WO2015129860A1 - アミド誘導体 - Google Patents

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oxopropyl
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晴久 菊地
大島 吉輝
俊夫 服部
禅 久保原
山田 修
張菁 周
芳久 松下
進也 喜田
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国立大学法人東北大学
国立大学法人群馬大学
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    • C07D213/60Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D213/78Carbon atoms having three bonds to hetero atoms, with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals
    • C07D213/81Amides; Imides
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    • C07D471/02Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed system contains two hetero rings
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    • C07CACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C2601/00Systems containing only non-condensed rings
    • C07C2601/12Systems containing only non-condensed rings with a six-membered ring
    • C07C2601/14The ring being saturated

Definitions

  • the present invention relates to a novel amide derivative. Furthermore, the present invention may be useful for the treatment and / or prevention of diseases caused by increased osteopontin (OPN) production, including cancer.
  • OPN osteopontin
  • insulin resistance improving drugs which are PPAR- ⁇ (Peroxisome Proliferator-Activated Receptor-gamma) agonists, non-steroidal anti-inflammatory agents (Indomethacin, ibuprofen, etc.) and HMG-CoA reductase inhibitors, statin hypercholesterolemia therapeutic agents (rosuvastatin, simvastatin, fluvastatin, etc.) are known, but have the same structure as the compound of the present invention. No compound is known.
  • PPAR- ⁇ Peroxisome Proliferator-Activated Receptor-gamma
  • non-steroidal anti-inflammatory agents Indomethacin, ibuprofen, etc.
  • HMG-CoA reductase inhibitors HMG-CoA reductase inhibitors
  • statin hypercholesterolemia therapeutic agents rosuvastatin, simvastatin, fluvastatin, etc.
  • N- (3- (2-amino-3- (4-hydroxyphenoxy) phenyl) -3-oxopropyl) -4-hydroxybenzamide (hereinafter sometimes referred to as breferamide) is cellular. It has been isolated from slime molds and has been shown to inhibit ERK phosphorylation and reduce cell proliferation by reducing epidermal growth factor reception in human astrocytoma cells (Non-Patent Documents 3 to 5).
  • Senger DR Perruzzi CA, Gracey CF, Papadopoulos A, Tenen DG. (1988) Secreted phosphoproteins associated with neoplastic transformation: close homology with plasma proteins cleaved during blood coagulation. Cancer Res 48 5 Brown LF, Papadopo ⁇ Los-Seigiou A, Brygida B, Manseau EJ, Tognazzi K, Perruzzi CA, Dvorak HF, Senger DR. (1994) Osteopontin expression in human carcinoma. Am J Pathol. 145 Kikuchi H. et al., J. Org.
  • bleferamide isolated from cellular slime molds has an OPN production inhibitory action, and is further represented by the following formula as a breferamide derivative.
  • the present invention was also completed by finding that these compounds also have a strong inhibitory effect on OPN production.
  • an amide derivative represented by the following formula (including breferamide) or a pharmaceutically acceptable salt thereof (hereinafter sometimes referred to as “the compound of the present invention”), and its OPN production inhibitory action Provides an invention for pharmaceutical use.
  • R 2 is a hydrogen atom, amino, amino, hydroxy or C 1-6 alkoxy substituted with 1 or 2 independently selected C 1-6 alkyl;
  • R 4 is a hydrogen atom, halogen, amino, amino substituted with 1 or 2 independently selected C 1-6 alkyl, C 1-6 alkyl or C 1-6 haloalkyl;
  • R 5 is C 2-6 alkenyl, C 2-6 alkynyl, C 3-8 cycloalkyl, C 3-8 heterocycloalkyl, C 6-10 aryl or 5-10 membered heteroaryl, wherein The C
  • R 1 is phenyl, and the 3-position and / or 4-position of the phenyl group is independently substituted with halogen, hydroxy, amino, C 1-4 acylamino or C 1-6 alkoxy, [1] To [4] or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
  • R 3 is phenyl, and the 3-position and / or 4-position of the phenyl group is independently halogen, hydroxy, C 1-6 alkyl, C 1-6 haloalkyl, C 1-6 alkoxy or C 1-
  • R 1 and R 3 are each independently a hydrogen atom, C 1-6 alkyl, C 2-6 alkenyl, C 2-6 alkynyl, C 3-8 cycloalkyl, C 3-8 heterocycloalkyl, C 6 -10 aryl or 5-10 membered heteroaryl, wherein the C 1-6 alkyl, C 2-6 alkenyl, C 2-6 alkynyl, C 3-8 cycloalkyl, C 3-8 heterocycloalkyl , C 6-10 aryl and 5-10 membered heteroaryl are each independently at a substitutable position halogen, hydroxy, mercapto, cyano, nitro, amino, mono- or di-C 1-6 alkylamino.
  • R 1 is C 3-8 cycloalkyl, C 3-8 heterocycloalkyl, C 6-10 aryl or 5- to 10-membered heteroaryl, wherein the C 3-8 cycloalkyl, C 3-8 heterocycloalkyl, C 6-10 aryl and 5-10 membered heteroaryl are each independently at a substitutable position halogen, hydroxy, amino, mono- or di-C 1-6 alkylamino One or the same selected from the group consisting of: C 1-4 acyl, C 1-4 acylamino, C 1-6 alkyl, C 1-6 haloalkyl, C 1-6 alkoxy, and C 1-6 haloalkoxy, or Optionally substituted with two or more different groups; R 2 is bonded to the 2-position of the benzene ring and is a hydrogen atom, amino or hydroxy; OR 3 is bonded to the 3-position of the benzene ring and R 3 is phenyl, where the phenyl is, at a substitutable position
  • R 1 is phenyl, and the 3-position and / or 4-position of the phenyl group is independently substituted with halogen, hydroxy, amino, C 1-4 acylamino or C 1-6 alkoxy, [14] The therapeutic agent according to any one of to [17].
  • the compound is N- (3- (2-amino-3- (4-hydroxyphenoxy) phenyl) -3-oxopropyl) -4-hydroxybenzamide (Compound 1); 4-hydroxy-N- (2- (7- (4-hydroxyphenoxy) -1H-indol-3-yl) ethyl) benzamide (Compound 2); N- (3- (2,3-dihydroxyphenyl) -3-oxopropyl) -4- (4-hydroxyphenoxy) benzamide (Compound 3); N- (3- (2-amino-3- (4-hydroxyphenoxy) phenyl) -3-oxopropyl) -4-methoxybenzamide (Compound 4); N- (3- (2-amino-3- (4-methoxyphenoxy) phenyl) -3-oxopropyl) -4-methoxybenzamide (Compound 5); N- (3- (2-amino-3- (4-methoxyphenoxy) phenyl) -3-oxopropy
  • R 1 and R 3 are each independently a hydrogen atom, C 1-6 alkyl, C 2-6 alkenyl, C 2-6 alkynyl, C 3-8 cycloalkyl, C 3-8 heterocycloalkyl, C 6 -10 aryl or C 6-10 heteroaryl, wherein the C 1-6 alkyl, C 2-6 alkenyl, C 2-6 alkynyl, C 3-8 cycloalkyl, C 3-8 heterocycloalkyl, C 6-10 aryl and C 6-10 heteroaryl are each independently at a substitutable position halogen, hydroxy, mercapto, cyano, nitro, amino, mono- or di-C 1-6 alkylamino, C 1-4 acyl, C 1-4 alkylsulfonyl, C 1-6 alkyl, C 1-6 haloalkyl, C 1-6 alkoxy, C 1-6 haloalkoxy, C 2- Alkenyl may be optionally substituted with
  • the amount of OPN produced by ELISA in the control group and the compound 1 (10 ⁇ M and 20 ⁇ M) addition group in HepG2 cells is shown.
  • the amount of OPN produced by ELISA in the control group and the compound 1 (12.5 ⁇ M and 25 ⁇ M) addition group in A549 cells is shown.
  • the OPN production amount by ELISA method of a control group and a compound 1 (25 ⁇ M and 50 ⁇ M) addition group in OUR-10 cells is shown.
  • the amount of OPN produced by ELISA in the control group and the compound 1 (20 ⁇ M and 40 ⁇ M) addition group in QGP-1 cells is shown.
  • the amount of OPN produced by ELISA in the control group and the compound 6 (10 ⁇ M and 20 ⁇ M) addition group in A549 cells is shown.
  • the wound-healing rate in the compound 1 (12.5 micromol and 25 micromol) when the wound healing rate of a control group is set to 100% in A549 cell is shown.
  • the ratio of the number of infiltrating cells in Compound 1 (12.5 ⁇ M and 25 ⁇ M) and Compound 6 (10 ⁇ M) when the number of infiltrating cells in the control group is 100% in A549 cells is shown.
  • the ratio of the OPN production amount by ELISA method of the compound 19 (12.5 ⁇ M and 25 ⁇ M) addition group when the OPN production amount of the control group is 100% in A549 cells is shown.
  • pyridyl pyridazinyl, isothiazolyl, pyrrolyl, furyl, thienyl, thiazolyl, imidazolyl, pyrimidinyl, thiadiazolyl, pyrazolyl, oxazolyl, isoxazolyl, pyrazinyl, triazinyl, triazolyl, imidazolidinyl, oxadiazolyl, triazolyl, indolyl, indolyl, indolyl, indolyl Quinolyl, isoquinolyl, benzofuranyl, benzothienyl, benzoxazolyl, benzothiazolyl, benzisoxazolyl, benzisothiazolyl, benzotriazolyl, benzimidazolyl and the like.
  • Diseases caused by increased osteopontin production include cancer, hepatitis, arteriosclerosis, multiple sclerosis, arthritis, rheumatism, pulmonary fibrosis, osteoporosis, urolithiasis, and the like. As the disease in the present invention, cancer is preferable.
  • R 3 includes a hydrogen atom, C 1-6 alkyl, C 2-6 alkenyl, C 2-6 alkynyl, C 3-8 cycloalkyl, C 3-8 heterocycloalkyl, C 6-10 aryl and 5-10 Membered heteroaryl, such as C 1-6 alkyl, C 2-6 alkenyl, C 2-6 alkynyl, C 3-8 cycloalkyl, C 3-8 heterocycloalkyl, C 6-10 aryl and 5 to 5
  • Each 10-membered heteroaryl is independently at a substitutable position a halogen, hydroxy, mercapto, cyano, nitro, amino, mono- or di-C 1-6 alkylamino, C 1-4 acyl, C 1 -4 acylamino, C 1-4 alkylsulfonyl, C 1-6 alkyl, C 1-6 haloalkyl, C 1-6 alkoxy, C 1-6 haloalkoxy, C 2 It may be substituted with one or
  • R 4 examples include a hydrogen atom, halogen, amino, mono- or di-C 1-6 alkylamino, C 1-6 alkyl and C 1-6 haloalkyl. Among them, preferred is a hydrogen atom, halogen or amino, and more preferred is a hydrogen atom.
  • X is preferably O.
  • R 2 is amino or substituted amino and is bonded to the 2-position of the benzene ring
  • X is preferably bonded to the nitrogen atom of R 2 as CH to form a pyrrole ring.
  • Y is preferably CH 2 or NH.
  • the manufacturing method of the Example compound of this invention is demonstrated below.
  • the compound of the present invention represented by the formula (I) can be produced, for example, by the method described in the following scheme 1 or non-patent document 4.
  • Step 1 is a step of obtaining aldehyde B by oxidizing the hydroxy group of amino alcohol A protected with a nosyl group (o-nitrobenzenesulfonyl group) using a commonly used oxidizing agent such as Jones reagent.
  • step 3 the indole D obtained is reacted with a thiol such as p-mercaptobenzoic acid in an aprotic solvent such as dimethylformamide to deprotect the o-nitrobenzenesulfonyl group, followed by addition of acyl chloride.
  • a thiol such as p-mercaptobenzoic acid
  • an aprotic solvent such as dimethylformamide
  • the appropriate substituents may be substituted with the above-mentioned substituents while appropriately protecting / deprotecting with commonly used protecting groups It can be introduced at the stage of aromatic hydrazine C, indole D in scheme 1 or can be introduced at the acyl chloride used in step 3, or it can be introduced at compound F.
  • Step 1 is a step of obtaining a compound B by amidation with a phenoxyaniline derivative A and a carboxylic acid having an amino group protected with a tert-butyloxycarbonyl group at a terminal in an aprotic solvent such as dichloromethane. .
  • esters dimethylformamide (DMF), amides such as N-methyl-2-pyrrolidone, sulfoxides such as dimethylsulfoxide (DMSO), and nitriles such as acetonitrile.
  • solvents may be used alone or in combination of two or more. It can be used by mixing. Depending on the type of reaction, organic acids and organic bases may be used as the solvent.
  • the compound of the present invention or a pharmaceutically acceptable salt thereof may have asymmetry or may have a substituent having an asymmetric carbon, and such compounds have optical isomers.
  • the compounds of the present invention include mixtures of these isomers and isolated ones, and can be produced according to ordinary methods. Examples of the production method include a method using a raw material having an asymmetric point, or a method of introducing asymmetry at an intermediate stage.
  • optical isomers can be obtained by using optically active raw materials or by optical resolution at an appropriate stage of the production process.
  • Ester solvent such as ethyl acetate, hydrocarbon solvent such as toluene, aprotic solvent such as acetonitrile, or a mixed solvent of two or more selected from the above solvents
  • optically active acid for example, Mandel
  • monocarboxylic acids such as N-benzyloxyalanine and lactic acid, tartaric acid, o-diisopropylidene tartaric acid, dicarboxylic acids such as malic acid, and sulfonic acids such as camphorsulfonic acid and bromocamphorsulfonic acid
  • the compound of the present invention has osteopontin production inhibitory activity, and diseases caused by increased osteopontin production, specifically, cancer, hepatitis, arteriosclerosis, multiple sclerosis, arthritis, rheumatism, pulmonary fibrosis, osteoporosis
  • it can be a novel therapeutic agent and / or preventive agent such as urinary calculus.
  • the therapeutic agent and / or prophylactic agent of the present invention is not limited to various therapeutically active ingredients and pharmaceutically acceptable agents that are usually used as long as they do not interfere with the therapeutic and / or prophylactic effects of diseases such as cancer caused by the compound of the present invention.
  • These additives may be appropriately blended by a method known per se.
  • Examples of various pharmaceutically active ingredients to be incorporated into the therapeutic agent and / or prophylactic agent of the present invention include anticancer agents, anti-inflammatory agents, herbal medicines, natural products and the like, and pharmaceutically acceptable additives include stabilizers. , Surfactants, solubilizers, buffers, suspending agents, antioxidants, coating agents, wetting agents, wetting regulators, cooling agents, coloring agents, flavoring agents, tonicity agents, emulsifiers, pH Examples include regulators, skin protectants, dispersants, propellants, fragrances, preservatives, solvents, and the like.
  • s is a single line
  • d is a double line
  • dd is a double double line
  • ddd is a double double line
  • t is a triple line
  • dt is a double line Triplet, td triple triplet, tt triple triplet, q quadruple, m multiple, br broad, brs wide singlet, brt wide triplet and J the coupling constant means.
  • Step 2 N- (2- (7- (4- (benzyloxy) phenoxy) -1H-indol-3-yl) ethyl) -2-nitrobenzenesulfonamide (1.11 g, 1.99 mmol) was converted to N, N-dimethylformamide. (20 mL), potassium carbonate (1.11 g, 3.98 mmol) and p-mercaptobenzoic acid (614 mg, 7.97 mmol) were added, and the mixture was stirred at 40 ° C. for 10 hours. Water (60 mL) was added to the reaction mixture, and the mixture was extracted 4 times with ethyl acetate (40 mL).
  • 0.3M hydrochloric acid 50 mL was added to the reaction mixture, and the mixture was extracted 3 times with ethyl acetate (30 mL). The obtained ethyl acetate layers were combined, washed with water (50 mL), saturated aqueous sodium hydrogen carbonate (50 mL) and saturated brine (50 mL), dried over anhydrous sodium sulfate, and the solvent was evaporated under reduced pressure.
  • Example 3 N- (3- (2,3-dihydroxyphenyl) -3-oxopropyl) -4- (4-hydroxyphenoxy) benzamide (Compound 3) Step 1. Tetrahydrofuran (50 mL) and acetonitrile (3.8 mL, 72.2 mmol) were stirred at ⁇ 78 ° C., and n-butyllithium (1.56 M hexane solution) (46.0 mL) was added dropwise over 30 minutes. Further, a tetrahydrofuran solution (25 mL) of 2,3-bis (methoxymethoxy) benzaldehyde (3.96 g, 17.52 mmol) synthesized by the method described in J. Org. Chem.
  • Step 2 Lithium aluminum hydride (429 mg, 11.3 mmol) was suspended in tetrahydrofuran (15 mL) and stirred at 0 ° C. A tetrahydrofuran solution (5 mL) of 3- (2,3-bis (methoxymethoxy) phenyl) -3-hydroxypropanenitrile (1.21 g, 4.52 mmol) was added, and the mixture was stirred at 70 ° C. for 4 hours. Cool to 0 ° C. and add 1M aqueous sodium hydroxide (60 mL). The reaction solution was filtered through Celite, and the filtrate was extracted three times with ethyl acetate (50 mL).
  • Step 4 (9H-Fluoren-9-yl) methyl 3- (2,3-bis (methoxymethoxy) phenyl) -3- (tert-butyldimethylsilyloxy) -propylcarbamate (88.7 mg, 0.146 mmol) was added to N, Dissolved in N-dimethylformamide (1.0 mL), piperidine (50 ⁇ L) was added, and the mixture was stirred at room temperature for 1 hour.
  • 0.2M hydrochloric acid (10 mL) was added to the reaction mixture, and the mixture was extracted 3 times with ethyl acetate (10 mL). The obtained ethyl acetate layers were combined, washed with water (15 mL), saturated aqueous sodium hydrogen carbonate (15 mL) and saturated brine (15 mL), dried over anhydrous sodium sulfate, and the solvent was evaporated under reduced pressure.
  • Step 6 N- (3- (2,3-bis (methoxymethoxy) phenyl) -3- (tert-butyldimethylsilyloxy) propyl) -4- (4- (methoxymethoxy) phenoxy) benzamide (35.0 mg,. 055 mmol) was dissolved in tetrahydrofuran (2.0 mL). At 0 ° C., tetra-n-butylammonium fluoride (1.0 M tetrahydrofuran solution) (50 ⁇ L) was added and stirred for 1 hour. 0.2M hydrochloric acid (10 mL) was added to the reaction mixture, and the mixture was extracted 3 times with ethyl acetate (10 mL).
  • Example 4 N- (3- (2-Amino-3- (4-hydroxyphenoxy) phenyl) -3-oxopropyl) -4-methoxybenzamide (Compound 4)
  • Compound 1 (9.4 mg, 0.024 mmol) was dissolved in N, N-dimethylformamide (1 mL), and potassium carbonate (10.6 mg, 0.077 mmol) and methyl iodide (2.5 ⁇ L, 0.040 mmol) were added. The mixture was further stirred at room temperature for 6 hours. 0.5M Hydrochloric acid (10 mL) was added to the reaction mixture, and the mixture was extracted 3 times with ethyl acetate (10 mL).
  • Example 5 N- (3- (2-Amino-3- (4-methoxyphenoxy) phenyl) -3-oxopropyl) -4-methoxybenzamide (Compound 5)
  • Compound 1 (9.4 mg, 0.024 mmol) was dissolved in N, N-dimethylformamide (1 mL), and potassium carbonate (10.6 mg, 0.077 mmol) and methyl iodide (2.5 ⁇ L, 0.040 mmol) were added. The mixture was further stirred at room temperature for 6 hours. 0.5M Hydrochloric acid (10 mL) was added to the reaction mixture, and the mixture was extracted 3 times with ethyl acetate (10 mL).
  • Compound 6 was synthesized according to the same production method as Compound 1 except that (2- (4- (methoxyphenoxy) phenyl) hydrazine was used instead of (2- (4- (benzyloxy) phenoxy) phenyl) hydrazine. It was done.
  • Compound 7 was synthesized according to the same production method as Compound 1 except that 3-methoxybenzoyl chloride was used instead of 4- (methoxymethoxy) benzoyl chloride.
  • Compound 9 was synthesized according to the same production method as Compound 1 except that 4-fluorobenzoyl chloride was used instead of 4- (methoxymethoxy) benzoyl chloride.
  • Compound 10 was synthesized according to the same production method as Compound 1 except that cyclohexanecarbonyl chloride was used in place of 4- (methoxymethoxy) benzoyl chloride.
  • Compound 11 was synthesized according to the same production method as Compound 1 except that tetrahydro-2H-pyran-4-carbonyl chloride was used instead of 4- (methoxymethoxy) benzoyl chloride.
  • Compound 12 was synthesized according to the same production method as Compound 1, except that (2-methoxyphenyl) hydrazine was used instead of 2- (4- (benzyloxy) phenoxy) phenyl) hydrazine.
  • Compound 13 was synthesized according to the same production method as Compound 1 except that (2- (benzyloxy) phenyl) hydrazine was used instead of 2- (4- (benzyloxy) phenoxy) phenyl) hydrazine.
  • Compound 16 was synthesized according to the same production method as Compound 1, except that (2- (3,4-dimethoxyphenoxy) phenyl) hydrazine was used instead of 2- (4- (benzyloxy) phenoxy) phenyl) hydrazine. It was.
  • Compound 17 was synthesized according to the same production method as Compound 1 except that (2- (4-chlorophenoxy) phenyl) hydrazine was used instead of 2- (4- (benzyloxy) phenoxy) phenyl) hydrazine. .
  • Example 18 8- (4-Hydroxyphenoxy) -1,2,3,4-tetrahydro- ⁇ -carbolin-1-one (Compound 18) 8- (4-Benzyloxyphenoxy) -1,2,3,4-tetrahydro- ⁇ -carbolin-1-one (299 mg) synthesized by the method described in J. Org. Chem. 2005, 70, 8854-8858 , 0.778 mmol) was dissolved in ethyl acetate (3 mL) and ethanol (3 mL), 20% palladium hydroxide-carbon (60 mg) was added, and the mixture was stirred at room temperature for 4 hours under a hydrogen atmosphere (1 atm). The reaction solution was filtered, and the filtrate was distilled off under reduced pressure. The residue was purified by silica gel column chromatography (eluted with chloroform-methanol (9: 1)) to obtain Compound 18 (171.7 mg, 0.583 mmol, 75%).
  • Step 2 N- (2- (7- (4-chlorophenoxy) -1H-indol-3-yl) ethyl) -4-acetamidobenzamide (29 mg, 0.065 mmol) was dissolved in acetonitrile (1 mL) and water (1 mL). , Sodium metaperiodate (60 mg, 0.281 mmol) was added, and the mixture was stirred at 60 ° C. for 48 hours. Water (10 mL) was added to the reaction mixture, and the mixture was extracted 3 times with ethyl acetate (10 mL).
  • 0.3M hydrochloric acid (20 mL) was added to the reaction mixture, and the mixture was extracted 3 times with ethyl acetate (20 mL). The obtained ethyl acetate layers were combined, washed with saturated aqueous sodium hydrogen carbonate (40 mL) and saturated brine (40 mL), dried over anhydrous sodium sulfate, and the solvent was evaporated under reduced pressure. The residue was purified by silica gel column chromatography (eluting with hexane-ethyl acetate (2: 3)) to obtain tert-butyl 2- (3- (4-methoxyphenoxy) phenylamido) ethylcarbamate (467 mg, 1. 33 mmol, 96%).
  • Step 2 tert-Butyl 2- (3- (4-methoxyphenoxy) phenylamido) ethylcarbamate (101 mg, 0.261 mmol) was dissolved in methanol (2.5 mL) and hydrochloric acid-methanol reagent (5-10%) (2. 5 mL) was added and stirred at room temperature for 5 hours.
  • Step 3 N- (2- (4- (methoxymethoxy) phenylamido) ethyl) -3- (4-methoxyphenoxy) benzamide (49 mg, 0.109 mmol) was dissolved in methanol (1.5 mL), and hydrochloric acid-methanol reagent ( 5-10%) (1.5 mL) was added and stirred at room temperature for 5 hours. The reaction solution was evaporated under reduced pressure, and the residue was purified by silica gel column chromatography (eluted with chloroform-methanol (19: 1)) to obtain Compound 21 (39 mg, 0.096 mmol, 88%).
  • Compound 22 was synthesized according to the same production method as compound 21 except that 2- (4-methoxyphenoxy) benzoic acid was used instead of 3- (4-methoxyphenoxy) benzoic acid.
  • Example 23 N- (4-hydroxyphenyl) -4- (3- (4-chlorophenoxy) phenylamino) -4-oxobutanamide (Compound 23) 4- (4-Hydroxyphenylamino) -4-oxobutanoic acid (26 mg, 0.122 mmol) was dissolved in methanol (2 mL), and 3- (4-chlorophenoxy) aniline (26 mg, 0.136 mmol) and 4- ( 4,6-Dimethoxy-1,3,5-triazin-2-yl) -4-methylmorpholinium chloride (37 mg, 0.134 mmol) was added, and the mixture was stirred at room temperature for 1 hour.
  • Example 24 N- (3- (3- (4-Chlorophenoxy) phenylamino) -3-oxopropyl) -4-hydroxybenzamide (Compound 24) Step 1. 3- (4-Chlorophenoxy) aniline (55 mg, 0.250 mmol) was dissolved in dichloromethane (3 mL), and N- (tert-butoxycarbonyl) - ⁇ -alanine (59 mg, 0.312 mmol), N, N-diisopropyl was dissolved.
  • Step 2 tert-Butyl 3- (3- (4-chlorophenoxy) phenylamino) -3-oxopropylcarbamate (53 mg, 0.135 mmol) was dissolved in methanol (1.5 mL) and hydrochloric acid-methanol reagent (5-10%) ) (1.5 mL) was added and stirred at room temperature for 4 hours.
  • Step 3 N- (3- (3- (4-chlorophenoxy) phenylamino) -3-oxopropyl) -4- (methoxymethoxy) benzamide (28 mg, 0.063 mmol) was dissolved in methanol (1 mL) and hydrochloric acid-methanol Reagent (5-10%) (1 mL) was added and stirred at room temperature for 5 hours. The reaction solution was evaporated under reduced pressure, and the residue was purified by silica gel column chromatography (eluted with chloroform-methanol (19: 1)) to obtain Compound 24 (9 mg, 0.022 mmol, 35%).
  • Example 25 N- (2- (3- (4-methoxyphenoxy) phenylamino) -2-oxyethyl) -4-hydroxybenzamide (Compound 25)
  • Compound 25 comprises 3- (4-methoxyphenoxy) aniline instead of 3- (4-chlorophenoxy) aniline and N- (tert-butoxy) instead of N- (tert-butoxycarbonyl) - ⁇ -alanine.
  • the compound was synthesized according to the same production method as for compound 24 except that carbonyl) glycine was used.
  • Example 26 N- (3- (3- (4-methoxyphenoxy) phenylamino) -3-oxopropyl) -4-hydroxybenzamide (Compound 26)
  • Compound 26 was synthesized according to the same production method as compound 24 except that 3- (4-methoxyphenoxy) aniline was used instead of 3- (4-chlorophenoxy) aniline.
  • Example 27 N- (4- (3- (4-methoxyphenoxy) phenylamino) -4-oxobutyl) -4-hydroxybenzamide (Compound 27)
  • Compound 27 comprises 3- (4-methoxyphenoxy) aniline instead of 3- (4-chlorophenoxy) aniline, and N- (tert-butoxy) instead of N- (tert-butoxycarbonyl) - ⁇ -alanine.
  • the compound was synthesized according to the same production method as compound 24 except that carbonyl) -4-aminobutanoic acid was used.
  • Example 28 N- (2- (2- (4-methoxyphenoxy) phenylamino) -2-oxoethyl) -4-hydroxybenzamide (Compound 28)
  • Compound 28 comprises 2- (4-methoxyphenoxy) aniline instead of 3- (4-chlorophenoxy) aniline and N- (tert-butoxy) instead of N- (tert-butoxycarbonyl) - ⁇ -alanine.
  • the compound was synthesized according to the same production method as compound 24 except that carbonyl) glycine was used.
  • Compound 29 was synthesized according to the same production method as compound 24 except that 2- (4-methoxyphenoxy) aniline was used instead of 3- (4-chlorophenoxy) aniline.
  • Compound 30 was synthesized according to the same production method as compound 24 except that 4- (4-methoxyphenoxy) aniline was used instead of 3- (4-chlorophenoxy) aniline.
  • Example 34 N- (3- (4-chlorophenoxy) phenyl) -1- (4-hydroxyphenylcarbonyl) pyrrolidine-2-carboxamide (Compound 34)
  • Compound 34 was synthesized according to the same production method as compound 24 except that N- (tert-butoxycarbonyl) -DL-proline was used instead of N- (tert-butoxycarbonyl) - ⁇ -alanine.
  • Example 35 N- (3- (3- (4-chlorophenoxy) phenylamino) -3-oxopropyl) thiophene-2-carboxamide (Compound 35)
  • Compound 35 was synthesized according to the same production method as compound 24 except that 2-thiophenecarboxylic acid was used instead of 4- (methoxymethoxy) benzoic acid.
  • Example 37 N- (3- (3- (4-Chlorophenoxy) phenylamino) -3-oxopropyl) pyridine-4-carboxamide (Compound 37) Compound 37 was synthesized according to the same production method as compound 24 except that isonicotinic acid was used in place of 4- (methoxymethoxy) benzoic acid.
  • Example 38 N- (3- (3- (3,4-dichlorophenoxy) phenylamino) -3-oxopropyl) -4-hydroxybenzamide (Compound 38)
  • Compound 38 was synthesized according to the same production method as compound 24 except that 3- (3,4-dichlorophenoxy) aniline was used instead of 3- (4-chlorophenoxy) aniline.
  • Test Example 1 Method for confirming luciferase expression inhibitory effect under control of OPN promoter Reporter vector pOPN1-luc, in which a human OPN promoter sequence (-765 to 23) is incorporated into the multicloning site of pGL-3 vector basic (Promega), Luciferase is expressed when transfected into animal cells.
  • the pOPN1-luc was transferred to a human non-small cell lung cancer cell line A549 together with pPUR (Clontech) expressing a puromycin resistance gene (puromycin-N-acetyl-transferase gene). Cells expressing luciferase that were transfected and capable of growing in puromycin supplemented media were selected. The selected cells were referred to as “A549 / OPNluc cells” and used for observation of the luciferase expression inhibitory effect under the control of the OPN promoter described below.
  • the test compound was added to the culture medium of A549 / OPNluc cells, and the influence on the intracellular luciferase expression level was observed.
  • the test compound has a cytotoxicity or cytostatic effect, the total luciferase expression level decreases due to the decrease in the number of living cells depending on the concentration of the test compound, and the OPN promoter under the test compound is controlled. It is conceivable that the effect of inhibiting luciferase expression in sucrose cannot be evaluated correctly.
  • a WST assay which is a method for quantifying cell proliferation ability or cell viability by colorimetry, was first carried out to obtain an IC50 (50% cell proliferation inhibitory concentration) for cell proliferation of the test compound. Subsequently, luciferase activity was measured, and EC50 (50% luciferase expression inhibitory concentration) for luciferase expression under the control of OPN promoter of the test compound was determined.
  • (1-1) WST assay A549 / OPNluc cells are suspended in DMEM medium supplemented with 10% fetal calf serum (FCS) and 1% penicillin streptomycin (P / S) to 3 ⁇ 10 4 cells / mL. This was dispensed 100 ⁇ L into each well of a 96-well plate. Since the test was performed in triplicate, a control group and a test compound addition group at each concentration were prepared in 3 wells. After dispensing, the 96-well plate was cultured for 24 ⁇ 4 hours in a carbon dioxide incubator (37 ° C., 5% CO 2 condition).
  • FCS fetal calf serum
  • P / S penicillin streptomycin
  • the compound of the present invention was made into a 50 mmol / L solution with dimethyl sulfoxide (DMSO) and stored at ⁇ 80 ° C.
  • DMSO dimethyl sulfoxide
  • the compound solution was diluted as a 2-fold dilution series with DMSO (usually in the range of 0.31 mmol / L to 20 mmol / L), and test compound solutions with different concentrations by two were prepared for the WST assay.
  • DMSO alone (control) or diluted test compound (specimen) solution was dispensed into each well to which the cell suspension was added (200-fold dilution). After mixing with a vortex mixer, the 96-well plate was cultured in a carbon dioxide incubator (37 ° C., 5% CO 2 condition) for 48 ⁇ 4 hours. Subsequently, 10 ⁇ L of Premix WST-1 Reagent (Takara Bio) was added to each well.
  • the 96-well plate After mixing in a vortex mixer, the 96-well plate is incubated at 37 ° C, 5% CO 2 and after 60 or 120 minutes using a microplate reader (Bio-Rad; Benchmark or Thermo Scientific; Varioskan Flash) The absorbance value (450 nm) of was measured.
  • the absorbance values of the control well and the sample well at each concentration were input to an Excel file, and the percentage of the absorbance value of the sample well at each concentration relative to the average absorbance value of the control was determined.
  • An approximate curve equation was obtained from the value by the least square method, and an IC50 value was calculated.
  • Luciferase Assay Substrate contained in Luciferase Assay Systems (Promega: Cat # E1500) was dissolved in Luciferase Assay Buffer (LAB) to prepare a luciferase reagent.
  • LAB Luciferase Assay Buffer
  • 5 ⁇ CellLRCulture Lysis Reagent (hereinafter referred to as CCLR) was diluted 5-fold with water to prepare 1 ⁇ CCLR.
  • the control RLU and the RLU of each concentration sample were input to an Excel file, and the percentage of the RLU of each concentration sample relative to the average value of the control RLU was determined.
  • An approximate curve equation was obtained from the value by the least square method, and an EC50 value was calculated. Also, the approximate curve equation was calculated by the least squares method using the ratio of the RLU of each concentration sample to the average value of the control RLU divided by the percent of the absorbance value of the WST assay at the same concentration of the compound (relative to the control).
  • the corrected EC50 value was calculated.
  • the corrected EC50 value is an EC50 value corrected for a decrease in RLU due to a decrease in the number of living cells depending on the concentration of the test compound due to cytotoxicity or cytostatic effect.
  • Table 1 shows IC50 values, EC50 values, and corrected EC50 values obtained using Compounds 1-38 as test compounds.
  • Test Example 2 Inhibitory effect of compounds 1, 6, 19 , 26, and 38 on OPN production of human cancer cell-derived cell line Breferamide (compound 1), human liver cancer-derived cell line HepG2, human non-small cell lung cancer-derived cell line A549
  • Breferamide compound 1
  • human liver cancer-derived cell line HepG2 human non-small cell lung cancer-derived cell line A549
  • R & D systems Human Osteopontin Immunoassay kit
  • a confirmation test was conducted by comparing the amount of OPN in the compound 1 addition group and the amount of OPN in the DMSO addition group (control).
  • compounds 6, 19, 26 and 38, which are breferamide derivatives were added to the culture solution of non-small cell lung cancer-derived cell line A549, and the same confirmation test was performed.
  • FIGS. 3 and 4 Preparation of cell culture medium (FIGS. 3 and 4) Suspend OUR-10 cells or QGP-1 cells in RPMI1640 medium supplemented with 10% FCS and 1% P / S to 4 ⁇ 10 4 cells / mL, respectively. Noted. Since the test was carried out in duplicate, 2 wells were prepared for each of the control group and the test compound addition group at each concentration. The 24-well plate was cultured for 24 ⁇ 4 hours in a carbon dioxide incubator (37 ° C., 5% CO 2 condition).
  • a 50 mmol / L solution of compound 6 stored at ⁇ 80 ° C. was diluted with DMSO to prepare concentrations of 2.5 mmol / L and 5 mmol / L (FIG. 5), respectively.
  • 2 ⁇ L each of a solution of compound 6 at two concentrations was added to each well in which A549 cells were cultured. Only 2 ⁇ L of DMSO was added to control wells.
  • 50 mmol / L solutions of compounds 19, 26 and 38 stored at ⁇ 80 ° C. were diluted with DMSO to concentrations of 3.125 mmol / L and 6.25 mmol / L (FIGS. 8 to 10), respectively.
  • Prepared. 2 ⁇ L each of solutions of two concentrations of compound 19, 26, and 38 was added to each well in which A549 cells were cultured. Only 2 ⁇ L of DMSO was added to control wells.
  • 1 ⁇ CCLR was prepared by diluting 5 ⁇ CCLR used in the luciferase assay 5 times with water, except for D-PBS ( ⁇ ). 200 ⁇ L of the prepared 1 ⁇ CCLR was dispensed into each well. Subsequently, the 24-well plate was placed on a rocking shaker and rocked for 15 minutes.
  • OPN standard was serially diluted with diluent RD5-24 included in the kit.
  • the required number of OPN Microplate and RD1-6 included in the kit were prepared, and 100 ⁇ L of RD1-6 was dispensed into each well.
  • the diluted OPN standard (vials A to H) and the sample were added in an additional 50 ⁇ L to the wells to which RD1-6 was added. Subsequently, the upper part of the well was covered with a seal and allowed to stand at room temperature for 2 hours. During this time, Wash Buffer Concentrate included in the kit was diluted with water to prepare Wash Buffer.
  • Substrate® Solution was dispensed at 200 ⁇ L per well and allowed to stand at room temperature for 30 minutes, protected from light. Subsequently, 50 ⁇ L of Stop Solution contained in the kit was added to each well and gently mixed with a vortex mixer until the whole well solution turned from blue to yellow. After mixing, absorbance values (450 nm and 570 nm) were measured using a microplate reader (Bio-Rad; Benchmark or Thermo ⁇ ⁇ ⁇ Scientific; Varioskan Flash). The value of OD 570 nm was subtracted from OD 450 nm of all measurement data, and this value was used in the following calculation.
  • a calibration curve was created from the absorbance values of the calibration curve samples.
  • the amount of OPN protein was calculated from the absorbance value of each sample using the equation of the calibration curve.
  • BCA reagent A and BCA reagent B included in the protein measurement kit were mixed to prepare Working® Reagent.
  • a calibration curve sample vials A to F
  • a 10-fold diluted protein measurement sample were each dispensed into a 96-well plate by 25 ⁇ L. Since the test was performed in duplicate, 2 wells were prepared for each of the control group and the test compound addition group at each concentration.
  • a calibration curve was created from the absorbance values of the calibration curve samples.
  • the total protein concentration of the diluted sample in each well was calculated using the equation of the calibration curve. Further, the total protein concentration was multiplied by the dilution factor (10 times) to calculate the total protein concentration of the sample.
  • OPN amount (amount per 1 mL of culture supernatant) was converted per the total amount (0.5 mL) of the sample for ELISA measurement. The converted value was divided by the amount of protein in the total amount of protein measurement sample (0.2 mL) in the same well as the sample for which the amount of OPN was obtained, and the amount of OPN was converted to 1 mg of total cell protein. The effect of Compound 1 administration was examined by the amount of OPN per mg of the protein.
  • FIG. 2 is a graph showing the effect of suppressing OPN production in A549 cells by adding Compound 1.
  • Compound 1 was confirmed to suppress OPN production in a concentration-dependent manner when the concentration was increased from 12.5 ⁇ mol / L to 25 ⁇ mol / L.
  • concentration was 12.5 ⁇ mol / L and 25 ⁇ mol / L, it was confirmed that OP549 production in A549 cells was significantly suppressed compared to the control group at a risk rate of less than 1%.
  • FIG. 4 shows a graph showing the effect of suppressing the OPN production in QGP-1 cells by the addition of Compound 1.
  • the OPN amount the two values each carried out in duplicate in the control group and the compound 1 addition group showed almost the same value.
  • Compound 1 showed no difference in OPN production from the control group at a concentration of 20 ⁇ mol / L, but at a concentration of 40 ⁇ mol / L, QGP-1 cells were compared to the control group. It was confirmed that OPN production was significantly suppressed.
  • FIG. 5 is a graph showing the effect of suppressing OPN production in A549 cells by adding Compound 6.
  • Compound 6 was confirmed to suppress OPN production in a concentration-dependent manner when the concentration was increased from 10 ⁇ mol / L to 20 ⁇ mol / L.
  • concentrations were 10 ⁇ mol / L and 20 ⁇ mol / L, it was confirmed that OP549 production in A549 cells was significantly suppressed compared to the control group at a risk rate of less than 1%.
  • FIG. 8 is a graph showing the effect of suppressing OPN production in A549 cells by the addition of Compound 19.
  • Compound 19 was confirmed to suppress OPN production in a concentration-dependent manner when the concentration was increased from 12.5 ⁇ mol / L to 25 ⁇ mol / L.
  • concentration was 12.5 ⁇ mol / L and 25 ⁇ mol / L, it was confirmed that OP549 production in A549 cells was significantly suppressed compared to the control group at a risk rate of less than 1%.
  • FIG. 9 shows a graph showing the effect of suppressing OPN production in A549 cells by the addition of Compound 26.
  • Compound 26 was confirmed to suppress OPN production in a concentration-dependent manner when the concentration was increased from 12.5 ⁇ mol / L to 25 ⁇ mol / L.
  • concentration was 12.5 ⁇ mol / L and 25 ⁇ mol / L, it was confirmed that OP549 production in A549 cells was significantly suppressed compared to the control group at a risk rate of less than 1%.
  • Compound 1 suppresses OPN production of human liver cancer cell line HepG2, human non-small cell lung cancer cell line A549, human renal cell cancer cell line OUR-10, and human pancreatic cancer cell line QGP-1. Confirmed to do. Further, FIG. 5 confirms that compound 6 suppresses OPN production of human non-small cell lung cancer-derived cell line A549, and from FIGS. 8 to 10, compounds 19, 26 and 38 show that human non-small cell It was confirmed that OPN production of cell lung cancer-derived cell line A549 was suppressed.
  • the human non-small cell lung cancer-derived cell line A549 is 3.5 ⁇ 10 5 cells / mL in DMEM medium supplemented with 10% FCS and 1% P / S. So that it was suspended. 500 ⁇ L (1.75 ⁇ 10 5 cells) of the cell suspension was dispensed into each well of the 24-well plate. Since the test was performed in triplicate, a control group and a test compound addition group at each concentration were prepared in 3 wells. After dispensing, the 24-well plate was cultured for 24 ⁇ 4 hours in a carbon dioxide incubator (37 ° C., 5% CO 2 condition).
  • Compound 1 as a test compound was made into a 50 mmol / L solution in DMSO and stored at ⁇ 80 ° C.
  • the Compound 1 solution was diluted with DMSO to prepare concentrations of 3.125 mmol / L and 6.25 mmol / L, respectively.
  • concentrations of 3.125 mmol / L and 6.25 mmol / L were prepared.
  • the 24-well plate was shaken to mix the solution in the well, and then cultured in a carbon dioxide incubator (37 ° C., 5% CO 2 condition) for 24 ⁇ 4 hours.
  • Wound healing rate (%) 100-[Wound area 2 days after wound / Wound area immediately after wound] ⁇ 100 Wound healing rate (%) was calculated based on the above formula.
  • the average value of the wound healing rate (%) was calculated for each of the control group and the group administered with Compound 1 at two concentrations.
  • the wound healing rate (%) of the compound treatment group with respect to the wound healing rate of the control group was also calculated.
  • FIG. 6 shows a graph showing the wound healing inhibitory effect of A549 cells by the addition of Compound 1.
  • Compound 1 showed no difference in wound healing rate from the control group at a concentration of 12.5 ⁇ mol / L, but at a risk rate of less than 1% at a concentration of 25 ⁇ mol / L, the control group A significant difference in wound healing rate was confirmed. That is, it is recognized that Compound 1 significantly inhibits wound healing of A549 cells when the concentration is 25 ⁇ mol / L.
  • Matrigel is an artificial basement membrane matrix for cell culture and is a soluble basement membrane preparation extracted from Engelbreth-Holm-Swarm (EHS) mouse sarcoma that is rich in extracellular matrix proteins.
  • the main ingredients of Matrigel are laminin, collagen IV, heparan sulfate proteoglycan, and entactin / nidogen.
  • Matrigel also includes TGF- ⁇ , epidermal growth factor, insulin-like growth factor, fibroblast growth factor, tissue plasminogen activator, and other growth factors that are naturally produced in EHS tumors.
  • the fluorescent dye was incorporated into A549 cells that had infiltrated the outside of the membrane, it was peeled off from the membrane, and the fluorescence intensity was measured.
  • a fluorescent dye was incorporated into cells for preparing a calibration curve whose number was known, and a calibration curve was created from the fluorescence intensity.
  • the number of infiltrating cells of the test sample whose cell number is unknown was determined from the approximate curve equation.
  • Cancer cells produce OPN upon stimulation of fetal calf serum added to the outer medium.
  • OPN is present in the culture medium, the cells bind to OPN, which produces an enzyme that degrades collagen called Matrix Metalloproteinase (MMP), dissolves Matrigel, and further increases the migration ability. Move to the well.
  • MMP Matrix Metalloproteinase
  • the human non-small cell lung cancer-derived cell line A549 is 1.8 ⁇ 10 5 cells / mL in DMEM medium supplemented with 10% FCS and 1% P / S. Suspended. 10 mL of this suspension was dispensed into a 75 cm 2 flask and cultured in a carbon dioxide incubator (37 ° C., 5% CO 2 condition) for 24 ⁇ 4 hours.
  • a 6 ⁇ 10 4 cell / mL suspension of A549 cells was prepared for the preparation of a calibration curve, 5 mL of the suspension was dispensed into a 25 cm 2 flask, and a carbon dioxide incubator (37 ° C., The cells were cultured for 24 ⁇ 4 hours under 5% CO 2 conditions. This day was designated as day 0 of the work.
  • Matrigel (10 mg / mL: BD Biosciences) was thawed on ice. Cell culture inserts (for 24 wells, 8.0 ⁇ m pore: BD Biosciences) and serum-free medium were ice-cooled. Matrigel was diluted 25-fold with an ice-cold serum-free medium to prepare a Matrigel solution.
  • a necessary number of cell culture inserts were set in a 24-well plate, 50 ⁇ L of the Matrigel solution was dispensed into the cell culture inserts, and the Matrigel solution was permeated throughout the membrane at the tip of the chip. Subsequently, the 24-well plate was placed in a carbon dioxide incubator (37 ° C., 5% CO 2 condition) for 1-2 hours.
  • CDS-dispensed flask Place the CDS-dispensed flask in a carbon dioxide incubator (37 ° C, 5% CO 2 condition) and heat for about 20 minutes (rocking every 5 minutes) to detach the cells from the bottom of the flask. (This operation is called “cell detachment” by CDS.)
  • a serum-free medium 8 mL of a suspension having a cell concentration of 2 ⁇ 10 5 cells / mL was prepared. After coating the surface with Matrigel solution, 0.5 mL (1 ⁇ 10 5 cells) of the prepared cell suspension was gently dispensed onto a culture insert incubated for 1-2 hours in a carbon dioxide incubator. The test was performed in triplicate.
  • a new 24-well plate was prepared, and 0.35 mL of 1 ⁇ calcein AM solution was dispensed into each well. While lifting the insert washed with D-PBS (-) with tweezers, remove D-PBS (-) in the insert with a pipette and transfer it to a well into which 1x calcein AM solution has been dispensed (of the cells of the test insert). Fluorescent staining). The 24-well plate to which the insert was transferred was incubated for 1 hour in a carbon dioxide incubator (37 ° C., 5% CO 2 condition). Tap the side of the plate every 30 minutes.
  • FIG. 7 shows a graph showing the effect of inhibiting matrix infiltration of A549 cells by addition of Compound 1 or Compound 6.
  • the number of infiltrating cells in the control group was compared with the concentration of Compound 1 of 12.5 ⁇ mol / L and 25 ⁇ mol / L, the number of infiltrating cells decreased depending on the concentration of Compound 1. It was confirmed that the number of infiltrating cells of A549 was significantly suppressed compared to the control group at a risk rate of less than 5% at a concentration of 12.5 ⁇ mol / L and at a risk rate of less than 1% at a concentration of 25 ⁇ mol / L. It was done.

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Abstract

 本発明は、式: [式中、R、R、R、R、R、R、R、m、n、p、XおよびYは、明細書に定義の通りである] で表される化合物またはその医薬的に許容される塩を含む、癌を含む、OPN産生亢進に起因する疾患の治療および/または予防に有用な治療剤を提供する。

Description

アミド誘導体
 本発明は、新規アミド誘導体に関する。また、本発明は、癌を含む、オステオポンチン(OPN)産生亢進に起因する疾患の治療および/または予防に有用であり得る。
 近年、OPN発現が腫瘍の進行度と相関することが示され、OPNが癌の転移に関連することが示唆されている。例えば、肺癌、肝癌、乳癌または前立腺癌に罹患している患者の血漿からOPNが検出されたこと、そして、正常部と比較して癌部のOPN mRNAは上昇していることが報告されている(非特許文献1および2)。つまり、腫瘍細胞の転移および浸潤を促進するOPNの産生を抑制することにより癌の転移を防ぐことができ、ひいては癌治療における新たな戦略となりうる。以上のことから、OPN産生を阻害する化合物を開発することにより、癌を含む、種々の疾患の新規な治療が想定される。
 これまでに、OPN産生阻害作用を有する薬剤として、PPAR-γ(Peroxisome Proliferator-Activated Receptor-gamma)アゴニストである、インスリン抵抗性改善薬(トログリタゾン、ピオグリタゾン、ロシグリタゾン等)、非ステロイド性抗炎症剤(インドメタシン、イブプロフェン等)およびHMG-CoA還元酵素阻害剤である、スタチン系高コレステロール血症治療剤(ロスバスタチン、シンバスタチン、フルバスタチン等)が知られているが、本発明の化合物と同様の構造を有する化合物は知られていない。
 一方、N-(3-(2-アミノ-3-(4-ヒドロキシフェノキシ)フェニル)-3-オキソプロピル)-4-ヒドロキシベンズアミド(以下、ブレフェラミド(brefelamide)と称することもある)は、細胞性粘菌から単離され、ヒト星状細胞腫細胞において上皮成長因子受容の減少によってERKリン酸化を阻害し、細胞増殖を阻害する活性が認められている(非特許文献3~5)。
Senger DR, Perruzzi CA, Gracey CF, Papadopoulos A, Tenen DG. (1988)  Secreted phosphoproteins associated with neoplastic transformation : close homology with plasma proteins cleaved during blood coagulation. Cancer Res 48, 5770 - 5774 Brown LF, PapadopoμLos-Seigiou A, Brygida B, Manseau EJ, Tognazzi K, Perruzzi CA, Dvorak HF, Senger DR. (1994) Osteopontin expression in human carcinoma. Am J Pathol. 145, 610 - 623 Kikuchi H. et al., J. Org. Chem., 70, 8854-8858 (2005) Kikuchi H., YAKUGAKU ZASSHI 127(9) 1431-1439 (2007) Shigeyoshi Honma et al., European Journal of Pharmacology, 616 (2009) 38-42
 本発明は、新規なOPN産生阻害作用を有する化合物を検討すると共に、癌を含む、OPN産生亢進に起因する疾患の治療および/または予防に有用な治療剤を提供することを目的とする。
 本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意検討した結果、細胞性粘菌から単離されたブレフェラミドがOPN産生阻害作用を有することを見出し、さらに、ブレフェラミドの誘導体として、下記式で表される化合物も強力なOPN産生の阻害作用を有することを見出し、本発明を完成させた。本発明によれば、下記式で表されるアミド誘導体(ブレフェラミドを含む)またはその医薬的に許容される塩(以下、「本発明の化合物」と称することもある)、およびそのOPN産生阻害作用による医薬用途発明が提供される。
 すなわち、本発明は、以下の態様の発明を提供するものである。
[1] 式:
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000005
[式中、
 RおよびRは、各々独立して、水素原子、C1-6アルキル、C2-6アルケニル、C2-6アルキニル、C3-8シクロアルキル、C3-8ヘテロシクロアルキル、C6-10アリールまたは5~10員のヘテロアリールであり、ここで、該C1-6アルキル、C2-6アルケニル、C2-6アルキニル、C3-8シクロアルキル、C3-8ヘテロシクロアルキル、C6-10アリールおよび5~10員のヘテロアリールは、各々独立して、置換可能な位置で、ハロゲン、ヒドロキシ、メルカプト、シアノ、ニトロ、アミノ、モノ-もしくはジ-C1-6アルキルアミノ、C1-4アシル、C1-4アシルアミノ、C1-4アルキルスルホニル、C1-6アルキル、C1-6ハロアルキル、C1-6アルコキシ、C1-6ハロアルコキシ、C2-6アルケニル、C2-6アルキニルおよび-ORからなる群から選択される1つまたは同一もしくは異なる2つ以上の基で置換されていてもよく;
 Rは、水素原子、アミノ、独立して選択される1もしくは2個のC1-6アルキルで置換されるアミノ、ヒドロキシまたはC1-6アルコキシであり;
 Rは、水素原子、ハロゲン、アミノ、独立して選択される1もしくは2個のC1-6アルキルで置換されるアミノ、C1-6アルキルまたはC1-6ハロアルキルであり;
 Rは、C2-6アルケニル、C2-6アルキニル、C3-8シクロアルキル、C3-8ヘテロシクロアルキル、C6-10アリールまたは5~10員のヘテロアリールであり、ここで、該C2-6アルケニル、C2-6アルキニル、C3-8シクロアルキル、C3-8ヘテロシクロアルキル、C6-10アリールおよび5~10員のヘテロアリールは、各々独立して、置換可能な位置で、ハロゲン、ヒドロキシ、メルカプト、シアノ、ニトロ、アミノ、モノ-もしくはジ-C1-6アルキルアミノ、C1-4アシル、C1-4アシルアミノ、C1-4アルキルスルホキシ、C1-6アルキル、C1-6ハロアルキル、C1-6アルコキシ、C1-6ハロアルコキシ、C2-6アルケニルおよびC2-6アルキニルからなる群から選択される1つまたは同一もしくは異なる2つ以上の基で置換されていてもよく;
 RおよびRは、各々独立して、水素原子またはC1-4アルキルであり;
 nは0~4であり、ただし、nが1~4であり、RがC1-4アルキルである場合、Rの末端の炭素原子がnの括弧で示されたアルキレン基の1つの炭素と結合して4~6員の環を形成してもよく;
 mは0または1であり;
 pは0または1であり; 
 XはOであるか、またはpが0であり、Rがアミノもしくは置換アミノでベンゼン環の2位に結合する場合は、XがCHとしてRの窒素原子と結合してピロール環を形成してもよく;および
 YはCHまたはNHである]
で表される化合物またはその医薬的に許容される塩、ただし、N-(3-(2-アミノ-3-(4-ヒドロキシフェノキシ)フェニル)-3-オキソプロピル)-4-ヒドロキシベンズアミドは除く。
[2] 式(I):
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000006
[式中、R、R、R、RおよびXは、[1]に定義されている通りである]
で表される、[1]記載の化合物またはその医薬的に許容される塩。
[3] Rが、C3-8シクロアルキル、C3-8ヘテロシクロアルキル、C6-10アリールまたは5~10員のヘテロアリールであり、ここで、該C3-8シクロアルキル、C3-8ヘテロシクロアルキル、C6-10アリールおよび5~10員のヘテロアリールは、各々独立して、置換可能な位置で、ハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、モノ-もしくはジ-C1-6アルキルアミノ、C1-4アシル、C1-4アシルアミノ、C1-6アルキル、C1-6ハロアルキル、C1-6アルコキシ、およびC1-6ハロアルコキシからなる群から選択される1つまたは同一もしくは異なる2つ以上の基で置換されていてもよく;
 Rがベンゼン環の2位に結合し、水素原子、アミノまたはヒドロキシであり;
 ORがベンゼン環の3位に結合し、Rがフェニルであり、ここで、該フェニルは、置換可能な位置で、ハロゲン、ヒドロキシ、C1-6アルキル、C1-6ハロアルキル、C1-6アルコキシ、およびC1-6ハロアルコキシからなる群から選択される1つまたは同一もしくは異なる2つ以上の基で置換されていてもよく;
 Rが水素原子、ハロゲンまたはアミノである、
[1]または[2]記載の化合物またはその医薬的に許容される塩。
[4] Rが、C3-8シクロアルキル、テトラヒドロピラニル、ピリジル、チエニルまたはフェニルであり、ここで、該C3-8シクロアルキル、テトラヒドロピラニル、ピリジル、チエニルおよびフェニルは、各々独立して、置換可能な位置で、ハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、C1-4アシル、C1-4アシルアミノ、C1-6アルキル、C1-6ハロアルキル、C1-6アルコキシおよびC1-6ハロアルコキシからなる群から選択される1つまたは同一もしくは異なる2つの基で置換されていてもよい、[1]~[3]のいずれかに記載の化合物またはその医薬的に許容される塩。
[5] Rがフェニルであり、フェニル基の3位および/または4位が独立して、ハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、C1-4アシルアミノまたはC1-6アルコキシで置換される、[1]~[4]のいずれかに記載の化合物またはその医薬的に許容される塩。
[6] Rがフェニルであり、フェニル基の3位および/または4位が独立して、ハロゲン、ヒドロキシ、C1-6アルキル、C1-6ハロアルキル、C1-6アルコキシまたはC1-6ハロアルコキシで置換される、[1]~[5]のいずれかに記載の化合物またはその医薬的に許容される塩。
[7] Rが水素原子である、[1]~[6]のいずれかに記載の化合物またはその医薬的に許容される塩。
[8] mが1であり、XがOである、[1]~[7]のいずれかに記載の化合物またはその医薬的に許容される塩。
[9] mが1であり、XがOであり、pが1である、[1]~[7]のいずれかに記載の化合物またはその医薬的に許容される塩。
[10] nが1~4であり、RがC1-4アルキルで、Rの末端の炭素原子がnの括弧で示されたアルキレン基の1つの炭素と結合して4~6員の環を形成する、[1]~[9]のいずれかに記載の化合物またはその医薬的に許容される塩。
[11] 4-ヒドロキシ-N-(2-(7-(4-ヒドロキシフェノキシ)-1H-インドール-3-イル)エチル)ベンズアミド(化合物2);
 N-(3-(2,3-ジヒドロキシフェニル)-3-オキソプロピル)-4-(4-ヒドロキシフェノキシ)ベンズアミド(化合物3);
 N-(3-(2-アミノ-3-(4-ヒドロキシフェノキシ)フェニル)-3-オキソプロピル)-4-メトキシベンズアミド(化合物4);
 N-(3-(2-アミノ-3-(4-メトキシフェノキシ)フェニル)-3-オキソプロピル)-4-メトキシベンズアミド(化合物5);
 N-(3-(2-アミノ-3-(4-メトキシフェノキシ)フェニル)-3-オキソプロピル)-4-ヒドロキシベンズアミド(化合物6);
 N-(3-(2-アミノ-3-(4-ヒドロキシフェノキシ)フェニル)-3-オキソプロピル)-3-メトキシベンズアミド(化合物7);
 N-(3-(2-アミノ-3-(4-ヒドロキシフェノキシ)フェニル)-3-オキソプロピル)-アセトアミド(化合物8);
 N-(3-(2-アミノ-3-(4-ヒドロキシフェノキシ)フェニル)-3-オキソプロピル)-4-フルオロベンズアミド(化合物9);
 N-(3-(2-アミノ-3-(4-ヒドロキシフェノキシ)フェニル)-3-オキソプロピル)-シクロヘキサンカルボキサミド(化合物10);
 N-(3-(2-アミノ-3-(4-ヒドロキシフェノキシ)フェニル)-3-オキソプロピル)-(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)-カルボキサミド(化合物11);
 N-(3-(2-アミノ-3-メトキシフェニル)-3-オキソプロピル)-4-ヒドロキシベンズアミド(化合物12);
 N-(3-(2-アミノ-3-ヒドロキシフェニル)-3-オキソプロピル)-4-ヒドロキシベンズアミド(化合物13);
 N-(3-(2-アミノ-3-(4-メチルフェノキシ)フェニル)-3-オキソプロピル)-4-ヒドロキシベンズアミド(化合物14);
 N-(3-(2-アミノ-3-(4-(トリフルオロメチル)フェノキシ)フェニル)-3-オキソプロピル)-4-ヒドロキシベンズアミド(化合物15);
 N-(3-(2-アミノ-3-(3,4-ジメトキシフェノキシ)フェニル)-3-オキソプロピル)-4-ヒドロキシベンズアミド(化合物16);
 N-(3-(2-アミノ-3-(4-クロロフェノキシ)フェニル)-3-オキソプロピル)-4-ヒドロキシベンズアミド(化合物17);
 N-(3-(2-アミノ-3-(4-クロロフェノキシ)フェニル)-3-オキソプロピル)-4-アミノベンズアミド(化合物19);
 N-(3-(2-アミノ-3-(4-クロロフェノキシ)フェニル)-3-オキソプロピル)-4-アセチルアミノベンズアミド(化合物20);
 N-(2-(3-(4-メトキシフェノキシ)ベンゾイルアミノ)エチル)-4-ヒドロキシベンズアミド(化合物21);
 N-(2-(2-(4-メトキシフェノキシ)ベンゾイルアミノ)エチル)-4-ヒドロキシベンズアミド(化合物22);
 N-(4-ヒドロキシフェニル)-4-(3-(4-クロロフェノキシ)フェニルアミノ)-4-オキソブタンアミド(化合物23);
 N-(3-(3-(4-クロロフェノキシ)フェニルアミノ)-3-オキソプロピル)-4-ヒドロキシベンズアミド(化合物24);
 N-(2-(3-(4-メトキシフェノキシ)フェニルアミノ)-2-オキシエチル)-4-ヒドロキシベンズアミド(化合物25);
 N-(3-(3-(4-メトキシフェノキシ)フェニルアミノ)-3-オキソプロピル)-4-ヒドロキシベンズアミド(化合物26);
 N-(4-(3-(4-メトキシフェノキシ)フェニルアミノ)-4-オキソブチル)-4-ヒドロキシベンズアミド(化合物27);
 N-(2-(2-(4-メトキシフェノキシ)フェニルアミノ)-2-オキソエチル)-4-ヒドロキシベンズアミド(化合物28);
 N-(3-(2-(4-メトキシフェノキシ)フェニルアミノ)-3-オキソプロピル)-4-ヒドロキシベンズアミド(化合物29);
 N-(3-(4-(4-メトキシフェノキシ)フェニルアミノ)-3-オキソプロピル)-4-ヒドロキシベンズアミド(化合物30);
 N-(3-(4-クロロフェノキシ)フェニル)-1-(4-ヒドロキシフェニルカルボニル)アゼチジン-3-カルボキサミド(化合物31);
 N-(3-(4-クロロフェノキシ)フェニル)-1-(4-ヒドロキシフェニルカルボニル)ピロリジン-3-カルボキサミド(化合物32);
 N-(3-(4-クロロフェノキシ)フェニル)-1-(4-ヒドロキシフェニルカルボニル)ピペリジン-3-カルボキサミド(化合物33);
 N-(3-(4-クロロフェノキシ)フェニル)-1-(4-ヒドロキシフェニルカルボニル)ピロリジン-2-カルボキサミド(化合物34);
 N-(3-(3-(4-クロロフェノキシ)フェニルアミノ)-3-オキソプロピル)チオフェン-2-カルボキサミド(化合物35);
 N-(3-(3-(4-クロロフェノキシ)フェニルアミノ)-3-オキソプロピル)チオフェン-3-カルボキサミド(化合物36);
 N-(3-(3-(4-クロロフェノキシ)フェニルアミノ)-3-オキソプロピル)ピリジン-4-カルボキサミド(化合物37);および
 N-(3-(3-(3,4-ジクロロフェノキシ)フェニルアミノ)-3-オキソプロピル)-4-ヒドロキシベンズアミド(化合物38)
からなる群から選択される、[1]~[10]のいずれかに記載の化合物またはその医薬的に許容される塩。
[12] [1]~[11]のいずれかに記載の化合物またはその医薬的に許容される塩、および医薬的に許容される添加剤を含有する医薬組成物。
[13] オステオポンチン産生亢進に起因する疾患の治療に使用するための、[12]記載の医薬組成物。
[14] 式:
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000007
[式中、
 RおよびRは、各々独立して、水素原子、C1-6アルキル、C2-6アルケニル、C2-6アルキニル、C3-8シクロアルキル、C3-8ヘテロシクロアルキル、C6-10アリールまたは5~10員のヘテロアリールであり、ここで、該C1-6アルキル、C2-6アルケニル、C2-6アルキニル、C3-8シクロアルキル、C3-8ヘテロシクロアルキル、C6-10アリールおよび5~10員のヘテロアリールは、各々独立して、置換可能な位置で、ハロゲン、ヒドロキシ、メルカプト、シアノ、ニトロ、アミノ、モノ-もしくはジ-C1-6アルキルアミノ、C1-4アシル、C1-4アシルアミノ、C1-4アルキルスルホニル、C1-6アルキル、C1-6ハロアルキル、C1-6アルコキシ、C1-6ハロアルコキシ、C2-6アルケニル、C2-6アルキニルおよび-ORからなる群から選択される1つまたは同一もしくは異なる2つ以上の基で置換されていてもよく;
 Rは、水素原子、アミノ、独立して選択される1もしくは2個のC1-6アルキルで置換されるアミノ、ヒドロキシまたはC1-6アルコキシであり;
 Rは、水素原子、ハロゲン、アミノ、独立して選択される1もしくは2個のC1-6アルキルで置換されるアミノ、C1-6アルキルまたはC1-6ハロアルキルであり;
 Rは、C2-6アルケニル、C2-6アルキニル、C3-8シクロアルキル、C3-8ヘテロシクロアルキル、C6-10アリールまたは5~10員のヘテロアリールであり、ここで、該C2-6アルケニル、C2-6アルキニル、C3-8シクロアルキル、C3-8ヘテロシクロアルキル、C6-10アリールおよび5~10員のヘテロアリールは、各々独立して、置換可能な位置で、ハロゲン、ヒドロキシ、メルカプト、シアノ、ニトロ、アミノ、モノ-もしくはジ-C1-6アルキルアミノ、C1-4アシル、C1-4アシルアミノ、C1-4アルキルスルホキシ、C1-6アルキル、C1-6ハロアルキル、C1-6アルコキシ、C1-6ハロアルコキシ、C2-6アルケニルおよびC2-6アルキニルからなる群から選択される1つまたは同一もしくは異なる2つ以上の基で置換されていてもよく;
 RおよびRは、各々独立して、水素原子またはC1-4アルキルであり;
 nは0~4であり、ただし、nが1~4であり、RがC1-4アルキルである場合、Rの末端の炭素原子がnの括弧で示されたアルキレン基の1つの炭素と結合して4~6員の環を形成してもよく;
 mは0または1であり;
 pは0または1であり; 
 XはOであるか、またはpが0であり、Rがアミノもしくは置換アミノでベンゼン環の2位に結合する場合は、XがCHとしてRの窒素原子と結合してピロール環を形成してもよく;および
 YはCHまたはNHである]
で表される化合物またはその医薬的に許容される塩を有効成分として含む、オステオポンチン産生亢進に起因する疾患の治療剤。
[15] 式が、式(I):
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000008
[式中、R、R、R、RおよびXは、[14]に定義されている通りである]
で表される、[14]記載の治療剤。
[16] Rが、C3-8シクロアルキル、C3-8ヘテロシクロアルキル、C6-10アリールまたは5~10員のヘテロアリールであり、ここで、該C3-8シクロアルキル、C3-8ヘテロシクロアルキル、C6-10アリールおよび5~10員のヘテロアリールは、各々独立して、置換可能な位置で、ハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、モノ-もしくはジ-C1-6アルキルアミノ、C1-4アシル、C1-4アシルアミノ、C1-6アルキル、C1-6ハロアルキル、C1-6アルコキシ、およびC1-6ハロアルコキシからなる群から選択される1つまたは同一もしくは異なる2つ以上の基で置換されていてもよく;
 Rがベンゼン環の2位に結合し、水素原子、アミノまたはヒドロキシであり;
 ORがベンゼン環の3位に結合し、Rがフェニルであり、ここで、該フェニルは、置換可能な位置で、ハロゲン、ヒドロキシ、C1-6アルキル、C1-6ハロアルキル、C1-6アルコキシ、およびC1-6ハロアルコキシからなる群から選択される1つまたは同一もしくは異なる2つ以上の基で置換されていてもよく;
 Rが水素原子、ハロゲンまたはアミノである、
[14]または[15]記載の治療剤。
[17] Rが、C3-8シクロアルキル、テトラヒドロピラニル、ピリジル、チエニルまたはフェニルであり、ここで、該C3-8シクロアルキル、テトラヒドロピラニル、ピリジル、チエニルおよびフェニルは、各々独立して、置換可能な位置で、ハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、C1-4アシル、C1-4アシルアミノ、C1-6アルキル、C1-6ハロアルキル、C1-6アルコキシおよびC1-6ハロアルコキシからなる群から選択される1つまたは同一もしくは異なる2つの基で置換されていてもよい、[14]~[16]のいずれかに記載の治療剤。
[18] Rがフェニルであり、フェニル基の3位および/または4位が独立して、ハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、C1-4アシルアミノまたはC1-6アルコキシで置換される、[14]~[17]のいずれかに記載の治療剤。
[19] Rがフェニルであり、フェニル基の3位および/または4位が独立して、ハロゲン、ヒドロキシ、C1-6アルキル、C1-6ハロアルキル、C1-6アルコキシまたはC1-6ハロアルコキシで置換される、[14]~[18]のいずれかに記載の治療剤。
[20] Rが水素原子である、[14]~[19]のいずれかに記載の治療剤。
[21] mが1であり、XがOである、[14]~[20]のいずれかに記載の治療剤。
[22] mが1であり、XがOであり、pが1である、[14]~[20]のいずれかに記載の治療剤。
[23] nが1~4であり、RがC1-4アルキルで、Rの末端の炭素原子がnの括弧で示されたアルキレン基の1つの炭素と結合して4~6員の環を形成する、[14]~[22]のいずれかに記載の治療剤。
[24] 化合物が、
 N-(3-(2-アミノ-3-(4-ヒドロキシフェノキシ)フェニル)-3-オキソプロピル)-4-ヒドロキシベンズアミド(化合物1);
 4-ヒドロキシ-N-(2-(7-(4-ヒドロキシフェノキシ)-1H-インドール-3-イル)エチル)ベンズアミド(化合物2);
 N-(3-(2,3-ジヒドロキシフェニル)-3-オキソプロピル)-4-(4-ヒドロキシフェノキシ)ベンズアミド(化合物3);
 N-(3-(2-アミノ-3-(4-ヒドロキシフェノキシ)フェニル)-3-オキソプロピル)-4-メトキシベンズアミド(化合物4);
 N-(3-(2-アミノ-3-(4-メトキシフェノキシ)フェニル)-3-オキソプロピル)-4-メトキシベンズアミド(化合物5);
 N-(3-(2-アミノ-3-(4-メトキシフェノキシ)フェニル)-3-オキソプロピル)-4-ヒドロキシベンズアミド(化合物6);
 N-(3-(2-アミノ-3-(4-ヒドロキシフェノキシ)フェニル)-3-オキソプロピル)-3-メトキシベンズアミド(化合物7);
 N-(3-(2-アミノ-3-(4-ヒドロキシフェノキシ)フェニル)-3-オキソプロピル)-アセトアミド(化合物8);
 N-(3-(2-アミノ-3-(4-ヒドロキシフェノキシ)フェニル)-3-オキソプロピル)-4-フルオロベンズアミド(化合物9);
 N-(3-(2-アミノ-3-(4-ヒドロキシフェノキシ)フェニル)-3-オキソプロピル)-シクロヘキサンカルボキサミド(化合物10);
 N-(3-(2-アミノ-3-(4-ヒドロキシフェノキシ)フェニル)-3-オキソプロピル)-(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)-カルボキサミド(化合物11);
 N-(3-(2-アミノ-3-メトキシフェニル)-3-オキソプロピル)-4-ヒドロキシベンズアミド(化合物12);
 N-(3-(2-アミノ-3-ヒドロキシフェニル)-3-オキソプロピル)-4-ヒドロキシベンズアミド(化合物13);
 N-(3-(2-アミノ-3-(4-メチルフェノキシ)フェニル)-3-オキソプロピル)-4-ヒドロキシベンズアミド(化合物14);
 N-(3-(2-アミノ-3-(4-(トリフルオロメチル)フェノキシ)フェニル)-3-オキソプロピル)-4-ヒドロキシベンズアミド(化合物15);
 N-(3-(2-アミノ-3-(3,4-ジメトキシフェノキシ)フェニル)-3-オキソプロピル)-4-ヒドロキシベンズアミド(化合物16);
 N-(3-(2-アミノ-3-(4-クロロフェノキシ)フェニル)-3-オキソプロピル)-4-ヒドロキシベンズアミド(化合物17);
 N-(3-(2-アミノ-3-(4-クロロフェノキシ)フェニル)-3-オキソプロピル)-4-アミノベンズアミド(化合物19);
 N-(3-(2-アミノ-3-(4-クロロフェノキシ)フェニル)-3-オキソプロピル)-4-アセチルアミノベンズアミド(化合物20);
 N-(2-(3-(4-メトキシフェノキシ)ベンゾイルアミノ)エチル)-4-ヒドロキシベンズアミド(化合物21);
 N-(2-(2-(4-メトキシフェノキシ)ベンゾイルアミノ)エチル)-4-ヒドロキシベンズアミド(化合物22);
 N-(4-ヒドロキシフェニル)-4-(3-(4-クロロフェノキシ)フェニルアミノ)-4-オキソブタンアミド(化合物23);
 N-(3-(3-(4-クロロフェノキシ)フェニルアミノ)-3-オキソプロピル)-4-ヒドロキシベンズアミド(化合物24);
 N-(2-(3-(4-メトキシフェノキシ)フェニルアミノ)-2-オキシエチル)-4-ヒドロキシベンズアミド(化合物25);
 N-(3-(3-(4-メトキシフェノキシ)フェニルアミノ)-3-オキソプロピル)-4-ヒドロキシベンズアミド(化合物26);
 N-(4-(3-(4-メトキシフェノキシ)フェニルアミノ)-4-オキソブチル)-4-ヒドロキシベンズアミド(化合物27);
 N-(2-(2-(4-メトキシフェノキシ)フェニルアミノ)-2-オキソエチル)-4-ヒドロキシベンズアミド(化合物28);
 N-(3-(2-(4-メトキシフェノキシ)フェニルアミノ)-3-オキソプロピル)-4-ヒドロキシベンズアミド(化合物29);
 N-(3-(4-(4-メトキシフェノキシ)フェニルアミノ)-3-オキソプロピル)-4-ヒドロキシベンズアミド(化合物30);
 N-(3-(4-クロロフェノキシ)フェニル)-1-(4-ヒドロキシフェニルカルボニル)アゼチジン-3-カルボキサミド(化合物31);
 N-(3-(4-クロロフェノキシ)フェニル)-1-(4-ヒドロキシフェニルカルボニル)ピロリジン-3-カルボキサミド(化合物32);
 N-(3-(4-クロロフェノキシ)フェニル)-1-(4-ヒドロキシフェニルカルボニル)ピペリジン-3-カルボキサミド(化合物33);
 N-(3-(4-クロロフェノキシ)フェニル)-1-(4-ヒドロキシフェニルカルボニル)ピロリジン-2-カルボキサミド(化合物34);
 N-(3-(3-(4-クロロフェノキシ)フェニルアミノ)-3-オキソプロピル)チオフェン-2-カルボキサミド(化合物35);
 N-(3-(3-(4-クロロフェノキシ)フェニルアミノ)-3-オキソプロピル)チオフェン-3-カルボキサミド(化合物36);
 N-(3-(3-(4-クロロフェノキシ)フェニルアミノ)-3-オキソプロピル)ピリジン-4-カルボキサミド(化合物37);および
 N-(3-(3-(3,4-ジクロロフェノキシ)フェニルアミノ)-3-オキソプロピル)-4-ヒドロキシベンズアミド(化合物38)
からなる群から選択される、[14]~[23]のいずれかに記載の治療剤。
[25] N-(3-(2-アミノ-3-(4-ヒドロキシフェノキシ)フェニル)-3-オキソプロピル)-4-ヒドロキシベンズアミドまたはその医薬的に許容される塩を含む、オステオポンチン産生亢進に起因する疾患の治療剤。
[26] オステオポンチン産生亢進に起因する疾患が、癌、肝炎、動脈硬化、多発性硬化症、関節炎、リウマチ、肺繊維症、骨粗鬆症または尿路結石である、[14]~[25]のいずれかに記載の治療剤。
[27] 治療が必要な患者に、治療上の有効量の[1]~[11]のいずれかに記載の化合物もしくはN-(3-(2-アミノ-3-(4-ヒドロキシフェノキシ)フェニル)-3-オキソプロピル)-4-ヒドロキシベンズアミド、またはその医薬的に許容される塩を投与することを特徴とする、オステオポンチン産生亢進に起因する疾患の治療方法。
[28] オステオポンチン産生亢進に起因する疾患の治療に使用する、[1]~[11]のいずれかに記載の化合物もしくはN-(3-(2-アミノ-3-(4-ヒドロキシフェノキシ)フェニル)-3-オキソプロピル)-4-ヒドロキシベンズアミド、またはその医薬的に許容される塩。
[29] オステオポンチン産生亢進に起因する疾患の治療剤を製造するための、[1]~[11]のいずれかに記載の化合物もしくはN-(3-(2-アミノ-3-(4-ヒドロキシフェノキシ)フェニル)-3-オキソプロピル)-4-ヒドロキシベンズアミド、またはその医薬的に許容される塩の使用。
[30] [1]~[11]のいずれかに記載の化合物もしくはN-(3-(2-アミノ-3-(4-ヒドロキシフェノキシ)フェニル)-3-オキソプロピル)-4-ヒドロキシベンズアミド、またはその医薬的に許容される塩を含む、オステオポンチン産生阻害剤。
[31] 治療が必要な患者に、治療上の有効量の[1]~[11]のいずれかに記載の化合物もしくはN-(3-(2-アミノ-3-(4-ヒドロキシフェノキシ)フェニル)-3-オキソプロピル)-4-ヒドロキシベンズアミド、またはその医薬的に許容される塩を投与することを特徴とする、オステオポンチン産生阻害方法。
[32] 式(I):
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000009
[式中、
 RおよびRは、各々独立して、水素原子、C1-6アルキル、C2-6アルケニル、C2-6アルキニル、C3-8シクロアルキル、C3-8ヘテロシクロアルキル、C6-10アリールまたはC6-10ヘテロアリールであり、ここで、該C1-6アルキル、C2-6アルケニル、C2-6アルキニル、C3-8シクロアルキル、C3-8ヘテロシクロアルキル、C6-10アリールおよびC6-10ヘテロアリールは、各々独立して、置換可能な位置で、ハロゲン、ヒドロキシ、メルカプト、シアノ、ニトロ、アミノ、モノ-もしくはジ-C1-6アルキルアミノ、C1-4アシル、C1-4アルキルスルホニル、C1-6アルキル、C1-6ハロアルキル、C1-6アルコキシ、C1-6ハロアルコキシ、C2-6アルケニル、C2-6アルキニルおよび-ORからなる群から選択される1つまたは同一もしくは異なる2つ以上の基で置換されていてもよく;
 Rは、水素原子、アミノ、独立して選択される1もしくは2個のC1-6アルキルで置換されるアミノ、ヒドロキシまたはC1-6アルコキシであり;
 Rは、水素原子、ハロゲン、アミノ、独立して選択される1もしくは2個のC1-6アルキルで置換されるアミノ、C1-6アルキルまたはC1-6ハロアルキルであり;
 Rは、C2-6アルケニル、C2-6アルキニル、C3-8シクロアルキル、C3-8ヘテロシクロアルキル、C6-10アリールまたはC6-10ヘテロアリールであり、ここで、該C2-6アルケニル、C2-6アルキニル、C3-8シクロアルキル、C3-8ヘテロシクロアルキル、C6-10アリールおよびC6-10ヘテロアリールは、各々独立して、置換可能な位置で、ハロゲン、ヒドロキシ、メルカプト、シアノ、ニトロ、アミノ、モノ-もしくはジ-C1-6アルキルアミノ、C1-4アシル、C1-4アルキルスルホキシ、C1-6アルキル、C1-6ハロアルキル、C1-6アルコキシ、C1-6ハロアルコキシ、C2-6アルケニルおよびC2-6アルキニルからなる群から選択される1つまたは同一もしくは異なる2つ以上の基で置換されていてもよく;および
 XはOであるか、またはRがアミノもしくは置換アミノである場合は、XがCHとしてRの窒素原子と結合してピロール環を形成してもよい]
で表される化合物またはその医薬的に許容される塩、ただし、N-(3-(2-アミノ-3-(4-ヒドロキシフェノキシ)フェニル)-3-オキソプロピル)-4-ヒドロキシベンズアミドは除く。
 本発明の化合物は、オステオポンチン産生阻害作用を有しており、オステオポンチン産生亢進に起因する疾患、例えば、癌の新規な治療剤および/または予防剤として有用である。
HepG2細胞における、対照群および化合物1(10μMおよび20μM)添加群のELISA法によるOPN産生量を示す。 A549細胞における、対照群および化合物1(12.5μMおよび25μM)添加群のELISA法によるOPN産生量を示す。 OUR-10細胞における、対照群および化合物1(25μMおよび50μM)添加群のELISA法によるOPN産生量を示す。 QGP-1細胞における、対照群および化合物1(20μMおよび40μM)添加群のELISA法によるOPN産生量を示す。 A549細胞における、対照群および化合物6(10μMおよび20μM)添加群のELISA法によるOPN産生量を示す。 A549細胞における、対照群の創傷治癒率を100%とした場合の化合物1(12.5μMおよび25μM)における創傷治癒率を示す。 A549細胞における、対照群の浸潤細胞数を100%とした場合の化合物1(12.5μMおよび25μM)および化合物6(10μM)における浸潤細胞数の割合を示す。 A549細胞における、対照群のOPN産生量を100%とした場合における化合物19(12.5μMおよび25μM)添加群のELISA法によるOPN産生量の割合を示す。 A549細胞における、対照群のOPN産生量を100%とした場合における化合物26(12.5μMおよび25μM)添加群のELISA法によるOPN産生量の割合を示す。 A549細胞における、対照群のOPN産生量を100%とした場合における化合物38(12.5μMおよび25μM)添加群のELISA法によるOPN産生量の割合を示す。
 本発明の化合物は、水和物および/または溶媒和物の形で存在することもあるので、これらの水和物および/または溶媒和物もまた本発明の化合物に包含される。溶媒和物としてはエタノール溶媒和物等が挙げられる。
 本発明の化合物は、1個または場合によりそれ以上の不斉炭素原子を有する場合があり、また幾何異性や軸性キラリティを生じることがあるので、数種の光学または立体異性体として存在することがある。本発明においては、これらの立体異性体、それらの混合物およびラセミ体は本発明の化合物に包含される。
 また、本発明の化合物のいずれか1つまたは2つ以上のHをH(D)に変換した重水素変換体も本発明の化合物に包含される。
 結晶として得られる本発明の化合物およびその医薬上許容される塩には、結晶多形が存在する場合があり、その結晶多形も本発明に包含される。
 次に、本明細書における用語について以下に説明する。
 「C1-6アルキル」とは、1~6個の炭素原子を有する、直鎖状または分枝鎖状の飽和炭化水素基を意味し、これらは、所望により本発明に含まれる1以上の置換基で置換されていてもよい。「C1-6アルキル」は、好ましくは炭素数が1~5、1~4、または1~3であってもよい。かかる具体例として、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、sec-ブチル、tert-ブチル、ぺンチル、イソペンチル、ネオペンチル、ヘキシル等が挙げられる。
 「C2-6アルケニル」とは、2~6個の炭素原子を有し、1以上の炭素-炭素二重結合を含有する、直鎖または分枝鎖状の脂肪族炭化水素基を意味し、これらは、所望により本発明に含まれる1以上の置換基で置換されていてもよい。「C2-6アルケニル」は、好ましくは炭素数が2~5、2~4、または2~3であってもよい。かかる具体例として、エテニル、プロペニル、ブテニル、ペンテニル、ヘキセニル等が挙げられる。
 「C2-6アルキニル」とは、2~6個の炭素原子を有し、1以上の炭素-炭素三重結合を有する、直鎖状または分枝鎖状の脂肪族炭化水素基を意味し、これらは、所望により本発明に含まれる1以上の置換基で置換されていてもよい。「C2-6アルキニル」は、好ましくは炭素数が2~5、2~4、または2~3であってもよい。かかる具体例として、エチニル、プロピニル、ブチニル、ペンチニル、ヘキシニル等が挙げられる。
 「C3-8シクロアルキル」とは、3~8個の炭素原子を有する、単環または多環式飽和炭化水素基を意味し、これらは、所望により本発明に含まれる1以上の置換基で置換されていてもよい。かかる具体例として、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロへキシル、シクロヘプチル、シクロオクチル等が挙げられる。
 「C3-8ヘテロシクロアルキル」とは、窒素原子、酸素原子および硫黄原子からなる群から独立して選ばれる1~4個の原子を含む、3~8個の炭素原子を有する単環または二環の非芳香族複素環基を意味し、これらは、所望により本発明に含まれる1以上の置換基で置換されていてもよい。窒素および硫黄原子は、所望により酸化されてもよく、窒素原子は、所望により四級化されてもよい。二環式基をもたらす縮合環は、一方の環が炭素原子のみを含有して構成されていてもよく、飽和、部分的飽和、または不飽和であってもよい。「C3-8ヘテロシクロアルキル」は、好ましくは窒素原子または酸素原子を合わせて1または2個含む5~7員の単環ヘテロシクロアルキルであってもよい。かかる具体例として、アゼチジニル、ピロリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、モルホリニル、ホモピペリジニル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロピラニル等が挙げられる。
 「C6-10アリール」とは、芳香族環に結合する1個の水素原子が除外された、6~10個の炭素原子を有する単環または二環の芳香族炭化水素基を意味し、これらは、所望により本発明に含まれる1以上の置換基で置換されていてもよい。かかる具体例として、フェニル、1-ナフチル、2-ナフチル、アントラセニル等が挙げられる。
 「ヘテロアリール」とは、窒素原子、酸素原子および硫黄原子からなる群から独立して選ばれる1~4個のヘテロ原子を含む、単環または二環の芳香族複素環基を意味し、これらは、所望により本発明に含まれる1以上の置換基で置換されていてもよい。「ヘテロアリール」は、好ましくは窒素原子を1または2個含む5または6員の単環式芳香族複素環基であってもよい。かかる具体例として、ピリジル、ピリダジニル、イソチアゾリル、ピロリル、フリル、チエニル、チアゾリル、イミダゾリル、ピリミジニル、チアジアゾリル、ピラゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、ピラジニル、トリアジニル、トリアゾリル、イミダゾリジニル、オキサジアゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、インドリル、インダゾリル、クロメニル、キノリル、イソキノリル、ベンゾフラニル、ベンゾチエニル、ベンゾオキサゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンズイソオキサゾリル、ベンズイソチアゾリル、ベンゾトリアゾリル、ベンズイミダゾリル等が挙げられる。
 「ハロゲン」とは、フッ素原子、塩素原子、臭素原子またはヨウ素原子を意味する。中でも好ましくは、フッ素原子または塩素原子である。
 「モノ-もしくはジ-C1-6アルキルアミノ」とは、1個または2個の水素原子が1~6個の炭素原子を有する上記のアルキル基によって置き換えられている、アミノ基を意味する。アルキル基によって2個置換される場合は、同一または異なるアルキル基で置換されていてもよい。かかる具体例として、メチルアミノ、エチルアミノ、ジメチルアミノ、ジエチルアミノ等が挙げられる。
 「C1-4アシル」とは、水素原子または1~3個の炭素原子を有する上記のアルキル基が結合している、カルボニル基(-C(=O))を意味する。かかる具体例として、ホルミル、アセチル、プロピオニル等が挙げられる。
 「C1-4アシルアミノ」とは、上記のアシル基が結合している、アミノ基を意味する。具体例としては、アセチルアミノ、プロピオニルアミノ等が挙げられる。
 「C1-4アルキルスルホニル」とは、1~4個の炭素原子を有する上記のアルキル基が結合している、スルホニル基(-S(=O))を意味する。かかる具体例として、メチルスルホニル、エチルスルホニル、プロピルスルホニル等が挙げられる。
 「C1-6ハロアルキル」とは、1個以上の水素原子がハロゲン原子(複数可)によって置き換えられている、1~6個の炭素原子を有する上記のアルキル基を意味する。置き換えられている水素原子の数は、1個から、最大で親アルキル基に他に存在しうる水素原子の総数の範囲まで及びうる。ハロゲン原子を複数有する場合は、同一または異なるハロゲン原子で置換されていてもよい。かかる具体例として、クロロメチル、トリフルオロメチル、2,2,2-トリフルオロエチル等が挙げられる。
 「C1-6アルコキシ」とは、1~6個の炭素原子を有する上記のアルキル基が酸素原子を介して結合している基を意味する。かかる具体例として、限定されるものではないが、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ブチルオキシ、ペンチルオキシ、イソペンチルオキシ、ネオペンチルオキシ、ヘキシルオキシ等が挙げられる。
 「C1-6ハロアルコキシ」とは、1個以上の水素原子がハロゲン原子(複数可)によって置き換えられている、1~6個の炭素原子を有する上記のアルコキシ基を意味する。置き換えられている水素原子の数は、1個から、最大で親アルキル基に他に存在しうる水素原子の総数の範囲まで及びうる。ハロゲン原子を複数有する場合は、同一または異なるハロゲン原子で置換されていてもよい。かかる具体例として、クロロメトキシ、トリフルオロメトキシ、2,2,2-トリフルオロエトキシ等が挙げられる。
 「オステオポンチン」または「OPN」とは、カルシウムの沈着した骨組織のマトリックスを構成する主要な非コラーゲン性タンパク質として同定された、分子量約41kDaの分泌型酸性リン酸化糖タンパク質を意味する。オステオポンチンは、インテグリンと結合するRGD配列を有し、破骨細胞と骨芽細胞の両方を骨組織周辺に接着させる作用を有する。また、オステオポンチンは、強く陰性に荷電しており、ヒドロキシアパタイトを沈着させ、骨のカルシウムを保持する作用を有する。他にも、細胞遊走、一酸化窒素産生の制御、腫瘍、免疫系への関与等、様々な機能を有する。
 「オステオポンチン産生亢進に起因する疾患」とは、癌、肝炎、動脈硬化、多発性硬化症、関節炎、リウマチ、肺繊維症、骨粗鬆症、尿路結石等が挙げられる。本発明における疾患としては、癌が好ましい。
 「医薬的に許容される塩」とは、本発明の化合物と医薬的に許容される酸または塩基により形成される塩を意味する。本発明の化合物がアミノ基等の塩基性官能基を有する場合、各種の酸と塩を形成しうる。酸付加塩の具体例としては、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、硫酸塩、過塩素酸塩、リン酸塩等の無機酸塩、シュウ酸塩、マロン酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、乳酸塩、リンゴ酸塩、クエン酸塩、酒石酸塩、安息香酸塩、トリフルオロ酢酸塩、酢酸塩、メタンスルホン酸塩、p-トルエンスルホン酸塩、トリフルオロメタンスルホン酸塩等の有機酸塩、またはグルタミン酸塩、アスパラギン酸塩等のアミノ酸塩が挙げられる。
 本発明の化合物が酸性官能基を有する場合、各種の塩基と塩を形成しうる。塩基付加塩の具体例としては、ナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩、カルシウム塩等のアルカリ土類金属塩、またはアンモニウム塩等が挙げられる。
 これらの塩は、本発明の化合物を酸または塩基と混合した後、再結晶等の常法により得ることができる。
 「治療」とは、哺乳動物、特にヒトにおける疾患および/または障害の治癒および/または改善を意味する。例えば、(a)疾患および/または障害を予防すること;および(b)疾患および/または疾患を緩和および/または軽減すること等も含まれる。
 「患者」とは、ヒトおよび動物、例えば、イヌ、ネコ、ウマ等を意味する。その中でも、ヒトが好ましい。
 「治療上の有効量」とは、未治療対象と比べて、疾患、障害および/または副作用の改善、治癒、予防および/または軽減をもたらす量、あるいは疾患および/または障害の進行速度の遅延をもたらす量を意味する。該用語は、その範囲内に、正常な生理的機能を促進するのに有効な量も含む。療法における使用では、本発明の化合物ならびにその塩、溶媒和物および生理的に機能的な誘導体の治療上の有効量を、化合物原体として投与することが可能である。特に限定するものではないが、通常、本発明の化合物またはその医薬的に許容される塩として、1日当たり0.001~1000mg/kg(体重)の範囲が有効である。
 かかる有効量として、本発明の化合物またはその医薬的に許容される塩の単独の量、本発明の化合物の組み合わせの量および/または癌治療に有用な他の活性成分と組み合わせた本発明の化合物の量が挙げられる。
 式(式(I)および式(II)を含む)で表される本発明の化合物の中のR~R、m、n、p、XおよびYに関して、好ましいものは以下のとおりであるが、本発明の技術的範囲は下記に挙げられた化合物の範囲に限定されるものではない。
 Rとしては、C1-6アルキル、C2-6アルケニル、C2-6アルキニル、C3-8シクロアルキル、C3-8ヘテロシクロアルキル、C6-10アリールおよび5~10員のヘテロアリールが挙げられ、該C1-6アルキル、C2-6アルケニル、C2-6アルキニル、C3-8シクロアルキル、C3-8ヘテロシクロアルキル、C6-10アリールおよび5~10員のヘテロアリールは、各々独立して、置換可能な位置で、ハロゲン、ヒドロキシ、メルカプト、シアノ、ニトロ、アミノ、モノ-もしくはジ-C1-6アルキルアミノ、C1-4アシル、C1-4アシルアミノ、C1-4アルキルスルホニル、C1-6アルキル、C1-6ハロアルキル、C1-6アルコキシ、C1-6ハロアルコキシ、C2-6アルケニル、C2-6アルキニルおよび-ORからなる群から選択される1つまたは同一もしくは異なる2つ以上の基で置換されていてもよい。中でも好ましくは、置換されていてもよい、C3-8シクロアルキル、テトラヒドロピラニル、ピリジル、チエニルまたはフェニルが挙げられ、より好ましくは、3位および/または4位が独立して、ハロゲン、ヒドロキシ、C1-6アルキル、C1-6ハロアルキルまたはC1-6アルコキシで置換されていてもよいフェニルが挙げられ、さらに好ましくは、3位および/または4位が独立して、フルオロ、ヒドロキシまたはメトキシで置換されているフェニルが挙げられる。
 Rとしては、水素原子、アミノ、独立して選択される1もしくは2個のC1-6アルキルで置換されるアミノ、ヒドロキシおよびC1-6アルコキシが挙げられる。中でも好ましくは、アミノ、独立して選択される1もしくは2個のC1-6アルキルで置換されるアミノまたはヒドロキシが挙げられ、より好ましくは、アミノが挙げられる。また、Rは、ベンゼン環のいずれの位置に結合してもよいが、2位に結合することが好ましい。
 Rとしては、水素原子、C1-6アルキル、C2-6アルケニル、C2-6アルキニル、C3-8シクロアルキル、C3-8ヘテロシクロアルキル、C6-10アリールおよび5~10員のヘテロアリールが挙げられ、該C1-6アルキル、C2-6アルケニル、C2-6アルキニル、C3-8シクロアルキル、C3-8ヘテロシクロアルキル、C6-10アリールおよび5~10員のヘテロアリールは、各々独立して、置換可能な位置で、ハロゲン、ヒドロキシ、メルカプト、シアノ、ニトロ、アミノ、モノ-もしくはジ-C1-6アルキルアミノ、C1-4アシル、C1-4アシルアミノ、C1-4アルキルスルホニル、C1-6アルキル、C1-6ハロアルキル、C1-6アルコキシ、C1-6ハロアルコキシ、C2-6アルケニル、C2-6アルキニルおよび-ORからなる群から選択される1つまたは同一もしくは異なる2つ以上の基で置換されていてもよい。中でも好ましくは、3位および/または4位が独立して、ハロゲン、ヒドロキシ、C1-6アルキル、C1-6ハロアルキルまたはC1-6アルコキシで置換されていてもよいフェニルが挙げられ、より好ましくは、3位および/または4位が独立して、クロロ、ヒドロキシ、メチル、トリフルオロメチル、メトキシで置換されているフェニルが挙げられる。
 また、ORがベンゼン環の3位に結合する場合、Rはフェニルであり、置換可能な位置で、ハロゲン、ヒドロキシ、C1-6アルキル、C1-6ハロアルキル、C1-6アルコキシ、およびC1-6ハロアルコキシからなる群から選択される1つまたは同一もしくは異なる2つ以上の基で置換されるのが好ましい。
 Rとしては、水素原子、ハロゲン、アミノ、モノ-もしくはジ-C1-6アルキルアミノ、C1-6アルキルおよびC1-6ハロアルキルが挙げられる。中でも好ましくは、水素原子、ハロゲンまたはアミノが挙げられ、より好ましくは、水素原子が挙げられる。
 Rとしては、C2-6アルケニル、C2-6アルキニル、C3-8シクロアルキル、C3-8ヘテロシクロアルキル、C6-10アリール、および5~10員のヘテロアリールが挙げられ、該C2-6アルケニル、C2-6アルキニル、C3-8シクロアルキル、C3-8ヘテロシクロアルキル、C6-10アリールおよび5~10員のヘテロアリールは、各々独立して、置換可能な位置で、ハロゲン、ヒドロキシ、メルカプト、シアノ、ニトロ、アミノ、モノ-もしくはジ-C1-6アルキルアミノ、C1-4アシル、C1-4アシルアミノ、C1-4アルキルスルホキシ、C1-6アルキル、C1-6ハロアルキル、C1-6アルコキシ、C1-6ハロアルコキシ、C2-6アルケニルおよびC2-6アルキニルからなる群から選択される1つまたは同一もしくは異なる2つ以上の基で置換されていてもよい。中でも好ましくは、ハロゲン、ヒドロキシ、C1-6アルキル、C1-6ハロアルキルまたはC1-6アルコキシで置換されていてもよいフェニルが挙げられ、より好ましくは、ヒドロキシで置換されているフェニルが挙げられる。
 RおよびRとしては、水素原子およびC1-4アルキルが好ましい。
 nは、0~4であることが好ましい。ただし、nが1~4であり、RがC1-4アルキルである場合、Rの末端の炭素原子がnの括弧で示されたアルキレン基の1つの炭素と結合して4~6員の環を形成することが好ましい。
 mは、0または1であることが好ましい。
 pは、0または1であることが好ましい。
 Xとしては、Oが好ましい。また、Xは、pが0であり、Rがアミノまたは置換アミノでベンゼン環の2位に結合する場合、CHとしてRの窒素原子と結合してピロール環を形成することが好ましい。
 Yとしては、CHまたはNHが好ましい。
 本発明の実施例化合物の製造方法について以下に説明する。
 式(I)で表される本発明の化合物は、例えば下記スキーム1や非特許文献4に記載の方法により製造することができる。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000010
 ステップ1は、ノシル基(o-ニトロベンゼンスルホニル基)で保護されているアミノアルコールAのヒドロキシ基をジョーンズ試薬等の通常用いられる酸化剤を用いて酸化し、アルデヒドBを得る工程である。
 ステップ2は、得られたアルデヒドBと芳香族ヒドラジンCをメタノール等のプロトン性溶媒中で反応させて、ヒドラジドを得、続いてギ酸および酢酸等の弱酸性溶媒中で70~80℃に加熱し、インドールDを得る工程である。
 ステップ3は、ジメチルホルムアミド等の非プロトン性溶媒下で、得られたインドールDをp-メルカプト安息香酸等のチオールと反応させて、o-ニトロベンゼンスルホニル基を脱保護し、続いて塩化アシルを加えてアミド化して、化合物Eを得る工程である。
 ステップ4は,得られた化合物Eをアセトニトリル等の溶媒に溶解し、メタ過ヨウ素酸ナトリウム水溶液を加え、70~80℃に加熱し、インドール環が酸化的開裂して、化合物Fを得る工程である。
 また、式(I)で表される本発明の化合物において、種々所定の置換基で置換される場合は、例えば通常用いられる保護基で適宜保護・脱保護を行いながら、所定の置換基を上記スキーム1の芳香族ヒドラジンC、インドールDの段階で導入することができ、またはステップ3で用いられる塩化アシルにおいて導入することができ、あるいは化合物Fにおいて導入することができる。
 式(II):
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000011
(式中、R~R、Rおよびnは、上記[1]に定義されている通りである)
で表される本発明の化合物は、例えば下記スキーム2に記載の方法により製造することができる。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000012
 ステップ1は、ジクロロメタンなどの非プロトン性溶媒中で,フェノキシアニリン誘導体Aと、末端にtert-ブチルオキシカルボニル基で保護されたアミノ基を有するカルボン酸とでアミド化し、化合物Bを得る工程である。
 ステップ2は,化合物Bのtert-ブチルオキシカルボニル基を脱保護し,続いて芳香族カルボン酸を加えてアミド化して,化合物Cを得る工程である。
 また、式(II)で表される本発明の化合物において、種々所定の置換基で置換される場合は、例えば通常用いられる保護基で適宜保護・脱保護を行いながら、所定の置換基を上記スキーム2のステップ1において導入することができ、または化合物Bまたは化合物Cの段階で導入することができる。
 上記製造法の各ステップにおいて使用される溶媒は、反応や原料化合物の種類等によって適宜選択されるべきであるが、例えばメタノール、エタノール、イソプロパノール等のアルコール類、アセトン、メチルケトン等のケトン類、塩化メチレン、クロロホルム等のハロゲン化炭化水素類、テトラヒドロフラン(THF)、ジオキサン等のエーテル類、トルエン、ベンゼン等の芳香族炭化水素類、ヘキサン、ヘプタン等の脂肪族炭化水素類、酢酸エチル、酢酸プロピル等のエステル類、ジメチルホルムアミド(DMF)、N-メチル-2-ピロリドン等のアミド類、ジメチルスルホキシド(DMSO)等のスルホキシド類、アセトニトリル等のニトリル類が挙げられ、これらの溶媒は単独または2種類以上混合して用いることができる。また反応の種類によっては、有機酸および有機塩基類を溶媒として用いてもよい。
 本発明の化合物またはその中間体は、当業者にとって公知の方法で分離、精製することができる。例えば、抽出、分配、再沈殿、カラムクロマトグラフィー(例えば、シリカゲルカラムクロマトグラフィー、イオン交換カラムクロマトグラフィー若しくは分取液体クロマトグラフィー)または再結晶等が挙げられる。再結晶溶媒としては例えば、メタノール、エタノール、2-プロパノール等のアルコール系溶媒、ジエチルエーテル等のエーテル系溶媒、酢酸エチル等のエステル系溶媒、ベンゼン、トルエン等の芳香族炭化水素系溶媒、アセトン等のケトン系溶媒、ジクロロメタン、クロロホルム等のハロゲン系溶媒、ヘキサン等の炭化水素系溶媒、ジメチルホルムアミド、アセトニトリル等の非プロトン系溶媒、水、または上記溶媒から選択される2種以上の混合溶媒等を用いることができる。その他の精製方法としては、実験化学講座(日本化学会編、丸善)1巻等に記載された方法等を用いることができる。
 本発明の化合物またはその医薬的に許容される塩には、不斉が生じる場合または不斉炭素を有する置換基を有する場合があり、そのような化合物にあっては光学異性体が存在する。本発明の化合物にはこれらの各異性体の混合物や単離されたものも含まれ、通常の方法に従って製造することができる。製造方法としては例えば、不斉点を有する原料を用いる方法か、または途中の段階で不斉を導入する方法が挙げられる。例えば、光学異性体の場合、光学活性な原料を用いるか、製造工程の適当な段階で光学分割等を行うことで、光学異性体を得ることができる。光学分割法としては例えば、本発明の化合物またはその中間体が塩基性官能基を有する場合には、不活性溶媒中(例えばメタノール、エタノール、2-プロパノール等のアルコール系溶媒、ジエチルエーテル等のエーテル系溶媒、酢酸エチル等のエステル系溶媒、トルエン等の炭化水素系溶媒、アセトニトリル等の非プロトン系溶媒、または上記溶媒から選択される2種以上の混合溶媒)、光学活性な酸(例えば、マンデル酸、N-ベンジルオキシアラニン、乳酸等のモノカルボン酸、酒石酸、o-ジイソプロピリデン酒石酸、リンゴ酸等のジカルボン酸、カンファースルフォン酸、ブロモカンファースルホン酸等のスルホン酸)を用いて塩を形成させるジアステレオマー法が挙げられる。本発明の化合物またはその中間体がカルボキシル基等の酸性官能基を有する場合には、光学活性なアミン(例えば1-フェニルエチルアミン、キニン、キニジン、シンコニジン、シンコニン、ストリキニーネ等の有機アミン)を用いて、塩を形成させることにより、光学分割を行うこともできる。
 本発明の化合物は、オステオポンチン産生阻害活性を有しており、オステオポンチン産生亢進に起因する疾患、具体的には、癌、肝炎、動脈硬化、多発性硬化症、関節炎、リウマチ、肺繊維症、骨粗鬆症、尿路結石等の新規な治療剤および/または予防剤となり得る。
 本発明の化合物の投与経路としては、限定されるものではないが、経口、舌下、口腔、非経口(例えば、皮下、筋肉内または静脈内)、直腸、局所、鼻腔内投与等が挙げられる。その一日投与量は、化合物の種類、投与方法、患者の症状・年齢等の様々な要因により異なる。例えば、経口投与の場合は、通常、ヒトまたは哺乳動物1kg体重当たり約0.001~1000mg、好ましくは約0.1~500mgを1~数回に分けて投与することができる。静注等の非経口投与の場合は、例えば、ヒトまたは哺乳動物1kg体重当たり約0.001mg~300mg、好ましくは約0.1mg~100mgを投与することができる。
 本発明の化合物の剤形は、対象の身体状況、健康状態等に応じて適宜選択することができ、調製することができる。例えば、錠剤(口腔内崩壊錠、チュアブル錠、発泡錠、分散錠、溶解錠)、カプセル剤、顆粒剤(発泡顆粒剤)、散剤、経口液剤(エリキシル剤、懸濁剤、乳剤、リモナーデ剤)、シロップ剤(シロップ用剤)、経口ゼリー剤、口腔用錠剤(トローチ剤、舌下錠、バッカル錠、付着錠、ガム剤)、口腔用スプレー剤、口腔用半固形剤、含嗽剤、注射剤(輸液剤、埋め込み注射剤、持続性注射剤)、透析用剤(腹膜透析用剤、血液透析用剤)、吸入剤(吸入粉末剤、吸入液剤、吸入エアゾール剤)、坐剤、直腸用半固形剤、注腸剤、点眼剤、眼軟膏剤、点耳剤、点鼻剤(点鼻粉末剤、点鼻液剤)、膣錠、膣用坐剤、外用固形剤(外用散剤)、外用液剤(リニメント剤、ローション剤)、スプレー剤(外用エアゾール剤、ポンプスプレー剤)、軟膏剤、クリーム剤、ゲル剤、貼付剤(テープ剤、パップ剤)等が挙げられる。本発明の化合物は、その製剤の組成物に対して0.1~70重量%含まれる。
 本発明の治療剤および/または予防剤は、本発明の化合物による疾患、例えば癌の治療および/または予防効果を妨げない範囲であれば、通常使用される各種医薬活性成分および医薬的に許容される添加剤を自体公知の方法により適宜配合してもよい。
 本発明の治療剤および/または予防剤に配合される各種医薬活性成分としては、抗癌剤、抗炎症剤、生薬、天然物などが挙げられ、医薬的に許容される添加剤としては、安定化剤、界面活性剤、可溶化剤、緩衝剤、懸濁化剤、抗酸化剤、コーティング剤、湿潤剤、湿潤調整剤、清涼化剤、着色剤、着香剤、等張化剤、乳化剤、pH調節剤、皮膚保護剤、分散剤、噴射剤、芳香剤、防腐剤、溶剤等が挙げられる。
 以下に実施例および試験例を挙げて本発明をさらに具体的に説明するが、これらは本発明を限定するものではない。なお、化合物の同定は、NMRスペクトル法、質量分析法等により行った。
 明細書の記載を簡略化するために実施例において以下に示すような略号を用いることもある。NMRに用いられる記号としては、sは一重線、dは二重線、ddは二重の二重線、dddは二重の二重の二重線、tは三重線、dtは二重の三重線、tdは三重の二重線、ttは三重の三重線、qは四重線、mは多重線、brは幅広い、brsは幅広い一重線、brtは幅広い三重線およびJは結合定数を意味する。
実施例1
N-(3-(2-アミノ-3-(4-ヒドロキシフェノキシ)フェニル)-3-オキソプロピル)-4-ヒドロキシベンズアミド(ブレフェラミド、化合物1)
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000013
工程1.N-(4-ヒドロキシブチル)-2-ニトロベンゼンスルホンアミド(1.80g,6.25mmol)をジクロロメタン(12.5mL)に溶解し、ヨードベンゼンジアセテート(3.11g,9.66mmol)および2,2,6,6-テトラメチルピペリジン 1-オキシル(145mg,0.94mmol)を加え、室温で6時間撹拌した。ジオキサン(8mL)、水(4mL)および硫酸(0.2mL)を順次加え、続けて(2-(4-(ベンジルオキシ)フェノキシ)フェニル)ヒドラジン(2.01g,6.66mmol)を加え、室温で3時間撹拌した。続いて、ギ酸(12mL)を加え、40℃で9時間撹拌した。反応液に水(150mL)を加え、酢酸エチル(100mL)で3回抽出した。得られた酢酸エチル層を合わせて、水(200mL)、飽和重曹水(200mL)および飽和食塩水(200mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(ヘキサン-酢酸エチル(3:2)で溶出)で精製し、N-(2-(7-(4-(ベンジルオキシ)フェノキシ)-1H-インドール-3-イル)エチル)-2-ニトロベンゼンスルホンアミドを得た(1.11g,1.99mmol,32%(3工程))。
工程2.N-(2-(7-(4-(ベンジルオキシ)フェノキシ)-1H-インドール-3-イル)エチル)-2-ニトロベンゼンスルホンアミド(1.11g,1.99mmol)をN,N-ジメチルホルムアミド(20mL)に溶解し、炭酸カリウム(1.11g,3.98mmol)およびp-メルカプト安息香酸(614mg,7.97mmol)を加え、40℃で10時間撹拌した。反応液に水(60mL)を加え、酢酸エチル(40mL)で4回抽出した。得られた酢酸エチル層を合わせて、水(100mL)、飽和重曹水(100mL)および飽和食塩水(100mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧留去した。該残渣をジクロロメタン(10mL)に溶解し、トリエチルアミン(1.39mL,9.96mmol)および塩化4-(メトキシメトキシ)ベンゾイル(1.00g,4.98mmol)のアセトン溶液(10mL)を加え,室温で2時間撹拌した。反応液に0.3M 塩酸(50mL)を加え、酢酸エチル(30mL)で3回抽出した。得られた酢酸エチル層を合わせて、水(50mL)、飽和重曹水(50mL)および飽和食塩水(50mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(ヘキサン-酢酸エチル(2:3)で溶出)で精製し、N-(2-(7-(4-(ベンジルオキシ)フェノキシ)-1H-インドール-3-イル)エチル)-4-(メトキシメトキシ)ベンズアミドを得た(431mg,0.825mmol,41%(2工程))。
工程3.N-(2-(7-(4-(ベンジルオキシ)フェノキシ)-1H-インドール-3-イル)エチル)-4-(メトキシメトキシ)ベンズアミド(321mg,0.614mmol)を酢酸エチル(5mL)およびメタノール(5mL)に溶解し、20%水酸化パラジウム-炭素(150mg)を加え、水素雰囲気(1気圧)下室温で5時間撹拌した。反応液を濾過し、該濾液を減圧留去した。該残渣をジクロロメタン(8mL)に溶解し、トリエチルアミン(260μL)および無水酢酸(120μL)を加え、室温で4時間攪拌した。反応液に飽和塩化アンモニウム水溶液(30mL)を加え、酢酸エチル(20mL)で3回抽出した。得られた酢酸エチル層を合わせて、水(30mL)、飽和重曹水(30mL)および飽和食塩水(30mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(ヘキサン-酢酸エチル(1:1)で溶出)で精製し、4-(3-(2-(4-(メトキシメトキシ)フェニルアミド)エチル)-1H-インドール-7-イルオキシ)フェニル-エタノレートを得た(144mg,0.303mmol,49%(2工程))。
工程4.4-(3-(2-(4-(メトキシメトキシ)フェニルアミド)エチル)-1H-インドール-7-イルオキシ)フェニル-エタノレート(144mg,0.303mmol)をアセトニトリル(4mL)および水(4mL)に溶解し、メタ過ヨウ素酸ナトリウム(259mg,1.21mmol)を加え、60℃で18時間撹拌した。反応液に水(20mL)を加え、酢酸エチル(20mL)で3回抽出した。得られた酢酸エチル層を合わせて、飽和食塩水(40mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧留去した。該残渣をメタノール(2.5mL)に溶解し、塩酸-メタノール試薬(5~10%)(2.5mL)を加え、室温で4時間撹拌した。反応液に飽和重曹水(15mL)を加え、酢酸エチル(20mL)で3回抽出した。得られた酢酸エチル層を合わせて、飽和食塩水(30mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(クロロホルム-メタノール(49:1)で溶出)で精製し、化合物1を得た(50mg,0.127mmol,42%(2工程))。
 生成物は、EIMS(電子衝撃質量スペクトル)法による質量分析およびNMRによって解析した。EIMSおよびNMRの結果は、J. Org. Chem. 2005, 70, 8854-8858に記載のものと完全に一致した。
実施例2
4-ヒドロキシ-N-(2-(7-(4-ヒドロキシフェノキシ)-1H-インドール-3-イル)エチル)ベンズアミド(化合物2)
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000014
 N-(2-(7-(4-(ベンジルオキシ)フェノキシ)-1H-インドール-3-イル)エチル)-4-(メトキシメトキシ)ベンズアミド(8.2mg,0.016mmol)を酢酸エチル(0.5mL)およびメタノール(0.5mL)に溶解し、20% 水酸化パラジウム-炭素(3.0mg)を加え、水素雰囲気(1気圧)下室温で5時間撹拌した。反応液を濾過し、該濾液を減圧留去した。残渣をメタノール(0.5mL)に溶解し、塩酸-メタノール試薬(5~10%)(0.5mL)を加え、室温で3時間撹拌した。反応液に飽和重曹水(10mL)を加え,酢酸エチル(10mL)で3回抽出した。得られた酢酸エチル層を合わせて、飽和食塩水(10mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(ヘキサン-酢酸エチル(1:2)で溶出)で精製し、化合物2を得た(3.2mg,0.008mmol,53%(2工程))。
 生成物は、EIMS(電子衝撃質量スペクトル)法による質量分析およびNMRによって解析した。EIMSおよびNMRの結果を以下に示す。
1H-NMR (400 MHz, アセトン-d6) δ 8.75 (1H, brs), 8.15 (1H, brs), 7.66 (2H, d, J = 8.8 Hz), 7.54 (1H, brs), 7.26 (1H, d, J = 7.9 Hz), 7.08 (1H, d, J = 2.4 Hz), 6.98 (1H, brs), 6.80 (1H, t, J = 7.9 Hz), 6.78 (2H, d, J = 8.9 Hz), 6.73 (2H, d, J = 8.9 Hz), 6.71 (2H, d, J = 8.9 Hz), 6.39 (1H, d, J = 7.9 Hz), 3.57 (2H, q, J = 5.8 Hz), 2.93 (2H, t, J = 5.8 Hz).
13C-NMR (100 MHz, CDCl3) δ 166.9, 160.8, 154.4, 150.4, 145.2, 131.3, 129.8 (2C), 129.0, 127.5, 123.6, 120.9 (2C), 119.9, 116.9 (2C), 115.6 (2C), 114.4, 114.2, 109.2, 41.2, 26.5.
EIMS m/z (rel. int) 388 [M]+ (18), 251 (100), 238 (11).
HREIMS m/z 388.1411 (C23H20O4N2の計算値388.1423).
実施例3
N-(3-(2,3-ジヒドロキシフェニル)-3-オキソプロピル)-4-(4-ヒドロキシフェノキシ)ベンズアミド(化合物3)
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000015
工程1.テトラヒドロフラン(50mL)およびアセトニトリル(3.8mL,72.2mmol)を-78℃で撹拌し、n-ブチルリチウム(1.56M ヘキサン溶液)(46.0mL)を30分間かけて滴下した。さらにJ. Org. Chem. 2005, 70, 7505-7511に記載の製法により合成された2,3-ビス(メトキシメトキシ)ベンズアルデヒド(3.96g,17.52mmol)のテトラヒドロフラン溶液(25mL)を30分間かけて滴下し、該温度を-78℃に維持しながら1時間撹拌した。0℃に昇温し、反応液に飽和塩化アンモニウム水溶液(100mL)を加え、ジエチルエーテル(100mL)で3回抽出した。得られたジエチルエーテル層を合わせて、水(500mL)および飽和食塩水(500mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(ヘキサン-酢酸エチル(7:3)で溶出)で精製し、3-(2,3-ビス(メトキシメトキシ)フェニル)-3-ヒドロキシプロパンニトリルを得た(2.56g,9.56mmol,55%)。
工程2.水素化リチウムアルミニウム(429mg,11.3mmol)をテトラヒドロフラン(15mL)に懸濁し、0℃で撹拌した。3-(2,3-ビス(メトキシメトキシ)フェニル)-3-ヒドロキシプロパンニトリル(1.21g,4.52mmol)のテトラヒドロフラン溶液(5mL)を加え、70℃で4時間撹拌した。0℃に冷却し、1M 水酸化ナトリウム水溶液(60mL)を加えた。反応液をセライト濾過し、該濾液を酢酸エチル(50mL)で3回抽出した。得られた酢酸エチル層を合わせて、飽和食塩水(100mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧留去した。該残渣をジクロロメタン(8.0mL)に溶解した。0℃でトリエチルアミン(1.0mL)およびクロロギ酸9-フルオレニルメチル(1.675g,6.47mmol)を順次加え、2時間撹拌した。反応液に0.5M 塩酸(30mL)を加え、酢酸エチル(20mL)で3回抽出した。得られた酢酸エチル層を合わせて、飽和重曹水(50mL)および飽和食塩水(50mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(ヘキサン-酢酸エチル(1:1)で溶出)で精製し、(9H-フルオレン-9-イル)メチル 3-(2,3-ビス(メトキシメトキシ)フェニル)-3-ヒドロキシプロピルカルバメートを得た(1.017g,2.06mmol,46%(2工程))。
工程3.(9H-フルオレン-9-イル)メチル 3-(2,3-ビス(メトキシメトキシ)フェニル)-3-ヒドロキシプロピルカルバメート(114mg,0.231mmol)をN,N-ジメチルホルムアミド(1.0mL)に溶解した。イミダゾール(78.4mg,1.152mmol)およびtert-ブチルジメチルシリルクロリド(83.4mg,0.553mmol)を順次加え、45℃で8時間撹拌した。反応液に0.1M 塩酸(10mL)を加え、酢酸エチル(10mL)で3回抽出した。得られた酢酸エチル層を合わせて、水(15mL)、飽和重曹水(15mL)および飽和食塩水(15mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(ヘキサン-酢酸エチル(3:1)で溶出)で精製し、(9H-フルオレン-9-イル)メチル 3-(2,3-ビス(メトキシメトキシ)フェニル)-3-(tert-ブチルジメチル-シリルオキシ)プロピルカルバメートを得た(105mg,0.173mmol,75%)。
工程4.(9H-フルオレン-9-イル)メチル 3-(2,3-ビス(メトキシメトキシ)フェニル)-3-(tert-ブチルジメチルシリルオキシ)-プロピルカルバメート(88.7mg,0.146mmol)をN,N-ジメチルホルムアミド(1.0mL)に溶解し、ピペリジン(50μL)を加え、室温で1時間撹拌した。反応液を減圧留去し、該残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(クロロホルム-メタノール(8:1)で溶出)で精製し、3-(2,3-ビス(メトキシメトキシ)フェニル)-3-(tert-ブチルジメチルシリルオキシ)プロパン-1-アミンを得た(46.6mg,0.121mmol,83%)。
工程5.4-(4-(メトキシメトキシ)フェノキシ)安息香酸(31.0mg,0.113mmol)をジクロロメタン(2.0mL)に溶解し、0℃で撹拌した。1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド塩酸塩(32.8mg,0.171mmol)、3-(2,3-ビス(メトキシメトキシ)フェニル)-3-(tert-ブチルジメチル-シリルオキシ)プロパン-1-アミン(43.8mg,0.113mmol)およびトリエチルアミン(25μL)を順次加え、2時間撹拌した。反応液に0.2M 塩酸(10mL)を加え、酢酸エチル(10mL)で3回抽出した。得られた酢酸エチル層を合わせて、水(15mL)、飽和重曹水(15mL)および飽和食塩水(15mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(ヘキサン-クロロホルム(1:4)で溶出)で精製し、N-(3-(2,3-ビス(メトキシメトキシ)フェニル)-3-(tert-ブチルジメチルシリルオキシ)プロピル)-4-(4-(メトキシメトキシ)フェノキシ)ベンズアミドを得た(38.3mg,0.060mmol,53%)。
工程6.N-(3-(2,3-ビス(メトキシメトキシ)フェニル)-3-(tert-ブチルジメチルシリルオキシ)プロピル)-4-(4-(メトキシメトキシ)フェノキシ)ベンズアミド(35.0mg,0.055mmol)をテトラヒドロフラン(2.0mL)に溶解した。0℃にて、フッ化テトラ-n-ブチルアンモニウム(1.0M テトラヒドロフラン溶液)(50μL)を加え、1時間撹拌した。反応液に0.2M 塩酸(10mL)を加え、酢酸エチル(10mL)で3回抽出した。得られた酢酸エチル層を合わせて、水(15mL)、飽和重曹水(15mL)および飽和食塩水(15mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧留去した。残渣をN,N-ジメチルホルムアミド(2.0mL)に溶解し、ピリジニウムジロメート(103mg,0.182mmol)を加え、室温で15時間撹拌した。反応液にジエチルエーテル(15mL)を加え、セライト濾過し、該濾液を水(10mL)、飽和重曹水(10mL)および飽和食塩水(10mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧留去した。該残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(ヘキサン-酢酸エチル(3:2)で溶出)で精製し、N-(3-(2,3-ビス(メトキシメトキシ)フェニル)-3-オキソプロピル)-4-(4-(メトキシメトキシ)フェノキシ)ベンズアミドを得た(18.4mg,0.035mmol,64%(2工程))。
工程7.N-(3-(2,3-ビス(メトキシメトキシ)フェニル)-3-オキソプロピル)-4-(4-(メトキシメトキシ)フェノキシ)ベンズアミド(13.2mg,0.025mmol)をジクロロメタン(1.4mL)に溶解した。0℃にて、トリフルオロ酢酸(0.6mL)を加え、2時間撹拌した。反応液を減圧留去し、該残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(ヘキサン-酢酸エチル(1:2)で溶出)で精製し、化合物3を得た(9.4mg,0.024mmol,95%)。
 生成物は、EIMS(電子衝撃質量スペクトル)法による質量分析およびNMRによって解析した。EIMSおよびNMRの結果を以下に示す。
1H-NMR (600 MHz, CDCl3) δ 7.62 (2H, d, J = 8.9 Hz), 7.24 (1H, dd, J = 8.2, 1.2 Hz), 7.05 (1H, dd, J = 8.2, 1.2 Hz), 7.01 (1H, t, J = 6.1 Hz), 6.86 (2H, d, J = 8.6 Hz), 6.84 (2H, d, J = 8.9 Hz), 6.76 (2H, d, J = 8.6 Hz), 6.75 (1H, t, J = 8.2 Hz), 3.77 (2H, q, J = 6.1 Hz), 3.31 (2H, t, J = 6.1 Hz).
13C-NMR (150 MHz, CDCl3) δ 205.9, 167.3, 161.8, 153.7, 149.6, 147.9, 145.6, 128.7 (2C), 127.5, 121.5 (2C), 121.4 (2C), 121.1, 120.6, 119.2, 116.3 (2C), 116.0, 38.1, 34.6.
EIMS m/z (rel. int) 393 [M]+ (37), 230 (20), 213 (100).
HREIMS m/z 393.1211 (C22H19O6Nの計算値393.1212).
実施例4
N-(3-(2-アミノ-3-(4-ヒドロキシフェノキシ)フェニル)-3-オキソプロピル)-4-メトキシベンズアミド(化合物4)
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000016
 化合物1(9.4mg,0.024mmol)をN,N-ジメチルホルムアミド(1mL)に溶解し、炭酸カリウム(10.6mg,0.077mmol)およびヨウ化メチル(2.5μL,0.040mmol)を加え、室温で6時間撹拌した。反応液に0.5M 塩酸(10mL)を加え、酢酸エチル(10mL)で3回抽出した。得られた酢酸エチル層を合わせて、水(15mL)、飽和重曹水(15mL)および飽和食塩水(15mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(クロロホルムで溶出)で精製し、化合物4を得た(4.4mg,0.011mmol,45%)。
 生成物は、EIMS(電子衝撃質量スペクトル)法による質量分析およびNMRによって解析した。EIMSおよびNMRの結果を以下に示す。
1H-NMR (600 MHz, CDCl3) δ 7.72 (2H, d, J = 8.8 Hz), 7.46 (1H, dd, J = 8.3, 1.1 Hz), 6.89 (2H, d, J = 8.8 Hz), 6.87 (2H, d, J = 8.9 Hz), 6.82 (1H, dd, J = 8.3, 1.1 Hz), 6.79 (2H, d, J = 8.9 Hz), 6.51 (1H, t, J = 8.3 Hz), 3.86 (2H, q, J = 5.9 Hz), 3.82 (3H, s), 3.30 (2H, t, J = 5.9 Hz).
13C-NMR (150 MHz, CDCl3) δ 201.7, 166.9, 162.2, 151.9, 150.1, 145.6, 142.7, 128.7 (2C), 126.9, 125.3, 121.2, 119.9 (2C), 118.4, 116.4 (2C), 114.6, 113.7 (2C), 55.4, 39.0, 35.1.
EIMS m/z (rel. int) 406 [M]+ (100), 254 (88), 135 (79).
HREIMS m/z 406.1553 (C23H22O5N2の計算値406.1529).
実施例5
N-(3-(2-アミノ-3-(4-メトキシフェノキシ)フェニル)-3-オキソプロピル)-4-メトキシベンズアミド(化合物5)
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000017
 化合物1(9.4mg,0.024mmol)をN,N-ジメチルホルムアミド(1mL)に溶解し、炭酸カリウム(10.6mg,0.077mmol)およびヨウ化メチル(2.5μL,0.040mmol)を加え、室温で6時間撹拌した。反応液に0.5M 塩酸(10mL)を加え、酢酸エチル(10mL)で3回抽出した。得られた酢酸エチル層を合わせて、水(15mL)、飽和重曹水(15mL)および飽和食塩水(15mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(クロロホルム-メタノール(49:1)で溶出)で精製し、化合物5を得た(4.8mg,0.011mmol,48%)。
 生成物は、EIMS(電子衝撃質量スペクトル)法による質量分析およびNMRによって解析した。EIMSおよびNMRの結果を以下に示す。
1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.74 (2H, d, J = 8.9 Hz), 7.48 (1H, dd, J = 8.4, 1.2 Hz), 6.95 (2H, d, J = 9.1 Hz), 6.91 (2H, d, J = 8.9 Hz), 6.87 (2H, d, J = 9.1 Hz), 6.86 (1H, brs), 6.83 (1H, dd, J = 8.4, 1.2 Hz), 6.64 (2H, br. s), 6.53 (1H, t, J = 8.4 Hz), 3.86 (2H, q, J = 5.4 Hz), 3.83 (3H, s), 3.81 (3H, s), 3.32 (2H, t, J = 5.4 Hz).
13C-NMR (100 MHz, CDCl3) δ 201.7, 166.8, 162.1, 156.0, 145.7, 142.7, 128.7 (2C), 125.3, 121.2, 119.8 (2C), 118.3, 115.0 (2C), 114.6, 113.7 (2C), 55.7, 55.4, 39.0, 35.0.
EIMS m/z (rel. int) 420 [M]+ (61), 269 (100), 135 (48).
HREIMS m/z 420.1710 (C24H24O5N2の計算値420.1685).
実施例6
N-(3-(2-アミノ-3-(4-メトキシフェノキシ)フェニル)-3-オキソプロピル)-4-ヒドロキシベンズアミド(化合物6)
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000018
 化合物6は、(2-(4-(ベンジルオキシ)フェノキシ)フェニル)ヒドラジンの代わりに(2-(4-(メトキシフェノキシ)フェニル)ヒドラジンを用いること以外は、化合物1と同様の製法にしたがって合成された。
 生成物は、EIMS(電子衝撃質量スペクトル)法による質量分析およびNMRによって解析した。EIMSおよびNMRの結果を以下に示す。
1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.64 (2H, d, J = 8.6 Hz), 7.45 (1H, dd, J = 8.3, 1.1 Hz), 6.93 (2H, d, J = 8.7 Hz), 6.86 (2H, d, J = 8.7 Hz), 6.85 (2H, d, J = 8.6 Hz), 6.82 (1H, dd, J = 8.3, 1.1 Hz), 6.63 (2H, brs), 6.52 (1H, t, J = 8.3 Hz), 3.86 (2H, q, J = 5.8 Hz), 3.79 (3H, s), 3.31 (2H, t, J = 5.8 Hz).
13C-NMR (100 MHz, CDCl3) δ 201.6, 167.5, 159.5, 155.9, 149.9, 145.6, 142.7, 128.9 (2C), 126.0, 125.2, 121.2, 119.7 (2C), 118.2, 115.5 (2C), 114.9 (2C), 114.7, 55.7, 38.9, 35.1.
EIMS m/z (rel. int) 406 [M]+ (3), 268 (100), 121 (29).
HREIMS m/z 406.1535 (C23H22O5N2の計算値406.1529).
実施例7
N-(3-(2-アミノ-3-(4-ヒドロキシフェノキシ)フェニル)-3-オキソプロピル)-3-メトキシベンズアミド(化合物7)
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000019
 化合物7は、塩化4-(メトキシメトキシ)ベンゾイルの代わりに塩化3-メトキシベンゾイルを用いること以外は、化合物1と同様の製法にしたがって合成された。
 生成物は、EIMS(電子衝撃質量スペクトル)法による質量分析およびNMRによって解析した。EIMSおよびNMRの結果を以下に示す。
1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.46 (1H, dd, J = 8.3, 1.0 Hz), 7.23-7.38 (3H, m), 7.00-7.08 (2H, m), 6.88 (2H, d, J = 8.8 Hz), 6.83 (2H, d, J = 8.8 Hz), 6.79-6.84 (1H, m), 6.64 (2H, brs), 6.52 (1H, t, J = 8.3 Hz), 6.30 (1H, brs), 3.87 (2H, q, J = 5.5 Hz), 3.83 (3H, s), 3.32 (2H, t, J = 5.5 Hz).
13C-NMR (100 MHz, CDCl3) δ 201.5, 167.6, 159.8, 152.5, 149.6, 145.8, 142.7, 135.8, 129.6, 125.1, 121.0, 120.0 (2C), 118.7, 118.2, 117.8, 116.5 (2C), 114.6, 112.3, 55.4, 38.8, 35.2.
EIMS m/z (rel. int) 406 [M]+ (95), 255 (100), 151 (54), 135 (44).
HREIMS m/z 406.1550 (C23H22O5N2の計算値406.1529).
実施例8
N-(3-(2-アミノ-3-(4-ヒドロキシフェノキシ)フェニル)-3-オキソプロピル)-アセトアミド(化合物8)
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000020
 化合物8は、塩化4-(メトキシメトキシ)ベンゾイルの代わりに無水酢酸を用いること以外は、化合物1と同様の製法にしたがって合成された。
 生成物は、EIMS(電子衝撃質量スペクトル)法による質量分析およびNMRによって解析した。EIMSおよびNMRの結果を以下に示す。
1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.44 (1H, dd, J = 8.3, 1.2 Hz), 6.89 (2H, d, J = 8.9 Hz), 6.83 (1H, dd, J = 8.3, 1.2 Hz), 6.82 (2H, d, J = 8.9 Hz), 6.63 (2H, brs), 6.53 (1H, t, J = 8.3 Hz), 6.22 (1H, brs), 5.47 (1H, brs), 3.68 (2H, q, J = 5.4 Hz), 3.22 (2H, t, J = 5.4 Hz), 1.97 (3H, s).
13C-NMR (100 MHz, CDCl3) δ 201.4, 170.4, 152.3, 149.7, 145.8, 142.6, 125.1, 121.0, 120.0 (2C), 118.2, 116.4 (2C), 114.6, 38.9, 34.6, 23.3.
EIMS m/z (rel. int) 314 [M]+ (98), 254 (100).
HREIMS m/z 314.1259 (C17H18O4N2の計算値314.1267).
実施例9
N-(3-(2-アミノ-3-(4-ヒドロキシフェノキシ)フェニル)-3-オキソプロピル)-4-フルオロベンズアミド(化合物9)
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000021
 化合物9は、塩化4-(メトキシメトキシ)ベンゾイルの代わりに塩化4-フルオロベンゾイルを用いること以外は、化合物1と同様の製法にしたがって合成された。
 生成物は、EIMS(電子衝撃質量スペクトル)法による質量分析およびNMRによって解析した。EIMSおよびNMRの結果を以下に示す。
1H-NMR (600 MHz, CD3OD) δ 7.79 (2H, dd, J = 8.5, 5.3 Hz), 7.50 (1H, dd, J = 8.3, 1.2 Hz), 7.11 (2H, dd, J = 9.0, 8.5 Hz), 6.87 (2H, d, J = 8.9 Hz), 6.82 (1H, dd, J = 8.3, 1.2 Hz), 6.81 (2H, d, J = 8.9 Hz), 6.54 (1H, t, J = 8.3 Hz), 3.82 (2H, t, J = 6.0 Hz), 3.34 (2H, t, J = 6.0 Hz).
13C-NMR (150 MHz, CD3OD) δ 201.8, 167.4, 166.6 (d, J = 229.9 Hz), 164.1, 153.5, 149.1, 146.3, 142.6, 129.5 (2C, d, J = 8.6 Hz), 125.1, 120.9, 120.2 (2C), 118.4, 116.4 (2C), 115.7 (2C, d, J = 21.5 Hz), 114.9, 38.9, 35.6.
EIMS m/z (rel. int) 394 [M]+ (46), 254 (100), 123 (39).
HREIMS m/z 394.1327 (C22H19O4N2Fの計算値394.1329).
実施例10
N-(3-(2-アミノ-3-(4-ヒドロキシフェノキシ)フェニル)-3-オキソプロピル)-シクロヘキサンカルボキサミド(化合物10)
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000022
 化合物10は、塩化4-(メトキシメトキシ)ベンゾイルの代わりに塩化シクロヘキサンカルボニルを用いること以外は、化合物1と同様の製法にしたがって合成された。
 生成物は、EIMS(電子衝撃質量スペクトル)法による質量分析およびNMRによって解析した。EIMSおよびNMRの結果を以下に示す。
1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.44 (1H, d, J = 8.0 Hz), 6.90 (2H, d, J = 8.9 Hz), 6.78-6.87 (3H, m), 6.63 (2H, brs), 6.52 (1H, t, J = 8.0 Hz), 6.23 (1H, brs), 5.56 (1H, brs), 3.66 (2H, q, J = 5.7 Hz), 3.20 (2H, t, J = 5.7 Hz), 2.05 (1H, tt, J = 12.2, 3.9 Hz), 1.73-1.86 (4H, m), 1.35-1.48 (2H, m), 1.17-1.31 (4H, m).
13C-NMR (100 MHz, CDCl3) δ 201.6, 176.2, 152.2, 149.9, 145.7, 142.6, 125.2, 121.1, 120.0 (2C), 118.3, 116.5 (2C), 114.6, 45.5, 39.0, 34.4, 29.6 (2C), 25.7 (3C).
EIMS m/z (rel. int) 382 [M]+ (100), 254 (90).
HREIMS m/z 382.1854 (C22H26O4N2の計算値382.1893).
実施例11
N-(3-(2-アミノ-3-(4-ヒドロキシフェノキシ)フェニル)-3-オキソプロピル)-(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)-カルボキサミド(化合物11)
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000023
 化合物11は、塩化4-(メトキシメトキシ)ベンゾイルの代わりに塩化テトラヒドロ-2H-ピラン-4-カルボニルを用いること以外は、化合物1と同様の製法にしたがって合成された。
 生成物は、EIMS(電子衝撃質量スペクトル)法による質量分析およびNMRによって解析した。EIMSおよびNMRの結果を以下に示す。
1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.68 (1H, brs), 7.45 (1H, dd, J = 8.3, 1.2 Hz), 6.87 (2H, d, J = 8.9 Hz), 6.83 (1H, dd, J = 8.3, 1.2 Hz), 6.80 (2H, d, J = 8.9 Hz), 6.76 (2H, brs), 6.62 (1H, brs), 6.54 (1H, t, J = 8.3 Hz), 3.99 (2H, ddd, J = 11.3, 3.8, 2.2 Hz), 3.65 (2H, q, J = 5.6 Hz), 3.41 (2H, td, J = 11.3, 3.4 Hz), 3.21 (2H, t, J = 5.6 Hz), 2.33 (1H, tt, J = 10.7, 5.0 Hz), 1.70-1.83 (4H, m).
13C-NMR (100 MHz, CDCl3) δ 201.8, 175.1, 153.4, 149.1, 146.2, 142.5, 125.1, 120.9, 120.2 (2C), 118.3, 116.4 (2C), 114.9, 67.4 (2C), 42.2, 38.8, 34.9, 29.2 (2C).
EIMS m/z (rel. int) 384 [M]+ (100), 328 (20), 254 (78).
HREIMS m/z 384.1673 (C21H24O5N2の計算値384.1685).
実施例12
N-(3-(2-アミノ-3-メトキシフェニル)-3-オキソプロピル)-4-ヒドロキシベンズアミド(化合物12)
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000024
 化合物12は、2-(4-(ベンジルオキシ)フェノキシ)フェニル)ヒドラジンの代わりに(2-メトキシフェニル)ヒドラジンを用いること以外は、化合物1と同様の製法にしたがって合成された。
 生成物は、EIMS(電子衝撃質量スペクトル)法による質量分析およびNMRによって解析した。EIMSおよびNMRの結果を以下に示す。
1H-NMR (400 MHz, CDCl3-CD3OD (4:1)) δ 7.63 (2H, d, J = 8.5 Hz), 7.37 (1H, d, J = 8.3 Hz), 6.86 (1H, d, J = 8.3 Hz), 6.83 (2H, d, J = 8.5 Hz), 6.60 (1H, t, J = 8.3 Hz), 3.88 (3H, s), 3.80 (2H, q, J = 5.7 Hz), 3.29 (2H, t, J = 6.6 Hz).
13C-NMR (100 MHz, CDCl3-CD3OD (4:1)) δ 202.0, 168.2, 160.4, 147.5, 141.6, 129.0 (2C), 125.5, 122.6, 117.2, 115.4, 114.7, 113.3 (2C), 55.9, 39.0, 35.3.
EIMS m/z (rel. int) 314 [M]+ (41), 177 (100), 121 (67), 44 (77).
HREIMS m/z 314.1258 (C17H18O4N2の計算値314.1267).
実施例13
N-(3-(2-アミノ-3-ヒドロキシフェニル)-3-オキソプロピル)-4-ヒドロキシベンズアミド(化合物13)
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000025
 化合物13は、2-(4-(ベンジルオキシ)フェノキシ)フェニル)ヒドラジンの代わりに(2-(ベンジルオキシ)フェニル)ヒドラジンを用いること以外は、化合物1と同様の製法にしたがって合成された。
 生成物は、EIMS(電子衝撃質量スペクトル)法による質量分析およびNMRによって解析した。EIMSおよびNMRの結果を以下に示す。
1H-NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.68 (2H, d, J = 8.5 Hz), 7.35 (1H, d, J = 8.1 Hz), 6.78-6.84 (3H, m), 6.48 (1H, t, J = 8.1 Hz), 3.72 (2H, q, J = 6.6 Hz), 3.28 (2H, t, J = 6.6 Hz).
13C-NMR (100 MHz, CD3OD) δ 202.6, 170.2, 162.0, 146.3, 142.4, 130.2 (2C), 126.5, 122.9, 118.9, 118.0, 116.1 (2C), 115.7, 39.8, 37.2.
EIMS m/z (rel. int) 300 [M]+ (87), 163 (57), 121 (100), 44 (91).
HREIMS m/z 300.1128 (C16H16O4N2の計算値300.1110).
実施例14
N-(3-(2-アミノ-3-(4-メチルフェノキシ)フェニル)-3-オキソプロピル)-4-ヒドロキシベンズアミド(化合物14)
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000026
 化合物14は、2-(4-(ベンジルオキシ)フェノキシ)フェニル)ヒドラジンの代わりに(2-(p-トリルオキシ)フェニル)ヒドラジンを用いる以外は、化合物1と同様の製法にしたがって合成された。
 生成物は、EIMS(電子衝撃質量スペクトル)法による質量分析およびNMRによって解析した。EIMSおよびNMRの結果を以下に示す。
1H-NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.68 (2H, d, J = 8.7 Hz), 7.63 (1H, d, J = 8.2 Hz), 7.13 (2H, d, J = 8.2 Hz), 6.82-6.88 (3H, m), 6.80 (2H, d, J = 8.2 Hz), 6.55 (1H, t, J = 8.2 Hz), 3.74 (2H, t, J = 6.8 Hz), 3.31 (2H, t, J = 6.8 Hz), 2.30 (3H, s).
13C-NMR (100 MHz, CD3OD) δ 202.4, 170.2, 162.0, 156.2, 146.1, 144.6, 134.0, 131.3 (2C), 130.2 (2C), 127.4, 126.4, 123.5, 119.9, 118.9 (2C), 116.1 (2C), 115.4, 39.9, 37.1, 20.7.
EIMS m/z (rel. int) 390 [M]+ (100), 303 (16), 252 (82), 226 (25), 121 (17).
HREIMS m/z 390.1577 (C23H22O4N2の計算値390.1580).
実施例15
N-(3-(2-アミノ-3-(4-(トリフルオロメチル)フェノキシ)フェニル)-3-オキソプロピル)-4-ヒドロキシベンズアミド(化合物15)
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000027
 化合物15は、2-(4-(ベンジルオキシ)フェノキシ)フェニル)ヒドラジンの代わりに(2-(4-(トリフルオロメチル)フェノキシ)フェニル)ヒドラジンを用いる以外は、化合物1と同様の製法にしたがって合成された。
 生成物は、EIMS(電子衝撃質量スペクトル)法による質量分析およびNMRによって解析した。EIMSおよびNMRの結果を以下に示す。
1H-NMR (600 MHz, CD3OD) δ 7.77 (1H, d, J = 8.2 Hz), 7.68 (2H, d, J = 8.7 Hz), 7.60 (2H, d, J = 9.0 Hz), 7.04-7.08 (3H, m), 6.81 (2H, d, J = 8.7 Hz), 6.65 (1H, t, J = 8.2 Hz), 3.74 (2H, t, J = 6.7 Hz), 3.33 (2H, t, J = 6.8 Hz).
13C-NMR (150 MHz, CD3OD) δ 202.4, 170.2, 162.0, 161.9, 145.1, 143.7, 130.2 (2C), 129.3, 128.2 (2C, q, J = 3.6 Hz), 126.7, 126.2, 125.8 (q, J = 32.2 Hz), 125.7 (q, J = 270.8 Hz), 120.5, 117.9 (2C), 116.1 (2C), 115.6, 39.9, 37.1.
EIMS m/z (rel. int) 444 [M]+ (100), 306 (90), 280 (41), 121 (30).
HREIMS m/z 444.1296 (C23H19O4N2F3の計算値444.1297).
実施例16
N-(3-(2-アミノ-3-(3,4-ジメトキシフェノキシ)フェニル)-3-オキソプロピル)-4-ヒドロキシベンズアミド(化合物16)
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000028
 化合物16は、2-(4-(ベンジルオキシ)フェノキシ)フェニル)ヒドラジンの代わりに(2-(3,4-ジメトキシフェノキシ)フェニル)ヒドラジンを用いること以外は、化合物1と同様の製法にしたがって合成された。
 生成物は、EIMS(電子衝撃質量スペクトル)法による質量分析およびNMRによって解析した。EIMSおよびNMRの結果を以下に示す。
1H-NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.68 (2H, d, J = 8.5 Hz), 7.61 (1H, d, J = 8.3 Hz), 6.87 (1H, d, J = 8.0 Hz), 6.86 (1H, d, J = 8.3 Hz), 6.80 (2H, d, J = 8.5 Hz), 6.70 (1H, d, J = 2.7 Hz), 6.55 (1H, t, J = 8.3 Hz), 6.47 (1H, dd, J = 8.0, 2.7 Hz), 3.80 (3H, s), 3.77 (3H, s), 3.74 (2H, t, J = 6.6 Hz), 3.31 (2H, t, J = 6.6 Hz).
13C-NMR (100 MHz, CD3OD) δ 202.4, 170.2, 162.0, 152.4, 151.6, 146.8, 146.6, 144.4, 130.2, 127.1, 126.4, 122.9, 119.8, 116.1 (2C), 115.4, 113.9, 110.5 (2C), 104.9, 57.0, 56.5, 39.9, 37.1.
EIMS m/z (rel. int) 436 [M]+ (100), 299 (85), 284 (47), 272 (19), 121 (52).
HREIMS m/z 436.1656 (C24H24O6N2の計算値436.1634).
実施例17
N-(3-(2-アミノ-3-(4-クロロフェノキシ)フェニル)-3-オキソプロピル)-4-ヒドロキシベンズアミド(化合物17)
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000029
 化合物17は、2-(4-(ベンジルオキシ)フェノキシ)フェニル)ヒドラジンの代わりに(2-(4-クロロフェノキシ)フェニル)ヒドラジンを用いること以外は、化合物1と同様の製法にしたがって合成された。
 生成物は、EIMS(電子衝撃質量スペクトル)法による質量分析およびNMRによって解析した。EIMSおよびNMRの結果を以下に示す。
1H-NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.70 (1H, d, J = 8.3 Hz), 7.67 (2H, d, J = 8.7 Hz), 7.30 (2H, d, J = 8.7 Hz), 6.97 (1H, d, J = 8.3 Hz), 6.93 (2H, d, J = 8.8 Hz), 6.80 (2H, d, J = 8.8 Hz), 6.60 (1H, t, J = 8.3 Hz), 3.74 (2H, t, J = 6.8 Hz), 3.30 (2H, t, J = 6.8 Hz).
13C-NMR (100 MHz, CD3OD) δ 202.4, 170.2, 162.1, 157.6, 144.9, 131.4, 130.8 (2C), 130.2 (2C), 129.0, 128.4, 126.4, 124.9, 120.2, 119.8 (2C), 116.0 (2C), 115.5, 39.9, 37.1.
EIMS m/z (rel. int) 412 [M+2]+ (38), 410 [M]+ (100), 274 (38), 272 (83), 246 (36), 121 (56).
HREIMS m/z 410.1046 (C22H19O4ClN2の計算値410.1033).
実施例18
8-(4-ヒドロキシフェノキシ)-1,2,3,4-テトラヒドロ-β-カルボリン-1-オン(化合物18)
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000030
 J. Org. Chem. 2005, 70, 8854-8858に記載の製法により合成された8-(4-ベンジルオキシフェノキシ)-1,2,3,4-テトラヒドロ-β-カルボリン-1-オン(299mg,0.778mmol)を酢酸エチル(3mL)およびエタノール(3mL)に溶解し、20% 水酸化パラジウム-炭素(60mg)を加え、水素雰囲気(1気圧)下室温で4時間撹拌した。反応液を濾過し、該濾液を減圧留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(クロロホルム-メタノール(9:1)で溶出)で精製し、化合物18を得た(171.7mg,0.583mmol,75%)。
 生成物は、EIMS(電子衝撃質量スペクトル)法による質量分析およびNMRによって解析した。EIMSおよびNMRの結果を以下に示す。
1H-NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 11.69 (1H, br.s), 9.23 (1H, br.s), 7.53 (1H, br.s), 7.30 (1H, d, J = 8.0 Hz), 6.97 (1H, t, J = 8.0 Hz), 6.88 (2H, d, J = 8.2 Hz), 6.77 (2H, d, J = 8.2 Hz), 6.59 (1H, d, J = 8.0 Hz), 3.51 (2H, t, J = 6.8 Hz), 2.92 (2H, t, J = 6.8 Hz).
13C-NMR (150 MHz, DMSO-d6) δ 161.4, 153.4, 148.7, 144.7, 128.8, 127.8, 127.4, 120.0 (2C), 119.9, 118.9, 115.9 (2C), 114.6, 110.8, 41.0, 20.5.
EIMS m/z (rel. int) 294 [M]+ (100), 265 (14), 237 (49).
HREIMS m/z 294.0992 (294.1004の計算値C17H14O3N2).
実施例19および20
N-(3-(2-アミノ-3-(4-クロロフェノキシ)フェニル)-3-オキソプロピル)-4-アミノベンズアミド(化合物19)およびN-(3-(2-アミノ-3-(4-クロロフェノキシ)フェニル)-3-オキソプロピル)-4-アセチルアミノベンズアミド(化合物20)
化合物19:
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000031
化合物20:
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000032
工程1.N-(2-(7-(4-クロロフェノキシ)-1H-インドール-3-イル)エチル)-2-ニトロベンゼンスルホンアミド(172mg,0.364mmol)をN,N-ジメチルホルムアミド(4mL)に溶解し、炭酸カリウム(100mg,0.728mmol)およびp-メルカプト安息香酸(225mg,1.46mmol)を加え、40℃で10時間撹拌した。反応液に水(15mL)を加え、酢酸エチル(10mL)で4回抽出した。得られた酢酸エチル層を合わせて、水(30mL)、飽和重曹水(20mL)および飽和食塩水(20mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧留去した。残渣をジクロロメタン(4mL)に溶解し、トリエチルアミン(0.300mL,2.16mmol)および塩化4-アセトアミドベンゾイル(194mg,1.08mmol)のアセトン溶液(5mL)を加え、室温で2時間撹拌した。反応液に0.3M 塩酸(20mL)を加え、酢酸エチル(20mL)で3回抽出した。得られた酢酸エチル層を合わせて、水(30mL)、飽和重曹水(30mL)および飽和食塩水(30mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(ヘキサン-酢酸エチル(9:1)で溶出)で精製し、N-(2-(7-(4-クロロフェノキシ)-1H-インドール-3-イル)エチル)-4-アセトアミドベンズアミドを得た(29mg,0.065mmol,18%(2工程))。
工程2.N-(2-(7-(4-クロロフェノキシ)-1H-インドール-3-イル)エチル)-4-アセトアミドベンズアミド(29mg,0.065mmol)をアセトニトリル(1mL)および水(1mL)に溶解し、メタ過ヨウ素酸ナトリウム(60mg,0.281mmol)を加え、60℃で48時間撹拌した。反応液に水(10mL)を加え、酢酸エチル(10mL)で3回抽出した。得られた酢酸エチル層を合わせて、飽和食塩水(10mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧留去した。残渣をメタノール(1mL)に溶解し、塩酸-メタノール試薬(5~10%)(1mL)を加え、室温で4時間撹拌した。反応液に飽和重曹水(10mL)を加え、酢酸エチル(15mL)で3回抽出した。得られた酢酸エチル層を合わせて、飽和食塩水(20mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(クロロホルム-メタノール(99:1)で溶出)で精製し、化合物19を得た(3mg,0.007mmol,10%(2工程))。また、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(クロロホルム-メタノール(49:1)で溶出)で精製し、化合物20を得た(2mg,0.005mmol,7%(2工程))。
 生成物は、EIMS(電子衝撃質量スペクトル)法による質量分析およびNMRによって解析した。EIMSおよびNMRの結果を以下に示す。
化合物19:
1H-NMR (600 MHz, CD3OD) δ 7.71 (1H, dd, J = 8.2, 1.3 Hz), 7.57 (2H, d, J = 8.9 Hz), 7.31 (2H, d, J = 8.9 Hz), 6.97 (1H, dd, J = 8.2, 1.3 Hz), 6.94 (2H, d, J = 9.1 Hz), 6.66 (2H, d, J = 9.1 Hz), 6.60 (1H, t, J = 8.2 Hz), 3.73 (2H, t, J = 6.9 Hz), 3.32 (2H, t, J = 6.9 Hz).
13C-NMR (150 MHz, CD3OD) δ 202.5, 170.5, 157.6, 153.2, 144.9, 144.8, 130.8 (2C), 129.9 (2C), 129.0, 128.5, 124.9, 123.2, 120.2, 119.8 (2C), 115.5, 114.7 (2C), 40.0, 37.0.
EIMS m/z (rel. int) 411 [M+2]+ (4), 409 [M]+ (12), 274 (29), 272 (69), 136 (47), 120 (100).
HREIMS m/z 409.1219 (C22H20O3N3Clの計算値409.1193).
化合物20:
1H-NMR (600 MHz, CDCl3) δ 7.71 (2H, d, J = 8.9 Hz), 7.55 (2H, d, J = 8.9 Hz), 7.53 (1H, dd, J = 8.2, 1.2 Hz), 7.37 (1H, br.s), 7.25 (2H, d, J = 9.1 Hz), 6.92 (1H, dd, J = 8.2, 1.2 Hz), 6.88 (2H, d, J = 9.1 Hz), 6.87 (1H, t, J = 6.3 Hz), 6.56 (1H, t, J = 8.2 Hz), 6.53 (2H, br.s), 3.84 (2H, q, J = 5.7 Hz), 3.30 (2H, t, J = 5.7 Hz), 2.17 (3H, s).
13C-NMR (150 MHz, CDCl3) δ 201.6, 168.3, 166.6, 155.5, 143.8, 143.1, 140.8, 129.9, 129.8 (2C), 128.4, 128.0 (2C), 126.6, 123.4, 119.0 (2C), 118.9 (2C), 118.8, 114.8, 38.9, 35.0, 24.7.
EIMS m/z (rel. int) 453 [M+2] (2), 451 [M]+ (5), 274 (40), 272 (100), 136 (34), 120 (49).
HREIMS m/z 451.1278 (C24H22O4N3Clの計算値451.1299).
実施例21
N-(2-(3-(4-メトキシフェノキシ)ベンゾイルアミノ)エチル)-4-ヒドロキシベンズアミド(化合物21)
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000033
工程1.N-(tert-ブトキシカルボニル)エチレンジアミン(202mg,1.26mol)をジクロロメタン(3mL)に溶解し、3-(4-メトキシフェノキシ)安息香酸(385mg,1.58mmol)、N,N-ジイソプロピルエチルアミン(660μL,3.80mmol)および(1-シアノ-2-エトキシ-2-オキソエチリデンアミノオキシ)ジメチルアミノモルホリノカルベニウム(810mg,1.89mmol)を加え、室温で18時間撹拌した。反応液に0.3M 塩酸(20mL)を加え、酢酸エチル(20mL)で3回抽出した。得られた酢酸エチル層を合わせて、飽和重曹水(40mL)および飽和食塩水(40mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(ヘキサン-酢酸エチル(2:3)で溶出)で精製し、tert-ブチル 2-(3-(4-メトキシフェノキシ)フェニルアミド)エチルカルバメートを得た(467mg,1.33mmol,96%)。
工程2.tert-ブチル 2-(3-(4-メトキシフェノキシ)フェニルアミド)エチルカルバメート(101mg,0.261mmol)をメタノール(2.5mL)に溶解し、塩酸-メタノール試薬(5~10%)(2.5mL)を加え、室温で5時間撹拌した。反応液を減圧留去し、残渣をジクロロメタン(5mL)に溶解し、4-(メトキシメトキシ)安息香酸(63mg,0.342mmol)、N,N-ジイソプロピルエチルアミン(200μL,1.15mmol)、および(1-シアノ-2-エトキシ-2-オキソエチリデンアミドオキシ)ジメチルアミノモルホリノカルベニウム(173mg,0.404mmol)を加え、室温で15時間撹拌した。反応液に0.3M 塩酸(20mL)を加え、酢酸エチル(20mL)で3回抽出した。得られた酢酸エチル層を合わせて、飽和重曹水(40mL)および飽和食塩水(40mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(酢酸エチルで溶出)で精製し、N-(2-(4-(メトキシメトキシ)フェニルアミド)エチル)-3-(4-メトキシフェノキシ)ベンズアミドを得た(80mg,0.178mmol,68%(2工程))。
工程3.N-(2-(4-(メトキシメトキシ)フェニルアミド)エチル)-3-(4-メトキシフェノキシ)ベンズアミド(49mg,0.109mmol)をメタノール(1.5mL)に溶解し、塩酸-メタノール試薬(5~10%)(1.5mL)を加え、室温で5時間撹拌した。反応液を減圧留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(クロロホルム-メタノール(19:1)で溶出)で精製し、化合物21を得た(39mg,0.096mmol,88%)。
 生成物は、EIMS(電子衝撃質量スペクトル)法による質量分析及びNMRによって解析した。EIMS及びNMRの結果を以下に示す。
1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.38 (1H, br.s), 8.00 (1H, br.s), 7.69 (1H, br.s), 7.63 (2H, d, J = 8.8 Hz), 7.44 (1H, ddd, J = 7.9, 2.0, 1.2 Hz), 7.40 (1H, dd, J = 2.0, 1.2 Hz), 7.29 (1H, t, J = 7.9 Hz), 7.02 (1H, ddd, J = 7.9, 2.0, 1.2 Hz), 6.93 (2H, d, J = 9.2 Hz), 6.86 (2H, d, J = 9.2 Hz), 6.79 (2H, d, J = 8.8 Hz), 3.77 (3H, s), 3.53-3.60 (4H, m).
13C-NMR (100 MHz, CDCl3) δ 169.0, 168.6, 160.2, 158.7, 156.0, 149.5, 135.5, 129.7, 129.0 (2C), 124.7, 120.8 (2C), 120.7, 120.5, 116.2 (2C), 115.2, 114.9 (2C), 55.5, 40.5, 40.2.
EIMS m/z (rel. int) 406 [M]+ (100), 269 (40), 256 (23), 227 (69), 121 (73).
HREIMS m/z 406.1505 (C23H22N2O5の計算値406.1529).
実施例22
N-(2-(2-(4-メトキシフェノキシ)ベンゾイルアミノ)エチル)-4-ヒドロキシベンズアミド(化合物22)
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000034
 化合物22は、3-(4-メトキシフェノキシ)安息香酸の代わりに、2-(4-メトキシフェノキシ)安息香酸を用いる以外は、化合物21と同様の製法にしたがって合成された。
 生成物は、EIMS(電子衝撃質量スペクトル)法による質量分析及びNMRによって解析した。EIMS及びNMRの結果を以下に示す。
1H-NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.87 (1H, dd, J = 7.8, 1.7 Hz), 7.57 (2H, d, J = 8.8 Hz), 7.37 (1H, td, J = 7.8, 1.7 Hz), 7.13 (1H, td, J = 7.8, 1.7 Hz), 6.92 (2H, d, J = 9.3 Hz), 6.85 (2H, d, J = 9.3 Hz), 6.71-6.80 (3H, m), 3.79 (3H, s), 3.62 (2H, t, J = 5.9 Hz), 3.55 (2H, t, J = 5.9 Hz).
13C-NMR (100 MHz, CD3OD) δ 170.4, 164.3, 162.0, 158.2, 157.8, 150.1, 133.6, 131.8, 130.2 (2C), 126.2, 123.8, 122.2 (2C), 121.9, 118.3, 116.1 (2C), 116.0 (2C), 56.1, 40.7, 40.6.
EIMS m/z (rel. int) 406 [M]+ (25), 215 (100).
HREIMS m/z 406.1549 (C23H22N2O5の計算値406.1529).
実施例23
N-(4-ヒドロキシフェニル)-4-(3-(4-クロロフェノキシ)フェニルアミノ)-4-オキソブタンアミド(化合物23)
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000035
 4-(4-ヒドロキシフェニルアミノ)-4-オキソブタン酸(26mg,0.122mmol)をメタノール(2mL)に溶解し、3-(4-クロロフェノキシ)アニリン(26mg,0.136mmol)および4-(4,6-ジメトキシ-1,3,5-トリアジン-2-イル)-4-メチルモルホリニウムクロリド(37mg,0.134mmol)を加え、室温で1時間撹拌した。反応液に0.3M 塩酸(10mL)を加え、酢酸エチル(10mL)で3回抽出した。得られた酢酸エチル層を合わせて、飽和重曹水(20mL)および飽和食塩水(20mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(クロロホルム-メタノール(19:1)で溶出)で精製し、化合物23を得た(11mg,0.026mmol,21%)。
 生成物は、EIMS(電子衝撃質量スペクトル)法による質量分析及びNMRによって解析した。EIMS及びNMRの結果を以下に示す。
1H-NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.36 (1H, t, J = 1.5 Hz), 7.32 (2H, d, J = 9.0 Hz), 7.29 (2H, d, J = 8.9 Hz), 7.24-7.28 (2H, m), 6.97 (2H, d, J = 9.0 Hz), 6.73-6.70 (3H, m), 2.65-2.74 (4H, m).
13C-NMR (100 MHz, CD3OD) δ 173.1, 172.6, 158.7, 157.4, 155.3, 141.6, 131.7, 131.0, 130.8 (2C), 129.4, 123.4 (2C), 121.4 (2C), 116.2 (2C), 116.1, 115.2, 111.6, 32.8, 32.4.
EIMS m/z (rel. int) 412 [M+2]+ (4), 410 [M]+ (11), 303 (25), 301 (67), 221 (33), 219 (100), 191 (92), 109 (84).
HREIMS m/z 410.1019 (C22H19N2O4Clの計算値410.1033).
実施例24
N-(3-(3-(4-クロロフェノキシ)フェニルアミノ)-3-オキソプロピル)-4-ヒドロキシベンズアミド(化合物24)
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000036
工程1.3-(4-クロロフェノキシ)アニリン(55mg,0.250mmol)をジクロロメタン(3mL)に溶解し、N-(tert-ブトキシカルボニル)-β-アラニン(59mg,0.312mmol)、N,N-ジイソプロピルエチルアミン(130μL,0.776mmol)および(1-シアノ-2-エトキシ-2-オキソエチリデンアミノオキシ)ジメチルアミノモルホリノカルベニウム(145mg,0.339mmol)を加え、室温で16時間撹拌した。反応液に0.3M 塩酸(20mL)を加え、酢酸エチル(20mL)で3回抽出した。得られた酢酸エチル層を合わせて、飽和重曹水(40mL)および飽和食塩水(40mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(ヘキサン-酢酸エチル(3:7)で溶出)で精製し、tert-ブチル 3-(3-(4-クロロフェノキシ)フェニルアミノ)-3-オキソプロピルカルバメートを得た(61mg,0.155mmol,62%)。
工程2.tert-ブチル 3-(3-(4-クロロフェノキシ)フェニルアミノ)-3-オキソプロピルカルバメート(53mg,0.135mmol)をメタノール(1.5mL)に溶解し、塩酸-メタノール試薬(5~10%)(1.5mL)を加え、室温で4時間撹拌した。反応液を減圧留去し、残渣をジクロロメタン(3mL)に溶解し、4-(メトキシメトキシ)安息香酸(32mg,0.175mmol)、N,N-ジイソプロピルエチルアミン(100μL,0.574mmol)および(1-シアノ-2-エトキシ-2-オキソエチリデンアミノオキシ)ジメチルアミノモルホリノカルベニウム(90mg,0.210mmol)を加え、室温で12時間撹拌した。反応液に0.3M 塩酸(20mL)を加え、酢酸エチル(20mL)で3回抽出した。得られた酢酸エチル層を合わせて、飽和重曹水(40mL)および飽和食塩水(40mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(クロロホルム-メタノール(39:1)で溶出)で精製し、N-(3-(3-(4-クロロフェノキシ)フェニルアミノ)-3-オキソプロピル)-4-(メトキシメトキシ)ベンズアミドを得た(38mg,0.082mmol,61%(2工程))。
工程3.N-(3-(3-(4-クロロフェノキシ)フェニルアミノ)-3-オキソプロピル)-4-(メトキシメトキシ)ベンズアミド(28mg,0.063mmol)をメタノール(1mL)に溶解し、塩酸-メタノール試薬(5~10%)(1mL)を加え、室温で5時間撹拌した。反応液を減圧留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(クロロホルム-メタノール(19:1)で溶出)で精製し、化合物24を得た(9mg,0.022mmol,35%)。
 生成物は、EIMS(電子衝撃質量スペクトル)法による質量分析及びNMRによって解析した。EIMS及びNMRの結果を以下に示す。
1H-NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.66 (2H, d, J = 8.8 Hz), 7.32-7.36 (1H, m), 7.28 (2H, d, J = 9.0 Hz), 7.24-7.27 (2H, m), 6.95 (2H, d, J = 9.0 Hz), 6.83 (2H, J = 8.8 Hz), 6.70-6.74 (1H, m), 3.67 (2H, t, J = 6.5 Hz), 2.65 (2H, t, J = 6.5 Hz).
13C-NMR (100 MHz, CD3OD) δ 170.8, 168.4, 160.3, 157.2, 155.5, 139.6, 129.8, 129.5 (2C), 128.8 (2C), 128.2, 124.7, 120.0 (2C), 115.1 (2C), 114.8, 114.2, 110.4, 36.5, 36.0.
EIMS m/z (rel. int) 412 [M+2]+ (3), 410 [M]+ (8), 275 (6), 273 (20), 221 (24), 219 (73), 121 (100).
HREIMS m/z 410.1014 (C22H19N2O4Clの計算値410.1032).
実施例25
N-(2-(3-(4-メトキシフェノキシ)フェニルアミノ)-2-オキシエチル)-4-ヒドロキシベンズアミド(化合物25)
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000037
 化合物25は、3-(4-クロロフェノキシ)アニリンの代わりに3-(4-メトキシフェノキシ)アニリンを、また、N-(tert-ブトキシカルボニル)-β-アラニンの代わりにN-(tert-ブトキシカルボニル)グリシンを用いる以外は、化合物24と同様の製法にしたがって合成された。
 生成物は、EIMS(電子衝撃質量スペクトル)法による質量分析及びNMRによって解析した。EIMS及びNMRの結果を以下に示す。
1H-NMR (400 MHz, アセトン-d6) δ 7.74 (2H, d, J = 8.9 Hz), 7.18-7.27 (3H, m), 6.98 (2H, d, J = 9.2 Hz), 6.89 (2H, d, J = 9.2 Hz), 6.86 (2H, d, J = 8.9 Hz), 6.65-6.72 (1H, m), 4.14 (2H, s), 3.81 (3H, s).
13C-NMR (100 MHz, アセトン-d6) δ 167.8, 160.5, 158.8, 155.8, 149.7, 141.7, 138.9, 129.6, 129.0 (2C), 124.1, 120.7 (2C), 115.1 (2C), 114.7 (2C), 113.8, 113.1, 109.2, 55.4, 43.7.
EIMS m/z (rel. int) 392 [M]+ (44), 215 (100), 121 (27).
HREIMS m/z 392.1385 (C22H20N2O5の計算値392.1372).
実施例26
N-(3-(3-(4-メトキシフェノキシ)フェニルアミノ)-3-オキソプロピル)-4-ヒドロキシベンズアミド(化合物26)
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000038
 化合物26は、3-(4-クロロフェノキシ)アニリンの代わりに3-(4-メトキシフェノキシ)アニリンを用いる以外は、化合物24と同様の製法にしたがって合成された。
 生成物は、EIMS(電子衝撃質量スペクトル)法による質量分析及びNMRによって解析した。EIMS及びNMRの結果を以下に示す。
1H-NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.67 (2H, d, J = 8.8 Hz), 7.24-7.19 (3H, m), 6.98 (2H, d, J = 9.3 Hz), 6.89 (2H, d, J = 9.3 Hz), 6.84 (2H, d, J = 8.8 Hz), 6.63-6.71 (1H, m), 3.80 (3H, s), 3.67 (2H, t, J = 6.6 Hz), 2.64 (2H, t, J = 6.6 Hz).
13C-NMR (100 MHz, CD3OD) δ 170.7, 168.5, 160.2, 158.6, 155.7, 149.6, 139.2, 129.4, 128.7 (2C), 124.6, 120.6 (2C), 114.9 (2C), 114.6 (2C), 113.7, 112.9, 109.1, 55.3, 36.3, 35.8.
EIMS m/z (rel. int) 406 [M]+ (55), 269 (23), 215 (100), 121 (28).
HREIMS m/z 406.1504 (C23H22N2O5の計算値406.1529).
実施例27
N-(4-(3-(4-メトキシフェノキシ)フェニルアミノ)-4-オキソブチル)-4-ヒドロキシベンズアミド(化合物27)
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000039
 化合物27は、3-(4-クロロフェノキシ)アニリンの代わりに3-(4-メトキシフェノキシ)アニリンを、また、N-(tert-ブトキシカルボニル)-β-アラニンの代わりにN-(tert-ブトキシカルボニル)-4-アミノブタン酸を用いる以外は、化合物24と同様の製法にしたがって合成された。
 生成物は、EIMS(電子衝撃質量スペクトル)法による質量分析及びNMRによって解析した。EIMS及びNMRの結果を以下に示す。
1H-NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.66 (2H, d, J = 8.3 Hz), 7.25-7.17 (3H, m), 6.97 (2H, d, J = 8.4 Hz), 6.88 (2H, d, J = 8.4 Hz), 6.81 (2H, d, J = 8.3 Hz), 6.61-6.66 (1H, m), 3.80 (3H, s), 3.44 (2H, t, J = 6.7 Hz), 2.40 (2H, t, J = 6.7 Hz), 1.95 (2H, quint, J = 6.7 Hz).
13C-NMR (100 MHz, CD3OD) δ 183.4, 172.4, 168.7, 160.1, 158.7, 155.8, 149.8, 139.5, 129.5, 128.8 (2C), 120.7 (2C), 115.0 (2C), 114.7 (2C), 113.8, 112.9, 109.2, 55.5, 39.2, 34.5, 25.4.
EIMS m/z (rel. int) 420 [M]+ (100), 270 (16), 257 (36), 215 (96), 121 (84).
HREIMS m/z 420.1693 (C24H24N2O5の計算値420.1684).
実施例28
N-(2-(2-(4-メトキシフェノキシ)フェニルアミノ)-2-オキソエチル)-4-ヒドロキシベンズアミド(化合物28)
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000040
 化合物28は、3-(4-クロロフェノキシ)アニリンの代わりに2-(4-メトキシフェノキシ)アニリンを、また、N-(tert-ブトキシカルボニル)-β-アラニンの代わりにN-(tert-ブトキシカルボニル)グリシンを用いる以外は、化合物24と同様の製法にしたがって合成された。
 生成物は、EIMS(電子衝撃質量スペクトル)法による質量分析及びNMRによって解析した。EIMS及びNMRの結果を以下に示す。
1H-NMR (600 MHz, CD3OD) δ 7.67 (2H, d, J = 8.9 Hz), 7.00-7.11 (2H, m), 6.90 (2H, d, J = 9.1 Hz), 6.83 (2H, d, J = 9.0 Hz), 6.80 (2H, d, J = 8.9 Hz), 6.77-6.86 (2H, m), 4.19 (2H, s), 3.77 (3H, s).
13C-NMR (150 MHz, CD3OD) δ 166.9, 160.8, 154.4, 150.4, 145.2, 131.3, 129.8 (2C), 129.0, 127.5, 123.6, 120.9 (2C), 119.9, 116.9 (2C), 115.6 (2C), 114.4, 114.2, 109.2, 41.2, 26.5.
EIMS m/z (rel. int) 392[M]+ (24), 215 (100).
HREIMS m/z 392.1385 (C22H20N2O5の計算値392.1372).
実施例29
N-(3-(2-(4-メトキシフェノキシ)フェニルアミノ)-3-オキソプロピル)-4-ヒドロキシベンズアミド(化合物29)
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000041
 化合物29は、3-(4-クロロフェノキシ)アニリンの代わりに2-(4-メトキシフェノキシ)アニリンを用いる以外は、化合物24と同様の製法にしたがって合成された。
 生成物は、EIMS(電子衝撃質量スペクトル)法による質量分析及びNMRによって解析した。EIMS及びNMRの結果を以下に示す。
1H-NMR (600 MHz, CD3OD) δ 8.15 (1H, dd, J = 7.8, 1.3 Hz), 7.66 (2H, d, J = 8.7 Hz), 7.04 (1H, td, J = 7.8, 1.3 Hz), 7.01 (1H, td, J = 7.8, 1.3 Hz), 6.93 (2H, d, J = 9.0 Hz), 6.88 (2H, d, J = 9.0 Hz), 6.82 (2H, d, J = 8.7 Hz), 6.73 (1H, dd, J = 7.8, 1.3 Hz), 3.80 (3H, s), 3.71 (2H, t, J = 6.2 Hz), 2.73 (2H, t, J = 6.2 Hz).
13C-NMR (150 MHz, CD3OD) δ 170.8, 168.2, 160.1, 155.9, 149.1, 148.1, 128.7 (2C), 127.8, 124.7, 124.6, 122.5, 122.0, 120.4 (2C), 116.1, 114.9 (2C), 114.7 (2C), 55.3, 36.3, 35.8.
EIMS m/z (rel. int) 406 [M]+ (25), 215 (100).
HREIMS m/z 406.1535 (C23H22N2O5の計算値406.1529).
実施例30
N-(3-(4-(4-メトキシフェノキシ)フェニルアミノ)-3-オキソプロピル)-4-ヒドロキシベンズアミド(化合物30)
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000042
 化合物30は、3-(4-クロロフェノキシ)アニリンの代わりに4-(4-メトキシフェノキシ)アニリンを用いる以外は、化合物24と同様の製法にしたがって合成された。
 生成物は、EIMS(電子衝撃質量スペクトル)法による質量分析及びNMRによって解析した。EIMS及びNMRの結果を以下に示す。
1H-NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.68 (2H, d, J = 8.8 Hz), 7.47 (2H, d, J = 9.3 Hz), 6.94 (2H, d, J = 9.0 Hz), 6.90 (2H, d, J = 9.0 Hz), 6.87 (2H, d, J = 9.3 Hz), 6.84 (2H, d, J = 8.8 Hz), 3.80 (3H, s), 3.69 (2H, t, J = 6.5 Hz), 2.66 (2H, t, J = 6.5 Hz).
13C-NMR (100 MHz, CD3OD) δ 170.5, 168.4, 160.2, 155.5, 154.5, 150.3, 132.7, 128.8 (2C), 124.6, 121.5 (2C), 120.1 (2C), 117.9 (2C), 115.0 (2C), 114.6 (2C), 55.4, 36.2, 36.0.
EIMS m/z (rel. int) 406 [M]+ (48), 215 (100), 121(24).
HREIMS m/z 406.1542 (C23H22N2O5の計算値406.1527).
実施例31
N-(3-(4-クロロフェノキシ)フェニル)-1-(4-ヒドロキシフェニルカルボニル)アゼチジン-3-カルボキサミド(化合物31)
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000043
 化合物31は、N-(tert-ブトキシカルボニル)-β-アラニンの代わりに1-(tert-ブトキシカルボニル)アゼチジン-3-カルボン酸を用いる以外は、化合物24と同様の製法にしたがって合成された。
 生成物は、EIMS(電子衝撃質量スペクトル)法による質量分析及びNMRによって解析した。EIMS及びNMRの結果を以下に示す。
1H-NMR (600 MHz, CD3OD) δ 7.50 (2H, d, J = 8.8 Hz), 7.30-7.34 (1H, m), 7.29 (2H, d, J = 8.9 Hz), 7.21-7.27 (2H, m), 6.93 (2H, d, J = 8.9 Hz), 6.78 (2H, d, J = 8.8 Hz), 6.69 (1H, dt, J = 6.6, 2.7 Hz), 4.44-4.50 (2H, m), 4.25-4.31 (1H, m), 4.18-4.23 (1H, m), 3.55 (1H, tt, J = 8.6, 6.1 Hz).
13C-NMR (150 MHz, CD3OD) δ 172.5, 172.3, 162.0, 158.8, 157.2, 141.3, 131.2, 131.1 (2C), 130.9 (2C), 129.5, 124.5, 121.4 (2C), 116.2 (2C), 116.1, 115.5, 111.6, 56.9, 52.7, 35.5.
EIMS m/z (rel. int) 424 [M+2]+ (1), 422 [M]+ (3), 287 (1), 285 (4), 274 (20), 272 (41), 121 (100).
HREIMS m/z 422.1004 (C23H19O4N2Clの計算値422.1033).
実施例32
N-(3-(4-クロロフェノキシ)フェニル)-1-(4-ヒドロキシフェニルカルボニル)ピロリジン-3-カルボキサミド(化合物32)
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000044
 化合物32は、N-(tert-ブトキシカルボニル)-β-アラニンの代わりに1-(tert-ブトキシカルボニル)ピロリジン-3-カルボン酸を用いる以外は、化合物24と同様の製法にしたがって合成された。
 生成物は、EIMS(電子衝撃質量スペクトル)法による質量分析及びNMRによって解析した。NMRスペクトルにおいて、標題化合物は2種の配座異性体の混合物(混合比1:1)として観測された。EIMS及びNMRの結果を以下に示す。
1H-NMR (600 MHz, CD3OD) δ 7.38 (2H, d, J = 8.2 Hz), 7.31-7.35 (1H, m), 7.19-7.29 (4H, m), 6.89-6.94 (2H, m), 6.77 (2H, d, J = 8.8 Hz), 6.65-6.71 (1H, m), 3.62-3.83 (3H, m), 3.52-3.61 (1H, m), 3.16-3.22 (0.5H, m), 3.04-3.11 (0.5H, m), 2.20-2.27 (0.5H, m), 2.04-2.20 (1.5H, m).
13C-NMR (150 MHz, CD3OD) δ 173.6 (0.5C), 172.8 (0.5C), 172.1 (0.5C), 171.9 (0.5C), 160.9, 158.8, 157.3, 141.5 (0.5C), 141.4 (0.5C), 131.1, 130.9 (2C), 130.4 (2C), 129.5, 128.2, 121.4 (2C), 116.1, 116.0 (2C), 115.4, 111.6 (0.5C), 111.5 (0.5C), 53.2 (0.5C), 50.5 (0.5C), 50.3 (0.5C), 47.2 (0.5C), 46.6 (0.5C), 44.8 (0.5C), 31.4 (0.5C), 29.5 (0.5C).
EIMS m/z (rel. int) 438 [M+2]+ (6), 436 [M]+ (17), 317 (4), 315 (12), 221 (3), 219 (9), 190 (100), 121 (85).
HREIMS m/z 436.1177 (C24H21O4N2Clの計算値436.1190).
実施例33
N-(3-(4-クロロフェノキシ)フェニル)-1-(4-ヒドロキシフェニルカルボニル)ピペリジン-3-カルボキサミド(化合物33)
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000045
 化合物33は、N-(tert-ブトキシカルボニル)-β-アラニンの代わりに1-(tert-ブトキシカルボニル)ピペリジン-3-カルボン酸を用いる以外は、化合物24と同様の製法にしたがって合成された。
 生成物は、EIMS(電子衝撃質量スペクトル)法による質量分析及びNMRによって解析した。EIMS及びNMRの結果を以下に示す。
1H-NMR (600 MHz, CD3OD) δ 7.29 (2H, d, J = 8.5 Hz), 7.18-7.27 (5H, m), 6.93 (2H, d, J = 8.8 Hz), 6.75-6.81 (2H, m), 6.66-6.70 (1H, m), 3.72-3.82 (1H, m), 3.25-3.36 (1H, m), 3.05-3.20 (2H, m), 2.49-2.61 (1H, m), 1.96-2.05 (1H, m), 1.66-1.85 (2H, m), 1.47-1.58 (1H, m).
13C-NMR (150 MHz, CD3OD) δ 174.1, 173.2, 160.7, 158.7, 157.3, 141.4, 131.1, 130.8 (2C), 130.2 (2C), 129.5, 127.3, 121.4 (2C), 116.2 (2C), 116.1, 115.4, 111.5, 46.3, 45.0, 44.0, 29.0, 26.2.
EIMS m/z (rel. int) 452 [M+2]+ (13), 450 [M]+ (35), 331 (9), 329 (24), 204 (100), 121 (85).
HREIMS m/z 450.1344 (C25H23O4N2Clの計算値450.1346).
実施例34
N-(3-(4-クロロフェノキシ)フェニル)-1-(4-ヒドロキシフェニルカルボニル)ピロリジン-2-カルボキサミド(化合物34)
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000046
 化合物34は、N-(tert-ブトキシカルボニル)-β-アラニンの代わりにN-(tert-ブトキシカルボニル)-DL-プロリンを用いる以外は、化合物24と同様の製法にしたがって合成された。
 生成物は、EIMS(電子衝撃質量スペクトル)法による質量分析及びNMRによって解析した。EIMS及びNMRの結果を以下に示す。
1H-NMR (600 MHz, CD3OD) δ 7.45 (2H, d, J = 8.7 Hz), 7.35-7.38 (1H, m), 7.28 (2H, d, J = 8.9 Hz), 7.23-7.27 (2H, m), 6.93 (2H, d, J = 8.9 Hz), 6.77 (2H, d, J = 8.8 Hz), 6.68-6.71 (1H, m), 4.57 (1H, t, J = 7.3 Hz), 3.66-3.74 (1H, m), 3.55-3.62 (1H, m), 2.26-2.33 (1H, m), 1.92-2.07 (2H, m), 1.79-1.87 (1H, m).
13C-NMR (150 MHz, CD3OD) δ 173.2, 172.1, 161.1, 158.8, 157.3, 141.4, 131.1, 130.8 (2C), 130.7 (2C), 129.5, 127.8, 121.5 (2C), 116.1, 115.9 (2C), 115.4, 111.6, 62.9, 52.0, 31.1, 26.6.
EIMS m/z (rel. int) 438 [M+2]+ (1), 436 [M]+ (3), 218 (14), 190 (40), 121 (100).
HREIMS m/z 436.1153 (C24H21O4N2Clの計算値436.1190).
実施例35
N-(3-(3-(4-クロロフェノキシ)フェニルアミノ)-3-オキソプロピル)チオフェン-2-カルボキサミド(化合物35)
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000047
 化合物35は、4-(メトキシメトキシ)安息香酸の代わりに2-チオフェンカルボン酸を用いる以外は、化合物24と同様の製法にしたがって合成された。
 生成物は、EIMS(電子衝撃質量スペクトル)法による質量分析及びNMRによって解析した。EIMS及びNMRの結果を以下に示す。
1H-NMR (600 MHz, CDCl3) δ 9.44 (1H, br.s), 7.74 (1H, br.t, J = 6.3 Hz), 7.48 (1H, dd, J = 3.8, 1.0 Hz), 7.41 (1H, dd, J = 4.9, 1.0 Hz), 7.25-7.27 (1H, m), 7.21 (2H, d, J = 9.0 Hz), 7.15-7.19 (2H, m), 6.99 (1H, dd, J = 4.9, 3.8 Hz), 6.87 (2H, d, J = 9.0 Hz), 6.62-6.66 (1H, m), 3.59 (2H, q, J = 6.3 Hz), 2.58 (2H, t, J = 6.3 Hz).
13C-NMR (150 MHz, CDCl3) δ 170.6, 163.1, 157.2, 155.5, 139.5, 138.4, 130.3, 129.9, 129.6 (2C), 128.4, 128.2, 127.7, 120.1 (2C), 114.8, 114.3, 110.4, 36.5, 36.1.
EIMS m/z (rel. int) 402 [M+2] (17), 400 [M]+ (41), 221 (37), 219 (100), 182 (27), 140 (20), 111 (46).
HREIMS m/z 400.0652 (C20H17O3N2ClSの計算値400.0648).
実施例36
N-(3-(3-(4-クロロフェノキシ)フェニルアミノ)-3-オキソプロピル)チオフェン-3-カルボキサミド(化合物36)
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000048
 化合物36は、4-(メトキシメトキシ)安息香酸の代わりに3-チオフェンカルボン酸を用いる以外は、化合物24と同様の製法にしたがって合成された。
 生成物は、EIMS(電子衝撃質量スペクトル)法による質量分析及びNMRによって解析した。EIMS及びNMRの結果を以下に示す。
1H-NMR (600 MHz, CDCl3) δ 9.38 (1H, br.s), 7.85 (1H, dd, J = 3.0, 1.2 Hz), 7.65 (1H, br.t, J = 6.1 Hz), 7.34 (1H, dd, J = 5.1, 1.2 Hz), 7.25-7.27 (1H, m), 7.25 (1H, dd, J = 5.1, 3.0 Hz), 7.20 (2H, d, J = 8.9 Hz), 7.16-7.19 (2H, m), 6.87 (2H, d, J = 8.9 Hz), 6.62-6.66 (1H, m), 3.59 (2H, q, J = 6.1 Hz), 2.58 (2H, t, J = 6.1 Hz).
13C-NMR (150 MHz, CDCl3) δ 170.6, 164.0, 157.3, 155.5, 139.5, 136.7, 129.9, 129.6 (2C), 128.7, 128.3, 126.4, 126.0, 120.1 (2C), 114.8, 114.3, 110.4, 36.5, 35.8.
EIMS m/z (rel. int) 402 [M+2] (8), 400 [M]+ (21), 221 (36), 219 (100), 182 (24), 140 (21), 111 (46).
HREIMS m/z 400.0652 (C20H17O3N2ClSの計算値400.0648).
実施例37
N-(3-(3-(4-クロロフェノキシ)フェニルアミノ)-3-オキソプロピル)ピリジン-4-カルボキサミド(化合物37)
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000049
 化合物37は、4-(メトキシメトキシ)安息香酸の代わりにイソニコチン酸を用いる以外は、化合物24と同様の製法にしたがって合成された。
 生成物は、EIMS(電子衝撃質量スペクトル)法による質量分析及びNMRによって解析した。EIMS及びNMRの結果を以下に示す。
1H-NMR (600 MHz, CDCl3) δ 8.93 (1H, br.s), 8.63 (2H, d, J = 5.7 Hz), 7.92 (1H, br.t, J = 6.1 Hz), 7.58 (2H, d, J = 5.7 Hz), 7.23 (1H, t, J = 2.2 Hz), 7.20 (2H, d, J = 8.8 Hz), 7.19 (1H, t, J = 7.9 Hz), 7.16 (1H, dd, J = 7.9, 2.2 Hz), 6.87 (2H, d, J = 8.8 Hz), 6.65 (1H, dd, J = 7.9, 2.2 Hz), 3.66 (2H, q, J = 6.2 Hz), 2.63 (2H, t, J = 6.2 Hz).
13C-NMR (150 MHz, CDCl3) δ 170.4, 166.1, 157.4, 155.5, 150.3 (2C), 141.2, 139.4, 130.0, 129.7 (2C), 128.4, 121.1 (2C), 120.2 (2C), 114.8, 114.4, 110.5, 36.2, 36.1.
EIMS m/z (rel. int) 397 [M+2]+ (12), 395 [M]+ (33), 221 (40), 219 (100).
HREIMS m/z 395.1041 (C21H18O3N3Clの計算値395.1037).
実施例38
N-(3-(3-(3,4-ジクロロフェノキシ)フェニルアミノ)-3-オキソプロピル)-4-ヒドロキシベンズアミド(化合物38)
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000050
 化合物38は、3-(4-クロロフェノキシ)アニリンの代わりに3-(3,4-ジクロロフェノキシ)アニリンを用いる以外は、化合物24と同様の製法にしたがって合成された。
 生成物は、EIMS(電子衝撃質量スペクトル)法による質量分析及びNMRによって解析した。EIMS及びNMRの結果を以下に示す。
1H-NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.62 (2H, d, J = 9.0 Hz), 7.37 (1H, t, J = 1.9 Hz), 7.31 (1H, dd, J = 8.2, 2.2 Hz), 7.27-7.21 (2H, m), 7.01-7.08 (1H, m), 6.83-6.77 (3H, m), 6.65-6.73 (1H, m), 3.64 (2H, t, J = 5.1 Hz), 2.62 (2H, t, J = 5.1 Hz).
13C-NMR (100 MHz, CD3OD) δ 170.7, 168.4, 160.1, 156.1, 139.6, 132.7, 130.6, 129.8, 128.7 (2C), 128.6, 126.1, 124.5, 120.0, 117.7, 115.3, 114.9 (2C), 114.4, 110.7, 36.2, 35.8.
EIMS m/z (rel. int) 446 [M+2]+ (1), 444 [M]+ (2), 311 (4), 309 (27), 307 (42), 257 (9), 255 (63), 253 (100), 121 (85), 55 (93).
HREIMS m/z 444.0652 (C22H18N2O4Cl2の計算値444.0644).
試験例1:OPNプロモーター制御下におけるルシフェラーゼ発現阻害効果の確認方法
 pGL-3ベクター basic (Promega)のマルチクローニング部位にヒトOPNプロモーター配列(-765から23)を組み込んだ、レポーターベクターpOPN1-lucは、動物細胞にトランスフェクションするとルシフェラーゼを発現する。該pOPN1-lucを、ピューロマイシン耐性遺伝子(ピューロマイシン-N-アセチル-トランスフェラーゼ遺伝子(puromycin-N-acetyl-transferase gene))を発現するpPUR(Clontech)と共にヒト非小細胞肺癌由来細胞株A549にトランスフェクトし、ピューロマイシン添加培地にて増殖可能である、ルシフェラーゼを発現する細胞を選択した。選択された細胞を「A549/OPNluc細胞」と称し、後述のOPNプロモーター制御下におけるルシフェラーゼ発現阻害効果の観察に使用した。
 被験化合物をA549/OPNluc細胞の培養液中に添加し、細胞内のルシフェラーゼ発現量に対する影響を観察した。ここで、被験化合物が細胞毒性または細胞増殖抑制効果を有している場合には、被験化合物の濃度に依存した生細胞数の減少により総ルシフェラーゼ発現量が低下し、被験化合物のOPNプロモーター制御下でのルシフェラーゼ発現阻害効果を正しく評価できないことが考えられる。このため、細胞増殖能力または細胞生存能力を発色測定により定量する方法であるWSTアッセイをまず実施し、被験化合物の細胞増殖に対するIC50(50%細胞増殖阻害濃度)を求めた。続いて、ルシフェラーゼ活性測定を実施し、被験化合物のOPNプロモーター制御下のルシフェラーゼ発現に対するEC50(50%ルシフェラーゼ発現抑制濃度)を求めた。
(1-1)WSTアッセイ
 A549/OPNluc細胞を、10% ウシ胎児血清(FCS)および1% ペニシリン・ストレプトマイシン(P/S)を添加したDMEM培地に3×104細胞/mLとなるよう懸濁し、これを96ウェルプレートの各ウェルに100μLずつ分注した。試験をトリプリケートで実施することから、対照群および各濃度の被験化合物添加群を、それぞれ3ウェルずつ準備した。分注後、96ウェルプレートを炭酸ガス培養器(37℃, 5% CO2条件下)で24±4時間培養した。
 本発明の化合物をジメチルスルホキシド(DMSO)によって50 mmol/L溶液とし、-80℃で保存した。該化合物溶液を、DMSOによって2倍希釈系列として希釈し(通常は0.31 mmol/L~20 mmol/Lの範囲)、2倍ずつ濃度の異なった被験化合物溶液をWSTアッセイのために準備した。
 細胞懸濁液を加えた各ウェルに、DMSOのみ(対照)または希釈した被験化合物(検体)の溶液を0.5μLずつ分注した(200倍希釈)。ボルテックスミキサーで混和した後、96ウェルプレートを炭酸ガス培養器(37℃, 5% CO2条件下)で48±4時間培養した。続いて、Premix WST-1 Reagent(タカラバイオ)を10μLずつ各ウェルに添加した。ボルテックスミキサーで混和した後、96ウェルプレートを37℃, 5% CO2条件下でインキュベートし、マイクロプレートリーダー(Bio-Rad;BenchmarkまたはThermo Scientific;Varioskan Flash)を用いて60分後または120分後の吸光値(450nm)を測定した。
 対照のウェルおよび各濃度の検体ウェルの吸光値をそれぞれエクセルファイルに入力し、対照の平均吸光値に対する各濃度の検体ウェルの吸光値のパーセントを求めた。その値から最小二乗法により近似曲線式を求め、IC50値を計算した。
(1-2)ルシフェラーゼアッセイ
 細胞懸濁液を加えた各ウェルに、DMSOのみ(対照)または希釈した被験化合物(検体)の溶液を0.5μLずつ加えて200倍希釈した。ボルテックスミキサーで混和した後、炭酸ガス培養器(37℃, 5% CO2条件下)で48±4時間培養する工程まで、上述のWSTアッセイと同様の操作を行った。
 Luciferase Assay Systems(Promega:Cat# E1500)に含まれるLuciferase Assay Substrate(以下、LASと表記する)をLuciferase Assay Buffer(LAB)で溶解し、ルシフェラーゼ試薬を調製した。5×Cell Culture Lysis Reagent(以下、CCLRと表記する)を水で5倍希釈し、1×CCLRを調製した。
 培養48±4時間後、各ウェルの培地を完全に取り除き、1×CCLRを50μLずつ分注した。室温で30分間静置した後、各ウェル内の1×CCLRを測定用試料とした。化学発光測定用のチューブにルシフェラーゼ試薬を100μL加え、これに測定用試料20μLを添加して混和し、TD20/20(Promega)または、GloMax20/20(Promega)を用いて、化学発光(相対発光強度:RLU)を測定した。
 対照のRLUおよび各濃度の検体のRLUをそれぞれエクセルファイルに入力し、対照のRLUの平均値に対する各濃度の検体のRLUのパーセントを求めた。その値から最小二乗法により近似曲線式を求め、EC50値を計算した。また、対照のRLUの平均値に対する各濃度の検体のRLUのパーセントを、化合物が同濃度の時のWSTアッセイの吸光値のパーセント(対照に対する)で割った値から、最小二乗法により近似曲線式を求め、補正EC50値を計算した。補正EC50値は、細胞毒性または細胞増殖抑制効果による被験化合物の濃度に依存した生細胞数の減少によるRLUの低下を補正したEC50値である。
 被験化合物として化合物1~38を用いて得られたIC50値、EC50値及び補正EC50値を表1に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000051
試験例2:ヒト癌細胞由来細胞株のOPN産生に対する化合物1、6、19、26および38の抑制効果
 ブレフェラミド(化合物1)を、ヒト肝癌由来細胞株HepG2、ヒト非小細胞肺癌由来細胞株A549、ヒト腎細胞癌由来OUR-10またはヒト膵癌由来QGP-1の培養液に加え、2日間培養後の培養上清中のOPN量を、Human Osteopontin Immunoassay kit(R&D systems)を使用して測定した。化合物1添加群のOPN量とDMSO添加群(対照)のOPN量を比較することにより、確認試験を行った。また、ブレフェラミド誘導体である化合物6、19、26および38を非小細胞肺癌由来細胞株A549の培養液に加え、同様の確認試験を行った。
 化合物1、6、19、26および38は、細胞増殖抑制効果も有していることから、OPN産生量抑制効果を正しく評価するために、培養上清を除いてウェルに残った細胞に、ルシフェラーゼアッセイで使用した1×CCLR液を添加して細胞溶解液を調製し、その蛋白量をBCA Protein Assay Kit(Thermo Scientific)を使用して測定した。化合物1の添加によるOPN産生量への影響は、蛋白1mg量当たりのOPN量で比較した。
(2-1)細胞培養液の調製(図1、図2、図5および図8~図10)
 HepG2細胞またはA549細胞を、それぞれ10% FCSおよび1% P/Sを添加したDMEM培地に4×104細胞/mLとなるよう懸濁し、24ウェルプレートの各ウェルに500μLずつ分注した。試験をトリプリケートで実施することから、対照群および各濃度の被験化合物添加群を、それぞれ3ウェルずつ準備した。24ウェルプレートを炭酸ガス培養器(37℃, 5% CO2条件下)内で24±4時間培養した。
(2-2)細胞培養液の調製(図3および図4)
 OUR-10細胞またはQGP-1細胞を、それぞれ10% FCSおよび1% P/Sを添加したRPMI1640培地に4×104細胞/mLとなるよう懸濁し、24ウェルプレートの各ウェルに500μLずつ分注した。試験をデュプリケートで実施するすることから、対照群および各濃度の被験化合物添加群を、それぞれ2ウェルずつ準備した。24ウェルプレートを炭酸ガス培養器(37℃, 5% CO2条件下)内で24±4時間培養した。
(2-3)化合物の添加
 被験化合物である化合物1、6、19、26および38は、DMSOを用いて50 mmol/L溶液とし、-80℃で保存した。該化合物1溶液を、DMSOを用いて希釈し、2.5 mmol/Lおよび5 mmol/L(図1)、3.125 mmol/Lおよび6.25 mmol/L(図2)、6.25 mmol/Lおよび12.5 mmol/L(図3)または5 mmol/Lおよび10 mmol/L(図4)の濃度にそれぞれ調製した。HepG2、A549、OUR-10またはQGP-1細胞を培養している各ウェルに、それぞれ2種類の濃度の化合物1の溶液を2μLずつ添加した。対照ウェルには、DMSOのみ2μLずつ添加した。
 同様に、-80℃で保存された化合物6の50 mmol/L溶液を、DMSOを用いて希釈し、2.5 mmol/Lおよび5 mmol/L(図5)の濃度にそれぞれ調製した。A549細胞を培養している各ウェルに、2種類の濃度の化合物6の溶液を2μLずつ添加した。対照ウェルには、DMSOのみ2μLずつ添加した。
 また、-80℃で保存された化合物19、26および38の50 mmol/L溶液を、DMSOを用いて希釈し、3.125 mmol/Lおよび6.25 mmol/L(図8~図10)の濃度にそれぞれ調製した。A549細胞を培養している各ウェルに、2種類の濃度の化合物19、26および38の溶液を2μLずつ添加した。対照ウェルには、DMSOのみ2μLずつ添加した。
(2-4)細胞培養と試料の調製
 24ウェルプレートを振揺し、ウェル内の溶液を混和した後、炭酸ガス培養器(37℃, 5% CO2条件下)で48±4時間培養した。続いて、培養上清全量を1.5 mLチューブに移し、細胞を含むウェルに、D-PBS(-)を500μL添加した。
 24ウェルプレートを軽く振揺してから、D-PBS(-)を除き、ルシフェラーゼアッセイで使用する5×CCLRを水で5倍希釈して1×CCLRを調製した。調製された1×CCLRを各ウェルに200μLずつ分注した。続いて、24ウェルプレートをロッキングシェーカーに置き、15分間ロッキングした。
 15分間ロッキングした後、24ウェルプレートの各ウェルから、細胞溶解液を1.5 mLチューブに移し、細胞破壊片等を除くために微量高速冷却遠心機にて4℃、15,000 rpmで1分間遠心分離した。得られた上清を蛋白量測定用試料とした。
 一方、1.5 mLチューブに移した培養上清を、細胞破壊片等を除くために微量高速冷却遠心機にて4℃、15,000 rpmで1分間遠心分離した。得られた上清をELISA用試料とした。
(2-5)OPN蛋白量の測定
 ELISA用試料は、QGP-1細胞の試料を除き(原液を使用)、以下のように希釈した。
     A549細胞(20倍希釈):試料5μL+培養培地95μL
     HepG2細胞(80倍希釈):試料2μL+培養培地158μL
     OUR-10細胞(10倍希釈):試料10μL+培養培地90μL
 ELISAキットに含まれているOPN standardのバイアルに水1 mLを加え、穏やかに混和し、室温で15分間静置して200 ng/mL OPN Standardを調製した。続いて、表2に示されるように、OPN standardをキットに含まれている希釈液RD5-24によって段階希釈した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000052
 キットに含まれる必要数のOPN MicroplateとRD1-6を準備し、RD1-6を100μLずつウェルに分注した。希釈したOPN standard(バイアルA~H)および試料を、RD1-6を添加したウェルにさらに50μLずつ添加した。続いて、ウェル上部をシールでカバーし、室温で2時間静置した。この間に、キットに含まれているWash Buffer Concentrateを水で希釈し、Wash Bufferを調製した。
 2時間静置した後、各ウェル内の液を除去した。各ウェルにWash Bufferを250μL分注した後、Wash Bufferを除去し、ウェルを洗浄した。該洗浄操作を4回行った。
 OPN conjugateを各ウェルに200μLずつ分注した。続いて、ウェル上部をシールでカバーし、室温で2時間静置した。この間に、キットに含まれているColor Reagent AとColor Reagent Bを等量混和し、Substrate Solutionを調製した。
 2時間静置した後、各ウェル内の液を除去した。各ウェルにWash Bufferを250μL分注した後、Wash Bufferを除去し、ウェルを洗浄した。該洗浄操作を4回行った。
 Substrate Solutionを各ウェルに200μLずつ分注し、遮光して室温で30分間静置した。続いて、キットに含まれているStop Solutionを各ウェルに50μLずつ添加し、ウェルの液全体が青色から黄色になるまで、穏やかにボルテックスミキサーにて混和した。混和後、マイクロプレートリーダー(Bio-Rad;BenchmarkまたはThermo Scientific;Varioskan Flash)を用いて、吸光値(450 nmおよび570 nm)を測定した。全ての測定データのOD 450 nmからOD 570 nmの値を減算し、以下の計算ではこの値を用いた。
 検量線サンプルの吸光値より、検量線を作成した。検量線の数式を用いて各サンプルの吸光値からOPN蛋白量を算出した。
(2-6)細胞中の総蛋白量測定
 蛋白量測定用試料10μLと水90μLを混和し、10倍希釈した。検量線サンプルを、表3に示されるように、BSA溶液を水で希釈して調製した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000053
 蛋白測定用キットに含まれているBCA試薬AとBCA試薬B(50:1)を混和し、Working Reagentを調製した。96ウェルプレートに検量線サンプル(バイアルA~F)および10倍希釈した蛋白測定用試料をそれぞれ25μL分注した。試験をデュプリケートで実施することから、対照群および各濃度の被験化合物添加群を、それぞれ2ウェルずつ準備した。
 Working Reagentを各ウェルに200μLずつ添加し、ボルテックスミキサーで30秒間混和した。60℃で30分間加温した後、室温で15分間静置した。続いて、マイクロプレートリーダー(Bio-Rad;BenchmarkまたはThermo Scientific;Varioskan Flash)を用いて吸光値(550 nm)を測定した。
 検量線サンプルの吸光値より、検量線を作成した。検量線の数式を用いて各ウェルの希釈した試料の総蛋白濃度を算出した。さらに、総タンパク濃度に希釈倍率(10倍)を乗算し、試料の総蛋白濃度を算出した。
(2-7)OPN(蛋白)量の表示
 OPN量(培養上清1 mL当たりの量)は、ELISA測定用の試料の全量(0.5 mL)当たりに換算された。該換算値を、OPN量を求めた試料と同じウェルの蛋白測定用試料全量(0.2 mL)中の蛋白量で割って、OPN量を細胞総蛋白1mg当たりに換算した。該蛋白1mg当たりのOPN量で、化合物1投与の影響を検討した。
(2-8)統計処理
 OPN量の統計処理には、エクセル統計Statcel 3を用いた。エクセルファイル上にて、被験化合物である化合物3を添加された試料のOPN量を、対照のOPN量との比較でDunnett検定した。
 図1は、化合物1添加によるHepG2細胞のOPN産生抑制効果を表すグラフを示す。化合物1は、濃度10μmol/Lの場合には対照群との間でOPN産生量に違いが認められなかったが、濃度20μmol/Lの場合には、1%未満の危険率において、対照群と比較してHepG2細胞のOPN産生を有意に抑制することが確認された。
 図2は、化合物1添加によるA549細胞のOPN産生抑制効果を表すグラフを示す。化合物1は、濃度を12.5μmol/Lから25μmol/Lに増加すると、濃度依存的にOPN産生を抑制することが確認された。濃度が12.5μmol/Lおよび25μmol/Lの場合、共に1%未満の危険率において、対照群と比較してA549細胞のOPN産生を有意に抑制することが確認された。
 図3は、化合物1添加によるOUR-10細胞のOPN産生抑制効果を表すグラフを示す。OPN量は、対照群および化合物1添加群共にデュプリケートで実施した各2本の値はほぼ同じ値を示した。化合物1は、濃度25μmol/Lおよび濃度50μmol/Lの場合に、対照群と比較してOUR-10細胞のOPN産生を有意に抑制することが確認された。
 図4は、化合物1添加によるQGP-1細胞のOPN産生抑制効果を表すグラフを示す。OPN量は、対照群および化合物1添加群共にデュプリケートで実施した各2本の値はほぼ同じ値を示した。化合物1は、濃度20μmol/Lの場合には対照群との間でOPN産生量に違いが認められなかったが、濃度40μmol/Lの場合には、対照群と比較してQGP-1細胞のOPN産生を有意に抑制することが確認された。
 図5は、化合物6添加によるA549細胞のOPN産生抑制効果を表すグラフを示す。化合物6は、濃度を10μmol/Lから20μmol/Lに増加すると、濃度依存的にOPN産生を抑制することが確認された。濃度が10μmol/Lおよび20μmol/Lの場合、共に1%未満の危険率において、対照群と比較してA549細胞のOPN産生を有意に抑制することが確認された。
 図8は、化合物19添加によるA549細胞のOPN産生抑制効果を表すグラフを示す。化合物19は、濃度を12.5μmol/Lから25μmol/Lに増加すると、濃度依存的にOPN産生を抑制することが確認された。濃度が12.5μmol/Lおよび25μmol/Lの場合、共に1%未満の危険率において、対照群と比較してA549細胞のOPN産生を有意に抑制することが確認された。
 図9は、化合物26添加によるA549細胞のOPN産生抑制効果を表すグラフを示す。化合物26は、濃度を12.5μmol/Lから25μmol/Lに増加すると、濃度依存的にOPN産生を抑制することが確認された。濃度が12.5μmol/Lおよび25μmol/Lの場合、共に1%未満の危険率において、対照群と比較してA549細胞のOPN産生を有意に抑制することが確認された。
 図10は、化合物38添加によるA549細胞のOPN産生抑制効果を表すグラフを示す。化合物38は、濃度を12.5μmol/Lから25μmol/Lに増加すると、濃度依存的にOPN産生を抑制することが確認された。濃度が12.5μmol/Lおよび25μmol/Lの場合、共に1%未満の危険率において、対照群と比較してA549細胞のOPN産生を有意に抑制することが確認された。
 図1~図4より、化合物1が、ヒト肝癌由来細胞株HepG2、ヒト非小細胞肺癌由来細胞株A549、ヒト腎細胞癌由来細胞株OUR-10およびヒト膵癌由来QGP-1のOPN産生を抑制することが確認された。また、図5より、化合物6が、ヒト非小細胞肺癌由来細胞株A549のOPN産生を抑制することが確認され、そして、図8~図10より、化合物19、26および38が、ヒト非小細胞肺癌由来細胞株A549のOPN産生を抑制することが確認された。
試験例3:ヒト非小細胞肺癌由来細胞株A549の創傷治癒能に対する化合物1の抑制効果
 OPNプロモーター制御下でのルシフェラーゼ発現を抑制するブレフェラミド(化合物1)は、実際に蛋白としてのOPN産生を抑制することが、図1~図4に示される実験結果から確認された。続いて、OPNが産生されたことにより細胞に生じる生理的な機能が、被験化合物である化合物1によって抑制されるか否かを確認した。確認方法の一つとして、細胞の創傷治癒試験(Wound-Healing assay)を行った。該試験は、細胞の遊走能を調べる方法として一般的に知られている方法である。単層培養した細胞をピペットの先等で部分的に細胞を剥がした際に、傷のまわりの細胞が移動(遊走)することで傷の部分を埋めていくが、培養液中に被験化合物を添加することより、該機能に影響を与えるかを観察した。
(3-1)創傷治癒試験(Wound-Healing assay)方法
 ヒト非小細胞肺癌由来細胞株A549を、10% FCSおよび1% P/Sを添加したDMEM培地に3.5×105細胞/mLとなるように懸濁した。24ウェルプレートの各ウェルに、細胞懸濁液を500μL(1.75×105細胞)ずつ分注した。試験をトリプリケートで実施することから、対照群および各濃度の被験化合物添加群を、それぞれ3ウェルずつ準備した。分注後、24ウェルプレートを炭酸ガス培養器(37℃, 5% CO2条件下)で24±4時間培養した。
 培養後、全てのウェルから培地を除去した。DMEMに0.1% ウシ血清アルブミン(BSA)および1% P/Sを添加した培地(無血清培地)を全てのウェルに500μLずつ分注した。プレートを振揺した後、再度、全ウェルから培地を除去した。培地を除去した後、無血清培地を全てのウェルに500μLずつ分注した。
 被験化合物である化合物1は、DMSOで50 mmol/L溶液とし、-80℃で保存した。該化合物1溶液をDMSOで希釈し、3.125 mmol/Lおよび6.25 mmol/Lの濃度にそれぞれ調製した。A549細胞を培養している各ウェルには、化合物1の3.125 mmol/Lまたは6.25 mmol/Lの溶液を2μLずつ添加した。対照ウェルには、DMSOのみ2μLずつ添加した。
 24ウェルプレートを振揺し、ウェル内の溶液を混和した後、炭酸ガス培養器(37℃, 5% CO2条件下)で24±4時間培養した。
 24ウェルプレート内の細胞を顕微鏡下で観察し、100%密集(confluent)であることを確認した後、20μL用のマイクロピペットチップの先端で、プレート底面の細胞に、1ウェルにつき3箇所傷をつけた。顕微鏡として、CCDカメラシステムのRetiga-2000 Fast 1394 Color(QImaging)を取り付けた倒立型リサーチ顕微鏡IX71(オリンパス)を使用した。
 顕微鏡で創傷部を観察し、創傷部が画像に収まるように調整して撮影した。倍率は40倍(接眼:×10、対物:×4)に設定した。撮影後、24ウェルプレートを炭酸ガス培養器(37℃, 5% CO2条件下)で48±4時間培養した。
 培養後、顕微鏡で創傷部を観察し、創傷部が画像に収まるように調整して撮影した。倍率は40倍(接眼:×10、対物:×4)に設定した。
 Image-Pro Plus 7.0J(MediaCybernetics社)を用いて、撮影した画像に基づいて、創傷部の面積を確認した。そして、
  創傷治癒率(%) =100 - [創傷2日後の創傷面積/創傷直後の創傷部面積]×100
という計算式に基づいて、創傷治癒率(%)を算出した。対照群および2種類の濃度の化合物1投与群それぞれの創傷治癒率(%)の平均値を算出した。また、対照群の創傷治癒率に対する化合物処理群の創傷治癒率(%)も算出した。
(3-2)統計処理
 創傷治癒率の算出値の統計処理は、エクセル統計Statcel 3を用い、エクセルファイル上ですべての化合物1投与処理群の創傷治癒率を、対照との比較でDunnett検定を行うことにより実施された。
 図6は、化合物1添加によるA549細胞の創傷治癒抑制効果を表すグラフを示す。化合物1は、濃度12.5μmol/Lの場合には対照群との間で創傷治癒率に違いが認められなかったが、濃度25μmol/Lの場合には、1%未満の危険率において、対照群の間で創傷治癒率に有意差が確認された。すなわち、化合物1は、濃度25μmol/Lの場合に、A549細胞の創傷治癒を有意に抑制するものと認められる。
試験例4:ヒト非小細胞肺癌由来細胞株A549の転移浸潤能に対する化合物1および化合物6の抑制効果
 OPNが産生されたことにより細胞に生じる生理的な機能が、被験化合物によって抑制されるか否かを調べる2番目の試験として、マトリクス浸潤試験(Matrix-Invasion assay)を行った。該試験では、細胞外マトリクス成分であるコラーゲンまたはラミニン(マトリゲル、BD Bioscience社)をコーティングした、φ8μmの細孔(ポア)を有する膜が底部に張ってあるカップ(インサート)と、そのインサートを挿入する24ウェルプレートを準備した。無血清培地に懸濁した細胞を内側のインサートに入れ、外側の24ウェルプレートの各ウェルに細胞の転移および浸潤を誘引する物質(ここでは、ウシ胎児血清)を加えた培地を注入し、インサートのマトリゲルをコーティングした膜を通過して外側のウェルに現れる細胞数を観察した。
 マトリゲルは、細胞培養用の人工基底膜マトリックスであり、細胞外マトリックスタンパク質を豊富に含むEngelbreth-Holm-Swarm(EHS)マウス肉腫から抽出された可溶性基底膜調製品である。マトリゲルの主成分は、ラミニン、コラーゲンIV、ヘパラン硫酸プロテオグリカン、およびエンタクチン/ニドジェンである。マトリゲルには、TGF-β、上皮細胞増殖因子、インシュリン様成長因子、線維芽細胞増殖因子、組織プラスミノーゲン活性化因子、およびEHS腫瘍に自然に産生される他の増殖因子も含まれる。
 具体的には膜の外側に浸潤してきたA549細胞に蛍光色素を取り込ませた後、膜から剥がし、その蛍光強度を測定した。同時に、数が既知である検量線作成用の細胞にも蛍光色素を取り込ませ、その蛍光強度から検量線を作成した。そして、近似曲線式から細胞数が未知である被験サンプルの浸潤細胞数を求めた。
 癌細胞は、外側の培地に加えたウシ胎児血清の刺激によりOPNを産生する。培養液にOPNが存在すると、細胞はOPNと結合し、その作用でマトリックスメタプロテイナーゼ(Matrix Metalloproteinase: MMP)というコラーゲンを分解する酵素を産生してマトリゲルを溶解し、さらに遊走能が高まるので外側のウェルに移動してくる。OPNプロモーター制御下でのルシフェラーゼ発現を抑制する、ブレフェラミド
(化合物1)およびその誘導体である化合物6のA549細胞のマトリクス浸潤機能に対する抑制効果を観察した。
(4-1)マトリクス浸潤試験(Matrix-Invasion assay)方法
 ヒト非小細胞肺癌由来細胞株A549を、10% FCSおよび1% P/Sを添加したDMEM培地に1.8×105細胞/mLとなるよう懸濁した。該懸濁液を75 cm2フラスコに10 mL分注し、炭酸ガス培養器(37℃, 5% CO2条件下)で24±4時間培養した。同様に、検量線作成用にA549細胞の6×104細胞/mLの懸濁液を調製し、該懸濁液を25 cm2フラスコに5 mL分注し、炭酸ガス培養器(37℃, 5% CO2条件下)で24±4時間培養した。この日を作業の0日目とした。
[翌日:作業1日目]
 細胞をシードした75 cm2フラスコから培地を除去した。培地を除去したフラスコに0.1% BSAおよび1% P/S添加DMEM培地(無血清培地)を10 mL分注し、細胞表面に一様に培地が浸透するようにフラスコを傾けた。続いて、フラスコから培地を除去した。
 培地を除去したフラスコに無血清培地を10 mL分注した。続いて、炭酸ガス培養器(37℃, 5% CO2条件下)で24±4時間培養した。
[作業2日目]
 マトリゲル(10 mg/mL:BD Biosciences)を氷上で融解した。セルカルチャーインサート(24ウェル用、8.0μmポア:BD Biosciences)および無血清培地を氷冷した。マトリゲルを氷冷した無血清培地で25倍希釈し、マトリゲル溶液を調製した。
 24ウェルプレートに必要数のセルカルチャーインサートをセットし、マトリゲル溶液を50μLずつセルカルチャーインサートに分注し、チップの先でメンブレン全体にマトリゲル溶液を浸透させた。続いて、24ウェルプレートを炭酸ガス培養器(37℃, 5% CO2条件下)に1~2時間置いた。
 前日に無血清培地に交換した75 cm2フラスコの細胞の培養上清を除去した。カルシウム・マグネシウム無添加リン酸緩衝生理食塩液(D-PBS(-))10 mLを分注し、細胞表面に一様にD-PBS(-)が浸透するようにフラスコを傾けた後、D-PBS(-)を除去した(該操作をD-PBS(-)による「洗浄操作」という。)。続いて、細胞剥離溶液(Cell Dissociation Solution/CDS:シグマ)を3~5 mLフラスコに分注した。CDSを分注したフラスコを炭酸ガス培養器(37℃, 5% CO2条件下)に入れて、約20分間加温(5分ごとにロッキング)し、細胞をフラスコ底部より剥離させる作業を行った(該操作をCDSによる「細胞剥離」という。)。
 300×gで遠心分離した後、上清を除去し、5 mLの無血清培地を用いて細胞を懸濁した。懸濁液の一部(10μL)を分取し、0.4%トリパンブルー溶液を10μL添加して軽くピペッティングした後、Burker-Turk血球計算盤を用いて細胞数を計数し、細胞濃度を求めた(該操作を「細胞数カウント」という)。
 無血清培地を用いて、2×105細胞/mLの細胞濃度の懸濁液を8 mL調製した。マトリゲル溶液によって表面をコートした後、炭酸ガス培養器で1~2時間インキュベートしたカルチャーインサートに、調製した細胞懸濁液を0.5 mL(1×105細胞)ずつ穏やかに分注した。試験をトリプリケートで実施した。
 15 mLチューブに10% FCSおよび1% P/Sを添加したDMEM培地を5 mL分注した。該チューブに化合物1の50 mmol/L DMSO溶液を1.25μL(最終濃度12.5μmol/L)または2.5μL(最終濃度25μmol/L)を分注し、化合物1添加培地を調製した。同様に、化合物6の50 mmol/L DMSO溶液の1μL(最終濃度10μmol/L)を分注し、化合物6添加培地を調製した。10% FCSおよび1% P/Sを添加したDMEM培地の5 mLにDMSOを5μL添加し、対照群用添加培地を調製した。
 カルチャーインサートとプレートの隙間から、24ウェルプレートのウェルに化合物1添加培地、化合物6添加培地または対照群用添加培地を0.75 mLずつ分注した。続いて、24ウェルプレートを炭酸ガス培養器(37℃, 5% CO2条件下)で48±4時間培養した。
[作業3日目]
 25 cm2フラスコで培養していたA549細胞の培地を除去し、無血清培地5 mLに交換した。続いて、25 cm2フラスコを炭酸ガス培養器(37℃, 5% CO2条件下)で24±4時間培養した。
[作業4日目]
 カルセインAM(50μg/バイアル:BD Biosciences)のバイアルを室温まで冷却し、DMSOを30μL添加して混和し、カルセインAM溶液を調製した。15 mLチューブにCDSを5 mL分注し、これにカルセインAM溶液を6μL添加して混和し、1×カルセインAM溶液(被験インサート用カルセインAM溶液)を調製した。一方、15 mLチューブにCDSを1.5 mL分注し、カルセインAM溶液を3.6μL添加して混和し、2×カルセインAM溶液(検量線用カルセインAM溶液)を調製した。
(4-2)検量線用細胞の準備
 前日に培地交換した25 cm2フラスコの細胞の培養上清を除去し、D-PBS(-)5 mLを用いて、上述の洗浄操作を行った。さらに、CDS 3 mLを用いて上述の細胞剥離を行った。続いて、上述の細胞数カウントを行い、CDSを用いて5×105細胞/mLの細胞懸濁液を調製した。そして、表4に示されるように、細胞懸濁液はCDSを用いて希釈した。96ウェルブラックプレート(コーニング)の各ウェルに、バイアルA~H内の細胞懸濁液を50μLずつ分注した。試験をトリプリケートで実施した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000054
(4-3)カルセインAM染色
 新しい24ウェルプレートの各ウェルにD-PBS(-)を0.75 mLずつ分注した。各インサートをピンセットで持ち上げながら、インサート内の培地をピペットによって除去し、D-PBS(-)0.75 mLを分注したウェルに移した。各インサートにD-PBS(-)を0.5 mL分注し、インサートをD-PBS(-)によって洗浄した。
 新しい24ウェルプレートを準備し、その各ウェルに1×カルセインAM溶液をそれぞれ0.35 mL分注した。D-PBS(-)によって洗浄したインサートをピンセットで持ち上げながら、インサート内のD-PBS(-)をピペットによって除去し、1×カルセインAM溶液を分注したウェルに移した(被験インサートの細胞の蛍光染色)。インサートを移した24ウェルプレートを、炭酸ガス培養器(37℃, 5% CO2条件下)で1時間インキュベートした。30分おきにプレート側面を軽く叩いた。
 インキュベーションの間、細胞懸濁液を分注した96ウェルブラックプレートの各ウェルに、2×カルセインAM溶液を50μLずつ分注し、アルミホイルで包んでから室温に静置した(検量線用の細胞の染色)。
(4-4)蛍光測定
 1時間のインキュベーションが終了した後、インサートを含む24ウェルプレートを、内部の液がこぼれないように注意しながら振揺し、液を混和した。続いて、24ウェルプレートの各ウェルからピンセットを用いて各インサートを取り除いた。インサートを取り除いた各ウェルの液を、新しい96ウェルブラックプレートの各ウェルに100μLずつ3ウェルに移した(被験インサートの細胞用プレート)。
 マイクロプレートリーダー(Molecular Device;SpectraMax M5またはThermo Scientific; Varioskan Flash)を用いて、検量線用細胞および被験インサートの細胞用の96ウェルブラックプレートの各ウェルの蛍光を測定した(励起波長:485 nm, 蛍光波長:520 nm)。
(4-5)総浸潤細胞数の算出
 検量線用細胞の蛍光強度(RLU)をエクセルに入力し、最小二乗法により近似曲線(検量線)の数式を求めた。検量線の数式を用いて、96ウェルプレートの1ウェルあたりの蛍光強度から浸潤細胞数を算出した。その浸潤細胞数に3.5を乗じ、24ウェルプレートの1ウェル当たりの総浸潤細胞数を算出した。さらに、トリプリケートで実施しているので3ウェルの総浸潤細胞数の平均値を算出した。
(4-6)統計処理
 統計処理は、エクセル統計Statcel 3を用いて、エクセルファイル上で、化合物1および化合物6処理群の総浸潤細胞数を、陰性対照(Control)値との比較でDunnett検定を行うことにより実施された。
 図7は、化合物1または化合物6添加によるA549細胞のマトリクス浸潤抑制効果を表すグラフを示す。化合物1の濃度12.5μmol/Lおよび25μmol/Lと対照群の浸潤細胞数を比較すると、浸潤細胞数は化合物1の濃度に依存して減少した。濃度12.5μmol/Lの場合に5%未満の危険率、濃度25μmol/Lの場合には1%未満の危険率において、対照群と比較してA549の浸潤細胞数を有意に抑制することが確認された。また、化合物6の濃度10μmol/Lの場合にも5%未満の危険率において、対照群と比較してA549の浸潤細胞数を有意に抑制することが確認された。すなわち、化合物1は、濃度12.5μmol/Lおよび25μmol/Lの場合に、そして、化合物6は、濃度10μmol/L場合に、A549細胞のマトリクス浸潤を有意に抑制するものと認められる。
 本発明の化合物またはその医薬的に上許容される塩は、強力なオステオポンチン産生阻害作用を有し、癌を含む、オステオポンチン産生亢進に起因する疾患の治療および/または予防に有用である。

Claims (15)

  1.  式:
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000001
    [式中、
     RおよびRは、各々独立して、水素原子、C1-6アルキル、C2-6アルケニル、C2-6アルキニル、C3-8シクロアルキル、C3-8ヘテロシクロアルキル、C6-10アリールまたは5~10員のヘテロアリールであり、ここで、該C1-6アルキル、C2-6アルケニル、C2-6アルキニル、C3-8シクロアルキル、C3-8ヘテロシクロアルキル、C6-10アリールおよび5~10員のヘテロアリールは、各々独立して、置換可能な位置で、ハロゲン、ヒドロキシ、メルカプト、シアノ、ニトロ、アミノ、モノ-もしくはジ-C1-6アルキルアミノ、C1-4アシル、C1-4アシルアミノ、C1-4アルキルスルホニル、C1-6アルキル、C1-6ハロアルキル、C1-6アルコキシ、C1-6ハロアルコキシ、C2-6アルケニル、C2-6アルキニルおよび-ORからなる群から選択される1つまたは同一もしくは異なる2つ以上の基で置換されていてもよく;
     Rは、水素原子、アミノ、独立して選択される1もしくは2個のC1-6アルキルで置換されるアミノ、ヒドロキシまたはC1-6アルコキシであり;
     Rは、水素原子、ハロゲン、アミノ、独立して選択される1もしくは2個のC1-6アルキルで置換されるアミノ、C1-6アルキルまたはC1-6ハロアルキルであり;
     Rは、C2-6アルケニル、C2-6アルキニル、C3-8シクロアルキル、C3-8ヘテロシクロアルキル、C6-10アリールまたは5~10員のヘテロアリールであり、ここで、該C2-6アルケニル、C2-6アルキニル、C3-8シクロアルキル、C3-8ヘテロシクロアルキル、C6-10アリールおよび5~10員のヘテロアリールは、各々独立して、置換可能な位置で、ハロゲン、ヒドロキシ、メルカプト、シアノ、ニトロ、アミノ、モノ-もしくはジ-C1-6アルキルアミノ、C1-4アシル、C1-4アシルアミノ、C1-4アルキルスルホキシ、C1-6アルキル、C1-6ハロアルキル、C1-6アルコキシ、C1-6ハロアルコキシ、C2-6アルケニルおよびC2-6アルキニルからなる群から選択される1つまたは同一もしくは異なる2つ以上の基で置換されていてもよく;
     RおよびRは、各々独立して、水素原子またはC1-4アルキルであり;
     nは0~4であり、ただし、nが1~4であり、RがC1-4アルキルである場合、Rの末端の炭素原子がnの括弧で示されたアルキレン基の1つの炭素と結合して4~6員の環を形成してもよく;
     mは0または1であり;
     pは0または1であり; 
     XはOであるか、またはpが0であり、Rがアミノもしくは置換アミノでベンゼン環の2位に結合する場合は、XがCHとしてRの窒素原子と結合してピロール環を形成してもよく;および
     YはCHまたはNHである]
    で表される化合物またはその医薬的に許容される塩、ただし、N-(3-(2-アミノ-3-(4-ヒドロキシフェノキシ)フェニル)-3-オキソプロピル)-4-ヒドロキシベンズアミドは除く。
  2.  式(I):
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000002
    [式中、R、R、R、RおよびXは、請求項1に定義されている通りである]
    で表される、請求項1記載の化合物またはその医薬的に許容される塩。
  3.  Rが、C3-8シクロアルキル、C3-8ヘテロシクロアルキル、C6-10アリールまたは5~10員のヘテロアリールであり、ここで、該C3-8シクロアルキル、C3-8ヘテロシクロアルキル、C6-10アリールおよび5~10員のヘテロアリールは、各々独立して、置換可能な位置で、ハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、モノ-もしくはジ-C1-6アルキルアミノ、C1-4アシル、C1-4アシルアミノ、C1-6アルキル、C1-6ハロアルキル、C1-6アルコキシ、およびC1-6ハロアルコキシからなる群から選択される1つまたは同一もしくは異なる2つ以上の基で置換されていてもよく;
     Rがベンゼン環の2位に結合し、水素原子、アミノまたはヒドロキシであり;
     ORがベンゼン環の3位に結合し、Rがフェニルであり、ここで、該フェニルは、置換可能な位置で、ハロゲン、ヒドロキシ、C1-6アルキル、C1-6ハロアルキル、C1-6アルコキシ、およびC1-6ハロアルコキシからなる群から選択される1つまたは同一もしくは異なる2つ以上の基で置換されていてもよく;
     Rが水素原子、ハロゲンまたはアミノである、
    請求項1または2記載の化合物またはその医薬的に許容される塩。
  4.  Rが、C3-8シクロアルキル、テトラヒドロピラニル、ピリジル、チエニルまたはフェニルであり、ここで、該C3-8シクロアルキル、テトラヒドロピラニル、ピリジル、チエニルおよびフェニルは、各々独立して、置換可能な位置で、ハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、C1-4アシル、C1-4アシルアミノ、C1-6アルキル、C1-6ハロアルキル、C1-6アルコキシおよびC1-6ハロアルコキシからなる群から選択される1つまたは同一もしくは異なる2つの基で置換されていてもよい、請求項1~3のいずれか一項に記載の化合物またはその医薬的に許容される塩。
  5.  Rがフェニルであり、フェニル基の3位および/または4位が独立して、ハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、C1-4アシルアミノまたはC1-6アルコキシで置換される、請求項1~4のいずれか一項に記載の化合物またはその医薬的に許容される塩。
  6.  Rがフェニルであり、フェニル基の3位および/または4位が独立して、ハロゲン、ヒドロキシ、C1-6アルキル、C1-6ハロアルキル、C1-6アルコキシまたはC1-6ハロアルコキシで置換される、請求項1~5のいずれか一項に記載の化合物またはその医薬的に許容される塩。
  7.  Rが水素原子である、請求項1~6のいずれか一項に記載の化合物またはその医薬的に許容される塩。
  8.  mが1であり、XがOであり、pが1である、請求項1~7のいずれか一項に記載の化合物またはその医薬的に許容される塩。
  9.  nが1~4であり、RがC1-4アルキルで、Rの末端の炭素原子がnの括弧で示されたアルキレン基の1つの炭素と結合して4~6員の環を形成する、請求項1~8のいずれか一項に記載の化合物またはその医薬的に許容される塩。
  10.  4-ヒドロキシ-N-(2-(7-(4-ヒドロキシフェノキシ)-1H-インドール-3-イル)エチル)ベンズアミド;
     N-(3-(2,3-ジヒドロキシフェニル)-3-オキソプロピル)-4-(4-ヒドロキシフェノキシ)ベンズアミド;
     N-(3-(2-アミノ-3-(4-ヒドロキシフェノキシ)フェニル)-3-オキソプロピル)-4-メトキシベンズアミド;
     N-(3-(2-アミノ-3-(4-メトキシフェノキシ)フェニル)-3-オキソプロピル)-4-メトキシベンズアミド;
     N-(3-(2-アミノ-3-(4-メトキシフェノキシ)フェニル)-3-オキソプロピル)-4-ヒドロキシベンズアミド;
     N-(3-(2-アミノ-3-(4-ヒドロキシフェノキシ)フェニル)-3-オキソプロピル)-3-メトキシベンズアミド;
     N-(3-(2-アミノ-3-(4-ヒドロキシフェノキシ)フェニル)-3-オキソプロピル)-アセトアミド;
     N-(3-(2-アミノ-3-(4-ヒドロキシフェノキシ)フェニル)-3-オキソプロピル)-4-フルオロベンズアミド;
     N-(3-(2-アミノ-3-(4-ヒドロキシフェノキシ)フェニル)-3-オキソプロピル)-シクロヘキサンカルボキサミド;
     N-(3-(2-アミノ-3-(4-ヒドロキシフェノキシ)フェニル)-3-オキソプロピル)-(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)-カルボキサミド;
     N-(3-(2-アミノ-3-メトキシフェニル)-3-オキソプロピル)-4-ヒドロキシベンズアミド;
     N-(3-(2-アミノ-3-ヒドロキシフェニル)-3-オキソプロピル)-4-ヒドロキシベンズアミド;
     N-(3-(2-アミノ-3-(4-メチルフェノキシ)フェニル)-3-オキソプロピル)-4-ヒドロキシベンズアミド;
     N-(3-(2-アミノ-3-(4-(トリフルオロメチル)フェノキシ)フェニル)-3-オキソプロピル)-4-ヒドロキシベンズアミド;
     N-(3-(2-アミノ-3-(3,4-ジメトキシフェノキシ)フェニル)-3-オキソプロピル)-4-ヒドロキシベンズアミド;
     N-(3-(2-アミノ-3-(4-クロロフェノキシ)フェニル)-3-オキソプロピル)-4-ヒドロキシベンズアミド;
     N-(3-(2-アミノ-3-(4-クロロフェノキシ)フェニル)-3-オキソプロピル)-4-アミノベンズアミド;
     N-(3-(2-アミノ-3-(4-クロロフェノキシ)フェニル)-3-オキソプロピル)-4-アセチルアミノベンズアミド;
     N-(2-(3-(4-メトキシフェノキシ)ベンゾイルアミノ)エチル)-4-ヒドロキシベンズアミド;
     N-(2-(2-(4-メトキシフェノキシ)ベンゾイルアミノ)エチル)-4-ヒドロキシベンズアミド;
     N-(4-ヒドロキシフェニル)-4-(3-(4-クロロフェノキシ)フェニルアミノ)-4-オキソブタンアミド;
     N-(3-(3-(4-クロロフェノキシ)フェニルアミノ)-3-オキソプロピル)-4-ヒドロキシベンズアミド;
     N-(2-(3-(4-メトキシフェノキシ)フェニルアミノ)-2-オキシエチル)-4-ヒドロキシベンズアミド;
     N-(3-(3-(4-メトキシフェノキシ)フェニルアミノ)-3-オキソプロピル)-4-ヒドロキシベンズアミド;
     N-(4-(3-(4-メトキシフェノキシ)フェニルアミノ)-4-オキソブチル)-4-ヒドロキシベンズアミド;
     N-(2-(2-(4-メトキシフェノキシ)フェニルアミノ)-2-オキソエチル)-4-ヒドロキシベンズアミド;
     N-(3-(2-(4-メトキシフェノキシ)フェニルアミノ)-3-オキソプロピル)-4-ヒドロキシベンズアミド;
     N-(3-(4-(4-メトキシフェノキシ)フェニルアミノ)-3-オキソプロピル)-4-ヒドロキシベンズアミド;
     N-(3-(4-クロロフェノキシ)フェニル)-1-(4-ヒドロキシフェニルカルボニル)アゼチジン-3-カルボキサミド;
     N-(3-(4-クロロフェノキシ)フェニル)-1-(4-ヒドロキシフェニルカルボニル)ピロリジン-3-カルボキサミド;
     N-(3-(4-クロロフェノキシ)フェニル)-1-(4-ヒドロキシフェニルカルボニル)ピペリジン-3-カルボキサミド;
     N-(3-(4-クロロフェノキシ)フェニル)-1-(4-ヒドロキシフェニルカルボニル)ピロリジン-2-カルボキサミド;
     N-(3-(3-(4-クロロフェノキシ)フェニルアミノ)-3-オキソプロピル)チオフェン-2-カルボキサミド;
     N-(3-(3-(4-クロロフェノキシ)フェニルアミノ)-3-オキソプロピル)チオフェン-3-カルボキサミド;
     N-(3-(3-(4-クロロフェノキシ)フェニルアミノ)-3-オキソプロピル)ピリジン-4-カルボキサミド;および
     N-(3-(3-(3,4-ジクロロフェノキシ)フェニルアミノ)-3-オキソプロピル)-4-ヒドロキシベンズアミド
    からなる群から選択される、請求項1~9のいずれか一項に記載の化合物またはその医薬的に許容される塩。
  11.  請求項1~10のいずれか一項に記載の化合物またはその医薬的に許容される塩、および医薬的に許容される添加剤を含有する医薬組成物。
  12.  オステオポンチン産生亢進に起因する疾患の治療に使用するための、請求項11記載の医薬組成物。
  13.  式:
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000003
    [式中、
     RおよびRは、各々独立して、水素原子、C1-6アルキル、C2-6アルケニル、C2-6アルキニル、C3-8シクロアルキル、C3-8ヘテロシクロアルキル、C6-10アリールまたは5~10員のヘテロアリールであり、ここで、該C1-6アルキル、C2-6アルケニル、C2-6アルキニル、C3-8シクロアルキル、C3-8ヘテロシクロアルキル、C6-10アリールおよび5~10員のヘテロアリールは、各々独立して、置換可能な位置で、ハロゲン、ヒドロキシ、メルカプト、シアノ、ニトロ、アミノ、モノ-もしくはジ-C1-6アルキルアミノ、C1-4アシル、C1-4アシルアミノ、C1-4アルキルスルホニル、C1-6アルキル、C1-6ハロアルキル、C1-6アルコキシ、C1-6ハロアルコキシ、C2-6アルケニル、C2-6アルキニルおよび-ORからなる群から選択される1つまたは同一もしくは異なる2つ以上の基で置換されていてもよく;
     Rは、水素原子、アミノ、独立して選択される1もしくは2個のC1-6アルキルで置換されるアミノ、ヒドロキシまたはC1-6アルコキシであり;
     Rは、水素原子、ハロゲン、アミノ、独立して選択される1もしくは2個のC1-6アルキルで置換されるアミノ、C1-6アルキルまたはC1-6ハロアルキルであり;
     Rは、C2-6アルケニル、C2-6アルキニル、C3-8シクロアルキル、C3-8ヘテロシクロアルキル、C6-10アリールまたは5~10員のヘテロアリールであり、ここで、該C2-6アルケニル、C2-6アルキニル、C3-8シクロアルキル、C3-8ヘテロシクロアルキル、C6-10アリールおよび5~10員のヘテロアリールは、各々独立して、置換可能な位置で、ハロゲン、ヒドロキシ、メルカプト、シアノ、ニトロ、アミノ、モノ-もしくはジ-C1-6アルキルアミノ、C1-4アシル、C1-4アシルアミノ、C1-4アルキルスルホキシ、C1-6アルキル、C1-6ハロアルキル、C1-6アルコキシ、C1-6ハロアルコキシ、C2-6アルケニルおよびC2-6アルキニルからなる群から選択される1つまたは同一もしくは異なる2つ以上の基で置換されていてもよく;
     RおよびRは、各々独立して、水素原子またはC1-4アルキルであり;
     nは0~4であり、ただし、nが1~4であり、RがC1-4アルキルである場合、Rの末端の炭素原子がnの括弧で示されたアルキレン基の1つの炭素と結合して4~6員の環を形成してもよく;
     mは0または1であり;
     pは0または1であり; 
     XはOであるか、またはpが0であり、Rがアミノもしくは置換アミノでベンゼン環の2位に結合する場合は、XがCHとしてRの窒素原子と結合してピロール環を形成してもよく;および
     YはCHまたはNHである]
    で表される化合物またはその医薬的に許容される塩を有効成分として含む、オステオポンチン産生亢進に起因する疾患の治療剤。
  14.  式が、式(I):
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000004
    [式中、R、R、R、RおよびXは、請求項12に定義されている通りである]
    で表される、請求項13記載の治療剤。
  15.  オステオポンチン産生亢進に起因する疾患が、癌、肝炎、動脈硬化、多発性硬化症、関節炎、リウマチ、肺繊維症、骨粗鬆症または尿路結石である、請求項13または14に記載の治療剤。
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