KR101628933B1 - 벤지딘 유도체, 이의 제조방법 및 이를 함유하는 c형 간염 바이러스에 의한 간질환 치료용 약학적 조성물 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 C형 바이러스에 대하여 항바이러스 활성을 갖는 화합물, 이의 광학 이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 이의 제조방법 및 이를 유효성분으로 함유하는 C형 간염 바이러스에 의한 간질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물에 관한 것으로, 본 발명에 따른 벤지딘 유도체는 C형 간염 바이러스에 대한 항바이러스 활성이 우수하고 생체 내에서 뛰어난 약리활성을 나타냄으로써, 이를 유효성분으로 포함하는 약학적 조성물은 C형 간염 바이러스에 의해 발병되는 급성 C형 간염, 만성 C형 간염, 간경변, 간세포성 암과 같은 간질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.

Description

벤지딘 유도체, 이의 제조방법 및 이를 함유하는 C형 간염 바이러스에 의한 간질환 치료용 약학적 조성물{Benzidine derivative, preparation method thereof and pharmaceutical composition for treating liver disease related with Hepatitis C virus containing the same}
본 발명은 C형 바이러스에 대하여 항바이러스 활성을 갖는 화합물, 이의 광학 이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 이의 제조방법 및 이를 유효성분으로 함유하는 C형 간염 바이러스에 의한 간질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물에 관한 것이다.
C형 간염 바이러스(Hepatitis C virus, HCV)는 플라비바이러스과(Flaviviridae)의 헤파시바이러스 속(hepacivirus genus)으로 분류되는 RNA 바이러스로서, 1989년에 미국에서 발견되었다.
상기 C형 간염 바이러스(HCV)에 의한 감염은 수혈 및 지역 특이적 전염(community-acquired)에 의해 발생되고, 신장 투석에 의해 약 70% 정도가 감염되는 것으로 보고되었다. 일단 C형 간염 바이러스에 감염이 되면 약 20% 정도가 5년 내에 간경화를 수반한 급성 간염을 일으키게 되고 간암으로 전이되는 것으로 알려져 있다(Davis et al, New. Engl. J. Med., 321 (1989) 1501 / Alter et al, Leonard et al., Current Pespective in Hepatology, (1989) p.83). 이러한 높은 만성 감염률은 RNA 바이러스에서 보기 드문 일로서 C형 간염 바이러스가 높은 비율의 간암을 일으키는 매개체임을 보여주는 증거이다. 최근에는 모든 혈액에 대해서 C형 간염 바이러스 검사가 잘 이루어지고 있어 수혈로 인한 감염은 현저히 줄어들었지만, 지역 특이적 감염은 이에 대한 관리가 효과적으로 이루어지지 않아 그 감염률이 높으므로 전 세계적으로 중요한 문제로 대두되고 있다.
한편, 역학적으로 볼 때 C형 간염 바이러스는 B형 간염 바이러스(HBV)와 달리 전 세계에 골고루 분포되어 있으며 전 세계 인구의 1.5% 내지 2%가 감염된 것으로 보고되고 있다. C형 간염 바이러스에 감염되면 만성 간염으로 진행되는 것이 특징인데 간경화 및 간암으로 전이되는 확률이 B형 간염보다 상당히 높다. C형 간염 바이러스는 분류학적으로도 B형 간염 바이러스와는 전혀 다른 바이러스과에 속하기 때문에 B형 간염 바이러스 백신으로는 예방이 불가능하다. 또한, 현재 C형 간염 바이러스 감염에 대한 치료제로, 인터페론과 항바이러스제인 리바비린(ribavirin) 병용요법이 사용되고 있으나(Hayashi N., et al., J. Gastroenterol., 41,(2006), 17), 유전형에 따라 반응이 현저히 다르고 효과가 극히 미약하며, 병용요법에 사용되는 두 약제의 부작용이 클 뿐만 아니라 고가이다. 따라서, 보다 효과적인 새로운 C형 간염 바이러스제의 개발이 요구되고 있다.
상기의 문제를 극복하기 위하여 연구된 현재까지 C형 간염 바이러스제는 C형 간염 바이러스의 생애주기의 특정 단계를 차단함으로써 C형 간염 바이러스제의 약리활성이 발현되는 특징을 갖는다.
C형 간염 바이러스의 생애주기는 다음와 같다. 숙주 세포(Host cell)의 표면에 부착된 HCV는 엔도사이토시스(endocytosis)에 의해 숙주 세포 내에 침입한다. 이후, 숙주 세포 내에 침입한 C형 간염 바이러스 게놈 RNA로부터 약 3천 개의 아미노산 잔기로 구성된 전구체 단백질이 생성된다. C형 간염 바이러스 게놈 또는 숙주 세포의 시그널 펩티다아제(signal peptidase)로 인코딩된(encoded) NS3 및 NS4 프로테아제와 함께 반응하여 캡시드 단백질(capsid protein), 엔벨로프 단백질(envelope protein), NS3 및 NS4 프로테아제, NS 5B RNA 중합효소(Polymerase) 같은 약 10종의 바이러스 단백질이 생성된다. NS 2B 중합효소로 복제된 게놈 RNA는 a-글루코시다아제(a-glucosidase)로 중개된 캡시드 단백질 및 엔벨로프 단백질과 결합하여 바이러스 입자가 된다. C형 간염 바이러스 입자는 숙주 세포로부터 배출된다(Manns MP., et al., Nat. Rev. Drug. Discov., 6,(2007), 991).
상기의 C형 간염 바이러스 생애주기의 특정 단계를 차단함으로써 C형 간염 바이러스 억제활성을 나타내는 약제는 HCV 생애주기에 근거하여 RNA 중합효소 억제제-유형, 프로테아제 억제제-유형, a-글루코시다아제 억제제-유형 및 기타 유형으로 분류된다. 예를 들면, MK-7009(Merck)과 R7128(Pharmasset/Roche) 등의 RNA 중합효소 억제제 유형은 임상시험 1상에 있고, VCH-759(Virochem), R1626(Roche), 발로피시타빈(valopicitabine, Idenix)는 임상시험 2상에 있다. 또한, 프로테아제 억제제 유형 중 ITMN-191(R-7227, InterMune/Roche)는 임상시험 1상에 있고, TMC435350(Medivir/Tibotec)은 임상시험 2상이며, 보세프레비어(Boceprevir(SCH 503034), Schering)과 텔라프레비어(Telaprevir, Vertex)는 임상시험 3상에 있다. 아울러, 사이클로필린 억제제 유형인 DEBIO-025(DEBIO)와 글루코시다아제 I 억제제 유형인 셀고시비어(celgosivir, MIGEBIX)는 임상시험 2상에 있다(Kronenberger B., et al., Clin Liver Dis., 12,(2008), 529).
그러나, 임상시험이 진행되고 있는 상기 C형 간염 바이러스제에 대하여 내성을 갖는 바이러스의 출현이 이미 보고되고 있으므로, 종래에 알려진 C형 간염 바이러스제와는 다른 기작으로 C형 간염 바이러스 억제효과를 나타내는 새로운 C형 간염 바이러스제의 개발이 절실히 요구되고 있다.
이에, 본 발명자들은 세포독성이 적고, C형 간염 바이러스에 대한 항바이러스 활성이 우수한 C형 간염 바이러스제에 관하여 연구하던 중, 벤지딘 유도체가 C형 간염 바이러스에 대한 항바이러스 활성이 우수하고, 세포독성이 없음을 확인하고 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 목적은 C형 간염 바이러스에 대한 항바이러스 활성을 갖는 화합물, 이의 광학 이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 상기 화합물의 제조방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 상기 화합물을 유효성분으로 함유하는 C형 간염 바이러스에 의한 간질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 상기 화합물을 유효성분으로 함유하는 C형 간염 바이러스에 의한 간질환 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위하여,
하기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 광학 이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 제공한다.
[화학식 1]
Figure 112014047142973-pat00001
상기 화학식 1에서,
R1 및 R2는 독립적으로 -H, -OH, 할로겐, C1 -10의 직쇄 또는 측쇄 알킬, C1 -10의 직쇄 또는 측쇄 알콕시, 비치환 또는 치환된 C6 -10의 아릴, 또는 -NHC(=O)R12이고,
여기서, 상기 치환된 C6 -10의 아릴은 C1 -5의 직쇄 또는 측쇄 알킬, C1 -5의 직쇄 또는 측쇄 알콕시 및 할로겐으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기가 치환될 수 있고,
또한, 상기 R12는 -H, 또는 C1 -5의 직쇄 또는 측쇄 알콕시이고;
R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, 및 R10은 독립적으로 -H, 할로겐, 비치환 또는 하나 이상의 할로겐이 치환된 C1 -5의 직쇄 또는 측쇄 알킬이고,
여기서, 상기 R4와 R7, 또는 R6과 R9는 이들이 함께 연결되어 있는 탄소 원자들과 함께 C5 -6의 고리를 형성할 수 있고, 상기 C5 -6의 고리에는 할로겐, C1 -5 직쇄 또는 측쇄 알킬 및 =O로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기가 치환될 수 있고;
R11은 -H, -OH, 할로겐, C1 -10의 직쇄 또는 측쇄 알킬, C1 -10의 직쇄 또는 측쇄 알콕시, 또는 =O이고;
Figure 112014047142973-pat00002
는 단일 또는 이중결합이고;
a는 0-3의 정수이다.
또한, 본 발명은 하기 반응식 1에 나타난 바와 같이,
화학식 2로 표시되는 화합물과 화학식 3으로 표시되는 화합물을 유기용매에서 반응시켜 화학식 4로 표시되는 화합물을 제조하는 단계(단계 1);
상기 단계 1에서 제조된 화학식 4로 표시되는 화합물의 보호기를 제거하여 화학식 5로 표시되는 화합물을 제조하는 단계(단계 2); 및
상기 단계 2에서 제조된 화학식 5로 표시되는 화합물과 화학식 6으로 표시되는 화합물을 반응시켜 화학식 1로 표시되는 화합물을 제조하는 단계(단계 3);를 포함하는 것을 특징으로 하는 상기 화학식 1로 표시되는 화합물의 제조방법을 제공한다.
[반응식 1]
Figure 112014047142973-pat00003
(상기 반응식 1에서,
R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10, R11, a, 및
Figure 112014047142973-pat00004
는 상기 화학식 1에서 정의한 바와 같고;
PG는 보호기이다).
나아가, 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 광학 이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 C형 간염 바이러스에 의한 간질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 광학 이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 C형 간염 바이러스에 의한 간질환 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공한다.
본 발명에 따른 벤지딘 유도체는 C형 간염 바이러스에 대한 항복제 바이러스 활성을 포함하는 뛰어난 항바이러스 활성을 나타내고, 세포에 대한 독성이 없으며, 생체 내에서 우수한 약리활성을 나타내고 심장 및 혈장에서도 독성이 없음이 확인됨으로써, 이를 유효성분으로 포함하는 약학적 조성물은 C형 간염 바이러스에 의해 발병되는 급성 C형 간염, 만성 C형 간염, 간경변, 간세포성 암과 같은 간질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.
이하, 본 발명을 상세히 설명한다.
본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 광학 이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 제공한다.
[화학식 1]
Figure 112014047142973-pat00005
상기 화학식 1에서,
R1 및 R2는 독립적으로 -H, -OH, 할로겐, C1 -10의 직쇄 또는 측쇄 알킬, C1 -10의 직쇄 또는 측쇄 알콕시, 비치환 또는 치환된 C6 -10의 아릴, 또는 -NHC(=O)R12이고,
여기서, 상기 치환된 C6 -10의 아릴은 C1 -5의 직쇄 또는 측쇄 알킬, C1 -5의 직쇄 또는 측쇄 알콕시 및 할로겐으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기가 치환될 수 있고,
또한, 상기 R12는 -H, 또는 C1 -5의 직쇄 또는 측쇄 알콕시이고;
R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, 및 R10은 독립적으로 -H, 할로겐, 비치환 또는 하나 이상의 할로겐이 치환된 C1 -5의 직쇄 또는 측쇄 알킬이고,
여기서, 상기 R4와 R7, 또는 R6과 R9는 이들이 함께 연결되어 있는 탄소 원자들과 함께 C5 -6의 고리를 형성할 수 있고, 상기 C5 -6의 고리에는 할로겐, C1 -5 직쇄 또는 측쇄 알킬 및 =O로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기가 치환될 수 있고;
R11은 -H, -OH, 할로겐, C1 -10의 직쇄 또는 측쇄 알킬, C1 -10의 직쇄 또는 측쇄 알콕시, 또는 =O이고;
Figure 112014047142973-pat00006
는 단일 또는 이중결합이고;
a는 0-3의 정수이다.
바람직하게는,
R1 및 R2는 독립적으로 -H, -OH, 할로겐, C1 -5의 직쇄 또는 측쇄 알킬, C1 -5의 직쇄 또는 측쇄 알콕시, 비치환 또는 치환된 C6 -8의 아릴, 또는 -NHC(=O)R12이고,
여기서, 상기 치환된 C6 -8의 아릴은 C1 -3의 직쇄 또는 측쇄 알킬, C1 -3의 직쇄 또는 측쇄 알콕시 및 할로겐으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기가 치환될 수 있고,
또한, 상기 R12는 -H, 또는 C1 -3의 직쇄 또는 측쇄 알콕시이고;
R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, 및 R10은 독립적으로 -H, 할로겐, 비치환 또는 하나 이상의 할로겐이 치환된 C1 -3의 직쇄 또는 측쇄 알킬이고,
여기서, 상기 R4와 R7, 또는 R6과 R9는 이들이 함께 연결되어 있는 탄소 원자들과 함께 C5 -6의 고리를 형성할 수 있고, 상기 C5 -6의 고리에는 할로겐, C1 -3 직쇄 또는 측쇄 알킬 및 =O로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기가 치환될 수 있고;
R11은 -H, -OH, 할로겐, C1 -5의 직쇄 또는 측쇄 알킬, C1 -5의 직쇄 또는 측쇄 알콕시, 또는 =O이고;
Figure 112014047142973-pat00007
는 단일 또는 이중결합이고;
a는 0-2의 정수이다.
더욱 바람직하게는,
R1 및 R2는 독립적으로 페닐, 또는 메톡시카보닐아미노이고;
R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9 및 R10은 독립적으로 -H, -F, -Cl, -Br, -CF3, 또는 메틸이고,
여기서, 상기 R4와 R7, 또는 R6과 R9는 이들이 함께 연결되어 있는 탄소 원자들과 함께 C5의 고리를 형성할 수 있고, 상기 C5의 고리에는 -F, =O 및 메틸로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기가 치환될 수 있고;
R11은 -H, 또는 =O이고;
Figure 112014047142973-pat00008
는 단일 또는 이중결합이고;
a는 0-1의 정수이다.
상기 화학식 1로 표시되는 화합물은 하기의 화합물 군으로부터 선택되는 어느 하나일 수 있다.
(1) 다이메틸 ((1R,1'R)-((2S,2'S)-2,2'-(((3,3'-다이메틸-[1,1'-바이페닐]-4,4'-다이일)비스(아잔다이일))비스(카보닐))비스(피롤리딘-2,1-다이일))비스(2-옥소-1-페닐에탄-2,1-다이일))다이카바메이트;
(2) 다이메틸 ((1R,1'R)-((2S,2'S)-2,2'-(((2,2'-비스(트리플루오로메틸)-[1,1'-바이페닐]-4,4'-다이일)비스(아잔다이일))비스(카보닐))비스(피롤리딘-2,1-다이일))비스(2-옥소-1-페닐에탄-2,1-다이일))다이카바메이트;
(3) 다이메틸 ((1R,1'R)-((2S,2'S)-2,2'-(((2,2'-다이메틸-[1,1'-바이페닐]-4,4'-다이일)비스(아잔다이일))비스(카보닐))비스(피롤리딘-2,1-다이일))비스(2-옥소-1-페닐에탄-2,1-다이일))다이카바메이트;
(4) 다이메틸 ((1R,1'R)-((2S,2'S)-2,2'-(((9H-플루오렌-2,7-다이일)비스(아잔다이일))비스(카보닐))비스(피롤리딘-2,1-다이일))비스(2-옥소-1-페닐에탄-2,1-다이일))다이카바메이트;
(5) 다이메틸 ((1R,1'R)-((2S,2'S)-2,2'-(((2,2'-다이플루오로-[1,1'-바이페닐]-4,4'-다이일)비스(아잔다이일))비스(카보닐))비스(피롤리딘-2,1-다이일))비스(2-옥소-1-페닐에탄-2,1-다이일))다이카바메이트;
(6) 다이메틸 ((1R,1'R)-((2S,2'S)-2,2'-(((2,2'-다이클로로-[1,1'-바이페닐]-4,4'-다이일)비스(아잔다이일))비스(카보닐))비스(피롤리딘-2,1-다이일))비스(2-옥소-1-페닐에탄-2,1-다이일))다이카바메이트;
(7) 다이메틸 ((1R,1'R)-((2S,2'S)-2,2'-(((2,2'-다이브로모-[1,1'-바이페닐]-4,4'-다이일)비스(아잔다이일))비스(카보닐))비스(피롤리딘-2,1-다이일))비스(2-옥소-1-페닐에탄-2,1-다이일))다이카바메이트;
(8) 다이메틸 ((1R,1'R)-((2R,2'R)-2,2'-(([1,1'-바이페닐]-4,4'-다이일비스(아잔다이일))비스(카보닐))비스(피롤리딘-2,1-다이일))비스(2-옥소-1-페닐에탄-2,1-다이일))다이카바메이트;
(9) 다이메틸 ((1R,1'R)-((5S,5'S)-5,5'-(([1,1'-바이페닐]-4,4'-다이일비스(아잔다이일))비스(카보닐))비스(3-옥소피롤리딘-5,1-다이일))비스(2-옥소-1-페닐에탄-2,1-다이일))다이카바메이트;
(10) 다이메틸 ((1R,1'R)-((2S,2'S)-2,2'-(([1,1'-바이페닐]-4,4'-다이일비스(아잔다이일))비스(카보닐))비스(피페리딘-2,1-다이일))비스(2-옥소-1-페닐에탄-2,1-다이일))다이카바메이트;
(11) 다이메틸 ((1R,1'R)-((2R,2'R)-2,2'-(([1,1'-바이페닐]-4,4'-다이일비스(아잔다이일))비스(카보닐))비스(피페리딘-2,1-다이일))비스(2-옥소-1-페닐에탄-2,1-다이일))다이카바메이트;
(12) 다이메틸 ((1R,1'R)-((2S,2'S)-2,2'-(([1,1'-바이페닐]-4,4'-다이일비스(아잔다이일))비스(카보닐))비스(2-메틸피롤리딘-2,1-다이일))비스(2-옥소-1-페닐에탄-2,1-다이일))다이카바메이트;
(13) 다이메틸 ((1R,1'R)-((2S,2'S)-2,2'-(((9,9-다이플루오로-9H-플루오렌-2,7-다이일)비스(아잔다이일))비스(카보닐))비스(피롤리딘-2,1-다이일))비스(2-옥소-1-페닐에탄-2,1-디일))다이카바메이트;
(14) 다이메틸 ((1R,1'R)-((2S,2'S)-2,2'-(((9,9-다이메틸-9H-플루오렌-2,7-다이일)비스(아잔다이일))비스(카보닐))비스(피롤리딘-2,1-다이일))비스(2-옥소-1-페닐에탄-2,1-다이일))다이카바메이트; 및
(15) 다이메틸 ((1R,1'R)-((2S,2'S)-2,2'-(((9-옥소-9H-플루오렌-2,7-다이일)비스(아잔다이일))비스(카보닐))비스(피롤리딘-2,1-다이일))비스(2-옥소-1-페닐에탄-2,1-다이일))다이카바메이트.
본 발명에 따른 화학식 1로 표시되는 화합물는 약학적으로 허용가능한 염의 형태로 사용할 수 있으며, 염으로는 약학적으로 허용가능한 유리산(free acid)에 의해 형성된 산 부가염이 유용하다. 산 부가염은 염산, 질산, 인산, 황산, 브롬화수소산, 요드화수소산, 아질산 또는 아인산과 같은 무기산류와 지방족 모노 및 다이카르복실레이트, 페닐-치환된 알카노에이트, 하이드록시 알카노에이트 및 알칸디오에이트, 방향족 산류, 지방족 및 방향족 설폰산류와 같은 무독성 유기산, 아세트산, 안식향산, 구연산, 젖산, 말레인산, 글루콘산, 메탄설폰산, 4-톨루엔설폰산, 주석산, 푸마르산과 같은 유기산으로부터 얻는다. 이러한 약학적으로 무독한 염류로는 설페이트, 피로설페이트, 바이설페이트, 설파이트, 바이설파이트, 나이트레이트, 포스페이트, 모노하이드로겐 포스페이트, 다이하이드로겐 포스페이트, 메타포스페이트, 피로포스페이트 클로라이드, 브로마이드, 아이오다이드, 플루오라이드, 아세테이트, 프로피오네이트, 데카노에이트, 카프릴레이트, 아크릴레이트, 포메이트, 이소부티레이트, 카프레이트, 헵타노에이트, 프로피올레이트, 옥살레이트, 말로네이트, 석시네이트, 수베레이트, 세바케이트, 푸마레이트, 말리에이트, 부틴-1,4-디오에이트, 헥산-1,6-디오에이트, 벤조에이트, 클로로벤조에이트, 메틸벤조에이트, 다이나이트로 벤조에이트, 하이드록시벤조에이트, 메톡시벤조에이트, 프탈레이트, 테레프탈레이트, 벤젠설포네이트, 톨루엔설포네이트, 클로로벤젠설포네이트, 크실렌설포네이트, 페닐아세테이트, 페닐프로피오네이트, 페닐부티레이트, 시트레이트, 락테이트, 하이드록시부티레이트, 글리콜레이트, 말레이트, 타트레이트, 메탄설포네이트, 프로판설포네이트, 나프탈렌-1-설포네이트, 나프탈렌-2-설포네이트, 만델레이트 등을 포함한다.
본 발명에 따른 산 부가염은 통상의 방법, 예를 들면, 화학식 1로 표시되는 화합물을 유기용매, 예를 들면 메탄올, 에탄올, 아세톤, 메틸렌클로라이드, 아세토니트릴 등에 녹이고 유기산 또는 무기산을 가하여 생성된 침전물을 여과, 건조하여 제조되거나, 용매와 과량의 산을 감압 증류한 후 건조하거나 유기용매 하에서 결정화시켜셔 제조할 수 있다.
또한, 염기를 사용하여 약학적으로 허용가능한 금속염을 만들 수 있다. 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속 염은 예를 들면 화합물을 과량의 알칼리 금속 수산화물 또는 알칼리 토금속 수산화물 용액 중에 용해하고, 비용해 화합물 염을 여과하고, 여액을 증발, 건조시켜 얻는다. 이때, 금속염으로는 나트륨, 칼륨 또는 칼슘염을 제조하는 것이 제약상 적합하다. 또한, 이에 대응하는 은 염은 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속 염을 적당한 은 염(예, 질산은)과 반응시켜 얻는다.
본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 화합물 및 이의 약학적으로 허용가능한 염뿐만 아니라, 이로부터 제조될 수 있는 가능한 용매화물, 수화물, 광학 이성질체 등을 모두 포함한다.
본 발명에 따른 상기 화학식 1로 표시되는 화합물은 C형 간염 바이러스에 대한 항바이러스 활성이 우수하므로, 이를 유효성분으로 포함하는 약학적 조성물은 C형 간염 바이러스에 의해 발병되는 급성 C형 간염, 만성 C형 간염, 간경변, 간세포성 암과 같은 간질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.
또한, 본 발명은 하기 반응식 1에 나타난 바와 같이,
화학식 2로 표시되는 화합물과 화학식 3으로 표시되는 화합물을 유기용매에서 반응시켜 화학식 4로 표시되는 화합물을 제조하는 단계(단계 1);
상기 단계 1에서 제조된 화학식 4로 표시되는 화합물의 보호기를 제거하여 화학식 5로 표시되는 화합물을 제조하는 단계(단계 2); 및
상기 단계 2에서 제조된 화학식 5로 표시되는 화합물과 화학식 6으로 표시되는 화합물을 반응시켜 화학식 1로 표시되는 화합물을 제조하는 단계(단계 3);를 포함하는 상기 화학식 1로 표시되는 화합물의 제조방법을 제공한다.
[반응식 1]
Figure 112014047142973-pat00009
(상기 반응식 1에서,
R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10, R11, a, 및
Figure 112014047142973-pat00010
는 상기 화학식 1에서 정의한 바와 같고;
PG는 보호기이다).
이하, 본 발명에 따른 화학식 1로 표시되는 화합물의 제조방법을 단계별로 상세히 설명한다.
본 발명에 따른 화학식 1로 표시되는 화합물의 제조방법에 있어서, 상기 단계 1은 화학식 2로 표시되는 화합물과 화학식 3으로 표시되는 화합물을 아마이드화제(amide reagent)와 함께 유기용매에서 반응시켜 화학식 4로 표시되는 화합물을 제조하는 단계이며, 보다 구체적으로는, 아마이드화제 존재하에서 화학식 2로 표시되는 화합물의 아민기와 화학식 3으로 표시되는 화합물의 카르복실산기의 아마이드화 반응을 수행하여 커플링 생성물인 화학식 4로 표시되는 화합물을 제조하는 단계이다.
이때, 상기 사용 가능한 아마이드화제(amide reagent)는 다이이소프로필에틸아민(DIPEA), 트라이에틸아민(TEA) 또는 다이메틸아미노피리딘(DMAP)와 함께 벤조트리아졸-1-일-옥시-트리스(다이메틸아미노)-포스포니움헥사플루오로포스페이트(Py-BOP), O-벤조트리아졸-N,N,N,N-테트라메틸-유로니움-헥사플루오로-포스페이트(HBTU), 2-(7-아자-1H-벤조트리아졸-1-일)-1,1,3,3-테트라메틸유로니움헥사플루오로포스페이트(HATU), 하이드록시벤조트리아졸(HOBt), 다이사이클로헥실카르보디이미드(DCC), 1-에틸-3-(3-다이메틸아미노프로필)카르보다이이미드(EDC), 카르보닐다이이미다졸(CDI) 등을 사용할 수 있으며, 바람직하게는 1-에틸-3-(3-다이메틸아미노프로필)카르보다이이미드(EDC)를 사용할 수 있다.
또한, 상기 유기용매는 메탄올, 다이메틸포름아마이드, 테트라하이드로퓨란, 다이클로로메탄, 톨루엔 등을 단독으로 또한 혼합하여 사용할 수 있고, 바람직하게는 다이클로로메탄을 사용할 수 있다.
나아가, 반응온도는 0℃에서 용매의 비등점 사이에서 수행하는 것이 바람직하고, 반응시간은 특별한 제약은 없으나, 0.5-10시간 동안 반응하는 것이 바람직하다.
본 발명에 따른 화학식 1로 표시되는 화합물의 제조방법에 있어서, 상기 단계 2는 상기 단계 1에서 제조된 화학식 4로 표시되는 화합물의 보호기를 제거하여 화학식 5로 표시되는 화합물을 제조하는 단계이며, 보다 구체적으로는 상기 단계 1에서 제조된 화학식 4로 표시되는 화합물에 포함되어 있는 아민 보호기(PG)를 탈보호화제를 이용하여 탈보호화 반응시킴으로써 아민 보호기가 탈보호화된 화학식 5로 표시되는 화합물을 제조하는 단계이다.
이때, 상기 화학식 3으로 표시되는 화합물에 포함되어 있는 아민 보호기(PG)로는 t-부톡시카보닐(Boc), 9H-플로렌-9-일메톡시카보닐(Fmoc), 트라이틸(trityl), 벤질, 클로로아세틸, 벤질옥시카보닐, p-메톡시벤질옥시카보닐, 포밀, 트라이플루오로아세틸, p-톨루엔술포닐, 벤젠술포닐, 메탄술포닐, p-니트로벤질옥시카보닐, 2,2,2-트라이클로로에톡시카보닐, 알릴옥시카보닐(Alloc) 등을 사용할 수 있으며, 바람직하게는 t-부톡시카보닐(Boc)을 사용할 수 있다.
또한, 본 발명에 따른 상기 단계 2의 탈보호화 조건은 보호화된 보호기에 따라 통상적으로 사용되는 비보호화 조건을 사용할 수 있다.
나아가, 반응온도는 0℃에서 용매의 비등점 사이에서 수행하는 것이 바람직하고, 반응시간은 특별한 제약은 없으나, 0.5-10시간 동안 반응하는 것이 바람직하다.
본 발명에 따른 화학식 1로 표시되는 화합물의 제조방법에 있어서, 상기 단계 3은 상기 단계 2에서 제조된 화학식 5로 표시되는 화합물과 화학식 6으로 표시되는 화합물을 아마이드화제와 함께 반응시켜 화학식 1로 표시되는 화합물을 제조하는 단계이며, 보다 구체적으로는, 아마이드화제 존재 하에서 상기 단계 2에서 탈보호화된 화학식 5로 표시되는 화합물의 아민기와 화학식 6으로 표시되는 카르복실산기의 아마이드화 반응을 수행하여 화학식 1로 표시되는 화합물을 제조하는 단계이다.
이때, 상기 사용 가능한 아마이드화제(amide reagent)는 다이이소프로필에틸아민(DIPEA), 트라이에틸아민(TEA) 또는 다이메틸아미노피리딘(DMAP)와 함께 벤조트리아졸-1-일-옥시-트리스(다이메틸아미노)-포스포니움헥사플루오로포스페이트(Py-BOP), O-벤조트리아졸-N,N,N,N-테트라메틸-유로니움-헥사플루오로-포스페이트(HBTU), 2-(7-아자-1H-벤조트리아졸-1-일)-1,1,3,3-테트라메틸유로니움헥사플루오로포스페이트(HATU), 하이드록시벤조트리아졸(HOBt), 다이사이클로헥실카르보디이미드(DCC), 1-에틸-3-(3-다이메틸아미노프로필)카르보다이이미드(EDC), 카르보닐다이이미다졸(CDI) 등을 사용할 수 있으며, 바람직하게는 1-에틸-3-(3-다이메틸아미노프로필)카르보다이이미드(EDC)를 사용할 수 있다.
또한, 상기 유기용매는 메탄올, 다이메틸포름아마이드, 테트라하이드로퓨란, 다이클로로메탄, 톨루엔 등을 단독으로 또한 혼합하여 사용할 수 있고, 바람직하게는 다이클로로메탄을 사용할 수 있다.
나아가, 반응온도는 0℃에서 용매의 비등점 사이에서 수행하는 것이 바람직하고, 반응시간은 특별한 제약은 없으나, 0.5-10시간 동안 반응하는 것이 바람직하다.
또한, 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 광학 이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 C형 간염 바이러스에 의한 간질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
본 발명에 따른 약학적 조성물에 있어서, 상기 C형 간염 바이러스에 의한 간질환은 급성 C형 간염, 만성 C형 간염, 간경변, 간세포성 암 등을 들 수 있다.
이에, 본 발명에 따른 화학식 1로 표시되는 화합물의 항 C형 바이러스 활성을 평가하였다. 구체적으로, 발광 효소 유전자를 포함하는 C형 간염 바이러스를 접종한 간암 세포에 본 발명에 따른 화학식 1의 화합물을 1μM의 농도로 처리한 결과, C형 간염 바이러스는 낮은 농도의 화학식 1로 표시되는 화합물에 의해 억제되는 것으로 나타났다(실험예 1 참조).
또한, 복제된 C형 간염 바이러스에 본 발명에 따른 화학식 1로 표시되는 화합물을 처리한 실험에서 항바이러스 활성을 나타내는 EC50값이 낮은 농도임이 확인되었으며, 특히 실시예 2, 3, 4, 5, 6, 7, 9, 13, 14 및 15에서 제조된 화합물은 각각 매우 낮은 EC50 값을 갖는 것으로 확인되었다(실험예 2 참조). 이로부터 본 발명에 따른 화학식 1로 표시되는 화합물은 C형 간염 바이러스에 대한 항바이러스 활성이 우수한 것을 알 수 있다.
구체적으로, 본 발명에 따른 화학식 1로 표시되는 화합물은 바이러스의 RNA 복제(Replication)에 필요한 인자로 알려진 NS5A(Nonstructural protein 5A)를 타겟(target)으로 작용한다. 상기 NS5A는 HCV RNA 복제(replication)에 관여하는 인산화 형태의 56 kDa의 바이러스 내의 단백질로서, 숙주세포 멤브린에 접합을 촉매하는 양친매성 알파 헬릭스(amphipathic alpha helix)구조를 가지고 또한 바이러스 RNA 복제, 아연(zinc) 결합 모티프(Cys 39, 57, 59 및 80), PI3K, PKR 및 NS5B와의 결합, 및 바이러스 조합 역할을 담당하는 1 내지 3의 도메인으로 구성되어 있다.
기존의 NS5A로 알려진 억제제로는 ACH-2928, AZD-7295, PPI-461, BMS 824393, GS-5885 및 Vertex 등이 있다.
상기 NS5A는 독특한 아연-결합 위치(zinc binding site)를 가지고 있기 때문에 상기 위치에 본 발명에 따른 화학식 1로 표시되는 화합물이 결합하여 NS5A의 저해제로서의 역할을 함으로써 C형 간염 바이러스에 대한 항바이러스 활성을 나타낼 것으로 예상되며, 앞으로 추가적인 연구가 더욱 진행되어야 하는 필요성이 있다.
나아가, 본 발명에 따른 실시예 1 내지 실시예 12의 화합물의 세포독성을 평가한 결과, 1μM의 농도로 처리한 경우 세포독성이 없는 것으로 확인되었다. 이로부터, 본 발명에 따른 화학식 1로 표시되는 화합물은 세포독성이 낮은 것을 알 수 있다(실험예 3 참조).
따라서, 본 발명에 따른 화학식 1로 표시되는 화합물은 C형 간염 바이러스에 대한 항바이러스 활성이 우수하고, 세포 독성이 없으므로 이를 유효성분으로 함유하는 약학적 조성물은 C형 간염 바이러스에 의하여 발병하는 급성 C형 간염, 만성 C형 간염, 간경변, 간세포성 암과 같은 간질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물을 의약품으로 사용하는 경우, 상기 화학식 1로 표시되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 약학적 조성물은 임상투여 시에 다양한 하기의 경구 또는 비경구 투여 형태로 제제화되어 투여될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
경구 투여용 제형으로는 예를 들면 정제, 환제, 경/연질 캅셀제, 액제, 현탁제, 유화제, 시럽제, 과립제, 엘릭시르제, 트로키제 등이 있는데, 이들 제형은 유효성분 이외에 희석제(예: 락토즈, 덱스트로즈, 수크로즈, 만니톨, 솔비톨, 셀룰로즈 및/ 또는 글리신), 활택제(예: 실리카, 탈크, 스테아르산 또는 그의 마그네슘염 또는 칼슘염 및/또는 폴리에틸렌 글리콜)를 함유하고 있다. 또한, 정제는 마그네슘 알루미늄 실리케이트, 전분 페이스트, 젤라틴, 메틸셀룰로즈, 나트륨 카복시메틸셀룰로즈 및/또는 폴리비닐피롤리딘과 같은 결합제를 함유할 수 있으며, 경우에 따라 전분, 한천, 알긴산 또는 그의 나트륨염과 같은 붕해제 또는 비등 혼합물 및/또는 흡수제, 착색제, 향미제 및 감미제를 함유할 수 있다.
상기 화학식 1로 표시되는 화합물을 유효성분으로 하는 약학적 조성물은 비경구 투여할 수 있으며, 비경구 투여는 피하주사, 정맥주사, 근육 내 주사 또는 흉부 내 주사를 주입하는 방법에 의한다.
이때, 비경구 투여용 제형으로 제제화하기 위하여 상기 화학식 1로 표시되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 안정제 또는 완충제와 함께 물에 혼합하여 용액 또는 현탁액으로 제조하고, 이를 앰플 또는 바이알 단위 투여형으로 제조할 수 있다. 상기 조성물은 멸균되고/되거나 방부제, 안정화제, 수화제 또는 유화 촉진제, 삼투압 조절을 위한 염 및/또는 완충제 등의 보조제, 및 기타 치료적으로 유용한 물질을 함유할 수 있으며, 통상적인 방법인 혼합, 과립화 또는 코팅 방법에 따라 제제화할 수 있다.
상기 화학식 1로 표시되는 화합물을 유효성분으로 함유하는 약학적 조성물의 인체에 대한 투여량은 환자의 나이, 몸무게, 성별, 투여형태, 건강상태 및 질환 정도에 따라 달라질 수 있으며, 바람직하게는 0.01 내지 200 mg/kg/일의 양으로 의사 또는 약사의 판단에 따라 일정시간 간격을 1일 수회, 바람직하게는 1일 1회 내지 3회로 분할하여 경구 또는 비경구적 경로를 통해 투여할 수 있다.
또한, 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 광학 이성질체, 또는 이의 식품학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 C형 간염 바이러스에 의한 간질환 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공한다.
본 발명에 따른 건강기능식품 조성물에 있어서, 상기 C형 간염 바이러스에 의한 간질환으로는 급성 C형 간염, 만성 C형 간염, 간경변, 간세포성 암 등을 들 수 있다.
본 발명에 따른 건강기능식품 조성물은 C형 간염 바이러스에 의하여 발병되는 간질환의 예방 또는 개선을 목적으로 상기 화학식 1로 표시되는 화합물을 식품, 음료 등의 건강기능 식품에 첨가할 수 있다.
상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 물질을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 드링크제, 육류, 소시지, 빵, 비스킷, 떡, 초콜릿, 캔디류, 스낵류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 알코올 음료 및 비타민 복합제, 유제품 및 유가공 제품 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강기능식품을 모두 포함한다.
본 발명에 따른 화학식 1로 표시되는 화합물는 식품에 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효성분의 혼합량은 그의 사용 목적(예방 또는 개선용)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 건강기능식품 중의 상기 화학식 1로 표시되는 화합물의 양은 전체 식품 중량의 0.1 내지 90 중량부로 가할 수 있다. 그러나 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있다.
본 발명의 건강기능성 음료는 지시된 비율로 필수 성분으로서 상기 화합물을 함유하는 외에는 다른 성분에는 특별한 제한이 없으며 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등; 다이사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스 등; 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당, 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트라이톨 등의 당알코올이다. 상술한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제(예를 들면, 타우마틴, 스테비아 추출물 등) 및 합성 향미제(예를 들면, 사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 건강기능식품 100 당 일반적으로 약 1 내지 20 g, 바람직하게는 약 5 내지 12 g이다.
상기 외에 본 발명에 따른 화학식 1로 표시되는 화합물을 유효성분으로 함유하는 건강기능식품 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제(예를 들면, 치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그 밖에 본 발명의 건강기능식품 조성물은 천연 과일쥬스 및 과일쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다.
이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 그렇게 중요하진 않지만 본 발명에 따른 건강기능식품 조성물 100 중량부 당 0.1 내지 약 20 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.
이하, 본 발명을 하기의 실시예 및 실험예에 의하여 더욱 상세히 설명한다.
단, 하기의 실시예 및 실험예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기의 실시예 및 실험예에 의해 한정되는 것은 아니다.
< 제조예 1> (R)-2-( 메톡시카보닐아미노 )-2-페닐아세트산의 제조
Figure 112014047142973-pat00011
D-페닐글라이신(1.5 g, 10 mmol)이 용해된 수산화나트륨 수용액(10 ml, 10 mmol)에 소듐카보네이트(0.55 g, 5.2 mmol)를 첨가하고, 얼음조를 이용하여 냉각시켰다. 냉각된 반응 혼합물에 메틸클로로포르메이트(0.85 ml, 11.0 mmol)를 천천히 적가한 다음, 적가가 완료되면 얼음조를 제거하여 상온으로 등온하여 3.25시간 동안 교반하였다. 그 후, 반응생성물을 에테르(18 ml)로 3 차례 세척하고, 물층을 얼음조를 이용하여 냉각시킨 후, 염산(conc. HCl)으로 pH 1 내지 2로 산성화하였다. 산성화된 수용액층을 다이클로로메탄(18 ml)으로 3 차례 추출하고, 추출된 유기층을 마그네슘설페이트(MgSO4)로 건조시킨 후 여과하였다. 여과된 유기층을 감압농축하여 얻은 오일 잔류물을 다이에틸에테르/헥산(~5:4 비율; 10 ml)으로 처리하여 침전물을 얻었다. 상기에서 얻은 침전물을 다이에틸에테르/헥산(~1:3 비율)로 세척 여과하고 진공하에 건조시켜 백색 고체의 목적화합물(1.4 g, 67%)을 얻었다.
1H NMR (DMSO-d 6, δ=2.5 ppm, 500 MHz): 12.79 (br s, 1H), 7.96 (d, J=12, 1H), 7.40-7.29 (m, 5H), 5.13 (d, J=12, 1H), 3.55 (s, 3H).
< 제조예 2> 9,9-디메틸-9 H - 플루오렌 -2,7- 디아민의 제조
단계 1 : 9,9-디메틸-2,7- 디나이트로 -9 H - 플루오렌의 제조
Figure 112014047142973-pat00012
2,7-나이트로-9H-플루오렌(100 mg, 0.39 mmol) 및 NaOt-Bu(75 mg, 0.78 mmol)의 혼합물을 질소 내, 얼음 욕조에서 DMF에 용해시켰다. 아이오도메탄(49 mL, 0.78 mmol)을 상기 혼합물에 천천히 첨가하고, 2시간 동안 혼합한 후, 물을 가하여 침전물을 얻었다. 상기 침전물을 필터하고 물로 세척한 후, 건조하였다. 별다른 정화과정 없이, 목적생성물(89 mg, 80%)을 노란색의 고체 형태로 얻었다.
1H NMR (DMSO-d 6, δ=2.5 ppm, 400 MHz): 8.59 (d, 2H), 8.33 (m, 4H), 1.60 (s, 6H).
13C NMR (DMSO-d 6, δ=39.52 ppm, 100 MHz): 156.2, 148.1, 142.7, 123.6, 122.9, 118.7, 47.9, 25.6.
단계 2 : 9,9-디메틸-9 H - 플루오렌 -2,7- 디아민의 제조
Figure 112014047142973-pat00013
Fe3O4 (15 mg, 0.063 mmol) 및 DMF(1.9 mL)를 오븐-건조된(oven-dried) 슈랭크 튜브(Schlenk tube)에 넣고, 아르곤 내 울트라사운드 욕조(ultrasound bath)에서 1분 동안 소니케이트(sonicate) 하였다. 상기 단계 1에서 얻은 9,9-디메틸-2,7-디나이트로-9H-플루오렌(90 mg, 0.32 mmol) 및 히드라진 모노하이드레이트(123 mL, 2.52 mmol)를 상기 혼합물에 첨가하였다. 상기 반응 혼합물은 아르곤 내 80℃에서 반응이 종결될 때까지 혼합하였다. 촉매를 사용하여 자기분리(magnetic separation) 후, 유기층을 진공 내에서 농축하였다. 잔여물은 CH2Cl2 및 H2O로 분리하였다. 상기 유기층을 브라인으로 세척하고, MgSO4로 건조한 후, 필터하고, 진공 내에서 농축하였다. 별다른 정화과정 없이, 목적생성물(69 mg, 98%)을 노란색의 고체 형태로 얻었다.
1H NMR (DMSO-d 6, δ=2.5 ppm, 400 MHz): 7.21 (s, 1H), 7.19 (s, 1H), 6.6 (d, 2H), 6.47 (d, 1H), 6.45(d, 1H), 4.9 (s, 4H), 1.3 (s, 6H).
13C NMR (DMSO-d 6, δ=39.52 ppm, 100 MHz): 153.5, 146.7, 128.4, 118.6, 112.6, 108.5, 45.6, 27.7.
19F NMR (DMSO-d 6 , 377 MHz,): δ-106.7. LC/MS: Anal. Calcd.
For [M+H]+ C15H16N2:225.1386; found 225.1383.
< 제조예 3> 9,9- 디플루오로 -9 H - 플루오렌 -2,7- 디아민의 제조
단계 1 : 9,9- 디플루오로 -2,7- 디나이트로 -9 H - 플루오렌의 제조
Figure 112014047142973-pat00014
2,7-나이트로-9H-플루오렌(100 mg, 0.39 mmol) 및 N-플루오로벤젠설폰이미드 (N-Fluorobenzenesulfonimide, NFSI)(369 mg, 1.17 mmol)를 DMF에 용해한 후, -20℃로 냉각하였다. NaHMDS (1.0 M in THF, 1.17 mL, 1.17 mmol)를 5분 동안 방울 단위로 첨가하였다. 0℃에서 2시간 동안의 시간을 가진 후, TLC를 통해 반응이 종결되었음을 확인하고, MeOH를 첨가하여 과량의 염기를 제거(quench)하였다. 상기 서스펜션(suspension)을 셀라이트를 사용하여 필터하고, 진공 내에서 농축하였다. 실리카 겔 메시(mesh)를 잔여물(residue)에서 준비하였고, 플래시 크로마토그래피(silica gel: EtOAc/hexane as eluent)를 통해 목적생성물(22 mg, 19%)을 노란색의 고체 형태로 얻었다.
1H NMR (DMSO-d 6, δ=2.5 ppm, 400 MHz): 8.63 (d, 2H), 8.53 (d, 1H), 8.56 (d, 1H), 8.36 (s, 1H), 8.34 (s, 1H).
13C NMR (DMSO-d 6, δ=39.52 ppm, 100 MHz): 149.1, 142.5, 138.5, 129.2, 144.3, 120.8, 119.6.
19F NMR (DMSO-d6, 377 MHz,): δ-110.3.
단계 2 : 9,9- 디플루오로 -9 H - 플루오렌 -2,7- 디아민의 제조
Figure 112014047142973-pat00015
Fe3O4 (4 mg, 0.015 mmol) 및 DMF(0.5 mL)를 오븐-건조된(oven-dried) 슈랭크 튜브(Schlenk tube)에 넣고, 아르곤 내 울트라사운드 욕조(ultrasound bath)에서 1분 동안 소니케이트(sonicate) 하였다. 상기 단계 1에서 얻은 9,9-디플루오로-2,7-디나이트로-9H-플루오렌(22 mg, 0.075 mmol) 및 히드라진 모노하이드레이트(29 ㎕, 0.60 mmol)를 상기 혼합물에 첨가하였다. 상기 반응 혼합물은 아르곤 내 80℃에서 반응이 종결될 때까지 혼합하였다. 촉매를 사용하여 자기분리(magnetic separation) 후, 유기층을 진공 내에서 농축하였다. 잔여물은 CH2Cl2 및 H2O로 분리하였다. 상기 유기층을 브라인으로 세척하고, MgSO4로 건조한 후, 필터하고, 진공 내에서 농축하였다. 별다른 정화과정 없이, 목적생성물(17 mg, 98%)을 노란색의 고체 형태로 얻었다.
1H NMR (DMSO-d 6, δ=2.5 ppm, 400 MHz): 7.19 (s, 1H), 7.17 (s, 1H), 6.8 (d, 2H), 6.61 (d, 1H), 6.59(d, 1H), 5.3 (s, 4H).
13C NMR (DMSO-d 6, δ=39.52 ppm, 100 MHz): 148.0, 137.3, 137.1, 127.7, 123.7, 119.8, 116.45, 109.1.
19F NMR (DMSO-d6, 377 MHz,): δ-106.7.
LC/MS: Anal. Calcd. For [M+H]+ C13H10F2N2:233.0885; found 233.0885.
< 제조예 4> 2,7- 디아미노 -9 H - 플루오렌 -9-온의 제조
Figure 112014047142973-pat00016
9H-플루오렌-2,7-디아민(294 mg, 1.5 mmol) 및 Cs2CO3(1.5 g, 4.5 mmol)의 혼합물을 DMSO (7 mL)에 용해시킨 후, 대기압 하(under an atmosphere of air)에서 혼합하였다. TLC를 통해 반응물질이 모두 사라졌음을 확인한 후, 상기 용액에 물을 가하여 침전물을 얻었다. 상기 침전물을 필터하고, 물로 세척한 후, 건조하였다. 별도의 정화과정 없이 목적생성물(239 mg, 76%)을 고체 형태로 얻었다.
1H NMR (DMSO-d 6, δ=2.5 ppm, 400 MHz): 7.10 (s, 1H), 7.08 (s, 1H), 6.70 (d, 2H), 6.57 (d, 1H), 6.57 (d, 1H) 5.30 (s, 4H).
13C NMR (DMSO-d 6, δ=39.52 ppm, 100 MHz): 194.9, 148.2, 134.6, 133.3, 119.9, 118.6, 109.7.
LC/MS: Anal. Calcd. For [M+H]+ C13H10N2O:211.0866; found 211.0867.
< 실시예 1> 다이메틸 ((1R,1'R)-((2S,2'S)-2,2'-(((3,3'- 다이메틸 -[1,1'- 바이페닐 ]-4,4'- 다이일 ) 비스 ( 아잔다이일 )) 비스 ( 카보닐 )) 비스 ( 피롤리딘 -2,1- 다이일 ))비스(2-옥소-1- 페닐에탄 -2,1- 다이일 )) 다이카바메이트의 제조
Figure 112014047142973-pat00017
N-Boc-L-프롤린(9.47 g, 44.0 mmol), EDC(9.97 g, 52.0 mmol), 및 오쏘-톨리딘(4.25 g, 20.0 mmol)을 CH2Cl2(30 mL)에서 혼합하고 상온에서 2시간 교반하였다.
다음으로, 상기에서 얻은 화합물을 CH2Cl2 및 H2O로 분획하고, 유기층을 1N 염산 수용액 및 염수(brine)로 세척하고, 황산마그네슘으로 건조하고 여과 후 감압 농축하여 별도의 정제 과정 없이 (2S,2'S)-다이-tert-부틸 2,2'-(((3,3'-다이메틸-[1,1'-바이페닐]-4,4'-다이일)비스(아잔다이일))비스(카보닐))비스(피롤리딘-1-카르복실레이트)를 고체로 얻었다(11.3 g, 93%).
상기에서 얻은 화합물(144 mg, 0.238 mmol)을 CF3CO2H(1 mL) 및 CH2Cl2(1 mL) 혼합용매에 넣고 상온에서 5시간 동안 교반하였다. 감압하에 휘발성분을 제거하고, i-Pr2NEt(208 ㎕, 1.192 mmol)이 용해된 CH2Cl2(1 mL) 용액을 4분에 걸쳐 넣고, 추가로 EDC(119 mg, 0.620 mmol) 및 제조예 1에서 제조한 화합물(100 mg, 0.572 mmol)의 반응 혼합물을 상온에서 75분간 교반하였다. 다음으로, 반응 잔류물을 CH2Cl2 및 H2O로 분획하여 얻은 유기층을 H2O 및 염수로 세척하고 황산마그네슘으로 건조시키고 여과한 후 감압 농축하였다. 상기 잔류물로부터 실리카겔 메쉬(mesh)를 준비하고, 이를 플래쉬크로마토그래피(용리액: EtOAc/hexane 혼합액)에 적용하여 목적화합물을 백색 고체로 얻었다(77 mg, 41%).
1H NMR (DMSO-d 6, δ=2.5 ppm, 400 MHz): 9.31 (s, 2H), 7.74 (d, 2H), 7.54-7.23 (m, 16H), 5.52 (d, 2H), 4.52 (m, 2H), 3.85 (m, 2H), 3.52 (s, 6H), 3.18 (m, 2H), 2.28 (s, 6H), 2.00-1.82 (m, 8H);
13C NMR (DMSO-d 6, δ=39.52 ppm, 100 MHz): 170.1, 168.8, 156.1, 137.1, 136.5, 135.4, 132.2, 128.6, 128.2, 128.1, 128.0, 125.2, 123.9, 60.6, 56.8, 51.6, 46.9, 29.1, 24.3, 17.9;
LC/MS: Anal. Calcd. For [M+H]+ C44H48N6O8:789.3606; found 789.3597.
< 실시예 2> 다이메틸 ((1R,1'R)-((2S,2'S)-2,2'-(((2,2'-비스( 트리플루오로메틸 )-[1,1'- 바이페닐 ]-4,4'- 다이일 ) 비스 ( 아잔다이일 )) 비스 ( 카보닐 )) 비스 ( 피롤리딘 -2,1-다이일)) 비스 (2-옥소-1- 페닐에탄 -2,1- 다이일 )) 다이카바메이트의 제조
Figure 112014047142973-pat00018
N-Boc-L-프롤린(3.23 g, 15.0 mmol), EDC(3.12 g, 16.3 mmol), 및 2,2'-비스(트리플루오로메틸)벤지딘(2.00 g, 6.3 mmol)을 CH2Cl2(20 mL)에서 혼합하고 상온에서 2시간 교반하였다.
다음으로, 상기에서 얻은 화합물을 CH2Cl2 및 H2O로 분획하고, 유기층을 1N 염산 수용액 및 염수(brine)로 세척하고, 황산마그네슘으로 건조하고 여과 후 감압 농축하여 별도의 정제 과정 없이 (2S,2'S)-다이-tert-부틸 2,2'-(((2,2'-비스(트리플루오로메틸)-[1,1'-바이페닐]-4,4'-다이일)비스(아잔다이일))비스(카보닐))비스(피롤리딘-1-카르복실레이트)를 고체로 얻었다(4.3 g, 96%).
상기에서 얻은 화합물(357 mg, 0.5 mmol)을 CF3CO2H(2 mL) 및 CH2Cl2(2 mL) 혼합용매에 넣고 상온에서 5시간 동안 교반하였다. 감압하에 휘발성분을 제거하고, i-Pr2NEt(434 ㎕, 2.5 mmol)이 용해된 CH2Cl2(2 mL) 용액을 4분에 걸쳐 넣고, 추가로 EDC(249 mg, 1.3 mmol) 및 제조예 1에서 제조한 화합물(251 mg, 1.2 mmol)의 반응 혼합물을 상온에서 75분간 교반하였다. 다음으로, 반응 잔류물을 CH2Cl2 및 H2O로 분획하여 얻은 유기층을 H2O 및 염수로 세척하고 황산마그네슘으로 건조시키고 여과한 후 감압 농축하였다. 상기 잔류물로부터 실리카겔 메쉬(mesh)를 준비하고, 이를 플래쉬크로마토그래피(용리액: EtOAc/hexane 혼합액)에 적용하여 목적화합물을 백색 고체로 얻었다(145 mg, 32%).
1H NMR (DMSO-d 6, δ=2.5 ppm, 400 MHz): 10.29 (s, 2H), 8.21 (d, 2H), 7.83 (m, 2H), 7.75 (d, 2H), 7.43-7.05 (m, 12H), 5.51 (d, 2H), 4.41 (m, 2H), 3.85 (app br s, 2H), 3.54 (s, 6H), 3.20 (app br d, 2H), 2.06-1.82 (m, 8H);
13C NMR (DMSO-d 6, δ=39.52 ppm, 100 MHz): 171.26, 168.75, 156.42, 139.30, 137.16, 132.79, 131.36, 128.89, 128.35, 128.25, 125.07, 122.88, 121.81, 116.37, 61.05, 56.97, 51.87, 47.22, 29.45, 24.51;
19F NMR (DMSO-d6, 377 MHz,): δ-57.28;
LC/MS: Anal. Calcd. For [M+H]+ C44H42F6N6O8: 897.3041; found 897.3046.
< 실시예 3> 다이메틸 ((1R,1'R)-((2S,2'S)-2,2'-(((2,2'- 다이메틸 -[1,1'- 바이페닐 ]-4,4'- 다이일 ) 비스 ( 아잔다이일 )) 비스 ( 카보닐 )) 비스 ( 피롤리딘 -2,1- 다이일 ))비스(2-옥소-1- 페닐에탄 -2,1- 다이일 )) 다이카바메이트의 제조
Figure 112014047142973-pat00019
N-Boc-L-프롤린(2.23 g, 10.4 mmol), EDC(2.35 g, 12.3 mmol), 및 meta-톨리딘(1.0 g, 4.7 mmol)을 CH2Cl2(10 mL)에서 혼합하고 상온에서 2시간 교반하였다.
다음으로, 상기에서 얻은 화합물을 CH2Cl2 및 H2O로 분획하고, 유기층을 1N 염산 수용액 및 염수(brine)로 세척하고, 황산마그네슘으로 건조하고 여과 후 감압 농축하여 별도의 정제 과정 없이 (2S,2'S)-다이-tert-부틸 2,2'-(((2,2'-다이메틸-[1,1'-바이페닐]-4,4'-다이일)비스(아잔다이일))비스(카보닐))비스(피롤리딘-1-카르복실레이트)를 고체로 얻었다(2.75 g, 96%).
상기에서 얻은 화합물(292 mg, 0.509 mmol)을 CF3CO2H(2 mL) 및 CH2Cl2(2 mL) 혼합용매에 넣고 상온에서 5시간 동안 교반하였다. 감압하에 휘발성분을 제거하고, i-Pr2NEt(443 ㎕, 2.54 mmol)이 용해된 CH2Cl2(2 mL) 용액을 4분에 걸쳐 넣고, 추가로 EDC(253 mg, 1.32 mmol) 및 제조예 1에서 제조한 화합물(256 mg, 1.22 mmol)의 반응 혼합물을 상온에서 75분간 교반하였다. 다음으로, 반응 잔류물을 CH2Cl2 및 H2O로 분획하여 얻은 유기층을 H2O 및 염수로 세척하고 황산마그네슘으로 건조시키고 여과한 후 감압 농축하였다. 상기 잔류물로부터 실리카겔 메쉬(mesh)를 준비하고, 이를 플래쉬크로마토그래피(용리액: EtOAc/hexane 혼합액)에 적용하여 목적화합물을 백색 고체로 얻었다(292 mg, 73%).
1H NMR (DMSO-d 6, δ=2.5 ppm, 400 MHz): 9.84 (s, 2H), 7.73 (d, 2H), 7.59 (s, 2H), 7.48-7.14 (m, 12H), 6.87 (d, 2H), 5.51 (d, 2H), 4.42 (m, 2H), 3.84 (m, 2H), 3.55 (s, 6H), 3.20 (m, 2H), 1.98 (s, 6H), 1.97-1.78 (m, 8H);
13C NMR (DMSO-d 6, δ=39.52 ppm, 100 MHz): 170.2, 168.4, 156.1, 137.9, 137.1, 135.8, 135.8, 129.58, 128.62, 128.1, 127.9, 120.5, 116.7, 60.7, 56.8, 51.7, 47.0, 29.4, 24.3, 19.8;
LC/MS: Anal. Calcd. For [M+H]+ C44H48N6O8:789.3606; found 789.3605.
< 실시예 4> 다이메틸 ((1R,1'R)-((2S,2'S)-2,2'-(((9H- 플루오렌 -2,7- 다이일 )비스( 아잔다이일 )) 비스 ( 카보닐 )) 비스 ( 피롤리딘 -2,1- 다이일 )) 비스 (2-옥소-1- 페닐에 탄-2,1- 다이일 )) 다이카바메이트의 제조
Figure 112014047142973-pat00020
N-Boc-L-프롤린(323 mg, 1.5 mmol), EDC(312 mg, 1.63 mmol), 및 2,7-다이아미노플루오렌(123 mg, 0.63 mmol)을 CH2Cl2(2 mL)에서 혼합하고 상온에서 2시간 교반하였다.
다음으로, 상기에서 얻은 화합물을 CH2Cl2 및 H2O로 분획하고, 유기층을 1N 염산 수용액 및 염수(brine)로 세척하고, 황산마그네슘으로 건조하고 여과 후 감압 농축하여 별도의 정제 과정 없이 (2S,2'S)-다이-tert-부틸 2,2'-(((9H-플루오렌-2,7-다이일)비스(아잔다이일))비스(카보닐))비스(피롤리딘-1-카르복실레이트)를 고체로 얻었다(359 mg, 97%).
상기에서 얻은 화합물(300 mg, 0.51 mmol)을 CF3CO2H(2 mL) 및 CH2Cl2(2 mL) 혼합용매에 넣고 상온에서 5시간 동안 교반하였다. 감압하에 휘발성분을 제거하고, i-Pr2NEt(441 ㎕, 2.5 mmol)이 용해된 CH2Cl2(2 mL) 용액을 4분에 걸쳐 넣고, 추가로 EDC(253 mg, 1.3 mmol) 및 제조예 1에서 제조한 화합물(255 mg, 1.3 mmol)의 반응 혼합물을 상온에서 75분간 교반하였다. 다음으로, 반응 잔류물을 CH2Cl2 및 H2O로 분획하여 얻은 유기층을 H2O 및 염수로 세척하고 황산마그네슘으로 건조시키고 여과한 후 감압 농축하였다. 상기 잔류물로부터 실리카겔 메쉬(mesh)를 준비하고, 이를 플래쉬크로마토그래피(용리액: EtOAc/hexane 혼합액)에 적용하여 목적화합물을 백색 고체로 얻었다(198 mg, 50%).
1H NMR (DMSO-d 6, δ=2.5 ppm, 400 MHz): 9.92 (s, 2H), 7.91 (s, 2H), 7.75-7.69 (m, 4H), 7.56 (d, 2H), 7.44-7.13 (m, 10H), 5.52 (d, 2H), 4.43 (m, 2H), 3.88-3.83 (m, 2H), 3.55 (s, 6H), 3.21 (m, 2H), 2.04-1.78 (m, 8H);
13C NMR (DMSO-d 6, δ=39.52 ppm, 100 MHz): 170.2, 168.5, 156.2, 143.6, 137.5, 137.2, 136.4, 128.7, 128.1, 127.9, 119.6, 118.1, 116.2, 60.8, 56.8, 51.7, 47.0, 36.7, 29.4, 24.3;
LC/MS: Anal. Calcd. For [M+H]+ C43H44N6O8: 773.3293; found 773.3296.
< 실시예 5> 다이메틸 ((1R,1'R)-((2S,2'S)-2,2'-(((2,2'- 다이플루오로 -[1,1'-바이페닐]-4,4'- 다이일 ) 비스 ( 아잔다이일 )) 비스 ( 카보닐 )) 비스 ( 피롤리딘 -2,1-다이일)) 비스 (2-옥소-1- 페닐에탄 -2,1- 다이일 )) 다이카바메이트의 제조
Figure 112014047142973-pat00021
N-Boc-L-프롤린(2.4 g, 10.9 mmol), EDC(2.3 g, 11.8 mmol), 및 4,4'-다이아미노-2,2'-다이플루오로바이페닐(1.0 g, 4.5 mmol)을 CH2Cl2(15 mL)에서 혼합하고 상온에서 2시간 교반하였다.
다음으로, 상기에서 얻은 화합물을 CH2Cl2 및 H2O로 분획하고, 유기층을 1N 염산 수용액 및 염수(brine)로 세척하고, 황산마그네슘으로 건조하고 여과 후 감압 농축하여 별도의 정제 과정 없이 (2S,2'S)-다이-tert-부틸 2,2'-(((2,2'-다이플루오로-[1,1'-바이페닐]-4,4'-다이일)비스(아잔다이일))비스(카보닐))비스(피롤리딘-1-카르복실레이트)를 고체로 얻었다(2.6 g, 93%).
상기에서 얻은 화합물(245 mg, 0.42 mmol)을 CF3CO2H(2 mL) 및 CH2Cl2(2 mL) 혼합용매에 넣고 상온에서 5시간 동안 교반하였다. 감압하에 휘발성분을 제거하고, i-Pr2NEt(370 ㎕, 2.1 mmol)이 용해된 CH2Cl2(2 mL) 용액을 4분에 걸쳐 넣고, 추가로 EDC(210 mg, 1.1 mmol) 및 제조예 1에서 제조한 화합물(212 mg, 1.0 mmol)의 반응 혼합물을 상온에서 75분간 교반하였다. 다음으로, 반응 잔류물을 CH2Cl2 및 H2O로 분획하여 얻은 유기층을 H2O 및 염수로 세척하고 황산마그네슘으로 건조시키고 여과한 후 감압 농축하였다. 상기 잔류물로부터 실리카겔 메쉬(mesh)를 준비하고, 이를 플래쉬크로마토그래피(용리액: EtOAc/hexane 혼합액)에 적용하여 목적화합물을 백색 고체로 얻었다(134 mg, 40%).
1H NMR (DMSO-d 6, δ=2.5 ppm, 400 MHz): 10.43 (s, 2H), 7.74-7.71 (m, 3H), 7.46-7.11 (m, 15H), 5.51 (d, 2H), 4.43 (m, 2H), 3.83 (m, 2H), 3.54 (s, 6H), 3.19 (m, 2H), 2.05-1.77 (m, 8H);
13C NMR (DMSO-d 6, δ=39.52 ppm, 100 MHz): 170.8, 168.4, 160.0, 158.0, 156.1, 140.5, 137.2, 131.6, 128.6, 128.5, 128.1, 127.9, 127.6, 117.1, 115.1, 106.3, 106.1, 60.8, 56.7, 51.7, 47.0, 29.3, 24.3;
19F NMR (DMSO-d6, 377 MHz,): δ-73.45;
LC/MS: Anal. Calcd. For [M+H]+ C42H42F2N6O8: 797.3105; found 797.3112.
< 실시예 6> 다이메틸 ((1R,1'R)-((2S,2'S)-2,2'-(((2,2'- 다이클로로 -[1,1'-바이페닐]-4,4'- 다이일 ) 비스 ( 아잔다이일 )) 비스 ( 카보닐 )) 비스 ( 피롤리딘 -2,1- 다이 일)) 비스 (2-옥소-1- 페닐에탄 -2,1- 다이일 )) 다이카바메이트의 제조
Figure 112014047142973-pat00022
N-Boc-L-프롤린(2.4 g, 10.9 mmol), EDC(2.3 g, 11.8 mmol), 및 4,4'-다이아미노-2,2'-다이클로로바이페닐(1.15 g, 4.5 mmol)을 CH2Cl2(15 mL)에서 혼합하고 상온에서 2시간 교반하였다.
다음으로, 상기에서 얻은 화합물을 CH2Cl2 및 H2O로 분획하고, 유기층을 1N 염산 수용액 및 염수(brine)로 세척하고, 황산마그네슘으로 건조하고 여과 후 감압 농축하여 별도의 정제 과정 없이 (2S,2'S)-다이-tert-부틸 2,2'-(((2,2'-다이클로로-[1,1'-바이페닐]-4,4'-다이일)비스(아잔다이일))비스(카보닐))비스(피롤리딘-1-카르복실레이트)를 고체로 얻었다(2.8 g, 95%).
상기에서 얻은 화합물(245 mg, 0.4 mmol)을 CF3CO2H(4 mL) 및 CH2Cl2(4 mL) 혼합용매에 넣고 상온에서 5시간 동안 교반하였다. 감압하에 휘발성분을 제거하고, i-Pr2NEt(347 ㎕, 2.0 mmol)이 용해된 CH2Cl2(4 mL) 용액을 4분에 걸쳐 넣고, 추가로 EDC(199 mg, 1.04 mmol) 및 제조예 1에서 제조한 화합물(200 mg, 0.96 mmol)의 반응 혼합물을 상온에서 75분간 교반하였다. 다음으로, 반응 잔류물을 CH2Cl2 및 H2O로 분획하여 얻은 유기층을 H2O 및 염수로 세척하고 황산마그네슘으로 건조시키고 여과한 후 감압 농축하였다. 상기 잔류물로부터 실리카겔 메쉬(mesh)를 준비하고, 이를 플래쉬크로마토그래피(용리액: EtOAc/hexane 혼합액)에 적용하여 목적화합물을 백색 고체로 얻었다(146 mg, 44%).
1H NMR (DMSO-d 6, δ=2.5 ppm, 400 MHz): 10.14 (s, 2H), 7.97-7.91 (m, 2H), 7.75 (d, 2H), 7.65-7.55 (m, 2H), 7.43-7.12 (m, 12H), 5.51 (d, 2H), 4.39 (m, 2H), 3.84 (m, 2H), 3.55 (s, 6H), 3.20 (m, 2H), 2.06-1.79 (m, 8H);
13C NMR (DMSO-d 6, δ=39.52 ppm, 100 MHz): 170.8, 168.5, 156.2, 139.9, 137.1, 132.6, 132.1, 131.7, 128.6, 128.1, 127.9, 119.3, 117.7, 60.8, 56.73, 51.68, 47.0, 29.3, 24.3;
LC/MS: Anal. Calcd. For [M+H]+ C42H42Cl2N6O8: 829.2514; found 829.2518.
< 실시예 7> 다이메틸 ((1R,1'R)-((2S,2'S)-2,2'-(((2,2'- 다이브로모 -[1,1'-바이페닐]-4,4'- 다이일 ) 비스 ( 아잔다이일 )) 비스 ( 카보닐 )) 비스 ( 피롤리딘 -2,1- 다이 일)) 비스 (2-옥소-1- 페닐에탄 -2,1- 다이일 )) 다이카바메이트의 제조
Figure 112014047142973-pat00023
N-Boc-L-프롤린(755 mg, 3.5 mmol), EDC(729 mg, 3.8 mmol), 및 4,4'-다이아미노-2,2'-다이브로모바이페닐(500 mg, 1.46 mmol)을 CH2Cl2(5 mL)에서 혼합하고 상온에서 2시간 교반하였다.
다음으로, 상기에서 얻은 화합물을 CH2Cl2 및 H2O로 분획하고, 유기층을 1N 염산 수용액 및 염수(brine)로 세척하고, 황산마그네슘으로 건조하고 여과 후 감압 농축하여 별도의 정제 과정 없이 (2S,2'S)-다이-tert-부틸 2,2'-(((2,2'-다이브로모-[1,1'-바이페닐]-4,4'-다이일)비스(아잔다이일))비스(카보닐))비스(피롤리딘-1-카르복실레이트)를 고체로 얻었다(991 mg, 92%).
상기에서 얻은 화합물(260 mg, 0.353 mmol)을 CF3CO2H(2 mL) 및 CH2Cl2(2 mL) 혼합용매에 넣고 상온에서 5시간 동안 교반하였다. 감압하에 휘발성분을 제거하고, i-Pr2NEt(3078 ㎕, 1.77 mmol)이 용해된 CH2Cl2(4 mL) 용액을 4분에 걸쳐 넣고, 추가로 EDC(176 mg, 0.92 mmol) 및 제조예 1에서 제조한 화합물(177 mg, 0.85 mmol)의 반응 혼합물을 상온에서 75분간 교반하였다. 다음으로, 반응 잔류물을 CH2Cl2 및 H2O로 분획하여 얻은 유기층을 H2O 및 염수로 세척하고 황산마그네슘으로 건조시키고 여과한 후 감압 농축하였다. 상기 잔류물로부터 실리카겔 메쉬(mesh)를 준비하고, 이를 플래쉬크로마토그래피(용리액: EtOAc/hexane 혼합액)에 적용하여 목적화합물을 백색 고체로 얻었다(110 mg, 42%).
1H NMR (DMSO-d 6, δ=2.5 ppm, 400 MHz): 10.13 (s, 2H), 8.32-8.12 (m,2H), 7.92-7.61 (m, 4H), 7.41-7.13 (m, 12H), 5.51 (d, 2H), 4.39 (m, 2H), 3.84 (m, 2H), 3.55 (s, 6H), 3.52 (m, 2H), 3.19 (m, 2H), 2.05-1.81 (m, 8H);
13C NMR (DMSO-d 6, δ=39.52 ppm, 100 MHz): 170.7, 168.5, 156.2, 139.8, 137.1, 135.9, 131.3, 128.6, 128.1, 127.9, 123.0, 122.3, 118.1, 60.8, 56.7, 51.7, 47.0, 29.3, 24.3;
LC/MS: Anal. Calcd. For [M+H]+ C42H42Br2N6O8: 917.1504; found 917.1521.
< 실시예 8> 다이메틸 ((1R,1'R)-((2R,2'R)-2,2'-(([1,1'- 바이페닐 ]-4,4'-다이일비스( 아잔다이일 )) 비스 ( 카보닐 )) 비스 ( 피롤리딘 -2,1- 다이일 )) 비스 (2-옥소-1- 페닐에탄 -2,1- 다이일 )) 다이카바메이트의 제조
Figure 112014047142973-pat00024
N-Boc-D-프롤린(771 mg, 3.6 mmol), EDC(812 mg, 4.2 mmol), 및 벤지딘(300 mg, 1.63 mmol)을 CH2Cl2(4 mL)에서 혼합하고 상온에서 2시간 교반하였다.
다음으로, 상기에서 얻은 화합물을 CH2Cl2 및 H2O로 분획하고, 유기층을 1N 염산 수용액 및 염수(brine)로 세척하고, 황산마그네슘으로 건조하고 여과 후 감압 농축하여 별도의 정제 과정 없이 (2R,2'R)-다이-tert-부틸 2,2'-(([1,1'-바이페닐]-4,4'-다이일비스(아잔다이일))비스(카보닐))비스(피롤리딘-1-카르복실레이트)를 고체로 얻었다(930 ng, 99%).
상기에서 얻은 화합물(300 mg, 0.52 mmol)을 CF3CO2H(2 mL) 및 CH2Cl2(2 mL) 혼합용매에 넣고 상온에서 5시간 동안 교반하였다. 감압하에 휘발성분을 제거하고, i-Pr2NEt(455 ㎕, 2.6 mmol)이 용해된 CH2Cl2(3 mL) 용액을 4분에 걸쳐 넣고, 추가로 EDC(258 mg, 0.620 mmol) 및 제조예 1에서 제조한 화합물(260 mg, 1.24 mmol)의 반응 혼합물을 상온에서 75분간 교반하였다. 다음으로, 반응 잔류물을 CH2Cl2 및 H2O로 분획하여 얻은 유기층을 H2O 및 염수로 세척하고 황산마그네슘으로 건조시키고 여과한 후 감압 농축하였다. 상기 잔류물로부터 실리카겔 메쉬(mesh)를 준비하고, 이를 플래쉬크로마토그래피(용리액: EtOAc/hexane 혼합액)에 적용하여 목적화합물을 백색 고체로 얻었다(171 mg, 57%).
1H NMR (DMSO-d 6, δ=2.5 ppm, 400 MHz): 10.14 (s, 2H), 7.68-7.60 (m, 9H), 7.46-7.30 (m, 11H), 5.49 (d, 2H), 4.53 (m, 2H), 3.68 (m, 2H), 3.54 (s, 6H), 3.12 (m, 2H), 2.00-2.13 (m, 2H), 1.89-1.82 (m, 6H);
13C NMR (DMSO-d 6, δ=39.52 ppm, 100 MHz): 170.2, 168.1, 156.4, 138.2, 136.9, 134.4, 128.4, 128.4, 127.8, 126.4, 119.4, 60.6, 56.6, 51.6, 46.9, 29.4, 24.7;
LC/MS: Anal. Calcd. For [M+H]+ C42H44N6O8: 761.3293; found 761.3281.
< 실시예 9> 다이메틸 ((1R,1'R)-((5S,5'S)-5,5'-(([1,1'- 바이페닐 ]-4,4'-다이일비스( 아잔다이일 )) 비스 ( 카보닐 )) 비스 (3- 옥소피롤리딘 -5,1- 다이일 )) 비스 (2-옥소-1-페 닐에 탄-2,1- 다이일 )) 다이카바메이트의 제조
Figure 112014047142973-pat00025
N-Boc-4-옥소-L-프롤린(335 mg, 1.5 mmol), EDC(303 mg, 1.6 mmol), 및 벤지딘(112 mg, 0.61 mmol)을 CH2Cl2(2 mL)에서 혼합하고 상온에서 2시간 교반하였다.
다음으로, 상기에서 얻은 화합물을 CH2Cl2 및 H2O로 분획하고, 유기층을 1N 염산 수용액 및 염수(brine)로 세척하고, 황산마그네슘으로 건조하고 여과 후 감압 농축하여 별도의 정제 과정 없이 (5S,5'S)-다이-tert-부틸 5,5'-(([1,1'-바이페닐]-4,4'-다이일비스(아잔다이일))비스(카보닐))비스(3-옥소피롤리딘-1-카르복실레이트)를 고체로 얻었다(320 mg, 87%).
상기에서 얻은 화합물(161 mg, 0.27 mmol)을 CF3CO2H(2 mL) 및 CH2Cl2(2 mL) 혼합용매에 넣고 상온에서 5시간 동안 교반하였다. 감압하에 휘발성분을 제거하고, i-Pr2NEt(232 ㎕, 1.3 mmol)이 용해된 CH2Cl2(2 mL) 용액을 4분에 걸쳐 넣고, 추가로 EDC(132 mg, 0.69 mmol) 및 제조예 1에서 제조한 화합물(133 mg, 0.64 mmol)의 반응 혼합물을 상온에서 75분간 교반하였다. 다음으로, 반응 잔류물을 CH2Cl2 및 H2O로 분획하여 얻은 유기층을 H2O 및 염수로 세척하고 황산마그네슘으로 건조시키고 여과한 후 감압 농축하였다. 상기 잔류물로부터 실리카겔 메쉬(mesh)를 준비하고, 이를 플래쉬크로마토그래피(용리액: EtOAc/hexane 혼합액)에 적용하여 목적화합물을 백색 고체로 얻었다(48 mg, 23%).
1H NMR (DMSO-d 6, δ=2.5 ppm, 400 MHz): 10.38 (s, 2H), 7.92 (d, 2H), 7.70-7.10 (m, 18H), 5.46 (d, 2H), 4.94 (d, 2H), 4.25 (d, 2H) 3.89 (d, 2H), 3.54 (s, 6H), 3.06 (m, 2H), 2.54 (m, 2H);
13C NMR (DMSO-d 6, δ=39.52 ppm, 100 MHz): 208.5, 170.1, 169.4, 156.1, 137.8, 136.8, 134.7, 128.6, 128.2, 128.1, 126.5, 119.7, 57.4, 56.9, 53.1, 51.7, 40.4;
LC/MS: Anal. Calcd. For [M+H]+ C42H40N6O10: 789.2879; found 789.2877.
< 실시예 10> 다이메틸 ((1R,1'R)-((2S,2'S)-2,2'-(([1,1'- 바이페닐 ]-4,4'-다이일비스( 아잔다이일 )) 비스 ( 카보닐 )) 비스 (피페리딘-2,1- 다이일 )) 비스 (2-옥소-1- 페 닐에탄-2,1- 다이일 )) 다이카바메이트의 제조
Figure 112014047142973-pat00026
N-Boc-L-피페콜산(400 mg, 1.75 mmol), EDC(363 mg, 1.9 mmol), 및 벤지딘(134 mg, 0.73 mmol)을 CH2Cl2(7 mL)에서 혼합하고 상온에서 2시간 교반하였다.
다음으로, 상기에서 얻은 화합물을 CH2Cl2 및 H2O로 분획하고, 유기층을 1N 염산 수용액 및 염수(brine)로 세척하고, 황산마그네슘으로 건조하고 여과 후 감압 농축하였다. 상기 잔류물로부터 실리카겔 메쉬(mesh)를 준비하고, 이를 플래쉬크로마토그래피(용리액: EtOAc/hexane 혼합액)에 적용하여 (2S,2'S)-다이-tert-부틸 2,2'-(([1,1'-바이페닐]-4,4'-다이일비스(아잔다이일))비스(카보닐))비스(피페리딘-1-카르복실레이트)를 고체로 얻었다(186 mg, 42%).
상기에서 얻은 화합물(73 mg, 0.12 mmol)을 CF3CO2H(1 mL) 및 CH2Cl2(1 mL) 혼합용매에 넣고 상온에서 5시간 동안 교반하였다. 감압하에 휘발성분을 제거하고, i-Pr2NEt(105 ㎕, 0.60 mmol)이 용해된 DMF(1 mL) 용액을 4분에 걸쳐 넣고, 추가로 EDC(60 mg, 0.31 mmol) 및 제조예 1에서 제조한 화합물(60 mg, 0.29 mmol)의 반응 혼합물을 상온에서 75분간 교반하였다. 다음으로, 반응 잔류물을 CH2Cl2 및 H2O로 분획하여 얻은 유기층을 H2O 및 염수로 세척하고 황산마그네슘으로 건조시키고 여과한 후 감압 농축하였다. 상기 잔류물로부터 실리카겔 메쉬(mesh)를 준비하고, 이를 플래쉬크로마토그래피(용리액: EtOAc/hexane 혼합액)에 적용하여 목적화합물을 고체로 얻었다(12 mg, 13%).
1H NMR (DMSO-d 6, δ=2.5 ppm, 400 MHz): 9.99-9.84 (s, 2H), 7.85-7.30 (m, 20H), 5.73-5.64 (m, 2H), 5.17/ 4.85 (m, 2H), 4.45/ 3.77 (m, 2H), 3.55 (app br s, 6H), 3.18/ 2.83 (m, 2H), 2.15 (m, 2H), 1.76 (m, 2H), 1.63-1.24 (m, 8H);
13C NMR (DMSO-d 6, δ=39.52 ppm, 100 MHz): 170.0, 169.3, 168.5, 156.2, 138.0, 137.2, 134.5, 128.6, 128.4, 128.2, 127.7, 126.5, 120.2, 119.7, 67.0, 55.5, 52.8, 51.6, 43.2, 27.5, 25.1, 24.6, 19.7;
LC/MS: Anal. Calcd. For [M+H]+ C44H48N6O8:789.3606; found 789.3605.
< 실시예 11> 다이메틸 ((1R,1'R)-((2R,2'R)-2,2'-(([1,1'- 바이페닐 ]-4,4'-다이일비스( 아잔다이일 )) 비스 ( 카보닐 )) 비스 (피페리딘-2,1- 다이일 )) 비스 (2-옥소-1- 페닐에탄 -2,1- 다이일 )) 다이카바메이트의 제조
Figure 112014047142973-pat00027
N-Boc-D-피페콜산(500 mg, 2.2 mmol), EDC(452 mg, 2.4 mmol), 및 벤지딘(167 mg, 0.91 mmol)을 CH2Cl2(4 mL)에서 혼합하고 상온에서 2시간 교반하였다.
다음으로, 상기에서 얻은 화합물을 CH2Cl2 및 H2O로 분획하고, 유기층을 1N 염산 수용액 및 염수(brine)로 세척하고, 황산마그네슘으로 건조하고 여과 후 감압 농축하였다. 상기 잔류물로부터 실리카겔 메쉬(mesh)를 준비하고, 이를 플래쉬크로마토그래피(용리액: EtOAc/hexane 혼합액)에 적용하여 (2R,2'R)-다이-tert-부틸 2,2'-(([1,1'-바이페닐]-4,4'-다이일비스(아잔다이일))비스(카보닐))비스(피페리딘-1-카르복실레이트)를 고체로 얻었다(190 mg, 35%).
상기에서 얻은 화합물(122 mg, 0.2 mmol)을 CF3CO2H(1 mL) 및 CH2Cl2(1 mL) 혼합용매에 넣고 상온에서 5시간 동안 교반하였다. 감압하에 휘발성분을 제거하고, i-Pr2NEt(195 ㎕, 1.0 mmol)이 용해된 DMF(1 mL) 용액을 4분에 걸쳐 넣고, 추가로 EDC(100 mg, 0.52 mmol) 및 제조예 1에서 제조한 화합물(101 mg, 0.48 mmol)의 반응 혼합물을 상온에서 75분간 교반하였다. 다음으로, 반응 잔류물을 CH2Cl2 및 H2O로 분획하여 얻은 유기층을 H2O 및 염수로 세척하고 황산마그네슘으로 건조시키고 여과한 후 감압 농축하였다. 상기 잔류물로부터 실리카겔 메쉬(mesh)를 준비하고, 이를 플래쉬크로마토그래피(용리액: EtOAc/hexane 혼합액)에 적용하여 목적화합물을 백색의 고체로 얻었다(23 mg, 15%).
1H NMR (DMSO-d 6, δ=2.5 ppm, 400 MHz): 9.98-9.84 (s, 2H), 7.84-7.28 (m, 20H), 5.72-5.64 (m, 2H), 5.16/ 4.85 (m, 2H), 4.45/ 3.75 (m, 2H), 3.55 (app br s, 6H), 3.17/ 2.83 (m, 2H), 2.15 (m, 2H), 1.76 (m, 2H), 1.63-1.23 (m, 8H);
13C NMR (DMSO-d 6, δ=39.52 ppm, 100 MHz): 170.0, 169.3, 168.5, 156.2, 138.0, 137.2, 134.5, 128.6, 128.4, 128.2, 127.7, 126.5, 120.2, 119.7, 67.0, 55.5, 52.8, 51.6, 43.2, 27.5, 25.1, 24.6, 19.7;
LC/MS: Anal. Calcd. For [M+H]+ C44H48N6O8:789.3606; found 789.3605.
< 실시예 12> 다이메틸 ((1R,1'R)-((2S,2'S)-2,2'-(([1,1'- 바이페닐 ]-4,4'-다이일비스( 아잔다이일 )) 비스 ( 카보닐 )) 비스 (2- 메틸피롤리딘 -2,1- 다이일 )) 비스 (2-옥소-1-페 닐에 탄-2,1- 다이일 )) 다이카바메이트의 제조
Figure 112014047142973-pat00028
N-Boc-a-메틸-L-프롤린(200 mg, 0.87 mmol), EDC(181 mg, 0.95 mmol), 및 벤지딘(67 mg, 0.36 mmol)을 CH2Cl2(2 mL)에서 혼합하고 상온에서 2시간 교반하였다.
다음으로, 상기에서 얻은 화합물을 CH2Cl2 및 H2O로 분획하고, 유기층을 1N 염산 수용액 및 염수(brine)로 세척하고, 황산마그네슘으로 건조하고 여과 후 감압 농축하였다. 상기 잔류물로부터 실리카겔 메쉬(mesh)를 준비하고, 이를 플래쉬크로마토그래피(용리액: EtOAc/hexane 혼합액)에 적용하여 (2S,2'S)-다이-tert-부틸 2,2'-(([1,1'-바이페닐]-4,4'-다이일비스(아잔다이일))비스(카보닐))비스(2-메틸피롤리딘-1-카르복실레이트)를 고체로 얻었다(86 mg, 31%).
상기에서 얻은 화합물(144 mg, 0.238 mmol)을 CF3CO2H(1 mL) 및 CH2Cl2(1 mL) 혼합용매에 넣고 상온에서 5시간 동안 교반하였다. 감압하에 휘발성분을 제거하고, i-Pr2NEt(208 ㎕, 1.192 mmol)이 용해된 CH2Cl2(1 mL) 용액을 4분에 걸쳐 넣고, 추가로 EDC(119 mg, 0.620 mmol) 및 제조예 1에서 제조한 화합물(100 mg, 0.572 mmol)의 반응 혼합물을 상온에서 75분간 교반하였다. 다음으로, 반응 잔류물을 CH2Cl2 및 H2O로 분획하여 얻은 유기층을 H2O 및 염수로 세척하고 황산마그네슘으로 건조시키고 여과한 후 감압 농축하였다. 상기 잔류물로부터 실리카겔 메쉬(mesh)를 준비하고, 이를 플래쉬크로마토그래피(용리액: EtOAc/hexane 혼합액)에 적용하여 목적화합물을 백색의 고체로 얻었다(77 mg, 41%).
1H NMR (DMSO-d 6, δ=2.5 ppm, 400 MHz): 9.03 (s, 1H), 8.89 (s, 1H), 7.77-7.57 (m, 10H), 7.40-7.32 (m, 10H), 5.46 (m, 2H), 3.99 (m, 1H), 3.76 (m, 1H), 3.56 (s, 3H), 3.54 (s, 3H), 3.48 (m, 1H), 3.21 (m, 1H), 2.18-2.08 (m, 2H), 1.91-1.80 (m, 6H), 1.55 (s, 3H), 1.43 (s, 3H);
13C NMR (DMSO-d 6, δ=39.52 ppm, 100 MHz): 171.8, 171.7, 168.2, 167.7, 156.4, 156.2, 138.2, 138.0, 137.2, 136.5, 134.7, 134.3, 128.7, 128.4, 128.22, 128.17, 127.70, 127.68, 126.09, 126.05, 120.9, 120.3, 67.6, 67.5, 57.2, 57.0, 51.7, 51.6, 47.7, 47.5, 23.5, 23.1, 20.6, 20.5;
LC/MS: Anal. Calcd. For [M+H]+ C44H48N6O8:789.3606; found 789.3600.
< 실시예 13> 다이메틸 ((1R,1'R)-((2S,2'S)-2,2'-(((9,9- 다이플루오로 -9H- 플루오렌 -2,7- 다이일 ) 비스 ( 아잔다이일 )) 비스 ( 카보닐 )) 비스 ( 피롤리딘 -2,1- 다이일 ))비스(2-옥소-1- 페닐에탄 -2,1- 디일 )) 다이카바메이트의 제조
단계 1 : (2S,2'S)- 다이 - tert -부틸 2,2'-(((9,9- 다이플루오로 -9H- 플루오렌 -2,7-다이일) 비스 ( 아잔다이일 )) 비스 ( 카보닐 )) 비스 ( 피롤리딘 -1- 카복시레이트 )의 제조
Figure 112014047142973-pat00029
CH2Cl2(1 mL)에 용해된 N-Boc-L-proline (24 mg, 0.11 mmol), EDC (24 mg, 0.12 mmol) 및 상기 제조예 3에서 얻은 9,9-디플루오로-9H-플루오렌-2,7-디아민(11 mg, 0.047 mmol) 혼합물을 주위온도(ambient temperature)에서 2시간 동안 혼합한 후, CH2Cl2 및 H2O을 사용하여 층 분리하였다. 유기층은 1 N aq HCl 용액과 브라인으로 세척하고, MgSO4로 건조한 후, 필터하고, 진공 내에서 농축하였다. 발뎌른 정화과정 없이, 목적생성물(28 mg, 95%)을 고체 형태로 얻었다.
1H NMR (DMSO-d 6, δ=2.5 ppm, 400 MHz): 10.29 (app br s, 2H), 8.06 (s, 1H), 8.02 (s, 1H), 7.69-7.66 (m, 4H), 4.30-4.25 (m, 1H), 4.21-4.18 (m, 1H), 3.45-3.41 (m, 2H), 3.37-3.34 (m, 2H), 2.23-2.16 (m, 2H), 1.92-1.80 (m, 6H), 1.40 (app br s, 9H), 1.27 (app br s, 9H).
13C NMR (DMSO-d6, δ=39.52 ppm, 100 MHz): 174.3, 173.9, 171.9, 171.5, 153.6, 153.1, 139.4, 133.56, 133.49, 122.8, 122.7, 121.2, 114.5, 114.4, 78.8, 78.6, 60.5, 59.3, 58.6, 46.6, 46.2, 46.1, 31.0, 30.3, 28.2, 28.0, 27.9, 27.7, 24.0, 23.4.
19F NMR (DMSO-d6, 377 MHz,): δ-108.9, -109.0.
LC/MS: Anal. Calcd. For [M+H]+ C33H40F2N4O6: 627.2989; found 627.2997.
단계 2 : 다이메틸 ((1R,1'R)-((2S,2'S)-2,2'-(((9,9- 다이플루오로 -9H- 플루오렌 -2,7- 다이일 ) 비스 ( 아잔다이일 )) 비스 ( 카보닐 )) 비스 ( 피롤리딘 -2,1- 다이일 )) 비스 (2-옥소-1- 페닐에탄 -2,1- 디일 )) 다이카바메이트의 제조
Figure 112014047142973-pat00030
CF3CO2H (1 mL) 및 CH2Cl2 (1 mL)에 용해된 상기 단계 1에서 얻은 (2S,2'S)-다이-tert-부틸 2,2'-(((9,9-다이플루오로-9H-플루오렌-2,7-다이일)비스(아잔다이일))비스(카보닐))비스(피롤리딘-1-카복시레이트)(27 mg, 0.043 mmol)를 상온에서 5시간 동안 혼합하였다. 휘발성분(volatile component)을 진공 내에서 제거하고, EDC (21 mg, 0.11 mmol), Cap (22 mg, 0.10 mmol)을 한 회분(batches) 4분 동안 CH2Cl2 (1 mL)에 용해된 i-Pr2NEt (28 mL, 0.22 mmol) 용액에 첨가한 후, 상기 반응 혼합물을 상온에서 75분 동안 혼합하였다. CH2Cl2 및 H2O를 사용하여 층 분리한 후, 유기층을 H2O 및 브라인으로 세척하고, MgSO4로 건조한 후, 필터하고, 진공 내에서 농축하였다. 잔여물(residue)로부터 실리카 겔 메시(mesh)를 준비하고, 플래시 크로마토그래피 (silica gel: EtOAc/hexane as eluent)를 통해 목적생성물(18 mg, 52%)을 고체 형태로 얻었다.
1H NMR (DMSO-d 6, δ=2.5 ppm, 400 MHz): 10.14 (s, 2H), 8.05 (s, 2H), 7.77 (d, 2H), 7.71 (s, 4H), 7.43-7.10 (m, 10H), 5.51 (d, 2H), 4.39 (m, 2H), 3.85 (m, 2H), 3.55 (s, 6H), 3.21 (m, 2H), 2.06-1.79 (m, 8H).
13C NMR (DMSO-d 6, δ=39.52 ppm, 100 MHz): 170.6, 168.5, 156.2, 139.3, 137.3, 137.0, 128.6, 128.4, 128.1, 127.9, 127.6, 122.8, 121.2, 114.5, 60.8, 56.7, 51.6, 47.0, 29.3, 24.3.
LC/MS: Anal. Calcd. For [M+H]+ C43H42F2N6O8: 809.3105; found 809.3109.
< 실시예 14> 다이메틸 ((1R,1'R)-((2S,2'S)-2,2'-(((9,9- 다이메틸 -9H- 플루오렌 -2,7- 다이일 ) 비스 ( 아잔다이일 )) 비스 ( 카보닐 )) 비스 ( 피롤리딘 -2,1- 다이일 )) 비스 (2-옥소-1- 페닐에탄 -2,1- 다이일 )) 다이카바메이트의 제조
단계 1 : (2S,2'S)- 다이 - tert -부틸 2,2'-(((9,9- 다이메틸 -9H- 플루오렌 -2,7-다이일) 비스 ( 아잔다이일 )) 비스 ( 카보닐 )) 비스 ( 피롤리딘 -1- 카복시레이트 )의 제조
Figure 112014047142973-pat00031
CH2Cl2 (1 mL)에 용해된 N-Boc-L-proline (173 mg, 0.80 mmol), EDC (167 mg, 0.87 mmol) 및 상기 제조예 2에서 얻은 9,9-디메틸-9H-플루오렌-2,7-디아민(75 mg, 0.33 mmol)의 혼합물을 주위온도(ambient temperature)에서 2시간 동안 혼합한 후, CH2Cl2 및 H2O를 사용하여 층 분리하였다. 유기층은 1 N aq HCl 및 브라인으로 세척하고, MgSO4로 건조한 후, 필터하고, 진공 내에서 농축하였다. 별다른 정화과정 없이, 목적생성물(201 mg, 97%)을 고체 형태로 얻었다.
1H NMR (DMSO-d 6, δ=2.5 ppm, 400 MHz): 10.10 (app br s, 2H), 7.84 (s, 1H), 7.79 (s, 1H), 7.66 (d, 2H), 7.51 (t, 2H), 4.31-4.28 (m, 1H), 4.24-4.21 (m, 1H), 3.44-3.40 (m, 2H), 3.37-3.31 (m, 2H), 2.21-2.16 (m, 2H), 1.95-1.80 (m, 6H), 1.40 (app br s, 9H), 1.34 (s, 6H), 1.28 (app br s, 9H).
13C NMR (DMSO-d6, δ=39.52 ppm, 100 MHz): 174.3, 173.9, 171.4, 171.0, 153.6, 153.2, 138.1, 138.0, 133.7, 133.6, 119.7, 118.4, 118.2, 113.8, 113.6, 78.6, 78.5, 60.4, 60.0, 46.6, 46.1, 42.2, 42.1, 31.0, 30.3, 28.2, 28.1, 27.9, 27.1, 24.0, 23.4.
LC/MS: Anal. Calcd. For [M+H]+ C35H42N4O6: 619.3490; found 619.3496.
단계 2 : 다이메틸 ((1R,1'R)-((2S,2'S)-2,2'-(((9,9- 다이메틸 -9H- 플루오렌 -2,7-다이일) 비스 ( 아잔다이일 )) 비스 ( 카보닐 )) 비스 ( 피롤리딘 -2,1- 다이일 )) 비스 (2-옥소-1- 페닐에탄 -2,1- 다이일 )) 다이카바메이트의 제조
Figure 112014047142973-pat00032
(2S,2'S)-다이-tert-부틸 2,2'-(((9,9-다이플루오로-9H-플루오렌-2,7-다이일)비스(아잔다이일))비스(카보닐))비스(피롤리딘-1-카복시레이트)를 사용하는 대신에, 상기 단계 1에서 얻은 (2S,2'S)-다이-tert-부틸 2,2'-(((9,9-다이메틸-9H-플루오렌-2,7-다이일)비스(아잔다이일))비스(카보닐))비스(피롤리딘-1-카복시레이트) (200 mg, 0.32 mmol)를 사용하는 것을 제외하고, 상기 실시예 13 단계 2와 동일한 방법으로 수행하여 목적생성물(135 mg, 53%)을 고체 형태로 얻었다.
1H NMR (DMSO-d 6, δ=2.5 ppm, 400 MHz): 9.96 (s, 2H), 7.86 (s, 2H), 7.74 (d, 2H), 7.69 (d, 2H), 7.51 (dd, 2H), 7.43-7.10 (m, 10H), 5.52 (d, 2H), 4.43 (m, 2H), 3.83 (m, 2H), 3.55 (s, 6H), 3.20 (m, 2H), 2.05-1.78 (m, 8H), 1.41 (s, 6H).
13C NMR (DMSO-d 6, δ=39.52 ppm, 100 MHz): 170.1, 168.3, 156.1, 153.7, 138.0, 137.2, 133.7, 128.6, 128.1, 127.8, 119.8, 118.3, 113.7, 60.7, 56.7, 51.6, 47.0, 46.5, 29.3, 27.2, 24.3.
LC/MS: Anal. Calcd. For [M+H]+ C45H48N6O8: 801.3606; found 801.3611.
< 실시예 15> 다이메틸 ((1R,1'R)-((2S,2'S)-2,2'-(((9-옥소-9H- 플루오렌 -2,7-다이일) 비스 ( 아잔다이일 )) 비스 ( 카보닐 )) 비스 ( 피롤리딘 -2,1- 다이일 )) 비스 (2-옥소-1- 페닐에탄 -2,1- 다이일 )) 다이카바메이트의 제조
단계 1 : (2S,2'S)- 다이 - tert -부틸 2,2'-(((9-옥소-9H- 플루오렌 -2,7- 다이일 )비스( 아잔다이일 )) 비스 ( 카보닐 )) 비스 ( 피롤리딘 -1- 카복시레이트 )의 제조
Figure 112014047142973-pat00033
CH2Cl2 (1 mL)에 용해된 N-Boc-L-proline (123 mg, 0.57 mmol), EDC (119 mg, 0.62 mmol) 및 상기 제조예 4에서 얻은 2,7-디아미노-9H-플루오렌-9-온 (50 mg, 0.24 mmol)를 주위온도(ambient temperature)에서 2시간 동안 혼합한 후, CH2Cl2 및 H2O를 사용하여 층 분리하였다. 유기층을 1 N aq HCl 용액 및 브라인으로 세척하고, MgSO4로 건조한 후, 필터하고, 진공 내에서 농축하였다. 별다른 정화과정 없이, 목적생성물(131 mg, 91%)을 고체 형태로 얻었다.
1H NMR (DMSO-d 6, δ=2.5 ppm, 400 MHz): 10.24 (s, 2H), 7.91 (m, 2H), 7.91 (m, 2H), 7.62 (m, 2H), 4.26-4.16 (m, 2H), 3.46-3.40 (m, 2H), 3.37-3.31 (m, 2H), 2.24-2.16 (m, 2H), 1.94-1.76 (m, 6H), 1.40 (app br s, 9H), 1.27 (app br s, 9H).
13C NMR (DMSO-d6, δ=39.52 ppm, 100 MHz): 192.9, 171.9, 171.4, 153.6, 153.1, 139.6, 138.8, 134.2, 125.0, 121.1, 115.0, 78.8, 78.6, 60.5, 60.1, 46.6, 46.1, 31.0, 30.2, 28.2, 28.0, 24.0, 23.4.
LC/MS: Anal. Calcd. For [M+H]+ C33H40N4O7: 605.2970; found 605.2980.
단계 2 : 다이메틸 ((1R,1'R)-((2S,2'S)-2,2'-(((9-옥소-9H- 플루오렌 -2,7- 다이일 ) 비스 ( 아잔다이일 )) 비스 ( 카보닐 )) 비스 ( 피롤리딘 -2,1- 다이일 )) 비스 (2-옥소-1- 페 닐에탄-2,1- 다이일 )) 다이카바메이트의 제조
Figure 112014047142973-pat00034
(2S,2'S)-다이-tert-부틸 2,2'-(((9,9-다이플루오로-9H-플루오렌-2,7-다이일)비스(아잔다이일))비스(카보닐))비스(피롤리딘-1-카복시레이트)를 사용하는 대신에, 상기 단계 1에서 얻은 (2S,2'S)-다이-tert-부틸 2,2'-(((9-옥소-9H-플루오렌-2,7-다이일)비스(아잔다이일))비스(카보닐))비스(피롤리딘-1-카복시레이트) (14 mg, 0.023 mmol)를 사용하는 것을 제외하고, 상기 실시예 13 단계 2와 동일한 방법으로 수행하여 목적생성물(12 mg, 66%)을 고체 형태로 얻었다.
1H NMR (DMSO-d 6, δ=2.5 ppm, 400 MHz): 10.10 (s, 2H), 7.91 (s, 2H), 7.76 (t, 4H), 7.64 (d, 2H), 7.43-7.10 (m, 10H), 5.51 (d, 2H), 4.39 (m, 2H), 3.85 (m, 2H), 3.55 (s, 6H), 3.20 (m, 2H), 2.05-1.79 (m, 8H).
13C NMR (DMSO-d 6, δ=39.52 ppm, 100 MHz): 192.8, 170.6, 168.5, 156.2, 139.5, 138.8, 137.1, 134.2, 128.6, 128.1, 127.9, 125.0, 121.1, 115.0, 60.8, 56.7, 51.7, 47.0, 29.3, 24.3.
LC/MS: Anal. Calcd. For [M+H]+ C43H42N6O9: 787.3086; found 787.3089.
이하, 하기 표 1에 실시예 1-15에서 제조한 화합물의 화학구조식을 나타내었다.
실시예 화학구조식 실시예 화학구조식
1
Figure 112014047142973-pat00035
 9
Figure 112014047142973-pat00036
2
Figure 112014047142973-pat00037
 10
Figure 112014047142973-pat00038
3
Figure 112014047142973-pat00039
 11
Figure 112014047142973-pat00040
4
Figure 112014047142973-pat00041
 12
Figure 112014047142973-pat00042
5
Figure 112014047142973-pat00043
 13
Figure 112014047142973-pat00044
6
Figure 112014047142973-pat00045
 14
Figure 112014047142973-pat00046
7
Figure 112014047142973-pat00047
 15
Figure 112014047142973-pat00048
8
Figure 112014047142973-pat00049
< 실험예 1> 항 C형 간염 바이러스 활성 평가 1
본 발명에 따른 화학식 1로 표시되는 실시예 화합물들의 항 C형 간염 바이러스 활성을 평가하기 위하여 하기와 같은 실험을 수행하였다.
12-웰 세포 배양 플레이트(cell culture plate)에 간암 세포주인 huh7.5.1 세포를 각 웰 당 약 5만 개씩 분주하였다. 분주된 세포는 10% (v/v)의 FBS(Fetal Bovine Serum SH30406.02, Hyclone Co.) 및 1% (v/v)의 항생제(페니실린/스트렙토마이신 용액 SV30010, Hyclone Co.)를 첨가한 DMEM 배양액(둘코스 개량 이글 배양액 12800-017, GIBCO Co.)을 이용하여 37℃의 6.0% 이산화탄소 세포 배양기(CO2 Incubator 311, Forma Scientific Co, Lnc. USA) 안에서 24시간 동안 배양하여 세포를 플레이트 바닥에 부착시켰다. 그 후, 리포터(reporter)로써 레닐라 루시페라아제 유전자(Renilla luciferase gene)를 가진 C형 간염 바이러스(JFH-5aFlucm4, PLoS One. 2011;6(8):e228808.)를 3시간 동안 분주된 세포에 접종하였다. 3시간의 바이러스 접종이 끝나면, 세포 배양액을 제거하고 본 발명에 따른 실시예 1 내지 실시예 15에서 제조된 화합물을 각각 1 μM의 농도로 배양액에 첨가하여 만든 새로운 세포 배양액을 각 웰에 주입하고, 37℃의 6.0% 이산화탄소 세포 배양기(CO2 Incubator 311, Forma Scientific Co, Lnc. USA) 안에서 3일 동안 배양하였다. 감염 3일 후에, 세포 배양액은 하기 <실험예 3>의 세포독성을 측정하기 위하여 따로 모아두었다. 플레이트에 부착되어 있는 세포를 인산 완충 용액(PBS, phosphate Buffered Saline)으로 세척하고 100 ㎕의 1X 간접 분해 버퍼(passive lysis buffer, promega, E1941)를 처리하여 용해시켰다. 용해된 세포액(10 ㎕)을 레닐라 루시페라아제 분석 시스템(Renilla Luciferase assay system, Promega, E2820)의 레닐라 루시페라아제 분석 시약(50 ㎕)에 주입하고 혼합하여 루미노미터(Luminometer, GLOMAX 20/20 Luminometer, Promega)에서 루시페라아제 측정(Luciferase measure) 프로그램을 이용하여 10초 동안 발광량(luminescence)을 측정하였다. 이때, 각각의 본 발명에 따른 실시예 1 내지 실시예 15의 화합물을 처리한 처리군 및 무처리군의 발광량을 3회씩 측정하여 그 평균을 비교 분석하였으며, 각 화합물의 농도에 따른 발광량을 시그마 플롯 프로그램(sigma plot program)을 이용하여 최대 50% 유효농도(hal maximal effective concentration, EC50)를 계산하여 하기 표 2에 나타냈다.
실시예 EC50 등급
1 C
2 A
3 A
4 B
5 A
6 A
7 A
8 C
9 A
10 C
11 C
12 C
13 A
14 A
15 B
상기 표 2에서,
A 등급은 EC50 1 nM 미만이고;
B 등급은 EC50 1 nM - 100 nM 이고;
C 등급은 EC50 100 nM 초과인 것을 나타낸다.
상기 표 2에 나타난 바와 같이, 본 발명에 따른 실시예 화합물들은 간암 세포주에 존재하는 C형 간염 바이러스에 대하여 항바이러스 효과가 있는 것으로 나타났다. 특히, 실시예 2, 3, 5, 6, 7, 9, 13 및 14는 최대 50% 유효농도(EC50)가 1 nM 이하로 나타나 매우 우수한 항바이러스 효과가 있는 것을 알 수 있었다.
따라서, 본 발명에 따른 실시예 화합물들은 C형 간염 바이러스에 대하여 항 C형 간염 바이러스 효과가 우수하므로, C형 간염 바이러스에 의해 발병되는 급성 C형 간염, 만성 C형 간염, 간경변 또는 간세포성 암과 같은 간질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.
< 실험예 2> 항 C형 간염 바이러스 활성 평가 2
본 발명에 따른 화학식 1로 표시되는 실시예 화합물들의 항 C형 간염 바이러스 활성, 즉 항복제 바이러스 활성을 평가하기 위하여 하기와 같은 실험을 수행하였다.
12-웰 세포 배양 플레이트에 C형 간염 바이러스의 복제 및 번역과정을 측정할 수 있는 레플리콘(replicon)인 NK/R2AN을 갖는 huh7.5.1 세포를 각 웰 당 약 5만 개 정도를 분주하였다. 분주된 세포는 최종농도가 10%(v/v)의 FBS(Fetal Bovine Serum SH30406.02, Hyclone Co.), 1%(v/v)의 항생제(페니실린/스트렙토마이신 용액 SV30010, Hyclone Co.) 및 G418(600 μg/mL, Calbiochem)을 첨가한 DMEM 배양액(둘코스 개량 이글 배양액 12800-017, GIBCO Co.)을 이용하여 37℃, 6.0% 이산화탄소 세포 배양기(CO2 Incubator 311, Forma Scientific Co, Lnc. USA) 안에서 24시간 동안 배양하여 세포를 플레이트 바닥에 부착시켰다. 그 후, 세포를 키우고 있던 세포 배양액을 제거하고 본 발명에 따른 실시예 1 내지 실시예 15에서 제조된 화합물을 각각 40 pM 내지 1μM의 농도로 배양액에 첨가하여 만든 새로운 세포 배양액을 각 웰에 주입하고, 37℃의 6.0% 이산화탄소 세포 배양기(CO2 Incubator 311, Forma Scientific Co, Lnc. USA) 안에서 3일 동안 배양하였다. 감염 3일 후에, 세포 배양액은 하기 <실험예 3>의 세포독성을 측정하기 위하여 따로 모아두었다. 상기 플레이트에 부착되어 있는 세포를 인산 완충 용액(PBS, phosphate Buffered Saline)으로 세척하고 100 ㎕의 1X 간접 분해 버퍼(passive lysis buffer, E1941)를 처리하여 용해시켰다. 용해된 세포액(10 ㎕)을 레닐라 루시페라아제 분석 시스템(Renilla Luciferase assay system, Promega, E2820)의 레닐라 루시페라아제 분석 시약(50 ㎕)에 주입하고 혼합하여 루미노미터(Luminometer, GLOMAX 20/20 Luminometer, Promega)에서 루시페라아제 측정(Luciferase measure) 프로그램을 이용하여 10초 동안 발광량(luminescence)을 측정하였다. 이때, 각각의 본 발명에 따른 실시예 1 내지 실시예 15의 화합물을 처리한 처리군 및 무처리군의 발광량을 3회씩 측정하여 그 평균을 비교 분석하였으며, 각 화합물의 농도에 따른 발광량을 시그마 플롯 프로그램(sigma plot program)을 이용하여 최대 50% 유효농도(hal maximal effective concentration, EC50)을 계산하여 하기 표 3에 나타내었다.
실시예 EC50 등급
1 C
2 A
3 A
4 A
5 A
6 A
7 A
8 C
9 A
10 C
11 D
12 C
13 A
14 A
15 A
상기 표 3에서,
A 등급은 EC50 100 pM 미만이고;
B 등급은 EC50 100 pM - 1 nM 이고;
C 등급은 EC50 1 nM - 100 nM이고;
D 등급은 EC50 100 nM 초과인 것을 나타낸다.
상기 표 3에 나타난 바와 같이, 본 발명에 따른 실시예 화합물들은 C형 간염 바이러스에 대하여 우수한 항바이러스 효과가 있는 것으로 확인되었다. 보다 구체적으로, 실시예 2, 3, 4, 5, 6, 7, 9, 13, 14 및 15에서 제조된 화합물은 EC50값이 100 pM 미만으로 나타나 C형 간염 바이러스에 대한 항바이러스 활성이 매우 뛰어난 것으로 확인되었다.
따라서, 본 발명에 따른 실시예 화합물들은 C형 간염 바이러스에 대하여 상당히 낮은 농도에서도 항 C형 간염 바이러스 효과가 현저히 우수하므로, C형 간염 바이러스에 의해 발병되는 급성 C형 간염, 만성 C형 간염, 간경변 또는 간세포성 암과 같은 간질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.
< 실험예 3> 세포독성 평가
본 발명에 따른 화학식 1로 표시되는 실시예 화합물들의 세포독성을 평가하기 위하여 하기와 같은 실험을 수행하였다.
세포독성 분석 키트(cytotoxicity assay kit, Lonza, LT07-117)의 사용법에 따라 각 웰 당 배양한 배지 20 ㎕를 취하고 AK 검출 시약(AK detection reagent, ToxiLight Non-destructive Cytotoxicity Bio Assay Kit LT07-117, Lonza Co., 100 ㎕)을 첨가하여 5분 동안 방치한 다음 빅터3(VICTOR3 TM wallaac 1420-051 Multiabel plate Counter, PerkinElmer Inc. Boston, MA, USA)로 월락 1420 워크스테이션(Wallac 1420 workstation) 프로그램을 이용하여 565 nm 파장에서, 1초 동안 발광하는 정도를 측정하였다. 본 발명에 따른 실시예 1 내지 실시예 12의 화합물 처리군 및 무처리군의 발광량을 비교분석하였다. 그 결과, 1μM의 농도로 처리한 경우 세포독성이 없는 것으로 확인되었으며 25μM의 농도로 처리할 경우에는 세포독성를 확인하는 키트의 형광이 565 nm에서 발광하는 것으로 확인되어 세포독성이 있는 것으로 알 수 있다. 이로부터, 본 발명에 따른 화학식 1로 표시되는 화합물은 세포독성으로 인한 부작용이 없는 것을 알 수 있다.
< 제제예 1> 산제의 제조
화학식 1의 화합물 2 g
유당 1 g
상기의 성분을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조하였다.
< 제제예 2> 정제의 제조
화학식 1의 화합물 100
옥수수전분 100
유당 100
스테아린산 마그네슘 2
상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조하였다.
< 제제예 3> 캡슐제의 제조
화학식 1의 화합물 100
옥수수전분 100
유당 100
스테아린산 마그네슘 2
상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 캡슐제의 제조방법에 따라서 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.
< 제제예 4> 주사제의 제조
화학식 1의 화합물 100
만니톨 180
Na2HPO42H2O 26
증류수 2974
통상적인 주사제의 제조방법에 따라, 상기 성분들을 제시된 함량으로 함유시켜 주사제를 제조하였다.
< 제제예 5> 건강기능식품의 제조
화학식 1의 화합물 1000
비타민 혼합물 적량
비타민 A 아세테이트 70
비타민 E 1.0
비타민 0.13
비타민 B2 0.15
비타민 B6 0.5
비타민 B12 0.2
비타민 C 10
비오틴 10
니코틴산아미드 1.7
엽산 50
판토텐산 칼슘 0.5
무기질 혼합물 적량
황산제1철 1.75
산화아연 0.82
탄산마그네슘 25.3
제1인산칼륨 15
제2인산칼슘 55
구연산칼륨 90
탄산칼슘 100
염화마그네슘 24.8
상기의 비타민 및 미네랄 혼합물의 조성비는 비교적 건강기능식품에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하며, 통상의 건강기능식품 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 과립을 제조하고, 통상의 방법에 따라 건강기능식품 조성물 제조에 사용할 수 있다.
< 제제예 6> 건강 음료의 제조
화학식 1의 화합물 1000
구연산 1000
올리고당 100 g
매실농축액 2 g
타우린 1 g
정제수를 가하여 전체 900
통상의 건강 음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 약 1시간 동안 85에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 2l 용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관한 다음 건강 음료 조성물 제조에 사용하였다.
상기 조성비는 비교적 기호 음료에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만 수요계층이나, 수요국가, 사용용도 등 지역적, 민족적 기호 도에 따라서 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하다.
< 제제예 7> 기타 건강기능식품의 제조
7-1. 음료의 제조
꿀 522
치옥토산아미드 5
니코틴산아미드 10
염산리보플라빈나트륨 3
염산피리독신 2
이노시톨 30
오르트산 50
화학식 1의 화합물 0.48-1.28
물 200
상기 조성 및 함량으로 하여 통상적인 방법을 사용하여 음료를 제조하였다.
7-2. 츄잉껌의 제조
껌베이스 20 %
설탕 76.36-76.76 %
화학식 1의 화합물 0.24-0.64 %
후르츠향 1 %
물 2 %
상기 조성 및 함량으로 하여 통상적인 방법을 사용하여 츄잉껌을 제조하였다.
7-3. 캔디의 제조
설탕 50-60 %
물엿 39.26-49.66 %
화학식 1의 화합물 0.24-0.64 %
오렌지향 0.1 %
상기 조성 및 함량으로 하여 통상적인 방법을 사용하여 캔디를 제조하였다.
7-4. 밀가루 식품의 제조
화학식 1의 벤지딘 유도체를 0.5 내지 5 중량부를 밀가루 100 중량부에 첨가하고, 이 혼합물을 이용하여 빵, 케이크, 쿠키, 크래커 및 면류를 제조하여 건강 증진용 식품을 제조하였다.
7-5. 유제품( dairy products )의 제조
화학식 1의 벤지딘 유도체를 5 내지 10 중량부를 우유 100 중량부에 첨가하고, 상기 우유를 이용하여 버터 및 아이스크림과 같은 다양한 유제품을 제조하였다.
7-6. 선식의 제조
현미 30 %
율무 15 %
보리 20 %
들깨 7 %
검정콩 7 %
검은깨 7 %
화학식 1의 화합물 3 %
영지 0.5 %
지황 0.5 %
현미, 보리, 찹쌀, 율무를 공지의 방법으로 알파화 시켜서 건조한 것을 배전한 후 분쇄기로 입도 60 메시의 분말로 제조하였다. 검은콩, 검정깨, 들깨도 공지의 방법으로 쪄서 건조한 것을 배전한 후 분쇄기로 입도 60 메시의 분말로 제조하였다. 분말로 분쇄된 곡물류 및 종실류와 본 발명의 화학식 1의 벤지딘 유도체를 상기와 같은 비율로 배합하여 제조하였다.

Claims (10)

  1. 하기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 광학 이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염:
    [화학식 1]
    Figure 112014047142973-pat00050

    (상기 화학식 1에서,
    R1 및 R2는 독립적으로 -H, -OH, 할로겐, C1 -10의 직쇄 또는 측쇄 알킬, C1 -10의 직쇄 또는 측쇄 알콕시, 비치환 또는 치환된 C6 -10의 아릴, 또는 -NHC(=O)R12이고,
    여기서, 상기 치환된 C6 -10의 아릴은 C1 -5의 직쇄 또는 측쇄 알킬, C1 -5의 직쇄 또는 측쇄 알콕시 및 할로겐으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기가 치환될 수 있고,
    또한, 상기 R12는 -H, 또는 C1 -5의 직쇄 또는 측쇄 알콕시이고;

    R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, 및 R10은 독립적으로 -H, 할로겐, 비치환 또는 하나 이상의 할로겐이 치환된 C1 -5의 직쇄 또는 측쇄 알킬이고,
    여기서, 상기 R4와 R7, 또는 R6과 R9는 이들이 함께 연결되어 있는 탄소 원자들과 함께 C5 -6의 고리를 형성할 수 있고, 상기 C5 -6의 고리에는 할로겐, C1 -5 직쇄 또는 측쇄 알킬 및 =O로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기가 치환될 수 있고;

    R11은 -H, -OH, 할로겐, C1 -10의 직쇄 또는 측쇄 알킬, C1 -10의 직쇄 또는 측쇄 알콕시, 또는 =O이고;

    Figure 112014047142973-pat00051
    는 단일 또는 이중결합이고;

    a는 0-3의 정수이다).
  2. 제1항에 있어서,
    R1 및 R2는 독립적으로 -H, -OH, 할로겐, C1 -5의 직쇄 또는 측쇄 알킬, C1 -5의 직쇄 또는 측쇄 알콕시, 비치환 또는 치환된 C6 -8의 아릴, 또는 -NHC(=O)R12이고,
    여기서, 상기 치환된 C6 -8의 아릴은 C1 -3의 직쇄 또는 측쇄 알킬, C1 -3의 직쇄 또는 측쇄 알콕시 및 할로겐으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기가 치환될 수 있고,
    또한, 상기 R12는 -H, 또는 C1 -3의 직쇄 또는 측쇄 알콕시이고;

    R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, 및 R10은 독립적으로 -H, 할로겐, 비치환 또는 하나 이상의 할로겐이 치환된 C1 -3의 직쇄 또는 측쇄 알킬이고,
    여기서, 상기 R4와 R7, 또는 R6과 R9는 이들이 함께 연결되어 있는 탄소 원자들과 함께 C5 -6의 고리를 형성할 수 있고, 상기 C5 -6의 고리에는 할로겐, C1 -3 직쇄 또는 측쇄 알킬 및 =O로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기가 치환될 수 있고;

    R11은 -H, -OH, 할로겐, C1 -5의 직쇄 또는 측쇄 알킬, C1 -5의 직쇄 또는 측쇄 알콕시, 또는 =O이고;

    Figure 112014047142973-pat00052
    는 단일 또는 이중결합이고;

    a는 0-2의 정수인 것을 특징으로 하는 화합물, 이의 광학 이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
  3. 제1항에 있어서,
    R1 및 R2는 독립적으로 페닐, 또는 메톡시카보닐아미노이고;

    R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9 및 R10은 독립적으로 -H, -F, -Cl, -Br, -CF3, 또는 메틸이고,
    여기서, 상기 R4와 R7, 또는 R6과 R9는 이들이 함께 연결되어 있는 탄소 원자들과 함께 C5의 고리를 형성할 수 있고, 상기 C5의 고리에는 -F, =O 및 메틸로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기가 치환될 수 있고;

    R11은 -H, 또는 =O이고;

    Figure 112014047142973-pat00053
    는 단일 또는 이중결합이고;

    a는 0-1의 정수인 것을 특징으로 하는 화합물, 이의 광학 이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
  4. 제1항에 있어서,
    상기 화학식 1로 표시되는 화합물은 하기의 화합물 군으로부터 선택되는 어느 하나인 것을 특징으로 하는 화합물, 이의 광학 이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염:
    (1) 다이메틸 ((1R,1'R)-((2S,2'S)-2,2'-(((3,3'-다이메틸-[1,1'-바이페닐]-4,4'-다이일)비스(아잔다이일))비스(카보닐))비스(피롤리딘-2,1-다이일))비스(2-옥소-1-페닐에탄-2,1-다이일))다이카바메이트;
    (2) 다이메틸 ((1R,1'R)-((2S,2'S)-2,2'-(((2,2'-비스(트리플루오로메틸)-[1,1'-바이페닐]-4,4'-다이일)비스(아잔다이일))비스(카보닐))비스(피롤리딘-2,1-다이일))비스(2-옥소-1-페닐에탄-2,1-다이일))다이카바메이트;
    (3) 다이메틸 ((1R,1'R)-((2S,2'S)-2,2'-(((2,2'-다이메틸-[1,1'-바이페닐]-4,4'-다이일)비스(아잔다이일))비스(카보닐))비스(피롤리딘-2,1-다이일))비스(2-옥소-1-페닐에탄-2,1-다이일))다이카바메이트;
    (4) 다이메틸 ((1R,1'R)-((2S,2'S)-2,2'-(((9H-플루오렌-2,7-다이일)비스(아잔다이일))비스(카보닐))비스(피롤리딘-2,1-다이일))비스(2-옥소-1-페닐에탄-2,1-다이일))다이카바메이트;
    (5) 다이메틸 ((1R,1'R)-((2S,2'S)-2,2'-(((2,2'-다이플루오로-[1,1'-바이페닐]-4,4'-다이일)비스(아잔다이일))비스(카보닐))비스(피롤리딘-2,1-다이일))비스(2-옥소-1-페닐에탄-2,1-다이일))다이카바메이트;
    (6) 다이메틸 ((1R,1'R)-((2S,2'S)-2,2'-(((2,2'-다이클로로-[1,1'-바이페닐]-4,4'-다이일)비스(아잔다이일))비스(카보닐))비스(피롤리딘-2,1-다이일))비스(2-옥소-1-페닐에탄-2,1-다이일))다이카바메이트;
    (7) 다이메틸 ((1R,1'R)-((2S,2'S)-2,2'-(((2,2'-다이브로모-[1,1'-바이페닐]-4,4'-다이일)비스(아잔다이일))비스(카보닐))비스(피롤리딘-2,1-다이일))비스(2-옥소-1-페닐에탄-2,1-다이일))다이카바메이트;
    (8) 다이메틸 ((1R,1'R)-((2R,2'R)-2,2'-(([1,1'-바이페닐]-4,4'-다이일비스(아잔다이일))비스(카보닐))비스(피롤리딘-2,1-다이일))비스(2-옥소-1-페닐에탄-2,1-다이일))다이카바메이트;
    (9) 다이메틸 ((1R,1'R)-((5S,5'S)-5,5'-(([1,1'-바이페닐]-4,4'-다이일비스(아잔다이일))비스(카보닐))비스(3-옥소피롤리딘-5,1-다이일))비스(2-옥소-1-페닐에탄-2,1-다이일))다이카바메이트;
    (10) 다이메틸 ((1R,1'R)-((2S,2'S)-2,2'-(([1,1'-바이페닐]-4,4'-다이일비스(아잔다이일))비스(카보닐))비스(피페리딘-2,1-다이일))비스(2-옥소-1-페닐에탄-2,1-다이일))다이카바메이트;
    (11) 다이메틸 ((1R,1'R)-((2R,2'R)-2,2'-(([1,1'-바이페닐]-4,4'-다이일비스(아잔다이일))비스(카보닐))비스(피페리딘-2,1-다이일))비스(2-옥소-1-페닐에탄-2,1-다이일))다이카바메이트;
    (12) 다이메틸 ((1R,1'R)-((2S,2'S)-2,2'-(([1,1'-바이페닐]-4,4'-다이일비스(아잔다이일))비스(카보닐))비스(2-메틸피롤리딘-2,1-다이일))비스(2-옥소-1-페닐에탄-2,1-다이일))다이카바메이트;
    (13) 다이메틸 ((1R,1'R)-((2S,2'S)-2,2'-(((9,9-다이플루오로-9H-플루오렌-2,7-다이일)비스(아잔다이일))비스(카보닐))비스(피롤리딘-2,1-다이일))비스(2-옥소-1-페닐에탄-2,1-디일))다이카바메이트;
    (14) 다이메틸 ((1R,1'R)-((2S,2'S)-2,2'-(((9,9-다이메틸-9H-플루오렌-2,7-다이일)비스(아잔다이일))비스(카보닐))비스(피롤리딘-2,1-다이일))비스(2-옥소-1-페닐에탄-2,1-다이일))다이카바메이트; 및
    (15) 다이메틸 ((1R,1'R)-((2S,2'S)-2,2'-(((9-옥소-9H-플루오렌-2,7-다이일)비스(아잔다이일))비스(카보닐))비스(피롤리딘-2,1-다이일))비스(2-옥소-1-페닐에탄-2,1-다이일))다이카바메이트.
  5. 하기 반응식 1에 나타난 바와 같이,
    화학식 2로 표시되는 화합물과 화학식 3으로 표시되는 화합물을 유기용매에서 반응시켜 화학식 4로 표시되는 화합물을 제조하는 단계(단계 1);
    상기 단계 1에서 제조된 화학식 4로 표시되는 화합물의 보호기를 제거하여 화학식 5로 표시되는 화합물을 제조하는 단계(단계 2); 및
    상기 단계 2에서 제조된 화학식 5로 표시되는 화합물과 화학식 6으로 표시되는 화합물을 반응시켜 화학식 1로 표시되는 화합물을 제조하는 단계(단계 3);를 포함하는 것을 특징으로 하는 제1항의 화학식 1로 표시되는 화합물의 제조방법:
    [반응식 1]
    Figure 112014047142973-pat00054

    (상기 반응식 1에서,
    R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10, R11, a, 및
    Figure 112014047142973-pat00055
    는 제1항의 화학식 1에서 정의한 바와 같고;
    PG는 보호기이다).
  6. 제5항에 있어서,
    상기 단계 1의 유기용매는 메탄올, 다이메틸포름아마이드, 테트라하이드로퓨란, 다이클로로메탄, 및 톨루엔으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상인 것을 특징으로 하는 제조방법.
  7. 제1항의 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 광학 이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 C형 간염 바이러스에 의한 간질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  8. 제7항에 있어서,
    상기 C형 간염 바이러스에 의한 간질환은 급성 C형 간염, 만성 C형 간염, 간경변 및 간세포성 암으로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종인 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
  9. 제1항의 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 광학 이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 C형 간염 바이러스에 의한 간질환 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물.
  10. 제9항에 있어서,
    상기 C형 간염 바이러스에 의한 간질환은 급성 C형 간염, 만성 C형 간염, 간경변 및 간세포성 암으로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종인 것을 특징으로 하는 건강기능식품 조성물.
KR1020140060213A 2013-12-03 2014-05-20 벤지딘 유도체, 이의 제조방법 및 이를 함유하는 c형 간염 바이러스에 의한 간질환 치료용 약학적 조성물 KR101628933B1 (ko)

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