WO2015182155A1 - 新規乳酸菌及び該乳酸菌を含む組成物 - Google Patents

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WO2015182155A1
WO2015182155A1 PCT/JP2015/002715 JP2015002715W WO2015182155A1 WO 2015182155 A1 WO2015182155 A1 WO 2015182155A1 JP 2015002715 W JP2015002715 W JP 2015002715W WO 2015182155 A1 WO2015182155 A1 WO 2015182155A1
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lactic acid
acid bacterium
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fatty liver
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靖記 米島
景子 久
良重 内堀
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日東薬品工業株式会社
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    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/225—Lactobacillus
    • C12R2001/24—Lactobacillus brevis

Definitions

  • the present invention relates to Lactobacillus brevis having a plurality of functions, in particular, Lactobacillus brevis NTM003 strain deposited under the accession number NITE BP-01634, a composition containing the same, particularly pharmaceuticals and foods Etc.
  • Hyperuricemia refers to a state in which the uric acid level in the blood has increased due to a decrease in uric acid excretion or excessive production of uric acid due to genetic or environmental factors.
  • Hyperuricemia which is representative of gout, is known to cause complications such as kidney damage and urinary calculi.
  • the gout reserve army is said to be 5 million people in Japan, and the peak age of onset is becoming younger from the 50s to the 30s, and there is an interest in prevention and treatment of hyperuricemia. It is growing.
  • Fatty liver is a condition in which fat is excessively accumulated in the liver, and medically refers to a condition in which fatty vacuoles are found in 30% or more of the hepatocytes in the liver.
  • Fatty liver is roughly divided into alcoholic fatty liver and nonalcoholic fatty liver. In Japan, it is said that 1.2 to 36 million people have developed nonalcoholic fatty liver or steatohepatitis. ing. Non-alcoholic fatty liver causes include obesity, diabetes, hyperlipidemia, and nutritional disorders. Fatty liver has few subjective symptoms and has been reported to shift to hepatitis, cirrhosis and liver cancer, so it needs to be dealt with early.
  • alcoholic alcohol and alcohol cessation are most effective in the case of alcoholic fatty liver, and in the case of non-alcoholic fatty liver, it is necessary to improve lifestyle through dietary therapy and exercise therapy. In particular, in the case of non-alcoholic fatty liver caused by diabetes, medication is also required.
  • lifestyle improvement is effective for the prevention and treatment of fatty liver, it is not easy to improve irregular lifestyle, unbalanced diet and lack of exercise. Therefore, there is a need for a safe and burdensome method that can support lifestyle improvement. So far, a prophylactic and / or inhibitor for fatty liver caused by lactic acid bacteria with little concern about side effects has been disclosed (Patent Document 2).
  • the lactic acid bacteria disclosed in the above patent documents are separate lactic acid bacteria each having a function as a serum uric acid level reducing agent and a fatty liver preventive and / or inhibitory agent.
  • a lactic acid bacterium having a function of improving both has not been reported yet.
  • an object of the present invention is to provide a lactic acid bacterium that can be used for foods and pharmaceuticals, which can prevent or treat hyperuricemia, fatty liver, and lifestyle-related diseases.
  • an object of the present invention is to provide a composition for preventing and / or treating hyperuricemia, fatty liver and lifestyle-related diseases, particularly a pharmaceutical or a food.
  • the present inventors have conducted intensive research and selected lactic acid bacteria with remarkably high nucleoside resolution.
  • the selected lactic acid bacteria were orally administered to rats reared with a purine-containing feed, and the influence of the serum uric acid level of the rats was observed.
  • the effect of blood uric acid level was observed when a capsule containing lactic acid bacteria was ingested by a human (6.5 mg / dL or higher) having a relatively high blood uric acid level.
  • a novel lactic acid bacterium, Lactobacillus brevis NTM003 that significantly suppresses the increase in uric acid levels was found.
  • the inventors took the lactic acid bacterium with an obese model mouse together with a high-fat diet, measured the liver weight and the amount of lipid in the liver after 42 days, and compared with the group not administered with the lactic acid bacterium. The group found that the liver weight was significantly less and the increase in lipid content in the liver was also suppressed.
  • the present invention is as follows: [1] A lactic acid bacterium (NITE BP-01634) which is Lactobacillus brevis NTM003 strain or a treated product thereof. [2] A composition for suppressing or improving blood uric acid levels, comprising the lactic acid bacterium according to [1] above or a treated product thereof as an active ingredient. [3] A composition for suppressing or improving fatty liver, comprising as an active ingredient the lactic acid bacterium according to [1] or a treated product thereof. [4] A composition for suppressing or improving lifestyle-related diseases comprising the lactic acid bacterium according to [1] or a treated product thereof as an active ingredient.
  • composition according to any one of [2] to [4] above which is a pharmaceutical product.
  • composition according to any one of [2] to [4] above which is a food.
  • An increase in blood uric acid level, fatty liver, or Lactobacillus brevis (NITE BP-01634) which is a strain of Lactobacillus brevis NTM003 or an effective amount thereof, How to control or improve lifestyle-related diseases.
  • Lactobacillus brevis NTM003 strain lactic acid bacterium (NITE BP-01634) or a treated product thereof, 1 ⁇ 10 4 to 1 ⁇ 10 12 cells per day or equivalent, blood uric acid level comprising orally administering to a patient having a high risk, a fatty liver patient, or a lifestyle-related disease patient.
  • Lactobacillus brevis NTM003 strain (NITE BP-01634) (hereinafter referred to as the lactic acid bacterium of the present invention) is a previously unknown lactic acid bacterium that has both an inhibitory or improving effect on blood uric acid levels and an inhibitory or improving effect on fatty liver. I found out.
  • the lactic acid bacteria of the present invention are used for the improvement and prevention of lifestyle-related diseases based on the functions described above, and particularly for the purpose of improving hyperuricemia, which causes gout and kidney damage when advanced, and the improvement of fatty liver, which causes hepatitis, etc. Since it can be used in the field of food and the like, it is extremely useful industrially.
  • the nucleoside degradation by NTM003 strain is shown.
  • the time-dependent change of nucleoside degradation by NTM003 strain is shown.
  • the change of the serum uric acid level in a hyperuricemia model rat is shown.
  • the blood uric acid level before and after taking is shown about the human test which ingested NTM003 strain.
  • the uric acid level in the human before and after taking a human with a relatively high pre-dose uric acid level (6.5 mg / dL or higher) for the human test ingesting the NTM003 strain is shown.
  • the body weight change up to the 42nd day when high fat diet and lactic acid bacteria were given to obese model mice is shown.
  • the liver weight and the amount of lipid in the liver are shown 42 days after a high fat diet and lactic acid bacteria were given to an obese model mouse.
  • the present invention provides Lactobacillus brevis NTM003 strain which is effective in preventing and improving hyperuricemia and fatty liver.
  • the lactic acid bacterium of the present invention was deposited on June 11, 2013 to the Patent Microorganism Deposit Center, National Institute of Technology and Evaluation, which has an address in 2-5-8, Kazusa Kamafoot, Kisarazu City, Chiba Prefecture, Japan.
  • the accession number of NTM003 stock is NITE BP-01634.
  • the lactic acid bacteria of the present invention can be cultured according to a conventional method of lactic acid bacteria culture.
  • the medium used for the culture is not particularly limited as long as it can grow the lactic acid bacteria of the present invention, but can be cultured using a medium for lactic acid bacteria culture such as MRS medium (solid medium, liquid medium, etc.). it can.
  • the medium contains various vitamins as necessary (including vitamin A, vitamin B1, vitamin B2, vitamin B6, vitamin C, vitamin D, vitamin E, etc., or derivatives thereof), various amino acids (natural amino acids or synthetics) Amino acids are also included), nucleobases (purines, pyrimidines), abasic substances (MgSO 4 , MnSO 4 , FeSO 4 , NaCl, etc.) can be added.
  • the culture temperature, the culture period, and the pH of the medium can be appropriately adjusted.
  • the culture temperature is usually 30 to 37 ° C., preferably 35 to 37 ° C.
  • the culture period is usually 16 hours to 3 days, preferably 1 to 2 days.
  • the pH of the medium is usually pH 3 to 8, preferably pH 4 to 7.
  • the culture may be stationary culture, or may be stirring culture when the medium is a liquid medium.
  • the culture may be aerobic or anaerobic.
  • the lactic acid bacteria of the present invention were separated from rape blossom pickles.
  • the mycological properties of the lactic acid bacteria of the present invention are shown below.
  • Table 1 shows the sugar utilization of the lactic acid bacteria of the present invention.
  • the lactic acid bacterium of the present invention has 16S rRNA represented by SEQ ID NO: 1. Based on the above properties and characteristics, the lactic acid strain of the present invention can be identified as a strain belonging to Lactobacillus brevis in light of Bergey's Manual of Systematic Bacteriology.
  • the lactic acid bacteria of the present invention converted inosine and guanosine, which are purines in the substrate solution, into hypoxanthine and guanine, which are different purines, respectively.
  • Purine is a compound having a purine skeleton, which is a purine nucleotide (adenylic acid, deoxyadenylic acid, guanylic acid, deoxyguanylic acid), purine nucleoside (adenosine, deoxyadenosine, guanosine, deoxyguanosine), purine base (adenine, Guanine), oligonucleotides and polynucleotides containing purine bases, and the like.
  • Purine bases constitute nucleic acids as well as various biological components such as ATP, GTP, cAMP, cGMP, coenzyme A, FAD, and NAD. Included in purine bodies.
  • Unnecessary purines in the body are eventually metabolized to uric acid and excreted.
  • the metabolic pathway from purine to uric acid is widely known.
  • AMP is converted to adenosine by 5′-nucleosidase, and adenosine is metabolized to hypoxanthine via inosine.
  • GMP is converted to guanosine by 5′-nucleosidase and then metabolized to guanine.
  • hypoxanthine is metabolized to xanthine by xanthine oxidase and guanine by guanine deaminase, and finally xanthine is metabolized to uric acid by xanthine oxidase. Therefore, one of the effective means for suppressing or improving the increase in blood uric acid level is to suppress the amount of purines that are absorbed into the living body through the intestinal tract. It is known that it becomes higher in the order of guanine and guanosine, and in the order of hypoxanthine, inosine and adenosine.
  • the lactic acid bacteria of the present invention are used for the purpose of suppressing the amount of purine absorbed by converting inosine and guanosine, which have high absorption efficiency, into hypoxanthine and guanine, which are purine bodies having low absorption efficiency.
  • the increase in rat serum uric acid levels was suppressed.
  • the lactic acid bacterium of the present invention is a novel lactic acid bacterium having an effect of suppressing or improving the blood uric acid level.
  • the lactic acid bacterium of the present invention when the lactic acid bacterium of the present invention was orally ingested into an obese / diabetic model mouse, the increase in the liver weight and lipid content in the mouse was suppressed. Therefore, the lactic acid bacterium of the present invention is a novel lactic acid bacterium having an effect of suppressing or improving fatty liver.
  • the lactic acid bacterium of the present invention Based on the effect of suppressing / improving the increase in blood uric acid level and the effect of suppressing / improving fatty liver by the lactic acid bacterium of the present invention, the lactic acid bacterium of the present invention or a treated product thereof is contained as an active ingredient.
  • the present invention provides a composition for suppressing / ameliorating fatty liver (hereinafter, the composition of the present invention).
  • the composition of the present invention can also be applied to the suppression / improvement of lifestyle-related diseases.
  • lifestyle-related diseases refer to a group of diseases in which lifestyle habits such as eating habits, exercise habits, rest, smoking, and alcohol consumption are related to the onset and progression thereof, hyperuricemia, adult obesity, childhood obesity, malnutrition Infectious disease, anorexia, gout, hypertension, arteriosclerosis, kidney stones, myocardial infarction, angina, gastric ulcer, kidney disease, fatty liver, hepatitis, cirrhosis, liver cancer, lung cancer, stroke, cerebral infarction, etc. It is.
  • lifestyle habits such as eating habits, exercise habits, rest, smoking, and alcohol consumption are related to the onset and progression thereof, hyperuricemia, adult obesity, childhood obesity, malnutrition Infectious disease, anorexia, gout, hypertension, arteriosclerosis, kidney stones, myocardial infarction, angina, gastric ulcer, kidney disease, fatty liver, hepatitis, cirrhosis, liver cancer, lung cancer, stroke, cerebral infarction, etc. It is.
  • the active ingredient contained in the composition of the present invention the lactic acid bacteria of the present invention isolated from the culture by means of collection such as centrifugation can be used.
  • the microbial cell processed material of this invention can also be used as an active ingredient contained in the composition of this invention.
  • the microbial cell processed product of the present invention includes the lactic acid bacterium of the present invention that has been subjected to treatments such as concentration, drying, and freeze-drying.
  • not only the separated microbial cells, but also crushed cells and crushed liquids obtained by removing the microbial cells by centrifugation after disrupting the microbial cells can be used as the treated microbial cells of the present invention.
  • the form of the culture not only a culture cultivated according to the above-mentioned culture conditions or a culture using a medium generally used for culturing lactic acid bacteria, but also dairy products such as cheese, fermented milk, lactic acid bacteria beverages, etc.
  • the lactic acid bacteria of the present invention can be isolated using known means.
  • composition of the present invention contains the lactic acid bacterium of the present invention as an active ingredient, and an excipient, a binder, a disintegrant, a lubricant, etc. are added, and an appropriate form (solid, liquid, etc.) is used depending on the application. ) Can be selected and prepared.
  • excipients include animal and vegetable oils such as soybean oil, safflower oil, olive oil, germ oil, sunflower oil, beef tallow and sardine oil, polyhydric alcohols such as polyethylene glycol, propylene glycol, glycerin and sorbitol, sorbitan fatty acid esters, Surfactants such as sucrose fatty acid ester, glycerin fatty acid ester, polyglycerin fatty acid ester, purified water, lactose, starch, crystalline cellulose, D-mannitol, lecithin, gum arabic, sorbitol solution, sugar solution and the like can be mentioned.
  • animal and vegetable oils such as soybean oil, safflower oil, olive oil, germ oil, sunflower oil, beef tallow and sardine oil
  • polyhydric alcohols such as polyethylene glycol, propylene glycol, glycerin and sorbitol, sorbitan fatty acid esters
  • Surfactants such as sucrose fatty
  • binder examples include hydroxypropylmethylcellulose, hydroxypropylcellulose, gelatin, pregelatinized starch, polyvinylpyrrolidone, polyvinyl alcohol and the like.
  • disintegrant examples include carmellose calcium, carmellose sodium, croscarmellose sodium, crospovidone, low-substituted hydroxypropylcellulose, corn starch and the like.
  • lubricant examples include talc, hydrogenated vegetable oil, waxes, light anhydrous silicic acid and derivatives thereof, stearic acid, magnesium stearate, calcium stearate, aluminum stearate and the like.
  • composition of the present invention may further contain sweeteners, colorants, pH adjusters, fragrances, various amino acids, and the like. If it is solid, it may be coated by a known method. If in liquid form, it may be dissolved or suspended in water or other suitable medium upon ingestion.
  • composition of the present invention is not limited to these, but is provided as, for example, pharmaceuticals, foods, feeds and the like.
  • the dosage form of the pharmaceutical of the present invention includes powders, granules, pills, soft capsules, hard capsules, tablets, chewable tablets, quick-disintegrating tablets, A syrup, a liquid agent, a suspension agent, etc. are mentioned. These preparations are prepared according to a conventional method.
  • the medicament of the present invention for oral administration includes solid or liquid dosage forms, specifically tablets (including sugar-coated tablets and film-coated tablets), pills, granules, powders, capsules (soft capsules). ), Syrup, emulsion, suspension and the like.
  • a composition is produced by a known method and may contain a carrier, a diluent or an excipient usually used in the pharmaceutical field.
  • the carrier and excipient for tablets for example, lactose, starch, sucrose, and magnesium stearate are used.
  • the pharmaceutical product of the present invention for parenteral administration for example, injections, suppositories and the like are used.
  • a method for preparing the injection it can be prepared, for example, by suspending or emulsifying the lactic acid bacterium of the present invention or a treated product thereof in a sterile aqueous liquid or oily liquid usually used for injection.
  • aqueous liquid for injection for example, isotonic solution containing physiological saline, glucose and other adjuvants, and the like are used.
  • the oily liquid for example, sesame oil, soybean oil and the like are used.
  • the suppository used for rectal administration can be prepared by mixing the lactic acid bacterium of the present invention or a treated product thereof with a normal suppository base.
  • the subject of administration of the pharmaceutical of the present invention includes humans or other warm-blooded animals (eg, mice, rats, rabbits, sheep, pigs, cows, cats, dogs, monkeys, birds, etc.).
  • warm-blooded animals eg, mice, rats, rabbits, sheep, pigs, cows, cats, dogs, monkeys, birds, etc.
  • the dose of the pharmaceutical agent of the present invention varies depending on the administration subject, target disease, symptom, administration route, etc., but for example, when used for suppressing / ameliorating hyperuricemia in adults, Alternatively, the processed bacterial cell product as a daily dose is usually 1 ⁇ 10 4 to 1 ⁇ 10 12 cells, preferably 1 ⁇ 10 6 to 1 ⁇ 10 11 cells, more preferably 1 ⁇ 10 8 to 1 ⁇ 10 11 cells, or equivalents thereof, can be administered orally or parenterally. Administration may be divided into multiple times per day. If symptoms are particularly severe, the dose may be increased according to the symptoms. When the pharmaceutical of the present invention is administered for the suppression / improvement of fatty liver in adults or the suppression / improvement of lifestyle-related diseases, the same dosage, administration route and administration days as described above may be used.
  • examples of the form of the food of the present invention include supplements (powder, granules, soft capsules, hard capsules, tablets, chewable tablets, quick-disintegrating tablets, Syrups, liquids, etc.), beverages (tea, carbonated beverages, lactic acid beverages, sports drinks, etc.), confectionery (gummy, jelly, gum, chocolate, cookies, candy, etc.), oils, oils and fats foods (mayonnaise, dressing, butter, cream, Margarine, etc.).
  • the above foods include various nutrients, various vitamins (vitamin A, vitamin B1, vitamin B2, vitamin B6, vitamin C, vitamin D, vitamin E, vitamin K, etc.) and various minerals (magnesium, zinc, Iron, sodium, potassium, selenium, etc.), dietary fiber, dispersants, emulsifiers and other stabilizers, sweeteners, taste ingredients (citric acid, malic acid, etc.), flavors, royal jelly, propolis, agarics, etc. it can.
  • the daily intake of the food of the present invention varies depending on the subject to be ingested, the target disease, symptoms and the like, but for example, when ingested to suppress / improve hyperuricemia in adults,
  • the daily intake of lactic acid bacteria or a treated product thereof is usually 1 ⁇ 10 4 to 1 ⁇ 10 12 cells, preferably 1 ⁇ 10 6 to 1 ⁇ 10 11 cells, more preferably 1 ⁇ 10 8 to 1 ⁇ 10 11 cells, or equivalent thereof, can be taken orally. Ingestion may be divided into multiple times per day. If symptoms are particularly severe, the dose may be increased according to the symptoms.
  • the intake, intake route, and intake days as described above may be used.
  • each calibration curve was prepared and the nucleic acid concentration contained in the reaction solution was determined. The result is shown in FIG. Inosine and guanosine were not detected after 1 hour reaction, but hypoxanthine and guanine were detected. Furthermore, the time course of the NTM003 strain was examined. The amount of lactic acid bacteria was the same as the above sample solution, and the substrate solution was increased to 5 mL. While stirring the reaction solution in an anaerobic chamber at 37 ° C., the reaction solution was collected every 10 minutes and analyzed by HPLC. The results are shown in FIG. The increase in the product accompanying the decrease in the substrate was confirmed.
  • Example 2 In vivo test on uric acid level reducing action of lactic acid bacteria (Production Example 1: Preparation of lactic acid bacteria powder and preparation of test solution)
  • the NTM003 strain was cultured at 37 ° C. in 600 L of MRS medium (manufactured by BD) or medium having the same composition as MRS medium, collected by centrifugation, and lyophilized.
  • the lyophilized cells were pulverized with a pulverizer and then mixed with potato starch to obtain a powder having a constant concentration.
  • lactic acid bacteria powder NTM003 strain
  • Japanese Pharmacopoeia water for injection 551 ⁇ 10 9 cells / mL (prepared at the time of use).
  • Rats Rats (Wister SPF, male, 7 weeks old) were used. An aluminum wire mesh bottom cage was used for breeding, and one rat was housed per cage. The lighting time was 12 hours / day (7-19 o'clock).
  • Quarantine and acclimatization The experimental animals were acclimatized for 7 days after being brought in. When the animals were obtained, the health condition was confirmed.
  • the rats were divided into groups as shown in Table 2, and potassium oxonate mixed diet (control group) and potassium oxonate + RNA mixed diet (negative control group, lactic acid bacteria group) were allowed to freely ingest rats for 8 days with a feeder.
  • control group and negative control group Japanese Pharmacopoeia water for injection once a day at 1 mL / body is forcibly administered using a gastric tube.
  • lactic acid bacteria group the above test solution is once a day at 1 mL / body.
  • the blood sampling frequency is 5 days (1 hour after administration of test solution) and 8 days (1 hour after administration of test solution) before the start of free intake of mixed food.
  • the blood is left at room temperature for 30 minutes or more and then centrifuged. Serum was collected. Serum was stored frozen. Serum uric acid concentration was measured using Uric acid C-Test Wako (Wako Pure Chemical Industries). (Examination results) There was no abnormality in the general condition throughout the 9-day observation period. All groups showed steady weight gain. There was no difference in food intake between the control group, negative control group, and lactic acid bacteria group. The results of serum uric acid levels are shown in FIG. The increase in serum uric acid level was suppressed in the lactic acid bacteria group compared to the negative control group.
  • Example 3 Human test on uric acid level reducing action of lactic acid bacteria (Preparation of test substance)
  • the lactic acid bacteria powder prepared in Production Example 1 of Example 2 was packed into a gelatin hard food capsule so as to contain 2 ⁇ 10 10 CFU lactic acid bacteria per capsule, and used as a test substance.
  • Subjects 18 men and women of adults (20s-60s) (this study) Subjects were allowed to take 1 capsule of the test substance per day for 1 month, and blood was collected before and after ingestion. The blood collected was measured for blood uric acid level at a clinical laboratory.
  • FIG. 5 shows the results of only subjects whose uric acid level is relatively high (6.5 mg / dL or more) before the start of intake.
  • the results of subjects with relatively high uric acid levels there was a significant difference between the average value before and after ingestion with P value ⁇ 0.05. That is, the uric acid level of humans with normal uric acid levels does not show a tendency to change, but in the case of humans with relatively high uric acid levels, hyperuricemia could be improved by ingesting lactic acid bacteria powder.
  • KKAy mice which are obesity / diabetes model mice.
  • KKAy mice (KKAy / TaJcL, male, 4 weeks old used) were acclimated for 1 week with commercially available normal diet (ND), and then divided into 2 groups as shown in Table 3.
  • HFD60 was purchased from Oriental Bio. HFD60 improved feed was prepared by Oriental Bio according to the composition of Table 4.
  • a test substance starch and NMT003 bacterial powder were used.
  • NTM003 bacterial powder a bacterial powder obtained by adjusting the concentration of the lactic acid bacterial powder prepared in Production Example 1 of Example 2 with starch to 2 ⁇ 10 11 CFU / g was used.
  • a feed and a test substance to be freely ingested by the first group and the second group of the test group were prepared by kneading each material at a ratio shown in Table 3.
  • the body weight of KKAy mice was measured every week and dissected on the 42nd day to measure organ weight, blood biochemical examination (cholesterol, neutral fat, free fatty acid), and stool water content.
  • the change in body weight is shown in FIG. 6, and the biochemical examination and the like on the 42nd day are shown in Table 5.
  • the liver weight and the amount of lipid in the liver are also shown in FIG.
  • the second group ingesting lactic acid bacteria of the NTM003 strain as the test substance has a significantly lighter liver weight than the first group, and the lipid amount in the liver is also low. , NTM003 strain was observed to inhibit fatty liver.
  • Lactobacillus brevis (Lactobacillus brevis) NTM003 strain (NITE BP-01634) is a novel lactic acid bacterium having both a high uric acid level improving action and a fatty liver inhibiting action.
  • the present invention has found a novel lactic acid strain and revealed that the lactic acid strain has a plurality of functions for improving hyperuricemia and fatty liver.
  • the composition containing the lactic acid bacterium and a treated product thereof can be applied to various fields such as pharmaceuticals and foods, and the present invention is extremely useful industrially.
  • This application is based on Japanese Patent Application No. 2014-110912 filed in Japan (filing date: May 29, 2014), the contents of which are incorporated in full herein.

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Abstract

　本発明は高尿酸血症や脂肪肝、生活習慣病を改善する乳酸菌とその乳酸菌を含む組成物を提供する。

Description

新規乳酸菌及び該乳酸菌を含む組成物
　本発明は、複数の機能を持つラクトバチルス・ブレビス（Lactobacillus brevis）、特に受託番号NITE BP-01634で寄託されたラクトバチルス・ブレビス（Lactobacillus brevis）NTM003株、それを含む組成物、特に医薬品、食品等に関する。
　高尿酸血症は、遺伝的要因や環境的要因により、尿酸排泄の低下や尿酸産生が過剰になることにより血液中の尿酸値が高値になった状態をいう。高尿酸血症は、痛風を代表として、腎障害や尿路結石等の合併症を引き起こすことが知られている。現在、痛風予備軍は日本全国に500万人ともいわれ、発症年齢のピークも従来の50歳代から30歳代へと若年化が進んでおり、高尿酸血症の予防と治療への関心が高まっている。
　高尿酸血症の予防および治療は生活指導（肥満の解消、食事療法、アルコール摂取制限、過度な運動を避ける、ストレス解消）と投薬療法の組み合わせで血中の尿酸値をコントロールすることによって行われる。生活指導による生活習慣の改善は高尿酸血症を改善する効果が得られるが、生活習慣を長期にわたりコントロールすることは容易ではない。投薬療法を必要とする場合は、医師により血中の尿酸値をコントロールすることになるが、投薬の必要までには至っていない患者の症状を生活指導で改善する場合は、生活指導の補助的方法として、プリン体を分解する乳酸菌、酵母などの微生物を経口的に患者に摂取させることによって腸管内でプリン体を分解し、体内への吸収を減少させる方法が報告されている（特許文献１）。乳酸菌は古くからヨーグルト、漬物などの食品から、医薬品まで広範に利用されている微生物であり、長期に亘り摂取した場合でも副作用の懸念が小さいことから、乳酸菌の摂取は高尿酸血症の予防または治療に有用な方法となりうる。
　また、脂肪肝は肝臓中に脂肪が過剰に蓄積した状態であり、医学的には肝臓内の肝細胞の30％以上に脂肪空胞が認められる状態を指す。脂肪肝はアルコール性脂肪肝と非アルコール性脂肪肝に大別され、日本においては、１，２００～３，６００万人が非アルコール性の脂肪肝または脂肪性肝炎を発症していると言われている。非アルコール性脂肪肝の原因としては、肥満、糖尿病、高脂血症、栄養障害などが挙げられる。脂肪肝は自覚症状がほとんどなく、肝炎、肝硬変および肝臓がんに移行することが報告されているため、早期に対処することが必要となる。
　脂肪肝の予防および治療は、アルコール性脂肪肝の場合は節酒、禁酒が最も有効であり、非アルコール性脂肪肝の場合は、食事療法や運動療法等による生活習慣の改善が必要である。特に、糖尿病が原因の非アルコール性脂肪肝の場合は投薬療法も必要となる。生活習慣の改善は脂肪肝の予防と治療に有効であるが、不規則な生活習慣、偏食や運動不足の状態を改善することは容易ではない。そのため、生活習慣の改善をサポートできる安全で負担のない方法が求められる。これまでに副作用の懸念の少ない乳酸菌による脂肪肝の予防及び／又は抑制剤が開示されている（特許文献２）。
　しかし、上記の特許文献にて開示されている乳酸菌は、それぞれ血清尿酸値低減剤、脂肪肝の予防及び／又は抑制剤としての機能を有する別々の乳酸菌であり、高尿酸血症と脂肪肝の両方を改善する機能を併せもった乳酸菌は未だ報告されていない。
WO2004/112809 特開2011-201801号公報
　本発明の目的は、上記状況を鑑み、高尿酸血症および脂肪肝、さらには生活習慣病を予防又は治療可能な、食品や医薬品に使用できる乳酸菌を提供することである。また同時に、本発明の目的は、高尿酸血症、脂肪肝および生活習慣病の予防及び／又は治療用の組成物、特に医薬品または食品を提供することである。
　本発明者らは、上記課題を解決すべく、鋭意研究を行い、ヌクレオシド分解能が顕著に高い乳酸菌を選抜した。選抜した乳酸菌をプリン体含有飼料で飼育したラットに経口投与し、該ラットの血清尿酸値の影響を観察した。また、血中尿酸値の比較的高いヒト（6.5mg/dL以上）に乳酸菌を含むカプセルを摂取したときの血中尿酸値の影響を観察した。その結果、尿酸値の上昇を有意に抑える新規乳酸菌Lactobacillus brevis NTM003を見出した。更に発明者らは、上記乳酸菌を肥満モデルマウスに高脂肪食と共に摂取させ、42日後の肝臓重量と肝臓中脂質量を測定したところ、上記乳酸菌を投与していない群と比較して、乳酸菌投与群は、有意に肝臓重量が少なく、肝臓中脂質量の上昇も抑制されることを見出した。
　以上の知見に基づき、本発明が完成された。
　即ち、本発明は下記のとおりである： 
［１］ラクトバチルス・ブレビス（Lactobacillus brevis）NTM003株である乳酸菌(NITE BP-01634)またはその菌体処理物。
［２］上記［１］に記載の乳酸菌またはその菌体処理物を有効成分として含む、血中尿酸値上昇抑制または改善用組成物。
［３］上記［１］に記載の乳酸菌またはその菌体処理物を有効成分として含む、脂肪肝抑制または改善用組成物。
［４］上記［１］に記載の乳酸菌またはその菌体処理物を有効成分として含む、生活習慣病抑制または改善用組成物。
［５］医薬品である、上記［２］～［４］のいずれか１つに記載の組成物。
［６］食品である、上記［２］～［４］のいずれか１つに記載の組成物。
［７］ラクトバチルス・ブレビス（Lactobacillus brevis）NTM003株である乳酸菌(NITE BP-01634)またはその菌体処理物の有効量を対象に投与することを含む、血中尿酸値の上昇、脂肪肝または生活習慣病の抑制または改善方法。
［８］ラクトバチルス・ブレビス（Lactobacillus brevis）NTM003株である乳酸菌(NITE BP-01634)またはその菌体処理物を1日当たり1×１０４～1×１０１２cellsまたはその相当量、血中尿酸値が高い患者、脂肪肝患者または生活習慣病患者に経口投与することを含む、上記［７］に記載の方法。
　本発明において、Lactobacillus brevis NTM003株（NITE BP-01634）（以下、本発明の乳酸菌）は血中尿酸値上昇抑制または改善作用と脂肪肝抑制または改善作用を併せ持つ従来知られていなかった乳酸菌であることを見出した。本発明の乳酸菌は、前記の機能に基づき、生活習慣病の改善や予防に利用され、特に進行すると痛風や腎障害を引き起こす高尿酸血症や、肝炎等を引き起こす脂肪肝の改善を目的として医薬品、食品等の分野に使用できることから、産業上極めて有用である。
NTM003株によるヌクレオシド分解を示す。 NTM003株によるヌクレオシド分解の経時変化を示す。Ino:イノシン、Hx:ヒポキサンチン、Guo:グアノシン、G:グアニン 高尿酸血症モデルラットでの血清中尿酸値の変化を示す。 NTM003株を摂取させたヒト試験について服用前後の血中尿酸値を示す。 NTM003株を摂取させたヒト試験について服用前尿酸値の比較的高い（6.5mg/dL以上）ヒトの服用前後の血中尿酸値を示す。 肥満モデルマウスに高脂肪食及び乳酸菌を与えた42日目までの体重変化を示す。 肥満モデルマウスに高脂肪食及び乳酸菌を与えた42日後の肝臓重量と肝臓中脂質量を示す。
　以下、本発明の詳細を説明する。
　本発明は、高尿酸血症および脂肪肝の予防や改善効果のあるラクトバチルス・ブレビス（Lactobacillus brevis）NTM003株を提供する。本発明の乳酸菌は、日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２－５－８に住所を有する、独立行政法人　製品評価技術基盤機構　特許微生物寄託センターに２０１３年６月１１日に寄託された。NTM003株の受託番号は、NITE BP-01634である。
　本発明の乳酸菌は、乳酸菌培養の常法に従って培養することができる。培養に用いる培地としては、本発明の乳酸菌が生育可能な培地であれば特に制限がないが、MRS培地等の乳酸菌培養用の培地（固形培地、又は液体培地等）を用いて培養することができる。当該培地には、必要に応じて各種ビタミン類（ビタミンA、ビタミンB1、ビタミンB2、ビタミンB6、ビタミンC、ビタミンD、ビタミンE等、又はこれらの誘導体も含む）、各種アミノ酸（天然アミノ酸又は合成アミノ酸も含む）、核酸塩基（プリン、ピリミジン）、無塩基類（MgSO4、MnSO4、FeSO4、NaCl等）等を添加することができる。培養条件としては、培養温度、培養期間、培地のpHを適宜調整することができる。例えば、培養温度としては、通常、３０～３７℃、好ましくは３５～３７℃が挙げられる。培養期間としては、通常、１６時間～３日間、好ましくは１～２日間が挙げられる。培地のｐHとしては、通常、ｐH３～８、好ましくはｐH４～７が挙げられる。また、培養は静置培養であってもよいし、培地が液体培地の場合は、撹拌培養であってもよい。また、培養は、好気的でも嫌気的でもよい。
　本発明の乳酸菌は、菜の花漬けから分離した。
　以下に本発明の乳酸菌の菌学的性質を示す。
（１）細胞形態
　桿菌
（２）運動性
　なし
（３）芽胞の形成
　形成しない
（４）寒天培地上でのコロニーの肉眼的特徴
　MRS寒天培地上において、円形で白色のコロニーを形成
（５）グラム染色性
　陽性
（６）生育温度
　３０～３７℃で良好に生育
　表１に本発明の乳酸菌の糖資化性について示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000001
　さらに、本発明の乳酸菌は配列番号：１に示される１６Ｓ　ｒＲＮＡを有する。以上の諸性質および特徴から、バージェイズ・マニュアル・オブ・システマティック・バクテリオロジー（Bergey’s Manual of Systematic Bacteriology）に照らし、本発明の乳酸菌株はラクトバチルス　ブレビス(Lactobacillus brevis)に属する菌株として同定できる。
　後述する実施例の通り、本発明の乳酸菌は、基質溶液中のプリン体であるイノシンとグアノシンをそれぞれ、別のプリン体であるヒポキサンチンとグアニンに変換した。プリン体とは、プリン骨格を有する化合物であり、プリンヌクレオチド（アデニル酸、デオキシアデニル酸、グアニル酸、デオキシグアニル酸）、プリンヌクレオシド（アデノシン、デオキシアデノシン、グアノシン、デオキシグアノシン）、プリン塩基（アデニン、グアニン）、プリン塩基を含むオリゴヌクレオチド及びポリヌクレオチドなどが含まれる。また、プリン塩基は、核酸を構成するほか、ATP、GTP、cAMP、cGMP、補酵素A、FAD、NAD等の多様な生体成分を構成し、プリン骨格を有する限り、このような生体成分も全てプリン体に含まれる。
　生体内における不要なプリン体は、最終的に尿酸に代謝され、排泄される。プリン体が尿酸まで至る代謝経路は広く知られており、AMPは５’－ヌクレオシダーゼによってアデノシンとなり、アデノシンはイノシンを経てヒポキサンチンに代謝される。また、GMPは５’－ヌクレオシダーゼによってグアノシンとなった後、グアニンに代謝される。さらに、ヒポキサンチンはキサンチンオキシダーゼによって、またグアニンはグアニンデアミナーゼによって、いずれもキサンチンに代謝され、最終的にキサンチンはキサンチンオキシダーゼによって尿酸に代謝される。従って、血中尿酸値の上昇を抑制または改善するための有効な手段の一つは、腸管を通じて生体内に吸収されるプリン体の量を抑制することであるが、その吸収効率は、キサンチン、グアニン、グアノシンの順に、また、ヒポキサンチン、イノシン、アデノシンの順に高くなることが知られている。
　そこで、後述する実施例の通り、吸収効率の高いイノシンとグアノシンを吸収効率の低いプリン体であるヒポキサンチンとグアニンに変換することによってプリン体の吸収量を抑制する目的で、本発明の乳酸菌をラットに経口摂取させたところ、ラットの血清中尿酸値の上昇が抑制された。さらに別の実施例において、本発明の乳酸菌を経口摂取した被験者のうち、値が高い被験者の血中尿酸値が有意に減少した。従って、本発明の乳酸菌は、血中尿酸値の上昇抑制または改善効果を有する新規乳酸菌である。
　また、後述する別の実施例の通り、本発明の乳酸菌を肥満・糖尿病モデルマウスに経口摂取させることによって、マウスの肝臓重量と肝臓中脂質量の上昇が抑制された。従って、本発明の乳酸菌は、脂肪肝の抑制または改善効果を有する新規乳酸菌である。
　本発明の乳酸菌による血中尿酸値の上昇抑制／改善効果および脂肪肝の抑制／改善効果に基づき、本発明の乳酸菌またはその菌体処理物を有効成分として含む、血中尿酸値上昇抑制または改善用／脂肪肝抑制または改善用組成物（以下、本発明の組成物）を本発明は提供する。また、本発明の組成物は、生活習慣病の抑制／改善にも適用することもできる。本発明において生活習慣病とは、食習慣、運動習慣、休養、喫煙、飲酒等の生活習慣がその発症、進行に関与する疾患群をいい、高尿酸血症、成人肥満、小児肥満、栄養失調症、拒食症、痛風、高血圧、動脈硬化症、腎臓結石、心筋梗塞、狭心症、胃潰瘍、腎臓病、脂肪肝、肝炎、肝硬変、肝臓がん、肺がん、脳卒中、脳梗塞等の病態が含まれる。
　本発明の組成物に含まれる有効成分としては、培養物から遠心分離などの集菌手段によって分離された本発明の乳酸菌を用いることができる。また、本発明の乳酸菌の菌体処理物もまた、本発明の組成物に含まれる有効成分として用いることができる。本発明の菌体処理物としては、濃縮、乾燥、凍結乾燥などの処理を行った本発明の乳酸菌が含まれる。また、分離した菌体だけでなく、菌体破砕物、菌体破砕後に遠心分離により菌体を除いた破砕液も、本発明の菌体処理物として用いることができる。培養物の形態としては、前述の培養条件に従って培養された培養物または一般的に乳酸菌の培養に用いられる培地を用いた培養物だけでなく、チーズ、発酵乳、乳酸菌飲料などの乳製品なども用いることでき、公知の手段を用いて、本発明の乳酸菌を分離することができる。
　本発明の組成物は、上記の本発明の乳酸菌等を有効成分とし、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤等を添加して、用途に応じて適宜形態（固体状、液状等）を選択して調製することができる。
　賦形剤としては、例えば大豆油、サフラー油、オリーブ油、胚芽油、ひまわり油、牛脂、いわし油等の動植物性油、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン、ソルビトール等の多価アルコール、ソルビタン脂肪酸エステル、ショ糖脂肪酸エステル、グリセリン脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステル等の界面活性剤、精製水、乳糖、デンプン、結晶セルロース、D－マンニトール、レシチン、アラビアガム、ソルビトール液、糖液等が挙げられる。
　結合剤としては、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ゼラチン、アルファー化デンプン、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール等が挙げられる。
　崩壊剤としては、カルメロースカルシウム、カルメロースナトリウム、クロスカルメロースナトリウム、クロスポピドン、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、トウモロコシデンプン等が挙げられる。
　滑沢剤としては、タルク、水素添加植物油、ロウ類、軽質無水ケイ酸及びその誘導体等、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸アルミニウム等が挙げられる。
　また、本発明の組成物は、さらに、甘味料、着色料、pH調整剤、香料、各種アミノ酸等を添加することもできる。また、固体状であれは周知の方法でコーティングされても良い。液状であれば、摂取時に水又は他の適当な媒体に溶解又は懸濁されてもよい。
　本発明の組成物は、これらに限定されるものではないが、例えば、医薬品、食品、飼料等として提供される。
　本発明の組成物を医薬品（以下、本発明の医薬品）として用いる場合、本発明の医薬品の剤型としては、散剤、顆粒剤、丸剤、ソフトカプセル、ハードカプセル、錠剤、チュアブル錠、速崩錠、シロップ、液剤、懸濁剤等が挙げられる。これらの製剤は常法に従って調製される。
　例えば、経口投与のための本発明の医薬品としては、固体または液体の剤形、具体的には錠剤（糖衣錠、フィルムコーティング錠を含む）、丸剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤（ソフトカプセル剤を含む）、シロップ剤、乳剤、懸濁剤等が挙げられる。このような組成物は公知の方法によって製造され、製剤分野において通常用いられる担体、希釈剤または賦形剤を含有していても良い。錠剤用の担体、賦形剤としては、例えば、乳糖、でんぷん、蔗糖、ステアリン酸マグネシウムが用いられる。
　非経口投与のための本発明の医薬品としては、例えば、注入剤、坐剤等が用いられる。注入剤の調製方法としては、例えば、本発明の乳酸菌又はその菌体処理物を、通常注入剤に用いられる無菌の水性液、または油性液に懸濁または乳化することによって調製できる。注入用の水性液としては、例えば、生理食塩水、ブドウ糖やその他の補助薬を含む等張液等が用いられる。油性液としては、例えば、ゴマ油、大豆油等が用いられる。直腸投与に用いられる坐剤は、本発明の乳酸菌又はその菌体処理物を通常の坐薬用基剤に混合することによって調製され得る。
　本発明の医薬品の投与対象は、ヒトまたは他の温血動物（例、マウス、ラット、ウサギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ネコ、イヌ、サル、トリなど）があげられる。
　本発明の医薬品の投与量は、投与対象、対象疾患、症状、投与ルートなどによっても異なるが、例えば、成人の高尿酸血症の抑制／改善のために使用する場合には、本発明の乳酸菌またはその菌体処理物を1日投与量として、通常、1×１０４～1×１０１２cells、好ましくは、１×１０６～１×１０１１cells、より好ましくは、１×１０８～１×１０１１cells、またはその相当量を、経口的または非経口的に投与することができる。投与は１日に複数回に分けてもよい。症状が特に重い場合には、その症状に応じて増量してもよい。本発明の医薬品を成人の脂肪肝の抑制／改善、生活習慣病の抑制／改善のために投与する場合についても、上記と同様の投与量、投与ルート、投与日数に従ってよい。
　本発明の組成物を食品（以下、本発明の食品）として用いる場合、本発明の食品の形態としては、例えば、サプリメント（散剤、顆粒剤、ソフトカプセル、ハードカプセル、錠剤、チュアブル錠、速崩錠、シロップ、液剤等）、飲料（お茶、炭酸飲料、乳酸飲料、スポーツ飲料等）、菓子（グミ、ゼリー、ガム、チョコレート、クッキー、キャンデー等）、油、油脂食品（マヨネーズ、ドレッシング、バター、クリーム、マーガリン等）等が挙げられる。
　上記食品には、必要に応じて各種栄養素、各種ビタミン類（ビタミンＡ、ビタミンＢ１、ビタミンＢ２、ビタミンＢ６、ビタミンＣ、ビタミンＤ、ビタミンＥ、ビタミンＫ等）、各種ミネラル類（マグネシウム、亜鉛、鉄、ナトリウム、カリウム、セレン等）、食物繊維、分散剤、乳化剤等の安定剤、甘味料、呈味成分（クエン酸、リンゴ酸等）、フレーバー、ローヤルゼリー、プロポリス、アガリクス等を配合することができる。
　本発明の食品の1日摂取量としては、摂取する対象、対象疾患、症状などによっても異なるが、例えば、成人の高尿酸血症の抑制／改善のために摂取する場合には、本発明の乳酸菌またはその菌体処理物を1日摂取量として、通常、1×１０４～1×１０１２cells、好ましくは、１×１０６～１×１０１１cells、より好ましくは、１×１０８～１×１０１１cells、またはその相当量を、経口的に摂取することができる。摂取は１日に複数回に分けてもよい。症状が特に重い場合には、その症状に応じて増量してもよい。本発明の食品を成人の脂肪肝の抑制／改善、生活習慣病の抑制／改善のために摂取する場合についても、上記と同様の摂取量、摂取ルート、摂取日数に従ってよい。
　以下の実施例により本発明をより具体的に説明するが、実施例は本発明の単なる例示にすぎず、本発明の範囲を何ら限定するものではない。
実施例１　乳酸菌の尿酸値低減作用に関するin vitro 試験
　乳酸菌NTM003株をMRS培地（BD社製）15mLに植菌し、37℃で培養、集菌した。得られた乳酸菌を0.85%NaClにて一定の濁度（OD600＝0.1）にし、試料溶液とした。試料溶液に基質溶液１ｍL（イノシン４ｍM、グアノシン２ｍM、0.1M KPB pH7.0：H2O=1:9）を加え、嫌気的に反応させ（37℃、120rpm、1時間）、反応液をHPLCで分析した。また、各検量線を作成し、反応液に含まれる核酸濃度を決定した。その結果を図１に示す。イノシンとグアノシンは１時間反応後には検出されず、ヒポキサンチンとグアニンが検出された。
　更に、NTM003株の経時的変化を調べた。乳酸菌量は上記試料溶液と同じとし、基質溶液を５ｍLに増やした。反応液を37℃の嫌気チャンバー内で撹拌しながら、１０分毎に分取してHPLCで分析した。結果を図２に示す。基質の減少に伴う生成物の増加が確認できた。
実施例２　乳酸菌の尿酸値低減作用に関するin vivo 試験
（製造例１：乳酸菌末の調製と被験液の調製）
　MRS培地（BD社製）またはMRS培地と同組成に調製した培地600LにてNTM003株を37℃で培養し、遠心分離にて集菌後、凍結乾燥した。凍結乾燥後の菌体を粉砕機にて粉砕後、バレイショデンプンと混合し、一定濃度の菌末を得た。被験液として、上記の乳酸菌末（NTM003株）を日本薬局方注射用水に5.51×109cell/mLとなるように懸濁した（用時調製）。
（実験動物の準備）
　ラット（Wister　SPF、雄、7週齢）を使用した。飼育にはアルミ製金網底ケージを使用し、１ケージ当たり１匹のラットを収容した。照明時間は12時間／日（７～19時）とした。
（検疫と馴化）
　実験動物は搬入したあとに7日間の馴化をおこなった。動物入手時に健康状態を確認し、異常の認められない動物を飼育室に収容し、飼料と被験液を除いて後述する試験と同様の飼育条件及び飼育環境下で7日間検疫・馴化飼育した。
（飼料及び混合餌）
　オリエンタル酵母工業株式会社製の粉末飼料MFを用いた。オキソン酸カリウム混合餌は粉末飼料MFにオキソン酸カリウム（シグマ-アルドリッチ社）を2.5w/w%となるように混合した。オキソン酸カリウム＋RNA混合餌は、粉末飼料MFにオキソン酸カリウムを2.5w/w%、RNA（MPバイオメディカル）を1.0w/w%となるように混合した。
（群分け）
　コントロール群、陰性対照群、乳酸菌群の3群に分け、それぞれ1群8匹構成とした。試験群構成を表２に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000002
（本飼育（試験））
　表２の通り群分けし、オキソン酸カリウム混合餌（コントロール群）、オキソン酸カリウム＋RNA混合餌（陰性対照群、乳酸菌群）をそれぞれ給餌器によりラットに8日間自由摂取させた。コントロール群、陰性対照群については日本薬局方注射用水を１ｍL/bodyで1日1回、胃ゾンデを用いて強制投与し、乳酸菌群については、上記の被験液を１ｍL/bodyで1日1回、胃ゾンデを用いて強制投与した。採血頻度は混合餌の自由摂取開始前、5日目（被験液投与1時間後）、8日目（被験液投与1時間後）とし、血液は室温で30分以上放置後、遠心分離して血清を採取した。血清は凍結保存した。保存した血清は尿酸C-テストワコー（和光純薬工業）を用いて血清中尿酸濃度を測定した。
（試験成績）
　9日間の観察期間を通して一般状態に異常は認められなかった。いずれの群も順調な体重増加を示した。コントロール群、陰性対照群、乳酸菌群に摂餌量の差は認められなかった。血清尿酸値の結果を図３に示す。乳酸菌群では陰性対照群と比べて血清尿酸値の上昇が抑制された。
実施例３　乳酸菌の尿酸値低減作用に関するヒト試験
（被験物質の調製）
　実施例２の製造例１で調製した乳酸菌末を食品用ゼラチン硬カプセルに1カプセル当たり2×1010CFUの乳酸菌を含有するように詰めて、被験物質とした。
（被験者）
　成人（20歳代～60歳代）の男女18名
（本試験）
　被験者に1日1カプセルの被験物質を1か月間摂取させ、摂取開始前と1か月摂取後に採血を行った。採血した血液は臨床検査会社にて血中尿酸値を測定した。
　被験者18人の尿酸値の結果を図４に示す。また、摂取開始前に尿酸値が比較的高い（6.5mg/dL以上）被験者のみの結果を図５に示す。尿酸値の比較的高い被験者の結果では、摂取前と摂取後の平均値においてP値＜0.05で有意差ありの結果となった。即ち、尿酸値が正常なヒトの尿酸値は変動傾向はみられないが、尿酸値が比較的高いヒトの場合、乳酸菌末を摂取することで高尿酸血症を改善できた。
実施例４　乳酸菌の脂肪肝抑制作用に関するin vivo試験
　肥満・糖尿病モデルマウスであるKKAｙマウスを用いて、NTM003株の効果を評価した。KKAｙマウス（KKAｙ/TaJcL、雄、4週齢を使用）を市販の普通飼料（ND）で1週間馴化した後、表３のとおり２群に群分けした。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000003
（飼料及び被験物質）
　ＨＦＤ６０はオリエンタルバイオより購入した。ＨＦＤ６０改良飼料は表４の組成に従い、オリエンタルバイオで調製した。被験物質としては、デンプン、NMT003菌末を使用した。NTM003菌末は実施例２の製造例１で調製した乳酸菌末を２×１０１１CFU／ｇとなるようにデンプンで濃度調整した菌末を用いた。試験群の第１群、第２群にそれぞれ自由摂取させるための飼料＋被験物質は、表３に記載の割合で各材料を混練し、調製した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000004
（本飼育（試験））
　各群につき、飼料＋被験物質を４g/日で４２日間自由摂取させた。
　KKAｙマウスの体重を１週間ごとに測定し、４２日目に解剖し、臓器重量、血液生化学的検査（コレステロール、中性脂肪、遊離脂肪酸）、糞便の水分量を測定した。体重の推移は図６に示し、４２日目の生化学的検査等は表５に示す。また、肝臓重量と肝臓中脂質量については図７にも示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000005
　図７、表５の結果より、NTM003株の乳酸菌を被験物質として摂取させた第２群は、肝臓の重量が第１群と比べて有意に軽く、また、肝臓中の脂質量も低値となり、NTM003株の脂肪肝抑制作用が認められた。
　以上の結果から、ラクトバチルス・ブレビス（Lactobacillus brevis）NTM003株（NITE BP-01634）は高尿酸値改善作用と脂肪肝抑制作用を併せ持つ新規の乳酸菌であることが示された。
　本発明を好ましい態様を強調して説明してきたが、好ましい態様が変更され得ることは当業者にとって自明である。
　ここで述べられた特許及び特許出願明細書を含む全ての刊行物に記載された内容は、ここに引用されたことによって、その全てが明示されたと同程度に本明細書に組み込まれるものである。
　本発明は、新規乳酸菌株を見出し、該乳酸菌株が高尿酸血症と脂肪肝を改善する複数の機能を持つことを明らかにした。当該乳酸菌及びその菌体処理物を含む組成物は、医薬品、食品等様々な分野へ適用可能であり、本発明は産業上極めて有用である。
　本出願は、日本で出願された特願２０１４－１１０９１２（出願日：平成２６年５月２９日）を基礎としており、その内容はすべて本明細書に包含されるものとする。

Claims (8)

  1. 　ラクトバチルス・ブレビス（Lactobacillus brevis）NTM003株である乳酸菌(NITE BP-01634)またはその菌体処理物。
  2. 　請求項１に記載の乳酸菌またはその菌体処理物を有効成分として含む、血中尿酸値上昇抑制または改善用組成物。
  3. 　請求項１に記載の乳酸菌またはその菌体処理物を有効成分として含む、脂肪肝抑制または改善用組成物。
  4. 　請求項１に記載の乳酸菌またはその菌体処理物を有効成分として含む、生活習慣病改善用組成物。
  5. 　医薬品である、請求項２～４のいずれか１項に記載の組成物。
  6. 　食品である、請求項２～４のいずれか１項に記載の組成物。 
  7. 　ラクトバチルス・ブレビス（Lactobacillus brevis）NTM003株である乳酸菌(NITE BP-01634)またはその菌体処理物の有効量を対象に投与することを含む、血中尿酸値の上昇、脂肪肝または生活習慣病の抑制または改善方法。
  8. 　ラクトバチルス・ブレビス（Lactobacillus brevis）NTM003株である乳酸菌(NITE BP-01634)またはその菌体処理物を1日当たり1×１０４～1×１０１２cellsまたはその相当量、血中尿酸値が高い患者、脂肪肝患者または生活習慣病患者に経口投与することを含む、請求項７に記載の方法。
     
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