WO2017034086A1 - 복령 재배용 배지 조성물 및 이를 이용한 복령의 재배방법 - Google Patents

복령 재배용 배지 조성물 및 이를 이용한 복령의 재배방법 Download PDF

Info

Publication number
WO2017034086A1
WO2017034086A1 PCT/KR2015/012640 KR2015012640W WO2017034086A1 WO 2017034086 A1 WO2017034086 A1 WO 2017034086A1 KR 2015012640 W KR2015012640 W KR 2015012640W WO 2017034086 A1 WO2017034086 A1 WO 2017034086A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
bokryeong
poria cocos
sawdust
cultivation
content
Prior art date
Application number
PCT/KR2015/012640
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
이찬중
정종천
문지원
권재건
공원식
Original Assignee
대한민국(농촌진흥청장)
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 대한민국(농촌진흥청장) filed Critical 대한민국(농촌진흥청장)
Publication of WO2017034086A1 publication Critical patent/WO2017034086A1/ko

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01G—HORTICULTURE; CULTIVATION OF VEGETABLES, FLOWERS, RICE, FRUIT, VINES, HOPS OR SEAWEED; FORESTRY; WATERING
    • A01G18/00—Cultivation of mushrooms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01G—HORTICULTURE; CULTIVATION OF VEGETABLES, FLOWERS, RICE, FRUIT, VINES, HOPS OR SEAWEED; FORESTRY; WATERING
    • A01G18/00—Cultivation of mushrooms
    • A01G18/20—Culture media, e.g. compost

Definitions

  • the present invention relates to a cultivation method of the cultivation of bokyeong cultivation medium, and more specifically, to a cultivation method of bokyeong for mass production of the clean bokyeong without pollution using the bokyeong cultivation medium composition containing sawdust and nutrients will be.
  • Mushrooms differ in cultivation methods depending on the type, and they are divided into 1) cultivation of fungi such as zelkova and mushrooms, 2) cultivation of mushrooms such as enoki mushroom and zelkova, and 3) cultivation of wood such as shiitake mushroom, ganoderma lucidum and bokyeong.
  • Fukryeong ( ⁇ ⁇ ) is a fungus belonging to the genus Pooryeong (Poria cocos) is a parasitic root of the pine roots to form a fungal nucleus, which is an important essential medicine in oriental medicine has been used as a herbal medicine harvested in the wild forest.
  • Pooryeong (Poria cocos) is a parasitic root of the pine roots to form a fungal nucleus, which is an important essential medicine in oriental medicine has been used as a herbal medicine harvested in the wild forest.
  • the demand for Chinese medicine has lowered due to the improvement of national income level and the interest in health, and it is artificially cultivated. As such quality is low, the development of new cultivation technology is urgently needed.
  • seedlings were inoculated by sealing with a black plastic bag on a 20 ⁇ 60cm length wood block and inoculated with sawdust or grain seedlings, and sandwiched between logs and logs, and then inoculated in the darkroom, and harvested in the dark.
  • the method is disclosed in Patent Publication No. 10-2005-0051801.
  • the above cultivation method it is carried out from April to November and cultivates seedlings in the soil and seedlings or sawdust or grain medium in the soil, attaches them to the logs, seals them in plastic bags and places them in the growers for at least 6 months to 2 years.
  • Harvest according to this method black vinyl cannot be sterilized, so there is no sterilization process, so the failure rate is high due to contamination during cultivation period, in particular, liquid spawn inoculation is impossible, and the formation process of Bokryeong cannot be visually confirmed, and in particular, stoppers and filters are not used in strain culture. No. After the swelling, the growth of Bokryeong was stopped, and there was a disadvantage that the polluted air shortage or the formation of Bokryeong stopped due to lack of moisture in the wood.
  • the Fukryeong produced by the landfill cultivation method of the well-known Bokryeong contains a large amount of foreign substances such as sand, soil, sawdust, etc., which cannot be handled in the medicinal herb, and the hardness is low, so there is a problem that when cutting for processing into a medicinal herb There is a problem that is difficult to use.
  • the present invention has been made to overcome the above problems, the object of the present invention is different from the conventional soil underground cultivation method and non-wood bag cultivation method using a pure sawdust after the inoculation fungi inoculated by the method of producing a clean pollution free
  • the present invention provides a composition for cultivation of bokyeong cultivation medium and a method of cultivating the bokyong using the same that can mass-produce bokyeong in sawdust without using wood.
  • the present invention is sawdust; And at least one nutrient source selected from the group consisting of rice bran, wheat bran and cottonseed meal, and provides 1 to 300 parts by weight of the nutrient source with respect to 100 parts by weight of the sawdust.
  • the nutrient source when the nutrient source is rice bran, it may include 1 to 45 parts by weight of rice bran relative to 100 parts by weight of the sawdust.
  • the nutrient source when it is bran, it may include 1 to 300 parts by weight of bran based on 100 parts by weight of the sawdust.
  • the nutrient source when it is cottonseed foil, it may include 1 to 20 parts by weight of cottonseed foil with respect to 100 parts by weight of the sawdust.
  • the present invention provides a cultivation method of Bokryeong, characterized in that the culture by inoculating Bokryeong bacteria in the medium composition.
  • the cultivation method is a step of inoculating the Bacillus bacillus in the medium composition; Culturing the inoculated Bokryeong bacteria to form bacteria nuclei from Bokryeong bacteria; It may include; and three stages to grow the bokyong from the fungal nucleus formed in the second step.
  • the two-step culture may be carried out for 45 to 50 days at a temperature of 20 to 35 °C and relative humidity of 60 to 70%.
  • the formation of the bacterium in step 2 may be performed for 20 to 25 days at a temperature of 20 to 25 °C, relative humidity of 60 to 80% and carbon dioxide concentration of 800 to 1200 ppm. .
  • the growth of the Bokryeong in the third step may be carried out at a temperature of 20 to 30 °C, relative humidity of 60 to 90% and carbon dioxide concentration of 800 to 1200 ppm.
  • the present invention is a cultivated in the cultivation method of the above, L-Aspartic acid content of 1.3 ⁇ 1.5 mg / g, L-Glutamic acid content of 1.4 ⁇ 1.6 mg / g, L-Histidine content of 0.2 ⁇ 0.4 mg / g, L-Alanine content 0.8-1.0 mg / g, L-Proline content 0.7-0.9 mg / g, L-Methionine content 0.2-0.4 mg / g, L-Lysin content 0.6 ⁇ 0.8 mg / g, L-Leucine content is 0.7-0.9 mg / g, and L-Phenylalanine content is 0.5-0.7 mg / g.
  • the cultivation in the bottle or bag using sawdust for the production of Bokryeong without using wood it is possible to mass production of Bokryeong, cultivation of Bokryeong using sawdust without embedding the wood directly into the soil sand, soil It is possible to prevent foreign substances, such as the mixing in the Bokryeong, and to reduce the production cost because it is possible to mass production of Bokryeong by automation rather than the method of cultivating non-filled wood plastic bags using solid wood.
  • 1 is an image of a sawdust for cultivation of the Fuling according to an embodiment of the present invention.
  • Figure 2 is an image showing the mycelial growth experiment process of Bokryeong bacteria according to the amount of rice bran added.
  • Figure 3 is an image showing the mycelial growth experiment process of Bokryeong bacteria according to the amount of bran added.
  • Figure 4 is an image showing the mycelial growth experiment process of Bokryeong bacteria according to the amount of cottonseed gourd.
  • Fig. 5 (a) is an image observing the formation of fungal nuclei of Bokyeong; (b) is an image showing the spirit of the ghost.
  • Fig. 6 (a) is an image of Bokryong with a bag; (b) is an image of the ghost of the unfinished bag; (c) is an image of Bokryeong contaminated with blue mold.
  • 7 (a) and 7 (b) are images of Bokryeong in sawdust medium and sawdust and nutrient addition medium.
  • 9 is an image showing the harvest harvested from the sawdust medium of a preferred embodiment of the present invention.
  • Figure 10 is a graph showing the amino acid content of each of the bokyeong sample according to an embodiment of the present invention.
  • Figure 11 (a) is an amino acid standard product; (b) is the natural wild boar; (c) is Chinese Bok-Ryong; (d) reclaimed landfill; (e) is a graph showing the spectrum of amino acid content for sawdust cultivation age.
  • the Fukryeong produced by the landfill cultivation method of the well-known Bokryeong contains a large amount of foreign substances such as sand, soil, sawdust, etc., which cannot be handled in the medicinal herb, and the hardness is low, so there is a problem that when cutting for processing into a medicinal herb There was an issue that was difficult to use.
  • the present invention sawdust; And at least one nutrient source selected from the group consisting of rice bran, wheat bran and cottonseed foil, thereby providing a composition for cultivation of the ghostling cultivation, which prevents foreign substances from being incorporated into the ghost, and rather than a non-filled wood plastic bag cultivation method using solid wood. Since it is possible to mass production of Bokryeong by automation, it is possible to provide a cultivation method of Bokryeong which can reduce the production cost.
  • the present invention will be described in more detail.
  • the present invention includes sawdust.
  • the sawdust may be used as a main raw material of the medium which can be mixed with nutrients and put in sterile state in a confined space to cultivate the Baeryeong bacteria.
  • the sawdust may use a variety of sawdust, such as conifers, deciduous trees, as well as pine, and is not particularly limited to species, but preferably one or more selected from the group consisting of pine sawdust, cottonwood sawdust, rice pine sawdust and oak sawdust (See FIG. 1).
  • the present invention includes at least one nutrient source selected from the group consisting of rice bran, bran and cottonseed meal.
  • the nutrient source is mixed with sawdust in an appropriate ratio to produce a medium capable of cultivating Bokyeong, which is excellent in mycelial growth rate and mycelial density, exhibits high water content and moisture content, and has improved amino acid content.
  • the nutrient source 1 to 300 parts by weight based on 100 parts by weight of the sawdust.
  • the nutrient source when the nutrient source is rice bran, it may include 1 to 45 parts by weight of rice bran relative to 100 parts by weight of sawdust, preferably 1 to 25 parts by weight based on 100 parts by weight of sawdust. It may include wealth.
  • the medium composition includes sawdust and nutrients in the above range, the mycelial growth rate and mycelial density of Bokyeong bacteria are excellent, exhibit high water content and moisture content, and improve the amino acid content.
  • the nutrient source when the nutrient source is bran, it may include 1 to 300 parts by weight of bran based on 100 parts by weight of the sawdust, preferably 1 to 45 parts by weight of wheat bran based on 100 parts by weight of sawdust. It may include wealth.
  • the medium composition includes sawdust and nutrients in the above range, the mycelial growth rate and mycelial density of Bokyeong bacteria are excellent, exhibit high water content and moisture content, and improve the amino acid content.
  • the nutrient source when the nutrient source is cottonseed foil, it may include 1 to 20 parts by weight of cottonseed foil with respect to 100 parts by weight of the sawdust, preferably 1 ⁇ 100% by weight cottonseed foil with respect to 100 parts by weight of sawdust It may include 12 parts by weight.
  • the medium composition includes sawdust and nutrients in the above range, the mycelial growth rate and mycelial density of Bokyeong bacteria are excellent, exhibit high water content and moisture content, and improve the amino acid content.
  • the present invention provides a cultivation method of Bokryeong, characterized in that the culture by inoculating Bokryeong bacteria in the medium composition.
  • the present invention will be described in more detail.
  • the cultivation method of Bokryeong can be prepared by inoculating the culture medium by inoculating Bok-Ryeong bacterium with excellent mycelial growth rate and mycelial density, exhibiting high water content and moisture content, and improving amino acid content. have.
  • the cultivation method of the bokyeong step 1 inoculating the bokyong bacteria in the medium composition; Culturing the inoculated Bokryeong bacteria to form bacteria nuclei from Bokryeong bacteria; It may include; and three stages to grow the bokyong from the fungal nucleus formed in the second step.
  • the first step is a step of inoculating the Baengryng bacteria in the culture medium composition
  • in the subsequent step can be grown mycelia of the Baengryeong bacteria from which bacteria can be formed.
  • Step 2 is a step of culturing the inoculated Bokryeong bacteria to form a bacterial nucleus from Bokryeong bacteria (see Fig. 5).
  • the two-step culture may be performed for 45 to 50 days at a temperature of 20 ⁇ 35 °C and 60 ⁇ 70% relative humidity, preferably 20 ⁇ 28 °C temperature and 60 ⁇ 70% relative humidity It is recommended to be carried out in 45-50 days.
  • Fueryeong mycelium grows in the temperature range of 10 ⁇ 35 °C, when cultured at a temperature of more than 35 °C has a problem that the killing or dead age of Fukryeong mycelium, the growth rate of mycelium is significantly slower than the temperature below 20 °C There is a problem in that the growth of mycelium is stopped at 5 °C or less.
  • the formation of the bacterial nuclei in the second step may be carried out for 20 to 25 days at a temperature of 20 to 25 °C, relative humidity of 60 to 80% and carbon dioxide concentration of 800 to 1200 ppm. If it is out of the above range there is a problem that the formation of the bacteria nucleus is late or the bacteria are not formed.
  • the steps 1 and 2 is preferably carried out in a sealed atmosphere separated from the external environment. Therefore, the medium according to the present invention may be contained in a plastic bag or a bottle and covered with a stopper to form a sealed atmosphere. At this time, there is a problem that contamination may occur in the ghosts when the closed atmosphere is not formed as described above (see Figure 6). In addition, depending on the container to create a closed atmosphere, such as a plastic bag or bottle may affect the productivity of the ghost (see Figure 8).
  • the stopper can be removed to induce Bokryeong fruiting body.
  • the growth of the Bokryeong in the third step may be carried out at a temperature of 20 ⁇ 30 °C, relative humidity of 60 ⁇ 90% and carbon dioxide concentration of 800 ⁇ 1200 ppm. If the growth temperature is less than 20 ° C slow growth of Bokryeong, if it exceeds 30 ° C there is a problem in the growth of Bokryeong.
  • the Bokryeong diameter should be about 10cm or more, in the case of the Bokryeong according to the present invention can be grown in a state capable of harvesting the diameter of the Bokryeong beyond about 10 cm when grown for about 5-6 months.
  • the present invention is a cultivation method of the cultivated in the above cultivation method, L-Aspartic acid content of 1.3 ⁇ 1.5 mg / g, L-Glutamic acid content of 1.4 ⁇ 1.6 mg / g, LHistidine content of 0.2 ⁇ 0.4 mg / g, L-Alanine content 0.8-1.0 mg / g, L-Proline content 0.7-0.9 mg / g, L-Methionine content 0.2-0.4 mg / g, L-Lysin content 0.6-0.8 mg / g, L-Leucine content of 0.7 to 0.9 mg / g, and L-Phenylalanine content of 0.5 to 0.7 mg / g provides a ghost.
  • the yeongryok can produce an improved amino acid content compared to the conventional manufacturing method by cultivating the yeongryok in the medium for cultivation of the yeongryong presented above.
  • Bokryeong is L-Serine content of 0.8 ⁇ 0.9 mg / g, Glycine content of 0.5 ⁇ 0.6 mg / g, Ammonium chloride content of 2.1 ⁇ 2.2 mg / g, L-Arginine
  • the content of is 0.6 ⁇ 0.7 mg / g
  • the content of L-Threonine is 0.7 ⁇ 0.8 mg / g
  • the content of L-Cystine is 0.15 ⁇ 0.25 mg / g
  • the content of L-Tyrosine is 0.1 ⁇ 0.2 mg / g, L-Valine content of 0.65 ⁇ 0.75 mg / g, L-Isoleucine
  • the content may be 0.1 to 0.2 mg / g.
  • the present invention in addition to the amino acid as described above, a relatively high content of a large amount is contained, and it is confirmed that there is a substance contained only in the fukryeong according to the present invention, but not in the cultivated according to the conventional cultivation method (See FIG. 13).
  • the strain used in the present invention was used as a test strain Fubok 1 (Poria cocos) stored in the Mushroom Division of the National Academy of Horticultural & Herbal Sciences.
  • the medium in which the culture is completed is transferred to a growth chamber (temperature 20 ° C.-25 ° C., relative humidity 60-80%, CO 2 concentration 1000 ppm), and the formation of bacterial nuclei is required for about 20-25 days without removing the cap of the bag. Induced.
  • Example 1 Except for using the same medium as in Table 2 in the step of Example 1 was grown in the same conditions as in Example 1.
  • landfill logs were prepared for the cultivated by the sawdust spawn inoculation cultivation method.
  • the mycelial growth and the mycelial density according to the medium of Examples 1 to 19 were grown by using a column as shown in FIGS. 2 to 4, and the results are shown in Table 3 below.
  • the mycelial growth at this time is shown in Figures 2 to 4.
  • the following mycelial density is about +, + ++; +++ marked as steel.
  • the cultivation days were faster in medium supplemented with nutrients than pure sawdust medium (Example 7).
  • the mycelial growth was 12.3 cm in the medium added 10% rice bran (Example 2), 11.2 cm in the medium added 30% bran (Example 11) 4 days after culture (Example 14) ) was 11.9 cm, and sawdust medium was 7.4 cm and mycelial growth was faster in medium supplemented with nutrients.
  • the mycelial density according to the amount of nutrient source was low in rice bran 5% medium (Example 1), wheat bran 5-20% medium (Examples 8-10) and cottonseed foil medium (Examples 5-10). , Sawdust 100% medium (Example 7) was confirmed to show a low density.
  • the average weight of Bokryeong grown in 100% sawdust medium was 230 g / bag, and the dry weight was 86.3 g / bag, and the moisture content was about 62.5%, and it was grown in a sawdust and nutrient mixture medium.
  • the average weight of Bokryeong was 260 g / bag, and the dry weight was 96.2 g / bag.
  • the moisture content was about 63%. Therefore, it could be seen that the nutrients were added to the sawdust medium rather than the sawdust 100% medium to show high yield.
  • Bokryeong of Example 2 and Comparative Examples 1 to 3 were lyophilized and then pulverized to prepare a powder to prepare an analytical sample for amino acid content analysis.
  • 0.1 g of the sample was mixed with 1 ml of 6N HCl and hydrolyzed for 24 hours after N2 gas filling with Fluorescence Waters Pico-Tag Workstation. After hydrolysis, the mixture was centrifuged, 200 ⁇ l of the supernatant was concentrated, and then dissolved in 500 ⁇ l of 25 mM HCl.
  • the solution was taken in a syringe, filtered through a syringe filter (Whatman PVDF syringe filter 13 mm, 0.3 ⁇ m), and subjected to fluorescence derivatization with an AccQ-Fluor Reagent kit.
  • the configuration of the HPLC used for amino acid analysis is shown in Table 5 below.
  • amino acid standards include 17 kinds of ammonia, including L-alanine, and diluted with tertiary distilled water, and prepared standard solutions for each concentration.
  • a calibration curve was prepared from the peak area to quantify the amount of components in the sample. Diluted concentration was 12.5 times, 25 times, 50 times, and 100 times, and the standard product was Amino Acid Standard.
  • a according to the present invention is an amino acid standard
  • the sample of Example 2 is E
  • the sample of Comparative Example 1 is B
  • the sample of Comparative Example 2 is D
  • the sample of Comparative Example 3 corresponds to C.
  • the bokyeong cultivated in the cultivation medium according to the present invention is superior in amino acid components compared to the cultivated by other cultivation method.
  • Assay samples were prepared in Comparative Examples 1 to 3 and Example 2 in the same manner as in Experimental Example 1, and were loaded at 1.0 ⁇ l in 1 cm intervals on 2 cm below the TLC plate.
  • the dye solution was infiltrated into the TLC plate, and then treated for 10 minutes in an oven at 70 ° C to confirm the band.
  • the results are shown in FIG.
  • the second command of the comparative example 2 corresponds to the second
  • the second command of the second example corresponds to the third
  • the second command of the comparative example 1 corresponds to the fourth.
  • A is a methanol extract
  • B is an ethyl acetate fraction.
  • the analysis of the concentrated sample by TLC showed that the sawdust cultivation was found to contain a variety of ingredients, particularly high content (parts indicated by circles), than other bokyeong.
  • Examples 2 and Comparative Examples 1 to 3 were dried and pulverized after drying to prepare a powder form was used as an analytical sample.
  • 100 g of each of the samples were repeatedly extracted with MeOH to concentrate the sample.
  • the concentrated sample was fractionated with ethyl acetate and used for HPLC analysis.
  • HPLC conditions used in the analysis are shown in Table 7 below. The results are shown in FIG. 13.
  • the sample of Example 2 according to the present invention is D
  • the sample of Comparative Example 1 is A
  • the sample of Comparative Example 2 is C
  • the sample of Comparative Example 3 corresponds to B.
  • Example 2 and Comparative Examples 1 to 3 each contain a different kind and content of components, especially in Example 2 according to the present invention is a relatively high content component It was found that a large amount of the substance, which is not present in Comparative Examples 1 to 3, but contained only in Bokryeong of Example 2 (see blue circle in FIG. 13).

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Mushroom Cultivation (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Cell Biology (AREA)

Abstract

본 발명은 복령 재배용 배지 조성물 및 이를 이용한 복령의 재배방법에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 톱밥 및 영양원을 포함하는 복령 재배용 배지 조성물을 이용하여 오염없는 청정 복령을 대량생산하기 위한 복령의 재배방법에 관한 것이다. 본 발명에 따르면 복령 생산을 위하여 원목을 사용하지 않고 톱밥을 이용하여 병 또는 봉지에 재배하므로 복령의 대량생산이 가능하고, 원목을 토양에 직접 매립하지 않고 톱밥을 이용하여 복령을 재배하므로 모래, 흙 등과 같은 이물질이 복령에 혼입되는 것이 방지되고, 원목을 이용하는 비매립 원목 비닐봉지 재배방법보다는 자동화에 의한 복령 대량생산이 가능하므로 생산비 절감효과가 있다. 또한, 톱밥재배에 의한 복령 대량생산 기술개발로 원료의 표준화 및 지속적인 원료 공급 시스템 확립으로 원료의 안정적인 공급 및 복령 소비확대 기여할 수 있다.

Description

복령 재배용 배지 조성물 및 이를 이용한 복령의 재배방법
본 발명은 복령 재배용 배지 조성물 및 이를 이용한 복령의 재배방법에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 톱밥 및 영양원을 포함하는 복령 재배용 배지 조성물을 이용하여 오염없는 청정 복령을 대량생산하기 위한 복령의 재배방법에 관한 것이다.
버섯은 종류에 따라 재배방법에 차이가 있으며, 크게 ① 느타리, 양송이 등 균상재배 ② 팽이버섯, 큰느타리 등 병재배 ③ 표고버섯, 영지버섯, 복령 등 원목재배로 구분한다.
우리나라에서 버섯 재배는 균상재배 위주에서 1990년대 이후 병재배로 전환되었으며, 2000년대에는 최대 10만병/일 정도로 대규모 농장들이 설립되었다. 최근에는 거의 모든 버섯재배가 자동화를 통한 대량생산체계로 전환되고 있으나, 복령 등은 아직도 원목을 이용하여 재배되고 있어 이들 버섯의 대량생산을 위한 새로운 재배기술이 요구되고 있다.
한편, 복령(茯笭)은 구멍버섯 속에 속하는 복령(Poria cocos)균이 소나무 뿌리에 기생하여 균핵을 형성한 것으로 한방에서 중요한 필수약재로서 주로 임야에서 자생하는 복령을 채취하여 한약재로 이용하여 왔다. 최근에는 국민소득 수준 향상 및 건강에 대한 관심이 높아지면서 한약의 수요가 급증하였고, 인공 재배되고 있으며 이와 같은 복령은 그 품질이 낮아 새로운 복령 재배기술의 개발이 절실히 필요하게 되었다.
종래 복령 재배방법으로는 국내 최초 소나무 원목을 일정길이로 토막치기하여 톱밥 복령균주를 접종하고 마개로 막은 후 그 소나무 원목을 1년간 양생하여 땅에 묻어 원목의 내부에 균사가 만연된 복령골목을 얻은 후 이를 절단하여 소나무 뿌리에 연장되게 타입 매설하여 재배하는 방법이 특허공고 제86-2180호로 공지되었다.
또한, 소나무 원목을 60cm 길이로 절단하고 절단면이 육각형이 되도록 원목의 둘레에 따라 한 면씩 교호로 표피를 박피하여 건조시킨 다음 복령균이 만연된 목편종균을 나무 사이에 끼워 놓고 복토한 후 비닐로 덮어 1년동안 관리하여 형성된 복령을 수확하는 재배방법이 특허공고 제96-3574호로 개시되었다.
이외에, 길이 20~60cm 나무토막에 검은 비닐봉지로 밀봉하여 톱밥 또는 곡물 종균을 접종하는 입봉접종법과 원목과 원목사이에 샌드위치 접착법에 의해 상기 종균을 접종한 후 암실에서 배양되도록 한 후 복령을 수확하는 방법이 특허공고 제10-2005-0051801호로 개시되어 있다.
상기 재배 방법에 따르면 4~11월에 실시하며 토양에 원목과 종균 또는 톱밥 또는 곡립 배지에 종균을 배양하여 원목에 부착하여 비닐봉지에 밀봉한 후 재배사에 적치한 다음 최소한 6개월~2년사이에 수확한다. 이 방법에 따르면 검정비닐을 멸균할 수 없으므로 멸균과정이 없어서 재배기간 중 오염으로 실패율이 높고 특히 액체 종균 접종이 불가하며, 복령 형성과정을 육안으로 확인할 수 없고 특히 균주 배양시 마개와 필터를 사용하지 아니하여 활착이후에 복령의 성장이 정지되며 또, 원목에 수분이 부족하게 되면서 공기부족으로 오염되거나 복령 형성이 정지되는 등 단점이 있었다.
이 밖에도 상기 공지된 복령의 매립 재배법으로 생산된 복령들은 약재상에서는 취급이 불가능할 정도로 모래, 흙, 톱밥 등 이물질이 많이 혼입되어 있고, 경도가 낮아서 약재로 가공하기 위해 절단시 부스러지는 문제가 있어 한약재로는 사용하기 곤란한 문제점이 있다.
본 발명은 상기 문제점을 극복하기 위하여 안출된 것으로, 본 발명의 목적은 종래의 토양 지하재배 방식과 원목 비매립 봉지 재배법과는 다르게 순수한 톱밥을 이용하여 오염 없는 청정 복령을 생산하는 방법으로 균 접종 후 원목을 이용하지 않고 톱밥에서 복령을 대량생산할 수 있는 복령 재배용 배지 조성물 및 이를 이용한 복령의 재배방법을 제공하는 데 있다.
이를 위하여, 본 발명은 톱밥; 및 미강, 밀기울 및 면실박으로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 영양원;을 포함하고, 상기 톱밥 100 중량부에 대하여 상기 영양원 1 ~ 300 중량부를 포함하는 것을 특징으로 하는 복령 재배용 배지 조성물을 제공한다.
본 발명의 바람직한 일실시예에 있어서, 상기 영양원이 미강인 경우, 상기 톱밥 100 중량부에 대하여 미강 1 ~ 45 중량부를 포함할 수 있다.
본 발명의 바람직한 일실시예에 있어서, 상기 영양원이 밀기울인 경우, 상기 톱밥 100 중량부에 대하여 밀기울 1 ~ 300 중량부를 포함할 수 있다.
본 발명의 바람직한 일실시예에 있어서, 상기 영양원이 면실박인 경우, 상기 톱밥 100 중량부에 대하여 면실박 1 ~ 20 중량부를 포함할 수 있다.
또한, 본 발명은 상기 배지 조성물에 복령균을 접종하여 배양하는 것을 특징으로 하는 복령의 재배방법을 제공한다.
본 발명의 바람직한 일실시예에 있어서, 상기 재배방법은 상기 배지 조성물에 복령균을 접종하는 1단계; 상기 접종된 복령균을 배양하여 복령균으로부터 균핵을 형성하는 2단계; 및 상기 2단계에서 형성된 균핵으로부터 복령을 생육하는 3단계;를 포함할 수 있다.
본 발명의 바람직한 일실시예에 있어서, 상기 2단계의 배양은 20 ~ 35℃의 온도 및 60 ~ 70 %의 상대습도에서 45 ~ 50 일 동안 수행될 수 있다.
본 발명의 바람직한 일실시예에 있어서, 상기 2단계에서 균핵의 형성은 20 ~ 25℃의 온도, 60 ~ 80 %의 상대습도 및 800 ~ 1200 ppm의 이산화탄소 농도에서 20 ~ 25일 동안 수행될 수 있다.
본 발명의 바람직한 일실시예에 있어서, 상기 3단계에서 복령의 생육은 20 ~ 30℃의 온도, 60 ~ 90 %의 상대습도 및 800 ~ 1200 ppm의 이산화탄소 농도에서 수행될 수 있다.
본 발명은 상기의 재배방법으로 재배한 복령에 있어서, L-Aspartic acid 함량이 1.3 ~ 1.5 mg/g이고, L-Glutamic acid 함량이 1.4 ~ 1.6 mg/g이고, L-Histidine 함량이 0.2 ~ 0.4 mg/g 이고, L-Alanine 함량이 0.8 ~ 1.0 mg/g 이고, L-Proline 함량이 0.7 ~ 0.9 mg/g 이고, L-Methionine 함량이 0.2 ~ 0.4 mg/g이고, L-Lysin 함량이 0.6 ~ 0.8 mg/g 이고, L-Leucine 함량이 0.7 ~ 0.9 mg/g 이고, L-Phenylalanine 함량이 0.5 ~ 0.7 mg/g인 것을 특징으로 하는 복령을 제공한다.
본 발명에 따르면 복령 생산을 위하여 원목을 사용하지 않고 톱밥을 이용하여 병 또는 봉지에 재배하므로 복령의 대량생산이 가능하고, 원목을 토양에 직접 매립하지 않고 톱밥을 이용하여 복령을 재배하므로 모래, 흙 등과 같은 이물질이 복령에 혼입되는 것이 방지되고, 원목을 이용하는 비매립 원목 비닐봉지 재배 방법보다는 자동화에 의한 복령 대량생산이 가능하므로 생산비 절감효과가 있다.
또한, 톱밥재배에 의한 복령 대량생산 기술개발로 원료의 표준화 및 지속적인 원료 공급시스템 확립으로 원료의 안정적인 공급 및 복령 소비확대 기여할 수 있다.
도 1은 본 발명의 바람직한 일실시예에 따른 복령 재배용 톱밥의 이미지이다.
도 2는 미강 첨가량에 따른 복령균의 균사 생육 실험과정을 나타낸 이미지이다.
도 3은 밀기울 첨가량에 따른 복령균의 균사 생육 실험과정을 나타낸 이미지이다.
도 4는 면실박 첨가량에 따른 복령균의 균사 생육 실험과정을 나타낸 이미지이다.
도 5(a)는 복령의 균핵 형성을 관찰한 이미지이고; (b)는 복령의 결령을 나타낸 이미지이다.
도 6(a)는 봉지를 씌운 복령의 이미지이고; (b)는 봉지를 씌우지 않은 복령의 이미지이고; (c)는 푸른 곰팡이에 오염된 복령의 이미지;이다.
도 7(a) 및 (b)는 톱밥 배지 및 톱밥과 영양원 첨가 배지에서의 복령의 이미지이다.
도 8는 본 발명의 바람직한 일실시예의 톱밥배지에서 병재배한 복령을 나타낸 이미지이다.
도 9는 본 발명의 바람직한 일실시예의 톱밥배지에서 수확한 복령을 나타낸 이미지이다.
도 10는 본 발명의 바람직한 일실시예에 따른 복령 시료별 아미노산 함량을 나타낸 그래프이다.
도 11(a)는 아미노산표준품; (b)는 자연산복령; (c)는 중국산복령; (d)는 매립원목복령; (e)는 톱밥재배복령에 대한 아미노산 함량의 스펙트럼을 나타낸 그래프이다.
도 12는 본 발명의 바람직한 일실시예에 따른 TLC 분석 결과를 나타낸 이미지이다.
도 13(a)는 본 발명에 따른 실시예 2의 HPLC 크로마토그램이고; (b)는 비교예 1의 HPLC 크로마토그램이고; (c)는 비교예 2의 HPLC 크로마토그램이고; (d)는 비교예 3의 HPLC 크로마토그램이다.
종래의 복령 재배 방법에 따르면 비닐을 멸균할 수 없으므로 멸균과정이 없어서 재배기간 중 오염으로 실패율이 높고 특히 액체 종균 접종이 불가하며, 복령 형성과정을 육안으로 확인할 수 없고 특히 균주 배양시 마개와 필터를 사용하지 아니하여 활착이후에 복령의 성장이 정지되며 또, 원목에 수분이 부족하게 되면서 공기부족으로 오염되거나 복령 형성이 정지되는 등 단점이 있었다.
이 밖에도 상기 공지된 복령의 매립 재배법으로 생산된 복령들은 약재상에서는 취급이 불가능할 정도로 모래, 흙, 톱밥 등 이물질이 많이 혼입되어 있고, 경도가 낮아서 약재로 가공하기 위해 절단시 부스러지는 문제가 있어 한약재로는 사용하기 곤란한 문제점이 있었다.
이에, 본 발명은 톱밥; 및 미강, 밀기울 및 면실박으로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 영양원;을 포함하는 복령 재배용 배지 조성물을 제공함으로써, 이물질이 복령에 혼입되는 것을 방지하고, 원목을 이용하는 비매립 원목 비닐봉지 재배방법보다는 자동화에 의한 복령 대량생산이 가능하므로 생산비 절감효과가 있는 복령의 재배방법을 제공할 수 있다. 이하, 본 발명을 보다 상세하게 설명한다.
본 발명은 톱밥을 포함한다. 상기 톱밥은 영양원과 혼합되어 밀폐된 공간에 멸균 상태로 담겨 복령 균을 배양할 수 있는 배지의 주 원료로 사용될 수 있다. 상기 톱밥은 소나무뿐만 아니라 침엽수, 활엽수 등 다양한 톱밥을 사용할 수 있고 수종에 특별히 한정되는 것은 아니나, 바람직하게는 소나무 톱밥, 미루나무 톱밥, 미송 톱밥 및 참나무 톱밥으로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상을 사용할 수 있다(도 1 참조).
본 발명은 미강, 밀기울 및 면실박으로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 영양원을 포함한다. 상기 영양원은 톱밥과 적정 비율로 혼합되어 균사 생육속도 및 균사 밀도가 우수하고, 높은 수량성 및 수분 함량을 나타내며 아미노산 함량이 향상된 복령을 재배할 수 있는 배지를 제조할 수 있다. 이때, 상기 톱밥 100 중량부에 대하여 상기 영양원 1 ~ 300 중량부를 포함하는 것이 바람직하다.
본 발명에 따른 복령 재배용 배지 조성물에 있어서, 상기 영양원이 미강인 경우, 상기 톱밥 100 중량부에 대하여 미강 1 ~ 45 중량부를 포함할 수 있고, 바람직하게는 톱밥 100 중량부에 대하여 미강 1 ~ 25 중량부를 포함할 수 있다. 상기 배지 조성물이 톱밥과 영양원을 상기 범위로 포함하는 경우 복령균의 균사 생육속도 및 균사 밀도가 우수하고, 높은 수량성 및 수분 함량을 나타내며 아미노산 함량이 향상될 수 있다.
본 발명에 따른 복령 재배용 배지 조성물에 있어서, 상기 영양원이 밀기울인 경우, 상기 톱밥 100 중량부에 대하여 밀기울 1 ~ 300 중량부를 포함할 수 있고, 바람직하게는 톱밥 100 중량부에 대하여 밀기울 1 ~ 45 중량부를 포함할 수 있다. 상기 배지 조성물이 톱밥과 영양원을 상기 범위로 포함하는 경우 복령균의 균사 생육속도 및 균사 밀도가 우수하고, 높은 수량성 및 수분 함량을 나타내며 아미노산 함량이 향상될 수 있다.
본 발명에 따른 복령 재배용 배지 조성물에 있어서, 상기 영양원이 면실박인 경우, 상기 톱밥 100 중량부에 대하여 면실박 1 ~ 20 중량부를 포함할 수 있고, 바람직하게는 톱밥 100 중량부에 대하여 면실박 1 ~ 12 중량부를 포함할 수 있다. 상기 배지 조성물이 톱밥과 영양원을 상기 범위로 포함하는 경우 복령균의 균사 생육속도 및 균사 밀도가 우수하고, 높은 수량성 및 수분 함량을 나타내며 아미노산 함량이 향상될 수 있다.
또한, 본 발명은 상기 배지 조성물에 복령균을 접종하여 배양하는 것을 특징으로 하는 복령의 재배방법을 제공한다. 이하, 본 발명을 보다 상세하게 설명한다.
본 발명에 따른 복령의 재배방법은 상기 배지 조성물에 복령균을 접종하여 배양함으로써 복령균의 균사 생육속도 및 균사 밀도가 우수하고, 높은 수량성 및 수분 함량을 나타내며 아미노산 함량이 향상된 복령을 제조할 수 있다.
보다 상세하게는, 상기 복령의 재배방법에 따르면 상기 배지 조성물에 복령균을 접종하는 1단계; 상기 접종된 복령균을 배양하여 복령균으로부터 균핵을 형성하는 2단계; 및 상기 2단계에서 형성된 균핵으로부터 복령을 생육하는 3단계;를 포함할 수 있다.
상기 1단계는 상기 배지 조성물에 복령균을 접종하는 하는 단계로서, 이후의 단계에서 복령균의 균사가 생육되고 이로부터 균핵이 형성될 수 있다.
상기 2단계는 상기 접종된 복령균을 배양하여 복령균으로부터 균핵을 형성하는 단계이다.(도 5 참조).
이때, 상기 2단계의 배양은 20 ~ 35℃의 온도 및 60 ~ 70 %의 상대습도에서 45 ~ 50 일 동안 수행될 수 있고, 바람직하게는 20 ~ 28℃의 온도 및 60 ~ 70 %의 상대습도에서 45 ~ 50 일 동안 수행되는 것이 좋다. 일반적으로 복령 균사는 10 ~ 35℃의 온도범위에서 생육하고, 35℃를 초과하는 온도에서 배양하는 경우 복령 균사가 사멸되거나 노쇠하는 문제점이 있고, 20℃ 미만의 온도에서는 균사의 생장속도가 현저히 늦어지며, 5℃ 이하에서는 균사의 생육이 정지하는 문제점이 있다.
또한, 상기 2단계에서 균핵의 형성은 20 ~ 25℃의 온도, 60 ~ 80 %의 상대습도 및 800 ~ 1200 ppm의 이산화탄소 농도에서 20 ~ 25일 동안 수행될 수 있다. 상기 범위를 벗어나는 경우 균핵의 형성이 늦어지거나 균핵이 형성되지 않는 문제점이 있다.
이때, 상기 복령의 재배방법에 있어서, 상기 1단계 및 2단계는 외부 환경과 분리되어 밀폐된 분위기에서 수행되는 것이 바람직하다. 따라서 비닐봉지 또는 병 등의 내부에 본 발명에 따른 배지를 담아 마개로 덮어 밀폐된 분위기를 조성할 수 있다. 이때, 상기와 같이 밀폐된 분위기가 조성되지 않은 경우 복령에 오염이 발생할 수 있는 문제점이 있다(도 6 참조). 또한, 상기 비닐봉지 또는 병 등 밀폐된 분위기를 조성하는 용기에 따라 복령의 생산성에 영향을 미칠 수 있다(도 8 참조). 구체적으로, 배지의 종류에 따라 복령균핵의 형성에는 뚜렷한 차이를 보이지 않으나, 균핵이 형성된 배지로부터 복령을 재배할 경우에 있어서, 비닐봉지에서 재배될 경우 병(폴리프로필렌 병)에서 재배되는 경우에 비해 수량성이 우수한 경향이 있다. 보다 상세하게는, 봉지배지에서 재배된 복령은 높은 수량성을 보일 수 있고, PP(Polyproylene)병과 봉지 측면에서 형성된 균핵을 이용한 재배에서는 수량이 떨어지는 경향을 보일 수 있다.
한편, 복령균으로부터 균핵이 형성된 이후에는 마개를 제거하여 복령 자실체를 유도할 수 있다.
또한, 상기 3단계에서 복령의 생육은 20 ~ 30℃의 온도, 60 ~ 90 %의 상대습도 및 800 ~ 1200 ppm의 이산화탄소 농도에서 수행될 수 있다. 상기 생육 온도가 20℃ 미만인 경우 복령의 생육이 늦어지고, 30℃를 초과하는 경우 복령의 생육이 문제점이 있다.
일반적으로 복령의 상업화를 위해서는 직경이 약 10cm 이상이 되어야 하는데, 본 발명에 따른 복령의 경우 5 ~ 6개월 정도 성장시키면 복령의 직경이 약 10 cm를 넘어 수확이 가능한 상태로 성장할 수 있다.
본 발명은 상기의 재배방법으로 재배한 복령에 있어서, L-Aspartic acid 함량이 1.3 ~ 1.5 mg/g이고, L-Glutamic acid 함량이 1.4 ~ 1.6 mg/g이고, LHistidine 함량이 0.2 ~ 0.4 mg/g 이고, L-Alanine 함량이 0.8 ~ 1.0 mg/g 이고, L-Proline 함량이 0.7 ~ 0.9 mg/g 이고, L-Methionine 함량이 0.2 ~ 0.4 mg/g 이고, L-Lysin 함량이 0.6 ~ 0.8 mg/g 이고, L-Leucine 함량이 0.7 ~ 0.9 mg/g 이고, L-Phenylalanine 함량이 0.5 ~ 0.7 mg/g인 것을 특징으로 하는 복령을 제공한다. 본 발명에 따른 복령은 상기 제시된 복령재배용 배지에서 복령을 재배함으로써 종래의 제조방법에 비해 아미노산 함량이 향상된 복령을 제조할 수 있다.
또한, 본 발명에 따른 복령은 L-Serine의 함량이 0.8 ~ 0.9 mg/g이고, Glycine의 함량이 0.5 ~ 0.6 mg/g 이고, Ammonium chloride의 함량이 2.1 ~ 2.2 mg/g이고, L-Arginine의 함량이 0.6 ~ 0.7 mg/g 이고, L-Threonine의 함량이 0.7 ~ 0.8 mg/g 이고, L-Cystine의 함량이 0.15 ~ 0.25 mg/g 이고, L-Tyrosine의 함량이 0.1 ~ 0.2 mg/g 이고, L-Valine의 함량이 0.65 ~ 0.75 mg/g 이고, L-Isoleucine의
함량이 0.1 ~ 0.2 mg/g 일 수 있다.
본 발명에 따르면, 상기와 같은 아미노신 이외에도 상대적으로 함량이 높은 성분이 다량 함유되어 있고, 종래의 재배방법에 따라 재배된 복령에는 존재하지 않으나 본 발명에 따른 복령에만 함유되는 물질이 존재하는 것을 확인할 수 있다(도 13 참조).
이하, 본 발명을 하기 실시예들을 통해 보다 상세하게 설명한다. 이때, 하기 실시예는 본 발명을 예시하기 위하여 제시된 것일 뿐, 본 발명의 권리범위가 하기 실시예들에 의하여 한정되는 것은 아니다.
준비예 1. 시험균주 및 종균의 준비
본 발명에서 사용한 균주는 국립원예특작과학원 버섯과에 보관하고 있는 복령1호(Poria cocos)를 시험균주로 사용하였다.
준비예 2. 복령 재배용 배지의 준비
하기 표 1과 같은 조성으로 복령 재배용 배지를 준비하였다.
Figure PCTKR2015012640-appb-T000001
실시예 1. 복령의 재배
(1) 상기 준비예 1의 균주를 PDA 평판배지에서 7 일간 배양한 후 미송톱밥과 미강을 혼합한 배지(80:20, v/v)를 250 ml 삼각플라스크에 100 ml가량 담아 121℃에서 40분간 살균한 배지에 복령균을 접종하여 20일간 배양한 후 접종원으로 사용하였다.
(2) 상기 준비예 2의 배지를 수분함량 65 % 내외로 조절하였고, PP(Polyproylene)병과 봉지에 목까지 동일한 압력으로 배지를 담아서 121℃에서 90
분간 고압살균 후 20℃ 내외로 냉각하고 준비된 종균을 접종하였다. 접종된 배지는
배양 온도 20 ~ 25℃, 상대습도 60 ~ 70%로 조절된 배양실에서 45 ~ 50일간 배양하였다. 배양기간 중에 혼합배지의 잡균 오염 여부를 조사하여 오염된 배지를 즉시 제거하였다.
(3) 상기 배양이 완료된 배지는 생육실(온도 20℃ ~ 25℃, 상대습도 60 ~ 80 %, CO2 농도 1000 ppm)로 옮겨 봉지의 마개를 제거하지 말고 약 20 ~ 25 일간 반드시 균핵의 형성을 유도하였다.
(4) 복령 균핵 형성이 완료된 배지는 조심스럽게 봉지의 마개를 제거하고 균핵이 오염되지 않도록 비닐봉지로 덮어서 복령의 발생 및 생육을 유도하며, 20일 후 갈색의 복령이 결령되기 시작하였다. 복령의 생육 온도는 20 ~ 25℃, 상대습도는 60 ~ 90 %, CO2 농도는 1000 ppm로 재배사를 관리하여 복령의 생육을 유도하였다.
실시예 2 ~ 19. 복령의 재배
상기 실시예 1의 단계에서 하기 표 2와 동일한 배지를 사용한 것을 제외하고는 실시예 1과 동일한 조건에서 복령을 재배하였다.
Figure PCTKR2015012640-appb-T000002
비교예 1. 자연산 복령
강원도 태백산에서 채취된 자연산 복령을 준비하였다.
비교예 2. 매립원목 복령
매립원목을 이용하여 톱밥 종균 접종 재배법으로 재배된 복령을 준비하였다.
비교예 3. 중국산 복령
중국에서 재배되고 운곡 한약품에서 구매된 중국산 복령을 준비하였다.
실험예 1. 영양원에 따른 균사 생장량 및 밀도 분석
상기 실시예 1 ~ 19의 배지에 따른 균사 생장량과 균사밀도를 하기 도 2 ~ 도 4와 같이 컬럼을 이용하여 생장시켜 조사하였고, 그 결과를 하기 표 3에 나타내었다. 또한 이때의 균사생육 상태를 하기 도 2 ~ 4에 나타내었다. 이때, 하기 균사밀도는 + 약, ++ 중; +++ 강으로 표시하였다.
Figure PCTKR2015012640-appb-T000003
표 3에 따르면, 톱밥에 영양원을 첨가하여 배양한 결과 순수한 톱밥배지(실시예 7)보다는 영양원이 첨가된 배지에서 배양일수가 빨랐다. 또한, 균사 생장량은 배양 4일 후 미강 10% 첨가된 배지(실시예 2)에서 12.3 cm, 밀기울 30% 첨가된 배지(실시예 11)에서는 11.2 cm 그리고 면실박 5% 첨가된 배지(실시예 14)에서는 11.9 cm였으며, 톱밥배지에서는 7.4 cm로 영양원이 첨가된 배지에서 균사생장이 빨랐다. 또한, 영양원이 첨가된 배지 중 미강을 첨가한 배지(실시예 1 ~ 6)가 다른 배지에 비해 상대적으로 균사생장이 빠른 것을 확인할 수 있었다. 영양원의 첨가량에 따른 균사밀도는 미강 5% 첨가배지(실시예 1), 밀기울 5 ~ 20% 첨가 배지(실시예 8 ~ 10) 및 면실박 첨가배지(실시예 5 ~ 10)에서 낮은 밀도를 보였고, 톱밥 100% 배지(실시예 7)에서도 낮은 밀도를 보이는 것을 확인할 수 있었다.
실험예 2. 복령의 생육 및 수량특성
상기 실시예 7 및 실시예 2의 배지에서 배양된 복령에 있어서, 생육 및 수량특성을 조사하기 위하여 봉지당 평균 수량 및 평균건조 중량 및 수분함량을 측정하였고, 그 결과를 표 4에 나타내었다.
Figure PCTKR2015012640-appb-T000004
상기 표 4 및 도 7 에 따르면, 톱밥 100% 배지에서 재배된 복령의 평균 무게는 230 g/봉지였으며, 건조 중량은 86.3 g/봉지으로 수분함량은 약 62.5%였으며, 톱밥과 영양원 혼합배지에서 재배된 복령의 평균 무게는 260 g/봉지였으며, 건조 중량은 96.2 g/봉지으로 수분함량은 약 63 %였다. 따라서 톱밥 100% 배지보다는 톱밥에 영양원을 첨가한 배지에서 높은 수량성을 보이는 것을 확인할 수 있었다.
실험예 3. 복령의 아미노산 함량 분석
상기 실시예 2 및 비교예 1 ~ 3의 복령을 냉동건조 후 분쇄하여 파우더 형태로 제조하여 아미노산 함량 분석을 위한 분석시료를 준비하였다. 상기 분석시료 0.1 g을 6N HCl 1 ml와 섞어 Fluorescence Waters Pico-Tag Workstation으로 N2 gas 충진 후 24 시간 동안 가수분해하였다. 이를 가수분해 후 원심분리하여, 상등액 200 ㎕을 취해 농축 한 다음 25 mM HCl 500 ㎕에 녹였다. 이 용액을 주사기에 취하여 syringe filter (Whatman PVDF syringe filter 13 mm, 0.3 ㎛)로 여과하고 AccQ-Fluor Reagent kit로 형광유도체화 반응시켰다. 형광유도체 반응은 AccQ fluor reagent borate buffer sample(standard) = 2 : 1로 전체 양은 100 ㎕가 되게 혼합한 후 55℃에서 반응시켜 HPLC 분석시료로 사용하였다. 이때, 아미노산 분석에 이용된 HPLC의 구성은 하기 표 5과 같다.
또한, 아미노산 표준물질은 L-alanine을 포함하여 17 종과 암모니아(ammonia)를 3차 증류수로 희석하고 각 농도별 표준용액을 조제하여 HPLC 분석을
실시하고 피크 면적으로부터 검량선을 작성하여 시료 내 성분량을 정량하였다. 희석농도는 12.5 배, 25 배, 50 배, 100 배로 하였고, 표준품은 Amino Acid Standard
H를 사용하였다. 그 결과를 하기 표 6 및 도 10 및 도 11에 나타내었다. 이때, 본 발명에 따른 A는 아미노산 표준품이고, 실시예 2의 시료가 E, 비교예 1의 시료가 B, 비교예 2의 시료가 D, 비교예 3의 시료가 C에 해당한다.
Figure PCTKR2015012640-appb-T000005
Figure PCTKR2015012640-appb-T000006
표 6, 도 10 및 11에 따르면, 본 발명에 따른 복령 재배용 배지에서 재배된 복령의 아미노산 함량을 조사한 결과 18 종류의 아미노산 중 L-Aspartic acid, L-Serine 등 16종류의 아미노산 함량이 자연산과 원목재배 복령보다 높았으나, L-Systeine과 L-Isoleucine은 자연산과 원목재배 복령과 비슷하거나 조금 낮은 경향을 보이는 것을 확인할 수 있었다. 또한, 아미노산 중 Ammonium chloride, LAspartic acid, L-Glutamic acid가 가장 높은 함량을 보였고, 산성 아미노산인 LAspartic acid와 L-Glutamic acid가 염기성 아미노산인 L-Arginine와 L-Histidine
보다 높은 훨씬 함량을 보이는 것을 확인할 수 있었다.
따라서, 본 발명에 따른 복령 재배용 배지에서 재배된 복령은 다른 재배방법에 의해 재배된 복령에 비해 아미노산 성분이 우수한 것을 알 수 있었다.
실험예 2. 복령의 TLC 분석
비교예 1 ~ 3 및 실시예 2의 복령을 상기 실험예 1과 동일한 방법으로 분석시료를 제조하였고, 이를 TLC plate의 아래에서 2 cm 위에 1 cm 간격으로 1.0 ㎕씩 로딩하였다. 이동상은 methylchloroform : methanol : water(25:3:1, v/v)을 사용하였다. 전개 후 TLC plate에 염색 용액이 스며들게 한 후 70℃ 오븐에서 10분간 처리 후 밴드를 확인하였다. 그 결과를 도 12에 나타내었다. 이때, 상기 비교예 2의 복령이 1번, 실시예 2의 복령이 2번, 비교예 3의 복령이 3번, 비교예 1의 복령이 4번에 해당한다. 또한, A는 메탄올 추출물, B는 에틸아세테이트 분획물이다.
도 12에 따르면, 농축된 시료를 TLC로 분석한 결과 톱밥재배 복령이 다른 복령보다는 함유성분이 다양하고, 특히 함량(원으로 표시된 부분)이 높은 성분도 함유되어 있는 것으로 나타나는 것을 확인할 수 있었다.
실험예 3. HPLC에 의한 복령의 함량 분석
실시예 2 및 비교예 1 ~ 3의 복령을 건조 후 분쇄하여 파우더 형태로 제조하여 분석시료로서 사용하였다. 전처리는 시료별 복령 100g을 MeOH로 3회 반복 추출하여 시료를 농축하였다. 또한, 농축된 시료는 에틸아세테이트로 분획하여 HPLC 분석에 사용하였다. 분석에 이용된 HPLC의 조건은 하기 표 7과 같다. 그 결과를 하기 도 13에 나타내었다. 이때, 본 발명에 따른 실시예 2의 시료가 D, 비교예 1의 시료가 A, 비교예 2의 시료가 C, 비교예 3의 시료가 B에 해당한다.
(사용기기 : Waters 515 HPLC pump, Waters Pump Control Module, Waters 717 Plus Auto-sampler, Waters Temperature Control Modul, Waters 2996 Photodiode Array Detector, Empower pro software, Column: Waters Sunfire C18 5 ㎛ (4.6×150 mm), 이동상 : Mobile phase : A-10% ACN(in 0.1% HOAc), B- 95% ACN →AB for 25 min, B for 15 min, Column temperature: 28℃, flow rate: 1 ml/min)
Figure PCTKR2015012640-appb-T000007
도 13에 따르면, 실시예 2 및 비교예1 ~ 3의 시료에 각각 상이한 종류 및 함량의 성분들이 포함되어 있는 것을 확인할 수 있었고, 특히 본 발명에 따른 실시예 2의 경우 상대적으로 함량이 높은 성분이 다량 함유되어 있고, 비교예 1 ~ 3에는 존재하지 않으나 본 실시예 2의 복령에만 함유되는 물질(도 13의 파란색원 참조)이 존재하는 것을 확인할 수 있었다.

Claims (10)

  1. 톱밥; 및
    미강, 밀기울 및 면실박으로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 영양원;을 포함하고,
    상기 톱밥 100 중량부에 대하여 상기 영양원 1 ~ 300 중량부를 포함하는 것을 특징으로 하는 복령 재배용 배지 조성물.
  2. 제 1 항에 있어서,
    상기 영양원이 미강인 경우, 상기 톱밥 100 중량부에 대하여 미강 1 ~ 45 중량부를 포함하는 것을 특징으로 하는 복령 재배용 배지 조성물.
  3. 제 1 항에 있어서,
    상기 영양원이 밀기울인 경우, 상기 톱밥 100 중량부에 대하여 밀기울 1 ~ 300 중량부를 포함하는 것을 특징으로 하는 복령 재배용 배지 조성물.
  4. 제 1 항에 있어서,
    상기 영양원이 면실박인 경우, 상기 톱밥 100 중량부에 대하여 면실박 1 ~ 20 중량부를 포함하는 것을 특징으로 하는 복령 재배용 배지 조성물.
  5. 제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항의 배지 조성물에 복령균을 접종하여 배양하는 것을 특징으로 하는 복령의 재배방법.
  6. 제 5 항에 있어서, 상기 재배방법은
    상기 배지 조성물에 복령균을 접종하는 1단계;
    상기 접종된 복령균을 배양하여 복령균으로부터 균핵을 형성하는 2단계; 및
    상기 2단계에서 형성된 균핵으로부터 복령을 생육하는 3단계;를 포함하는 것을 특징으로 하는 복령의 재배방법.
  7. 제 5 항에 있어서,
    상기 2단계의 배양은 20 ~ 35℃의 온도 및 60 ~ 70 %의 상대습도에서 45 ~ 50 일 동안 수행되는 것을 특징으로 하는 복령의 재배방법.
  8. 제 5 항에 있어서,
    상기 2단계에서 균핵의 형성은 20 ~ 25℃의 온도, 60 ~ 80 %의 상대습도 및 800 ~ 1200 ppm의 이산화탄소 농도에서 20 ~ 25일 동안 수행되는 것을 특징으로 하는 복령의 재배방법.
  9. 제 5 항에 있어서,
    상기 3단계에서 복령의 생육은 20 ~ 30℃의 온도, 60 ~ 90 %의 상대습도 및 800 ~ 1200 ppm의 이산화탄소 농도에서 수행되는 것을 특징으로 하는 복령의 재배방법.
  10. 제 5 항의 재배방법으로 재배한 복령에 있어서,
    L-Aspartic acid 함량이 1.3 ~ 1.5 mg/g이고,
    L-Glutamic acid 함량이 1.4 ~ 1.6 mg/g이고,
    L-Histidine 함량이 0.2 ~ 0.4 mg/g 이고,
    L-Alanine 함량이 0.8 ~ 1.0 mg/g 이고
    L-Proline 함량이 0.7 ~ 0.9 mg/g 이고,
    L-Methionine 함량이 0.2 ~ 0.4 mg/g 이고,
    L-Lysin 함량이 0.6 ~ 0.8 mg/g 이고,
    L-Leucine 함량이 0.7 ~ 0.9 mg/g 이고,
    L-Phenylalanine 함량이 0.5 ~ 0.7 mg/g인 것을 특징으로 하는 복령.
PCT/KR2015/012640 2015-08-25 2015-11-24 복령 재배용 배지 조성물 및 이를 이용한 복령의 재배방법 WO2017034086A1 (ko)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR10-2015-0119355 2015-08-25
KR1020150119355A KR101865140B1 (ko) 2015-08-25 2015-08-25 복령 재배용 배지 조성물 및 이를 이용한 복령의 재배방법

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2017034086A1 true WO2017034086A1 (ko) 2017-03-02

Family

ID=58100508

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/KR2015/012640 WO2017034086A1 (ko) 2015-08-25 2015-11-24 복령 재배용 배지 조성물 및 이를 이용한 복령의 재배방법

Country Status (2)

Country Link
KR (1) KR101865140B1 (ko)
WO (1) WO2017034086A1 (ko)

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113383673A (zh) * 2021-07-07 2021-09-14 云茯苓普洱有限公司 一种茯苓种植营养包的配置方法
CN113383672A (zh) * 2021-07-07 2021-09-14 云茯苓普洱有限公司 一种茯苓松桩种植方法
CN113383674A (zh) * 2021-07-07 2021-09-14 云茯苓普洱有限公司 一种茯苓的种植方法
CN113812303A (zh) * 2021-10-21 2021-12-21 宁洱天瑞农业生物资源开发有限公司 一种种植茯苓用培养基

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR102220300B1 (ko) * 2018-12-17 2021-02-26 농업회사법인 미래에코시스템연구소 주식회사 소나무 재선충병 고사목을 이용한 복령의 재배방법
KR102220299B1 (ko) * 2018-12-17 2021-02-26 농업회사법인 미래에코시스템연구소 주식회사 소나무 재선충병 고사목을 이용한 복령 종균 배양용 톱밥배지의 제조방법
KR102305609B1 (ko) * 2019-08-27 2021-09-28 코스맥스 주식회사 스타필로코커스속 균주 및 그의 용도

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR960000493B1 (ko) * 1993-06-18 1996-01-08 농촌진흥청 복령의 인공재배방법
KR20050051801A (ko) * 2003-11-28 2005-06-02 여상철 복령의 재배방법
KR20110000089A (ko) * 2009-06-26 2011-01-03 경상북도(농업기술원) 고품질 복령의 대량 생산을 위한 토양중 원목 비매립 비닐봉지 재배방법
KR20150015292A (ko) * 2013-07-31 2015-02-10 대한민국(농촌진흥청장) 버섯 재배용 배지 조성물

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104284578B (zh) 2013-03-27 2016-06-08 株式会社津村 茯苓的人工栽培方法

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR960000493B1 (ko) * 1993-06-18 1996-01-08 농촌진흥청 복령의 인공재배방법
KR20050051801A (ko) * 2003-11-28 2005-06-02 여상철 복령의 재배방법
KR20110000089A (ko) * 2009-06-26 2011-01-03 경상북도(농업기술원) 고품질 복령의 대량 생산을 위한 토양중 원목 비매립 비닐봉지 재배방법
KR20150015292A (ko) * 2013-07-31 2015-02-10 대한민국(농촌진흥청장) 버섯 재배용 배지 조성물

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
SON, HYEONG RAK ET AL.: "Cultivation Techniques of Medicinal Mushrooms Poria cocos", THE KOREAN SOCIETY OF MUSHROOM SCIENCE, vol. 15, no. 2, November 2011 (2011-11-01), pages 42 - 43 *

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113383673A (zh) * 2021-07-07 2021-09-14 云茯苓普洱有限公司 一种茯苓种植营养包的配置方法
CN113383672A (zh) * 2021-07-07 2021-09-14 云茯苓普洱有限公司 一种茯苓松桩种植方法
CN113383674A (zh) * 2021-07-07 2021-09-14 云茯苓普洱有限公司 一种茯苓的种植方法
CN113812303A (zh) * 2021-10-21 2021-12-21 宁洱天瑞农业生物资源开发有限公司 一种种植茯苓用培养基
CN113812303B (zh) * 2021-10-21 2023-01-31 宁洱天瑞农业生物资源开发有限公司 一种种植茯苓用培养基

Also Published As

Publication number Publication date
KR20170024290A (ko) 2017-03-07
KR101865140B1 (ko) 2018-07-04

Similar Documents

Publication Publication Date Title
WO2017034086A1 (ko) 복령 재배용 배지 조성물 및 이를 이용한 복령의 재배방법
CN104651239B (zh) 一种促进齿瓣石斛种子萌发形成幼苗的菌株及其应用
CN1152132C (zh) 人工培育冬虫夏草的方法
CN105906415A (zh) 一种采用苹果木栽培牛樟芝子实体的方法及其培养基
CN111990164B (zh) 一种金耳新菌株中菌金耳1号菌株及其栽培方法
Zhang et al. Adopting stick spawn reduced the spawn running time and improved mushroom yield and biological efficiency of Pleurotus eryngii
CN105052558A (zh) 一种牛樟芝的快速培育方法
CN104541977B (zh) 一种牛樟芝的杉木板培方法
CN102972206B (zh) 一种灵芝的人工栽培方法及其培养基
CN1019816B (zh) 蚕蛹虫草的人工培育方法
CN114381379A (zh) 一株具有提高石斛幼苗萌蘖能力的胶膜菌菌株tp-8及其应用
CN1541511A (zh) 用于培养外生菌根性食用菌和药用菌菌根苗的苗床
CN101182471B (zh) 蛹虫草的一种高效培育方法
CN113115682B (zh) 牛樟芝培育方法以及用于培养牛樟芝的多孔载体
CN103688760A (zh) 一种以黄粉虫为载体培养人工虫草的方法
Luangharn et al. Domestication of Ganoderma leucocontextum, G. resinaceum, and G. gibbosum Collected from Yunnan Province, China
Gooding Jr et al. Effect of temperature on growth and survival of Fomes annosus
CN1670179A (zh) 蔷甘菌人工培养形成子实体和菌丝体的方法
CN103749149A (zh) 一种以黄粉虫蛹为载体培养人工虫草的方法
CN103283488A (zh) 一种食用菌母种的基内菌丝提纯法
CN1766090A (zh) 一株苜蓿根瘤菌及其发酵培养方法与应用
Marshall et al. Biological activity of volatile metabolites from cultures of Fomes scutellatus
CN107253872A (zh) 一种用于栽培牛樟芝子实体的培养基及其培养方法
CN111226694A (zh) 一种以黄粉虫幼虫为原料栽培获取蛹虫草子实体的方法
Fletcher et al. Pythium oligandmm associated with a cropping disorder of Agaricus bisporus

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 15902358

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

122 Ep: pct application non-entry in european phase

Ref document number: 15902358

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1