WO2017090253A1 - Ｎａｆｌｄ／ｎａｓｈ予防及び／又は治療剤 - Google Patents

Ｎａｆｌｄ／ｎａｓｈ予防及び／又は治療剤 Download PDF

Info

Publication number
WO2017090253A1
WO2017090253A1 PCT/JP2016/004963 JP2016004963W WO2017090253A1 WO 2017090253 A1 WO2017090253 A1 WO 2017090253A1 JP 2016004963 W JP2016004963 W JP 2016004963W WO 2017090253 A1 WO2017090253 A1 WO 2017090253A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
concentrate
plum juice
food
nafld
therapeutic agent
Prior art date
Application number
PCT/JP2016/004963
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
勝也 平石
史恵 神間
洋之 相馬
太郎 足立
足立　正一
一平 山岡
知博 香川
Original Assignee
ＡｄａＢｉｏ株式会社
株式会社大塚製薬工場
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by ＡｄａＢｉｏ株式会社, 株式会社大塚製薬工場 filed Critical ＡｄａＢｉｏ株式会社
Priority to CA3004153A priority Critical patent/CA3004153A1/en
Priority to JP2017552276A priority patent/JP6485846B2/ja
Priority to US15/776,108 priority patent/US10610558B2/en
Priority to KR1020187013064A priority patent/KR102080128B1/ko
Priority to EP16868204.5A priority patent/EP3381459A4/en
Priority to SG11201804029UA priority patent/SG11201804029UA/en
Priority to CN201680068041.1A priority patent/CN108289923A/zh
Priority to NZ742338A priority patent/NZ742338A/en
Priority to AU2016359870A priority patent/AU2016359870B2/en
Publication of WO2017090253A1 publication Critical patent/WO2017090253A1/ja
Priority to PH12018550050A priority patent/PH12018550050A1/en

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/73—Rosaceae (Rose family), e.g. strawberry, chokeberry, blackberry, pear or firethorn
    • A61K36/736—Prunus, e.g. plum, cherry, peach, apricot or almond
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L2/00—Non-alcoholic beverages; Dry compositions or concentrates therefor; Their preparation
    • A23L2/385—Concentrates of non-alcoholic beverages
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/105—Plant extracts, their artificial duplicates or their derivatives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2200/00—Function of food ingredients
    • A23V2200/30—Foods, ingredients or supplements having a functional effect on health

Definitions

  • the present invention relates to a prophylactic and / or therapeutic agent for nonalcoholic fatty liver disease (NAFLD), particularly nonalcoholic steatohepatitis (NASH), which contains a concentrate of plum juice or a processed product thereof, and such prophylactic and / or therapeutic agents.
  • NAFLD nonalcoholic fatty liver disease
  • NASH nonalcoholic steatohepatitis
  • the present invention relates to a method for preparing a therapeutic agent.
  • the liver is the largest organ with more than 500 different functions. It reprocesses various nutrients absorbed in the intestine, supplies them to other organs, stores the surplus, and produces and secretes bile. , As well as many other functions necessary to maintain life such as detoxification and excretion.
  • this organ is easily damaged by various factors such as irregular life, stress, viruses, drugs, alcohol, malnutrition, hepatic circulatory system disorders, and diseases such as acute hepatitis, chronic hepatitis, fatty liver, cirrhosis May occur.
  • more than 15% of adults are said to have fatty liver, and the expansion to young people is a major social problem.
  • Fatty liver has been considered as a pathological condition related to alcoholic liver damage mainly caused by alcohol consumption.
  • Alcoholic fatty liver is an alcohol intake that causes fat droplets to be seen in hepatocytes due to the accumulation of fat in the liver.
  • fat especially neutral fat
  • It refers to a condition that causes liver damage.
  • findings similar to alcoholic liver damage also appear in non-alcoholic people.
  • Non-alcoholic fatty liver disease can be mentioned as a pathological condition of fatty liver injury in non-alcoholic people.
  • NAFLD is manifested in fatty liver, where neutral fat is deposited in hepatocytes, but in about 90% of patients, simple fatty liver that can improve symptoms with appropriate diet and exercise therapy. is there.
  • NASH non-alcoholic steatohepatitis
  • ume flesh has long been known as a home remedy for recovery from fatigue, per meal, etc., and it is a food for autophagy induction containing a neutralized processed product of ume meat extract (for example, see Patent Document 1) and ume meat extract.
  • An agent for improving liver function in patients with viral hepatitis containing Japanese processed products has been proposed.
  • a plum extract obtained by sterilizing and heat-sterilizing a 20-fold concentrated squeezed ume juice prepared by squeezing ume is effective for rats with galactosamine hydrochloride-induced acute liver injury. (For example, refer nonpatent literature 1).
  • An object of the present invention is to prevent NAFLD, in particular NASH, for prevention and / or treatment of NAFLD, especially NASH, which is safe and easy to ingest, obtained by using components contained in plants and processed products thereof. And / or providing a therapeutic agent.
  • the present inventors have been searching for components that improve NAFLD, particularly NASH, for components contained in natural products such as plants that are safe and easy to ingest.
  • viral hepatitis mainly caused by viral infection and toxic substances
  • the concentrate of plum juice and its processed product which were known to be effective against acute hepatitis caused by administration of the above, were administered to streptozocin (STZ) -induced NASLD model mice and STZ-induced NASH model mice.
  • STZ streptozocin
  • STZ streptozocin
  • the present inventors have found that hepatic fibrosis, which is one of the pathological conditions in NAFLD, particularly NASH, can be reduced, and the present invention has been completed.
  • a prophylactic and / or therapeutic agent for nonalcoholic fatty liver disease comprising a concentrate of plum juice or a processed product thereof.
  • NAFLD nonalcoholic fatty liver disease
  • NASH non-alcoholic fatty liver disease
  • a method for preparing a preventive and / or therapeutic agent for nonalcoholic fatty liver disease comprising the following steps (a) and (b): (A) a step of preparing a plum juice from ome; (B) A step of concentrating the plum juice prepared in step (a) to prepare a plum juice concentrate; (9) The preparation method according to (8) above, wherein the concentration in step (b) is heating concentration. (10) The preparation method as described in (8) or (9) above, further comprising the following step (c).
  • (C) a step of neutralizing the plum juice concentrate or the plum juice heated concentrate prepared in step (b) to prepare a plum juice concentrated neutralized product or a plum juice heated concentrated neutralized product;
  • NASH non-alcoholic steatohepatitis
  • the food according to (12) above, wherein the processed product of the concentrate is a neutralized product of the concentrate.
  • a food additive comprising, as an active ingredient, a concentrate of plum juice or a processed product thereof.
  • Plum juice concentrate or processed product thereof for use in the prevention and / or treatment of non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD).
  • NASH non-alcoholic fatty liver disease
  • NASH non-alcoholic steatohepatitis
  • NAFLD especially NASH
  • NAFLD can be treated by reducing liver tissue fibrosis in NAFLD, especially NASH patients, and by reducing the incidence of NAFLD, especially NASH, in non-alcoholics, NAFLD, especially NASH can be prevented.
  • FIG. 1 It is a figure which shows the liver tissue by a hematoxylin stain / sirius red stain.
  • A is the liver of a standard mouse
  • (b) is the liver of an STZ-induced NASH model mouse (control mouse)
  • (c) is the liver of an STZ-induced NASH model mouse administered with a concentrated neutralization dilution of plum juice.
  • Sirius red staining positive sites of 12-week-old standard mice, 12-week-old STZ-induced NASH model mice, and 12-week-old STZ-induced NASH model mice 28 days after the start of the administration test of concentrated syrup juice were quantified. It is a graph.
  • FIG. 1 It is a figure which shows the liver tissue by a hematoxylin stain / sirius red stain.
  • A is the liver of an STZ-induced NAFLD model mouse (control mouse), and
  • b) is the liver of an STZ-induced NAFLD model mouse administered with a concentrated neutralization dilution of plum juice.
  • (A) is a photomicrograph of liver tissue of a control rat administered with distilled water stained with hematoxylin and eosin (photographing magnification: 400 times)
  • (b) is a heated concentrate of plum juice without neutralization treatment Micrographs of the liver tissue of rats administered with the diluted solution (photographing magnification: 400 times)
  • (c) are micrographs of the liver tissue of control rats immunostained with anti- ⁇ smooth muscle actin antibody (photographing magnification). : 1000 times).
  • the NAFLD of the present invention is not particularly limited as long as it is a prophylactic and / or therapeutic agent containing a concentrate or a processed product thereof, but is preferably for oral administration.
  • Preferred examples of the concentrate include a heated concentrate, and examples of processed products of these concentrates include dilution and / or neutralized products of these concentrates (hereinafter referred to as neutralization of concentrates).
  • the processed product is sometimes referred to as “plum juice concentrated neutralized product”).
  • the NAFLD or NASH preventive and / or therapeutic agent of the present invention can be used in the form of a medicine or a supplement.
  • a concentrate or processed product of plum juice for use in the prevention and / or treatment of NAFLD, in particular NASH, and the production of plum juice in the production of a prevention and / or treatment agent for NAFLD or NASH The use of the concentrate and the processed product thereof, and the prevention and / or treatment method of NAFLD, particularly NASH, in which the concentrated plum juice and the processed product are orally administered to the subject can be mentioned.
  • the step (a) of preparing a plum juice from ome the plum juice prepared in the step (a) (heating)
  • liver tissue fibrosis refers to activated stellate cells or myofibroblasts that occur in response to hepatocyte necrosis or damage that begins to show signs of fatty degeneration or inflammatory changes, or a decrease in tissue function.
  • liver tissue contributes to the maintenance of physical morphology. It is said that it does not restore the function of liver tissue.
  • the pathology progresses further and becomes more severe when tissue deposition with excessive fibrous protein deposition such as collagen and fibroblast infiltration and proliferation is not limited to the local area but is widely observed in the liver tissue. Progression to severe liver fibrosis and cirrhosis.
  • Examples of NAFLD in the present invention include pathological conditions in which deposition of neutral fat on hepatocytes is observed in the liver tissue of non-alcohol intake persons.
  • Examples of the action of the NAFLD of the present invention include reduction of liver fibrosis in NASH patients, and a method for confirming the presence or absence of reduction of liver fibrosis and inflammation of liver tissue.
  • Methods for staining liver tissue sections include aniline blue staining method, trichrome staining method, silver halide staining method, Azan Mallory staining method, hematoxylin and eosin staining method, Sirius red staining method, hematoxylin staining / Sirius red staining method, etc. Can be mentioned.
  • the hydrophilic and high molecular weight Sirius red binds with the cationic metal complex dye to emphasize fibers and related tissues.
  • a hematoxylin staining / sirius red staining method that can be dyed can be preferably mentioned.
  • liver fibrosis is reduced by administration of the NAFLD of the present invention, particularly NASH prevention and / or treatment agent
  • the fibrosis region can be observed after administration by evaluating the above liver tissue image visually using a microscope or the like.
  • a case where the staining positive site is decreased or disappeared, or a case where the staining positive site is decreased or disappeared after administration by extracting and analyzing the staining positive site using an image analysis application can be exemplified.
  • the improvement of the pathological condition of NASH in the present invention is achieved by reducing liver fibrosis and may be accompanied by an increase in plasma albumin level or plasma total protein level.
  • the reduction of liver fibrosis can include, for the sake of convenience, the recovery of liver tissue by the reduction of liver fibrosis that has begun to form and the suppression of the start of liver fibrosis.
  • NAFLD NAFLD
  • NASH preventive and / or therapeutic agents As subjects (persons) to which the NAFLD of the present invention, particularly NASH preventive and / or therapeutic agents, are administered, those who are diagnosed with NAFLD and NASH and need to treat NAFLD and NASH; and metabolic syndrome, obesity, diabetes NAFLD and NASH are not diagnosed, such as those who are highly likely to develop NAFLD and NASH such as hyperlipidemia, hypertension and hyperuricemia, but it is necessary to prevent NAFLD and NASH / Those who wish to prevent;
  • the administration mode of the NAFLD of the present invention can be appropriately set according to the health condition of the subject to be administered, severity of symptoms, age, weight, doctor's judgment, etc. Oral administration is preferred.
  • the oral dose to humans is 30 to 600 mg / kg / day, preferably 40 to 370 mg / kg / day, in terms of a diluted solution of concentrated plum juice (1.7 times diluted in Example 3). More preferably, 80 to 300 mg / kg / day can be exemplified.
  • optional components for example, crystalline cellulose, gelatin, lactose, starch, magnesium stearate, talc, vegetable and animal fats, oils and fats, gums, polyalkylene glycols and the like, pharmaceutically acceptable ordinary carriers, binding Mention various compounding ingredients for preparations such as an agent, a stabilizer, a solvent, a dispersion medium, an extender, an excipient, a diluent, a pH buffer, a disintegrant, a solubilizer, a solubilizer, and an isotonic agent. it can.
  • the step (a) in the method for preparing NAFLD of the present invention can include a step of preparing a plum juice from Ome.
  • a plum juice from Ome For example, for Ome 1, preferably 0 And a step of preparing a plum juice at a ratio of 2 to 0.6.
  • the method for obtaining the roughly crushed ome pulp include a method of crushing ome with a mixer or the like.
  • the ume it is preferable to use the ume just after collection, or it is preferable to cryopreserve the ume just after collection until just before preparing the plum juice.
  • the plum juice prepared in the above step (a) is concentrated to concentrate the plum juice, preferably heated and concentrated. For example, preferably 0.07 to 0.2, more preferably 0.075 to 0.15, and still more preferably 0 with respect to the plum juice 1.
  • the plum juice (heated) concentrate prepared in the above step (b) is neutralized and the plum juice (heated)
  • the process of preparing a concentrated neutralized product it is preferable to dilute the plum juice (heated) concentrate prior to neutralization.
  • the amount of water is preferably 0.5 to 6.0, more preferably 0.75 to 4.3, and still more preferably 1.0 to 2.0 with respect to the plum juice (heated) concentrate 1.
  • a diluted solution of plum juice (heated) concentrate can be prepared by adding an appropriate solvent
  • the diluted solution of the plum juice (heated) concentrate is neutralized.
  • the pH of the diluted solution of plum juice (heated) concentrate is preferably pH 5.0 to 8.0, By adjusting the pH to 5.4 to 7.2, more preferably to pH 6.5 to 7.0, a solution of plum juice (heated) concentrated neutralized product can be prepared.
  • the alkaline solution include NaOH aqueous solution and KOH aqueous solution.
  • insoluble matter such as non-dispersible solids and non-flowable solids can be removed from the solution of the above concentrated plum juice (heated) concentrate by a filter or centrifugation. Moreover, after removing an insoluble matter using the mesh from the solution of the said ume fruit juice (heating) concentrated neutralized material, it can also be diluted and made into a product.
  • the above-described concentrated plum juice (heated) concentrate is usually diluted at a predetermined magnification.
  • the predetermined magnification include 1.5 to 20 times, preferably 2 to 10 times, and more preferably 3 to 5 times.
  • NAFLD nonalcoholic fatty liver disease
  • the concentrated plum juice or processed product thereof according to the present invention can be used in the food field.
  • various foods for example, general foods including so-called health foods, special special-purpose foods, health functional foods, food materials, beverages
  • Special-purpose foods include food for the sick, food for specified health use, milk powder for pregnant and lactating women, infant formula, and food for people with difficulty swallowing.
  • Functional health foods include foods for specified health use, nutritional functional foods, and functional labeling foods.
  • the concentrated plum juice or processed product thereof according to the present invention can be particularly preferably used for the production of foods for patients, foods for specified health use, functional display foods and the like.
  • the concentrated plum juice or processed product thereof according to the present invention can be ingested as a food in the form (paste) as it is without adding other substances. If necessary, the concentrated plum juice of the present invention or the processed product thereof may be pulverized or granulated by conventional means.
  • the concentrated plum juice of the present invention or processed product thereof after adding suitable auxiliaries such as rice flour, oil and fat, starch, lactose, maltose, vegetable oil and fat powder, cocoa butter powder, stearic acid, etc. to the concentrated plum juice of the present invention or processed product thereof, conventional means are used.
  • the compounding quantity of the concentrate of the plum juice of this invention or its processed material is suitably set according to the kind, state, etc. of the said edible composition.
  • STZ-induced NASH model mice Streptozocin (STZ) was administered to C57BL / 6J mice to produce STZ-induced NASH model mice. The outline is shown below.
  • mice For 30 C57BL / 6J mice (Charles River Japan) on the 17th day of pregnancy, as a standard diet, gamma-irradiated solid feed (CRF-1, manufactured by Oriental Yeast Co., Ltd.), and free drinking water The animals were reared individually and given birth. The offspring mice were divided at a ratio of 4: 1 into mice administered STZ and mice not administered (standard mice).
  • CRF-1 gamma-irradiated solid feed
  • the birth date was set to day 0, and the second day after birth, a syringe for insulin (MyJector, Terumo) was used and 10 mg / mL (0.1 M) of STZ (manufactured by Sigma) was used. 20 ⁇ L of citrate buffer (pH 4.5) solution was subcutaneously administered to the back. After STZ administration, they were reared by breastfeeding until they reached 4 weeks of age. Males and females were identified on the day when they reached 4 weeks of age and 4 weeks had passed after STZ administration, and male individuals were selected. On the same day, the male individuals fasted for 6 hours, and then the blood glucose level was measured by collecting blood from the tail vein using a simple blood glucose measuring device (Glutest Neo, manufactured by Sanwa Chemical Laboratory).
  • Glutest Neo manufactured by Sanwa Chemical Laboratory
  • a statistical analysis system EXSUS7.7 manufactured by CAC Excicare was used, and in the following examination, a group of mice administered with a concentrated neutralized product of plum juice and a control mouse group In addition, grouping was performed by stratified randomized allocation. Body weight was measured every week from the grouping date and on the day of necropsy.
  • the plasma albumin concentration of the standard mouse was 1.91 g / dL
  • the plasma albumin concentration of the control mouse was 1.77 g / dL.
  • the plasma albumin concentration of the mice administered with the concentrated neutralization dilution of plum juice was 1.96 g / dL
  • oral administration of the concentrated neutralization dilution of plum juice resulted in an increase in the plasma albumin level, and the survival rate was reduced.
  • STZ-induced NAFLD model mice STZ-induced NAFLD model mice that reached 5 weeks of age were administered with a concentrated neutralization dilution of plum juice from the next day when they reached 5 weeks of age.
  • oral administration of a concentrated neutralization diluted solution of plum juice has the effect of suppressing infiltration and fibrosis of inflammatory cells in the liver of STZ-induced NAFLD model mice, and may have the effect of improving and treating NAFLD and preventing NASH. confirmed.
  • mice administered with the concentrated neutralization dilution solution of plum juice showed significantly lower values than the control mice (* in the figure). Is a significant difference test by Student's t-test in comparison between a control mouse group and a mouse group administered with a concentrated neutralization dilution solution of plum juice, indicating that the P value is 0.05 or less)
  • Hematoxylin and eosin staining Hematoxylin and eosin staining was performed on the control mice and the mice treated with the concentrated neutralization dilution solution of plum juice using the paraffin sections. Sections of individuals close to the average values of AST and ALT in both groups were selected, and the pathological image was observed with an all-in-one fluorescence microscope (BZ-9000, manufactured by Keyence) under a 4 ⁇ objective lens. ) And (b).
  • the plum juice concentrate and processed product of the present invention are useful in the medical field in that NAFLD or NASH can be prevented and / or treated.
  • D (+)-galactosamine hydrochloride at a dose of 750 mg / 2.5 mL / kg was intraperitoneally administered to induce acute liver injury.
  • blood was exhaled from the abdominal aorta under anesthesia with pentobarbital, and the liver was collected, formalin-fixed, and subjected to hematoxylin and eosin staining.
  • FIG. 10 (c) shows that the cells appearing in the liver lobule by galactosamine administration are activated stellate cells (cells indicated by ⁇ ) that are positive for immunostaining with anti- ⁇ smooth muscle actin antibody.
  • the plum juice concentrate and processed product thereof according to the present invention are extremely useful in the medical field in that NAFLD or NASH can be prevented and / or treated.

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Alternative & Traditional Medicine (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)
  • Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
  • Preparation Of Fruits And Vegetables (AREA)

Abstract

梅果汁の濃縮物又はその処理物を含む非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、とりわけ非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）の予防及び／又は治療剤。当該予防及び／又は治療剤は、植物に含まれる成分やその処理物を利用することにより得られるため、安全で、しかも摂取が容易である。　梅果汁の濃縮物やその処理物を、ストレプトゾシン（ＳＴＺ）誘発ＮＡＦＬＤモデルマウスやＳＴＺ誘発ＮＡＳＨモデルマウスに経口投与したところ、肝線維化を軽減できることが確認されている。

Description

ＮＡＦＬＤ／ＮＡＳＨ予防及び／又は治療剤
　本発明は、梅果汁の濃縮物やその処理物を含む非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、とりわけ非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）の予防及び／又は治療剤や、かかる予防及び／又は治療剤の調製方法に関する。
　肝臓は、５００種類以上の多彩な機能を持つ最大の臓器であり、腸で吸収された様々な栄養素を再加工してほかの臓器に供給し、余剰分は貯蔵する他、胆汁の生成や分泌、及び解毒や排泄などの生命の維持に必要な多くの働きを行っている。しかし、この臓器は、不規則な生活、ストレス、ウイルス、薬物、アルコール、栄養不良、肝循環系障害などの様々な因子により障害を受け易く、急性肝炎、慢性肝炎、脂肪肝、肝硬変などの疾患を起こす場合がある。特に我が国では成人の１５％以上（推定で１５０～２００万人）が脂肪肝といわれ、若年層への拡大が大きな社会問題となっている。
　脂肪肝は、主としてアルコール多量摂取を原因とするアルコール性肝障害に関連する病態として考えられてきた。アルコール性の脂肪肝とは、アルコール摂取者において、肝臓に脂肪が蓄積することにより、肝細胞内に脂肪滴がみられるようになり、さらには肝細胞に脂肪（特に中性脂肪）が沈着して肝障害を引き起こす病態をいう。しかし、近年、アルコール非摂取者においてもアルコール性肝障害に類似した所見が現れることが判明してきた。
　アルコール非摂取者における脂肪性肝障害の病態としては、非アルコール性脂肪性肝疾患（Non-alcoholic fatty liver disease：ＮＡＦＬＤ）を挙げることができる。ＮＡＦＬＤは、肝細胞への中性脂肪の沈着が認められる脂肪肝が所見として現れるが、その患者の約９０％においては、適切な食餌療法や運動療法により症状を改善しうる単純性脂肪肝である。
　しかしながら、上記ＮＡＦＬＤの約１０％の症例においては、進行性の病態を示す非アルコール性脂肪性肝炎（Non-alcoholic steatohepatitis：ＮＡＳＨ）であることが知られている。ＮＡＳＨの病理組織的進行過程についての統一的見解は得られていないが、脂肪が蓄積した肝細胞が、変性や壊死することにより、肝組織に炎症所見や線維化を伴う脂肪性肝炎が認められることには一定のコンセンサスが得られているとされる。また、メタボリックシンドローム、肥満、糖尿病、高脂血症、高血圧、高尿酸血症等、マルチプルリスクファクターを伴う対象においては、脂肪肝からＮＡＳＨへの進行、さらにはより重篤な肝線維症、肝硬変、肝がんへ進行する確率がより高くなるといわれている。
　一方、梅果肉は古くから疲労回復・食あたり等に対する家庭薬として知られ、梅肉エキスの中和処理物を含有するオートファジー誘導用食品（例えば、特許文献１参照）や、梅肉エキスの中和処理物を含有するウイルス性肝炎患者における肝機能改善剤（例えば、特許文献２参照）等が提案されている。また、梅を圧搾することにより作製された梅搾汁液を加熱することにより２０倍に濃縮したものをＮａＯＨにより中和後加熱滅菌した梅肉エキスがガラクトサミン塩酸塩誘発急性肝障害ラットに効果があったことが報告されている（例えば、非特許文献１参照）。
特開２００７－１４３４５２号公報 特開２０１１－２０１８４１号公報
World Gastroenterol. 2012, Vol.18(31) 4118-4126
　本発明の課題は、植物に含まれる成分やその処理物を利用することにより得られる、安全で摂取が容易な、ＮＡＦＬＤ、とりわけＮＡＳＨを予防及び／又は治療するための、ＮＡＦＬＤ、とりわけＮＡＳＨの予防及び／又は治療剤を提供することにある。
　本発明者らは、安全で、摂取しやすい植物等の天然物に含まれる成分について、ＮＡＦＬＤ、とりわけＮＡＳＨを改善する成分を探索してきたが、ウイルスの感染を主因とするウイルス性肝炎や、毒物等の投与を原因とする急性肝炎に対して効果があることが知られていた梅果汁の濃縮物やその処理物を、ストレプトゾシン（ＳＴＺ）誘発ＮＡＳＬＤモデルマウスやＳＴＺ誘発ＮＡＳＨモデルマウスに投与したところ、ＮＡＦＬＤ、とりわけＮＡＳＨにおける病態の一つである肝線維化を軽減できることを見いだし、本発明を完成するに至った。
　すなわち本発明は、以下のとおりである。
（１）梅果汁の濃縮物又はその処理物を含む非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）の予防及び／又は治療剤。
（２）濃縮物の処理物が濃縮物の中和処理物であることを特徴とする上記（１）記載の予防及び／又は治療剤。
（３）濃縮物が加熱濃縮物であることを特徴とする上記（１）又は（２）記載の予防及び／又は治療剤。
（４）経口投与用であることを特徴とする上記（１）～（３）のいずれか記載の予防及び／又は治療剤。
（５）サプリメントとして使用することを特徴とする上記（１）～（４）のいずれか記載の予防及び／又は治療剤。
（６）肝組織における線維化を軽減することを特徴とする上記（１）～（５）のいずれか記載の予防及び／又は治療剤。
（７）非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）が非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）であることを特徴とする上記（１）～（６）のいずれか記載の予防及び／又は治療剤。
（８）以下の（ａ）及び（ｂ）の工程を含むことを特徴とする非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）の予防及び／又は治療剤の調製方法。
（ａ）青梅から梅搾汁液を調製する工程；
（ｂ）工程（ａ）で調製された梅搾汁液を濃縮して梅果汁濃縮物を調製する工程；
（９）工程（ｂ）における濃縮が、加熱濃縮であることを特徴とする上記（８）記載の調製方法。
（１０）さらに、以下の工程（ｃ）を含むことを特徴とする上記（８）又は（９）記載の調製方法。
（ｃ）工程（ｂ）で調製された梅果汁濃縮物又は梅果汁加熱濃縮物を中和して、梅果汁濃縮中和物又は梅果汁加熱濃縮中和物を調製する工程；
（１１）非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）が非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）であることを特徴とする上記（８）～（１０）のいずれか記載の調製方法。
（１２）梅果汁の濃縮物又はその処理物を含む食品。
（１３）濃縮物の処理物が濃縮物の中和処理物であることを特徴とする上記（１２）記載の食品。
（１４）濃縮物が加熱濃縮物であることを特徴とする上記（１２）又は（１３）記載の食品。
（１５）食品が病者用食品、特定保健用食品又は機能性表示食品である、上記（１２）～（１４）のいずれか記載の食品。
（１６）梅果汁の濃縮物又はその処理物を有効成分とする食品添加剤。
（１７）濃縮物の処理物が濃縮物の中和処理物であることを特徴とする上記（１６）記載の食品添加剤。
（１８）濃縮物が加熱濃縮物であることを特徴とする上記（１６）又は（１７）記載の食品添加剤。
（１９）病者用食品、特定保健用食品又は機能性表示食品の製造に使用される、上記（１６）～（１８）のいずれか記載の食品添加剤。
（２０）非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）の予防及び／又は治療における使用のための梅果汁の濃縮物又はその処理物。
（２１）濃縮物の処理物が濃縮物の中和処理物であることを特徴とする上記（２０）記載の梅果汁の濃縮物又はその処理物。
（２２）濃縮物が加熱濃縮物であることを特徴とする上記（２０）又は（２１）記載の梅果汁の濃縮物又はその処理物。
（２３）経口投与用であることを特徴とする上記（２０）～（２２）のいずれか記載の梅果汁の濃縮物又はその処理物。
（２４）サプリメントとして使用することを特徴とする上記（２０）～（２３）のいずれか記載の梅果汁の濃縮物又はその処理物。
（２５）肝組織における線維化を軽減することを特徴とする上記（２０）～（２４）のいずれか記載の梅果汁の濃縮物又はその処理物。
（２６）非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）が非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）であることを特徴とする上記（２０）～（２５）のいずれか記載の梅果汁の濃縮物又はその処理物。
（２７）有効量の梅果汁の濃縮物又はその処理物を対象に投与することを含む、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）を予防及び／又は治療する方法。
（２８）濃縮物の処理物が濃縮物の中和処理物であることを特徴とする上記（２７）記載の方法。
（２９）濃縮物が加熱濃縮物であることを特徴とする上記（２７）又は（２８）記載の方法。
（３０）経口投与用であることを特徴とする上記（２７）～（２９）のいずれか記載の方法。
（３１）サプリメントとして使用することを特徴とする上記（２７）～（３０）のいずれか記載の方法。
（３２）肝組織における線維化を軽減することを特徴とする上記（２７）～（３１）のいずれか記載の方法。
（３３）非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）が非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）であることを特徴とする上記（２７）～（３２）のいずれか記載の方法。
（３４）有効量の梅果汁の濃縮物又はその処理物の、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）の予防及び／又は治療剤を製造するための方法。
（３５）濃縮物の処理物が濃縮物の中和処理物であることを特徴とする上記（３４）記載の方法。
（３６）濃縮物が加熱濃縮物であることを特徴とする上記（３４）又は（３５）記載の方法。
（３７）経口投与用であることを特徴とする上記（３４）～（３６）のいずれか記載の方法。
（３８）サプリメントとして使用することを特徴とする上記（３４）～（３７）のいずれか記載の方法。
（３９）肝組織における線維化を軽減することを特徴とする上記（３４）～（３８）のいずれか記載の方法。
（４０）非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）が非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）であることを特徴とする上記（３４）～（３９）のいずれか記載の方法。
　本発明によると、ＮＡＦＬＤ、とりわけＮＡＳＨ患者における肝臓組織の線維化を軽減することによりＮＡＦＬＤ、とりわけＮＡＳＨを治療することができ、アルコール非摂取者におけるＮＡＦＬＤ、とりわけＮＡＳＨの発症率を低下させることにより、ＮＡＦＬＤ、とりわけＮＡＳＨを予防することができる。
ヘマトキシリン染色／シリウスレッド染色による肝臓組織を示す図である。（ａ）は標準マウスの肝臓、（ｂ）はＳＴＺ誘発ＮＡＳＨモデルマウス（コントロールマウス）の肝臓、（ｃ）は梅果汁濃縮中和希釈液を投与したＳＴＺ誘発ＮＡＳＨモデルマウスの肝臓である。 １２週齢の標準マウス、１２週齢のＳＴＺ誘発ＮＡＳＨモデルマウス、梅果汁濃縮中和希釈液投与試験開始２８日後の１２週齢のＳＴＺ誘発ＮＡＳＨモデルマウスの、シリウスレッド染色陽性部位を定量化したグラフである。 標準マウス、ＳＴＺ誘発ＮＡＳＨモデルマウス、梅果汁濃縮中和希釈液を投与したＳＴＺ誘発ＮＡＳＨモデルマウスの、血漿アルブミン値を示すグラフである。 標準マウス、ＳＴＺ誘発ＮＡＳＨモデルマウス、梅果汁濃縮中和希釈液を投与したＳＴＺ誘発ＮＡＳＨモデルマウスの、血漿総タンパク質値を示すグラフである。 標準マウス、ＳＴＺ誘発ＮＡＳＨモデルマウス、梅果汁濃縮中和希釈液を投与したＳＴＺ誘発ＮＡＳＨモデルマウスの、（ａ）体重、（ｂ）ＡＬＴ値、（ｃ）ＡＳＴ値を示すグラフである。 ヘマトキシリン染色／シリウスレッド染色による肝臓組織を示す図である。（ａ）はＳＴＺ誘発ＮＡＦＬＤモデルマウスの肝臓（コントロールマウス）、（ｂ）は梅果汁濃縮中和希釈液を投与したＳＴＺ誘発ＮＡＦＬＤモデルマウスの肝臓である。 ８週齢のＳＴＺ誘発ＮＡＦＬＤモデルマウス、梅果汁濃縮中和希釈液投与試験開始２１日後の８週齢のＳＴＺ誘発ＮＡＦＬＤモデルマウスの、シリウスレッド染色陽性部位を定量化したグラフである。 ＳＴＺ誘発ＮＡＦＬＤモデルマウス、梅果汁濃縮中和希釈液を投与したＳＴＺ誘発ＮＡＦＬＤモデルマウスの（ａ）ＡＳＴ値、（ｂ）ＡＬＴ値を示すグラフである。 ヘマトキシリン・エオジン染色による肝臓組織を示す図である。（ａ）は、コントロールＳＴＺ誘発ＮＡＦＬＤモデルマウスの肝臓、（ｂ）は、梅果汁濃縮中和希釈液を投与したＳＴＺ誘発ＮＡＦＬＤモデルマウスの肝臓である。 （ａ）は、ヘマトキシリン・エオジン染色を行った蒸留水を投与したコントロールラットの肝臓組織の顕微鏡写真（撮影倍率：４００倍）、（ｂ）は、中和処理を行っていない梅果汁加熱濃縮物溶液の希釈液を投与したラットの肝臓組織の顕微鏡写真（撮影倍率：４００倍）、及び（ｃ）は、抗αsmooth muscle actin抗体により免疫染色を行ったコントロールラットの肝臓組織の顕微鏡写真（撮影倍率：１０００倍）である。
　本発明のＮＡＦＬＤ、とりわけＮＡＳＨの予防及び／又は治療剤としては、濃縮物やその処理物を含む予防剤及び／又は治療剤であれば特に限定されないが、経口投与用であることが好ましい。上記濃縮物としては加熱濃縮物を好適に例示することができ、これら濃縮物の処理物としては、これら濃縮物の希釈及び／又は中和物を挙げることができる（以下、濃縮物の中和処理物を「梅果汁濃縮中和物」ということがある）。本発明のＮＡＦＬＤ又はＮＡＳＨ予防及び／又は治療剤は、医薬やサプリメントの形態で使用することができる。本発明の別の態様として、ＮＡＦＬＤ、とりわけＮＡＳＨの予防及び／又は治療に使用するための梅果汁の濃縮物やその処理物や、ＮＡＦＬＤ又はＮＡＳＨの予防及び／又は治療剤の製造における梅果汁の濃縮物やその処理物の使用や、対象に梅果汁の濃縮物やその処理物を経口投与するＮＡＦＬＤ、とりわけＮＡＳＨの予防及び／又は治療方法を挙げることができる。
　また、本発明のＮＡＦＬＤ、とりわけＮＡＳＨの予防及び／又は治療剤の調製方法としては、青梅から梅搾汁液を調製する工程（ａ）；工程（ａ）で調製された梅搾汁液を（加熱）濃縮して梅果汁の（加熱）濃縮物を調製する工程（ｂ）を備えておれば特に制限されないが、工程（ｂ）で調製された梅果汁（加熱）濃縮物を中和して梅果汁（加熱）濃縮中和物を調製する工程（ｃ）を備えることが好ましい。
　本発明におけるＮＡＳＨとしては、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）やＢ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）等のウイルス感染が認められず、かつ、明らかな飲酒歴がない、アルコール非摂取者の肝臓組織において、脂肪変性と炎症性細胞浸潤を伴う肝組織の炎症病態及び線維化が進行する病態を挙げることができる。肝組織の線維化とは、脂肪性変性や炎症性変化の兆候を示し始めた肝細胞の壊死や損傷による実質細胞の脱落や組織の機能低下に応じて起こる、活性化星細胞又は筋線維芽細胞を含む線維芽細胞の集積や線維芽細胞が作り出すコラーゲン等の細胞間マトリックスの蓄積等による脱落組織の置換をいうが、肝組織の線維化は、物理的な形態の維持には寄与するものの肝組織の機能を回復するものではないとされている。過度のコラーゲン等の線維性タンパク質の沈着や、線維芽細胞の浸潤増殖を伴う組織の硬直化が局所にとどまらず、肝臓組織に広汎にみられるようになると、病態はさらに進展し、より重篤な肝線維症や肝硬変へと進行する。本発明におけるＮＡＦＬＤとしては、アルコール非摂取者の肝臓組織において、肝細胞への中性脂肪の沈着が認められる病態を挙げることができ、上記ＮＡＳＨに加え、単純性脂肪肝、明確な炎症性細胞の集積や明確な線維化などのＮＡＳＨの定義は満たさないが、限局的な肝実質の脂肪変性壊死、あるいは小葉中心や門脈領域の間質拡張などを認めるＮＡＳＨへの移行過程とみられる病態を含む。また、血液検査では血中のＡＬＴ値やＡＳＴ値の軽度上昇（健常の２倍程度～４倍程度）を伴うことが多く、特にＡＬＴが有意な上昇を示すことが多いと言われている。
　本発明のＮＡＦＬＤ、とりわけＮＡＳＨの予防及び／又は治療剤の作用としては、ＮＡＳＨ患者における肝線維化の軽減を挙げることができ、肝線維化や肝組織の炎症の軽減の有無を確認する方法としては、肝臓組織切片を染色することにより作製された肝臓組織像において確認する方法を挙げることができる。肝臓組織切片を染色する方法としては、アニリンブルー染色法、トリクローム染色法、鍍銀染色法、アザン・マロリー染色法、ヘマトキシリン・エオジン染色法、シリウスレッド染色法、ヘマトキシリン染色／シリウスレッド染色法等を挙げることができる。中でも、ヘマトキシリンのような金属錯塩染料により核と細胞質を染色した後、親水性で高分子のシリウスレッドが、陽イオン性の金属錯塩染料と結合することにより、線維やその関連組織を強調して染色することができる、ヘマトキシリン染色／シリウスレッド染色法を好適に挙げることができる。
　本発明のＮＡＦＬＤ、とりわけＮＡＳＨ予防及び／又は治療剤の投与により肝線維化が軽減する場合としては、上記肝臓組織像を、顕微鏡等を用いて目視により評価することにより、投与後に線維化領域が減少又は消滅している場合や、画像解析アプリケーションを使用して染色陽性部位を抽出して解析することにより、投与後に染色陽性部位が減少又は消滅している場合を挙げることができる。なお、本発明におけるＮＡＳＨの病態の改善は、肝線維化の軽減をもって達成されるものであり、血漿アルブミン値の増加や、血漿総タンパク値を伴う場合もある。なお、上記肝線維化が軽減することには、形成し始めている肝線維の軽減による肝臓組織の回復や、肝線維化の開始を抑制することも便宜上含めることができる。
　本発明のＮＡＦＬＤ、とりわけＮＡＳＨ予防及び／又は治療剤が投与される対象（者）としては、ＮＡＦＬＤやＮＡＳＨと診断され、ＮＡＦＬＤやＮＡＳＨを治療する必要がある者；及び、メタボリックシンドローム、肥満、糖尿病、高脂血症、高血圧、高尿酸血症等のＮＡＦＬＤやＮＡＳＨを発症する可能性が高いとされている者など、ＮＡＦＬＤやＮＡＳＨと診断されていないが、ＮＡＦＬＤやＮＡＳＨを予防する必要のある／予防を希望する者；を例示することができる。
　本発明のＮＡＦＬＤ、とりわけＮＡＳＨ予防及び／又は治療剤の投与態様としては、投与される対象の健康状態、症状の軽重、年齢、体重、医師の判断等に応じて適宜設定することができるが、経口投与が好ましい。ヒトへの経口投与量としては、梅果汁濃縮中和物の希釈液（実施例３の１．７倍希釈物）換算で、３０～６００ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ、好ましくは４０～３７０ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ、より好ましくは８０～３００ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙを例示することができる。
　本発明のＮＡＦＬＤ、とりわけＮＡＳＨ予防及び／又は治療剤の製剤化においては、必要に応じて他の任意成分を加えることができる。任意成分としては、例えば結晶性セルロース、ゼラチン、乳糖、澱粉、ステアリン酸マグネシウム、タルク、植物性及び動物性脂肪、油脂、ガム、ポリアルキレングリコール等の、薬学的に許容される通常の担体、結合剤、安定化剤、溶剤、分散媒、増量剤、賦形剤、希釈剤、ｐＨ緩衝剤、崩壊剤、可溶化剤、溶解補助剤、等張剤などの各種調剤用配合成分を挙げることができる。
　本発明のＮＡＦＬＤ、とりわけＮＡＳＨ予防及び／又は治療剤の調製方法における工程（ａ）としては、青梅から梅搾汁液を調製する工程を挙げることができ、例えば、青梅１に対して、好ましくは０．２～０．６の割合の梅搾汁液を調製する工程を挙げることができる。具体的には、荒く破砕した青梅の果肉や凍結融解した青梅の果肉を、各種絞り器や遠心分離機で搾り、梅搾汁を回収することにより、梅搾汁液を調製する工程を例示することができる。上記荒く破砕された青梅の果肉を得る方法としては、青梅をミキサー等で破砕する方法を挙げることができる。青梅は、採取直後の青梅を使用することが好ましく、又は採取直後の青梅を、梅搾汁液を調製する直前まで凍結保存したものが好ましい。
　本発明のＮＡＦＬＤ、とりわけＮＡＳＨ予防及び／又は治療剤の調製方法における工程（ｂ）としては、上記工程（ａ）で調製された梅搾汁液を濃縮して梅果汁濃縮物、好ましくは加熱濃縮して梅果汁加熱濃縮物を調製する工程を挙げることができ、例えば、梅搾汁液１に対して好ましくは０．０７～０．２、より好ましくは０．０７５～０．１５、さらに好ましくは０．０８～０．１２の割合の梅果汁（加熱）濃縮物を調製する工程を挙げることができる。具体的には、上記梅搾汁液を減圧濃縮、あるいは、加熱沸騰させたまま１００℃以上を維持しながら加熱処理することにより、Ｂｒｉｘ値７０～８０％の梅果汁（加熱）濃縮物を調製する工程を挙げることができる。
　本発明のＮＡＦＬＤ、とりわけＮＡＳＨ予防及び／又は治療剤の調製方法における工程（ｃ）としては、上記工程（ｂ）で調製された梅果汁（加熱）濃縮物を中和して梅果汁（加熱）濃縮中和物を調製する工程を挙げることができるが、中和に先立って梅果汁（加熱）濃縮物を希釈しておくことが好ましい。例えば、上記梅果汁（加熱）濃縮物１に対して、好ましくは０．５～６．０、より好ましくは０．７５～４．３、さらに好ましくは１．０～２．０の割合の水又は適切な溶媒を添加することにより梅果汁（加熱）濃縮物の希釈溶液を調製することができる
　次いで、上記梅果汁（加熱）濃縮物の希釈溶液は中和される。具体的には、上記梅果汁（加熱）濃縮物の希釈溶液にアルカリ性溶液を添加することにより、上記梅果汁（加熱）濃縮物の希釈溶液のｐＨを、好ましくはｐＨ５．０～８．０、より好ましくはｐＨ５．４～７．２、さらに好ましくはｐＨ６．５～７．０に調整することにより、梅果汁（加熱）濃縮中和物の溶液を調製することができる。上記アルカリ性溶液としては、ＮａＯＨ水溶液、ＫＯＨ水溶液を例示することができる。
　上記梅果汁（加熱）濃縮中和物の溶液から、さらに非分散性の固形物や非流動性の固形物等の不溶物をフィルターや遠心分離により除去することもできる。また、上記梅果汁（加熱）濃縮中和物の溶液から、メッシュを用いて不溶物を除去した後に希釈して製品とすることもできる。
　本発明における梅果汁（加熱）濃縮中和物は、通常上記梅果汁（加熱）濃縮物が所定の倍率で希釈されている。かかる所定の倍率としては、１．５～２０倍、好ましくは２～１０倍、より好ましくは３～５倍を例示することができる。
　本発明の梅果汁の濃縮物又はその処理物は、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）の予防及び／又は治療剤として使用することに加え、食品分野においても利用することが可能である。例えば、本発明の梅果汁の濃縮物又はその処理物を含有する種々の食品（例えば、いわゆる健康食品を含む一般食品、特定特別用途食品、保健機能食品、食品素材、飲料）、食品添加剤、等が挙げられる。特別用途食品には、病者用食品、特定保健用食品、妊産婦・授乳婦用粉乳、乳児用調製粉乳、えん下困難者用食品が含まれる。保健機能食品には、特定保健用食品、栄養機能食品及び機能性表示食品が含まれる。本発明の梅果汁の濃縮物又はその処理物は、病者用食品、特定保健用食品、機能性表示食品などの製造に特に好適に用いることができる。本発明の梅果汁の濃縮物又はその処理物は、他の物質を加えずにそのままの形態（ペースト状）で食品として摂取することができる。また、必要に応じて、慣用手段により、本発明の梅果汁の濃縮物又はその処理物を粉末化あるいは顆粒化しても良い。更に、本発明の梅果汁の濃縮物又はその処理物に、米粉、油脂、澱粉、乳糖、麦芽糖、植物油脂粉末、カカオ脂末、ステアリン酸などの適当な助剤を添加した後、慣用の手段を用いて、食用に適した形態、例えば、ペースト、ドリンク、ソフトカプセル、シームレスカプセル、ハードカプセル、顆粒、丸剤などに成形して食用に供してもよく、また、種々の食品、例えば、食パン、菓子パン等のパン；ジャム；ビスケット；クッキー；せんべい等の菓子；ケーキ；ガム；インスタントラーメン、インスタントみそ汁、インスタントスープ等のインスタント食品；アイスクリーム製品；ヨーグルト、牛乳、ドリンク剤、清涼飲料（お茶、コーヒー、紅茶、ジュース等）などの飲料に添加して使用してもよい。この場合、本発明の梅果汁の濃縮物又はその処理物の配合量は、当該食用組成物の種類や状態等により適宜設定される。
　以下、実施例により本発明をより具体的に説明するが、本発明の技術的範囲はこれらの例示に限定されるものではない。
［梅果汁濃縮物中和物の溶液の調製］
　採取直後の青梅２０ｋｇをミキサーで砕き、荒く砕いた果肉を、遠心力を利用した絞り器で搾り、搾り汁を回収して梅搾汁液８ｋｇを得た。この梅搾汁液を加熱沸騰させたまま約９０時間かけて濃縮し、さらに２４時間１００℃以上を維持することにより加熱処理し、梅果汁加熱濃縮物０．４ｋｇ（Ｂｒｉｘ７５％）を得た。
　上記梅果汁加熱濃縮物を約等重量の水で希釈して梅果汁加熱濃縮物溶液とし、この梅果汁加熱濃縮物溶液に８Ｎ ＮａＯＨ水溶液を加え、ｐＨ６．８に中和し、精製水でメスアップして梅果汁濃縮中和物（３７ｗ／ｖ％溶液）を得た。かかる梅果汁濃縮中和物の溶液を３０００ｒｐｍにて遠心分離し、不溶物を沈殿させた。さらに、滅菌フィルター（０．２μｍポアサイズ、Sartorius社製）を用いて無菌化し、不溶物を除去した梅果汁濃縮中和物の溶液を得た。
［ＳＴＺ誘発ＮＡＳＨモデルマウスの作製］
　Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスにストレプトゾシン（ＳＴＺ）を投与し、ＳＴＺ誘発ＮＡＳＨモデルマウスを作製した。概要を以下に示す。
　妊娠１７日目のＣ５７ＢＬ／６Ｊマウス（日本チャールズリバー社製）３０匹について、標準食として、ガンマ線照射固型飼料（ＣＲＦ－１、オリエンタル酵母工業社製)の自由摂取、及び蒸留水の自由飲水下に個別飼育を行い、出産させた。産子マウスを４：１の割合で、ＳＴＺを投与するマウスと投与しないマウス（標準マウス）に分割した。
　ＳＴＺを投与する各マウスには、出生日を０日として出生後２日目に、インスリン用シリンジ（マイジェクター、テルモ社製）を用いて、ＳＴＺ（シグマ社製）の１０ｍｇ／ｍＬ（０．１Ｍクエン酸バッファーｐＨ４．５）溶液２０μＬを背部皮下投与した。ＳＴＺ投与後は４週齢に達するまで母乳栄養により飼育された。４週齢に達し、ＳＴＺ投与後４週間経過した日に、雌雄の判別を行い、雄性の個体を選択した。同日に雄性の個体は６時間絶食した後、簡易血糖測定装置(グルテストＮｅｏ、三和化学研究所製)を使用して、尾静脈からの採血により血糖値を測定した。
　絶食開始後６時間経過時を離乳とし、これ以降、高脂肪食（ＨＦＤ３２、日本クレア社製）を給餌し、ＳＴＺ誘発ＮＡＳＨモデルマウス群として飼育を続けた。ＳＴＺを投与しなかった標準マウスには、高脂肪食の代わりにＣＲＦ－１を給餌した。
［梅果汁濃縮中和物の投与］
（マウスの群分け）
　上記ＳＴＺ誘発ＮＡＳＨモデルマウス群について、８週齢に達した日に、頚静脈採血法より０．０５ｍＬの採血を行った。採血された血液は、ただちにヘパリンが入った遠心チューブに回収し、３０００ｒｐｍにて１０分間遠心分離して、血漿を得た後、ドライケム（富士フィルム社）を用いてＡＬＴ値を測定した。ＡＬＴ値、体重、及び血糖値に基づいて、統計解析システムＥＸＳＵＳ７．７（ＣＡＣエクシケア社製)を用いて、以下の検討において、梅果汁濃縮中和物の投与を行うマウス群と、コントロールマウス群とに、層別無作為化割付にて群分けを行った。群分け日から１週間毎に、及び剖検日に体重を測定した。
（投与態様）
　８週齢に達した次の日から、実施例１で調製した不溶物を除去した梅果汁加熱濃縮中和物（溶液）の蒸留水による１．７倍希釈液（「梅果汁濃縮中和希釈液」という）の投与試験を行った。梅果汁濃縮中和希釈液投与マウス群とコントロールマウス群にはＨＦＤ３２を、標準マウス群にはＣＲＦ－１を、それぞれ自由給餌させ、蒸留水の自由飲水下に飼育を行った。さらに、投与開始日から２８日間連続してそれぞれ午前９時から午前１１時の間に１回と午後５時から午後７時の間に１回ずつ経口胃ゾンデを用いて、梅果汁濃縮中和希釈液投与マウス群には、１０ｍＬ／ｋｇ（体重）の梅果汁濃縮中和希釈液を、コントロールマウス群には、１０ｍＬ／ｋｇ（体重）の蒸留水を投与した。
　梅果汁濃縮中和希釈液投与試験開始２８日後の剖検日に、１２週齢のＳＴＺ誘発ＮＡＳＨモデルマウスは２時間の絶食を行い、ソムノペンチル麻酔下に腹部大静脈より採血を行った。得られた血液は直ちにヘパリンが入った遠心チュープに回収し、３０００ｒｐｍにて、１０分間遠心分離して血漿を得た。放血による安楽死を確認した後、肝臓を採取し一部をホルマリン緩衝液に浸漬した。
（シリウスレッド染色画像）
　上記ホルマリン浸漬肝臓について、パラフィン切片を作製した。ヘマトキシリン染色及びPicrosirius Red Stain Kit(コスモバイオ株式会社)を用いてシリウスレッド染色を実施した。シリウスレッド染色を施した切片標本は、オールインワン蛍光顕微鏡（ＢＺ－９０００、キーエンス社製）にて１０倍の対物レンズ下で画像を取り込み、連結画像を作製した。結果を図１（ａ）～（ｃ）に示す。
（結果）
　図１（ａ）より明らかなとおり、ＳＴＺ非投与の標準マウスの肝臓ではシリウスレッド陽性となるコラーゲン繊維は血管基底膜にのみ認められ、疾患反応性の肝線維化は認められないが、図１（ｂ）から明らかなとおり、梅果汁濃縮中和希釈液非投与・ＳＴＺ投与のコントロールマウスの肝臓においては、炎症細胞の浸潤と、シリウスレッド陽性なコラーゲンが肝細胞周囲に拡張した像がみられ、肝線維化が認められた（特に矢印部位）。一方、図１（ｃ）から明らかなとおり、梅果汁濃縮中和希釈液投与マウスの肝臓においては、炎症細胞の浸潤と線維化はみられなかった。したがって、梅果汁濃縮中和希釈液の経口投与は、ＳＴＺ誘発ＮＡＳＨモデルマウスの肝臓における炎症細胞の浸潤と線維化を消滅させる効果があることが確認された。
（シリウスレッド染色陽性部位定量）
　上記連結画像について、ＢＺ－ＩＩ画像解析アプリケーションを使用してシリウスレッド陽性部位面積を抽出し、標準マウス（ｎ＝７）を１とした場合の、コントロールマウス（ｎ＝１８）と梅果汁濃縮中和希釈液投与マウス（ｎ＝１８）とのそれぞれの比を算出して図２のグラフに示した。有意差検定（スチューデントのｔ検定）は、ｐ＜０．０５をもって有意差ありと判断した。
（結果）
　図２から明らかなとおり、標準マウス（ｎ＝７）を１とした場合、コントロールマウスのシリウスレッド陽性部位の値は、１.５５であり、梅果汁濃縮中和希釈液投与マウスのシリウスレッド陽性部位の値は、１．２６であり有意に減少した（図中の＊は、ＳＴＺ投与のコントロールマウス群と梅果汁濃縮中和希釈液投与マウス群の比較において、上記の有意差検定で、Ｐ値が０．０５以下であることを示す）。梅果汁濃縮中和希釈液の経口投与は、ＮＡＳＨモデルマウスの肝臓における炎症細胞の浸潤と線維化を予防及び／又は治療する効果があることが確認された。
（血漿アルブミン値）
　非代償性肝硬変患者における血清アルブミン濃度と累積生存率とは相関関係にあり、血清アルブミン濃度が高値のほうが予後が良いことが知られていることから、３種のマウスについて血漿中のアルブミン濃度を測定した。結果を図３に示す。
（結果）
　図３から明らかなとおり、標準マウスの血漿アルブミン濃度が１．９１ｇ／ｄＬであり、コントロールマウスの血漿アルブミン濃度は１.７７ｇ／ｄＬであった。一方、梅果汁濃縮中和希釈液投与マウスの血漿アルブミン濃度は１．９６ｇ／ｄＬであったことから、梅果汁濃縮中和希釈液の経口投与は、血漿アルブミン値の増加をもたらし、生存率の上昇をもたらす可能性があることが確認された（図中の＊は、ＳＴＺ投与のコントロールマウス群と梅果汁濃縮中和希釈液投与マウス群の比較において、スチューデントのｔ検定による有意差検定で、Ｐ値が０．０５以下であることを示す）。
（血漿総タンパク値）
　肝障害が進展することにより肝機能が低下すると肝臓でのタンパク質合成能が低下することが知られていることから（Hepatology 1984 May-Jun;4(3):430-5）、３種のマウスについて血漿総タンパク値を測定した。結果を図４に示す。
（結果）
　図４から明らかなとおり、標準マウスの血漿総タンパク値が４．３４ｇ／ｄＬであり、コントロールマウスの血漿総タンパク値は３.８３ｇ／ｄＬであった。一方、梅果汁濃縮中和希釈液投与マウスのシリウスレッド血漿アルブミン値は４.１０ｇ／ｄＬであったことから、梅果汁濃縮中和希釈液の経口投与は、血漿総タンパク値の増加をもたらし、肝臓でのタンパク質合成能の上昇をもたらす可能性があることが確認された（図中の＊は、ＳＴＺ投与のコントロールマウス群と梅果汁濃縮中和希釈液投与マウス群の比較において、スチューデントのｔ検定による有意差検定で、Ｐ値が０．０５以下であることを示す）。
（肝機能指標）
　３種のマウスについて血漿中のアスパラギン酸アミノ基転移醇素（ＡＳＴ）濃度とアラニンアミノ基転移酵素（ＡＬＴ）濃度とが、富士ドライケム生化学分析装置により測定された。実験に使用したマウスの体重と併せて、結果を図５（ａ）～（ｃ）に示す。
（結果）
　図５（ａ）から明らかなとおり、体重については、コントロールマウス、梅果汁濃縮中和希釈液投与マウスとも、標準マウスと比較して減少していた。ＡＬＴ値及びＡＳＴ値については、コントロールマウス及び梅果汁濃縮中和希釈液投与マウスは、標準マウスと比較して高い値を示した（図中のn.s.は、ＳＴＺ投与のコントロールマウス群と梅果汁濃縮中和希釈液投与マウス群の比較において、スチューデントのｔ検定による有意差検定で、Ｐ値が０．０５より大きいことを示す）。
［まとめ］
　８～１２週齢のＳＴＺ誘発ＮＡＳＨモデルマウスにおいて、梅果汁濃縮中和希釈液を経口投与した場合、ＡＳＴ・ＡＬＴ値には差を認めないが線維化を有意に軽減されることが確認され、梅果汁濃縮中和希釈液のＮＡＳＨにおける線維化の軽減効果が認められた。また、１２週齢に至っても肝線維症への進行を抑制できることが確認された。また、血中アルブミン値・総タンパク値は梅果汁濃縮中和希釈液の投与により有意に上昇することが確認され、肝機能の改善が示された。
［ＳＴＺ誘発ＮＡＦＬＤモデルマウスの作製］
　５週齢に達したＳＴＺ誘発ＮＡＦＬＤモデルマウスに、５週齢に達した次の日から梅果汁濃縮中和希釈液を投与した。
　梅果汁濃縮中和希釈液投与試験開始２１日後の剖検日に、８週齢のＳＴＺ誘発ＮＡＦＬＤモデルマウスは２時間の絶食を行い、ソムノペンチル麻酔下に腹部大静脈より採血を行った。得られた血液は直ちにヘパリンが入った遠心チュープに回収し、３０００ｒｐｍにて、１０分間遠心分離して血漿を得た。放血による安楽死を確認した後、肝臓を採取し一部をホルマリン緩衝液に浸漬した。
（シリウスレッド染色画像）
　上記ホルマリン浸漬肝臓について、パラフィン切片を作製した。ヘマトキシリン染色及びPicrosirius Red Stain Kitを用いてシリウスレッド染色を実施した。シリウスレッド染色を施した切片標本は、上記オールインワン蛍光顕微鏡にて１０倍の対物レンズ下で画像を取り込み、連結画像を作製した。結果を図６（ａ）及び（ｂ）に示す。
（結果）
　図６（ａ）から明らかなとおり、梅果汁濃縮中和希釈液非投与・ＳＴＺ投与のコントロールＮＡＦＬＤモデルマウスの肝臓においては、血管周囲への炎症細胞の集積、肝細胞への脂肪沈着、ならびにシリウスレッド陽性なコラーゲン線維化部位の拡張が認められ、ＮＡＳＨへ進行していることが確認された。一方、図６（ｂ）から明らかなとおり、梅果汁濃縮中和希釈液を投与したマウスの肝臓においては、炎症細胞の浸潤や肝細胞の脂肪沈着、血管周囲の線維化拡張はほとんどみられなかった。したがって、梅果汁濃縮中和希釈液の経口投与は、ＳＴＺ誘発ＮＡＦＬＤモデルマウスの肝臓における炎症細胞の浸潤と線維化を抑制させる効果があり、ＮＡＦＬＤの改善や治療、ＮＡＳＨの予防効果があることが確認された。
（シリウスレッド染色陽性部位定量）
　上記連結画像について、ＢＺ－ＩＩ画像解析アプリケーションを使用してシリウスレッド陽性部位面積を抽出し、コントロールマウス（ｎ＝１９）を１とした場合の梅果汁濃縮中和希釈液投与マウス（ｎ＝１９）の比を算出して図７のグラフに示した。有意差検定（スチューデントのｔ検定）は、ｐ＜０．０５をもって有意差ありと判断した。
（結果）
　図７から明らかなとおり、コントロールマウス（ｎ＝１９）を１とした場合、梅果汁濃縮中和希釈液投与マウス（ｎ＝１９）のシリウスレッド陽性部位の値は、０．６３であり有意に減少した（図中の＊は、コントロールマウス群と梅果汁濃縮中和希釈液投与マウスの上記の有意差検定で、有意差ありと判定されたことを示す）。
（肝機能指標）
　標準マウス（ｎ＝７）、コントロールマウス（ｎ＝１９）、梅果汁濃縮中和希釈液投与マウス（ｎ＝１９）の３種のマウスについて血漿中のＡＳＴ濃度とＡＬＴ濃度とが、日立７１８０型自動分析装置を用いたＪＳＣＣ標準化対応法により測定された。結果を図８（ａ）及び（ｂ）に示す。
（結果）
　図８（ａ）及び（ｂ）から明らかなとおり、ＡＳＴ値及びＡＬＴ値について、梅果汁濃縮中和希釈液投与マウスは、コントロールマウスと比較して有意に低い値を示した（図中の＊は、コントロールマウス群と梅果汁濃縮中和希釈液投与マウス群の比較において、スチューデントのｔ検定による有意差検定で、Ｐ値が０．０５以下であることを示す）
（ヘマトキシリン・エオジン染色）
　コントロールマウスと梅果汁濃縮中和希釈液投与マウスとについて、上記パラフィン切片を用いてヘマトキシリン・エオジン染色を行った。両群のＡＳＴ及びＡＬＴの平均値に近い個体の切片を選択し、病理像をオールインワン蛍光顕微鏡（ＢＺ－９０００、キーエンス社製）にて４倍の対物レンズ下で観察した結果を図９（ａ）及び（ｂ）に示す。
　図９（ａ）及び（ｂ）から明らかなとおり、（ａ）のコントロールマウスにおいては、微小な脂肪滴沈着が多数認められた。（ｂ）の梅果汁濃縮中和希釈液投与マウスにおいては、脂肪滴は認められなかった。
（まとめ）
　５～８週齢のＳＴＺ誘発ＮＡＦＬＤモデルマウスにおいて、梅果汁濃縮中和希釈液を経口投与した場合、ＡＳＴ・ＡＬＴ値は有意に低下し、脂肪沈着も有意に軽減され、線維化の顕在化を抑制する効果があることが確認された。したがって、ＮＡＦＬＤモデルマウスの肝臓における炎症細胞の浸潤を予防して、８週齢に至ってもＮＡＳＨへの進行を抑制できることが確認された。
［総括］
　本発明の梅果汁濃縮物やその処理物は、ＮＡＦＬＤ又はＮＡＳＨを予防及び／又は治療できるという点で、医療分野において有用である。
［中和処理していない梅果汁の加熱濃縮物溶液の投与］
（材料と方法）
　動物は８週齢のウィスター系雄性ラットを用いた。実施例１の梅果汁の加熱濃縮物を約等重量の水で希釈して梅果汁加熱濃縮物溶液とし、さらに水でメスアップして中和していない梅果汁加熱濃縮物の溶液（３７ｗ／ｖ％溶液）を得た。この中和していない梅果汁加熱濃縮物の溶液を実施例３における試験と同濃度に希釈した梅果汁加熱濃縮物の投与液（中和していない梅果汁加熱濃縮物溶液の希釈液）を６ｇ／ｋｇの用量、動物に８日間経口投与し同量の蒸留水を投与した場合（コントロール群）と比較した。投与７日目の試験物質投与終了後に７５０ｍｇ／２．５ｍＬ／ｋｇの用量のＤ（＋）－ガラクトサミン塩酸塩を腹腔内に投与し急性肝障害を誘発した。このガラクトサミン投与４８時間後にペントバルビタール麻酔下に腹部大動脈より放血して、肝臓を採取しホルマリン固定し、ヘマトキシリン・エオジン染色に供した。また、ガラクトサミン投与ラットの肝小葉内に出現する細胞が、抗α smooth muscle actin抗体（Ｐｒｏｔｅｉｎｔｅｃｈ社）による免疫染色（ニチレイ社ヒストファイン染色キット）に陽性を示す活性化星細胞であることの確認を行った。
（結果）
　肝臓組織は蒸留水を与えた群では、肝小葉内に小型の繊維産生細胞の集積像が見られるのに対し（図１０(a)）。梅果汁濃縮物の投与液を与えた群では、これらの繊維産生細胞の集積が、著しく軽減されていた（図１０(ｂ)）。コントロール群の肝小葉内に集積した小型の繊維産生細胞は、α smooth muscle actin抗原が陽性な活性化星細胞であり、肝組織における繊維化の責任細胞である。この結果から梅果汁濃縮物の投与液を与えた群では、ガラクトサミンの投与により誘導される肝障害に伴う肝の繊維化責任細胞である活性化星細胞の出現を抑制したことが分かった。図１０（c）は、ガラクトサミン投与により肝小葉内に出現する細胞が、抗α smooth muscle actin抗体による免疫染色に陽性を示す活性化星細胞（→が示す細胞）であることを示している。
産業条の利用可能性
　本発明の梅果汁濃縮物やその処理物は、ＮＡＦＬＤ又はＮＡＳＨを予防及び／又は治療できるという点で、医療分野において極めて有用である。

Claims (19)

  1. 梅果汁の濃縮物又はその処理物を含む非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）の予防及び／又は治療剤。
  2. 濃縮物の処理物が濃縮物の中和処理物であることを特徴とする請求項１記載の予防及び／又は治療剤。
  3. 濃縮物が加熱濃縮物であることを特徴とする請求項１又は２記載の予防及び／又は治療剤。
  4. 経口投与用であることを特徴とする請求項１～３のいずれか記載の予防及び／又は治療剤。
  5. サプリメントとして使用することを特徴とする請求項１～４のいずれか記載の予防及び／又は治療剤。
  6. 肝組織における線維化を軽減することを特徴とする請求項１～５のいずれか記載の予防及び／又は治療剤。
  7. 非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）が非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）であることを特徴とする請求項１～６のいずれか記載の予防及び／又は治療剤。
  8. 以下の（ａ）及び（ｂ）の工程を含むことを特徴とする非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）の予防及び／又は治療剤の調製方法。
    （ａ）青梅から梅搾汁液を調製する工程；
    （ｂ）工程（ａ）で調製された梅搾汁液を濃縮して梅果汁濃縮物を調製する工程；
  9. 工程（ｂ）における濃縮が、加熱濃縮であることを特徴とする請求項８記載の調製方法。
  10. さらに、以下の工程（ｃ）を含むことを特徴とする請求項８又は９記載の調製方法。
    （ｃ）工程（ｂ）で調製された梅果汁濃縮物又は梅果汁加熱濃縮物を中和して、梅果汁濃縮中和物又は梅果汁加熱濃縮中和物を調製する工程；
  11. 非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）が非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）であることを特徴とする請求項８～１０のいずれか記載の調製方法。
  12. 梅果汁の濃縮物又はその処理物を含む食品。
  13. 濃縮物の処理物が濃縮物の中和処理物であることを特徴とする請求項１２記載の食品。
  14. 濃縮物が加熱濃縮物であることを特徴とする請求項１２又は１３記載の食品。
  15. 食品が病者用食品、特定保健用食品又は機能性表示食品である、請求項１２～１４のいずれか記載の食品。
  16. 梅果汁の濃縮物又はその処理物を含む食品添加剤。
  17. 濃縮物の処理物が濃縮物の中和処理物であることを特徴とする請求項１６記載の食品添加剤。
  18. 濃縮物が加熱濃縮物であることを特徴とする請求項１６又は１７記載の食品添加剤。
  19. 病者用食品、特定保健用食品又は機能性表示食品の製造に使用される、請求項１６～１８のいずれか記載の食品添加剤。
PCT/JP2016/004963 2015-11-27 2016-11-25 Ｎａｆｌｄ／ｎａｓｈ予防及び／又は治療剤 WO2017090253A1 (ja)

Priority Applications (10)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CA3004153A CA3004153A1 (en) 2015-11-27 2016-11-25 Prophylactic and/or therapeutic agent for non-alcoholic fatty liver diseases (nafld)/non-alcoholic steatohepatitis (nash)
JP2017552276A JP6485846B2 (ja) 2015-11-27 2016-11-25 Ｎａｆｌｄ／ｎａｓｈ予防及び／又は治療剤
US15/776,108 US10610558B2 (en) 2015-11-27 2016-11-25 Prophylactic and/or therapeutic agent for NAFLD/NASH
KR1020187013064A KR102080128B1 (ko) 2015-11-27 2016-11-25 Nafld/nash 예방 및/또는 치료제
EP16868204.5A EP3381459A4 (en) 2015-11-27 2016-11-25 PROPHYLACTIC AND / OR THERAPEUTIC ACTIVE FOR NAFLD / NASH
SG11201804029UA SG11201804029UA (en) 2015-11-27 2016-11-25 Prophylactic and/or therapeutic agent for nafld/nash
CN201680068041.1A CN108289923A (zh) 2015-11-27 2016-11-25 Nafld/nash预防及/或治疗剂
NZ742338A NZ742338A (en) 2015-11-27 2016-11-25 Prophylactic and/or therapeutic agent for nafld/nash
AU2016359870A AU2016359870B2 (en) 2015-11-27 2016-11-25 Prophylactic and/or therapeutic agent for NAFLD/NASH
PH12018550050A PH12018550050A1 (en) 2015-11-27 2018-04-27 Prophylactic and/or therapeutic agent for nafld/nash

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2015-232053 2015-11-27
JP2015232053 2015-11-27

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2017090253A1 true WO2017090253A1 (ja) 2017-06-01

Family

ID=58763356

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/JP2016/004963 WO2017090253A1 (ja) 2015-11-27 2016-11-25 Ｎａｆｌｄ／ｎａｓｈ予防及び／又は治療剤

Country Status (12)

Country Link
US (1) US10610558B2 (ja)
EP (1) EP3381459A4 (ja)
JP (1) JP6485846B2 (ja)
KR (1) KR102080128B1 (ja)
CN (1) CN108289923A (ja)
AU (1) AU2016359870B2 (ja)
CA (1) CA3004153A1 (ja)
NZ (1) NZ742338A (ja)
PH (1) PH12018550050A1 (ja)
SG (1) SG11201804029UA (ja)
TW (1) TW201722455A (ja)
WO (1) WO2017090253A1 (ja)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR100396590B1 (ko) * 2001-07-10 2003-09-02 주식회사 신광레포츠 화살대 제조방법 및 상기 방법으로 제조된 화살대
CN114845725B (zh) * 2019-12-24 2023-09-26 (株)美尊生活健康 包含朝鲜紫菀提取物的用于预防或治疗非酒精性脂肪性肝炎的药物组合物

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2003265138A (ja) * 2002-03-18 2003-09-24 Nippon Apricot:Kk 抗腫瘍性飲食品
JP2007143452A (ja) 2005-11-25 2007-06-14 Nippon Apricot Kk オートファジー誘導用飲食品
JP2011201841A (ja) 2010-03-26 2011-10-13 Ａｄａ Ｂｉｏ株式会社 ウイルス性肝炎患者における肝機能改善剤

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7473426B2 (en) * 2001-02-27 2009-01-06 Yun Seok Choe Method for selectively inhibiting reuptake of serotonin and norepinephrine using yeast extract
KR101245434B1 (ko) * 2012-09-28 2013-03-19 김태현 농축산물의 생산효율 향상을 위한 생육 보조제
KR101639128B1 (ko) 2013-10-29 2016-07-13 울산대학교 산학협력단 플라스마로젠 전구체, 플라스마로젠 또는 플라스마로젠 유사체를 유효성분으로 함유하는 간질환 예방 또는 치료용 약학조성물

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2003265138A (ja) * 2002-03-18 2003-09-24 Nippon Apricot:Kk 抗腫瘍性飲食品
JP2007143452A (ja) 2005-11-25 2007-06-14 Nippon Apricot Kk オートファジー誘導用飲食品
JP2011201841A (ja) 2010-03-26 2011-10-13 Ａｄａ Ｂｉｏ株式会社 ウイルス性肝炎患者における肝機能改善剤

Non-Patent Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
AKIHIRO MATSUMOTO: "Hi Alcohol-sei Shibo-sei Kan Shikkan (NAFLD)", MEDICAL JOURNAL OF AIZAWA HOSPITAL, vol. 12, 2014, pages 1 - 4, XP009511088, ISSN: 1882-0565 *
HARUHISA NAKAO ET AL.: "NASH(non-alcoholic steatohepatitis)", MEBIO, vol. 26, no. 11, November 2009 (2009-11-01), pages 82 - 89, XP009511089, ISSN: 0910-0474 *
HEPATOLOGY, vol. 4, no. 3, May 1984 (1984-05-01), pages 430 - 5
HOKARI A ET AL.: "Efficacy of MK 615 for the treatment of patients with liver disorders", WORLD JOURNAL OF GASTROENTEROLOGY, vol. 18, no. 31, 21 August 2012 (2012-08-21), pages 4118 - 4126, XP055541553, ISSN: 1007-9327 *
KEN'ICHI IKESHIMA ET AL.: "Topics update in NAFLD: from bench side to clinics", JAPANESE JOURNAL OF GASTROENTEROLOGY, vol. 111, no. 1, January 2014 (2014-01-01), pages 4 - 13, XP055496916, ISSN: 0446-6586 *
MASAKAZU TAKAHASHI ET AL.: "Suppressive Effect on Lipid Accumulation in Hepatocytes by Prunus mume Extracts and Edible Oil Constituent of Perilla frutescens var. frutescens Cultivated in Fukui", JOURNAL OF FUKUI PREFECTURAL UNIVERSITY, vol. 45, pages 47 - 55, XP009511086, ISSN: 0918-9637, Retrieved from the Internet <URL:http://hdl.handle.net/10461/18452> [retrieved on 20161214] *
See also references of EP3381459A4
WORLD GASTROENTEROL., vol. 18, no. 31, 2012, pages 4118 - 4126

Also Published As

Publication number Publication date
KR102080128B1 (ko) 2020-02-24
US20180325975A1 (en) 2018-11-15
KR20180059553A (ko) 2018-06-04
AU2016359870B2 (en) 2019-10-31
EP3381459A1 (en) 2018-10-03
JPWO2017090253A1 (ja) 2018-07-12
AU2016359870A1 (en) 2018-05-24
EP3381459A4 (en) 2019-07-24
JP6485846B2 (ja) 2019-03-20
NZ742338A (en) 2020-01-31
CA3004153A1 (en) 2017-06-01
SG11201804029UA (en) 2018-06-28
TW201722455A (zh) 2017-07-01
US10610558B2 (en) 2020-04-07
CN108289923A (zh) 2018-07-17
PH12018550050A1 (en) 2018-10-29

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP5597345B2 (ja) アディポネクチン濃度上昇剤
CN104320981A (zh) 葎草提取物在预防或治疗代谢紊乱或脂肪肝中的用途
JP6485846B2 (ja) Ｎａｆｌｄ／ｎａｓｈ予防及び／又は治療剤
JP2011201841A (ja) ウイルス性肝炎患者における肝機能改善剤
WO2018084224A1 (ja) 非アルコール性脂肪性肝疾患治療又は予防剤及び非アルコール性脂肪性肝疾患予防用食品
JP5506229B2 (ja) メタボリックシンドローム改善又は予防剤
JP5606005B2 (ja) メタボリックシンドローム改善又は予防剤
JP2009057283A (ja) 緑藻由来の硫酸化多糖を含有する血管障害改善剤及びその製造方法
JP4712257B2 (ja) チキンエキス膜処理物及びその含有物の製造法
JP2001046019A (ja) 柑橘系由来の栄養組成物
JP5305577B2 (ja) 糖尿病性疾患の予防・治療用組成物及び糖尿病性疾患の予防・改善用機能性食品
CN115671128B (zh) 一种活性多糖、活性多糖益生菌组合物及其应用
US20240123019A1 (en) Composition for treating or ameliorating liver disease and liver dysfunction comprising zizania latifolia extract
JP6378926B2 (ja) 血糖値低下用組成物
TWI670068B (zh) 花生膜萃取物於提升ptprd基因表現之應用
TWI832945B (zh) 血糖值上昇抑制用、血中三酸甘油酯上昇抑制用組成物
CN106334028A (zh) 一种治疗糖尿病肾病的中药组合物
JP5007995B2 (ja) 海苔を用いた糖尿病治療剤
JP2006213607A (ja) 尿酸値低下剤
JP6518993B2 (ja) 体重増加抑制剤
TWI691334B (zh) 內服用組成物、製劑、與用途
JP2010202639A (ja) 糖尿病および／または高脂血症および／または高血圧、あるいはメタボリックシンドロームの治療、改善および／または予防用組成物
CN106728405A (zh) 一种牛磺酸和水溶性茶多酚复方组合物及其制备方法与应用
EP0438596A1 (en) Solid and aqueous treated products of lamprey
JP2010195772A (ja) 海苔を用いた血中インスリン値上昇抑制剤、脂肪分解抑制剤、高インスリン血症治療薬、糖尿病治療薬、および、機能性飲食品

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 16868204

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2017552276

Country of ref document: JP

Kind code of ref document: A

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 12018550050

Country of ref document: PH

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 3004153

Country of ref document: CA

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 20187013064

Country of ref document: KR

Kind code of ref document: A

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 11201804029U

Country of ref document: SG

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 15776108

Country of ref document: US

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2016359870

Country of ref document: AU

Date of ref document: 20161125

Kind code of ref document: A

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 2016868204

Country of ref document: EP

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2016868204

Country of ref document: EP

Effective date: 20180627