WO2017022091A1 - 脂肪幹細胞誘引剤を含む、真皮空洞化による皮膚のたるみ又は老化改善剤 - Google Patents

脂肪幹細胞誘引剤を含む、真皮空洞化による皮膚のたるみ又は老化改善剤 Download PDF

Info

Publication number
WO2017022091A1
WO2017022091A1 PCT/JP2015/072140 JP2015072140W WO2017022091A1 WO 2017022091 A1 WO2017022091 A1 WO 2017022091A1 JP 2015072140 W JP2015072140 W JP 2015072140W WO 2017022091 A1 WO2017022091 A1 WO 2017022091A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
adipose stem
dermal
skin
stem cell
stem cells
Prior art date
Application number
PCT/JP2015/072140
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
智暢 江連
孝広 落谷
Original Assignee
株式会社資生堂
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 株式会社資生堂 filed Critical 株式会社資生堂
Priority to KR1020187002459A priority Critical patent/KR20180030850A/ko
Priority to CN201580082119.0A priority patent/CN107847424A/zh
Priority to US15/749,949 priority patent/US10918590B2/en
Priority to EP15900402.7A priority patent/EP3332765B1/en
Priority to RU2018107704A priority patent/RU2018107704A/ru
Priority to PCT/JP2015/072140 priority patent/WO2017022091A1/ja
Priority to JP2017532310A priority patent/JPWO2017022091A1/ja
Publication of WO2017022091A1 publication Critical patent/WO2017022091A1/ja

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/96—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution
    • A61K8/97—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution from algae, fungi, lichens or plants; from derivatives thereof
    • A61K8/9783—Angiosperms [Magnoliophyta]
    • A61K8/9789—Magnoliopsida [dicotyledons]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/96—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • A61Q19/08—Anti-ageing preparations
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/23—Apiaceae or Umbelliferae (Carrot family), e.g. dill, chervil, coriander or cumin
    • A61K36/236—Ligusticum (licorice-root)

Definitions

  • the present invention relates to an agent for improving skin sagging or aging due to dermal cavity formation, comprising an adipose stem cell attractant. More specifically, licorice extract and / or rosemary extract are used as an adipose stem cell attractant.
  • Regenerative medicine In the field of regenerative medicine that aims to newly regenerate tissues, the use of various stem cells has been attempted to restore the function of the lost tissues. Regenerative medicine has been applied not only to the medical field but also to the beauty field such as hair regeneration and skin regeneration.
  • Stem cells are cells that have both self-renewal ability and differentiation ability.
  • stem cells embryonic stem cells (ES cells), such as embryonic stem cells (ES cells), can be differentiated into all types of cell types that can differentiate into all types of cell types.
  • ES cells embryonic stem cells
  • hematopoietic stem cells and mesenchymal stem cells having differentiation pluripotency that can differentiate into multiple lineages.
  • embryonic stem cells can only be obtained from embryos in the early stages of development, and it is difficult to use in research and clinical settings easily due to the risk to the mother at the time of collection and ethical issues.
  • Use in the beauty field is difficult. In the beauty field, studies have been conducted on the use of adult stem cells. However, the frequency of their existence is very low, and isolation is difficult, and it is also difficult to culture in large quantities while maintaining self-replication and differentiation capabilities.
  • Non-patent Document 1 World J Stem Cells 2014 January 26; 6 (1): 65-68.
  • Non-patent Document 2 Fat stem cells contribute to hair follicle regeneration by functioning as skin Niche cells that control the activity of skin stem cells
  • Non-patent Document 3 JournalJof Dermatological Science (2007) 48, 15- 24. Further, it is disclosed that the contact of adipose stem cells and dermal fibroblasts promotes the proliferation of dermal fibroblasts, and it is known that they can be used for wound healing and skin regeneration (non-patented).
  • Reference 4 Journal of Dermatological Science (2007) 48, 15- 24). Furthermore, a transplantation test for adipose stem cells has shown a therapeutic effect in congenital muscular dystrophy targeting collagen type 6, and it is known that adipose stem cells can also be used for muscle regeneration (non-patented). Reference 5: Stem Cell Research & Theapy 2014, 5; 21).
  • sagging skin and wrinkles on the face are a concern in beauty.
  • sagging tends to occur near the jaw and cheek of the face line.
  • causes of sagging include decreased function of facial muscles, decreased elasticity of skin supporting facial muscles, increased subcutaneous fat, etc. (Non-patent document 6: Skin Research and Technology, 2009; 15; 299-305 ).
  • an oral composition for the purpose of improving sag, a composition comprising a plurality of components, for example, two or more mucopolysaccharides, a collagen partial degradation product and coenzyme Q10, and these three components as active ingredients (Patent Document 3: JP-A-2006-143671).
  • the object of the present invention is to develop a drug that improves skin sagging.
  • the inventors of the present invention conducted intensive research on the skin aging phenomenon, in particular, skin sagging, and found that dermal hollowing occurred as one of the causes of sagging. Therefore, intensive research was conducted on the method for improving the sag by filling the cavity in the hollowed dermis, and it was found that the cavity can be filled by attracting adipose stem cells. Furthermore, when a cosmetic material capable of attracting adipose stem cells was screened, the licorice and / or rosemary extract was found to attract adipose stem cells, leading to the present invention. Accordingly, the present invention relates to the following.
  • An adipose stem cell attractant comprising a licorice extract or rosemary extract.
  • An agent for improving skin sagging or aging due to dermal cavity formation comprising the adipose stem cell attractant according to item 1.
  • the skin sagging or aging improving agent according to item 2 wherein the dermal cavity is filled with a dermal structure due to the adipose stem cells attracted to the dermal cavity by the adipose stem cell attractant according to item 1.
  • the skin sagging or aging improving agent according to Item 3 comprising dermal fibroblasts and stromal components produced from the dermal fibroblasts by the induced adipose stem cells.
  • adipose stem cell attractant comprises a licorice extract and / or a rosemary extract.
  • a method for improving skin sagging or aging comprising administering an adipose stem cell attractant to a subject suffering from sagging skin due to dermal hollowing.
  • adipose stem cell attractant for the manufacture of an agent for improving skin sagging or aging due to dermal cavity formation.
  • the dermal cavity is filled with a dermal structure due to the adipose stem cells attracted to the dermal cavity by the adipose stem cell attractant.
  • the dermal structure comprises dermal fibroblasts and stromal components produced from the dermal fibroblasts.
  • the adipose stem cell attractant penetrates through an appendage.
  • adipose stem cell attractant acts in the dermal cavity.
  • the adipose stem cell attractant comprises a licorice extract and / or a rosemary extract.
  • An adipose stem cell attractant comprising a licorice extract or a rosemary extract.
  • a composition for improving symptoms that is a therapeutic target for mesenchymal stem cells, comprising the adipose stem cell attractant of item 25.
  • the improvement of the symptom as a therapeutic target of the mesenchymal stem cell is promoted hair growth, wound healing, skin regeneration, muscle regeneration, soft tissue regeneration, bone regeneration, myocardial regeneration, or nerve regeneration.
  • a fat stem cell attractant comprising administering a licorice extract or a rosemary extract to a subject in need of attracting adipose stem cells.
  • the improvement of a symptom that is a therapeutic target of the mesenchymal stem cell is promoted hair growth, wound healing, skin regeneration, muscle regeneration, soft tissue regeneration, bone regeneration, myocardial regeneration, or nerve regeneration.
  • 30. A method according to item 29, intended.
  • a cosmetic method by attracting adipose stem cells by applying a cosmetic containing a licorice extract or a rosemary extract.
  • Use of a licorice extract or rosemary extract for the manufacture of a medicament for attracting adipose stem cells.
  • the skin sagging or aging improving agent according to Item 35 wherein the dermal cavity is filled with a dermal structure due to the adipose stem cells attracted to the dermal cavity by the adipose stem cell attractant.
  • the agent for improving skin sagging or aging according to Item 36 wherein the dermis structure comprises dermal fibroblasts and stromal components produced from the dermal fibroblasts.
  • the skin sagging or aging improving agent according to any one of items 35 to 38, wherein the adipose stem cell attractant acts in a dermal cavity.
  • the adipose stem cell attractant comprises a licorice extract and / or a rosemary extract.
  • An agent for improving skin sagging or aging due to dermal cavity formation containing an adipose stem cell attractant, wherein the adipose stem cell attractant attracts adipose stem cells to the dermis cavity, and is caused by the induced adipose stem cells
  • the skin sagging or aging improving agent which is filled with a dermis structure.
  • the adipose stem cell attractant used for the skin sagging or aging improving agent of the present invention acts by attracting adipose stem cells to the dermal cavity.
  • Adipose stem cells can promote the proliferation of dermal fibroblasts and the production of stromal components by dermal fibroblasts, thereby filling dermal cavities that cause skin sagging or aging.
  • FIG. 1 is a staining diagram of the dermis layer in a skin tissue section obtained from young and elderly skin. In the elderly, it is shown that the dermal cavity is formed by raising the subcutaneous tissue.
  • FIG. 2A is a diagram showing the relationship between the degree of hollowing and the age.
  • FIG. 2B is a diagram showing the relationship between the physical properties of the skin and the degree of cavitation.
  • FIG. 2C is a diagram illustrating the relationship between the degree of sagging and the degree of cavitation.
  • FIG. 3 is a photograph (FIG. 3A) and a graph (FIG. 3B) showing changes in cultured dermal fibroblasts in the presence and absence of adipose stem cells.
  • FIG. 3 is a photograph (FIG. 3A) and a graph (FIG. 3B) showing changes in cultured dermal fibroblasts in the presence and absence of adipose stem cells.
  • FIG. 4 is a graph showing changes in the number of cultured dermal fibroblasts in the presence and absence of adipose stem cells (FIG. 4A) and a graph showing changes in collagen production (FIG. 4B).
  • FIG. 5 is a graph showing the attraction of adipose stem cells by a rosemary extract (FIG. 5A) and the attraction of adipose stem cells by a licorice extract (FIG. 5B).
  • the present invention relates to an agent for improving skin sagging or aging due to dermal cavity formation, comprising an adipose stem cell attractant.
  • An adipose stem cell attractant refers to an agent capable of attracting adipose stem cells.
  • the adipose stem cell attractant is capable of attracting adipose stem cells to the dermal cavity of the skin.
  • Adipose stem cells can also be referred to as adipose tissue-derived mesenchymal stem cells, and are a type of mesenchymal stem cell that exists in adipose tissue.
  • Adipose stem cells are known to have migration ability (Non-patent Documents 1 and 1), and are thought to be able to migrate through adipose tissue.
  • Adipose stem cells are characterized by the expression of CD90 markers, CD105 markers, etc., but are not intended to be limited to cells that express these markers.
  • Adipose stem cells express various cell growth factors or intercellular signal transduction factors that promote the growth of dermal fibroblasts and the production of stromal components, particularly collagen, from dermal fibroblasts. Can do. Therefore, by attracting adipose stem cells, the surrounding dermal fibroblasts are activated.
  • the adipose stem cell attractant may be any substance as long as it can attract adipose stem cells.
  • the adipose stem cell attractant may be an agent capable of promoting migration and proliferation of adipose stem cells, apart from the attraction effect.
  • in vivo factors such as chemokines and cytokines, polypeptides and proteins may be used, and cosmetic or pharmaceutical materials such as low molecular weight compounds, high molecular compounds, and extracts may be used. Good.
  • a substance that can be used as the adipose stem cell attractant includes SDF1 ⁇ .
  • cosmetic materials are preferred, and examples thereof include plant extracts such as licorice extract and rosemary extract.
  • the adipose stem cell attractant can be used alone or in combination of two or more of the extracts, or may be used in combination with an existing adipose stem cell attractant.
  • an extraction solvent used for obtaining a plant extract water or an aliphatic monohydric alcohol such as methanol, ethanol or propanol; an aliphatic polyhydric alcohol such as glycerin, propylene glycol or 1,3-butylene glycol; acetone Ketones such as diethyl ether, dioxane, acetonitrile, and ethyl acetate; aromatic solvents such as xylene, benzene, and toluene; and organic solvents such as halogenated alkyls such as chloroform.
  • These extraction solvents may be used alone or in combination of two or more.
  • the mixing ratio of the extraction solvent to be mixed is not particularly limited and can be adjusted as appropriate.
  • the extraction solvent is preferably a water-containing extraction solvent containing at least water.
  • the extraction method for obtaining the plant extract is not particularly limited, and a conventionally known general extraction method can be employed.
  • the extraction site of each plant can be used as it is or after drying as an extraction raw material.
  • purification treatment such as filtration, deodorization, and decolorization can be appropriately performed as necessary.
  • the adipose stem cell attractant or skin sagging or aging improving agent is added to the final product.
  • concentration of each of the extracts contained in the final product is not particularly limited.
  • the extract is typically 0.001 to It is blended in the range of 10% by mass, preferably in the range of 0.001 to 1% by mass, and most preferably in the range of 0.01 to 0.5% by mass.
  • Rosemary extract is an aromatic extract derived from Rosemary (Rosmarinus officinalis), an evergreen shrub belonging to the family Lamiaceae originating from the Mediterranean coast.
  • the root, leaves, stems, flowers, and whole plant of the plant It can be used as a raw material.
  • any method can be used as the extraction method, for example, an extract can be obtained by performing steam distillation or solvent extraction on the leaves of rosemary.
  • any extraction solvent can be used, but an extract obtained by extraction with 50% (v / v) butylene glycol can also be used.
  • the licorice extract is an extract derived from the leguminous perennial licorice (Glycyrrhiza glabra L. or Glycyrrhiza uralensis Fisher), and the roots, leaves, stems, flowers and the whole plant of the plant can be used as raw materials.
  • Sweet potato roots contain sweetening ingredients such as glycyrrhizin, glucose and sucrose. Glycyrrhizin is well known because its degradation product binds to harmful products in the liver of the living body and detoxifies.
  • the licorice extract it is preferable to extract licorice root as a raw material, and the extraction method can be any method such as steam distillation or solvent extraction.
  • any extraction solvent can be used, but an extract obtained by extraction with 50% (v / v) butylene glycol can also be used.
  • licorice extract licorice extract powder and licorice flavonoids (oil-soluble licorice extract) of the blending ingredient standard for cosmetic varieties may be used.
  • the attraction effect of the adipose stem cell attractant can be determined by culturing adipose stem cells in a medium having a difference in concentration of the adipose stem cell inducer and detecting migration.
  • In vivo confirmation can be performed by calculating the number or ratio of adipose stem cells in a tissue section after administration of an adipose stem cell attractant, and the presence or absence of attraction can be examined.
  • the dermal cavity is a sinus formed by the partial elevation of the subcutaneous tissue toward the dermis layer due to aging or some other cause (FIG. 1).
  • the size of the dermal cavity is approximately spherical with a diameter of approximately 10 ⁇ m to 1000 ⁇ m, but its shape is not constant. Since the inside of the dermal cavity is filled with the subcutaneous tissue, it can be simply referred to as a dermal sinus. Since cell components and interstitial components contained in the dermis layer are not contained in the dermis cavity, the elasticity of the skin is lost, sagging occurs, leading to skin aging. Moreover, due to the presence of the dermal cavity, the thinning of the dermis partially contributes to the sagging and aging of the skin. In fact, it was found that the higher the degree of dermal hollowing, the lower the elasticity of the skin and the higher the degree of sagging appearance (FIGS. 2B and 2C).
  • the degree of the dermal cavity can be measured by integrating the thickness of the dermis at a certain length in the skin section, that is, the thickness from the boundary with the epidermis to the boundary with the subcutaneous tissue.
  • the thickness of the dermis decreases due to the subcutaneous tissue rising to the dermis layer side.
  • the thickness of the epidermis is constant and sufficiently thin as compared with the dermis, so that it can be calculated by simply adding the thickness from the skin surface to the subcutaneous tissue.
  • an index indicating the elasticity of the skin is measured using a device that measures the elasticity of the skin such as a cut meter. And it can be substituted.
  • the cause of the adipose stem cells attracted to the dermal cavity by the adipose stem cell attractant means that the adipose stem cells attracted directly or indirectly act. That is, adipose stem cells attracted to the dermal cavity can indirectly activate dermal fibroblasts present in the surrounding area by secreting various cell activators.
  • the dermal fibroblasts activated in this way undergo cell proliferation and increase the production of stromal components.
  • the proliferated dermal fibroblasts and the produced interstitial components are stratified to form a dermis structure, and the dermis cavity is filled with the dermis structure.
  • the adipose stem cells are mesenchymal stem cells, they can be differentiated into dermal cells such as fibroblasts, thereby directly improving the dermal cavity. Therefore, the dermal cavity is improved by attracting adipose stem cells to the dermal cavity.
  • the dermis is mainly composed of cellular components such as fibroblasts, histiospheres, mast cells, plasma cells, and dendritic cells, and stromal components that fill the spaces between the cells.
  • Interstitial components are roughly classified into collagen fibers composed of collagen, elastic fibers composed of fibrin and elastin, and substrates mainly composed of glycoproteins and proteoglycans existing between the fibers and cells.
  • the skin sagging or aging improving agent of the present invention can be administered to a subject suffering from sagging skin and / or aging due to a dermal cavity.
  • Causes of sagging include decreased function of facial muscles, decreased elasticity of the skin supporting the facial muscles, increased subcutaneous fat, etc. These causes, independently or in cooperation, cause sagging and Brings aging.
  • the main cause of sagging is a decrease in skin elasticity, particularly a decrease in skin elasticity accompanying a decrease in the thickness of the dermis layer due to the dermal cavity.
  • the degree of dermal cavitation can also be measured. It is preferable to apply the skin sagging or aging improving agent of the present invention or a cosmetic method to a subject having a high degree of cavity. Based on the threshold value determined from the numerical value of the degree of dermal cavitation, an object that exceeds the threshold value can also be determined as an object having a high degree under the cavity.
  • the skin sagging or aging improving agent of the present invention can be administered by any route such as oral or parenteral administration, but transdermal administration is preferred from the viewpoint of direct administration to the skin.
  • Transdermally administered adipose stem cell attractant can penetrate through appendages such as pores and sweat glands present in the skin. Since the appendages usually reach the deepest part of the dermis layer, they are very close to the presence of the dermal cavity. Therefore, the transdermally administered adipose stem cell attractant can be delivered to the dermal cavity, which is the site of action, by penetrating through the appendage.
  • the skin sagging or aging improving agent may be appropriately selected for its viscosity, surface tension, hydrophilicity, and hydrophobicity. it can.
  • high frequency vibrations or sound waves can be applied after application of the skin sagging or aging improver of the present invention to facilitate penetration into the dermal cavity.
  • the skin sagging or aging improving agent of the present invention can be incorporated into cosmetics, pharmaceuticals, or quasi drugs.
  • cosmetics for cosmetic purposes, it is preferable to blend in cosmetics.
  • the cosmetic dosage form to be blended is arbitrary, and can be blended and used in the form of a liquid, gel, foam, emulsion, cream, ointment, sheet or the like.
  • Cosmetics, pharmaceuticals, or quasi-drugs to be formulated include topical pharmaceutical preparations, lotions, emulsions, creams, ointments, lotions, oils, packs, and other basic cosmetics, facial cleansers, skin cleansers, hair removers, Makeup cosmetics such as hair remover, after-shave lotion, pre-shave lotion, shaving cream, foundation, lipstick, blusher, eye shadow, eyeliner, mascara, shampoo, rinse, hair treatment, pre-hair treatment, hair conditioner, perm, hair It can be applied to various products such as tonics, hair dyes, hair cosmetics such as hair growth and nourishing agents, and bath preparations.
  • the present invention may relate to a method of screening for a skin sagging due to dermal hollowing or an aging improving agent.
  • the ability to attract a test substance can be examined by culturing adipose stem cells in a medium having a difference in concentration of the test substance. More specifically, one or a plurality of flow paths having a diameter that allows cell culture cells to pass through are provided, a cell culture well is disposed at one of the flow paths, and a test substance addition well is disposed at the other.
  • a cell migration test well can be used that is configured.
  • the channel can also be replaced by a membrane having a constant pore size.
  • Adipose stem cells are mesenchymal stem cells known to differentiate into various mesenchymal cells such as adipocytes, osteoblasts, chondrocytes, muscle cells, and nerve cells (Non-patent Document 1). .
  • Non-patent document 1 discloses that adipose stem cell-derived chondrocytes can be used for the treatment of articular cartilage diseases such as osteoarthritis, and that adipose stem cell-derived osteoblasts can be applied to bone defects.
  • the adipose stem cell attracting composition of the present invention can be used to treat or ameliorate a condition that is a therapeutic target of mesenchymal stem cells, particularly adipose stem cells.
  • Non-Patent Document 2 it contributes to the regeneration of hair follicles by functioning as skin Niche cells that control the activity of skin stem cells. It is disclosed that hair growth can be promoted by attracting adipose stem cells.
  • Non-Patent Document 3 discloses that adipose stem cells and dermal fibroblasts are brought into contact with each other to promote proliferation of dermal fibroblasts. It is known that it can be used for wound healing and skin regeneration. Furthermore, regarding the draft of adipose stem cells and muscle regeneration, non-patent document 4 shows a therapeutic effect in congenital muscular dystrophy targeting collagen type 6 by an adipose stem cell transplantation test. It is disclosed that it can also be used for muscle regeneration.
  • Cutaneous tissue sections were obtained from female abdomen of young and elderly subjects and subjected to hematoxylin-eosin staining.
  • the reagent for staining hematoxylin and eosin was performed according to a conventional method, and the stained tissue was observed under a microscope (FIG. 1).
  • the boundary between the dermis tissue and the subcutaneous tissue was smooth, whereas in the skin tissue section of the elderly person, the boundary between the dermis tissue and the subcutaneous tissue was disturbed, and a part of the subcutaneous tissue The dermal cavity was formed by the bulge.
  • the test was conducted on 30 healthy female subjects (nationality: Japan) in their 30s to 50s having a standard body mass index (BMI) of less than 25.
  • BMI body mass index
  • the subjects washed their face and adapted to a standard environment.
  • a digital camera (Nikon D-100; Nikon Corporation, Tokyo, Japan) was used to take a photo of the face from an angle of 45 ° left and right while sitting.
  • the severity of upper cheek sagging severity based on a 6-grade evaluation standard based on photographs (Ezure T, Hosoi J, Amano S, Tsuchiya T. Skin Res Technol. 2009 Aug; 15 (3): 299-305 .).
  • the elasticity of the dermis is measured with the noninvasive skin elasticity meter (Cutometer MPA 580 (registered trademark), Courage & Khazaka, Cologne, Germany) based on the measurement of skin deformation and recovery during suction and release. Elasticity was evaluated. A suction probe with a large diameter (6 mm) was used. The subject was laid on the bed and his face was tilted at an angle of 45 ° to reduce the effect of gravity when measuring dermal elasticity. The measurement point was set at the center of the upper cheek.
  • Cutometer MPA 580 registered trademark
  • Skin suction is performed at a pressure of 400 mbar for 2 seconds, followed by a relaxation period of 2 seconds, Ue (immediate distension of the skin, representing elastic deformation), Uv (viscoelastic creep occurring after the elastic deformation), Uf (final distension at the The end of the vacuum period, representing the total extensibility of the skin), and Ur ((the immediate retraction of the skin meaning elastic deformation recovery) were obtained from the skin deformation curve.
  • Uv / Ue ratio of viscoelastic to elastic distention
  • FIG. 2A shows the relationship between the age and the degree of cavitation, and the relationship between the degree of cavitation and the physical property of the skin is shown in FIG.
  • the relationship between the degree of hollowing and the degree of sagging is shown in FIG.
  • a Pearson test was performed on the relationship between the age of FIG. 2A and the degree of hollowing, and the relationship between the degree of hollowing and the physical properties of FIG. 2B.
  • Spearman test was performed on the relationship between the degree of hollowing and the degree of sagging in FIG.
  • Adipose Stem Cell Dermal Fibroblast Activation Test Dermal fibroblasts were purchased from Lonza and cultured in DMEM containing 10% FBS. Adipose stem cells (ADSC) were purchased from Invitrogen and cultured in MessenPro RS medium medium. Dermal fibroblasts were seeded on the upper layer of a transwell (trans well for 6 well plate: Falcon) at 1 ⁇ 10 4 cells / well. ADSCs were treated with 10 ⁇ g / mL mitomycin for 3 hours, and then seeded on the lower layer of a transwell for 6 well plate so as to be 2 ⁇ 10 5 cells / well.
  • ADSC Adipose Stem Cell Dermal Fibroblast Activation Test
  • the medium was replaced with DMEM containing 10% FBS and 250 uM ascorbic acid, and co-culture was started. Seven days later, the upper layer was fixed with paraformaldehyde, followed by HE staining and observation (FIG. 3A). The thickness of the upper layer was measured and shown (FIG. 3B). As a control group, culture was performed with fibroblasts alone without ADSC. In the presence of ADSC, dermal fibroblasts were activated and the thickness of the dermal layer was increased (Student t test: P ⁇ 0.05).
  • Dermal fibroblasts were purchased from Lonza and cultured in DMEM containing 10% FBS.
  • Adipose stem cells (ADSC) were purchased from Invitrogen and cultured in MessenPro RS medium medium. Dermal fibroblasts were seeded on the upper layer of a transwell (trans well for 6 well plate: Falcon) so as to be 1 ⁇ 10 5 cells / well. ADSCs were treated with 10 ⁇ g / mL mitomycin for 3 hours, and then seeded on the lower layer of a transwell for 6 well plate so as to be 2 ⁇ 10 5 cells / well. After 24 hours, the medium was replaced with DMEM containing 10% FBS and 250 uM ascorbic acid, and co-culture was started.
  • RT-PCR was reverse transcribed using the Light cycler kit (Roche) according to the product instructions and quantified using the following primers (FIG. 4B).
  • AlamarBlue assay the number of viable cells was measured using AlamarBlue (Bio-Rad Company) according to the product instructions (FIG. 4A).
  • ADSC the number of living cells increased (Student t test: P ⁇ 0.05), and the expression level of collagen (COL1A1) also increased (Student t test: P ⁇ 0.05).
  • Adipose Stem Cell Induction Test Adipose-derived stem cells (Invitrogen (Carlsbad, Calif.)) Were cultured in a flask containing MessenPro RS medium (DMEM; GIBCO / BRL (Carlsbad, Calif.)) At 37 ° C. under 5% CO 2 humidification. . When subconfluent, cells were harvested using Accutase (PAA (Linz, Austria)) and labeled with 2 ⁇ M PKH67 (Sigma-Aldrich (St. Louis, MO)) according to product instructions. .
  • PAA Accutase
  • PKH67 Sigma-Aldrich
  • rosemary (Rosemarinus Officinalis) leaf extract (Maruzen Pharmaceutical, product code: 6435, extraction solvent: 50% (w / v) Butylene glycol) and Glycyrrhiza Glabra root extract (Maruzen Pharmaceutical, product code: 9488, extraction solvent: 50% (w / v) butylene glycol) have been shown to have excellent adipose stem cell-inducing activity .
  • Wells to which rosemary extract and licorice extract were added showed significantly higher fluorescence compared to control wells containing no extract and containing only the extraction solvent (Table 1, FIGS. 5A and B, Student t-test). : P ⁇ 0.05).
  • the extraction solvent was 50% (w / v) butylene glycol and only this solvent was added to the control wells instead of the test extract.

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Birds (AREA)
  • Gerontology & Geriatric Medicine (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Cosmetics (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)

Abstract

真皮空洞化による皮膚のたるみ又は老化の改善剤を提供することを目的とする。真皮空洞に脂肪幹細胞を誘引することにより、その周囲の真皮線維芽細胞が活性化することで真皮空洞を改善することができる。したがって、脂肪幹細胞誘引する物質をスクリーニングしたところ、ローズマリー抽出物及びカンゾウ抽出物が、脂肪幹細胞誘引能力を有することから、真皮空洞化による皮膚のたるみ又は老化を改善することができる。

Description

脂肪幹細胞誘引剤を含む、真皮空洞化による皮膚のたるみ又は老化改善剤
　本発明は、脂肪幹細胞誘引剤を含む、真皮空洞化による皮膚のたるみ又は老化改善剤に関する。より具体的には、脂肪幹細胞誘引剤として、カンゾウ抽出物及び／又はローズマリー抽出物が使用される。
　組織を新しく再生することを目指す再生医学の領域において、失われた組織の機能を回復させるために、各種幹細胞の活用が試みられている。再生医学は、医療領域のみならず、毛髪再生や皮膚再生など美容領域にも応用されてきている。
　幹細胞とは、自己複製能力と分化能力とを併せ持つ細胞である。幹細胞としては、胚性幹細胞（ＥＳ細胞）のように一個体を形成する全ての系統の細胞種へ分化することのできる分化万能性を有する幹細胞の他、成人の体にも、分化万能性はないが、複数系統へ分化できる分化多能性を有する成体幹細胞（造血幹細胞や、間葉系幹細胞）が存在することが知られている。
　しかしながら、胚性幹細胞は発生初期の胚からしか得ることができず、採取時の母体への危険性や倫理的な問題なども加わって、手軽に研究・臨床の場に利用することは難しく、美容領域での利用は困難である。美容領域では、成体幹細胞の利用について研究が行われているが、その存在頻度が非常に低く単離が難しく、また自己複製能力と分化能力を維持させながら大量に培養することも困難である。
　幹細胞には様々な種類が存在するものの、脂肪組織から単離される脂肪幹細胞は、遊走能力を有することが知られており（特許文献１：特表2013-507958）、種々の細胞系列へと分化することができることも知られていることから、様々な再生治療への応用が期待されている（非特許文献１：World J Stem Cells 2014 January 26; 6(1): 65-68）。再生治療への応用として、例えば、脂肪幹細胞が、皮膚幹細胞の活性を制御する皮膚Niche細胞として機能することで、毛包の再生に寄与することが明らかになっている（非特許文献２：Cell, (2011)146, 761-771）。また、脂肪幹細胞の皮膚直下への移植が、皮膚の創傷治癒能力を早めることができることが示されている（非特許文献３：Journal of Dermatological Science (2007) 48, 15- 24)。また、脂肪幹細胞と真皮線維芽細胞とが接触することで真皮線維芽細胞の増殖を促すことが開示されており、創傷治癒や皮膚の再生に利用可能であることが知られている（非特許文献４：Journal of Dermatological Science (2007) 48, 15- 24）。さらに、脂肪幹細胞の移植試験により、コラーゲン６型を標的とする先天性筋ジストロフィーでの治療効果が示されており、脂肪幹細胞は、筋肉再生にも利用可能であることが知られている（非特許文献５：Stem Cell Research & Theapy 2014, 5;21）。
　一方で、顔に生じる皮膚のたるみやしわは、美容における関心事である。特に、たるみはフェースラインの顎及び頬の近傍に生じ易い。たるみの原因としては、表情筋の機能低下、表情筋を支えている皮膚の弾力の低下、皮下脂肪の増大等が挙げられる(非特許文献６：Skin Research and Technology, 2009; 15; 299-305)。たるみを効果的に改善するためには、原因を特定し、それに沿った改善策を講じることが必要とされる。例えば、たるみの主原因が、表情筋の機能低下である場合、たるみを改善するためには表情筋のエクササイズが有効である。また、たるみの主原因が、皮膚の弾力低下である場合、皮膚の弾力に関わる弾性線維、例えばコラーゲンやエラスチンの産生促進剤の摂取が有効である。たるみの主原因が、皮下脂肪の増大である場合、エクササイズやカロリー制限、さらには体内脂肪を燃焼する添加剤が有効である（特許文献２：特開２００７－３３０１７８号）。これらのたるみの原因は、一つである場合は少なく、複合的であることが多い。そのため、たるみ改善を目的とする経口用組成物としては、複数の成分、例えば２種類以上のムコ多糖に、コラーゲン部分分解物とコエンザイムＱ１０を加え、これら３種の成分を有効成分とする組成物が開示されている（特許文献３：特開２００６－１４３６７１号）。
特表2013-507958号公報 特開２００７－３３０１７８号公報 特開２００６－１４３６７１号公報
World J Stem Cells 2014 January 26; 6(1): 65-68 Cell, (2011)146, 761-771 Journal of Dermatological Science (2007) 48, 15- 24 Journal of Dermatological Science (2007) 48, 15- 24） Stem Cell Research & Theapy 2014, 5;21） Skin Research and Technology, 2009; 15; 299-305)
　本発明は、皮膚のたるみを改善する薬剤の開発を課題とする。
　本発明者らは、皮膚の老化現象、特に皮膚のたるみについて鋭意研究を行ったところ、たるみの原因の一つとして、真皮空洞化が生じることを見出した。そこで空洞化した真皮において空洞を充填することによるたるみの改善方法について鋭意研究を行ったところ、脂肪幹細胞を誘引することで、空洞の充填が可能になるとの知見を得た。さらに、脂肪幹細胞の誘引を可能にする化粧品素材をスクリーニングしたところ、カンゾウ及び/又はローズマリーの抽出物が、脂肪幹細胞を誘引することを見出し、本発明に至った。したがって、本発明は、以下に関する。
［１］　カンゾウ抽出物又はローズマリー抽出物を含む、脂肪幹細胞誘引剤。
［２］　項目１に記載の脂肪幹細胞誘引剤を含む、真皮空洞化による皮膚のたるみ又は老化改善剤。
［３］　項目１に記載の脂肪幹細胞誘引剤により真皮空洞に誘引された脂肪幹細胞に起因して真皮空洞が真皮構造物により充填される、項目２に記載の皮膚のたるみ又は老化改善剤。
［４］　前記誘引された脂肪幹細胞により、真皮線維芽細胞と、当該真皮線維芽細胞から産生される間質成分とを含む、項目３に記載の皮膚のたるみ又は老化改善剤。
［５］　項目１に記載の脂肪幹細胞誘引剤が、付属器官を介して浸透する、項目２～４のいずれか一項に記載の皮膚のたるみ又は老化改善剤。
［６］　項目１に記載の脂肪幹細胞誘引剤が、真皮空洞にて作用する、項目２～５のいずれか一項に記載の皮膚のたるみ又は老化改善剤。
［７］　脂肪幹細胞誘引剤を適用する工程を含む、真皮空洞化による皮膚のたるみ又は老化の改善のための美容方法。
［８］　適用された脂肪幹細胞誘引剤が真皮空洞に脂肪幹細胞を誘引し、誘引された脂肪幹細胞に起因して真皮空洞が真皮構造物により充填される、項目７に記載の美容方法。
［９］　前記真皮構造物が、真皮線維芽細胞と、当該真皮線維芽細胞から産生される間質成分とを含む、項目８に記載の美容方法。
［１０］　適用された脂肪幹細胞誘引剤が、付属器官を介して浸透する、項目７～９のいずれか一項に記載の美容方法。
［１１］　適用された脂肪幹細胞誘引剤が、真皮空洞にて作用する、項目７～１０のいずれか一項に記載の美容方法。
［１２］　前記脂肪幹細胞誘引剤が、カンゾウ抽出物及び／又はローズマリー抽出物を含む、項目７～１１のいずれか一項に記載の美容方法。
［１３］　真皮空洞化による皮膚のたるみを患う対象において、脂肪幹細胞誘引剤を投与することを含む、皮膚のたるみ又は老化改善方法。
［１４］　適用された脂肪幹細胞誘引剤が真皮空洞に脂肪幹細胞を誘引し、誘引された脂肪幹細胞に起因して真皮空洞が真皮構造物により充填される、項目１３に記載の皮膚のたるみ又は老化改善方法。
［１５］　前記真皮構造物が、真皮線維芽細胞と、当該真皮線維芽細胞から産生される間質成分とを含む、項目１４に記載の皮膚のたるみ又は老化改善方法。
［１６］　前記脂肪幹細胞誘引剤が、付属器官を介して浸透する、項目１３～１５のいずれか一項に記載の皮膚のたるみ又は老化改善方法。
［１７］　前記脂肪幹細胞誘引剤が、真皮空洞にて作用する、項目１３～１６のいずれか一項に記載の皮膚のたるみ又は老化改善方法。
［１８］　前記脂肪幹細胞誘引剤が、カンゾウ抽出物及び／又はローズマリー抽出物を含む、項目１３～１７のいずれか一項に記載の皮膚のたるみ又は老化改善方法。
［１９］　真皮空洞化による皮膚のたるみ又は老化改善薬の製造のための、脂肪幹細胞誘引剤の使用。
［２０］　前記脂肪幹細胞誘引剤によって、真皮空洞に誘引された脂肪幹細胞に起因して真皮空洞が真皮構造物により充填される、項目１９に記載の使用。
［２１］　前記真皮構造物が、真皮線維芽細胞と、当該真皮線維芽細胞から産生される間質成分とを含む、項目２０に記載の使用。
［２２］　前記脂肪幹細胞誘引剤が、付属器官を介して浸透する、項目１９～２１のいずれか一項に記載の使用。
［２３］　前記脂肪幹細胞誘引剤が、真皮空洞にて作用する、項目１９～２２のいずれか一項に記載の使用。
［２４］　前記脂肪幹細胞誘引剤が、カンゾウ抽出物及び／又はローズマリー抽出物を含む、項目１９～２３のいずれか一項に記載の使用。
［２５］　カンゾウ抽出物又はローズマリー抽出物を含む、脂肪幹細胞誘引剤。
［２６］　項目２５の脂肪幹細胞誘引剤を含む、間葉系幹細胞の治療標的となる症状の改善用組成物。
［２７］　前記間葉系幹細胞の治療標的となる症状の改善が、発毛促進、創傷治癒、皮膚の再生、筋肉の再生、軟組織の再生、骨の再生、心筋の再生、又は神経の再生である、脂肪幹細胞誘引剤。
［２８］　脂肪幹細胞誘引を必要とする対象に対して、カンゾウ抽出物又はローズマリー抽出物を投与することを含む、脂肪幹細胞誘引方法。
［２９］　項目２８に記載の誘引方法により、間葉系幹細胞の治療標的となる症状を治療又は改善する方法。
［３０］　前記間葉系幹細胞の治療標的となる症状の改善が、発毛促進、創傷治癒、皮膚の再生、筋肉の再生、軟組織の再生、骨の再生、心筋の再生、又は神経の再生を目的とする、項目２９に記載の方法。
［３０］　カンゾウ抽出物又はローズマリー抽出物を含む化粧料を適用することにより、脂肪幹細胞誘引による美容方法。
［３１］　発毛促進、創傷治癒、皮膚の再生を目的とする、項目３０に記載の美容方法。
［３２］　脂肪幹細胞誘引のための医薬の製造のための、カンゾウ抽出物又はローズマリー抽出物の使用。
［３３］　脂肪幹細胞の誘引により、間葉系幹細胞の治療標的となる疾患及び症状の治療のための、項目３２に記載の使用。
［３４］　　前記間葉系幹細胞の治療標的となる症状の改善が、発毛促進、創傷治癒、皮膚の再生、筋肉の再生、軟組織の再生、骨の再生、心筋の再生、又は神経の再生を目的とする、項目３３に記載の使用。
［３５］　脂肪幹細胞誘引剤を含む、真皮空洞化による皮膚のたるみ又は老化改善剤。
［３６］　前記脂肪幹細胞誘引剤によって、真皮空洞に誘引された脂肪幹細胞に起因して、真皮空洞が真皮構造物により充填される、項目３５に記載の皮膚のたるみ又は老化改善剤。
［３７］　前記真皮構造物が、真皮線維芽細胞と、当該真皮線維芽細胞から産生される間質成分とを含む、項目３６に記載の皮膚のたるみ又は老化改善剤。
［３８］　前記脂肪幹細胞誘引剤が、付属器官を介して浸透する、項目３６又は３７に記載の皮膚のたるみ又は老化改善剤。
［３９］　前記脂肪幹細胞誘引剤が、真皮空洞にて作用する、項目３５～３８のいずれか一項に記載の皮膚のたるみ又は老化改善剤。
［４０］　前記脂肪幹細胞誘引剤が、カンゾウ抽出物及び／又はローズマリー抽出物を含む、項目３５～３９のいずれか一項に記載の皮膚のたるみ又は老化改善剤。
［４１］　脂肪幹細胞誘引剤を含む真皮空洞化による皮膚のたるみ又は老化改善剤であって、当該脂肪幹細胞誘引剤が脂肪幹細胞を真皮空洞に誘引し、誘引された脂肪幹細胞に起因して真皮空洞が真皮構造物により充填される、前記皮膚のたるみ又は老化改善剤。
　本発明の皮膚のたるみ又は老化改善剤に用いられる脂肪幹細胞誘引剤は、真皮空洞に脂肪幹細胞を誘引することにより作用する。脂肪幹細胞は、真皮線維芽細胞の増殖や、真皮線維芽細胞による間質成分の産生を促進することができ、これにより皮膚のたるみ又は老化の原因となる真皮空洞を充填することができる。
図１は、若齢者及び高齢者の皮膚から取得された皮膚組織切片における真皮層の染色図である。高齢者では、皮下組織が隆起することにより真皮空洞が形成されていることが示される。 図２Aは、空洞化程度と年齢との関係を示す図である。図２Bは、皮膚物性と空洞化程度との関係を示す図である。図２Cは、たるみ程度と空洞化程度との関係を示す図である。 図３は、脂肪幹細胞の存在下及び非存在下における培養真皮線維芽細胞の変化を示す写真（図３A）及びグラフ（図３B）である。 図４は、脂肪幹細胞の存在下及び非存在下における、培養真皮線維芽細胞の数の変化を示すグラフ（図４A）、及びコラーゲンの産生量の変化を示すグラフ（図４B）である。 図５は、ローズマリー抽出物による脂肪幹細胞の誘引作用（図５A）及びカンゾウ抽出物による脂肪幹細胞の誘引作用（図５B）を示すグラフである。
　本発明は、脂肪幹細胞誘引剤を含む、真皮空洞化による皮膚のたるみ又は老化改善剤に関する。脂肪幹細胞誘引剤とは、脂肪幹細胞を誘引することができる薬剤をいう。好ましい態様では、脂肪幹細胞誘引剤は、脂肪幹細胞を皮膚の真皮空洞に誘引することができる。
　脂肪幹細胞とは、脂肪組織由来中間葉幹細胞（Adipose tissue-derived mesenchymal stem cells)ということもでき、脂肪組織中に存在する間葉系幹細胞の一種である。脂肪幹細胞は、遊走能力を有することが知られており（非特許文献１及び特許文献１)、脂肪組織中を移動することができると考えられている。脂肪幹細胞は、ＣＤ９０マーカー、ＣＤ１０５マーカー等の発現により特徴付けられるが、これらのマーカーを発現する細胞に限定されることを意図するものではない。脂肪幹細胞は、種々の細胞増殖因子又は細胞間情報伝達因子を発現しており、これらの因子は真皮線維芽細胞の増殖や真皮線維芽細胞からの間質成分、特にコラーゲンの産生を促進することができる。したがって、脂肪幹細胞が誘引されることにより、その周囲の真皮線維芽細胞は活性化される。
　脂肪幹細胞誘引剤は、脂肪幹細胞を誘引することができれば任意の物質であってもよい。脂肪幹細胞誘引剤は、誘引効果とは別に、脂肪幹細胞の遊走及び増殖を促進することができる薬剤であってもよい。脂肪幹細胞誘引剤として、ケモカインやサイトカインなどの生体内因子や、ポリペプチド及びタンパク質などであってもよいし、低分子化合物、高分子化合物、及び抽出物などの化粧品素材や医薬品素材であってもよい。脂肪幹細胞誘引剤としては用いることができる物質として、ＳＤＦ１αが挙げられる。また、美容の目的で用いる観点から、化粧品素材が好ましく、例えばカンゾウ抽出物、ローズマリー抽出物などの植物抽出物が挙げられる。前記脂肪幹細胞誘引剤は、前記抽出物の１種を単独で、又は２種以上を混合して用いることができるし、既存の脂肪幹細胞誘引剤と組み合わせて使用されてもよい。
　植物抽出物を得るために用いる抽出溶媒としては、水、又は、メタノール、エタノール、プロパノールなどの脂肪族１価アルコール；グリセリン、プロピレングリコール、１，３－ブチレングリコールなどの脂肪族多価アルコール；アセトンなどのケトン類；ジエチルエーテル、ジオキサン、アセトニトリル、酢酸エチルエステルなどのエステル類；キシレン、ベンゼン、トルエンなどの芳香族類；クロロホルムなどハロゲン化アルキル類などの有機溶媒が挙げられる。これらの抽出溶媒は、１種が単独で、又は２種以上が混合されて用いられ得る。混合されてなる抽出溶媒の混合比は、特に限定されるものではなく、適宜調整することができる。前記抽出溶媒としては、少なくとも水を含む水含有抽出溶媒が好ましい。
　植物抽出物を得るための抽出の方法としては、特に制限されず、従来公知の一般的な抽出方法を採用することができる。抽出においては、抽出原料として各植物の抽出部位をそのまま若しくは乾燥させて用いることができる。抽出した後においては、必要に応じて、適宜、ろ過、脱臭、脱色などの精製処理を行うことができる。脂肪幹細胞誘引剤又は皮膚のたるみ若しくは老化改善剤は、最終製品に添加して用いられる。最終製品中に含まれる上記各抽出物の濃度は、特に限定されず、例えば、十分な脂肪幹細胞誘引効果を発揮する観点から概ね組成物に対して、抽出物を典型的には０．００１～１０質量％の範囲、好ましくは０．００１～１質量％の範囲、最も好ましくは０．０１～０．５質量％の範囲で配合される。
　ローズマリー抽出物は、地中海沿岸を原産とするシソ科の常緑低木であるローズマリー（Rosmarinus officinalis）に由来する芳香性の抽出物であり、該植物の根、葉、茎、花、植物全体を原材料として用いることができる。抽出方法は任意の方法を用いることができるが、例えばローズマリーの葉について水蒸気蒸留や溶媒抽出を行うことで抽出物を得ることができる。また溶媒としては、任意の抽出溶媒を用いることができるが、５０％（ｖ/ｖ）のブチレングリコールで抽出して得た抽出物を用いることもできる。
　カンゾウ抽出物は、マメ科の多年草のカンゾウ（Glycyrrhiza glabra L．または Glycyrrhiza uralensis Fisher）に由来する抽出物であり、該植物の根、葉、茎、花、植物全体を原材料として用いることができる。カンゾウの根には、グリチルリチン、ブドウ糖、ショ糖などの甘味成分が含まれる。グリチルリチンは、その分解産物が生体の肝臓で有害産物と結合して解毒することでよく知られている。カンゾウ抽出物としては、カンゾウの根を原材料として抽出することが好ましく、抽出方法は任意の方法、例えば水蒸気蒸留や、溶媒抽出を行うことができる。溶媒としては、任意の抽出溶媒を用いることができるが、５０％（ｖ/ｖ）のブチレングリコールで抽出して得た抽出物を用いることもできる。カンゾウ抽出物としては、化粧品種別配合成分規格のカンゾウ抽出末やカンゾウフラボノイド（油溶性甘草エキス）であってもよいし、局方品カンゾウ粗エキス、局方品カンゾウエキスを用いることもできる。
　脂肪幹細胞の誘引は、in vitro及びin vivoのいずれでも確認することができる。in vitroの実験では、脂肪幹細胞誘引剤の濃度差がある培地中で脂肪幹細胞を培養して遊走を検出することで、脂肪幹細胞誘引剤の誘引効果を決定することができる。in vivoでの確認は、脂肪幹細胞誘引剤を投与した後に組織切片にて脂肪幹細胞の数又は割合を算出することで、誘引の有無を調べることができる。
　真皮空洞とは、加齢やその他なんらかの原因により、皮下組織が部分的に真皮層側に隆起することで形成される洞をいう（図１）。真皮空洞の大きさは、おおよそ１０μｍ～１０００μｍの直径を有する略球状であるが、その形状は一定ではない。真皮空洞内は皮下組織により充填されていることから、単に真皮洞ともいうことができる。真皮層中に含まれる細胞成分や間質成分が、真皮空洞内には含まれないことにより、皮膚の弾力が失われ、たるみが生じ、皮膚の老化に繋がる。また、真皮空洞が存在することで、真皮が部分的に菲薄化することが、皮膚のたるみ及び老化の一因でもある。実際に真皮空洞化の程度が高い程、皮膚の弾性が低く、また外観のたるみ程度が高いことが分かった（図２Ｂ、Ｃ）。
　真皮空洞の程度は、皮膚断面において、一定の長さにおける真皮の厚さ、即ち表皮との境界から、皮下組織との境界までの厚さを積算することで計測することができる。真皮空洞が存在すると、皮下組織が真皮層側に隆起することで、真皮の厚さが低下する。通常表皮の厚さは一定であり、かつ真皮に比較して十分に薄いため、単に皮膚表面から皮下組織までの厚さを積算することで計算することもできる。真皮空洞の程度は、肌の弾性と相間しているため（図２B）、キュートメーター等の肌の弾性を測定する機器を用いて肌の弾性を示す指標、例えばＵｖ／Ｕｅ値を測定することで、代用することもできる。
　脂肪幹細胞誘引剤により、真皮空洞に誘引された脂肪幹細胞に起因とは、誘引された脂肪幹細胞が、直接又は間接的に作用することをいう。すなわち、真皮空洞に誘引された脂肪幹細胞は、様々な細胞活性化因子を分泌することにより周囲に存在する真皮線維芽細胞を間接的に活性化することができる。このようにして活性化された真皮線維芽細胞は、細胞増殖を行うとともに、間質成分の産生量が増大する。増殖した真皮線維芽細胞と、産生された間質成分とは、重層化することで真皮構造物を形成し、真皮空洞が真皮構造物によって充填される。また、脂肪幹細胞は間葉系の幹細胞であることから、真皮細胞、例えば線維芽細胞などへ分化することができ、これにより直接的に真皮空洞を改善することができる。したがって、真皮空洞に脂肪幹細胞が誘引されることで、真皮空洞が改善する。
　真皮は、線維芽細胞、組織球、肥満細胞、形質細胞、及び樹状細胞などの細胞成分と、細胞の間を埋める間質成分とから主に構成される。間質成分は、コラーゲンから構成される膠原線維、フィブリンやエラスチンから構成される弾性線維、及び線維や細胞の間に存在する糖タンパク質やプロテオグリカンを主成分とする基質に大別される。
　本発明の皮膚のたるみ又は老化改善剤は、真皮空洞による皮膚のたるみ及び/又は老化を患う対象に投与することができる。たるみの原因は、表情筋の機能低下、表情筋を支えている皮膚の弾力の低下、皮下脂肪の増大等が挙げられ、これらの原因は独立に又は協働して、たるみを引き起こし、外観の老化をもたらす。本発明では、皮膚のたるみを患う対象に投与されるが、このような対象は、たるみの主原因が、皮膚の弾力低下、特に真皮空洞による真皮層の厚さの減少に伴う皮膚の弾力低下であることが好ましい。真皮空洞が、皮膚のたるみの主原因であることを確認するために、真皮空洞化程度を測定することもできる。空洞下程度が高い対象に対し、本発明の皮膚のたるみ又は老化改善剤や、美容方法を適用することが好ましい。真皮空洞化程度の数値から決定された閾値に基づき、閾値を超えた対象を空洞下程度の高い対象と決定することもできる。
　本発明の皮膚のたるみ又は老化改善剤は、経口又は非経口投与など、任意の経路で投与することができるが、皮膚に直接投与する観点から経皮投与が好ましい。経皮投与された脂肪幹細胞誘引剤は、皮膚に存在する毛穴や汗腺などの付属器官を介して浸透することができる。付属器官は、通常真皮層の最深部に達していることから、真皮空洞が存在する場合、その極めて近くに達している。したがって、経皮投与された脂肪幹細胞誘引剤は、付属器官を介して浸透することで作用部位である真皮空洞部に送達することができる。また、付属器官を介して、作用部位である真皮空洞部への浸透を促進するために、皮膚のたるみ又は老化改善剤は、その粘度、表面張力、親水性、疎水性を適宜選択することができる。さらに、真皮空洞への浸透を促進するために、本発明の皮膚のたるみ又は老化改善剤の適用後に、高周波数の振動又は音波を適用することもできる。
　本発明の皮膚のたるみ又は老化改善剤は、化粧品、医薬品、又は医薬部外品に配合することができる。美容の目的では化粧品に配合することが好ましい。配合される化粧品の剤型は任意であり、液体、ゲル、気泡、乳液、クリーム、軟膏、シート等の形態で配合して用いることができる。配合される化粧品、医薬品、又は医薬部外品としては、外用薬用製剤、化粧水、乳液、クリーム、軟膏、ローション、オイル、パック等の基礎化粧料、洗顔料や皮膚洗浄料、除毛剤、脱毛剤、アフターシェーブローション、プレシェーブローション、シェービングクリーム、ファンデーション、口紅、頬紅、アイシャドウ、アイライナー、マスカラ等のメークアップ化粧料、シャンプー、リンス、ヘアートリートメント、プレヘアートリートメント、整髪料、パーマ剤、ヘアートニック、染毛料、育毛・養毛料等の頭髪化粧料、浴用剤など様々な製品に応用できる。
　本発明の別の態様では、本発明は真皮空洞化による皮膚のたるみ又は老化改善剤をスクリーニングする方法に関してもよい。当該スクリーニング方法は、脂肪幹細胞を試験物質の濃度差のある培地中で培養することにより、試験物質の誘引能力を検討することができる。より具体的には、細胞培養細胞が通過できる程度の直径を有する１又は複数の流路を設け、流路の一方の出入り口に細胞培養ウェルを配置し、もう一方に試験物質添加ウェルを配置する構成を取る細胞遊走試験ウェルを用いることができる。流路は一定の孔径を有する膜により置き換えることもできる。スクリーニングに用いる試験物質薬剤は任意の薬剤を用いることができるが、化粧用品の開発のためには、既に安全性が確認できている化粧品素材ライブラリーから試験物質を選択することができる。
　上記スクリーニングにより、得られたカンゾウ抽出物又はローズマリー抽出物は、脂肪幹細胞誘引活性を有しており、脂肪幹細胞誘因剤又は組成物として使用することができる。脂肪幹細胞は、脂肪細胞、骨芽細胞、軟骨細胞、筋細胞、及び神経細胞等の種々の間葉系細胞へと分化することが知られている間葉系幹細胞である（非特許文献１）。この非特許文献１には、脂肪幹細胞由来の軟骨細胞が、関節軟骨疾患、例えば変形性関節症等の治療に用いることができること、脂肪幹細胞由来の骨芽細胞が、骨欠損箇所に適用できること、心筋や血管細胞へと分化することで心機能の改善に寄与することが開示されている。さらに、脂肪幹細胞からの分泌因子により、血管新生の亢進、細胞アポトーシスの減少、及び神経発芽の促進が生じることから、脂肪幹細胞が標的細胞に分化する直接的な再生医療への応用の他に、分泌因子を介した間接的な再生医療への応用が期待されている。したがって、本発明の脂肪幹細胞誘引組成物は、間葉系幹細胞、特に脂肪幹細胞の治療標的となる症状を治療又は改善するために用いることができる。間葉系幹細胞の治療標的となる症状の改善として、発毛促進、創傷治癒、皮膚の再生、筋肉の再生、軟組織の再生、骨の再生、心筋の再生、又は神経の再生が挙げられる。これらうち、脂肪幹細胞と発毛促進との関係については、非特許文献２に、皮膚幹細胞の活性を制御する皮膚Niche細胞として機能することで、毛包の再生に寄与することが明らかになっており、脂肪幹細胞の誘引により発毛促進を可能にすることが開示されている。また、脂肪幹細胞と創傷治癒及び/又は皮膚の再生との関係については、非特許文献３に、脂肪幹細胞と真皮線維芽細胞とが接触することで真皮線維芽細胞の増殖を促すことが開示されており、創傷治癒や皮膚の再生に利用可能であることが知られている。さらに、脂肪幹細胞と筋肉再生との下案啓については、非特許文献４に脂肪幹細胞の移植試験により、コラーゲン６型を標的とする先天性筋ジストロフィーでの治療効果が示されており、脂肪幹細胞は、筋肉再生にも利用可能であることが開示されている。
真皮空洞化の検出
　若齢及び高齢の被験者の女性腹部から皮膚組織切片を取得し、ヘマトキシリン-エオジン染色に供した。ヘマトキシリン・エオジン染色用試薬を、常法に則って行い、染色された組織を顕微鏡下で観察した（図１）。若齢者の皮膚組織切片では、真皮組織と皮下組織との境界が平滑であった一方で、高齢者の皮膚組織切片では真皮組織と皮下組織との境界が乱れており、皮下組織の一部が隆起することで真皮空洞が形成していた。
皮膚のたるみの計測
　ボディマス指数（ＢＭＩ）２５未満の標準体型を有する３０～５０代の３０名の健常女性被験者（国籍：日本国）に対し試験を行った。被験者は、洗顔を行い、標準的な環境下に順応させた。標準光条件下で、デジタルカメラ(Nikon D-100; Nikon Corporation, Tokyo, Japan)で、着席状態で、左右４５°の角度から顔の写真を撮影した。上頬のたるみ重篤度を、写真に基づく６グレードの評価基準に基づく既報の方法（Ezure T, Hosoi J, Amano S, Tsuchiya T. Skin Res Technol. 2009 Aug;15(3):299-305.)に従い評価した。
真皮空洞化の観察
　真皮層の内部構造を、超音波検査法を用いて非侵襲的に観察した。キュートメーターによる計測箇所と同じ箇所を同じ体位で測定した。１３MHzのプローブであるProsound alpha 5 (Aloka Co., Ltd., Tokyo, Japan)を、超音波ゲルの薄層で被膜した皮膚に対して垂直に適用し、そしてBモードを用いて皮膚構造を測定した。Image Jを用い、表皮からの脂肪層までの最短の距離を計測し、正負を逆転させた値（mm）を真皮空洞化の程度とした。
真皮弾性の計測
　真皮の弾性を、吸引と解放の際の皮膚の変形と回復の計測に基づく非侵襲性皮膚弾性計測器(Cutometer MPA 580（登録商標）, Courage & Khazaka, Cologne, Germany)で真皮弾性を評価した。大直径（6mm）の吸引プローブを用いた。被験者をベッドに横たえ、そして真皮弾性の計測の際に重力の影響を低下させるために、４５°の角度で顔を傾けた。計測点は、上頬の中心にセットした。皮膚吸引を４００ｍｂａｒの圧力で２秒間行い、続いて２秒間の弛緩期とし、Ｕｅ（immediate distension of the skin, representing elastic deformation）、Ｕｖ（viscoelastic creep occurring after the elastic deformation）、Ｕｆ（final distension at the end of the vacuum period, representing the total extensibility of the skin）、Ｕｒ（(the immediate retraction of the skin meaning elastic deformation recovery）を皮膚変形曲線から得た。Ｕｖ／Ｕｅ（ratio of viscoelastic to elastic distention）値を計算し、皮膚物性とした(Skin Research and Technology 2010; 16: 332-338, Skin Research and Technology 2012; 18: 259-264)。
　上で決定された空洞化程度、皮膚物性、年齢、及びたるみ程度について、年齢と空洞化程度との関係を図２（Ａ）に示し、空洞化程度と皮膚物性との関係を図２（Ｂ）に示し、空洞化程度とたるみ程度との関係を図２（Ｃ）に示した。図２Ａの年齢と空洞化程度との関係、及び図２（Ｂ）の空洞化程度と皮膚物性との関係について、ピアソン検定を行った。また、図２（Ｃ）の空洞化程度とたるみ程度との関係について、スピアマン検定を行った。
脂肪幹細胞の真皮線維芽細胞活性化試験
　真皮線維芽細胞はLonzaより購入し、10%FBSを含むDMEMにて培養した。脂肪幹細胞（ＡＤＳＣ）はInvitrogenより購入し、MessenPro RS medium培地にて培養した。真皮線維芽細胞を1×104cells/ wellとなるようにトランスウェル(trans well for 6 well plate：Falcon)の上層に播種した。ＡＤＳＣは10μg/mL マイトマイシンで3時間処理後、2×105cells/ wellとなるようにトランスウェル(trans well for 6 well plate)の下層に播種した。24時間後に培地を10%FBS、250uMアスコルビン酸を含むDMEMに交換し、共培養を開始した。7日後に上層をパラホルムアルデヒドにて固定し、ＨＥ染色を行い観察した（図３Ａ）。上層の厚みを計測して示した（図３Ｂ）。対照群としてＡＤＳＣ無しで線維芽細胞単独で培養を行った。ＡＤＳＣ存在下では、真皮線維芽細胞が活性化し、真皮層の厚みが増大した（スチューデントｔ検定：Ｐ＜０．０５）。
　真皮線維芽細胞はLonzaより購入し、10%FBSを含むDMEMにて培養した。脂肪幹細胞（ＡＤＳＣ）はInvitrogenより購入し、MessenPro RS medium培地にて培養した。真皮線維芽細胞を1×105cells/ wellとなるようにトランスウェル(trans well for 6 well plate：Falcon)の上層に播種した。ＡＤＳＣは10μg/mL マイトマイシンで3時間処理後、2×105cells/ wellとなるようにトランスウェル(trans well for 6 well plate)の下層に播種した。24時間後に培地を10%FBS、250uMアスコルビン酸を含むDMEMに交換し、共培養を開始した。４８時間後に細胞を回収し、ＲＴ-ＰＣＲ及びＡｌａｍａｒ　Ｂｌｕｅアッセイに供した。ＲＴ-ＰＣＲは、Light cyclerキット(Roche)を製品説明書に従って用いて逆転写を行い、下記のプライマーを用いて定量した（図４Ｂ）。また、ＡｌａｍａｒＢｌｕｅアッセイでは、AlamarBlue (Bio-Rad Company)を、製品説明書に従って用いて、生細胞数を測定した（図４Ａ）。ＡＤＳＣの存在下では、生細胞数が増加する（スチューデントｔ検定：Ｐ＜０．０５）とともに、コラーゲン（COL1A1）の発現量も増加した（スチューデントｔ検定：Ｐ＜０．０５）。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000001
脂肪幹細胞の誘引試験
　脂肪由来幹細胞（Invitrogen (Carlsbad, CA))を、MessenPro RS培地(DMEM；GIBCO/BRL (Carlsbad, CA))を含むフラスコ中で、３７℃５％ＣＯ2加湿下で培養した。サブコンフルエントになった際にAccutase（PAA (Linz, Austria)）を用いて細胞を回収し、そして２μMのPKH６７（Sigma-Aldrich (St. Louis, MO)）を用いて製品説明書に従い標識化した。３×１０4標識細胞／wellを２４well Fluoroblok plate(Becton Dickinson (Mountain View, CA))の上部ウェルに播種した。６時間のインキュベーション後に、培地をサプリメントを伴わないMessenPro RS培地(DMEM；GIBCO/BRL (Carlsbad, CA))に置き換えた。インキュベーションを１２時間続け、試験物質をFluoroblokの下部ウェルに０．１％の濃度で加えた。８時間後、Fluorobolok膜の下側を、蛍光フィルターを備えた顕微鏡を通して写真を撮り、膜を通して誘引された細胞を、Image J. を用いて孔サイズよりも大きい蛍光領域として計数した。脂肪由来幹細胞の誘引活性は、対照ウェルでの蛍光値と、試験ウェルでの蛍光値との比較により評価した。
　試験抽出物として、多数の化粧品素材をスクリーニングに供したところ、その中で、ローズマリー（Rosemarinus Officinalis)の葉抽出物（丸善製薬、商品コード：6435、抽出溶媒：５０％（w／ｖ）のブチレングリコール）及びカンゾウ（Glycyrrhiza Glabra）根抽出物（丸善製薬、商品コード：9488、抽出溶媒：５０％（w／ｖ）のブチレングリコール）が、優れた脂肪幹細胞誘因活性を有することが示された。ローズマリー抽出物及びカンゾウ抽出物を添加したウェルは、抽出物を伴わず、抽出溶媒のみを含む対照ウェルと比較して有意に高い蛍光を示した（表１、図５Ａ及びＢ、スチューデントｔ検定：Ｐ＜０．０５）。ローズマリー抽出物及びカンゾウ抽出物の場合、その抽出溶媒は、５０％（w／ｖ）のブチレングリコールであり、試験抽出物の代わりにこの溶媒のみを対照ウェルに加えた。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000002

Claims (7)

  1. 　カンゾウ抽出物又はローズマリー抽出物を含む、脂肪幹細胞誘引剤。
  2. 　請求項１に記載の脂肪幹細胞誘引剤を含む、真皮空洞化による皮膚のたるみ又は老化改善剤。
  3. 　請求項１に記載の脂肪幹細胞誘引剤により真皮空洞に誘引された脂肪幹細胞に起因して真皮空洞が真皮構造物により充填される、請求項２に記載の皮膚のたるみ又は老化改善剤。
  4. 　前記誘引された脂肪幹細胞により、真皮線維芽細胞と、当該真皮線維芽細胞から産生される間質成分とを含む、請求項３に記載の皮膚のたるみ又は老化改善剤。
  5. 　請求項１に記載の脂肪幹細胞誘引剤が、付属器官を介して浸透する、請求項２～４のいずれか一項に記載の皮膚のたるみ又は老化改善剤。
  6. 　請求項１に記載の脂肪幹細胞誘引剤が、真皮空洞にて作用する、請求項２～５のいずれか一項に記載の皮膚のたるみ又は老化改善剤。
  7. 　脂肪幹細胞誘引剤を含む真皮空洞化による皮膚のたるみ又は老化改善剤であって、当該脂肪幹細胞誘引剤が脂肪幹細胞を真皮空洞に誘引し、誘引された脂肪幹細胞に起因して真皮空洞が真皮構造物により充填される、前記皮膚のたるみ又は老化改善剤。
PCT/JP2015/072140 2015-08-04 2015-08-04 脂肪幹細胞誘引剤を含む、真皮空洞化による皮膚のたるみ又は老化改善剤 WO2017022091A1 (ja)

Priority Applications (7)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020187002459A KR20180030850A (ko) 2015-08-04 2015-08-04 지방 줄기 세포 유인제를 포함하는, 진피 공동화에 의한 피부의 처짐 또는 노화 개선제
CN201580082119.0A CN107847424A (zh) 2015-08-04 2015-08-04 包含脂肪干细胞诱引剂的、由真皮空洞化引起的皮肤的松弛或老化改善剂
US15/749,949 US10918590B2 (en) 2015-08-04 2015-08-04 Fat stem cell attractant-containing agent for improving skin looseness or aging caused by dermal cavitation
EP15900402.7A EP3332765B1 (en) 2015-08-04 2015-08-04 Fat stem cell attractant-containing agent for improving skin looseness or aging caused by dermal cavitation
RU2018107704A RU2018107704A (ru) 2015-08-04 2015-08-04 Средство, содержащее аттрактант жировых стволовых клеток, для улучшения рыхлости или старения кожи, вызываемых образованием дермальных полостей
PCT/JP2015/072140 WO2017022091A1 (ja) 2015-08-04 2015-08-04 脂肪幹細胞誘引剤を含む、真皮空洞化による皮膚のたるみ又は老化改善剤
JP2017532310A JPWO2017022091A1 (ja) 2015-08-04 2015-08-04 脂肪幹細胞誘引剤を含む、真皮空洞化による皮膚のたるみ又は老化改善剤

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
PCT/JP2015/072140 WO2017022091A1 (ja) 2015-08-04 2015-08-04 脂肪幹細胞誘引剤を含む、真皮空洞化による皮膚のたるみ又は老化改善剤

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2017022091A1 true WO2017022091A1 (ja) 2017-02-09

Family

ID=57942630

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/JP2015/072140 WO2017022091A1 (ja) 2015-08-04 2015-08-04 脂肪幹細胞誘引剤を含む、真皮空洞化による皮膚のたるみ又は老化改善剤

Country Status (7)

Country Link
US (1) US10918590B2 (ja)
EP (1) EP3332765B1 (ja)
JP (1) JPWO2017022091A1 (ja)
KR (1) KR20180030850A (ja)
CN (1) CN107847424A (ja)
RU (1) RU2018107704A (ja)
WO (1) WO2017022091A1 (ja)

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108309924A (zh) * 2018-04-26 2018-07-24 湖南海济药业有限公司 一种调理型胚胎干细胞洗发水
JP2019207232A (ja) * 2018-05-25 2019-12-05 ポーラ化成工業株式会社 低酸素条件下におけるｌｏｘ遺伝子の発現量を指標とするスクリーニング方法、並びにｌｏｘ遺伝子の発現の上昇抑制剤、皮下脂肪細胞の線維化抑制剤及びたるみの改善又は予防剤
JP2020111540A (ja) * 2019-01-12 2020-07-27 株式会社桃谷順天館 植物由来の抽出物によるカリクレイン７前駆体産生促進剤、カリクレイン７活性促進剤、表皮角化細胞増殖剤、角層重層改善剤、ターンオーバー改善剤、皮膚弾力性改善剤又は過角化改善剤
WO2023112718A1 (ja) * 2021-12-17 2023-06-22 株式会社 資生堂 シワの評価方法、シワ評価システム、空洞化の評価方法、空洞化評価システム、コンピュータープログラム、シワの評価を行うための肌のセンシング方法、シワの評価に基づくレコメンデーション方法、および将来的な空洞化の状態および／またはシワの状態の予測方法

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2020045450A1 (ja) * 2018-08-31 2020-03-05 株式会社 資生堂 美容方法

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH11263718A (ja) * 1998-03-16 1999-09-28 Kao Corp 皮膚引き締め剤
JP2003137767A (ja) * 2001-08-21 2003-05-14 Shiseido Co Ltd 表皮細胞におけるラミニン５産生促進剤
JP2013507956A (ja) * 2009-10-23 2013-03-07 アールエヌエル バイオ カンパニー リミテッド 脂肪組織由来成体幹細胞遊走を誘導する方法

Family Cites Families (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2788435B1 (fr) * 1999-01-15 2002-08-02 Oreal Utilisation d'un extrait d'un vegetal du genre rosmarinus dans des compositions destinees a traiter les signes cutanes du vieillissement
TWI332401B (en) 2001-08-21 2010-11-01 Shiseido Co Ltd Materials which are capable of enhancing laminin-5 producing ability in epidermal cell and the use thereof
US20040121031A1 (en) * 2002-12-09 2004-06-24 Muhammed Majeed Novel topical skin care and nutraceutical applications of Glabridin or extracts containing a defined amount (4-90%) of Glabridin
JP2006143671A (ja) 2004-11-22 2006-06-08 Jc Community:Kk 経口用皮膚老化予防・改善剤。
JP2007330178A (ja) 2006-06-16 2007-12-27 International Cosmetics Kk ダイエット食品
JP2009256270A (ja) * 2008-04-18 2009-11-05 Maruzen Pharmaceut Co Ltd インスリン様成長因子−１発現促進剤
ES2959848T3 (es) 2008-06-09 2024-02-28 Otsuka Pharma Co Ltd Composición para uso externo
JP5852773B2 (ja) * 2010-06-01 2016-02-03 ピアス株式会社 骨髄間葉系幹細胞の誘引剤の製造方法、骨髄間葉系幹細胞の誘引方法、及び、骨髄間葉系幹細胞の誘引剤を製造するための使用
JP2013147479A (ja) * 2012-01-23 2013-08-01 Shiseido Co Ltd 幹細胞賦活化剤
US20140004210A1 (en) 2012-06-28 2014-01-02 Shiseido Company, Ltd. Degradation inhibitor of hyaluronic acid, comprising rosemary extract and retinol acetate

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH11263718A (ja) * 1998-03-16 1999-09-28 Kao Corp 皮膚引き締め剤
JP2003137767A (ja) * 2001-08-21 2003-05-14 Shiseido Co Ltd 表皮細胞におけるラミニン５産生促進剤
JP2013507956A (ja) * 2009-10-23 2013-03-07 アールエヌエル バイオ カンパニー リミテッド 脂肪組織由来成体幹細胞遊走を誘導する方法

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
"Antiwrinkle effect of adipose-derived stem cell : Activation of dermal fibroblast by secretory factors", J DERMATOL SCI, vol. 53, no. 2, 2009, pages 96 - 102, XP025815305, ISSN: 0923-1811 *
"Mitame no Anti Aging update 7 Various Injection Therapies aganist Aging Changes on Outer Body : in Main Skin Improvement, Wrinkle Therapy and Hair Growth", ANTI-AGING MEDICINE- JAPANESE SOCIETY OF ANTI-AGING MEDICINE ZASSHI, vol. 10, no. 6, 2014, pages 890 - 895, XP009504778, ISSN: 1880-1579 *
"Research of skin tension around the eyes", FRAGRANCE JOURNAL, vol. 36, no. 11, 2008, pages 33 - 38, XP009504768, ISSN: 0288-9803 *
See also references of EP3332765A4 *

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108309924A (zh) * 2018-04-26 2018-07-24 湖南海济药业有限公司 一种调理型胚胎干细胞洗发水
JP2019207232A (ja) * 2018-05-25 2019-12-05 ポーラ化成工業株式会社 低酸素条件下におけるｌｏｘ遺伝子の発現量を指標とするスクリーニング方法、並びにｌｏｘ遺伝子の発現の上昇抑制剤、皮下脂肪細胞の線維化抑制剤及びたるみの改善又は予防剤
JP7328793B2 (ja) 2018-05-25 2023-08-17 ポーラ化成工業株式会社 低酸素条件下におけるｌｏｘ遺伝子の発現量を指標とするスクリーニング方法、並びにｌｏｘ遺伝子の発現の上昇抑制剤、皮下脂肪細胞の線維化抑制剤及びたるみの改善又は予防剤
JP2020111540A (ja) * 2019-01-12 2020-07-27 株式会社桃谷順天館 植物由来の抽出物によるカリクレイン７前駆体産生促進剤、カリクレイン７活性促進剤、表皮角化細胞増殖剤、角層重層改善剤、ターンオーバー改善剤、皮膚弾力性改善剤又は過角化改善剤
WO2023112718A1 (ja) * 2021-12-17 2023-06-22 株式会社 資生堂 シワの評価方法、シワ評価システム、空洞化の評価方法、空洞化評価システム、コンピュータープログラム、シワの評価を行うための肌のセンシング方法、シワの評価に基づくレコメンデーション方法、および将来的な空洞化の状態および／またはシワの状態の予測方法

Also Published As

Publication number Publication date
RU2018107704A (ru) 2019-09-05
US20180200179A1 (en) 2018-07-19
EP3332765A4 (en) 2020-10-21
EP3332765B1 (en) 2024-06-05
EP3332765A1 (en) 2018-06-13
KR20180030850A (ko) 2018-03-26
RU2018107704A3 (ja) 2019-09-05
JPWO2017022091A1 (ja) 2018-05-24
US10918590B2 (en) 2021-02-16
CN107847424A (zh) 2018-03-27

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US10639264B2 (en) Mesenchymal stem cell extract and its use
WO2017022091A1 (ja) 脂肪幹細胞誘引剤を含む、真皮空洞化による皮膚のたるみ又は老化改善剤
EP3656850A1 (en) Mesenchymal-stem-cell induction agent
JP2017524654A (ja) 育毛を刺激する小サイズの幹細胞の能力および当該幹細胞の使用
CN105030645A (zh) 一种组合物及其制备方法、美容制剂
JP7258749B2 (ja) 抗老化物質のスクリーニング方法
JP6843425B2 (ja) 幹細胞の未分化状態維持剤及び増殖促進剤
TWI674104B (zh) 包含脂肪幹細胞引誘劑之由於真皮空洞化所導致的皮膚鬆弛或老化改善劑
Kumaran et al. Resveratrol‐induced thrombocytopenia: Inadvertent side‐effect of a commonly used antioxidant.
KR20120058864A (ko) 비피더스균 추출물을 함유하는 지방유래 줄기세포의 줄기세포성 증진용 및 피부세포 증식용 조성물
KR20090126692A (ko) 지방세포 분화 촉진용 조성물
CN106456529A (zh) 小尺寸干细胞的美白能力及其用途
JP4599480B2 (ja) 感染免疫機能強化剤、新陳代謝機能促進剤、生体諸機能低下予防改善剤及びこれらを含有する機能食品
JP6649050B2 (ja) 幹細胞の未分化状態維持剤及び増殖促進剤
JP6615589B2 (ja) 幹細胞の未分化状態維持剤及び増殖促進剤
JP6587899B2 (ja) 幹細胞の未分化状態維持剤及び増殖促進剤
KR20120058829A (ko) 세콰이어 캘러스 추출물을 함유하는 지방유래 줄기세포의 줄기세포성 증진용 및 피부세포 증식용 조성물
JP7286131B2 (ja) 糖尿病性潰瘍の治癒促進剤
KR20120058830A (ko) 하이페리쿰 추출물을 함유하는 지방유래 줄기세포의 줄기세포성 증진용 및 피부세포 증식용 조성물
WO2022176174A1 (ja) 免疫細胞活性化剤、抗老化剤、免疫細胞の活性化方法、及び老化を防止又は予防する方法
WO2020230331A1 (ja) Ａｐｊ発現促進剤
JP6844829B2 (ja) 幹細胞の未分化状態維持剤及び増殖促進剤
KR20210152372A (ko) 지방세포 분화 억제제 및 이를 포함하는 조성물
JP2022119185A (ja) 抗光老化のための薬剤及び美容方法，並びに抗光老化剤のスクリーニング方法
TW202042786A (zh) Apj表現促進劑

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 15900402

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2017532310

Country of ref document: JP

Kind code of ref document: A

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 20187002459

Country of ref document: KR

Kind code of ref document: A

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 15749949

Country of ref document: US

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 2018107704

Country of ref document: RU