WO2015056619A1 - ペプチド又はその酸付加塩、飲食品、及び糖尿病予防等の組成物 - Google Patents

ペプチド又はその酸付加塩、飲食品、及び糖尿病予防等の組成物 Download PDF

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WO2015056619A1
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seq
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addition salt
acid addition
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貴文 水重
耕作 大日向
達宏 綾部
耕介 速水
韓　力
辻　智子
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日本水産株式会社
国立大学法人京都大学
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    • C07K5/06104—Dipeptides with the first amino acid being acidic
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    • A—HUMAN NECESSITIES
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    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Definitions

  • the present invention relates to a peptide or an acid addition salt thereof, a food or drink, and a composition for preventing diabetes.
  • skeletal muscles By the way, there are two types of skeletal muscles: fast muscle fibers with excellent instantaneous power and slow muscle fibers with excellent endurance. So far, it has been clarified that skeletal muscles become hypertrophied and fast muscles when rats are fed a diet containing walleye pollutant protein (APP) for 8 weeks (Non-patent Document 1). It is thought to lead to improvement. Skeletal muscles, especially fast muscles, are organs that are active in glucose uptake, and it is thought that the increase in skeletal muscles and the rapid muscles increase glucose tolerance and lead to improvement of diabetes.
  • APP walleye pollutant protein
  • Non-patent Document 2 There is also a report that cod protein increases insulin sensitivity (Non-patent Document 2).
  • compositions used for diabetes prevention and the like are in the process of development, and there is a demand for providing a composition with a higher improvement effect.
  • the present invention has been made in view of the above circumstances, and an object of the present invention is to provide a composition excellent in diabetes prevention, diabetes treatment, insulin sensitivity enhancement, sugar metabolism improvement and the like.
  • the present inventors have found that an isolated peptide consisting of a peptide of 9 amino acids or less containing QW or a peptide of 10 amino acids or less containing ELR, or an acid addition salt thereof, is used for diabetes prevention, diabetes treatment, insulin sensitivity enhancement, sugar
  • the present inventors have found that it is excellent in improving metabolism etc. and have completed the present invention.
  • the present invention provides the following.
  • the present invention is an isolated peptide consisting of a peptide of 9 amino acids or less including QW (SEQ ID NOs: 1 and 2) or a peptide of 10 amino acids or less including ELR (SEQ ID NOs: 3 and 4) or an acid thereof Addition salt.
  • the present invention also relates to the isolated peptide according to (1), wherein the peptide of 9 amino acids or less containing QW is a peptide of 9 amino acids or less containing QWR (SEQ ID NOs: 5 and 6), or a peptide thereof Acid addition salt.
  • the present invention is the isolated peptide or acid addition salt thereof according to (2), wherein the QWR is present at the C-terminus of a peptide of 9 amino acids or less containing the QW. .
  • the peptide of 9 amino acids or less containing QW is any one of ANGEVAQWR (SEQ ID NO: 7, 8), ANSEVAQWR (SEQ ID NO: 9, 10), or QWR (SEQ ID NO: 5, 6).
  • the isolated peptide according to any one of (1) to (3) or an acid addition salt thereof.
  • the present invention also provides the isolated peptide according to any one of (1) to (4), wherein the ELR is present at the C-terminus of a peptide of 10 amino acids or less containing the ELR. Or an acid addition salt thereof.
  • the present invention provides the isolated peptide according to any one of (1) to (5) or a peptide thereof, wherein the peptide of 10 amino acids or less including the ELR is ELR (SEQ ID NOs: 3 and 4). Acid addition salt.
  • the present invention provides the isolated peptide according to any one of (1) to (6) or a peptide thereof, wherein the peptide of 10 amino acids or less including the ELR is YNELR (SEQ ID NO: 11, 12). Acid addition salt.
  • this invention is the food / beverage products which added the isolated peptide in any one of (1) to (7), or its acid addition salt.
  • this invention is a composition used for diabetes prevention or diabetes treatment which uses the isolated peptide in any one of (1) to (7) or its acid addition salt as an active ingredient.
  • the present invention also relates to a composition used for enhancing insulin sensitivity or improving glucose metabolism, comprising the isolated peptide or acid addition salt thereof according to any one of (1) to (7) as an active ingredient. is there.
  • the present invention further comprises digesting an animal protein containing a peptide having the sequence of ANGEVAQWR (SEQ ID NO: 7), ANSEVAQWR (SEQ ID NO: 9) or IWHHTFYNELR (SEQ ID NO: 13) with trypsin, and This is a method for producing a composition for use in diabetes prevention or treatment, wherein the peptide is concentrated twice or more.
  • an isolated peptide consisting of a peptide of 9 amino acids or less containing QW or a peptide of 10 amino acids or less containing ELR or an acid addition salt thereof, diabetes prevention, diabetes treatment, insulin sensitivity Effects such as enhancement and improved sugar metabolism can be obtained.
  • FIG. 6 It is a figure which shows the intracellular glucose uptake
  • an acid addition salt of a peptide refers to an addition salt with a pharmaceutically acceptable acid (inorganic acid and organic acid), for example, hydrochloride, hydrogen bromide, acid salt, sulfate, nitrate, acetic acid. Salt, benzoate, maleate, fumarate, succinate, tartrate, citrate, oxalate, methanesulfonate, toluenesulfonate, aspartate, glutamate and the like.
  • the sequence of the peptide is not particularly limited as long as it contains QW and is 9 amino acids or less, and includes QWR (SEQ ID NOs: 5 and 6) and 9 amino acids or less. It is preferable. Moreover, it is preferable that QWR exists in C terminal.
  • a peptide containing QWR and having 9 amino acids or less preferably has a low number of amino acids from the viewpoint of improving functionality per dose as long as the function is not completely impaired. 7 amino acids or less, 6 amino acids or less, 5 amino acids or less, 4 amino acids or less, 3 amino acids or less are preferable. Among them, the peptide is preferably any one of ANGEVAQWR (SEQ ID NO: 7, 8), ANSEVAQWR (SEQ ID NO: 9, 10), or QWR.
  • the peptide may be obtained by peptide synthesis or may be derived from a natural product.
  • the method of peptide synthesis is not particularly limited, and may be either a solid phase method or a liquid phase method.
  • the peptide of the present invention obtained by peptide synthesis can be purified by a conventional purification method using reverse phase high performance liquid chromatography, chromatography using an ion exchange resin or high porous polymer resin, affinity chromatography, or the like.
  • a natural product-derived one can be obtained by decomposing, isolating and purifying an animal protein containing a peptide having the sequence of ANGEVAQWR or ANSEVAQWR with trypsin.
  • sequence of the peptide is not particularly limited as long as it is an isolated sequence of 10 amino acids or less including ELR, but the ELR is preferably present at the C-terminus.
  • a peptide having 10 amino acids or less including ELR preferably has a low number of amino acids from the viewpoint of improving functionality per dose as long as the function is not completely impaired, specifically, 9 amino acids or less, 8 amino acids or less, 7 amino acids or less, 6 amino acids or less, and 5 amino acids are preferable.
  • a peptide is ELR or YNELR (sequence number 11, 12).
  • peptides of 9 amino acids or less including QW may also be obtained by peptide synthesis or derived from natural products.
  • a product derived from a natural product is obtained by digesting an animal protein including a peptide having the sequence of IWHHTFYNELR (SEQ ID NO: 13) with trypsin.
  • the peptide or acid addition salt thereof may be included in food or drink.
  • the type of food and drink is not particularly limited. Can be mentioned.
  • the food or drink can be produced by adding the peptide of the present invention or an acid addition salt thereof to the final product by mixing, coating, spraying or the like (typically as a food additive).
  • the content of the peptide in the food can be appropriately selected, but is generally in the range of 0.00001 to 100% by weight with respect to the food. Considering the taste and appearance of the food, the peptide content is preferably about 100 ⁇ g to 1000 g per 1 kg of food. When the peptide itself is used as a supplement for health foods or the like, it is only necessary to add excipients or the like for molding powders, tablets and the like.
  • the peptide or acid addition salt thereof Since the peptide or acid addition salt thereof has an action of increasing sugar uptake, it exhibits a hypoglycemic action that lowers blood glucose level and / or fasting blood glucose level at any time in chronic hyperglycemic state, thereby causing chronic hyperglycemic state. Therefore, it is used as a composition for the prevention or treatment of diabetes. Moreover, since the said peptide or its acid addition salt shows an insulin sensitivity enhancement effect
  • diabetes refers to a group of metabolic diseases mainly having a chronic hyperglycemia state due to insufficient quantity or action of insulin. Diabetes is broadly classified into insulin-dependent diabetes (type 1 diabetes) and non-insulin-dependent diabetes (type 2 diabetes), and the composition of the present invention can function as an active ingredient regardless of the combination with insulin. Therefore, it can be preferably used for prevention or treatment of any type of diabetes.
  • insulin sensitivity refers to the degree of action of insulin, that is, the degree of blood glucose lowering action and gluconeogenesis inhibiting action. Therefore, the composition used for enhancing insulin sensitivity is administered together with insulin (which may or may not be simultaneous. The administration route may be the same or different).
  • the blood glucose lowering action and the insulin sensitivity regulating action of the peptide or acid addition salt thereof can be evaluated by measuring, for example, the action of increasing sugar uptake.
  • the action of increasing glucose uptake can be evaluated using, for example, glucose infusion rate (GIR) in the hyperinsulin normoglycemic clamp method using normal animals and pathological model animals as an index.
  • GIR glucose infusion rate
  • Insulin resistance refers to a state in which the sensitivity of insulin in a tissue is reduced and the action of insulin is suppressed. Insulin resistance can be evaluated by using, for example, fasting blood glucose and insulin concentration, Brgman's minimum model, steady state plasma glucos (SSPG) method, HOMA-IR (Homeostasis model of insulin insulin), and high insulin normoglycemic clamp method. it can.
  • SSPG steady state plasma glucos
  • HOMA-IR Homeostasis model of insulin insulin
  • high insulin normoglycemic clamp method it can.
  • “improvement of sugar metabolism” means to improve poor metabolism of carbohydrates to obtain a more normal sugar metabolism state.
  • carbohydrate metabolic pathways may not function normally in the process of carbohydrates becoming energy, such as hyperglycemia caused by insufficient insulin action. Is to promote the utilization of carbohydrates.
  • glucose metabolism is improved, an increase in blood glucose level after a meal can be suppressed, and the blood glucose level can be lowered to a normal level as soon as possible.
  • poor metabolism of carbohydrates causes chronic hyperglycemia, which causes systemic vascular disorders and further complications such as neuropathy and retinopathy. Therefore, the composition of the present invention is useful for preventing or ameliorating these vascular disorders and their complications.
  • composition according to the present invention can be administered orally or parenterally in the state of the active ingredient as described above or further blended with optional ingredients such as a pharmaceutically acceptable carrier.
  • Examples of dosage forms for oral administration of the composition of the present invention include tablets (including sugar-coated tablets and film-coated tablets), pills, granules, powders, capsules (including soft capsules and microcapsules), Sublingual tablets, syrups, emulsions or suspensions may be mentioned.
  • examples of the dosage form for parenteral administration of the composition of the present invention include injections, infusions, drops, vapours, and suppositories.
  • the peptide of the present invention or an acid addition salt thereof is prepared by using a suitable base (eg, butyric acid polymer, glycolic acid polymer, butyric acid-glycolic acid copolymer, butyric acid polymer and glycolic acid polymer). Combinations with mixtures or polyglycerol fatty acid esters) can also be used as sustained-release preparations.
  • a suitable base eg, butyric acid polymer, glycolic acid polymer, butyric acid-glycolic acid copolymer, butyric acid polymer and glycolic acid polymer.
  • the above composition may further contain other nutritional components (such as carbohydrates), salt (such as NaCl), and pH adjusters (such as edible acids).
  • the preventive or therapeutic agent according to the present invention further includes one or more of a pharmaceutically or physiologically acceptable base, carrier, excipient, binder, disintegrant, lubricant, and coloring agent. May include.
  • Examples of the carrier and excipient include lactose, glucose, sucrose, mannitol, potato starch, corn starch, calcium carbonate, calcium phosphate, calcium sulfate, and crystalline cellulose.
  • Examples of the binder include starch, gelatin, syrup, tragacanth gum, polyvinyl alcohol, polyvinyl ether, polyvinyl pyrrolidone, hydroxypropyl cellulose, methyl cellulose, ethyl cellulose, and carboxymethyl cellulose.
  • Examples of the disintegrant include starch, agar, gelatin powder, crystalline cellulose, calcium carbonate, sodium bicarbonate, sodium alginate, sodium carboxymethylcellulose, and carboxymethylcellulose calcium.
  • Examples of the lubricant include magnesium stearate, hydrogenated vegetable oil, talc and macrogol.
  • the colorant may be any colorant that is allowed to be added to a pharmaceutical product.
  • composition according to the present invention comprises sucrose, gelatin, purified shellac, glycerin, sorbitol, ethylcellulose, hydroxypropylcellulose, hydroxypropylmethylcellulose, polyvinylpyrrolidone, cellulose phthalate acetate, hydroxypropylmethylcellulose phthalate, methyl methacrylate and You may have one or more films, such as a methacrylic acid polymer.
  • the preventive or therapeutic agent according to the present invention may contain a pH adjuster, a buffer, a stabilizer, a solubilizer, and the like as necessary.
  • the hypoglycemic effect and insulin sensitivity are enhanced.
  • the effect can be demonstrated.
  • the dose of the composition is not limited depending on conditions such as the degree of symptoms, the patient's age, weight and health condition, but in the case of an adult, the peptide or its acid addition salt is 1 ⁇ g to 10 g / kg / day. Alternatively, it may be administered orally at an appropriate interval by dividing it once a day or 2 to 4 times or more orally so that the amount is preferably 100 ⁇ g to 1 g / kg / day.
  • composition can be obtained by degrading an animal protein containing a peptide having the sequence of ANGEVAQWR, ANSEVAQWR or IWHHTFYNELR with trypsin, and further concentrating the peptide in the degradation product twice or more.
  • Animal protein includes a peptide having the sequence of ANGEVAQWR (SEQ ID NO: 7), ANSEVAQWR (SEQ ID NO: 9) or IWHHTFYNELR (SEQ ID NO: 13), and if the peptide of this sequence is produced by trypsin, It is not specifically limited, It may be meat protein such as milk protein, livestock meat such as cow, pig, sheep, rabbit, kangaroo and meat, chicken such as chicken, turkey, quail, fish such as fish, white fish. Fish meat proteins, particularly white fish fish proteins, especially fish fish proteins belonging to the order of Codoptera are preferred in that both peptides ANGEVAQWR sequences and IWHHTFYNELR sequences are produced by trypsin degradation.
  • Examples of the fish belonging to the codfish include walleye pollock, minamidara, northern blue whiting, king clip, hake, madara, hoki, etc., and walleye pollock is preferred.
  • walleye pollack fish and Hoki fish meat processed in the following steps can be used as fish meat protein.
  • fish protein may be produced by the following process.
  • the fish meat is cut into an appropriate size, the cut sample is frozen, and then freeze-dried with a freeze dryer.
  • the freeze-dried sample is pulverized by a conventional method, and ethanol or the like is added thereto to elute the fat-soluble component. Subsequently, fish protein can be obtained by removing ethanol.
  • the amount of ethanol or the like used is not particularly limited, but is usually 1 to 50 times (volume), preferably 2 to 20 times the amount of the extraction material.
  • the extraction temperature can be arbitrarily set between room temperature and the boiling point of the extraction solvent. For example, it is preferably carried out at a temperature between room temperature and the boiling point of the extraction solvent under shaking or reflux. Or you may boil the mixture which consists of an extraction material and an extraction solvent.
  • the extraction time is suitably 5 minutes to several hours, preferably 20 minutes to 2 hours, when the extraction is carried out at a temperature about the boiling point of the solvent. Such an extraction operation may be performed only once or repeatedly.
  • the animal protein is degraded with a proteolytic enzyme.
  • This proteolytic enzyme needs to be trypsin.
  • an isolated peptide comprising the sequence of ANGEVAQWR (SEQ ID NO: 7), ANSEVAQWR (SEQ ID NO: 9) or IWHHTFYNELR (SEQ ID NO: 13) can be obtained from the degradation product. .
  • the method of enzymatic degradation is not particularly limited.
  • an appropriate amount of water is added to animal protein from which a fat-soluble component has been removed, and the mixture is homogenized sufficiently. Trypsin is added in an amount of 1/100 of the total weight.
  • it may be subjected to enzymatic degradation by slowly stirring at 37 ° C. for 5 hours under the condition of pH 7.5.
  • the enzyme is decomposed and boiled at 100 ° C. for 10 minutes, the enzyme is deactivated to terminate the reaction, and a filtrate rich in peptide can be obtained by suction filtration.
  • An acid addition salt of a peptide can be obtained by adding sodium hydroxide, for example, to the filtrate thus obtained, if necessary.
  • the peptide in the degradation product is concentrated twice or more.
  • the concentration method is not particularly limited, and examples thereof include filtration (for example, ultrafiltration), precipitation and re-dissolution in a small amount of solvent, freeze-drying and re-dissolution in a small amount of solvent, or solvent absorption with a dry gel. .
  • APP Preparation of walleye fish protein
  • the cut samples were arranged in a layer on a freeze-drying tray, and freeze-dried for 4 days and nights after preliminary freezing at ⁇ 30 ° C. for 4 hours in a freeze-dryer (TF20-85ATNNN, manufactured by Tokyo Rika Kikai Co., Ltd.).
  • the freeze-dried sample was lightly crushed by hand and pulverized with a pin mill (manufactured by Hadano Sangyo Co., Ltd., EM-1A). 99.5% ethanol (manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd., reagent grade) was added to the pulverized freeze-dried sample to elute the fat-soluble component. After air-drying for 1 week, residual ethanol was removed with a rotary evaporator (Tokyo Rika Kikai Co., Ltd., N-21NS) to obtain walleye pollack fish protein. About 1.5 kg of walleye fish protein was obtained from 10 kg of frozen walleye fillet. The composition of this protein is shown in Table 1.
  • mice 4-week-old male ddY mice (Japan SLC, Inc.) were preliminarily raised for 7 days in an animal breeding room at 22 ⁇ 1 ° C. and 12 hours light / dark cycle (light period 7: 00-19: 00). During the preliminary breeding period, the mice were allowed to freely take solid feed MF (manufactured by Japan SLC) and water.
  • mice were fasted for 180 minutes, and then the APP digests shown in Table 2 were ingested in the amounts shown in Table 2. After a further 180 minutes of fasting, 0.75 U / kg B. W. It was intraperitoneally administered so that Blood was collected from the tail vein immediately before administration and 15 minutes, 30 minutes and 60 minutes after administration, and the blood glucose level was measured using a Nipro Freestyle Kissei Meter (manufactured by Nipro Corporation). The results for the trypsin digest are shown in FIG. 1, and the results for the chymotrypsin digest and pancreatin digest are shown in FIG.
  • digested trypsin can lower the blood glucose level to about 60% at a dose of about 100 mg / kg.
  • the blood glucose level can only be reduced to about 75% even if administered in an amount of 300 mg / kg.
  • the trypsin digest has an insulin sensitivity enhancing action as compared with other digests.
  • fraction C has an insulin sensitivity enhancing action.
  • Fraction C which showed activity by the insulin tolerance test, was further fractionated.
  • HPLC was performed using tryptic digest under the same conditions as described above. The outflow time corresponding to fraction C was further divided into 10 and re-fractionated into 10 fractions (fractions C1-C10).
  • FIG. 5 shows an HPLC chart when fraction C of APP trypsin digest is further fractionated into 10 fractions.
  • fraction C3 has an insulin sensitivity enhancing action among 10 fractions. Moreover, the tendency for fraction C8 to increase insulin sensitivity was seen.
  • FIG. 8 confirms that fractions C3-2 and C8-3 have an insulin sensitivity enhancing action.
  • the peptide contained in the peak is a 9-residue peptide whose amino acid sequence is ANGEVAQWR (SEQ ID NO: 7), and for fraction C8-3, the peptide contained in the peak was confirmed to be an 11-residue peptide consisting of IWHHTFYNELR (SEQ ID NO: 13).
  • Synthesis was performed by a solid phase synthesis method using a peptide synthesizer (PS3; Aloka, peti Model Model PSS-510; manufactured by Hypep Laboratories).
  • Fmoc amino acid (Watanabe Chemical) was sequentially bound to Resin amino acid in the presence of N-methyl morpholine, and deprotected with trifluoroacidic acid (TFA). Thereafter, the resultant was precipitated with diethyl ether to obtain a crude peptide. This was separated by HPLC using an ODS column (20 ⁇ 250 mm), and its main peak (absorption wavelength: 230 nm) was collected and lyophilized. The mass of the synthetic peptide was confirmed with a mass spectrometer, and the amino acid sequence was confirmed with a protein sequencer.
  • each synthetic peptide was freeze-dried, and an insulin tolerance test was performed using the obtained sample.
  • the dose of synthetic peptide to mice is 1 mg / kg B. for synthetic peptides ANGEVAQWR, WR and IWHHTFYNELR. W. 3 mg / kg B. W. And 10 mg / kg B. W. 1 mg / kg B. for other synthetic peptides W. It was.
  • the test was performed in the same manner as in Test Example 3.
  • the results for ANGEVAQWR are shown in FIG. 10 (a)
  • the results for ANG, EVA and QWR are shown in FIG. 10 (b)
  • the results for WR are shown in FIG.
  • the result about IWH, HTF, and YNELR is shown in FIG.
  • Test 4-2 Insulin sensitivity enhancing action of three types of synthetic peptides YNELR, YNE and ELR [peptide synthesis] Three synthetic peptides YNELR (SEQ ID NO: 12), YNE (SEQ ID NO: 20), and ELR (SEQ ID NO: 4) were obtained in the same manner as in Test 4-1.
  • FIG. 13 confirmed that the synthetic peptides YNELR and ELR have an insulin sensitivity enhancing action.
  • ELR showed an insulin sensitivity enhancing action, suggesting that the C-terminal side of YNELR is important for activity.
  • YNE did not show a significant insulin sensitivity enhancing action (FIG. 13). This shows that the structure of ELR is important for the insulin sensitivity enhancing action.
  • Test 4-3 Insulin sensitivity enhancing action of synthetic peptide ANSVAQWR [peptide synthesis] A synthetic peptide ANSEV AQWR (SEQ ID NO: 10) was obtained in the same manner as in Test 4-1.
  • FIG. 14 confirmed that the synthetic peptide ANSEVAQWR has an insulin sensitivity enhancing action. At that time, there was no correlation with the dose.
  • Mouse-derived skeletal muscle cells C2C12 were used for the experiment.
  • the cells were cultured in a growth medium composed of DMEM + GlutaMAX (manufactured by Gibco) containing 10% fetal bovine serum (Biological Industries) and 1% penicillin-streptomycin (Gibco) (37 ° C., 5% CO 2 ).
  • C2C12 was seeded in 12-well plates and incubated until 100% confluence.
  • the medium was replaced with a differentiation medium composed of DMEM + GlutaMAX containing 2% horse serum (Gibco), 1% penicillin-streptomycin, and incubated for 5 days to differentiate into myotube cells.
  • the medium was replaced with serum-free medium and incubated for 6 hours.
  • the medium was replaced with Krebs-Ringer-Phosphate-HEPES buffer containing 2% bovine serum albumin (Sigma), and various synthetic peptides or insulin was added. Twenty minutes later, 1 mM 2-Deoxyglucose (2-DG, Sigma) was added. Further, after 20 minutes, the reaction was stopped by washing with PBS containing Phloretin (Sigma), a sugar uptake inhibitor. The cells were collected, and the amount of 2-DG in the obtained extract was quantified using a 2-DG metabolic rate measurement kit (manufactured by Cosmo Bio). The results are shown in FIGS.
  • ANGEVAQWR, QWR, and YNELR which showed an insulin sensitivity enhancing action in vivo, showed a glucose uptake promoting action in skeletal muscle cells. This suggests that when ANGEVAQWR, QWR, and YNELR are used, the blood glucose level decreases regardless of the presence or absence of insulin. On the other hand, a peptide that did not show an insulin potentiating action did not show a significant change in the ability of glucose uptake into skeletal muscle cells. Therefore, it was suggested that the peptide should be 9 amino acids or less including QW or 10 amino acids or less including ELR in order to prevent diabetes, treat diabetes and improve glucose metabolism.
  • Tests 1 to 5 show the results when normal model mice were used.
  • Test 6 shows the results when using a disease state model mouse. Even when a pathological model mouse is used, the same effects as when a normal model mouse is used are exhibited.
  • mice Hoshino Test Animal Breeding Co., Ltd.
  • light period 7: 00-19: 00 The preliminary breeding period, the mice were allowed to freely take solid feed MF (manufactured by Japan SLC) and water.
  • Intraperitoneal administration of synthetic peptide QWR Five-week-old male NSY mice (Hoshino Test Animal Breeding Co., Ltd.) were tested at 23 ⁇ 1 ° C for 12 hours of light-dark cycle (light period 7: 00-19: 00). Preliminarily raised for 7 days in the animal room. During the preliminary breeding period, the mice were allowed to freely take solid feed MF (manufactured by Japan SLC) and water.
  • mice were fasted for 180 minutes, and then the synthetic peptide QWR was added at 1 mg / kg B.R. Only W was ingested. After a further 180 minutes of fasting, 0.75 U / kg B. W. It was intraperitoneally administered so that Blood was collected from the tail vein immediately before administration and 15 minutes, 30 minutes and 60 minutes after administration, and the blood glucose level was measured using a Nipro Freestyle Kissei Meter (manufactured by Nipro Corporation). The results are shown in FIG.
  • FIG. 18 confirms that the blood glucose level is decreased even when the synthetic peptide QWR is administered intraperitoneally to the disease model mouse.
  • QWR QWR was forcibly administered orally.
  • the dose of QWR to mice was 10 mg / kg B.R. W. , 30 mg / kg B. W. And 100 mg / kg B.R. W. The three types.
  • insulin was 0.5 U / kgB. W. It was intraperitoneally administered so that Blood was collected from the tail vein immediately before administration and 15 minutes, 30 minutes and 60 minutes after administration, and the blood glucose level was measured using a Nipro Freestyle Kissei Meter (manufactured by Nipro Corporation). The results are shown in FIG.

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Abstract

　糖尿病予防、糖尿病治療、インスリン感受性増強、糖代謝改善等に優れる組成物を提供する。　本発明は、ＱＷ（配列番号１，２）を含む９アミノ酸以下、又はＥＬＲ（配列番号３，４）を含む１０アミノ酸以下の単離されたペプチド又はその酸付加塩である。前者のペプチドはＡＮＧＥＶＡＱＷＲ（配列番号７，８）、ＡＮＳＥＶＡＱＷＲ（配列番号９，１０）又はＱＷＲ（配列番号５，６）であることが好ましく、後者のペプチドはＥＬＲ又はＹＮＥＬＲ（配列番号１１，１２）であることが好ましい。ペプチドは、ペプチド合成由来であっても、天然物由来であってもよい。天然物由来のペプチドは、ＡＮＧＥＶＡＱＷＲ（配列番号７）、ＡＮＳＥＶＡＱＷＲ（配列番号９）又はＩＷＨＨＴＦＹＮＥＬＲ（配列番号１３）の配列を有するペプチドを含む動物性タンパク質をトリプシンで分解し、さらに分解物中のペプチドを２倍以上に濃縮することによって得られる。

Description

ペプチド又はその酸付加塩、飲食品、及び糖尿病予防等の組成物
　本発明は、ペプチド又はその酸付加塩、飲食品、及び糖尿病予防等の組成物に関する。
　日本では６５歳以上の高齢者人口が３,１９０万人、総人口に占める割合は２５．１％（平成２５年１０月現在）に達し、さらに高齢者の割合は増加の一途をたどると予想されている。加齢は様々な身体機能に影響を及ぼし、特に運動機能の維持に必須である骨格筋量はピーク時より３０～４０％減少するといわれている。加齢によるサルコペニア（筋肉減少症）により日常生活に支障をきたし、寝たきりとなってしまう高齢者も多く存在する。また、骨格筋は糖・エネルギー代謝を行う主たる組織であり、サルコペニアは糖尿病、肥満の発症の引き金となりうる。そのため、これら症状の改善のために、筋機能や耐糖能の維持、改善につながる生理活性物質を提供することが期待されている。
　年齢を問わず筋機能維持のためには適切な運動が効果的である。一方で、乳清タンパク質や大豆タンパク質をはじめとした食品タンパク質を摂取すると、骨格筋のタンパク質合成を促進し、分解を抑制することが知られている。そこで、食品タンパク質の摂取と骨格筋量との関係が注目されている。
　ところで、骨格筋には瞬発力にすぐれた速筋繊維と、持久力に優れた遅筋繊維の２種類の筋繊維タイプが存在する。これまで、ラットにスケトウダラタンパク質（ＡＰＰ）を含んだ餌を８週間摂取させることで骨格筋が肥大化、速筋化することが明らかとなっており（非特許文献１）、高齢者の筋委縮の改善につながると考えられている。また、骨格筋、特に速筋は糖取り込みが盛んな臓器であり、骨格筋の肥大化、速筋化により耐糖能が上昇し、糖尿病の改善につながると考えられている。
　また、タラタンパク質がインスリン感受性を高めるという報告がある（非特許文献２）。
Ｔａｋａｆｕｍｉ　Ｍｉｚｕｓｈｉｇｅ，　Ｆｕｍｉｎｏｒｉ　Ｋａｗａｂａｔａ，　Ｋｅｉｓｕｋｅ　Ｕｏｚｕｍｉ，　Ｔｏｍｏｋｏ　Ｔｓｕｊｉ，　Ｔａｒｏ　Ｋｉｓｈｉｄａ，　Ｋｉｙｏｓｈｉ　Ｅｂｉｈａｒａ．　Ｆａｓｔ－ｔｗｉｔｃｈ　ｍｕｓｃｌｅ　ｈｙｐｅｒｔｒｏｐｈｙ　ｐａｒｔｌｙ　ｉｎｄｕｃｅｓ　ｌｉｐｉｄ　ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ　ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｗｉｔｈ　Ａｌａｓｋａ　ｐｏｌｌａｃｋ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｉｎｔａｋｅ　ｉｎ　ｒａｔｓ．　Ｂｉｏｍｅｄ　Ｒｅｓ．　２０１０　Ｄｅｃ；　３１　（６）：　３４７－５２． Ｖｅｒｏｎｉｑｕｅ　Ｏｕｅｌｌｅｔ　ｅｔ　ａｌ．；　Ｄｉｅｔａｒｙ　Ｃｏｄ　Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ｉｍｐｒｏｖｅｓ　Ｉｎｓｕｌｉｎ　Ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ　ｉｎ　Ｉｎｓｕｌｉｎ－Ｒｅｓｉｓｔａｎｔ　Ｍｅｎ　ａｎｄ　Ｗｏｍｅｎ；Ｄｉａｂｅｔｓ　Ｃａｒｅ；　２００７　Ｎｏｖ；　３０　（１１）：　２８１６－２８２１．
　しかしながら、糖尿病予防等に用いられる組成物の研究は発展途上であり、より改善効果の高い組成物を提供することが求められている。
　本発明は、以上の実情に鑑みてなされたものであり、その目的は、糖尿病予防、糖尿病治療、インスリン感受性増強又は糖代謝改善等に優れる組成物を提供することである。
　本発明者らは、ＱＷを含む９アミノ酸以下のペプチド、又はＥＬＲを含む１０アミノ酸以下のペプチドからなる、単離されたペプチド又はその酸付加塩が、糖尿病予防、糖尿病治療、インスリン感受性増強、糖代謝改善等に優れることを見出し、本発明を完成するに至った。具体的に、本発明は以下のものを提供する。
　（１）　本発明は、ＱＷ（配列番号１，２）を含む９アミノ酸以下のペプチド、又はＥＬＲ（配列番号３，４）を含む１０アミノ酸以下のペプチドからなる、単離されたペプチド又はその酸付加塩である。
　（２）　また、本発明は、前記ＱＷを含む９アミノ酸以下のペプチドがＱＷＲ（配列番号５，６）を含む９アミノ酸以下のペプチドである、（１）に記載の単離されたペプチド又はその酸付加塩である。
　（３）　また、本発明は、前記ＱＷＲが、前記ＱＷを含む９アミノ酸以下のペプチドのＣ末端に存在するものである、（２）に記載の単離されたペプチド又はその酸付加塩である。
　（４）　また、本発明は、前記ＱＷを含む９アミノ酸以下のペプチドがＡＮＧＥＶＡＱＷＲ（配列番号７，８）、ＡＮＳＥＶＡＱＷＲ（配列番号９，１０）又はＱＷＲ（配列番号５，６）のいずれかである、（１）から（３）のいずれかに記載の単離されたペプチド又はその酸付加塩である。
　（５）　また、本発明は、前記ＥＬＲが、前記ＥＬＲを含む１０アミノ酸以下のペプチドのＣ末端に存在するものである、（１）から（４）のいずれかに記載の単離されたペプチド又はその酸付加塩である。
　（６）　また、本発明は、前記ＥＬＲを含む１０アミノ酸以下のペプチドがＥＬＲ（配列番号３，４）である、（１）から（５）のいずれかに記載の単離されたペプチド又はその酸付加塩である。
　（７）　また、本発明は、前記ＥＬＲを含む１０アミノ酸以下のペプチドがＹＮＥＬＲ（配列番号１１，１２）である、（１）から（６）のいずれかに記載の単離されたペプチド又はその酸付加塩である。
　（８）　また、本発明は、（１）から（７）のいずれかに記載の単離されたペプチド又はその酸付加塩を添加した飲食品である。
　（９）　また、本発明は、（１）から（７）のいずれかに記載の単離されたペプチド又はその酸付加塩を有効成分とする糖尿病予防又は糖尿病治療に用いられる組成物である。
　（１０）　また、本発明は、（１）から（７）のいずれかに記載の単離されたペプチド又はその酸付加塩を有効成分とするインスリン感受性増強又は糖代謝改善に用いられる組成物である。
　（１１）　また、本発明は、ＡＮＧＥＶＡＱＷＲ（配列番号７）、ＡＮＳＥＶＡＱＷＲ（配列番号９）又はＩＷＨＨＴＦＹＮＥＬＲ（配列番号１３）の配列を有するペプチドを含む動物性タンパク質をトリプシンにより分解し、さらに分解物中の前記ペプチドを２倍以上に濃縮する、糖尿病予防又は糖尿病治療に用いられる組成物の製造方法である。
　本発明によれば、ＱＷを含む９アミノ酸以下のペプチド、又はＥＬＲを含む１０アミノ酸以下のペプチドからなる、単離されたペプチド又はその酸付加塩を用いることで、糖尿病予防、糖尿病治療、インスリン感受性増強、糖代謝改善等の効果が得られる。
ＡＰＰトリプシン消化物をマウスに投与したときの血糖値の減少率を示す図である。 ＡＰＰキモトリプシン消化物又はパンクレアチン消化物をマウスに投与したときの血糖値の減少率を示す図である。 ＡＰＰトリプシン消化物を４つのフラクションに分画したときのＨＰＬＣチャートである。 上記４つのフラクションに係る消化物をマウスに投与したときの血糖値の減少率を示す図である。 フラクションＣをさらに１０個のフラクションに再分画したときのＨＰＬＣチャートである。 上記１０個のフラクションに係る消化物をマウスに投与したときの血糖値の減少率を示す図である。 上記１０個のフラクションの中のフラクションＣ３及びＣ８をさらに再々分画したことを示す図である。 図７に示す各々のフラクションに係る消化物をマウスに投与したときの血糖値を示す図である。 フラクションＣ３－２及びＣ８－３のＨＰＬＣチャートを示す。 合成ペプチドＡＮＧＥＶＡＱＷＲ（配列番号８），ＡＮＧ（配列番号１５），ＥＶＡ（配列番号１６）及びＱＷＲ（配列番号６）をマウスに投与したときの血糖値の減少率を示す図である。 合成ペプチドＷＲ（配列番号１７）をマウスに投与したときの血糖値の減少率を示す図である。 合成ペプチドＩＷＨ（配列番号１８），ＨＴＦ（配列番号１９）及びＹＮＥＬＲ（配列番号１２）をマウスに投与したときの血糖値の減少率を示す図である。 合成ペプチドＹＮＥＬＲ（配列番号１２），ＹＮＥ（配列番号２０）及びＥＬＲ（配列番号４）をマウスに投与したときの血糖値の減少率を示す図である。 合成ペプチドＡＮＳＥＶＡＱＷＲ（配列番号１０）をマウスに投与したときの血糖値の減少率を示す図である。 各種合成ペプチドの細胞内糖取込み活性を示す図である。 図１５に続く図である。 合成ペプチドＱＷＲ（配列番号６）を病態マウスに投与し、グルコース負荷試験を行ったときの結果を示す図である。 合成ペプチドＱＷＲ（配列番号６）を病態マウスに投与し、インスリン負荷試験を行ったときの結果を示す図である。 合成ペプチドＱＷＲ（配列番号６）を正常マウスに投与し、インスリン負荷試験を行ったときの結果を示す図である。
　以下、本発明の実施形態を説明するが、これに本発明が限定されるものではない。
＜ペプチド又はその酸付加塩＞
　本発明は、ＱＷ（配列番号１，２）を含む９アミノ酸以下のペプチド、又はＥＬＲ（配列番号３，４）を含む１０アミノ酸以下のペプチドからなる、単離されたペプチド又はその酸付加塩である。本明細書において、ペプチドの酸付加塩とは、製薬上許容される酸（無機酸及び有機酸）との付加塩をいい、例えば塩酸塩、臭化水素、酸塩、硫酸塩、硝酸塩、酢酸塩、安息香酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、クエン酸塩、シュウ酸塩、メタンスルホン酸塩、トルエンスルホン酸塩、アスパラギン酸塩、グルタミン酸塩等が挙げられる。
［ＱＷを含む９アミノ酸以下のペプチド］
　ペプチドの配列は、ＱＷを含み、９アミノ酸以下の単離されたものであれば、特に限定されるものではないが、ＱＷＲ（配列番号５，６）を含み、９アミノ酸以下の単離されたものであることが好ましい。また、ＱＷＲは、Ｃ末端に存在することが好ましい。
　ＱＷＲを含み、９アミノ酸以下のペプチドは、その機能が完全に損なわれない限りにおいて、投与量あたりの機能性を向上する観点で、アミノ酸数が低いことが好ましく、具体的には、８アミノ酸以下、７アミノ酸以下、６アミノ酸以下、５アミノ酸以下、４アミノ酸以下、３アミノ酸以下が好ましい。中でも、ペプチドは、ＡＮＧＥＶＡＱＷＲ（配列番号７，８）、ＡＮＳＥＶＡＱＷＲ（配列番号９，１０）又はＱＷＲのいずれかであることが好ましい。
　ペプチドは、ペプチド合成によって得られたものであっても、天然物由来のものであってもよい。ペプチド合成の手法は特に限定されるものでなく、固相法、液相法のいずれであってもよい。ペプチド合成によって得られた本発明のペプチドは逆相高速液体クロマトグラフィー、イオン交換樹脂やハイポーラスポリマー樹脂を用いたクロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー等を用いた通常の精製法で精製できる。また、下記に説明するとおり、天然物由来のものは、ＡＮＧＥＶＡＱＷＲ又はＡＮＳＥＶＡＱＷＲの配列を有するペプチドを含む動物性タンパク質をトリプシンで分解し、分離、精製することによって得られる。
［ＥＬＲを含む１０アミノ酸以下のペプチド］
　ペプチドの配列は、ＥＬＲを含み、１０アミノ酸以下の単離されたものであれば、特に限定されるものではないが、ＥＬＲは、Ｃ末端に存在することが好ましい。
　ＥＬＲを含む１０アミノ酸以下のペプチドは、その機能が完全に損なわれない限りにおいて、投与量あたりの機能性を向上する観点で、アミノ酸数が低いことが好ましく、具体的には、９アミノ酸以下、８アミノ酸以下、７アミノ酸以下、６アミノ酸以下、５アミノ酸が好ましい。中でも、ペプチドは、ＥＬＲ又はＹＮＥＬＲ（配列番号１１，１２）であることが好ましい。
　ＱＷを含む９アミノ酸以下のペプチドと同様、ＥＬＲを含む１０アミノ酸以下のペプチドについてもまた、ペプチド合成によって得られたものであっても、天然物由来のものであってもよい。下記に説明するとおり、天然物由来のものは、ＩＷＨＨＴＦＹＮＥＬＲ（配列番号１３）の配列を有するペプチドを含む動物性タンパク質をトリプシンにより分解することによって得られる。
＜飲食品＞
　上記ペプチド又はその酸付加塩は、飲食品に含まれるものであってもよい。飲食品の種類は特に限定されず、例えば、チューインガム、クッキー、せんべい、ゼリー、ようかん、ヨーグルト若しくはまんじゅう等の菓子類、清涼飲料、お茶類、栄養飲料、スープ、又はパン若しくはうどん等の麺類等が挙げられる。飲食品は、食品の製造工程において、あるいは最終製品に、本発明のペプチド又はその酸付加塩を混合、塗布、噴霧等により（典型的には食品添加剤として）添加して製造できる。
　食品中のペプチドの含有量は適宜選択可能であるが、一般に食品に対して０．００００１～１００重量％の範囲内である。そして、食品の味や外観を考慮すると、ペプチドの含有量は、食品１ｋｇあたり、１００μｇ～１０００ｇ程度が好ましい。ペプチドそのままを健康食品等のサプリメントとして用いる場合、粉末、タブレット等の成形するための賦形剤等を添加するのみでよい。
＜組成物＞
　上記ペプチド又はその酸付加塩は、糖取り込み増加作用を有することから、慢性的高血糖状態において随時血糖値及び／又は空腹時血糖値を低下させる血糖降下作用を示し、これにより慢性の高血糖状態を改善することができるため、糖尿病予防又は糖尿病治療の組成物として用いられる。また、上記ペプチド又はその酸付加塩は、インスリン感受性増強作用を示し、これにより、インスリン抵抗性を改善することができるため、インスリン感受性増強又は糖代謝改善の組成物としても用いられる。
　本明細書において、「糖尿病」とは、インスリンの量的不足又は作用不足による慢性の高血糖状態を主徴とする代謝疾患群をいう。糖尿病は、インスリン依存型糖尿病（１型糖尿病）とインスリン非依存型糖尿病（２型糖尿病）に大別され、本発明の組成物は、インスリンとの併用にかかわらず有効成分の機能が奏されるため、いずれのタイプの糖尿病の予防又は治療にも好ましく用いることができる。
　また、本明細書において、「インスリン感受性」とは、インスリンの作用の程度、即ち血糖低下作用及び糖新生抑制作用の程度をいう。従って、インスリン感受性増強に用いられる組成物は、インスリンとともに（同時であっても同時でなくてもよい。投与経路が同じであっても、異なっていてもよい。）投与される。上記ペプチド又はその酸付加塩の血糖降下作用及びインスリン感受性調節作用は、例えば、糖取り込み増加作用を測定することで評価できる。糖取り込み増加作用は、例えば、正常動物及び病態モデル動物を用いた高インスリン正常血糖クランプ法におけるＧｌｕｃｏｓｅ　ｉｎｆｕｓｉｏｎ　ｒａｔｅ（ＧＩＲ）を指標として評価できる。
　また、本明細書において、「インスリン抵抗性」とは、組織におけるインスリンの感受性が低下し、インスリンの作用が抑制された状態をいう。インスリン抵抗性は、例えば、空腹時血糖とインスリン濃度、Ｂｒｇｍａｎのミニマムモデル、ｓｔｅａｄｙ　ｓｔａｔｅ ｐｌａｓｍａ　ｇｌｕｃｏｓｅ（ＳＳＰＧ）法、ＨＯＭＡ－ＩＲ（Ｈｏｍｅｏｓｔａｓｉｓ　ｍｏｄｅｌ　ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ　ｏｆ　ｉｎｓｕｌｉｎ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ）、高インスリン正常血糖クランプ法を用いて評価できる。
　また、本明細書において、「糖代謝改善」とは、糖質の代謝不良を改善し、より正常な糖の代謝状態とすることをいう。例えば、インスリンの作用不足により起こる高血糖状態等、糖質がエネルギーとなる過程において糖質の代謝経路が正常に働かず、糖質の利用が阻害されることがあるが、糖質の代謝不良を改善し、糖質の利用を促進することである。糖代謝改善がなされると、食後の血糖値の上昇を抑制し、またできる限り早く血糖値を正常値まで低下させることができる。一方、糖質の代謝不良は慢性的な高血糖状態を引き起こし、慢性的な高血糖状態は全身の血管障害を起こし、さらに神経障害、網膜症などの合併症もきたす。したがって、本発明の組成物は、これらの血管障害、その合併症の予防又は改善に有用である。
　本発明に係る組成物は、上記有効成分のままの状態で又は医薬として許容される担体等の任意成分を更に配合して、経口又は非経口で投与される。
　本発明の組成物を経口投与する場合の剤形としては、例えば、錠剤（糖衣錠及びフィルムコーティング錠を含む）、丸剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤（ソフトカプセル剤及びマイクロカプセル剤を含む）、舌下錠、シロップ剤、乳剤又は懸濁剤が挙げられる。また、本発明の組成物を非経口投与する場合の剤形としては、例えば、注射剤、注入剤、点滴剤、バップ剤又は坐剤が挙げられる。
　本発明のペプチド又はその酸付加塩は、適当な基剤（例えば、酪酸の重合体、グリコール酸の重合体、酪酸－グリコール酸の共重合体、酪酸の重合体とグリコール酸の重合体との混合物又はポリグリセロール脂肪酸エステル）と組み合わせて、徐放性製剤とすることも可能である。
　上記組成物は、他の栄養成分（炭水化物等）、塩分（ＮａＣｌ等）、ｐＨ調整剤（食用酸等）を更に含んでもよい。また、本発明に係る予防又は治療剤は、薬学的又は生理学的に許容される基剤、担体、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤及び着色剤等の１種以上等を更に含んでよい。
　担体及び賦形剤としては、乳糖、ブドウ糖、白糖、マンニトール、馬鈴薯デンプン、トウモロコシデンプン、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、硫酸カルシウム及び結晶セルロース等が挙げられる。結合剤としては、デンプン、ゼラチン、シロップ、トラガントゴム、ポリビニルアルコール、ポリビニルエーテル、ポリビニルピロリドン、ヒドロキシプロピルセルロース、メチルセルロース、エチルセルロース及びカルボキシメチルセルロース等が挙げられる。崩壊剤としては、デンプン、寒天、ゼラチン末、結晶セルロース、炭酸カルシウム、炭酸水素ナトリウム、アルギン酸ナトリウム、カルボキシメチルセルロースナトリウム及びカルボキシメチルセルロースカルシウム等が挙げられる。滑沢剤としては、ステアリン酸マグネシウム、水素添加植物油、タルク及びマクロゴール等が挙げられる。着色剤は、医薬品に添加することが許容されている任意の着色剤であってよい。
　本発明に係る組成物は、必要に応じて、白糖、ゼラチン、精製セラック、グリセリン、ソルビトール、エチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、フタル酸セルロースアセテート、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、メチルメタクリレート及びメタアクリル酸重合体等の一層以上の被膜を有してもよい。また、本発明に係る予防又は治療剤は、必要に応じて、ｐＨ調節剤、緩衝剤、安定化剤及び可溶化剤等を含んでもよい。
　本発明の組成物は、哺乳動物（例えば、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ、ネコ、イヌ、ウシ、ヒツジ、サル又はヒト）、特にヒトに対して投与した場合に、血糖降下作用及びインスリン感受性増強作用を発揮できる。組成物の投与量は、症状の程度、患者の年齢、体重及び健康状態等の条件に応じて、限定されないが、成人であれば、上記ペプチド又はその酸付加塩が１μｇ～１０ｇ／ｋｇ／日、好ましくは１００μｇ～１ｇ／ｋｇ／日の量になるように、経口で１日１回又は２～４回以上に分割し適宜の間隔をあけて、投与されてよい。
＜組成物の製造方法＞
　上記組成物は、ＡＮＧＥＶＡＱＷＲ、ＡＮＳＥＶＡＱＷＲ又はＩＷＨＨＴＦＹＮＥＬＲの配列を有するペプチドを含む動物性タンパク質をトリプシンにより分解し、さらに分解物中の前記ペプチドを２倍以上に濃縮することによって得られる。
［動物性タンパク質］
　動物性タンパク質は、ＡＮＧＥＶＡＱＷＲ（配列番号７）、ＡＮＳＥＶＡＱＷＲ（配列番号９）又はＩＷＨＨＴＦＹＮＥＬＲ（配列番号１３）の配列を有するペプチドを含み、かつ、この配列のペプチドがトリプシンにより産生されるものであれば、特に限定されず、乳タンパク質、牛、豚、羊、うさぎ、カンガルー等の畜肉及び獣肉、鶏、七面鳥、うずら等の鳥肉、魚、白身魚等の魚肉等の肉類タンパク質であってよい。魚肉タンパク質、特に白身魚の魚肉タンパク質、中でもタラ目に属する魚の魚肉タンパク質は、ペプチドがＡＮＧＥＶＡＱＷＲの配列とＩＷＨＨＴＦＹＮＥＬＲの配列との両方がトリプシン分解で産生される点で好ましい。
　タラ目に属する魚としては、スケトウダラ、ミナミダラ、ノーザンブルーホワイティング、キングクリップ、メルルーサ、マダラ及びホキ等が挙げられ、中でもスケトウダラが好ましい。例えば、魚肉タンパク質として、以下の工程で処理したスケトウダラ魚肉及びホキ魚肉を使用することができる。
　魚肉タンパク質は、例えば、次のような工程で製造してよい。魚肉を適当な大きさに切断し、切断した試料を凍結させた後、凍結乾燥機で凍結乾燥させる。凍結乾燥した試料を常法にて粉砕し、これにエタノール等を添加して脂溶性成分を溶出させる。次いで、エタノールを除去することにより魚肉タンパク質を得ることができる。
　エタノール等の使用量は特に限定されないが、通常、抽出材料に対して、１～５０倍量（容量）であり、好ましくは２～２０倍量である。抽出温度は、室温～抽出溶媒の沸点程度の間で任意に設定できるが、例えば室温～抽出溶媒の沸点程度の温度で、振盪下または還流下に行うのが好ましい。あるいは、抽出材料と抽出溶媒からなる混合物を煮沸してもよい。抽出時間は、抽出を溶媒の沸点程度の温度で行う場合、５分～数時間、好ましくは２０分～２時間程度が適当である。このような抽出操作は、１回だけ行ってもよく、複数回繰り返し行ってもよい。
［動物性タンパク質の酵素分解］
　上記動物性タンパク質をタンパク質分解酵素で分解する。このタンパク質分解酵素はトリプシンであることを要する。上記動物性タンパク質をトリプシンで分解することによって、分解物からＡＮＧＥＶＡＱＷＲ（配列番号７）、ＡＮＳＥＶＡＱＷＲ（配列番号９）又はＩＷＨＨＴＦＹＮＥＬＲ（配列番号１３）の配列からなる、単離されたペプチドを得ることができる。
　酵素分解の手法は特に限定されるものではないが、例えば、脂溶性成分を除去した動物性タンパク質に対して適量の水を加えて充分ホモジナイズし、トリプシンを全重量の１／１００量を加えて３７℃で５時間、ｐＨ７．５の条件下でゆっくり撹拌して酵素分解に付すことが挙げられる。次いで、酵素分解後に１００℃で１０分間煮沸し、酵素を失活させて反応を終了させ、吸引ろ過によりペプチドに富むろ液を得ることができる。このようにして得られたろ液に、必要に応じて、例えば水酸化ナトリウムを加えると、ペプチドの酸付加塩にすることができる。
［ペプチドの濃縮］
　そして、分解物中のペプチドを２倍以上に濃縮する。濃縮方法は特に限定されるものでなく、ろ過（例えば限外ろ過）、沈殿させて少量の溶媒へ再溶解、凍結乾燥して少量の溶媒へ再溶解、又は乾燥ゲルで溶媒吸収等が挙げられる。
＜試験１＞　消化酵素のスクリーニング
［スケソウダラ魚肉タンパク質（以下「ＡＰＰ」ともいう。）の調製］
　冷凍のアラスカ産スケトウダラフィレー（ユニシー社製）をバンドソー（秋山機械社製、６００ＳＴ）で１ｃｍ×１ｃｍ×１ｃｍ程度の大きさに切断した。切断した試料を凍結乾燥用トレーに一層に並べて、凍結乾燥機（東京理化器械社製、ＴＦ２０－８５ＡＴＮＮＮ）にて－３０℃で４時間の予備凍結後に、４昼夜凍結乾燥した。凍結乾燥試料を手で軽く砕き、ピンミル（槇野産業社製、ＥＭ－１Ａ）にて粉砕した。粉砕した凍結乾燥試料に９９．５％エタノール（和光純薬工業社製、試薬特級）を添加して脂溶性成分を溶出させた。１週間風乾させた後、残留エタノールをロータリーエバポレーター（東京理化器械社製、Ｎ－２１ＮＳ）にて除去し、スケトウダラ魚肉タンパク質を得た。冷凍のスケトウダラフィレー１０ｋｇから、約１．５ｋｇのスケトウダラ魚肉タンパク質が得られた。このタンパク質の組成を表１に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000001
［ＡＰＰ消化物の取得］
　上記脂溶性成分を除去して得られたＡＰＰに水を加え、濃度を２０ｍｇ／ｍｌとし、充分ホモジナイズし、トリプシン、キモトリプシンについては全重量の１／１００量、パンクレアチンについては全重量の１／２０量を加えて３７℃で５時間、ｐＨ７．５の条件下でゆっくり撹拌して酵素分解に付した。その後、１００℃で１０分間煮沸し、消化酵素を失活させた。そして、吸引ろ過により、３種類のＡＰＰ消化物を得た。
［インスリン負荷試験］
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000002
　４週齢の雄性ｄｄＹマウス（日本エスエルシー社）を２２±１℃、明暗サイクル１２時間（明期７：００－１９：００）の動物飼育室で７日間予備飼育した。予備飼育期間中、マウスには固形飼料ＭＦ（日本エスエルシー社製）と水とを自由に摂取させた。
　その後、マウスを１８０分絶食させた後、表２に示すＡＰＰ消化物を表２に示す量だけ摂取させた。そして、さらに１８０分絶食させた後、インスリンを０．７５Ｕ／ｋｇＢ．Ｗ．となるように腹腔内投与した。投与直前と投与後１５分、３０分、６０分後に尾静脈より採血し、ニプロフリースタイルキッセイメーター（ニプロ社製）を用いて血糖値を測定した。トリプシン消化物についての結果を図１に示し、キモトリプシン消化物及びパンクレアチン消化物についての結果を図２に示す。
　図１より、トリプシン消化物は、１００ｍｇ／ｋｇ程度の投与量で血糖値を６０％程度にまで下げることができるといえる。一方、図２より、他の消化物では、３００ｍｇ／ｋｇの量だけ投与しても、血糖値を７５％程度にまでしか低下できない。
　したがって、トリプシン消化物は、他の消化物に比べインスリン感受性増強作用を有するといえる。
＜試験２＞　ペプチド又はその酸付加塩のスクリーニング
［ＨＰＬＣによるＡＰＰトリプシン消化物の分画］
　上記ＡＰＰトリプシン消化物を５０ｍｇ／ｍｌとなるように溶解し、４℃、１０，０００ｒｐｍで５分間遠心し、上清を得た。上清１ｍｌをＯＤＳカラム（Ｃｏｓｍｏｓｉｌ　５Ｃ１８－ＡＲ－II，２０×２５０ｍｍ，ナカライテスク社製）を用いてＨＰＬＣ（Ｗａｔｅｒｓ　６００，日本ウォーターズ社製）で分画した。移動相は０．１％ＴＦＡを含むＨ２Ｏと０．１％トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）を含むＣＨ３ＣＮとし、後者の割合を０－５０％（０－５０ｍｉｎ，ｌｉｎｅａｒ　ｇｒａｄｉｅｎｔ）、流速を１０ｍＬ／ｍｉｎとした。これを４つのフラクション（フラクションＡ－Ｄ）に分画した。ＡＰＰトリプシン消化物を４つのフラクションに分画したときのＨＰＬＣチャートを図３に示す。
［インスリン負荷試験（１回目）］
　続いて、各フラクションを凍結乾燥し、得られたサンプルを用いてインスリン負荷試験を行った。マウスを１８０分絶食させた後、サンプルを元の消化物相当で１００ｍｇ／ｋｇとなるように投与したこと以外は、試験１と同様の手法にて血糖値を測定した。結果を図４に示す。
　図４より、４つのフラクションの中でも、フラクションＣがインスリン感受性増強作用を持つことが確認された。
［ＡＰＰトリプシン消化物の再分画］
　インスリン負荷試験により活性の見られたフラクションＣをさらに分画した。トリプシン消化物を用いて上記と同様の条件でＨＰＬＣを行った。フラクションＣに相当する流出時間をさらに１０分割して１０個のフラクション（フラクションＣ１－Ｃ１０）に再分画した。ＡＰＰトリプシン消化物のフラクションＣをさらに１０個のフラクションに分画したときのＨＰＬＣチャートを図５に示す。
［インスリン負荷試験（２回目）］
　続いて、各フラクションを凍結乾燥し、得られたサンプルを用いてインスリン負荷試験を行った。試験は、１回目と同様の手法にて行った。結果を図６に示す。
　図６より、１０個のフラクションの中でも、フラクションＣ３がインスリン感受性増強作用を持つことが確認された。また、フラクションＣ８がインスリン感受性を増強する傾向が見られた。
［ＡＰＰトリプシン消化物の再々分画］
　インスリン負荷試験により活性の見られたフラクションＣ３及びＣ８について、ピークを１本ずつ分取し、これら分取したフラクションの各々について、トリプシン消化物を用いて上記と同様の条件でＨＰＬＣを行った。図７に示すとおり、フラクションＣ３については、３個のフラクション（フラクションＣ３－１～Ｃ３－３）が得られ、フラクションＣ８については、４個のフラクション（フラクションＣ８－１～Ｃ８－４）が得られた。
［インスリン負荷試験（３回目）］
　続いて、各フラクションを凍結乾燥し、得られたサンプルを用いてインスリン負荷試験を行った。試験は、１回目と同様の手法にて行った。結果を図８に示す。
　図８より、特にフラクションＣ３－２及びＣ８－３がインスリン感受性増強作用を持つことが確認された。
＜試験３＞　フラクションＣ３－２及びＣ８－３のアミノ酸配列
　ＣＮカラムを用い、上記フラクションＣ３－２及びＣ８－３をＨＰＬＣにより分離した。カラムは５ＣＮ－Ｒ（４．６×２５０ｍｍ，ナカライテスク社製）を用い、移動相は０．１％ＴＦＡを含むＨ２Ｏおよび０．１％トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）を含むＣＨ３ＣＮを用いた。後者の割合を０－５０％（０－５０ｍｉｎ，　ｌｉｎｅａｒ　ｇｒａｄｉｅｎｔ）、流速１ｍＬ／ｍｉｎとした。吸光波長２１５ｎｍの各ピークを分取し、これらを質量分析（ＭＳ；Ｍａｒｉｎｅｒ；　Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）およびプロテインシーケンサー（Ｐｒｏｃｉｓｅ　４９２　ＨＴ，　Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）で分析した。ＭＳで得られた質量とプロテインシーケンサーで得られた配列の情報をもとに、ピークに含まれているペプチドのアミノ酸配列を決定した。フラクションＣ３－２のＨＰＬＣチャートを図９の（ａ）に示し、フラクションＣ８－３のＨＰＬＣチャートを図９の（ｂ）に示す。
　その結果、フラクションＣ３－２に関しては、ピークに含まれているペプチドのアミノ酸配列がＡＮＧＥＶＡＱＷＲ（配列番号７）からなる９残基ペプチドであり、フラクションＣ８－３に関しては、ピークに含まれているペプチドのアミノ酸配列がＩＷＨＨＴＦＹＮＥＬＲ（配列番号１３）からなる１１残基ペプチドであることが確認された。
＜試験４＞　合成ペプチドのインスリン感受性増強作用
〔試験４－１〕　９種類の合成ペプチドＡＮＧＥＶＡＱＷＲ、ＡＮＧ、ＥＶＡ、ＱＷＲ、ＷＲ、ＩＷＨＨＴＦＹＮＥＬＲ、ＩＷＨ、ＨＴＦ及びＹＮＥＬＲのインスリン感受性増強作用
［ペプチド合成］
　以下の手法にて、９種類の合成ペプチドＡＮＧＥＶＡＱＷＲ（配列番号８）、ＡＮＧ（配列番号１５）、ＥＶＡ（配列番号１６）、ＱＷＲ（配列番号６）、ＷＲ（配列番号１７）、ＩＷＨＨＴＦＹＮＥＬＲ（配列番号１４）、ＩＷＨ（配列番号１８）、ＨＴＦ（配列番号１９）及びＹＮＥＬＲ（配列番号１２）を得た。
　ペプチド合成機（ＰＳ３；　Ａｌｏｋａ，　ｐｅｔｉ　Ｓｙｚｅｒ　Ｍｏｄｅｌ　ＰＳＳ－５１０；ハイペップ研究所製）を用いて、固相合成法により合成を行った。Ｒｅｓｉｎアミノ酸にＦｍｏｃアミノ酸（渡辺化学）をＮ－ｍｅｔｈｙｌ　ｍｏｒｐｈｏｌｉｎｅ存在下で順次結合させ、ｔｒｉｆｌｕｏｒｏａｔｅｉｃ　ａｃｉｄ　（ＴＦＡ）で脱保護した。その後ｄｉｅｔｈｙｌ　ｅｔｈｅｒで沈殿させ粗ペプチドとした。これをＯＤＳカラム（２０×２５０ｍｍ）を用いてＨＰＬＣで分離し、そのメインピーク（吸光波長：２３０ｎｍ）を採取し、凍結乾燥した。なお、合成ペプチドの質量は質量分析器で確認し、アミノ酸配列はプロテインシーケンサーで確認した。
［インスリン負荷試験］
　続いて、各合成ペプチドを凍結乾燥し、得られたサンプルを用いてインスリン負荷試験を行った。合成ペプチドのマウスへの投与量は、合成ペプチドＡＮＧＥＶＡＱＷＲ、ＷＲ及びＩＷＨＨＴＦＹＮＥＬＲについては１ｍｇ／ｋｇ　Ｂ．Ｗ．，３ｍｇ／ｋｇ　Ｂ．Ｗ．及び１０ｍｇ／ｋｇ　Ｂ．Ｗ．の３種類とし、他の合成ペプチドについては１ｍｇ／ｋｇ　Ｂ．Ｗ．とした。試験は、試験例３と同様の手法にて行った。ＡＮＧＥＶＡＱＷＲについての結果を図１０の（ａ）に示し、ＡＮＧ、ＥＶＡ及びＱＷＲについての結果を図１０の（ｂ）に示し、ＷＲについての結果を図１１に示す。また、ＩＷＨ、ＨＴＦ及びＹＮＥＬＲについての結果を図１２に示す。
　図１０の（ａ）より、合成ペプチドＡＮＧＥＶＡＱＷＲはインスリン感受性増強作用を有することが確認された。中でも、ＱＷＲがインスリン感受性増強作用を示したことから（図１０の（ｂ））、ＡＮＧＥＶＡＱＷＲのＣ末端側が活性に重要であることが示唆された。一方、ＡＮＧ、ＥＶＡ、ＷＲは有意なインスリン感受性増強作用を示さなかった（図１０の（ｂ）、図１１）。これにより、インスリン感受性増強作用には、ペプチドがＱＷを含み９アミノ酸以下である必要があることが示唆された。
　図１２より、合成ペプチドＹＮＥＬＲはインスリン感受性増強作用を有することが確認された。一方、ＩＷＨＨＴＦＹＮＥＬＲ（data not shown）、ＩＷＨ及びＨＴＦは有意なインスリン感受性増強作用を示さなかった（図１２）。
〔試験４－２〕　３種類の合成ペプチドＹＮＥＬＲ、ＹＮＥ、ＥＬＲのインスリン感受性増強作用
［ペプチド合成］
　試験４－１と同様の手法にて、３種類の合成ペプチドＹＮＥＬＲ（配列番号１２）、ＹＮＥ（配列番号２０）、ＥＬＲ（配列番号４）を得た。
［インスリン負荷試験］
　続いて、合成ペプチドを凍結乾燥し、得られたサンプルを用いてインスリン負荷試験を行った。合成ペプチドのマウスへの投与量は、それぞれ１ｍｇ／ｋｇ　Ｂ．Ｗ．とした。試験は、試験例３と同様の手法にて行った。結果を図１３に示す。
　図１３より、合成ペプチドＹＮＥＬＲ及びＥＬＲはインスリン感受性増強作用を有することが確認された。中でも、ＥＬＲがインスリン感受性増強作用を示したことから、ＹＮＥＬＲのＣ末端側が活性に重要であることが示唆された。一方、ＹＮＥは有意なインスリン感受性増強作用を示さなかった（図１３）。これにより、インスリン感受性増強作用には、ＥＬＲの構造が重要であることが分かる。
〔試験４－３〕　合成ペプチドＡＮＳＥＶＡＱＷＲのインスリン感受性増強作用
［ペプチド合成］
　試験４－１と同様の手法にて、合成ペプチドＡＮＳＥＶＡＱＷＲ（配列番号１０）を得た。
［インスリン負荷試験］
　続いて、合成ペプチドを凍結乾燥し、得られたサンプルを用いてインスリン負荷試験を行った。合成ペプチドのマウスへの投与量は、１ｍｇ／ｋｇ　Ｂ．Ｗ．，３ｍｇ／ｋｇ　Ｂ．Ｗ．及び１０ｍｇ／ｋｇ　Ｂ．Ｗ．の３種類とした。試験は、試験例３と同様の手法にて行った。結果を図１４に示す。
　図１４より、合成ペプチドＡＮＳＥＶＡＱＷＲはインスリン感受性増強作用を有することが確認された。その際、投与量との相関性は見られなかった。
＜試験５＞　細胞内糖取込み活性測定
［合成ペプチド］
　試験例４－１で合成した９種類の合成ペプチドＡＮＧＥＶＡＱＷＲ、ＡＮＧ、ＥＶＡ、ＱＷＲ、ＷＲ、ＩＷＨＨＴＦＹＮＥＬＲ、ＩＷＨ、ＨＴＦ及びＹＮＥＬＲを用いた。
［細胞内糖取込み活性測定］
　実験にはマウス由来骨格筋細胞Ｃ２Ｃ１２を使用した。１０％ウシ胎児血清（Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ）、１％ペニシリン－ストレプトマイシン（Ｇｉｂｃｏ）を含んだＤＭＥＭ＋ＧｌｕｔａＭＡＸ（Ｇｉｂｃｏ社製）で構成される増殖培地で培養した（３７℃、５％ＣＯ２）。Ｃ２Ｃ１２を１２穴プレートに播種し、１００％コンフルエンスになるまでインキュベートした。培地を２％ウマ血清（Ｇｉｂｃｏ社製）、１％ペニシリン－ストレプトマイシンを含んだＤＭＥＭ＋ＧｌｕｔａＭＡＸで構成される分化培地に交換し、５日間インキュベートし、筋管細胞へ分化させた。分化後、培地を無血清培地に交換し、６時間インキュベートした。培地を２％ウシ血清アルブミン（Ｓｉｇｍａ社製）を含んだＫｒｅｂｓ－Ｒｉｎｇｅｒ－Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ－ＨＥＰＥＳ緩衝液に交換し、各種の合成ペプチドまたはインスリンを添加した。その２０分後に１ｍＭの２－Ｄｅｏｘｙｇｌｕｃｏｓｅ（２－ＤＧ，Ｓｉｇｍａ）を添加した。さらに２０分後に糖取り込み阻害剤であるＰｈｌｏｒｅｔｉｎ（Ｓｉｇｍａ）を含んだＰＢＳで洗浄し、反応を停止させた。細胞を回収し、得られた抽出液中の２－ＤＧ量を２－ＤＧ代謝速度測定キット（コスモバイオ社製）を用いて定量した。結果を図１５及び図１６に示す。
　Ｉｎ　ｖｉｖｏでインスリン感受性増強作用を示したＡＮＧＥＶＡＱＷＲ、ＱＷＲ、ＹＮＥＬＲは、骨格筋細胞において糖取り込み促進作用を示した。このことは、ＡＮＧＥＶＡＱＷＲ、ＱＷＲ、ＹＮＥＬＲを用いると、インスリンの併用の有無にかかわらず血糖値が下がることを示唆している。一方、インスリン増強作用を示さなかったペプチドは、骨格筋細胞への糖取り込み能に有意な変化が見られなかった。従って、糖尿病予防、糖尿病治療、糖代謝改善のためにも、ペプチドが、ＱＷを含み９アミノ酸以下であること、又はＥＬＲを含み１０アミノ酸以下であることが必要であると示唆された。
＜試験６＞　病態モデルマウスでの検討
　試験１～試験５は、いずれも、正常モデルマウスを用いたときの結果を示す。試験６では、病態モデルマウスを用いたときの結果を示す。病態モデルマウスを用いたときであっても、正常モデルマウスを用いたときと同様の効果を奏する。
［合成ペプチド］
　試験例４－１で合成した９種類の合成ペプチドのうち、ＱＷＲを用いた。
［グルコース負荷試験］
　５週齢の雄性ＮＳＹマウス（株式会社星野試験動物飼育所）を２３±１℃、明暗サイクル１２時間（明期７：００－１９：００）の動物飼育室で７日間予備飼育した。予備飼育期間中、マウスには固形飼料ＭＦ（日本エスエルシー社製）と水とを自由に摂取させた。
　そして、マウスを１８時間絶食させた後、グルコースを２ｇ／ｋｇ　Ｂ．Ｗとなるように経口投与を行った。合成ペプチドＱＷＲのマウスへの投与量は、１ｍｇ／ｋｇ　Ｂ．Ｗとした。そして、さらに１８０分絶食させた後、インスリンを０．７５Ｕ／ｋｇＢ．Ｗ．となるように腹腔内投与した。投与直前と投与後１５分、３０分、６０分、１２０分後に尾静脈より採血し、ニプロフリースタイルキッセイメーター（ニプロ社製）を用いて血糖値を測定した。結果を図１７に示す。
　図１７から、病態モデルマウスに対してグルコースを経口投与した場合であっても、血糖値の減少が見られることが確認された。
［インスリン負荷試験］　合成ペプチドＱＷＲの腹腔内投与
　５週齢の雄性ＮＳＹマウス（株式会社星野試験動物飼育所）を２３±１℃、明暗サイクル１２時間（明期７：００－１９：００）の動物飼育室で７日間予備飼育した。予備飼育期間中、マウスには固形飼料ＭＦ（日本エスエルシー社製）と水とを自由に摂取させた。
　その後、マウスを１８０分絶食させた後、合成ペプチドＱＷＲを１ｍｇ／ｋｇ　Ｂ．Ｗだけ摂取させた。そして、さらに１８０分絶食させた後、インスリンを０．７５Ｕ／ｋｇＢ．Ｗ．となるように腹腔内投与した。投与直前と投与後１５分、３０分、６０分後に尾静脈より採血し、ニプロフリースタイルキッセイメーター（ニプロ社製）を用いて血糖値を測定した。結果を図１８に示す。
　図１８から、病態モデルマウスに対して合成ペプチドＱＷＲを腹腔内投与した場合であっても、血糖値の減少が見られることが確認された。
＜試験７＞　経口投与での検討
［インスリン負荷試験］　合成ペプチドＱＷＲの経口投与
　５週齢の雄性ｄｄＹマウス（株式会社星野試験動物飼育所）を２２±１℃、明暗サイクル１２時間（明期７：００－１９：００）の動物飼育室で７日間予備飼育した。予備飼育期間中、マウスには固形飼料ＭＦ（日本エスエルシー社製）と水とを自由に摂取させた。
　そして、マウスを１８０分絶食させた後、ＱＷＲの強制経口投与を行った。ＱＷＲのマウスへの投与量は、１０ｍｇ／ｋｇ　Ｂ．Ｗ．，３０ｍｇ／ｋｇ　Ｂ．Ｗ．及び１００ｍｇ／ｋｇ　Ｂ．Ｗ．の３種類とした。そして、さらに１８０分絶食させた後、インスリンを０．５Ｕ／ｋｇＢ．Ｗ．となるように腹腔内投与した。投与直前と投与後１５分、３０分、６０分後に尾静脈より採血し、ニプロフリースタイルキッセイメーター（ニプロ社製）を用いて血糖値を測定した。結果を図１９に示す。
　図１９から、正常モデルマウスに対して合成ペプチドＱＷＲを経口投与した場合であっても、血糖値の減少が見られることが確認された。

Claims (11)

  1. 　ＱＷ（配列番号１，２）を含む９アミノ酸以下のペプチド、又はＥＬＲ（配列番号３，４）を含む１０アミノ酸以下のペプチドからなる、単離されたペプチド又はその酸付加塩。
  2. 　前記ＱＷを含む９アミノ酸以下のペプチドがＱＷＲ（配列番号５，６）を含む９アミノ酸以下のペプチドである、請求項１に記載の単離されたペプチド又はその酸付加塩。
  3. 　前記ＱＷＲは、前記ＱＷを含む９アミノ酸以下のペプチドのＣ末端に存在するものである、請求項２に記載の単離されたペプチド又はその酸付加塩。
  4. 　前記ＱＷを含む９アミノ酸以下のペプチドがＡＮＧＥＶＡＱＷＲ（配列番号７，８）、ＡＮＳＥＶＡＱＷＲ（配列番号９，１０）又はＱＷＲ（配列番号５，６）のいずれかである、請求項１から３のいずれかに記載の単離されたペプチド又はその酸付加塩。
  5. 　前記ＥＬＲは、前記ＥＬＲを含む１０アミノ酸以下のペプチドのＣ末端に存在するものである、請求項１から４のいずれかに記載の単離されたペプチド又はその酸付加塩。
  6. 　前記ＥＬＲを含む１０アミノ酸以下のペプチドがＥＬＲ（配列番号３，４）である、請求項１から５のいずれかに記載の単離されたペプチド又はその酸付加塩。
  7. 　前記ＥＬＲを含む１０アミノ酸以下のペプチドがＹＮＥＬＲ（配列番号１１，１２）である、請求項１から６のいずれかに記載の単離されたペプチド又はその酸付加塩。
  8. 　請求項１から７のいずれかに記載の単離されたペプチド又はその酸付加塩を添加した飲食品。
  9. 　請求項１から７のいずれかに記載の単離されたペプチド又はその酸付加塩を有効成分とする糖尿病予防又は糖尿病治療に用いられる組成物。
  10. 　請求項１から７のいずれかに記載の単離されたペプチド又はその酸付加塩を有効成分とするインスリン感受性増強又は糖代謝改善に用いられる組成物。
  11. 　ＡＮＧＥＶＡＱＷＲ（配列番号７）、ＡＮＳＥＶＡＱＷＲ（配列番号９）又はＩＷＨＨＴＦＹＮＥＬＲ（配列番号１３）の配列を有するペプチドを含む動物性タンパク質をトリプシンにより分解し、さらに分解物中の前記ペプチドを２倍以上に濃縮する、糖尿病予防又は糖尿病治療に用いられる組成物の製造方法。
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