WO2014175699A1 - 벤지딘 유도체, 이의 제조방법 및 이를 함유하는 c형 간염 바이러스에 의한 간질환 치료용 약학적 조성물. - Google Patents

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장승기
김병문
배일학
최진규
금선주
이승기
김희선
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서울대학교 산학협력단
포항공과대학교 산학협력단
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Definitions

  • the present invention provides a method for preventing hepatic disease caused by a compound having antiviral activity against a virus, an optical isomer thereof, or a pharmaceutically acceptable salt thereof, a preparation method thereof, and a hepatitis C virus containing the same as an active ingredient, or It relates to a therapeutic pharmaceutical composition.
  • Hepatitis C virus is an RNA virus classified as the hepacivirus genus of the Flavivir idae and was discovered in the United States in 1989. Infection with the hepatitis C virus (HCV) is caused by transfusion and community-acquired, and about 70% has been reported by kidney dialysis. Once hepatitis C virus is infected, about 20% of people develop acute hepatitis with cirrhosis and metastasize to liver cancer within 5 years (Davis et al. New Engl. J. Med., 321). (1989) 1501 I Alter et al, Leonard et al., Current Perspective in Hepatology, (1989) p.83).
  • hepatitis C virus is a carrier of high rates of liver cancer.
  • hepatitis c virus tests have been performed on all blood, and infections caused by blood transfusions have been significantly reduced.
  • regional-specific infections are important because they are highly effective because they are not managed effectively. It is a problem.
  • hepatitis C virus unlike hepatitis B virus (HBV), is distributed evenly around the world and is reported to infect 1.5% to 2% of the world's population. Infection with hepatitis C virus is characterized by progression to chronic hepatitis, which is more likely than hepatitis B to spread to cirrhosis and liver cancer.
  • Hepatitis C virus cannot be prevented with the hepatitis B virus vaccine because it is classified taxonomically and completely different from the hepatitis B virus.
  • a combination of interferon and antiviral ribavirin is currently used as a treatment for hepatitis C virus infection (Hayashi N., et al., J. Gastroenterol., 41, (2006), 17
  • the reactions are very different depending on the genotype, the effect is extremely weak, and the side effects of the two drugs used in combination therapy are not only high but also expensive. Therefore, the new more effective hepatitis C bar
  • the development of antiviral agents is required. To date, the hepatitis C virus has been studied to overcome the above problems. Has
  • hepatitis C virus The life cycle of hepatitis C virus is as follows. HCV attached to the surface of the host cell invades the host cell by endocytosis. Subsequently, a precursor protein consisting of about 3,000 amino acid residues is produced from hepatitis C virus genomic RNA infiltrated into the host cell. Reactions with NS3 and NS4 proteases encoded as signal peptidases of the hepatitis C virus genome or host cell, capsid protein, envelope protein, NS3 and NS4 protease About 10 kinds of viral proteins such as NS 5 ⁇ RNA polymerase are produced.
  • RNA polymerase inhibitor-type RNA polymerase inhibitor-type
  • protease inhibitor-type RNA polymerase inhibitor-type
  • RNA polymerase inhibitor types such as 7009 (Merck) and R7128 (Pharmasset / Roche) are in phase 1 clinical trials, and VCH-759 (Virochem), R1626 (Roche), and Valopicitabine (Idenix) It is in phase 2 of the test.
  • IT ⁇ -19 R-7227, InterMune / Roche is in phase 1 clinical trial
  • TMC435350 Medivir / Tibotec
  • boceprevir SCH 503034
  • Schering Schering
  • Telaprevir Vertex
  • the cyclophylline inhibitor type DEBI0-025 (DEBI0) and the glucosidase I inhibitor type celgosivir (MIGEBIX) are in phase 2 clinical trials (Kronenberger B., et al., Clin Liver Dis., 12, (2008), 529).
  • hepatitis C virus since the emergence of a virus that is resistant to the hepatitis C virus in clinical trials has already been reported, hepatitis C virus. The development of hepatitis C virus is urgently needed. Accordingly, the present inventors have been studying the hepatitis C virus agent having low cytotoxicity and excellent antiviral activity against the hepatitis C virus.
  • the benzidine derivatives the antiviral activity against hepatitis C virus is excellent and it is confirmed that there is no cytotoxicity, the present invention was completed.
  • the substituted (: 6 - 10 aryl group is a straight chain or branched chain alkyl 5 of d-, one or more substituents selected from the group consisting of d- 5 , straight or branched alkoxy, and halogen may be substituted,
  • R 12 and R 13 is or straight chain or branched alkyl of Ci-5,
  • R 14 is Or straight or branched alkoxy of ds; Eu wherein R 1 and R 2 are taken together with the carbon atoms to which they are attached, N, 0, and C 5 containing one or more heteroatoms selected from the group consisting of S - to form a 10-heterocycloalkyl, and;
  • R 3 , R 4 , R 5 , R 6 , R 7 , R 8 , R 9 , and R 10 are each independently a straight or branched chain alkyl of d- 5 substituted with -H, halogen, unsubstituted or one or more halogens.
  • X is -0-, -S-, or -CH 2- ;
  • Step 1 Preparing a compound represented by Chemical Formula 4 by reacting the compound represented by Chemical Formula 2 and the compound represented by Chemical Formula 3 in an organic solvent (Step 1);
  • Step 2 Preparing a compound represented by Chemical Formula 5 by removing the protecting group of the compound represented by Chemical Formula 4 prepared in Step 1 (Step 2); And reacting the compound represented by Chemical Formula 5 and the compound represented by Chemical Formula 6 prepared in step 2 to prepare a compound represented by Chemical Formula 1 (step 3). It provides a method for preparing the compound.
  • the present invention provides a pharmaceutical water for preventing or treating liver disease caused by hepatitis C virus having the compound represented by Formula 1, an isomer thereof, or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.
  • the present invention contains a compound represented by the formula (1), an optical isomer thereof, or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient Four cores ⁇ y 6
  • Benzidine derivatives according to the invention show excellent antiviral activity, including anti-hepatitis activity against hepatitis C virus, have no specific toxicity, and show excellent pharmacological activity in vivo and no toxicity in plasma.
  • the pharmaceutical composition including the component may be usefully used as a pharmaceutical composition for preventing or treating liver diseases such as acute hepatitis C, chronic hepatitis C, cirrhosis, and hepatocellular carcinoma caused by hepatitis C virus.
  • FIG. 1 is a graph showing drug concentration in plasma according to measured drug administration time after oral administration and administration of the compound of Example 16 in Experimental Example 4.
  • FIG. 2 is a graph showing noncompar tment a 1 pharmacokinetic parameters using plasma drug concentration results according to drug administration time measured in Experimental Example 4.
  • FIG. 1 is a graph showing drug concentration in plasma according to measured drug administration time after oral administration and administration of the compound of Example 16 in Experimental Example 4.
  • FIG. 2 is a graph showing noncompar tment a 1 pharmacokinetic parameters using plasma drug concentration results according to drug administration time measured in Experimental Example 4.
  • the present invention provides a compound represented by Formula 1, an optical isomeric maxi thereof, or a pharmaceutically acceptable side thereof.
  • R 14, - 6 - alkyl, 10 straight or branched chain alkyl, unsubstituted or substituted with a (
  • R 12 and R 13 is -H, or a straight or branched chain alkyl of d- 5 ,
  • R 14 is —H or d- 5 a straight or branched alkoxy;
  • the R 1, and R 2, together with the carbon atoms to which they are attached they are, N, 0, and C 5 containing by interrogating one atom selected from the group at least consisting of S - to form a 10-heterocycloalkyl, and;
  • R 3 , R 4 , R 5 , R 6 , R 7 , R 8 , R 9 , and R 10 are each independently a straight or branched chain alkyl of d- 5 substituted with -H, halogen, unsubstituted or one or more halogens.
  • X is -0-, -s-, or -CH 2- ;
  • ⁇ is a single or double bond; a is an integer of 0-3.
  • the substituted C 6 - 8 aryl group may have one or more substituents selected from the group consisting of a ds of straight or branched alkyl, linear or branched d- 5 alkoxy, and halogen may be substituted,
  • R 12 and R 13 is -H, or a straight or branched chain alkyl of d- 3 ,
  • R 14 is —H or d-3 straight or branched alkoxy;
  • R 1 and R 2 together with the carbon atom to which they are bonded are N, 0,
  • one or more heteroatoms selected from the group consisting of s ⁇ comprising C 5 to - may form a 8 to interrogating cycloalkyl;
  • R 3 , R 4 , R 5 , R 6 , R 7 , R 8 , R 9 , and R 10 are independently d— 5 straight or branched chain alkyl of halogen, unsubstituted or substituted one or more halogen, and
  • X is -S- or -CH 2- ;
  • R 1 , and R 2 are independently methyl, isopropyl tert-butyl, phenyl, dimethyl ⁇ ] mino, diethylamino , or methoxy 7 bonyl ⁇ mino;
  • R 1 , R 2 And the carbon atom to which they are bonded Tetrahydrofuran can be formed;
  • R 3 , R 4 , R 5 , R 6 , R 7 , R 8 , R 9 , and R 10 are independently —F, —C 1 , —Br, —CF 3 , or methyl,
  • substituents selected from the group consisting of may be substituted;
  • (22) Dimethyl ((11 ⁇ , 1'10-((25,2'3) -2,2 '-(((9,9-difluoro-9H-fluorene-2,7-diyl) ) Bis (azanediyl)) bis (carbonyl)) bis (pyridin-2,1-diyl)) bis (2-oxo-1-phenylethane— 2, 1-diyl)) dicarbamate ;
  • Acid addition salts include inorganic acids such as hydrochloric acid, nitric acid, phosphoric acid, sulfuric acid, hydrobromic acid, hydroiodic acid, nitrous acid or phosphorous acid, aliphatic mono and dicarboxylates, phenyl-substituted alkanoates, hydroxy alkanoates and alkanes.
  • Non-toxic organic acids such as diates, aromatic acids, aliphatic and aromatic sulfonic acids, Acetic acid, benzoic acid, citric acid, lactic acid, maleic acid, gluconic acid, methanesulfonic acid,
  • the acid addition salt according to the present invention is produced by dissolving a compound represented by the formula (1) in an organic solvent, for example, methane, ethanol, acetone, methylene chloride, acetonitrile, and the like by adding an organic acid or an inorganic acid.
  • the precipitate may be prepared by filtration and drying, or the solvent and excess acid may be distilled under reduced pressure and dried or crystallized under an organic solvent.
  • Bases can also be used to make pharmaceutically acceptable metal salts.
  • Alkali or alkaline earth metal salts are obtained, for example, by dissolving the compound in an excess of alkali metal hydroxide or alkaline earth metal hydroxide solution, filtering the insoluble compound salt, and evaporating and drying the filtrate.
  • the metal salt it is pharmaceutically suitable to prepare sodium, potassium or calcium salt.
  • silver salts are obtained by reacting alkali or alkaline earth metal salts with a suitable silver salt (for example, silver nitrate).
  • the present invention includes not only the compound represented by Formula 1 and a pharmaceutically acceptable salt thereof, but also all possible solvates, hydrates, optical isomers, and the like, which can be prepared therefrom. Since the compound represented by Formula 1 according to the present invention has excellent antiviral activity against hepatitis C virus, the pharmaceutical composition comprising the same as an active ingredient is acute hepatitis C caused by hepatitis C virus, It can be usefully used as a pharmaceutical composition for preventing or treating liver diseases such as chronic hepatitis C, cirrhosis and hepatocellular carcinoma.
  • the present invention as shown in the following reaction formula 1, Preparing a compound represented by Chemical Formula 4 by reacting the compound represented by Chemical Formula 2 and the compound represented by Chemical Formula 3 in an organic solvent (Step 1);
  • Step 2 Preparing a compound represented by Chemical Formula 5 by removing the protecting group of the compound represented by Chemical Formula 4 prepared in Step 1 (Step 2); And preparing a compound represented by Chemical Formula 1 by reacting the compound represented by Chemical Formula 5 and the compound represented by Chemical Formula 6 prepared in Step 2 (Step 3). Provide a method.
  • R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5 , R 6 , R 7 , R 8 , R 9 , R 10 , R 11 , X, a, and: ⁇ : are the same as defined in Formula 1 above;
  • Step 1 is carried out by reacting the compound represented by Chemical Formula 2 and the compound represented by Chemical Formula 3 with an amide reagent in an organic solvent.
  • Step 1 is carried out by reacting the compound represented by Chemical Formula 2 and the compound represented by Chemical Formula 3 with an amide reagent in an organic solvent.
  • step of preparing a compound represented by 4 more specifically, in the presence of an amide agent is carried out by carrying out the amidation reaction of the amine group of the compound represented by the formula (2) and the carboxylic acid group of the compound represented by the formula (3) It is a step of preparing a compound represented by the formula (4) as a product.
  • the usable amide reagent may be used in combination with diisopropylethylamine (DIPEA), triaethylamine (TEA) or dimethylamino pyridine (DMAP) to benzotriazole— 1-yl-oxy-tris ( Dimethylamino) -phosphonium-nuclear fluorophosphate (Py-BOP), 0-benzotriazole-
  • DIPEA diisopropylethylamine
  • TEA triaethylamine
  • DMAP dimethylamino pyridine
  • HBTU ⁇ , ⁇ , ⁇ , ⁇ -tetramethyl-uronium-nucleus-fluoro-phosphate
  • HATU hydroxybenzotriazole
  • HOBt dicyclonucleosil carbodiimide
  • DCC 1-ethyl-3- (3-dimethylaminopropyl) carbodiimide
  • EDC Carbonyldiimidazole
  • CDI Carbonyldiimidazole (CDI) rounds can be used, preferably 1-ethyl-3- (3-dimethylaminopropyl) carbodiimide (EDC).
  • organic solvent may be used alone or in combination with methanol, dimethylformamide, tetrahydrofuran, dichloromethane, toluene and the like, preferably dichloromethane.
  • Step 2 is a step of preparing a compound represented by Chemical Formula 5 by removing the protecting group of the compound represented by Chemical Formula 4 prepared in Step 1, More specifically, by deprotecting the amine protecting group (PG) included in the compound represented by Formula 4 prepared in Step 1 using a deprotection agent, the compound represented by Formula 5 wherein the amine protecting group is deprotected Manufacturing step.
  • PG amine protecting group
  • the protecting group (PG) includes t-butoxycarbonyl (Boc), 9H-florene-9-ylmethoxycarbonyl (Fmoc), trityl, benzyl, chloroacetyl, benzyloxycarbonyl, p-methoxy Benzyloxycarbonyl, formyl, trifluoroacetyl, P-luenesulfonyl, benzenesulfonyl, methanesulfonyl, P-nitrobenzyloxycarbonyl, 2, 2, 2- trichloroerooxycarbonyl, allyloxy Carbonyl (Alloc) and the like can be used, and preferably t-Buroxycarbonyl (Boc) can be used.
  • the deprotection conditions of step 2 according to the present invention may use the unprotected conditions commonly used according to the protected group.
  • the reaction temperature is preferably carried out between the boiling point of the solvent at 0 ° C, the reaction time is not particularly limited, it is preferable to react for 0.5-10 hours.
  • the step 3 is to react the compound represented by the formula (5) and the compound represented by the formula (6) prepared in step 2 with the amide agent to formula (1)
  • the step of preparing a compound represented by more specifically, the amidation reaction of the amine group of the compound represented by the formula (5) deprotected in step 2 in the presence of an amide agent and the carboxylic acid group represented by the formula (6)
  • This step is to prepare a compound represented by the formula (1).
  • the usable amide reagent may be diisopropylethylamine (DIPEA), triethylamine (TEA) or dimethylamino
  • Benzotriazol-1-yl-oxy-tris (dimerorotylamino) -phosphonium nucleofluorophosphate (Py-B0P), 0-benzotriazole-dimming ⁇ with pyridine (DMAP), ⁇ , ⁇ , ⁇ -tetramethyl-euronium-nucleus-fluoro-phosphate (HBTU), 2- (7-studied aza-1 hexa-benzotriazol-1-yl) -1,1,3,3-tetra Methyluronium nucleus fluorophosphate (HATU), hydroxybenzotriazole (HOBt), dicyclonuclear carbodiimide (DCC), 1-ethyl- 3- (3-dimethylaminopropyl) carbodiimide (EDO , Carbonyldiimidazole (CDI) and the like can be used, preferably 1 ⁇ ethyl-3- (3-dimethylaminopropyl)
  • organic solvent may be used alone and in combination with methanol, dimethylformamide, tetrahydrofuran, dichloromethane, toluene and the like, preferably dichloromethane can be used.
  • reaction temperature is preferably carried out between the boiling point of the solvent at 0 ° C, the reaction time is not particularly limited, it is preferable to react for 0.5-10 hours.
  • present invention is a compound represented by Formula 1,
  • the liver disease caused by the hepatitis C virus includes acute hepatitis C, chronic hepatitis C, cirrhosis, hepatocellular carcinoma, and the like. Therefore, anti-C virus activity of the compound represented by the formula (1) according to the present invention was evaluated. Specifically, comprising a luminescent enzyme gene
  • Hepatitis C virus inoculated with hepatitis C virus was treated with a compound of Formula 1 according to the present invention at a concentration of ⁇ . Hepatitis C virus was inhibited by a low concentration of the compound represented by Formula 1 (Experimental Example). 1).
  • the EC 50 value representing the antiviral activity was low.
  • Examples 2, 3, 4, 5, The compounds prepared at 6, 7, 9, 16, 21, 22, 23 and 24 were found to have very low EC 50 values, respectively (see Experimental Example 2). From this, it can be seen that the compound represented by Chemical Formula 1 according to the present invention has excellent antiviral activity against hepatitis C virus.
  • the compound represented by Formula 1 acts as a target (NS5A) (Nonstructural protein 5A) known as a factor necessary for RNA replication (virus) of the virus.
  • the malleable NS5A is a protein in the phosphorylated form of the 56 kDa virus that is involved in HCV RNA replication, and has an amphipathic alpha helix structure that catalyzes conjugation to the host cell membrane. , Zinc binding motifs (Cys 39, 57, 59 and 80), binding to PI3K, PKR and NS5B, and 1 to 3 domains that play a viral combination.
  • NS5A Conventional inhibitors known as NS5A include ACH-2928, AZD-7295, PPI-461, BMS 824393, GS-5885 and Vertex.
  • the compound represented by Chemical Formula 1 according to the present invention binds to the position to act as an inhibitor of NS5A, thereby preventing the hepatitis C virus. It is expected to show viral activity and there is a need for further research in the future. Furthermore, as a result of evaluating the cell toxicity of the compounds of Examples 1 to 21 according to the present invention, it was confirmed that there is no cytotoxicity when treated at a concentration of 1 ⁇ . From this, it can be seen that the compound represented by the formula (1) according to the present invention is low in cytotoxicity (see Experimental Example 3).
  • the drug for the compound represented by the formula (1) according to the present invention As a result of the kinetics experiment, the blood concentration was reached within 2 hours, and the bioavailability was 20%. From this, it can be seen that the pharmacological activity of the compound according to the present invention is excellent (see Experimental Example 4, FIGS. 1 and 2). Furthermore, experiments were performed to analyze hERG (human Ether-a-go-go-Re 1 at ed Gene) ligand binding of the compound represented by Formula 1 according to the present invention. As a result, the inhibitory effective concentration of hERG measured through the degree of polarization of the compound of Example 16 was found to be 9.8 ⁇ .
  • the survival rate of the mouse plasma was found to be 99% or more. From this, it can be seen that the compound of Example 16 according to the present invention is not cytotoxic in vivo (see Experimental Example 6). Therefore, the compound represented by Formula 1 according to the present invention is excellent in antiviral activity against hepatitis C virus, is not toxic to cells and heart, is not only safe for the human body, but also has excellent pharmacological activity in the human body and other drugs.
  • the pharmaceutical composition containing it as an active ingredient is acute hepatitis C, chronic hepatitis C, cirrhosis, hepatocellular disease caused by hepatitis C virus. It can be usefully used as a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of liver diseases such as cancer.
  • the pharmaceutical composition containing the compound represented by Formula 1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient may be used in various oral or parenteral forms as described below. It may be formulated and administered in a sphere dosage form, but is not limited thereto.
  • Formulations for oral administration include, for example, tablets, pills, hard / soft capsule solutions, suspensions, emulsifiers, syrups, granules, elixirs, troches, etc. These formulations may contain diluents (e.g. lactose) in addition to the active ingredients. , Dextrose, sucrose, manny, sorbetle, celrose and / or glycine, glidants (eg silica, talc, stearic acid or its magnesium salts or calcium salts and / or Polyethylene glycol).
  • diluents e.g. lactose
  • glidants eg silica, talc, stearic acid or its magnesium salts or calcium salts and / or Polyethylene glycol.
  • the tablets may also contain binders such as magnesium aluminium silicate, starch paste, gelatin, methylcellose, sodium carboxymethylcellose and / or polyvanylpyridine, optionally starch, agar, alginic acid or its sodium It may contain disintegrants or boiling mixtures such as salts and / or absorbents, colorants, flavors and sweeteners.
  • binders such as magnesium aluminium silicate, starch paste, gelatin, methylcellose, sodium carboxymethylcellose and / or polyvanylpyridine, optionally starch, agar, alginic acid or its sodium It may contain disintegrants or boiling mixtures such as salts and / or absorbents, colorants, flavors and sweeteners.
  • Pharmaceutical compositions comprising the compound represented by Formula 1 as an active ingredient may be parenterally administered, parenterally Administration may be by subcutaneous injection, intravenous injection, intramuscular injection or intrathoracic injection.
  • the compound represented by the formula (1) or a pharmaceutically acceptable salt thereof is mixed with water with a stabilizer or a buffer to prepare a parenteral dosage form into a solution or suspension, which is prepared in a lump or vial unit dosage form. It can be prepared by.
  • the composition may contain sterile and / or preservatives, stabilizers, hydrating or emulsifying accelerators, auxiliaries such as salts and / or buffers for controlling osmotic pressure, and other therapeutically valuable substances, It can be refined according to mixing, granulation or coating method.
  • the dosage of the pharmaceutical composition containing the compound represented by Formula 1 as an active ingredient to the human body may vary depending on the age, weight, sex, dosage form, health condition and degree of disease of the patient, preferably 0.01 to In the amount of 200 mg / kg / day can be administered via the oral or parenteral route by dividing a certain time interval several times a day, preferably once to three times a day at the discretion of the doctor or pharmacist.
  • the present invention is a compound represented by the formula (1), its optical silver is a sumisumi isomer, or a health function for preventing or improving liver disease by hepatitis C virus containing a food acceptable salt thereof as an active ingredient Provide a food composition.
  • the liver disease caused by the hepatitis C virus includes acute hepatitis C, chronic hepatitis C, cirrhosis, hepatocellular carcinoma and the like.
  • the health functional food composition according to the present invention may be added to the health functional food, such as food, beverages and the like represented by the formula (1) for the purpose of preventing or improving liver disease caused by hepatitis C virus.
  • the kind of food There is no particular limitation on the kind of food. Examples of foods to which the substance may be added include drinks, meat, sausages, bread, biscuits, rice cakes, chocolates, candy, snacks, confectionary, pizza, ramen, other noodles, gums, ice creams, including ice cream, and various soups.
  • Beverages, alcoholic beverages and vitamin complexes, dairy and dairy products include all dietary supplements.
  • the compound represented by Chemical Formula 1 according to the present invention may be added to a food as it is or used with other food or food ingredients, and may be appropriately used according to a conventional method.
  • the mixed amount of the active ingredient can be suitably determined according to the purpose of use (prevention or improvement).
  • the amount of the compound represented by Formula 1 in the health functional food can be added to 0.1 to 90 parts by weight of the total food weight.
  • the amount may be below the above range, and since there is no problem in terms of safety, the active ingredient may be used in an amount above the above range. have.
  • the functional beverage of the present invention is not particularly limited to other ingredients except for containing the above compounds as essential ingredients in the indicated ratios, and may contain various flavors or natural carbohydrates as additional components, such as ordinary drinks.
  • natural carbohydrates include monosaccharides such as glucose, fructose and the like; Disaccharides such as maltose, sucrose and the like; And sugars such as conventional sugars such as polysaccharides such as textulin, cyclotextine, and the like, and xylyl, sorbitol, and erythryl.
  • natural flavoring agents e.g., taumartin, stevia extract, etc.
  • synthetic flavoring agents e.g., saccharin, aspartame, etc.
  • the ratio of the natural carbohydrate is generally about 1 to 20 g, preferably about 5 to 12 g per 100 functional foods of the present invention.
  • the health functional food composition containing the compound represented by Chemical Formula 1 according to the present invention as an active ingredient includes various nutrients, vitamins, minerals (electrolytes), synthetic flavors and natural flavoring agents such as flavoring agents, coloring agents and neutralizing agents.
  • the health functional food composition of the present invention may contain a flesh for preparing natural fruit juice and fruit juice beverage and vegetable beverage. These components can be used independently or in combination. The proportion of such additives is not so critical but is usually selected in the range of 0.1 to about 20 parts by weight per 100 parts by weight of the nutraceutical composition according to the present invention.
  • reaction product was washed three times with ether (17 ml), the water layer was washed with ice water, and acidified to pH 1 or 2 with hydrochloric acid (cone. HC1).
  • the acidified aqueous layer was extracted three times with dichloromethane (17 ml), and the extracted organic layer was dried over magnesium sulfate (MgS0 4 ) and filtered.
  • the filtered organic layer was concentrated under reduced pressure and the target compound (5 g, 86%) was obtained as a white solid without further purification.
  • the acidified reaction mixture was slowly isothermally stirred to room temperature, stirred overnight to terminate the reaction, and the resulting semi-finished product was filtered to remove the suspended matter.
  • the filtrate was concentrated by distillation under reduced pressure, and recrystallized with ethanol to obtain the target compound (625 mg, 60%) in the form of white hydrochloride.
  • the acidified reaction product was extracted with ethyl acetate, the extracted organic layer was washed with brine, the organic layer was dried over magnesium sulfate (MgS0 4 ), filtered and the filtered organic layer was distilled under reduced pressure to remove the solvent.
  • the desired compound (17 g, 97%) was obtained.
  • Sodium carbonate (0.55 g, 5.2 Pa) was added to an aqueous sodium hydroxide solution (10 ml, 10 Pa) in which D-phenylglycine (1.5 g, 10 Pa) was dissolved, and cooled using an ice bath.
  • Methylchloroformate (0.85 ml, 11.0 ⁇ l) was slowly added dropwise to the reacted reaction mixture, and when the addition was completed, the ice bath was removed and isothermalized to room temperature, followed by stirring for 3.25 hours. Thereafter, the reaction product was washed three times with ether (18 ml), the water layer was immersed in an ice bath, and acidified to pH 1-2 with hydrochloric acid (cone. HC1).
  • the acidified aqueous solution was extracted three times with dichloromethane (18 ml), and the extracted organic layer was dried over magnesiumsulfate (MgS0 4 ) and filtered.
  • the oil residue obtained by concentrating the filtered organic layer under reduced pressure was treated with diethyl ether / nucleic acid ( ⁇ 5: 4 ratio; 10 ml) to obtain a precipitate.
  • the precipitate obtained above was washed with diethyl ether / nucleic acid ( ⁇ 1: 3 ratio), filtered and dried under vacuum to obtain the title compound (1.4 g, 67%) as a white solid.
  • Step 1 Preparation of 9, 9-difluoro ⁇ 2,7-dinitro-9-fluorene
  • Example 1 Dimethyl ((lR, l'R)-((2S, 2'S) -2,2 '-(((3,3'-dimethyl- [1,1'-biphenyl]-) 4,4'-diyl) bis (azanediyl)) bis (carbonyl)) bis (pyridin-2,1-diyl)) bis (2-oxo-1-phenylethane-2,1- Preparation of diyl)) dicarbamate
  • Example 2 Dimethyl ((lR, l'R)-((2S, 2'S) -2,2 '-(((2,2'-bis (trifluoromethyl)-[1,1' -Biphenal] -4,4'-diyl) bis (azanediyl)) bis (carbonyl)) bis (pyridin-2,1-diyl)) bis (2-oxo-1-phenylethane -2,1-diyl)) dicarbamate preparation
  • the compound (245 mg, 0.4 ⁇ l ol) obtained above was added to a mixture of CF 3 CO 2 H (4 mL) and CH 2 C1 2 (4 mL), and stirred for 5 hours at silver. Remove volatiles under reduced pressure, add CH 2 C1 2 (4 mL) solution dissolved in / -Pr 2 NEt (347 ⁇ , 2.0 ⁇ l) over 4 minutes, and further add EDC (199 mg, 1.04 mmol). And the reaction mixture of the compound prepared in Preparation Example 9 (200 mg, 0.96 ⁇ l ol) was stirred for 75 minutes at phase silver.
  • Example 7 Dimethyl ((lR, l'R)-((2S, 2'S) -2,2 '-(((2,2'-dibromo- [1, ⁇ -biphenyl] -4) 4'-diyl) bis (azanediyl)) bis (carbonyl)) bis (pyrrolidine-2,1-diyl)) bis (2-oxo-1-phenylethane-2,1-di (1) Production of Dica Bamate
  • the compound (260 mg, 0.353 ⁇ l) obtained above was added to a mixture of CF 3 C0 2 H (2 mL) and CH 2 C1 2 (2 mL), and the mixture was stirred at room temperature for 5 hours. Remove volatiles under reduced pressure, add CH 2 C1 2 (4 mL) solution with / -Pr 2 NEt (3078 ⁇ , 1.77 ⁇ ol) over 4 minutes, and add EDC (176 mg, 0.92 mmol) And the reaction mixture of the compound (177 mg, 0.85 mmol) prepared in Preparation Example 9 was stirred at room temperature for 75 minutes.
  • Example 8 Dimethyl ((lR, l'R)-((2R, 2'R) -2,2 '-(([l, r-biphenyl] -4,4'-diylbis Preparation of (azanediyl)) bis (carbonyl)) bis (pyridin-2,1-diyl)) bis (2-oxo-1-phenylethane-2, 1-diyl)) dicarbamate
  • Example 10 Dimethyl ((lR, l'R)-((2S, 2'S) -2,2 '-(([l, l'-biphenyl] -4,4'-diylbis ( Preparation of azanadiyl)) bis (carbonyl)) bis (piperidine-2, 1-diyl)) bis (2-oxo-1-phenylethane-2, 1-diyl)) dicarbamate
  • iV-Boc-L-Piphy # acid 400 mg, 1.75 mmol
  • EDC 363 mg, 1 9 ⁇ o 1
  • benzidine 134 mg, 0.73 ⁇ ol
  • the compound (73 mg, 0.12 mmol) obtained above was added to a mixture of CF 3 CO 2 H (1 mL) and CH 2 C1 2 (1 mL), and stirred for 5 hours at silver phase. Remove volatiles under reduced pressure, add DMF (1 mL) solution containing / -Pr 2 NEt (105 ⁇ , 0.60 ⁇ ol) over 4 minutes, and further add EDC (60 mg, 0.31 mmol) and Preparation Example. The reaction mixture of the compound prepared in 9 (60 mg, 0.29 ⁇ ol) was stirred at room temperature for 75 minutes.
  • reaction mixture was separated with CH 2 C1 2 and H 2 O, and the organic layer was washed with 3 ⁇ 40 and brine, dried over magnesium sulfate, filtered and concentrated under reduced pressure.
  • a silica gel mesh was prepared from the residue, which was subjected to flash chromatography (eluent: EtOAc / hexane mixture) to obtain the target compound as a solid (12 mg, 13%).
  • yV-Boc—D-Pipecolic acid 500 mg, 2.2 mmol
  • EDCC452 mg, 2.4 mmol EDCC452 mg, 2.4 mmol
  • benzidine 167 mg, 0.91 mmol
  • vV-Boc a-methyl-L-proline (200 mg, 0.87 ⁇ l ol), EDG (181 mg, 0.95 ⁇ l ol), and benzidine (67 mg, 0.36 ⁇ l ol) in CH 2 C1 2 (2 mL) The mixture was stirred for 2 hours in phase silver.
  • the compound (144 mg, 0.238 ⁇ l) obtained above was added to a mixture of CF 3 CO 2 H (1 mL) and CH 2 C1 2 (1 mL), and the mixture was stirred at room temperature for 5 hours. Remove volatiles under reduced pressure, add CH 2 C1 2 (1 mL) solution with / -Pr 2 NEt (208 ⁇ , 1.192 ⁇ ol) over 4 minutes and add EDC (119 mg, 0.620 mmol) and The reaction mixture of the compound prepared in Preparation Example 9 (100 mg, 0.572 ⁇ l) was stirred at room temperature for 75 minutes.
  • Step 1 (2S, 2'S) -di-tert-butyl 2, 2 ' ⁇ (biphenyl-4, 4'-diylbis (azanediyl)) bis (oxomethylene) dipyridine-1-car Article of carboxylate ⁇ _
  • Step 2 Dimethyl (2R, 2'R) -1, 1 '-((2S, 2'S) -2, 2'-(biphenyl-4,4'-diylbis (azanediyl)) Preparation of Bis (oxomethylene) bis (pyridin-2,1-diyl)) bis (3-methyl-1-oxobutane-2,1-diyl) dicarbamate
  • methylene chloride (1 ml) and trifluoroacetic acid (1 ml)
  • the compound (138 mg, 0.238 dl ol) prepared in Step 1 was dissolved and stirred at room temperature for 5 hours.
  • the washed organic layer was dried over magnesium sulfate (MgS0 4 ), filtered, and the filtered organic layer was dried under reduced pressure.
  • the dried semi-product was purified by column chromatography (silica gel, ethyl acetate / n-nucleic acid) to obtain the title compound (60 mg, 36%) as a white solid.
  • Example 13 except that the compound (100 0.56 ⁇ ol) prepared in Preparation Example 3 instead of using the compound (138 0.238 mmol) prepared in Preparation Example 1 in step 2 of Example 13 same
  • the target compound (40 mg, 25%) was obtained by the method.
  • the semi-finished product was layered using methylene chloride and, and the separated organic layer was washed with 1N hydrochloric acid and brine, and then dried over magnesium sulfate (MgSO 4 ). The dried organic layer was filtered and distilled under reduced pressure to obtain a red solid compound (20.7 g, 94%) without further purification.
  • reaction product was separated using methylene chloride and water, and the separated organic layer was washed with water.
  • the washed organic layer was dried over magnesium sulfate (MgSO and filtered, and the filtered organic layer was dried under reduced pressure.
  • the dried reaction product was purified by column chromatography (silica gel, ethyl acetate / n-nucleic acid) to obtain a white solid as a target compound. (34 mg, 22%) was obtained.
  • Preparation Example compound in step 2 of Example 13 (138 mg, 0.238 instead of Preparation Example 5 compound (100 mg, 0.485 except that the same method as in the above 13 except that the target compound (53 mg, 46%) Got it.
  • Example 18 Dimethyl (23, 2'3) -1, 1 '-((25, 2'10-2, 2'-(biphenyl-4, 4'-diylbis) (azanediyl) Preparation of Bis (oxomethylene) bis (pyridin-2,1-diyl)) bis (1-oxopropane-2,1-diyl) dicarbamate
  • Example 20 Dimethyl (23,2'5) -1,1 '-((23,2'1) -2,2'-(biphenyl-4,4'-diylbis (azanediyl) )) Bis (oxomethylene) bis (pyridin-2,1-diyl)) bis (3-methyl-1—oxobutane-2,1-diyl) dicarbamate
  • Example 13 Except for using the compound prepared in Preparation Example 1 (138 mg, 0.238 mmol) in step 2 of Example 13 except that the compound (100 mg, 0.572 ⁇ ol) prepared in Preparation Example 2 Same as Example 13 Performed by one method to obtain the target compound (69 mg, 42%).
  • Example 21 Dimethyl (18, 15 ')-2,2'-((41 ⁇ , 4'10-4,4 '-(biphenyl-4,4'-diylbis (azanediyl) Preparation of Bis (oxomethylene) bis (thiazolidine-4,3-diyl)) bis (2-oxo-1-phenylethane-2,1-diyl) bicarbamate
  • Example 22 Dimethyl ((lR, l'R)-((2S, 2'S) -2,2 '-(((9,9-difluoro-9H-fluorene-2,7-di I) bis (azanediyl)) bis (carbonyl)) bis (pyridin-2,1-diyl)) bis (2-oxo-1-phenylethane-2,1-diyl)) dicarbame Manufacture of wight
  • Step 1 (2S, 2'S) -di-tert-butyl 2, 2 '-(((9,9-difluoro-9H-fluorene-2 / 7-diyl) bis (azanediyl)) bis (Carbonyl) Bis (Pirley) Preparation of Di--1-carboxylate)
  • Step 2 Dimethyl ((1R, l'R) — ((2S, 2'S) -2,2 '-(((9,9-difluoro-9H-fluorene-2,7-dayl) bis Preparation of (azanediyl)) bis (carbonyl)) bis (pyridin-2,1-diyl)) bis (2-oxo-1-phenylethane-2,1-diyl)) dicarbamate
  • Example 23 Dimethyl ((lR, l'R)-((2S, 2'S) -2,2 '-(((9,9-dimethyl-9H-fluorene-2,7-diyl) ) Bis (azanediyl)) bis (carbonyl)) bis (pyridin-2,1-diyl)) bis (2-oxo-1-phenylethane-2,1-diyl)) daikamei Manufacturing
  • Step 1 (2S, 2'S) -di-tert-butyl 2,2 '-(((9,9-dimethyl-9H—polluene-2,7-diyl) bis (azanediyl)) bis Preparation of (carbonyl)) bis (pyridin-1-carboxylate)
  • Step 2 Dimethyl ((lR, l'R)-((2S, 2'S) -2,2 '-(((9,9-dimethyl 911-fluorene-2,7-diyl) bis (a Preparation of Zandiyl)) bis (carbonyl)) bis (pyridin-2,1-diyl)) bis (2-oxo-1-phenylethane-2,1-diyl)) dicarbamate
  • Example 24 Dimethyl ((lR, l'R)-((2S, 2'S) -2,2 '-(((9-oxo-9H-fluorene-2,7-diyl) bis Preparation of Dicarbamate: Xandiyl)) Bis (carbonyl)) Bis (Pyridin-2, 1-diyl)) Bis (2-oxo-1-phenylethane-2, 1-diyl))
  • Step 1 (2S, 2'S) _di-tert-butyl 2,2 '-(((9-oxo-9H-fluorene-2,7-diyl) bis (azanediyl)) bis (carbonyl) Preparation of Bis (Pirridin-1-carboxylate)
  • Step 2 Dimethyl ((lR.l'R) — ((25 ⁇ 2'5) -2,2 '-(((9-oxo-Ae-Fluorene-2,7-diyl) bis (a Preparation of Dicarbamate: Xandiyl)) Bis (carbonyl)) Bis (Pyridin-2,1-diyl)) Bis (2-oxo-1-phenylethane-2, 1-diyl))
  • Example 22 was carried out in the same manner as Step 2, to obtain the target product (12 mg, 66%) in the solid form.
  • Liver cancer cell line in a 12-well cell culture plate huh7.5.1 cells were dispensed at about 50,000 per well. Dispensed cells were added 10% (v / v) Fetal Bovine Serum SH30406.02, Hyclone Co.) and 1% (v / v) antibiotic (penicillin / straptomycin solution SV30010, Hyclone Co.) a DMEM culture medium (Eagle culture medium improved both course 12800-017, GIBC0 Co.) using a cultured for 24 hours in 6.0% carbon dioxide cell incubator (C0 2 incubator 311, Forma Scientif ic Co, Lnc. USA) a 37 ° C Cells were attached to the bottom of the plate.
  • C0 2 incubator 311, Forma Scientif ic Co, Lnc. USA a 37 ° C Cells were attached to the bottom of the plate.
  • Renilla luciferase gene (R en il la luc if erase gene) C hepatitis with as a reporter (reporter) (JFH-5aFlucm4, PLoS One 2011; 6 (8):.. E228808) for 3 hours
  • the seeded cells were inoculated.
  • the cell culture solution was removed and a new cell culture solution prepared by adding the compounds prepared in Examples 1 to 24 according to the present invention to the culture medium at a concentration of 1 ⁇ M each was injected into each well. , which was times amount for three days in 6.0% carbon dioxide cell incubator (C0 2 incubator 311, Forma Scientific Co, Lnc. USA) of 37 ° C.
  • the cell cultures were collected separately to measure the cytotoxicity of the following ⁇ Experiment 3>.
  • the cells attached to the plates were washed with phosphate buffered saline (PBS) and lysed by treatment with 100 ⁇ IX passive lysis buffer (promega, E1941).
  • the lysed cell solution (10 ⁇ is injected into the Renilla luciferase assay reagent (Reni lla Lucif erase assay system, Promega, E2820) in 50 ml and mixed with a luminometer (Luminometer, GLOMAX).
  • Luminescence was measured for 10 seconds using a Luciferase measurement program in a 20/20 Luminometer (Promega), wherein each of Examples 1 to 24 according to the present invention was measured. The average amount of luminescence of the treated and untreated groups of the compound was measured three times, and the averages were compared and analyzed. The luminescence according to the concentration of each compound was measured using a sigma plot program. hal maximal effective concentration (EC50) was calculated and shown in Table 2 below.
  • a grade is less than EC 50 1 nM
  • B grade is EC 50 1 nM-100 nM
  • Grade C indicates greater than EC 50 100 nM.
  • the example compounds according to the present invention was shown to have an antiviral effect against hepatitis C virus present in the liver cancer cell line.
  • the maximum 50% effective concentration (EC 50 ) is 1 nM or less, so that the upo-water has an antiviral effect.
  • the exemplary compounds according to the present invention have an excellent anti-hepatitis C virus effect against the hepatitis C virus, and therefore, acute hepatitis C, chronic hepatitis C, liver cirrhosis or hepatocellular carcinoma caused by hepatitis C virus. It can be usefully used as a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of the same liver disease.
  • NK / R2AN a replicon capable of measuring the replication and process of hepatitis C virus
  • Busy FBS Fetal Bovine Serum SH30406.02, Hyclone Co.
  • l% (v / v) antibiotics penacillin / streptomycin solution SV30010, Hyclone Co.
  • G418 37 ° C, 6.0% carbon dioxide cell incubator (C0 2 Incubator 311, Forma Scientific Co, Lnc) using DMEM medium (Dulcos modified Eagle culture 12800-017, GIBCO Co.) with 600 ⁇ g / mL, Calbiochem
  • DMEM medium Dulcos modified Eagle culture 12800-017, GIBCO Co.
  • each cell was prepared with a new cell culture medium prepared by removing the cell culture medium in which the cells were grown and adding the compounds prepared in Examples 1 to 24 according to the present invention to the culture medium at concentrations of 40 pM to ⁇ , respectively. And incubated in a 37% 6.0% carbon dioxide cell incubator (C0 2 Incubator 311, Forma Scientif ic Co, Lnc. USA) for 3 days. After 3 days of infection, the cell cultures were collected separately to measure the cell toxicity of ⁇ Experiment 3>. The cells attached to the plate were washed with phosphate buffered saline (PBS) and lysed by treatment with 100 ⁇ IX passive lysis buffer (E1941).
  • PBS phosphate buffered saline
  • the lysed cell solution (10) was injected into the Renilla Luciferase Assay Reagent (50) of the Renilla Lucif erase assay system (Promega, E2820) and mixed and mixed with a Luminometer (GLOMAX 20/20). Luminometer was measured for 10 seconds using a Luciferase measure program in Luminometer, Promega), wherein each compound of Examples 1 to 24 according to the present invention was treated. The amount of emission of one treatment group and no treatment group was measured three times, and the average was compared and analyzed. The emission amount according to the concentration of each compound was determined using a sigma plot program. concentration, EC 50) is calculated and shown in Table 3.
  • the example compounds according to the present invention was confirmed to have an excellent antiviral effect against hepatitis C virus. More specifically, the compounds prepared in Examples 2, 3, 4, 5, 6, 7, 9, 16, 21, 22, 23, and 24 have an EC 50 value of less than 100 M, but not for hepatitis C virus. The antiviral activity was found to be very good. Therefore, the example compounds according to the present invention have an excellent anti-hepatitis C virus effect even at a considerably low concentration against the hepatitis C virus, and thus, acute hepatitis C, chronic hepatitis C and cirrhosis caused by hepatitis C virus. Or it may be usefully used as a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of liver diseases such as hepatocellular cancer.
  • cytotoxicity assay kit (Lonza, LT07-117), take 20 ⁇ cultured medium per well and use the AK detect reagent (AK detect i on reagent, ToxiLight Non-dest rut ive Cytotoxicity Bio Assay Kit). Add LT07-117, Lonza Co., 100 ⁇ ) and leave for 5 minutes, then Victor 3 (VICT0R 3 TM wallaac 1420-051 Multiabel plate Counter, PerkinElmer Inc.
  • mice were orally and intravenously administered to confirm pharmacokinetic changes.
  • orally dissolved drug was administered at 5 mg / kg and collected at a predetermined time from the jugular vein.
  • a tube was inserted into the jugular vein and the femoral vein, and the drug dissolved into the femoral vein was administered at 5 mg / kg, and blood was collected at a predetermined time.
  • the compound of Example 16 according to the present invention was confirmed to exhibit excellent drug effect in vivo.
  • the maximum plasma concentration (C max ) of oral administration was confirmed to be 0.188 g / ml, and the time to reach the maximum concentration of drug (T nax ) was confirmed to be 2 hours.
  • the bioavailability (F t ) of the compound of Example 16 according to the present invention was found to be 20%. From this, it can be seen that the compound of Example 16 according to the present invention exhibits an excellent drug effect of maximal concentration and bioavailability of 20% after 2 hours of administration in vivo. Therefore, the compound of Example 16 according to the present invention is rapidly absorbed in vivo, exerts a drug effect with high bioavailability in vivo, and thus has excellent pharmacological activity, and thus is acute type C caused by hepatitis C virus. It can be usefully used as a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of liver diseases such as hepatitis, chronic hepatitis C, liver cirrhosis or hepatocellular carcinoma.
  • liver diseases such as hepatitis, chronic hepatitis C, liver cirrhosis or hepatocellular carcinoma.
  • HERG a major part of the ion channel protein that releases potassium (K + ) ions from cardiac muscle cells, is known to contribute to the heart's electrical activity that regulates the heartbeat. If the current through the cell membrane of hERG is inhibited by drug or its own genetic modification, it causes fatal symptoms. For this reason, the test for the inhibition of hERG in drug development is one of the clinically important tests.
  • hERG inhibitory activity of the compound of Example 16 according to the invention was evaluated by fluorescence polarization measurement using a red fluorescent hERG channel ligand detection agent having high affinity with hERG.
  • the hERG inhibitor astemizole (astemizole) as a control was performed in the same manner to evaluate and evaluate the hERG inhibitory activity, the results are shown in Table 5.
  • the compound of Example 16 according to the present invention has a low inhibitory effect on hERG. More specifically, when the compound of Example 16 according to the present invention was treated with hERG, the binding of the compound of Example 16 and the cell membrane of hERG is not well formed, and as a result of the competitive binding with the compound of Example 16, hERG
  • the red fluorescence hERG channel ligand detector with high affinity binds to the hERG cell membrane better than the compound of Example 16 and shows high polarization degree.
  • the inhibitory effective concentration of hERG measured by the degree of polarization of the compound of Example 16 was 9.8. appeared to be ⁇ M.
  • the inhibitory effective concentration of hERG was 0.0019 ⁇ , which was about 5160 times higher than the compound of Example 16 according to the present invention.
  • the compound of Example 16 according to the present invention has a significantly low inhibitory activity against hERG, it can be seen that there is no side effect on cardiac toxicity causing sudden death. Therefore, the benzidine derivatives according to the present invention have a significantly low effect of inhibiting hERG, and thus have no side effects such as cardiac toxicity caused by the inhibition of hERG.
  • acute hepatitis C virus caused by hepatitis C virus chronic C It can be usefully used as a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of liver diseases such as hepatitis, cirrhosis or hepatocellular carcinoma.
  • liver diseases such as hepatitis, cirrhosis or hepatocellular carcinoma.
  • Example 16 In order to evaluate the cytotoxicity of the compound prepared in Example 16 according to the present invention, the following experiment was performed. First, a sample solution was prepared by dissolving the compound of Example 16 according to the present invention to 5 ⁇ M in dimethyl sulfoxide. Plasma solution (495 ⁇ ) in which the phosphate buffer solution of ⁇ 7.4 was mixed in a 1: 1 ratio was injected into each well of a 96-well plate, and the sample solution prepared above (5) was injected. Cover the lid of the plate and orbital shaker (orbital) V privatization.
  • the shaker was shaken at 0.5 rpm for 1 hour and 4 hours at 37 rpm for 100 hours at 37 ° C, and the reaction was terminated by adding acetonitrile at 0-5 ° C to the plate.
  • the reaction was terminated by injecting the sample solution into the plate containing the plasma solution and injecting acetonitrile.
  • the plate on which reaction was terminated was cryopreserved and then centrifuged at 3000 rpm for 10 minutes. Upon completion of centrifugation, supernatant (100 ⁇ ) was injected into a 96-well assay plate to perform LC-MS / MS analysis. Plasma survival according to the treatment time was calculated by comparing the measured value according to the elapsed time of each sample based on the measured value when 0 hours passed, and the results are shown in Table 6 below.
  • the compound of Example 16 according to the present invention was confirmed that there is no cytotoxicity in vivo. More specifically, even after 4 hours after the mouse plasma was treated with the compound of Example 16 according to the present invention, the survival rate of mouse plasma was found to be 993 ⁇ 4 or more. From this, it can be seen that the compound of Example 16 according to the present invention is not cytotoxic in vivo.
  • the compound of Example 16 according to the present invention is safe for the human body because there is no cytotoxicity against cells in vivo, and therefore, acute hepatitis C, chronic hepatitis C, liver cirrhosis or hepatocellular carcinoma caused by hepatitis C virus and It can be usefully used as a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of the same liver disease.
  • the compound represented by Formula 1 according to the present invention can be formulated in various forms according to the purpose. The following are some examples of formulation methods containing the benzidine derivative according to the present invention as an active ingredient, but the present invention is not limited thereto.
  • Compound 100 of Formula 1 Corn starch 100 Lactose 100 Magnesium stearate 2 After the above components were mixed, tablets were prepared by tableting according to a conventional method for preparing tablets.
  • Vitamin Complex Amount Vitamin A Acetate 70 Vitamin E 1.0 Vitamin 0.13 Vitamin B2 0.15 Vitamin B6 0.5 Vitamin B12 0.2 Vitamin C 10 Biotin 10 Nicotinamide 1.7 Folic Acid 50 Pantothenate Calcium 0.5 Mineral Mixture Proper Ferrous Sulfate 1.75 Oxidation Zinc 0.82 Magnesium Carbonate 25.3 Potassium Potassium Phosphate 15 Dibasic Calcium Phosphate 55 According to
  • composition ratio of the vitamin and mineral mixtures described above is a relatively preferred composition suitable for the health functional formula, but the composition ratio may be arbitrarily modified. After mixing the above components according to the functional food production method, granules are prepared, and can be used for producing a health functional food composition according to a conventional method.
  • composition ratios are generally formulated as a preferred example of a component suitable for a favorite beverage
  • the compounding ratio may be arbitrarily modified according to regional and ethnic preferences such as demand hierarchy, demand country, and usage OO.
  • Chewing gum was prepared using conventional methods using the above composition and content.
  • a benzidine derivative of Formula 1 was added in an amount of 0: 5 to 5 parts by weight of 100 parts by weight of flour, and the bread, cake, cookies, crackers, and noodles were prepared using the mixture to prepare foods for health promotion. 7-5. Manufacture of dairy products
  • Beans, black sesame seeds, and perilla are also known to be steamed and roasted.
  • the benzidine derivatives according to the present invention have excellent anti-Bass activity against hepatitis C virus, and therefore, acute hepatitis C caused by the pharmaceutical composition of hepatitis C virus comprising it as an active ingredient. It may be useful as a pharmaceutical preparation for preventing or treating liver diseases such as hepatocellular carcinoma.

Abstract

본 발명은 C형 바이러스에 대하여 항바이러스 활성을 갖는 화합물, 이의 광학 이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 이의 제조방법 및 이를 유효성분으로 함유하는 C형 간염 바이러스에 의한 간질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물에 관한 것으로, 본 발명에 따른 벤지딘 유도체는 C형 간염 바이러스에 대한 항바이러스 활성이 우수하고 생체 내에서 뛰어난 약리활성을 나타냄으로써, 이를 유효성분으로 포함하는 약학적 조성물은 C형 간염 바이러스에 의해 발병되는 급성 C형 간염, 만성 C형 간염, 간경변, 간세포성 암과 같은 간질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.

Description

【명세서 】
【발명의 명칭 】
벤지딘 유도체 이의 제조방법 및 o
Figure imgf000003_0001
함유하는 C형 간염 바 o 러스에 의한 간질환 치료용 약학적 조성물
【기술분야 】
본 발명은 C형 바이러스에 대하여 항바이러스 활성을 갖는 화합 물， 이의 광학 이성질체， 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염， 이와 제조방법 및 이를 유효성분으로 함유하는 C형 간염 바이러스에 의한 간질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물에 관한 것이다.
【배경기술 】 ᅳ
C형 간염 바이러스 (Hepat it is C virus, HCV)는 폴라비바이러스과 (Flavivir idae)의 헤파시바이러스 속 (hepacivirus genus)으로 분류되 는 RNA 바이러스로서， 1989년에 미국에서 발견되었다. 상기 C형 간염 바이러스 (HCV)에 의한 감염은 수혈 및 지역 특이 적 전염 (community-acquired)에 의해 발생되고， 신장 투석에 의해 약 70% 정도가 감염되는 것으로 보고되었다. 일단 C형 간염 바아러스에 감염이 되면 약 20% 정도가 5년 내에 간경화를 수반한 급성 간염을 일 으키게 되고 간암으로 전이되는 것으로 알려져 있다 (Davis et alᅳ New Engl . J. Med. , 321 (1989) 1501 I Alter et al , Leonard et al . , Current Pespect ive in Hepatology, (1989) p.83) . 이러한 높은 만성 감염률은 RNA 바이러스에서 보기 드문 일로서 C형 간염 바이러스가 높 은 비율의 간암을 일으키는 매개체임을 보여주는 증거이다. 최근에는 모든 혈액에 대해서 c형 간염 바이러스 검사가 잘 이루어지고 있어 수 혈로 인한 감염은 현저히 줄어들었지만, 지역 특이적 감염은 이에 대 한 관리가 효과적으로 아루어지지 않아 그 감염를이 높으므로 전 세계 적으로 중요한 문제로 대두되고 있다. 한편， 역학적으로 볼 때 C형 간염 바이러스는 B형 간염 바이러스 (HBV)와 달리 전 세계에 골고루 분포되어 있으며 전 세계 인구의 1.5% 내지 2%가 감염된 것으로 보고되고 있다. C형 간염 바이러스에 감염되 면 만성 간염으로 진행되는 것이 특징인데 간경화 및 간암으로 전이되 는 확률이 B형 간염보다 상당히 높다. C형 간염 바이러스는 분류학적 으로도 B형 간염 바이러스와는 전혀 다른 바이러스과에 속하기 때문에 B형 간염 바이러스 백신으로는 예방이 불가능하다. 또한， 현재 C형 간 염 바이러스 감염에 대한 치료제로， 인터페론과 항바이러스제인 리바 비린 (ribavirin) 병용요법이 사용되고 있으나 (Hayashi N.， et al . , J. Gastroenterol . , 41, (2006)， 17) , 유전형에 따라 반웅이 현저히 다르 고 효과가 극히 미약하며， 병용요법에 사용되는 두 약제의 부작용이 클 뿐만 아니라 고가이다. 따라서， 보다 효과적인 새로운 C형 간염 바 이러스제의 개발이 요구되고 있다 상기의 문제를 극복하기 위하여 연구된 현재까지 C형 간염 바이 러스제는 C형 간염 바이러스의 생애주기의 특정 단계를 차단함으로써 C형 간염 바이러스제의 약리활성이 발현되는 특징을 갖는다.
C형 간염 바이러스의 생애주기는 다음와 같다. 숙주 세포 (Host cell)의 표면에 부착된 HCV는 엔도사이토시스 (endocytosis)에 의해 숙 주 세포 내에 침입한다. 이후， 숙주 세포 내에 침입한 C형 간염 바이 러스 게놈 RNA로부터 약 3천 개의 아미노산 잔기로 구성된 전구체 단 백질이 생성된다. C형 간염 바이러스 게놈 또는 숙주 세포의 시그널 펩티다아제 (signal peptidase)로 인코딩된 ( encoded) NS3 및 NS4 프로 테아제와 함께 반웅하여 캡시드 단백질 (capsid protein)， 엔벨로프 단 백질 (envelope protein) , NS3 및 NS4 프로테아제， NS 5Β RNA 중합효소 (Polymerase) 같은 약 10종의 바이러스 단백질아 생성된다. NS 2B 중 합효소로 복제된 게놈 RNA는 a-글루코시다아제 (a-glucosidase)로 중개 된 캡시드 단백질 및 엔벨로프 단백질과 결합하여 바이러스 입자가 된 다. C형 간염 바이러스 입자는 숙주 세포로부터 배출된다 (Manns MP. , et al . , Nat . Rev. Drug. Discov. , 6, (2007) , 991) . 상기의 C형 간염 바이러스 생애주기의 특정 단계를 차단함으로써 C형 간염 바이러스 억제활성을 나타내는 약제는 HCV 생애주기에 근거 하여 RNA 중합효소 억제제-유형 , 프로테아제 억제제-유형 , a-글루코시 다아제 억제제 -유형 및 기타 유형으로 분류된다. 예를 들면， MK-
7009(Merck)과 R7128(Pharmasset/Roche) 등의 RNA 중합효소 억제제 유 형은 임상시험 1상에 있고， VCH-759(Virochem)， R1626(Roche) , 발로피 시타빈 (valopicitabine, Idenix)는 임상시험 2상에 있다. 또한， 프로 테아제 억제제 유형 중 IT匪 -19 R-7227, InterMune/Roche)는 임상시 험 1상에 있고， TMC435350(Medivir/Tibotec)은 임상시험 2상이며， 보 세프레비어 (Boceprevir(SCH 503034) , Schering)과 텔라프레비어 (Telaprevir , Vertex)는 임상시험 3상에 있다 . 아울러， 사이클로필린 억제제 유형인 DEBI0-025(DEBI0)와 글루코시다아제 I 억제제 유형인 셀고시비어 (celgosivir， MIGEBIX)는 임상시험 2상에 있다 (Kronenberger B. , et al . , Clin Liver Dis. , 12,(2008)， 529) . 그러나, 임상시험이 진행되고 있는 상기 C형 간염 바이러스제에 대하여 내성을 갖는 바이러스의 출현이 이미 보고되고 있으므로， 종래 에 알려진 C형 간염 바이러스.제와는 다른 기작으로 C형 간염 바이러스 억제효과를 나타내는 새로운 C형 간염 바이러스제의 개발이 절실히 요 구되고 있다. 이에， 본 발명자들은 세포독성이 적고， C형 간염 바이러스에 대 한 항바이러스 활성이 우수한 C형 간염 바이러스제에 관하여 연구하던 중， 벤지딘 유도체가 C형 간염 바이러스에 대한 항바이러스 활성이 우 수하고， 세포독성이 없음을 확인하고 본 발명을 완성하였다.
【발명의 상세한 설명 】
【기술적 과제 】
본 발명의 목적은 C형 간염 바이러스에 대한 항 바이러스 활성을 갖는 화합물， 이의 광학 이성질체， 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 제공하는 것이다. 본 발명의 다른 목적은 상기 화합물의 제조방법을 제공하는 것이 다. 본 발명의 또 다른 목적은 상기 화합물을 유효성분으로 함유하는 C형 간염 바이러스에 의한 간질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다 . ᅳ 본 발명의 다른 목적은 상기 화합물을 유효성분으로 함유하는 C 형 간염 바이러스에 의한 간질환 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성 물을 제공하는 것이다.
【기술적 해결방법 】
상기 목적을 달성하기 위하여，
하기 화학식 1로 표시되는 화합물 이의 광학 이성질체， 또는 이 의 약학적으로 허용가능한 염을 제공한다.
[화학식 1]
Figure imgf000005_0001
상기 화학식 1에서，
R1, 및 R2는 독립적으로 -H, -0H, 할로겐 , d-n^ 직쇄 또는 측 쇄 알킬， 10의 직쇄 또는 측쇄 알콕시， 비치환 또는 치환된 C6— 10의 아릴 , -NR12R13, 또는 -NHC(=0)R14이고 ,
여기서， 상기 치환된 (：6-10의 아릴은 d-5의 직쇄 또는 측쇄 알킬， d-5의 직쇄 또는 측쇄 알콕시， 및 할로겐으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기가 치환될 수 있고，
또한, 상기 R12, 및 R13은 또는 Ci-5의 직쇄 또는 측쇄 알킬이 고,
나아가, 상기 R14는
Figure imgf000006_0001
또는 d-s의 직쇄 또는 측쇄 알콕시이고; 상기 R1ᅳ 및 R2는 이들이 결합 되어있는 탄소 원자와 함께 , N, 0 및 S로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 헤테로 원자를 포함하는 C5-10 헤테로사이클로알킬을 형성할 수 있고;
R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, 및 R10은 독립적으로 -H, 할로겐， 비 치환 또는 하나 이상의 할로겐이 치환된 d-5의 직쇄 또는 측쇄 알킬이 고，
여기서， 상기 R4와 R7, 또는 R6과 R9는 이들이 함께 연결되어 있 는 탄소 원자들과 함께 C5-6의 고리를 형성할 수 있고， 상기 C5-6의 고 리에는 할로겐 , d-5 직쇄 또는 측쇄 알킬 , 및 =0로 이투어지는 군으로 부터 선택되는 하나 이상의 치환기가 치환될 수 있고 ;
X는 -0-， -S-, 또는 -CH2-이고;
R11은 -0H, 할로겐， -10의 직쇄 또는 측쇄 알킬， d-u^ 직 쇄 또는 측쇄 알콕시ᅵ 또는 =0이고;
：ΤΤΓΤ:는 단일 또는 이중결합이고; a는 0-3의 정수이다. 또한， 본 발명은 하기 반웅식 1에 나타난 바와 같이，
화학식 2로 표시되는 화합물과 화학식 3으로 표시되는 화합물을 유기용매에서 반웅시켜 화학식 4로 표시되는 화합물을 제조하는 단계 (단계 1);
상기 단계 1에서 제조된 화학식 4로 표시되는 화합물의 보호기를 제거하여 화학식 5로 표시되는 화합물을 제조하는 단계 (단계 2); 및 상기 단계 2에서 제조된 화학식 5로 표시되는 화합물과 화학식 6 으로 표시되는 화합물을 반웅시켜 화학식 1로 표시되는 화합물올 제조 하는 단계 (단계 3);를 포함하는 것을 특징으로 하는 상기 화학식 1로 표시되는 화합물의 제조방법을 제공한다.
[반웅식 1] 조광함 성유학
Figure imgf000007_0001
(상기 반응식 1에서，
R1, R2, R3, R4, R5, R R7, R8, R9, R10, R11, X， a, 및 상기 화학식 1에서 정의한 바와 같고
PG는 보호기이다) . 나아가, 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 화합물， 이의 이성질체， 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 하는 C형 간염 바이러스에 의한 간질환 예방 또는 치료용 약학적 물을 제공한다 . 또한, 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 화합물， 이의 광학 이성질체， 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유 포심제 [ ¬장유에 y 6
아리 ¬이본및대한
하는 C형 간염 바이러스에 의한 간질환 예방 또는 개선용 건강기능식 품 조성물을 제공한다. 효과】
발명에 따른 벤지딘 유도체는 C형 간염 바이러스에 대한 항복 러스 활성을 포함하는 뛰어난 항바이러스 활성을 나타내고 ᅳ 세 한 독성이 없으며， 생체 내에서 우수한 약리활성을 나타내고 혈장에서도 독성이 없음이 확인됨으로써， 이를 유효성분으로 포함하는 약학적 조성물은 C형 간염 바이러스에 의해 발병되는 급성 C 형 간염， 만성 C형 간염 , 간경변， 간세포성 암과 같은 간질환 예방 또 는 치료용 먁학적 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.
【도면의 간단한 설명 】
도 1은 실험예 4에서 실시예 16의 화합물을 경구 투여 및 투여한 후， 측정된 약물 투여 시간에 따른 혈장 내 약물 농도를 한 그래프이다. 도 2는 실험예 4에서 측정된 약물 투여 시간에 따른 혈장 내 약 물 농도 결과를 이용하여 비구획 약물동태학 매개변수 (noncompar tment a 1 pharmacokinetic parameter)를 도시한 그래프이다.
【발명의 실시를 위한 최선의 형태 】
이하， 본 발명을 상세히 설명한다. 본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 화합물， 이의 광학 이성도정질 맥시 체， 또는 이의 약학적으로 허용가능한 옆을 제공한다.
[화학식 1]
Figure imgf000008_0001
상기 화학식 1에서 ,
R1, 및 R2는 독립적으로 -H, -애， 할로겐， C— 10의 직쇄 또는 측 쇄 알킬 , ― 10의 직쇄 또는 측쇄 알콕시， 비치환 또는 치환된 (：6-10의 아릴， -NR12R13, 또는 -NHC(=0)R14이고，
여기서 , 상기 치환된 (：6-10의 아릴은 d-5의 직쇄 또는 측쇄 알킬， d-5의 직쇄 또는 측쇄 알콕시， 및 할로겐으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기가 치환될 수 있고，
또한， 상기 R12, 및 R13은 -H, 또는 d-5의 직쇄 또는 측쇄 알킬이 고，
나아가， 상기 R14는 -H, 또는 d-5의 직쇄 또는 측쇄 알콕시이고; 상기 R1, 및 R2는 이들이 결합 되어.있는 탄소 원자와 함께 , N, 0 및 S로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 해테로 원자를 포함하는 C5-10 헤테로사이클로알킬을 형성할 수 있고;
R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, 및 R10은 독립적으로 -H， 할로겐， 비 치환 또는 하나 이상의 할로겐이 치환된 d-5의 직쇄 또는 측쇄 알킬이 고，
여기서， 상기 R4와 R7, 또는 R6과 R9는 이들이 함께 연결되어 있 는 탄소 원자들과 함께 C5-6의 고리를 형성할 수 있고， 상기 C5-6의 고 리에는 할로겐 : , Ci-5 직쇄 또는 측쇄 알킬 , 및 = 0로 이루어지는 군으로 부터 선택되는 하나 이상의 치환기가 치환될 수 있고 ;
X는 -0-， -s -， 또는 -CH2-이고;
R11은 -H, -0H, 할로겐， d— 10의 직쇄 또는 측쇄 알킬， 10의 직 쇄 또는 측쇄 알콕시， 또는 =0이고
ΓΓΤΤΤΓ는 단일 또는 이중결합이고; a는 0-3의 정수이다. 바람직하게는，
R1, 및 R2는 독립적으로 -H, -0H, 할로겐， d-5의 직쇄 또는 측쇄 알킬， d-5의 직쇄 또는 측쇄 알콕시 ， 비치환 또는 치환된 C6-8의 아릴， -NR12R13, 또는 -NHC(=0)R14이고，
여기서 , 상기 치환된 C6-8의 아릴은 d-s의 직쇄 또는 측쇄 알킬， d-5의 직쇄 또는 측쇄 알콕시， 및 할로겐으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기가 치환될 수 있고，
또한， 상기 R12, 및 R13은 -H, 또는 d-3의 직쇄 또는 측쇄 알킬이 고，
나아가， 상기 R14는 -H, 또는 d-3의 직쇄 또는 측쇄 알콕시이고,; 상기 R1, 및 R2는 이들이 결합 되어있는 탄소 원자와 함께， N, 0， 및 s로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 헤테로 원자■ 포함하는 C5-8 해테로사이클로알킬을 형성할 수 있고;
R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, 및 R10은 독립적으로 할로겐 , 비 치환 또는 하나 이상의 할로겐이 치환된 d— 5의 직쇄 또는 측쇄 알킬이 고
여기서， 상기 R4와 R7ᅳ 또는 R6과 R9는 이들이 함께 연결되어 있 는 탄소 원자들과 함께 C5-6의 고리를 형성할 수 있고, 상기 C5-6의 고 리에는 할로겐， d-5 직쇄 또는 측쇄 알킬， 및 =0로 이루어지는 군으로 부터 선택되는 하나 이상의 치환기가 치환될 수 있고 ;
X는 -S-, 또는 -CH2-이고；
R11은 -H, -OH, d-5의 직쇄 또는 측쇄 알킬， d-5의 직쇄 또는 측 쇄 알콕시 또는 =0이고 ;
：는 단일 또는 이중결합이고; a는 0-2의 정수이다 더욱 바람직하게는，
R1, 및 R2는 독립적으로 메틸， 이소프로필 tert-부틸， 페닐， 이메틸 ο]·미노， 다이에틸아미노, 또는 메톡시 7 보닐 < 미노이고，
여기서 , 상기 R1, 및 R2는 이들이 결합 되어있는 탄소 원자와
Figure imgf000010_0001
께 , 테트라하이드로퓨란을 형성할 수 있고;
R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, 및 R10은 독립적으로 -F, -C1 , - Br， -CF3 , 또는 메틸이고，
여기서 , 상기 R4와 R7, 또는 R6과 R9는 이들이 함께 연결되어 있 는 탄소 원자들과 함께 C5의 고리를 형성할 수 있고， 상기 C5의 고리 에는 -F, =으 및 메틸로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기가 치환될 수 있고 ;
X는 -S -， 또는 -CH2-이고 ; R11은 또는 =0이고；
：는 단일 또는 이중결합이고 a는 0-1의 정수이다 상기 화학식 1로 표시되는 화합물은 하기의 화합물 군으로부터 선택되는 어느 하나일 수 있다.
(1) 다이메틸 ((lR,l'R)-((2S,2'S)_2,2'-(((3,3'-다이메틸- [ 1， 1 '―바이페닐] -4 , 4 '-다이일 )비스 (아잔다이일))비스 (카보닐))비스 (피 를리딘 -2,1-다이일))비스 (2-옥소 -1-페닐에탄 -2,1-다이일))다이카바메 이트;
(2) 다이메틸 ((lR,l'R)-((2S,2'S)-2,2'-(((2,2'_비스 (트리플루 오로메틸) -[1， Γ-바이페닐] -4，4'—다이일)비스 (아잔다이일 ))비스 (카보 닐 ))비스 (피를리딘 -2,1-다이일 ))비스 (2-옥소 -1-페닐에탄— 2,1-다이일 )) 다이카바메이트;
(3) 다이메틸 ((lR,l'R)-((2S,2'S)-2,2'-(((2,2'-다이메틸-
[1， Γ-바이페닐] -4,4' -다이일)비스 (아잔다이일))비스 (카보닐))비스 (피 를리딘—2,1-다이일))비스 (2-옥소 -1-페닐에탄 -2，1-다이일))다이카바메 이트; '
(4) 다이메틸 ((lR,l'R)-((2S,2'S)-2,2'-(((9H-플루오렌 -2,7-다 이일)비스 (아잔다이일))비스 (카보닐 ))비스 (피를리딘 -2， 1-다이일))비스
(2—옥소 -1-페닐에탄 -2,1-다이일 ))다이카바메이트；
(5) 다이메틸 ((lR,l'R)-((2S,2'S)-2,2'-(((2,2'—다이플루오로- [ 1， 1 ' -바이페닐] -4 , 4 ' -다이일 )비스 (아잔다이일))비스 (카보닐))비스 (피 를리딘 -2,1-다이일 ))비스 (2-옥소 -1-페닐에탄 -2，1-다이일 ))다이카바메 이트;
(6) 다이메틸 (( ，1'10-((25，2'3)-2，2'-(((2，2'-다이클로로- [ 1， 1 '-바이페닐] -4， 4 다이일 )비스 (아잔다이일))비스 (카보닐))비스 (피
-를리딘 -2,1-다이일))비스 (2-옥소 -1-페닐에탄 -2,1-다이일))다이카바메 이트;
(7) 다이메틸 ((1 ，1'!0-((23，2'3)-2，2'-(((2，2'-다이브로모-
[1，1'-바이페닐 ]— 4,4' -다이일 )비스 (아잔다이일 ))비스 (카보닐))비스 (피 를리딘 -2,1-다이일))비스 (2-옥소 -1-페닐에탄 -2,1-다이일))다이카바메 이트; ■
(8) 다이메틸 ((1R,1'R)-((2R,2'R)— 2，2'-(([1，1' -바이페닐] - 4,4'-다이일비스 (아잔다이일 ))비스 (카보닐))비스 (피롤리딘 -2, 1-다이 일 ))비스 (2-옥소 -1-페닐에탄 -2， 1-다이일 ))다이카바메이트;
(9) 다이메틸 ((lR,l'R)-((5S,5'S)-5,5'-(([l,r-바이페닐] - 4,4'-다이일비스 (아잔다이일 ))비스 (카보닐))비스 (3—옥소피를리딘 -5, 1- 다이일))비스 (2-옥소 -1-페닐에탄 -2， 1-다이일))다이카바메이트；
(10) 다이메틸 ((1 ，1 (23，2'3)-2，2'-(([1，1'-바이페닐]-
4,4'-다이일비스 (아잔다이일 ))비스 (카보닐))비스 (피페리딘 -2， 1-다이 일))비스 ( 2-옥소 -1-페닐에탄 -2， 1-다이일))다이카바메이트;
(11) 다이메틸 ((lR,l'R)-((2R,2'R)-2,2'-(([l,r-바이페닐] - 4,4' -다이일비스 (아잔다이일 ))비스 (카보닐))비스 (피페리딘 -2， 1-다이 일))비스 (2-옥소 -1-페닐에탄 -2，1-다이일))다이카바메이트;
(12) 다이메틸 (( ，1'10-((23，2'3)-2，2'-(([1，1'-바이페닐]- 4， 4'-다이일비스 (아잔다이일))비스 (카보닐))비스 (2-메틸피를리딘 -2， 1- 다이일))비스 (2-옥소— 1-페닐에탄 -2,1-다이일 ))다이카바메이트；
(13) 다이메틸 (2R,2'R)-1,1'-((2S, 2 ' S)-2ᅳ 2 ' - (바이페닐 -4， 4 ' - 다이일비스 (아잔다이일 ))비스 (옥소메틸렌)비스 (피를리딘 -2,1-다이일 )) 비스 (3-메틸 -1-옥소부탄 -2,1-다이일)다이카바메이트;
(14) (S,2S,2'S)-N,N'- (바이페닐 -4，4'-다이일)비스 (1-((S)— 2- (다 이메틸아미노 ) -2-페닐아세틸)피를리딘 -2-카복스아마이드);
(15) (S,2S,2'S)-N,N'_ (바이페닐 -4，4'-다이일)비스 (l-((S)-2- (다 이에틸아미노) -2-페닐아세틸)피를리딘 -2-카복스아마이드) ;
(16) 다이메틸 (lS,l'S)-2,2'-((2S, 2S ' )_2， 2 ' - (바이페닐 -4， 4 ' - 다이일비스 (아잔다이일))비스 (옥소메틸렌)비스 (피를리딘 -2， 1-다이일 )) 비스 (2-옥소 -1-페닐에탄— 2，1-다이일)다이카바메이트
(17) (R,2S,2'S)-N,N'- (바이페닐ᅳ4，4' -다이일)비스 (1-((R) 테트 라하이드로퓨란 -2-카보닐)피를리딘 -2-카복스아마이드；
(18) 다이메틸 (2S, 2'S)— 1，1'— ((2S,2R')-2,2'- (바이페닐 -4,4'- 다이일비스 (아잔다이일 ))비스 (옥소메틸렌)비스 (피를리딘 -2,1-다이일 )) 비스 (1-옥소프로판ᅳ 2， 1-다이일 )다이카바메이트;
(19) 다이메틸 (2S,2S' )-1， l'-((2S,2R' )-2，2'— (바이페닐 -4，4'-다 이일비스 (아잔다이일))비스 (옥소메틸렌)비스 (피를리딘 -2， 1-다이일 ))비 스 (3 ,3-다이메틸 -1-옥소부탄 -2， 1-다이일 )다이카바메이트;
(20) 다이메틸 (2S,2'S)_1, l'-((2S, 2 ' R)-2， 2 ' - (바이페닐 -4， 4 ' - 다이일비스 (아잔다이일))비스 (옥소메틸렌)비스 (피를리딘 -2， 1 -다이일)) 비스 (3-메틸 -1-옥소부탄 -2， 1-다이일 )다이카바메이트 ;
(21) 다이메틸 (15，15')-2，2'-((41?，4'10-4，4'-(바이페닐-4，4'-다 이일비스 (아잔다이일))비스 (옥소메틸렌)비스 (티아졸리딘 -4， 3-다이일)) 비스 (2-옥소 -1-페닐에탄 -2,1-다이일)바이카바메이트;
(22) 다이메틸 ((11^，1'10-((25，2'3)-2，2'-(((9，9-다이플루오로- 9H-플루오렌 -2， 7-다이일)비스 (아잔다이일))비스 (카보닐))비스 (피를리 딘 -2,1-다이일))비스 (2-옥소 -1-페닐에탄— 2， 1-디일))다이카바메이트；
(23) 다이메틸 ((11，1'1 -((23，2'3)-2，2'-(((9，9-다이메틸-911-플 루오렌 2 , 7-다이일)비스 (아잔다이일))비스 (카보닐))바스 (피를리딘 -
2，1-다이일))비스 (2-옥소 -1-페닐에탄— 2， 1-다이일))다이카바메이트 ; 및
(24) 다이메틸 (( ，1'1?)-((23，2'5)-2，2'-(((9-옥소—911-플루오렌 -2， 7-다이일)비스 (아잔다이일 ))비스 (카보닐 ))비스 (피를리딘 -2ᅳ 1-다이 일))비스 (2-옥소 -1ᅳ페닐에탄 -2， 1-다이일))다이카바메이트 . 본 발명에 따른 화학식 1로 표시되는 화합물는 약학적으로 허용 가능한 염의 형태로 사용할 수 있으며， 염으로는 약학적으로 허용가능 한 유리산 (free acid)에 의해 형성된 산 부가염이 유용하다. 산 부가 염은 염산， 질산, 인산， 황산， 브롬화수소산， 요드화수소산， 아질산 또는 아인산과 같은 무기산류와 지방족 모노 및 다이카르복실레이트， 페닐-치환된 알카노에이트, 하이드록시 알카노에이트 및 알칸디오에이 트, 방향족 산류， 지방족 및 방향족 설폰산류와 같은 무독성 유기산， 아세트산， 안식향산， 구연산， 젖산， 말레인산， 글루콘산， 메탄설폰산，
4-를루엔설폰산， 주석산， 푸마르산과 같은 유기산으로부터 얻는다 . 이 러한 약학적으로 무독한 염류로는 설페이트, 피로설페이트, 바이설페 이트， 설파이트， 바이설파이트， 나이트레이트, 포스페이트， 모노하이 드로겐 포스페이트， 다이하이드로겐 포스페이트， 메타포스페이트， 피 로포스페이트 클로라이드, 브로마이드， 아이오다이드， 플루오라이드， 아세테이트， 프로피오네이트， 데카노에이트, 카프릴레이트， 아크릴레 이트， 포메이트， 이소부티레이트, 카프레이트， 헵타노에이트， 프로피 올레이트， 옥살레이트， 말로네이트， 석시네이트, 수베레이트， 세바케 이트， 푸마레이트， 말리에이트， 부틴— 1，4-디오에이트， 핵산 1， 6-디오 에이트， 벤조에이트， 클로로벤조에이트， 메틸벤조에이트， 다이나이트 로 벤조쎄이트， 하이드록시벤조에이트, 메톡시벤조에이트， 프탈레이트， 테레프탈레이트， 벤젠설포네이트， 를루엔설포네이트， 클로로벤젠설포 네이트， 크실렌설포네이트， 페닐아세테이트， 페닐프로피오네이트, 페 닐부티레이트， 시트레이트， 락테이트， 하이드록시부티레이트， 글리콜 레이트， 말레이트， 타트레이트， 메탄설포네이트， 프로판설포네이트， 나프탈렌 -1-설포네이트, 나프탈렌 -2-설포네이트， 만델레이트 등올 포 함한다. ,
본 발명에 따른 산 부가염은 통상의 방법， 예를 들면， 화학식 1 로 표시되는 화합물을 유기용매， 예를 들면 메탄을， 에탄올， 아세톤， 메틸렌클로라이드， 아세토니트릴 등에 녹이고 유기산 또^ 무기산을 가하여 생성된 침전물을 여과， 건조하여 제조되거나， 용매와 과량의 산을 감압 증류한 후 건조하거나 유기용매 하에서 결정화시켜셔 제조 할 수 있다.
또한， 염기를 사용하여 약학적으로 허용가능한 금속염을 만들 수 있다. 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속 염은 예를 들면 화합물을 과량 의 알칼리 금속 수산화물 또는 알칼리 토금속 수산화물 용액 중에 용 해하고， 비용해 화합물 염을 여과하고， 여액을 증발， 건조시켜 얻는다. 이때， 금속염으로는 나트륨， 칼륨 또는 칼슘염을 제조하는 것이 제약 상 적합하다. 또한， 아에 대웅하는 은 염은 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속 염을 적당한 은 염 (예， 질산은)과 반웅시켜 얻는다.
본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 화합물 및 이의 약학적으로 허용가능한 염뿐만 아니라， 이로부터 제조될 수 있는 가능한 용매화물， 수화물， 광학 이성질체 등을 모두 포함한다. 본 발명에 따른 상기 화학식 1로 표시되는 화합물은 C형 간염 바 이러스에 대한 항바이러스 활성이 우수하므로， 이를 유효성분으로 포 함하는 약학적 조성물은 C형 간염 바이러스에 의해 발병되는 급성 C형 간염， 만성 C형 간염， 간경변， 간세포성 암과 같은 간질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물로 유용하게 사용될 수 있다. 또한， 본 발명은 하기 반웅식 1에 나타난 바와 같이 ， 화학식 2로 표시되는 화합물과 화학식 3으로 표시되는 화합물을 유기용매에서 반웅시켜 화학식 4로 표시되는 화합물을 제조하는 단계 (단계 1);
상기 단계 1에서 제조된 화학식 4로 표시되는 화합물의 보호기를 제거하여 화학식 5로 표시되는 화합물을 제조하는 단계 (단계 2); 및 상기 단계 2에서 제조된 화학식 5로 표시되는 화합물과 화학식 6 으로 표시되는 화합물을 반웅시켜 화학식 1로 표시되는 화합물을 제조 하는 단계 (단계 3);를 포함하는 상기 화학식 1로 표시되는 화합물의 제조방법을 제공한다.
[반웅식 1] .
Figure imgf000014_0001
(상기 반웅식 1에서 ,
R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10, R11, X， a, 및 ： ττττ :는 상기 화학식 1에서 정의한 바와 같고;
PG는 보호기이다) . 이하， 본 발명에 따른 화학식 1로 표시되는 화합물의 제조방법을 단계별로 상세히 설명한다. 본 발명에 따른 화학식 1로 표시되는 화합물의 제조방법에 있어 서 , 상기 단계 1은 화학식 2로 표시되는 화합물과 화학식 3으로 표시 되는 화합물을 아마이드화제 (amide reagent)와 함께 유기용매에서 반 웅시켜 화학식 4로 표시되는 화합물을 제조하는 단계이며， 보다 구체 적으로는， 아마이드화제 존재하에서 화학식 2로 표시되는 화합물의 아 민기와 화학식 3으로 표시되는 화합물의 카르복실산기의 아마이드화 반웅을 수행하여 커플링 생성물인 화학식 4로 표시되는 화합물을 제조 하는 단계이다 .
이때 , 상기 사용 가능한 아마이드화제 (amide reagent)는 다이이 소프로필에틸아민 (DIPEA) , 트라아에틸아민 (TEA) 또는 다이메틸아미노 피리딘 (DMAP)와 함께 벤조트리아졸— 1-일-옥시-트리스 (다이메틸아미 노) -포스포니움핵사플루오로포스페이트 (Py-BOP)， 0-벤조트리아졸-
Ν,Ν,Ν,Ν-테트라메틸-유로니움-핵사플루오로-포스페이트 (HBTU)， 2-(7- 아자 -1Η-벤조트리아졸 -1—일 )-1， 1,3，3-테트라메틸유로니움핵사플루오로 포스페이트 (HATU), 하이드록시벤조트리아졸 (HOBt) , 다이사이클로핵실 카르보디이미드 (DCC)， 1-에틸 -3- (3-다이메틸아미노프로필)카르보다이 이미드 (EDC), 카르보닐다이이미다졸 (CDI) 둥을 사용할 수 있으며， 바 람직하게는 1-에틸 -3-(3-다이메틸아미노프로필)카르보다이이미드 (EDC) 를 사용할 수 있다.
또한， 상기 유기용매는 메탄올， 다이메틸포름아마이드， 테트라하 이드로퓨란， 다이클로로메탄， 를루엔 등을 단독으로 또한 흔합하여 사 용할 수 있고， 바람직하게는 다이클로로메탄을 사용할 수 있다.
나아가, 반웅온도는 0°C에서 용매의 비등점 사이에서 수행하는 것이 바람직하고， 반웅시간은 특별한 제약은 없으나 , 0.5-10시간 동안 반웅하는 것이 바람직하다 . 본 발명에 따른 화학식 1로 표시되는 화합물의 제조방법에 있어 서， 상기 단계 2는 상기 단계 1에서 제조된 화학식 4로 표시되는 화합 물의 보호기를 제거하여 화학식 5로 표시되는 화합물을 제조하는 단계 이며 , 보다 구체적으로는 상기 단계 1에서 제조된 화학식 4로 표시되 는 화합물에 포함되어 있는 아민 보호기 (PG)를 탈보호화제를 이용하여 탈보호화 반웅시킴으로써 아민 보호기가 탈보호화된 화학식 5로 표시 되는 화합물을 제조하는 단계이다.
이때， 상기 화학식 3으로 표시되는 화합물에 포함되어 있는 아민 보호기 (PG)로는 t-부톡시카보닐 (Boc)， 9H-플로렌 -9-일메록시카보닐 (Fmoc)， 트라이틸 (trityl), 벤질， 클로로아세틸 , 벤질옥시카보닐， p- 메톡시벤질옥시카보닐， 포밀， 트라이플루오로아세틸 , P-를루엔술포닐， 벤젠술포닐 , 메탄술포닐， P-니트로벤질옥시카보닐， 2，2，2-트라이클로 로에록시카보닐， 알릴옥시카보닐 (Alloc) 등을 사용할 수 있으며， 바람 직하게는 t-부록시카보닐 (Boc)을 사용할 수 있다.
또한， 본 발명에 따른 상기 단계 2의 탈보호화 조건은 보호화된 보호기에 따라 통상적으로 사용되는 비보호화 조건을 사용할 수 있다. 나아가， 반웅온도는 0°C에서 용매의 비등점 사이에서 수행하는 것이 바람직하고， 반웅시간은 특별한 제약은 없으나， 0.5-10시간 동안 반웅하는 것이 바람직하다 . 본 발명에 따른 화학식 1로 표시되는 화합물의 제조방법에 있어 서， 상기 단계 3은 상기 단계 2에서 제조된 화학식 5로 표시되는 화합 물과 화학식 6으로 표시되는 화합물을 아마이드화제와 함께 반웅시켜 화학식 1로 표시되는 화합물을 제조하는 단계이며， 보다 구체적으로는， 아마이드화제 존재 하에서 상기 단계 2에서 탈보호화된 화학식 5로 표 시되는 화합물의 아민기와 화학식 6으로 표시되는 카르복실산기의 아 마이드화 반웅을 수행하여 화학식 1로 표시되는 화합물을 제조하는 단 계이다.
이때， 상기 사용 가능한 아마이드화제 (amide reagent)는 다이이 소프로필에틸아민 (DIPEA), 트라이에틸아민 (TEA) 또는 다이메틸아미노 이으학
피리딘 (DMAP)와 함께 벤조트리아졸 -1-일-옥시-트리스 (다이메의로적틸아미 노) -포스포니움핵사플루오로포스페이트 (Py-B0P)， 0-벤조트리아졸- 조광함 Ν,Ν,Ν,Ν-테트라메틸 -유로니움-핵사플루오로 -포스페이트 (HBTU)， 2-(7- 성학유 아자 -1Η-벤조트리아졸 -1-일 ) -1，1，3，3-테트라메틸유로니움핵사플루오로 포스페이트 (HATU), 하이드록시벤조트리아졸 (HOBt)， 다이사이클로핵실 카르보디이미드 (DCC)， 1-에틸— 3-(3-다이메틸아미노프로필)카르보다이 이미드 (EDO, 카르보닐다아이미다졸 (CDI) 등을 사용할 수 있으며， 바 람직하게는 1ᅳ에틸 -3-(3-다이메틸아미노프로필 )카르보다이이미드 (EDC) 를 사용할 수 있다.
또한 , 상기 유기용매는 메탄올， 다이메틸포름아마이드， 테트라하 이드로퓨란， 다이클로로메탄， 를루엔 등을 단독으로 또한 흔합하여 시— 용할 수 있고， 바람직하게는 다이클로로메탄을 사용할 수 있다.
나아가， 반웅온도는 0°C에서 용매의 비등점 사이에서 수행하는 것이 바람직하고， 반웅시간은 특별한 제약은 없으나， 0.5-10시간 동안 반웅하는 것이 바람직하다 . 또한， 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 화합물，
이성질체 , 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분
하는 C형 간염 바이러스에 의한 간질환 예방 또는 치료용 약
물을 제공한다. 본 발명에 따른 약학적 조성물에 있어서， 상기 C형 간염 바이러 스에 의한 간질환은 급성 C형 간염， 만성 C형 간염， 간경변， 간세포성 암 등을 들 수 있다. 이에 , 본 발명에 따른 화학식 1로 표시되는 화합물의 항 C형 바 이러스 활성을 평가하였다. 구체적으로， 발광 효소 유전자를 포함하는
C형 간염 바이러스를 접종한 간암 세포에 본 발명에 따른 화학식 1의 화합물을 ΙμΜ의 농도로 처리한 결과， C형 간염 바이러스는 낮은 농도 의 화학식 1로 표시되는 화합물에 의해 억제되는 것으로 나타났다 (실 험예 1 참조). 또한， 복제된 C형 간염 바이러스에 본 발명에 따른 화학식 1로 표시되는 화합물을 처리한 실험에서 항바이러스 활성을 나타내는 EC50 값이 낮은 농도 임이 확인되었으며， 특히 실시예 2， 3， 4， 5， 6， 7, 9， 16， 21， 22， 23 및 24에서 제조된 화합물은 각각 매우 낮은 EC50 값을 갖는 것으로 확인되었다 (실험예 2 참조). 이로부터 본 발명에 따른 화 학식 1로 표시되는 화합물은 C형 간염 바이러스에 대한 항바이러스 활 성이 우수한 것을 알 수 있다.
구체적으로， 본 발명에 따른 화학식 1로 표시되는 화합물은 바이 러스의 RNA 복제 (Replication)에 필요한 인자로 알려진 NS5A(Nonstructural protein 5A)를 타겟 (target)으로 작용한다. 상가 NS5A는 HCV RNA 복제 (replication)에 관여하는 인산화 형태의 56 kDa 의 바이러스 내의 단백질로서， 숙주세포 멤브린에 접합을 촉매하는 양 친매성 알파 헬릭스 (amphipathic alpha helix)구조를 가지고 또한 바 이러스 RNA 복제， 아연 (zinc) 결합 모티프 (Cys 39， 57， 59 및 80)， PI3K, PKR 및 NS5B와의 결합， 및 바이러스 조합 역할을 담당하는 1 내 지 3의 도메인으로 구성되어 있다 .
기존의 NS5A로 알려진 억제제로는 ACH-2928, AZD-7295, PPI-461, BMS 824393, GS-5885 및 Vertex 등이 있다.
상기 NS5A는 독특한 아연 -결합 위치 (zinc binding site)를 가지 고 있기 때문에 상기 위치에 본 발명에 따른 화학식 1로 표시되는 화 합물이 결합하여 NS5A의 저해제로서의 역할을 함으로써 C형 간염 바이 러스에 대한 항바이러스 활성을 나타낼 것으로 예상되며， 앞으로 추가 적인 연구가 더욱 진행되어야 하는 필요성이 있다. 나아가， 본 발명에 따른 실시예 1 내지 실시예 21의 화합물의 세 포독성을 평가한 결과， 1 μΜ의 농도로 처리한 경우 세포독성이 없는 것으로 확인되었다. 이로부터， 본 발명에 따른 화학식 1로 표시되는 화합물은 세포독성이 낮은 것을 알 수 있다 (실험예 3 참조). 또한， 본 발명에 따른 화학식 1로 표시되는 화합물에 대한 약물 '동력학 실험을 수행한 결과， 2시간 내에 혈중 최대 농도에 도달하였으 며， 생체 이용률은 20%인 것으로 확인되었다. 이로부터 본 발명에 따 른 화합물의 약리활성이 우수한 것을 알 수 있다 (실험예 4， 도 1 및 도 2 참조). 나아가， 본 발명에 따른 화학식 1로 표시되는 화합물의 hERG(human Ether-a-go-go-Re 1 at ed Gene) 리간드 결합 분석을 하기 위 하여 실험을 수행하였다. 그 결과， 실시예 16 화합물의 분극화도를 통 해 측정된 hERG의 억제 유효농도는 9.8 μΜ인 것으로 나타났다. 반면， hERG의 저해제로서 알려져 있는 아스테미졸을 사용한 대조군의 경우 hERG의 억제 유효농도는 0.0019 μΜ으로， 본 발명에 따른 실시예 16의 화합물에 비하여 약 5160배의 높은 hERG 저해활성이 있는 것으로 나타 났다. 이로부터， 본 발명에 따른 실시예 16의 화합물은 hERG에 대한 억제 활성이 현저히 낮으므로 돌연사를 유발하는 심장독성에 대한 부 작용이 없는 것을 알 수 있다 (실험예 5 참조). 또한， 본 발명에 따른 화학식 1로 표시되는 화합물의 혈장 안정 성 (생체 내 세포독성 )을 평가하기 위하여 실험을 수행하였다. 그 결과， 마우스 혈장에 본 발명에 따른 실시예 16의 화합물을 처리하고 4시간 이 경과된 후에도 마우스 혈장의 생존률은 99% 이상인 것으로 나타났 다. 이로부터， 본 발명에 따른 실시예 16의 화합물은 생체 내 세포독 성이 없는 것을 알 수 있다 (실험예 6 참조). 따라서， 본 발명에 따른 화학식 1로 표시되는 화합물은 C형 간염 바이러스에 대한 항바이러스 활성이 우수하고， 세포 및 심장에 대한 독성이 없어 인체에 안전할 뿐만 아니라， 인체 내 약리활성이 우수하 고 타약물과 병용투여가 가능하여 다양한 치료 방법의 적용이 가능하 므로， 이를 유효성분으로 함유하는 약학적 조성물은 C형 간염 바이러 스에 의하여 발병하는 급성 C형 간염， 만성 C형 간염， 간경변， 간세포 성 암과 같은 간질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물로 유용하게 사용될 수 있다. 본 발명의 약학적 조성물을 의약품으로 사용하는 경우, 상기 화 학식 1로 표시되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유 효성분으로 함유하는 약학적 조성물은 임상투여 시에 다양한 하기의 경구 또는 비경구 투여 형태로 제제화되어 투여될 수 있으나， 이에 한 정되는 것은 아니다.
경구 투여용 제형으로는 예를 들면 정제， 환제， 경 /연질 캅셀제 액제 , 현탁제 , 유화제， 시럽제 , 과립게， 엘릭시르제， 트로키제 등이 있는데， 이들 제형은 유효성분 이외에 희석제 (예 : 락토즈， 덱스트로즈， 수크로즈， 만니를， 솔비틀， 셀를로즈 및 / 또는 글리신), 활택제 (예 : 실리카， 탈크， 스테아르산 또는 그의 마그네슘염 또는 칼슘염 및 /또는 폴리에틸렌 글리콜)를 함유하고 있다. 또한， 정제는 마그네슘 알루 늄 실리케이트, 전분 페이스트, 젤라틴， 메틸셀를로즈， 나트륨 카복 메틸셀를로즈 및 /또는 폴리바닐피를리딘과 같은 결합제를 함유할 있으며， 경우에 따라 전분， 한천， 알긴산 또는 그의 나트륨염과 같 붕해제 또는 비등 흔합물 및 /또는 흡수제， 착색제 , 향미제 및 감미 를 함유할 수 있다 상기 화학식 1로 표시되는 화합물을 유효성분으로 하는 약학적 조성물은 비경구 투여할 수 있으며， 비경구 투여는 피하주사， 정맥주 사 , 근육 내 주사 또는 흉부 내 주사를 주입하는 방법에 의한다.
이때， 비경구 투여용 제형으로 제제화하기 위하여 상기 화학식 1 로 표시되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 안정제 또는 완충제와 함께 물에 흔합하여 용액 또는 현탁액으로 제조하고， 이를 엄플 또는 바이알 단위 투여형으로 제조할 수 있다. 상기 조성물은 멸 균되고 /되거나 방부제， 안정화제， 수화제 또는 유화 촉진제， 삼투압 조절을 위한 염 및 /또는 완층제 등의 보조제， 및 기타 치료적으로 유 용한 물질을 함유할 수 있으며 , 통상적인 방법인 흔합， 과립화 또는 코팅 방법에 따라 쎄제화할 수 있다.
상기 화학식 1로 표시되는 화합물을 유효성분으로 함유하는 약학 적 조성물의 인체에 대한 투여량은 환자의 나이， 몸무게， 성별， 투여 형태， 건강상태 및 질환 정도에 따라 달라질 수 있으며， 바람직하게는 0.01 내지 200 mg/kg/일의 양으로 의사 또는 약사의 판단에 따라 일정 시간 간격을 1일 수회， 바람직하게는 1일 1회 내지 3회로 분할하여 경 구 또는 비경구적 경로를 통해 투여할 수 있다. 또한， 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 화합물， 이의 광학은시수미제 이성질체， 또는 이의 식품학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함 유하는 C형 간염 바이러스에 의한 간질환 예방 또는 개선용 건강기능 식품 조성물을 제공한다. 본 발명에 따른 건강기능식품 조성물에 있어서， 상기 C형 간염 바이러스에 의한 간질환으로는 급성 C형 간염， 만성 C형 간염， 간경변， 간세포성 암 등을 들 수 있다. 본 발명에 따른 건강기능식품 조성물은 C형 간염 바이러스에 와 하여 발병되는 간질환의 예방 또는 개선을 목적으로 상기 화학식 1로 표시되는 화합물을 식품， 음료 등의 건강기능 식품에 첨가할 수 있다. 상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 물질을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 드링크제， 육류， 소시지， 빵， 비스킷， 떡 , 초 콜릿， 캔디류， 스낵류， 과자류， 피자， 라면， 기타 면류， 껌류， 아이스 크림류를 포함한 낙농제품， 각종 스프, 음료수， 알코올 음료 및 비타 민 복합제， 유제품 및 유가공 제품 등이 있으며， 통상적인 의미에서의 건강기능식품을 모두 포함한다.
본 발명에 따른 화학식 1로 표시되는 화합물는 식품에 그대로 첨 가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효성분의 흔합량은 그의 사 용 목적 (예방 또는 개선용)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적 으로， 건강기능식품 중의 상기 화학식 1로 표시되는 화합물의 양은 전 체 식품 중량의 0.1 내지 90 중량부로 가할 수 있다. 그러나 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭 취의 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있으며 ， 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로도 사 용될 수 있다.
본 발명의 건강기능성 음료는 지시된 비율로 필수 성분으로서 상 기 화합물을 함유하는 외에는 다른 성분에는 특별한 제한이 없으며 통 상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성 분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이 드， 예를 들어， 포도당， 과당 등; 다이사카라이드, 예를 들어 말토스 , 슈크로스 등; 및 폴리사카라이드, 예를 들어 텍스트린， 시클로텍스트 린 등과 같은 통상적인 당, 및 자일리를， 소르비를， 에리트라이를 등 의 당알코올이다. 상술한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제 (예를 들 면， 타우마틴 , 스테비아 추출물 등) 및 합성 향미제 (예를 들면 , 사카 린， 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물 의 비율은 본 발명의 건강기능식품 100 당 일반적으로 약 1 내지 20 g, 바람직하게는 약 5 내지 12 g이다. 상기 외에 본 발명에 따른 화학식 1로 표시되는 화합물을 유효성 분으로 함유하는 건강기능식품 조성물은 여러 가지 영양제， 비타민， 광물 (전해질)， 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제， 착색제 및 중진제 (예를 들면 , 치즈， 초콜릿 등)， 펙트산 및 그의 염， 알긴산 및 그의 염， 유기산， 보호성 콜로이드 증점제， pH 조절제 , 안정화제， 방 부제 , 글리세린， 알코을， 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그 밖에 본 발명의 건강기능식품 조성물은 천연 과일쥬스 및 과일쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러 한 첨가제의 비율은 그렇게 중요하진 않지만 본 발명에 따른 건강기능 식품 조성물 100 중량부 당 0.1 내지 약 20 중량부의 범위에서 선택되 는 것이 일반적이다.
【발명의 실시를 위한 형태 】
이하， 본 발명을 하기의 실시예 및 실험예에 의하여 더욱 상세히 설명한다.
단， 하기의 실시예 및 실험예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐， 본 발명의 내용이 하기의 실시예 및 실험예에 의해 한정되는 것은 아니다. <제조예 1> (S)-2- (메특시카보닐아미노) -3-메틸부타논산의 제조
Figure imgf000021_0001
L-발린 (valine, 3.9 g, 33.29 mmol)이 용해된 1M의 소듭하이드록 사이드 수용액 (33 ml , 33 議 ol)에 소듐카보네이트 (1.83 g, 17.2 mmol ) 를 첨가하고， 얼음물을 이용하여 넁각시켰다. 냉각된 반웅 혼합물에 메틸 글로로포르메이트 (2.8 ml， 36.1 隱 ol)를 천천히 적가한 다음， 적 가가 완료되면 얼음물을 제거하여 상은으로 등은하여 3.25시간 동안 교반하였다. 그 후， 반웅생성물을 에테르 (17 ml)로 3 차례 세척하고， 물층을 얼음물을 이용하여 넁각시킨 후， 염산 (cone. HC1)으로 pH 1 내 지 2로 산성화하였다. 산성화된 수용액층을 다이클로로메탄 (17 ml)으 로 3 차례 추출하고， 추출된 유기층을 마그네슘설페이트 (MgS04)로 건 조시킨 후 여과하였다. 여과된 유기층을 감압농축하고 별도의 정제없 이 백색 고체의 목적화합물 (5 g, 86%)을 얻었다.
¾ 匪 R(400 MHz, DMSO-de, δ =2.5 pm)： 12.51 (br s, 1H) ,
7.32 (d, 1H) , 3.84 (t , 1H) , 3.54 (s, 3H) , 2.03 (m, 1H) , 0.88 (d, J=12, 6H) .
<제조예 2> (R)-2- (메톡시카보닐아미노) -3-메틸부타논산의 제조
Figure imgf000021_0002
상기 제조예 1에서 L-발린 (valine, 3.9 g, 33.29 mmol)을 사용하 는 대신에 D-발린 (valine, 586 mg, 5 mmol)을 사용하는 것을 제외하고 는 상기 제조에 1과 동일한 방법으로 수행하여 백색 고체의 목적화합 물 (760 mg, 87%)을 얻었다.
H NMR(400 MHz, DMS0-d6) δ =2.5 ppm)： 12.54 (s, 1H) , 7.32
(d, 1H), 3.84 (t , 1H) , 3.54 (s, 3Η) , 2.03 (m, 1Η)， 0.87 (d, 6H) . <제조예 3> (R)-2- (다이메틸아미노) -2-페닐아세트산의 제조
Figure imgf000021_0003
으페닐글라이신 (1 10 隱 ol), 포름알데하 이드 (5 ml , 37 중량 % 수용액 ) 및 1N의 염산 (4.5 ml )가 용해된 흔합물 을 10% Pd/C(310 mg, 0.3 mmol)가 현탁된 메탄올 (1.5 ml)에 첨가하고, 수소 가스 (H2 풍선)를 주입하여 밤샘 교반하였다. 그 후， 상기 반웅 흔합물을 셀라이트 (Cel ite) 여과하고 여과된 흔합물을 감압농축하였다. 농축된 흔합물올 이소프로판을로 재결정하껴 백색 침상 염산염 형태의 목적화합물 (1.84 g, 89%)을 얻었다.
¾ 丽 R(600 MHz, DMSO-de, δ =2.5 ppm)： 7.43-7.39 (m, 5H) , 4.47 (s , 1Η) , 2.43 (s, 6H) . 제조예 4> (R)-2- (다이에탈아미노) -2-페닐아세트산의
Figure imgf000022_0001
Figure imgf000022_0002
메탄올 (13 ml )에 D-페닐글라이신 (756 mg, 5 mmol)을 용해시킨 흔 합물을 얼음물로 넁각시키고， 소듐시아노보로하이드라이드 (786 mg, 12.5 mmol )를 수 분동안 나눠서 첨가한 후， 5분 동안 교반하였다. 상 기 반웅 혼합물에 아세트알데하이드 (1.3 ml , 22.5 隱 ol )를 천천히 적 가하고 저은으로 유지하면서 45분 동안 교반한 다음， 상은으로 등은하 여 6.5시간 동안 교반하였다. 교반을 유지하면서 얼음물을 이용하여 넁각시키고， 염산 (cone. HCI)을 적가하여 반웅물의 pH를 1.5 내지 2.0 으로 산성화하였다. 산상화된 반응 흔합물을 천천히 상온으로 등온시 키면서 밤샘 교반하여 반응을 종결시키고， 생성된 반웅생성물을 여과 하여 부유물을 제거하였다. 여과된 여액을 감압증류하여 농축시키고， 에탄올로 재결정하여 백색 염산염 형태의 목적화합물 (625 mg, 60%)을 얻었다.
lU NMRC600 MHz, DMS0-d6, δ =2.5 ppm)： 10.77 (br s, 1H)， 7.72 (m, 2H) , 7.51 (m, 3H)， 5.33 (s, 1H)， 3.17 (app br s, 2H) , 3.01 (app br s, 2H)， 1.20 (app br s, 6H) .
<제조예 5> (R)-2- (메록시카보닐아미노) -2-페닐아세트산의 제조
Figure imgf000022_0003
상기 제조예 1에서 L-발린 (val ine, 3.9 g, 33.29 画 ol )을 사용하 는 대신에 D—페닐글라이신 (1.5 g, 10 隱 ol )을 사용하는 것을 제외하고 는 상기 제조에 1과 동일한 방법으로 수행하여 백색 고체의 목적화합 물 (760 mg, 87%)을 얻었다.
XH NMR(600 MHz, DMSO- δ =2.5 ppm)： 12.79 (br s, 1H), 7.96 (d, J=12, 1H) , 7.40-7. (m, 5H) , 5.13 (d, J=12, 1H) , 3.55 (s, 3H) .
：제조예 6> (S)— 2- (메톡시카보닐아미노)프로파논산의 제조
Figure imgf000023_0001
상기 제조예 1에서 L-발린 (valine, 3.9 g, 33.29 隱 ol)을 사용하 는 대신에 L-알라닌 (0.89 g, 10 隱 ol)을 사용하는 것을 제외하고는 상 기 제조에 1과 동일한 방법으로 수행하여 무색 오일의 목적화합물 (0.83 g, 56%)을 얻었다.
XH 匪 R(600MHz, δ =7.26 ppm, CDC13)： 10.00 (br s, 1H) , 5.49 (d, J=12, 1H) , 4.38 (m, 1H) , 3.69 (s, 3H) , 1.45 (d, J=12, 3H) .
(S)-2-(2-메톡시 -2-옥소에틸) -3,3-다이메틸부타논산 의 제조
Figure imgf000023_0002
상기 제조예 1에서 L-발린 (valine, 3.9 g, 33.29 隱 ol)을 사용하 대신에 L-tert-류신 (0.656 g, 5 隱 ol)을 사용하는 것을 제외하고는 상기 제조에 1과 동일한 방법으로 수행하여 백색 고체의 목적화합물 (0.67 g, 71%)을 얻었다.
丽 R(600MHz, δ =7.26 ppm, CDC13)： 9.57 (br s, 1H)， 5.31 (d, 1H) , 4.20 (d, 1H) , 3.70 (s, 3H) , 1.03 (s, 9H) .
<제조예 8> (S)-3-(tert-부록시카보닐)티아졸리딘 -4-카르복실산 제조
Figure imgf000023_0003
아세토나이트릴 (50 ml), 트라이에틸아민 (26 ml) 및 증류수 (50 ml)의 흔합용벡에 L-티오프를린 (10 g, 75 隱 ol)을 용해시킨 흔합용액 을 0으로 넁각시킨 다음， 다이 -tert-부틸다이카보네이트 (21.3 g, 98 隱 ol)를 첨가하고， 상온으로 천천히 등온하면서 18시간 동안 교반하였 다. 그 후， 반웅생성물을 증류하여 아세토나이트릴을 제거하고, 1N 염 산을 이용하여 pH 2로 산성화하였다. 산성화된 반응생성물을 에틸아세 테이트로 추출하고 , 추출된 유기층을 소금물로 세척한 후, 마그네슘설 페이트 (MgS04)로 건 건조된 유기층을 여과하고， 여과된 유기 층을 감압증류하여 용매가 제거된 목적화합물 (17 g, 97%)을 얻었다.
XH 丽 R(600 MHz, DMSO-de, δ =2.5 ppm)： 12.87 (s, 1H)， 4.62- 4.52 (m, 1H) , 4.87 (d, 1H) , 4.29 (m, 1H)， 3.36 (m, 1H) , 3.10 (m, 1H)，― 1.38-1.34 (app br s, 9H)；
13C NMR(600 MHz, DMS0-d6, δ =39.52 ppm)： 171.85, 152.59, 79.94, 61.01, 48.56, 33.95, 27.85.
<제조예 9> (R)-2- (메특시카보닐아미노) -2-페닐아세트산의 제조
Figure imgf000024_0001
D-페닐글라이신 (1.5 g, 10 睡 ol)이 용해된 수산화나트륨 수용액 (10 ml, 10 讓 ol)에 소듐카보네이트 (0.55 g, 5.2 誦 ol)를 첨가하고, 얼음조를 이용하여 냉각시켰다. 넁각된 반웅 혼합물에 메틸클로로포르 메이트 (0.85 ml, 11.0 隱 ol)를 천천히 적가한 다음， 적가가 완료되면 얼음조를 제거하여 상온으로 등온하여 3.25시간 동안 교반하였다. 그 후， 반웅생성물을 에테르 (18 ml)로 3 차례 세척하고， 물층을 얼음조를 이용하여 넁각시킨 후 , 염산 (cone. HC1)으로 pH 1 내지 2로 산성화하 였다. 산성화된 수용액충을 다이클로로메탄 (18 ml)으로 3 차례 추출하 고， 추출된 유기층을 마그네슘설페아트 (MgS04)로 건조시킨 후 여과하 였다. 여과된 유기층을 감압농축하여 얻은 오일 잔류물을 다이에틸에 테르 /핵산 (~5:4 비율; 10 ml)으로 처리하여 침전물을 얻었다. 상기에 서 얻은 침전물을 다이에틸에테르 /핵산 (~1:3 비율)로 세척 여과하고 진공하에 건조시켜 백색 고체의 목적화합물 (1.4 g, 67%)을 얻었다.
XH 丽 R (DMSO-ie, δ =2.5 ppm, 500 MHz)： 12.79 (br s, 1H) , 7.96 (d, J=12, 1H) , 7.40-7.29 (m, 5H) , 5.13 (d, J=12, 1H) , 3.55 (s, 3H) .
<제조예 10> 9，9-디메틸 -9 ^플루오렌 -2，7-디아민의 제조
단계 1 ： 9, 9-디메틸 -2.7-디나이트로 -9 -플루오렌의 제조
Figure imgf000025_0001
2，7-나이트로 -9 ―플루오렌 (100 mg, 0.39 mmol) 및 Na0t-Bu(75 mg 0.78 醒 ol)의 흔합물을 질소 내， 얼음 욕조에서 DMF에 용해시켰다. 아 이오도메탄 (49 mL, 0.78 隱 ol)을 상기 흔합물에 천천히 첨가하고， 2시 간 동안 흔합한 후, 물을 가하여 침전물을 얻었다. 상기 침전물을 필 터하고 물로 세척한 후， 건조하였다. 별다른 정화과정 없이， 목적생성 물 (89 mg, 80%)을 노란색의 고체 형태로 얻었다.
lH NMR (DMSO-ie, δ =2.5 pm, 400 MHz)： 8.59 (d, 2H) , 8.33 (m 4H), 1.60 (s, 6H) .
13C 丽 R (DMSO-t/6 , δ =39.52 ppm, 100 MHz)： 156.2, 148.1， 142.7, 123.6, 122.9, 118.7， 47.9, 25.6. 단계 2 : 9,9—디메틸 -9 -플루오렌 -2, 7-디아민의 제조
Figure imgf000025_0002
Fe304 ( 15 mg, 0.063 mmol) 및 DMF(1.9 mL)를 오븐-건조된 (oven- dried) 슈탱크 튜브 (Schlenk tube)에 넣고， 아르곤 내 울트라사운드 욕조 (ultrasound bath)에서 1분 동안 소니케이트 (sonicate) 하였다. 상기 단계 1에서 얻은 9，9-디메틸 -2，7-디나이트로 -9 -플루오렌 (90 mg, 0.32 mmol) 및 히드라진 모노하이드레이트 (123 mL , 2.52 讓 ol)를 상기 흔합물에 첨가하였다. 상기 반응 흔합물은 아르곤 내 80°C에서 반웅이 종결될 때까지 흔합하였다. 촉매를 사용하여 자기분리 (magnetic separation) 후， 유기층을 진공 내에서 농축하였다. 잔여물은 CH2C12 및 H20로 분리하였다. 상기 유기층을 브라인으로 세척하고, MgS04로 건조한 후, 필터하고, 진공 내에서 농축하였다. 별다른 정화과정 없이， 목적생성물 (69 mg, 98%)을 노란색의 고체 형태로 얻었다.
XH NMR (DMSO-c/e, δ =2.5 ppm, 400 MHz)： 7.21 (s, 1H)， 7.19 (s, 1H) , 6.6 (d, 2H) , 6.47 (d, 1H) , 6.45(d, 1H)， 4.9 (s, 4H) , 1.3 (s, 6H) .
13C NMR (DMSO-i/e, δ =39.52 ppm, 100 MHz): 153.5, 146.7, 128.4, 118.6, 112.6， 108.5, 45.6, 27.7.
19F NMR (DMSO-de, 377 MHz,): δ -106.7. LC/MS: Anal . Calcd. For [M+H]+ C15H16N2: 225.1386； found 225.1383.
<제조예 11> 9，9-디플루오로 -9 -플루오렌 -2,7-디아민의 제조
단계 1 ： 9, 9-디플루오로ᅳ2，7-디나이트로 -9 -플루오렌의 제조
Figure imgf000026_0001
2，7-나이트로 -9 ^폴루오렌 (100 mg, 0.39 mmol) 및 N-플루오로벤 젠설폰이미드 (N-Fluorobenzenesulfonimide, NFSI)(369 mg, 1.17 誦 ol)를 DMF에 용해한 후， -20°C로 넁각하였다. NaHMDS (1.0 M in THF 1.17 mL, 1.17 mmol)를 5분 동안 방울 단위로 첨가하였다 . 0°C에 시간 동안의 시간을 가진 후， TLC를 통해 반웅이 종결되었음을 확 고 , MeOH를 첨가하여 과량의 염기를 제거 (quench)하였다. 상기 서 션 (suspension)을 셀라이트를 사용하여 필터하고， 진공 내에서 농 였다. 실리카 겔 메시 (mesh)를 잔여물 (residue)에서 준비하였고， 시 크로마토그래피 (si 1 ica gel： EtOAc/hexane as eluent)를 통해 생성물 (22 mg, 19%)을 노란색의 고체 형태로 얻었다.
¾ 匪 R (DMS0―^， δ =2.5 ppm, 400 MHz)： 8.63 (d, 2H)， 8.53 (d 1H) , 8.56 (d, 1H) , 8.36 (s, 1H) , 8.34 (sᅳ 1H) .
13C NMR (DMSO-ie, δ =39.52 ppm, 100 MHz)： 149.1， 142.5, 138.5, 129.2, 144.3, 120.8， 119.6.
19F 画 R (DMSO-de, 377 MHz , )： δ -110.3.
서플목스죽인 - 하하적펜래 2
Figure imgf000026_0002
Fe304 (4 mg, 0.015 mmol) 및 DMF(0.5 mL)를 오본-건조된 (oven- dried) 슈랭크 튜브 (Schlenk tube)에 넣고， 아르곤 내 울트라사운드 욕조 (ultrasound bath)에서 1분 동안 소니케이트 ( soni cat e) 하였다. 상기 단계 1에서 얻은 9,9-디플루오로 -2,7-디나이트로 -9 -플루오렌 (22 mg, 0.075 mmol) 및 히드라진 모노하이드레이트 (29 ≠ , 0.60 隱 ol)를 상기 흔합물에 첨가하였다. 상기 반웅 흔합물은 아르곤 내 80°C에서 반웅이 종결될 때까지 흔합하였다. 촉매를 사용하여 자기분리 (magnetic separation) 후， 유기층을 진공 내에서 농축하였다. 잔여물 은 CH2C12 및 H20로 분리하였다. 상기 유기층을 브라인으로 세척하고， MgS04로 건조한 후， 필터하고， 진공 내에서 농축하였다. 별다른 정화 과정 없이， 목적생성물 (17 mg, 98%)을 노란색의 고체 형태로 얻었다.
XH NMR (DMSO-ie, δ =2.5 ppm , 400 MHz): 7.19 (s, 1H) , 7.17 (s 1H), 6.8 (d, 2H) , 6.61 (d, 1H)， 6.59(d, 1H) , 5.3 (s, 4H).
13C 匪 R (DMSO-o'e, δ =39.52 ppm, 100 MHz)： 148.0, 137.3, 137.1， 127.7, 123.7， 119.8， 116.45， 109.1.
. 19F NMR (DMSO-de, 377 MHz,): δ -106.7.
LC/MS: Anal . Calcd. For [M+H]+ C13H10F2N2 : 233.0885 ; found 233.0885.
<제조예 12> 2 ,7-디아미노 -9 ―플루오렌 -9-온의 제조
Figure imgf000027_0001
9 -플루오렌 -2，그디아민 (294 mg, 1.5 mmol) 및 Cs2C03(1.5 g, 4.5 隱 ol)의 흔합물을 DMS0 (7 mL)에 용해시킨 후， 대기압 하 (under an atmosphere of air)에서 흔합하였다. TLC를 통해 반응물질이 모두 사라졌음을 확인한 후， 상기 용액에 물을 가하여 침전물을 얻었다. 상 기 침전물을 필터하고， 물로 세척한 후， 건조하였다. 별도의 정화과정 없이 목적생성물 (239 mg, 76%)을 고체 형태로 얻었다.
XH 匪 R (DMS0-(/6, δ =2.5 ppm, 400 MHz)： 7.10 (s, 1H)， 7.08 (s 1H) , 6.70 (d, 2H) , 6.57 (d, 1H)， 6.57 (d, 1H) 5.30 (s, 4H) .
13C NMR (DMSO-ie, δ =39.52 ppm, 100 MHz)： 194.9， 148.2, 134.6, 133.3, 119.9， 118.6, 109.7.
LC/MS: Anal. Calcd. For [M+H]+ C13H10N20： 211.0866； found 211.0867.
<실시예 1> 다이메틸 ((lR,l'R)-((2S,2'S)-2,2'-(((3,3'-다이메 틸 -[1，1'-바이페닐] -4，4'-다이일)비스 (아잔다이일 ))비스 (카보닐 ))비스 (피를리딘 -2,1-다이일 ))비스 (2-옥소 -1-페닐에탄 -2,1-다이일 ))다이카바 메이트의 제조
Figure imgf000027_0002
—Boc-L-프를린 (9.47 g, 44.0 mmol) , EDC(9.97 g, 52.0 mmol) , 및 오쏘-를리딘 (4.25 g, 20.0 隱 ol)을 CH2C (30 mL)에서 흔합하고 상 온에서 2시간 교반하였다.
다음으로， 상기에서 얻은 화합물을 CH2C12 및 H20로 분획하고， 유기층을 1N 염산 수용액 및 염수 (brine)로 세척하고， 황산마그네슘으 로 건조하고 여과 후 감압 농축하여 별도의 정제 과정 없이 (2S,2'S)_ 다이 -tert-부틸 2，2'-(((3，3'-다이메틸 -[1， 1'-바이페닐] -4，4'-다이일) 비스 (아잔다이일))비스 (카보닐 ))비스 (피를리딘 -1-카르복실레이트)를 고체로 얻었다 (11.3 g, 93%).
상기에서 얻은 화합물 (144 mg, 0.238 麵 ol)을 CF3C02H(1 mL) 및
CH2C12(1 mL) 혼합용매에 넣고 상은에서 5시간 동안 교반하였다. 감압 하에 휘발성분을 제거하고， /-Pr2NEt(208 μί , 1.192 画 ol)이 용해된 CH2C12(1 mL) 용액을 4분에 걸쳐 넣고， 추가로 EDC(119 mg, 0.620 顏 ol) 및 제조예 9에서 제조한 화합물 (100 mg, 0.572 匪 ol)의 반웅 흔 합물을 상온에서 75분간 교반하였다. 다음으로， 반웅 잔류물을 CH2C12 및 H20로 분획하여 얻은 유기층을 H20 및 염수로 세척하고 황산마그네 슘으로 건조시키고 여과한 후 감압 농축하였다. 상기 잔류물로부터 실 리카겔 메쉬 (mesh)를 준비하고， 이를 플래쉬크로마토그래피 (용리액 : EtOAc/hexane 흔합액 )에 적용하여 목적화합물을 백색 고체로 얻었다 (77 mg, 41%) .
:Η NMR (DMSO-i/e, δ =2.5 ppm, 400 MHz)： 9.31 (s, 2H) , 7.74 (d, 2H) , 7.54-7.23 (m, 16H) , 5.52 (d, 2H) , 4.52 (m, 2H) , 3.85 (m, 2H) , 3.52 (s, 6H) , 3.18 (m, 2H) , 2.28 (s, 6H) , 2.00-1.82 (m, 8H)； 13C 丽 R (DMSO-ie, δ =39.52 ppm, 100 MHz): 170.1， 168.8, 156.1， 137.1， 136.5， 135.4, 132.2, 128.6, 128.2, 128.1, 128.0, 125.2, 123.9， 60.6, 56.8, 51.6， 46.9, 29.1, 24.3, 17.9；
LC/MS: Anal . Calcd. For [M+H]+ C44H48N608 : 789.3606 ; found 789.3597.
<실시예 2> 다이메틸 ((lR,l'R)-((2S,2'S)-2,2'-(((2,2'-비스 (트 리플루오로메틸) -[1,1 '-바이페날] -4,4'-다이일)비스 (아잔다이일))비스 (카보닐))비스 (피를리딘 -2,1-다이일))비스 (2-옥소 -1-페닐에탄 -2,1-다 이일))다이카바메이트의 제조
Figure imgf000028_0001
-Boc-L—프를린 (3.23 g, 15.0 隱 ol), EDC(3.12 g, 16.3 删 ol), 및 2，2'-비스 (트리플루오로메틸)벤지딘 (2.00 g, 6.3 隱 ol)을 CH2C12(20 mL)에서 흔합하고 상온에서 2시간 교반하였다.
다음으로， 상기에서 얻은 화합물을 CH2C12 및 H20로 분획하고， 유기층을 1N 염산 수용액 및 염수 (brine)로 세척하고， 황산마그네슘으 로 건조하고 여과 후 감압 농축하여 별도의 정제 과정 없이 (2S,2'S)- 다이 -tert-부틸 2,2'-(((2，2'-비스 (트리플루오로메틸 )-[1，1'-바이페 닐] -4，4'ᅳ다이일)비스 (아잔다이일 ))비스 (카보닐))비스 (피를리딘 -1-카 르복실레이트)를 고체로 얻었다 (4.3 g, 96%) .
상기에서 얻은 화합물 (357 mg, 0.5 誦 ol )을 CF3C02H(2 mL) 및 CH2C12(2 mL) 흔합용매에 넣고 상온에서 5시간 동안 교반하였다. 감압하에 휘발 성분을 제거하고， /-Pr2NEt(434 ≠ , 2.5 麵 ol )이 용해된 CH2C12(2 mL) 용액을 4분에 걸쳐 넣고, 추가로 EDC(249 mg, 1.3 隱 ol ) 및 제조예 9 에서 제조한 화합물 (251 mg, 1.2 隱 ol )의 반웅 흔합물을 상온에서 75 분간 교반하였다. 다음으로, 반웅 잔류물을 CH2C12 및 H20로 분획하여 얻은 유기층을 H20 및 염수로 세척하고. 황산마그네슘으로 건조시키고 여과한 후 감압 농축 ^하였다. 상기 잔류물로부터 실리카겔 메쉬 (mesh) 를 준비하고， 이를 플래쉬크로마토그래피 (용리액 : EtOAc/hexane 혼합 액 )에 적용하여 목적화합물을 백색 고체로 얻었다 (145 mg, 32%) .
XH 匪 R (DMSO-ie, δ =2.5 ppm, 400 MHz)： 10.29 (s, 2H) , 8.21
(d, 2H) , 7.83 (m, 2H)， 7.75 (d, 2H)， 7.43-7.05 (m, 12H) , 5.51 (d, 2H) , 4.41 (m, 2H) , 3.85 (app br s, 2H) , 3.54 (s, 6H) , 3.20 (app br d, 2H)， 2.06-1.82 (m, 8H)；
13C 匪 R (MSO-de, δ =39.52 ppm, 100 MHz)： 171.26, 168.75, 156.42, 139.30, 137.16， 132.79， 131.36, 128.89, 128.35, 128.25, 125.07, 122.88， 121.81， 116.37, 61.05， 56.97, 51.87, 47.22, 29.45, 24.51；
19F 匪 R (DMSO-de, 377 MHz , ) : δ -57.28；
LC/MS： Anal . Calcd. For [M+H]+ C44H42F6N608: 897.3041； found 897.3046.
<실시예 3> 다이메틸 ((lR,l'R)-((2S,2'S)-2,2'-(((2,2'-다이메 틸 -[1，1'-바이페닐] -4,4'-다이일)비스 (아잔다이일))비스 (카보닐 ))비스 (피를리딘 -2， 1-다이일 ))비스 (2-옥소 -1-페닐에탄 -2,1-다이일 ))다이카바 메이트의 제조
Figure imgf000029_0001
y^-Boc-L-프를린 (2.23 g, 10.4 mmol ) , EDC(2.35 g, 12.3 誦 ol) , 및 meta-를리딘 (1.0 g, 4.7 隱 ol )을 CH2C12(10 mL)에서 흔합하고 상온 에서 2시간 교반하였다. 다음으로， 상기에서 얻은 화합물을 CH2C12 및 H20로 분획하고， 유기층을 1N 염산 수용액 및 염수 (brine)로 세척하고， 황산마그네슘으 로 건조하고 여과 후 감압 농축하여 별도의 정제 과정 없이 (2S,2'S)- 다이 -tert-부틸 2，2'-(((2，2'-다이메틸-[1，1'-바이페닐 ]-4，4'-다이일 ) 비스 (아잔다이일))비스 (카보닐))비스 (피를리딘 -1-카르복실레이트)를 고체로 얻었다 (2.75 g, 96%).
상기에서 얻은 화합물 (292 mg, 0.509 mmol)을 CF3C02H(2 mL) 및 CH2C12(2 mL) 혼합용매에 넣고 상온에서 5시간 동안 교반하였다. 감압 하에 휘발성분을 제거하고， /— Pr2NEt(443 ， 2.54 隱 ol)이 용해된 CH2C12(2 mL) 용액을 4분에 걸쳐 넣고， 추가로 EDC(253 mg, 1.32 mmol) 및 제조예 9에서 제조한 화합물 (256 mg, 1.22 mmol)의 반웅 흔 합물을 상온에서 75분간 교반하였다. 다음으로， 반웅 잔류물을 CH2C12 및 H20로 분획하여 얻은 유기층을 H20 및 염수로 세척하고 황산마그네 슘으로 건조시키고 여과한 후 감압 농축하였다. 상기 잔류물로부터 실 리카겔 메쉬 (mesh)를 준비하고， 이를 플래쉬크로마토그래피 (용리액 : EtOAc/hexane 흔합액 )에 적용하여 목적화합물을 백색 고체로 얻었다 (292 rag, 73%) .
XH NMR (DMSO-ie, δ =2.5 ppm, 400 MHz)： 9.84 (s, 2H) , 7.73 " (d, 2H), 7.59 (s, 2H) , 7.48-7.14 (m, 12H) , 6.87 (d, 2H), 5.51 (d, 2H) , 4.42 (m, 2H) , 3.84 (m, 2H)， 3.55 (s, 6H) , 3.20 (m, 2H) , 1.98 (s, 6H) , 1.97-1.78 (m, 8H)；
13C 匪 R (DMSO-ie, δ =39.52 ppm, 100 MHz)： 170.2, 168.4, 156.1， 137.9， 137.1， 135.8, 135.8, 129.58, 128.62, 128.1， 127.9, 120.5， 116.7, 60.7， 56.8, 51.7, 47.0, 29.4， 24.3, 19.8；
LC/MS: Anal . Calcd. For [M+H]+ C44H48N608： 89.3606； found
789.3605.
<실시예 4> 다이메틸 ((lR,l'R)-((2S,2'S)-2,2'-(((9H-플루오렌- 2,7-다이일)비스 (아잔다이일 ))비스 (카보닐))비스 (피를리딘 -2,1-다이 일))비스 (2-옥소 -1-페닐에탄 -2,1-다이일))다이카바메이트의 제조
Figure imgf000030_0001
-Boc-L-프를린 (323 mg, 1.5 隱 ol), EDC(312 mg, 1.63 mmol), 및 2，7-다이아미노플루오렌 (123 mg, 0.63 mmol)을 CH2C12(2 mL)에서 흔합 하고 상온에서 2시간 교반하였다. 다음으로, 상기에서 얻은 화합물을 CH2C12 및 H20로 분획하고， 유기 ^을 1N 염산 수용액 및 염수 (brine)로 세척하고， 황산마그네슘으 로 건조하고 여과 후 감압 농축하여 별도의 정제 과정 없이 (2S,2'S)_ 다이 -tert-부틸 2， 2' -(((9H-플루오렌 -2,7-다이일 )비스 (아잔다이일))비 스 (카보닐))비스 (피를리딘 -1-카르복실레이트)를 고체로 얻었다 (359 mg 97%) .
상기에서 얻은 화합물 (300 mg, 0.51 麵 ol )을 CF3C02H(2 mL) 및 CH2C12(2 mL) 흔합용매에 넣고 상은에서 5시간 동안 교반하였다. 감맙 하에 휘발성분을 제거하고， /— Pr2NEt(441 μί , 2.5 mmol )이 용해된 CH2C12(2 mL) 용액을 4분에 걸쳐 넣고， 추가로 EDC(253 mg, 1.3 mmol ) 및 제조예 9에서 제조한 화합물 (255 mg, 1.3 瞧 ol )의 반웅 흔합물을 상은에서 75분간 교반하였다. 다음으로， 반웅 잔류물을 CH2C12 및 H20 로 분획하여 얻은 유기층을 H20 및 염수로 세척하고 황산마그네슘으로 건조시키고 여과한 후 감압 농축하였다.ᅳ상기 잔류물로부터 실리카겔 메쉬 (mesh)를 준비하고， 이를 플래쉬크로마토그래피 (용리액 : EtOAc/hexane 흔합액)에 적용하여 목적화합물을 백색 고체로 얻었다 (198 mg, 50%) .
¾ NMR (DMSO-i/e, δ =2.5 ppm, 400 MHz)： 9.92 (s, 2H) , 7.91 (s 2Η)， 7.75-7.69 (m, 4H)， 7.56 (d, 2H) , 7.44-7.13 (m, 10H) , 5.52 (d 2H)， 4.43 (m, 2H)， 3.88-3.83 (m, 2H) , 3.55 (s, 6H) , 3.21 (m, 2H)，
2.04-1.78 (m; 8H)；
13C NMR (DMSO-ie, δ =39.52 ppm, 100 MHz)： 170.2， 168.5， 156.2, 143.6 137.5, 137.2, 136 4， 128.7, 128.1, 127.9， 119.6, 118.1， 116.2, 60.8， 56.8， 51.7 47.0， 36.7, 29.4, 24.3；
LC/MS: Anal . Calcd. For [M+H]+ C43H44N608: 773.3293； found 773.3296.
<실시예 5> 다이메틸 ((lR,l'R)-((2S,2'S)-2,2'-(((2,2'-다이플 루오로 -[1，1' -바이페닐] -4,4'-다이일)비스 (아잔다이일))비스 (카보닐 )) 비스 (피를리딘 -2， 1-다이일 ))비스 (2-옥소 -1-페닐에탄 -2， 1-다이일 ))다이 카바메이트꾀 제조
Figure imgf000031_0001
yV-Boc— L-프를린 (2.4 g, 10.9 隱 ol ) , EDC(2.3 g, 11.8 隱 ol ) , 및 4,4' -다이아미노 -2，2'-다이플루오로바이페닐 (1.0 g, 4.5 mmol )을 CH2C12(15 mL)에서 흔합하고 상온에서 2시간 교반하였다.
다음으로， 상기에서 먿은 화합물을 CH2C12 및 H20로 분획하고, 유기층을 1N 염산 수용액 및 염수 (brine)로 세척하고， 황산마그네슘으 로 건조하고 여과 후 감압 농축하여 ᅳ별도의 정제 과정 없이 (2S,2'S)- 다이 -tert-부틸 2，2'-(((2,2'-다이플루오로-[1，1'-바이페닐]-4，4'-다 이일)비스 (아잔다이일 ))비스 (카보닐))비스 (피를리딘 -1-카르복실레이 트)를 고체로 얻었다 (2.6 g, 93%).
상기에서 얻은 화합물 (245 mg, 0.42 隱 ol)을 CF3C02H(2 mL) 및 CH2C12(2 mL) 흔합용매에 넣고 상온에서 5시간 동안 교반하였다. 감압 하에 휘발성분을 제거하고， 7'-Pr2NEt(370 ≠ , 2.1 画 ol)이 용해된 CH2C12(2 mL) 용액을 4분에 걸쳐 넣고, 추가로 EDC(210 mg, 1.1 mmol) 및 제조예 9에서 제조한 화합물 (212 mg, 1.0 mmol)의 반웅 혼합물을 상온에서 75분간 교반하였다： 다음으로， 반웅 잔류물을 CH2C12 및 H20 로 분획하여 얻은 유기층을 H20 및 염수로 세척하고 황산마그네슘으로 건조시키고 여과한 후 감압 농축하였다. 상기 잔류물로부터 실리카겔 메쉬 (mesh)를 준비하고, 이를 플래쉬크로마토그래피 (용리액 : EtOAc/hexane 흔합액 )에 적용하여 목적화합물을 백색 고체로 얻었다 (134 mg, 40%) .
ιϋ 匪 R (DMSO-i/e, δ =2.5 ppm, 400 MHz)： 10.43 (s, 2H), 7.74- 7.71 (m, 3H) , 7.46-7.11 (m, 15H)， 5.51 (d, 2H)， 4.43 (m, 2H)， 3.83 (m, 2H) , 3.54 (s, 6H), 3.19 (m, 2H)， 2.05-1.77 (m, 8H)；
13C 丽 R (DMS0-o , δ =39.52 ppm, 100 MHz)： 170.8, 168.4, 160.0， 158.0， 156.1， 140.5, 137.2, 131.6, 128.6， 128.5, 128.1， 127.9， 127.6， 117.1， 115.1, 106.3, 106.1， 60.8, 56.7, 51.7 47.0 29.3, 24.3； "
19F NMR (DMSO-de, 377 MHz,): δ -73.45；
LC/MS: Anal . Calcd. For [M+H]+ C42H42F2N608 : 797.3105； found 797.3112.
<실시예 6> 다이메틸 ((lR,l'R)-((2S,2'S)-2,2'-(((2,2'-다이클 로로 -[1，1'-바이페닐] -4， 4' -다이일 )비스 (아잔다이일 ))비스 (카보닐))비 스 (피를리딘 -2,1-다이일))비스 (2-옥소 -1-페닐에탄 -2,1-다이일))다이카 바메이트의 제조
Figure imgf000032_0001
-Boc-L-프를린 (2.4 g, 10.9 隱 ol), EDC(2.3 g, 11.8 mmol) , 및 4，4'—다이아미노 -2,2 '-다이클로로바이페닐 (1.15 gᅳ 4.5 隱 ol)올 CH2C12(15 mL)에서 흔합하고 상온에서 2시간 교반하였다.
다음으로, 상기에서 얻은 화합물을 CH2C12 및 H20로 분획하고， 유기층을 1N 염산 수용액 및 염수 (brine)로 세척하고， 황산마그네슘으 로 건조하고 여과 후 감압 농축하여 별도의 정제 과정 없이 (2S,2'S)_ 다이 -tert-부틸 2，2'-(((2，2'-다이클로로 -[1， 1'-바이페닐] -4,4'-다이 일 )비스 (아잔다이일))비스 (카보닐))비스 (피를리딘 -1-카르복실레이트 ) 를 고체로 얻었다 (2.8 g, 95%) .
상기에서 얻은 화합물 (245 mg, 0.4 瞧 ol)을 CF3C02H(4 mL) 및 CH2C12(4 mL) 흔합용매에 넣고 상은에서 5시간 동안 교반하였다. 감압 하에 휘발성분을 제거하고， /-Pr2NEt(347 μί , 2.0 議 ol)이 용해된 CH2C12(4 mL) 용액을 4분에 걸쳐 넣고, 추가로 EDC(199 mg, 1.04 mmol) 및 제조예 9에서 제조한 화합물 (200 mg, 0.96 醒 ol)의 반응 흔 합물을 상은에서 75분간 교반하였다. 다음으로， 반웅 잔류물을 CH2C12 및 H20로 분획하여 얻은 유기층을 H20 및 염수로 세척하고 황산마그네 슘으로 건조시키고 여과한 후 감압 농축하였다. 상기 잔류물로부터 실 리카겔 메쉬 (mesh)를 준비하고， 이를 플래쉬크로마토그래피 (용리액 : EtOAc/hexane 혼합액 )에 적용하여 목적화합물을 백색 고체로 얻었다 (146 mg, 44%) .
JH 匪 R (DMSO-ie, δ =2.5 ppm, 400 MHz)： 10.14 (s, 2H) , 7.97- 7.91 (mᅳ 2H) , 7.75 (d, 2Η) , 7.65—7.55 (m, 2Η) , 7.43-7.12 (m, 12H) , 5.51 (d, 2Η) , 4.39 (m, 2Η), 3.84 (m, 2H) , 3.55 (s, 6H)， 3.20 (m, 2H) , 2.06-1.79 (m, 8H)；
13C 匪 R (DMSO-i/e, δ =39.52 ppm, 100 MHz)： 170.8， 168.5,
156.2, 139.9， 137.1， 132.6, 132.1， 131.7, 128.6, 128.1, 127.9,
119.3, 117.7， 60.8, 56.73， 51.68, 47.0， 29.3, 24.3；
LC/MS: Anal . Calcd. For [M+H]+ C42H42(:12N608 : 829.2514； found 829.2518.
<실시예 7> 다이메틸 ((lR,l'R)-((2S,2'S)-2,2'-(((2,2'-다이브 로모 - [ 1 , Γ -바이페닐] - 4， 4 ' -다이일)비스 (아잔다이일))비스 (카보닐))비 스 (피롤리딘 -2,1-다이일))비스 (2-옥소 -1-페닐에탄 -2,1-다이일))다이카 바메이트의 제조
Figure imgf000034_0001
TV-BOC-L—프를린 (755 mg, 3.5 mmol ) , EDC(729 mg 3.8 画 1)， 및 4，4'-다이아미노-2，2'ᅳ다이브로모바이페닐 (500 mg, 1.46 睡 1)을 CH2C12(5 mL)에서 흔합하고 상온에서 2시간 교반하였다.
다음으로， 상기에서 얻은 화합물을 CH2C12 및 H20로 분획하고， 유기층을 1N 염산 수용액 및 염수 (brine)로 세척하고， 황산마그네슘으 로 건조하고 여과 후 감압 농축하여 별도의 정제 과정 없이 (2S,2'S)_ 다이 -tert-부틸 2，2'-(((2，2'—다이브로모 -[1， 1'-바이페닐] -4， 4'-다이 일 )비스 (아잔다이일))비스 (카보닐))비스 (피롤리딘 1-카르복실레이트 ) 를 고체로 얻었다 (991 mg, 92%).
상기에서 얻은 화합물 (260 mg, 0.353 讓 ol)을 CF3C02H(2 mL) 및 CH2C12(2 mL) 흔합용매에 넣고 상온에서 5시간 동안 교반하였다. 감압 하에 휘발성분을 제거하고， /-Pr2NEt(3078 ≠ , 1.77 隱 ol)이 용해된 CH2C12(4 mL) 용액을 4분에 걸쳐 넣고， 추가로 EDC(176 mg, 0.92 mmol) 및 제조예 9에서 제조한 화합물 (177 mg, 0.85 mmol)의 반웅 흔 합물을 상온에서 75분간 교반하였다. 다음으로， 반응 잔류물을 CH2C12 및 0로 분획하여 얻은 유기층을 H20 및 염수로 세척하고 황산마그네 슘으로 건조시키고 여과한 후 감압 농축하였다. 상기 잔류물로부터 실 리카겔 메쉬 (mesh)를 준비하고， 이를 플래쉬크로마토그래피 (용리액 : EtOAc/hexane 흔합액 )에 적용하여 목적화합물을 백색 고체로 얻었다 (110 mg, 42%) .
¾ 匪 R (DMS0— 6， δ =2.5 ppm, 400 MHz)： 10.13 (s, 2H) , 8.32- 8.12 (m,2H) , 7.92-7.61 (m, 4Η)， 7.41-7.13 (m, 12H)， 5.51 (d, 2H)， 4.39 (m, 2H) , 3.84 (m, 2Η) , 3.55 (sᅳ 6H)， 3.52 (m, 2H) , 3.19 (m, 2H) , 2.05-1.81 (m, 8H)；
13C 丽 R (DMSO-ie, δ =39.52 ppm, 100 MHz)： 170.7， 168.5, 156.2, 139.8， 137.1, 135.9， 131.3, 128.6， 128.1， 127.9, 123.0, 122.3， 118.1, 60.8， 56.7， 51.7, 47.0, 29.3, 24.3；
LC/MS: Anal . Calcd. For [M+H]+ C42H42Br2N608: 917.1504； found 917.1521.
<실시예 8> 다이메틸 ((lR,l'R)-((2R,2'R)-2,2'-(([l,r-바이페 닐 ] -4,4'-다이일비스 (아잔다이일 ))비스 (카보닐 ))비스 (피를리딘 -2,1-다 이일))비스 (2-옥소 -1-페닐에탄 -2 , 1-다이일))다이카바메이트의 제조
Figure imgf000035_0001
vV-Boc-D—프를린 (771 mg, 3.6 mmol) ， EDC(812 mg., 4.2 画 ol)， 및 벤지딘 (300 mg, 1.63 mmol)을 CH2C12(4 mL)에서 혼합하고 상온에서 2 시간 교반하였다.
다음으로， 상기에서 얻은 화합물을 CH2C12 H20로 분획하고， 유기층을 1N 염산 수용액 및 염수 (brine)로 세척하고， 황산마그네슘으 로 건조하고 여과 후 감압 농축하여 별도의 정제 과정 없이 (2R,2'R)- 다이 -tert-부틸 2，2'-(([1，1'-바이페닐] -4,4' -다이일비스 (아잔다이 일))비스 (카보닐))비스 (피를리딘 -1-카르복실레이트)를 고체로 얻었다 (930 ng, 99%) .
상기에서 얻은 화합물 (300 mg, 0.52 隱 ol)을 CF3C02H(2 mL) 및 CH2C12(2 mL) 흔합용매에 넣고 상은에서 5시간 동안 교반하였다. 감압 하에 휘발성분을 제거하고, /-Pr2NEt(455 μΐ , 2.6 mmol)이 용해된 CH2C12(3 mL) 용액을 4분에 걸쳐 넣고， 추가로 EDC(258 mg, 0.620 mmol) 및 제조예 9에서 제조한 화합물 (260 mg, 1.24 mmol)의 반웅 흔 합물을 상온에서 75분간 교반하였다. 다음으로， 반웅 잔류물을 CH2C12 및 H20로 분획하여 얻은 유기층을 H20 및 염수로 세척하고 황산마그네 슘으로 건조시키고 여과한 후 감압 농축하였다. 상기 잔류물로부터 실 리카겔 메쉬 (mesh)를 준비하고， 이를 플래쉬크로마토그래피 (용리액 : EtOAc/hexane 흔합액 )에 적용하여 목적화합물을 백색 고체로 얻었다 (171 mg, 57%) .
¾ 匪 R (DMS0-f6, δ =2.5 ppm, 400 MHz)： 10.14 (s, 2H) , 7.68- 7.60 (m, 9H) , 7.46-7.30 (m, 11H) , 5.49 (d, 2H) , 4.53 (m, 2H) 3.68 (m, 2H), 3.54 (s, 6H) 3.12 (m, 2H) , 2.00 -2.13 (m, 2H) 1.89-1.82 (m, 6H)；
13C NMR (DMSO-ie, δ =39.52 ppm, 100 MHz )： 170.2 168 156.4, 138.2, 136.9, 134.4, 128.4, 128.4, 127.8 126.4 119 60.6， 56.6, 51.6, 46.9, 29.4, 24.7；
LC/MS: Anal . Calcd. For [M+H]+ C42H44N608: 761.3293； found 761.3281.
<실시예 9> 다이메틸 ((lR,l'R)-((5S,5'S)-5,5'-(([l,l'-바이페 닐 ] -4,4'—다이일비스 (아잔다이일))비스 (카보닐 ))비스 (3-옥소괴를리딘- 5， 1-다이일))비스 (2-옥소 -1-페닐에탄 -2,1-다이일))다이카바메이트의 제조
Figure imgf000036_0001
y^-Boc-4-옥소 -L—프를린 (335 mg, 1.5 mmol) , EDC(303 mg, 1.6 mmol ) , 및 벤지딘 (112 mg, 0.61 mmol )을 CH2C12(2 mL)에서 흔합하고 상온에서 2시간 교반하였다.
다음으로， 상기에서 얻은 화합물을 CH2C12 및 H20로 분획하고 , 유기층을 1N 염산 수용액 및 염수 (brine)로 세척하고, 황산마그네슘으 로 건조하고 여과 후 감압 농축하여 별도의 정제 과정 없이 (5S,5'S)- 다이 -tert-부틸 5，5'-(( [1， 1'-바이페닐 ]ᅳ4，4'-다이일비스 (아잔다이 일))비스 (카보닐))비스 (3-옥소피를리딘 -1-카르복실레이트)를 고체로 얻었다 (320 mg, 87%) .
상기에서 얻은 화합물 (161 mg, 0.27 mmol )을 CF3C02H(2 mL) 및 CH2C12(2 mL) 흔합용매에 넣고 상온에서 5시간 동안 교반하였다. 감압 하에 휘발성분을 제거하고， /'-Pr2NEt(232 ≠ , 1.3 隱 ol )이 용해된 CH2C12(2 mL) 용액을 4분에 걸쳐 넣고， 추가로 EDC(132 mg, 0.69 mmol ) 및 제조예 9에서 제조한 화합물 (133 mg, 0.64 mmol)의 반응 흔 합물을 상온에서 75분간 교반하였다. 다음으로， 반웅 잔류물을 CH2C12 및 H20로 분획하여 얻은 유기층을 H20 및 염수로 세척하고 황산마그네 슘으로 건조시키고 여과한 후 감압 농축하였다. 상기 잔류물로부터 실 리카겔 메쉬 (mesh)를 준비하고， 이를 플래쉬크로마토그래피 (용리액 : EtOAc/hexane 흔합액 )에 적용하여 목적화합물을 백색 고체로 얻었다 (48 mg, 23%) .
XH 匪 R (DMS0-G , δ =2.5 ppm, 400 MHz)： 10.38 (s, 2H) , 7.92 (d, 2H) , 7.70-7.10 (m, 18H)， 5.46 (d, 2H) , 4.94 (d, 2H)， 4.25 (d, 2H) 3.89 (d, 2H) , 3.54 (s, 6H) , 3.06 (m, 2H) , 2.54 (m, 2H)；
13C 丽 R (DMS0-(/6, δ =39.52 ppm, 100 MHz)： 208.5, 170.1, 169.4， 156.1， 137.8, 136.8, 134.7, 128.6, 128.2, 128.1， 126.5， 119.7, 57.4, 56.9， 53.1， 51.7， 40.4；
LC/MS: Anal . Calcd. For [M+H]+ C42H4oN6010: 789.2879; found 789.2877.
<실시예 10> 다이메틸 ((lR,l'R)-((2S,2'S)-2,2'-(([l,l'-바이페 닐 ] -4,4'-다이일비스 (아잔다이일 ))비스 (카보닐 ))비스 (피페리딘 -2， 1-다 이일))비스 ( 2-옥소 - 1-페닐에탄 -2 , 1-다이일))다이카바메이트의 제조
Figure imgf000037_0001
iV-Boc-L-피쩨 #산 (400 mg, 1.75 mmol ) , EDC(363 mg, 1 9 麵 o 1 )， 및 벤지딘 (134 mg, 0.73 隱 ol )을 CH2C12(7 mL)에서 혼합하고 상온에서 2시간 교반하였다.
다음으로 상기에서 얻은 화합물을 CH2C12 및 H20로 분획하고， 유기층을 1N 염산 수용액 및 염수 (brine)로 세척하고， 황산마그네슴으 로 건조하고 여과 후 감압 농축하였다.ᅳ상기 잔류물로부터 실리카겔 메쉬 (mesh)를 준비하고， 이를 플래쉬크로마토그래피 (용리액 : EtOAc/hexane 흔합액 )에 적용하여 (2S， 2 ' S)-다이 -t er t-부틸 2,2'- (( [1， 1'-바이페닐] -4,4'-다이일비스 (아잔다이일 ))비스 (카보닐 ))비스 (피페리딘 -1-카르복실레이트)를 고체로 얻었다 (186 mg, 42%) .
상기에서 얻은 화합물 (73 mg, 0.12 mmol)을 CF3C02H(1 mL) 및 CH2C12(1 mL) 흔합용매에 넣고 상은에서 5시간 동안 교반하였다. 감압 하에 휘발성분을 제거하고， /-Pr2NEt(105 μί , 0.60 隱 ol )이 용해된 DMF(1 mL) 용액을 4분에 걸쳐 넣고， 추가로 EDC(60 mg, 0.31 mmol ) 및 제조예 9에서 제조한 화합물 (60 mg, 0.29 隱 ol )의 반웅 흔합물을 상온 에서 75분간 교반하였다. 다음으로， 반웅 잔류물을 CH2C12 및 H20로 분 획하여 얻은 유기층을 ¾0 및 염수로 세척하고 황산마그네슘으로 건조 시키고 여과한 후 감압 농축하였다. 상기 잔류물로부터 실리카겔 메쉬 (mesh)를 준비하고， 이를 플래쉬크로마토그래피 (용리액 : EtOAc/hexane 흔합액 )에 적용하여 목적화합물을 고체로 얻었다 (12 mg, 13%) .
¾ 匪 R (DMSO- ， δ =2.5 ppm, 400 MHz)： 9.99-9.84 (s , 2H) ,
7.85 7.30 (m, 2애)， 5.73-5.64 (m, 2H) , 5.17/ 4.85 (m, 2H) , 4.45/ 3.77 (m, 2H) , 3.55 (app br s, 6H) , 3.18/ 2.83 (m, 2H)， 2.15 (m,
2H)， 1.76 (m, 2H)， 1.63-1.24 (m, 8H)；
1 C NMR (DMS0-c , δ =39.52 ppm, 100 MHz)： 170.0， 169.3， 168.5， 156.2, 138.0, 137.2, 134.5, 128.6, 128.4, 128.2, 127.7, 126.5， 120.2, 119.7， 67.0, 55.5, 52.8, 51.6， 43.2, 27.5, 25.1， 24.6， 19.7；
LC/MS: Anal . Calcd. For [M+H]+ C44H48N608 : 789.3606 ; found 789.3605.
<실시예 11> 다이메틸 ((lR,l'R)-((2R,2'R)-2,2'-(([l,r-바이페 닐 ] -4，4'-다이일비스 (아잔다이일 ))비스 (카보닐 ))비스 (피페리딘 -2，1-다 이일))비스 (2-옥소 -1-페닐에탄 -2,1-다이일))다이카바메이트의 제조
Figure imgf000038_0001
yV-Boc— D-피페콜산 (500 mg, 2.2 mmol ) EDCC452 mg, 2.4 mmol ) , 및 벤지딘 (167 mg, 0.91 mmol)을 CH2C12(4 mL)에서 흔합하고 상온에서 2시간 교반하였다.
다음으로, 상기에서 얻은 화합물을 CH2C12 및 H20로 분획하고， 유기층을 1N 염산 수용액 및 염수 (brine)로 세척하고， 황산마그네슘으 로 건조하고 여과 후 감압 농축하였다. 상기 잔류물로부터 실리카겔 메쉬 (mesh)를 준비하고， 이를 플래쉬크로마토그래피 (용리액 : EtOAc/hexane 흔합액 )에 적용하여 (2R， 2 ' R)-다이 -t er t 부틸 2，2'- ( ( [ 1， 1 ' -바이페닐] -4 , 4 ' -다이일비스 (아잔다이일))비스 (카보닐))비스 (피페리딘 -1-카르복실레이트)를 고체로 얻었다 (190 mg, 35%) .
상기에서 얻은 화합물 (122 mg, 0.2 mmol)을 CF3C02H(1 mL) 및 CH2C12(1 mL) 흔합용매에 넣고 상온에서 5시간 동안 교반하였다. 감압 하에 휘발성분을 제거하고 ;'-Pr2NEt(195 ≠ , 1.0 mmol)이 용해된 DMF(1 mL) 용액을 4분에 걸쳐 넣고， 추가로 EDC 100 mg, 0.52 mmol ) 및 제조예 9에서 제조한 화합물 (101 mg, 0.48 mmol)의 반응 흔합물을 상온에서 75분간 교반하였다. 다음으로， 반웅 잔류물을 CH2C12 및 H20 로 분획하여 얻은 유기춤을 H20 및 염수로 세척하고 황산마그네슘으로 건조시키고 여과한 후 감압 농축하였다. 상기 잔류물로부터 실리카겔 메쉬 (mesh)를 준비하고， 이를 플래쉬크로마토그래피 (용리액 : EtOAc/hexane 흔합액 )에 적용하여 목적화합물을 백색의 고체로 얻었다 (23 mg, 15%) .
:H 匪 R (DMSO-ie, δ =2.5 ppm, 400 MHz)： 9.98-9.84 (s, 2H)， 7.84-7.28 (m, 20H) , 5.72-5.64 (m, 2H)， 5.16/ 4.85 (m, 2H) , 4.45/ 3.75 (m, 2H) , 3.55 (app br s, 6H) , 3.17/ 2.83 (m, 2H) , 2.15 (m,
2H) 1.76 (m, 2H) , 1.63-1.23 (m, 8H)；
13C NMR (DMSO-ie, δ =39.52 ppm, 100 MHz)： 170.0, 169.3 168.5, 156.2, 138.0， 137.2, 134.5, 128.6， 128.4, 128.2, 127.7 126.5， 120.2, 119.7, 67.0, 55.5, 52.8, 51.6, 43.2, 27.5 25.1 24.6， 19.7；
LC/MS: Anal . Calcd. For [M+H]+ C44H48N608： 789.3606； found 789.3605. <실시예 12> 다이메틸 ((lR,l'R)-((2S,2'S)-2,2'-(([l,l'-바이페 닐 ] -4，4'-다이일비스 (아잔다이일 ))비스 (카보닐 ))비스 (2-메틸피를리딘- 2， 1-다이일 ))비스 (2-옥소 -1-페닐에탄 -2,1-다이일 ))다이카바메이트의 제조
Figure imgf000039_0001
vV-Boc— a-메틸 -L-프롤린 (200 mg, 0.87 隱 ol), EDG(181 mg, 0.95 隱 ol), 및 벤지딘 (67 mg, 0.36 隱 ol)을 CH2C12(2 mL)에서 흔합하고 상 은에서 2시간 교반하였다.
다음으로， .상기에서 얻은 화합물을 CH2C12 및 H20로 분획하고， 유기층 을 1N 염산 수용액 및 염수 (brine)로 세척하고, 황산마그네슘으로 건 조하고 여과 후 감압 농축^하였다ᅳ 상기 잔류물로부터 실리카겔 메쉬
(mesh)를 준비하고， 이를 플래쉬크로마토그래피 (용리액 : EtOAc/hexane 흔합액 )에 적용하여 (2S,2'S)-다이 -tert-부틸 2， 2 ' -( ( [ 1， Γ -바이페 닐 ] -4,4' -다이일비스 (아잔다이일 ))비스 (카보닐 ))비스 (2-메틸피를리딘- 1-카르복실레이트)를 고체로 얻었다 (86 mg, 31%) .
상기에서 얻은 화합물 (144 mg, 0.238 隱 ol)을 CF3C02H(1 mL) 및 CH2C12(1 mL) 흔합용매에 넣고 상온에서 5시간 동안 교반하였다. 감압 하에 휘발성분을 제거하고， /-Pr2NEt(208 μί , 1.192 隱 ol)이 용해된 CH2C12(1 mL) 용액을 4분에 걸쳐 넣고 추가로 EDC(119 mg, 0.620 mmol) 및 제조예 9에서 제조한 화합물 (100 mg, 0.572 隱 ol)의 반웅 흔 합물을 상온에서 75분간 교반하였다. 다음으로， 반웅 잔류물을 CH2C12 및 H20로 분획하여 얻은 유기층을 H20 및 염수로 세척하고 황산마그네 슘으로 건조시키고 여과한 후 감압 농축하였다. 상기 잔류물로부터 실 리카겔 메쉬 (mesh)를 준비하고， 이를 플래쉬크로마토그래피 (용리액 : EtOAc/hexane 흔합액 )에 적용하여 목적화합물을 백색의 고체로 얻었다 (77 mg, 41%) .
¾ NMR (DMSO-ie, δ =2.5 ppm , 400 MHz)： 9.03 (s 1H), 8.89 (s 1H) , 7.77-7.57 (m, 10H) , 7.40-7.32 (m, 10H) , 5.46 (m, 2H), 3.99 (m, 1H) , 3.76 (m, 1H)， 3.56 (s, 3H) , 3.54 (s, 3H)， 3.48 (m, 1H) , 3.21 (m, 1H) , 2.18-2.08 (m, 2H) , 1.91-1.80 (m, 6H)， 1.55 (s, 3H) , 1.43 (s, 3H)；
13C NMR (DMSO-ie, δ =39.52 ppm, 100 MHz)： 171.8 171.7,
168 2， 167.7 156.4, 156.2， 138.2, 138.0, 137.2 136.5 134.7，
134.3, 128.7, 128.4， 128.22, 128.17， 127.70， 127.68, 126.09, 126.05, 120.9, 120.3, 67.6, 67.5, 57.2, 57.0, 51.7， 51.6, 47.7, 47.5， 23.5, 23.1, 20.6, 20.5；
LC/MS: Anal . Calcd. For [M+H]+ C44H48N608 : 789.3606 ; found 789.3600.
<실시예 13> 다이메틸 (2R,2,R)-1,1'-((2S, 2'S)-2,2'- (바이페닐 -4,4'-다이일비스 (아잔다이일 ))비스 (옥소메틸렌)비스 (피를리딘 -2,1-다 이일 ))비스 (3-메틸 -1-옥소부탄— 2,1-다이일)다이카바메이트의 제조
Figure imgf000040_0001
단계 1: (2S,2'S)-다이 -tert-부틸 2， 2 'ᅳ (바이페닐 -4 , 4 ' -다이일비 스 (아잔다이일 ))비스 (옥소메틸렌 )다이피를리딘 -1-카르복실레이트의 제 ^_
메틸렌클로라이드 (38 ml )에 N-Boc-L-프를린 (8 g, 86.3 隱 ol ) , 1- 에틸 -3-(3-다이메틸아미노프로필 )카르보다이이미드 (EDC, 19 g, 99 瞧 ol ) 및 벤지딘 (benzidine, 7 g, 38 隱 ol )을 용해시키고， 상온에서 2 시간 동안 교반하였다. 그 후 , 반응생성물을 메틸렌클로라이드 및 물 을 이용하여 층분리하고， 분리된 유기층을 1N의 염산과 소금물을 이용 하여 세척한 다음, 마그네슘설페이트 (MgS04)로 건조시켰다. 건조된 상 기 유기층을 여과하고， 감압증류하여 별도의 정제없이 갈색 고체의 목 적화합물 (20.7 g, 94%)을 얻었다.
[a]d = -93. Γ (c=10 mg/mL in MeOH)；
lYi NMRC300 MHz, DMS0-d6, δ =2.5 ppm)： 10.06 (s, 2H)， 7.69- 7.59 (dd, 8H) , 4.24 (m, 2H)， 3.39 (m, 4H) , 2.21 (m, 2H)， 1.85 (m, 6H) , 1.41-1.28 (app br s , 18H) 1；
13C NMR(300 MHz, DMS0-d6, δ =39.52 ppm)： 171.53， 153.17， 138.23, 134.45, 126.39, 119.58, 78.45, 60.39, 46.58, 31.04， 28.13， 27.95, 23.43；
LC/MS: Anal . Calcd. For [M+H]+ C32H42N406 : 579.3177 ; found 579.3152. 단계 2: 다이메틸 (2R,2'R)-1, 1 '-((2S, 2 ' S)-2 , 2 ' - (바이페닐 - 4,4'-다이일비스 (아잔다이일))비스 (옥소메틸렌)비스 (피를리딘 -2, 1-다 이일))비스 ( 3-메틸 -1-옥소부탄 -2 , 1-다이일)다이카바메이트의 제조 메틸렌클로라이드 (1 ml) 및 트라이플루오로아세트산 (1 ml)의 흔 합용매에 상기 단계 1에서 제조된 화합물 (138 mg, 0.238 誦 ol)을 용해 시키고 상온에서 5시간 동안 교반하였다. 그 후， 상기 반웅 흔합물을 감압증류하여 휘발물질들을 모두 제거하고， 1—에틸 -3-(3-다이메틸아미 노프로필)카르보다이이미드 (EDC, 119 mg, 0.62 隱 ol), 상기 제조예 1 에서 제조된 화합물 (100 mg, 0.572 mmol) , 다이이소프로필에틸아민 (DIPEA, 208 ≠ , 1.192 mmol) 및 메틸렌클로라이드 (1 ml)를 상기 반웅 흔합물이 담겨 있는 반웅용기에 4분 동안 첨가하고， 상온에서 75분 동 안 교반하였다. 교반이 완료되면， 반웅생성물을 메틸렌클로라이드와 물을 이용하여 층분리하고, 분리된 유기층을 물로 세척하였다. 세척된 유기층을 마그네슘설페이트 (MgS04)로 건조시키고 여과한 다음， 여과된 유기층을 감압건조하였다. 건조된 반웅생성물을 컬럼크로마토그래피 (실리카겔， 에틸아세테이트 /n-핵산)로 정제하여 백색 고체의 목적화합 물 (60 mg, 36%)을 얻었다.
[a]d=-167.2° (c=10 mg/mL in MeOH)； .
XH 丽 R(400 MHz , DMS0-d6, δ =2.5 ppm)： 10.07 (s, 2H)， 7.63- 7.54 (dd, 8H) , 7.31 (d, 2H) , 4.43 (m, 2H)， 4.01 (t, 2H)， 3.80 (m, 2H) , 3.61 (m, 2H) , 3.5 (s, 6H) , 2.13 (m, 2H) , 1.89 (m, 8H)， 0.92 (d, 6H) , 0.86 (d, 6H)；
. 13C 匪 R(400 MHz, DMS0-d6, δ =39.52 ppm)： 170.39, 170.37, 156.79, 138.25, 134.32, 126.39, 119.34, 60.21, 57.95, 51.43, 47.23, 29.87, 29.47， 24.67， 18.91, 18.63；
LC/MS: Anal . Calcd. For [M+H]+ C36H48N608 : 699.3306 ; found 693.3572.
<실시예 14> (5，25，2'3)-1， -(바이페닐-4，4'-다이일)비스(1- ((S)-2- (다이메틸아미노) -2-페닐아세틸)피를리딘 -2-카복스아마이드)의 제조
Figure imgf000041_0001
상기 실시예 13의 단계 2에서 제조예 1에서 제조된 화합물 (138 0.238 mmol)을 사용하는 대신에 제조예 3에서 제조된 화합물 (100 0.56 隱 ol)을 사용하는 것을 제외하고는 상기 실시예 13과 동일한 방법으로 수행하여 목적화합물 (40 mg, 25%)을 얻었다.
[a]d = -201.3° (c=19 mg/mL in MeOH)；
XH 匪 R(400 MHz, DMSO-de, δ =2.5 ppm)： 10.09 (s, 2H)， 7.68-
7.60 (dd, 8H), 7.46-7.29 (m, 10H) , 4.37 (m, 2H) , 4.21 (s, 2H) , 3.87 (m, 2H), 3.45 (m, 2H)， 2.16 (s, 12H)， 2.16-1.97 (m, 2H)， 1.90- L.80 (m, 2H)；
13C 匪 R(400丽 zᅳ DMSO-de, δ =39.52 ppm)： 170.51, 169.14， 138.32, 134.32, 129.07, 129.01, 128.23, 127.86， 126.40， 119.39， 71.44, 60.57, 47.19， 42.93， 29.23, 24.51；
LC/MS: Anal . Calcd. For [M+H]+ C42H48N604： 701.3810； found 701.3774.
<실시예 15> (3，25，2'3)얘 '-(바이페닐-4,4'-다이일)비스(1- ((S)-2- (다이에틸아미노) -2-페닐아세틸)피를리딘 -2-카복스아마이드)의 제조
물상목용
Figure imgf000042_0001
단계 (2S, 2' S)-다이 -tert-부틸 2， 2 ' - (바이페닐 -4 , 4 ' -다이일 ϋ 스 (아잔다이일))비스 (옥소메틸렌)다이피를리딘 -1-카르복실레이트의 제 메틸렌클로라이드 (38 ml)에 N-Boc-L—프를린 (8 g, 86.3 隱 ol), 1- 에틸 -3-(3-다이쩨틸아미노프로필)카르보다이이미드 (EDC, 19 g, 99 mmol ) 및 벤지딘 (benzidine, 7 g, 38 mmol)을 용해시키고， 상은에서 2 시간 동안 교반하였다. 그 후， 반웅생성물을 메틸렌클로라이드 및 을 이용하여 층분리하고， 분리된 유기층을 1N의 염산과 소금물을 。 하여 세척한 다음, 마그네슘설페이트 (MgS04)로 건조시켰다. 건조된 기 유기층을 여과하고， 감압증류하여 별도의 정제없이 갈색 고체의 적화합물 (20.7 g, 94%)을 얻었다.
[a]d = -93.1° (c=10 mg/mL in MeOH)；
¾ NMRC300 MHz, DMS0-d6) δ =2.5 ppm)： 10.06 (s, 2H) , 7.69- 7.59 (dd, 8H) , 4.24 (m, 2H)， 3.39 (m, 4H) , 2.21 (m, 2H) , 1.85 (tn, 6H), 1.41-1.28 (app br s, 18H)1； 1 C NMR(300 匪 z, 腿 S0-d6, δ =39.52 ppm)： 171.53, 153.17, 138.23, 134.45, 126.39， 119.58, 78.45, 60.39, 46.58, 31.04, 28.13 27.95, 23.43；
LC/MS: Anal . Calcd. For [M+H]+ C32H42N406: 578.31044; found 579.3152. 단계 2: 다이메틸 (2R,2'S)-l, l'-((2R,2'R)-2,2'- (바이페닐 4,4'-다이일비스 (아잔다이일))비스 (옥소메틸렌)비스 (피를리딘 -2, 1-다 이일 ))비스 (3-메틸 -1-옥소부탄 -2, 1-다이일 )다이카바메이트의 제조
메틸렌클로라이드 (1 ml ) 및 트라이플루오로아세트산 (1 ml )의 흔 합용매에 상기 단계 1에서 제조된 화합물 (138 mg, 0.238 麵 ol)을 용해 시키고 상온에서 5시간 동안 교반하였다. 그 후, 상기 반웅 흔합물을 감압증류하여 휘발물질들을 모두 제거하고， 1-에틸 -3— (3-다이메틸아미 노프로필 )카르보다이이미드 (EDC, 119 mg, 0.62 mmol ) , 상기 제조예 4 에서 제조된 화합물 (100 mg, 0.485 隱 ol ) , 다이이소프로필에틸아민 (DIPEA, 208 μί , 1.192 mmol) 및 메틸렌클로라이드 (1 ml)를 상기 반응 흔함물이 담겨 있는 반웅용기에 4분 동안 첨가하고， 상온에서 75분 동 안 교반하였다. 교반이 완료되면， 반응생성물을 메틸렌클로라이드와 물을 이용하여 층분리하고， 분리된 유기층을 물로 세척하였다. 세척된 유기층을 마그네슘설페이트 (MgSO 로 건조시키고 여과한 다음， 여과된 유기층을 감압건조하였다. 건조된 반응생성물을 컬럼크로마토그래피 (실리카겔， 에틸아세테이트 /n-핵산)로 정제하여 백색 고체의 목적화합 물 (34 mg, 22%)을 얻었다.
[a]d = 181.3° (c=23 mg/mL in MeOH)；
lE NMR(400腿 z, DMS0-d6, δ =2.5 ppm)： 10.08 (s, 2H) , 7.68- 7.60 (dd, 8H) , 7.43-7.26 (m, 10H)， 4.70 (s, 2H) , 4.43 (m, 2H) , 3.81 (m, 2H) , 3.39 (q, 2H) , 2.67-2.59 (m, 4H) , 2.54-2.45 (m, 4H)， 2.11-1.97 (m, 4H)， 1.89-1.78 (m, 4H)， 0.91 (t , 12H)；
13C NMR(400MHz, DMS0-d6, δ =39.52 ppm)： 170.51, 169.84, 138.29， 137.54, 134.31, 129.09, 128.07， 127.47， 126.38, 119.38, 66.20, 60.45， 47.07, 43.17， 29.22, 24.58, 12.60；
LC/MS: Anal . Calcd. For [M+H]+ C46H56N6()4 : 757.4436 ; found 757.4392. <실시예 16> 다이메틸 (lS,l'S)-2,2'-((2S, 2 ' S)-2， 2 ' - (바이페닐
-4,4' -다이일비스 (아잔다이일))비스 (옥소메틸렌)비스 (피를리딘 -2,1-다 이일))비스 (2-옥소 -1-페닐에탄 -2,1-다이일)다이카바메이트의 제조
Figure imgf000044_0001
상기 실시예 13의 단계 2에서 제조예 화합물 (138 mg, 0.238 대신에 제조예 5 화합물 (100 mg, 0.485 것을 제외하고는 상기 13과 동일 한 방법으 수행하여 목적화합물 (53 mg, 46%)을 얻었다.
[a]d = -226.3° (c=30 mg/mL in MeOH)；
匪 R(400MHz, DMS0-d6, δ =2.5 ppm)： 9.95 (s, 2H) , 7.74-7.58 (m, 9H) , 7.51-7.30 (m, 10H) , 7.14 (app br s, 1H) 5.51 (d, 2H), 4.42 (app br d, 2H) , 3.83 (app br s, 2H) , 3에에.55 (s, 6H) , 3.20 (app br d, 2H)， 2.04-1.79 (m, 8H)； 서서
13C NMR( 400MHz, DMSO— d6, δ =39.52 ppm)： 170.22, 168.35, 156.07, 138.09, 137.17, 134.43, 128.58, 128.03, 127.84, 126.36， 119.57, 60.69, 56.68, 51.63, 46.94, 29.33, 24.25； 된L된
LC/MS: Anal . Calcd. For [M+H]+ C42H44N608 : 761.3293 found 761.3263.
<실시예 17> 0?,25,2ᅳ5)-^^-(바이페닐-4，4'-다이일)비스(1- ((R)-테트라하이드로퓨란 -2-카보닐 )피를리딘 -2-카복스아마이드의 제조
Figure imgf000044_0002
상기 실시예 13의 단계 2에서 제조예 1에서 제조된 화합물 (138 mg, 0.238 隱 ol)을 사용하는 대신에 (R) ( + )-테트라하이드로퓨란ᅳ 2-카 르복실산 (83 μί 0.863 mmol)을 사용하는 것을 제외하고는 상기 실시 예 13과 동일한 방법으로 수행하여 목적화합물 (101 mg, 49%)을 얻었다,
[a]d = -152.9° (c=26 mg/mL in MeOH)；
JH 匪 R(400MHz DMSO-de, δ =2.5 ppm) 10.21 (s, 2H trans
또는 2Hcis) , 10.05 (s, 2Htrans 또는 2Hcis), 7.67-7.59 (dd, 8H)， 4.79 (d, 2Htrans 또는 2Hcis), 4.58 (t , 2Htrans 또는 2Hcis), 4.42 (d, 2Htrans 또 는 2Hcis), 4.30 (t , 2Htrans 또는 2Hcis), 3.83-3.68 (m, 5Htrans/5Hcis) , 3.58-3.37 (m, 3Htrans/3Hcis) , 2.13-1.75 (m, 16Htrans/16Hcis)；
13C NMR(400MHz, DMS0-d6, δ =39.52 ppm)： 170.78, 170.52， 170.29， 170.13， 138.21, 134.31, 126.50, 126.43, 126.38, 126.31, 119.77, 119.44, 76.22, 76.08, 68.38, 68.18, 60.37, 59.77, 46.99, 46.62， 32.09, 29.16， 28.22, 25.32, 25.05， 24.62, 21.80；
LC/MS: Anal . Calcd. For [M+H]+ C36H38N406 : 575 · 2864 ; found 575.2839.
<실시예 18> 다이메틸 (23，2'3)-1,1'-((25，2'10-2，2'-(바이페닐- 4，4'-다이일비스 (아잔다이일))비스 (옥소메틸렌)비스 (피를리딘 -2,1-다 이일 ))비스 (1-옥소프로판 -2,1-다이일 )다이카바메이트의 제조
Figure imgf000045_0001
상기 실시예 13의 단계 2에서 제조예 1에서 제조된 화합물 (138 mg, 0.238 隱 ol)을 사용하는 대신에 제조예 6에서 제조된 화합물 (100 mg, 0.514 隱 ol)을 사용하는 것을 제외하고는 상기 실시예 13과 동일 한 방법으로 수행하여 목적화합물 (69 mg, 47%)을 얻었다.
[a]d = +19 7° (c=23 mg/mL in CHC13)；
匪 R OOMHz, DMS0-d6) δ =2.5ppm)： 10.00 (s, 2H) , 7.63-7.55 (dd, 8Η) , 7.32 (d, 2Η) , 4.43 (m, 2Η) , 4.30 (t , 2Η)， 3.65 (m, 2H)， 3.58 (m, 2H) , 3.49 (s, 6H) , 2.14 (m, 2H) , 1.96 (m, 6H) , 1.18 (d, 6H)；
13C NMR(400MHz, DMS0-d6 , δ =39.52 ppm)： 171.30, 170.80,
156.65, 138.59, 134.73， 126.73, 119.81, 60.62, 51.74, 48.36, 47.11， 29.70， 25.08， 17.19；
LC/MS: Anal . Calcd. For [M+H]+ C32H40N608 : 637.2980 ; found 637.2949.
<실시예 19> 다이메틸 (2S,2'S)-l,l'-((2S,2'R)-2,2'- (바이페닐- 4，4'-다이일비스 (아잔다이일 ))비스 (옥소메틸렌)비스 (피를리딘 -2， 1-다 이일 ))비스 (3,3-다이메틸 -1-옥소부탄 -2,1-다이일)다이카바메이트의 제 조
Figure imgf000046_0001
상기 실시예 13의 단계 2에서 제조예 1에서 제조된 화합물 (138 mg, 0.238 麵 ol)을 사용하는 대신에 제조예 7에서 제조된 화합물 (100 mg, 0.531 mmol)을 사용하는 것을 제외하고는 상기 실시예 13과 동일 한 방법으로 수행하여 목적화합물 (38 mg, 24%)을 얻었다.
[a]d = -116.3° (c=33 mg/mL in MeOH)；
¾ NMR(400MHz, DMS0-d6, δ =2.5 ppm)： 10.11 (s, 2H)， 7.66- 7.57 (dd, 8H) , 7.09 (d, 2H) , 4.48 (m, 2H) , 4.23 (d, 2H), 3.79 (m, 2H) , 3.63 (m, 2H) , 3.54 (s, 6H)， 2.18 (m, 2H) , 2.00 (m, 2H) , 1.89 (m, 4H)， 0.98 (s, 18H)；
13C 丽 R OOMHz, DMS0-d6, δ =39.52 ppm)： 170.38, 169.58, 156.87, 138.27, 134.34, 126.41, 119.34, 60.24, 59.12， 51.48, 47.94， 34.46, 29.50, 26.37, 24.81；
LC/MS: Anal . Calcd. For [M+H]+ C38H52N608 : 721.3919 ; found
721.3882.
<실시예 20> 다이메틸 (23,2'5)-1，1'-((23，2'1 )-2，2'-(바이페닐- 4,4'-다이일비스 (아잔다이일 ))비스 (옥소메틸렌)비스 (피를리딘 -2,1-다 이일 ))비스 (3-메틸 -1—옥소부탄 -2,1-다이일)다이카바메이트의 제조
Figure imgf000046_0002
상기 실시예 13의 단계 2에서 제조예 1에서 제조된 화합물 (138 mg, 0.238 mmol)을 사용하는 대신에 제조예 2에서 제조된 화합물 (100 mg, 0.572 隱 ol)을 사용하는 것을 제외하고는 상기 실시예 13과 동일 한 방법으로 수행하여 목적화합물 (69 mg, 42%)을 얻었다.
[a]d = -164.4° (c=47 mg/iriL in MeOH)；
XH NMR(400MHz, DMS0-d6, δ =2.5ppm)： 10.11 (s, 2H)， 7.67-7.58 (dd, 8H) , 7.32 (d, 2H)， 4.48 (m, 2H) , 4.05 (t , 2H) , 3.83 (m, 2H) , 3.64 (m, 2H) , 3.54 (s, 6H)， 2.18 (m, 2H) , 1.94 (m, 8H) , 0.96 (d, 6H) , 0.90 (d, 6H)；
13C 丽 R OOMHz, DMSO-de, δ =39.52 ppm)： 170.39, 170.37, 156.79, 138.26， 134.33, 126.38, 119.36， 60.22， 57.95, 51.42 47.24 29.88, 29.46, 24.67， 18.92, 18.61；
LC/MS: Anal . Calcd. For [M+H]+ C36H48N608 : 693 · 3606 ; found 693.3577.
<실시예 21> 다이메틸 (18，15')-2,2'-((41^，4'10-4,4'-(바이페닐- 4，4'-다이일비스 (아잔다이일 ))비스 (옥소메틸렌)비스 (티아졸리딘 -4,3- 다이일 ))비스 (2-옥소 -1-페닐에탄 -2,1-다이일)바이카바메이트의 제조
Figure imgf000047_0001
상기 실시예 15의 단계 1에서 N-Boc-L-프롤린 (8 g, 86.3 隱 ol)을 사용하는 대신에 L-티오프를린 (5 g, 37.5 画 ol)을 사용하는 것을 제외 하고는 상기 실시예 13과 동일한 방법으로 수행하여 목적화합물 (25 mg, 14%)을 얻었다.
XH NMR(400MHz, DMS0-d6, δ =2.5 ppm)： 9.89 (s, 2H) , 7.93 (d, 2Η) , 7.73-7.16 (m, 18H)， 5.64 (d, 2H)， 4.87 (m, 4H) , 4.53 (d, 2Η) , 3.58 (s, 6Η) , 3.31 (s, 2Η)， 3.20-3.16 (m, 2H)；
13C NMR(400MHz, DMS0-d6， δ =39.52 ppm)： 168.32, 167.90, 156.36， 137.76, 136.26, 134.68, 128.66， 128.25, 128.11， 126.42, 119.78， 63.18, 56.81, 51.76, 48.98， 33.08.
<실시예 22> 다이메틸 ((lR,l'R)-((2S,2'S)-2,2'-(((9,9-다이플 루오로 -9H-플루오렌 -2,7-다이일)비스 (아잔다이일))비스 (카보닐 ))비스 (피를리딘 -2,1-다이일))비스 (2-옥소 -1-페닐에탄 -2,1-디일))다이카바메 이트의 제조
단계 1 ： (2S,2'S)-다이 -tert-부틸 2 , 2 ' -( ( (9， 9-다이플루오로- 9H-플루오렌 -2/7-다이일 )비스 (아잔다이일 ))비스 (카보닐 ))비스 (피를리 딘 -1-카복시레이트)의 제조
Figure imgf000048_0001
CH2C12(1 mL)에 용해된 -Boc-L-prol ine (24 mg, 0.11 mmo 1 ) , EDC (24 mg, 0.12 隱 ol) 및 상기 제조예 11에서 얻은 9, 9-디플루오로- 9 -플루오렌ᅳ2，7-디아민 (11 mg, 0.047 画 ol) 흔합물을 주위온도 (ambient temperature)에서 2시간 동안 흔합한 후， CH2C12 및 H20을 사 용하여 층 분리하였다. 유기층은 1 N aq HC1 용액과 브라인으로 세척 하고， MgS04로 건조한 후， 필터하고 , 진공 내에서 농축하였다. 발뎌른 정화과정 없이， 목적생성물 (28 mg, 95%)을 고체 형태로 얻었다.
¾ NMR (MSO-de, δ =2.5 ppm , 400 MHz)： 10.29 (app br s, 2H) , 8.06 (s, 1H) , 8.02 (s, 1H) , 7.69-7. & 6 (m, 4H) , 4.30-4.25 (m, 1H) , 4.21-4.18 (m, 1H) , 3.45-3.41 (m, 2H) , 3.37-3.34 (m, 2H) , 2.23-
2.16 (m, 2H) 1.92-1.80 (m, 6H) , 1.40 (app br s, 9H) , 1.27 (app br s, 9H).
13C NMR (DMS0-cl6, δ =39.52 ppm, 100 MHz)： 174.3-, 173.9 171.9， 171.5 153.6, 153.1， 139.4, 133.56, 133.49, 122.8, 122.7 121.2, 114.5 114.4， 78.8, 78.6, 60.5, 59.3, 58.6, 46.6 46.2 46.1, 31.0, 30.3， 28.2， 28.0， 27.9, 27.7, 24.0, 23.4.
19F NMR (DMS0-d6> 377 MHz, )： δ -108.9, -109.0.
LC/MS: Anal . Calcd. For [M+H]+ C33H40F2N406: 627.2989 f ound 627.2997. 단계 2 ： 다이메틸 ((1R, l'R)— ((2S,2'S)-2,2'-(((9,9-다이플루오 로 -9H—플루오렌— 2， 7-다아일)비스 (아잔다이일 ))비스 (카보닐))비스 (피를 리딘 -2,1—다이일))비스 (2-옥소 -1-페닐에탄 -2,1-디일))다이카바메이트 의 제조
Figure imgf000048_0002
CF3CO2H (1 mL) 및 CH2C12 (1 mL)에 용해된 상기 단계 1에서 얻은 (2S,2'S)-다이 -tert-부틸 2， 2 ' -( ( (9 , 9-다이플루오로 -9H-플루오렌 -2，그 다이일)비스 (아잔다이일))비스 (카보닐) )비스 (피를리딘 -1-카복시레이 트) (27 mg, 0.043 mmol )를 상온에서 5시간 동안 흔합하였다 . 휘발성분 (volati le component)을 진공 내에사 제거하고， EDC (21 mg, 0.11 隱 ol) , Cap (22 mg, 0.10 mmol )을 한 회분 (batches) 4분 동안 CH2C12 (1 mL)에 용해된 /-Pr2NEt (28 mL, 0.22 mmol ) 용액에 첨가한 후， 상 기 반웅 흔합물을 상온에서 75분 동안 흔합하였다. CH2C12 및 H20를 사 용하여 층 분리한 후， 유기층을 H20 및 브라인으로 세척하고， MgS04로 건조한 후， 필터하고， 진공 내에서 농축하였다. 잔여물 (residue)로부 터 실리카 겔 메시 (mesh)를 준비하고， 플래시 크로마토그래피 (si l ica gel： EtOAc/hexane as eluent)를 통해 목적생성물 (18 mg, 52%)을 고체 형태로 얻었다.
¾ 丽 R (MSO-de, δ 2.5 ppm, 400 MHz)： 10.14 (s, 2H) , 8.05 (s, 2H) , 7.77 (d, 2H) ,. 7.71 (s, 4H)， 7.43-7.10 (m, 10H) , 5.51 (d, 2H) , 4.39 (m, 2H) , 3.85 (m, 2H)， 3.55 (s 6H) , 3.21 (m, 2H) , 2.06-1.79 (m, 8H) .
13C NMR (MSO- e, δ 39.52 ppm, 100 MHz)： 170.6, 168.5 156.2, 139.3, 137.3, 137.0， 128.6, 128.4； 128.1, 127.9， 127.6 122.8, 121.2, 114.5, 60.8， 56.7, 51.6, 47.0, 29.3, 24.3.
LC/MS: Anal . Calcd. For [M+H]+ C43H42F2N608： 809.3105； found 809.3109.
<실시예 23> 다이메틸 ((lR,l'R)-((2S,2'S)-2,2'-(((9,9-다이메 틸 -9H-플루오렌 -2,7-다이일)비스 (아잔다이일))비스 (카보닐))비스 (피를 리딘 -2 , 1-다이일))비스 ( 2-옥소 - 1-페닐에탄 -2， 1-다이일))다이카바메이 트의 제조
단계 1 ： (2S,2'S)-다이 -tert-부틸 2 , 2 ' -( ( (9， 9-다이메틸 -9H—폴 루오렌 -2, 7-다이일 )비스 (아잔다이일 ))비스 (카보닐))비스 (피를리딘 -1- 카복시레이트)의 제조
Figure imgf000049_0001
CH2CI2 (1 mL)에 용해된 -Boc-L-prol ine (173 mg, 0.80 麵 ol ) , EDC (167 mg, 0.87 mmol ) 및 9， 9_디메틸 _9 "플루오렌 -2， 7-디아민 (75 mg, 0.33 mmol )의 흔합물을 주위온도 ( amb i ent temperature)에서 2시간 동안 흔합한 후， CH2C12 및 H20를 사용하여 층 분리하였다. 유기층은 1 N aq HC1 및 브라인으로 세척하고， MgS04로 건조한 후， 필터하고， 진 공 내에서 농축하였다ᅳ 별다른 정화과정 없이 , 목적생성물 (201 mg;
97%)을 고체 형태로 얻었다.
XH NMR (DMSO-ie, δ 2.5 ppm, 400 MHz)： 10.10 (app br s, 2H) , 7.84 (s, 1H) , 7.79 (s, 1H)， 7.66 (d, 2H)， 7.51 (t, 2H)， 4.31-4.28 (m, 1H), 4.24-4.21 (m, 1H) , 3.44-3.40 (m, 2H)， 3.37-3.31 (m, 2H) , 2.21-2.16 (m, 2H) , 1.95-1.80 (m, 6H) , 1.40 (app br s, 9H)， 1.34
(s 6H) , 1.28 (app br s , 9H) .
13C NMR (DMS0-d6, δ 39.52 ppm, 100 MHz)： 174.3, 173.9, 171.4, 171.0, 153.6, 153.2, 138.1， 138.0, 133.7, 133.6, 119.7, 118.4, 118.2, 113.8， 113.6, 78.6, 78.5, 60.4, 60.0, 46.6， 46.1， 42.2， 42.1， 31.0, 30.3， 28.2, 28.1， 27.9， 27.1， 24.0， 23.4.
LC/MS: Anal Calcd. For [M+H]+ C35H42N406: 619.3490； found 619.3496. 단계 2 ： 다이메틸 ((lR,l'R)-((2S,2'S)-2,2'-(((9,9-다이메틸 911-플루오렌-2,7-다이일 )비스 (아잔다이일 ))비스 (카보닐 ))비스 (피를리 딘 -2,1-다이일 ))비스 (2-옥소 -1-페닐에탄 -2,1-다이일))다이카바메이트 의 제조
Figure imgf000050_0001
(25，2'3)-다이 -16 -부틸 2，2'-(((9，9-다이플루오로 -9H-플루오렌 -2， 7-다이일)비스 (아잔다이일 ))비스 (카보닐))비스 (피를리딘 -1-카복시 레이트)를 사용하는 대신에， 상기 단계 1에서 얻은 (2Sᅳ 2'S)_다이- tert-부틸 2 ,2' -(((9,9-다이메틸— 9H-플루오렌 -2， 7-다이일)비스 (아잔다 이일))비스 (카보닐))비스 (피를리딘 -1-카복시레이트) (200 mg, 0.32 隱 ol)를 사용하는 것을 제외하고， 상기 실시예 22 단계 2와 동일한 방 법으로 수행하여 목적생성물 (135 mg, 53%)을 고체 형태로 얻었다.
XH NMR (DMSO-i/e, δ 2.5 ppm, 400 MHz)： 9.96 (s, 2H)， 7.86 (s 2H) , 7.74 (d, 2H), 7.69 (d, 2H) , 7.51 (dd, 2H) , 7.43-7.10 (m, 10H) , 5.52 (d, 2H) , 4.43 (m, 2H) , 3.83 (m, 2H)， 3.55 (s, 6H) , 3.20 (m, 2H) , 2.05-1.78 (m, 8H) , 1.41 (s, 6H) .
13C NMR (DMSO-i/e, δ 39.52 ppm, 100 MHz)： 170.1， 168.3，
156.1, 153.7, 138.0, 137.2， 133.7, 128.6， 128.1， 127.8, 119.8.
118.3, 113.7, 60.7, 56.7, 51.6 47.0, 46.5， 29.3， 27.2, 24.3.
LC/MS: Anal . Calcd. For [M+H]+ C45H48N608: 801.3606； found 801.3611.
<실시예 24> 다이메틸 ((lR,l'R)-((2S,2'S)-2,2'-(((9-옥소 -9H- 플루오렌 -2,7-다이일)비스 (아잔다이일))비스 (카보닐))비스 (피를리딘- 2 , 1-다이일))비스 (2-옥소 -1-페닐에탄 -2， 1-다이일))다이카바메이트의 제조
단계 1 ： (2S,2'S)_다이 -tert-부틸 2 , 2 ' -( ( (9-옥소 -9H-플루오렌- 2,7-다이일)비스 (아잔다이일 ))비스 (카보닐))비스 (피를리딘 -1-카복시레 이트)의 제조
Figure imgf000051_0001
GH2C12 (1 mL)에 용해된 yV-Boc-L-pr ο Π ne (123 mg, 0.57 mmol) , EDC (119 mg, 0.62 mmol) 및 상기 제조예 12에서 얻은 2，그디아미노- 9 -플루오렌 -9-은 (50 mg, 0.24 mmol)를 주위온도 (ambient temperature)에서 2시간 동안 흔합한 후， CH2C12 및 0를 사용하여 충 분리하였다. 유기층을 1 N aq HC1 용액 및 브라안으로 세척하고， MgS04로 건조한 후， 필터하고， 진공 내에서 농축하였다. 별다른 정화 과정 없이， 목적생성물 (131 mg, 91%)을 고체 형태로 얻었다.
:H 匪 R (DMS0-(6, δ 2.5 ppm, 400 MHz)： 10.24 (s, 2H)， 7.91 (m, 2H) , 7.91 (m, 2H) , 7.62 (m, 2H), 4.26-4.16 (m, 2H) , 3.46-3.40 (m, 2H) , 3.37-3.31 (m, 2H) , 2.24-2.16 (m, 2H) , 1.94-1.76 (m, 6H)， 1.40 (app br s, 9H) , 1.27 (app br s' 9H) .
13C 匪 R (DMS0-d6, δ 39.52 ppm, 100 MHz): 192.9， 171.9， 171.4, 153.6, 153.1, 139.6, 138.8, 134.2, 125.0, 121.1， 115.0, 78.8, 78.6, 60.5, 60.1， 46.6， 46.1, 31.0， 30.2, 28.2， 28.0， 24.0， 23.4.
LC/MS: Anal . Calcd. For [M+H]+ C33H40N407 : 605.2970； found 605.2980. 단계 2 ： 다이메틸 ((lR.l'R)— ((25ᅳ2'5)-2,2'-(((9-옥소—애-플루 오렌 -2, 7-다이일)비스 (아잔다이일))비스 (카보닐))비스 (피를리딘 -2,1- 다이일))비스 (2-옥소 -1-페닐에탄 -2， 1-다이일))다이카바메이트의 제조
Figure imgf000052_0001
(2S,2'S)-다이 -tert-부틸 2， 2 '— ( ( (9， 9ᅳ다이플루오로 -9H-플루오렌 -2 ,7-다이일)비스 (아잔다이일 ))비스 (카보닐))비스 (피를리딘 -1-카복시 레이트)를 사용하는 대신에， 상기 단계 1에서 얻은 (25，2'3)-다이- tert-부틸 2，2'-(((9—옥소 -9H-플루오렌" ^，그다이일 )비스 (아잔다이일 )) 비스 (카보닐))비스 (피를리딘 -1-카복시레 ᅵ트) (14 mg, 0.023 瞧 ol)를 사용하는 것을 제외하고， 상기 실시예 22 단계 2와 동.일한 방법으로 수행하여 목적생성물 (12 mg, 66%)을 고체 형태로 얻었다.
¾ NMR (DMSO-ie, δ 2.5 ppm, 400 MHz)： 10.10 (s, 2H)， 7.91 (s, 2H), 7.76 (t, 4H), 7.64 (d, 2H) , 7.43-7.10 (m, 10Η) , 5.51 (d, 2H) , 4.39 (m, 2H) , 3 85 (m, 2H) , 3.55 (s, 6H) , 3.20 (m, 2H)， 2.05-1.79 (m, 8H) .
13C 丽 R (DMS0-(/6, δ 39.52 ppm, 100 MHz)： 192.8，
168.5， 156.2, 139.5, 138.8, 137.1, 134.2, 128.6, 128.1，
Figure imgf000052_0002
125.0， 121.1, 115.0, 60.8， 56.7， 51.7, 47.0, 29.3, 24.3.
LC/MS: Anal . Calcd. For [M+H]+ C43H42N609 : 787.3086 found 787.3089. 이하， 하기 표 1에 실시예 1-24에서 제조한 화합물의 화학구조식 나타내었다.
【표 1】
Figure imgf000052_0003
Figure imgf000053_0001
Figure imgf000054_0001
<실험예 1> 항 C형 간염 바이러스 활성 평가 1
본 발명에 따른 화학식 1로 표시되는 실시예 화합물들의 항 C형 바이러스 활성을 평가하기 위하여 하기와 같은 실험을 수행하였
12-웰 세포 배양 플레이트 (cell culture plate)에 간암 세포주인 huh7.5.1 세포를 각 웰 당 약 5만 개씩 분주하였다. 분주된 세포는 10% (v/v)의 FBS(Fetal Bovine Serum SH30406.02, Hyclone Co. ) 및 1% (v/v)의 항생제 (페니실린 /스트랩토마이신 용액 SV30010, Hyclone Co. ) 를 첨가한 DMEM 배양액 (둘코스 개량 이글 배양액 12800-017， GIBC0 Co. )을 이용하여 37°C의 6.0% 이산화탄소 세포 배양기 (C02 Incubator 311, Forma Scientif ic Co, Lnc . USA) 안에서 24시간 동안 배양하여 세포를 플레이트 바닥에 부착시켰다. 그 후， 리포터 (reporter)로써 레 닐라 루시페라아제 유전자 (Reni l la luc if erase gene)를 가진 C형 간염 바이러스 (JFH-5aFlucm4, PLoS One. 2011； 6(8)： e228808. )를 3시간 동안 분주된 세포에 접종하였다. 3시간의 바이러스 접종이 끝나면， 세포 배 양액을 제거하고 본 발명에 따른 실시예 1 내지 실시예 24에서 제조된 화합물을 각각 1 μ Μ의 농도로 배양액에 첨가하여 만든 새로운 세포 배양액을 각 웰에 주입하고， 37°C의 6.0% 이산화탄소 세포 배양기 (C02 Incubator 311, Forma Scientific Co, Lnc. USA) 안에서 3일 동안 배 양하였다. 감염 3일 후에， 세포 배양액은 하기 <실험예 3〉의 세포독성 을 측정하기 위하여 따로 모아두었다. 플레이트에 부착되어 있는 세포 를 인산 완충 용액 (PBS, phosphate Buffered Saline)으로 세척하고 100 ^의 IX 간접 분해 버퍼 (passive lysis buffer , promega, E1941) 를 처리하여 용해시켰다. 용해된 세포액 (10 μί 을 레닐라 루시페라아 제 분석 入 1스템 (Reni lla Luci f erase assay system , Promega , E2820)의 레닐라 루시페라아제 분석 시약 (50 에 주입하고 흔합하여 루미노미 터 (Luminometer， GLOMAX 20/20 Luminometer , Promega)에서 루시페라 ο]· 제 측정 (Luciferase measure) 프로그램을 이용하여 10초 동안 발광량 (luminescence)을 측정하였다. 이때， 각각의 본 발명에 따른 실시예 1 내지 실시예 24의 화합물을 처리한 처리군 및 무처리군의 발광량을 3 회씩 측정하여 그 평균을 비교 분석하였으며， 각 화합물의 농도에 따 른 발광량을 시그마 폴롯 프로그램 (sigma plot program)을 이용하여 최대 50% 유효농도 (hal maximal effective concentration, EC50)를 계 산하여 하기 표 2에 나타냈다.
【표 2】
Figure imgf000055_0001
Figure imgf000056_0001
상기 표 2에서 ,
A 등급은 EC50 1 nM 미만이고;
B 등급은 EC50 1 nM - 100 nM 이고;
C 등급은 EC50 100 nM 초과인 것을 나타낸다. 상기 표 2에 나타난 바와 같이， 본 발명에 따른 실시예 화합물들 은 간암 세포주에 존재하는 C형 간염 바이러스에 대하여 항바이러스 효과가 있는 것으로 나타났다. 특히， 실시예 2, 3， 5， 6， 7， 9，세갖번 16， 22 및 23은 최대 50% 유효농도 (EC50)가 1 nM 이하로 나타나 매우 우포는수역 한 항바이러스 효과가 있는 것올 알 수 있었다. 따라서， 본 발명에 따른 실시예 화합물들은 C형 간염 바이러스에 대하여 항 C형 간염 바이러스 효과가 우수하므로, C형 간염 바이러스 에 의해 발병되는 급성 C형 간염， 만성 C형 간염， 간경변 또는 간세포 성 암과 같은 간질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.
<실험예 2> 항 C형 간염 바이러스 활성 평가 2
본 발명에 따른 화학식 1로 표시되는 실시예 화합물들의 항 C형 간염 바이러스 활성， 즉 항복제 바이러스 활성을 평가하기 위하여 하 기와 같은 실험을 수행하였다.
12-웰 세포 배양 들레이트에 C형 간염 바이러스의 복제 및 과정을 측정할 수 있는 레플리콘 (repl icon)인 NK/R2AN을 huh7.5.1 세포를 각 웰 당 약 5만 개 정도를 분주하였다. 분주된 는 최종농도가 1Μ(ν/ν)의 FBS(Fetal Bovine Serum SH30406.02, Hyclone Co.), l%(v/v)의 항생제 (페나실린 /스트렙토마이신 용액 SV30010, Hyclone Co. ) 및 G418(600 μ g/mL, Calbiochem)을 첨가한 DMEM 배양액 (둘코스 개량 이글 배양액 12800-017， GIBCO Co. )을 이용 하여 37°C , 6.0% 이산화탄소 세포 배양기 (C02 Incubator 311, Forma Scientific Co, Lnc. USA) 안에서 24시간 동안 배양하여 세포를 플레 이트 바닥에 부착시켰다. 그 후， 세포를 키우고 있던 세포 배양액을 제거하고 본 발명에 따른 실시예 1 내지 실시예 24에서 제조된 화합물 을 각각 40 pM 내지 Ι μ Μ의 농도로 배양액에 첨가하여 만든 새로운 세 포 배양액을 각 웰에 주입하고， 37°C의 6.0% 이산화탄소 세포 배양기 (C02 Incubator 311, Forma Scientif ic Co, Lnc. USA) 안에서 3일 동 안 배양하였다. 감염 3일 후에， 세포 배양액은 하기 <실험예 3>의 세 포독성을 측정하기 위하여 따로 모아두었다. 상기 플레이트에 부착되 어 있는 세포를 인산 완충 용액 (PBS, phosphate Buffered Saline)으로 세척하고 100 ^의 IX 간접 분해 버퍼 (passive lysis buffer , E1941) 를 처리하여 용해시켰다. 용해된 세포액 (10 을 레닐라 루시페라아 게 분석 시스템 (Renilla Luci f erase assay system , Promega , E2820)의 레닐라 루시페라아제 분석 시약 (50 )에 주입하고 흔합하여 루미노미 터 (Luminometer , GLOMAX 20/20 Luminometer , Promega)에서 루시페라 ό]· 제 측정 (Luciferase measure) 프로그램을 이용하여 10초 동안 발광량 ( luminescence)을 측정하였다. 이때， 각각의 본 발명에 따른 실시예 1 내지 실시예 24의 화합물을 처리한 처리군 및 무처리군의 발광량을 3 회씩 측정하여 그 평균을 비교 분석하였으며， 각 화합물의 농도에 따 른 발광량을 시그마 플롯 프로그램 (sigma plot program)을 이용하여 최대 50% 유효농도 (hal maximal effective concentration, EC50)을 계 산하여 하기 표 3에 나타내었다. 이때， 계산된 EC50이 ΙΟΟρΜ 미만인 경우에는 A; 100 pM - 1 nM인 경우에는 B; 1 nM - 100 nM인 경우에는 C; 및 i00 nM를 초과하는 경우에는 D로 나누어 등급 표시하였다. 그 결과를 하기 표 3에 나타내었다.
【표 3]
Figure imgf000057_0001
Figure imgf000058_0001
상기 표 3에서，
-는 실험을 수행하지 않았음을 나타낸다. 상기 표 3에 나타난 바와 같이， 본 발명에 따른 실시예 화합물들 은 C형 간염 바이러스에 대하여 우수한 항바이러스 효과가 있는 것으 로 확인되었다. 보다 구체적으로， 실시예 2， 3, 4， 5， 6, 7， 9， 16, 21， 22, 23 및 24에서 제조된 화합물은 EC50값이 100 M 미만으로 나 타나 C형 간염 바이러스에 대한 항바이러스 활성이 매우 뛰어난 것으 로 확인되었다. 따라서 , 본 발명에 따른 실시예 화합물들은 C형 간염 바이러스에 대하여 상당히 낮은 농도에서도 항 C형 간염 바이러스 효과가 현저히 우수하므로， C형 간염 바이러스에 의해 발병되는 급성 C형 간염， 만성 C형 간염， 간경변 또는 간세포성 암과 같은 간질환의 예방 또는 치료 용 약학적 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.
<실험예 3> 세포독성 평가
본 발명에 따른 화학식 1로 표시되는 실시예 화합물들의 세포독 성을 평가하기 위하여 하기와 같은 실험을 수행하였다. 세포독성 분석 키트 (cytotoxicity assay kit , Lonza, LT07-117) 의 사용법에 따라 각 웰 당 배양한 배지 20 ^를 취하고 AK 검출 시약 ( AK detect i on reagent , ToxiLight Non-dest ruct ive Cytotoxicity Bi o Assay Kit LT07-117, Lonza Co. , 100 ≠ )을 첨가하여 5분 동안 방치한 다음 빅터 3(VICT0R3 TM wallaac 1420-051 Multiabel plate Counter , PerkinElmer Inc. Boston, MA, USA)로 월락 1420 워크스테이션 (Wal 1 ac 1420 workstation) 프로그램을 이용하여 565 nm 파장에서， 1초 동안 발광하는 정도를 측정하였다. 본 발명에 따른 실시예 1 내지 실시예 21의 화합물 처리군 및 무처리군의 발광량을 비교분석하였다. 그 결과， 1 μ Μ의 농도로 처리한 경우 세포독성이 없는 것으로 확인되었으며 25 μ Μ의 농도로 처리할 경우에는 세포독성를 확인하는 키트의 형광이 565 nm에서 발광하는 것으로 확인되어 세포독성이 있는 것으로 알 수 있다. 이로부터， 본 발명에 따른 화학식 1로 표시되는 화합물은 세포 독성으로 인한 부작용이 없는 것올 알 수 있다.
평시통
^가.예
<실험예 4> 약리활성
본 발명에 따른 실 16에서 제조된 화합물의 약물동태 (pharmacokinetic) 변화를 약물꾀 약리활성을 평가하기 위하여 하기와 같은 실험을 수행하였다. 수컷 마우스에 대하여 경구 및 정맥투여를 수행하여 약물동태 변 화를 확인하였다. 실시예 16의 화합물을 2.5 mg/ml의 농도로 용해시킨 후， 경구 투여의 경우， 구강으로 용해된 약물을 5 mg/kg로 투여하고 경정맥으로부터 정해진 시간에 채혈하였으며， 정맥투여의 경우， 수컷 마우스의 경정맥 및 대퇴정맥에 관을 삽입하여 대퇴정맥으로 용해된 약물을 5 mg/kg로 투여하고, 정해진 시간에 채혈을 하였다. 채혈된 혈 액을 원심분리하여 혈장을 분리하고， 적정 유기용매를 사용하여 혈장 및 뇨 시료를 전처리한 후， LC-MS/MS로 농도를 분석하였다. 이때 , LC- MS/MS는 질량분석기 (Mass spectrometry, Agi lent 6460 QQQ, Agi lent ) , LC 램프 (Agi lent 1260, Agi lent) , 오토샘플러 ( Agi 1 ent 1260, Agi lent) 및 자료 분석 시스템 (Peak Sample Data System, Analyst 1.4.2, Applied Biosystems)을 사용하여 측정하였으며， 측정 조건은 다음과 같다; 시료 주입량: 10 ιΛ , 유속: 0.3 ml/min， 컬럼 : 3 μ M의 C18 컬 럼 (50 隱 X 2.0 mm, 12 nm, YMC) , 용출용매 : 아세토니트릴 : 10 mM 암모 니움포메이트 완충용액 = 90:10 (v/v) 및 MS/MS 조건 : MRM 모드 : HCV(m/z 761.8170.1) , IS (이미프라민， m/z 281.286.2) . 경구 및 정맥 투여 후 분석된 약물의 혈중 농도 -시간 결과값으로부터 , WinNonlin(Pharsight , USA)을 이용하여 비구획 약물동태학 매개변수 (noncompar tment a 1 pharmacokinetic parameter)를 산줄하였으며 ， 그 결과를 하기의 표 4， 도 1 및 도 2에 나타내었다.
【표 4】
Figure imgf000059_0001
Figure imgf000060_0001
상기 표 4， 도 1 및 도 2에 나타낸 바와 같이 ， 본 발명에 따른 실시예 16의 화합물은 생체 내에서 우수한 약물 효과를 나타내는 것으 로 확인되었다. 보다 구체적으로， 본 발명에 따른 실시예 16의 화합물 은 약물 투여 후 24시간까지의 AUC0-24값은 정맥 투여한 경우 9.16 ug /ml , 경구 투여한 경우 1.83 /zg/ml로 나타났으며， 무한시간까지의 AUC0-∞값은 정맥 투여한 경우 9.37 /ig/ml , 경구 투여한 경우 2.5 /ml인 것으로 나타났다. 또한， 경구 투여한 경우의 혈장 내 약물의 최 대농도 (Cmax)는 0.188 g /ml로 확인되었으며， 약물의 농도가 최대에 이 르는데 걸리는 시간 (Tnax)은 2시간으로 확인되었다. 나아가， 상기 측정 값들로부터 본 발명에 따른 실시예 16의 화합물의 생체 이용률 (Ft)은 20%인 것으로 확인되었다. 이로부터， 본 발명에 따른 실시예 16의 화 합물은 생체 내에 투여되고 2시간이 경과되었을 때 그 농도가 최대가 되며， 생체 이용률이 20%에 달하는 우수한 약물 효과를 발휘하는 것을 알 수 있다. 따라서， 본 발명에 따른 실시예 16의 화합물은 생체 내에 빠른 속도로 흡수되고, 생체 내에서 높은 생체 이용률로 약물 효과를 발휘 하여 약리활성이 우수하므로， C형 간염 바이러스에 의해 발병되는 급 성 C형 간염 , 만성 C형 간염， 간경변 또는 간세포성 암과 같은 간질환 의 예방 또는 치료용 약학적 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.
<실험예 5> hERG (human Ether-a-go-go-Re 1 at ed Gene) 리간드 결 합 분석
본 발명에 따른 실시예 16에서 제조된 화합물의 심장독성으로 인 한 부작용 발생여부를 평가하기 위하여 하기와 같은 실험을 수행하였 다. 심장 근육세포의 포타슘 (potassium(K+)) 이온을 방출하는 역할을 하는 이온 채널 단백질 중의 주요한 일부인 hERG는 심장의 박동을 조 절하는 심장의 전기 활성에 기여하는 것으로 알려져 있다. 약물이나 자체의 유전자 변형으로 인하여 hERG의 세포 막을 투과하는 전류가 억 제되면， 치명적 증상을 일으킨다. 이로 인하여， 약물개발에 있어서 hERG의 억제정도에 대한 테스트는 임상적으로 중요한 테스트 중의 하 나이다.
돌연사는 체내에 흡수된 약물들의 hERG 포타슘 채널 저해를 통한 심전도 QT 간격 (electrodardiogram(ECG) QT interval)의 증가로 ¾하 여 유발되는 심장독성 (TdPa, 심실부정맥 ) 때문에 발생된다. 이에， 본 발명에 따른 실시예 16의 화합물의 hERG 저해활성을 hERG와 높은 친화 력을 갖는 적색형광 hERG 채널 리간드 검출제를 이용한 형광 분극화도 측정을 통하여 평가하였다. 이때， 대조군으로써 hERG 억제제인 아스테 미졸 (astemizole)을 동일한 방법으로 수행하여 hERG 저해 활성을 비교 평가하였으며， 그 결과를 표 5에 나타내었다.
【표 5】
Figure imgf000061_0001
상기 표 5에 나타난 바와 같이， 본 발명에 따른 실시예 16의 화 합물은 hERG에 대한 저해효과가 낮은 것을 알 수 있다 . 보다 구체적으 로， 본 발명에 따른 실시예 16의 화합물을 hERG에 처리하였을 경우， 실시예 16의 화합물과 hERG의 세포막의 결합이 잘 형성되지 않으므로 실시예 16의 화합물과 경쟁적 결합으로 인한 결과로서 hERG와 친화력 이 높은 적색형광 hERG 채널 리간드 검출제가 hERG 세포막에 실시예 16의 화합물보다 더욱 잘 결합하여 높은 분극화도를 나타내었으며， 실 시예 16의 화합물의 분극화도를 통하여 측정된 hERG의 억제 유효농도 는 9.8 μ Μ인 것으로 나타났다. 반면， hERG의 저해제로서 알려져 있는 아스테미졸을 사용한 대조군의 경우 hERG의 억제 유효농도는 0.0019 μΜ으로， 본 발명에 따른 실시예 16의 화합물에 비하여 약 5160배의 높은 hERG 저해활성이 있는 것으로 나타났다. 이로부테 본 발명에 따 른 실시예 16의 화합물은 hERG에 대한 억제 활성이 현저히 낮으므로 돌연사를 유발하는 심장독성에 대한 부작용이 없는 것을 알 수 있다. 따라서， 본 발명에 따른 벤지딘 유도체들은 hERG을 저해하는 효 과가 현저히 낮으므로 hERG의 저해로 인하여 유발되는 심장독성 등의 부작용이 없으므로， C형 간염 바이러스에 의해 발병되는 급성 C형 간 염 , 만성 C형 간염， 간경변 또는 간세포성 암과 같은 간질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물로 유용하게 사용될 수 있다. <실험예 6> 혈장 안정성 평가
본 발명에 따른 실시예 16에서 제조된 화합물의 생체 내 세포독 성올 평가하기 위하여 하기와 같은 실험을 수행하였다. 먼저， 본 발명에 따른 실시예 16의 화합물을 다이메틸설폭사이드 에 5 μ Μ이 되도록 용해시켜 시료용액을 제조하였다. ρΗ 7.4의 인산완 충용액과 혈장을 1:1로 흔합시킨 혈장 용액 (495 μί )을 96-웰 플레이트 의 각 웰에 주 ^하고, 상기에서 제조된 시료용액 (5 을 주입하였다. 그 후 상기 플레이트의 리드 (lid)를 덮고 오비탈 쉐이커 (orbital V사유화.
shaker) J학를당기 이용하여 37°C에서 100 rpm으로 0.5사간， 1시간, 4시간 동 안 진탕배양하고， 0-5°C의 아세토나이트릴을 플레이트에 첨가하여 반 웅을 종결시켰다. 이때， 시료용액을 처리하고 경과시간이 0시간인 경 우는 혈장용액이 있는 플레이트에 시료용액을 주입함과 동시에 아세토 나이트릴를 주입하여 반웅을 종결시켰다. 반웅이 종결된 상기 플레이 트를 냉동보관한 다음， 10분 동안 3000 rpm에서 원심분리하였다. 원심 분리가 완료되면 상등액 (100 ^)을 96-웰 분석 플레이트에 주입하여 LC-MS/MS 분석을 수행하였다. 0시간 경과한 경우의 측정값을 기준으로 각 시료처리 경과시간에 따른 측정값을 대비하여 처리시간에 따른 혈 장 생존를을 산출하였으며， 그 결과를 하기 표 6에 나타내었다.
【표 6】
Figure imgf000062_0001
상기 표 6에 나타난 바와 같이 , 본 발명에 따른 실시예 16의 화 합물은 생체 내 세포독성이 없는 것으로 확인되었다. 보다 구체적으로 , 마우스 혈장에 본 발명에 따른 실시예 16의 화합물을 처리하고 4시간 이 경과된 후에도 마우스 혈장의 생존률은 99¾ 이상인 것으로 나타났 다. 이로부터， 본 발명에 따른 실시예 16의 화합물은 생체 내 세포독 성이 없는 것을 알 수 있다. 따라서， 본 발명에 따른 실시예 16의 화합물은 생체 내 세포에 대한 세포독성이 없어 인체에 안전하므로， C형 간염 바이러스에 의해 발병되는 급성 C형 간염， 만성 C형 간염， 간경변 또는 간세포성 암과 같은 간질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물로 유용하게 사용될 수 있다. 한편， 본 발명에 따른 상기 화학식 1로 표시되는 화합물은 목적 에 따라 여러 형태로 제제화가 가능하다. 하기는 본 발명에 따른 상기 벤지딘 유도체를 활성성분으로 함유시킨 몇몇 제제화 방법을 예시한 것으로 본 발명이 이에 한정되는 것은 아니다.
11예 ι>산제의 제조
식 1의 화합물 2 g
1 g 의 성분을 흔합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조하였다
<제제예 2> 정제의 제조
화학식 1의 화합물 100 옥수수전분 100 유당 100 스테아린산 마그네슘 2 상기의 성분을 흔합한 후， 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타 정하여 정제를 제조하였다.
<제제예 3> 캡술제의 제조
화학식 1의 화합물 100 옥수수전분 100 유당 loo 스테아린산 마그네슘 . 2 상기의 성분을 흔합한 후， 통상의 캡슐제의 제조방법에 따라서 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다. <제제예 4> 주사제의 제조
화학식 1의 화합물 100 만니를 180
Na2HP042H20 26 증류수 2974 통상적인 주사제의 제조방법에 따라， 상기 성분들을 제시된 함량 으로 함유시켜 주사제를 제조하였다.
<제제예 5> 건강기능식품의 제조
화학식 1의 화합물 1000 비타민 흔합물 적량 비타민 A 아세테이트 70 비타민 E 1.0 비타민 0.13 비타민 B2 0.15 비타민 B6 0.5 비타민 B12 0.2 비타민 C 10 비오틴 10 니코틴산아미드 1.7 엽산 50 판토텐산 칼슘 0.5 무기질 흔합물 적량 황산제 1철 1.75 산화아연 0.82 탄산마그네슘 25.3 제 1인산칼륨 15 제 2인산칼슘 55 를품에따
62
설껌
구탕베연산칼륨 90 탄산이칼슘 100 염화마그네슘 24.8 상기의 비타민 및 미네랄 흔합물의 조성비는 비교적 건강기능식 에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 흔합 조성하였지만， 그 배합비 임의로 변형 실시하여도 무방하며 ᅳ 통상의 건강기능식품 제조방법 따라 상기의 성분을 흔합한 다음， 과립을 제조하고, 통상의 방법에 라 건강기능식품 조성물 제조에 사용할 수 있다.
<제제예 6> 건강 음료의 제조
화학식 1의 화합물 1000 구연산 1000 올리고당 100 g 매실농축액 2 g 타우린 1 g 정제수를 가하여 전체 900 통상의 건강 음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 흔합한 다음, 약 1시간 동안 85에서 교반 가열한 후， 만들어진 용액을 여과하여 멸 균된 21 용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 넁장 보관한 다음 건강 음료 조성물 제조에 사용하였다.
상기 조성비는 비교적 기호 음료에 적합한 성분을 O바람직한 실시 예로 흔합 조성하였지만 수요계층이나， 수요국가， 사용용도 OO 등 지역적， 민족적 기호 도에 따라서 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하 다.
<제제예 7> 기타 건강기능식품의 제조
7-1. 음료의 제조
꿀 522
치옥토산아미드 5
니코틴산아미드 10
염산리보플라빈나트륨 3
염산괴리독신 2
이노시를 30
오르 E산 50
화학식 1의 화합물
물 200
상기 조성 및 함량으로 하여 통상적인 방법을 사용하여
제조하였다.
7-2. 츄잉껌의 제조
20 %
76.36-76.76 % 상보들오현율화지설물화검검영
화학식 1의 화합물 0.24-0.64 % ¬무깨은미학지황학기리정탕엿렌
후르츠시지「향 1 %
물 2 %
상기 조성 및 함량으로 하여 통상적인 방법을 사용하여 츄잉껌을 제조하였다.
7-3. 캔디의 제조
50-60 %
39.26-49.66 %
1의 화합물 0.24-0.64 %
0.1 %
조성 및 함량으로 하여 통상적인 방법을 사용하여 캔디를 제조하였다. 7-4. 밀가루 식품의 제조
화학식 1의 벤지딘 유도체를 0:5 내지 5 증량부를 밀가루 100 중 량부에 첨가하고， 이 흔합물을 이용하여 빵， 케이크, 쿠키， 크래커 및 면류를 제조하여 건강 증진용 식품을 제조하였다. 7-5. 유제품 (dairy products)의 제조
화학식 1의 벤지딘 유도체를 5 내지 10 중량부를 우유 100 중량 부에 첨가하고， 상기 우유를 이용하여 버터 및 아이스크림과 같은 다 양한 유제품을 제조하였다.
류흐ᅵ1율건검
7-6. 선식의 제조
30 % 조은로분및
15 %
20 %
7 %
콩 7 %
깨 7 %
식 1의 화합물 3 %
0.5 %
0.5 %
현미 ， 보리， 참쌀， 율무를 공지의 방법으로 알파화 시켜서
한 것을 배전한 후 분쇄기로 입도 60 메시의 분말로 제조하였다.
콩， 검정깨， 들깨도 공지의 방법으로 쪄서 건조한 것을 배전한
쇄기로 입도 60 메시의 분말로 제조하였다. 분말로 분쇄된 곡물
종실류와 본 발명의 화학식 1의 벤지딘 유도체를 상기와 같은 t
배합하여 제조하였다.
【산업상 이용가능성 】 물성이염
64
은물러， 본 발명에 따른 벤지딘 유도체는 C형 간염 바이러스에 대한 항바 스 활성이 우수하므로， 이를 유효성분으로 포함하는 약학적 조성 C형 간염 바이러스에 의해 발병되는 급성 c형 간염 만성 C형 간 간경변， 간세포성 암과 같은 간질환 예방 또는 치료용 약학적 조 로 유용할 수 있다.

Claims

【청구의 범위 】 【청구항 1】 하기 화학식 1로 표시되는 화합물， 이의 광학 이성질체， 또는 o 의 약학적으로 허용가능한 염 : [화학식 1] (상기 화학식 1에서， R1, 및 R2는 독립적으로 -H, -0H, 할로겐， - 의 직쇄 또는 측 쇄 알킬 , (^-10의 직쇄 또는 측쇄 알콕시 ， 비치환 또는 치환된 (：6-10의 아릴， -NR12R13, 또는 -NHC(0)R14이고 , 여기서 , 상기 치환된 < 6-10의 아릴은 d-5의 직쇄 또는 측쇄 알킬， d-5의 직쇄 또는 측쇄 알콕시， 및 할로겐으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기가 치환될 수 있고， 또한, 상기 R12, 및 R13은 또는 d-s의 직쇄 또는 측쇄 알킬이 고， 나아가, 상기 R14는 또는 d-s의 직쇄 또는 측쇄 알콕시이고; 상기 R1, 및 R2는 이들이 결합 돠어있는 탄소 원자와 함께， N, 0, 및 S로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 해테로 원자를 포함하는 C5-io 헤테로사이클로알킬을 형성할 수 있고; R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, 및 R10은 독립적으로 할로겐 , 비 치환 또는 하나 이상의 할로겐이 치환된 d-5의 직쇄 또는 측쇄 알킬이 고， 여기서， 상기 R4와 R7， 또는 R6과 R9는 이들이 함께 연결되어 있 는 탄소 원자들과 함께 C5-6의 고리를 형성할 수 있고， 상기 C5-6의 고 리에는 할로겐， d-5 직쇄 또는 측쇄 알킬 , 및 =0로 이루어지는 군으로 부터 선택되는 하나 이상의 치환기가 치환될 수 있고 ; X는 -0-, -S-, 또는 -CH2-이고; R11은 -H, -OH, 할로겐， ( - 의 직쇄 또는 측쇄 알킬， d-1(^ 직 쇄 또는 측쇄 알콕시， 또는 =0이고; 단일 또는 이중결합이고; a는 0-3의 정수이다) 【청구항 2】 제 1항에 있어서 R1, 및 R2는 독립적으로 -H, -0H, 할로겐， d-5의 직쇄 또는 측쇄 알킬， d-5의 직쇄 또는 측쇄 알콕시 , 비치환 또는 치환된 C6-8의 아릴 : _NRi2Ri3, 또는 -NHC(=0)R14이고， 여기서， 상기 치환된 C6-8의 아릴은 d-5의 직쇄 또는 측쇄 알킬， d-5의 직쇄 또는 측쇄 알콕시， 및 할로겐으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기가 치환될 수 있고， . 또한， 상기 R12, 및 R13은 -H, 또는 d-3의 직쇄 또는 측쇄 알킬이 고 , 나아가, 상기 R14는 -H, 또는 d-3의 직쇄 또는 측쇄 알콕시이고; 상기 R1, 및 R2는 이들이 결합 되어있는 탄소 원자와 함께， N, 0, 및 S로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 해테로 원자를 포함하는 C5-8 헤테로사이클로알킬을 형성할 수 있고; R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9， 및 R10은 독립적으로 -H， 할로겐 , 비 치환 또는 하나 이상의 할로겐이 치환된 d-5의 직쇄 또는 측쇄 알킬이 고， 여기서， 상기 R4와 R7, 또는 R6과 R9는 이들이 함께 연결되어 있 는 탄소 원자들과 함께 C5-6의 고리를 형성할 수 있고, 상기 C5-6의 고 리에는 할로겐， d-5 직쇄 또는 측쇄 알킬 , 및 =0로 이루어지는 군으로 부터 선택되는 하나 이상의 치환기가 치환될 수 있고 ; X는 -S-, 또는 -CH2-이고； R11은 -H, -OH, d-5의 직쇄 또는 측쇄 알킬， Ci-5의 직쇄 또는 측 쇄 알콕시， 또는 =0이고； ：는 단일 또는 이중결합이고 a는 0-2의 정수인 것을 특징으로 하는 화합물 , 이의 광학 이성질 체， 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염 . 【청구항 3】 제 1항에 있어서， R1, 및 R2는 독립적으로 메틸， 이소프로필， tert-부틸， 페닐， 다 이데틸아미노， 다이에틸아미노， 또는 메록시카보닐아미노이고， 여기서， 상기 R1, 및 R2는 이들이 결합 되어있는 탄소 원자와 함 께， 테트라하이드로퓨란을 형성할 수 있고 ; R3, R4, R5, R6, R7, R8( R9, 및 R10은 독립적으로 -H, -F, -C1 , - Br， -CF3， 또는 메틸이고, 여기서 , 상기 R4와 R7, 또는 R6과 R9는 이들이 함께 연결되어 있 는 탄소 원자들과 함께 C5의 고리를 형성할 수 있고， 상기 C5의 고리 에는 -F， =0， 및 메틸로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기가 치환될 수 있고 ; · X는 -S -， 또는 -CH2-이고； R11은 -H, 또는 =0이고； ^■r:는 단일 또는 이중결합이고; a는 0-1와 정수인 것을 특징으로 하는 화합물， 이의 광학 이성질 체， 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염 . 【청구항 4】 제 1항에 있어서 , 상기 화학식 1로 표시되는 화합물은 하기의 화합물 군으로부터 선택되는 어느 하나인 것을 특징으로 하는 화합물， 이의 광학 이성질 체， 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염 :
(1) 다이메틸 ( lR,l'R)-((2S,2'S)-2,2'-(((3,3'—다이메틸- [1，1'-바이페닐] _4，4' -다이일)비스 (아잔다이일))비스 (카보닐))비스 (피 롤리딘 -2，1-다이일))비스 (2-옥소— 1-페닐에탄 -2,1-다이일))다이카바메 이트; ■
(2) 다이메틸 ((1R, l'R)-((2S,2'S)— 2，2'-(((2，2'—비스 (트리플루 오로메틸) -[1， 1'-바이페닐 ]— 4,4'-다이일)비스 (아잔다이일))비스 (카보 닐))비스 (피를리딘 -2， 1-다이일))비스 (2-옥소 -1-페닐에탄 -2， 1-다이일 )) 다이카바메이트;
(3) 다이메틸 ((lR,l'R)-((2S,2'S)-2,2'-(((2,2'—다이메틸- [ 1 , 1 바이페닐] -4， 4 '-다이일)비스 (아잔다이일))비스 (카보닐))비스 (피 를리딘 -2,1-다이일))비스 (2-옥소 -1-페닐에탄 -2,1-다이일))다이카바메 이트 ;
(4) 다이메틸 ((lR,l'R)-((2S,2'S)-2,2'-(((9H-플루오렌 -2，7-다 이일 )비스 (아잔다이일 ))비스 (카보닐))비스 (피를리딘 -2,1-다이일 ))비스 (2-옥소 -1-페닐에탄 -2,1-다이-일 ))다이카바메이트；
(5) 다이메틸 (( ，1'1?)-((25，2'3)-2,2'-(((2，2'-다이플루오로- [1，1'-바이페닐] -4,4'-다이일 )비스 (아잔다이일 ))비스 (카보닐))비스 (피 를리딘 -2， 1-다이일))비스 (2-옥소 -1-페닐에탄 -2， 1-다이일))다이카바메 이트; .
(6) 다이메틸 ((1R, l'R)— ((2S，2'S)-2，2'-(((2，2'ᅳ다이클로로- [l,l'ᅳ바아페닐]-4，4'—다이일)비스(아잔다이일 ))비스(카보닐))비스(피 를리딘 -2， 1-다이일))비스 (2-옥소 -1-페닐에탄 -2,1-다이일))다이카바메 이트; '
(7) 다이메틸 ((1R, l'R)— ((2S,2'S)-2，2'-(((2，2'-다이브로모-
[l，l'ᅳ바이페닐 ]-4，4 ' -다이일 )비스 (아잔다이일))비스 (카보닐))비스 (피 를리딘 -2， 1—다이일))비스 (2-옥소 -1-페닐에탄 -2， 1-다이일))다이카바메 이트 ; '
(8) 다이메틸 ((lR,l'R)-((2R,2'R)-2,2'-(([l,r—바이페닐] - 4，4'-다이일비스 (아잔다이일 ))비스 (카보닐 ))비스 (피를리딘 -2， 1-다이 일))비스 (2-옥소 -1-페닐에탄 -2， 1-다이일))다이카바메이트；
(9) 다이메틸 ((lR,l'R)-((5S,5'S)-5,5'-(([l,r-바이페닐] - 4，4'-다이일비스 (아잔다이일))비스 (카보닐))비스 (3-옥소피를리딘 -5， 1- 다이일))비스 (2-옥소 -1-페닐에탄 -2,1-다이일 ))다이카바메이트；
(10) 다이메틸 ((1 ，1'1으((23，2'3)-2，2'-(([1,1'-바이페닐]-
4，4'—다이일비스 (아잔다이일))비스 (카보닐))비스 (피페리딘 -2， 1-다이 일))비스 (2-옥소 -1-페닐에탄 -2， 1-다이일 ))다이카바메이트 ;
(11) 다이메틸 ((1 ，1'10-((21，2 0-2，2'-(([1，1'-바이페닐]- 4，4' -다이일비스 (아잔다이일 ))비스 (카보닐))비스 (피페리딘 -2, 1-다이 일 ))비스 (2-옥소ᅳ 1-페닐에탄 -2， 1-다이일))다이카바메이트；
(12) 다이메틸 ((11 ᅳ1'10ᅳ((25，2'3)-2，2'-(([1，1'-바이페닐]- 4，4'-다이일비스 (아잔다이일 ))비스 (카보닐))비스 (2-메틸피를리딘 -2， 1- 다이일))비스 (2-옥소 -1-페닐에탄 -2， 1-다이일))다이카바메이트;
(13) 다이메틸 (2R,2'R)-1, l'-((2S, 2 ' S)-2， 2 ' - (바이페닐 -4， 4 ' - 다이일비스 (아잔다이일))비스 (옥소메틸렌)비스 (피를리딘 -2， 1-다이일)) 비스 (3-메틸 -1-옥소부탄 -2, 1-다이일 )다이카바메이트;
(14) (S,2S,2'S)-N,N'- (바이페닐 -4，4 '-다이일 )비스 (l-((S)-2- (다 이메틸아미노) -2-페닐아세틸)피를리딘 -2-카복스아마이드) ;
(15) (S,2S,2'S)_N,N'- (바이페닐 -4，4 '-다이일 )비스 ( 1ᅳ( (S)-2- (다 이에틸아미노) -2-페닐아세틸 )피를리딘 -2-카복스아마이드) ;
(16) 다이메틸 (lS,r S)-2,2'-((2S, 2S' )-2，2'- (바이페닐 -4,4'- 다이일비스 (아잔다이일))비스 (옥소메틸렌)비스 (피를리딘 -2， 1-다이일)) 비스 (2-옥소 -1-페닐에탄ᅳ2， 1-다이일 )다이카바메이트
(17) ，25，2'3)-!^，1^' -(바이페닐 -4，4' -다이일 )비스 ( 1 ( (R) -테트 라하이드로퓨란 -2-카보닐 )피롤리딘 -2-카복스아마이드;
(18) 다이메틸 (2S, 2'S)-1, l'-((2S,2R' )-2，2'- (바이페닐 -4，4'_ 다이일비스 (아잔다이일 ))비스 (옥소메틸렌)비스 (피를리딘 -2， 1-다이일 )) 비스 (1-옥소프로판 -2， 1-다이일 )다이카바메이트 ;
(19) 다이메틸 (2S,2S' )— 1,1'-((2S,2R' )-2，2'— (바이페닐 -4，4'-다 이일비스 (아잔다이일 ))비스 (옥소메틸렌)비스 (피를리딘 -2， 1-다이일 ))바 스 (3, 3-다이메틸 -1-옥소부탄 -2， 1-다이일 )다이카바메이트;
(20) 다이메틸 (2S,2'S)-1,1'-((2S, 2 ' R) -2， 2 ' - (바이페닐— 4， 4 ' - 다이일비스 (아잔다이일))비스 (옥소메틸렌)비스 (피를리딘 -2， 1-다이일)) 비스 (3-메틸 -1-옥소부탄 -2,1-다이일 )다이카바메이트 ;
(21) 다이메틸 (1SJLS' )-2，2'— ((4R,4'R)-4,4'- (바이페닐 -4，4'-다 이일비스 (아잔다이일 ))비스 (옥소메틸렌)비스 (티아졸리딘 -4,3-다이일 )) 비스 (2-옥소 -1-페닐에탄 -2，1-다이일 )바이카바메이트;
(22) 다이메틸 ((1R, l'R)-((2S,2'S)— 2，2'-(((9，9-다이폴루오로- 911-플루오렌-2， 7-다이일 )비스 (아잔다이일 ))비스 (카보닐 ))비스 (피를리 딘 -2，1-다이일 ))비스 (2-옥소 -1-페닐에탄 -2，1-디일))다이카바메이트 ;
(23) 다이메틸 ((1R, 1'10-((23,2'3)-2，2'-(((9，9-다이메틸-911—플 루오렌 -2 ,7-다이일)비스 (아잔다이일))비스 (카보닐))비스 (피를리딘-
2，1_다이일))비스 (2-옥소 -1-페닐에탄 -2,1-다이일))다이카바메이트; 및
(24) 다이메틸 ((lR,l'R)-((2S,2'S)-2,2'-(((9-옥소 -9H-플루오렌 -2， 7-다이일)비스 (아잔다이일))비스 (카보닐))비스 (피를리딘 -2， 1-다이 일))비스 (2-옥소 -1-페닐에탄 -2， 1-다이일))다이카바메이트 .
【청구항 5】
하기 반웅식 1에 나타난 바와 같이，
화학식 2로 표시되는 화합물과 화학식 3으로 표시되는 화합물을 유기용매에서 반웅시켜 화학식 4로 표시되는 화합물을 제조하는 단계 (단계 1);
상기 단계 1에서 제조된 화학식 4로 표시되는 화합물의 보호기를 제거하여 화학식 5로 표시되는 화합물을 제조하는 단계 (단계 2); 및 상기 단계 2에서 제조된 화학식 5로 표시되는 화합물과 화학식 6 으로 표시되는 화합물을 반웅시켜 화학식 1로 표시되는 화합물을 제조 하는 단계 (단계 3);를 포함하는 것을 특징으로 하는 게 1항의 화학식 1 로 표시되는 화합물의 제조방법 :
[반웅식 1]
Figure imgf000072_0001
(상기 반웅식 1에서，
R1, R2, R3, R4, R5, R R7, R8, R9, R10, R1 111, X， a, 및 제 1항의 화학식 1에서 정의
PG는 보호기이다) .
【청구항 6】
게 5항에 있어서，
상기 단계 1의 유기용매는 메탄올， 다이메틸포름아마이드, 테트 라하이드로퓨란， 다이클로로메탄， 및 를루엔으로 이루어지는 군으로부 터 선택되는 1종 이상인 것을 특징으로 하는 제조방법 . 【청구항 7】
제 1항의 화학식 1로 표시되는 화합물， 이의 광학.이성질체， 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 C형 간염 바 이러스에 의한 간질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
【청구항 8】
제 7항에 있어서， '
상기 C형 간염 바이러스에 의한 간질환은 급성 C형 간염， 만성 C 형 간염， 간경변 및 간세포성 암으로 이루어진 군으로부터 선택되는 1 종인 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
【청구항 9】
제 1항의 화학식 1로 표시되는 화합물， 이의 광학 이성질체， 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 C형 간염 바 이러스에 의한 간질환 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물.
【청구항 10】
제 9항에 있어서，
상기 C형 간염 바이러스에 의한 간질환은 급성 C형 간염， 만성 C 형 간염， 간경변 및 간세포성 암으로 이루어진 군으로부터 선택되는 1 종인 것을 특징으로 하는 건강기능식품 조성물.
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