CN102972206B - 一种灵芝的人工栽培方法及其培养基 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种灵芝的人工栽培方法及其培养基。所述方法包括将灵芝液体菌种接种于灵芝固体栽培培养基中培养，获得灵芝子实体；所述灵芝固体栽培培养基由质量比为（49—9）:1的阔叶林段木和阔叶林木屑组成；所述阔叶林木屑的细度为20目；所述阔叶林段木的长度为25—35厘米，横截面直径为5—10厘米；每个所述灵芝固体栽培培养基中接种所述灵芝液体菌种10—30mL。实验证明，使用本发明所提供的方法及其培养基培养赤芝（Ganoderma lucidum），与对照的固体接种相比，明显缩短了灵芝的培养周期，降低了杂菌污染率；同时还具有生产成本低、接种简便，更适合工厂化、标准化生产等优点，具有十分广阔的应用前景。
Description
技术领域
本发明涉及一种灵芝的人工栽培方法及其培养基。
背景技术
灵芝（Ganodema lucidem）是担子菌纲多孔菌科（Polyporaceae）灵芝属（Ganodema）真菌，是中医药学宝库中的珍品。目前灵芝人工栽培有段木栽培和袋料栽培，段木栽培是指采用适生树种截成段栽培灵芝的方法。段木栽培中常见的有长段木生料栽培、短段木生料栽培、短段木熟料栽培、树桩栽培以及枝束栽培等。熟料栽培虽然比生料栽培工序复杂，耗能大，技术要求严格等，但熟料栽培具有发菌速度快，菌丝在段木内分布面积广，营养积累多，生产周期短，生产较稳定以及易获得优质高产等优点。
目前灵芝菌种的生产方式主要是固体培养，即利用传统的固体原材料如木质、草质等进行固体发酵，将获得的固体菌种用于栽培，最终获得子实体。通过固体菌种生产培养的灵芝存在发菌慢且菌龄不一致等缺点。
发明内容
本发明的一个目的是提供一种灵芝的人工栽培方法及其培养基。
本发明所提供的灵芝的人工栽培方法，包括将灵芝液体菌种接种于灵芝固体栽培培养基中培养，获得灵芝子实体。
所述灵芝固体栽培培养基由阔叶林段木和阔叶林木屑组成；所述灵芝固体栽培培养基中的所述阔叶林段木和所述阔叶林木屑的质量比为（49—9）:1，或（49—19）:1，或（19—9）:1，具体可为49:1、19:1或9:1。
所述灵芝固体栽培培养基为袋装，每袋所述灵芝固体栽培培养基含1个所述阔叶林段木，所述阔叶林木屑位于所述阔叶林段木的两端；
每个所述阔叶林加工木屑的细度为20目；所述阔叶林段木的长度为25—35厘米（如30厘米），横截面直径为5—10厘米（如7.5厘米）。
所述接种按如下比例进行：每袋所述灵芝固体栽培培养基中接种所述灵芝液体菌种10—30mL，或10—20mL，或20—30mL，具体可为10mL、20mL或30mL。
所述灵芝液体菌种的浓度以菌丝干重计为2—4g/L，具体可为2g/L或4g/L。
所述灵芝液体菌种按照包括如下步骤的方法获得：将所述灵芝的菌丝体接入灵芝液体发酵培养基中进行液体发酵培养，收集所有发酵产物即所述灵芝液体菌种；
所述灵芝菌种具体可为灵芝菌丝体菌种；
所述灵芝液体发酵培养基具体可为PDA液体培养基；
每升所述PDA液体培养基是由去皮马铃薯200g、葡萄糖20g和水制成的体积为1L的pH值为5.8的溶液；
所述液体发酵培养的温度为28℃、转速为200转/分钟。
将接种所述灵芝液体菌种的所述灵芝固体栽培培养基依次于如下a）和b）的温度和光照条件下进行培养获得所述灵芝子实体：
a）20℃条件下培养至所述灵芝菌丝体充满所述灵芝固体栽培培养基；
b）20℃，每天24小时中光照12小时其余时间黑暗，光照强度为1000—2000Lux条件下培养至获得所述灵芝子实体。
本发明还提供了一种灵芝固体栽培培养基，由阔叶林段木和阔叶林木屑按如下质量比组成：（49—9）:1，或（49—19）:1，或（19—9）:1，具体可为49:1、19:1或9:1。
所述灵芝固体栽培培养基为袋装，每袋所述灵芝固体栽培培养基含1个所述阔叶林段木，所述阔叶林木屑位于所述阔叶林段木的两端；每个所述阔叶林段木的长度为25—35厘米（如30厘米），横截面直径为5—10厘米（如7.5厘米）；所述阔叶林加工木屑的细度为20目。
上述灵芝在本实施例中为赤芝（Ganoderma lucidum）。
实验证明，使用本发明所提供的灵芝的人工栽培方法及其培养基培养赤芝（Ganoderma lucidum），其菌丝体长满培养基的天数为9.9±1.5天，总发菌时间为33.2±2.3天，杂菌污染率为2.1±0.6%；与对照的固体接种相比，明显缩短了灵芝的培养周期，降低了杂菌污染率；同时还具有生产成本低、接种简便，更适合工厂化、标准化生产等优点，具有十分广阔的应用前景。
具体实施方式
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
下述实施例中所用的灵芝品种为赤芝（Ganoderma lucidum），在中国普通微生物菌种保藏管理中心（CGMCC）的保藏编号为CGMCC No.5.26。
下述实施例中所用培养基的制备方法如下：
PDA液体培养基（1L）：去皮马铃薯200g、葡萄糖20g和水制成的体积为1L的溶液，调pH值至5.8，经121℃、103兆帕高压灭菌30分钟后使用。
PDA固体培养基（1L）：去皮马铃薯200g、葡萄糖20g和水制成的体积为1L的溶液，调pH值至5.8，再添加10g琼脂，经121℃、103兆帕高压灭菌30分钟后使用。
实施例1、灵芝的人工栽培（接种方式）
一、液体菌种接种方式
1、培养基的制备
1）灵芝液体培养基的配制
采用PDA液体培养基。
2）灵芝固体栽培培养基的制备
所述灵芝固体栽培培养基由段木和木屑组成，其中，段木和木屑的质量比为49:1，具体制备方法如下：
取11月至次年3月期间砍伐的阔叶林壳斗科树种横截面直径为7.5cm（5—10cm均可）、长度为30cm（25—35cm均可）的段木，装于筒状塑料袋中；按与所述段木的质量比为49:1的量取同树种细度为20目的木屑平均装于袋的两端；扎紧袋口的两端；常压100℃下灭菌8—10小时后，冷却至25—30℃备用。
2、灵芝液体菌种的制备
取灵芝（赤芝（Ganoderma lucidum）CGMCC No.5.26）的菌种接种于PDA固体培养基上，28℃活化培养后，取菌块接种于装有200ml步骤1灵芝液体培养基的500ml三角瓶，28℃、200rpm震荡培养3天，收集所有发酵产物得到含灵芝以菌丝干重计浓度为2g/L的种子液即灵芝液体菌种。
3、接种
取步骤2获得的灵芝液体菌种30mL，用注射器注射接种于灵芝固体栽培培养基两端袋口部位，每端各注射一半（即15mL），然后把袋口封闭。
4、菌丝体培养
将经步骤3接种的菌袋放置于20℃、弱光照条件下培养，记录每袋菌丝体长满培养基天数。菌丝体长满培养基后，再继续培养25天。
5、子实体培养
将经步骤4培养的菌袋埋在预先修好的田里，进行子实体培养（即出芝管理），获得灵芝子实体，同时记录每袋的总发菌时间（即从接种至菌丝长满菌袋并吃料进入段木内部的天数）；所述子实体培养的条件如下：温度为20℃、每天24小时中光照12小时、黑暗12小时，光照强度为1000—2000Lux。
二、固体菌种接种方式（对照）
1、培养基的制备
1）灵芝固体培养基的配制
采用PDA固体培养基。
2）灵芝固体栽培培养基的制备
与步骤一中1中的2）相同，但不添加木屑。
2、灵芝固体菌种的制备
取灵芝（赤芝（Ganoderma lucidum）CGMCC No.5.26）的菌种用PDA固体培养基在28℃条件下进行固体发酵培养，得到含灵芝以菌丝干重计含量为2g/L的灵芝固体菌种。
3、接种
取步骤2获得的灵芝固体菌种涂抹到段木两端的切面上，每端切面的涂抹体积为15mL，并将袋口重新封好。
4、菌丝体培养
与步骤一中的4相同。
5、子实体培养
与步骤一中的5相同。
三、统计结果
每种处理（即不同接种方式）设置三个重复，每个重复随机取10袋，计算三个重复各结果的平均值，结果如表1所示。表1中的杂菌污染率为从接种到收获子实体期间各重复中染杂菌袋数的比例。
表1.不同接种方式的统计结果
| 接种方式 | 菌丝体长满培养基的天数 | 总发菌时间（天） | 杂菌污染率（%） |
| 液体菌种接种 | 9.9±1.5 | 33.2±2.3 | 2.1±0.6 |
| 固体菌种接种 | 35.5±3.2 | 58.1±1.3 | 15.1±0.6 |
实施例2、灵芝的人工栽培（灵芝固体栽培培养基）
按照实施例1步骤一的方法进行，其中设三种处理，即灵芝固体栽培培养基中段木和木屑的质量比分别为49:1、19:1和9:1，每种处理设置三个重复，每个重复随机取10袋，计算三个重复各结果的平均值，结果如表2所示。
表2.不同灵芝固体栽培培养基的统计结果
| 段木和木屑的质量比 | 菌丝体长满培养基的天数 | 总发菌时间（天） |
| 49:1 | 8天 | 32 |
| 19:1 | 7天 | 30 |
| 9:1 | 6天 | 28 |
实施例3、灵芝的人工栽培（接种量）
按照实施例1步骤一的方法进行，不同之处在于：
1、灵芝液体菌种的制备方法如下：
取灵芝（赤芝（Ganoderma lucidum）CGMCC No.5.26）的菌种接种于PDA固体培养基上，28℃活化培养后，取菌块接种于装有200ml PDA液体培养基的500ml三角瓶，28℃、200rpm震荡培养2—3天，收集所有发酵产物得到含灵芝菌丝干重计浓度为2和4g/L的种子液即灵芝液体菌种。
2、接种方法如下：
取步骤1获得的含灵芝以菌丝干重计浓度为2g/L和4g/L的灵芝液体菌种各10、20和30mL，用注射器分别接种于灵芝固体栽培培养基（段木与木屑的质量比为49:1）两端袋口部位，每端各注射一半的量，然后把袋口封闭。
表3.不同液体菌种浓度和接种量对液体菌种生长的影响
Claims (7)
1.一种灵芝的人工栽培方法，包括将灵芝液体菌种接种于灵芝固体栽培培养基中培养，获得灵芝子实体；所述灵芝固体栽培培养基由阔叶林段木和阔叶林木屑组成；所述灵芝固体栽培培养基中的所述阔叶林段木和所述阔叶林木屑的质量比为9:1；所述灵芝固体栽培培养基为袋装，每袋所述灵芝固体栽培培养基含1个所述阔叶林段木，所述阔叶林木屑位于所述阔叶林段木的两端；每个所述阔叶林段木的长度为25-35厘米，横截面直径为5-10厘米；所述阔叶林木屑的细度为20目；所述接种为分别将所述灵芝液体菌种接种于所述灵芝固体栽培培养基两端袋口部位，然后把袋口封闭；所述接种按如下比例进行：每袋所述灵芝固体栽培培养基中接种所述灵芝液体菌种10-30mL。
2.根据权利要求1所述的人工栽培方法，其特征在于：所述灵芝液体菌种的浓度以菌丝干重计为2-4g/L。
3.根据权利要求1所述的人工栽培方法，其特征在于：所述灵芝液体菌种按照包括如下步骤的方法获得：将灵芝的菌丝体接入灵芝液体发酵培养基中进行液体发酵培养，收集所有发酵产物即所述灵芝液体菌种；
所述灵芝液体发酵培养基为PDA液体培养基；
所述液体发酵培养的温度为28℃、转速为200转/分钟。
4.根据权利要求1-3中任一所述的人工栽培方法，其特征在于：将接种所述灵芝液体菌种的所述灵芝固体栽培培养基依次于如下温度和光照条件下进行培养获得所述灵芝子实体：
a)20℃条件下培养至所述灵芝菌丝体充满所述灵芝固体栽培培养基；
b)20℃，每天24小时中光照12小时其余时间黑暗，光照强度为1000-2000Lux条件下培养至获得所述灵芝子实体。
5.根据权利要求4所述的人工栽培方法，其特征在于：所述灵芝为赤芝(Ganodermalucidum)。
6.一种灵芝固体栽培培养基，由质量比为9:1的阔叶林段木和阔叶林木屑组成；
所述灵芝固体栽培培养基为袋装，每袋所述灵芝固体栽培培养基含1个所述阔叶林段木，所述阔叶林木屑位于所述阔叶林段木的两端；每个所述阔叶林段木的长度为25-35厘米，横截面直径为5-10厘米；所述阔叶林木屑的细度为20目。
7.根据权利要求6所述的培养基，其特征在于：所述灵芝为赤芝(Ganoderma lucidum)。
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