WO2014075435A1 - 一种人凝血因子ⅷ的干热处理稳定剂及其用途 - Google Patents

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WO2014075435A1
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dry heat
human
heat treatment
human coagulation
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牟蕾
鲁涛
王黔川
李伟
余伟
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成都蓉生药业有限责任公司
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    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/36—Blood coagulation or fibrinolysis factors
    • A61K38/37—Factors VIII
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/96—Stabilising an enzyme by forming an adduct or a composition; Forming enzyme conjugates

Definitions

  • the present invention relates to the field of plasma products, and in particular to a dry heat treatment stabilizer for human coagulation factor rings and uses thereof.
  • the human coagulation factor loop is a kind of coagulation factor and is a complex factor consisting of two parts, of which a small molecular weight (about 260KD) partial ring: C, has procoagulant activity, during the waterfall reaction of blood coagulation, as FIXa
  • the cofactor which activates FX into FXa, corrects clotting abnormalities in hemophilia A.
  • the preparation of human coagulation factor ring from plasma is the main human coagulation factor ring product on the market. Common methods for the preparation of human coagulation factor loops include precipitation and chromatography. Precipitation methods include isoelectric precipitation, salting out precipitation, ether precipitation, acid precipitation and PEG precipitation.
  • Chromatography includes ion exchange chromatography, affinity layer. Analysis and so on. Since the human coagulation factor loop is derived from plasma and is at risk of transmitting the virus, effective viral inactivation and removal measures are required during the preparation process. Commonly used viruses are inactivated by pasteurization, organic solvents/detergents, nanofiltration, light and dry heat. Human coagulation factor loop has poor stability and is not heat-resistant. Its stability is affected by various factors such as plasma protein, antibody, proteolysis and self-degradation. Thrombin has a dual effect.
  • Patent Application No.: 201110240278.2 Title of the Invention: Patent Application File for "Dry Heat Treatment Method for Human Coagulation Factor Ring Formulation and Stabilizer” discloses a dry heat treatment stabilizer for human coagulation factor ring, which includes human blood white Protein, Ca 2+ soluble salt, amino acid, trisodium citrate and sodium chloride, wherein the human blood albumin concentration percentage is 2%, the appearance of the prepared human coagulation factor ring and the visible foreign matter are in compliance with the regulations, the titer The recovery rate is up to approximately 94.6%.
  • the stabilizer is composed of five components, wherein the human blood albumin has a high concentration, a large amount of use, and a high cost.
  • Patent Application Document for "Human Coagulation Factor Ring and vW Complex or Dry Heat Treatment Stabilizer for Human Coagulation Factor Ring” discloses a stabilizer for human coagulation factor loops, including amino acids and/or sugars.
  • the sugar alcohol is mannitol
  • the amino acid is histidine or a salt thereof, arginine or a salt thereof, lysine or a salt thereof
  • the sugar alcohol content is 0.1-10%, amino acid or its salt content 0.1-10%
  • the protective agent is added to the human coagulation factor loop prepared by chromatography, inactivated at 80 ° C for 72 h, the activity recovery rate of human coagulation factor loop The highest is only 33.28%.
  • the stabilizer has only two components, does not require the use of a large amount of human albumin, and has low cost, but the activity recovery rate of the human coagulation factor ring is the least low, and the practical application value is low.
  • the present invention provides a novel dry heat treatment stabilizer for human coagulation factor rings and a novel human coagulation factor ring preparation and a process for the preparation thereof.
  • the present invention relates to a dry heat treatment stabilizer for a blood coagulation factor ring, which comprises the following components: sodium citrate 0.005M ⁇ 0.015M, calcium chloride 0.001M ⁇ 0.002M, arginine hydrochloride
  • the concentration percentage is 0.6 ⁇ 1.0%).
  • the aforementioned dry heat stabilizer is used in the preparation of a preparation of a human coagulation factor loop.
  • the present inventive coagulation factor ring preparation comprises the aforementioned dry heat stabilizer and human coagulation factor loop, wherein the concentration of the human coagulation factor loop is 16-28 IU/ml.
  • the method of the present invention for a coagulation factor loop preparation comprising the steps of:
  • step (3) taking the eluate after the step (2), sterilizing, dispensing, lyophilizing, and dry heat treatment.
  • the polyethylene glycol precipitation method of the step (1) is precipitated by using 30% polyethylene glycol.
  • the gel used in the ion exchange chromatography is Toyopearl DEAE 650M, and the buffer is 0.001 M ⁇ 0.05 M sodium citrate buffer.
  • the temperature of the dry heat treatment in the step (3) is 80 ° C, and the time is 72 hours.
  • the dry heat treatment stabilizer of the coagulation factor ring of the present invention can effectively maintain human coagulation factor
  • the activity of the ring does not affect the virus inactivating effect of the dry heat treatment, and the types of the components are small, and the human albumin contained is small and the cost is low.
  • the coagulation factor ring preparation of the present invention has good stability, high activity, safety and effectiveness, low cost and good clinical application prospect.
  • step I The eluate obtained in step I is subjected to ultrafiltration dialysis using a buffer containing 0.005 M sodium citrate, 0.0015 M calcium chloride, 0.15 M arginine hydrochloride, and the obtained solution is a human coagulation factor ring. , sodium citrate, calcium chloride and arginine hydrochloride, after ultrafiltration is completed, adding 20% human albumin, so that the concentration of human serum albumin is 6g / L ;
  • step I The eluate obtained in step I is subjected to ultrafiltration dialysis using a buffer containing 0.015 M sodium citrate, 0.002 M calcium chloride, 0.25 M arginine hydrochloride, and the obtained solution component is a human coagulation factor ring.
  • step I (1) using 0.01 M sodium citrate, 0.001 M calcium chloride, 0.19 M arginine hydrochloride
  • the eluate obtained in step I is subjected to ultrafiltration dialysis, and the prepared solution components are human coagulation factor ring, sodium citrate, calcium chloride and arginine hydrochloride.
  • the prepared solution components are human coagulation factor ring, sodium citrate, calcium chloride and arginine hydrochloride.
  • 20% human blood is added. Protein, such that the concentration of human serum albumin is 8 g / L;
  • the main indicators used in the formulation of FVEI products are: 1. The recovery rate of the product after dry heat; 2. The appearance of the product and visible foreign matter, which meets the requirements of the Pharmacopoeia and is not qualified according to the Pharmacopoeia.
  • the Pharmacopoeia stipulates: The appearance should be milky white loose body. After reconstitution, the solution should be a colorless clarified liquid, which can be slightly opalescent; visible foreign matter, except for the small amount of fine protein particles allowed, the rest should meet the requirements.
  • Example 1 Virus inactivation process The virus inactivating effect of the sample prepared by the formulation of the formulation The human coagulation factor ring preparation prepared in Example 3 was tested for dry heat virus inactivation, and the results are shown in Table 2.
  • the human coagulation factor loop preparation prepared in Example 3 was taken. The formulations were tested at 2-8 ° C (conventional storage conditions), 25 ° C (acceleration stability) and 40 ° C (strong destruction test). Stability under storage conditions.
  • the potency of human coagulation factor ring preparations should be 80% to 140% of the labeled amount.
  • the experiment shows that the human coagulation factor ring has a long effective period under the conventional storage conditions of the human coagulation factor ring preparation, and the dry heat treatment stabilizer of the present invention can maintain the activity of the human coagulation factor ring for a long time.
  • the experiment shows that the human coagulation factor ring preparation has an effective period of at least 6 months under the storage condition of 25 ° C, indicating that the dry heat treatment stabilizer of the present invention can effectively maintain the activity of the human coagulation factor loop at a higher temperature.
  • the experiment shows that the human coagulation factor ring is valid for at least 6 months under the storage condition of 40 ° C, indicating that the dry heat treatment stabilizer of the present invention can effectively maintain the activity of the human coagulation factor ring at high temperature.
  • the dry heat treatment stabilizer of the present invention can effectively maintain the activity of the human coagulation factor loop without affecting the inactivation of the virus by the dry heat treatment, and the human albumin is used in a small amount and at a low cost, which is significantly superior to the existing one. Dry heat treatment stabilizer for coagulation factor ring preparations.
  • the appearance and visible foreign matter of the coagulation factor ring preparation of the present invention meets the requirements, has good stability under normal storage conditions and high temperature conditions, and has high activity, and is a new, safe and effective, low cost human coagulation factor ring, which has good Industrial application prospects.

Abstract

提供了一种人凝血因子Ⅷ的干热处理稳定剂，它包括如下配比的成分：枸橼酸钠0.005M~0.015M，氯化钙0.001M-0.002M，盐酸精氨酸0.15M~0.25M，人血白蛋白6~10g/L。还提供了一种人凝血因子Ⅷ制剂及其制备方法，该人凝血因子Ⅷ的干热处理稳定剂可维持人凝血因子Ⅷ的活性。

Description

一种人凝血因子環的干热处理稳定剂及其用途 技术领域
本发明涉及血浆制品领域， 具体涉及一种人凝血因子環的干热处理 稳定剂及其用途。
背景技术
人凝血因子環是凝血因子的一种，是一种复合因子，由两部分组成， 其中小分子量（约 260KD)部分環: C， 具有促凝血活性， 在血液凝固的 瀑布反应过程中， 作为 FIXa的辅助因子， 使 FX激活成 FXa， 可纠正甲 型血友病的凝血异常。 以血浆为原料制备人凝血因子環是目前市场上 的主要人凝血因子環产品。人凝血因子環制备的常用方法有沉淀法和层 析法， 沉淀法包括等电点沉淀， 盐析沉淀， 醚沉淀， 酸沉淀和 PEG沉 淀等， 层析法包括离子交换层析， 亲和层析等。 由于人凝血因子環来源 于血浆， 有传播病毒的危险， 因此， 在制备过程中需采用有效的病毒灭 活和去除措施。常用的病毒灭活方式有巴氏法， 有机溶剂 /去污剂， 纳米 过滤， 光照法和干热法等。 人凝血因子環稳定性差， 不耐热处理， 其稳 定性受血浆蛋白、 抗体、 蛋白水解、 自身降解等多种因素的影响， 凝血 酶对其有双重作用。
因人凝血因子環的不稳定性， 分离纯化时， 需在最终配制时加入保 护剂， 使产品能耐受冻干及干热处理， 又不影响干热处理的病毒灭活效 果。
申请号： 201110240278.2， 发明名称： "用于人凝血因子環制剂的干 热处理方法及其稳定剂"的专利申请文件公开了一种人凝血因子環的干 热处理稳定剂， 该稳定剂包括人血白蛋白、 Ca2+可溶解盐、 氨基酸、 柠 檬酸三钠和氯化钠， 其中， 人血白蛋白浓度百分比为 2%时， 制备的人 凝血因子環的外观和可见异物才符合规定， 效价回收率最高约 94.6%。 该稳定剂由 5种成分组成， 其中的人血白蛋白浓度高， 使用量大， 成本 极高。 申请号： 201210060299.0， 发明名称： "人凝血因子環与 vW复合 物或人凝血因子環的干热处理稳定剂"的专利申请文件公开了一种人凝 血因子環的稳定剂， 包括氨基酸和 /或糖醇， 所述糖醇为甘露醇， 所述的 氨基酸为组氨酸或其盐， 精氨酸或其盐， 赖氨酸或其盐， 糖醇含量为 0.1-10%, 氨基酸或其盐含量 0.1-10%， 将该保护剂加入用层析法制备得 到的人凝血因子環中， 80°C干热灭活 72h， 人凝血因子環的活性回收率 最高仅 33.28%。该稳定剂组成成分仅为 2种，不需要使用大量人血白蛋 白， 成本低， 但是人凝血因子環的活性回收率最太低， 实际应用价值较 低。
发明内容
本发明提供了一种新的人凝血因子環的干热处理稳定剂以及新的 人凝血因子環制剂及其制备方法。
本发明人凝血因子環的干热处理稳定剂， 它包括如下配比的成分： 枸橼酸钠 0.005M~0.015M， 氯化钙 0.001M~0.002M， 盐酸精氨酸
0.15M-0.25M, 人血白蛋白 6~10g/L (浓度百分比为 0.6~1.0% )。
优选地， 它由如下配比的成分组成： 枸橼酸钠 0.005M~0.015M， 氯 化钙 0.001M~0.002M， 盐酸精氨酸 0.15M~0.25M， 人血白蛋白 6~10g/L 浓度百分比为 0.6~1.0%)。
进一步优选地， 它由如下配比的成分组成： 枸橼酸钠 0.01M, 氯化 钙 0.001M,盐酸精氨酸 0.19M,人血白蛋白 8g/L (浓度百分比为 0.8%)。
前述干热稳定剂在制备人凝血因子環的制剂中用途。
本发明人凝血因子環制剂， 它包括前述的干热稳定剂和人凝血因子 環， 其中， 人凝血因子環的浓度为 16-28IU/ml。
本发明人凝血因子環制剂的方法， 它包括如下步骤：
( 1 ) 取新鲜冰冻血浆， 融化， 离心制备冷沉淀， 溶解， 用聚乙二 醇沉淀法沉淀， 离心， 得上清， SD法病毒灭活， 离子交换层析法纯化， 得到含人凝血因子環的洗脱液；
(2)取含有枸橼酸钠、氯化钙和盐酸精氨酸的缓冲液， 对步骤（1 ) 所得洗脱液进行超滤透析， 后加入人血白蛋白；
(3 )取步骤（2)处理后的洗脱液， 除菌、 分装、 冻干， 干热处理， 即得。
其中， 步骤 （1 ) 所述聚乙二醇沉淀法采用 30%聚乙二醇沉淀。 其中， 步骤 （1 ) 所述离子交换层析采用的凝胶为 Toyopearl DEAE 650M， 缓冲液为 0.001 M~0.05M的枸橼酸钠缓冲液。
其中， 步骤 （3 ) 所述干热处理的温度为 80°C， 时间为 72小时。 本发明人凝血因子環的干热处理稳定剂既可有效维持人凝血因子 環的活性， 又不影响干热处理的病毒灭活效果， 并且成分的种类少， 含 有的人血白蛋白少， 成本低廉。 本发明人凝血因子環制剂的稳定性好， 活性高， 安全有效， 成本低廉， 具有良好的临床应用前景。
显然， 根据本发明的上述内容， 按照本领域的普通技术知识和惯用 手段， 在不脱离本发明上述基本技术思想前提下， 还可以做出其它多种 形式的修改、 替换或变更。
以下通过实施例形式的具体实施方式， 对本发明的上述内容再作进 一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下 的实例。 凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。 具体实施方式
实验材料： 枸橼酸钠、 氯化钙、 盐酸精氨酸、 人血白蛋白、 聚乙二醇、 氢氧化铝、 Toyopearl DEAE 650M凝胶均为市售品。
实施例 1 本发明人凝血因子環制剂的制备
1、 制备方法
I、 分离纯化
( 1 ) 以新鲜冰冻血浆为原料， 经血浆融化， 离心制备冷沉淀， 0.02MTris缓冲液溶解冷沉淀， 后经 30%聚乙二醇沉淀， 氢氧化铝吸附 后离心， 得上清；
(2)上清合并澄清后， 加入 Tween-80和磷酸三丁酯使其最终浓度 分别为 1%和 0.3%， 25°C ± 1 °C处理 6小时， 完成第一次病毒灭活 （即 SD病毒灭活）；
(3) 采用以 Toyopearl DEAE 650M为凝胶为填料的离子交换层析 作进一步纯化， 缓冲液为缓冲液为 0.001M的枸橼酸钠缓冲液， 通过改 变层析缓冲液的氯化钠离子强度， 收集得到含人凝血因子環的洗脱液。
II、 配制
( 1 ) 用含 0.005M枸橼酸钠、 0.0015M氯化钙、 0.15M盐酸精氨酸 的缓冲液对步骤 I获得的洗脱液进行超滤透析， 制得的溶液的成分为人 凝血因子環、 枸橼酸钠、 氯化钙和盐酸精氨酸， 超滤完成后， 加入 20% 人血白蛋白， 使得人血白蛋白的浓度为 6g/L;
(2) 再进行除菌、 分装、 冻干， 冻干结束后， 作 80°C72小时的干 热处理， 即得。
实施例 2 本发明人凝血因子環制剂的制备 1、 制备方法
I、 分离纯化
( 1 ) 以新鲜冰冻血浆为原料， 经血浆融化， 离心制备冷沉淀， 0.02MTris缓冲液溶解冷沉淀， 后经 30%聚乙二醇沉淀， 氢氧化铝吸附 后离心， 得上清；
(2)上清合并澄清后， 加入 Tween-80和磷酸三丁酯使其最终浓度 分别为 1%和 0.3%， 25°C ± 1 °C处理 6小时， 完成第一次病毒灭活 （即 SD病毒灭活）；
(3) 采用以 Toyopearl DEAE 650M为凝胶为填料的离子交换层析 作进一步纯化， 缓冲液为 0.05M的枸橼酸钠缓冲液， 通过改变层析缓冲 液的氯化钠离子强度， 收集得到含人凝血因子環的洗脱液。
II、 配制
( 1 ) 用含 0.015M枸橼酸钠、 0.002M氯化钙、 0.25M盐酸精氨酸 的缓冲液对步骤 I获得的洗脱液进行超滤透析， 制得的溶液成分为人凝 血因子環、 枸橼酸钠、 氯化钙和盐酸精氨酸， 超滤完成后， 加入 20%人 血白蛋白， 使得人血白蛋白的浓度为 10g/L;
(2) 再进行除菌、 分装、 冻干， 冻干结束后， 作 80°C72小时的干 热处理， 即得。
实施例 3 本发明人凝血因子環制剂的制备
1、 制备方法
I、 分离纯化
( 1 ) 以新鲜冰冻血浆为原料， 经血浆融化， 离心制备冷沉淀， 0.02MTris缓冲液溶解冷沉淀， 后经 30%聚乙二醇沉淀， 氢氧化铝吸附 后离心， 得上清；
(2)上清合并澄清后， 加入 Tween-80和磷酸三丁酯使其最终浓度 分别为 1%和 0.3%， 25°C ± 1 °C处理 6小时， 完成第一次病毒灭活 （即 SD病毒灭活）；
(3) 采用以 Toyopearl DEAE 650M为凝胶为填料的离子交换层析 作进一步纯化， 缓冲液为 0.02M的枸橼酸钠缓冲液， 通过改变层析缓冲 液的氯化钠离子强度， 收集得到含人凝血因子環的洗脱液。
II、 配制
( 1 ) 用含 0.01M枸橼酸钠、 0.001M氯化钙、 0.19M盐酸精氨酸的 缓冲液对步骤 I获得的洗脱液进行超滤透析， 制得的溶液成分为人凝血 因子環、 枸橼酸钠、 氯化钙和盐酸精氨酸， 超滤完成后， 加入 20%人血 白蛋白， 使得人血白蛋白的浓度为 8g/L的比例；
(2) 再进行除菌、 分装、 冻干， 冻干结束后， 作 80°C72小时的干 热处理， 即得。
实施例 4本发明稳定剂的筛选试验
1、 制备方法
1、 分离纯化
( 1 ) 以新鲜冰冻血浆为原料， 经血浆融化， 离心制备冷沉淀， 0.02MTris缓冲液溶解冷沉淀， 后经 30%聚乙二醇沉淀， 氢氧化铝吸附 后离心， 得上清；
(2)上清合并澄清后， 加入 Tween-80和磷酸三丁酯使其最终浓度 分别为 1%和 0.3%， 25°C ± 1 °C处理 6小时， 完成第一次病毒灭活 （即 SD病毒灭活）；
(3) 采用 Toyopearl DEAE 650M离子交换层析作进一步纯化， 缓 冲液为 0.01M的枸橼酸钠缓冲液，通过改变层析缓冲液的氯化钠离子强 度， 收集得到含人凝血因子環的洗脱液。
II、 配制
( 1 ) 按照如下方式分别加入表 1所示 6种配方中各成分： 用含盐 酸精氨酸， 枸橼酸钠， 氯化钙的缓冲液对获得的洗脱液进行超滤透析， 透析完成后加入白蛋白；
(2) 再进行除菌、 分装、 冻干， 冻干结束后， 作 80°C72小时的干 热处理 （第二次病毒灭活）， 即得。
2、 检测
FVEI产品配方优劣主要采用的判定指标为： 1. 产品干热后效价回收 率； 2. 产品外观和可见异物， 符合药典规定为合格， 不符合药典规定为 不合格。 药典规定： 外观应为乳白色疏松体， 复溶后溶液应为无色澄清 液体， 可带轻微乳光； 可见异物， 除允许有微量细小蛋白颗粒外， 其余 应符合规定。
检测结果见表 1 : 配方组合试验结果
Figure imgf000007_0001
由表 1可以看出， 在人凝血因子環洗脱液中， 加入本发明干热处理 稳定剂后， 再进行 80°C72小时干热处理， 得到的人凝血因子環制剂外 观与可见异物均符合药典规定， 活性回收率在 91%之上， 与现有稳定剂 的活性回收率相当。 用本发明优选的干热处理稳定剂（如配方 1所示）， 成品外观与可见异物均符合药典规定， 活性回收率显著优于现有稳定 剂。 以下以实验例的方式来说明本发明的有益效果：
实验例 1 干热灭活过程对该制剂配方配制的样品的病毒灭活效果 取实施例 3制备的人凝血因子環制剂，进行干热病毒灭活效果检测， 结果见表 2。
病毒灭活验证结果 （n=3 )
Figure imgf000007_0002
由表 2 可以看出， 本发明人凝血因子環制剂的病毒灭活效果大 于>4.01(¾， 完全能达到国家规定的标准。
实验说明本发明干热处理稳定剂在保护制品质量的同时， 不会影响 干热处理对病毒的灭活作用。
实验例 2 本发明干热处理稳定剂的稳定性
取实施例 3制备的人凝血因子環制剂。分别考察了本制剂配方样品 在 2-8°C (常规保存条件）， 25 °C (加速稳定性）和 40°C (强力破坏试验) 保存条件下的稳定性。
根据药典规定， 人凝血因子環制剂的效价应为标示量的 80%〜 140%。
结果见表 3， 表 4， 表 5:
表 3 2-8°C稳定性试验结果 （n=3 )
Figure imgf000008_0001
由表 3可知， 2-8°C条件下， 人凝血因子環制剂保存 9个月，其效价 一直保持在比较高的水平上。
实验说明， 在人凝血因子環制剂常规保存条件下， 人凝血因子環的 有效期长， 本发明干热处理稳定剂可以长时间维持人凝血因子環 的活 性。
Figure imgf000008_0002
由表 4可知， 25°C条件下， 人凝血因子環的效价在 1~3个月一直保 持在比较高的水平上， 保存 6个月后， 效价下降。
实验说明，在 25°C保存条件下，人凝血因子環制剂的有效期至少为 6个月， 说明在较高温度下， 本发明干热处理稳定剂仍然可以有效维持 人凝血因子環 的活性。
40°C强力破坏试验结果 （n=3 )
Figure imgf000008_0003
由表 5可知， 40°C条件下， 人凝血因子環制剂的效价在 1~3个月一 直保持在比较高的水平上， 保存 6个月后， 效价明显下降。
实验说明， 在 40°C保存条件下， 人凝血因子環的有效期至少为 6 个月， 说明在高温下， 本发明干热处理稳定剂仍然可以有效维持人凝血 因子環 的活性。 综上， 本发明干热处理稳定剂既能有效维持人凝血因子環的活性， 又不会影响干热处理对病毒的灭活作用， 人血白蛋白的用量少， 成本低 廉， 显著优于现有凝血因子環制剂的干热处理稳定剂。 本发明人凝血因 子環制剂外观和可见异物符合规定， 在常规保存条件和高温条件下的稳 定性好， 活性高， 是一种新的、 安全有效， 成本低廉的人凝血因子環， 具有良好的工业应用前景。

Claims

权 利 要 求 书
1、一种人凝血因子覆的干热处理稳定剂， 其特征在于： 它包括如下配比 的成分： 枸橼酸钠 0.005M~0.015M， 氯化钙 0.001M~0.002M， 盐酸精氨酸 0.15M-0.25M, 人血白蛋白 6~10g/L。
2、根据权利要求 1所述的干热处理稳定剂， 其特征在于： 它由如下配比 的成分组成： 枸橼酸钠 0.005M~0.015M， 氯化钙 0.001M~0.002M， 盐酸精氨 酸 0.15M~0.25M， 人血白蛋白 6~10g/L。
3、根据权利要求 1所述的干热处理稳定剂， 其特征在于： 它由如下配比 的成分组成： 枸橼酸钠 0.01M, 氯化钙 0.001M, 盐酸精氨酸 0.19M, 人血白 蛋白 8g/L。
4、 权利要求 1~3任意一项所述的干热稳定剂在制备人凝血因子覆制剂 中用途。
5、 一种人凝血因子覆制剂， 其特征在于： 它包括权利要求 1~3任意一 项所述的干热稳定剂和人凝血因子覆， 其中， 人凝血因子覆的浓度为
16-28IU/ml。
6、一种制备权利要求 5所述人凝血因子覆制剂的方法， 其特征在于： 它 包括如下步骤：
( 1 )取新鲜冰冻血桨， 融化， 离心制备冷沉淀， 溶解， 用聚乙二醇沉淀 法沉淀， 离心， 得上清， SD法病毒灭活， 离子交换层析法纯化， 得到含人 凝血因子覆的洗脱液；
(2) 取含有枸橼酸钠、 氯化钙和盐酸精氨酸的缓冲液， 对步骤 （1 ) 所 得洗脱液进行超滤透析， 后加入人血白蛋白；
(3 ) 取步骤 （2) 处理后的洗脱液， 除菌、 分装、 冻干， 干热处理， 即 得。
7、 根据权利要求 6所述的方法， 其特征在于： 步骤 （1 ) 所述聚乙二醇 沉淀法采用 30%聚乙二醇沉淀。
8、 根据权利要求 6所述的方法， 其特征在于： 步骤 （1 ) 所述离子交换 层析采用的凝胶为 Toyopearl DEAE 650M, 缓冲液为 0.001 M-0.05M的枸橼 酸钠缓冲液。
9、 根据权利要求 6所述的方法， 其特征在于： 步骤 （3 ) 所述干热处理 的温度为 80°C， 时间为 72小时。
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