WO2019059687A1 - 플루오렌 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 이의 제조방법 및 이를 유효성분으로 포함하는 hcv 관련 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 - Google Patents

플루오렌 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 이의 제조방법 및 이를 유효성분으로 포함하는 hcv 관련 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 Download PDF

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chemical formula
hcv
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김병문
장승기
유영수
배일학
문희조
김병욱
김희선
문재곤
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서울대학교 산학협력단
포항공과대학교 산학협력단
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Definitions

  • the present invention relates to a fluorene derivative or a pharmaceutically acceptable salt thereof, a process for producing the same, and a pharmaceutical composition for preventing or treating HCV-related diseases containing the same as an active ingredient.
  • HCV Hepatitis C Virus
  • the genome of HCV is (+) RNA (plus-strand RNA), which is 9.6 kb in size and expresses a poly-protein composed of 3,010 amino acids.
  • the multiprotein is separated into three structural proteins and six nonstructural proteins by the enzymes of the host cell and the virus.
  • the HCV genome there are untranslated regions in which the nucleotide sequences of almost all genotypes remain the same.
  • the 5 'end there are 330 to 341 nucleotides.
  • 98 nucleotides are found behind poly A (poly A), which is presumed to play an important role in RNA replication and translation of the virus.
  • the viral RNA is made into the viral structural proteins Core, E1, and E2 after intracellular translation, and the rest of the viral structural proteins are made into nonstructural proteins.
  • the structural proteins consist of core, E1, and E2, which constitute the envelope of the virus.
  • Nonstructural proteins are separated by a signal peptidase present in the ER (endoplasmic reticulum) after translation.
  • Nonstructural proteins are separated by the serine protease, NS3, and the cofactor, NS4A. Separated non-proteins play an important role in viral RNA replication and assembly and release processes.
  • NS5B has an RNA-dependent RNA polymerase, NS5A, It is a necessary protein.
  • HCV infection is reported to be caused by transfusion and community-acquired, and about 70% is transmitted by kidney dialysis. Once infected with HCV, about 20% of patients are known to develop acute hepatitis with liver cirrhosis within 5 years and to metastasis to liver cancer (Davis et al, New. Engl. J. Med., [ 0010] 321 (1989) 1501) and Non-Patent Document 2 (Alter et al., Leonard et al., Current Pespective in Hepatology, (1989) p. This high rate of chronic infection is rare in RNA viruses and is evidence that HCV is a mediator of high rates of liver cancer. In recent years, HCV has been well screened for all blood, so transfusion-induced infections are significantly reduced. However, regional-specific infections are recognized as an important issue worldwide because of the high infection rates due to ineffective management.
  • HCV hepatitis B virus
  • HCV attached to the surface of the host cell invades into the host cell by endocytosis. Thereafter, a precursor protein consisting of approximately 3,000 amino acid residues is generated from the HCV RNA that has entered the host cell.
  • NS3 and NS4 proteases with the signal peptidase of the HCV genome or host cell to generate capsid protein, envelope protein, NS3 and NS4 protease, NS5A protein and NS5B RNA About 10 viral proteins such as polymerase are produced.
  • HCV RNA cloned by the NS5B polymerase is assembled with capsid proteins and envelope proteins modified from ⁇ -glucosidase in ER to become viral particles. Thereafter, the HCV particles are released from the host cells (see Manns MP, et al., Nat. Rev. Drug. Discov., 6, (2007), 991).
  • HCV could not be infected or propagated in cultured cells.
  • a limited development in 1999 led to the development of a system in which transfection of HCV RNA was performed by transfection of the HCV RNA portion encoding non-structural proteins into the liver cancer cell line, It is called replicon.
  • the use of replicon has enabled the in vitro screening of drugs that inhibit HCV proliferation (see Non-Patent Document 5 (Trend of Hepatitis C virus Research, Korean Society of Biochemistry and Molecular Biology, 2013, 12)).
  • HCV RNA containing a structural protein was transfected with a non-structural part of JFH-1 as a backbone by selectively selecting HCV-cloned liver cancer cell lines HCV infection models have been established in in vitro cell culture.
  • HCV obtained from the cultured cells was called HCVcc (cc is derived from cell culture).
  • HCVcc has also been reported to cause HCV infection in chimpanzees, confirming the success of the cell culture HCV infection model.
  • In vitro transfection of JFH-1 RNA into liver cancer cell lines has shown that HCVcc can be obtained and HCVcc obtained can again infect liver cancer cells.
  • the success of these cell culture HCV infection models further accelerates recent HCV studies and accelerates new discoveries (see Non-Patent Literature 5, Trends in Hepatitis C Virus, Korean Biochemistry Molecular Biology Society, 2013, 12).
  • the present invention provides a pharmaceutical composition for preventing or treating HCV-related liver diseases containing the compound represented by the formula (1), an optical isomer thereof or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.
  • the present invention provides a compound represented by the following general formula (1), an optical isomer thereof or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
  • R 3 is a straight chain or branched C 1-10 alkyl or C 6-10 aryl
  • R < 4 &gt may be hydrogen or taken together with any of R < 5 > and R < 6 > and the C atom to which they are attached may form a C3-7 cycloalkyl;
  • R 1 is a C 2-6 straight-chain alkyl of one or more substituted with halogen or unsubstituted;
  • R 3 is linear or branched C 1-6 alkyl or phenyl
  • R 3 is linear or branched C 1-4 alkyl or phenyl
  • R < 4 &gt may be hydrogen or form cyclopropyl or cyclopentyl with either R < 5 > and R < 6 > and the C atom to which they are attached;
  • X is , or At least one of X must be or ego;
  • R 1 is -CH 2 CH 3, - (CH 2) 2 CH 3, - (CH 2) 3 CH 3, - (CH 2) 4 CH 3, - (CH 2) 3 CF 3 or - (CH 2) 4 CF 3 ;
  • R 2 is ego
  • R < 4 &gt may be hydrogen or form cyclopentyl with any of R < 5 > and R < 6 > and the C atom to which they are attached;
  • R 5 and R 6 are each independently selected from the group consisting of hydrogen, -OH, -F, -OCH 3 , -CH 2 OCH 3 , -O (CH 2 ) 2 OCH 3 , or Or together with the C atoms to which they are attached form a carbonyl, cyclopropyl or 1,3-dioxolanyl.
  • R 1 , R 4 , R 5 and R 6 are as defined in Formula 1;
  • PG is selected from the group consisting of t-butyloxycarbonyl (BOC), carbobenzyloxy (Cbz), 9-fluorenylmethyloxycarbonyl (Fmoc), acetyl (Ac), benzoyl (Bz) (PMB), 3,4-dimethoxybenzyl (DMPM), p-methoxyphenyl (PMP), tosyl (Ts), 2,2,2- trichloroethoxycarbonyl (Troc)
  • BOC t-butyloxycarbonyl
  • Cbz carbobenzyloxy
  • Fmoc 9-fluorenylmethyloxycarbonyl
  • Ac benzoyl (Bz)
  • PMB 3,4-dimethoxybenzyl
  • DMPM 3,4-dimethoxybenzyl
  • PMP p-methoxyphenyl
  • Ts 2,2,2- trichloroethoxycarbonyl
  • Troc An amine protection group selected from the
  • the step 2 is a step of reacting the compound represented by the formula 6 and the compound represented by the formula 7 to obtain the compound represented by the formula 8
  • Step 3 is a step of reacting the compound represented by Formula 8 and the compound represented by Formula 9 obtained in Step 2 to prepare a compound represented by Formula 10,
  • the halogen of the compound to be displayed is reacted with the amine of the phthalimide compound represented by the formula (7) to produce a compound having the phthalimide bonded thereto represented by the formula (8), and then the hydrazine compound represented by the formula To produce a primary amine.
  • the condensing agent may be bis (2-oxo-3-oxazolidinyl) phosphinic chloride (BOP-Cl), benzotriazol-1-yloxytris (dimethylamino) phosphonium hexafluorophosphate Dicyclohexylcarbodiimide (DCC), diisopropylcarbodiimide (DIC), 1-ethyl-3- (3-methylphenyl) (N, N-carbonyldiimidazole), O- benzotriazole-N, N, N ', N (N, N'-diethylaminopropyl) carbodiimide '-Tetramethyl-uronium-hexafluorophosphate (HBTU) may be used alone or in combination.
  • BOP-Cl bis (2-oxo-3-oxazolidinyl) phosphinic chloride
  • DCC dicyclohexylcarbodiimide
  • DIC diisoprop
  • ether solvents such as tetrahydrofuran, dioxane and 1,2-dimethoxyethane
  • aromatic hydrocarbon solvents such as benzene, toluene and xylene
  • Lower alcohol dimethylformamide (DMF), dimethylsulfoxide (DMSO), acetonitrile, water and the like, which may be used alone or in combination.
  • DMF dimethylformamide
  • DMSO dimethylsulfoxide
  • acetonitrile water and the like
  • step 1 Reacting a compound represented by the formula (12) with a compound represented by the formula (5) to prepare a compound represented by the formula (13) (step 1);
  • step 2 Reacting the compound represented by the formula (13) and the compound represented by the formula (9) obtained in the above step 1 to prepare a compound represented by the formula (10) (step 2);
  • step 3 a step of reacting the compound represented by the formula (10) and the compound represented by the formula (11) obtained in the step 2 to prepare a compound represented by the formula (2a) (step 3).
  • PG is selected from the group consisting of t-butyloxycarbonyl (BOC), carbobenzyloxy (Cbz), 9-fluorenylmethyloxycarbonyl (Fmoc), acetyl (Ac), benzoyl (Bz) (PMB), 3,4-dimethoxybenzyl (DMPM), p-methoxyphenyl (PMP), tosyl (Ts), 2,2,2- trichloroethoxycarbonyl (Troc)
  • BOC t-butyloxycarbonyl
  • Cbz carbobenzyloxy
  • Fmoc 9-fluorenylmethyloxycarbonyl
  • Ac benzoyl (Bz)
  • PMB 3,4-dimethoxybenzyl
  • DMPM 3,4-dimethoxybenzyl
  • PMP p-methoxyphenyl
  • Ts 2,2,2- trichloroethoxycarbonyl
  • Troc An amine protection group selected from the
  • Y 2 is halogen
  • the step 1 is a step of reacting a compound represented by the formula (12) with a compound represented by the formula (5) to prepare a compound represented by the formula (13). Specifically, it is a step of preparing a compound represented by the formula (13) wherein alkyl is introduced through an alkylation reaction in the presence of a base.
  • the base may include N, N-dimethylaminopyridine (DMAP), pyridine, triethylamine, N, N-diisopropylethylamine, 1,8-diazabicyclo [5.4.0] (DBU) or an inorganic base such as sodium bicarbonate, sodium hydroxide, potassium hydroxide, cesium carbonate, etc., can be used alone or in combination, in an amount or in an excess amount. In the present invention, cesium carbonate is used, But is not limited thereto.
  • DMAP N-dimethylaminopyridine
  • DBU 1,8-diazabicyclo [5.4.0]
  • an inorganic base such as sodium bicarbonate, sodium hydroxide, potassium hydroxide, cesium carbonate, etc.
  • solvent usable in the above reaction examples include ether solvents such as tetrahydrofuran, dioxane and 1,2-dimethoxyethane, aromatic hydrocarbon solvents such as benzene, toluene and xylene, lower alcohols such as methanol, ethanol, , Dimethylformamide (DMF), dimethylsulfoxide (DMSO), acetonitrile, water and the like, which can be used alone or in combination.
  • ether solvents such as tetrahydrofuran, dioxane and 1,2-dimethoxyethane
  • aromatic hydrocarbon solvents such as benzene, toluene and xylene
  • lower alcohols such as methanol, ethanol, , Dimethylformamide (DMF), dimethylsulfoxide (DMSO), acetonitrile, water and the like, which can be used alone or in combination.
  • DMF Dimethylformamide
  • DMSO dimethylsulfoxide
  • acetonitrile
  • Step 2 is a step of reacting a compound represented by Formula 13 and a compound represented by Formula 9 to obtain a compound represented by Formula 10 Specifically, the step of reducing the nitro (NO 2 ) of the compound represented by the formula (13) in the presence of the metal catalyst and the hydrazine compound represented by the formula (9) is a step for producing a primary amine.
  • the step 2 may be carried out by a method known to those skilled in the art, such as reduction of a general nitro group to an amine. In the present invention, however, the present invention is not limited thereto.
  • Step 3 is a step of reacting the compound represented by Formula 10 and the compound represented by Formula 11 obtained in Step 2 to prepare a compound represented by Formula 2a Lt;
  • Step 3 The detailed description of Step 3 is the same as Step 4 of the production method shown in the above Reaction Scheme 2.
  • step 2 Reacting the compound represented by the formula (15) and the compound represented by the formula (16) obtained in the above step 1 to prepare a compound represented by the formula (17) (step 2);
  • step 3 Reacting the compound represented by the formula (17) and the compound represented by the formula (11) obtained in the step 2 to prepare a compound represented by the formula (18) (step 3);
  • step 4 Reacting a compound represented by the formula 18 obtained in the above step 3 to prepare a compound represented by the formula 19 (step 4);
  • Step 6 And reacting the compound of Formula 20 and the compound of Formula 11 obtained in Step 5 to prepare a compound of Formula 2b (Step 6).
  • R 1 , R 4 , R 5 and R 6 are as defined in Formula 1;
  • PG is selected from the group consisting of t-butyloxycarbonyl (BOC), carbobenzyloxy (Cbz), 9-fluorenylmethyloxycarbonyl (Fmoc), acetyl (Ac), benzoyl (Bz) (PMB), 3,4-dimethoxybenzyl (DMPM), p-methoxyphenyl (PMP), tosyl (Ts), 2,2,2- trichloroethoxycarbonyl (Troc)
  • BOC t-butyloxycarbonyl
  • Cbz carbobenzyloxy
  • Fmoc 9-fluorenylmethyloxycarbonyl
  • Ac benzoyl (Bz)
  • PMB 3,4-dimethoxybenzyl
  • DMPM 3,4-dimethoxybenzyl
  • PMP p-methoxyphenyl
  • Ts 2,2,2- trichloroethoxycarbonyl
  • Troc An amine protection group selected from the
  • Y 2 is halogen
  • the step 6 is a step of reacting the compound represented by the formula 20 and the compound represented by the formula 11 obtained in the step 5 to prepare a compound represented by the formula 2b to be.
  • the HCV mutation may be L31V, Y93H or L31V + Y93H (double mutation), but is not limited thereto, but is not limited thereto.
  • the HCV-related liver disease may be one or more liver diseases selected from the group consisting of acute hepatitis C, chronic hepatitis C, cirrhosis and hepatocellular carcinoma.
  • the HCV-related liver disease may be one in which an HCV mutation has occurred.
  • the pharmaceutical composition of the present invention suppresses not only single mutants L31V and Y93H but also L31V + Y93H (double mutation) showing stronger resistance at a low concentration, so that a single mutation as well as double or multiple mutations can be targeted And can be usefully used as a pharmaceutical composition for preventing or treating HCV-related liver diseases that solves the problem of resistance mutation of existing therapeutic agents.
  • composition of the present invention When the composition of the present invention is used as a medicine, the pharmaceutical composition containing the compound represented by the formula (1) or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient can be administered orally or parenterally May be formulated and administered, but the present invention is not limited thereto.
  • formulations for oral administration include tablets, pills, light / soft capsules, liquids, suspensions, emulsions, syrups, granules, elixirs and troches, (E.g., silica, talc, stearic acid or a magnesium salt or a calcium salt and / or polyethylene glycol), and the like.
  • the tablets may also contain binders such as magnesium aluminum silicate, starch paste, gelatin, methylcellulose, sodium carboxymethylcellulose and / or polyvinylpyrrolidine, optionally mixed with starch, agar, alginic acid or its sodium salt The same disintegrating or boiling mixture and / or absorbing agent, coloring agent, flavoring agent and sweetening agent.
  • the biphenyl diamide derivative of the above formula (1) or a pharmaceutically acceptable salt thereof is mixed with water or a stabilizer or a buffer to prepare a solution or suspension, which is then mixed with an ampule or vial unit May be prepared in dosage forms.
  • the compositions may contain sterilized and / or preservatives, stabilizers, wettable or emulsifying accelerators, adjuvants such as salts and / or buffers for the control of osmotic pressure, and other therapeutically useful substances, Or may be formulated according to the coating method.
  • the present invention provides a health functional food composition for preventing or ameliorating HCV-related liver diseases containing the compound represented by the formula (1) of the present invention, an optical isomer thereof or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.
  • the compound represented by formula (I) of the health functional food composition shows an antiviral effect against HCV (hepatitis C virus) or HCV mutation.
  • the HCV mutation may be L31V, Y93H or L31V + Y93H (double mutation), but is not limited thereto, but is not limited thereto.
  • the HCV-related liver disease may be one or more liver diseases selected from the group consisting of acute hepatitis C, chronic hepatitis C, cirrhosis and hepatocellular carcinoma.
  • the HCV-related liver disease may be one in which an HCV mutation has occurred.
  • the health functional food according to the present invention can be used for the prevention or amelioration of hepatic diseases caused by HCV.
  • the compound represented by the formula (1), its pharmaceutically acceptable salt or an optical isomer thereof is used as a health functional food ≪ / RTI >
  • the kind of the food There is no particular limitation on the kind of the food.
  • the foods to which the above substances can be added include dairy products including dairy products, meat, sausage, bread, biscuits, rice cakes, chocolate, candies, snacks, confectionery, pizza, ramen and other noodles, gums, ice cream, Beverages, alcoholic beverages and vitamin complexes, dairy products, and dairy products, all of which include health functional foods in a conventional sense.
  • the compound represented by the formula (1) according to the present invention, a pharmaceutically acceptable salt thereof or an optical isomer thereof can be directly added to the food or can be used together with other food or food ingredients, and can be suitably used according to a conventional method.
  • the amount of the active ingredient to be mixed can be suitably determined according to the intended use (for prevention or improvement).
  • the amount of the compound in the health functional food may be 0.1 to 90 parts by weight based on the total weight of the food.
  • the amount may be less than the above range, and since there is no problem in terms of safety, the active ingredient may be used in an amount exceeding the above range.
  • the health functional beverage of the present invention is not particularly limited to the other ingredients other than the above-mentioned compounds as essential ingredients in the indicated ratios and may contain various flavors or natural carbohydrates as additional ingredients such as ordinary beverages.
  • natural carbohydrates include monosaccharides such as glucose, fructose and the like; Daisakaride, for example Maltose, sucrose etc; And polysaccharides such as dextrin, cyclodextrin and the like, and sugar alcohols such as xylitol, sorbitol, and erythritol.
  • Natural flavors e.g., tau martin, stevia extract, etc.
  • synthetic flavorings e.g., saccharin, aspartame, etc.
  • the ratio of the natural carbohydrate is generally about 1 to 20 g, preferably about 5 to 12 g per 100 healthy function foods of the present invention.
  • the health functional food containing the compound represented by the formula (I) according to the present invention, the pharmaceutically acceptable salt thereof or the optical isomer thereof as an active ingredient is useful as various nutrients, vitamins, minerals (electrolytes) (For example, cheese, chocolate, etc.), pectic acid and its salts, alginic acid and its salts, organic acids, protective colloid thickeners, pH adjusting agents, stabilizers, preservatives, glycerin, Alcohols, carbonating agents used in carbonated drinks, and the like.
  • the health functional food of the present invention may contain natural fruit juice and pulp for the production of fruit juice drinks and vegetable drinks.
  • the proportion of such additives is not so important, but is generally selected in the range of 0.1 to about 20 parts by weight per 100 parts by weight of the health functional food according to the present invention.
  • the present invention provides a method for preparing a pharmaceutical composition or a health functional food comprising the compound represented by the formula 1, an isomer thereof, a solvate thereof, a hydrate thereof or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient,
  • the present invention provides a method for preventing or treating HCV-related liver diseases.
  • the present invention relates to a pharmaceutical composition or a pharmaceutical composition comprising a compound represented by the above-mentioned formula (1), an isomer thereof, a solvate thereof, a hydrate thereof or a pharmaceutically acceptable salt thereof in the prevention or treatment of HCV- Provides the use of food.
  • Step 2 Preparation of 1- (7-nitro-9,9-dipropyl-9H-fluoren-2-yl) ethan-
  • Step 4 (S) -tert-butyl 2- (5- (7-nitro-9,9-dipropyl-9H-fluoren- Preparation of 1-carboxylate
  • Step 6 Preparation of methyl ((S) -1 - ((S) -2- (5- (7-amino-9,9-dipropyl-9H- fluoren- Yl) pyrrolidin-1-yl) -3-methyl-1-oxobutan-2-yl) carbamate
  • the target compound (718 mg, 85%) was obtained by carrying out the same procedure as in the step 5 of Example 3.
  • Examples 1 to 42 of the present invention were prepared by the same method as in Example 1-3, and the chemical structures and analytical data (NMR or LC / MS) of the Examples were shown in Tables 1 to 4 Respectively.
  • Step 1 Cell culture and cell culture
  • Step 2 Create the virus
  • JFH5a-Rluc-ad34 In vitro transcript RNA of JFH5a-Rluc-ad34, a derivative of JFHl with an adaptive mutation in the E2 and p7 regions, was transfected into Huh7.5.1 cells by electroporation.
  • the JFH5a-Rluc-ad34 virus contains Renilla luciferase (Rluc), which is convenient for virus multiplication analysis.
  • Cell culture media containing HCV were harvested 3-5 days after electroporation and then filtered through a 0.45 ⁇ M pore size filter.
  • Step 3 Infection HCV Particles (infectious HCV particle Antivirus Activity test
  • Step 1 Cell culture and cell culture
  • HCV activity of the example compounds was tested using Huh 7.5.1 cells containing the bicistronic HCV replicon NK5.1-Gluc (genotype 1b) and S52-Feo (genotype 3a) Respectively.
  • the first open reading frame (ORF) of the replicons is the Reporter gene (fused with the foot-and-mouth disease virus (FMDV) 2a gene and the neomycin phosphotransferase gene Gaussia luciferase; 1b, Firefly luciferase; 3a) and the second ORF HCV nonstructural gene NS3-5.
  • the replicon-containing cells were incubated with the additional antibiotic G418 (0.5 mg / ml, Calbiochem) under the same conditions as described above.
  • Step 2 HCV Replicons Antiviral activity test using
  • Huh 7.5.1 cells containing HCV replicon NK5.1-Gluc (GT1b) or S52-Feo (GT-3a) were cultured in 12-well plates (5 x 10 4 cells per well). After 16 hours, the medium containing the example compound continuously diluted in the replicon containing the cells was inoculated for 3 days. After chemical treatment, in the case of NK5.1-Gluc, the cell culture medium was collected and analyzed using a Renilla luciferase assay system ( Renilla luciferase assay system, Promega) was used to measure Gaussia luciferase activities. In the case of S52-Feo, cells were harvested and luciferase activity was measured using a firefly luciferase assay system (Promega), followed by standardization as obtained from negative control cells Respectively.
  • GT1b HCV replicon NK5.1-Gluc
  • GT-3a S52-Feo
  • RNA Transiently transfected assay-gene 1b type resistant mutant Transiently transfected assay of Genotype 1b Resistance mutant RNAs
  • Replicon genomes substituted with the resistance mutants Y93H, L31V and L31V + Y93H (double mutants) for Daclatasvir at the position of NS5A protein domain 1 (Domain1) were used.
  • HCV RNA with mutations was synthesized HCV RNA with mutations through in vitro transcription.
  • Huh 7.5.1 cells were individually electroporated with HCV RNA with resistant mutations and plated on 12-well plates. After 4 hours, Huh7.5.1 cells were inoculated with DMEM medium containing the compound of the series diluted for 3 days. Three days later, the cells were harvested and the intracellular luciferase activity was measured. Luciferase activity was normalized to that obtained from mock-treated cells.
  • A is 1 pM ⁇ EC 50 ⁇ 10 pM
  • B is 10 pM ⁇ EC 50 ⁇ 100 pM
  • C is 100 pM ⁇ EC 50 ⁇ 1 nM
  • D is 1 nM ⁇ EC 50 ⁇ 100 nM.
  • E is EC 50 > 100 nM.
  • the compound of the example according to the present invention exhibits excellent antiviral performance at low concentrations in all of the genotypes 1b, 2a and 3a.
  • the pharmaceutical composition of the present invention suppresses not only single mutants L31V and Y93H but also L31V + Y93H (double mutation) showing stronger resistance at a low concentration, so that a single mutation as well as double or multiple mutations can be targeted And can be usefully used as a pharmaceutical composition for preventing or treating HCV-related liver diseases that solves the problem of resistance mutation of existing therapeutic agents.
  • tablets were prepared by tableting according to a conventional method for producing tablets.
  • the capsules were filled in gelatin capsules according to the conventional preparation method of capsules.
  • an injectable preparation was prepared by incorporating the aforementioned components in the amounts indicated.
  • Vitamin A acetate 70 mg
  • Vitamin E 1.0mg
  • Vitamin B6 0.5mg
  • the above components were mixed according to a conventional health drink manufacturing method, and the mixture was stirred and heated at 85 DEG C for about 1 hour. The resulting solution was filtered to obtain a sterilized container, which was sealed and sterilized, And used for manufacturing.
  • composition ratio is relatively mixed with the ingredient suitable for the favorite drink, it is also possible to arbitrarily modify the blending ratio according to the regional or national preference such as the demand class, demand country, use purpose, and the like.

Abstract

본 발명은 플루오렌 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 이의 제조방법 및 이를 유효성분으로 포함하는 HCV 관련 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물에 관한 것이다. 본 발명에 따른 플루오렌 유도체는 HCV에 대하여 항 바이러스 성능을 나타낼 뿐만 아니라, HCV 돌연변이, 특히, 이중 돌연변이에 대하여도 높은 항바이러스 성능을 나타냄을 확인하여, HCV에 의해 발병되는 급성 C형 간염, 만성 C형 간염, 간경변, 간세포성 암 등의 간질환, 특히 HCV의 돌연변이가 발생한 간질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물로 사용될 수 있으며, 기존 치료제의 내성 돌연변이 문제를 해결한 HCV 관련 간질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.

Description

플루오렌 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 이의 제조방법 및 이를 유효성분으로 포함하는 HCV 관련 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물
본 발명은 플루오렌 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 이의 제조방법 및 이를 유효성분으로 포함하는 HCV 관련 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물에 관한 것이다.
HCV(Hepatitis C Virus)는 플라비바이러스 (Flavivirus) 과에 속하는 막이 있는 바이러스이다. HCV의 게놈은 (+)RNA (plus-strand RNA)로서 그 크기가 9.6kb이며 3,010개의 아미노산으로 구성된 다단백질(poly-protein)을 발현한다. 상기 다단백질은 숙주 세포와 바이러스의 효소에 의해 3개의 구조 단백질과 6개의 비구조 단백질로 분리된다.
상기 HCV 게놈의 5'과 3' 말단에는 거의 모든 유전형(genotype)의 염기 서열이 동일하게 유지된 비번역 부위가 있다. 5' 말단에서는 330~341개의 뉴클레오티드가, 3' 말단에서는 폴리 A(poly A) 뒤에 98개의 뉴클레오티드가 최근 발견되었는데, 이곳이 바이러스의 RNA 복제나 번역에 중요한 역할을 한다고 추측되고 있다. 바이러스 RNA는 세포 내 번역 후 바이러스 구조 단백질인 Core, E1, E2를 만들고 나머지 부위는 비구조 단백질을 만들게 된다. 구조 단백질은 바이러스의 외피를 구성하는 core, E1, E2로 되어있으며, 이들은 다단백질로 번역 후 ER(소포체)에 존재하는 신호 펩티드 분해효소(signal peptidase)에 의해 분리된다. 비구조 단백질은 세린 단백질 분해효소 (serine protease)인 NS3과 보조인자(cofactor)인 NS4A에 의해 분리된다. 분리된 비단백질들은 바이러스 RNA 복제 및 조립과 방출과정에 중요한 역할을 하며 특히 NS5B는 RNA-의존적인 RNA 중합효소(RNA-dependent RNA polymerase) 기능을 갖고 있으며, NS5A는 바이러스 유전자의 복제와 바이러스 조립에 반드시 필요한 단백질이다.
HCV는 세계적으로 약 7천만 명이 감염된 것으로 추산되는 주요 인간 병원체이다. 이들 HCV에 감염된 개체 중 높은 비율에서 간경변 및 간세포성 암종을 비롯한 심각한 진행성 간 질환이 발생한다.
HCV에 의한 감염은 수혈 및 지역 특이적 전염(community-acquired)에 의해 발생되고, 신장 투석에 의해 약 70% 정도가 감염되는 것으로 보고되었다. 일단 HCV에 감염이 되면 약 20% 정도가 5년 내에 간경화를 수반한 급성 간염을 일으키게 되고 간암으로 전이되는 것으로 알려져 있다(비특허문헌 1(Davis et al, New. Engl. J. Med., [0010] 321 (1989) 1501) 및 비특허문헌 2(Alter et al, Leonard et al., Current Pespective in Hepatology, (1989) p.83) 참조). 이러한 높은 만성 감염률은 RNA 바이러스에서 보기 드문 일로서 HCV가 높은 비율의 간암을 일으키는 매개체임을 보여주는 증거이다. 최근에는 모든 혈액에 대해서 HCV 검사가 잘 이루어지고 있어 수혈로 인한 감염은 현저히 줄어들었지만, 지역 특이적 감염은 이에 대한 관리가 효과적으로 이루어지지 않아 그 감염률이 높으므로 전 세계적으로 중요한 문제로 인식되고 있다.
또한, HCV는 B형 간염 바이러스(HBV)와 달리 전 세계에 골고루 분포되어 있으며 전 세계 인구의 0.5% 내지 1 %가 감염된 것으로 보고되고 있다. HCV에 감염되면 만성 간염으로 진행되는 것이 특징인데 간경화 및 간암으로 전이되는 확률이 B형 간염보다 상당히 높다. HCV는 분류학적으로도 B형 간염 바이러스와는 전혀 다른 바이러스과에 속하기 때문에 B형 간염 바이러스 백신으로는 예방이 불가능하다.
한편, 현재 HCV 감염에 대한 치료제로, 인터페론과 항바이러스제인 리바비린(ribavirin) 병용요법이 사용되고 있으나(비특허문헌 3(Hayashi N., et al., J. Gastroenterol., 41,(2006), 17) 참조), 유전형에 따라 반응이 현저히 다르고 효과가 극히 미약하며, 병용요법에 사용되는 두 약제의 부작용이 클 뿐만 아니라 고가이다. 따라서, 보다 효과적인 새로운 항HCV제의 개발이 요구되고 있다.
상기의 문제를 극복하기 위하여 현재까지 연구된 항HCV제는 HCV의 생애주기의 특정 단계, 즉 바이러스 복제와 조립을 차단함으로써 항HCV 약제의 약리활성이 발현되는 특징을 갖는다.
HCV의 생애주기는 다음과 같다. 숙주 세포(Host cell)의 표면에 부착된 HCV는 엔도사이토시스(endocytosis)에 의해 숙주 세포 내에 침입한다. 이후, 숙주 세포 내에 침입한 HCV RNA로부터 약 3천 개의 아미노산 잔기로 구성된 전구체 단백질이 생성된다. HCV 게놈 또는 숙주 세포의 시그널 펩티다아제(signal peptidase)와 인코딩된(encoded) NS3 및 NS4 프로테아제와 함께 반응하여 캡시드 단백질(capsid protein), 엔벨로프 단백질(envelope protein), NS3 및 NS4 프로테아제, NS5A 단백질과 NS5B RNA 중합효소(Polymerase) 같은 약 10종의 바이러스 단백질이 생성된다. NS5B 중합효소로 복제된 HCV RNA는 캡시드 단백질(capsid protein)와 ER에서 α-글루코시다아제 (α-glucosidase)로 변형된 엔벨로프 단백질(envelope protein)과 조립하여 바이러스 입자가 된다. 이후, HCV 입자는 숙주 세포로부터 배출된다(비특허문헌 4(Manns MP., et al., Nat. Rev. Drug. Discov., 6,(2007), 991) 참조).
HCV의 경우에는 최근까지 배양세포에서 감염·증식시킬 수 없었다. 다만 1999년에 제한적인 발전이 있어, 비구조 단백질(non-structural proteins)을 코딩하는 HCV RNA 부분을 간암세포주에 형질주입(transfection)시켜 HCV RNA의 복제가 일어나도록 만든 시스템이 개발되었는데 이를 HCV RNA 레플리콘(replicon)이라고 명한다. 레플리콘을 이용하게 되면서 HCV 증식을 억제하는 약물의 생체 외 스크리닝이 가능하게 되었다(비특허문헌 5(Hepatitis C virus 연구동향, 한국생화학분자생물학회, 2013, 12) 참조).
또한, 2001년 일본의 Wakita 박사 연구팀은 HCV 환자로서는 드물게 전격성 간염(fulminant hepatitis)을 나타낸 일본인 환자로부터 HCV를 클로닝하였고 (Japanese fulminant hepatitis라는 뜻에서 JFH-1으로 명명됨) 이를 이용하여 HCV RNA 레플리콘을 만들었는데, 매우 강력한 레플리콘 활성을 나타냄이 관찰되었다. 결국 2005년에, HCV 복제가 잘 이루어지는 간암세포주를 선택적으로 골라낸 후 여기에 JFH-1의 비구조(non-structural) 부분을 백본(backbone)으로 하여 구조 단백질이 포함된 HCV RNA를 형질주입 시킴으로써 in vitro 세포배양에서 HCV 감염모델이 확립되었다. 그리고 이렇게 배양된 세포에서 얻어진 HCV는 HCVcc라고 불리게 되었다(cc는 cell culture에서 유래됨). HCVcc는 침팬지에서도 HCV 감염을 일으킴이 보고되어 세포배양 HCV 감염모델의 성공은 입증되었다. in vitro 전사(transcription)를 통하여 얻은 JFH-1 RNA를 간암세포주에 형질주입시킴으로서 HCVcc를 얻을 수 있고 얻어진 HCVcc는 다시 간암세포를 감염시킬 수 있음을 보여주고 있다. 이러한 세포배양 HCV 감염모델의 성공은 최근 HCV 연구를 더욱 촉진하며 새로운 발견들을 가속화하고 있다(비특허문헌 5(Hepatitis C virus 연구동향, 한국생화학분자생물학회, 2013, 12) 참조).
상기의 HCV 생애주기의 특정 단계를 차단함으로써 항HCV 활성을 나타내는 약제는 HCV 생애주기에 근거하여 NS5B-RNA 중합효소 억제제-유형, NS3/4A프로테아제 억제제-유형, NS5A 억제제 유형 및 기타 유형으로 분류된다. 예를 들면, 현재 FDA에 승인을 받은 저해제로써 sofosbuvir는 RNA중합효소 억제제 유형이며, Daclatasvir (BMS-790052), ledipasvir (GS-5885), ombitasvir (ABT-267), elbasvir (MK-8742), velpatasvir (GS-5816)는 NS5A를 타겟으로 하는 억제제이다. 또한, 프로테아제 억제제 유형으로는 Grazoprevir, Simeprevir, Paritaprevir가 있다. 아울러, 사이클로필린 억제제 유형인 Alisporivir, Bis-amide derivative, NIM258, Phenylepyrrolidine derivative가 있다(비특허문헌 6(Kronenberger B., et al., Clin Liver Dis., 12,(2008), 529) 및 비특허문헌 7(G Li et al. Antiviral Res 142, 83-122) 참조).
그러나, 현재 판매되고 있는 상기 항HCV 약제에 대하여 내성을 갖는 바이러스의 출현이 이미 보고되고 있으므로, 종래에 알려진 항HCV 약제의 내성 돌연변이 문제를 해결한 효능으로 항HCV 효과를 나타내는 새로운 항HCV 약제의 개발이 절실히 요구되고 있다.
한편, HCV 치료의 어려움은 바이러스에 존재하는 다양성에 기인한다. 상기 바이러스는 7 가지 주요 유전자형으로 분류되며, 50 가지 이상의 아형이 존재하는 것으로 알려져 있다. 수십 가지의 아형이 존재하는 이유는 C형간염 바이러스(HCV)가 간염 바이러스 중에서도 가장 높은 돌연변이율을 나타내기 때문이며, HCV는 면역으로부터 회피하는 기전을 가지고 있는데, 첫째로는 HCV 표면의 T세포 수용체 항원부분에 돌연변이가 일어나 단백변형을 일으켜 T세포 반응을 회피하는 것이 높은 돌연변이를 나타내는 이유 중 하나로 알려져 있다.
이러한 이유로 C형간염의 치료는 지금까지 15년 이상 표준요법의 자리를 지켜 온 peg-interferon과 ribavirin (PR) 병합요법으로부터 직접작용약제(direct acting agent, DAA) 로 옮아가는 전환기이다. 지금까지 표준치료로 널리 사용되어 온 interferon의 부작용으로는 독감증세, 탈모증, 주사 맞은 부위의 피부소양증, 골수 억제로 인한 백혈구 감소증, 우울증 등이 있다. 한편, 진행성 간경변 환자나 고령의 노인들은 이러한 약제 부작용을 잘 이겨내지 못하여 치료기간을 충분히 채우지 못하는 경우가 많고, 치료기간을 잘 견뎌냈다 하더라도 치료 반응이 좋지 않다. PR 병용요법은 주사치료를 받아야만 해서 불편하고 약제 부작용 및 내성(inelligible)으로 인한 금기증이 있는 약제이기 때문에, 이러한 단점을 극복할 수 있는 새로운 대안으로서 경구용 신약이 필요하게 되었다. Interferon이 숙주의 면역능력을 증강시켜 항바이러스 효능을 얻게 하는 간접적인 치료 원리를 가지고 있는 것에 비하여, 직접작용약제는 바이러스의 복제기전을 직접적인 타겟으로 한다.
NS5A 저해제는 직접작용약제 중 하나로서, Replication complex 억제제이다. 대표적으로 Daclatasvir(BMS-790052), ledipasvir(GS-5885), ombitasvir(ABT-267), elbasvir(MK-8742), velpatasvir(GS-5816)가 있으며 상기 약제들은 복제복합체를 억제하고, Daclatasvir의 경우 유전자형 1a에서는 치료효과가 매우 제한적이고, 유전자형 1b에서는 높은 치료 효과를 나타내었다. 한편, NS5A 저해제의 경우 NS5A-L31, NS5A-Y93 유전자 돌연변이가 나타나며 이로 인하여 약제 내성을 나타내어 치료효과가 떨어지는 문제가 있다.
HCV는 단일 돌연변이뿐만 아니라, 이중 돌연변이(double mutation), 삼중 돌연변이(triple mutation)과 같은 다중 돌연변이(multiple mutation)가 발생하며, 이러한 다중 돌연변이는 단일 돌연변이보다 강한 약제 내성으로 치료효과를 상당히 많이 떨어뜨리는 문제가 있다.
이에, 본 발명자들은 HCV에 대한 항 바이러스 성능을 나타내는 화합물을 개발하기 위해 노력하던 중, 본 발명에 따른 플루오렌 유도체가 HCV에 대하여 항 바이러스 성능을 나타낼 뿐만 아니라, HCV 돌연변이에 대하여도 높은 항바이러스 성능을 나타냄을 확인하여, HCV에 의해 발병되는 급성 C형 간염, 만성 C형 간염, 간경변, 간세포성 암 등의 간질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물로 사용될 수 있다는 것을 알아내고 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 목적은 플루오렌 유도체, 이의 광학 이성질체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 상기 플루오렌 유도체의 제조방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 상기 플루오렌 유도체, 이의 광학 이성질체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 HCV 관련 간질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 상기 플루오렌 유도체, 이의 광학 이성질체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 HCV 관련 간질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위하여,
하기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 광학 이성질체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 제공한다:
[화학식 1]
Figure PCTKR2018011182-appb-I000001
(상기 화학식 1에서,
X는 -NHC(=O)-, -C(=O)NH- 또는 N, O 및 S로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 헤테로 원자를 포함하는 5 내지 8 원자의 헤테로아릴이되, X중 적어도 하나는 반드시 -NHC(=O)- 또는 -C(=O)NH-이고;
R1는 비치환 또는 할로겐으로 하나 이상 치환된 직쇄의 C2-10알킬이고;
R2는 직쇄 또는 분지쇄의 C1-10알콕시카보닐아미노이고;
R3은 직쇄 또는 분지쇄의 C1-10알킬 또는 C6-10의 아릴이고;
R4는 수소이거나, R5 및 R6 중 어느 하나 및 이들이 결합된 C 원자와 함께 C3-7의 사이클로알킬을 형성할 수 있고;
R5 및 R6는 각각 독립적으로, 수소, -OH, 할로겐, 직쇄 또는 분지쇄의 C1- 10알콕실, 직쇄 또는 분지쇄의 C1- 10알콕실직쇄 또는 분지쇄의C1 - 4알킬 또는 -O(C=O)Ra이고, 여기서 Ra는 직쇄 또는 분지쇄의 C1- 10알킬 또는 N, O 및 S로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 헤테로원자를 포함하는 5 또는 6원자의 헤테로사이클로알킬직쇄 또는 분지쇄의 C1- 4알킬이거나, 이들이 결합된 C 원자와 함께 카보닐, C3-7의 사이클로알킬 또는 O 원자를 하나 이상 포함하는 3-7원자의 헤테로 사이클로알킬을 형성할 수 있다).
또한, 하기 반응식 1에 나타낸 바와 같이,
화학식 2로 표시되는 화합물과 화학식 3으로 표시되는 화합물을 반응시켜 화학식 1로 표시되는 화합물을 제조하는 단계를 포함하는 상기 화학식 1로 표시되는 화합물의 제조방법을 제공한다:
[반응식 1]
Figure PCTKR2018011182-appb-I000002
(상기 반응식 1에서,
R1, R2, R3, R4, R5, R6 및 X는 상기 화학식 1에서 정의한 바와 같고; 및
PG는 t-부틸옥시카보닐(BOC), 카보벤질옥시(Cbz), 9-플루오레닐메틸옥시카보닐(Fmoc), 아세틸(Ac), 벤조일(Bz), 벤질(Bn), p-메톡시벤질(PMB), 3,4-다이메톡시벤질(DMPM), p-메톡시페닐(PMP), 토실(Ts), 2,2,2-트리클로로에톡시카보닐(Troc), 2-트리메틸실릴에톡시카보닐(Teoc) 및 아릴옥시카보닐(Alloc) 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종의 아민 보호기(amine protectiong group)이다).
본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 광학 이성질체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 HCV 관련 간질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 광학 이성질체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 HCV 관련 간질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공한다.
본 발명은, 상기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 이성질체, 이의 용매화물, 이의 수화물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 약학적 조성물 또는 건강기능식품을 필요한 대상에게 투여하는 단계를 포함하는 HCV 관련 간질환의 예방 또는 치료 방법을 제공한다.
본 발명은, HCV 관련 간질환의 예방 또는 치료에 있어서의, 상기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 이성질체, 이의 용매화물, 이의 수화물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 함유하는 약학적 조성물 또는 건강기능식품의 용도를 제공한다.
본 발명에 따른 플루오렌 유도체는 HCV에 대하여 항 바이러스 성능을 나타낼 뿐만 아니라, HCV 돌연변이, 특히, 이중 돌연변이에 대하여도 높은 항바이러스 성능을 나타냄을 확인하여, HCV에 의해 발병되는 급성 C형 간염, 만성 C형 간염, 간경변, 간세포성 암 등의 간질환, 특히 HCV의 돌연변이가 발생한 간질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물로 사용될 수 있으며, 기존 치료제의 내성 돌연변이 문제를 해결한 HCV 관련 간질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.
이하, 본 발명을 상세히 설명한다.
본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 광학 이성질체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 제공한다.
[화학식 1]
Figure PCTKR2018011182-appb-I000003
(상기 화학식 1에서,
X는 -NHC(=O)-, -C(=O)NH- 또는 N, O 및 S로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 헤테로 원자를 포함하는 5 내지 8 원자의 헤테로아릴이되, X중 적어도 하나는 반드시 -NHC(=O)- 또는 -C(=O)NH-이고;
R1는 비치환 또는 할로겐으로 하나 이상 치환된 직쇄의 C2-10알킬이고;
R2는 직쇄 또는 분지쇄의 C1-10알콕시카보닐아미노이고;
R3은 직쇄 또는 분지쇄의 C1-10알킬 또는 C6-10의 아릴이고;
R4는 수소이거나, R5 및 R6 중 어느 하나 및 이들이 결합된 C 원자와 함께 C3-7의 사이클로알킬을 형성할 수 있고;
R5 및 R6는 각각 독립적으로, 수소, -OH, 할로겐, 직쇄 또는 분지쇄의 C1- 10알콕실, 직쇄 또는 분지쇄의 C1- 10알콕실직쇄 또는 분지쇄의C1 - 4알킬 또는 -O(C=O)Ra이고, 여기서 Ra는 직쇄 또는 분지쇄의 C1- 10알킬 또는 N, O 및 S로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 헤테로원자를 포함하는 5 또는 6원자의 헤테로사이클로알킬직쇄 또는 분지쇄의 C1- 4알킬이거나, 이들이 결합된 C 원자와 함께 카보닐, C3-7의 사이클로알킬 또는 O 원자를 하나 이상 포함하는 3-7원자의 헤테로 사이클로알킬을 형성할 수 있다).
바람직하게,
상기 X는 -NHC(=O)-, -C(=O)NH- 또는 N, O 및 S로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 헤테로 원자를 포함하는 5 내지 6 원자의 헤테로아릴이되, X 중 적어도 하나는 반드시 -NHC(=O)- 또는 -C(=O)NH-이고;
R1는 비치환 또는 할로겐으로 하나 이상 치환된 직쇄의 C2-6알킬이고;
R2는 직쇄 또는 분지쇄의 C1-6알콕시카보닐아미노이고;
R3은 직쇄 또는 분지쇄의 C1-6알킬 또는 페닐이고;
R4는 수소이거나, R5 및 R6 중 어느 하나 및 이들이 결합된 C 원자와 함께 C3-5의 사이클로알킬을 형성할 수 있고;
R5 및 R6는 각각 독립적으로, 수소, -OH, 할로겐, 직쇄 또는 분지쇄의 C1- 6알콕실, 직쇄 또는 분지쇄의 C1- 6알콕실C1 - 2알킬 또는 -O(C=O)Ra이고, 여기서 Ra는 직쇄 또는 분지쇄의 C1- 6알킬 또는 N, O 및 S로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 헤테로원자를 포함하는 6원자의 헤테로사이클로알킬C1 - 2알킬이거나, 이들이 결합된 C 원자와 함께 카보닐, C3-5의 사이클로알킬 또는 O 원자를 하나 이상 포함하는 3-5원자의 헤테로 사이클로알킬을 형성할수 있다.
보다 바람직하게,
상기 X는 -NHC(=O)-, -C(=O)NH- 또는 이미다졸이되, X 중 적어도 하나는 반드시 -NHC(=O)- 또는 -C(=O)NH-이고;
R1는 비치환 또는 F으로 하나 이상 치환된 직쇄의 C2-6알킬이고;
R2는 직쇄 또는 분지쇄의 C1-4알콕시카보닐아미노이고;
R3은 직쇄 또는 분지쇄의 C1-4알킬 또는 페닐이고;
R4는 수소이거나, R5 및 R6 중 어느 하나 및 이들이 결합된 C 원자와 함께 사이클로프로필 또는 사이클로펜틸을 형성할 수 있고;
R5 및 R6는 각각 독립적으로, 수소, -OH, 할로겐, 직쇄 또는 분지쇄의 C1- 4알콕실, 직쇄 또는 분지쇄의 C1- 4알콕실C1 - 2알킬 또는 -O(C=O)Ra이고, 여기서 Ra는 직쇄 또는 분지쇄의 C1- 4알킬 또는 모폴리닐C1 - 2알킬이거나, 이들이 결합된 C 원자와 함께 카보닐, 사이클로프로필, 사이클로펜틸 또는 O 원자를 하나 이상 포함하는 5원자의 헤테로 사이클로알킬을 형성할수 있다.
가장 바람직하게,
상기 X는
Figure PCTKR2018011182-appb-I000004
,
Figure PCTKR2018011182-appb-I000005
또는
Figure PCTKR2018011182-appb-I000006
이되, X중 적어도 하나는 반드시
Figure PCTKR2018011182-appb-I000007
또는
Figure PCTKR2018011182-appb-I000008
이고;
R1는 -CH2CH3, -(CH2)2CH3, -(CH2)3CH3, -(CH2)4CH3, -(CH2)3CF3 또는 -(CH2)4CF3이고;
R2는
Figure PCTKR2018011182-appb-I000009
이고;
R3은 이소프로필 또는 페닐이고;
R4는 수소이거나, R5 및 R6 중 어느 하나 및 이들이 결합된 C 원자와 함께 사이클로펜틸을 형성할 수 있고;
R5 및 R6는 각각 독립적으로, 수소, -OH, -F, -OCH3, -CH2OCH3, -O(CH2)2OCH3,
Figure PCTKR2018011182-appb-I000010
또는
Figure PCTKR2018011182-appb-I000011
이거나, 이들이 결합된 C 원자와 함께 카보닐, 사이클로프로필 또는 1,3-디옥솔라닐(1,3-dioxolanyl)을 형성할수 있다.
본 발명에 따른 상기 화학식 1로 표시되는 화합물의 바람직한 예로는 하기의 화학식 1-1 내지 1-42로 표시되는 화합물들을 들 수 있다:
[화학식 1-1]
Figure PCTKR2018011182-appb-I000012
;
[화학식 1-2]
Figure PCTKR2018011182-appb-I000013
;
[화학식 1-3]
Figure PCTKR2018011182-appb-I000014
;
[화학식 1-4]
Figure PCTKR2018011182-appb-I000015
;
[화학식 1-5]
Figure PCTKR2018011182-appb-I000016
;
[화학식 1-6]
Figure PCTKR2018011182-appb-I000017
;
[화학식 1-7]
Figure PCTKR2018011182-appb-I000018
;
[화학식 1-8]
Figure PCTKR2018011182-appb-I000019
;
[화학식 1-9]
Figure PCTKR2018011182-appb-I000020
;
[화학식 1-10]
Figure PCTKR2018011182-appb-I000021
;
[화학식 1-11]
Figure PCTKR2018011182-appb-I000022
;
[화학식 1-12]
Figure PCTKR2018011182-appb-I000023
;
[화학식 1-13]
Figure PCTKR2018011182-appb-I000024
;
[화학식 1-14]
Figure PCTKR2018011182-appb-I000025
;
[화학식 1-15]
Figure PCTKR2018011182-appb-I000026
;
[화학식 1-16]
Figure PCTKR2018011182-appb-I000027
;
[화학식 1-17]
Figure PCTKR2018011182-appb-I000028
;
[화학식 1-18]
Figure PCTKR2018011182-appb-I000029
;
[화학식 1-19]
Figure PCTKR2018011182-appb-I000030
;
[화학식 1-20]
Figure PCTKR2018011182-appb-I000031
;
[화학식 1-21]
Figure PCTKR2018011182-appb-I000032
;
[화학식 1-22]
Figure PCTKR2018011182-appb-I000033
;
[화학식 1-23]
Figure PCTKR2018011182-appb-I000034
;
[화학식 1-24]
Figure PCTKR2018011182-appb-I000035
;
[화학식 1-25]
Figure PCTKR2018011182-appb-I000036
;
[화학식 1-26]
Figure PCTKR2018011182-appb-I000037
;
[화학식 1-27]
Figure PCTKR2018011182-appb-I000038
;
[화학식 1-28]
Figure PCTKR2018011182-appb-I000039
;
[화학식 1-29]
Figure PCTKR2018011182-appb-I000040
;
[화학식 1-30]
Figure PCTKR2018011182-appb-I000041
;
[화학식 1-31]
Figure PCTKR2018011182-appb-I000042
;
[화학식 1-32]
Figure PCTKR2018011182-appb-I000043
;
[화학식 1-33]
Figure PCTKR2018011182-appb-I000044
;
[화학식 1-34]
Figure PCTKR2018011182-appb-I000045
;
[화학식 1-35]
Figure PCTKR2018011182-appb-I000046
;
[화학식 1-36]
Figure PCTKR2018011182-appb-I000047
;
[화학식 1-37]
Figure PCTKR2018011182-appb-I000048
;
[화학식 1-38]
Figure PCTKR2018011182-appb-I000049
;
[화학식 1-39]
Figure PCTKR2018011182-appb-I000050
;
[화학식 1-40]
Figure PCTKR2018011182-appb-I000051
;
[화학식 1-41]
Figure PCTKR2018011182-appb-I000052
;
[화학식 1-42]
Figure PCTKR2018011182-appb-I000053
.
본 발명의 상기 화학식 1로 표시되는 화합물은 약학적으로 허용가능한 염의 형태로 사용할 수 있으며, 염으로는 약학적으로 허용가능한 유리산(free acid)에 의해 형성된 산 부가염이 유용하다. 산 부가염은 염산, 질산, 인산, 황산, 브롬화수소산, 요드화수소산, 아질산, 아인산 등과 같은 무기산류, 지방족 모노 및 디카르복실레이트, 페닐-치환된 알카노에이트, 하이드록시 알카노에이트 및 알칸디오에이트, 방향족 산류, 지방족 및 방향족 설폰산류 등과 같은 무독성 유기산, 아세테이트, 안식향산, 구연산, 젖산, 말레인산, 글루콘산, 메탄설폰산, 4-톨루엔설폰산, 주석산, 푸마르산 등과 같은 유기산으로부터 얻는다. 이러한 약학적으로 무독한 염의 종류로는 설페이트, 피로설페이트, 바이설페이트, 설파이트, 바이설파이트, 니트레이트, 포스페이트, 모노하이드로겐 포스페이트, 디하이드로겐 포스페이트, 메타포스페이트, 피로포스페이트 클로라이드, 브로마이드, 아이오다이드, 플루오라이드, 아세테이트, 프로피오네이트, 데카노에이트, 카프릴레이트, 아크릴레이트, 포메이트, 이소부티레이트, 카프레이트, 헵타노에이트, 프로피올레이트, 옥살레이트, 말로네이트, 석시네이트, 수베레이트, 세바케이트, 푸마레이트, 말리에이트, 부틴-1,4-디오에이트, 헥산-1,6-디오에이트, 벤조에이트, 클로로벤조에이트, 메틸벤조에이트, 디니트로 벤조에이트, 하이드록시벤조에이트, 메톡시벤조에이트, 프탈레이트, 테레프탈레이트, 벤젠설포네이트, 톨루엔설포네이트, 클로로벤젠설포네이트, 크실렌설포네이트, 페닐아세테이트, 페닐프로피오네이트, 페닐부티레이트, 시트레이트, 락테이트, β-하이드록시부티레이트, 글리콜레이트, 말레이트, 타트레이트, 메탄설포네이트, 프로판설포네이트, 나프탈렌-1-설포네이트, 나프탈렌-2-설포네이트, 만델레이트 등을 포함한다.
본 발명에 따른 산 부가염은 통상의 방법으로 제조할 수 있으며, 예를 들면 화학식 1의 유도체를 메탄올, 에탄올, 아세톤, 메틸렌클로라이드, 아세토니트릴 등과 같은 유기용매에 녹이고 유기산 또는 무기산을 가하여 생성된 침전물을 여과, 건조시켜 제조하거나, 용매와 과량의 산을 감압 증류한 후 건조시켜 유기용매 하에서 결정화시켜셔 제조할 수 있다.
또한, 염기를 사용하여 약학적으로 허용가능한 금속염을 만들 수 있다. 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속 염은 예를 들면 화합물을 과량의 알칼리 금속 수산화물 또는 알칼리 토금속 수산화물 용액 중에 용해하고, 비용해 화합물 염을 여과하고, 여액을 증발, 건조시켜 얻는다. 이때, 금속염으로는 나트륨, 칼륨 또는 칼슘염을 제조하는 것이 제약상 적합하다. 또한, 이에 대응하는 염은 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속 염을 적당한 음염(예, 질산은)과 반응시켜 얻는다.
나아가, 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 화합물 및 이의 약학적으로 허용가능한 염뿐만 아니라, 이로부터 제조될 수 있는 용매화물, 광학 이성질체, 수화물 등을 모두 포함한다.
또한, 하기 반응식 1에 나타낸 바와 같이,
화학식 2로 표시되는 화합물과 화학식 3으로 표시되는 화합물을 반응시켜 화학식 1로 표시되는 화합물을 제조하는 단계를 포함하는 상기 화학식 1로 표시되는 화합물의 제조방법을 제공한다.
[반응식 1]
Figure PCTKR2018011182-appb-I000054
상기 반응식 1에서,
R1, R2, R3, R4, R5, R6 및 X는 상기 화학식 1에서 정의한 바와 같고; 및
PG는 t-부틸옥시카보닐(BOC), 카보벤질옥시(Cbz), 9-플루오레닐메틸옥시카보닐(Fmoc), 아세틸(Ac), 벤조일(Bz), 벤질(Bn), p-메톡시벤질(PMB), 3,4-다이메톡시벤질(DMPM), p-메톡시페닐(PMP), 토실(Ts), 2,2,2-트리클로로에톡시카보닐(Troc), 2-트리메틸실릴에톡시카보닐(Teoc) 및 아릴옥시카보닐(Alloc) 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종의 아민 보호기(amine protectiong group)이다.
이하, 본 발명에 따른 상기 화학식 1로 표시되는 화합물의 제조방법을 상세히 설명한다.
본 발명에 따른 상기 화학식 1로 표시되는 화합물의 제조방법은 상기 반응식 1에 나타낸 바와 같이, 화학식 2로 표시되는 화합물과 화학식 3으로 표시되는 화합물을 반응시켜 화학식 1로 표시되는 화합물을 제조할 수 있다.
구체적으로, 화학식 2로 표시되는 화합물의 아민 보호기를 제거한 후, 아마이드화제(amide reagent) 존재 하에 화학식 3으로 표시되는 화합물을 첨가하여 반응시켜 화학식 1로 표시되는 화합물을 제조할 수 있다.
이때, 상기 아민 보호기로는 t-부틸옥시카보닐(Boc), 카보벤질옥시(Cbz), 9-플루오레닐메틸옥시카보닐(Fmoc), 아세틸(Ac), 벤조일(Bz), 벤질(Bn), p-메톡시벤질(PMB), 3,4-다이메톡시벤질(DMPM), p-메톡시페닐(PMP), 토실(Ts), 2,2,2-트리클로로에톡시카보닐(Troc), 2-트리메틸실릴에톡시카보닐(Teoc) 또는 아릴옥시카보닐(Alloc) 등이 있으며, 바람직하게는 t-부틸옥시카보닐(Boc)일 수 있다.
또한, 상기 아민 보호기는 통상의 방법으로 제거할 수 있다. 예를 들면, 산 또는 염기를 사용한 조건하에 제거할 수 있으며, 상기 산에는 염산, 황산, 트리플루오로아세트산, 브롬산 등이 있고, 상기 염기에는 피페리딘, 암모니아가스 등이 있으며, 이를 당량 또는 과량 사용할 수 있다.
나아가, 상기 아마이드화제(amide reagent)는 벤조트리아졸-1-일-옥시-트리스(다이메틸아미노)-포스포니움헥사플루오로포스페이트(Py-BOP), O-벤조트리아졸-N,N,N,N-테트라메틸-유로니움-헥사플루오로-포스페이트(HBTU), 2-(7-아자-1H-벤조트리아졸-1-일)-1,1,3,3-테트라메틸유로니움헥사플루오로포스페이트(HATU), 하이드록시벤조트리아졸(HOBt), 다이사이클로헥실카르보디이미드(DCC), 1-에틸-3-(3-다이메틸아미노프로필)카보다이이미드(EDCI) 또는 카르보닐다이이미다졸(CDI)을 사용할 수 있으며, 바람직하게는 1-에틸-3-(3-다이메틸아미노프로필)카보다이이미드(EDCI)를 다이이소프로필에틸아민(DIPEA), 트라이에틸아민(TEA) 또는 다이메틸아미노피리딘(DMAP)과 함께 사용할 수 있다.
상기 반응에서 사용 가능한 용매로는 테트라하이드로퓨란, 다이옥산, 1,2-디메톡시에탄 등과 같은 에테르 용매, 벤젠, 톨루엔, 자일렌과 같은 방향족 하이드로카본 용매, 메탄올, 에탄올, 프로판올, 부탄올과 같은 저급 알코올, 디메틸포름아미드(DMF), 디메틸설폭사이드(DMSO), 아세토나이트릴, 물 등이 있으며, 이를 단독 또는 혼합하여 사용할 수 있다.
나아가, 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 광학 이성질체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 HCV 관련 간질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
출발물질(화학식 2로 표시되는 화합물)의 제법
상기 반응식 1의 출발 물질인 화학식 2의 화합물은 하기 반응식 2 내지 4에 나타낸 바와 같은 제조방법으로 제조할 수 있다.
상기 화학식 2에서 X가 모두 -NHC(=O)- 또는 -C(=O)NH-인 화학식 2로 표시되는 화합물의 유도체 2a는 하기 반응식 2 또는 3에 나타낸 바와 같은 제조방법으로 제조할 수 있다.
X가 모두 -NHC(=O)- 또는 -C(=O)NH-인 화학식 2로 표시되는 화합물의 유도체 2a는, 하기 반응식 2에 나타낸 바와 같이,
화학식 4로 표시되는 화합물과 화학식 5로 표시되는 화합물을 반응시켜 화학식 6으로 표시되는 화합물을 제조하는 단계(단계 1);
상기 단계 1에서 얻은 화학식 6으로 표시되는 화합물과 화학식 7로 표시되는 화합물을 반응시켜 화학식 8로 표시되는 화합물을 제조하는 단계(단계 2);및상기 단계 2에서 얻은 화학식 8로 표시되는 화합물과 화학식 9로 표시되는 화합물을 반응시켜 화학식 10으로 표시되는 화합물을 제조하는 단계(단계 3); 및
상기 단계 3에서 얻은 화학식 10으로 표시되는 화합물과 화학식 11로 표시되는 화합물을 반응시켜 화학식 2a로 표시되는 화합물을 제조하는 단계(단계 4);를 포함하는 제조방법을 통하여 제조할 수 있다.
[반응식 2]
Figure PCTKR2018011182-appb-I000055
상기 반응식 2에서,
R1, R4, R5 및 R6는 상기 화학식 1에서 정의한 바와 같고;
PG는 t-부틸옥시카보닐(BOC), 카보벤질옥시(Cbz), 9-플루오레닐메틸옥시카보닐(Fmoc), 아세틸(Ac), 벤조일(Bz), 벤질(Bn), p-메톡시벤질(PMB), 3,4-다이메톡시벤질(DMPM), p-메톡시페닐(PMP), 토실(Ts), 2,2,2-트리클로로에톡시카보닐(Troc), 2-트리메틸실릴에톡시카보닐(Teoc) 및 아릴옥시카보닐(Alloc) 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종의 아민 보호기(amine protectiong group)이고; 및
Y1 및 Y2는 각각 독립적으로 할로겐이다.
이하, 상기 반응식 2로 표시되는 제조방법에 대하여 상세히 설명한다.
본 발명에 따른 상기 반응식 2로 표시되는 제조방법에 있어서, 상기 단계 1은 화학식 4로 표시되는 화합물과 화학식 5로 표시되는 화합물을 반응시켜, 화학식 6으로 표시되는 화합물을 제조하는 단계이다. 구체적으로, 상전이 촉매(Phase-transfer catalyst)를 사용하는 알킬레이션 반응을 통하여 알킬이 도입된 화학식 6으로 표시되는 화합물을 제조하는 단계이다.
이때, 상기 상전이 촉매는 통상적으로 사용하는 상전이 촉매를 사용할 수 있으며 바람직하게는 4차 암모늄 염을 사용할 수 있으며, 본 발명에서는 TBAB(Tetra-n-butylammonium bromide)를 사용하였으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
또한, 상기 반응에서 사용 가능한 용매로는 테트라하이드로퓨란, 다이옥산, 1,2-디메톡시에탄 등과 같은 에테르 용매, 벤젠, 톨루엔, 자일렌과 같은 방향족 하이드로카본 용매, 메탄올, 에탄올, 프로판올, 부탄올과 같은 저급 알코올, 디메틸포름아미드(DMF), 디메틸설폭사이드(DMSO), 아세토나이트릴, 물 등이 있으며, 이를 단독 또는 혼합하여 사용할 수 있다.
나아가, 염기로는 N,N-다이메틸아미노피리딘(DMAP), 피리딘, 트라이에틸아민, N,N-다이이소프로필에틸아민, 1,8-디아자비사이클로[5.4.0]-7-운데센(DBU) 등의 유기염기 또는 소듐바이카보네이트, 수산화나트륨, 수산화칼륨 등의 무기염기가 있으며, 이를 단독 또는 혼합, 단량 또는 과량으로 사용할 수 있다.
본 발명에 따른 상기 반응식 2로 표시되는 제조방법에 있어서, 상기 단계 2 는 상기 단계 1에서 얻은 화학식 6으로 표시되는 화합물과 화학식 7로 표시되는 화합물을 반응시켜 화학식 8로 표시되는 화합물을 제조하는 단계이고, 상기 단계 3ㅇ은 상기 단계 2에서 얻은 화학식 8로 표시되는 화합물과 화학식 9로 표시되는 화합물을 반응시켜 화학식 10으로 표시되는 화합물을 제조하는 단계로서, 구체적으로, 단계 2를 통하여 화학식 6으로 표시되는 화합물의 할로겐과 화학식 7로 표시되는 프탈이미드 화합물의 아민이 반응하여 화학식 8로 표시되는 프탈이미드가 결합된 화합물을 제조한 후, 단계 3을 통해 화학식 10으로 표시되는 하이드라진 화합물을 사용하여 1차 아민을 제조한다.
상기 단계 2 및 3은 당업자라면 충분히 알고 있는 일반적인 프탈이미드를 사용한 -NH2 생성방법(Gabriel Synthesis)의 반응조건을 통하여 수행할 수 있으며, 본 발명에서는 본 발명에 따른 실시예와 같이 수행하였으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명에 따른 상기 반응식 2로 표시되는 제조방법에 있어서, 상기 단계 4 는 상기 단계 3에서 얻은 화학식 10으로 표시되는 화합물과 화학식 11로 표시되는 화합물을 반응시켜 화학식 2a로 표시되는 화합물을 제조하는 단계이다. 구체적으로, 축합제 및 염기 존재 하에 축합반응시켜 화학식 2a로 표시되는 화합물을 제조할 수 있다.
이때, 상기 축합제로는 비스 (2-옥소-3-옥사졸리디닐)포스피닉 클로라이드 (BOP-Cl), 벤조트리아졸-1-일옥시트리스(다이메틸아미노)포스포늄 헥사플루오로포스페이트 (BOP), 다이페닐포스포닐아자이드(diphenylphosphonylazide, DPPA) 등의 유기포스포러스계열의 시약, 다이사이클로헥실카보다이이미드(DCC), 다이아이소프로필카보다이이미드(DIC), 1-에틸-3-(3-다이메틸아미노프로필)카보다이이미드(EDCI) 등의 카보다이이미드 계열의 시약 또는 N,N-카보닐다이이미다졸(N,N-carbonyldiimidazole), O-벤조트리아졸-N,N,N’,N’-테트라메틸-우로니늄-헥사플루오로포스페이트(HBTU) 등을 단독 또는 혼합하여 사용할 수 있다.
또한, 상기 염기로는 N,N-다이메틸아미노피리딘(DMAP), 피리딘, 트라이에틸아민, N,N-다이이소프로필에틸아민, 1,8-디아자비사이클로[5.4.0]-7-운데센(DBU) 등의 유기염기 또는 소듐바이카보네이트, 수산화나트륨, 수산화칼륨 등의 무기염기가 있으며, 이를 단독 또는 혼합하여 사용할 수 있다.
나아가, 상기 반응에서 사용 가능한 용매로는 테트라하이드로퓨란, 다이옥산, 1,2-디메톡시에탄 등과 같은 에테르 용매, 벤젠, 톨루엔, 자일렌과 같은 방향족 하이드로카본 용매, 메탄올, 에탄올, 프로판올, 부탄올과 같은 저급 알코올, 디메틸포름아미드(DMF), 디메틸설폭사이드(DMSO), 아세토나이트릴, 물 등이 있으며, 이를 단독 또는 혼합하여 사용할 수 있다.
상기 화학식 2에서 X가 모두 -NHC(=O)- 또는 -C(=O)NH-인 화학식 2로 표시되는 화합물의 유도체 2a는 하기 반응식 2 또는 3에 나타낸 바와 같은 제조방법으로 제조할 수 있다.
또한, X가 모두 -NHC(=O)- 또는 -C(=O)NH-인 화학식 2로 표시되는 화합물의 유도체 2a는, 하기 반응식 3에 나타난 바와 같이,
화학식 12로 표시되는 화합물과 화학식 5로 표시되는 화합물을 반응시켜 화학식 13으로 표시되는 화합물을 제조하는 단계(단계 1);
상기 단계 1에서 얻은 화학식 13으로 표시되는 화합물과 화학식 9로 표시되는 화합물을 반응시켜 화학식 10으로 표시되는 화합물을 제조하는 단계(단계 2);
상기 단계 2에서 얻은 화학식 10으로 표시되는 화합물과 화학식 11로 표시되는 화합물을 반응시켜 화학식 2a로 표시되는 화합물을 제조하는 단계(단계 3);를 포함하는 제조방법을 통하여 제조할 수 있다.
[반응식 3]
Figure PCTKR2018011182-appb-I000056
상기 반응식 3에서,
R1, R4, R5 및 R6는 상기 화학식 1에서 정의한 바와 같고;
PG는 t-부틸옥시카보닐(BOC), 카보벤질옥시(Cbz), 9-플루오레닐메틸옥시카보닐(Fmoc), 아세틸(Ac), 벤조일(Bz), 벤질(Bn), p-메톡시벤질(PMB), 3,4-다이메톡시벤질(DMPM), p-메톡시페닐(PMP), 토실(Ts), 2,2,2-트리클로로에톡시카보닐(Troc), 2-트리메틸실릴에톡시카보닐(Teoc) 및 아릴옥시카보닐(Alloc) 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종의 아민 보호기(amine protectiong group)이고; 및
Y2는 할로겐이다.
이하, 상기 반응식 3으로 표시되는 제조방법에 대하여 상세히 설명한다.
본 발명에 따른 상기 반응식 3으로 표시되는 제조방법에 있어서, 상기 단계 1은 화학식 12로 표시되는 화합물과 화학식 5로 표시되는 화합물을 반응시켜, 화학식 13으로 표시되는 화합물을 제조하는 단계이다. 구체적으로, 염기 존재하에 알킬레이션 반응을 통하여 알킬이 도입된 화학식 13으로 표시되는 화합물을 제조하는 단계이다.
이때, 상기 염기로는 N,N-다이메틸아미노피리딘(DMAP), 피리딘, 트라이에틸아민, N,N-다이이소프로필에틸아민, 1,8-디아자비사이클로[5.4.0]-7-운데센(DBU) 등의 유기염기 또는 소듐바이카보네이트, 수산화나트륨, 수산화칼륨, 세슘 카보네이트 등의 무기염기를 상기 염기를 단독 또는 혼합, 단량 또는 과량으로 사용할 수 있으며, 본 발명에서는 세슘 카보네이트를 사용하였으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
상기 반응에서 사용 가능한 용매로는 테트라하이드로퓨란, 다이옥산, 1,2-디메톡시에탄 등과 같은 에테르 용매, 벤젠, 톨루엔, 자일렌과 같은 방향족 하이드로카본 용매, 메탄올, 에탄올, 프로판올, 부탄올과 같은 저급 알코올, 디메틸포름아미드(DMF), 디메틸설폭사이드(DMSO), 아세토나이트릴, 물 등이 있으며, 이를 단독 또는 혼합하여 사용할 수 있다.
본 발명에 따른 상기 반응식 3으로 표시되는 제조방법에 있어서, 상기 단계 2는 상기 단계 1에서 얻은 화학식 13으로 표시되는 화합물과 화학식 9로 표시되는 화합물을 반응시켜 화학식 10으로 표시되는 화합물을 제조하는 단계이며, 구체적으로, 화학식 13으로 표시되는 화합물의 니트로(NO2)를 금속 촉매 및 화학식 9로 표시되는 하이드라진 화합물 존재하에 환원반응시켜 1차 아민을 제조하는 단계이다.
상기 단계 2는 당업자라면 충분히 알고 있는 일반적인 니트로기를 아민으로 환원하는 방법을 통해 수행할 수 있으며, 본 발명에서는 본 발명에 따른 실시예와 같이 수행하였으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명에 따른 상기 반응식 3으로 표시되는 제조방법에 있어서, 상기 단계 3은 상기 단계 2에서 얻은 화학식 10으로 표시되는 화합물과 화학식 11로 표시되는 화합물을 반응시켜 화학식 2a로 표시되는 화합물을 제조하는 단계이며,
단계 3의 상세한 설명은 상기 반응식 2로 표시되는 제조방법의 단계 4와 동일하다.
상기 화학식 2에서 X 중 하나는 이미다졸이고 다른 하나가 -NHC(=O)- 또는 -C(=O)NH-일 때 화학식 2로 표시되는 화합물의 유도체 2b는 하기 반응식 4에 나타낸 바와 같이,
화학식 14로 표시되는 화합물과 화학식 5로 표시되는 화합물을 반응시켜 화학식 15로 표시되는 화합물을 제조하는 단계(단계 1);
상기 단계 1에서 얻은 화학식 15로 표시되는 화합물과 화학식 16으로 표시되는 화합물을 반응시켜 화학식 17로 표시되는 화합물을 제조하는 단계(단계 2);
상기 단계 2에서 얻은 화학식 17로 표시되는 화합물과 화학식 11로 표시되는 화합물을 반응시켜 화학식 18로 표시되는 화합물을 제조하는 단계(단계 3);
상기 단계 3에서 얻은 화학식 18로 표시되는 화합물을 반응시켜 화학식 19로 표시되는 화합물을 제조하는 단계(단계 4);
상기 단계 4에서 얻은 화학식 19로 표시되는 화합물을 반응시켜 화학식 20으로 표시되는 화합물을 제조하는 단계(단계 5); 및
상기 단계 5에서 얻은 화학식 20으로 표시되는 화합물과 화학식 11로 표시되는 화합물을 반응시켜 화학식 2b로 표시되는 화합물을 제조하는 단계(단계 6);을 포함하는 제조방법을 통하여 제조할 수 있다.
[반응식 4]
Figure PCTKR2018011182-appb-I000057
상기 반응식 4에 있어서,
R1, R4, R5 및 R6는 상기 화학식 1에서 정의한 바와 같고;
PG는 t-부틸옥시카보닐(BOC), 카보벤질옥시(Cbz), 9-플루오레닐메틸옥시카보닐(Fmoc), 아세틸(Ac), 벤조일(Bz), 벤질(Bn), p-메톡시벤질(PMB), 3,4-다이메톡시벤질(DMPM), p-메톡시페닐(PMP), 토실(Ts), 2,2,2-트리클로로에톡시카보닐(Troc), 2-트리메틸실릴에톡시카보닐(Teoc) 및 아릴옥시카보닐(Alloc) 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종의 아민 보호기(amine protectiong group)이고; 및
Y2는 할로겐이다.
이하, 상기 반응식 4로 표시되는 제조방법에 대하여 상세히 설명한다.
본 발명에 따른 상기 반응식 4로 표시되는 제조방법에 있어서, 상기 단계 1은 화학식 14로 표시되는 화합물과 화학식 5로 표시되는 화합물을 반응시켜 화학식 15로 표시되는 화합물을 제조하는 단계이다.
단계 1의 상세한 설명은 상기 반응식 3으로 표시되는 제조방법의 단계 1과 동일하다.
본 발명에 따른 상기 반응식 4로 표시되는 제조방법에 있어서, 상기 단계 2는 상기 단계 1에서 얻은 화학식 15로 표시되는 화합물과 화학식 16으로 표시되는 화합물을 반응시켜 화학식 17로 표시되는 화합물을 제조하는 단계이다. 구체적으로, Friedel-Crafts 아실레이션(Friedel-Crafts acylation)을 통하여 화학식 15로 표시되는 화합물에 아세틸기를 도입하는 단계이다.
상기 단계 2는 당업자라면 충분히 알고 있는 일반적인 Friedel-Crafts 아실레이션 반응 조건을 통하여 수행할 수 있으며, 본 발명에서는 본 발명에 따른 실시예와 같이 수행하였으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명에 따른 상기 반응식 4로 표시되는 제조방법에 있어서, 상기 단계 3은 상기 단계 2에서 얻은 화학식 17로 표시되는 화합물과 화학식 11로 표시되는 화합물을 반응시켜 화학식 18로 표시되는 화합물을 제조하는 단계이다. 구체적으로, 아세틸기를 브롬화(Bromination)한 후, 화학식 11로 표시되는 화합물을 염기 존재하에 반응시켜 화학식 18로 표시되는 화합물을 제조하는 단계이다.
이때, 상기 브롬화반응은 당업자라면 충분히 알고 있는 일반적인 브롬화 반응조건에 의해 수행할 수 있으며, 본 발명에서는 NBS(N-브로모석신이미드) 또는 CuBr2를 사용하여 브롬화 반응을 수행하였으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
또한, 상기 염기로는 N,N-다이메틸아미노피리딘(DMAP), 피리딘, 트라이에틸아민, N,N-다이이소프로필에틸아민(DIPEA), 1,8-디아자비사이클로[5.4.0]-7-운데센(DBU) 등의 유기염기 또는 소듐바이카보네이트, 수산화나트륨, 수산화칼륨 등의 무기염기를 사용할 수 있으며 이를 단독 또는 혼합, 단량 또는 과량으로 사용할 수 있다. 본 발명에서는 DIPEA를 사용하였으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
상기 반응에서 사용가능한 용매는 테트라하이드로퓨란, 다이옥산, 1,2-디메톡시에탄 등과 같은 에테르 용매, 벤젠, 톨루엔, 자일렌과 같은 방향족 하이드로카본 용매, 메탄올, 에탄올, 프로판올, 부탄올과 같은 저급 알코올, 디메틸포름아미드(DMF), 디메틸설폭사이드(DMSO), 아세토나이트릴, 물 등이 있으며, 이를 단독 또는 혼합하여 사용할 수 있다.
본 발명에 따른 상기 반응식 4로 표시되는 제조방법에 있어서, 상기 단계 4는 상기 단계 3에서 얻은 화학식 18로 표시되는 화합물을 반응시켜 화학식 19로 표시되는 화합물을 제조하는 단계이다. 구체적으로, 화학식 18로 표시되는 화합물을 NH4OAc를 사용하여 고리화 반응시켜 이미다졸을 형성하는 단계이다.
본 발명에서는 단계 4를 본 발명에 따른 실시예와 같이 수행하였으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명에 따른 상기 반응식 4로 표시되는 제조방법에 있어서, 상기 단계 5는 상기 단계 4에서 얻은 화학식 19로 표시되는 화합물을 반응시켜 화학식 20으로 표시되는 화합물을 제조하는 단계이다.
단계 5의 상세한 설명은 상기 반응식 3으로 표시되는 제조방법의 단계 2와 동일하다.
본 발명에 따른 상기 반응식 4로 표시되는 제조방법에 있어서, 상기 단계 6은 상기 단계 5에서 얻은 화학식 20으로 표시되는 화합물과 화학식 11로 표시되는 화합물을 반응시켜 화학식 2b로 표시되는 화합물을 제조하는 단계이다.
단계 6의 상세한 설명은 상기 반응식 2로 표시되는 제조방법의 단계 4와 동일하다.
나아가, 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 광학 이성질체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 HCV 관련 간질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
여기서, 상기 약학적 조성물의 화학식 1로 표시되는 화합물은 HCV(hepatitis C virus) 또는 HCV 돌연변이에 대한 항바이러스 효과를 나타낸다.
나아가, 상기 HCV 돌연변이는 L31V, Y93H 또는 L31V+Y93H(이중 돌연변이)일 수 있고, 상기가 아닌 다른 저항성을 유발한 돌연변이 일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
또한, 상기 HCV 관련 간질환은 급성 C형 간염, 만성 C형 간염, 간경변 및 간세포성 암으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상의 간질환일 수 있다. 이때, 상기 HCV 관련 간질환은 HCV 돌연변이가 발생된 것일 수 있다.
본 발명에 따른 실시예 화합물들이 낮은 농도에서 유전자형 1b, 2a, 3a형의 HCV를 억제하며, 유전자형 1b형에 빈번히 관찰되는 내성 돌연변이인 L31V, Y93H 및 L31V+Y93H(이중 돌연변이) 또한 낮은 농도에서 억제함을 확인하였다. 종래 HCV 약물들은 유전자형 1b를 선택적으로 낮은 농도에서 억제하는 반면, 2a 및 3a형에 대해서는 좋은 활성을 나타내지 못한 사례가 있는 반면, 본 발명에 따른 실시예 화합물은 1b, 2a 및 3a의 유전형을 모두 낮은 농도에서 우수하게 항바이러스 성능을 나타냄을 알 수 있다(실험예 및 표 5 참조).
따라서, 본 발명의 약학적 조성물은 단일 돌연변이인 L31V 및 Y93H 뿐만 아니라, 보다 강한 내성을 나타내는 L31V+Y93H(이중 돌연변이)를 낮은 농도에서 우수하게 억제함으로써, 단일 돌연변이 뿐만 아니라, 이중 또는 다중 돌연변이를 타겟으로 한 치료제로 유용하게 사용될 수 있으며, 기존 치료제의 내성 돌연변이 문제를 해결한 HCV 관련 간질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.
본 발명의 조성물을 의약품으로 사용하는 경우, 상기 화학식 1로 표시되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 함유하는 약학적 조성물은 임상투여 시에 다양한 하기의 경구 또는 비경구 투여 형태로 제제화되어 투여될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
경구 투여용 제형으로는 예를 들면 정제, 환제, 경/연질 캅셀제, 액제, 현탁제, 유화제, 시럽제, 과립제, 엘릭시르제, 트로키제 등이 있는데, 이들 제형은 유효성분 이외에 희석제(예: 락토즈, 덱스트로즈, 수크로즈, 만니톨, 솔비톨, 셀룰로즈 및/ 또는 글리신), 활택제(예: 실리카, 탈크, 스테아르산 또는 그의 마그네슘염 또는 칼슘염 및/또는 폴리에틸렌 글리콜)를 함유하고 있다. 또한, 정제는 마그네슘 알루미늄 실리케이트, 전분 페이스트, 젤라틴, 메틸셀룰로즈, 나트륨 카복시메틸셀룰로즈 및/또는 폴리비닐피롤리딘과 같은 결합제를 함유할 수 있으며, 경우에 따라 전분, 한천, 알긴산 또는 그의 나트륨염과 같은 붕해제 또는 비등 혼합물 및/또는 흡수제, 착색제, 향미제 및 감미제를 함유할 수 있다.
상기 화학식 1로 표시되는 화합물을 유효성분으로 하는 약학적 조성물은 비경구 투여할 수 있으며, 비경구 투여는 피하주사, 정맥주사, 근육 내 주사 또는 흉부 내 주사를 주입하는 방법에 의한다.
이때, 비경구 투여용 제형으로 제제화하기 위하여 상기 화학식 1의 바이페닐다이아마이드 유도체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 안정제 또는 완충제와 함께 물에 혼합하여 용액 또는 현탁액으로 제조하고, 이를 앰플 또는 바이알 단위 투여형으로 제조할 수 있다. 상기 조성물은 멸균되고/되거나 방부제, 안정화제, 수화제 또는 유화 촉진제, 삼투압 조절을 위한 염 및/또는 완충제 등의 보조제, 및 기타 치료적으로 유용한 물질을 함유할 수 있으며, 통상적인 방법인 혼합, 과립화 또는 코팅 방법에 따라 제제화할 수 있다.
상기 화학식 1로 표시되는 화합물을 유효성분으로 함유하는 약학적 조성물의 인체에 대한 투여량은 환자의 나이, 몸무게, 성별, 투여형태, 건강상태 및 질환 정도에 따라 달라질 수 있으며, 바람직하게는 0.01 내지 200 ㎎/㎏/일의 양으로 의사 또는 약사의 판단에 따라 일정시간 간격을 1일 수회, 바람직하게는 1일 1회 내지 3회로 분할하여 경구 또는 비경구적 경로를 통해 투여할 수 있다.
나아가, 본 발명의 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 광학 이성질체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 HCV 관련 간질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공한다.
여기서, 상기 건강기능식품 조성물의 화학식 1로 표시되는 화합물은 HCV(hepatitis C virus) 또는 HCV 돌연변이에 대한 항바이러스 효과를 나타낸다.
나아가, 상기 HCV 돌연변이는 L31V, Y93H 또는 L31V+Y93H(이중 돌연변이)일 수 있고, 상기가 아닌 다른 저항성을 유발한 돌연변이 일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
또한, 상기 HCV 관련 간질환은 급성 C형 간염, 만성 C형 간염, 간경변 및 간세포성 암으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상의 간질환일 수 있다. 이때, 상기 HCV 관련 간질환은 HCV 돌연변이가 발생된 것일 수 있다.
본 발명에 따른 건강기능식품은 HCV에 의하여 발병되는 간질환의 예방 또는 개선을 목적으로 상기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 식품학적으로 허용 가능한 염 또는 이의 광학 이성질체를 식품, 음료 등의 건강기능 식품에 첨가할 수 있다.
상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 물질을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 드링크제, 육류, 소시지, 빵, 비스킷, 떡, 초콜릿, 캔디류, 스낵류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 알코올 음료 및 비타민 복합제, 유제품 및 유가공 제품 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강기능식품을 모두 포함한다.
본 발명에 따른 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 식품학적으로 허용 가능한 염 또는 이의 광학 이성질체는 식품에 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효성분의 혼합량은 그의 사용 목적(예방 또는 개선용)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 건강기능식품 중의 상기 화합물의 양은 전체 식품 중량의 0.1 내지 90 중량부로 가할 수 있다. 그러나 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있다.
본 발명의 건강기능성 음료는 지시된 비율로 필수 성분으로서 상기 화합물을 함유하는 외에는 다른 성분에는 특별한 제한이 없으며 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등; 다이사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스 등; 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당, 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트라이톨 등의 당알코올이다. 상술한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제(예를 들면, 타우마틴, 스테비아 추출물 등) 및 합성 향미제(예를 들면, 사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 건강기능식품 100 당 일반적으로 약 1 내지 20 g, 바람직하게는 약 5내지 12 g이다.
상기 외에 본 발명에 따른 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 식품학적으로 허용 가능한 염 또는 이의 광학 이성질체를 유효성분으로 함유하는 건강기능식품은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제(예를 들면, 치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그 밖에 본 발명의 건강기능식품은 천연 과일쥬스 및 과일쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다.
이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 그렇게 중요하진 않지만 본 발명에 따른 건강기능식품 100 중량부 당 0.1 내지 약 20 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.
본 발명은, 상기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 이성질체, 이의 용매화물, 이의 수화물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 약학적 조성물 또는 건강기능식품을 필요한 대상에게 투여하는 단계를 포함하는 HCV 관련 간질환의 예방 또는 치료 방법을 제공한다.
본 발명은, HCV 관련 간질환의 예방 또는 치료에 있어서의, 상기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 이성질체, 이의 용매화물, 이의 수화물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 함유하는 약학적 조성물 또는 건강기능식품의 용도를 제공한다.
이하, 본 발명의 실시예 및 실험예에 대해 상세히 설명한다.
단, 하기 실시예 및 실험예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예 및 실험예에 한정되는 것은 아니다.
< 실시예 1> 디메틸 ((1R,1'R)-((2S,2'S)-(((9,9-디프로필-9H-플루오렌-2,7-디일)비스(아자네디일))비스(카보닐))비스(피롤리딘-2,1-디일))비스(2-옥소-1-페닐에탄-2,1-디일))디카바메이트의 제조
Figure PCTKR2018011182-appb-I000058
단계 1: 9,9-디프로필-2-니트로-9H-플루오렌의 제조
2,7-디니트로플루오렌 (10.0 g, 39.0 mmol) 및 Cs2CO3 (51.4 g, 117 mmol)의 DMF (100 mL) 혼합물을 아르곤하에 0 °C에서 교반시켰다. 20분 후, 1-아이도오프로판 (10.7 mL, 93.7 mmol)을 주사기로 적하첨가하고, 상기 반응혼합물을 천천히 상온까지 승온시키면서 밤샘교반시켰다. 상기 반응물을 물로 퀀칭하고, 물층을 EtOAc로 추출하였다. 상기 유기층을 소금물로 세척하고, MgSO4로 건조시키고, 필터하여 감압하에 농축하였다. 상기 잔여물로부터 실리카겔 메쉬를 제조하고, 플래시 크로마토그래피를 수행하여 (용리액: EtOAc/헥산) 9,9-디프로필-2-니트로-9H-플루오렌(11.29 g, 85%)를 얻었다.
1H-NMR (DMSO-d6, δ=2.5 ppm, 400 MHz): 8.41 (s, 2H), 8.30-8.24 (m, 4H), 2.17 (t, 4H), 0.98 (m, 4H), 0.56 (t, 6H), 0.37 (m, 4H).
단계 2: 9,9-디프로필-9H-플루오렌-2,7-디아민의 제조
마그네틱 바, Fe3O4 (119 mg, 0.514 mmol), 및 DMF (20 mL)를 오븐에서 건조한 two-necked 100 mL round-bottom 플라스크에 투입하고, 상기 혼합물을 초음파 배스(ultrasound bath)에서 아르곤하에 1분간 초음파처리하였다. 단계 1에서 얻은 화합물(874 mg, 2.57 mmol) 및 하이드라진 모노하이드레이트(1.00 mL, 20.5 mmol)를 상기 혼합물에 첨가하고, 아르곤 분위기하에 80 °C에서 단계 1에서 얻은 화합물이 소진될때까지 교반시켰다. Fe3O4를 자기분리(magnetic separation)한 후, 상기 반응 혼합물을 물로 희석하고, EtOAc로 추출하였다. 상기 유기층을 소금물로 세척하고, MgSO4로 건조시키고, 필터하여 진공하에 농축하였다. 별도의 정제 없이 9,9-디프로필-9H-플루오렌-2,7-디아민(668 mg, 93%)을 얻었다.
단계 3: (2S,2'S)-디-tert-부틸 2,2'-(((9,9-디프로필-9H-플루오렌-2,7-디일)비스(아잔디일))비스(카보닐))비스(피롤리딘-1-카복실레이트)의 제조
N-Boc-L-프롤린 (35 mg, 0.160 mmol), EDCI(1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필)카보디이미드) (31 mg, 0.160 mmol), DIPEA(N,N-디이소프로필에틸아민) (56 μL, 0.321 mmol) 및 단계 2에서 얻은 화합물(18 mg, 0.064 mmol)의 CH2Cl2 (0.5 mL)혼합물을 상온에서 밤샘교반하였다. 상기 반응 잔여물을 CH2Cl2 및 H2O로 층을 나눈 후, 유기층을 0.1N HCl (aq) 및 소금물로 세척하고 MgSO4로 건조한 후, 필터하고, 진공하에 농축하였다. 상기 잔여물로부터 실리카겔 메쉬를 제조하고, 플래시 크로마토그래피를 수행하여 (용리액: EtOAc/헥산) (2S,2'S)-디-tert-부틸 2,2'-(((9,9-디프로필-9H-플루오렌-2,7-디일)비스(아잔디일))비스(카보닐))비스(피롤리딘-1-카복실레이트)(23 mg, 53%)를 얻었다.
1H-NMR (DMSO-d6, δ=2.5 ppm, 400 MHz):
단계 4: 디메틸 ((1R,1'R)-((2S,2'S)-(((9,9-디프로필-9H-플루오렌-2,7-디일)비스(아자네디일))비스(카보닐))비스(피롤리딘-2,1-디일))비스(2-옥소-1-페닐에탄-2,1-디일))디카바메이트의 제조
단계 3에서 얻은 (2S,2'S)-디-tert-부틸 (2S,2'S)-디-tert-부틸 2,2'-(((9,9-디프로필-9H-플루오렌-2,7-디일)비스(아잔디일))비스(카보닐))비스(피롤리딘-1-카복실레이트) (19 mg, 0.040 mmol)의 2N HCl 디옥산 용액 (0.5 mL)을 상온에서 2시간 교반시켰다. 휘발성분을 감압하에 제거한 후, EDCI (19 mg, 0.100 mmol), 및 (R)-2-((메톡시카보닐)아미노)-2-페닐아세틱 애시드 (21 mg, 0.100 mmol)를 4분에 걸쳐 DIPEA(35 μL, 0.200 mmol)의 CH2Cl2 (0.5 mL)용액에 첨가하였다. 상기 반응 혼합물을 상온에서 18시간 교반시켰다. 상기 잔여물을 CH2Cl2 및 H2O로 층을 나눈 후, 유기층을 H2O 및 소금물로 세척하고 MgSO4로 건조한 후, 필터하고, 진공하에 농축하였다. 상기 잔여물로부터 실리카겔 메쉬를 제조하고, 플래시 크로마토그래피를 수행하여(용리액: EtOAc/헥산) 목적 화합물 (53%)을 얻었다.
1H-NMR (DMSO-d6, δ=2.5 ppm, 400 MHz):
< 실시예 2> 디메틸 ((1R,1'R)-((2S,2'S)-(((9,9-디부틸-9H-플루오렌-2,7-디일)비스(아자네디일))비스(카보닐))비스(피롤리딘-2,1-디일))비스(2-옥소-1-페닐에탄-2,1-디일))디카바메이트의 제조
Figure PCTKR2018011182-appb-I000059
단계 1: 9,9-디부틸-2,7-디니트로-9H-플루오렌의 제조
2,7-디니트로플루오렌 (10.0 g, 39.0 mmol)의 DMF(디메틸포름아미드) (100 mL)에 Cs2CO3를 0 °C에서 아르곤가스하에 첨가하였다. 20분 후, 1-아이오도부탄 (11.1 mL, 97.6 mmol)을 주사기로 상기 반응 혼합물에 적하첨가하였다. 상기 반응물에 물을 부어 퀀칭하고, 물층을 EtOAc로 추출하였다. 상기 유기층을 소금물로 세척하고, MgSO4로 건조한 후, 필터하고, 진공하에 농축하였다. 상기 잔여물로부터 실리카겔 메쉬를 제조하고, 플래시 크로마토그래피를 수행하여(용리액: EtOAc/헥산) 9,9-디부틸-2,7-디니트로-9H-플루오렌(6.18 g, 47%)를 얻었다.
1H-NMR (DMSO-d6, δ=2.5 ppm, 400 MHz): 8.41 (s, 2H), 8.30-8.24 (m, 4H), 2.17 (t, 4H), 0.98 (m, 4H), 0.56 (t, 6H), 0.37 (m, 4H).
단계 2: 9,9-디부틸-9H-플루오렌-2,7-디아민의 제조
마그네틱 바, Fe3O4 (843 mg, 3.64 mmol), 및 DMF (110 mL)를 오븐에서 건조한 two-necked 250 mL round-bottom 플라스크에 투입하고, 상기 혼합물을 초음파 배스(ultrasound bath)에서 1분간 초음파처리하였다. 단계 1에서 얻은 화합물 (6.18 g, 18.2 mmol) 및 하이드라진 모노하이드레이트 (7.08 mL, 146 mmol)을 상기 혼합물에 첨가하였다. 상기 반응물을 아르곤 분위기 하에 80 °C에서 단계 1의 화합물이 모두 소진될때까지 반응시켰다. Fe3O4의 자성 분리 후, 상기 반응 혼합물을 물로 희석하고, EtOAc로 추출하였다. 상기 유기층을 소금물로 세척하고, MgSO4로 건조한 후, 필터하고, 진공하에 농축하였다. 별도의 정제없이 9,9-디부틸-9H-플루오렌-2,7-디아민 (5.57 g, 99%)을 얻었다.
1H-NMR (DMSO-d6, δ=2.5 ppm, 400 MHz): 7.15 (d, 2H), 6.49 (d, 2H), 6.42 (dd, 2H), 4.87 (s, 4H), 1.73 (m, 4H), 1.02 (td, 4H), 0.64 (t, 6H), 0.52 (m, 4H).
단계 3: (2S,2'S)-디-tert-부틸 2,2'-(((9,9-디부틸-9H-플루오렌-2,7-디일)비스(아잔디일))비스(카보닐))비스(피롤리딘-1-카복실레이트)의 제조
상기 실시예 1의 단계 3과 동일한 방법을 수행하여 (2S,2'S)-디-tert-부틸 2,2'-(((9,9-디부틸-9H-플루오렌-2,7-디일)비스(아잔디일))비스(카보닐))비스(피롤리딘-1-카복실레이트)(9.60 g, 86%)를 얻었다.
1H-NMR (DMSO-d6, δ=2.5 ppm, 400 MHz): 10.03 (s, 2H), 7.76 (s, 1H), 7.63 (m, 4H), 7.48 (d, 1H), 4.29-4.17 (m, 2H), 3.41 (m, 2H), 3.34 (m, 2H), 2.20 (m, 2H), 1.92-1.78 (m, 10H), 1.40 (s, 6H), 1.24 (s, 12H), 1.01 (m, 4H), 0.60 (m, 6H), 0.50 (m, 4H).
단계 4: 디메틸 ((1R,1'R)-((2S,2'S)-(((9,9-디부틸-9H-플루오렌-2,7-디일)비스(아자네디일))비스(카보닐))비스(피롤리딘-2,1-디일))비스(2-옥소-1-페닐에탄-2,1-디일))디카바메이트의 제조
실시예 3의 단계 4와 동일한 방법을 수행하여 목적 화합물(3.49 g, 53%)을 얻었다.
1H-NMR (DMSO-d6, δ=2.5 ppm, 400 MHz): 10.30-9.96 (m, 2H), 7.74-7.51 (m, 8H), 7.42-7.30 (m, 10H), 5.52 (d, 2H), 4.43 (d, 2H), 3.82 (m, 2H), 3.55 (s, 6H), 3.19 (m, 2H), 1.99-1.79 (m, 12H), 1.05 (m, 4H), 0.64 (m, 6H), 0.52 (m, 4H).
< 실시예 3> 메틸 ((S)-1-((S)-2-(5-(9,9-디프로필-7-((S)-1-((R)-2-((메톡시카보닐)아미노)-2-페닐아세틸)피롤리딘-2-카복시아미도)-9H-플루오렌-2-일)-1H-이미다졸-2-일)피롤리딘-1-일)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카바메이트의 제조
Figure PCTKR2018011182-appb-I000060
단계 1: 2-니트로-9,9-디프로필-9H-플루오렌의 제조
2-니트로-9H-플루오렌 (3 g, 14.2 mmol) 및 Cs2CO3 (13.9 g, 42.6 mmol)의 DMF (50 mL)을 0 °C에서 아르곤 하에 30분간 교반시켰다. 브로모프로판(3.10 mL, 34.1 mmol)을 상기 반응 혼합물에 첨가하고 상온에서 밤샘 교반시켰다. 상기 반응물을 물로 퀀칭하고, 물층을 EtOAc로 추출하였다. 상기 유기층을 소금물로 세척하고, MgSO4로 건조한 후, 필터하고, 진공하에 농축하였다. 상기 잔여물로부터 실리카겔 메쉬를 제조하고, 플래시 크로마토그래피를 수행하여(용리액: EtOAc/헥산) 9,9-디에틸-2-니트로-9H-플루오렌 (2.99 g, 71%)을 얻었다.
단계 2: 1-(7-니트로-9,9-디프로필-9H-플루오렌-2-일)에탄-1-온의 제조
상기 단계 1에서 얻은 9,9-디프로필-2-니트로-9H-플루오렌 (2.99 g, 10.1 mmol)의 무수 CH2Cl2 (20 mL)에, AlCl3 (1.89 g, 14.2 mmol)를 아르곤 분위기하에 상온에서 첨가하였다. 상기 반응 혼합물을 40 °C까지 승온시켰다. 상기 용액에 아세틸 클로라이드(865 uL, 12.2 mmol) 를 적하첨가하였다. 상기 반응 혼합물을 밤샘 교반시켰다. 상기 반응물을 10% HCl (aq)로 퀀칭하고 0 °C에서 10분간 교반시켰다. 두층을 분리하고, 물층을 CH2Cl2로 추출하였다. 합친 유기층을 포화 NaHCO3 (aq)로 세척하고, MgSO4로 건조한 후, 필터하고, 진공하에 농축하였다. 상기 잔여물로부터 실리카겔 메쉬를 제조하고, 플래시 크로마토그래피를 수행하여(용리액: EtOAc/헥산) 1-(7-니트로-9,9-디프로필-9H-플루오렌-2-일)에탄-1-온(2.04 g, 60%)을 얻었다.
1H-NMR (CDCl3, δ=7.26 ppm, 400 MHz,): 8.24-8.19 (m, 2H), 7.99 (s, 1H), 7.96 (s, 1H), 7.85-7.82 (dd, 2H), 2.64 (s, 3H), 2.03-2.00 (t, 4H), 0.60-0.52 (m, 10H).
단계 3: (S)-1-tert-부틸 2-(2-(7-니트로-9,9-디프로필-9H-플루오렌-2-일)-2-옥소에틸) 피롤리딘-1,2-디카복실레이트의 제조
단계 2에서 얻은 1-(7-니트로-9,9-디프로필-9H-플루오렌-2-일)에탄-1-온 (2.04 g, 6.04 mmol), 쿠퍼 (Ⅱ) 브로마이드 (1.62 g, 7.25 mmol)의 에틸 아세테이트 (10 mL) / 클로로포름 (10 mL)을 가열하고, 8시간 환류시켰다. 상기 혼합물을 필터하여 쿠퍼 (Ⅱ) 브로마이드를 제거하였다. 여액을 진공하에 농축하여 노란색 고체를 얻었다. 상기 미정제 반응 혼합물을 ACN(아세토니트릴) (16 mL)에 용해시키고, N-Boc-L-프롤린 (2.55 g, 11.8 mmol) 및 DIPEA(2.40 mL, 13.8 mmol)를 첨가하였다. 상기 혼합물을 상온에서 출발물질이 사라질때까지 교반시켰다. 휘발성분을 감압하에 증발시키고, 잔여물을 EtOAc 및 물로 층을 나누었다. 상기 유기층을 소금물로 세척하고, MgSO4로 건조한 후, 필터하고, 진공하에 농축하였다. 상기 잔여물을 컬럼 크로마토그래피를 수행하여(용리액: EtOAc/헥산) (S)-1-tert-부틸 2-(2-(7-니트로-9,9-디프로필-9H-플루오렌-2-일)-2-옥소에틸) 피롤리딘-1,2-디카복실레이트 (2.2 g, 2단계 수율 96%)를 얻었다.
단계 4: (S)-tert-부틸 2-(5-(7-니트로-9,9-디프로필-9H-플루오렌-2-일)-1H-이미다졸-2-일)피롤리딘-1-카복실레이트의 제조
상기 단계 3에서 얻은 1-(tert-부틸) 2-(2-(7-니트로-9,9-디프로필-9H-플루오렌-2-일)-2-옥소에틸) (S)-피롤리딘-1,2-디카복실레이트 (2.67 g, 4.85 mmol), NH4OAc (5.61 g, 72.8 mmol), 톨루엔 (20 mL)을 실드 튜브에 넣어 90 °C에서 20시간 가열시켰다. 휘발성분을 진공하에 제거하고 상기 잔여물을 EtOAc 및 물로 층을 나누었다. 상기 유기층을 분리하고 물층을 추가적으로 EtOAc로 추출하였다. 상기 합친 유기층을 소금물로 세척하고, MgSO4로 건조한 후, 필터하고, 진공하에 농축하였다. 상기 잔여물을 컬럼 크로마토그래피를 수행하여(용리액: EtOAc/헥산) (S)-tert-부틸 2-(5-(7-니트로-9,9-디프로필-9H-플루오렌-2-일)-1H-이미다졸-2-일)피롤리딘-1-카복실레이트(1.37 g, 81%)를 얻었다.
단계 5: 메틸 ((S)-3-메틸-1-((S)-2-(5-(7-니트로-9,9-디프로필-9H-플루오렌-2-일)-1H-이미다졸-2-일)피롤리딘-1-일)-1-옥소부탄-2-일)카바메이트의 제조
상기 단계 4에서 얻은 (S)-tert-부틸 2-(5-(7-니트로-9,9-디프로필-9H-플루오렌-2-일)-1H-이미다졸-2-일)피롤리딘-1-카복실레이트 (1.37 g, 2.58 mmol) 및 2N HCl 디옥산 (20 mL)을 상온에서 2시간동안 교반시켰다. 휘발성분을 진공하게 제거하고, 상기 반응 잔여물을 CH2Cl2 (10 mL)에 용해시켰다. 상기 용액에 EDCI (1.29 g, 6.71 mmol), HOBt (906 mg, 6.71 mmol), (메톡시카보닐)-L-발린 (1.08 g, 6.19 mmol), 및 DIPEA(2.25 mL, 12.9 mmol) 를 첨가하였다. 상기 반응 혼합물을 상온에서 밤샘교반하였다. 상기 잔여물을 CH2Cl2 및 H2O로 층을 나눈 후, 유기층을 H2O 및 소금물로 세척하고 MgSO4로 건조한 후, 필터하고, 진공하에 농축하였다. 상기 잔여물로부터 실리카겔 메쉬를 제조하고, 플래시 크로마토그래피를 수행하여(용리액: EtOAc/헥산) 메틸 ((S)-3-메틸-1-((S)-2-(5-(7-니트로-9,9-디프로필-9H-플루오렌-2-일)-1H-이미다졸-2-일)피롤리딘-1-일)-1-옥소부탄-2-일)카바메이트
(1.12 g, 74%)를 얻었다.
단계 6: 메틸 ((S)-1-((S)-2-(5-(7-아미노-9,9-디프로필-9H-플루오렌-2-일)-1H-이미다졸-2-일)피롤리딘-1-일)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카바메이트의 제조
상기 실시예 4의 단계 2와 동일한 방법을 수행하여 메틸 ((S)-1-((S)-2-(5-(7-아미노-9,9-디프로필-9H-플루오렌-2-일)-1H-이미다졸-2-일)피롤리딘-1-일)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카바메이트(806 mg, 76%)를 얻었다.
단계 7: (S)-tert-부틸 2-((7-(2-((S)-1-((S)-2-((메톡시카보닐)아미노)-3-메틸부타노일)피롤리딘-2-일)-1H-이미다졸-5-일)-9,9-디프로필-9H-플루오렌-2-일)카바모일)피롤리딘-1-카복실레이트의 제조
실시예 3의 단계 4와 동일한 방법을 수행하여 (S)-tert-부틸 2-((7-(2-((S)-1-((S)-2-((메톡시카보닐)아미노)-3-메틸부타노일)피롤리딘-2-일)-1H-이미다졸-5-일)-9,9-디프로필-9H-플루오렌-2-일)카바모일)피롤리딘-1-카복실레이트(793 mg, 99%)를 얻었다.
LC/MS: Anal. Calcd. For [M+H]+ : C43H59N6O6: 755.4; found 755.4
단계 8: 메틸 ((S)-1-((S)-2-(5-(9,9-디프로필-7-((S)-1-((R)-2-((메톡시카보닐)아미노)-2-페닐아세틸)피롤리딘-2-카복시아미도)-9H-플루오렌-2-일)-1H-이미다졸-2-일)피롤리딘-1-일)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카바메이트의 제조
실시예 3의 단계 5와 동일한 방법을 수행하여 목적 화합물(718 mg, 85%)을 얻었다.
LC/MS: Anal. Calcd. For [M+H]+ : C48H60N7O7: 846.5 ; found 846.4
본 발명의 실시예 1 내지 42의 화합물은 상기 실시예 1-3 중 어느 하나와 동일한 방법을 수행하여 제조하였으며, 실시예의 화학구조 및 분석 데이터(NMR 또는 LC/MS)를 하기 표 1 내지 4에 나타내었다.
실시예 화학구조 화합물명 NMR 또는 LC/MS
1
Figure PCTKR2018011182-appb-I000061
 디메틸 ((1R,1'R)-((2S,2'S)-(((9,9-디프로필-9H-플루오렌-2,7-디일)비스(아자네디일))비스(카보닐))비스(피롤리딘-2,1-디일))비스(2-옥소-1-페닐에탄-2,1-디일))디카바메이트 LC/MS: Anal. Calcd. For [M+H]+ : C49H57N6O8: 857.4 ; found 857.3
2
Figure PCTKR2018011182-appb-I000062
 디메틸 ((1R,1'R)-((2S,2'S)-(((9,9-디부틸-9H-플루오렌-2,7-디일)비스(아자네디일))비스(카보닐))비스(피롤리딘-2,1-디일))비스(2-옥소-1-페닐에탄-2,1-디일))디카바메이트 1H-NMR (DMSO-d6, δppm, 400 MHz): 10.30-9.96 (m, 2H), 7.74-7.51 (m, 8H), 7.42-7.30 (m, 10H), 5.52 (d, 2H), 4.43 (d, 2H), 3.82 (m, 2H), 3.55 (s, 6H), 3.19 (m, 2H), 1.99-1.79 (m, 12H), 1.05 (m, 4H), 0.64 (m, 6H), 0.52 (m, 4H). LC/MS: Anal. Calcd. For [M+H]+ : C51H61N6O8: 885.5 ; found 885.4
3
Figure PCTKR2018011182-appb-I000063
 메틸 ((S)-1-((S)-2-(5-(9,9-디프로필-7-((S)-1-((R)-2-((메톡시카보닐)아미노)-2-페닐아세틸)피롤리딘-2-카복시아미도)-9H-플루오렌-2-일)-1H-이미다졸-2-일)피롤리딘-1-일)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카바메이트 LC/MS: Anal. Calcd. For [M+H]+ : C48H60N7O7: 846.5 ; found 846.4
4
Figure PCTKR2018011182-appb-I000064
 디메틸 ((1R,1'R)-((2S,2'S)-(((9,9-비스(4,4,4-트리플루오로부틸)-9H-플루오렌-2,7-디일)비스(아자네디일))비스(카보닐))비스(피롤리딘-2,1-디일))비스(2-옥소-1-페닐에탄-2,1-디일))디카바메이트 LC/MS: Anal. Calcd. For [M+H]+: C51H55F6N6O8 +: 993.4; found 993.3.
5
Figure PCTKR2018011182-appb-I000065
 메틸 ((R)-2-((S)-2-((7-((R)-1-((S)-2-((메톡시카보닐)아미노)-2-페닐아세틸)피롤리딘-2-카복시아미도)-9,9-비스(5,5,5-트리플루오로펜틸)-9H-플루오렌-2-일)카바모일)피롤리딘-1-일)-2-옥소-1-페닐에틸)카바메이트 LC/MS: Anal. Calcd. For [M+H]+: C53H59F6N6O8 +: 1021.4; found 1021.3.
6
Figure PCTKR2018011182-appb-I000066
 디메틸 ((1R,1'R)-((5S,5'S)-(((9,9-디부틸-9H-플루오렌-2,7-디일)비스(아자네디일))비스(카보닐))비스(3-옥소피롤리딘-5,1-디일))비스(2-옥소-1-페닐에탄-2,1-디일))디카바메이트 LC/MS: Anal. Calcd. For [M+H]+ : C51H56N6O10: 913.4 ; found 913.3
7
Figure PCTKR2018011182-appb-I000067
 메틸 ((R)-2-((S)-8-((9,9-디부틸-7-((S)-1-((R)-2-((메톡시카보닐)아미노)-2-페닐아세틸)-4-옥소피롤리딘-2-카복시아미도)-9H-플루오렌-2-일)카바모일)-1,4-디옥사-7-아자스피로[4.4]노난-7-일)-2-옥소-1-페닐에틸)카바메이트 LC/MS: Anal. Calcd. For [M+H]+ : C53H61N6O11: 957.4 ; found 957.5
8
Figure PCTKR2018011182-appb-I000068
 메틸 ((S)-1-((S)-2-(5-(9,9-디에틸-7-((S)-1-((R)-2-((메톡시카보닐)아미노)-2-페닐아세틸)피롤리딘-2-카복시아미도)-9H-플루오렌-2-일)-1H-이미다졸-2-일)피롤리딘-1-일)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카바메이트 LC/MS: Anal. Calcd. For [M+H]+ C46H55N7O7: 818.4; found 818.4.
9
Figure PCTKR2018011182-appb-I000069
 메틸 ((S)-1-((S)-2-(5-(9,9-디부틸-7-((S)-1-((R)-2-((메톡시카보닐)아미노)-2-페닐아세틸)피롤리딘-2-카복시아미도)-9H-플루오렌-2-일)-1H-이미다졸-2-일)피롤리딘-1-일)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카바메이트 LC/MS: Anal. Calcd. For [M+H]+ C50H64N7O7: 874.5; found 874.4.
10
Figure PCTKR2018011182-appb-I000070
 메틸 ((R)-2-((S)-2-((9,9-디부틸-7-((S)-1-((R)-2-((메톡시카보닐)아미노)-2-페닐아세틸)피롤리딘-2-카복시아미도)-9H-플루오렌-2-일)카바모일)-4-옥소피롤리딘-1-일)-2-옥소-1-페닐에틸)카바메이트 LC/MS: Anal. Calcd. For [M+H]+ : C51H59N6O9: 900.1 ; found 900.2
실시예 화학구조 화합물명 NMR 또는 LC/MS
11
Figure PCTKR2018011182-appb-I000071
 디메틸 ((1R,1'R)-((2S,2'S)-(((9,9-디펜틸-9H-플루오렌-2,7-디일)비스(아자네디일))비스(카보닐))비스(피롤리딘-2,1-디일))비스(2-옥소-1-페닐에탄-2,1-디일))디카바메이트 1H-NMR (DMSO-d6, δppm, 400 MHz): 10.30-9.96 (m, 2H), 7.74-7.51 (m, 8H), 7.42-7.30 (m, 10H), 5.52 (d, 2H), 4.43 (d, 2H), 3.82 (m, 2H), 3.55 (s, 6H), 3.19 (m, 2H), 1.99-1.79 (m, 12H), 1.05 (m, 4H), 0.64 (m, 6H), 0.52 (m, 4H). LC/MS: Anal. Calcd. For [M+H]+ : C53H65N6O8: 913.5 ; found 913.3
12
Figure PCTKR2018011182-appb-I000072
 메틸 ((R)-2-((S)-2-((7-((S)-7-((R)-2-((메톡시카보닐)아미노)-2-페닐아세틸)-1,4-디옥사 -7-아자스피로 [4.4]노난 -8-카복스아미도)-9,9-디펜틸 -9H-플루오렌 -2-일)카바모일)피롤리딘 -1-일)-2-옥소 -1-페닐에틸)카바메이트 LC/MS: Anal. Calcd. For [M+H]+ : C55H67N6O10: 971.5 ; found 971.4
13
Figure PCTKR2018011182-appb-I000073
 디메틸 ((1R,1'R)-((8S,8'S)-(((9,9-디펜틸-9H-플루오렌 -2,7-디일)비스 (아자네디일))비스(카보닐))비스 (1,4-디옥사 -7-아자스피로[4.4]노난 -8,7-디일))비스 (2-옥소 -1-페닐에탄 -2,1-디일))디카바메이트 LC/MS: Anal. Calcd. For [M+H]+ : C57H69N6O12: 1029.5 ; found 1029.5
14
Figure PCTKR2018011182-appb-I000074
 메틸 ((S)-1-((S)-2-(5-(9,9-디부틸-7-((S)-7-((R)-2-((메톡시카보닐)아미노)-2-페닐아세틸)-1,4-디옥사-7-아자스피로[4.4]노난-8-카복시아미도)-9H-플루오렌-2-일)-1H-이미다졸-2-일)피롤리딘-1-일)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카바메이트 LC/MS: Anal. Calcd. For [M+H]+ : C52H66N7O9: 932.5 ; found 932.1
15
Figure PCTKR2018011182-appb-I000075
 디메틸 ((1R,1'R)-((8S,8'S)-(((9,9-디부틸-9H-플루오렌-2,7-디일)비스(아자네디일))비스(카보닐))비스(1,4-디옥사-7-아자스피로[4.4]노난-8,7-디일))비스(2-옥소-1-페닐에탄-2,1-디일))디카바메이트 LC/MS: Anal. Calcd. For [M+H]+ : C55H64N6NaO12: 1023.4 ; found 1024.1
16
Figure PCTKR2018011182-appb-I000076
 메틸 ((R)-2-((S)-8-((9,9-디부틸-7-((S)-1-((R)-2-((메톡시카보닐)아미노)-2-페닐아세틸)피롤리딘-2-카복시아미도)-9H-플루오렌-2-일)카바모일)-1,4-디옥사-7-아자스피로[4.4]노난-7-일)-2-옥소-1-페닐에틸)카바메이트 LC/MS: Anal. Calcd. For [M+H]+ : C53H63N6O10: 943.5 ; found 944.4
17
Figure PCTKR2018011182-appb-I000077
 디메틸 ((1R,1'R)-((5S,5'S)-(((9,9-디펜틸-9H-플루오렌-2,7-디일)비스(아자네디일))비스(카보닐))비스(3-옥소피롤리딘-5,1-디일))비스(2-옥소-1-페닐에탄-2,1-디일))디카바메이트 LC/MS: Anal. Calcd. For [M+H]+ : C53H61N6O10: 941.4 ; found 941.3
18
Figure PCTKR2018011182-appb-I000078
 메틸 ((R)-2-((S)-8-((7-((S)-1-((R)-2-((메톡시카보닐)아미노)-2-페닐아세틸)-4-옥소피롤리딘-2-카복시아미도)-9,9-디펜틸-9H-플루오렌-2-일)카바모일)-1,4-디옥사-7-아자스피로[4.4]노난-7-일)-2-옥소-1-페닐에틸)카바메이트 LC/MS: Anal. Calcd. For [M+H]+ : C55H65N6O11: 985.5; found 985.3
19
Figure PCTKR2018011182-appb-I000079
 메틸 ((R)-2-((S)-2-((7-((S)-1-((R)-2-((메톡시카보닐)아미노)-2-페닐아세틸)피롤리딘-2-카복시아미도)-9,9-디펜틸-9H-플루오렌-2-일)카바모일)-4-옥소피롤리딘-1-일)-2-옥소-1-페닐에틸)카바메이트 LC/MS: Anal. Calcd. For [M+H]+ : C53H63N6O9: 927.5 ; found 928.1
20
Figure PCTKR2018011182-appb-I000080
 디메틸 ((1R,1'R)-((5S,5'S)-(((9,9-디부틸-9H-플루오렌-2,7-디일)비스(아자네디일))비스(카보닐))비스(3,3-디플로오로피롤리딘-5,1-디일))비스(2-옥소-1-페닐에탄-2,1-디일))디카바메이트 LC/MS: Anal. Calcd. For [M+H]+ : C51H57F4N6O8: 957.4 ; found 958.3
실시예 화학구조 화합물명 NMR 또는 LC/MS
21
Figure PCTKR2018011182-appb-I000081
 디메틸 ((1R,1'R)-((6S,6'S)-(((9,9-디부틸-9H-플루오렌-2,7-디일)비스(아자네디일))비스(카보닐))비스(5-아자스피로[2.4]헵탄-6,5-디일))비스(2-옥소-1-페닐에탄-2,1-디일))디카바메이트 LC/MS: Anal. Calcd. For [M+H]+ : C55H65N6O8: 937.5 ; found 937.4
22
Figure PCTKR2018011182-appb-I000082
 디메틸 ((1R,1'R)-((2S,2'S,3aR,3a'R,6aR,6a'R)-(((9,9-디부틸-9H-플루오렌-2,7-디일)비스(아자네디일))비스(카보닐))비스(헥사하이드로사이클로펜타[b]피롤-2,1(2H)-디일))비스(2-옥소-1-페닐에탄-2,1-디일))디카바메이트 LC/MS: Anal. Calcd. For [M+H]+ C57H69N6O8: 965.5; found 965.5
23
Figure PCTKR2018011182-appb-I000083
 디메틸 ((1R,1'R)-((2S,2'S,3aR,3a'R,6aR,6a'R)-(((9,9-디부틸-9H-플루오렌-2,7-디일)비스(아자네디일))비스(카보닐))비스(헵사하이드로카이클로펜타[b]피롤-2,1(2H)-디일))비스(2-옥소-1-페닐에탄-2,1-디일))디카바메이트 LC/MS: Anal. Calcd. For [M+H]+ C53H61F2N6O8: 947.5; found: 947.4
24
Figure PCTKR2018011182-appb-I000084
 메틸 ((R)-2-((S)-2-((9,9-디부틸-7-((S)-5-((R)-2-((메톡시카보닐)아미노)-2-페닐아세틸)-5-아자스피로[2.4]헵탄-6-카복시아미도)-9H-플루오렌-2-일)카바모일)-4,4-디플로오로피롤리딘-1-일)-2-옥소-1-페닐에틸)카바메이트 LC/MS: Anal. Calcd. For [M+H]+ C54H63F2N6O8: 961.5; found 961.4
25
Figure PCTKR2018011182-appb-I000085
 메틸 ((R)-2-((S)-6-((9,9-디부틸-7-((2S,3aR,6aR)-1-((R)-2-((메톡시카보닐)아미노)-2-페닐아세틸)옥타하이드로사이클로펜타[b]피롤-2-카복시아미도)-9H-플루오렌-2-일)카바모일)-5-아자스피로[2.4]헵탄-5-일)-2-옥소-1-페닐에틸)카바메이트 LC/MS: Anal. Calcd. For [M+H]+ C56H67N6O8: 951.5; found: 951.5
26
Figure PCTKR2018011182-appb-I000086
 메틸 ((S)-1-((S)-2-(5-(9,9-디부틸-7-((S)-5-((R)-2-((메톡시카보닐)아미노)-2-페닐아세틸)-5-아자스피로[2.4]헵탄-6-카복시아미도)-9H-플루오렌-2-일)-1H-이미다졸-2-일)피롤리딘-1-일)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카바메이트 LC/MS: Anal. Calcd. For [M+H]+ C52H66N7O7: 900.5; found: 900.4
27
Figure PCTKR2018011182-appb-I000087
 메틸 ((S)-1-((S)-2-(5-(7-((S)-7-((R)-2-((메톡시카보닐)아미노)-2-페닐아세틸)-1,4-디옥사-7-아자스피로[4.4]노난-8-카복시아미도)-9,9-디프로필-9H-플루오렌-2-일)-1H-이미다졸-2-일)피롤리딘-1-일)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카바메이트 LC/MS: Anal. Calcd. For [M+H]+ : C50H62N7O9: 904.5 ; found 904.4
28
Figure PCTKR2018011182-appb-I000088
 메틸 ((S)-1-((S)-2-(5-(9,9-디부틸-7-((2S,3aR,6aR)-1-((R)-2-((메톡시카보닐)아미노)-2-페닐아세틸)옥타하이드로사이클로펜타[b]피롤-2-카복시아미도)-9H-플루오렌-2-일)-1H-이미다졸-2-일)피롤리딘-1-일)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카바메이트 LC/MS: Anal. Calcd. For [M+H]+ C41H55N6O6: 914.52; found 914.5.
29
Figure PCTKR2018011182-appb-I000089
 디메틸 ((1R,1'R)-((3R,3'R,5S,5'S)-(((9,9-디부틸-9H-플루오렌-2,7-디일)비스(아자네디일))비스(카보닐))비스(3-하이드록시피롤리딘-5,1-디일))비스(2-옥소-1-페닐에탄-2,1-디일))디카바메이트 LC/MS: Anal. Calcd. For [M+H]+ : C51H61N6O10: 917.4 ; found 917.3
30
Figure PCTKR2018011182-appb-I000090
 디메틸 (1R,1'R)-2,2'-((2S,2'S)-2,2'-(9,9-디에틸-9H-플루오렌-2,7-디일)비스(아자네디일)비스(옥소메틸렌)비스(피롤리딘-2,1-디일))비스(2-옥소-1-페닐에탄-2,1-디일)디카바메이트 LC/MS: Anal. Calcd. For [M+H]+ : C47H53N6O8: 829.4 ; found 829.3
실시예 화학구조 화합물명 NMR 또는 LC/MS
31
Figure PCTKR2018011182-appb-I000091
 메틸((S)-1-((S)-2-(5-(9,9-디부틸 -7-((2S,4R)-4-하이드록시 -1-((R)-2-((메톡시카보닐)아미노)-2-페닐아세틸)피롤리딘 -2-카복시아미도)-9H-플루오렌-2-일)-1H-이미다졸 -2-일)피롤리딘 -1-일)-3-메틸 -1-옥소부탄 -2-일)카바메이트 LC/MS: Anal. Calcd. For [M+H]+ : C50H64N7O8: 890.5 ; found 890.3
32
Figure PCTKR2018011182-appb-I000092
 (3R,3'R,5S,5'S,52R)-5,5'-(9,9-디부틸-9H-플루오렌-2,7-디일)비스(아자네디일)비스(옥소메틸렌)비스(1-((R)-2-(메톡시카보닐아미노)-2-페닐아세틸)피롤리딘-5,3-디일) 비스(2-메틸프로파노에이트) LC/MS: Anal. Calcd. For [M+H]+ : C59H73N6O12: 1057.5 ; found 1057.5
33
Figure PCTKR2018011182-appb-I000093
 (3R,3'R,5S,5'S,52R)-5,5'-(9,9-디부틸-9H-플루오렌-2,7-디일)비스(아자네디일)비스(옥소메틸렌)비스(1-((R)-2-(메톡시카보닐아미노)-2-페닐아세틸)피롤리딘-5,3-디일) 비스(2-모폴리노아세테이트) LC/MS: Anal. Calcd. For [M+H]+ : C63H79N8O14: 1171.6 ; found 1171.4
34
Figure PCTKR2018011182-appb-I000094
 디메틸 (1R,1'R)-2,2'-((3R,3'R,5S,5'S)-5,5'-(9,9-디부틸-9H-플루오렌-2,7-디일)비스(아자네디일)비스(옥소메틸렌)비스(3-(2-메톡시에톡시)피롤리딘-5,1-디일))비스(2-옥소-1-페닐에탄-2,1-디일)디카바메이트 LC/MS: Anal. Calcd. For [M+H]+ : C57H73N6O12: 1033.5 ; found 1033.4
35
Figure PCTKR2018011182-appb-I000095
 디메틸 (1R,1'R)-2,2'-((3S,3'S,5S,5'S)-5,5'-(9,9-디부틸-9H-플루오렌-2,7-디일)비스(아자네디일)비스(옥소메틸렌)비스(3-하이드록시피롤리딘-5,1-디일))비스(2-옥소-1-페닐에탄-2,1-디일)디카바메이트 LC/MS: Anal. Calcd. For [M+H]+ : C51H61N6O10: 917.4 ; found 917.3
36
Figure PCTKR2018011182-appb-I000096
 디메틸 (1R,1'R)-2,2'-((3S,3'S,5S,5'S)-5,5'-(9,9-디부틸-9H-플루오렌-2,7-디일)비스(아자네디일)비스(옥소메틸렌)비스(3-(메톡시메틸)피롤리딘-5,1-디일))비스(2-옥소-1-페닐에탄-2,1-디일)디카바메이트 LC/MS: Anal. Calcd. For [M+H]+ C55H69N6O10: 973.5; found: 973.3
37
Figure PCTKR2018011182-appb-I000097
 메틸 ((R)-2-((2S,4S)-2-((9,9-디부틸-7-((S)-1-((R)-2-((메톡시카보닐)아미노)-2-페닐아세틸)피롤리딘-2-카복시아미도)-9H-플루오렌-2-일)카바모일)-4-(메톡시메틸)피롤리딘-1-일)-2-옥소-1-페닐에틸)카바메이트 LC/MS: Anal. Calcd. For [M+H]+ C53H65N6O9: 929.5; found: 929.3
38
Figure PCTKR2018011182-appb-I000098
 메틸 ((R)-2-((2S,4S)-2-((9,9-디부틸-7-((2S,4R)-4-하이드록시-1-((R)-2-((메톡시카보닐)아미노)-2-페닐아세틸)피롤리딘-2-카복시아미도)-9H-플루오렌-2-일)카바모일)-4-(메톡시메틸)피롤리딘-1-일)-2-옥소-1-페닐에틸)카바메이트 LC/MS: Anal. Calcd. For [M+H]+ C53H65N6O10: 945.5; found: 945.3
39
Figure PCTKR2018011182-appb-I000099
 디메틸 (1R,1'R)-2,2'-((3R,3'R,5S,5'S)-5,5'-(9,9-디부틸-9H-플루오렌-2,7-디일)비스(아자네디일)비스(옥소메틸렌)비스(3-메톡시피롤리딘-5,1-디일))비스(2-옥소-1-페닐에탄-2,1-디일)디카바메이트 LC/MS: Anal. Calcd. For [M+H]+ C53H65N6O10 + : 945.5 ; found 945.4
40
Figure PCTKR2018011182-appb-I000100
 메틸 ((S)-1-((2S,4S)-2-(5-(9,9-디부틸-7-((2S,4S)-1-((R)-2-((메톡시카보닐)아미노)-2-페닐아세틸)-4-(메톡시메틸)피롤리딘-2-카복시아미도)-9H-플루오렌-2-일)-1H-이미다졸-2-일)-4-(메톡시메틸)피롤리딘-1-일)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카바메이트 LC/MS: Anal. Calcd. For [M+H]+ C54H72N7O9 + : 962.5 ; found 962.4
41
Figure PCTKR2018011182-appb-I000101
 메틸 ((S)-1-((2S,4S)-2-(5-(9,9-디부틸-7-((S)-1-((R)-2-((메톡시카보닐)아미노)-2-페닐아세틸)피롤리딘-2-카복시아미도)-9H-플루오렌-2-일)-1H-이미다졸-2-일)-4-(메톡시메틸)피롤리딘-1-일)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카바메이트 LC/MS: Anal. Calcd. For [M+H]+ C52H68N7O8 + : 918.5 ; found 918.4
42
Figure PCTKR2018011182-appb-I000102
 메틸 ((S)-1-((S)-2-(5-(9,9-디부틸-7-((2S,4S)-1-((R)-2-((메톡시카보닐)아미노)-2-페닐아세틸)-4-(메톡시메틸)피롤리딘-2-카복시아미도)-9H-플루오렌-2-일)-1H-이미다졸-2-일)피롤리딘-1-일)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카바메이트 LC/MS: Anal. Calcd. For [M+H]+ C52H68N7O8 + : 918.5 ; found 918.4
< 실험예 1> HCVcc를 이용한 실시예 화합물의 항- HCV 활성 측정
단계 1: 세포 주 및 세포 배양
Huh 7.5.1 세포는 항생제(100 U/mL penicillin, 10 μg/mL streptomycin) 및 10% 열-비활성화 소태아혈청(heat-inactivated fetal bovine serum (ΔFBS; PEAK))을 보충한 Dulbecco's Modified Eagle's medium (DMEM; Gibco)에서 37°C, 6.0% 습도의 CO2 incubator에서 성장시켰다.
단계 2: 바이러스 생성
E2와 p7 영역에서 적응 돌연변이(adaptive mutation)를 가진 JFH1의 유도체인 JFH5a-Rluc-ad34의 시험 관내 전사 RNA를 전기천공법(electroporation) 으로 Huh7.5.1 세포로 형질주입 시켰다. JFH5a-Rluc-ad34 바이러스는 바이러스 증식 분석에 편리한 Renilla 루시퍼라제(luciferase, Rluc)를 포함하고 있다. HCV를 포함하는 세포 배양 배지를 전기천공 후 3 ~ 5 일에 수집 한 다음 0.45 μM의 기공 크기 필터를 통해 여과 하였다.
단계 3: 감염성 HCV 입자(infectious HCV particle)를 이용한 항 바이러스 활성 시험
Huh 7.5.1 세포에 JFH5a-Rluc-ad34 바이러스를 접종하고 4 시간 동안 배양 하였다. 바이러스 접종 4 시간 후, HCV에 감염된 Huh7.5.1 세포를 연속 희석된 실시예 화합물을 함유하는 배지로 배양 하였다. 3일 후, 세포를 수확하고 세포 내 루시퍼라제(luciferase) 활성을 Renilla 루시퍼라제 분석 시스템 (Renilla luciferase assay system, Promega)을 사용하여 측정 하였다. 최종적으로 루시퍼라제 활성은 음성 대조군 세포(mock-treated cells) 로부터 수득한 것으로 표준화하였다.
< 실험예 2> HCV 레플리콘(HCV replicon)을 사용한 실시예 화합물의 항- HCV 활성 측정
단계 1: 세포 주 및 세포배양
바이시스트로닉 HCV 레플리콘(bicistronic HCV replicon) NK5.1-Gluc (유전자형 1b) 및 S52-Feo (유전자형 3a)를 함유하는 Huh 7.5.1 세포를 사용하여 실시예 화합물의 항-HCV 활성을 시험하였다. 레플리콘의 첫번째 오픈 리딩 프레임 (open reading frame, ORF)은 구제역 바이러스 (foot-and-mouth disease virus, FMDV) 2a 유전자 및 네오마이신 포스포트랜스퍼라아제(neomycin phosphotransferase) 유전자가 융합된 Reporter 유전자 (Gaussia luciferase; 1b, Firefly luciferase; 3a)와 두 번째 ORF HCV 비구조 유전자(nonstructural gene) NS3-5를 포함한다. 상기 레플리콘 함유 세포를 추가 항생제 G418 (0.5 mg / ml, Calbiochem)으로 상술한 바와 동일한 조건 하에서 배양하였다.
단계 2: HCV 레플리콘을 이용한 항바이러스 활성 시험
HCV 레플리콘 NK5.1-Gluc (GT1b) 또는 S52-Feo (GT-3a)를 함유하는 Huh 7.5.1 세포를 12- well plate (5 x 104 cells per well)에서 배양하였다. 16 시간 후에, 세포를 함유하는 레플리콘에 연속 희석된 실시예 화합물을 함유하는 배지를 3 일동안 접종하였다. 화학처리 후, NK5.1-Gluc의 경우, 세포 배양 배지를 수집하고 Renilla 루시퍼라제 분석 시스템 (Renilla luciferase assay system, Promega)을 사용하여 가우시아 루시퍼라제 활성( Gaussia luciferase activities)을 측정하였다. S52-Feo의 경우, 세포를 채취하고, 파이어 플라이 루시퍼라제 분석 시스템(firefly luciferase assay system, Promega)을 사용하여 루시퍼라제 활성을 측정 한 다음, 음성 대조군 세포(mock-treated cells)로부터 수득한 것으로 표준화하였다.
< 실험예 3> RNA Transiently transfected assay-유전자 1b형 저항성 돌연변이 (Transiently transfected assay of Genotype 1b Resistance mutant RNAs )
NS5A 단백질 도메인1 (Domain1) 위치에 Daclatasvir에 대한 내성 돌연변이인 Y93H, L31V 및 L31V+Y93H(이중 돌연변이)로 치환된 Replicon 게놈을 사용하였다.
이들 HCV 저항성 돌연변이 게놈을 scal 제한 효소(restriction enzyme)로 선형화시킨 후 in vitro 전사를 통하여 돌연변이를 가진 HCV RNA를 합성하였다. Huh 7.5.1 세포를 저항성 돌연변이를 가진 HCV RNA로 개별적으로 전기천공하고 12 well plate에 도말하였다. 4 시간 후, Huh7.5.1 세포를 연속 희석된 실시예 화합물 함유하는 DMEM 배지로 3일 동안 접종하였다. 3일 후, 세포를 수확하고 세포 내 루시퍼라제 활성을 측정 하였다. 루시퍼라제 활성은 음성 대조군 세포(mock-treated cells)로부터 수득한 것으로 표준화하였다.
실시예 HCV wt.GT-1b HCV wt.GT-2a HCV wt.GT-3a HCVMutationL31V HCVMutationY93H HCVMutationL31V + Y93H
1 B D C C D E
2 A D B A C D
3 B B B B B D
4 A D B C E D
5 A D B C E E
6 B C B A C D
7 B D B A B C
8 A A B B B D
9 A B B B B C
10 A C B A C D
11 A D B A D D
12 A D B A C D
13 A D C A A B
14 A B B A A D
15 A D C A B B
16 A D B A B D
17 A D B A C D
18 B D C B C D
19 B D D B C D
20 A D B B D -
21 A C B B D D
22 A D B A B E
23 - - - A D E
24 - - - A D D
25 A D B A D D
26 A B B B C E
27 A B B A A D
28 A B B B C E
29 A C B B B B
30 B C C C D E
31 B C C C B D
32 A C B B B B
33 B C C B B C
34 C D D B B D
35 B D B A C D
36 A C B A A C
37 A C A A B D
38 B C B A A B
39 B D C A B D
40 A B C A B D
41 B B C A B D
42 B C C A B D
상기 표 5에서,
A는 1 pM < EC50 < 10 pM이고;
B는 10 pM < EC50 < 100 pM이고;
C는 100 pM < EC50 <1 nM이고;
D는 1 nM < EC50 < 100 nM이다.
E는 EC50 > 100nM 이다.
상기 표 5에 나타난 바와 같이, 본 발명에 따른 실시예 화합물들이 낮은 농도에서 유전자형 1b, 2a, 3a형의 HCV를 억제하며, 유전자형 1b형에 빈번히 관찰되는 내성 돌연변이인 L31V, Y93H 및 L31V+Y93H(이중 돌연변이) 또한 낮은 농도에서 억제함을 확인하였다.
종래 HCV 약물들은 유전자형 1b를 선택적으로 낮은 농도에서 억제하지만, 2a 및 3a형에 대해서는 좋은 활성을 나타내지 못한 사례가 있는 반면,
본 발명에 따른 실시예 화합물은 1b, 2a 및 3a의 유전형을 모두 낮은 농도에서 우수하게 항바이러스 성능을 나타냄을 알 수 있다.
따라서, 본 발명의 약학적 조성물은 단일 돌연변이인 L31V 및 Y93H 뿐만 아니라, 보다 강한 내성을 나타내는 L31V+Y93H(이중 돌연변이)를 낮은 농도에서 우수하게 억제함으로써, 단일 돌연변이 뿐만 아니라, 이중 또는 다중 돌연변이를 타겟으로 한 치료제로 유용하게 사용될 수 있으며, 기존 치료제의 내성 돌연변이 문제를 해결한 HCV 관련 간질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물로 유용하게 사용될 수 있음을 알 수 있다.
< 제제예 1> 산제의 제조
화학식 1로 표시되는 유도체 2g
유당 1g
상기의 성분을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조하였다.
< 제제예 2> 정제의 제조
화학식 1로 표시되는 유도체 100 ㎎
옥수수전분 100 ㎎
유당 100 ㎎
스테아린산 마그네슘 2 ㎎
상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조하였다.
< 제제예 3> 캡슐제의 제조
화학식 1로 표시되는 유도체 100 ㎎
옥수수전분 100 ㎎
유당 100 ㎎
스테아린산 마그네슘 2 ㎎
상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 캡슐제의 제조방법에 따라서 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.
< 제제예 4> 주사제의 제조
화학식 1로 표시되는 유도체 100 ㎎
만니톨 180 ㎎
Na2HPO4ㆍ2H2O 26 ㎎
증류수 2974 ㎎
통상적인 주사제의 제조방법에 따라, 상기 성분들을 제시된 함량으로 함유시켜 주사제를 제조하였다.
< 제제예 5> 건강식품의 제조
화학식 1로 표시되는 유도체 500ng
비타민 혼합물 적량
비타민 A 아세테이트 70mg
비타민 E 1.0mg
비타민 0.13mg
비타민 B2 0.15mg
비타민 B6 0.5mg
비타민 B12 0.2mg
비타민 C 10mg
비오틴 10mg
니코틴산아미드 1.7mg
엽산 50mg
판토텐산 칼슘 0.5mg
무기질 혼합물 적량
황산제1철 1.75mg
산화아연 0.82mg
탄산마그네슘 25.3mg
제1인산칼륨 15mg
제2인산칼슘 55mg
구연산칼륨 90mg
탄산칼슘 100mg
염화마그네슘 24.8mg
상기의 비타민 및 미네랄 혼합물의 조성비는 비교적 건강식품에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하며, 통상의 건강식품 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 과립을 제조하고, 통상의 방법에 따라 건강식품 조성물 제조에 사용할 수 있다.
< 제제예 6> 건강음료의 제조
화학식 1로 표시되는 유도체 500ng
구연산 1000mg
올리고당 100g
매실농축액 2g
타우린 1g
정제수를 가하여 전체 900ml
통상의 건강 음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 약 1시간 동안 85℃에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관한 다음 건강 음료 조성물 제조에 사용하였다.
상기 조성비는 비교적 기호 음료에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만 수요계층이나, 수요국가, 사용용도 등 지역적, 민족적 기호 도에 따라서 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하다.
본 발명에 따른 플루오렌 유도체는 HCV에 의해 발병되는 급성 C형 간염, 만성 C형 간염, 간경변, 간세포성 암 등의 간질환, 특히 HCV의 돌연변이가 발생한 간질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물로 사용될 수 있으며, 기존 치료제의 내성 돌연변이 문제를 해결한 HCV 관련 간질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.

Claims (12)

  1. 하기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 광학 이성질체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염:
    [화학식 1]
    Figure PCTKR2018011182-appb-I000103
    (상기 화학식 1에서,
    X는 -NHC(=O)-, -C(=O)NH- 또는 N, O 및 S로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 헤테로 원자를 포함하는 5 내지 8 원자의 헤테로아릴이되, X중 적어도 하나는 반드시 -NHC(=O)- 또는 -C(=O)NH-이고;
    R1는 비치환 또는 할로겐으로 하나 이상 치환된 직쇄의 C2- 10알킬이고;
    R2는 직쇄 또는 분지쇄의 C1- 10알콕시카보닐아미노이고;
    R3은 직쇄 또는 분지쇄의 C1- 10알킬 또는 C6-10의 아릴이고;
    R4는 수소이거나, R5 및 R6 중 어느 하나 및 이들이 결합된 C 원자와 함께 C3-7의 사이클로알킬을 형성할 수 있고;
    R5 및 R6는 각각 독립적으로, 수소, -OH, 할로겐, 직쇄 또는 분지쇄의 C1- 10알콕실, 직쇄 또는 분지쇄의 C1- 10알콕실직쇄 또는 분지쇄의C1 - 4알킬 또는 -O(C=O)Ra이고, 여기서 Ra는 직쇄 또는 분지쇄의 C1- 10알킬 또는 N, O 및 S로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 헤테로원자를 포함하는 5 또는 6원자의 헤테로사이클로알킬직쇄 또는 분지쇄의 C1- 4알킬이거나, 이들이 결합된 C 원자와 함께 카보닐, C3-7의 사이클로알킬 또는 O 원자를 하나 이상 포함하는 3-7원자의 헤테로 사이클로알킬을 형성할 수 있다).
  2. 제1항에 있어서,
    상기 X는 -NHC(=O)-, -C(=O)NH- 또는 N, O 및 S로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 헤테로 원자를 포함하는 5 내지 6 원자의 헤테로아릴이되, X 중 적어도 하나는 반드시 -NHC(=O)- 또는 -C(=O)NH-이고;
    R1는 비치환 또는 할로겐으로 하나 이상 치환된 직쇄의 C2- 6알킬이고;
    R2는 직쇄 또는 분지쇄의 C1- 6알콕시카보닐아미노이고;
    R3은 직쇄 또는 분지쇄의 C1- 6알킬 또는 페닐이고;
    R4는 수소이거나, R5 및 R6 중 어느 하나 및 이들이 결합된 C 원자와 함께 C3-5의 사이클로알킬을 형성할 수 있고;
    R5 및 R6는 각각 독립적으로, 수소, -OH, 할로겐, 직쇄 또는 분지쇄의 C1- 6알콕실, 직쇄 또는 분지쇄의 C1- 6알콕실C1 - 2알킬 또는 -O(C=O)Ra이고, 여기서 Ra는 직쇄 또는 분지쇄의 C1- 6알킬 또는 N, O 및 S로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 헤테로원자를 포함하는 6원자의 헤테로사이클로알킬C1 - 2알킬이거나, 이들이 결합된 C 원자와 함께 카보닐, C3-5의 사이클로알킬 또는 O 원자를 하나 이상 포함하는 3-5원자의 헤테로 사이클로알킬을 형성할수 있는 것을 특징으로 하는 화합물, 이의 광학 이성질체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
  3. 제1항에 있어서,
    상기 X는 -NHC(=O)-, -C(=O)NH- 또는 이미다졸이되, X 중 적어도 하나는 반드시 -NHC(=O)- 또는 -C(=O)NH-이고;
    R1는 비치환 또는 F으로 하나 이상 치환된 직쇄의 C2- 6알킬이고;
    R2는 직쇄 또는 분지쇄의 C1- 4알콕시카보닐아미노이고;
    R3은 직쇄 또는 분지쇄의 C1- 4알킬 또는 페닐이고;
    R4는 수소이거나, R5 및 R6 중 어느 하나 및 이들이 결합된 C 원자와 함께 사이클로프로필 또는 사이클로펜틸을 형성할 수 있고;
    R5 및 R6는 각각 독립적으로, 수소, -OH, 할로겐, 직쇄 또는 분지쇄의 C1- 4알콕실, 직쇄 또는 분지쇄의 C1- 4알콕실C1 - 2알킬 또는 -O(C=O)Ra이고, 여기서 Ra는 직쇄 또는 분지쇄의 C1- 4알킬 또는 모폴리닐C1 - 2알킬이거나, 이들이 결합된 C 원자와 함께 카보닐, 사이클로프로필, 사이클로펜틸 또는 O 원자를 하나 이상 포함하는 5원자의 헤테로 사이클로알킬을 형성할수 있는 것을 특징으로 하는 화합물, 이의 광학 이성질체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
  4. 제1항에 있어서,
    상기 X는
    Figure PCTKR2018011182-appb-I000104
    ,
    Figure PCTKR2018011182-appb-I000105
    또는
    Figure PCTKR2018011182-appb-I000106
    이되, X중 적어도 하나는 반드시
    Figure PCTKR2018011182-appb-I000107
    또는
    Figure PCTKR2018011182-appb-I000108
    이고;
    R1는 -CH2CH3, -(CH2)2CH3, -(CH2)3CH3, -(CH2)4CH3, -(CH2)3CF3 또는 -(CH2)4CF3이고;
    R2는
    Figure PCTKR2018011182-appb-I000109
    이고;
    R3은 이소프로필 또는 페닐이고;
    R4는 수소이거나, R5 및 R6 중 어느 하나 및 이들이 결합된 C 원자와 함께 사이클로펜틸을 형성할 수 있고;
    R5 및 R6는 각각 독립적으로, 수소, -OH, -F, -OCH3, -CH2OCH3, -O(CH2)2OCH3,
    Figure PCTKR2018011182-appb-I000110
    또는
    Figure PCTKR2018011182-appb-I000111
    이거나, 이들이 결합된 C 원자와 함께 카보닐, 사이클로프로필 또는 1,3-디옥솔라닐(1,3-dioxolanyl)을 형성할수 있는 것을 특징으로 하는 화합물, 이의 광학 이성질체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
  5. 제1항에 있어서,
    상기 화학식 1로 표시되는 화합물은 하기 화학식 1-1 내지 1-37로 표시되는 화합물로부터 선택되는 어느 하나인 것을 특징으로 하는 화합물, 이의 광학 이성질체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염:
    [화학식 1-1]
    Figure PCTKR2018011182-appb-I000112
    ;
    [화학식 1-2]
    Figure PCTKR2018011182-appb-I000113
    ;
    [화학식 1-3]
    Figure PCTKR2018011182-appb-I000114
    ;
    [화학식 1-4]
    Figure PCTKR2018011182-appb-I000115
    ;
    [화학식 1-5]
    Figure PCTKR2018011182-appb-I000116
    ;
    [화학식 1-6]
    Figure PCTKR2018011182-appb-I000117
    ;
    [화학식 1-7]
    Figure PCTKR2018011182-appb-I000118
    ;
    [화학식 1-8]
    Figure PCTKR2018011182-appb-I000119
    ;
    [화학식 1-9]
    Figure PCTKR2018011182-appb-I000120
    ;
    [화학식 1-10]
    Figure PCTKR2018011182-appb-I000121
    ;
    [화학식 1-11]
    Figure PCTKR2018011182-appb-I000122
    ;
    [화학식 1-12]
    Figure PCTKR2018011182-appb-I000123
    ;
    [화학식 1-13]
    Figure PCTKR2018011182-appb-I000124
    ;
    [화학식 1-14]
    Figure PCTKR2018011182-appb-I000125
    ;
    [화학식 1-15]
    Figure PCTKR2018011182-appb-I000126
    ;
    [화학식 1-16]
    Figure PCTKR2018011182-appb-I000127
    ;
    [화학식 1-17]
    Figure PCTKR2018011182-appb-I000128
    ;
    [화학식 1-18]
    Figure PCTKR2018011182-appb-I000129
    ;
    [화학식 1-19]
    Figure PCTKR2018011182-appb-I000130
    ;
    [화학식 1-20]
    Figure PCTKR2018011182-appb-I000131
    ;
    [화학식 1-21]
    Figure PCTKR2018011182-appb-I000132
    ;
    [화학식 1-22]
    Figure PCTKR2018011182-appb-I000133
    ;
    [화학식 1-23]
    Figure PCTKR2018011182-appb-I000134
    ;
    [화학식 1-24]
    Figure PCTKR2018011182-appb-I000135
    ;
    [화학식 1-25]
    Figure PCTKR2018011182-appb-I000136
    ;
    [화학식 1-26]
    Figure PCTKR2018011182-appb-I000137
    ;
    [화학식 1-27]
    Figure PCTKR2018011182-appb-I000138
    ;
    [화학식 1-28]
    Figure PCTKR2018011182-appb-I000139
    ;
    [화학식 1-29]
    Figure PCTKR2018011182-appb-I000140
    ;
    [화학식 1-30]
    Figure PCTKR2018011182-appb-I000141
    ;
    [화학식 1-31]
    Figure PCTKR2018011182-appb-I000142
    ;
    [화학식 1-32]
    Figure PCTKR2018011182-appb-I000143
    ;
    [화학식 1-33]
    Figure PCTKR2018011182-appb-I000144
    ;
    [화학식 1-34]
    Figure PCTKR2018011182-appb-I000145
    ;
    [화학식 1-35]
    Figure PCTKR2018011182-appb-I000146
    ;
    [화학식 1-36]
    Figure PCTKR2018011182-appb-I000147
    ;
    [화학식 1-37]
    Figure PCTKR2018011182-appb-I000148
    ;
    [화학식 1-38]
    Figure PCTKR2018011182-appb-I000149
    ;
    [화학식 1-39]
    Figure PCTKR2018011182-appb-I000150
    ;
    [화학식 1-40]
    Figure PCTKR2018011182-appb-I000151
    ;
    [화학식 1-41]
    Figure PCTKR2018011182-appb-I000152
    ; 및
    [화학식 1-42]
    Figure PCTKR2018011182-appb-I000153
    .
  6. 하기 반응식 1에 나타낸 바와 같이,
    화학식 2로 표시되는 화합물과 화학식 3으로 표시되는 화합물을 반응시켜 화학식 1로 표시되는 화합물을 제조하는 단계를 포함하는 제1항의 화학식 1로 표시되는 화합물의 제조방법:
    [반응식 1]
    Figure PCTKR2018011182-appb-I000154
    (상기 반응식 1에서,
    R1, R2, R3, R4, R5, R6 및 X는 제1항의 화학식 1에서 정의한 바와 같고; 및
    PG는 t-부틸옥시카보닐(BOC), 카보벤질옥시(Cbz), 9-플루오레닐메틸옥시카보닐(Fmoc), 아세틸(Ac), 벤조일(Bz), 벤질(Bn), p-메톡시벤질(PMB), 3,4-다이메톡시벤질(DMPM), p-메톡시페닐(PMP), 토실(Ts), 2,2,2-트리클로로에톡시카보닐(Troc), 2-트리메틸실릴에톡시카보닐(Teoc) 및 아릴옥시카보닐(Alloc) 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종의 아민 보호기(amine protectiong group)이다).
  7. 제1항의 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 광학 이성질체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 HCV 관련 간질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  8. 제7항에 있어서,
    상기 화합물은 HCV(hepatitis C virus) 또는 HCV 돌연변이에 대한 항바이러스 효과를 나타내는 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
  9. 제8항에 있어서,
    상기 HCV 돌연변이는 L31V, Y93H 또는 L31V+Y93H(이중 돌연변이)인 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
  10. 제7항에 있어서,
    상기 HCV 관련 간질환은 급성 C형 간염, 만성 C형 간염, 간경변 및 간세포성 암으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상인 것을 특징으로 하는 HCV 관련 간질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  11. 제7항에 있어서,
    상기 HCV 관련 간질환은 HCV 돌연변이가 발생된 간질환인 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
  12. 제1항의 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 광학 이성질체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 HCV 관련 간질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물.
PCT/KR2018/011182 2017-09-22 2018-09-20 플루오렌 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 이의 제조방법 및 이를 유효성분으로 포함하는 hcv 관련 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 WO2019059687A1 (ko)

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