPBA.
  • nanostructure of phenylboronic acid and doxorubicin at 4: 1 molar ratio was confirmed by transmission electron microscope (TEM, JEM-2210, JEOL) to confirm formation of nanostructure of about 70 nm. This is shown in FIG.
  • Example 2-1 Anticancer drug Supported Confirmation of cell inflow pattern of nanostructure
  • MCF-7 human breast cancer cell line
  • PC-3 human prostate cancer cell line
  • the cells were further cultured for 30 minutes in a serum-free medium containing (w / o) 5 mmol / L PBA-NH2 as a competitor pretreatment or without (w /) and the medium was cultured for 1 hour in a 1: 1 molar ratio of phenylboronic acid and doxorubicin (PPBA-DOX 1: 1 complex), a 2: 1 nanostructure (pPBA-DOX 2: 1 complex) or a 4: 1 nanostructure (pPBA-DOX 4: 1 complex) And cultured for another 4 hours.
  • the concentration of doxorubicin was adjusted to be 2 [mu] mol / L.
  • FCR648-pPBA FCR648-labeled pPBA
  • nanostructure eg, pPBA-DOX 2: 1 complex
  • doxorubicin eg, pPBA-DOX 2: 1 complex
  • Example 2-2 Anticancer drug Supported Nano-structured liver cancer treatment effect confirmation
  • doxorubicin When doxorubicin alone was treated, cytotoxicity was increased with increasing concentration in all cells regardless of disease or not.
  • the pPBA-DOX 1: 1 complex and the pPBA-DOX 2: 1 complex also showed a tendency to increase cytotoxicity with increasing concentrations as doxorubicin.
  • the pPBA-DOX complex is effective in the treatment of hepatocellular carcinoma with a lower concentration of drug than does doxorubicin alone and is effective in all hepatocellular carcinomas regardless of hepatocellular carcinoma or adenocarcinoma it means.
  • the animal experiment of the present invention was carried out in accordance with the guidelines of the Ethical Committee of Experimental Animals of the Catholic University of Korea.
  • 1 ⁇ 10 6 cells / mouse of Hepa1-6 hepatoma cell line was subcutaneously injected into the right thigh of a C57 / B6 mouse (male, 6-8 weeks old) and when the average volume of cancer tissue reached about 300 mm 3
  • the concentration was adjusted to be 3 mg / kg, and the free pPBA or pPBA of the pPBA-DOX group was labeled with pCRBA or unlabeled pPBA.
  • Example 3-2 Anticancer drug Supported Determination of bio-distribution of nanostructures
  • mice treated with liver cancer as described in Example 3-1 and administered with drugs as shown in Table 3 were administered IVIS spectral small animal in vivo imaging system (Califer Lifescience, Hopkinton, MA) at the 1st, 3rd or 7th day of drug administration, , And the fluorescence intensity was measured. The results are shown in Fig.
  • Example 3-3 Anticancer drug Supported Nano-structured liver cancer treatment effect confirmation
  • mice were modeled as liver cancer by the method of Example 3-1 and the drug-administered mice as shown in Table 3 were followed up for 15 days after the administration of the drug.
  • Tumor volume ab 2/2 were recorded in accordance with (a length, b is the width) of the formula.
  • Experimental results show that the tumor volume in mice treated with No-treat or Free pPBA significantly increased over time, while that of mice treated with Free DOX or pPBA-DOX showed a slight increase in tumor volume I could.
  • the tumor volume was decreased in the order of No-treat, Free pPBA, Free DOX, and pPBA-DOX, and pPBA-DOX showed the greatest inhibitory effect on tumor growth.
  • mice were sacrificed to separate the tumor and the actual tumor was shown in Fig.
  • the presence of tumor showed that tumor volume was smaller in the order of No-treat, Free pPBA, Free DOX, and pPBA-DOX, indicating that pPBA-DOX is the most effective inhibitor of tumor growth.
  • Example 3-4 Anticancer drug Supported Determination of liver toxicity of nanostructures
  • liver function values alanine aminotransferase (ALT) and aspartate aminotransferase (AST) were measured to determine whether the nanostructures carrying the anticancer drug induced liver toxicity or drug toxicity in the liver cancer mouse model. Specifically, the mice were modeled as hepatocellular carcinoma by the method of Example 3-1, and drug-administered mice as shown in Table 3 were administered with drug for 15 days. Serum of the mouse model was collected and the liver function values ALT and AST were measured.
  • the free pPBA and pPBA-DOX appeared almost the same as the ALT and AST values of Normal and No-treat, so that the nanostructures carrying the anticancer drug showed no liver toxicity.
  • the phenylboronic acid-coupled maleic anhydride polymer of the present invention can function as a cancer cell marker, and the maleic anhydride polymer conjugated with doxorubicin-supported phenylboronic acid is used for the treatment of liver cancer , It was found that the therapeutic effect of liver cancer was superior to that of free form of doxorubicin.

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Abstract

본 발명은 항암제가 담지된 나노구조체를 포함하는 간암 치료용 약학조성물에 관한 것으로, 보다 구체적으로, 말레산 무수물 중합체에 페닐보론산이 결합되어 형성된 중합체(pPBA)에 항암제를 담지한 나노구조체를 유효성분으로 포함하는 간암 치료용 약학조성물에 관한 것이다. 본 발명의 나노구조체는 암, 특히 간암에서 종양 증식 억제 효과가 우수하고, 종양 부위로의 약물 전달 효과가 우수하며, 암 세포와 특이적으로 결합하므로 종양 표지자로 기능할 수 있으며, 생체에서 안정적으로 대사되므로, 의학 분야에서 크게 이용될 것으로 기대된다.

Description

항암제가 담지된 나노구조체를 유효성분으로 포함하는 간암 치료용 약학조성물
본 출원은 2017년 12월 21일자 한국 특허 출원 제10-2017-0176937호에 기초한 우선권의 이익을 주장하며, 해당 한국 특허 출원의 문헌에 개시된 모든 내용은 본 명세서의 일부로서 포함한다.
본 발명은 항암제가 담지된 나노구조체를 포함하는 간암 치료용 약학조성물에 관한 것이다.
최근 의학분야에서는 질병의 진단(diagnosis) 및 치료(therapy)를 동시에 수행할 수 있는 나노메디컬시스템(nanomedical system)에 대한 연구가 활발하게 진행되고 있다. 이를 질병의 진단 및 치료를 동시에 수행한다는 의미에서 "테라노시스(Theranosis; Therapy+Diagnosis)"라 한다. 질병의 진단분야에 있어서는 단순한 병변에 대한 분석보다는 조기진단의 신뢰도 향상에 대한 필요성이 대두되고 있어, 나노기술이 바이오 및 의료기술과 접목된 다양한 나노메디슨(nanomedicine) 분야가 개발되고 있고, 질병의 치료분야에서는 현재까지 개발된 다양한 합성약물 및 바이오의약품(단백질, 핵산, 세포 등)을 질병부위에 선택적으로 전달함으로써, 부작용을 최소화할 수 있는 맞춤형 전달시스템에 대한 기술개발이 활발하게 진행되고 있다. 예를 들어, 한국 공개특허 제2012-0089892호나 제2001-0010393호와 같은 특허에서 소수성 약물 전달을 위한 고분자 전달체를 개시하고 있고, 한국 등록특허 제10-1711127호에서 암 표적화된 항암제 결합 산화철 나노입자 복합체를 개시하고 있으나, 아직까지 간암 특이적인 표적 치료제로서의 나노구조체에 대한 개발은 미비한 실정이다.
한편, 페닐보론산(Phenylboronic acid)은 보론산의 R그룹이 벤젠그룹으로 치환된 분자로, cis-diol 혹은 catechol 구조를 가지는 분자와 중성에서 선택적인 가역적 공유결합을 형성할 수 있다. 말레산 무수물 중합체는 amine 이나 hydroxyl과 같은 친핵성 치환 반응을 유도하는 작용기와 손쉽게 반응하여, 다양한 단분자를 고분자의 주사슬에 도입할 수 있는 장점을 가지고 있다.
따라서 본 발명은 말레산 무수물 중합체에 페닐보론산이 결합되어 형성된 중합체(pPBA)에 항암제를 담지한 나노구조체를 유효성분으로 포함하는 간암 치료용 약학조성물에 관한 것으로, 본 발명의 나노구조체는 암, 특히 간암에서 종양 증식 억제 효과가 우수하므로, 의학 분야에서 크게 이용될 것으로 기대된다.
[선행기술문헌]
[특허문헌]
(특허문헌 1) 한국 공개특허 제2012-0089892호
(특허문헌 2) 한국 공개특허 제2001-0010393호
(특허문헌 3) 한국 등록특허 제10-1711127호
본 발명은 상기와 같은 종래의 기술상의 문제점을 해결하기 위해 안출된 것으로, 항암제가 담지된 나노구조체를 포함하는 간암 치료용 약학조성물에 관한 것이다.
그러나 본 발명이 이루고자 하는 기술적 과제는 이상에서 언급한 과제에 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 과제들은 아래의 기재로부터 당 업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.
이하, 본원에 기재된 다양한 구체예가 도면을 참조로 기재된다. 하기 설명에서, 본 발명의 완전한 이해를 위해서, 다양한 특이적 상세사항, 예컨대, 특이적 형태, 조성물 및 공정 등이 기재되어 있다. 그러나, 특정의 구체예는 이들 특이적 상세 사항 중 하나 이상 없이, 또는 다른 공지된 방법 및 형태와 함께 실행될 수 있다. 다른 예에서, 공지된 공정 및 제조 기술은 본 발명을 불필요하게 모호하게 하지 않게 하기 위해서, 특정의 상세사항으로 기재되지 않는다. "한 가지 구체예" 또는 "구체예"에 대한 본 명세서 전체를 통한 참조는 구체예와 결부되어 기재된 특별한 특징, 형태, 조성 또는 특성이 본 발명의 하나 이상의 구체예에 포함됨을 의미한다. 따라서, 본 명세서 전체에 걸친 다양한 위치에서 표현된 "한 가지 구체예에서" 또는 "구체예"의 상황은 반드시 본 발명의 동일한 구체예를 나타내지는 않는다. 추가로, 특별한 특징, 형태, 조성, 또는 특성은 하나 이상의 구체예에서 어떠한 적합한 방법으로 조합될 수 있다.
명세서에서 특별한 정의가 없으면 본 명세서에 사용된 모든 과학적 및 기술적인 용어는 본 발명이 속하는 기술분야에서 당업자에 의하여 통상적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 가진다.
본 발명은 항암제가 담지된 나노구조체, 보다 바람직하게는 항암제가 담지된 페닐보론산이 결합된 말레산 무수물 중합체를 포함하는 약학조성물에 관한 것으로, 본 발명의 항암제가 담지된 페닐보론산이 결합된 말레산 무수물 중합체는 타겟 암세포로 항암제를 효율적으로 전달하므로, 암세포 성장 억제 및 치료에 우수한 효과가 있다.
보다 구체적으로, 상기의 고분자는 석신산 무수물 모이어티(moiety)를 포함하고 있는 말레산 무수물 중합체가 바람직하며, 페닐보론산이 석신산 무수물 모이어티와 결합하여 약물 결합 부위를 형성할 수 있다.
본 발명에서 페닐보론산이 결합하는 고분자는 (Poly(methyl vinyl ether-alt-maleic anhydride), pMAnh)계열의 고분자가 바람직하나 가수분해 후 수용성이고 석신산 무수물 모이어티를 포함하고 있는 고분자라면 제한되지 않고 사용할 수 있다.
본 발명에서 페닐보론산이 결합하는 고분자의 분자량은 2kDa 내지 1000kDa, 10kDa 내지 1000kDa, 100kDa 내지 800kDa, 200kDa 내지 600kDa, 200kDa 내지 500kDa, 200kDa 내지 400kDa 바람직하게는 250kDa 내지 350kDa이나 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 일 실시예에 따르면, 아래 [화학식 1]로 표현되는 폴리 메틸 비닐 에터-알트-말레산 무수물(Poly(methyl vinyl ether-alt-maleic anhydride), pMAnh)에 페닐보론산이 결합하여 중합체를 합성할 수 있다.
[화학식 1]
Figure PCTKR2018016363-appb-I000001
(n은 20 내지 5000이다.)
본 발명의 일 구체예에 따르면, 말레산 무수물 모이어티를 포함하고 있는 고분자에 페닐보론산을 결합하기 위해서 아민기가 결합된 아미노 페닐보론산(aminophenyboronic acid)을 사용할 수 있다. 아미노 페닐보론산은 아래 [화학식 2]로 표현되는 3-아미노 페닐보론산이 바람직하나 이에 제한되는 것은 아니다.
[화학식 2]
Figure PCTKR2018016363-appb-I000002
아미노 페닐보론산의 아미노기와 고분자에 포함된 말레산 무수물 모이어티가 가수분해를 통한 고리열림 반응(ring opening)으로 결합할 수 있다. 본 발명의 일 실시예에 따르면 [화학식 1]의 말레산 무수물 중합체[화학식 2]의 아미노 페닐보론산의 결합에 의해 [화학식 3]의 폴리 페닐보론산-말레산 무수물 중합체(poly(phenylboronic acid-co-maleic anhydride), pPBA)를 약물전달체에 포함되는 중합체로 사용할 수 있다. 본 발명의 일 실시예에 따르면, 중합체 합성은 상온에서 다이메틸설폭사이드(dimehyl sulfoxide, DMSO)나 아세톤(acetone)과 같은 용매 내에서 단순히 말레산 무수물 중합체와 아미노 페닐보론산의 혼합을 통해 이루어질 수 있기 때문에 매우 간단하며, 합성 효율도 우수하다.
[화학식 3]
Figure PCTKR2018016363-appb-I000003
(상기 화학식 3에서 x는 20 내지 5000의 정수이고, y는 20 내지 5000의 정수이다.)
본 발명의 중합체는 페닐보론산이 결합되어 있어 다이올(diol) 또는 카테콜(catechol)을 포함하는 소수성 약물과 결합할 수 있다.
본 발명의 일 구체예에서 암이란, 제어되지 않은 세포성장으로 특징지어지며, 이러한 비정상적인 세포성장에 의해 종양(tumor)이라고 불리는 세포 덩어리가 형성되어 주위의 조직으로 침투하고, 심한 경우에는 신체의 다른 기관으로 전이되는 것이다. 학문적으로는 신생물(neoplasia)이라고도 불린다. 암은 수술, 방사선 및 화학요법으로 치료를 하더라도 많은 경우에 근본적인 치유가 되지 못하고 환자에게 고통을 주며, 궁극적으로는 죽음에 이르게 하는 난치성 만성질환이다. 암의 발생요인으로는 여러 가지가 있으나, 내적 요인과 외적 요인으로 구분하기도 한다. 정상세포가 어떠한 기전을 거처 암세포로 형질전환이 되는지에 대해서는 정확하게 규명되지 않았으나, 적어도 80 내지 90%가 환경요인 등 외적인자에 의해 영향을 받아 발생하는 것으로 알려져 있다. 내적 요인으로는 유전 인자, 면역학적 요인 등이 있으며, 외적 요인으로는 화학물질, 방사선, 바이러스 등이 있다. 암의 발생에 관련되는 유전자에는 종양형성유전자(oncogenes)와 종양억제유전자(tumor suppressor genes)가 있는데, 이들 사이의 균형이 상기에 기술된 내적 혹은 외적 용인들에 의해 무너질 때 암이 발생하게 된다. 암은 그 발생 부위에 따라 구강암, 간암, 위암, 결장암, 유방암, 폐암, 골암, 췌장암, 피부암, 두부암, 경부암, 피부암, 자궁경부암, 난소암, 대장암, 소장암, 직장암, 나팔관암종, 항문부근암, 자궁내막암종, 질암종, 음문암종, 호지킨병(Hodgkin's disease), 식도암, 임파선암, 방광암, 담낭암, 내분비선암, 갑상선암, 부갑상선암, 부신암, 연조직 육종, 요도암, 음경암, 전립선암, 만성 백혈병, 급성 백혈병, 림프구 림프종, 신장암, 수뇨관암, 신장세포암종, 신장골반암종, 중추신경계 종양, 1차 중추신경계 림프종, 척수 종양, 뇌간 신경교종 및 뇌하수체 선종으로 구분할 수 있다.
본 발명의 항암제가 담지된 나노구조체는 타겟 암세포로 항암제를 효율적으로 전달하여 항암제를 단독으로 투여하는 것보다 암 치료에 현저하며, 특히 간암에서 기타 암에 비하여 암세포의 성장 억제 및 암 치료 효과가 현저하다.
본 발명의 일 구체예에서 항암제란, 악성종양의 치료를 위하여 사용되는 화학요법제의 총칭이다. 대부분의 항암제는 암세포의 각종 대사경로(代謝經路)에 개입하여 주로 핵산의 합성을 억제하거나 항암활성(抗癌活性)을 나타내는 약제이다. 현재 암치료에 사용되고 있는 항암제는 생화학적인 작용 기전에 따라 6개의 범주로 분류하고 있다.
(1) 알킬화제(alkylating agents): 어떤 화합물에 알킬기 R-CH2를 도입할 능력을 갖춘, 반응성이 대단히 높은 물질로 세포에 작용시키면 대부분은 DNA의 구아닌의 N7과 반응하여 DNA구조를 변형시키고, 사슬절단[鎖切斷]을 일으켜 항암효과 및 세포독효과를 나타낸다. 여기에 속하는 약물로는, ① 나이트로젠머스터드계(系): 나이트로젠 머스타드·클로람부실·멜팔란·사이클로포스파마이드 등 ② 에틸렌이민계: 싸이오테파 ③ 알킬설포네이트계: 부설판 ④ 트라이아진계·하이드라진계: DTIC(다카바진)·프로카바진 ⑤ 나이트로소요소계: BCNU, CCNU, 메틸-CCNU 등이 있다.
(2) 대사길항제(代謝拮抗劑: antimetabolites): 이 군(群)에 속하는 약물은 암세포의 증식에 필요한 대사과정을 저해하는 작용을 가진 것으로 ① 엽산유도체: 메소트렉세이트(MTX) ② 퓨린 유도체: 6-메르캅토퓨린(6-MP), 6-싸이오구아닌 ③ 피리미딘 유도체: 5-플루오로우라실, 시타라빈 등이 있다.
(3) 항생물질(抗生物質: antibiotics): 세균에서 생산되는 항생물질 가운데 항암작용을 나타내는 것으로는 아드리아마이신, 다우노루비신, 블레오마이신, 미토마이신-C, 악티노마이신-D 등이 있다.
(4) 유사분열억제제(有絲分裂抑制劑: vinca alkaloid): 이들 약물은 분열시기 특이성 약물로서 유사분열 시기 중 중기(metaphase)에서 세포분열을 중지시킨다. 빈크리스틴, 빈블라스틴, VP-16-213 및 VM-26이 있다.
(5) 호르몬제: 어떤 종류의 암은 호르몬을 투여함으로써 치료효과를 볼 수 있는데, 남성호르몬을 사용하는 경우는 유방암, 여성호르몬은 전립선암, 프로게스테론은 자궁내막암에 효과가 있으며, 부신피질호르몬은 급성림프성 백혈병이나 림프종(腫)의 치료에 사용하고 있고, 유방암에 대해서는 항여성 호르몬제인 타목시펜이 쓰이고 있다.
(6) 기타: 시스플라틴, L-아스파라지네이스, o,p-DDD 등이 있다. 이상과 같이 현재 암치료에 사용되고 있는 항암제는 40여 종으로서 각각의 약제마다 그 항암범위에는 큰 차이가 있다.
본 발명의 항암제는 상기의 기재를 포함하는 광범위한 항암제이며, 바람직하게는 유사분열억제제이고, 더욱 바람직하게는 안트라사이클린계 또는 폴리페놀계 항암제이며, 더욱 바람직하게는 독소루비신(Doxorubicin), 에피루비신(epirubicin) 또는 올레오루페인(oleuropein)이나, 1,2-cis-diol, 1,3-cis-diol, 및 카테콜(catechol) 모이어티(moiety)로부터 선택된 어느 하나 이상의 작용기(functional group)를 포함하는 약물이라면 제한되지 않고 사용될 수 있으며, 특정한 계열에 한정하는 것은 아니다. 여기서, 안트라사이클린계 항암제로는 독소루비신 또는 에피루비신을 예로 들수 있다. 이러한 안트라사이클린계 항암제는 세포 분열에 필요한 RNA나 DNA 등을 손상시켜 세포 분열을 억제하는 방법으로 암세포를 사멸시킨다. 한편, 폴리페놀계 항암제의 예로는 올레오루페인이나, 페닐보론산과 가역적 결합이 가능한 약물이라면, 특별히 제한되지 않는다. 또한, 본 발명의 항암제는 페닐보론산이 결합된 말레산 무수물 중합체와 가역적 결합이 가능하므로, 외부자극 또는 환경변화를 주어 다른 기관에 영향을 주지 않으면서 간암 조직에 특이적으로 방출될 수 있다.
본 발명에 따르면, 페닐보론산에 소수성 약물이 결합한 고분자 중합체는 페닐보론산 및 소수성 약물의 소수성 상호작용에 의한 자가-결합(self-assembly)으로 약물을 포함한 100 내지 150nm 크기의 나노구조체를 형성할 수 있다. 약물을 포함한 나노구조체는 산성 조건 및 ATP의 농도 변화에 의해 약물을 효율적으로 종양에 방출할 수 있다. 본 발명의 일 실시예에 따르면, 중성 pH나 저농도의 ATP에서는 적어도 48시간 동안은 나노구조체에서 약물이 거의 방출되지 않는 반면, 약산성 pH 및 고농도 ATP에서는 48시간 이내에 최소 70% 이상의 나노구조체가 해리되어 약물을 방출할 수 있다. 그리고, 나노구조체의 페닐보론산은 종양 세포 표면의 N-아세틸뉴라민산(N-acetylnuraminic acid)을 특이적으로 인식하여 상호작용할 수 있어, 다른 기관에 영향을 주지 않고 종양 특이적으로 약물을 축적할 수 있다.
본 발명의 나노구조체는 pH 5.0이하, pH 3 내지 5, pH 4 내지 5의 산성 조건 및 10 내지 100 mM의 ATP 농도에서 해리되어 약물을 전달할 수 있다.
본 발명의 나노구조체는 페닐보론산이 결합된 고분자 중합체의 자가 결합으로 형성되어 소수성 약물이 포함되어 있어도 매우 용해도를 가질 수 있다. 일반적으로 소수성 약물은 수용성 용매에서 용해도가 낮아 소수성 약물을 용해하거나, 약물 전달을 위한 캐리어(carrier)에 담지할 때 유기 용매, 계면활성제를 사용한다. 유기 용매나 계면활성제는 소수성 약물을 용해시키는데 유용하나, 혈액적합도가 매우 낮아 적혈구의 용혈(hemolysis)을 유발할 수 있고, 독성 물질로 작용하여 신체 전반에 만성 독성도 유발할 수 있다. 그러나, 본 발명의 중합체는 소수성 약물과 결합하여 수용성 용매에서 쉽게 용해될 수 있어 생체 독성을 유발할 수 있는 용매를 사용하지 않을 수 있다. 본 발명의 일 실시예에 따르면, 폴리 메틸 비닐 에터-알트-말레산 무수물에 페닐보론산을 결합한 폴리 페닐보론산-말레산 무수물 중합체(poly(phenylboronic acid-co-maleic anhydride), pPBA)로 인하여 소수성 항암제인 독소루비신이 수용성 용매에서도 쉽게 용해될 수 있다. 그리하여, 유기용매나 계면활성제를 사용하지 않아도 소수성 약물이 포함된 나노구조체를 형성할 수 있고, 용혈 현상이 거의 없어 혈액 적합성도 매우 높다.
본 발명의 나노구조체에 포함된 약물과 페닐보론산의 몰비(mole ratio)를 조절하여 약물 전달 효과를 더 상승시킬 수 있다. 본 발명의 일 실시예에 따르면, 나노구조체에서 페닐보론산과 약물의 몰비가 1:1에 근접하게 포함될수록 종양 특이적인 약물 전달 효과는 감소할 수 있다. 그러나, 나노구조체에 페닐보론산이 약물보다 더 많이 포함되고, 페닐보론산과 약물의 몰비가 변할수록 종양 특이적 약물 전달 효과가 보다 상승할 수 있다. 이는 나노구조체에서 약물과 결합하지 않은 페닐보론산이 증가할수록 종양 세포의 N-아세틸뉴라민산(N-acetylnuraminic acid)과 더 잘 상호작용할 수 있기 때문으로 여겨진다. 그러나, 페닐보론산이 더 많이 포함되는 경우 소수성 상호작용에 의한 나노구조체 형성이 어려울 수 있다.
본 발명의 나노구조체에서 페닐보론산과 약물의 몰비는 1:1 내지 10:1이고, 바람직하게는 1:1 내지 8:1이며, 더욱 바람직하게는 1:1 내지 6:1이며, 더욱 바람직하게는 1:1 내지 4:1이며, 더욱 바람직하게는 2:1 내지 4:1이나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 일 구체예에서 약학조성물이란, 특정한 목적을 위해 투여되는 조성물을 의미한다. 본 발명의 목적상, 본 발명의 약학조성물은 간암 치료 목적으로 사용되고, 항암제가 담지된 나노구조체인 것이며, 보다 바람직하게는 항암제가 담지된 페닐보론산이 결합된 말레산 무수물 중합체인 것이며, 이에 관여하는 단백질 및 약학적으로 허용 가능한 담체, 부형제 또는 희석제를 포함할 수 있다. 상기의 "약학적 허용될 가능한" 담체 또는 부형제는 정부의 규제부에 의해 승인된 것이나, 또는 척추 동물, 그리고 보다 특별하게는 인간에게 사용을 위한 정부 또는 기타 일반적으로 승인된 약전에서 리스트된 것을 의미한다.
비경구적인 투여에 적절하도록 약학조성물은 유성 또는 수성 담체에 있는 현탁액, 용액 또는 에멀젼의 형태로 될 수 있고, 고체 또는 반고체의 형태로 제조될 수 있으며, 현탁제, 안정화제, 용해제 및/또는 분산제와 같은 제형화제를 포함할 수 있다. 본 형태는 멸균될 수 있고, 액체일 수 있다. 이것은 제조 및 저장의 조건 하에서 안정할 수 있고 그리고 세균이나 곰팡이와 같은 미생물의 오염 작용에 대해 보존될 수 있다. 대안적으로, 약학조성물은 사용 전에 적절한 담체와 재구성을 위해 멸균 분말 형태일 수 있다. 약학조성물은 단위-복용량 형태로, 마이크로니들 패치에, 앰플에, 또는 기타 단위-복용량 용기에, 또는 다-복용량 용기에 존재할 수 있다. 또한, 약학적 조성물은 단지 멸균 액체 담체, 예를 들어 사용 바로 전에 주사용 물의 부가함을 요하는 동결-건조된(냉동건조) 상태로 보관될 수 있다. 즉시 주사용액 및 현탁액은 멸균 분말, 그래뉼 또는 타블렛으로 제조될 수 있다.
몇몇 비 제한적인 실시형태에 있어서, 본 발명의 약학조성물은 액체로 제형화되어 질 수 있고, 또는 액체 속에 미립구의 형태로 포함될 수 있다. 어떤 비 제한적인 실시형태에 있어서, 본 발명의 약학조성물은 본 발명의 유효성분을 약학적으로 허용될 수 있는 화합물 및/또는 혼합물을 0.001 내지 100,000 U/kg 사이의 농도로 포함한다. 또한 어떤 비 제한적인 실시형태에 있어서, 본 발명의 약학조성물에 적절한 부형제는 보존제, 현탁제, 안정화제, 염료, 완충제, 항균제, 항진균제, 및 등장화제, 예를 들어, 설탕 또는 염화나트륨을 포함한다. 여기서 사용된 것으로, 용어 "안정화제"는 보존 수명을 증가하기 위해 본 발명의 약학적 조성물에 선택적으로 사용된 화합물을 언급한다. 비-제한적인 실시에 있어서, 안정화제는 당, 아미노산, 화합물, 또는 폴리머일 수 있다. 약학적 조성물은 하나 또는 그 이상의 약학적으로 허용될 수 있는 담체를 포함할 수 있다. 담체는 용매 또는 분산 배지일 수 있다. 약학적으로 허용될 수 있는 담체의 비-제한적인 예는 물, 식염수, 에탄올, 폴리올 (예, 글리세롤, 프로필렌 글리콜 및 액체 폴리에틸렌 글리콜), 오일, 및 이들의 적절한 혼합물을 포함한다. 또한 비경구용 제형은 멸균될 수 있다. 멸균 기술의 비-제한적인 예는 세균-억제 필터를 통한 여과, 터미날 멸균화, 멸균 제제의 합체, 방사선 조사, 멸균 가스 조사, 가열, 진공 건조 및 동결 건조를 포함한다.
본 발명의 일 구체예에서 투여란, 어떠한 적절한 방법으로 환자에게 본 발명의 조성물을 도입하는 것을 의미하며, 본 발명의 조성물의 투여경로는 목적 조직에 도달할 수 있는 한 어떠한 일반적인 경로를 통하여 투여될 수 있다. 경구 투여, 복강 내 투여, 정맥 내 투여, 근육 내 투여, 피하 투여, 피내 투여, 비내 투여, 폐내 투여, 직장내 투여, 강내 투여, 복강 내 투여, 경막 내 투여가 이루어질 수 있으나, 본 발명의 항암제가 담지된 나노구조체를 유효성분으로 포함하는 약학조성물의 경우, 비경구 투여가 바람직하다.
본 발명의 치료 방법은 상기 약학조성물을 약제학적 유효량으로 투여하는 것을 포함할 수 있다. 본 발명에서 유효량은 질환의 종류, 질환의 중증도, 조성물에 함유된 유효 성분 및 다른 성분의 종류 및 함량, 제형의 종류 및 환자의 연령, 체중, 일반 건강 상태, 성별 및 식이, 투여 시간, 투여 경로 및 조성물의 분비율, 치료 기간, 동시 사용되는 약물을 비롯한 다양한 인자에 따라 조절될 수 있다.
본 발명의 일 구체예에서, 항암제가 담지된 페닐보론산이 결합된 말레산 무수물 중합체를 유효성분으로 포함하는 간암 치료용 약학조성물을 제공하고, 상기 페닐보론산이 결합된 말레산 무수물 중합체는 말레산 무수물 중합체의 석신산 무수물 모이어티(moiety)와 아민이 결합된 페닐보론산의 반응으로 형성된 것인 간암 치료용 약학조성물을 제공한다.
이러한 경우에, 상기 항암제는 바람직하게는 1,2-cis-diol, 1,3-cis-diol, 및 카테콜(catechol) 모이어티(moiety)로부터 선택된 어느 하나 이상의 작용기(functional group)를 포함하는 안트라사이클린계 또는 폴리페놀계 항암제인 간암 치료용 약학조성물이고, 보다 바람직하게는 독소루비신(doxorubicin), 에피루비신(epirubicin), 및 올레오루페인(oleuropein)으로 구성되는 그룹으로부터 선택되는 어느 하나 이상인 항암제이다.
상기 간암은 간세포암종, 담관상피암종, 간모세포종, 간내 혈관육종, 및 간내 선암으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 어느 하나 이상을 포함한다.
상기의 치료는 암세포의 수적 증가를 억제시키거나, 암세포의 양적 증식을 억제시키거나, 암세포를 사멸시키거나, 암 조직의 크기를 유지시키거나, 암 조직의 크기를 감소시키거나, 암 조직 내의 신생혈관 발달을 억제하거나, 또는 암의 전이를 억제하는 것 중 어느 하나 이상을 포함한다.
본 발명의 다른 구체예에서, 개체에 항암제가 담지된 페닐보론산이 결합된 말레산 무수물 중합체를 유효성분으로 포함하는 약학조성물을 투여하는 단계를 포함하는 간암 치료 방법을 제공한다.
본 발명의 또 다른 구체예에서, (a) 제 1 간암 개체에 항암제가 담지된 페닐보론산이 결합된 말레산 무수물 중합체를 유효성분으로 포함하는 약학조성물을 단독 투여하는 단계; (b) 제 2 간암 개체에 항암제가 담지된 페닐보론산이 결합된 말레산 무수물 중합체를 유효성분으로 포함하는 약학조성물과 간암 치료용 후보물질을 병용 투여하는 단계; (c) 제 1 개체와 제 2 개체의 간암 치료 효과를 비교하는 단계; 및 (d) 제 1 개체의 간암 치료 효과보다 제 2 개체의 효과가 좋을 경우, 상기 간암 치료용 후보물질을 항암제가 담지된 페닐보론산이 결합된 말레산 무수물 중합체의 병용 투여용 간암 치료 물질로 판단하는 단계를 포함하는 간암 치료용 병용 투여 물질의 스크리닝 방법을 제공한다.
본 발명의 또 다른 구체예에서, 항암제가 담지된 페닐보론산이 결합된 말레산 무수물 중합체를 포함하는 암 표지용 조성물을 제공하고, 상기 페닐보론산이 결합된 말레산 무수물 중합체는 말레산 무수물 중합체의 석신산 무수물 모이어티(moiety)와 아민이 결합된 페닐보론산의 반응으로 형성된 것인 암 표지용 조성물을 제공하며, 상기 중합체는 형광 프로브로 표지된 것인 암 표지용 조성물을 제공한다.
이하 상기 본 발명을 단계별로 상세히 설명한다.
본 발명은 항암제가 담지된 나노구조체를 유효성분으로 포함하는 간암 치료용 약학조성물에 관한 것으로, 본 발명의 말레산 무수물 중합체에 페닐보론산이 결합되어 형성된 중합체에 항암제를 담지한 나노구조체는 암, 특히 간암에서 종양 증식 억제 효과가 우수하고, 종양 부위로의 약물 전달 효과가 우수하며, 암 세포와 특이적으로 결합하므로 종양 표지자로 기능할 수 있으며, 생체에서 안정적으로 대사되므로, 의학 분야에서 크게 이용될 것으로 기대된다.
도 1은 본 발명의 일 실시예에 따른, 페닐보론산이 결합된 말레산 무수물 중합체(pPBA)의 합성 과정을 나타낸 모식도이다.
도 2는 본 발명의 일 실시예에 따른, pPBA의 1H-NMR 스펙트럼 결과를 나타낸 도이다.
도 3은 본 발명의 일 실시예에 따른, pPBA-DOX 나노구조체의 형성 및 파괴 과정을 나타낸 모식도이다.
도 4는 본 발명의 일 실시예에 따른, 페닐보론산과 독소루비신을 4:1의 몰비율로 포함하는 나노구조체의 투과전자현미경 사진을 나타낸 도이다.
도 5는 본 발명의 일 실시예에 따른, 페닐보론산과 독소루비신 몰비에 따른 나노구조체(pPBA-DOX)의 세포 유입 형태를 나타낸 도이다.
도 6은 본 발명의 일 실시예에 따른, 간암 세포주에서 pPBA-DOX의 세포독성 효과를 나타낸 도이다.
도 7은 본 발명의 일 실시예에 따른, 간암 마우스 모델에서 pPBA-DOX의 생체분포를 나타낸 도이다.
도 8은 본 발명의 일 실시예에 따른, 간암 마우스 모델에서 약물 투여 후 15일까지의 종양 부피 변화를 나타낸 도이다.
도 9는 본 발명의 일 실시예에 따른, 간암 마우스 모델에서 약물 투여 15일 후 종양의 실체를 나타낸 도이다.
도 10는 본 발명의 일 실시예 따른, 간암 마우스 모델에서 약물 투여 15일 후 혈청 내 alanine aminotransferase(ALT) 및 aspartate aminotransferase(AST)를 측정한 결과를 나타낸 도이다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로서, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.
실시예 1. 항암제가 담지된 나노구조체의 제조
실시예 1-1. 페닐보론산이 결합된 말레산 무수물 중합체를 포함한 약물전달체의 합성
말레산 무수물(maleic anhydrate)로 분자량 80,000인 pMAnh(Poly(methyl vinyl ether-alt-maleic anhydride)와 아민기가 결합된 페닐보론산으로 3-아미노페닐보론산 수화물(3-aminophenylboronic acid monohydrate, PBA-NH2)을 준비하였다. 페닐보론산이 결합된 말레산 무수물 중합체는 도 1과 같은 방법으로 합성하였다. 우선, pMAnh(3.2mmol 숙신산 무수물 포함) 500mg을 DMSO(dimethyl sulfoxide)에 용해시킨 수용액을 준비하였다. 이후, pMAnh를 용해시킨 수용액에 PBA-NH2(1mmol) 160mg을 첨가하고 실온에서 24시간 저어 주었다. 24시간 후, 0.1N NaOH 10㎖를 첨가하여 말레산 무수물 중합체의 미반응한 석신산 무수물 모이어티(moiety)의 가수분해를 촉진하고 반응을 종결하였다. 반응 종료 후, 이틀 간 투석한 후(분획분자량(MWCO = 10,000)) 동결 건조하여 페닐보론산이 결합된 말레산 무수물 중합체인 pPBA(poly(phenylboronic acid-co-maleic anhydride))를 얻었다. 수득률은 91%였고, PBA의 컨쥬게이션 비율은 하기 표 1의 방법(1H-NMR)으로 계산하였다. 계산결과 pPBA에서 PBA의 몰비는 513 반복단위(unit)당 156으로 나타났다. 상기 1H-NMR 스펙트럼을 도 2에 나타내었다.
1H NMR (D2O, 300 MHz): 7.7-7.0 (m, Ph, 4xH); 3.8-3.5 (m, -CH-, 1H); 3.5-3.1 (m, -OCH3, 3H); 3.1-2.4 (m, CHCOO, 2H); 2.4-1.4 (m, -CH2-, 2H)
실시예 1-2. 항암제가 담지된 나노구조체 형성
실온에서 DMSO 수용액에 pPBA(poly(phenylboronic acid-co-maleic anhydride)) 및 약물(항암제)로 독소루비신(Doxorubicin; DOX)를 혼합하였다. 독소루비신과 pPBA의 페닐보론산의 결합을 통해 약물이 로딩되었다. pPBA의 페닐보론산과 독소루비신의 결합과 함께 페닐보론산과 독소루비신의 소수성 상호작용에 의해 pPBA들의 자가 결합이 일어났다. 자가 결합에 의해 독소루비신이 로딩된 나노 구조체가 형성된 것을 확인하였다. 상기 pPBA-DOX 나노구조체의 형성 및 파괴에 대한 모식도를 도 3에 나타내었다. 나노구조체의 형성은 pPBA의 페닐보론산과 독소루비신의 1,3-디올 사이의 전하 공유, 및 보론산 에스테르 형성에 의해 이루어진다. 산성 pH 환경에서, 나노구조체의 파괴는 보론산 에스테르의 결합력 약화에 의해 유도되고, 그 결과로 독소루비신이 유리된다.
독소루비신 로딩 과정에서 pPBA와 독소루비신 각각의 첨가량을 조절하여, 로딩된 독소루비신의 농도 및 페닐보론산과 독소루비신의 몰비율을 조절할 수 있었다. 250mM 독소루비신 DMSO 용액 20㎕에 50mM pPBA 수용액 100㎕를 첨가한 후, DPBS 880㎕를 첨가하여 독소루비신 최종농도가 5mM이고 페닐보론산과 독소루비신의 몰비율이 1:1인 나노구조체를 합성할 수 있었다. 페닐보론산과 독소루비신을 2:1의 몰비율, 또는 4:1의 몰비율로 포함하는 나노구조체를 100mM pPBA를 사용한 동일한 방법으로 제조할 수 있었다.
페닐보론산과 독소루비신을 4:1 몰비율의 나노구조체를 투과전자현미경(Transmission Electron Microscope; TEM, JEM-2210, JEOL)으로 확인하여 약 70nm 정도의 나노구조의 형성을 확인하였다. 이를 도 4에 나타내었다.
실시예 2. in vitro 에서 항암제가 담지된 나노구조체의 효과 확인
실시예 2-1. 항암제가 담지된 나노구조체의 세포 유입 형태 확인
항암제가 담지된 나노구조체의 세포내 흡수(intracellular uptake) 형태를 확인하기 위하여, MCF-7(인간 유방암 세포주) 또는 PC-3(인간 전립선암 세포주) 세포를 12웰 플레이트에 1 X 105cell/well로 분주하고 하루동안 배양하였다. 배양 후, 경쟁자 전처리로서 5mmol/L PBA-NH2를 함유하거나(w/) 함유하지 않는(w/o) 무혈청 배지로 30분간 추가 배양하고, 배지를 페닐보론산과 독소루비신 몰비가 1:1인 나노구조체(pPBA-DOX 1:1 complex), 2:1인 나노구조체(pPBA-DOX 2:1 complex), 또는 4:1인 나노구조체(pPBA-DOX 4:1 complex)를 포함하는 배지로 교체하여 4시간 더 배양하였다. 독소루비신의 농도는 2μmol/L 가 되도록 동일하게 조절하였다. 세포 내에서 pPBA의 위치를 확인하기 위해서 pPBA의 일부를 FCR648- 표지된 pPBA(FCR648-pPBA)로 대체하였다. 이후, 세포를 DPBS로 세척하고, 4℃ 에서 10% 중성 완충 포르말린으로 하루동안 고정시키고, 커버슬립상의 세포를 DAPI(4', 6-dDamamidine-2'-phenylindole dihydrochloride, Vector Labs)가 포함된 봉입제로 봉입하여 공초점 레이저스캐닝현미경으로 633/647nm 및 488/530nm 파장에서 관찰하였다. 상기 형광 이미지 결과를 도 5에 나타내었다.
실험 결과, 나노구조체는 세포막을 통과하여 세포질로 유입되며, 독소루비신에 비하여 페닐보론산의 몰비가 높은 나노구조체(예; pPBA-DOX 2:1 complex)의 경우, 나노구조체의 세포유입은 PBA-NH2을 전처리함으로써 조절할 수 있다는 것을 확인하였다.
실시예 2-2. 항암제가 담지된 나노구조체의 간암 치료 효과 확인
FL83B(ATCC® CRL-2390쪠, 미국세포주은행), Hepa1-6(ATCC® CRL-1830쪠, 미국세포주은행), HepG2(ATCC® HB-8065쪠, 미국세포주은행), Huh7(Huh7, 한국세포주은행), SK-Hep1(ATCC® HTB-52쪠, 미국세포주은행), 및 HCCLM3(HCCLM3, Bolise co., LTD.) 세포를 96웰(well) 배양 플레이트에 8 X 103cell/well로 분주하고 하루동안 배양하였다. 각 세포의 배양액 및 배양방법은 미국세포주은행 또는 한국세포주은행에서 제공하는 세포배양정보에 따라 수행하였다. 상기 6종 세포의 정보는 하기 표 2에 기재하였다.
세포명 생물명 기원 장기 질병 내역
FL83B 마우스(Mus musculus ) 간(liver) 정상(질병 없음)
Hepa1-6 마우스(Mus musculus ) 간(liver) 간세포암(Hepatocellular carcinoma)
HepG2 인간(Homo sapiens) 간(liver) 간세포암 (Hepatocellular carcinoma)
Huh7 인간(Homo sapiens) 간(liver) 간세포암 (Hepatocellular carcinoma)
SK-Hep1 인간(Homo sapiens) 간(liver) 및 복수(ascites) 선암(adenocarcinoma)
HCCLM3 인간(Homo sapiens) 간(liver) 간세포암(Hepatocellular carcinoma)
상기 FL83B, Hepa1-6, HepG2, Huh7, SK-Hep1, 및 HCCLM3 세포들을 하루 배양 후, 새 배지로 교체하고 pPBA, 독소루비신(DOX), 페닐보론산과 독소루비신 몰비가 1:1인 나노구조체(pPBA-DOX 1:1 complex) 및 페닐보론산과 독소루비신 몰비가 2:1인 나노구조체(pPBA-DOX 2:1 complex) 각각을 0.01 내지 100μM 농도로 처리하고, 48시간 동안 추가로 배양하였다. 배양 후, MTT 어세이를 통해 세포독성을 확인하였고, 그 결과를 도 6에 나타내었다. 이 결과, 가수분해된 pMAnh의 생체적합성 및 강한 음전하로 인하여 pPBA는 모든 세포에서 세포독성을 나타내지 않았으며, 독소루비신만 처리했을 경우 질병 유무에 상관없이 모든 세포에서 농도가 증가할수록 세포독성이 나타났다. pPBA-DOX 1:1 complex와 pPBA-DOX 2:1 complex도 독소루비신과 마찬가지로 농도가 증가할수록 세포독성이 증가하는 경향을 나타냈는데, pPBA-DOX 1:1 complex와 pPBA-DOX 2:1 complex 간에는 유의미한 차이가 없었으나, 독소루비신에 비해서는 pPBA-DOX complex 들이 현저하게 암세포의 사멸 효과가 높은 것으로 확인되었다. 특히, Hepa1-6, HepG2, 및 Huh7 세포의 경우, 0.1 내지 10μM 농도에서 독소루비신과의 암세포 사멸 효과 차이가 현저하였으며, SK-Hep1, 및 HCCLM3 세포의 경우에는 10μM 농도에서 pPBA-DOX complex 들의 암세포 사멸 효과가 독소루비신보다 2 내지 3배 높은 것으로 나타났다. 이는 pPBA-DOX complex가 독소루비신 단독 사용시보다 적은 농도의 약물로 현저한 간암 치료 효과를 얻을 수 있다는 것을 의미하며, 간세포암(Hepatocellular carcinoma) 또는 간의 선암(adenocarcinoma)에 관계없이 모든 간암에서 치료 효과가 있다는 것을 의미한다.
실시예 3. in vivo 에서 항암제가 담지된 나노구조체의 효과 확인
실시예 3-1. 간암 모델 마우스의 제조 및 약물 투여
본 발명의 동물 실험 일체는 가톨릭대학교 의과대학 실험동물실 윤리위원회의 가이드라인에 따라 수행하였다. C57/B6 마우스(수컷, 6-8주령)의 우측 대퇴부에 Hepa1-6 간암 세포주 1 X 106cell/mouse를 피하 주사(subcutaneous injection)하고, 암조직의 평균 체적이 약 300mm3에 도달한 시점에서 마우스를 무작위로 그룹핑(그룹당 n=7)하여 하기 표 3과 같이 약물을 정맥주사(intravenous injection; i.v. injection)하였으며, 이를 통하여 약물이 전신투여(systemic administration) 되었다.
그룹 비고
No-treat 비처리
Free DOX 독소루비신(DOX) 단독투여
Free pPBA 페닐보론산이 결합된 말레산 무수물 중합체(pPBA) 단독투여
pPBA-DOX pPBA와 독소루비신이 결합된 나노구조체 단독투여
독소루비신이 단독 또는 복합체 형태로 투여되는 경우에 농도는 3mg/kg 가 되도록 조절하였고, Free pPBA 또는 pPBA-DOX 그룹의 pPBA는 FCR648로 표지 pPBA, 또는 비표지 pPBA 를 사용하였다.
실시예 3-2. 항암제가 담지된 나노구조체의 생체분포 확인
실시예 3-1의 방법으로 간암 모델링되고 표 3과 같이 약물 투여된 마우스들을 약물 투여 1일, 3일, 또는 7일 되는 시점에서 IVIS 스펙트럼 소형동물 생체 내 이미징 시스템 (Califer Lifescience, Hopkinton, MA)으로 마우스 내 형광 위치, 및 형광 강도를 측정하였다. 그 결과를 도 7에 나타내었다.
실험 결과, pPBA가 생체 내에서 종양 부위에 잘 결합되며, Free PBA 형태보다 항암제와 결합한 pPBA-DOX일 때 종양에 더 강하게 축적되는 것을 알 수 있었다. 또한 Free pPBA와 pPBA-DOX 모두 정상적으로 대사되어, 약물 투여 후 7일 정도 후에는 거의 잔존하지 않는다는 것을 알 수 있었다. 이는 페닐보론산이 결합된 말레산 무수물 중합체(pPBA) 및 pPBA와 독소루비신이 결합된 나노구조체가 생체대사 시스템 내에서 순응한다는 것으로, pPBA를 이용한 약물 개발 시 대사 안정성이 높음을 시사한다.
실시예 3-3. 항암제가 담지된 나노구조체의 간암 치료 효과 확인
실시예 3-1의 방법으로 간암 모델링되고 표 3과 같이 약물 투여된 마우스들을 약물 투여 후 15일까지 추적 분석하였다.
15일까지의 종양 부피 변화를 도 8에 나타내었다. 종양 부피는 종양 부피 = ab2/2(a는 길이, b는 폭) 공식에 따라 기록하였다. 실험 결과, No-treat, 또는 Free pPBA를 투여한 마우스에서의 종양 부피는 시간이 지남에 따라 크게 증가한 것이 비하여, Free DOX, 또는 pPBA-DOX를 투여한 마우스에서의 종양 부피는 미비하게 증가한 것을 확인할 수 있었다. 동일 시점에서 종양 부피는 No-treat, Free pPBA, Free DOX, 및 pPBA-DOX의 순으로 적은 것으로 나타나, pPBA-DOX가 가장 종양 성장억제 효과가 큰 것을 알 수 있었다.
약물 투여 15일 경과 후에, 마우스를 희생하여 종양을 분리 후 종양의 실체를 도 9에 나타내었다. 종양의 실체를 확인한 결과 종양의 부피가 No-treat, Free pPBA, Free DOX, 및 pPBA-DOX의 순으로 작은 것으로 나타나, pPBA-DOX가 가장 종양 성장억제 효과가 큰 것을 알 수 있었다.
실시예 3-4. 항암제가 담지된 나노구조체의 간 독성 여부 확인
간암 마우스 모델에서 항암제가 담지된 나노구조체가 간 독성 또는 약물 독성을 유발하는지 확인하기 위해 간기능 수치인 alanine aminotransferase(ALT) 및 aspartate aminotransferase(AST)를 측정하여 도 10에 나타내었다. 구체적으로, 실시예 3-1의 방법으로 간암 모델링되고 표 3과 같이 약물 투여된 마우스들을 15일동안 약물 투여한 후에, 마우스 모델의 혈청을 채취하여 간기능 수치인 ALT 및 AST를 측정하였다.
도 10에 나타낸 바와 같이, Free pPBA 및 pPBA-DOX는 Normal 및 No-treat의 ALT 및 AST 수치와 거의 동일하게 나타나므로, 항암제가 담지된 나노구조체는 간 독성을 보이지 않는 것으로 나타냈다.
상기 실시예 1 내지 3의 결과로부터, 본 발명의 페닐보론산이 결합된 말레산 무수물 중합체가 암세포 표지제로서 기능할 수 있다는 것과, 독소루비신 담지된 페닐보론산이 결합된 말레산 무수물 중합체를 간암 치료에 이용할 경우, 독소루비신을 자유 형태로 투여하는 것보다 간암 치료 효과가 우수하다는 것을 알 수 있었다.

Claims (20)

  1. 항암제가 담지된 페닐보론산이 결합된 말레산 무수물 중합체를 유효성분으로 포함하는, 간암 치료용 약학조성물.
  2. 제 1항에 있어서,
    상기 페닐보론산이 결합된 말레산 무수물 중합체는 말레산 무수물 중합체의 석신산 무수물 모이어티(moiety)와 아민이 결합된 페닐보론산의 반응으로 형성된 것인, 간암 치료용 약학조성물.
  3. 제 1항에 있어서,
    상기 항암제는 1,2-cis-diol, 1,3-cis-diol, 및 카테콜(catechol) 모이어티(moiety)로부터 선택된 어느 하나 이상의 작용기(functional group)를 포함하는 안트라사이클린계 또는 폴리페놀계 항암제인, 간암 치료용 약학조성물.
  4. 제 3항에 있어서,
    상기 항암제는 독소루비신(doxorubicin), 에피루비신(epirubicin), 및 올레오루페인(oleuropein)으로 구성되는 그룹으로부터 선택되는 어느 하나 이상인, 간암 치료용 약학조성물.
  5. 제 1항에 있어서,
    상기 간암은 간으로부터 발생하거나, 또는 간으로 전이된 암인, 간암 치료용 약학조성물.
  6. 제 1항에 있어서,
    상기 간암은 간세포암종, 담관상피암종, 간모세포종, 간내 혈관육종, 및 간내 선암으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 어느 하나 이상인, 간암 치료용 약학조성물.
  7. 제 1항에 있어서,
    상기 치료는 암세포의 수적 증가를 억제시키거나, 암세포의 양적 증식을 억제시키거나, 암세포를 사멸시키거나, 암 조직의 크기를 유지시키거나, 암 조직의 크기를 감소시키거나, 암 조직 내의 신생혈관 발달을 억제하거나, 또는 암의 전이를 억제하는 것 중 어느 하나 이상인, 간암 치료용 약학조성물.
  8. 인간을 제외한 개체에 항암제가 담지된 페닐보론산이 결합된 말레산 무수물 중합체를 유효성분으로 포함하는 약학조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 간암 치료 방법.
  9. 제 8항에 있어서,
    상기 페닐보론산이 결합된 말레산 무수물 중합체는 말레산 무수물 중합체의 석신산 무수물 모이어티(moiety)와 아민이 결합된 페닐보론산의 반응으로 형성된 것인, 간암 치료 방법.
  10. 제 8항에 있어서,
    상기 항암제는 1,2-cis-diol, 1,3-cis-diol, 및 카테콜(catechol) 모이어티(moiety)로부터 선택된 어느 하나 이상의 작용기(functional group)를 포함하는 안트라사이클린계 또는 폴리페놀계 항암제인, 간암 치료 방법.
  11. 제 10항에 있어서,
    상기 항암제는 독소루비신(doxorubicin), 에피루비신(epirubicin), 및 올레오루페인(oleuropein)으로 구성되는 그룹으로부터 선택되는 어느 하나 이상인, 간암 치료 방법.
  12. (a) 인간을 제외한 제 1 간암 개체에 제 1항의 약학조성물을 단독 투여하는 단계;
    (b) 인간을 제외한 제 2 간암 개체에 제 1항의 약학조성물과 간암 치료용 후보물질을 병용 투여하는 단계;
    (c) 제 1 개체와 제 2 개체의 간암 치료 효과를 비교하는 단계; 및
    (d) 제 1 개체의 간암 치료 효과보다 제 2 개체의 효과가 좋을 경우, 상기 간암 치료용 후보물질을 제 1항의 약학조성물과 병용 투여용 간암 치료 물질로 판단하는 단계를 포함하는, 간암 치료용 병용 투여 물질의 스크리닝 방법.
  13. 제 12항에 있어서,
    상기 간암은 간으로부터 발생하거나, 또는 간으로 전이된 암인, 간암 치료용 병용 투여 물질의 스크리닝 방법.
  14. 제 12항에 있어서,
    상기 간암은 간세포암종, 담관상피암종, 간모세포종, 간내 혈관육종, 및 간내 선암으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 어느 하나 이상인, 간암 치료용 병용 투여 물질의 스크리닝 방법.
  15. 제 12항에 있어서,
    상기 치료는 암세포의 수적 증가를 억제시키거나, 암세포의 양적 증식을 억제시키거나, 암세포를 사멸시키거나, 암 조직의 크기를 유지시키거나, 암 조직의 크기를 감소시키거나, 암 조직 내의 신생혈관 발달을 억제하거나, 또는 암의 전이를 억제하는 것 중 어느 하나 이상인, 간암 치료용 병용 투여 물질의 스크리닝 방법.
  16. 항암제가 담지된 페닐보론산이 결합된 말레산 무수물 중합체를 포함하는, 암 표지용 조성물.
  17. 제 16항에 있어서,
    상기 페닐보론산이 결합된 말레산 무수물 중합체는 말레산 무수물 중합체의 석신산 무수물 모이어티(moiety)와 아민이 결합된 페닐보론산의 반응으로 형성된 것인, 암 표지용 조성물.
  18. 제 16항에 있어서,
    상기 중합체는 형광 프로브로 표지된 것인, 암 표지용 조성물.
  19. 제 16항에 있어서,
    상기 항암제는 1,2-cis-diol, 1,3-cis-diol, 및 카테콜(catechol) 모이어티(moiety)로부터 선택된 어느 하나 이상의 작용기(functional group)를 포함하는 안트라사이클린계 또는 폴리페놀계 항암제인, 암 표지용 조성물.
  20. 제 16항에 있어서,
    상기 암은 간암인, 암 표지용 조성물.
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