KR20070019992A - 티올 항상성을 개선시키기 위한 시스테인 리치 펩티드 - Google Patents

Abstract

티올 항상성 복원용 의약, 보조제, 음료 또는 식품의 제조를 위한 적어도 6.5% wt 시스테인을 함유하는 펩티드의 혼합물의 용도에 관한 것이다. 게다가 그것이 필요한 주체에 있어서 티올 항상성을 복원시키기 위한 방법에 관한 것으로서, 상기 방법은 적어도 6.5% wt 시스테인을 함유하는 펩티드의 혼합물의 효과적인 양을 상기 주체에 투여하는 것을 포함하는 것인 방법이다.

티올 항상성, 복원, 시스테인, 펩티드의 혼합물

Description

티올 항상성을 개선시키기 위한 시스테인 리치 펩티드{CYSTEINE RICH PEPTIDES FOR IMPROVING THIOL HOMEOSTASIS}

본 발명은 티올 항상성 복원용 의약, 보조제, 음료 또는 식품의 제조를 위한 펩티드 혼합물의 용도에 관한 것으로서, 그 펩티드는 적어도 6.5% wt 시스테인을 함유하고 있다.

효소를 포함한 많은 필수 단백질들의 생리적 활성은 레독스-센스티브 티올그룹들의 레독스-상태(redox-state), 즉 이들 티올 그룹들이 환원된(-SH) 또는 산화된(-S-S-) 상태로 존재하는지 여부에 의존한다. 그 단백질들은 그들 환경의 레독스 전위에서 매우 작은 변화에도 반응한다. 비-단백질 바이오티올 항산화제, 항산화 비타민 및 항산화효소의 전체 네트워크는 단백질의 구조를 유지거나 각각 표적에 레독스 신호의 수송을 확립하는데 중요하다.

소위 신체의 티올 버퍼로 불리는 것은 단백질에서 실질적으로 모든 레독스-센스티브 티올 그룹들뿐만 아니라 GSH, GSH 전구체 및 시스테인을 포함한다. 수많은 항산화 효소와 함께 이들 티올들은 효소와 같은 단백질의 구조 및 기능을 책임지는 산화 및 환원 반응의 복잡한 평형을 관리하고 있다. 레독스 연쇄는 NF-kB/p50 시스템, 수용체 기능, 단백질 키나아제 및 포스파타아제, 혈청 알부민의 수송 기능 (지방산을 위한 것 같은), 티올에 결합함으로써 NO의 수명 및 세포자살 기작을 조절하는 몇몇 단백질들과 같은 신호 수송 사슬에 영향을 미친다.

현대 생활에서, 거의 모두는 일상적인 부분에서 외부 화학 물질에 노출되어 있다. 대기 오염, 자동차 배기 가스에 노출, 흡연, 마약 남용, 음주 및 커피 및/또는 의약의 섭취는 모두 그 신체에 외부의 화학 물질의 수준을 높이도록 할 수 있다. 세포내의 티올들은 분자적으로, 레독스 상태를 경유하여 외부 화학 물질의 그런 더 높은 수준을 초래하는 신체적으로 부정적인 효과의 효율적인 제거를 위해 가장 중요하다.

티올 매개 레독스 상태 및 평형에 관련된 상기 메카니즘들은 "티올 항상성" 용어에 통합된다. 상기 용어는 본 기술분야에 잘 알려져 있다 (참고, D. M. Townsend, K. D. Tew and H. Tapiero, Biomed. Pharmacother. 2004, vol 58(1) : 47-55).

펩티드 생산물의 단백질의 부분에서 계산된, 적어도 6.5% wt 시스테인을 함유하는 펩타이들의 혼합물은 하나 또는 그 이상의 병을 앓고 있는 상태 또는 표면적으로는 양호한 건강 상태이건, 어느 주체에서나 티올 항상성을 복원시키는데 매우 효과적이라는 것을 지금 놀랍게도 발견하였다. 여기에서 사용된 것처럼, 그 % wt는 펩티드 혼합물내에서 총 펩티드의 무게에서 시스테인의 무게에 관한 것이다. 후자는 본 기술분야에서 일반적으로 사용되고 알려진 방법에 의해, 즉, 펩티드 혼합물에서 질소의 총 무게 비율을 인자 6.38을 곱함으로써 편리하게 계산된다.

그러므로, 본 발명은 티올 항상성 복원용 의약, 보조제, 음료 또는 식품의 제조를 위한 펩티드 혼합물의 용도에 관한 것으로, 그 펩티드는 적어도 6.5% wt 시스테인을 함유하는 것이다.

주체들, 특히 50세 이상의 주체들에서, 상기 펩티드 혼합물에 의해 부여된 그러한 복원된 티올 항상성은 개선된 에너지 및 생명력, 피로 및 스트레스의 경감, 개선된 수면의 질 및 증가된 정신적인 경계에 의해 그 자체로 명백해 짐을 발견하였다.

여기에서 사용한 것처럼, 펩티드들은 하나 또는 그 이상의 단백질로부터 유래된 아미노산 사슬들로 정의된다; 그 펩타이들의 분자량은 바람직하게 200 Da과 11,000 Da 사이이고, 더욱 바람직하게 300 Da과 6,000 Da 사이, 더더욱 바람직하게 400 Da과 5,000 Da 사이이다.

상기 펩티드들의 혼합물에 있어서 펩티드들은 적어도 6.5% wt, 더욱 바람직하게는 적어도 6.7% wt, 더더욱 바람직하게는 적어도 6.9% wt, 가장 바람직하게는 적어도 7% wt 시스테인을 포함한다. 실험실 규모에서, 펩티드들의 시스테인 성분은 20% wt만큼 높을 수 있다; 그러나 현재 기술을 사용하는 대규모 제조에서 펩티드 혼합물들은 6.5-7.5% wt, 즉, 일반적으로 바람직한 범위의 시스테인 성분을 가지는 것이 수득된다는 것을 발견하였다. 그러나 펩티드들의 시스테인 성분이 적용 및 투여에서 좀더 유연성을 제공하는 것이 가능할 정도로 높은 것이 바람직하다.

의약 또는 보조제로서의 용도를 위하여, 상기 제조는 원하는 투여 형태의 의약을 수득하기 위하여 다른 적절한 담체, 희석제, 어쥬번트, 부형제 등과 조합될 수 있다. 편리하게, 상기 의약 또는 보조제는 경구로 투여된다. "보조제" 용어는 건강 드링크와 같은 건강 식품뿐만 아니라 식품 보조제를 포함하는 의미이다.

의도된 용도를 위해, 적어도 6.5% wt 시스테인을 포함하는 펩티드들의 상기 혼합물은 단독으로 또는 약학적으로 허용되는 담체와 혼합되어 투여될 수 있다.

잘 알려진 방법들 및 부형제들을 사용하여 제조될 수 있는, "레밍턴의 약학 과학 핸드북 (Remington's Pharmaceutical Sciences Handbook, Mack Pub. Co. , N. Y. U. S. A.)"에 기재된 것들과 같은 상기 제형들의 예들은 정제들, 캡슐들, 시럽들, 및 경구 투여를 위한 유사한 것이고, 반면에 비경구적 투여를 위한 적절한 형태들은 허용되는 액체, 임플란트 등에서의 무균 용액들 또는 현탁액이다.

음료 또는 식품에서 사용하기 위하여, 적어도 6.5% wt 시스테인을 함유하는 펩티드들의 상기 혼합물은 어떤 일반적인 식품 성분들과 혼합될 수 있다. "음료"란 용어는 물 또는 인스턴트 드링크의 제조를 위해 다른 음료에서 용해되는 건조 분말의 제형뿐만 아니라 코디얼주(cordials) 및 시럽을 포함하는 의미이다.

바람직한 구체예에서, 적어도 6.5% wt 시스테인을 포함하는 펩티드들의 상기 혼합물은 보조제, 음료 또는 식품의 제조를 위해 사용된다. 보조제, 음료 또는 식품은 시스테인의 1회 양이 10-1000mg, 바람직하게 50-600mg, 좀더 바람직하게 80-300mg, 가장 바람직하게는 100-200mg의 양으로 매일 투여되는 것이 바람직하다. 비록 상기 펩티드들의 혼합물을 투여하더라도, 겉으로는 건강한 상태 또는 특정 건강 조건을 갖고 있는 상기 주체들은 정력적이고 전반적으로 나아진 모습으로 느끼는 것을 발견하였다.

바람직한 구체예에서, 펩티드의 적어도 70%, 바람직하게 적어도 80%는 적어도 말단 시스테인(a terminal cysteine)을 포함하고, 인간 또는 동물에 쉽게 이용될 수 있고, 그러므로 티올 항상성의 복원을 위해 이용될 수 있다. 펩티드들의 적어도 70%, 바람직하게 적어도 80%는 하나 또는 두 개의 말단 시스테인을 가지는 것을 의미한다. 말단 시스테인의 성분은 당업계에서 알려진 N-말단 아미노산 시퀀싱에 의해 결정될 수 있다.

유리하게, 적어도 6.5% wt 시스테인을 포함하는 펩티드들의 상기 혼합물은 시스테인 형태로 존재하는 시스테인을 적어도 60%, 바람직하게 적어도 70%, 좀더 바람직하게 적어도 80% 포함한다. 여기에서 사용된 "시스테인"은 산화된 형태에서의 시스테인, 즉, 설퍼 브릿지(sulphur bridge)에 의해 다른 시스테인 잔기에 연결된 시스테인 잔기를 의미한다. 본 명세서를 통해, "시스테인" 용어는 환원된 형태 (SH-기를 갖는) 및 산화된 (시스테인) 형태 모두를 지시한다. 시스테인과 같은 유리 티올들은 자유 라디컬(free radical)의 생성을 이끄는 인체에서 쉽게 산화된다. 그러므로, 유리 티올의 많은 일회량이 혈류에 들어갔을 때 프로-산화제(pro-oxidants)로서 작용할 수 있다. 그러므로 상기 혼합물에서 존재하는 시스테인 잔기들은 대부분 산화된 형태로 존재하는데, 이 형태는 화학적으로 덜 반응적이기 때문이며, 주체에 투여되었을 때, 유리 시스테인과 비교해서 더 안정적이다 (참고: Biothiols in Health and Disease,L. Packer and E. Cadenas(eds.), Marcel Dekker Inc. , New York, Basel, Hongkongm, 1995).

다른 구체예에서 적어도 6.5% wt 시스테인을 함유하는 펩티드들의 상기 혼합물들은 알콜 섭취 효과를 예방 및/또는 감소시키기 위해 사용된다. 알콜의 전환 경로에 있어서 중요한 매개체는 아세틸알데히드, 단백질에 대해 높은 화학적 반응성을 갖는 강독성 화합물, 신체를 구성하는 생체내(in vivo)의 DNA 및 지질이다. 아세틸알데히드의 형성은 인체에 장기 및 단기적으로 부정적인 효과를 갖는다. 티올 그룹들은 아세틸알데히드와 직접적으로 그리고 비-효소적으로 반응할 수 있어, 상기 독성 화합물을 수거하여, 그것에 의한 심각한 결말을 신체를 위해 감소시킨다. 시스테인 리치 펩티드들의 혼합물의 투여는 레독스 및 티올 항상성을 복원시켜 티올 그룹들이 좀더 쉽게 독성 아세트알데히드를 수거하는데 이용될 수 있도록 하는 것으로 믿어진다. 이는 숙취 및 안면 홍조와 같은 알콜 섭취의 단기적인 효과들을 예방 또는 감소시킬 뿐만 아니라, 간 기능 장애와 같은 장기적인 효과도 예방 및 감소시킨다.

그러므로, 다른 구체예에서, 적어도 6.5% wt 시스테인을 포함하는 펩티드들의 상기 혼합물은 숙취 예방 및/또는 감소를 위해 사용된다. 티올 그룹들의 반응은 복원된 티올 항상성으로 인해 나타나고, 아세트알데히드와 함께 본 발명에 따른 시스테인 리치 펩티드의 혼합물의 섭취의 결과는 아세트알데히드를 효과적으로 제거하여 신체에서의 그것의 결말, 특히 숙취가 감소된다.

또 다른 구체예에서, 적어도 6.5% wt 시스테인을 포함하는 펩티드들의 상기 혼합물은 안면 홍조를 예방 및/또는 감소시키는데 사용된다. 많은 사람들, 특히 아시아계 사람들은 아세트알데히드 디하이드로게나아제 효소(ALDH)의 활성에 대해 유전적인 특성을 소유하고, 이것이 아세트알데히드의 산화, 알콜의 독성 대사 산물을 초래한다. 이처럼, 그들은 ALDH이 결핍되어, 신체에서 안면 홍조 및 다른 심장 혈관 징후들을 유발시키는 아세트알데히드의 증강을 야기시킨다(H. M. Chao, Alcohol Clin. Exp. Res. 1995, vol. 19(1) : 104-109). 적은 양의 알콜을 섭취한 후 안면 홍조를 경험한 주체들은 이에 당황해 할 것이다. 상기 펩티드들의 혼합물의 주입이 안면 홍조의 발생 및 ALDH 결핍에 의해 야기된 다른 효과들을 예방 및/또는 감소시키는 것을 발견하였다. 그 예로 주체들이 공개적인 환경에서 좀더 자신감을 느끼거나 덜 당황해하는 것이다.

다른 구체예에서, 적어도 6.5% wt 시스테인을 함유한 펩티드의 상기 혼합물은 활기를 증가시키기 위한 의약, 보조제, 음료 또는 식품의 제조에 이용된다. 놀랍게도 주체들, 어느 건강 조건으로 진단받지 않은 주체들조차 상기 펩티드들의 혼합물의 주입 후에 활기가 재생됨을 느끼는 것을 발견하였다. 상기 주체들은 일반적으로 더 많은 활력을 느꼈으며, 일반적으로 삶이 좀더 활기참을 느꼈다. 이 증가된 활기 및 증가된 에너지는 함유된 티올 및 레독스 항상성을 중화시키기 때문인 것으로 믿어진다.

또 다른 구체예에서, 적어도 6.5% wt 시스테인을 포함하는 펩티드의 상기 혼합물은 피로 예방 및/또는 감소용 의약, 보조제, 음료 또는 식품의 제조에 사용된다. 상기에서 논의한 것처럼, 일반적으로 주체들은 좀더 많은 활력을, 덜 피곤함을 느꼈다. 흥미로운 구체예에서, 본 발명에 따른 펩티드들의 혼합물은 또한 만성 피로 징후를 감소시킨다.

또 다른 구체예에서, 적어도 6.5% wt 시스테인을 포함하는 펩티드들의 상기 혼합물은 수면을 개선시키기 위한 의약, 보조제, 음료 또는 식품의 제조에 이용된다. 상기 펩티드들의 혼합물을 섭취한 주체들은 마치 복원된 티올 항상성으로 인한 불균형을 이루는 화학 물질이 효과적으로 제거된 것처럼 숙면을 경험하였다.

다른 구체예에서, 적어도 6.5% wt 시스테인을 포함하는 펩티드들의 상기 혼합물은 대사증후군(Metabolic Syndrome), 특히 비-인슐린 의존성 당뇨병(NIDDM) 징후의 발전을 예방하기 위한 의약, 보조제, 음료 또는 식품의 제조에 이용된다. 대사증후군은 유전적 기질 및 생활 습관, 예로 다이어트 및 신체 활동 수준의 조합에 의해 야기되는 것으로 믿어진다. 보통, 의학적 문제와 연관된 징후들은 시간이 흐르면서 발전한다. 주체들은 그들이 지나치게 살이 쪘거나 고혈압을 가지고 있을 때 항상 대사증후군 발전으로의 위험을 안고 있다. 인슐린이 신체 세포들이 혈액으로부터 글루코오스를 흡수하도록 하게 하는 활성을 상실하였을때, 즉 글루코오스 레벨이 변함없이 높게 존재할 때 대사증후군이 시작된다. 변함없이 높은 혈액 글루코스 수준으로 인하여, 주체들은 결국 비-인슐린 의존 당뇨병의 위험에 처하게 된다. NIDDM의 다른 단계들, 즉 인슐린 저항성, 고인슐린혈증(hyperinsulinemia), 손상된 글루코오스 관용성, 손상된 단식 글루코스(impared fasting glucose) 및 β-세포 손실은 여러가지 독성에 의해 동반된다. 본 발명에 따른 펩티드들의 혼합물의 섭취가 티올 항상성을 복원하여 대사 증후군에서의 인슐린 저항성의 독성, 특히 단백질 크로스-링킹 또는 DNA 변형이 매개된 티올로 인한 독성을 예방 및/또는 감소시키는 것으로 믿어진다(M. R. Hayden and S. C. Tyagi, J. of Pancreas 2002, vol. 3 (4): 86-108).

다른 구체예에서, 본 발명에 따른 펩티드들의 혼합물은 심장혈관병(cardiovascular diseases), 특히 대사증후군에서 증가된 아테롬성동맥경화증(atherosclerosis)이 발전된 상태 및 명백한 NIDDM의 중간 매개 상태인 아테로스클레로패시(atheroscleropathy)의 발전을 예방 및/또는 감소시키는데 이용된다. 그것은 상기에서 논의한데로 NIDDM의 다양한 독성에 의해 야기된다(M. R. Hayden and S. C. Tyagi, Atheroscleropathy Cardiovasc. Diabetol. 2002, vol. 1(1) : 3).

또 다른 구체예에서, 본 발명에 따른 펩티드들의 복합체는 혈압을 낮추는데 이용된다. ACE는 안지오텐신 I를 안지오텐신 II로 전환시킨다. 후자는 중요한 혈관수축신경제(vasoconstrictor)로서, 이는 조절장애가 있을 경우 혈압 증가를 야기시킨다. 티올 항상성의 복원으로 인하여 ACE 활성이 억제되고, 그리하여 적은 안지오텐신 II가 형성되어 혈압을 낮추거나 혈압의 증가를 예방하게 되는 것으로 믿어진다. 그처럼, 본 발명에 따른 펩티드들의 혼합물의 이용은 또한 대사 증후군의 발전을 예방하는데 기여한다(R. Bataller, R. F. Schwabe, Y. H. Choi, L. Yang, Y. H. Paik, J.Lindquist, T. Qian, R. Schoonhoven, C. H. Hagedorn, J. J. Lemasters, and D. A. Brenner. J. Clin. Invest. 2003, vol. 112 (9): 1383-1394).

다른 구체예에서, 적어도 6.5% wt 시스테인을 함유하는 펩티드들의 상기 혼합물은 약물에 의한 독성(drug-induced toxicity)을 예방 및/또는 치료하기 위한 의약, 보조제, 음료 또는 식품의 제조에 이용된다. 티올 및 레독스 항상성의 복원에 의한 올바른 레독스 상태에서의 효소 및 저-분자량 바이오티올을 유지하는 것은 약물에 영향을 미치는 간의 좀더 빠른 제거가 가능하도록 하여 약물에 의한 독성의 발생이 회피 및/또는 치료되는 것으로 믿어진다.

적어도 6.5% wt 시스테인을 함유하는 펩티드들의 상기 혼합물은 또한 피부를 환하게 하기 위한 의약, 보조제, 음료 또는 식품을 제조하는데 이용될 수 있다. 피부 색상을 결정하는 주요 인자는 멜라닌의 농도 및 주체의 멜라노사이트에 있어서 멜라닌 종류, 즉, 유멜라닌(검정색/갈색 색소들) 및 페오멜라닌(황색/붉은색 색소들)의 혼합이다.

상기 펩티드들의 혼합물이 멜라닌의 경로에 있어서 초기 효소들 중의 하나인 티로시나아제의 활성을 조절하여 멜라닌을 적게 형성하도록 하여 피부를 환하게 하도록 하는 것으로 현재 믿어지고 있다. 게다가, 세포내의 티올 그룹들은 좀더 밝은 색소를 유도하는 페오멜라닌을 선호하면서 유멜라닌 및 페오멜라닌의 균형을 조절할 수 있는 것으로 믿어진다. 상기 펩티드들의 혼합물이 또한 세포 내에서 티올의 농도를 증기시키기 때문에 더 밝은 색소인 페오멜라닌이 되도록 멜라닌의 합성을 변형시킨다.

양 색소들 사이에 약 1:1 비율을 갖는 피부 타입에서 특히 시각적인 효과가 기대된다. 본 발명에 따른 펩티드들의 혼합물은 또한 여드름(acne)과 같은 염증 상태 이후의 어두워진 피부 타입에서 흉터가 형성되는 동안 발생하는 국부적인 피부 변색의 경구적 치료를 위해 사용된다(R. M. Halder,H.L. Brooks, and V. D. Callender, Dermatol. Clin. 2003, vol. 21 (4): 609-615).

또 다른 구체예에서, 적어도 6.5% wt 시스테인을 함유하는 펩티드들의 상기 혼합물은 염증 감소에 이용된다. 염증 과정 그 자체는 급성 상 단백질 형성(acute phase protein synthesis) 및 면역 세포 활성의 유지를 위해, 염증으로 인한 자유 라디칼의 생성을 방해하기 위해, 그 후 손상된 조직의 복구를 위해 아미노산을 함유한 황을 더 많이 요구하게 된다. 만성 염증은 심각한 조직의 결말을 초래하는 티올 및 레독스 항상성의 지속적인 조절장애(dysregulation)를 이끈다. 본 발명에 따른 펩티드들의 혼합물은 관절염, 만성 염증성 장 증후군(chronic inflammatory bowel syndrome), 여드름 및 패혈증과 같은 염증 상태에 이로운 효과를 보여주는 것으로 믿어진다(F. Santangelo, Curr. Med. Chem. 2003, vol. 10 (23): 2599-2610).

바람직한 구체예에서, 적어도 6.5% wt 시스테인을 함유하는 펩티드들의 상기 혼합물은 다음 단계들을 함유하는 방법에 의해 수득된다:

a) 단백질 소스의 단백질들을 펩티드들로 분해;

b) 적어도 하나의 엑소펩티다아제(exopeptidase)에 의해 단계 a)에서 수득된 펩티드들의 소화로서, 그 행위는 그 펩티드에서 시스테인의 위치에서 약화되어 말단 시스테인을 갖는 소화된 펩티드들을 형성하도록 하고;

c) 그 소화된 펩티드들을 정제.

첫 번째 단계 a)에서, 단백질 소스의 단백질들은 더 작은 펩티드들로 분해된다. 이 분해는 당업계에서 잘 알려진 분해 반응에 의해 수행될 수 있다; 바람직하게, 그 분해는 엔도펩티다아제에 의해 단백질 펩티드 결합의 효소적인 가수분해에 의해 수행되어 약 소화된 길이의 펩티드가 생성되고, 엑소펩티다아제를 위한 기질의 양이 증가하게 된다. 본 목적을 위한 적절한 엔도펩티다아제의 예로 NOVO 노르디스크로부터 알칼라제(Alcalase, NOVO Nordisk)를 들 수 있다.

두 번째 단계에서, 분해 반응에 의해 수득된 펩티드들은 적어도 하나의 엑소펩티다아제에 의해 소화된다. "적어도 하나의 엑소펩티다아제"는 소화 반응이 하나 또는 그 이상의 다른 엑소펩티다아제들에 의해 수행될 수 있음을 의미한다. 엑소펩티다아제는 펩티드들의 말단으로부터 단일 아미노산을 유리시킨다. 엑소펩티다아제 및 소화 반응 조건들이 선택되어 엑소펩티다아제의 활성은 펩티드에서 시스테인의 위치에서 적어도 약화된다. "적어도 약화된다"는 엑소펩티다아제는 선택된 반응 조건들에서 펩티드로부터 시스테인을 제거하지 않거나 시스테인의 분해에는 약하게 수행하거나, 게다가 펩티드로부터 다른 아미노산의 분해와 비교하여 상기 분해 반응을 매우 느리게 하게 되는 것을 의미한다. 그러한 엑소펩티다아제 및 조건들의 이용에 의해, 펩티드들은 말단 아미노산들이 상기 말단에 가장 가까운 시스테인 잔기까지 제거되어 형성된다. 당업자들은 엑소펩티다아제 활성을 갖는, 상업적으로 이용가능한 효소들의 시스테인에서의 행위를 약화시키는 조건을 찾을 수 있다. 그 펩티드들은 상기 아미노산 사슬에서 존재하는 시스테인 잔기들의 이황화 브릿지(disulfide bridges)에 의해 서로 결합된 하나 또는 그 이상의 아미노산 사슬들을 가진다.

"말단 시스테인을 갖는 소화된 펩티드"는 그러므로 그런 멀티-사슬 펩티드 말단의 적어도 하나가 말단 시스테인을 갖는다는 사실을 반영한다. 물론, 그런 펩티드들은 하나의 말단 시스테인보다 더 많이 포함한다. 바람직하게 효소 활성은 정제 단계 전에 pH 변화 또는 열 불활성화 처리에 의해 비활성화된다.

바람직하게, 엑소펩티다아제는 카르복시펩티다아제 Y(E.C. 3.4. 16.1.)를 포함하는데, 이 효소는 시스테인 잔기에서 효과적으로 약화될 수 있어 말단 시스테인 잔기를 갖는 펩티드들을 생산할 수 있는 것으로 알려졌기 때문이다.

분해 단계 a) 및 소화 단계 b)는 동일한 반응 조건에서 양 기능을 갖는 엔도펩티다아제 및 엑소펩티다아제를 이용함으로써 동시에 수행될 수 있다. 또한 효소의 준비는 엔도펩티다아제 및 엑소펩티다아제 활성을 모두 가지는 것을 이용할 수 있다.

마지막으로, 이들 소화된 펩티드들은 정제된다. 엑소펩티다아제에 의해 유리된 유리 아미노산들로부터 소화된 펩티드들을 분리하기 위한 적절한 방법들은 당업계에 알려져 있다. 분자량에 있어서의 차이점은 펩티드들을 함유하는 시스테인 및 엑소펩티다아제의 활동에 의해 유리된 유리 아미노산들 사이에서 발생되기 때문에, 시스테인 리치 펩티드들은 이런 차이점을 이용하여 정제될 수 있다.

당업계에 알려진 몇몇 기술들이 이 목적을 위해 사용될 수 있다.

바람직하게, 유리 아미노산 및 다른 저분자량 화합물들은 멤브레인 공정, 바람직하게 한외여과(ultrafiltration), 정용여과(diafiltration) 또는 나노여과(nanofiltration)를 이용하여 제거된다. 정제단계는 또한 코르니아 등(Kronina et al., Journal of Chromatography A, 852 (1999) pp 261-272)에 따른 IMAC(immobilised metal affinity chromatography step)의 이용을 포함할 수 있다. 시스테인 리치 펩티드들은 이 후에 건조될 수 있다.

특정 구체예에서, 단계 b)에서의 엑소펩티다아제 및 분해 반응은 그렇게 선택되고, 엑소펩티다아제는 펩티드에서 시스테인의 위치에서 적어도 약화된다. 이는 탁월하게 말단 시스테인을 갖는 소화된 펩티드들을 초래할 것이다.

단백질 소스는 그것이 시스테인-함유 단백질을 포함하는 것이라면 어느 소스라도 가능하다. 그 단백질 소스는 분해 단계 전 또는 그동안 두 가지 또는 그 이상의 단백질 소스에 의해 본 발명의 방법에 적용되기 전에 준비될 수 있다.

바람직하게, 단백질 소스는 식용 단백질로 구성되어, 소화된 펩티드들은 식품 첨가제로서 이용될 수 있다. 더욱 특정한 구체예에서, 단백질 소스는 분리 유청 단백질(WPI) 및/또는 농축 유청 단백질(WPC)을 포함한다. "분리 유청 단백질(whey protein isolates)" 및 "농축 유청 단백질(whey protein concentrates)" 용어는 본 분야에 알려져 있다. 분리 유청 단백질이 90w/w% 또는 그 이상의 단백질 성분을 함유함에 반하여, 농축 유청 단백질은 35-80w/w% 단백질을 갖는 유청 단백질 생산물이다. WPC 80의 예는 타투아의 알라센 132 (Alacen 132, Tatua, 뉴질랜드); WPI의 예는 데이비스코 푸드 인터내셔날의 비프로(Bipro, Davisco Foods International, USA), 또는 산 분리 유청 단백질(Acid Whey Protein Isolate, ARLA Foods, Denmark)이다. 분리 유청 단백질은 알부민, 특히 α-락타알부민 및 소혈청 알부민과 같은 매우 적절한 시스테인 리치 단백질들을 포함한다. 상기 단백질들은 본 발명에 따른 스타팅 단백질 소스로서 유리하게 이용된다.

또 다른 바람직한 구체예에서, 단백질 소스는 알부민, 특히 α-락타알부민, 소 혈청 알부민, 계란 단백질들(예. 오브알부민, 시스타틴), 소맥 글루텐(wheat gluten), 분리 옥수수 단백질(maize protein isolate), γ-콩글루틴(γ-conglutin, 루핀) 및 유채 알부민(rapeseed)으로 구성된 그룹에서 하나 또는 그 이상을 포함한다.

바람직하게, 단계 a) 및 b)는 가능한 한 많이 산화된 형태로 유지되도록 단백질 소스에서 단백질들에 존재하는 시스테인 잔기들 사이의 설퍼 브릿지(sulphur bridges)를 형성하게 하는 조건 아래에서 수행된다. 이 경우에, 시스테인 리치 펩티드 혼합물들이 수득되고, 대부분의 시스테인 잔기들은 산화되어 디설파이드 브릿지(disulphide bridges)를 통해 다른 펩티드들과 결합된다. 상기 펩티드 혼합물들의 산화된 형태는 덜 반응적이어서 적용에 있어서 더욱 안정하다. 다른 잇점은 엑소펩티다아제 활성을 갖는 많은 효소들은 비록 상대적으로 낮은 활성에도 불구하고 환원된 형태의 시스테인들이 상기 효소들에 의해 펩티드들로부터 분해되는 반면에, 산화된 시스테인들을 분해하지 못한다. 상기 펩티드 혼합물에서의 곁사슬 변형을 회피하기 위하여, 단계 a) 및 b)은 바람직하게 pH 2 내지 8 사이에서 수행된다.

산성 환경에서 가수분해 과정이 수행되는 것이 바람직하다. 산성 pH에서, 시스테인의 디설파이드 브릿지는 염기성 pH에서보다 더욱 안정하다 (Creighton, T. E. , 1993, Proteins: structures and Molecular Properties.2ndEd. ; Freeman and Company, New York).

매우 흥미로운 구체예에서, 엔도펩티다아제 기능을 갖는 효소는 또한 엑소펩티다아제 기능을 가지고, 그 엑소펩티다아제 기능은 시스테인 위치에서 약화된다. 그런 효소들은 당업계에 알려져 있고 그것들의 잇점은 단계 a) 및 b)가 동시에 수행될 수 있다는 점이다. 엔도펩티다아제 및 엑소펩티다아제 기능을 모두 가진 바람직한 효소들의 예는 플래이버자임(Flavourzyme, NOVO Nordisk), 애시드 프로티아제 A(Acid Protease A), 프로티아제 M(Protease M), 프로티아제 2A(Protease 2A) 및 프로티아제 B(Protease B, Amano Enzyme), 코롤라아제PN-L (CorolasePN-L, AB Enzymes, UK), 엔제코 애시드 진균 프로티아제(Enzeco Acid Fungal Protease, EDC, USA) 또는 이들의 두 가지 또는 그 이상의 조합이다.

바람직하게, 제조된 펩티드들의 적어도 70%, 더욱 바람직하게 적어도 80%는 말단 시스테인을 함유하고, 인간 또는 동물에게 쉽게 이용가능 하다. 이들 말단 시스테인들은 상기에서 논의한 데로 엑소펩티다아제의 이용에 의해 수득된다.

다른 측면에 있어서, 본 발명은 그것이 필요한 주체에서 티올 항상성을 복원시키는 방법에 관한 것으로서, 상기 방법은 적어도 6.5% wt 시스테인을 함유하는 펩티드들의 혼합물의 효과적인 양을 상기 주체에 투여하는 것을 포함한다. 상기 방법은 상기에서 논의된 이유로 인하여 잇점을 갖는다.

바람직한 구체예에서, 상기 방법은 그것이 필요한 주체들에 있어서 알콜 섭취의 효과를 예방 및/또는 감소시키기 위함이며, 특히 숙취의 예방 및/또는 감소 및 안면 홍조의 예방 및/또는 감소시키기 위함이다. 상기 방법은 상기에서 설명한 이유로 인하여 잇점을 갖는다.

다른 구체예에서, 상기 방법은 상기에서 약술한 이유로 활기를 증강시키기 위함이며, 특히 피로, 특히 만성피로 증후군을 예방 및/또는 감소시키기 위함이다.

상기 방법은 또한 수면을 개선시키는데 이용될 수 있다. 적어도 6.5% wt 시스테인을 함유한 펩티드의 효과적인 양을 투여한 주체들은 상기에서 논의한 바데로, 더 나은 수면을 취할 수 있음을 발견하였다.

대신에, 상기 방법은 상기에서 지시한 이유로 인하여 심장혈관병(cardiovascular diseases), 특히 아테로스클레로패시(atheroscleropathy)의 발전을 예방 및/또는 감소시키기 위한 경우일 뿐만 아니라 특히 비-인슐린 의존성 단백질(NIDDM)과 같은 대사 증후군의 징후의 발전을 예방하는데 적용될 수 있다.

또 다른 구체예에서, 상기 방법은 혈압을 낮추기 위해 사용된다. 상기 방법은 상기에서 약술한 이유로 인하여 이롭다.

상기 방법은 또한 상기에서 논의한 데로 약물에 의한 독성을 예방 및/또는 치료하는데 이용될 수 있다.

또 다른 구체예에서, 상기 방법은 상기에서 논의한 것처럼 피부 라이트닝(lightening)을 위해 이용될 수 있다.

또 다시 다른 구체예에서, 상기 방법은 여드름과 같은 염증을 감소시키는기 위해 이용된다.

상기 방법에 있어서, 적어도 6.5% wt 시스테인을 함유하는 펩티드들의 상기 혼합물은 다음 단계를 포함하는 방법에 의해 수득된다: a) 단백질 소스를 펩티드들로 분해; b) 엑소펩티아다제에 의해 단계 a)에서 수득된 펩티드들의 소화로서, 펩티드에서 시스테인의 위치에서 적어도 약화되는 행위로, 그로인해 말단 시스테인을 가지는 소화된 펩티드들의 형성한다; c) 그 소화된 펩티드들의 정제.

펩티드들의 매우 유리한 혼합물은 티올 항상성을 복원하기 위하여 생물학적으로 쉽게 이용가능한 말단 시스테인 잔기의 많은 부분이 포함된 것이 수득된다. 상기 방법은 상기 논의된 구체예들의 어느 하나를 이용하여 수행될 수 있다.

본 발명은 지금 하기 비-제한적인 실시예들을 수단으로 하여 좀더 상세하게 기술될 것이다. 그것에서 지시된 비율은 달리 지시되지 않았다면 무게 비율을 의미한다.

실시예 1. 시스테인 리치 펩티드 들의 제조를 위한 과정

분리 유청 단백질(WPI; typically Bipro, Davisco)의 5% wt 분산은 WPI를 미리 가열된 미네랄이 제거된 물(demineralised water)에 첨가한 후 과정 온도 (50℃)까지 가열함으로써 생산된다. pH는 30% 황산을 첨가함으로써 pH 3으로 조정된다. 가수분해는 엔제코 진균 산 프로티아제(ENZECO fungal acid protease, EDC, U. S. )을 첨가함으로써 개시된다. 단백질 건조 중량에 기초하여 효소/단백질 비율은 전형적으로 2% wt이다. 적절한 가수분해 기산, 전형적으로 20 시간 후에, NaOH (33%)가 pH 6.5에 도달될 때까지 첨가되고, 그 혼합물은 104℃까지 가열되고 3분 동안 그 온도를 유지시킨다.

가수분해물은 50℃에서 미네랄이 제거된 물로 정용여과 (전형적으로 300%, 임의적으로 200%)를 수행하고, 부피 감소 및 나노여과를 나디르 SS NF-PES-10 3838 B 멤브레인 모듈을 이용하여 수행하였다. 나노여과는 50℃에서 진행시켰다. 전형적으로 25%의 건조 물질이 되었을 때, 그 리텐트에이트(retentate)는 분무 건조되었 다.

실시예 2. 대표적인 분석

분석은 공인된 상업적인 실험실(CCL Nutricontrol, Veghel, The Netherlands)에 의해 수행되었다. 방법: 펩티드의 HCL 가수분해에 앞서 과폼산(performic acid)으로 샘플에서 시스테인의 산화, 유리 아미노산의 이온-교환 크로마토그래피 및 EC 가이드라인 98/64/EG (3-9-1998, Publication L257/14-23 dated 19-9- 1998)에 따른 닌하이드린으로 포스트-컬럼 유도체화(post-column derivatisation)를 수행하였다.

		대표
전체 고체들	%	95.1
단백질(N*6, 38)	%	83.4
단백질(N*6, 62)	%	86.0
시스테인	g/kg	65.50
시스테인	%/Prot	7.9%
아미노산
알라닌	g/kg	37.0
아르기닌	g/kg	18.6
아스파르트산	g/kg	146.9
글루탐산	g/kg	186.4
글라이신	g/kg	17.7
히스티딘	g/kg	19.6
이소루이신	g/kg	43.0
루이신	g/kg	59.4
라이신	g/kg	89.8
메티오닌	g/kg	12.2
페닐알라닌	g/kg	18.4
플롤린	g/kg	37.6
세린	g/kg	43.3
트레오닌	g/kg	47.3
트립토판 (효소 가수분해 후)	g/kg	11.4
티로신	g/kg	18.6
발린	g/kg	45.6
총 아미노산		915.29

펩티드에 있어서 유리 티올 그룹들은 우레아의 존재하에서 DTNB(엘만의 시약)으로, NaBH₄에 의한 환원으로 결정된다. SH/SS의 비율은 환원한 후 환원/티올의 총 농도 없이 이용가능한 티올의 농도에 의해 계산되고 이는 6.5%로 발견되었다.

실시예 3. 분자량 분포

방법:

HPLC-시스템: UV 검출기를 갖는 이소크래틱 HPLC 시스템(isocratic HPLC systems), 오토샘플러, 워터스 밀레니엄 데이터 획득 소프트웨어(waters millenium data acquisition software)

컬럼: 플겔 TSK-G2000SWXL 7.8mm × 30cm (Supelco), 가드 컬럼: 프로겔 TSK SWXL (Supelco)

용출액: 30% 아세토니트릴/H₂O/0.1% TFA

유속: 1㎖/분

관측: 214nm

보정(calibration) : HPLC 표준(Sigma): 탄산 탈수 효소(Carbonic Anhydrase), 리보뉴클레아제 A(Ribonuclease A), 아프로티닌(Aprotinin), 인슐린, 바시트리신(Bacitracin), 페닐알라닌,

분자량 분포는 다음에서 보는 바와 같이 발견되었다:

분자량 범위(D)	% 범위
> 10,000	17.5
10,000-5,000	3.7
5,000-2,000	6.6
2,000-1,000	12.1
1,000-500	20.2
<500	39.9

실시예 4. 시스테인 리치 펩티드 를 함유한 정제의 제조

1 회량: 펩티드 혼합물의 형태에서 200mg L-시스테인/1일을 수송하는 4 정제/day.

정제 무게 850mg.

	100g 당
시스테인 리치 펩티드	88.24g
미세결정성 세룰로오즈1	10.59g
실리콘 다이옥사이드2	0.47g
마그네슘 스테아르산염	0.35g
스테아르산	0.35g

¹ Avicel PH-102-FMC

² CAB-0-SIL M-5

분말은 마그네슘 스테아르산염이 혼합의 마지막 순간동안 보류되는 동안 미리 혼합된다. 그 정제들은 직접적인 압축에 의해 제조된다(압축 압력 20 kN, 경도: 160 N).

실시예 5. 시스테인 리치 펩티드 들을 함유하는 초콜렛 카라멜 바의 제조

하나의 바는 시스테인 리치 펩티드 혼합물의 형태로 200mg의 L-시스테인을 수송한다.

	100g 당	서빙 당 (40g)
시스테인 리치 펩티드	8.30 g	3.32 g
말티톨 시럽 1	66.01 g	26.41 g
칼슘 카세인염	10.65 g	4.26 g
초콜렛 리퀴르	8.52 g	3.41 g
나트륨 카세인염, 과립	4.26 g	1.70 g
코코아 버터	2.13 g	0.85 g
버터, 무염	0.11 g	0.04 g
레시틴	0.01 g	0.0043 g
바닐라향	0.01 g	0.0043 g
1 리카신 85% 용액

실시예 6. 시스테인 리치 펩티드 를 함유하는 가열-처리된 요거트 드링크의 제조

	100g 당	L-시스테인/서빙
시스테인 펩티드	0.86g	0.05g
탈지유(skimmed milk)	55g
설탕	6g
말티톨 1	3g
젖산	0.002g
펙틴 2	0.3g
향	0.055g
물	34.6g
접종원 3	0.2g

1 C*maltidex 16385 Cerestar

2 Genu Pectine YM-115-H CP Kelco

3 YC-X11 Christian Hansen

우유는 물과 혼합되었다. 시스테인 리치 펩티드, 설탕 및 말티톨이 첨가되고, 지속적인 교반으로 용해된 후 파스퇴르 살균법(저온살균법, 90℃, 5 분)을 수행하였다. 발효 온도 (42℃)까지 냉각한 후, 접종원을 첨가하였다. 발효는 pH 4.3 에 도달할 때까지 진행되었다. pH는 젖산을 이용하여 3.8에서 4.0까지 떨어졌다. 펙틴은 강한 교반아래에서 첨가되었다. 혼합물은 70℃까지 가열되었고, 120/20 bar에서 균질화되고 향이 첨가되었다. 여과한 후 제품이 저온살균되었다(80℃/3분).

실시예 7. 시스테인 리치 펩티드 를 함유한 간 정화 드링크의 제조

	100g 당	서빙당 (250㎖)	L-시스테인/서빙
시스테인 펩티드	0.43g	1.08	0.06g
덱스트로오즈	4.4g	11g
플락토오즈	3.6g	9g
사과 향	0.055g	0.14
바나나 향	0.037g	0.09
펙틴 1	0.15g	0.37
물	91.33g	228.36

¹ Genu Pectine YM-115-H CP Kelco

모든 건조 성분은 물에 용해되고, pH는 시트르산 (총 ±0,14%)으로 pH 3.8까지 처음에 조정되었고, 그 후 말산(총 ±0,66%)으로 pH 3.5까지 조정되었다. 용액은 70℃까지 미리가열되었고, 펙틴 사전 혼합물 (물에 4%)가 첨가되었다. 균질화 (150 bar)후에, 제품이 채워지고 저온살균 또는 저온살균한 후 무균으로 채워졌다.

실시예 8. 시스테인 리치 펩티드 의 투여 후 파라세티몰의 감소된 간독성

쥐들은 14일 동안 아미노산 (38 mg/kg)을 함유한 황 농도 유지를 포함한 이소칼로리 및 이소니트로제닉 식이 또는 시스테인 리치 펩티드(62 mg/kg)가 강화된 각각의 식이로 사육되었다. 14일 이후에, 각 식이 그룹의 동물들은 아세트아미노펜(acetaminophen, 경구적으로, 옥수수 기름에서 300 mg/kg 체중)으로 테스트시키 고, 식품은 그 12 시간 후 동안 섭취되지 않았다. 테스트 후 즉시, 12 및 24시간 후에, 각 그룹의 6(t=0) 및 9 마리의 쥐들(t=12 h and t=24)을 죽여 생화학적 분석 및 조직학 실험을 위해 간을 회수하였다. 혈액 샘플들은 플라스마 간 마커 효소들(plasma liver marker enzymes)의 분석을 위해 취했다. 파라세타몰(Paracetamol)은 대조군 및 시스테인 리치 펩티드들을 섭취한 그룹 모두에 있어서 간 조직 손상을 이끌고, 계속된 시스테인 리치 펩티드의 공급이 대조군 그룹과 비교하여 현저하게 그것의 구조적 보전을 복원시키기 위해 쥐 간의 능력을 개선시켰다.

간 아스파르트산 아미노기전이효소 ( ASAT )[U/L]

간 효소 아스파르트산 아미노기전이효소의 특이 활성은 간 손상에 대한 상응하는 지시제이다. 만약 효소의 활성 수준이 증가되면, 이는 간 손상을 의미한다.

테스트 후의 시간	카세인 식이	시스테인 리치 펩티드가 풍부한 식이
0	69±2	78±6
12	126±14	93±15
24	120±16	109±16

상기 표는 명백하게 파라세타몰에 의한 간 손상이 시스테인 리치 펩티드가 풍부한 식이를 섭취함으로써 실질적으로 감소되었음을 보여준다.

괴저 세포들[cells/20 fields]의 현미경 조직학 실험

테스트 후의 시간	카세인 식이			시스테인 리치 펩티드가 강화된 식이
	중간	최소	최대	중간	최소	최대
0	2.5	0	4	4	1	14
12	51	2	229	61	1	376
24	16	0	89	3	1	9

상기 표에서 보는 바와 같이, 괴저 세포들의 수가 초기 이후에 결국 대조군 (카세인) 그룹에 비교하였을 때 시스테인 리치 펩티드가 강화된 식이 그룹에 있어서 상당히 낮은 수준까지 감소되었음을 관찰할 수 있고, 이는 복원된 바이오티올 항상성의 결과로서 조직 보전의 더 빠른 복원을 의미한다.

공포가 있는 세포들 [cells/20 fields]의 현미경 조직학 실험

테스트 후의 시간	카세인 식이			시스테인 리치 펩티드가 강화된 식이
	중간	최소	최대	중간	최소	최대
0	16	1	146	4	0	13
12	80	16	824	419	10	618
24	11	2	141	7	0	32

공포가 있는 세포들은 세포 손상의 초기를 의미하고, 결국 세포 괴저를 이끈다. 세포들의 공포형성(Vacuolation)은 가역적인 과정이다. 상기 표로부터 시스테인 리치 펩티드가 강화된 식이는 정상 상태로의 더 빠른 복귀를 유도함을 결론내릴 수 있다.

실시예 9. 시스테인 리치 펩티드 의 ACE 억제활성

ACE 억제 분석은 Maguire 및 Price(Ann. Clin. Biochem. 1985, vol. 22: 204-210)에 따른 기질로서 FAPGG(furylacryloyl- phenylalanyl-glycyl-glycine)의 가수분해에 기초한 것으로, 마이크로티터(microtiter) 과정이 적용되었다. 토끼 폐(nr. A6778)로부터 ACE, FAPGG (nr F7131) 및 캡토프릴®(nr. C 8856)은 시그마(Sigma)로부터 수득하였다. 테스트 물질들(억제제)의 다양한 농도들이 기질 용액 (0.145 mmol)에 첨가되었고, 반응은 효소 (ACE, 0.145 U)를 첨가함으로써 개시되었다. 340nm 흡광에 있어서의 감소는 바이오-텍 기구로부터의 어글루언트 플레이트 리더(agluant plate reader)로 1분의 간격에서 10분 동안 측정되었다. IC₅₀은 억제 농도 대 ACE 억제(%)의 플랏으로부터 수득되었다. 분리 유청 단백질(Bipro, Davisco)은 음성 대조군으로서 사용되었다. 그 IC₅₀은 ACE의 50% 억제를 야기시키는 억제제 농도를 의미한다.

결과:

	IC50
시스테인 리치 펩티드: -가수분해물의 300% 정용여과(ex.1) -가수분해물의 200% 정용여과(ex.2)	203.23 mg/L 133.47 mg/L
	< 2 mg/L
분리 유청 단백질(Bipro, Davisco)	억제 못함
CE 90B	80 mg/L

캡토프릴®은 ACE 억제제로 잘 알려져 있다. 참고로 CE 90 B는 ACE 억제 활성을 보여주는 DMV 인터내셔날(네덜란드)로부터의 카세인 가수분해물이다.

실시예 10. 시스테인 리치 펩티드 의 효과의 인간 조사

50+ 연령을 가진 13명의 사람들에게 200 mg 시스테인/1 일에 상응하는 시스테인 리치 펩티드의 믹쳐(the micture)의 3.3g의 양으로 4주 동안 시스테인 펩티드 알약을 섭취하도록 요청하였다. 테스트 전 및 후에, 건강 관심사 및 상태를 앙케이트 및 인터뷰의 수단으로 조사하였다.

9 명의 사람들이 조사를 마쳤다. 그들 중 7명은 다음과 같은 긍정적인 효과가 관찰되었다:

- 증가된 에너지의 자연 수준

- 더 나은 수면 질 (아침에 더욱 상쾌함)

- 개선된 금속 경계, 더 나은 주의

본 조사에 있어서 세 명의 사람들은 증가되었던 혈압이 감소되었음이 보고되었고, 이는 실시예 8의 결과들과 일치된다.

증가된 에너지의 효과는 섭취 시작 후 4-5일 기록되었고, 에너지 수준은 알약 섭취를 그만둔 후에 감소되었음이 보고되었다.

다른 연령 (30-50)의 높은 스트레스 수준에 노촐된 10 명의 사람이 실험을 통하지 않고 시스테인 리치 펩타이들의 혼합물의 동일한 양을 섭취하였다. 조사 대상자들에 의해 보고된 관찰들은: 더 나은 수면 (아침에 좀더 상쾌함) 및 하루 동안 더욱 에너지가 있었다.

그들 자신을 모두 숙취에 민감하다고 묘사한, 아시아계의 5명의 성인들은 알콜 섭취 이전에 직접적으로 시스테인 리치 펩티드(6.5% wt 시스테인을 함유한)의 혼합물 0.8-1.6g을 섭취하였다. 모든 주체들이 그들이 숙취로 고생하지 않고 어떤 안면 홍조도 경헙하지 않았다고 보고하였다.

아시아계의 2 명의 성인은 적어도 4주 동안 시스테인 리치 펩티드(6.5% wt 시스테인을 함유한)의 혼합물 0.8-1.6g을 섭취하였다. 그 주체들은 그들의 피부 상태 및 피부 패턴이 개선되었다(여드름이 감소)고 보고하였다. 게다가 그들은 좀더 많은 에너지를 느꼈고, 더 잘 잘 수 있다고 보고하였다.

Claims (28)

1. 티올 항상성 복원용 의약, 보조제, 음료 또는 식품의 제조를 위한 펩티드들의 혼합물의 용도로서, 그 펩티드는 적어도 6.5% wt 시스테인을 함유하는 것인 용도.
2. 제 1항에 있어서, 알콜 섭취의 효과를 예방 및/또는 감소시키기 위한 것인 용도.
3. 제 2항에 있어서, 숙취를 예방 및/또는 감소시키기 위한 것인 용도.
4. 제 1항 또는 제2항에 있어서, 안면 홍조를 예방 및/또는 감소시키기 위한 것인 용도.
5. 제 1항에 있어서, 활기를 증강시키기 위한 것인 용도.
6. 제 6항에 있어서, 피로를 예방 및/또는 감소시키기 위한 것인 용도.
7. 제 1항에 있어서, 수면을 개선시키기 위한 것인 용도.
8. 제 1항에 있어서, 대사 증후군, 특히 비인슐린 의존성 당뇨병의 징후의 발전을 예방 및/또는 감소시키기 위한 것인 용도.
9. 제 8항에 있어서, 심장 혈관병의 발전, 특히 아테로스클레로패시(atheroscleropathy)의 예방 및/또는 감소시키기 위한 것인 용도.
10. 제 1항 또는 제8항에 있어서, 혈압을 낮추기 위한 것인 용도.
11. 제 1항에 있어서, 약물에 의한 독성을 예방 및/또는 치료하기 위한 것인 용도.
12. 제 1항에 있어서, 피부의 라이트닝(lightening)을 위한 것인 용도.
13. 제 1항에 있어서, 염증을 감소시키기 위한 것인 용도.
14. 전 항들 중 어느 한 항에 있어서, 상기 적어도 6.5% wt 시스테인을 함유하는 펩티드들의 혼합물은 다음 단계들을 포함하는 방법에 의해 수득되는 것인 용도: a) 단백질 소스의 단백질을 펩티드로 분해; b) 엑소펩티다아제에 의해 단계 a)에서 수득한 펩티드의 소화로서, 이는 펩티드에서 시스테인의 위치에서 적어도 약화되어 말단 시스테인을 가지는 소화된 펩티드를 형성; c) 그 소화된 펩티드의 정제.
15. 그것이 필요한 주체에 있어서 티올 항상성을 복원시키는 방법으로서, 상기 방법은 적어도 6.5% wt 시스테인을 함유하는 펩티드의 혼합물의 효과적인 양을 상기 주체들에게 투여하는 것을 포함하는 것인 방법.
16. 제 15항에 있어서, 그것이 필요한 주체에 있어서 알콜 섭취의 효과를 예방 및/또는 감소시키기 위한 것인 방법.
17. 제 16항에 있어서, 숙취를 예방 및/또는 감소시키기 위한 것인 방법.
18. 제 16항에 있어서, 안면 홍조를 예방 및/또는 감소시키기 위한 것인 방법.
19. 제 15항에 있어서, 활기를 증가시키기 위한 것인 방법.
20. 제 19항에 있어서, 피로를 예방 및/또는 감소시키기 위한 것인 방법.
21. 제 15항에 있어서, 수면을 개선시키기 위한 것인 방법.
22. 제 15항에 있어서, 대사 증후군, 특히 비-인슐린 의존성 당뇨병의 징후의 발전을 예방하기 위한 것인 방법.
23. 제 22항에 있어서, 심장혈관병, 특히 아테로스클레로패시(atheroscleropathy)의 발전을 예방 및/또는 감소시키기 위한 것인 방법.
24. 제 15항에 있어서, 혈압을 낮추기 위한 것이 방법.
25. 제 15항에 있어서, 약물에 의한 독성을 예방 및/또는 감소시키기 위한 것인 방법.
26. 제 15항에 있어서, 피부의 라이트닝을 위한 것인 방법.
27. 제 15항에 있어서, 염증을 감소시키기 위한 것인 방법.
28. 제 14 항 내지 제 25항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 적어도 6.5% wt 시스테인을 함유하는 펩티드의 혼하불은 다음 단계를 포함하는 방법에 의해 수득된다: a) 단백질 소스의 단백질을 펩티드로 분해; b) 엑소펩티다아제에 의해 단계 a)에서 수득한 펩티드의 소화로서, 이는 펩티드에서 시스테인의 위치에서 적어도 약화되어 말단 시스테인을 가지는 소화된 펩티드를 형성; c) 그 소화된 펩티드의 정제.