KR101766822B1

KR101766822B1 - 디페닐설페이트 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 이의 제조방법 및 이를 유효성분으로 포함하는 c형 간염 바이러스 관련 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물

Info

Publication number: KR101766822B1
Application number: KR1020150128517A
Authority: KR
Inventors: 김병문; 유영수; 배일학; 장승기; 이승기; 김희선
Original assignee: 서울대학교산학협력단; 포항공과대학교 산학협력단
Priority date: 2015-09-10
Filing date: 2015-09-10
Publication date: 2017-08-24
Also published as: KR20170031307A

Abstract

본 발명은 디페닐설페이트 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 이의 제조방법 및 이를 유효성분으로 포함하는 C형 간염 바이러스 관련 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물에 관한 것이다. 본 발명에 따른 디페닐설페이트 유도체는 C형 간염 바이러스에 의한 감염; 및 C형 간염 바이러스의 복제;를 우수하게 억제하므로, C형 간염 바이러스에 의해 발병되는 급성 C형 간염, 만성 C형 간염, 간경변, 간세포성 암 등의 간질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.

Description

디페닐설페이트 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 이의 제조방법 및 이를 유효성분으로 포함하는 C형 간염 바이러스 관련 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물{Diphenyl sulfate derivatives or pharmaceutically acceptable salts thereof, preparation method thereof and pharmaceutical composition for use in preventing or treating hepatitis C virus related diseases}

본 발명은 디페닐설페이트 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 이의 제조방법 및 이를 유효성분으로 포함하는 C형 간염 바이러스 관련 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물에 관한 것이다.

C형 간염 바이러스(Hepatitis C Virus; HCV)는 플라비바이러스(Flavivirus) 과에 속하는 막이 있는 바이러스이다. C형 간염 바이러스의 게놈은 (+)-RNA(plus-strand RNA)로서 그 크기가 9.6kb이며 3,010개의 아미노산으로 구성된 다단백질(poly-protein)을 발현한다. 상기 다단백질은 숙주 세포와 바이러스의 효소에 의해 3개의 구조 단백질과 6개의 비구조 단백질로 분리된다.

상기 C형 간염 바이러스 게놈의 5'과 3' 말단에는 거의 모든 유전형(genotype)의 염기 서열이 동일하게 유지된 비해독 부위가 있다. 5' 말단에서는 330~341개의 뉴클레오티드가, 3' 말단에서는 폴리 A(poly A) 뒤에 98개의 뉴클레오티드가 최근 발견되었는데, 이곳이 바이러스의 RNA 복제나 해독에 중요한 역할을 한다고 추측되고 있다. 바이러스 게놈의 아미노 말단은 바이러스 구조 단백질인 중심 항원 유전자(Core), E1, E2를 만들고 나머지 부위는 비구조 단백질을 만들게 된다. 중심 항원 유전자는 바이러스의 캡사이드(Capsid) 단백질, E1과 E2는 바이러스의 외피 단백질로 되어 있고 이들 단백질은 내형질쇄막(endoplasmic reticulum)에 있는 신호 펩티드 분해효소(signal peptidase)에 의해 분리된다. 비구조 단백질은 세린 단백질 분해효소 (serine protease)인 NS3과 보조인자(cofactor)인 NS4A에 의해 분리된다. NS5B는 RNA-의존적인 RNA 중합효소(RNA-dependent RNA polymerase) 기능을 갖고 있으며 바이러스 복제에 가장 중요한 효소이다.

C형 간염 바이러스는 세계적으로 1억 7천만 명 - 인간 면역결핍 바이러스 제1형에 감염된 숫자의 대략 5배 - 이 감염된 것으로 추산되는 주요 인간 병원체이다. 이들 C형 간염 바이러스에 감염된 개체 중 높은 비율에서 간경변 및 간세포성 암종을 비롯한 심각한 진행성 간 질환이 발생한다.

C형 간염 바이러스에 의한 감염은 수혈 및 지역 특이적 전염(community-acquired)에 의해 발생되고, 신장 투석에 의해 약 70% 정도가 감염되는 것으로 보고되었다. 일단 C형 간염 바이러스에 감염이 되면 약 20% 정도가 5년 내에 간경화를 수반한 급성 간염을 일으키게 되고 간암으로 전이되는 것으로 알려져 있다(비특허문헌 1-2 참조). 이러한 높은 만성 감염률은 RNA 바이러스에서 보기 드문 일로서 C형 간염 바이러스가 높은 비율의 간암을 일으키는 매개체임을 보여주는 증거이다. 최근에는 모든 혈액에 대해서 C형 간염 바이러스 검사가 잘 이루어지고 있어 수혈로 인한 감염은 현저히 줄어들었지만, 지역 특이적 감염은 이에 대한 관리가 효과적으로 이루어지지 않아 그 감염률이 높으므로 전 세계적으로 중요한 문제로 인식되고 있다.

또한, C형 간염 바이러스는 B형 간염 바이러스(HBV)와 달리 전 세계에 골고루 분포되어 있으며 전 세계 인구의 1.5% 내지 2%가 감염된 것으로 보고되고 있다. C형 간염 바이러스에 감염되면 만성 간염으로 진행되는 것이 특징인데 간경화 및 간암으로 전이되는 확률이 B형 간염보다 상당히 높다. C형 간염 바이러스는 분류학적으로도 B형 간염 바이러스와는 전혀 다른 바이러스과에 속하기 때문에 B형 간염 바이러스 백신으로는 예방이 불가능하다.

한편, 현재 C형 간염 바이러스 감염에 대한 치료제로, 인터페론과 항바이러스제인 리바비린(ribavirin) 병용요법이 사용되고 있으나(비특허문헌 3 참조), 유전형에 따라 반응이 현저히 다르고 효과가 극히 미약하며, 병용요법에 사용되는 두 약제의 부작용이 클 뿐만 아니라 고가이다. 따라서, 보다 효과적인 새로운 항C형 간염 바이러스제의 개발이 요구되고 있다.

상기의 문제를 극복하기 위하여 현재까지 연구된 항C형 간염 바이러스제는 C형 간염 바이러스의 생애주기의 특정 단계를 차단함으로써 항C형 간염 바이러스 약제의 약리활성이 발현되는 특징을 갖는다.

C형 간염 바이러스의 생애주기는 다음과 같다. 숙주 세포(Host cell)의 표면에 부착된 C형 간염 바이러스는 엔도사이토시스(endocytosis)에 의해 숙주 세포 내에 침입한다. 이후, 숙주 세포 내에 침입한 C형 간염 바이러스 게놈 RNA로부터 약 3천 개의 아미노산 잔기로 구성된 전구체 단백질이 생성된다. C형 간염 바이러스 게놈 또는 숙주 세포의 시그널 펩티다아제(signal peptidase)로 인코딩된(encoded) NS3 및 NS4 프로테아제와 함께 반응하여 캡시드 단백질(capsid protein), 엔벨로프 단백질(envelope protein), NS3 및 NS4 프로테아제, NS 5B RNA 중합효소(Polymerase) 같은 약 10종의 바이러스 단백질이 생성된다. NS 2B 중합효소로 복제된 게놈 RNA는 α-글루코시다아제(α-glucosidase)로 중개된 캡시드 단백질 및 엔벨로프 단백질과 결합하여 바이러스 입자가 된다. 이후, C형 간염 바이러스 입자는 숙주 세포로부터 배출된다(비특허문헌 4 참조).

HCV의 경우에는 최근까지 배양세포에서 감염·증식시킬 수 없었다. 다만 1999년에 제한적인 발전이 있어, 비구조 단백질(non-structural proteins)을 코딩하는 HCV RNA 부분을 간암세포주에 형질주입(transfection)시켜 HCV RNA의 복제가 일어나도록 만든 시스템이 개발되었는데 이를 HCV RNA 레플리콘(replicon)이라고 명한다. 레플리콘을 이용하게 되면서 HCV 증식을 억제하는 약물의 생체 외 스크리닝이 가능하게 되었다(비특허문헌 5 참조).

또한, 2001년 일본의 Wakita 박사 연구팀은 HCV 환자로서는 드물게 전격성 간염(fulminant hepatitis)을 나타낸 일본인 환자로부터 HCV를 클로닝하였고 (Japanese fulminant hepatitis라는 뜻에서 JFH-1으로 명명됨) 이를 이용하여 HCV RNA 레플리콘을 만들었는데, 매우 강력한 레플리콘 활성을 나타냄이 관찰되었다. 결국 2005년에, HCV 복제가 잘 이루어지는 간암세포주를 선택적으로 골라낸 후 여기에 JFH-1의 비구조(non-structural) 부분을 백본(backbone)으로 하는 HCV RNA를 형질주입 시킴으로써 in vitro 세포배양에서 HCV 감염모델이 확립되었다. 그리고 이렇게 배양된 세포에서 얻어진 HCV는 HCVcc라고 불리게 되었다(cc는 cell culture에서 유래됨). HCVcc는 침팬지에서도 HCV 감염을 일으킴이 보고되어 세포배양 HCV 감염모델의 성공은 입증되었다. in vitro 전사(transcription)를 통하여 얻은 JFH-1 RNA를 간암세포주에 형질주입시킴으로서 HCVcc를 얻을 수 있고 얻어진 HCVcc는 다시 간암세포를 감염시킬 수 있음을 보여주고 있다. 이러한 세포배양 HCV 감염모델의 성공은 최근 HCV 연구를 더욱 촉진하며 새로운 발견들을 가속화하고 있다(비특허문헌 5 참조).

상기의 C형 간염 바이러스 생애주기의 특정 단계를 차단함으로써 항C형 간염 바이러스 활성을 나타내는 약제는 C형 간염 바이러스 생애주기에 근거하여 RNA 중합효소 억제제-유형, 프로테아제 억제제-유형, α-글루코시다아제 억제제-유형 및 기타 유형으로 분류된다. 예를 들면, MK-7009(Merck)과 R7128(Pharmasset/Roche) 등의 RNA 중합효소 억제제 유형은 임상시험 1상에 있고, VCH-759(Virochem), R1626(Roche), 발로피시타빈(valopicitabine, Idenix)는 임상시험 2상에 있다. 또한, 프로테아제 억제제 유형 중 ITMN-191(R-7227, InterMune/Roche)는 임상시험 1상에 있고, TMC435350(Medivir/Tibotec)은 임상시험 2상이며, 보세프레비어(Boceprevir(SCH 503034), Schering)과 텔라프레비어(Telaprevir, Vertex)는 임상시험 3상에 있다. 아울러, 사이클로필린 억제제 유형인 DEBIO-025(DEBIO)와 글루코시다아제 I 억제제 유형인 셀고시비어(celgosivir, MIGEBIX)는 임상시험 2상에 있다(비특허문헌 6 참조).

그러나, 임상시험이 진행되고 있는 상기 항C형 간염 바이러스 약제에 대하여 내성을 갖는 바이러스의 출현이 이미 보고되고 있으므로, 종래에 알려진 항C형 간염 바이러스 약제와는 다른 기작으로 항C형 간염 바이러스 효과를 나타내는 새로운 항C형 간염 바이러스 약제의 개발이 절실히 요구되고 있다.

이에, 본 발명자들은 인터루킨-C형 간염 바이러스에 대한 억제 활성을 나타내는 화합물을 개발하기 위해 노력하던 중, 본 발명에 따른 디페닐설페이트 유도체가 C형 간염 바이러스에 의한 감염 및 C형 간염 바이러스의 복제를 우수하게 억제하므로, C형 간염 바이러스에 의해 발병되는 급성 C형 간염, 만성 C형 간염, 간경변, 간세포성 암 등의 간질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물로 사용될 수 있다는 것을 알아내고 본 발명을 완성하였다.

Davis et al, New. Engl. J. Med., [0010] 321 (1989) 1501; Alter et al, Leonard et al., Current Pespective in Hepatology, (1989) p.83; Hayashi N., et al., J. Gastroenterol., 41,(2006), 17; Manns MP., et al., Nat. Rev. Drug. Discov., 6,(2007), 991; Hepatitis C virus 연구동향, 한국생화학분자생물학회, 2013, 12; Kronenberger B., et al., Clin Liver Dis., 12,(2008), 529.

본 발명의 목적은 디페닐설페이트 유도체, 이의 광학 이성질체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 목적은 상기 디페닐설페이트 유도체의 제조방법을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 상기 디페닐설페이트 유도체, 이의 광학 이성질체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 C형 간염 바이러스 관련 간질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 목적은 상기 디페닐설페이트 유도체, 이의 광학 이성질체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 C형 간염 바이러스 관련 간질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공하는 것이다.

상기 목적을 달성하기 위하여,

본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 광학 이성질체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 제공한다.

[화학식 1]

상기 화학식 1에서,

A는 단일결합, -O-, -NH- 또는 C_1-2알킬렌이고;

X는 N, O 및 S로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 헤테로 원자를 포함하는 5 내지 8 원자의 헤테로아릴, 카보닐아미노(-(C=O)NH-) 또는 아미노카보닐(-NH(C=O)-)이고;

R¹은 수소, 할로겐 또는 직쇄 또는 측쇄의 C_1-5알킬 또는 C_1-5알콕시이고; 및

R² 및 R³은 각각 독립적으로 수소; 비치환된 직쇄 또는 측쇄의 C_1- ₅알킬, C_1- ₅알콕시 또는 C_1- ₅알콕시카보닐아미노; 또는 비치환 또는 치환된 C_6- ₈아릴이고, 여기서, 상기 치환된 C_6- ₈아릴은 할로겐 및 직쇄 또는 측쇄의 C_1- ₅알킬 또는 C_1- ₅알콕시로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기로 치환될 수 있다.

또한, 본 발명은 하기 반응식 1에 나타낸 바와 같이,

화학식 2로 표시되는 화합물과 화학식 3으로 표시되는 화합물을 염기 존재 하에 반응시켜 화학식 1로 표시되는 화합물을 제조하는 단계를 포함하는 상기 화학식 1로 표시되는 화합물의 제조방법을 제공한다.

[반응식 1]

상기 반응식 1에서,

R¹, R², R³, X 및 A는 상기 화학식 1에서 정의한 바와 같고; 및

PG는 아민 보호기(amine protectiong group)이다.

나아가, 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 광학 이성질체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 C형 간염 바이러스 관련 간질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 광학 이성질체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 C형 간염 바이러스 관련 간질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공한다.

본 발명에 따른 디페닐설페이트 유도체는 C형 간염 바이러스에 의한 감염; 및 C형 간염 바이러스의 복제;를 우수하게 억제하므로, C형 간염 바이러스에 의해 발병되는 급성 C형 간염, 만성 C형 간염, 간경변, 간세포성 암 등의 간질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.

본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 광학 이성질체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 제공한다:

[화학식 1]

상기 화학식 1에서,

A는 단일결합, -O-, -NH- 또는 C_1-2알킬렌이고;

바람직하게는,

상기 A는 단일결합, -O- 또는 -NH- 이고;

X는 N 및 S로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 헤테로 원자를 포함하는 5 내지 8 원자의 헤테로아릴, 카보닐아미노(-(C=O)NH-) 또는 아미노카보닐(-NH(C=O)-)이고;

R¹은 수소, C_1-5의 직쇄 또는 측쇄 알킬, 플루오로, 브로모 또는 클로로이고; 및

R² 및 R³은 각각 독립적으로 직쇄 또는 측쇄의 C_1- ₅알킬,

또는 비치환 또는 치환된 페닐이고, 여기서, 상기 R⁴는 직쇄 또는 측쇄의 C_1- ₃알킬이고, 치환된 페닐은 할로겐 및 직쇄 또는 측쇄의 C_1- ₃알킬로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기로 치환될 수 있다.

보다 바람직하게는,

상기 A는 단일결합 또는 -O- 이고;

X는

,

또는

이고;

R¹은 수소, 메틸 또는 플루오로이고;

R² 및 R³은 각각 독립적으로 메틸, 아이소프로필, t-부틸,

,

또는

이다.

본 발명에 따른 상기 화학식 1로 표시되는 화합물의 바람직한 예로는 하기의 화합물을 들 수 있다:

(1) 다이메틸 ((1R,1'R)-((2S,2'S)-(((설포닐피스(4,1-페닐렌))비스(아자네디일))비스(카보닐))비스(피롤리딘-2,1-디일))비스(2-옥소-1-페닐에탄-2,1-디일))다이카바메이트

(2) 비스(4-((S)-1-((R)-2-((메톡시카보닐)아미노)-2-페닐아세틸)피롤리딘-2-카복스아미도)페닐) 설페이트;

(3) 비스(4-((S)-1-((메톡시카보닐)-D-발릴)피롤리딘-2-카복스아미도)페닐) 설페이트;

(4) 비스(3-((S)-1-((R)-2-((메톡시카보닐)아미노)-2-페닐아세틸)피롤리딘-2-카복스아미도)페닐) 설페이트;

(5) 비스(4-(2-((S)-1-((R)-2-(메톡시카보닐아미노)-3-메틸부타노일)피롤리딘-2-일)-1H-이미다졸-5-일)페닐) 설페이트;

(6) 비스(4-(2-((S)-1-((R)-2-(메톡시카보닐아미노)-2-페닐아세틸)피롤리딘-2-일)-1H-이미다졸-5-일)페닐) 설페이트;

(7) 비스(3-((S)-1-((메톡시카보닐)-D-발릴)피롤리딘-2-카복스아미도)페닐) 설페이트;

(8) 비스(3-(2-((S)-1-((R)-2-(메톡시카보닐아미노)-3-메틸부타노일)피롤리딘-2-일)-1H-이미다졸-5-일)페닐) 설페이트;

(9) 비스(3-(2-((S)-1-((R)-2-(메톡시카보닐아미노)-2-페닐아세틸)피롤리딘-2-일)-1H-이미다졸-5-일)페닐) 설페이트;

(10) 비스(5-((S)-1-((R)-2-((메톡시카보닐)아미노)-2-페닐아세틸)피롤리딘-2-카복스아미도)-2-메틸페닐) 설페이트;

(11) 비스(5-((S)-1-((메톡시카보닐)-D-발릴)피롤리딘-2-카복스아미도)-2-메틸페닐) 설페이트;

(12) 3-((S)-1-((R)-2-((메톡시카보닐)아미노)-2-페닐아세틸)피롤리딘-2-카복스아미도)페닐 (4-((S)-1-((R)-2-((메톡시카보닐)아미노)-2-페닐아세틸)피롤리딘-2-카복스아미도)페닐) 설페이트;

(13) 3-((S)-1-((메톡시카보닐)-D-발릴)피롤리딘-2-카복스아미도)페닐 (4-((S)-1-((메톡시카보닐)-D-발릴)피롤리딘-2-카복스아미도)페닐) 설페이트;

(14) 비스(2-플루오로-5-((S)-1-((R)-2-((메톡시카보닐)아미노)-2-페닐아세틸)피롤리딘-2-카복스아미도)페닐) 설페이트;

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(17) 비스(3-((S)-1-((R)-2-((메톡시카보닐)아미노)-2-페닐아세틸)피롤리딘-2-카복스아미도)-2-메틸페닐) 설페이트;

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(23) 2-플루오로-3-((R)-1-((R)-2-(메톡시카보닐아미노)-2-페닐아세틸)피롤리딘-2-카복스아미도)페닐 2-플루오로-3-((S)-1-((R)-2-(메톡시카보닐아미노)-2-페닐아세틸)피롤리딘-2-카복스아미도)페닐 설페이트;

(24) 2-플루오로-3-((R)-1-((R)-2-(메톡시카보닐아미노)-3-메틸부타노일)피롤리딘-2-카복스아미도)페닐 2-플루오로-3-((S)-1-((R)-2-(메톡시카보닐아미노)-3-메틸부타노일)피롤리딘-2-카복스아미도)페닐 설페이트;

(25) 비스(2-플루오로-5-(2-((S)-1-((R)-2-(메톡시카보닐아미노)-3-메틸부타노일)피롤리딘-2-일)-1H-이미다졸-5-일)페닐) 설페이트;

(26) 비스(2-플루오로-5-(2-((S)-1-((R)-2-(메톡시카보닐아미노)-2-페닐아세틸)피롤리딘-2-일)-1H-이미다졸-5-일)페닐) 설페이트;

(27) 비스(2-플루오로-5-(2-((S)-1-((S)-2-(메톡시카보닐아미노)-3-메틸부타노일)피롤리딘-2-일)-1H-이미다졸-5-일)페닐) 설페이트;

(28) 비스(3-((S)-1-((R)-2-(메톡시카보닐아미노)-3-메틸부타노일)피롤리딘-2-카복스아미도)-2-메틸페닐) 설페이트;

(29) 다이메틸 (2R,2'R)-1,1'-((2S,2'S)-2,2'-(4,4'-설포닐비스(4,1-페닐렌)비스(아자엔다이일))비스(옥소메틸렌)비스(피롤리딘-2,1-다이일))비스(3-메틸-1-옥소부탄-2,1-다이일)다이카바메이트;

(30) 비스(3-(2-((S)-1-((S)-2-(메톡시카보닐아미노)-4-메틸펜타노일)피롤리딘-2-일)-1H-이미다졸-5-일)페닐) 설페이트;

(31) 비스(3-(2-((S)-1-((S)-2-(메톡시카보닐아미노)프로파노일)피롤리딘-2-일)-1H-이미다졸-5-일)페닐) 설페이트;

(32) 비스(3-(2-((S)-1-((S)-2-(메톡시카보닐아미노)-2-페닐아세틸)피롤리딘-2-일)-1H-이미다졸-5-일)페닐) 설페이트;

(33) 비스(3-((S)-1-((S)-2-(메톡시카보닐아미노)-3,3-다이메틸부타노일)피롤리딘-2-카복스아미도)페닐) 설페이트;

(34) 2-플루오로-3-((S)-1-((R)-2-(메톡시카보닐아미노)-2-페닐아세틸)피롤리딘-2-카복스아미도)페닐 2-플루오로-5-((S)-1-((R)-2-(메톡시카보닐아미노)-2-페닐아세틸)피롤리딘-2-카복스아미도)페닐 설페이트;

(35) 2-플루오로-3-((S)-1-((R)-2-(메톡시카보닐아미노)-3-메틸부타노일)피롤리딘-2-카복스아미도)페닐 2-플루오로-5-((S)-1-((R)-2-(메톡시카보닐아미노)-3-메틸부타노일)피롤리딘-2-카복스아미도)페닐 설페이트.

본 발명의 상기 화학식 1로 표시되는 화합물은 약학적으로 허용가능한 염의 형태로 사용할 수 있으며, 염으로는 약학적으로 허용가능한 유리산(free acid)에 의해 형성된 산 부가염이 유용하다. 산 부가염은 염산, 질산, 인산, 황산, 브롬화수소산, 요드화수소산, 아질산, 아인산 등과 같은 무기산류, 지방족 모노 및 디카르복실레이트, 페닐-치환된 알카노에이트, 하이드록시 알카노에이트 및 알칸디오에이트, 방향족 산류, 지방족 및 방향족 설폰산류 등과 같은 무독성 유기산, 아세트산, 안식향산, 구연산, 젖산, 말레인산, 글루콘산, 메탄설폰산, 4-톨루엔설폰산, 주석산, 푸마르산 등과 같은 유기산으로부터 얻는다. 이러한 약학적으로 무독한 염의 종류로는 설페이트, 피로설페이트, 바이설페이트, 설파이트, 바이설파이트, 니트레이트, 포스페이트, 모노하이드로겐 포스페이트, 디하이드로겐 포스페이트, 메타포스페이트, 피로포스페이트 클로라이드, 브로마이드, 아이오다이드, 플루오라이드, 아세테이트, 프로피오네이트, 데카노에이트, 카프릴레이트, 아크릴레이트, 포메이트, 이소부티레이트, 카프레이트, 헵타노에이트, 프로피올레이트, 옥살레이트, 말로네이트, 석시네이트, 수베레이트, 세바케이트, 푸마레이트, 말리에이트, 부틴-1,4-디오에이트, 헥산-1,6-디오에이트, 벤조에이트, 클로로벤조에이트, 메틸벤조에이트, 디니트로 벤조에이트, 하이드록시벤조에이트, 메톡시벤조에이트, 프탈레이트, 테레프탈레이트, 벤젠설포네이트, 톨루엔설포네이트, 클로로벤젠설포네이트, 크실렌설포네이트, 페닐아세테이트, 페닐프로피오네이트, 페닐부티레이트, 시트레이트, 락테이트, β-하이드록시부티레이트, 글리콜레이트, 말레이트, 타트레이트, 메탄설포네이트, 프로판설포네이트, 나프탈렌-1-설포네이트, 나프탈렌-2-설포네이트, 만델레이트 등을 포함한다.

본 발명에 따른 산 부가염은 통상의 방법으로 제조할 수 있으며, 예를 들면 화학식 1의 유도체를 메탄올, 에탄올, 아세톤, 메틸렌클로라이드, 아세토니트릴 등과 같은 유기용매에 녹이고 유기산 또는 무기산을 가하여 생성된 침전물을 여과, 건조시켜 제조하거나, 용매와 과량의 산을 감압 증류한 후 건조시켜 유기용매 하에서 결정화시켜셔 제조할 수 있다.

나아가, 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 화합물 및 이의 약학적으로 허용가능한 염뿐만 아니라, 이로부터 제조될 수 있는 용매화물, 광학 이성질체, 수화물 등을 모두 포함한다.

또한, 본 발명은 하기 반응식 1에 나타낸 바와 같이,

화학식 2로 표시되는 화합물과 화학식 3으로 표시되는 화합물을 반응시켜 화학식 1로 표시되는 화합물을 제조하는 단계를 포함하는 상기 화학식 1로 표시되는 화합물의 제조방법을 제공한다.

[반응식 1]

상기 반응식 1에서,

R¹, R², R³, X 및 A는 상기 화학식 1에서 정의한 바와 같고; 및

PG는 아민 보호기(amine protectiong group)이다.

이하, 본 발명에 따른 상기 화학식 1로 표시되는 화합물의 제조방법을 상세히 설명한다.

본 발명에 따른 상기 화학식 1로 표시되는 화합물의 제조방법은 상기 반응식 1에 나타낸 바와 같이, 화학식 2로 표시되는 화합물과 화학식 3으로 표시되는 화합물을 반응시켜 화학식 1로 표시되는 화합물을 제조할 수 있다.

구체적으로, 화학식 2로 표시되는 화합물의 아민 보호기를 제거한 후, 아마이드화제(amide reagent) 존재 하에 화학식 3으로 표시되는 화합물을 첨가하여 반응시켜 화학식 1로 표시되는 화합물을 제조할 수 있다.

이때, 상기 아민 보호기로는 t-부틸옥시카보닐(Boc), 카보벤질옥시(Cbz), 9-플루오레닐메틸옥시카보닐(Fmoc), 아세틸(Ac), 벤조일(Bz), 벤질(Bn), p-메톡시벤질(PMB), 3,4-다이메톡시벤질(DMPM), p-메톡시페닐(PMP), 토실(Ts), 2,2,2-트리클로로에톡시카보닐(Troc), 2-트리메틸실릴에톡시카보닐(Teoc) 또는 아릴옥시카보닐(Alloc) 등이 있으며, 바람직하게는 t-부틸옥시카보닐(Boc)일 수 있다.

또한, 상기 아민 보호기는 통상의 방법으로 제거할 수 있다. 예를 들면, 산 또는 염기를 사용한 조건하에 제거할 수 있으며, 상기 산에는 염산, 황산, 트리플루오로아세트산, 브롬산 등이 있고, 상기 염기에는 피페리딘, 암모니아가스 등이 있으며, 이를 당량 또는 과량 사용할 수 있다.

나아가, 상기 아마이드화제(amide reagent)는 벤조트리아졸-1-일-옥시-트리스(다이메틸아미노)-포스포니움헥사플루오로포스페이트(Py-BOP), O-벤조트리아졸-N,N,N,N-테트라메틸-유로니움-헥사플루오로-포스페이트(HBTU), 2-(7-아자-1H-벤조트리아졸-1-일)-1,1,3,3-테트라메틸유로니움헥사플루오로포스페이트(HATU), 하이드록시벤조트리아졸(HOBt), 다이사이클로헥실카르보디이미드(DCC), 1-에틸-3-(3-다이메틸아미노프로필)카보다이이미드(EDCI) 또는 카르보닐다이이미다졸(CDI)을 사용할 수 있으며, 바람직하게는 1-에틸-3-(3-다이메틸아미노프로필)카보다이이미드(EDCI)를 다이이소프로필에틸아민(DIPEA), 트라이에틸아민(TEA) 또는 다이메틸아미노피리딘(DMAP)과 함께 사용할 수 있다.

또한, 반응 유기용매로는 메탄올, 다이메틸포름아마이드, 테트라하이드로퓨란, 디클로로메탄, 톨루엔 등을 이용하여 반응을 수행할 수 있고, 바람직하게는 디클로로메탄을 사용할 수 있다.

출발물질(화학식 2로 표시되는 화합물)의 제법

상기 반응식 1의 출발 물질인 화학식 2의 화합물은 A가 -O-일 경우, 하기 반응식 2 또는 반응식 3에 나타낸 바와 같이 제조할 수 있다.

상기 화학식 2에서 A가 -O-인 화학식 2로 표시되는 화합물의 유도체 2a는, 하기 반응식 3에 나타낸 바와 같이,

화학식 5로 표시되는 화합물과 화학식 6으로 표시되는 화합물을 반응시켜 화학식 2a로 표시되는 화합물을 제조하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 제조방법:

하기 반응식 2에 나타낸 바와 같이,

화학식 4로 표시되는 화합물과 1,1'-설포닐다이이미다졸을 반응시켜 화학식 2a로 표시되는 화합물을 제조하는 단계를 포함하는 제조방법에 의해 제조될 수 있다.

[반응식 2]

상기 반응식 2에서

X 및 R¹은 상기 화학식 1에서 정의한 바와 같고;

PG는 아민 보호기(amine protectiong group)이고; 및

화학식 2a는 상기 화학식 2의 유도체이다.

이하, 상기 화학식 2a로 표시되는 화합물의 제조방법을 구체적으로 설명한다.

본 발명에 따른 화학식 2a로 표시되는 화합물의 제조방법에 있어서, 화학식 4로 표시되는 화합물과 1,1'-설포닐다이이미다졸을 반응시켜 화학식 2a로 표시되는 화합물을 제조하는 단계를 포함하는 제조방법에 의해 제조될 수 있다.

또한, 상기 반응에서 사용 가능한 염기로는 소듐하이드록사이드, 소듐카보네이트, 포타슘카보네이트, 세슘카보네이트 등이 있으며, 바람직하게는 세슘카보네이트를 사용할 수 있고, 이를 당량 또는 과량 사용할 수 있다.

나아가, 상기 반응에서 사용 가능한 용매로는 아세토나이트릴, 디클로로메탄, 테트라하이드로퓨란, 디메틸포름아미드(DMF)등이 있으며, 바람직하게는 테트라하이드로퓨란을 사용할 수 있고, 이를 단독 또는 혼합하여 사용할 수 있다.

또한, 하기 반응식 3에 나타낸 바와 같이,

화학식 5로 표시되는 화합물과 화학식 6으로 표시되는 화합물을 반응시켜 화학식 2a로 표시되는 화합물을 제조하는 단계를 포함하는 제조방법에 의해 제조될 수 있다.

[반응식 3]

상기 반응식 3에서,

X 및 R¹은 상기 화학식 1에서 정의한 바와 같고;

PG는 아민 보호기(amine protectiong group)이고; 및

화학식 2a는 상기 화학식 2의 유도체이다

본 발명에 따른 화학식 2a로 표시되는 화합물의 제조방법에 있어서, 화학식 5로 표시되는 화합물과 화학식 6으로 표시되는 화합물을 염기 존재 하에 반응시켜 화학식 2a로 표시되는 화합물을 제조하는 단계를 포함하는 제조방법에 의해 제조될 수 있다.

또한, 상기 반응에서 사용 가능한 염기로는 트라이메틸아민, 트라이에틸아민, N,N-디이소프로필에틸아민(DIPEA), N-메틸피페리딘, 피리딘, 루티딘, N,N-다이메틸아미노피리딘(DMAP), 1,8-디아자비사이클로[5.4.0]-7-운데센(DBU) 등이 있으며, 바람직하게는 1,8-디아자비사이클로[5.4.0]-7-운데센(DBU)을 사용할 수 있고, 이를 단독 또는 혼합하여 사용할 수 있다.

나아가, 상기 반응에서 사용 가능한 용매로는 테트라하이드로퓨란, 다이옥산, 디클로로메탄, 1,2-다이메톡시에탄과 같은 에테르계 용매, 벤젠, 톨루엔, 자일렌과 같은 아로마틱 하이드로카본용매, 디메틸포름아미드(DMF), 디메틸설폭사이드(DMSO), 아세토나이트릴 등이 있으며, 바람직하게는 디메틸포름아미드(DMF)를 사용할 수 있고, 이를 단독 또는 혼합하여 사용할 수 있다.

또한, 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 광학 이성질체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 C형 간염 바이러스 관련 간질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.

여기서, 상기 C형 간염 바이러스 관련 간질환은 급성 C형 간염, 만성 C형 간염, 간경변, 간세포성 암 등과 같은 간질환인 것을 특징으로 하는 C형 간염 바이러스 관련 간질환 등을 포함할 수 있다.

본 발명에 따른 화학식 1로 표시되는 화합물의 C형 간염 바이러스에 의한 감염 억제 활성을 측정한 결과, 본 발명에 따른 실시예 화합물들이 낮은 농도에서 간암 세포주에 존재하는 C형 간염 바이러스에 의한 감염을 억제하는 것으로 확인되었다. 특히, 실시예 2, 4, 6, 12, 14, 21, 26, 33 및 34는 EC₅₀값이 1 nM 이하로 매우 낮은 농도에서도 C형 간염 바이러스에 의한 감염을 우수하게 억제하는 것을 알 수 있었다(실험예 1 참조).

또한, 본 발명에 따른 화학식 1로 표시되는 실시예 화합물들의 C형 간염 바이러스 복제 억제 활성을 측정한 결과, 본 발명에 따른 실시예 화합물들이 낮은 농도에서 C형 간염 바이러스의 복제를 우수하게 억제하는 것으로 확인되었다. 특히, 실시예 2, 4, 6, 10, 12, 14, 15, 19, 21, 26, 29, 31 및 34 화합물은 EC₅₀값이 1 nM 이하로 매우 낮은 농도에서도 C형 간염 바이러스의 복제를 우수하게 억제하는 것을 알 수 있었다(실험예 2 참조).

따라서, 본 발명에 따른 실시예 화합물들은 C형 간염 바이러스에 의한 감염을 우수하게 억제하고, C형 간염 바이러스의 복제를 우수하게 억제하므로, C형 간염 바이러스에 의해 발병되는 급성 C형 간염, 만성 C형 간염, 간경변, 간세포성 암 등의 간질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.

본 발명의 조성물을 의약품으로 사용하는 경우, 상기 화학식 1로 표시되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 함유하는 약학적 조성물은 임상투여 시에 다양한 하기의 경구 또는 비경구 투여 형태로 제제화되어 투여될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

경구 투여용 제형으로는 예를 들면 정제, 환제, 경/연질 캅셀제, 액제, 현탁제, 유화제, 시럽제, 과립제, 엘릭시르제, 트로키제 등이 있는데, 이들 제형은 유효성분 이외에 희석제(예: 락토즈, 덱스트로즈, 수크로즈, 만니톨, 솔비톨, 셀룰로즈 및/ 또는 글리신), 활택제(예: 실리카, 탈크, 스테아르산 또는 그의 마그네슘염 또는 칼슘염 및/또는 폴리에틸렌 글리콜)를 함유하고 있다. 또한, 정제는 마그네슘 알루미늄 실리케이트, 전분 페이스트, 젤라틴, 메틸셀룰로즈, 나트륨 카복시메틸셀룰로즈 및/또는 폴리비닐피롤리딘과 같은 결합제를 함유할 수 있으며, 경우에 따라 전분, 한천, 알긴산 또는 그의 나트륨염과 같은 붕해제 또는 비등 혼합물 및/또는 흡수제, 착색제, 향미제 및 감미제를 함유할 수 있다.

상기 화학식 1로 표시되는 화합물을 유효성분으로 하는 약학적 조성물은 비경구 투여할 수 있으며, 비경구 투여는 피하주사, 정맥주사, 근육 내 주사 또는 흉부 내 주사를 주입하는 방법에 의한다.

이때, 비경구 투여용 제형으로 제제화하기 위하여 상기 화학식 1의 바이페닐다이아마이드 유도체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 안정제 또는 완충제와 함께 물에 혼합하여 용액 또는 현탁액으로 제조하고, 이를 앰플 또는 바이알 단위 투여형으로 제조할 수 있다. 상기 조성물은 멸균되고/되거나 방부제, 안정화제, 수화제 또는 유화 촉진제, 삼투압 조절을 위한 염 및/또는 완충제 등의 보조제, 및 기타 치료적으로 유용한 물질을 함유할 수 있으며, 통상적인 방법인 혼합, 과립화 또는 코팅 방법에 따라 제제화할 수 있다.

상기 화학식 1로 표시되는 화합물을 유효성분으로 함유하는 약학적 조성물의 인체에 대한 투여량은 환자의 나이, 몸무게, 성별, 투여형태, 건강상태 및 질환 정도에 따라 달라질 수 있으며, 바람직하게는 0.01 내지 200 ㎎/㎏/일의 양으로 의사 또는 약사의 판단에 따라 일정시간 간격을 1일 수회, 바람직하게는 1일 1회 내지 3회로 분할하여 경구 또는 비경구적 경로를 통해 투여할 수 있다.

나아가, 본 발명의 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 광학 이성질체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 C형 간염 바이러스 관련 간질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공한다.

본 발명에 따른 건강기능식품은 C형 간염 바이러스에 의하여 발병되는 간질환의 예방 또는 개선을 목적으로 상기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 식품학적으로 허용 가능한 염 또는 이의 광학 이성질체를 식품, 음료 등의 건강기능 식품에 첨가할 수 있다.

상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 물질을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 드링크제, 육류, 소시지, 빵, 비스킷, 떡, 초콜릿, 캔디류, 스낵류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 알코올 음료 및 비타민 복합제, 유제품 및 유가공 제품 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강기능식품을 모두 포함한다.

본 발명에 따른 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 식품학적으로 허용 가능한 염 또는 이의 광학 이성질체는 식품에 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효성분의 혼합량은 그의 사용 목적(예방 또는 개선용)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 건강기능식품 중의 상기 화합물의 양은 전체 식품 중량의 0.1 내지 90 중량부로 가할 수 있다. 그러나 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있다.

본 발명의 건강기능성 음료는 지시된 비율로 필수 성분으로서 상기 화합물을 함유하는 외에는 다른 성분에는 특별한 제한이 없으며 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등; 다이사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스 등; 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당, 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트라이톨 등의 당알코올이다. 상술한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제(예를 들면, 타우마틴, 스테비아 추출물 등) 및 합성 향미제(예를 들면, 사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 건강기능식품 100 당 일반적으로 약 1 내지 20 g, 바람직하게는 약 5내지 12 g이다.

상기 외에 본 발명에 따른 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 식품학적으로 허용 가능한 염 또는 이의 광학 이성질체를 유효성분으로 함유하는 건강기능식품은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제(예를 들면, 치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그 밖에 본 발명의 건강기능식품은 천연 과일쥬스 및 과일쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다.

이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 그렇게 중요하진 않지만 본 발명에 따른 건강기능식품 100 중량부 당 0.1 내지 약 20 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.

이하, 본 발명의 실시예 및 실험예에 대해 상세히 설명한다.

단, 하기 실시예 및 실험예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예 및 실험예에 한정되는 것은 아니다.

< 제조예 1> (R)-2-( 메톡시카보닐아미노 )-3- 메틸부타노익 애시드의 제조

소듐카보네이트(276 mg, 2.6 mmol)를 D-발린(D-vailine)(586 mg, 5.00 mmol)의 수산화나트륨 수용액 (5 mL의 1M/H₂O, 5 mmol)에 용해시킨 후, 반응혼합물을 얼음물 욕조에서 냉각시켰다. 메틸렌 클로로포메이트(0.420 mL, 5.40 mmol)을 조금씩 첨가한 후, 얼음물 욕조를 제거하고 반응 혼합물을 상온에서 3.25시간 교반시켰다. 반응혼합물을 에테르(3 X 9 mL)로 세척하고, 물층을 얼음물 욕조에서 냉각시킨 후, conc.HCl을 첨가하여 pH 1-2로 산성화(acidified)하고 디클로로메탄(3 X 9 mL)으로 추출하였다. 유기층을 무수황산마그네슘으로 건조하고, 필터한 후, 진공 내에서 농축하여 목적 화합물(760 mg, 87% 수율)을 흰색 고체 상태로 얻었다.

¹H NMR (DMSO-d₆, δ=2.5 ppm, 300MHz): 12.54 (s, 1H), 7.32 (d, 1H), 3.84 (t, 1H), 3.54 (s, 3H), 2.03 (m, 1H), 0.87 (d, 6H).

< 제조예 2> (S)-2-( 메톡시카보닐아미노 )-3- 메틸부타노익 애시드의 제조

소듐카보네이트(1.83 g, 12.7 mmol)을 L-발린(L-vailine)(3.900 g, 33.29 mmol)의 수산화나트륨 수용액 (33 mL의 1M/H₂O, 33 mmol)에 용해시킨 후, 반응혼합물을 얼음물 욕조에서 냉각시켰다. 메틸렌 클로로포메이트(2.8 mL, 36.1 mmol)을 조금씩 첨가한 후, 얼음물 욕조를 제거하고 반응 혼합물을 상온에서 3.25시간 교반시켰다. 반응혼합물을 에테르(3 x 17 mL)로 세척하고, 물층을 얼음물 욕조에서 냉각시킨 후, conc.HCl을 첨가하여 pH 1-2로 산성화(acidified)하고 디클로로메탄(3 X 17 mL)으로 추출하였다. 유기층을 무수황산마그네슘으로 건조하고, 필터한 후, 진공내에서 농축하여 목적 화합물(5.00 g, 86% 수율)을 흰색 고체 상태로 얻었다.

¹H NMR (DMSO-d₆, δ=2.5 ppm, 400MHz): 12.51 (br s, 1H), 7.32 (d, 1H), 3.84 (t, 1H), 3.54 (s, 3H), 2.03 (m, 1H), 0.88 (d, J=12, 6H).

< 제조예 3> (R)-2-( 메톡시카보닐아미노 )-2- 페닐아세틱 애시드의 제조

소듐카보네이트(0.55 g, 5.2 mmol)을 D-페닐글리신(D-phenylglycine)(1.500 g, 10.0 mmol)의 수산화나트륨 수용액 (10 mL의 1M/H₂O, 10 mmol)에 용해시킨 후, 반응혼합물을 얼음물 욕조에서 냉각시켰다. 메틸렌 클로로포메이트(0.85 mL, 11.0 mmol)을 조금씩 첨가한 후, 얼음물 욕조를 제거하고 반응 혼합물을 상온에서 3.25시간 교반시켰다. 반응혼합물을 에테르(3 X 18 mL)로 세척하고, 물층을 얼음물 욕조에서 냉각시킨 후, conc.HCl을 첨가하여 pH 1-2로 산성화(acidified)하고 디클로로메탄(3 X 18 mL)으로 추출하였다. 유기층을 무수황산마그네슘으로 건조하고, 필터한 후, 진공내에서 농축하여 생성된 오일 잔여물을 디에틸에테르/헥산(5/4, 10mL)로 처리하여 침전물을 생성하였다. 생성된 침전물을 필터하고 디에틸 에테르/헥산(1/3)로 세척한 후, 진공하에 건조하여 목적 화합물 (R)-2-(메톡시카보닐아미노)-2-페닐아세틱 애시드(1.4 g, 67% 수율)를 흰색 고체 상태로 얻었다.

¹H NMR (DMSO-d₆, δ=2.5 ppm, 500MHz): 12.79 (br s, 1H), 7.96 (d, J=12, 1H), 7.40-7.29 (m, 5H), 5.13 (d, J=12, 1H), 3.55 (s, 3H).

< 제조예 4> (S)-2-( 메톡시카보닐아미노 )-2- 페닐아세틱 애시드의 제조

소듐카보네이트(0.631 g, 5.95 mmol)을 L-페닐글리신(D-페닐glycine)(1.8 g, 11.9 mmol)의 수산화나트륨 수용액 (10 mL of 1M/H₂O, 10 mmol)에 용해시킨 후, 반응혼합물을 얼음물 욕조에서 냉각시켰다. 메틸렌 클로로포메이트(1.01 mL, 13.1 mmol)을 조금씩 첨가한 후, 얼음물 욕조를 제거하고 반응 혼합물을 상온에서 2시간 교반시켰다. 반응혼합물을 에테르(3 X 18 mL)로 세척하고, 물층을 얼음물 욕조에서 냉각시킨 후, conc.HCl을 첨가하여 pH 1-2로 산성화(acidified)하고 디클로로메탄(3 X 18 mL)으로 추출하였다. 유기층을 무수황산마그네슘으로 건조하고, 필터한 후, 진공내에서 농축하여 생성된 오일 잔여물을 디에틸에테르/헥산(5/4, 10mL)로 처리하여 침전물을 생성하였다. 생성된 침전물을 필터하고 디에틸 에테르/헥산(1/3)로 세척한 후, 진공하에 건조하여 목적 화합물 (S)-2-(메톡시카보닐아미노)-2-페닐아세틱 애시드(1.3 g, 52% 수율)를 흰색 고체 상태로 얻었다.

< 제조예 5> 다이 - tert -부틸 2,2'-( ((설포닐비스(4,1-페닐렌))비스(아자엔다이일))비스(카보닐) )(2S,2'S)-비스(피롤리딘-1-카복실레이트)의 제조

4,4'-디아미노디페닐 설폰(481 mg, 1.94 mmol), N-Boc-L-프롤린(1.00 g, 4.65 mmol) 및 1-에틸-3-(3-다이메틸아미노프로필)카보다이이미드(EDCI)(945 mg, 5.03 mmol)를 디클로로메탄(10 mL)에 용해시킨 후, 상온에서 16시간 교반시켰다. 반응혼합물을 1 N 염산수용액에 희석하고 디클로로메탄을 사용하여 추출하였다. 유기층을 무수황산마그네슘으로 건조하고, 필터한 후, 진공내에서 농축하여 목적 화합물 tert-부틸 (S)-2-((4-((4-((R)-1-(tert-부톡시카보닐)피롤리딘-2-카복스아미도)페닐)설포닐)페닐)카바모일)피롤리딘-1-카복실레이트(544 mg, 44% 수율)를 흰색 고체 상태로 얻었다.

¹H NMR (DMSO-d₆, δ=2.5 ppm, 400MHz): 10.43 (s, 2H), 7.89-7.79 (m, 8H), 4.27-4.18 (m, 2H), 3.44-3.39 (m, 4H), 2.19-2.16 (m, 2H), 1.99-1.78 (m, 6H), 1.38-1.23 (app br s, 18H);

¹³C NMR (DMSO-d₆, δ=39.52 ppm, 100 MHz): 172.31, 153.01, 143.44, 135.30, 128.49, 119.22, 112.95, 78.58, 62.80, 60.42, 46.54, 45.14, 33.13, 30.93, 30.09, 27.93, 26.68, 26.60, 23.95, 23.35, 13.13.

< 제조예 6> 3-아미노-2- 메틸페놀의 제조

2-메틸-3-나이트로페놀(2.0 g, 13.1 mmol)을 메탄올(50 mL)에 상온에서 용해시킨 후, 10 중량%의 팔라듐/차콜(Pd/C, palladium on charcoal)(100 mg)을 첨가하였다. 수소 가스 하에 반응혼합물을 24시간 교반시킨 후, 10 중량%의 팔라듐/차콜을 셀라이트로 필터하였다. 여액을 진공 하에 농축하여 목적화합물 (1.62 g, 99% 수율)을 고체상태로 얻었다.

¹H NMR (CD₃OD, δ=3.31 ppm, 400MHz): 6.77-6.73,(t, 1H), 6.29-6.27 (d, 1H), 6.22-6.20 (d, 1H), 2.02 (s, 3H);

¹³C NMR (CD₃OD, δ=49.00 ppm, 100 MHz): 156.69, 147.48, 127.22, 110.86, 108.78, 106.65, 9.18.

< 제조예 7> (S)- tert - 부틸2 -((3- 하이드록시 -2- 메틸페닐 ) 카바모일 ) 피롤리딘 -1-카 복실레이트 의 제조

상기 제조예 6에서 얻은 3-아미노-2-메틸페놀(1.19 g, 5.52 mmol), N-Boc-L-프롤린(1.43g, 6.63 mmol) 및 1-에틸-3-(3-다이메틸아미노프로필)카보다이이미드(EDCI)(928 mg, 7.18 mmol)를 디클로로메탄(20 mL)에 용해시킨 후, 상온에서 5시간 교반시켰다. 반응혼합물을 1 N 염산수용액에 희석하고 디클로로메탄을 사용하여 추출하였다. 유기층을 무수황산마그네슘으로 건조하고, 필터한 후, 진공 내에서 농축하여 목적화합물 (1.76 g, 99% 수율)을 흰색 고체상태로 얻었다.

¹H NMR (DMSO-d₆, δ=2.5 ppm, 400MHz): 9.36-9.24 (t, 2H), 6.94 (s, 1H), 6.82-6.78 (d, 1H), 6.65 (s, 1H), 4.29 (s, 1H), 3.42-3.32 (m, 2H), 2.23-2.14 (d, 1H), 1.99 (s, 3H), 1.89-1.81 (m, 3H), 1.42-1.37(app br s, 9H);

¹³C NMR (DMSO-d₆, δ=39.52 ppm, 100 MHz): 171.26, 155.74, 153.34, 137.14, 125.51, 119.25, 116.24, 111.80, 78.49, 59.95, 46.61, 31.37, 28.10, 23.28, 10.69.

< 제조예 8> (2S,2'S)-디- tert -부틸 2,2'-(3,3'- 설포닐비스(옥시)비스 (2- 메틸 -3,1-페닐렌)) 비스 ( 아자네디일 ) 비스 ( 옥소메틸렌 ) 디피롤리딘 -1- 카복실레이트의 제조

상기 제조예 7에서 얻은 (S)-tert-부틸2-((3-하이드록시-2-메틸페닐)카바모일)피롤리딘-1-카복실레이트(485 mg, 1.51 mmol), 세슘카보네이트(217 mg, 0.666 mmol) 및 1,1'-설포닐다이이미다졸(120 mg, 0.605 mmol)을 다이메틸포름아마이드(10 mL)에 용해시킨 후, 반응혼합물을 60℃에서 12시간 환류시켰다. 반응혼합물을 짧은 실리카컬럼으로 필터한 후, 진공 내에서 농축하였다. 잔여물은 헥산 : 에틸 아세테이트를 이동상으로 사용한 실리카겔 플래시 컬럼 크로마토그래피를 통해 정제하여 목적화합물 (321 mg, 75% 수율)을 노란색 고체상태로 얻었다.

¹H NMR (DMSO-d₆, δ=2.5 ppm, 400MHz): 9.66-9.61 (d, 2H), 7.41 (s, 2H), 7.37-7.33 (t, 2H), 7.26-7.24 (d, 2H), 4.31-4.29 (t, 2H), 3.42 (s, 2H), 3.34 (s, 2H), 2.25-2.23 (br d, 2H), 2.11 (s, 6H), 1.97-1.82 (m, 6H), 1.41-1.35 (app br s, 18H);

¹³C NMR (DMSO-d₆, δ=39.52 ppm, 100 MHz): 171.67, 153.81, 153.22, 148.62, 138.29, 126.84, 125.85, 125.05, 118.07, 78.59, 59.92, 46.58, 31.26, 29.99, 28.07, 24.05, 23.24, 11.35.

< 제조예 9> 5-아미노-2- 플루오로페놀의 제조

상온에서 2-플루오로-5-나이트로페놀(1.0 g, 6.37 mmol)을 메탄올(25 mL)에 용해시킨 후, 10 중량%의 팔라듐/차콜(Pd/C, palladium on charcoal)(50 mg)을 첨가하였다. 수소가스 하에 반응혼합물을 24시간 교반시킨 후, 10 중량%의 팔라듐/차콜을 셀라이트로 필터하였다. 여액을 진공하에 농축하여 목적화합물 (809 mg, 99% 수율)을 고체상태로 얻었다.

¹H NMR (CD₃OD, δ=3.31 ppm, 400MHz): 6.78-6.73,(t, 1H), 6.34-6.31 (q, 1H), 6.17-6.13 (m, 1H);

¹³C NMR (CD₃OD, δ=49.00 ppm, 100 MHz): 147.94, 145.65, 145.15, 116.60, 107.67, 106.22;

¹⁹F NMR (376 MHz, CD₃OD): -152.91.

<제조예 10> (S)- tert - 부틸2 -((4- 플루오로 -3- 하이드록시페닐 ) 카바모일 ) 피롤리딘 -1-카복실레이트의 제조

상기 제조예 9에서 얻은 5-아미노-2-플루오로페놀(510 mg, 3.93 mmol), N-Boc-L-프롤린(1.02 g, 4.72 mmol) 및 1-에틸-3-(3-다이메틸아미노프로필)카보다이이미드(EDCI)(661mg, 5.11 mmol)를 디클로로메탄(20 mL)에 용해시킨 후, 상온에서 16시간 교반시켰다. 반응혼합물을 1 N 염산수용액에 희석하고 디클로로메탄을 사용하여 추출하였다. 유기층을 무수황산마그네슘으로 건조하고, 필터한 후, 진공 내에서 농축하였다. 잔여물은 헥산 : 에틸 아세테이트를 이동상으로 사용한 실리카겔 플래시 컬럼 크로마토그래피를 통해 정제하여 목적화합물 (748mg, 59% 수율)을 흰색 고체상태로 얻었다.

¹H NMR (DMSO-d₆, δ=2.5 ppm, 400MHz): 10.19-9.87 (d, 2H), 7.39-7.37 (d, 1H), 7.06-7.01 (t, 1H), 6.94-6.92 (d, 1H), 4.22-4.13 (m, 1H), 3.42-3.29 (m, 2H), 2.20-2.14 (m, 1H), 1.89-1.76 (m, 3H), 1.39-1.27 (app br s, 9H);

¹³C NMR (DMSO-d₆, δ=39.52 ppm, 100 MHz): 171.29, 153.17, 148.29, 145.93, 144.67, 135.57, 115.83, 109.96, 108.99, 78.49, 60.37, 46.59, 31.02, 27.97, 23.43;

¹⁹F NMR (376 MHz, DMSO-d₆): -142.31.

< 제조예 11> (S)- tert - 부틸2 -((3-(( tert - 부틸다이메틸실릴 ) 옥시 )-4- 플루오로페닐 )카바모일)피롤리딘-1-카복실레이트의 제조

상기 제조예 10에서 얻은 (S)-tert-부틸2-((4-플루오로-3-하이드록시페닐)카바모일)피롤리딘-1-카복실레이트(321 mg, 0.988 mmol), tert-부틸다이메틸실릴 클로라이드(223 mg, 1.48 mmol) 및 이미다졸(108 mg, 1.58 mmol)을 디클로로메탄(10 mL)에 용해시킨 후, 반응혼합물을 상온에서 4시간 교반시켰다. 반응혼합물을 물에 희석하고 디클로로메탄을 사용하여 추출하였다. 유기층을 무수황산마그네슘으로 건조하고, 필터한 후, 진공 내에서 농축하였다. 잔여물은 헥산 : 에틸 아세테이트를 이동상으로 사용한 실리카겔 플래시 컬럼 크로마토그래피를 통해 정제하여 목적화합물 (318 mg, 73% 수율)을 흰색 오일상태로 얻었다.

¹H NMR (DMSO-d₆, δ=2.5 ppm, 400MHz): 9.95 (s, 1H), 7.51-7.38 (q, 1H), 7.09 (s, 2H), 4.22-4.12 (m, 1H), 3.42-3.39 (m, 1H), 3.35-3.30 (m, 1H), 2.21-2.12 (m, 1H), 1.87-1.75 (m, 3H), 1.39-1.25 (app br s, 9H), 0.95 (s, 9H), 0.17 (s, 6H);

¹³C NMR (DMSO-d₆, δ=39.52 ppm, 100 MHz): 171.38, 153.08, 150.51, 148.14, 142.08, 135.72, 115.92, 113.02, 78.41, 60.40, 46.55, 30.94, 27.85, 25.34, 23.42, 17.95, -4.89;

¹⁹F NMR (376 MHz, DMSO-d₆): -138.76.

< 제조예 12> (S)- tert - 부틸2 -((4- 플루오로 -3-(( 플루오로설포닐 ) 옥시 ) 페닐 ) 카바모일 ) 피롤리딘 -1- 카복실레이트의 제조

상기 제조예 10에서 얻은 (S)-tert-부틸2-((4-플루오로-3-하이드록시페닐)카바모일)피롤리딘-1-카복실레이트(229 mg, 0.707 mmol)와 N,N-디아이소프로필에틸아민 (228 mL, 0.919 mmol)을 디클로로메탄(5 mL)에 용해시킨 후, 설퍼릴 플루오라이드(SO₂F₂) 하에 상온에서 5시간 교반시켰다. 반응혼합물을 물에 희석하고 디클로로메탄을 사용하여 추출하였다. 유기층을 무수황산마그네슘으로 건조하고, 필터한 후, 진공 내에서 농축하여 목적화합물 (260 mg, 90% 수율)을 흰색 오일상태로 얻었다.

¹H NMR (DMSO-d₆, δ=2.5 ppm, 400MHz): 10.42 (s, 1H), 8.14-8.12 (d, 1H), 7.64-7.56 (m, 2H), 4.24-4.15 (m, 1H), 3.41 (s, 1H), 3.31 (s, 1H),2.22-2.17 (m, 1H), 1.93-1.78 (m, 3H), 1.39-1.25 (app s, 9H);

¹³C NMR (DMSO-d₆, δ=39.52 ppm, 100 MHz): 172.14, 153.63, 153.05, 149.36, 146.90, 136.55, 135.74, 135.60, 120.93, 118.14, 113.36, 78.65, 60.46, 46.59, 30.92, 30.11, 27.90, 24.00, 23.40;

¹⁹F NMR (DMSO-d₆, 376 MHz): -136.06.

< 제조예 13> 다이 - tert -부틸 2,2'-((((설포닐비스(옥시))비스(4-플루오로-3,1-페닐렌))비스(아자엔다이일))비스(카보닐))(2S,2'S)-비스(피롤리딘-1-카복실레이트)의 제조

상기 제조예 11에서 얻은 (S)-tert-부틸2-((3-((tert-부틸다이메틸실릴)옥시)-4-플루오로페닐)카바모일)피롤리딘-1-카복실레이트(207 mg, 0.472 mmol), 상기 제조예 12에서 얻은 (S)- tert-부틸2-((4-플루오로-3-((플루오로설포닐)옥시)페닐)카바모일)피롤리딘-1-카복실레이트(130 mg, 0.394 mmol)와 DBU (11.8 mL, 0.08 mmol)를 디클로로메탄(10 mL)에 용해시킨 후, 50℃에서 24시간 교반시켰다. 반응혼합물을 1N 염산수용액에 희석하고 디클로로메탄을 사용하여 추출하였다. 유기층을 무수황산마그네슘으로 건조하고, 필터한 후, 진공 내에서 농축하였다. 잔여물은 헥산 : 에틸 아세테이트를 이동상으로 사용한 실리카겔 플래시 컬럼 크로마토그래피를 통해 정제하여 다이-tert-부틸 2,2'-((((설포닐비스(옥시))비스(4-플루오로-3,1-페닐렌))비스(아자엔다이일))비스(카보닐))(2S,2'S)-비스(피롤리딘-1-카복실레이트)(217 mg, 78% 수율)을 흰색 고체상태로 얻었다.

¹H NMR (DMSO-d₆, δ=2.5 ppm, 400MHz): 10.33 (s, 2H), 8.11-8.08 (t, 2H), 7.60-7.58 (d, 2H), 7.53-7.48 (t, 2H), 4.23-4.13 (m, 2H), 3.42-3.40 (m, 2H), 3.35-3.32 (m, 2H), 2.21-2.18 (m, 2H), 1.91-1.78 (m, 6H), 1.38-1.23 (app br s, 18H);

¹³C NMR (DMSO-d₆, δ=39.52 ppm, 100 MHz): 171.92, 153.60, 153.04, 149.87, 147.41, 136.27, 119.94, 117.90, 113.55, 78.60, 60.45, 46.57, 30.92, 30.11, 27.86, 23.99, 23.40;

¹⁹F NMR (376 MHz, DMSO-d₆): -135.44.

< 제조예 14> (S)- tert -부틸 2-((3- 하이드록시페닐 ) 카바모일 ) 피롤리딘 -1- 카복실레이트의 제조

3-아미노페놀(3.00 g, 27.5 mmol), N-Boc-L-프롤린(7.11 g, 33.0 mmol) 및 1-에틸-3-(3-다이메틸아미노프로필)카보다이이미드(EDCI)(4.62 g, 35.7 mmol)를 디클로로메탄(50 mL)에 용해시킨 후, 상온에서 16시간 교반시켰다. 반응혼합물을 1 N 염산수용액에 희석하고 디클로로메탄을 사용하여 추출하였다. 유기층을 무수황산마그네슘으로 건조하고, 필터한 후, 진공 내에서 농축하였다. 잔여물은 헥산 : 에틸 아세테이트를 이동상으로 사용한 실리카겔 플래시 컬럼 크로마토그래피를 통해 정제하여 목적화합물 (2.33 g, 28% 수율)을 흰색 고체상태로 얻었다.

¹H NMR (DMSO-d₆, δ=2.5 ppm, 400MHz): 9.83 (s, 1H), 9.36 (s, 1H), 7.18 (s, 1H), 7.08-7.04 (t, 1H), 6.96-6.94 (d, 1H), 6.45-6.43 (d, 1H), 4.24-4.15 (m, 1H), 3.37 (m, 1H), 3.33-3.32 (m, 1H), 2.17-2.08 (m, 1H), 1.86-1.75 (m, 3H), 1.39-1.27 (app br s, 9H);

¹³C NMR (DMSO-d₆, δ=39.52 ppm, 100 MHz): 171.40, 157.63, 153.23, 140.15, 129.28, 110.38, 110.11, 106.55, 78.49, 60.40, 46.60, 31.06, 27.98, 23.44.

< 제조예 15> (S)- tert - 부틸2 -((3-(( tert - 부틸다이메틸실릴 ) 옥시 ) 페닐 ) 카바모일 ) 피롤리딘 -1- 카복실레이트의 제조

상기 제조예 14에서 얻은 (S)-tert-부틸 2-((3-하이드록시페닐)카바모일)피롤리딘-1-카복실레이트(702 mg, 2.29 mmol), tert-부틸다이메틸실릴 클로라이드(518 mg, 3.44 mmol) 및 이미다졸(249 mg, 3.66 mmol)을 테트라하이드로퓨란(10 mL)에 용해시킨 후, 반응혼합물을 상온에서 4시간 교반시켰다. 반응혼합물을 물에 희석하고 디클로로메탄을 사용하여 추출하였다. 유기층을 무수황산마그네슘으로 건조하고, 필터한 후, 진공 내에서 농축하였다. 잔여물은 헥산 : 에틸 아세테이트를 이동상으로 사용한 실리카겔 플래시 컬럼 크로마토그래피를 통해 정제하여 목적화합물 (1.47 g, 91% 수율)을 흰색 오일상태로 얻었다.

¹H NMR (DMSO-d₆, δ=2.5 ppm, 400MHz): 9.93 (s, 1H), 7.35-7.24 (d, 1H), 7.16-7.09 (m, 2H), 6.52-6.51 (d, 1H), 4.23-4.13 (m, 1H), 3.44-3.38 (m, 1H), 3.32-3.30 (m, 1H),2.21-2.12 (m, 1H), 1.90-1.75 (m, 3H), 1.39-1.26 (app s, 9H), 0.93 (s, 9H), 0.17 (s, 6H);

¹³C NMR (DMSO-d₆, δ=39.52 ppm, 100 MHz): 171.50, 155.27, 153.11, 140.22, 129.48, 114.63, 112.27, 110.84, 78.44, 60.40, 46.56, 30.95, 27.89, 25.55, 23.43, 17.95, -4.53.

< 제조예 16> tert -부틸(S)-2-((3-(((4-((S)-1-( tert - 부톡시카보닐 ) 피롤리딘 -2-카복스아미도)페녹시)설포닐)옥시)페닐)카바모일)피롤리딘-1-카복실레이트의 제조

상기 제조예 15에서 얻은 (S)-tert-부틸2-((3-((tert-부틸다이메틸실릴)옥시)페닐)카바모일)피롤리딘-1-카복실레이트(172 mg, 0.408 mmol)를 (S)- tert-부틸2-((4-((플루오로설포닐)옥시)페닐)카바모일)피롤리딘-1-카복실레이트(106 mg, 0.272 mmol), DBU (8.14 mL, 0.05 mmol)와 디클로로메탄(10 mL)에 용해시킨 후, 50℃에서 24시간 교반시켰다. 반응혼합물을 1N 염산수용액에 희석하고 디클로로메탄을 사용하여 추출하였다. 유기층을 무수황산마그네슘으로 건조하고, 필터한 후, 진공 내에서 농축하였다. 잔여물은 헥산 : 에틸 아세테이트를 이동상으로 사용한 실리카겔 플래시 컬럼 크로마토그래피를 통해 정제하여 목적화합물 (170 mg, 93% 수율)을 흰색 고체상태로 얻었다.

¹H NMR (DMSO-d₆, δ=2.5 ppm, 500MHz): 10.34-10.23 (d, 2H), 7.96-7.88 (m, 1H), 7.75-7.73 (d, 2H), 7.58-7.55 (t, 1H), 7.49-7.37 (m, 3H), 7.11-7.10 (d, 1H), 4.26-4.16 (m, 2H), 3.45-3.40 (m, 2H), 3.36-3.31 (m, 2H), 2.23-2.15 (m, 2H), 1.93-1.77 (m, 6H), 1.39-1.24 (app br s, 18H);

¹³C NMR (DMSO-d₆, δ=39.52 ppm, 125MHz): 171.80, 153.08, 149.91, 144.95, 144.91, 140.75, 138.75, 130.59, 121.56, 120.58, 118.31, 115.45, 111.39, 78.54, 60.41, 46.58, 30.95, 30.14, 27.90, 23.99, 23.40.

< 제조예 17> 다이 - tert -부틸 2,2'-( (((설포닐비스(옥시))비스(3,1-페닐렌))비스(아자엔다이일) )비스(카보닐))(2S,2'S)-비스(피롤리딘-1-카복실레이트)의 제조

상기 제조예 15에서 얻은 (S)-tert-부틸2-((3-하이드록시페닐)카바모일)피롤리딘-1-카복실레이트(773 mg, 2.52 mmol), 세슘카보네이트(1.11 g, 2.52 mmol) 및 1,1'-설포닐다이이미다졸(200 mg, 1.01 mmol)을 테트라하이드로퓨란(20 mL)에 용해시킨 후, 반응혼합물을 66℃에서 12시간 환류시켰다. 반응혼합물을 짧은 실리카컬럼으로 필터한 후, 진공 내에서 농축하였다. 잔여물은 헥산 : 에틸 아세테이트를 이동상으로 사용한 실리카겔 플래시 컬럼 크로마토그래피를 통해 정제하여 목적화합물 (378 mg, 56% 수율)을 흰색 고체상태로 얻었다.

¹H NMR (DMSO-d₆, δ=2.5 ppm, 400MHz): 10.32 (s, 1H), 8.21-7.77 (m, 3H), 7.59-7.57 (d, 2H), 7.47 (s, 1H), 7.40-7.22 (m, 1H), 7.12-7.08 (t, 1H), 4.24-4.18 (d, 2H), 3.41 (br s, 4H), 2.20 (s, 2H), 1.88-1.80 (m, 6H), 1.39- 1.24(app br s, 18H);

¹³C NMR (DMSO-d₆, δ=39.52 ppm, 100 MHz): 172.03, 153.06, 149.87, 140.75, 130.57, 118.38, 115.33, 111.43, 78.58, 60.46, 46.56, 30.93, 27.88, 23.39

< 제조예 18> (S)- tert - 부틸2 -((3- 하이드록시 -4- 메틸페닐 ) 카바모일 ) 피롤리딘 -1- 카복 실레이트 의 제조

5-아미노-o-크레졸(1.00 g, 8.12 mmol), N-Boc-L-프롤린(2.10g, 9.74 mmol) 및 1-에틸-3-(3-다이메틸아미노프로필)카보다이이미드(EDCI) (1.36 g, 10.6 mmol)를 디클로로메탄(25 mL)에 용해시킨 후, 상온에서 5시간 교반시켰다. 반응혼합물을 1 N 염산수용액에 희석하고 디클로로메탄을 사용하여 추출하였다. 유기층을 무수황산마그네슘으로 건조하고, 필터한 후, 진공 내에서 농축하여 목적화합물 (1.92 g, 74% 수율)을 흰색 고체상태로 얻었다.

¹H NMR (DMSO-d₆, δ=2.5 ppm, 400MHz): 9.73 (s, 1H), 9.27 (s, 1H), 7.21 (s, 1H), 6.94-6.92 (d, 1H), 6.86-6.84 (d, 1H), 4.23-4.13 (m, 1H), 3.39 (s, 2H), 2.20-2.17 (d, 1H), 2.04 (s, 3H), 1.86-1.80 (m, 3H), 1.39-1.23 (app br s, 9H);

¹³C NMR (DMSO-d₆, δ=39.52 ppm, 100 MHz): 171.05, 155.19, 153.17, 137.64, 130.18, 118.63, 109.93, 106.16, 78.40, 60.30, 46.54, 30.99, 27.95, 23.39, 15.50.

< 제조예 19> (2S,2'S)-디- tert -부틸 2,2'-(3,3'- 설포닐비스(옥시)비스 (4- 메틸 -3,1-페닐렌)) 비스 ( 아자네디일 ) 비스 ( 옥소메틸렌 ) 디피롤리딘 -1- 카복실레이트의 제조

상기 제조예 18에서 얻은 (S)-tert-부틸2-((3-하이드록시-4-메틸페닐)카바모일)피롤리딘-1-카복실레이트(349 mg, 1.09 mmol), 세슘카보네이트(163 mg, 0.499 mmol) 및 1,1'-설포닐다이이미다졸(90.0 mg, 0.454 mmol)을 다이메틸포름아마이드(10 mL)에 용해시킨 후, 반응혼합물을 60℃에서 12시간 환류시켰다. 반응혼합물을 짧은 실리카컬럼으로 필터한 후, 진공 내에서 농축하였다. 잔여물은 헥산 : 에틸 아세테이트를 이동상으로 사용한 실리카겔 플래시 컬럼 크로마토그래피를 통해 정제하여 목적화합물 (229 mg, 72% 수율)을 흰색 고체상태로 얻었다.

¹H NMR (DMSO-d₆, δ=2.5 ppm, 400MHz): 10.22 (s, 2H), 7.95 (s, 2H), 7.54-7.48 (q, 2H), 7.34-7.32 (d, 2H), 4.24-4.13 (m, 2H), 3.42-3.31 (m, 4H), 2.20-2.17 (d, 8H), 1.91-1.77 (m, 6H), 1.38-1.23 (app br s, 18H);

¹³C NMR (DMSO-d₆, δ=39.52 ppm, 100 MHz): 171.76, 153.07, 148.19, 138.42, 131.91, 124.47, 118.45, 111.63, 78.53, 60.42, 46.55, 30.93, 27.87, 23.40, 15.12.

< 제조예 20> 다이 - tert -부틸 2,2'-( (((설포닐비스(옥시))비스(4,1-페닐렌))비스(아자엔다이일) )비스(카보닐))(2S,2'S)-비스(피롤리딘-1-카복실레이트)의 제조

(S)-tert-부틸2-((4-하이드록시페닐)카바모일)피롤리딘-1-카복실레이트(464 mg, 1.51 mmol), 세슘카보네이트(164 mg, 0.505 mmol) 및 1,1'-설포닐다이이미다졸(100 mg, 0.505 mmol)을 테트라하이드로퓨란(25 mL)에 용해시킨 후, 반응혼합물을 66℃에서 12시간 환류시켰다. 반응혼합물을 짧은 실리카컬럼으로 필터한 후, 진공 내에서 농축하였다. 잔여물은 헥산 : 에틸 아세테이트를 이동상으로 사용한 실리카겔 플래시 컬럼 크로마토그래피를 통해 정제하여 목적화합물 (102 mg, 30% 수율)을 노란색 고체상태로 얻었다.

¹H NMR (DMSO-d₆, δ=2.5 ppm, 400MHz): 10.28 (s, 1H), 7.72-7.70 (d, 4H), 7.39-7.37 (d, 4H), 4.23-4.16 (m, 2H), 3.39-3.32 (m, 4H), 2.21-2.16 (t, 2H), 1.86-1.78 (m, 6H), 1.38-1.25 (app br s, 18H);

¹³C NMR (DMSO-d₆, δ=39.52 ppm, 100 MHz): 172.16, 153.45, 145.24, 138.81, 121.89, 120.92, 78.98, 62.96, 60.65, 46.82, 31.20, 28.17, 23.65.

< 제조예 21> (S)-1- tert - 부틸2 -(2-(4- 하이드록시페닐 )-2- 옥소에틸 ) 피롤리딘 -1,2-다 이카복실레이 트의 제조

2-브로모-4-하이드록시아세토페논(1.00 g, 4.65 mmol)과 N-Boc-L-프롤린(1.10g, 5.12 mmol)을 아세토니트릴 (50 mL)에 용해시킨 후, 디아이소프로필에틸아민(1.44mL, 5.58 mmol)을 조금씩 첨가하여, 상온에서 5시간 교반시켰다. 반응혼합물을 1 N 염산수용액에 희석하고 디클로로메탄을 사용하여 추출하였다. 유기층을 무수황산마그네슘으로 건조하고, 필터한 후, 진공 내에서 농축하였다. 잔여물은 헥산 : 에틸 아세테이트를 이동상으로 사용한 실리카겔 플래시 컬럼 크로마토그래피를 통해 정제하여 목적화합물 (1.20 g, 74% 수율)을 흰색 고체상태로 얻었다.

¹H NMR (DMSO-d₆, δ=2.5 ppm, 400MHz): 10.49 (s, 1H), 7.86-7.85 (d, 2H), 6.88-6.86 (t, 2H), 5.53-5.32 (m, 2H), 4.32-4.29 (m, 1H), 3.11 (m, 2H), 2.29-2.14 (m, 2H), 1.90-1.85 (m, 2H), 1.36 (app br s, 9H);

¹³C NMR (DMSO-d₆, δ=39.52 ppm, 100 MHz): 190.47, 172.31, 162.68, 152.95, 130.41, 125.35, 115.44, 78.94, 66.11, 58.55, 46.17, 30.43, 27.93, 23.05.

< 제조예 22> (S)- tert -부틸 2-(5-(4- 하이드록시페닐 )-1H- 이미다졸 -2-일) 피롤리딘 -1- 카복실레이트의 제조

상기 제조예 21에서 얻은 (S)-1-tert-부틸2-(2-(4-하이드록시페닐)-2-옥소에틸)피롤리딘-1,2-다이카복실레이트(2.00 g, 5.72mmol)와 암모늄 아세테이트(6.62 g, 85.9mmol)를 톨루엔 (20 mL)에 용해시킨 후, 반응혼합물을 90℃까지 가열하고 20시간 교반시켰다. 반응혼합물을 물에 희석하고 에틸 아세테이트를 사용하여 추출하였다. 유기층을 무수황산마그네슘으로 건조하고, 필터한 후, 진공 내에서 농축하였다. 잔여물은 헥산 : 에틸 아세테이트를 이동상으로 사용한 실리카겔 플래시 컬럼 크로마토그래피를 통해 정제하여 목적화합물 (887 mg, 47% 수율)을 노란색 고체상태로 얻었다.

¹H NMR (DMSO-d₆, δ=2.5 ppm, 400MHz): 11.76 (br s, 1H), 9.48 (br s, 1H), 7.53 (s, 2H), 7.20 (s, 1H), 6.77-6.75 (d, 2H), 4.83-4.76 (d, 1H), 3.54-3.35 (d, 2H), 2.20-1.81 (m, 4H), 1.39-1.17 (app br s, 9H);

¹³C NMR (DMSO-d₆, δ=39.52 ppm, 100 MHz): 155.93, 153.82, 153.47, 150.09, 125.54, 115.30, 78.23, 55.26, 46.34, 33.41, 31.88, 27.93, 23.85, 23.16.

< 제조예 23> (S)-1- tert - 부틸2 -(2-(3- 하이드록시페닐 )-2- 옥소에틸 ) 피롤리딘 -1,2-다 이카복실레이 트의 제조

2-브로모-3-하이드록시아세토페논(1.00 g, 4.65 mmol)과 N-Boc-L-프롤린(1.10g, 5.12 mmol)을 아세토니트릴 (50 mL)에 용해시킨 후, 디아이소프로필에틸아민(1.44mL, 5.58 mmol)을 조금씩 첨가한 후, 상온에서 5시간 교반시켰다. 반응혼합물을 1 N 염산수용액에 희석하고 디클로로메탄을 사용하여 추출하였다. 유기층을 무수황산마그네슘으로 건조하고, 필터한 후, 진공 내에서 농축하였다. 잔여물은 헥산 : 에틸 아세테이트를 이동상으로 사용한 실리카겔 플래시 컬럼 크로마토그래피를 통해 정제하여 목적화합물 (1.47 g, 91% 수율)을 흰색 고체상태로 얻었다.

¹H NMR (DMSO-d₆, δ=2.5 ppm, 400MHz): 9.88 (s, 1H), 7.45-7.43 (d, 1H), 7.37-7.33 (m, 2H), 7.10-7.08 (d, 1H), 5.58-5.38 (m, 2H), 4.37-4.31 (m, 1H), 3.41-3.31 (m, 2H), 2.34-2.10 (m, 2H), 1.92-1.82 (m, 2H), 1.40-1.37 (app br s, 9H);

¹³C NMR (DMSO-d₆, δ=39.52 ppm, 100 MHz): 192.42, 172.30, 157.84, 153.00, 135.18, 130.04, 121.13, 118.74, 113.90, 79.00, 66.55, 58.59, 46.21, 30.48, 29.56, 28.11, 27.94, 23.87, 23.12.

< 제조예 24> (S)- tert - 부틸2 -(5-(3- 하이드록시페닐 )-1H- 이미다졸 -2-일) 피롤리딘 -1- 카복실레이트의 제조

상기 제조예 23에서 얻은 (S)-1-tert-부틸2-(2-(3-하이드록시페닐)-2-옥소에틸)피롤리딘-1,2-다이카복실레이트(1.11 g, 3.19 mmol)와 암모늄 아세테이트(3.68 g, 47.8 mmol)를 톨루엔 (20 mL)에 용해시킨 후, 반응혼합물을 90℃까지 가열하고 20시간 교반시켰다. 반응혼합물을 물에 희석하고 에틸 아세테이트를 사용하여 추출하였다. 유기층을 무수황산마그네슘으로 건조하고, 필터한 후, 진공 내에서 농축하였다. 잔여물은 헥산 : 에틸 아세테이트를 이동상으로 사용한 실리카겔 플래시 컬럼 크로마토그래피를 통해 정제하여 목적화합물 (456 mg, 45% 수율)을 노란색 고체상태로 얻었다.

¹H NMR (DMSO-d₆, δ=2.5 ppm, 400MHz): 11.88 (br s, 1H), 9.41 (br s, 1H), 7.34-7.11 (m, 4H), 6.60 (s, 1H), 4.85-4.77 (d, 1H), 3.55 (s, 1H), 3.35 (s, 1H), 2.22-2.14 (m, 1H), 1.99-1.82 (m, 3H), 1.39-1.16 (app br s, 9H);

¹³C NMR (DMSO-d₆, δ=39.52 ppm, 100 MHz): 157.66, 153.51, 129.43, 115.25, 113.14, 111.25, 78.32, 55.33, 48.72, 46.42, 33.49, 31.93, 27.96, 23.93, 23.25.

< 제조예 25> 디- tert -부틸 2,2'-((( 설포닐비스 ( 옥시 )) 비스 (3,1- 페닐렌 )) 비스 (1H- 이미다졸 -5,2- 디일 ))(2S,2'S)- 비스(피롤리딘-1-카복실레이트)의 제조

상기 제조예 24에서 얻은 (S)-tert-부틸2-(5-(3-하이드록시페닐)-1H-이미다졸-2-일)피롤리딘-1-카복실레이트(479 mg, 1.45 mmol), 세슘카보네이트(217 mg, 0.666 mmol) 및 1,1'-설포닐다이이미다졸(120 mg, 0.605 mmol)을 다이메틸포름아마이드(10 mL)에 용해시킨 후, 반응혼합물을 60℃에서 12시간 환류시켰다. 반응혼합물을 짧은 실리카컬럼으로 필터한 후, 진공 내에서 농축하였다. 잔여물은 헥산 : 에틸 아세테이트를 이동상으로 사용한 실리카겔 플래시 컬럼 크로마토그래피를 통해 정제하여 목적화합물 (388 mg, 89% 수율)을 흰색 고체상태로 얻었다.

¹H NMR (DMSO-d₆, δ=2.5 ppm, 400MHz): 12.04-11.97 (br d, 2H), 8.21-7.76 (t, 4H), 7.64-7.61 (d, 1H), 7.52-7.44 (q, 2H), 7.37-7.20 (m, 2H), 6.93-6.74 (q, 1H), 4.83-4.77 (d, 2H), 3.53 (s, 2H), 3.39-3.36 (m, 2H), 2.22-2.15 (m, 2H), 1.98-1.79 (m, 6H), 1.38-1.14 (app br s, 18H);

¹³C NMR (DMSO-d₆, δ=39.52 ppm, 100 MHz): 153.38, 150.43, 138.11, 131.32, 130.48, 123.45, 119.17, 117.87, 116.43, 116.24, 78.24, 55.23, 46.30, 33.28, 27.86, 23.11.

< 제조예 26> 2- 브로모 -1-(4- 플루오로 -3- 하이드록시페닐 ) 에탄온의 제조

4'-플루오로-3'-하이드록시아세토페논 (100 mg, 0.649 mmol), 브롬화구리(II) (174 mg, 0.779 mmol)의 에틸 아세테이트(5 mL) / 클로로포름 (5 mL)을 8시간 환류시켰다. 상기 반응 혼합물을 필터하여 브롬화구리(I)을 제거하였다. 상기 여액을 진공하에 농축하여, 2-브로모-1-(4-플루오로-3-하이드록시페닐)에탄온(123 mg, 81%)을 노란색 고체로 얻었다.

¹H NMR (CDCl₃, δ=7.26 ppm, 400 MHz): 7.67-7.64 (m, 1H), 7.56-7.51 (m, 1H), 7.19-7.13 (m, 1H), 5.63 (s, 1H), 4.38 (s, 2H);

¹³C NMR (CDCl₃, δ=77.16 ppm, 100 MHz): 190.18, 155.97, 153.50, 144.29, 131.19, 122.62, 118.44, 116.35, 30.63;

¹⁹F NMR (376 MHz, CDCl₃): -130.70

< 제조예 27> (S)-1- tert -부틸 2-(2-(4- 플루오로 -3- 하이드록시페닐 )-2- 옥소에틸 ) 피롤리딘-1,2-다이카복실레이트의 제조

상기 제조예 26에서 얻은 2-브로모-1-(4-플루오로-3-하이드록시페닐)에탄-1-온(97.0 mg, 0.416 mmol) 및 N-Boc-L-프롤린(108 mg, 0.499 mmol)의 아세토니트릴 (10 mL)에 다이아이소프로필에틸아민(94 μL, 0.541 mmol)을 적하 첨가하고, 상온에서 5시간 교반시켰다. 상기 혼합물을 1N HCl 수용액에 붓고, 메틸렌클로라이드로 추출하였다. 상기 유기층을 황산마그네슘으로 건조하고, 컬럼 크로마토그래피 (헥산 / 에틸 아세테이트)정제하여, (S)-1-tert-부틸 2-(2-(4-플루오로-3-하이드록시페닐)-2-옥소에틸) 피롤리딘-1,2-다이카복실레이트(110 mg, 72%)을 흰색 고체로 얻었다.

¹H NMR (DMSO-d₆, =2.5 ppm, 400 MHz): 10.43 (s, 1H), 7.55-7.48 (m, 2H), 7.34-7.29 (m, 1H), 5.56-5.36 (m, 2H), 4.35-4.03 (s, 1H), 3.41-3.34 (m, 1H), 3.28-3.16 (m, 1H), 2.32-2.09 (m, 1H), 1.92-1.76 (m, 3H), 1.36 (app br s, 9H);

¹³C NMR (DMSO-d₆, δ=39.52 ppm, 100 MHz): 191.37, 172.33, 155.97, 153.00, 145.44, 130.79, 120.36, 116.90, 116.55, 79.06, 66.41, 58.56, 46.22, 30.47, 29.55, 27.96, 23.88, 23.12;

¹⁹F NMR (376 MHz, DMSO-d₆): -127.51.

< 제조예 28> (S)- tert -부틸 2-(5-(4- 플루오로 -3- 하이드록시페닐 )-1H-이미다졸-2-일)피롤리딘-1-카복실레이트의 제조

상기 제조예 27에서 얻은 (S)-1-tert-부틸 2-(2-(3-하이드록시페닐)-2-옥소에틸) 피롤리딘-1,2-다이카복실레이트(203 mg, 0.554mmol) 및 암모늄 아세테이트(640 mg, 8.30mmol)를 톨루엔(10 mL)에 현탁시켰다. 상기 반응 혼합물을 90 ℃로 가열하여 20 시간 교반시켰다. 상기 혼합물을 물에 붓고 에틸 아세테이트로 추출하였다. 상기 유기층을 황산마그네슘으로 건조하고 진공하에 증발시켰다. 을 컬럼 크로마토그래피(헥산 / 에틸 아세테이트)로 정제하여 (S)-tert-부틸 2-(5-(4-플루오로-3-하이드록시페닐)-1H-이미다졸-2-일)피롤리딘-1-카복실레이트(101 mg, 52%)를 노란색 고체로 얻었다.

¹H NMR (DMSO-d₆, δ=2.5 ppm, 400MHz): 12.06-11.76 (m, 1H), 9.70 (s, 1H), 7.35 (s, 2H), 7.10-7.01 (m, 2H), 4.80-4.73 (d, 1H), 3.52 (s, 1H), 2.32-2.15 (m, 1H), 1.97-1.76 (m, 4H), 1.39-1.15 (app br s, 9H);

³C NMR (DMSO-d₆, δ=39.52 ppm, 100 MHz): 153.39, 150.76, 144.58, 138.79, 131.95, 115.97, 115.18, 113.60, 111.31, 78.60, 58.75, 55.20, 46.28, 33.32, 27.88, 23.88, 23.14;

¹⁹F NMR (376 MHz, DMSO-d₆): -140.30.

< 제조예 29> (S)- tert -부틸 2-(5-(4- 플루오로 -3-( 플루오로설포닐옥시 )페닐)-1H-이미다졸-2-일)피롤리딘-1-카복실레이트의 제조

상기 제조예 28에서 얻은 tert-부틸 (S)-2-(5-(4-플루오로-3-하이드록시페닐)-1H-이미다졸-2-일)피롤리딘-1-카복실레이트(90.1 mg, 0.259 mmol) 및 N,N-다이아이소프로필에틸아민 (76.8 μL, 0.441 mmol)의 메틸렌클로라이드(5 mL) 설퍼릴플루오라이드하에, 상온에서 5시간 교반시켰다. 상기 혼합물을 1N HCl 수용액에 붓고, 메틸렌클로라이드로 추출하였다. 상기 유기층을 황산마그네슘으로 건조, 필터하고, 진공하에 농축하였다. 별도의 정제과정 없이, (S)-tert-부틸 2-(5-(4-플루오로-3-(플루오로설포닐옥시)페닐)-1H-이미다졸-2-일)피롤리딘-1-카복실레이트(33.4 mg, 30%)를 흰색 오일로 얻었다.

¹H NMR (DMSO-d₆, δ=2.5 ppm, 400 MHz): 12.07-12.00 (d, 1H), 8.03-8.01 (d, 1H), 7.91-7.87 (m, 1H), 7.66-7.64 (m, 1H), 7.58-7.54 (t, 1H), 4.82-4.77 (d, 1H), 3.53 (s, 1H), 3.34-3.29 (m, 1H), 2.22 (s, 1H), 1.96-1.85 (m, 3H), 1.39-1.15 (app s, 9H);

¹³C NMR (DMSO-d₆, δ=39.52 ppm, 100 MHz): 153.36, 151.81, 151.06, 149.33, 136.79, 133.63, 125.85, 118.19, 113.46, 78.26, 55.23, 46.31, 33.29, 31.84, 27.86, 23.83, 23.10;

¹⁹F NMR (DMSO-d₆, 376 MHz, ): 39.85, -134.19.

< 제조예 30> (S)- tert -부틸 2-(5-(3-( tert - 부틸다이메틸실릴옥시 )-4- 플루오로페닐 )-1H-이미다졸-2-일)피롤리딘-1-카복실레이트의 제조

상기 제조예 28에서 얻은 tert-부틸 (S)-2-(5-(4-플루오로-3-하이드록시페닐)-1H-이미다졸-2-일)피롤리딘-1-카복실레이트(696 mg, 2.00 mmol), tert-부틸다이메틸실릴 클로라이드(453 mg, 3.00 mmol), 이미다졸(218 mg, 3.21 mmol)의 메틸렌클로라이드(10 mL)를 상온에서 4시간 교반시켰다. 상기 혼합물을 물에 붓고, 메틸렌클로라이드로 추출하였다. 상기 유기층을 황산마그네슘으로 건조하고, 컬럼 크로마토그래피(헥산 / 에틸 아세테이트)로 정제하여, (S)-tert-부틸 2-(5-(3-(tert-부틸다이메틸실릴옥시)-4-플루오로페닐)-1H-이미다졸-2-일)피롤리딘-1-카복실레이트(638 mg, 69%)를 끈적한 흰색 오일로 얻었다.

¹H NMR (DMSO-d₆, δ=2.5 ppm, 400MHz): 12.12-11.81 (m, 1H), 7.43 (s, 1H), 7.35-7.31 (m, 2H), 7.23-7.10 (m, 1H), 4.83-4.76 (m, 1H), 3.53 (s, 1H), 2.21-2.10 (m, 1H), 1.98-1.84 (m, 3H), 1.39 (s, 4H), 1.15 (s, 9H), 0.97 (s, 9H), 0.18 (s, 6H);

¹³C NMR (DMSO-d₆, δ=39.52 ppm, 100MHz): 153.10, 150.70, 142.40, 138.33, 132.30, 118.02, 117.76, 116.26, 116.07, 111.83, 78.15, 55.30, 46.25, 33.25, 31.81, 27.84, 25.42, 23.73, 23.06, 18.01, -4.82;

¹⁹F NMR (376 MHz, DMSO-d₆): -136.21.

< 제조예 31> 3-아미노-2- 플루오로페놀의 제조

2-플루오로-3-나이트로페놀(2.0 g, 12.7 mmol)의 메탄올(50 mL)을 상온에서 교반시키면서 10 wt% Pd/C(100 mg)을 첨가하였다. 수소가스 하에, 24시간 교반시킨 후, 셀라이트 필터로 Pd/C를 제거하였다. 여액을 진공하에 농축하여, 3-아미노-2-플루오로페놀(1.65mg, 99%)을 어두운 고체로 얻었다.

¹H NMR (CD₃OD, δ=3.31 ppm, 400MHz): 6.69-6.65 (t, 1H), 6.34-6.25 (m, 2H);

¹³C NMR (CD₃OD, δ=49.00 ppm, 100 MHz) δ 146.13, 143.90, 141.59, 124.71, 109.49, 107.95;

¹⁹F NMR (376 MHz, CD₃OD): -161.96.

< 제조예 32> (S)- tert -부틸 2-(2- 플루오로 -3- 하이드록시페닐카바모일 ) 피롤리 딘-1-카복실레이트의 제조

상기 제조예 31에서 얻은 3-아미노-2-플루오로페놀 (1.60 g, 12.6 mmol), N-Boc-L-프롤린 (3.25 g, 15.1 mmol), 및 EDCI (2.11 g, 16.4 mmol)의 메틸렌클로라이드(30 mL)을 상온에서 16시간 교반시켰다. 상기 혼합물을 1N HCl 수용액에 붓고, 메틸렌클로라이드로 추출하였다. 상기 유기층을 황산마그네슘으로 건조하고, 컬럼 크로마토그래피(헥산 / 에틸 아세테이트)로 정제하여, (S)-tert-부틸 2-(2-플루오로-3-하이드록시페닐카바모일)피롤리딘-1-카복실레이트(3.79 g, 93%)를 흰색 고체로 얻었다.

¹H NMR (DMSO-d₆, δ=2.5 ppm, 500MHz): 9.84 (s, 1H), 9.63 (s, 1H), 7.32-7.21 (m, 1H), 6.90-6.89 (d, 1H), 6.71-6.70 (d, 1H), 4.42-4.33 (m, 1H), 3.40 (s, 1H), 3.36-3.32 (m, 1H), 2.20-2.12 (m, 1H), 1.87-1.78 (m, 3H), 1.40-1.31 (app br s, 9H);

¹³C NMR (DMSO-d₆, δ=39.52 ppm, 125MHz): 171.90, 153.34, 145.34, 142.79, 127.08, 123.46, 114.31, 113.46, 78.66, 60.03, 46.67, 31.23, 28.02, 23.43;

¹⁹F NMR (376 MHz, DMSO-d₆): -147.91, -149.01.

< 제조예 33> (S)- tert -부틸 2-(2- 플루오로 -3-( 플루오로설포닐옥시 ) 페닐카바모일 )피롤리딘-1-카복실레이트의 제조

상기 제조예 32에서 얻은 tert-부틸 (S)-2-((2-플루오로-3-하이드록시페닐)카바모일)피롤리딘-1-카복실레이트(350 mg, 1.08 mmol) 및 N,N-다이아이소프로필에틸아민(244 μL, 1.40 mmol)의 메틸렌클로라이드(10 mL)을 설퍼릴플루오라이드하에, 상온에서 5시간 교반시켰다. 상기 혼합물을 1N HCl 수용액에 붓고, 메틸렌클로라이드로 추출하였다. 상기 유기층을 황산마그네슘으로 건조, 필터하고, 진공하에 농축하였다. 별도의 정제과정 없이, (S)-tert-부틸 2-(2-플루오로-3-(플루오로설포닐옥시)페닐카바모일)피롤리딘-1-카복실레이트(364mg, 83%)를 흰색 오일로 얻었다.

¹H NMR (DMSO-d₆, δ=2.5 ppm, 400MHz): 10.18 (s, 1H), 8.04-7.95 (d, 1H), 7.54 (s, 1H), 7.39-7.35 (t, 1H), 4.45-4.36 (m, 1H), 3.42 (s, 1H), 3.37-3.33 (m, 1H), 2.23-2.16 (m, 1H), 1.92-1.80 (s, 3H), 1.40-1.31 (app s, 9H);

¹³C NMR (DMSO-d₆, δ=39.52 ppm, 100 MHz): 172.20, 153.08, 146.52, 144.00, 136.75, 128.31, 124.97, 118.45, 78.61, 59.87, 46.55, 31.04, 29.94, 27.86, 23.94, 23.30;

¹⁹F NMR (DMSO-d₆, 376 MHz, ): 39.69, -139.30.

< 제조예 34> (S)- tert -부틸 2-(3-( tert - 부틸다이메틸실릴옥시 )-2- 플루오로페 닐카바모일)피롤리딘-1-카복실레이트의 제조

상기 제조예 32에서 얻은 tert-부틸 (S)-2-((2-플루오로-3-하이드록시페닐)카바모일)피롤리딘-1-카복실레이트(300 mg, 0.925 mmol), tert-부틸다이메틸실릴 클로라이드(209 μL, 1.39 mmol), 이미다졸(189 mg, 2.77 mmol)의 메틸렌클로라이드(10 mL)을 상온에서 4시간 교반시켰다. 상기 혼합물을 물에 붓고, 메틸렌클로라이드로 추출하였다. 상기 유기층을 황산마그네슘으로 건조하고, 컬럼 크로마토그래피(헥산 / 에틸 아세테이트)로 정제하여, (S)-tert-부틸 2-(3-(tert-부틸다이메틸실릴옥시)-2-플루오로페닐카바모일)피롤리딘-1-카복실레이트(194 mg, 48%)를 끈적한 흰색 오일로 얻었다.

¹H NMR (DMSO-d₆, δ=2.5 ppm, 400MHz): 9.71 (s, 1H), 7.54-7.38 (m, 1H), 7.02-6.98 (t, 1H), 6.78-6.74 (t, 1H), 4.40-4.33 (m, 1H), 3.43-3.38 (m, 1H), 2.24-2.08 (m, 1H), 1.91-1.77 (m, 3H), 1.40-1.30 (app br s, 9H), 0.96 (s, 9H), 0.17 (s, 6H);

¹³C NMR (DMSO-d₆, δ=39.52 ppm, 100 MHz): 171.82, 153.14, 142.85, 127.23, 123.61, 123.56, 117.48, 116.90, 78.51, 59.85, 46.54, 31.05, 27.88, 25.38, 23.32, 18.00, -4.84;

¹⁹F NMR (376 MHz, DMSO-d₆): -143.28.

< 제조예 35> ( 2S,2'S )- 다이 - tert -부틸 2,2'-(3,3'-설포닐비스(옥시)비스(2-플루오로-3,1-페닐렌))비스(아자엔다이일)비스(옥소메틸렌)다이피롤리딘-1-카복실레이트의 제조

상기 제조예 34에서 얻은 tert-부틸 (S)-2-((3-((tert-부틸다이메틸실릴)옥시)-2-플루오로페닐)카바모일)피롤리딘-1-카복실레이트(146 mg, 0.333 mmol), 상기 제조예 33에서 얻은 tert-부틸 (S)-2-((2-플루오로-3-((플루오로설포닐)옥시)페닐)카바모일)피롤리딘-1-카복실레이트(162 mg, 0.399 mmol) 및 DBU (10.0 μL, 0.07 mmol)의 메틸렌클로라이드(10 mL)를 50 ℃에서 24 시간 교반시켰다. 상기 혼합물을 1N HCl 수용액에 붓고, 메틸렌클로라이드로 추출하였다. 상기 유기층을 황산마그네슘으로 건조하고, 컬럼 크로마토그래피(헥산 / 에틸 아세테이트)로 정제하여, (2S,2'S)-다이-tert-부틸 2,2'-(3,3'-설포닐비스(옥시)비스(2-플루오로-3,1-페닐렌))비스(아자엔다이일)비스(옥소메틸렌)다이피롤리딘-1-카복실레이트(231 mg, 98%)를 흰색 고체로 얻었다.

¹H NMR (DMSO-d₆, δ=2.5 ppm, 400MHz): 10.12 (s, 2H), 8.00-7.97 (t, 1H), 7.90-7.87 (t, 1H), 7.43-7.40 (t, 2H), 7.35-7.31 (t, 2H), 4.43-4.34 (m, 2H), 3.44-3.39 (m, 2H), 3.30 (m, 2H), 2.32-2.11 (m, 2H), 1.91-1.76 (m, 6H), 1.40- 1.29. (app br s, 18H);

¹³C NMR (DMSO-d₆, δ=39.52 ppm, 100 MHz): 172.17, 153.07, 137.06, 128.08, 124.67, 124.04, 118.49, 78.61, 59.83, 46.55, 31.04, 29.98, 27.90, 23.95, 23.31;

¹⁹F NMR (376 MHz, DMSO-d₆): -138.71.

< 제조예 36> (S)- tert -부틸 2-(3-(5-((S)-1-(tert-부톡시카보닐)피롤리딘-2-카복스아미도)-2-플루오로페녹시설포닐옥시)-2-플루오로페닐카바모일)피롤리딘-1-카복실레이트의 제조

tert-부틸 (S)-2-((3-((tert-부틸다이메틸실릴)옥시)-4-플루오로페닐)카바모일)피롤리딘-1-카복실레이트(118 mg, 0.269 mmol), 상기 제조예 33에서 얻은 tert-부틸 (S)-2-((2-플루오로-3-((플루오로설포닐)옥시)페닐)카바모일)피롤리딘-1-카복실레이트(109 mg, 0.269 mmol) 및 DBU (8.0 μL, 0.05 mmol)의 메틸렌클로라이드(20 mL)을 50 ℃에서 24 시간 교반시켰다. 상기 혼합물을 1N HCl 수용액에 붓고, 메틸렌클로라이드로 추출하였다. 상기 유기층을 황산마그네슘으로 건조하고, 컬럼 크로마토그래피(헥산 / 에틸 아세테이트)로 정제하여, (S)-tert-부틸 2-(3-(5-((S)-1-(tert-부톡시카보닐)피롤리딘-2-카복스아미도)-2-플루오로페녹시설포닐옥시)-2-플루오로페닐카바모일)피롤리딘-1-카복실레이트(77.8 mg, 41%)을 흰색 고체로 얻었다.

¹H NMR (DMSO-d₆, δ=2.5 ppm, 400 MHz): 10.33 (s, 1H), 10.11 (s, 1H), 8.12-7.90 (m, 2H), 7.61 (s, 1H), 7.54-7.49 (t, 1H), 7.40-7.31 (m, 2H), 4.43-4.36 (m, 1H), 4.23-4.13 (m, 1H), 3.40 (s, 2H), 3.30 (s, 2H), 2.21 (s, 2H), 1.88-1.79 (m, 6H), 1.39-1.23 (app br s, 18H);

¹³C NMR (DMSO-d₆, δ=39.52 ppm, 100 MHz): 171.95, 153.61, 153.04, 149.87, 147.41, 137.09, 136.21, 128.05, 124.70, 124.01, 119.90, 117.92, 113.55, 78.61, 60.45, 46.56, 30.92, 30.12, 27.88, 23.99, 23.39;

¹⁹F NMR (376 MHz, DMSO-d₆): -135.48, -138.91.

< 제조예 37> ( 2S,2'S )- 다이 - tert -부틸 2,2'-(5,5'-(3,3'-설포닐비스(옥시)비스(4-플루오로-3,1-페닐렌))비스(1H-이미다졸-5,2-다이일))다이피롤리딘-1-카복실레이트의 제조

tert-부틸 (S)-2-(5-(3-((tert-부틸다이메틸실릴)옥시)-4-플루오로페닐)-1H-이미다졸-2-일)피롤리딘-1-카복실레이트(295 mg, 0.639 mmol), tert-부틸 (S)-2-(5-(4-플루오로-3-((플루오로설포닐)옥시)페닐)-1H-이미다졸-2-일)피롤리딘-1-카복실레이트(302 mg, 0.702 mmol) 및 DBU (220 μL, 1.47 mmol)의 메틸렌클로라이드(10 mL)을 50 ℃에서 24 시간 교반시켰다. 상기 혼합물을 1N HCl 수용액에 붓고, 메틸렌클로라이드로 추출하였다. 상기 유기층을 황산마그네슘으로 건조하고, 컬럼 크로마토그래피(헥산 / 에틸 아세테이트)로 정제하여, (2S,2'S)-다이-tert-부틸 2,2'-(5,5'-(3,3'-설포닐비스(옥시)비스(4-플루오로-3,1-페닐렌))비스(1H-이미다졸-5,2-다이일))다이피롤리딘-1-카복실레이트(305 mg, 63%)을 흰색 고체로 얻었다.

¹H NMR (DMSO-d₆, δ=2.5 ppm, 400 MHz): 12.01 (s, 2H), 7.92-7.91 (d, 2H), 7.82 (s, 2H), 7.58 (s, 2H), 7.52-7.47 (t, 2H), 4.82-4.76 (d, 2H), 3.52 (s, 2H), 3.37-3.17 (m, 2H), 2.22-2.13 (m, 2H), 1.95-1.84 (t, 2H), 1.37-1.14(app br s, 18H);

¹³C NMR (DMSO-d₆, δ=39.52 ppm, 100 MHz): 153.35, 152.22, 150.24, 136.98, 136.87, 133.21, 125.00, 118.39, 117.68, 113.11, 78.24, 55.22, 46.29, 33.23, 31.78, 27.83, 23.77, 23.07;

¹⁹F NMR (376 MHz, DMSO-d₆): -133.22.

< 제조예 38> (S)- tert -부틸 2-(5-(4-( tert - 부틸다이메틸실릴옥시 )페닐)-1H-이미다졸-2-일)피롤리딘-1-카복실레이트의 제조

tert-부틸 (S)-2-(5-(4-하이드록시페닐)-1H-이미다졸-2-일)피롤리딘-1-카복실레이트(333 mg, 1.01 mmol), tert-부틸다이메틸실릴 클로라이드(228 mg, 1.52 mmol), 이미다졸(110 mg, 1.62 mmol)의 메틸렌클로라이드(10 mL)를 상온에서 4시간 교반시켰다. 상기 혼합물을 물에 붓고, 메틸렌클로라이드로 추출하였다. 상기 유기층을 황산마그네슘으로 건조하고, 컬럼 크로마토그래피 (헥산 / 에틸 아세테이트)정제하여, (S)-tert-부틸 2-(5-(4-(tert-부틸다이메틸실릴옥시)페닐)-1H-이미다졸-2-일)피롤리딘-1-카복실레이트(269 mg, 60%)를 끈적한 흰색 오일로 얻었다.

¹H NMR (DMSO-d₆, δ=2.5 ppm, 500MHz): 11.77 (s, 1H), 7.60-7.59 (d, 2H), 7.30 (s, 1H), 6.81-6.80 (d, 2H), 4.83-4.75 (m, 1H), 3.56-3.50 (m, 1H), 3.37-3.34 (m, 1H), 2.23-2.12 (m, 1H), 2.03-1.83 (m, 3H), 1.39-1.16 (app br s, 9H), 0.95 (s, 9H), 0.18 (s, 6H);

³C NMR (DMSO-d₆, δ=39.52 ppm, 125MHz): 153.70, 153.37, 139.36, 128.82, 125.44, 119.76, 78.12, 55.20, 46.25, 33.30, 31.76, 27.88, 25.57, 23.79, 23.05, 17.94, -3.21, -4.52.

< 제조예 39> (S)- tert -부틸 2-(5-(3-(4-(2-((S)-1-tert-부톡시카보닐피롤리딘-2-일)-1H-이미다졸-5-일)페녹시설포닐옥시)페닐)-1H-이미다졸-2-일)피롤리딘-1-카복실레이트의 제조

tert-부틸 (S)-2-(5-(4-((tert-부틸다이메틸실릴)옥시)페닐)-1H-이미다졸-2-일)피롤리딘-1-카복실레이트(851 mg, 1.92 mmol), tert-부틸 (S)-2-(5-(3-((플루오로설포닐)옥시)페닐)-1H-이미다졸-2-일)피롤리딘-1-카복실레이트(948 mg, 2.30 mmol) 및 DBU(631 μL, 4.22 mmol)의 메틸렌클로라이드(20 mL)을 50 ℃에서 24 시간 교반시켰다. 상기 혼합물을 1N HCl 수용액에 붓고, 메틸렌클로라이드로 추출하였다. 상기 유기층을 황산마그네슘으로 건조하고, 컬럼 크로마토그래피(헥산 / 에틸 아세테이트) 및 prep. LC로 정제하여, (S)-tert-부틸 2-(5-(3-(4-(2-((S)-1-tert-부톡시카보닐피롤리딘-2-일)-1H-이미다졸-5-일)페녹시설포닐옥시)페닐)-1H-이미다졸-2-일)피롤리딘-1-카복실레이트(721 mg, 52%)을 흰색 고체로 얻었다.

¹H NMR (DMSO-d₆, δ=2.5 ppm, 400MHz): 8.25-8.04 (m, 6H), 7.66-7.51 (d, 4H), 5.12 (s, 2H), 3.63 (s, 2H), 3.41 (s, 2H), 2.38 (s, 2H), 2.07-1.91 (m, 6H), 1.38-1.15. (app br s, 18H);

¹³C NMR (DMSO-d₆, δ=39.52 ppm, 100 MHz): 153.71, 152.45, 150.67, 150.56, 150.22, 149.56, 131.39, 127.37, 124.78, 122.07, 117.89, 116.19, 115.71, 79.19, 52.97, 46.45, 32.89, 31.98, 27.70, 23.92, 23.38.

< 제조예 40> ( 2S,2'S )- 다이 - tert -부틸 2,2'-(5,5'- (4,4'-설포닐비스(옥시)비 스(4,1-페닐렌))비스(1H-이미다졸-5,2-다이일))다이피롤리딘-1-카복실레이트의 제조

tert-부틸 (S)-2-(5-(4-하이드록시페닐)-1H-이미다졸-2-일)피롤리딘-1-카복실레이트(311 mg, 0.472 mmol), Cs₂CO₃(154 mg, 0.472 mmol) 및 1,1'-설포닐다이이미다졸(85 mg, 0.429 mmol)을 DMF(10 mL)에 현탁시켰다. 상기 반응 혼합물을 60 ℃로 가열하여 12 시간 교반시켰다. 상기 혼합물을 짧은 실리카 컬럼으로 필터하고, 진공하에 증발시켰다. 컬럼 크로마토그래피(헥산 / 에틸 아세테이트)로 정제하여 (2S,2'S)-다이-tert-부틸 2,2'-(5,5'-(4,4'-설포닐비스(옥시)비스(4,1-페닐렌))비스(1H-이미다졸-5,2-다이일))다이피롤리딘-1-카복실레이트(254 mg, 82%)를 노란색 고체로 얻었다.

¹H NMR (DMSO-d₆, δ=2.5 ppm, 400MHz): 11.99 (s, 2H), 7.88-7.85 (d, 3H), 7.53 (s, 2H), 7.39-7.38 (d, 3H), 7.30-7.27 (d, 1H), 6.91-6.87 (d, 1H), 4.84-4.77 (d, 2H), 4.03-3.98 (t, 1H), 3.53 (s, 2H), 3.29-3.25 (m, 1H), 2.22-2.14 (m, 2H), 2.05-1.93 (m, 2H), 1.85-1.71 (m, 4H), 1.39-1.15 (app br s, 18H);

¹³C NMR (DMSO-d₆, δ=39.52 ppm, 100 MHz): 174.64, 153.35, 147.86, 125.70, 121.14, 78.34, 59.58, 55.23, 46.36, 33.31, 31.01, 29.99, 28.03, 23.89, 23.20.

< 실시예 1> 다이메틸 ((1R,1'R)-((2S,2'S)-((( 설포닐피스 (4,1- 페닐렌 )) 비스 (아자네디일))비스(카보닐))비스(피롤리딘-2,1-디일))비스(2-옥소-1-페닐에탄-2,1-디일))다이카바메이트의 제조

(S)-2-((4-((4-((R)-1-(tert-부톡시카보닐)피롤리딘-2-카복스아미도)페닐)설포닐)페닐)카바모일)피롤리딘-1-카복실레이트(172 mg, 0.268 mmol)를 트리플루오로아세틱에시드/디클로로메탄(1/1) 혼합용액(4 mL)에 용해시킨 후, 상온에서 30분간 교반시켰다. 용매를 진공하에 농축한 후, 농축한 반응물, 1-에틸-3-(3-다이메틸아미노프로필)카보다이이미드(EDCI)(133 mg, 0.696 mmol), 하이드록시벤조트리아졸 하이드레이트(90.1 mg, 0.667 mmol) 및상기 제조예 3에서 얻은 (R)-2-(메톡시카보닐아미노)-2-페닐아세틱 애시드(134 mg, 0.642 mmol)를 일괄적으로 4분에 걸쳐 N,N-디아이소프로필에틸아민(233 mL, 1.28 mmol)의 디클로로메탄(10 mL)에 첨가하여 상온에서 밤샘 교반시켰다.반응혼합물을 1N 염산수용액에 희석하고 디클로로메탄을 사용하여 추출하였다. 유기층을 무수황산마그네슘으로 건조하고, 필터한 후, 진공 내에서 농축하였다. 잔여물은 디클로로메탄 : 메탄올을 이동상으로 사용한 실리카겔 플래시 컬럼 크로마토그래피를 통해 정제하여 목적화합물 (111 mg, 50% 수율)을 흰색 고체상태로 얻었다.

¹H NMR (DMSO-d₆, δ=2.5 ppm, 400MHz): 10.37 (s, 2H), 7.87-7.85 (d, 4H), 7.82-7.80 (d, 4H), 7.73-7.57 (q, 2H), 7.40-7.29 (m, 9H), 7.20-6.99 (q, 1H), 5.50-5.48 (d, 2H), 4.38-4.37 (d, 2H), 3.80-3.70 (m, 2H), 3.52 (s, 6H), 3.20-3.14 (q, 2H), 2.02-1.94 (m, 4H), 1.91-1.78 (m, 4H);

¹³C NMR (DMSO-d₆, δ=39.52 ppm, 100 MHz): 171.04, 168.34, 156.03, 143.36, 137.19, 135.31, 128.58, 127.99, 119.23, 60.68, 56.62, 51.63, 46.94, 29.17, 24.27.

< 실시예 2> 비스 (4-((S)-1-((R)-2-(( 메톡시카보닐 )아미노)-2- 페닐아세틸 ) 피롤리딘 -2-카복스아미도)페닐) 설페이트의 제조

상기 제조예 20에서 얻은 (S)-2-((4-(((4-((R)-1-(tert-부톡시카보닐)피롤리딘-2-카복스아미도)페녹시)설포닐)옥시)페닐)카바모일)피롤리딘-1-카복실레이트(50.0 mg, 0.0741 mmol)를 트리플루오로아세틱에시드/디클로로메탄(1/1) 혼합용액(2 mL)에 용해시킨 후, 상온에서 30분간 교반시켰다. 용매를 진공하에 농축한 후, 농축한 반응물, 1-에틸-3-(3-다이메틸아미노프로필)카보다이이미드(EDCI)(64.5 mg, 0.193 mmol), 하이드록시벤조트리아졸 하이드레이트(26.0 mg, 0.193 mmol) 및 제조예 3에서 얻은 (R)-2-(메톡시카보닐아미노)-2-페닐아세틱 애시드(37.2 mg, 0.178 mmol)를 일괄적으로 4분에 걸쳐 N,N-디아이소프로필에틸아민(64.5 mL, 0.371 mmol)의 디클로로메탄(5 mL)에 첨가하여 상온에서 밤샘 교반시켰다.반응혼합물을 1N 염산수용액에 희석하고 디클로로메탄을 사용하여 추출하였다. 유기층을 무수황산마그네슘으로 건조하고, 필터한 후, 진공 내에서 농축하였다. 잔여물은 디클로로메탄 : 메탄올을 이동상으로 사용한 실리카겔 플래시 컬럼 크로마토그래피를 통해 정제하여 목적화합물 (37.6 mg, 59% 수율)을 흰색 고체상태로 얻었다.

¹H NMR (DMSO-d₆, δ=2.5 ppm, 400MHz): 10.14 (s, 1H), 7.76-7.52 (m, 7H), 7.42-7.32 (m, 12H), 7.23-7.09 (m, 1H), 5.51-5.49 (d, 2H), 4.40-4.38 (d, 2H), 3.82 (br s, 2H), 3.54 (s, 6H), 3.20-3.18 (d, 2H), 2.04-1.80 (m, 8H);

¹³C NMR (DMSO-d₆, δ=39.52 ppm, 100 MHz): 170.58, 168.16, 156.37, 144.93, 138.72, 136.86, 128.64, 128.45, 128.05, 121.59, 120.46, 62.83, 62.80, 60.57, 56.65, 51.59, 46.90, 29.30, 29.13, 24.72.

< 실시예 3> 비스(4-((S)-1-((메톡시카보닐)-D-발릴)피롤리딘-2-카복스아미도)페닐) 설페이트의 제조

상기 제조예 20에서 얻은 (S)-2-((4-(((4-((R)-1-(tert-부톡시카보닐)피롤리딘-2-카복스아미도)페녹시)설포닐)옥시)페닐)카바모일)피롤리딘-1-카복실레이트(48.9 mg, 0.0725 mmol)를 트리플루오로아세틱에시드/디클로로메탄(1/1) 혼합용액(2 mL)에 용해시킨 후, 상온에서 30분간 교반시켰다. 용매를 진공하에 농축한 후, 농축한 반응물, 1-에틸-3-(3-다이메틸아미노프로필)카보다이이미드(EDCI)(36.1 mg, 0.188 mmol), 하이드록시벤조트리아졸 하이드레이트(25.5 mg, 0.188 mmol) 및 상기 제조예 1에서 얻은 (R)-2-(메톡시카보닐아미노)-3-메틸부타노익 애시드(30.5 mg, 0.174 mmol)를 일괄적으로 4분에 걸쳐 N,N-디아이소프로필에틸아민(63.1 mL, 0.362 mmol)의 디클로로메탄(5 mL)에 첨가하여 상온에서 밤샘 교반시켰다.반응혼합물을 1N 염산수용액에 희석하고 디클로로메탄을 사용하여 추출하였다. 유기층을 무수황산마그네슘으로 건조하고, 필터한 후, 진공 내에서 농축하였다. 잔여물은 디클로로메탄 : 메탄올을 이동상으로 사용한 실리카겔 플래시 컬럼 크로마토그래피를 통해 정제하여 목적화합물 (58.0 mg, 86% 수율)을 흰색 고체상태로 얻었다.

¹H NMR (DMSO-d₆, δ=2.5 ppm, 400MHz): 10.00 (s, 2H), 7.74-7.72 (d, 4H), 7.42-7.34 (q, 6H), 4.42-4.40 (d, 2H), 4.11-4.07 (t, 2H), 3.79 (s, 2H), 3.63-3.60 (d, 2H), 3.54 (s, 6H), 2.13-1.91 (m, 10H), 0.89-0.78 (app br s, 12H);

¹³C NMR (DMSO-d₆, δ=39.52 ppm, 100 MHz): 170.68, 170.24, 156.92, 144.95, 138.55, 121.51, 120.49, 60.26, 58.00, 54.92, 51.57, 47.10, 29.73, 29.38, 24.33, 19.06, 18.31.

< 실시예 4> 비스(3-((S)-1-((R)-2-((메톡시카보닐)아미노)-2-페닐아세틸)피롤리딘-2-카복스아미도)페닐) 설페이트의 제조

상기 제조예 17에서 얻은 (S)-2-((3-(((3-((R)-1-(tert-부톡시카보닐)피롤리딘-2-카복스아미도)페녹시)설포닐)옥시)페닐)카바모일)피롤리딘-1-카복실레이트(192 mg, 0.285 mmol)를 트리플루오로아세틱에시드/디클로로메탄(1/1) 혼합용액(2 mL)에 용해시킨 후, 상온에서 30분간 교반시켰다. 용매를 진공하에 농축한 후, 농축한 반응물, 1-에틸-3-(3-다이메틸아미노프로필)카보다이이미드(EDCI)(142 mg, 0.741 mmol), 하이드록시벤조트리아졸 하이드레이트(100 mg, 0.741 mmol) 및상기 제조예 3에서 얻은 (R)-2-(메톡시카보닐아미노)-2-페닐아세틱 애시드(143 mg, 0.684 mmol)를 일괄적으로 4분에 걸쳐 N,N-디아이소프로필에틸아민(248 mL, 1.42 mmol)의 디클로로메탄(5 mL)에 첨가하여 상온에서 밤샘 교반시켰다.반응혼합물을 1N 염산수용액에 희석하고 디클로로메탄을 사용하여 추출하였다. 유기층을 무수황산마그네슘으로 건조하고, 필터한 후, 진공 내에서 농축하였다. 잔여물은 디클로로메탄 : 메탄올을 이동상으로 사용한 실리카겔 플래시 컬럼 크로마토그래피를 통해 정제하여 목적화합물 (13.2 mg, 5.4% 수율)을 흰색 고체상태로 얻었다.

¹H NMR (DMSO-d₆, δ=2.5 ppm, 400MHz): 10.25 (s, 1H), 7.88-7.85 (d, 3H), 7.72-7.70 (d, 2H), 7.63-7.61 (d, 2H), 7.50-7.47 (t, 2H), 7.40-7.30 (m, 8H), 7.16-7.10 (q, 2H), 5.50-5.48 (d, 2H), 4.38-4.36 (m, 2H), 3.81-3.73 (d, 2H), 3.52 (s, 6H), 3.20-3.17 (m, 2H), 2.02-1.79 (m, 8H);

¹³C NMR (DMSO-d₆, δ=39.52 ppm, 100 MHz): 170.82, 168.37, 149.87, 140.74, 137.19, 130.68, 128.60, 128.36, 128.02, 118.36, 115.47, 111.33, 60.71, 56.67, 51.63, 46.96, 29.22, 24.30.

< 실시예 5> 비스(4-(2-((S)-1-((R)-2-( 메톡시카보닐아미노 )-3- 메틸부타노일 )피롤리딘-2-일)-1H- 이미다졸 -5-일) 페닐 ) 설페이트의 제조

다이-tert-부틸 2,2'-(((설포닐비스(옥시))비스(4,1-페닐렌))비스(1H-이미다졸-5,2-디일))(2S,2'S)-비스(피롤리딘-1-카복실레이트) (89.5 mg, 0.124 mmol)를 트리플루오로아세틱에시드/디클로로메탄(1/1) 혼합용액(2 mL)에 용해시킨 후, 상온에서 30분간 교반시켰다. 용매를 진공하에 농축한 후, 농축한 반응물, 1-에틸-3-(3-다이메틸아미노프로필)카보다이이미드(EDCI)(61.9 mg, 0.323 mmol), 하이드록시벤조트리아졸 하이드레이트(43.6 mg, 0.323 mmol) 및 상기 제조예 1에서 얻은 (R)-2-(메톡시카보닐아미노)-3-메틸부타노익 애시드(52.2 mg, 0.298 mmol)를 일괄적으로 4분에 걸쳐 N,N-디아이소프로필에틸아민(108 μL, 0.142 mmol)의 디클로로메탄(5 mL)에 첨가하여 상온에서 밤샘 교반시켰다.반응혼합물을 1N 염산수용액에 희석하고 디클로로메탄을 사용하여 추출하였다. 유기층을 무수황산마그네슘으로 건조하고, 필터한 후, 진공 내에서 농축하였다. 잔여물은 디클로로메탄 : 메탄올을 이동상으로 사용한 실리카겔 플래시 컬럼 크로마토그래피를 통해 정제하여 목적화합물 (76.9 mg, 74% 수율)을 흰색 고체상태로 얻었다.

¹H NMR (DMSO-d₆, δ=2.5 ppm, 400MHz): 8.09 (s, 2H), 7.96-7.94 (d, 4H), 7.65-7.62 (d, 3H), 7.58-7.52 (m, 1H), 7.25-7.23 (d, 2H), 5.19-5.16 (q, 2H), 4.19-4.15 (t, 2H), 3.91-3.83 (m, 2H), 3.70-3.61 (m, 2H), 3.53 (s, 6H), 2.38-2.36 (t, 2H), 2.08-1.94 (m, 8H), 0.90-0.85 (q, 10H), 0.71-0.70 (d, 1H), 0.35-0.34 (d, 1H);

¹³C NMR (DMSO-d₆, δ=39.52 ppm, 100 MHz): 170.80, 156.87, 149.61, 149.58, 127.33, 122.04, 115.87, 57.82, 53.19, 51.59, 47.02, 30.90, 29.71, 24.35, 19.29, 17.87.

< 실시예 6> 비스(4-(2-((S)-1-((R)-2-( 메톡시카보닐아미노 )-2- 페닐아세틸 ) 피 롤리딘-2-일)-1H-이미다졸-5-일)페닐) 설페이트의 제조

다이-tert-부틸 2,2'-(((설포닐비스(옥시))비스(4,1-페닐렌))비스(1H-이미다졸-5,2-디일))(2S,2'S)-비스(피롤리딘-1-카복실레이트) (105 mg, 0.145 mmol)를 트리플루오로아세틱에시드/디클로로메탄(1/1) 혼합용액(6 mL)에 용해시킨 후, 상온에서 30분간 교반시켰다. 용매를 진공하에 농축한 후, 농축한 반응물, 1-에틸-3-(3-다이메틸아미노프로필)카보다이이미드(EDCI)(72.6 mg, 0.349 mmol), 하이드록시벤조트리아졸 하이드레이트(51.2 mg, 0.379 mmol) 및 상기 제조예 3에서 얻은 (R)-2-(메톡시카보닐아미노)-2-페닐아세틱 애시드(75.2 mg, 0.350 mmol)를 일괄적으로 4분에 걸쳐 N,N-디아이소프로필에틸아민(127 μL, 0.728 mmol)의 디클로로메탄(5 mL)에 첨가하여 상온에서 밤샘 교반시켰다.반응혼합물을 1N 염산수용액에 희석하고 디클로로메탄을 사용하여 추출하였다. 유기층을 무수황산마그네슘으로 건조하고, 필터한 후, 진공 내에서 농축하였다. 잔여물은 디클로로메탄 : 메탄올을 이동상으로 사용한 실리카겔 플래시 컬럼 크로마토그래피를 통해 정제하여 목적화합물 (56.1 mg, 43% 수율)을 흰색 고체상태로 얻었다.

¹H NMR (DMSO-d₆, δ=2.5 ppm, 400 MHz): 8.14 (s, 1H), 8.07 (s, 1H), 7.98-7.96 (d, 2H), 7.92-7.85 (q, 2H), 7.80-7.78 (d, 1H), 7.71-7.60 (m, 5H), 7.39 (s, 4H), 7.35-7.34 (d, 1H), 7.30-7.29 (d, 4H), 7.04 (s, 1H), 5.54-5.50 (t, 2H), 5.21-5.19 (m, 2H), 3.96-3.77 (m, 2H), 3.51 (s, 6H), 3.39-3.14 (m, 2H), 2.38-2.23 (m, 2H), 2.09-1.86 (m, 6H);

¹³C NMR (DMSO-d₆, δ=39.52 ppm, 100 MHz): 168.99, 158.56, 156.34, 149.72, 149.43, 136.85, 131.43, 128.68, 128.32, 128.12, 127.45, 127.25, 122.10, 115.93, 57.00, 53.48, 51.62, 47.00, 30.81, 24.14.

< 실시예 7> 비스(3-((S)-1-((메톡시카보닐)-D-발릴)피롤리딘-2-카복스아미도)페닐) 설페이트의 제조

상기 제조예 17에서 얻은 (S)-2-((3-(((3-((R)-1-(tert-부톡시카보닐)피롤리딘-2-카복스아미도)페녹시)설포닐)옥시)페닐)카바모일)피롤리딘-1-카복실레이트(66.0 mg, 0.0978 mmol)를 트리플루오로아세틱에시드/디클로로메탄(1/1) 혼합용액(2 mL)에 용해시킨 후, 상온에서 30분간 교반시켰다. 용매를 진공하에 농축한 후, 농축한 반응물, 1-에틸-3-(3-다이메틸아미노프로필)카보다이이미드(EDCI)(48.8 mg, 0.254 mmol), 하이드록시벤조트리아졸 하이드레이트(34.4 mg, 0.254 mmol) 및 상기 제조예 1에서 얻은 (R)-2-(메톡시카보닐아미노)-3-메틸부타노익 애시드(41.1 mg, 0.235 mmol)을 일괄적으로 4분에 걸쳐 N,N-디아이소프로필에틸아민(85.2 mL, 0.489 mmol)의 디클로로메탄(5 mL)에 첨가하여 상온에서 밤샘 교반시켰다.반응혼합물을 1N 염산수용액에 희석하고 디클로로메탄을 사용하여 추출하였다. 유기층을 무수황산마그네슘으로 건조하고, 필터한 후, 진공 내에서 농축하였다. 잔여물은 디클로로메탄 : 메탄올을 이동상으로 사용한 실리카겔 플래시 컬럼 크로마토그래피를 통해 정제하여 목적화합물 (42.5 mg, 55% 수율)을 흰색 고체상태로 얻었다.

¹H NMR (DMSO-d₆, δ=2.5 ppm, 400MHz): 10.13 (s, 2H), 7.87 (s, 2H), 7.62-7.60 (d, 2H), 7.49-7.45 (t, 3H), 7.36-7.34 (d, 2H), 7.12-7.10 (d, 2H), 4.41-4.39 (d, 2H), 4.12-4.08 (t, 2H), 3.79 (s, 2H), 3.62-3.60 (d, 2H), 3.54 (s, 6H), 2.14-1.94 (m, 10H), 0.88 (app br s, 12H);

¹³C NMR (DMSO-d₆, δ=39.52 ppm, 100 MHz): 170.97, 170.23, 156.92, 149.86, 140.73, 130.61, 118.27, 115.37, 111.26, 60.32, 57.98, 51.54, 47.10, 29.76, 24.37, 19.07, 18.28.

< 실시예 8> 비스(3-(2-((S)-1-((R)-2-(메톡시카보닐아미노)-3-메틸부타노일)피롤리딘-2-일)-1H-이미다졸-5-일)페닐) 설페이트의 제조

다이-tert-부틸 2,2'-(((설포닐비스(옥시))비스(4,1-페닐렌))비스(1H-이미다졸-5,2-디일))(2S,2'S)-비스(피롤리딘-1-카복실레이트) (134 mg, 0.185 mmol)를 트리플루오로아세틱에시드/디클로로메탄(1/1) 혼합용액(6 mL)에 용해시킨 후, 상온에서 30분간 교반시켰다. 용매를 진공하에 농축한 후, 농축한 반응물, 1-에틸-3-(3-다이메틸아미노프로필)카보다이이미드(EDCI)(62.3 mg, 0.482 mmol), 하이드록시벤조트리아졸 하이드레이트(65.2 mg, 0.482 mmol) 및 상기 제조예 1에서 얻은 (R)-2-(메톡시카보닐아미노)-3-메틸부타노익 애시드(78.0 mg, 0.445 mmol)를 일괄적으로 4분에 걸쳐 N,N-디아이소프로필에틸아민(240 μL, 0.927 mmol)의 디클로로메탄(10 mL)에 첨가하여 상온에서 밤샘 교반시켰다.반응혼합물을 1N 염산수용액에 희석하고 디클로로메탄을 사용하여 추출하였다. 유기층을 무수황산마그네슘으로 건조하고, 필터한 후, 진공 내에서 농축하였다. 잔여물은 디클로로메탄 : 메탄올을 이동상으로 사용한 실리카겔 플래시 컬럼 크로마토그래피를 통해 정제하여 목적화합물 (119 mg, 77% 수율)을 흰색 고체상태로 얻었다.

¹H NMR (DMSO-d₆, δ 2.5 ppm, 500MHz): 12.20 (app br s, 2H), 7.98-7.96 (d, 1H), 7.82-7.78 (m, 2H), 7.75 (s, 1H), 7.71-7.69 (d, 1H), 7.60 (s, 1H), 7.53-7.47 (m ,2H), 7.42-7.38 (m, 1H), 7.35-7.28 (m, 1H), 7.23-7.21 (m, 2H), 5.62-5.61 (d, 1H), 5.06-5.04 (d, 1H), 4.12-4.09 (t, 1H), 3.99-3.95 (t, 1H), 3.86-3.83 (t, 1H), 3.62-3.57 (m, 1H), 3.54 (s, 6H), 3.47-3.40 (m, 2H), 2.23-2.21 (m, 1H), 2.13-2.02 (m, 4H), 1.99-1.95 (m, 3H), 1.87-1.84 (m, 1H), 1.66-1.61 (q, 1H), 0.89-0.88 (d, 8H), 0.67-0.66 (d, 2H), 0.27-0.25 (d, 3H).

¹³C NMR (DMSO-d₆, δ 39.52 ppm, 125MHz): 173.34, 171.22, 170.26, 157.00, 150.40, 126.87, 124.28, 119.02, 109.76, 59.52, 58.07, 54.66, 51.40, 29.54, 19.19, 18.00.

< 실시예 9> 비스(3-(2-((S)-1-((R)-2-( 메톡시카보닐아미노 )-2-페닐아세틸)피롤리딘-2-일)-1H- 이미다졸 -5-일) 페닐 ) 설페이트의 제조

상기 제조예 25에서 얻은 디-tert-부틸 2,2'-(((설포닐비스(옥시))비스(3,1-페닐렌))비스(1H-이미다졸-5,2-디일))(2S,2'S)-비스(피롤리딘-1-카복실레이트)(185 mg, 0.256 mmol)를 트리플루오로아세틱에시드/디클로로메탄(1/1) 혼합용액(6 mL)에 용해시킨 후, 상온에서 30분간 교반시켰다. 용매를 진공하에 농축한 후, 농축한 반응물, 1-에틸-3-(3-다이메틸아미노프로필)카보다이이미드(EDCI)(128 mg, 0.667 mmol), 하이드록시벤조트리아졸 하이드레이트(90.1 mg, 0.667 mmol), 및 상기 제조예 3에서 얻은 (R)-2-(메톡시카보닐아미노)-2-페닐아세틱 애시드(129 mg, 0.615 mmol)를 일괄적으로 4분에 걸쳐 N,N-디아이소프로필에틸아민(223 mL, 1.28 mmol)의 디클로로메탄(10 mL)에 첨가하여 상온에서 밤샘 교반시켰다.반응혼합물을 1N 염산수용액에 희석하고 디클로로메탄을 사용하여 추출하였다. 유기층을 무수황산마그네슘으로 건조하고, 필터한 후, 진공 내에서 농축하였다. 잔여물은 디클로로메탄 : 메탄올을 이동상으로 사용한 실리카겔 플래시 컬럼 크로마토그래피를 통해 정제하여 목적화합물 (97.2 mg, 67% 수율)을 노란색 고체상태로 얻었다.

¹H NMR (DMSO-d₆, δ=2.5 ppm, 400MHz): 12.05 (br s, 1H), 7.96 (s, 1H), 7.94-7.64 (m, 5H), 7.50 (s, 1H), 7.39-7.25 (m, 13H), 7.00-6.93 (d, 1H), 5.49-5.40 (m, 2H), 5.14-5.05 (d, 2H), 4.18-3.67 (m, 2H), 3.55 (s, 6H), 3.43-3.41 (t, 1H), 3.11 (s, 1H), 1.98-1.72 (m, 8H);

¹³C NMR (DMSO-d₆, δ=39.52 ppm, 100 MHz): 173.42, 172.13, 168.36, 155.99, 150.45, 149.61, 137.22, 130.56, 128.40, 127.69, 124.24, 123.55, 119.01, 116.33, 109.82, 72.32, 60.30, 58.13, 56.98, 55.24, 51.62, 46.67, 31.12, 29.22, 24.02.

< 실시예 10> 비스 (5-((S)-1-((R)-2-(( 메톡시카보닐 )아미노)-2- 페닐아세틸 ) 피롤리딘 -2-카복스아미도)-2-메틸페닐) 설페이트의 제조

tert-부틸(S)-2-((3-(((5-((R)-1-(tert-부톡시카보닐)피롤리딘-2-카복스아미도)-2-메틸페녹시)설포닐)옥시)-4-메틸페닐)카바모일)피롤리딘-1-카복실레이트(113 mg, 0.161 mmol)를 트리플루오로아세틱에시드/디클로로메탄(1/1) 혼합용액(4 mL)에 용해시킨 후, 상온에서 30분간 교반시켰다. 용매를 진공하에 농축한 후, 농축한 반응물, 1-에틸-3-(3-다이메틸아미노프로필)카보다이이미드(EDCI)(78.1 mg, 0.418 mmol), 하이드록시벤조트리아졸 하이드레이트(90.1 mg, 0.667 mmol) 및 상기 제조예 3에서 얻은 (R)-2-(메톡시카보닐아미노)-2-페닐아세틱 애시드(80.7 mg, 0.386 mmol)를 일괄적으로 4분에 걸쳐 N,N-디아이소프로필에틸아민(137 mL, 0.804 mmol)의 디클로로메탄(10 mL)에 첨가하여 상온에서 밤샘 교반시켰다.반응혼합물을 1N 염산수용액에 희석하고 디클로로메탄을 사용하여 추출하였다. 유기층을 무수황산마그네슘으로 건조하고, 필터한 후, 진공 내에서 농축하였다. 잔여물은 디클로로메탄 : 메탄올을 이동상으로 사용한 실리카겔 플래시 컬럼 크로마토그래피를 통해 정제하여 목적화합물 (105 mg, 74% 수율)을 흰색 고체상태로 얻었다.

¹H NMR (DMSO-d₆, δ=2.5 ppm, 400MHz): 10.36-10.19 (d, 2H), 7.94-7.89 (d, 2H), 7.75-7.67 (q, 2H), 7.58 (s, 2H), 7.42-7.41 (d, 3H), 7.36-7.07 (m, 9H), 5.52-5.47 (t, 2H), 4.47-4.38 (d, 2H), 3.82-3.66 (d, 2H), 3.53 (s, 6H), 3.18-3.09 (d, 2H), 2.22 (s, 6H), 1.99-1.78 (m, 8H);

¹³C NMR (DMSO-d₆, δ=39.52 ppm, 100 MHz): 170.59, 168.36, 156.07, 148.28, 138.47, 136.85, 132.01, 128.61, 128.05, 124.63, 118.45, 111.44, 60.69, 56.69, 51.64, 46.98, 29.26, 24.31, 15.26.

< 실시예 11> 비스 (5-((S)-1-(( 메톡시카보닐 )-D-발릴) 피롤리딘 -2- 카복스아미 도)-2-메틸페닐) 설페이트의 제조

tert- 부틸 (S)-2-((3-(((5-((R)-1-(tert-부톡시카보닐)피롤리딘-2-카복스아미도)-2-메틸페녹시)설포닐)옥시)-4-메틸페닐)카바모일)피롤리딘-1-카복실레이트(106 mg, 0.147 mmol)를 트리플루오로아세틱에시드/디클로로메탄(1/1) 혼합용액(4 mL)에 용해시킨 후, 상온에서 30분간 교반시켰다. 용매를 진공하에 농축한 후, 농축한 반응물, 1-에틸-3-(3-다이메틸아미노프로필)카보다이이미드(EDCI)(73.0 mg, 0.381 mmol), 하이드록시벤조트리아졸 하이드레이트(90.1 mg, 0.667 mmol) 및 상기 제조예 1에서 얻은 (R)-2-(메톡시카보닐아미노)-3-메틸부타노익 애시드(61.6 mg, 0.352 mmol)을 일괄적으로 4분에 걸쳐 N,N-디아이소프로필에틸아민(128mL, 0.732 mmol)의 디클로로메탄(10 mL)에 첨가하여 상온에서 밤샘 교반시켰다.반응혼합물을 1N 염산수용액에 희석하고 디클로로메탄을 사용하여 추출하였다. 유기층을 무수황산마그네슘으로 건조하고, 필터한 후, 진공 내에서 농축하였다. 잔여물은 디클로로메탄 : 메탄올을 이동상으로 사용한 실리카겔 플래시 컬럼 크로마토그래피를 통해 정제하여 목적화합물 (63.6 mg, 53% 수율)을 흰색 고체상태로 얻었다.

¹H NMR (DMSO-d₆, δ=2.5 ppm, 400MHz): 10.03 (s, 2H), 7.88 (s, 2H), 7.54-7.52 (d, 2H), 7.36-7.32 (t, 4H), 4.38-4.37 (d, 2H), 4.11 (br s, 2H), 3.76 (br s, 2H), 3.63-3.57 (q, 2H), 3.53 (s, 6H), 2.19 (s, 6H), 2.12-1.89 (m, 10H), 0.87-0.75 (app br s, 12H);

¹³C NMR (DMSO-d₆, δ=39.52 ppm, 100 MHz): 170.71, 170.17, 156.90, 148.21, 138.42, 131.96, 124.52, 118.32, 111.29, 60.25, 57.95, 51.54, 47.09, 29.77, 24.36, 19.08, 18.29, 15.22.

< 실시예 12> 3-((S)-1-((R)-2-(( 메톡시카보닐 )아미노)-2- 페닐아세틸 ) 피롤리딘 -2-카복스아미도)페닐 (4-((S)-1-((R)-2-(( 메톡시카보닐 )아미노)-2- 페닐아세틸 )피롤리딘-2-카복스아미도)페닐) 설페이트의 제조

상기 제조예 16에서 얻은 tert-부틸 (R)-2-((3-(((4-((S)-1-(tert-부톡시카보닐)피롤리딘-2-카복스아미도)페녹시)설포닐)옥시)페닐)카바모일)피롤리딘-1-카복실레이트(102 mg, 0.151 mmol)를 트리플루오로아세틱에시드/디클로로메탄(1/1) 혼합용액(6 mL)에 용해시킨 후, 상온에서 30분간 교반시켰다. 용매를 진공하에 농축한 후, 농축한 반응물, 1-에틸-3-(3-다이메틸아미노프로필)카보다이이미드(EDCI)(75.2 mg, 0.392 mmol), 하이드록시벤조트리아졸 하이드레이트(53.0 mg, 0.392 mmol) 및 상기 제조예 3에서 얻은 (R)-2-(메톡시카보닐아미노)-2-페닐아세틱 애시드(77.9 mg, 0.362 mmol)를 일괄적으로 4분에 걸쳐 N,N-디아이소프로필에틸아민(131 mL, 0.754 mmol)의 디클로로메탄(10 mL)에 첨가하여 상온에서 밤샘 교반시켰다.반응혼합물을 1N 염산수용액에 희석하고 디클로로메탄을 사용하여 추출하였다. 유기층을 무수황산마그네슘으로 건조하고, 필터한 후, 진공 내에서 농축하였다. 잔여물은 디클로로메탄 : 메탄올을 이동상으로 사용한 실리카겔 플래시 컬럼 크로마토그래피를 통해 정제하여 목적화합물 (106.7 mg, 83% 수율)을 흰색 고체상태로 얻었다.

¹H NMR (DMSO-d₆, δ=2.5 ppm, 400MHz): 10.51-10.16 (m, 2H), 7.93-7.87 (t, 1H), 7.78-7.77 (d, 2H), 7.74-7.72 (t, 2H), 7.67-7.54 (m, 2H), 7.50-7.47 (t, 1H), 7.44-7.41 (m, 5H), 7.38-7.35 (t, 3H), 7.33-7.30 (t, 2H), 7.25 (s, 1H), 7.13-7.05 (m, 2H), 5.52-5.32 (m, 2H), 4.59-4.37 (m, 2H), 3.85-3.81 (q, 1H), 3.72-3.62 (m, 1H), 3.53 (s, 6H), 3.22-3.10 (m, 2H), 2.05-1.77 (m, 8H);

¹³C NMR (DMSO-d₆, δ=39.52 ppm, 100 MHz): 170.59, 168.40, 156.09, 149.89, 145.03, 140.74, 138.70, 137.21, 130.65, 128.62, 128.06, 121.61, 120.65, 118.31, 115.50, 111.35, 60.71, 56.71, 51.65, 46.98, 29.25, 24.30.

< 실시예 13> 3-((S)-1-(( 메톡시카보닐 )-D-발릴) 피롤리딘 -2- 카복스아미도 )페닐 (4-((S)-1-(( 메톡시카보닐 )-D-발릴) 피롤리딘 -2- 카복스아미도 )페닐) 설페이트의 제조

상기 제조예 16에서 얻은 tert-부틸 (R)-2-((3-(((4-((S)-1-(tert-부톡시카보닐)피롤리딘-2-카복스아미도)페녹시)설포닐)옥시)페닐)카바모일)피롤리딘-1-카복실레이트(56.3 mg, 0.0834 mmol)를 트리플루오로아세틱에시드/디클로로메탄(1/1) 혼합용액(2 mL)에 용해시킨 후, 상온에서 30분간 교반시켰다. 용매를 진공하에 농축한 후, 농축한 반응물, 1-에틸-3-(3-다이메틸아미노프로필)카보다이이미드(EDCI)(72.7 mg, 0.217 mmol), 하이드록시벤조트리아졸 하이드레이트(29.3 mg, 0.217 mmol) 및 상기 제조예 1에서 얻은 (R)-2-(메톡시카보닐아미노)-3-메틸부타노익 애시드(35.1 mg, 0.200 mmol)을 일괄적으로 4분에 걸쳐 N,N-디아이소프로필에틸아민(72.7 mL, 0.417 mmol)의 디클로로메탄(5 mL)에 첨가하여 상온에서 밤샘 교반시켰다.반응혼합물을 1N 염산수용액에 희석하고 디클로로메탄을 사용하여 추출하였다. 유기층을 무수황산마그네슘으로 건조하고, 필터한 후, 진공 내에서 농축하였다. 잔여물은 디클로로메탄 : 메탄올을 이동상으로 사용한 실리카겔 플래시 컬럼 크로마토그래피를 통해 정제하여 목적화합물 (46.7 mg, 71% 수율)을 흰색 고체상태로 얻었다.

¹H NMR (DMSO-d₆, δ=2.5 ppm, 400MHz): 10.64-10.02 (q, 2H), 7.87 (s, 1H), 7.76-7.73 (d, 2H), 7.61-7.59 (d, 2H), 7.51-7.36 (m, 5H), 7.14-7.08 (m, 1H), 4.43-4.39 (q, 2H), 4.12-4.07 (t, 2H), 3.79(s, 2H), 3.64-3.58 (q, 2H), 3.55 (s, 6H), 3.48-3.46 (m, 1H), 2.16-2.08 (m, 2H), 2.04-1.92 (m, 8H), 0.88-0.77 (app br s, 12H);

¹³C NMR (DMSO-d₆, δ=39.52 ppm, 100 MHz): 171.01, 170.71, 170.24, 156.92, 149.85, 144.94, 140.71, 138.67, 130.61, 121.57, 120.50, 118.19, 115.42, 111.22, 60.32, 60.27, 58.01, 51.56, 47.11, 29.76, 29.41, 29.37, 24.39, 24.35, 19.09, 18.32.

< 실시예 14> 비스 (2- 플루오로 -5-((S)-1-((R)-2-(( 메톡시카보닐 )아미노)-2- 페 닐아세틸)피롤리딘-2-카복스아미도)페닐) 설페이트의 제조

tert-부틸(S)-2-((3-(((5-((R)-1-(tert-부톡시카보닐)피롤리딘-2-카복스아미도)-2-플루오로페녹시)설포닐)옥시)-4-플루오로페닐)카바모일)피롤리딘-1-카복실레이트(97.7 mg, 0.137 mmol)를 트리플루오로아세틱에시드/디클로로메탄(1/1) 혼합용액(4 mL)에 용해시킨 후, 상온에서 30분간 교반시켰다. 용매를 진공하에 농축한 후, 농축한 반응물, 1-에틸-3-(3-다이메틸아미노프로필)카보다이이미드(EDCI)(68.5 mg, 0.357 mmol), 하이드록시벤조트리아졸 하이드레이트(90.1 mg, 0.667 mmol) 및 상기 제조예 3에서 얻은 (R)-2-(메톡시카보닐아미노)-2-페닐아세틱 애시드(69.0 mg, 0.330 mmol)를 일괄적으로 4분에 걸쳐 N,N-디아이소프로필에틸아민(120mL, 0.687 mmol)의 디클로로메탄(10 mL)에 첨가하여 상온에서 밤샘 교반시켰다.반응혼합물을 1N 염산수용액에 희석하고 디클로로메탄을 사용하여 추출하였다. 유기층을 무수황산마그네슘으로 건조하고, 필터한 후, 진공 내에서 농축하였다. 잔여물은 디클로로메탄 : 메탄올을 이동상으로 사용한 실리카겔 플래시 컬럼 크로마토그래피를 통해 정제하여 목적화합물 (63.4 mg, 52% 수율)을 흰색 고체상태로 얻었다.

¹H NMR (DMSO-d₆, δ=2.5 ppm, 400MHz): 10.28 (s, 2H), 8.08-8.06 (t, 2H), 7.74-7.72 (d, 2H), 7.65 (s, 2H), 7.55-7.50 (t, 2H), 7.42-7.30 (m, 9H), 7.06-7.04 (t, 1H), 5.52-5.50 (d, 2H), 4.37-4.35 (d, 2H), 3.82 (br s, 2H), 3.53 (s, 6H), 3.20-3.18 (d, 2H),2.04-1.77 (m, 8H);

¹³C NMR (DMSO-d₆, δ=39.52 ppm, 100 MHz): 170.71, 168.39, 156.07, 149.70, 147.73, 137.20, 136.26, 128.59, 128.03, 119.96, 117.92, 113.47, 60.69, 56.67, 51.63, 46.96, 29.21, 24.31;

¹⁹F NMR (DMSO-d₆, 470 MHz): -135.20.

< 실시예 15> 비스(3-(2-((S)-1-((S)-2-(메톡시카보닐아미노)-3-메틸부타노일)피롤리딘-2-일)-1H-이미다졸-5-일)페닐) 설페이트의 제조

상기 제조예 25에서 얻은 디-tert-부틸2,2'-(((설포닐비스(옥시))비스(3,1-페닐렌))비스(1H-이미다졸-5,2-디일))(2S,2'S)-비스(피롤리딘-1-카복실레이트)(117 mg, 0.163 mmol)를 트리플루오로아세틱에시드/디클로로메탄(1/1) 혼합용액(6 mL)에 용해시킨 후, 상온에서 30분간 교반시켰다. 용매를 진공하에 농축한 후, 농축한 반응물, 1-에틸-3-(3-다이메틸아미노프로필)카보다이이미드(EDCI)(81.1 mg, 0.423 mmol), 하이드록시벤조트리아졸 하이드레이트(90.1 mg, 0.667 mmol) 및 상기 제조예 2에서 얻은 (S)-2-(메톡시카보닐아미노)-3-메틸부타노익 애시드(68.4 mg, 0.391 mmol)을 일괄적으로 4분에 걸쳐 N,N-디아이소프로필에틸아민(142mL, 0.814 mmol)의 디클로로메탄(10 mL)에 첨가하여 상온에서 밤샘 교반시켰다.반응혼합물을 1N 염산수용액에 희석하고 디클로로메탄을 사용하여 추출하였다. 유기층을 무수황산마그네슘으로 건조하고, 필터한 후, 진공 내에서 농축하였다. 잔여물은 디클로로메탄 : 메탄올을 이동상으로 사용한 실리카겔 플래시 컬럼 크로마토그래피를 통해 정제하여 목적화합물 (60.8 mg, 44% 수율)을 노란색 고체상태로 얻었다.

¹H NMR (DMSO-d₆, δ=2.5 ppm, 400MHz): 11.98 (br s, 1H), 7.98-7.96 (d, 1H), 7.77-7.75 (d, 3H), 7.71-7.69 (d, 1H), 7.59 (s, 1H), 7.53-7.45 (q, 3H), 7.42-7.38 (t, 1H), 7.28-7.26 (d, 1H), 7.21-7.18 (d, 1H), 5.06 (s, 2H), 4.05-4.01 (t, 2H), 3.86-3.76 (m, 4H), 3.53 (s, 6H), 2.12-2.07 (m, 4H), 1.94-1.87 (m, 6H), 0.91-0.80 (app br s, 12H);

¹³C NMR (DMSO-d₆, δ=39.52 ppm, 125MHz): 170.39, 156.79, 150.38, 149.79, 131.10, 129.85, 127.81, 126.60, 123.92, 118.76, 116.80, 110.28, 57.71, 57.23, 54.72, 53.63, 51.27, 29.93.

< 실시예 16> 비스 (2- 플루오로 -5-((S)-1-(( 메톡시카보닐 )-D-발릴) 피롤리딘 -2-카복스아미도)페닐) 설페이트의 제조

tert-부틸 (S)-2-((3-(((5-((R)-1-(tert-부톡시카보닐)피롤리딘-2-카복스아미도)-2-플루오로페녹시)설포닐)옥시)-4-플루오로페닐)카바모일)피롤리딘-1-카복실레이트(83.7 mg, 0.118 mmol)를 트리플루오로아세틱에시드/디클로로메탄(1/1) 혼합용액(4 mL)에 용해시킨 후, 상온에서 30분간 교반시켰다. 용매를 진공하에 농축한 후, 농축한 반응물, 1-에틸-3-(3-다이메틸아미노프로필)카보다이이미드(EDCI)( 58.7 mg, 0.306 mmol), 하이드록시벤조트리아졸 하이드레이트(90.1 mg, 0.667 mmol) 및 상기 제조예 1에서 얻은 (R)-2-(메톡시카보닐아미노)-3-메틸부타노익 애시드(49.5 mg, 0.283 mmol)을 일괄적으로 4분에 걸쳐 N,N-디아이소프로필에틸아민(103mL, 0.589 mmol)의 디클로로메탄에 첨가하여 밤샘 교반시켰다.반응혼합물을 1N 염산수용액에 희석하고 디클로로메탄을 사용하여 추출하였다. 유기층을 무수황산마그네슘으로 건조하고, 필터한 후, 진공 내에서 농축하였다. 잔여물은 디클로로메탄 : 메탄올을 이동상으로 사용한 실리카겔 플래시 컬럼 크로마토그래피를 통해 정제하여 목적화합물 (77.7 mg, 80% 수율)을 흰색 고체상태로 얻었다.

¹H NMR (DMSO-d₆, δ=2.5 ppm, 500MHz): 10.15 (s, 2H), 8.04 (s, 2H), 7.63-7.61 (d, 2H), 7.52-7.48 (t, 2H), 7.36-7.35 (d, 2H), 4.38-4.36 (d, 2H), 4.11-4.07 (t, 2H), 3.78-3.74 (m, 2H), 3.63-3.57 (m, 2H), 3.53 (s, 6H), 2.15-2.08 (m, 2H), 2.08-1.84 (m, 8H), 0.87-0.76 (app br s, 12H);

¹³C NMR (DMSO-d₆, δ=39.52 ppm, 125MHz): 170.87, 170.22, 156.93, 149.64, 147.66, 136.25, 120.42, 119.35, 117.33, 113.56, 113.09, 60.63, 59.92, 57.96, 51.42, 29.95, 24.44, 19.09, 18.29;

¹⁹F NMR (DMSO-d₆, 376 MHz): -135.35.

< 실시예 17> 비스 (3-((S)-1-((R)-2-(( 메톡시카보닐 )아미노)-2- 페닐아세틸 ) 피롤리딘 -2-카복스아미도)-2-메틸페닐) 설페이트의 제조

3-((R)-1-((R)-2-((메톡시카보닐)아미노)-2-페닐아세틸)피롤리딘)-2-카복스아미도)-2-메틸페닐 (3-((S)-1-((R)-2-((메톡시카보닐)아미노)-2-페닐아세틸)피롤리딘-2-카복스아미도)-2-케틸페닐) 설페이트(82.1 mg, 0.117mmol)를 트리플루오로아세틱에시드/디클로로메탄(1/1) 혼합용액(4 mL)에 용해시킨 후, 상온에서 30분간 교반시켰다. 용매를 진공하에 농축한 후, 농축한 반응물, 1-에틸-3-(3-다이메틸아미노프로필)카보다이이미드(EDCI)(39.3 mg, 0.304 mmol), 하이드록시벤조트리아졸 하이드레이트(41.0 mg, 0.304 mmol) 및 상기 제조예 3에서 얻은 (R)-2-(메톡시카보닐아미노)-2-페닐아세틱 애시드(58.7 mg, 0.280 mmol)를 일괄적으로 4분에 걸쳐 N,N-디아이소프로필에틸아민(151 μL, 0.584 mmol)의 디클로로메탄(10 mL)에 첨가하여 상온에서 밤샘 교반시켰다.반응혼합물을 1N 염산수용액에 희석하고 디클로로메탄을 사용하여 추출하였다. 유기층을 무수황산마그네슘으로 건조하고, 필터한 후, 진공 내에서 농축하였다. 잔여물은 디클로로메탄 : 메탄올을 이동상으로 사용한 실리카겔 플래시 컬럼 크로마토그래피를 통해 정제하여 목적화합물 (84.5 mg, 85% 수율)을 흰색 고체상태로 얻었다.

¹H NMR (DMSO-d₆, δ 2.5 ppm, 400MHz): 9.73-9.56 (d, 2H), 7.76-7.58 (m, 2H), 7.48-7.21 (m, 15H), 7.12-6.67 (m, 1H), 5.52-5.43 (m, 2H), 4.65-4.47 (m, 2H), 3.85 (s, 1H), 3.75-3.62 (m, 1H), 3.55-3.50 (app br s, 6H), 3.17 (s, 2H), 2.16 (s, 6H), 2.00-1.73 (m, 8H)

¹³C NMR (DMSO-d₆, δ 39.52 ppm, 100 MHz): 170.42, 168.79, 156.10, 148.60, 138.23, 137.08, 128.63, 128.08, 126.83, 126.04, 125.26, 118.25, 60.56, 56.82, 51.57, 46.96, 29.09, 24.33, 11.27.

< 실시예 18> 비스(3-(2-((S)-1-((R)-2-( 메톡시카보닐아미노 )-3,3-디 메틸부타노일 ) 피롤리딘 -2-일)-1H- 이미다졸 -5-일) 페닐 ) 설페이트의 제조

다이-tert-부틸 2,2'-(((설포닐비스(옥시))비스(4,1-페닐렌))비스(1H-이미다졸-5,2-디일))(2S,2'S)-비스(피롤리딘-1-카복실레이트)(50 mg, 0.0694 mmol)를 트리플루오로아세틱에시드/디클로로메탄(1/1) 혼합용액(6 mL)에 용해시킨 후, 상온에서 30분간 교반시켰다. 용매를 진공하에 농축한 후, 농축한 반응물, 1-에틸-3-(3-다이메틸아미노프로필)카보다이이미드(EDCI)(34.6 mg, 0.180 mmol), 하이드록시벤조트리아졸 하이드레이트(24.4 mg, 0.667 mmol) 및 (S)-2-(메톡시카보닐아미노)-3,3-다이메틸부타노익 애시드(31.5 mg, 0.166 mmol)를 일괄적으로 4분에 걸쳐 N,N-디아이소프로필에틸아민(60.4 μL, 0.347 mmol)의 디클로로메탄(10 mL)에 첨가하여 상온에서 밤샘 교반시켰다.반응혼합물을 1N 염산수용액에 희석하고 디클로로메탄을 사용하여 추출하였다. 유기층을 무수황산마그네슘으로 건조하고, 필터한 후, 진공 내에서 농축하였다. 잔여물은 디클로로메탄 : 메탄올을 이동상으로 사용한 실리카겔 플래시 컬럼 크로마토그래피를 통해 정제하여 목적화합물 (43.8 mg, 73% 수율)을 흰색 고체상태로 얻었다.

¹H NMR (DMSO-d₆, δ 2.5 ppm, 400MHz): 8.07-7.83 (m, 1H), 7.78-7.71 (m, 4H), 7.66-7.63 (t, 1H), 7.57-7.40 (m, 3H), 7.29-7.21 (m, 2H), 7.08-7.06 (d, 1H), 5.42-5.05 (m, 2H), 4.21-4.19 (d, 2H), 3.81-3.68 (m, 4H), 3.54 (s, 6H), 2.18-2.08 (m, 3H), 2.02-1.66 (m, 5H), 0.94-0.88 (app br s, 18H)

¹³C NMR (DMSO-d₆, δ 39.52 ppm, 125MHz): 172.72, 169.67, 156.85, 150.38, 130.54, 128.62, 127.37, 125.07, 124.52, 123.52, 119.62, 119.14, 116.42, 109.89, 83.42, 62.76, 59.16, 53.84, 52.52, 51.49, 47.52, 34.60, 30.87, 26.25, 24.38, 16.48.

< 실시예 19> 비스 (4-(2-((S)-1-((S)-2-( 메톡시카보닐아미노 )-3- 메틸부타노일 )피롤리딘-2-일)-1H-이미다졸-5-일)페닐) 설페이트의 제조

다이-tert-부틸 2,2'-(((설포닐비스(옥시))비스(4,1-페닐렌))비스(1H-이미다졸-5,2-다이일))(2S,2'S)-비스(피롤리딘-1-카복실레이트) (171 mg, 0.237mmol)의 트리플루오로아세틱 애시드(3 mL) / 메틸렌클로라이드(3 mL)를 상온에서 30분간 교반시켰다. 상기 휘발물질을 진공하게 제거하고, EDCI(118 mg, 0.615mmol), 하이드록시벤조트리아졸 하이드레이트(83.1 mg, 0.615 mmol), 상기 제조예 1에서 얻은 (S)-2-(메톡시카보닐아미노)-3-메틸부타노익 애시드 (99.4 mg, 0.568 mmol)의 혼합물에 4분에 걸쳐 N,N-다이아이소프로필에틸아민(206 νL, 1.18 mmol)의 메틸렌클로라이드(5 mL)를 첨가하고 상기 반응 혼합물을 상온에서 밤샘 교반시켰다. 상기 혼합물을 1N HCl 수용액에 붓고, 메틸렌클로라이드로 추출하였다. 상기 유기층을 황산마그네슘으로 건조하고, 컬럼 크로마토그래피(메틸렌클로라이드 / 메탄올)으로 정제하여, 목적화합물(25.0 mg, 13 %)을 흰색 고체로 얻었다.

¹H NMR (DMSO-d₆, δ=2.5 ppm, 400MHz): 11.88 (s, 2H), 7.88-7.81 (m, 4H), 7.52 (s, 2H), 7.39-7.37 (d, 4H), 7.29-7.27 (d, 2H), 5.07 (s, 2H), 4.08-3.99 (m, 2H), 3.80-3.74 (m, 4H), 3.54 (s, 6H), 2.14 (s, 2H), 1.99-1.91 (m, 6H), 1.86-1.76 (m, 2H), 0.89-0.83 (q, 12H);

¹³C NMR (DMSO-d₆, δ=39.52 ppm, 100 MHz): 173.49, 170.41, 170.24, 156.82, 147.85, 125.65, 121.17, 59.24, 58.01, 54.18, 51.46, 46.84, 30.93, 29.85, 24.27, 18.95, 18.51.

< 실시예 20> 3-(2-((S)-1-((S)-2-( 메톡시카보닐아미노 )-3- 메틸부타노일 ) 피롤리딘 -2-일)-1H- 이미다졸 -5-일) 페닐 4-(2-((S)-1-((S)-2-( 메톡시카보닐아미노 )-3-메틸부타노일) 피롤리딘 -2-일)-1H- 이미다졸 -5-일) 페닐 설페이트의 제조

tert-부틸 (S)-2-(5-(3-(((4-(2-((S)-1-(tert-부톡시카보닐)피롤리딘-2-일)-1H-이미다졸-5-일)페녹시)설포닐)옥시)페닐)-1H-이미다졸-2-일)피롤리딘-1-카복실레이트(177.0 mg, 0.246mmol)의 트리플루오로아세틱 애시드(3 mL) / 메틸렌클로라이드(3 mL)를 상온에서 30분간 교반시켰다. 상기 휘발물질을 진공하에 제거하고, EDCI(122 mg, 0.639mmol), 하이드록시벤조트리아졸 하이드레이트(86.3 mg, 0.639 mmol), 상기 제조예 1에서 얻은 (S)-2-(메톡시카보닐아미노)-3-메틸부타노익 애시드 (103 mg, 0.590 mmol)의 혼합물에 4분에 걸쳐 N,N-다이아이소프로필에틸아민 (214 νL, 1.23 mmol)의 메틸렌클로라이드(10 mL)를 첨가하고, 상기 반응 혼합물을 상온에서 밤샘 교반시켰다. 상기 혼합물을 1N HCl 수용액에 붓고, 메틸렌클로라이드로 추출하였다. 상기 유기층을 황산마그네슘으로 건조하고, 컬럼 크로마토그래피(메틸렌클로라이드 / 메탄올)로 정제하여, 목적화합물(110 mg, 54%)을 노란색 고체로 얻었다.

¹H NMR (DMSO-d₆, δ=2.5 ppm, 400MHz): 11.92-11.86 (d, 2H), 7.85-7.83 (d, 2H), 7.76-7.73 (m, 2H), 7.61 (s, 1H), 7.54 (s, 1H), 7.48-7.44 (t, 1H), 7.39-7.36 (d, 2H), 7.31-7.26 (t, 2H), 7.19-7.16 (q, 1H), 5.06 (s, 2H), 4.11-4.00 (m, 2H), 3.78 (s, 2H), 3.53 (s, 6H), 3.17-3.16 (d, 1H), 2.13 (s, 4H), 1.94-1.87 (m, 6H), 0.89-0.80 (m, 12H);

¹³C NMR (DMSO-d₆, δ=39.52 ppm, 125MHz): 170.35, 156.77, 150.39, 149.67, 147.82, 137.76, 135.00, 130.43, 125.64, 123.38, 121.04, 117.89, 116.19, 113.71, 113.19, 57.99, 54.18, 51.44, 48.61, 46.79, 30.96, 30.87, 29.84, 24.26, 18.51.

< 실시예 21> 3-(2-((S)-1-((S)-2-( 메톡시카보닐아미노 )-2- 페닐아세틸 ) 피롤리딘 -2-일)-1H-이미다졸-5-일)페닐 4-(2-((S)-1-((S)-2-( 메톡시카보닐아미노 )-2-페닐아세틸)피롤리딘-2-일)-1H-이미다졸-5-일)페닐 설페이트의 제조

tert-부틸 (S)-2-(5-(3-(((4-(2-((S)-1-(tert-부톡시카보닐)피롤리딘-2-일)-1H-이미다졸-5-일)페녹시)설포닐)옥시)페닐)-1H-이미다졸-2-일)피롤리딘-1-카복실레이트(123.0 mg, 0.171mmol)의 트리플루오로아세틱 애시드(3 mL) / 메틸렌클로라이드(3 mL)를 상온에서 30분간 교반시켰다. 상기 휘발물질을 진공하에 제거하고, EDCI(85.2 mg, 0.444mmol), 하이드록시벤조트리아졸 하이드레이트(60.0 mg, 0.444 mmol), 상기 제조예 3에서 얻은 (R)-2-(메톡시카보닐아미노)-2-페닐아세틱 애시드(85.8 mg, 0.410 mmol)의 혼합물에 4분에 걸쳐 N,N-다이아이소프로필에틸아민 (85.2 νL, 0.464 mmol)의 메틸렌클로라이드(10 mL)를 첨가하고, 상기 반응 혼합물을 상온에서 밤샘 교반시켰다. 상기 혼합물을 1N HCl 수용액에 붓고, 메틸렌클로라이드로 추출하였다. 상기 유기층을 황산마그네슘으로 건조하고, 컬럼 크로마토그래피(메틸렌클로라이드 / 메탄올)로 정제하여, 목적화합물(43.3 mg, 28%)을 노란색 고체로 얻었다.

¹H NMR (DMSO-d₆, δ=2.5 ppm, 400MHz): 8.19-8.06 (m, 2H), 7.98-7.96 (d, 2H), 7.91-7.83 (m, 2H), 7.73-7.64 (m, 5H), 7.39-7.25 (m, 10H), 7.03 (s, 1H), 5.53-5.38 (m, 2H), 5.18 (s, 2H), 3.91-3.85 (d, 1H), 3.80-3.71 (m, 1H), 3.54-3.51 (app br s, 6H), 3.46-3.38 (d, 1H), 3.17-3.15 (d, 1H), 2.36-1.89 (m, 8H);

¹³C NMR (DMSO-d₆, δ=39.52 ppm, 125MHz): 168.99, 156.34, 155.97, 150.33, 149.40, 136.86, 131.50, 128.69, 128.62, 128.31, 128.12, 127.79, 127.44, 127.23, 124.83, 122.11, 122.06, 117.94, 115.90, 57.00, 56.73, 53.48, 51.62, 47.01, 30.88, 24.14.

< 실시예 22> 3-(2-((S)-1-((R)-2-( 메톡시카보닐아미노 )-3- 메틸부타노일 ) 피롤리딘 -2-일)-1H-이미다졸-5-일)페닐 4-(2-((S)-1-((R)-2-( 메톡시카보닐아미노 )-3-메 틸부타노일 ) 피롤리딘 -2-일)-1H- 이미다졸 -5-일) 페닐 설페이트의 제조

tert-부틸 (S)-2-(5-(3-(((4-(2-((S)-1-(tert-부톡시카보닐)피롤리딘-2-일)-1H-이미다졸-5-일)페녹시)설포닐)옥시)페닐)-1H-이미다졸-2-일)피롤리딘-1-카복실레이트(108 mg, 0.149 mmol)의 트리플루오로아세틱 애시드(3 mL) / 메틸렌클로라이드(3 mL)를 상온에서 30분간 교반시켰다. 상기 휘발물질을 진공하에 제거하고, EDCI(74.3 mg, 0.388 mmol), 하이드록시벤조트리아졸 하이드레이트(52.4 mg, 0.388 mmol), 상기 제조예 1에서 얻은 (R)-2-(메톡시카보닐아미노)-3-메틸부타노익 애시드(62.7 mg, 0.358 mmol)의 혼합물에 4분에 걸쳐 N,N-다이아이소프로필에틸아민 (130 νL, 0.746 mmol)의 메틸렌클로라이드(10 mL)를 첨가하고, 상기 반응 혼합물을 상온에서 밤샘 교반시켰다. 상기 혼합물을 1N HCl 수용액에 붓고, 메틸렌클로라이드로 추출하였다. 상기 유기층을 황산마그네슘으로 건조하고, 컬럼 크로마토그래피(메틸렌클로라이드 / 메탄올)로 정제하여, 목적화합물(40.5 mg, 33%)을 노란색 고체로 얻었다.

¹H NMR (DMSO-d₆, δ=2.5 ppm, 400 MHz): 8.13-8.08 (d, 2H), 7.95-7.87 (m, 4H), 7.78-7.63 (m, 3H), 7.54-7.48 (m, 1H), 7.30-7.23 (m, 2H), 5.16 (s, 2H), 4.18-4.07 (m, 2H), 3.88-3.78 (m, 2H), 3.68-3.66 (d, 2H), 3.53 (s, 6H), 2.36 (s, 2H), 2.08-1.96 (m, 8H), 0.90-0.68 (m, 12H);

¹³C NMR (DMSO-d₆, δ=39.52 ppm, 101 MHz): 170.80, 158.49, 158.15, 156.87, 150.32, 149.57, 131.43, 127.33, 124.70, 122.08, 120.79, 117.78, 116.21, 115.85, 57.84, 53.19, 51.59, 47.00, 30.89, 29.70, 24.34, 19.28, 17.89.

< 실시예 23> 2- 플루오로 -3-((R)-1-((R)-2-( 메톡시카보닐아미노 )-2- 페닐아세틸 )피롤리딘-2-카복스아미도)페닐 2- 플루오로 -3-((S)-1-((R)-2-( 메톡시카보닐아미 노)-2-페닐아세틸)피롤리딘-2-카복스아미도)페닐 설페이트의 제조

다이-tert-부틸 2,2'-((((설포닐비스(옥시))비스(2-플루오로-3,1-페닐렌))비스(아자엔다이일))비스(카보닐))(2S,2'S)-비스(피롤리딘-1-카복실레이트) (66.0 mg, 0.0929mmol)의 트리플루오로아세틱 애시드(3 mL) / 메틸렌클로라이드(3 mL)를 상온에서 30분간 교반시켰다. 상기 휘발물질을 진공하에 제거하고, EDCI(46.3 mg, 0.241mmol), 하이드록시벤조트리아졸 하이드레이트(32.6 mg, 0.241 mmol), 상기 제조예 3에서 얻은 (R)-2-(메톡시카보닐아미노)-2-페닐아세틱 애시드(46.6 mg, 0.223 mmol)의 혼합물에 4분에 걸쳐 N,N-다이아이소프로필에틸아민 (80.9 νL, 0.464 mmol)의 메틸렌클로라이드(10 mL)를 첨가하고, 상기 반응 혼합물을 상온에서 밤샘 교반시켰다. 상기 혼합물을 1N HCl 수용액에 붓고, 메틸렌클로라이드로 추출하였다. 상기 유기층을 황산마그네슘으로 건조하고, 컬럼 크로마토그래피(메틸렌클로라이드 / 메탄올)로 정제하여, 목적화합물(41.0 mg, 49%)을 흰색 고체로 얻었다.

¹H NMR (DMSO-d₆, δ=2.5 ppm, 400MHz): 10.21 (s, 1H), 10.10 (s, 1H), 8.02-7.97 (q, 2H), 7.72-7.66 (q, 2H), 7.41-7.25 (m, 14H), 5.51-5.45 (q, 2H), 4.69-4.67 (m, 1H), 4.57-4.55 (m, 1H), 3.81 (s, 1H), 3.71-3.65 (m, 1H), 3.53 (s, 6H), 3.18-3.16 (d, 1H), 3.10-3.08 (d, 1H), 2.18-2.16 (d, 1H), 2.03-1.78 (m, 7H);

¹³C NMR (DMSO-d₆, δ=39.52 ppm, 125MHz): 170.92, 168.45, 168.25, 156.33, 155.97, 136.74, 128.60, 128.38, 128.35, 127.99, 124.76, 123.15, 118.26, 118.03, 60.26, 56.65, 51.55, 46.85, 29.14, 24.69, 24.27;

¹⁹F NMR (DMSO-d₆, 376 MHz): -74.67, -139.84.

< 실시예 24> 2- 플루오로 -3-((R)-1-((R)-2-( 메톡시카보닐아미노 )-3- 메틸부타노일 )피롤리딘-2-카복스아미도)페닐 2- 플루오로 -3-((S)-1-((R)-2-( 메톡시카보닐아미 노)-3- 메틸부타노일 ) 피롤리딘 -2- 카복스아미도 ) 페닐 설페이트의 제조

tert-부틸 다이-tert-부틸 2,2'-((((설포닐비스(옥시))비스(2-플루오로-3,1-페닐렌))비스(아자엔다이일))비스(카보닐))(2S,2'S)-비스(피롤리딘-1-카복실레이트) (114 mg, 0.160 mmol)의 트리플루오로아세틱 애시드(3 mL) / 메틸렌클로라이드(3 mL)를 상온에서 30분간 교반시켰다. 상기 휘발물질을 진공하에 제거하고, EDCI(79.7 mg, 0.416 mmol), 하이드록시벤조트리아졸 하이드레이트(56.2 mg, 0.416 mmol), 상기 제조예 1에서 얻은 (R)-2-(메톡시카보닐아미노)-3-메틸부타노익 애시드(67.3 mg, 0.384 mmol)의 혼합물에 4분에 걸쳐 N,N-다이아이소프로필에틸아민 (139 νL, 0.800 mmol)의 메틸렌클로라이드(10 mL)를 첨가하고, 상기 반응 혼합물을 상온에서 밤샘 교반시켰다. 상기 혼합물을 1N HCl 수용액에 붓고, 메틸렌클로라이드로 추출하였다. 상기 유기층을 황산마그네슘으로 건조하고, 컬럼 크로마토그래피(메틸렌클로라이드 / 메탄올)로 정제하여, 목적화합물(30.8 mg, 23%)을 흰색 고체로 얻었다.

¹H NMR (DMSO-d₆, δ=2.5 ppm, 400 MHz): 10.45-9.97 (d, 2H), 7.98-7.81 (m, 2H), 7.48-7.29 (m, 6H), 4.60-4.58 (d, 1H), 4.12-4.07 (t, 1H), 3.87-3.79 (m, 2H), 3.66-3.60 (m, 4H), 3.50 (s, 6H), 2.25-2.11 (m, 2H), 1.98-1.85 (m, 8H), 0.89-0.71 (m, 12H);

¹³C NMR (DMSO-d₆, δ=39.52 ppm, 101 MHz): 170.53, 156.87, 146.52, 144.01, 137.14, 128.15, 124.70, 123.42, 118.19, 59.91, 58.04, 51.45, 48.64, 47.13, 29.75, 29.16, 24.37, 19.08, 18.32;

¹⁹F NMR (DMSO-d₆, 376 MHz): -78.40, -144.44.

< 실시예 25> 비스 (2- 플루오로 -5-(2-((S)-1-((R)-2-( 메톡시카보닐아미노 )-3-메틸부타노일)피롤리딘-2-일)-1H-이미다졸-5-일)페닐) 설페이트의 제조

다이-tert-부틸 2,2'-(((설포닐비스(옥시))비스(4-플루오로-3,1-페닐렌))비스(1H-이미다졸-5,2-다이일))(2S,2'S)-비스(피롤리딘-1-카복실레이트)(57.4 mg, 0.076mmol)의 트리플루오로아세틱 애시드(3 mL) / 메틸렌클로라이드(3 mL)를 상온에서 30분간 교반시켰다. 상기 휘발물질을 진공하에 제거하고, EDCI(37.8 mg, 0.197mmol), 하이드록시벤조트리아졸 하이드레이트(26.6 mg, 0.197 mmol), 상기 제조예 1에서 얻은 (R)-2-(메톡시카보닐아미노)-3-메틸부타노익 애시드(31.9 mg, 0.182 mmol)의 혼합물에 4분에 걸쳐 N,N-다이아이소프로필에틸아민 (66.1 νL, 0.379 mmol)의 메틸렌클로라이드(10 mL)를 첨가하고, 상기 반응 혼합물을 상온에서 밤샘 교반시켰다. 상기 혼합물을 1N HCl 수용액에 붓고, 메틸렌클로라이드로 추출하였다. 상기 유기층을 황산마그네슘으로 건조하고, 컬럼 크로마토그래피(메틸렌클로라이드 / 메탄올)로 정제하여, 목적화합물(34.5 mg, 52%)을 노란색 고체로 얻었다.

¹H NMR (DMSO-d₆, δ=2.5 ppm, 400MHz): 8.08-8.06 (d, 2H), 8.01 (s, 2H), 7.92-7.91 (d, 2H), 7.80 (s, 1H), 7.73-7.68 (t, 1H), 7.59-7.46 (m, 1H), 7.25-7.23 (d, 1H), 5.69-5.12 (m, 2H), 4.17-4.13 (t, 2H), 3.87-3.86 (d, 2H), 3.68-3.62 (q, 2H), 3.53 (s, 6H), 2.32 (s, 2H), 2.08-1.67 (m, 8H), 0.90-0.29 (m, 12H);

¹³C NMR (DMSO-d₆, δ=39.52 ppm, 101MHz): 170.71, 156.88, 149.66, 137.07, 136.94, 126.54, 120.06, 118.57, 115.78, 57.87, 53.48, 51.58, 46.95, 30.88, 29.69, 24.28, 19.25, 18.57, 18.41, 17.93;

¹⁹F NMR (DMSO-d₆, 376 MHz): -74.27.

< 실시예 26> 비스 (2- 플루오로 -5-(2-((S)-1-((R)-2-( 메톡시카보닐아미노 )-2-페닐아세틸)피롤리딘-2-일)-1H-이미다졸-5-일)페닐) 설페이트의 제조

다이-tert-부틸 2,2'-(((설포닐비스(옥시))비스(4-플루오로-3,1-페닐렌))비스(1H-이미다졸-5,2-다이일))(2S,2'S)-비스(피롤리딘-1-카복실레이트) (37.9 mg, 0.050 mmol)의 트리플루오로아세틱 애시드(3 mL) / 메틸렌클로라이드(3 mL)를 상온에서 30분간 교반시켰다. 상기 휘발물질을 진공하에 제거하고, EDCI(25.0 mg, 0.130 mmol), 하이드록시벤조트리아졸 하이드레이트(17.6 mg, 0.130 mmol), 상기 제조예 3에서 얻은 (R)-2-(메톡시카보닐아미노)-2-페닐아세틱 애시드(25.1 mg, 0.120 mmol)의 혼합물에 4분에 걸쳐 N,N-다이아이소프로필에틸아민 (43.6 νL, 0.250 mmol)의 메틸렌클로라이드(10 mL)를 첨가하고, 상기 반응 혼합물을 상온에서 밤샘 교반시켰다. 상기 혼합물을 1N HCl 수용액에 붓고, 메틸렌클로라이드로 추출하였다. 상기 유기층을 황산마그네슘으로 건조하고, 컬럼 크로마토그래피(메틸렌클로라이드 / 메탄올)로 정제하여, 목적화합물(23.5 mg, 12%)을 노란색 고체로 얻었다.

¹H NMR (DMSO-d₆, δ=2.5 ppm, 400 MHz): 8.11-8.03 (m, 4H), 7.98-7.93 (m, 2H), 7.79-7.71 (m, 2H), 7.68-7.64 (t, 2H), 7.39-7.34 (m, 6H), 7.29 (s, 2H), 6.99 (s, 2H), 5.50-5.49 (d, 2H), 5.17-5.16 (d, 2H), 3.90 (s, 2H), 3.51 (s, 6H), 3.18-3.12 (q, 2H), 2.22-2.15 (m, 2H), 2.02-2.00 (d, 4H), 1.87 (s, 2H);

¹³C NMR (DMSO-d₆, δ=39.52 ppm, 101 MHz): 168.88, 155.95, 151.56, 149.53, 137.11, 136.95, 128.67, 128.27, 128.11, 127.78, 126.70, 120.27, 118.82, 118.63, 115.87, 56.99, 53.80, 51.61, 46.94, 30.91, 24.10;

¹⁹F NMR (DMSO-d₆, 376 MHz): -78.97.

< 실시예 27> 비스 (2- 플루오로 -5-(2-((S)-1-((S)-2-( 메톡시카보닐아미노 )-3-메틸부타노일)피롤리딘-2-일)-1H-이미다졸-5-일)페닐) 설페이트의 제조

다이-tert-부틸 2,2'-(((설포닐비스(옥시))비스(4-플루오로-3,1-페닐렌))비스(1H-이미다졸-5,2-다이일))(2S,2'S)-비스(피롤리딘-1-카복실레이트) (164 mg, 0.216 mmol)의 트리플루오로아세틱 애시드(3 mL) / 메틸렌클로라이드(3 mL)를 상온에서 30분간 교반시켰다. 상기 휘발물질을 진공하에 제거하고, EDCI(108 mg, 0.563 mmol), 하이드록시벤조트리아졸 하이드레이트(76.0 mg, 0.563 mmol), 상기 제조예 1에서 얻은 (S)-2-(메톡시카보닐아미노)-3-메틸부타노익 애시드 (91.0 mg, 0.519 mmol)의 혼합물에 4분에 걸쳐 N,N-다이아이소프로필에틸아민 (189 νL, 1.08 mmol)의 메틸렌클로라이드(10 mL)를 첨가하고, 상기 반응 혼합물을 상온에서 밤샘 교반시켰다. 상기 혼합물을 1N HCl 수용액에 붓고, 메틸렌클로라이드로 추출하였다. 상기 유기층을 황산마그네슘으로 건조하고, 컬럼 크로마토그래피(메틸렌클로라이드 / 메탄올)로 정제하여, 목적화합물(23.5 mg, 12%)을 노란색 고체로 얻었다.

¹H NMR (DMSO-d₆, δ=2.5 ppm, 400 MHz): 8.06-8.05 (d, 2H), 7.99 (s, 2H), 7.90-7.88 (d, 2H), 7.71-7.67 (t, 2H), 7.30-7.28 (d, 2H), 5.11-5.08 (t, 2H), 4.10-4.06 (t, 2H), 3.86-3.76 (m, 4H), 3.53 (s, 6H), 2.32-2.28 (t, 2H), 2.14-2.10 (m, 2H), 2.07-1.94 (m, 6H), 0.81-0.75 (q, 12H);

¹³C NMR (DMSO-d₆, δ=39.52 ppm, 101 MHz): 170.95, 158.36, 158.03, 156.88, 149.87, 137.07, 136.93, 126.37, 119.84, 118.72, 118.55, 57.93, 53.34, 51.52, 47.05, 31.00, 29.30, 24.58, 19.13, 17.99;

¹⁹F NMR (DMSO-d₆, 376 MHz): -78.32, -138.05.

< 실시예 28> 비스 (3-((S)-1-((R)-2-( 메톡시카보닐아미노 )-3- 메틸부타노일 ) 피 롤리딘-2-카복스아미도)-2-메틸페닐) 설페이트의 제조

다이-tert-부틸 2,2'-((((설포닐비스(옥시))비스(2-메틸-3,1-페닐렌))비스(아자엔다이일))비스(카보닐))(2S,2'S)-비스(피롤리딘-1-카복실레이트)(81.1 mg, 0.115mmol)의 트리플루오로아세틱애시드(3 mL) / 메틸렌클로라이드(3 mL)를 상온에서 30분간 교반시켰다. 휘발물질을 진공하에 제거하고, EDCI(38.8 mg, 0.300mmol), 하이드록시벤조트리아졸 하이드레이트(40.5 mg, 0.300 mmol), 상기 제조예 1에서 얻은 (R)-2-(메톡시카보닐아미노)-3-메틸부타노익 애시드(48.5 mg, 0.277 mmol)의 혼합물에 4분에 걸쳐 N,N-다이아이소프로필에틸아민(149 νL, 0.577 mmol)의 메틸렌클로라이드(10 mL)를 첨가하고 상기 반응 혼합물을 상온에서 밤샘 교반시켰다. 상기 혼합물을 1N HCl 수용액에 붓고, 메틸렌클로라이드로 추출하였다. 상기 유기층을 황산마그네슘으로 건조하고, 컬럼 크로마토그래피(메틸렌클로라이드 / 메탄올)으로 정제하여, 목적화합물(52.4 mg, 56 %)을 흰색 고체로 얻었다.

¹H NMR (DMSO-d₆, δ=2.5 ppm, 400MHz): 9.96-9.35 (app s, 2H), 7.47-7.38 (m, 4H), 7.35-7.31 (t, 2H), 7.28-7.23 (t, 2H), 4.52-4.50 (d, 2H), 4.10-4.02 (m, 2H), 3.90-3.80 (m, 2H), 3.65-3.59 (q, 2H), 3.56-3.53 (d, 2H), 3.51-3.42 (app br s, 6H), 2.17 (s, 1H), 2.13-2.11 (app s, 6H), 2.09-1.88 (m, 9H), 0.92-0.88 (t, 10H), 0.84-0.82 (d, 1H), 0.76-0.74 (d, 1H);

¹³C NMR (DMSO-d₆, δ=39.52 ppm, 125MHz): 170.91, 170.48, 157.03, 148.52, 138.16, 126.78, 125.72, 124.99, 118.13, 60.15, 58.15, 51.39, 47.13, 29.61, 29.08, 24.38, 19.01, 18.41, 11.10.

< 실시예 29> 다이메틸 (2R,2'R)-1,1'-((2S,2'S)-2,2'-(4,4'-설포닐비스(4,1-페닐렌)비스(아자엔다이일))비스(옥소메틸렌)비스(피롤리딘-2,1-다이일))비스(3-메틸-1-옥소부탄-2,1-다이일)다이카바메이트의 제조

다이-tert-부틸 2,2'-(((설포닐비스(4,1-페닐렌))비스(아자엔다이일))비스(카보닐))(2S,2'S)-비스(피롤리딘-1-카복실레이트) (82.0 mg, 0.128mmol)의 트리플루오로아세틱 애시드(3 mL) / 메틸렌클로라이드(3 mL)를 상온에서 30분간 교반시켰다. 상기 휘발물질을 진공하에 제거하고, EDCI(63.6 mg, 0.332mmol), 하이드록시벤조트리아졸 하이드레이트(44.8 mg, 0.332 mmol), 상기 제조예 1에서 얻은 (R)-2-(메톡시카보닐아미노)-3-메틸부타노익 애시드(53.6 mg, 0.536 mmol)의 혼합물에 4분에 걸쳐 N,N-다이아이소프로필에틸아민 (111 νL, 0.638 mmol)의 메틸렌클로라이드(10 mL)를 첨가하고 상기 반응 혼합물을 상온에서 밤샘 교반시켰다. 상기 혼합물을 1N HCl 수용액에 붓고, 메틸렌클로라이드로 추출하였다. 상기 유기층을 황산마그네슘으로 건조하고, 컬럼 크로마토그래피(메틸렌클로라이드 / 메탄올)로 정제하여, 목적화합물(53.1 mg, 55 %)을 흰색 고체로 얻었다.

¹H NMR (DMSO-d₆, δ=2.5 ppm, 500MHz): 10.72-10.24 (app s, 2H), 7.99-7.84 (m, 4H), 7.82-7.71 (m, 4H), 7.56-7.33 (m, 2H), 4.41-4.40 (d, 2H), 4.10-4.07 (t, 2H), 3.78-3.68 (m, 2H), 3.63-3.59 (m, 1H), 3.54 (s, 6H), 3.46-3.44 (t, 1H), 2.18-2.09 (m, 2H), 2.04-1.82 (m, 8H), 0.88-0.85 (t, 10H), 0.77-0.76 (d, 1H), 0.68-0.67 (d, 1H);

¹³C NMR (DMSO-d₆, δ=39.52 ppm, 125MHz): 171.17, 170.18, 156.85, 143.33, 135.26, 128.36, 119.11, 60.26, 57.94, 51.55, 47.06, 29.72, 29.28, 24.33, 19.05, 18.27.

< 실시예 30> 비스 (3-(2-((S)-1-((S)-2-( 메톡시카보닐아미노 )-4- 메틸펜타노 일)피롤리딘-2-일)-1H-이미다졸-5-일)페닐) 설페이트의 제조

다이-tert-부틸 2,2'-(((설포닐비스(옥시))비스(3,1-페닐렌))비스(1H-이미다졸-5,2-다이일))(2S,2'S)-비스(피롤리딘-1-카복실레이트) (70 mg, 0.0971mmol)의 트리플루오로아세틱 애시드(3 mL) / 메틸렌클로라이드(3 mL)를 상온에서 30분간 교반시켰다. 상기 휘발물질을 진공하에 제거하고, EDCI(48.4 mg, 0.252mmol), 하이드록시벤조트리아졸 하이드레이트(34.1 mg, 0.252 mmol), (S)-2-(메톡시카보닐아미노)-4-메틸펜타노익 애시드(44.1 mg, 0.233 mmol)의 혼합물에 4분에 걸쳐 N,N-다이아이소프로필에틸아민(84.6 νL, 0.486 mmol)의 메틸렌클로라이드(10 mL)를 첨가하고, 상기 반응 혼합물을 상온에서 밤샘 교반시켰다. 상기 혼합물을 1N HCl 수용액에 붓고, 메틸렌클로라이드로 추출하였다. 상기 유기층을 황산마그네슘으로 건조하고, 컬럼 크로마토그래피(메틸렌클로라이드 / 메탄올)로 정제하여, 목적화합물(52.4 mg, 63%)을 노란색 고체로 얻었다.

¹H NMR (DMSO-d₆, δ=2.5 ppm, 400MHz): 12.14-11.89 (d, 1H), 7.96-7.94 (d, 1H), 7.80-7.76 (m, 3H), 7.69-7.67 (d, 1H), 7.60 (s, 1H), 7.51-7.45 (q, 2H), 7.43-7.41 (d, 1H), 7.38-7.36 (d, 1H), 7.34-7.32 (d, 1H), 7.21-7.11 (m, 1H), 5.06-5.00 (m ,1H), 4.33-4.28 (m, 1H), 3.97-3.93 (m, 1H), 3.73-3.71 (m, 2H), 3.53 (s, 6H), 3.38-3.36 (m, 3H), 2.15-2.04 (m, 2H), 1.97-1.94 (m, 3H), 1.83-1.80 (d, 1H), 1.64 (s, 2H), 1.56-1.37 (m, 5H), 1.23 (s, 1H), 0.88-0.83 (m, 12H);

¹³C NMR (DMSO-d₆, δ=39.52 ppm, 125MHz): 174.45, 170.99, 156.64, 150.40, 130.43, 126.92, 124.29, 123.41, 117.83, 116.25, 109.74, 54.43, 52.11, 51.37, 50.79, 46.37, 39.52, 30.99, 24.28, 24.04, 23.17, 22.90, 21.35, 21.10.

< 실시예 31> 비스 (3-(2-((S)-1-((S)-2-( 메톡시카보닐아미노 ) 프로파노일 ) 피롤 리딘-2-일)-1H-이미다졸-5-일)페닐) 설페이트의 제조

다이-tert-부틸 2,2'-(((설포닐비스(옥시))비스(3,1-페닐렌))비스(1H-이미다졸-5,2-다이일))(2S,2'S)-비스(피롤리딘-1-카복실레이트) (108 mg, 0.149mmol)의 트리플루오로아세틱 애시드(3 mL) / 메틸렌클로라이드(3 mL)를 상온에서 30분간 교반시켰다. 상기 휘발물질을 진공하에 제거하고, EDCI(74.3 mg, 0.388mmol), 하이드록시벤조트리아졸 하이드레이트(52.4 mg, 0.388 mmol), (S)-2-(메톡시카보닐아미노)프로파노익 애시드(52.7 mg, 0.358 mmol)의 혼합물에 4분에 걸쳐 N,N-다이아이소프로필에틸아민 (130 νL, 0.746 mmol)의 메틸렌클로라이드(10 mL)를 첨가하고, 상기 반응 혼합물을 상온에서 밤샘 교반시켰다. 상기 혼합물을 1N HCl 수용액에 붓고, 메틸렌클로라이드로 추출하였다. 상기 유기층을 황산마그네슘으로 건조하고, 컬럼 크로마토그래피(메틸렌클로라이드 / 메탄올)로 정제하여, 목적화합물(53.0 mg, 46%)을 노란색 고체로 얻었다.

¹H NMR (DMSO-d₆, δ=2.5 ppm, 400MHz): 7.97-7.94 (d, 1H), 7.83-7.77 (m, 4H), 7.69-7.67 (d, 1H), 7.59 (s, 1H), 7.52-7.47 (m, 2H), 7.40-7.34 (m, 2H), 7.24-7.20 (m, 2H), 5.13-5.04 (m, 2H), 4.35-4.31 (t, 1H), 3.73-3.70 (m, 3H), 3.66-3.62 (m, 1H), 3.52 (s, 6H), 3.42 (s, 2H), 2.13-2.03 (m, 3H), 1.97-1.94 (m, 3H), 1.85-1.78 (m, 1H), 1.48-1.38 (m, 1H), 1.26-1.16 (m, 6H);

¹³C NMR (DMSO-d₆, δ=39.52 ppm, 125MHz): 171.03, 156.25, 150.42, 130.50, 126.95, 124.31, 123.42, 119.04, 117.89, 116.16, 109.71, 54.55, 51.36, 48.04, 46.38, 31.04, 24.19, 16.83.

< 실시예 32> 비스 (3-(2-((S)-1-((S)-2-( 메톡시카보닐아미노 )-2- 페닐아세틸 )피롤리딘-2-일)-1H-이미다졸-5-일)페닐) 설페이트의 제조

다이-tert-부틸 2,2'-(((설포닐비스(옥시))비스(3,1-페닐렌))비스(1H-이미다졸-5,2-다이일))(2S,2'S)-비스(피롤리딘-1-카복실레이트) (81.0 mg, 0.112mmol)의 트리플루오로아세틱 애시드(3 mL) / 메틸렌클로라이드(3 mL)를 상온에서 30분간 교반시켰다. 상기 휘발물질을 진공하에 제거하고, EDCI(56.0 mg, 0.92mmol), 하이드록시벤조트리아졸 하이드레이트(39.5 mg, 0.388 mmol), (S)-2-(메톡시카보닐아미노)-2-페닐아세틱 애시드(56.4 mg, 0.270 mmol)의 혼합물에 4분에 걸쳐 N,N-다이아이소프로필에틸아민 (97.8 νL, 0.562 mmol)의 메틸렌클로라이드(10 mL)를 첨가하고, 상기 반응 혼합물을 상온에서 밤샘 교반시켰다. 상기 혼합물을 1N HCl 수용액에 붓고, 메틸렌클로라이드로 추출하였다. 상기 유기층을 황산마그네슘으로 건조하고, 컬럼 크로마토그래피(메틸렌클로라이드 / 메탄올)로 정제하여, 목적화합물(28.0 mg, 28%)을 노란색 고체로 얻었다.

¹H NMR (DMSO-d₆, δ=2.5 ppm, 400MHz): 12.30-11.99 (d, 2H), 7.86- 7.85 (d, 1H), 7.77-7.72 (m, 3H), 7.66-7.60 (m, 3H), 7.52-7.44 (m, 3H), 7.39-7.35 (t, 6H), 7.30-7.28 (m, 2H), 7.26-7.20 (m, 4H), 5.49-5.47 (d, 2H), 5.14-5.07 (m, 2H), 3.70-3.64 (q, 2H), 3.54 (s, 6H), 3.39 (s, 2H), 2.17-2.12 (m, 1H), 2.00-1.91 (m, 6H);

¹³C NMR (DMSO-d₆, δ=39.52 ppm, 125MHz): 168.05, 156.35, 150.41, 149.45, 137.75, 137.60, 137.12, 130.40, 128.75, 128.21, 127.65, 123.49, 117.79, 116.33, 113.67, 56.48, 54.58, 51.57, 46.42, 30.93, 24.17.

< 실시예 33> 비스 (3-((S)-1-((S)-2-( 메톡시카보닐아미노 )-3,3- 다이메틸부타노일 )피롤리딘-2-카복스아미도)페닐) 설페이트의 제조

다이-tert-부틸 2,2'-((((설포닐비스(옥시))비스(3,1-페닐렌))비스(아자엔다이일))비스(카보닐))(2S,2'S)-비스(피롤리딘-1-카복실레이트) (11.1 mg, 0.164 mmol)의 트리플루오로아세틱 애시드(3 mL) / 메틸렌클로라이드(3 mL)를 상온에서 30분간 교반시켰다. 상기 휘발물질을 진공하에 제거하고, EDCI(81.8 mg, 0.427 mmol), 하이드록시벤조트리아졸 하이드레이트(57.6 mg, 0.427 mmol), (S)-2-(메톡시카보닐아미노)-3,3-다이메틸부타노익 애시드(74.5 mg, 0.394 mmol)의 혼합물에 4분에 걸쳐 N,N-다이아이소프로필에틸아민 (143 νL, 0.820 mmol)의 메틸렌클로라이드(10 mL)를 첨가하고, 상기 반응 혼합물을 상온에서 밤샘 교반시켰다. 상기 혼합물을 1N HCl 수용액에 붓고, 메틸렌클로라이드로 추출하였다. 상기 유기층을 황산마그네슘으로 건조하고, 컬럼 크로마토그래피(메틸렌클로라이드 / 메탄올)로 정제하여, 목적화합물(29.7 mg, 22%)을 흰색 고체로 얻었다.

¹H NMR (DMSO-d₆, δ=2.5 ppm, 400 MHz): 10.41-10.16 (d, 2H), 7.88-7.82 (d, 2H), 7.62-7.60 (d, 2H), 7.48-7.44 (t, 2H), 7.27-7.10 (q, 4H), 4.45-4.41 (t, 2H), 4.23-4.20 (d, 2H), 3.79-3.76 (m, 2H), 3.65-3.62 (m, 2H), 3.54 (s, 6H), 2.20-2.14 (m, 2H), 2.02-1.84 (m, 6H), 0.96 (s, 18H);

¹³C NMR (DMSO-d₆, δ=39.52 ppm, 125 MHz): 170.94, 169.64, 156.88, 149.88, 140.90, 130.69, 118.15, 115.21, 111.11, 60.32, 59.11, 51.50, 47.94, 34.65, 29.45, 26.36, 26.22, 24.84.

< 실시예 34> 2- 플루오로 -3-((S)-1-((R)-2-( 메톡시카보닐아미노 )-2- 페닐아세틸 ) 피롤리딘 -2- 카복스아미도 )페닐 2- 플루오로 -5-((S)-1-((R)-2-( 메톡시카보닐아미노 )-2- 페닐아세틸 ) 피롤리딘 -2- 카복스아미도 )페닐 설페이트의 제조

tert-부틸 (S)-2-((3-(((5-((S)-1-(tert-부톡시카보닐)피롤리딘-2-카복스아미도)-2-플루오로페녹시)설포닐)옥시)-2-플루오로페닐)카바모일)피롤리딘-1-카복실레이트(62.2 mg, 0.088mmol)의 트리플루오로아세틱 애시드(3 mL) / 메틸렌클로라이드(3 mL)를 상온에서 30분간 교반시켰다. 상기 휘발물질을 진공하에 제거하고, EDCI(43.6 mg, 0.228mmol), 하이드록시벤조트리아졸 하이드레이트(30.7 mg, 0.228 mmol), 상기 제조예 3에서 얻은 (R)-2-(메톡시카보닐아미노)-2-페닐아세틱 애시드(43.9 mg, 0.210 mmol)의 혼합물에 4분에 걸쳐 N,N-다이아이소프로필에틸아민 (76.2 νL, 0.438 mmol)의 메틸렌클로라이드(10 mL)를 첨가하고, 상기 반응 혼합물을 상온에서 밤샘 교반시켰다. 상기 혼합물을 1N HCl 수용액에 붓고, 메틸렌클로라이드로 추출하였다. 상기 유기층을 황산마그네슘으로 건조하고, 컬럼 크로마토그래피(메틸렌클로라이드 / 메탄올)로 정제하여, 목적화합물(24.5 mg, 31%)을 흰색 고체로 얻었다.

¹H NMR (DMSO-d₆, δ=2.5 ppm, 400MHz): 10.46-10.11 (m, 2H), 8.11-8.01 (m, 2H), 7.74-7.64 (m, 3H), 7.55-7.50 (t, 1H), 7.39-7.21 (m, 11H), 7.09-7.04 (d, 2H), 5.51-5.45 (q, 2H), 4.68-4.36 (q, 2H), 3.81-3.67 (m, 2H), 3.52 (s, 6H), 3.17-3.08 (m, 2H), 2.16-1.80 (m, 8H);

¹³C NMR (DMSO-d₆, δ=39.52 ppm, 101MHz): 170.92, 168.38, 156.30, 156.05, 149.85, 147.40, 137.16, 136.77, 136.25, 136.08, 128.58, 128.35, 128.01, 124.81, 123.48, 123.06, 119.72, 117.96, 117.78, 113.31, 60.67, 56.65, 51.54, 46.94, 29.18, 24.30;

¹⁹F NMR (DMSO-d₆, 376 MHz): -73.82, -135.52, -139.50.

< 실시예 35> 2- 플루오로 -3-((S)-1-((R)-2-( 메톡시카보닐아미노 )-3- 메틸부타노일 ) 피롤리딘 -2- 카복스아미도 )페닐 2- 플루오로 -5-((S)-1-((R)-2-( 메톡시카보닐아 미노)-3-메틸부타노일)피롤리딘-2-카복스아미도)페닐 설페이트의 제조

tert-부틸 (S)-2-((3-(((5-((S)-1-(tert-부톡시카보닐)피롤리딘-2-카복스아미도)-2-플루오로페녹시)설포닐)옥시)-2-플루오로페닐)카바모일)피롤리딘-1-카복실레이트(90.1 mg, 0.127mmol)의 트리플루오로아세틱 애시드(3 mL) / 메틸렌클로라이드(3 mL)를 상온에서 30분간 교반시켰다. 상기 휘발물질을 진공하에 제거하고, EDCI(63.2 mg, 0.330mmol), 하이드록시벤조트리아졸 하이드레이트(44.5 mg, 0.330 mmol), 상기 제조예 1에서 얻은 (R)-2-(메톡시카보닐아미노)-3-메틸부타노익 애시드(53.3 mg, 0.304 mmol)의 혼합물에 4분에 걸쳐 N,N-다이아이소프로필에틸아민 (110 νL, 0.634 mmol)의 메틸렌클로라이드(10 mL)를 첨가하고, 상기 반응 혼합물을 상온에서 밤샘 교반시켰다. 상기 혼합물을 1N HCl 수용액에 붓고, 메틸렌클로라이드로 추출하였다. 상기 유기층을 황산마그네슘으로 건조하고, 컬럼 크로마토그래피(메틸렌클로라이드 / 메탄올)로 정제하여, 목적화합물(22.3 mg, 21%)을 흰색 고체로 얻었다.

¹H NMR (DMSO-d₆, δ=2.5 ppm, 400MHz): 10.64-9.97 (m, 2H), 8.08-8.07 (d, 1H), 7.99-7.96 (t, 1H), 7.61 (s, 1H), 7.53-7.48 (t, 1H), 7.44-7.28 (m, 4H), 4.60-4.58 (d, 1H), 4.38-4.37 (d, 1H), 4.12-4.07 (t, 2H), 3.79 (s, 2H), 3.64-3.58 (m, 2H), 3.53 (s, 6H), 2.21-2.09 (m, 2H), 1.99-1.81 (m, 8H), 0.89-0.66 (m, 12H);

¹³C NMR (DMSO-d₆, δ=39.52 ppm, 101MHz): 170.90, 170.22, 156.84, 149.90, 147.44, 146.40, 143.89, 137.12, 136.06, 128.18, 124.71, 123.31, 119.81, 117.89, 113.39, 60.28, 58.00, 51.54, 47.09, 29.75, 24.38, 19.07, 18.30;

¹⁹F NMR (DMSO-d₆, 376 MHz): -135.41, -139.92.

하기 표 1에 실시예 1-35에서 제조한 화합물의 화학구조식을 정리하여 나타내었다.

실시예	구조식	실시예	구조식
1		2
3		4
5		6
7		8
9		10
11		12
13		14
15		16
17		18
19		20
21		22
23		24
25		26
27		28
29		30
31		32
33		34
35		-	-

< 실험예 1> C형 간염 바이러스에 의한 감염 억제 활성 측정

본 발명에 따른 화학식 1로 표시되는 실시예 화합물들의 C형 간염 바이러스에 의한 감염 억제 활성을 측정하기 위하여 하기와 같은 실험을 수행하였다.

12-웰 세포 배양 플레이트(cell culture plate)에 간암 세포주인 huh 7.5.1 세포를 각 웰 당 약 5만 개씩 분주하였다. 분주된 세포는 10% (v/v)의 FBS(Fetal Bovine Serum SH30406.02, Hyclone Co.) 및 1% (v/v)의 항생제(페니실린/스트렙토마이신 용액 SV30010, Hyclone Co.)를 첨가한 DMEM 배양액(둘코스 개량 이글 배양액 12800-017, GIBCO Co.)을 이용하여 37℃의 6.0% 이산화탄소 세포 배양기(CO₂ Incubator 311, Forma Scientific Co, Lnc. USA) 안에서 24시간 동안 배양하여 세포를 플레이트 바닥에 부착시켰다. 그 후, 리포터(reporter)로써 레닐라 루시페라아제 유전자(Renilla luciferase gene)를 가진 C형 간염 바이러스(JFH-5aFlucm4, PLoS One. 2011;6(8): e228808.)를 3시간 동안 분주된 세포에 접종하였다. 3시간의 바이러스 접종이 끝나면, 세포 배양액을 제거하고 본 발명에 따른 실시예 화합물을 각각 1 μM의 농도로 배양액에 첨가하여 만든 새로운 세포 배양액을 각 웰에 주입하고, 37℃의 6.0% 이산화탄소 세포 배양기(CO₂ Incubator 311, Forma Scientific Co, Lnc. USA) 안에서 3일 동안 배양하였다. 상기 플레이트에 부착되어 있는 세포를 인산 완충 용액(PBS, phosphate Buffered Saline)으로 세척하고 100 μL의 1X 간접 분해 버퍼(passive lysis buffer, promega, E1941)를 처리하여 용해시켰다. 용해된 세포액(10 μL)을 레닐라 루시페라아제 분석 시스템(Renilla Luciferase assay system, Promega, E2820)의 레닐라 루시페라아제 분석 시약(50 μL)에 주입하고 혼합하여 루미노미터(Luminometer, GLOMAX 20/20 Luminometer, Promega)에서 루시페라아제 측정(Luciferase measure) 프로그램을 이용하여 10초 동안 발광량(luminescence)을 측정하였다. 이때, 각각의 본 발명에 따른 실시예 화합물을 처리한 처리군 및 무처리군의 발광량을 3회씩 측정하여 그 평균을 비교 분석하였으며, 각 화합물의 농도에 따른 발광량을 시그마 플롯 프로그램(sigma plot program)을 이용하여 최대 50% 유효농도(half maximal effective concentration, EC₅₀)를 계산하여 하기 표 2에 나타냈다.

실시예	HCVcc(2a)
1	-
2	A
3	C
4	A
5	C
6	A
7	C
8	C
9	B
10	B
11	-
12	A
13	-
14	A
15	-
16	-
17	-
18	-
19	-
20	B
21	A
22	-
23	B
24	-
25	-
26	A
27	-
28	-
29	-
30	-
31	-
32	-
33	A
34	A
35	-

(상기 표 2에서,

A 등급은 EC₅₀ 1 pM 초과 1 nM 이하이고;

B 등급은 EC₅₀ 1 nM 초과 100 nM 이하이고;

C 등급은 EC₅₀ 100 nM 초과인 것을 나타낸다).

상기 표 2에 나타낸 바와 같이, 본 발명에 따른 실시예 화합물들은 낮은 농도에서 간암 세포주에 존재하는 C형 간염 바이러스에 의한 감염을 억제하는 것으로 확인되었다. 실시예 2, 4, 6, 9, 10, 12, 14, 20, 21, 23, 26, 33 및 34는 100 nM 이하의 낮은 EC₅₀에서 C형 간염 바이러스에 의한 감염을 억제하였고, 특히, 실시예 2, 4, 6, 12, 14, 21, 26, 33 및 34는 EC₅₀값이 1 nM 이하로 매우 낮은 농도에서도 C형 간염 바이러스에 의한 감염을 우수하게 억제하는 것을 알 수 있었다.

따라서, 본 발명에 따른 실시예 화합물들은 C형 간염 바이러스에 의한 감염을 억제하는 효과가 우수하므로, C형 간염 바이러스에 의해 발병되는 급성 C형 간염, 만성 C형 간염, 간경변 또는 간세포성 암과 같은 간질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.

< 실험예 2> C형 간염 바이러스 복제 억제 활성 측정

본 발명에 따른 화학식 1로 표시되는 실시예 화합물들의 C형 간염 바이러스 에 대한 복제 억제 활성을 측정하기 위하여 하기와 같은 실험을 수행하였다.

12-웰 세포 배양 플레이트에 C형 간염 바이러스의 복제 및 번역과정을 측정할 수 있는 레플리콘(replicon)인 NK/R2AN을 갖는 huh 7.5.1 세포를 각 웰 당 약 5만 개 정도를 분주하였다. 분주된 세포는 최종농도가 10%(v/v)의 FBS(Fetal Bovine Serum SH30406.02, Hyclone Co.), 1%(v/v)의 항생제(페니실린/스트렙토마이신 용액 SV30010, Hyclone Co.) 및 G418(600 μg/mL, Calbiochem)을 첨가한 DMEM 배양액(둘코스 개량 이글 배양액 12800-017, GIBCO Co.)을 이용하여 37℃, 6.0% 이산화탄소 세포 배양기(CO₂ Incubator 311, Forma Scientific Co, Lnc. USA) 안에서 24시간 동안 배양하여 세포를 플레이트 바닥에 부착시켰다. 그 후, 세포 배양액을 제거하고 본 발명에 따른 실시예 화합물을 각각 1 pM 내지 1μM의 농도로 배양액에 첨가하여 만든 새로운 세포 배양액을 각 웰에 주입하고, 37℃의 6.0% 이산화탄소 세포 배양기(CO₂ Incubator 311, Forma Scientific Co, Lnc. USA) 안에서 3일 동안 배양하였다. 상기 플레이트에 부착되어 있는 세포를 인산 완충 용액(PBS, phosphate Buffered Saline)으로 세척하고 100 μL의 1X 간접 분해 버퍼(passive lysis buffer, E1941)를 처리하여 용해시켰다. 용해된 세포액(10 μL)을 레닐라 루시페라아제 분석 시스템(Renilla Luciferase assay system, Promega, E2820)의 레닐라 루시페라아제 분석 시약(50 μL)에 주입하고 혼합하여 루미노미터(Luminometer, GLOMAX 20/20 Luminometer, Promega)로 루시페라아제 측정(Luciferase measure) 프로그램을 이용하여 10초 동안 발광량(luminescence)을 측정하였다. 이때, 각각의 본 발명에 따른 실시예 화합물을 처리한 처리군 및 무처리군의 발광량을 3회씩 측정하여 그 평균을 비교 분석하였으며, 각 화합물의 농도에 따른 발광량을 시그마 플롯 프로그램(sigma plot program)을 이용하여 최대 50% 유효농도(half maximal effective concentration, EC₅₀)을 계산하여 하기 표 3에 나타내었다.

실시예	replicon(1b)
1	B
2	A
3	C
4	A
5	C
6	A
7	C
8	C
9	B
10	A
11	B
12	A
13	B
14	A
15	A
16	C
17	C
18	B
19	A
20	C
21	A
22	B
23	C
24	C
25	B
26	A
27	B
28	C
29	A
30	B
31	A
32	C
33	B
34	A
35	C

(상기 표 3에서,

A 등급은 EC₅₀ 1 pM 초과 1 nM 이하이고;

B 등급은 EC₅₀ 1 nM 초과 100 nM 이하이고;

C 등급은 EC₅₀ 100 nM 초과인 것을 나타낸다).

상기 표 3에 나타낸 바와 같이, 본 발명에 따른 실시예 화합물들이 낮은 농도에서 C형 간염 바이러스의 복제를 억제하는 것으로 확인되었다. 실시예 1, 2, 4, 6, 9-15, 18, 19, 21, 22, 25-27, 29-31, 33 및 34 화합물은 100 nM 이하의 낮은 EC₅₀에서도 C형 간염 바이러스의 복제를 억제하는 것을 확인하였으며, 특히, 실시예 2, 4, 6, 10, 12, 14, 15, 19, 21, 26, 29, 31 및 34 화합물은 EC₅₀값이 1 nM 이하로 매우 낮은 농도에서도 C형 간염 바이러스의 복제를 우수하게 억제하는 것을 알 수 있었다.

따라서, 본 발명에 따른 실시예 화합물들은 C형 간염 바이러스의 복제를 억제하는 효과가 우수하므로, C형 간염 바이러스에 의해 발병되는 급성 C형 간염, 만성 C형 간염, 간경변, 간세포성 암 등의 간질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.

< 제제예 1> 산제의 제조

화학식 1로 표시되는 화합물 2g

유당 1g

상기의 성분을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조하였다.

< 제제예 2> 정제의 제조

화학식 1로 표시되는 화합물 100 ㎎

옥수수전분 100 ㎎

유당 100 ㎎

스테아린산 마그네슘 2 ㎎

상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조하였다.

< 제제예 3> 캡슐제의 제조

화학식 1로 표시되는 화합물 100 ㎎

옥수수전분 100 ㎎

유당 100 ㎎

스테아린산 마그네슘 2 ㎎

상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 캡슐제의 제조방법에 따라서 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.

< 제제예 4> 주사제의 제조

화학식 1로 표시되는 화합물 100 ㎎

만니톨 180 ㎎

Na₂HPO₄ㆍ2H₂O 26 ㎎

증류수 2974 ㎎

통상적인 주사제의 제조방법에 따라, 상기 성분들을 제시된 함량으로 함유시켜 주사제를 제조하였다.

< 제제예 5> 건강식품의 제조

화학식 1로 표시되는 화합물 500ng

비타민 혼합물 적량

비타민 A 아세테이트 70mg

비타민 E 1.0mg

비타민 0.13mg

비타민 B2 0.15mg

비타민 B6 0.5mg

비타민 B12 0.2mg

비타민 C 10mg

비오틴 10mg

니코틴산아미드 1.7mg

엽산 50mg

판토텐산 칼슘 0.5mg

무기질 혼합물 적량

황산제1철 1.75mg

산화아연 0.82mg

탄산마그네슘 25.3mg

제1인산칼륨 15mg

제2인산칼슘 55mg

구연산칼륨 90mg

탄산칼슘 100mg

염화마그네슘 24.8mg

상기의 비타민 및 미네랄 혼합물의 조성비는 비교적 건강식품에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하며, 통상의 건강식품 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 과립을 제조하고, 통상의 방법에 따라 건강식품 조성물 제조에 사용할 수 있다.

< 제제예 6> 건강음료의 제조

화학식 1로 표시되는 화합물 500ng

구연산 1000mg

올리고당 100g

매실농축액 2g

타우린 1g

정제수를 가하여 전체 900ml

통상의 건강 음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 약 1시간 동안 85℃에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관한 다음 건강 음료 조성물 제조에 사용하였다.

상기 조성비는 비교적 기호 음료에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만 수요계층이나, 수요국가, 사용용도 등 지역적, 민족적 기호 도에 따라서 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하다.

Claims

하기 화합물 군으로부터 선택되는 어느 하나인 화합물, 이의 광학 이성질체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염:
(2) 비스(4-((S)-1-((R)-2-((메톡시카보닐)아미노)-2-페닐아세틸)피롤리딘-2-카복스아미도)페닐) 설페이트;
(4) 비스(3-((S)-1-((R)-2-((메톡시카보닐)아미노)-2-페닐아세틸)피롤리딘-2-카복스아미도)페닐) 설페이트;
(6) 비스(4-(2-((S)-1-((R)-2-(메톡시카보닐아미노)-2-페닐아세틸)피롤리딘-2-일)-1H-이미다졸-5-일)페닐) 설페이트;
(10) 비스(5-((S)-1-((R)-2-((메톡시카보닐)아미노)-2-페닐아세틸)피롤리딘-2-카복스아미도)-2-메틸페닐) 설페이트;
(12) 3-((S)-1-((R)-2-((메톡시카보닐)아미노)-2-페닐아세틸)피롤리딘-2-카복스아미도)페닐 (4-((S)-1-((R)-2-((메톡시카보닐)아미노)-2-페닐아세틸)피롤리딘-2-카복스아미도)페닐) 설페이트;
(14) 비스(2-플루오로-5-((S)-1-((R)-2-((메톡시카보닐)아미노)-2-페닐아세틸)피롤리딘-2-카복스아미도)페닐) 설페이트;
(15) 비스(3-(2-((S)-1-((S)-2-(메톡시카보닐아미노)-3-메틸부타노일)피롤리딘-2-일)-1H-이미다졸-5-일)페닐) 설페이트;
(19) 비스(4-(2-((S)-1-((S)-2-(메톡시카보닐아미노)-3-메틸부타노일)피롤리딘-2-일)-1H-이미다졸-5-일)페닐) 설페이트;
(21) 3-(2-((S)-1-((S)-2-(메톡시카보닐아미노)-2-페닐아세틸)피롤리딘-2-일)-1H-이미다졸-5-일)페닐 4-(2-((S)-1-((S)-2-(메톡시카보닐아미노)-2-페닐아세틸)피롤리딘-2-일)-1H-이미다졸-5-일)페닐 설페이트;
(26) 비스(2-플루오로-5-(2-((S)-1-((R)-2-(메톡시카보닐아미노)-2-페닐아세틸)피롤리딘-2-일)-1H-이미다졸-5-일)페닐) 설페이트;
(29) 다이메틸 (2R,2'R)-1,1'-((2S,2'S)-2,2'-(4,4'-설포닐비스(4,1-페닐렌)비스(아자엔다이일))비스(옥소메틸렌)비스(피롤리딘-2,1-다이일))비스(3-메틸-1-옥소부탄-2,1-다이일)다이카바메이트;
(31) 비스(3-(2-((S)-1-((S)-2-(메톡시카보닐아미노)프로파노일)피롤리딘-2-일)-1H-이미다졸-5-일)페닐) 설페이트;
(33) 비스(3-((S)-1-((S)-2-(메톡시카보닐아미노)-3,3-다이메틸부타노일)피롤리딘-2-카복스아미도)페닐) 설페이트; 및
(34) 2-플루오로-3-((S)-1-((R)-2-(메톡시카보닐아미노)-2-페닐아세틸)피롤리딘-2-카복스아미도)페닐 2-플루오로-5-((S)-1-((R)-2-(메톡시카보닐아미노)-2-페닐아세틸)피롤리딘-2-카복스아미도)페닐 설페이트.
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하기 반응식 1에 나타낸 바와 같이,
화학식 2로 표시되는 화합물과 화학식 3으로 표시되는 화합물을 반응시켜 화학식 1로 표시되는 화합물을 제조하는 단계를 포함하는 제1항의 화합물 군으로부터 선택되는 어느 하나인 화합물의 제조방법:
[반응식 1]

(상기 반응식 1에서,
R¹, R², R³, X 및 A는 제1항에 기재된 화합물들의 치환기 범위와 동일하고; 및
PG는 아민 보호기(amine protectiong group)이다).
제5항에 있어서,
상기 화학식 2에서 A가 -O-인 화학식 2로 표시되는 화합물의 유도체 2a는, 하기 반응식 2의,
화학식 4로 표시되는 화합물과 1,1'-설포닐다이이미다졸을 반응시켜 제조되는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 제조방법:
[반응식 2]

(상기 반응식 2에서
X 및 R¹은 제1항에 기재된 화합물들의 치환기 범위와 동일하고;
PG는 아민 보호기(amine protectiong group)이고; 및
화학식 2a는 상기 화학식 2의 유도체이다).
제5항에 있어서,
상기 화학식 2에서 A가 -O-인 화학식 2로 표시되는 화합물의 유도체 2a는, 하기 반응식 3의,
화학식 5로 표시되는 화합물과 화학식 6으로 표시되는 화합물을 반응시켜 제조되는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 제조방법:
[반응식 3]

(상기 반응식 3에서,
X 및 R¹은 제1항에 기재된 화합물들의 치환기 범위와 동일하고;
PG는 아민 보호기(amine protectiong group)이고; 및
화학식 2a는 상기 화학식 2의 유도체이다).
제5항에 있어서,
상기 아민 보호기는 t-부틸옥시카보닐(BOC), 카보벤질옥시(Cbz), 9-플루오레닐메틸옥시카보닐(Fmoc), 아세틸(Ac), 벤조일(Bz), 벤질(Bn), p-메톡시벤질(PMB), 3,4-다이메톡시벤질(DMPM), p-메톡시페닐(PMP), 토실(Ts), 2,2,2-트리클로로에톡시카보닐(Troc), 2-트리메틸실릴에톡시카보닐(Teoc) 및 아릴옥시카보닐(Alloc) 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종인 것을 특징으로 하는 제조방법.
제1항의 화합물 군으로부터 선택되는 어느 하나인 화합물, 이의 광학 이성질체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 C형 간염 바이러스 관련 간질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
제9항에 있어서,
상기 C형 간염 바이러스 관련 간질환은 급성 C형 간염, 만성 C형 간염, 간경변 및 간세포성 암으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상의 간질환인 것을 특징으로 하는 C형 간염 바이러스 관련 간질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
제1항의 화합물 군으로부터 선택되는 어느 하나인 화합물, 이의 광학 이성질체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 C형 간염 바이러스 관련 간질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물.
제11항에 있어서,
상기 C형 간염 바이러스 관련 간질환은 급성 C형 간염, 만성 C형 간염, 간경변 및 간세포성 암으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상의 간질환인 것을 특징으로 하는 C형 간염 바이러스 관련 간질환 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물.