WO2014056167A1

WO2014056167A1 - 一种治疗风热感冒的中药组合物及其制备方法和应用

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Publication number: WO2014056167A1
Application number: PCT/CN2012/082756
Authority: WO
Inventors: 张丽华
Original assignee: 赤峰天奇制药有限责任公司
Priority date: 2012-10-10
Filing date: 2012-10-11
Publication date: 2014-04-17
Also published as: CN103120721A; CN103120721B

Abstract

一种治疗风热感冒的中药组合物及其制备方法和应用，该中药组合物使用金银花400-800重量份、金莲花400-800重量份、小秦宄花100-300重量份、板蓝根700-1300重量份制成，或使用金银花提取物400-800重量份、金莲花提取物400-800重量份、小秦宄花提取物100-300重量份、板蓝根提取物700-1300重量份制成。其中金银花提取物、金莲花提取物、小秦宄花提取物、板蓝根提取物为乙醇提取物、水提醇沉提取物或这两种提取物进一步过大孔树脂柱得到的精制物。

Description

一种治疗风热感冒的中药组合物及其制备方法和应用技术领域

本发明涉及一种中药组合物及其制备方法，具体涉及一种治疗风热感冒的中药组合物及其制备方法。背景技术

金银花为忍冬科植物忍冬 japonica Thunb. 的干燥花蕾或带初开的花。其化学成分主要包括有机酸类、黄酮类、三萜皂苷类和挥发油等。绿原酸类化合物是金银花的主要有效成分，包括绿原酸（chlorogenic ac id)和异绿原酸（i sochlorogenic ac id) , 其它有机酸还有咖啡酸和棕榈酸。药理实验表明金银花对多种致病菌均有一定的抑制作用。

金莲花 Trolliusch inensis Bunge为毛莨科多年生草本植物，以花入药，有清热解毒、抗菌消炎作用。近代药理研究表明，金莲花对绿脓杆菌、痢疾杆菌、金黄色葡萄球菌等均有明显的抑制作用，并对流感病毒感染小鼠引起的死亡有明显的保护作用。

小秦艽花为龙胆科植物小秦艽^¾ 2 <3 2<3 dahurica Fi sch.的干燥花，具有清热、解毒、止咳、祛痰之功效，用于肺热咳嗽、咽喉肿痛、毒热、瘟热等，是蒙医单复方常用药。其化学成分研究表明其可能含有黄酮类及其苷、三萜皂苷、 <甾体皂苷、生物碱、有机酸、鞣质、糖类、蛋白质等。

板蓝根为十字花科植物菘蓝 Isa tis indigotica For t. 的干燥根，有清热解毒，凉血利咽功能。目前化学成分的研究显示板蓝根含有生物碱（靛蓝类吲哚生物碱、喹唑酮类生物碱）、有机酸类化合物、黄酮类、芥子苷类、甾醇类、多糖类、和氨基酸等。药理研究表明，板蓝根对曱型流感病毒具有明显的抑制作用。发明内容

本发明的目的在于提供一种治疗感冒的中药组合物；本发明另一个目的在于提供该中药组合物的制备方法；

本发明另一个目的在于提供该中药组合物在制备治疗风热感冒药物中的应用；

本发明另一个目的在于提供该中药组合物在制备抑制流感病毒性药物中的应用；

本发明另一个目的在于提供该中药组合物在制备抗炎药物中的应用。本发明另一个目的在于提供该中药组合物的质量检测方法。

本发明的目的是通过如下技术方案实现的：

一种治疗风热感冒的中药组合物，该中药组合物的原料药组成为：金银花 400-800重量份金莲花 400-800重量份

小秦艽花 100-300重量份板蓝根 700-1300重量份。

本发明中药组合物，其原料药组成优选为：

金银花 500-700重量份金莲花 500-700重量份

小秦艽花 150-250重量份板蓝根 800-1200重量份。

本发明中药组合物，其原料；组成优选为：

金银花 550-650重量份金莲花 550-650重量份

小秦艽花 180-220重量份板蓝根 900-1100重量份。

本发明中药组合物，其原料；组成优选为：

金银花 600重量份金莲花 600重量份

小秦艽花 200重量份板蓝根 1000重量份。

本发明中药组合物，其原料；组成优选为：

金银花 550重量份金莲花 650重量份

小秦艽花 180重量份板蓝根 1100重量份。

本发明中药组合物，其原料；组成优选为：

金银花 650重量份金莲花 550重量份

板蓝根 900重量份。

本发明所述中药组合物的制备方法为：按比例取原料药，采用有机溶剂提取

优选的，所述有机溶剂为乙醇或曱醇；进一步优选的，所述有机溶剂为 50-90%的乙醇；

优选的，提取溶剂用量为 5-10倍量（体积 /重量）；提取次数为 2-4次，每次 1-3小时；进一步优选的，提取溶剂用量为 7倍量（体积 /重量）；提取次数为 3次，每次 1小时。

本发明中药组合物还可以按如下方法制备：按比例取原料药，采用水提醇沉法制备；其中所述醇沉浓度为 40-90%。

优选的，所述醇沉浓度为 60%;

优选的，所述提取溶剂用量为 5-10倍量（体积 /重量）；提取次数为 2-4 次，每次 1-3小时；进一步优选的，提取溶剂用量为 6倍量（体积 /重量）；提取次数为 3次，每次 1小时。

本发明中药组合物还可以按如下方法制备：按比例取原料药，其中金银花、金莲花、小秦艽花合并采用有机溶剂合并提取，得提取物 A; 板蓝根单独采用水提醇沉法制备得提取物 B; 合并提取物 A和 B, 即得。

其中所述醇沉浓度为 40-90%, 优选为 60%;

所述有机溶剂为 50-90%的乙醇；所述提取溶剂用量为 5-10倍量（体积 / 重量）；提取次数为 2-4次，每次 1-3小时；进一步优选的，提取溶剂用量为 6倍量（体积 /重量）；提取次数为 3次，每次 1小时。

本发明中药组合物经提取后可按常规工艺制成颗粒剂、片剂、散剂、胶嚢剂、丸剂、口服液等临床可接受的剂型。

为使上述剂型能够实现，需在制备这些剂型时加入药学可接受的辅料，例如：填充剂、崩解剂、润滑剂、助悬剂、粘合剂、甜味剂、矫味剂、防腐剂、基质等。填充剂包括：淀粉、预胶化淀粉、乳糖、甘露醇、曱壳素、微晶纤维素、蔗糖等；崩解剂包括：淀粉、预胶化淀粉、微晶纤维素、羧曱基淀粉钠、交联聚乙烯吡咯烷酮、低取代羟丙纤维素、交联羧曱基纤维素钠等；润滑剂包括：硬脂酸镁、十二烷基硫酸钠、滑石粉、二氧化硅等；助悬剂包括：聚乙烯吡咯烷酮、微晶纤维素、蔗糖、琼脂、羟丙基曱基纤维素等；粘合剂包括，淀粉浆、聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基曱基纤维素等；甜味剂包括：糖精钠、阿斯帕坦、蔗糖、甜蜜素、甘草次酸等；矫味剂包括：甜味剂及各种香精；防腐剂包括：尼泊金类、苯曱酸、苯曱酸钠、山梨酸及其盐类、苯扎溴铵、醋酸氯乙定、桉叶油等；基质包括： PEG6000, PEG4000, 虫蜡等。

本发明所述治疗风热感冒的中药组合物除了以金银花、金莲花、小秦艽花和板蓝根原药材投料的形式外，还可以采用以金银花、金莲花、小秦艽花和板蓝根的提取物（有效部位）投料的形式，因此本发明进一步公开了治疗风热感冒的中药组合物：

一种治疗风热感冒的中药组合物，该中药组合物的原料药组成为：金银花提取物 400-800重量份金莲花提取物 400-800重量份小秦艽花提取物 100-300重量份板蓝根提取物 700-1300重量份。本发明中药组合物，其原料药组成优选为：

金银花提取物 500-700重量份金莲花提取物 500-700重量份小秦艽花提取物 150-250重量份板蓝根提取物 800-1200重量份。本发明中药组合物，其原料药组成优选为：

金银花提取物 550-650重量份金莲花提取物 550-650重量份小秦艽花提取物 180-220重量份板蓝根提取物 900-1100重量份。本发明中药组合物，其原料药组成优选为：

金银花提取物 600重量份金莲花提取物 600重量份小秦艽花提取物 200重量份板蓝根提取物 1000重量份。本发明所述金银花提取物、金莲花提取物、小秦艽花提取物、板蓝根提取物可以是但不限于乙醇提取物或水提醇沉提取物；乙醇提取物或水提醇沉提取物还可以进一步精制纯化，如过大孔树脂柱。

所述提取用乙醇浓度为 50-90%, 溶剂用量为 5-10倍量（体积 /重量）；提取次数为 2-4次，每次 1-3小时；

所述水提醇沉工艺，提取溶剂用量为 5-10倍量（体积 /重量）；提取次数为 2-4次，每次 1-3小时；醇沉浓度为 40-90%。

本发明所述水提醇沉法系指在中药水提浓缩液中，加入乙醇使达到规定的含醇量（即醇沉浓度），某些成分在醇溶液中溶解度降低析出沉淀，滤过，取乙醇溶液，回收溶剂，使水提液得以精制的方法。

本发明中药组合物制剂的质量检测方法为：

A、色谱条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈一 0.4%磷酸溶液为流动相等度洗脱；检测波长为 300-350nm; 理论板数按绿原酸峰计算应不低于 3000;

B、对照品溶液制备：取绿原酸对照品，加曱醇溶液溶解制成对照品溶液；

C、供试品溶液的制备：取本发明中药组合物制剂，以曱醇溶液提取，提取液滤过，蒸干，曱醇溶解，即得；

D、测定法：分别取对照品溶液、供试品溶液注入液相色语仪，照高效液相色谱法测定，即得。

相当于 12g生药材的本发明中药组合物制剂的绿原酸（ C 16H 1809 )含量，不得少于 30mg。

优选的，所述流动相为 5-15: 95-85的乙腈一 0.4%磷酸溶液；所述检测波长为 327nm。

本发明中药组合物制剂的质量检测方法优选为：

A、色谱条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以 10: 90的乙腈一 0.4% 磷酸溶液为流动相等度洗脱；检测波长为 327nm; 理论板数按绿原酸峰计算应不低于 3000;

B、对照品溶液制备：取绿原酸对照品适量，精密称定，加 50%曱醇溶液制成每 lmL含 5(^g的对照品溶液；

C、供试品溶液的制备：取本发明组合物制剂，取约 O. lg, 精密称定，精密加曱醇 25 mL, 称定重量，超声处理 20分钟，取出，放冷，再称定重量，用曱醇补足减失的重量，摇勾，滤过；精密量取续滤液 10mL , 水浴蒸干，残渣加 50%曱醇使溶解，转移至 10mL量瓶中，加 50%曱醇至刻度，摇匀，滤过，即付；

D、测定法：分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液各 10 L, 注入液相色语仪，照高效液相色谱法测定，即得。

本发明所述金银花为忍冬科植物忍冬 Lo 'cera japonica Thunb. 的干燥花蕾或带初开的花；符合《中国药典》 2010年版 (一部） 205页金银花项下的有关规定；用时，除去杂质；

所述金莲花为毛莨科植物金莲花 Trollius chinensis Bge.的干燥花；符合《中华人民共和国药品标准》蒙药分册（ 1998年）第 30页金莲花项下的有关规定；用时，除去杂质；

所述小秦充花为龙胆科植物小秦充 Gentiana dahurica Fisch.的干燥花；符合《中华人民共和国药品标准》蒙药分册（ 1998年）第 5页小秦艽花项下的有关规定；用时，除去杂质；

所述板蓝根为十字花科植物菘蓝 Isatis indigoti ¥ort的干燥根；符合《中国药典》 2010年版 (一部）191页，板蓝根项下的有关规定；用时除去杂质，洗净，润透，切厚片，干燥。

本发明组合物具有明显的抗病毒、解热、镇痛抗炎作用。对病毒性肺炎抑制率达 72.3% , 显著优于模型组（PO.05 ), 并能显著延长流感病毒感染小鼠的生存时间；对酵母致大鼠体温升高亦具有明显的解热作用，其作用强于中药阳性对照药双黄连口服液；镇痛抗炎实验表明本发明组合物能明显抑制腹腔注射醋酸导致的腹痛扭体反应 ( P<0.01 ), 并能显著减轻小鼠足趾肿胀。

本发明中药组合物在临床上的用量为 36 生药/人/天，人的体重按 60 kg 计算，则临床剂量相当于 0.6g生药 /kg。在动物试验中设计为三个剂量水平，分别约为 1/2临床量，临床量， 2倍临床量。按体表面积折算，则大鼠剂量分别为 1.75、 3.5、 7.0g生药 / kg, 小鼠剂量分别为 2.5、 5.0、 lO.Og生药 / kg, 各约相当于临床剂量的 0.5、 1.0、 2.0倍。在每一项试验中，所有动物均采用灌胃给药。附图说明

图 1 绿原酸对照品溶液高效液相色谱图

图 2 供试品溶液高效液相色谱图

图 3 不含金银花阴性溶液高效液相色谱图

图 4 不含金银花和金莲花双阴性溶液高效液相色谱图

图 5 对照品溶液标准曲线实验例

实验例 1 抗病毒实验

1 实验材料 1.1 实险药物：

本发明组合物颗粒剂（按实施例 1方法制备），用蒸馏水将其配制成 0.5 g 生药 /ml;

达菲（上海浦东英轩公司 ), 用蒸馏水将其配制成 2.5mg/ml;

抗病毒口服液（湖北午时药业股份有限公司），用蒸馏水将其配制成 0.25ml 原液 /ml。

1.2 病毒株： FM1型小鼠流感病毒株，由中国中医科学院中药研究所药理室病毒组提供

1.3 实验动物： ICR小鼠，购自北京维通利华实验动物技术有限公司，许可证编号为 SCXK (京 ) 2006-0009

2 实验方法

2.1 本发明组合物对流感病毒感染小鼠肺指数的影响

选择体重在 13-15g之间的健康 ICR小鼠， 100只，雌雄各半，将动物随机分成： ①正常对照组， ②模型组， ③ 达菲 50mg/kg, ④抗病毒口服液 5 ml/kg, ⑤本发明组合物 10.0生药 /kg共 5组，每组 20只，雌雄各 10只。

各组均于动物感染流感病毒之前 1天开始给药，给药体积为 0.2ml/10g体重，每日灌胃给药 1次。次日，除正常对照组外，其余组的动物用乙醚轻度麻醉，以 15倍 LD₅。流感病毒液滴鼻感染小鼠，每只动物滴鼻体积为 35μ1, 以造成病毒性肺炎感染。感染当天以及随后 3天继续给药，共连续给药 5天。正常对照组和模型组灌胃给予同体积蒸馏水。第 4次给药当日下午开始禁食，禁食 17~20h, 自由饮水。称禁食体重，于最后 1次给药后 lh, 所有动物摘眼球取血后处死，称量肺脏重量，计算肺指数和肺炎抑制率（％)。

肺指数（PI ) =肺脏重量（g ) /体重（g ) lOO

肺炎抑制率（％) = (模型组 PI-药物组 PI)/(模型组 PI-对照组 PI)xl00 2.2 本发明组合物对流感病毒感染小鼠肺匀浆中 TNF-α含量的影响从 2.1 中随机抽取 11只动物（36只， $5只）进行肺组织匀浆，用生理盐水制备成 10%的匀浆液， 3000转离心 15 min, 上清液用 ELISA试剂盒检测 TNF-α的含量， BCA法测定蛋白含量，并计算每毫克蛋白中 TNF-α的含量。

2.3 本发明组合物对流感病毒感染小鼠生存天数的影响动物分组、给药同 2.1, 连续给药 5天后停药，逐日观察动物生存情况，共观察 15天。记录动物生存天数并计算延长率。

延长率（％ ) = (生存天数药物组 -生存天数模型组） /生存天数模型组 xlOO 3 实验结果

3.1本发明组合物对流感病毒感染小鼠肺指数的影响

结果见表 1。

表 1本发明组合物对流感病毒感染小鼠肺指数的影响（ ±sd)

注：与模型组比较 *P<0.05; **P<0.01

表 1结果显示，模型组由于肺部感染，肺部有明显的炎症和水肿，肺的重量较对照组明显增加（与对照组比较 PO.01 )。本发明组合物对病毒性肺炎具有明显的抑制作用，与模型组相比有统计学显著性差异（PO.05), 肺炎抑制率达 72.3%。结果表明本发明组合物具有显著的抑制流感病毒性肺炎的作用。

3.2本发明组合物对流感病毒感染小鼠肺匀浆中 TNF-α含量的影响结果见表 2。

表 2 本发明组合物对肺炎、鼠肺组织匀浆中 TNF-α含量的影响

( isd, pg/mg pro , η=11 )

剂量

组别 TNF-α

(g/kg)

对照 0.545 ±0.078

模型 0.506 ±0.064

达菲 0.05 0.585 ±0.106

抗病毒口月艮液 5.0 ml/kg 0.468 ±0.091

本发明组合物 10.0 0.416 ±0.054 " 注：与模型组比较 ** P<0.01

结果表明阳性对照药达菲和抗病毒口服液对肺组织勾浆中 TNF-α的分泌无降低作用，而本发明组合物可在一定程度上降低 TNF-α的含量（与模型组比较 PO.01 ), 从而防止肺部炎症反应的加重。

3.3本发明组合物对流感病毒感染小鼠生存天数的影响

结果见表 3。

表 3 本发明组合物对流感病毒感染小鼠生存天数的影响（ ±sd )

注：与模型组比较 * P<0.05 , ** P<0.01 , *** P<0.001

结果表明，模型组的生存时间为 11.3天，本发明组合物组使动物死亡时间延长至 13.2天，延长率为 15.8 % , 与模型组比较有显著性意义（P<0.05 )。表明本发明组合物对流感病毒感染导致的小鼠死亡具有保护作用。实验例 2解热实验

1 实验材料

1.1 实验药物：

本发明组合物颗粒剂（按实施例 1方法制备），用蒸馏水将其配制成 0.7g 生药 /ml, 0.35g生药 /ml;

阿司匹林泡腾片（阿斯利康制药有限公司），用蒸馏水将其配制成 20mg/ml;

双黄连口服液（哈药集团三精制药股份有限公司），用蒸馏水将其配制成 0.6ml原液 /ml。

1.2实验动物： SD大鼠，购自北京维通利华实验动物技术有限公司，许可证编号为 SCXK (京） 2006-0009

2 实验方法

将大鼠按体重随机分为正常对照组动物和造模动物。除了正常对照组动物 10只外，其余 60只均造模。于造模前，连续 2天测量动物的基础体温，取两次测定的肛温平均值作为其基础体温。造模动物均按照 2ml/100g体重的体积皮下注射 15%酵母混悬液，正常对照组动物注射等体积生理盐水。于注射酵母后 3.5 h测量大鼠体温。将造模后的动物按照体温增高值随机分为 6组，分别为： ①模型组， ②阿司匹林 200 mg/kg组， ③双黄连口服液 6ml/kg组， ④本发明组合物 3.5 g生药 /kg组， ⑤本发明组合物 7.0 g生药 /kg组，每组 10 只动物。各组大鼠均灌胃给药，给药体积 lml/100g。于给药后 0.5 h、 1.0 h、 2.0 h、 3.0 h、 4.0 h、 6.0 h分别测量大鼠肛温。于第 1次给药后 3.0h各组再加强给药 1次。正常对照组和模型组灌胃等体积蒸馏水。

计算每只动物各时间点与致热前基础体温的差值作为体温增高值（致热后某时间点的体温-基础体温 ), 各组体温增高值数据均以均数士标准差表示，用单因素方差分析（ANOVA )进行组间比较。按下列公式计算其抑制率

%。

抑制率（％ ) = (体温增高值模型组-体温增高值药物组） /体温增高值模型组 l 00%

3 实验结果

结果见表 4。

表 4 本发明组合物对酵母致大鼠发热解热作用的影响（ ±sd,

注：与模型组比较 * P<0.05 , ** P<0.01 , *** P<0.001

表 4结果显示，本发明组合物对酵母致大鼠体温升高亦具有明显的解热作用， 3.5g生药 /kg剂量组于药后 0.5h和 l.Oh, 7.0g生药 /kg剂量组于药后 6.0h, 均能明显抑制大鼠体温的升高，抑制率分别为 18.8%, 25.7%和 33.5%, 与模型组比较有显著性差异（P<0.05 , PO.01 , P<0.01 )。西药阳性药阿司匹林组于药后 0.5h至 6h均能明显抑制大鼠的体温升高（PO.001 ); 中药阳性对照药双黄连口服液在本实验中的解热作用不明显。

结果表明本发明组合物对酵母菌诱导的大鼠高热具有一定的解热作用，其作用强于中药阳性对照药双黄连口液。

实验例 3 抗炎实验

1 实验材料

1.1 实险药物：

本发明组合物颗粒剂（按实施例 1方法制备），用蒸馏水将其配制成 4种浓度，分别为 0.5 g生药 /ml, 0.25 g生药 /ml (小鼠）和 0.7 g生药 /ml, 0.35 g 生药 /ml (大鼠）；

阿司匹林泡腾片（阿斯利康制药有限公司），用蒸馏水将其配制成 10mg/ml (大鼠）和 20 mg/ml (小鼠）；

双黄连口服液（哈药集团三精制药股份有限公司 ), 用蒸馏水将其配制成 0.6ml原液 /ml (大鼠）和 0.9ml原液 /ml (小鼠）。

1.2实验动物： ICR小鼠， SD大鼠，均购自北京维通利华实验动物技术有限公司，许可证编号为 SCXK (京 ) 2006-0009

2实验方法

2.1 本发明组合物对小鼠毛细血管通透性的影响

ICR小鼠，雄性， 76只。按体重随机分为： ①正常对照组， ②模型组， ③阿司匹林 200mg/kg,④双黄连口服液 9 ml/kg,⑤本发明组合物 2.5 g生药 /kg, ⑥本发明组合物 5.0 g生药 /kg共 6组，每组 12-13只。各组按体重灌胃给予药物 0.2 ml/lOg, 每日给药 1次，连续给药 4 d。正常对照组和模型组给予等体积蒸馏水。末次给药前 16-18h禁食不禁水，末次给药后 60 min, 除正常对照组外，其余各组均腹腔注射 1 %冰醋酸生理盐水溶液 0.1 ml/lOg, 正常对照组注射等体积生理盐水。给予醋酸后，立即观察并记录小鼠出现扭体的潜伏期和 15 min内小鼠发生扭体反应的次数。 15 min内未出现扭体的动物，其潜伏期记为 900s。

于注射冰醋酸生理盐水溶液（正常对照组注射生理盐水）后 30 min, 所有动物尾静脉注射 0.5 %伊文思蓝溶液 0.2 ml/lOg, 20min后脱颈推处死。将 2 ml 生理盐水注入腹腔，轻柔腹部 30次后，收集腹腔液，再用 4 ml生理盐水分 2 次洗涤腹腔，每次 2 ml, 分别收集腹腔液，合并 3次的腹腔液后定容至 8 ml。将腹腔液经 3000 rpm离心 15 min,取上清液在 630 nm处比色，读取吸光度值。并以不同浓度的伊文思兰为标准，绘制标准曲线，计算腹腔液中伊文思蓝含量。

扭体抑制率 ( % ) = (扭体次数模型组 -扭体次数药物组） /扭体次数模型组 χ ΙΟΟ

伊文思蓝渗出量抑制率（％ ) = (伊文思蓝渗出量模型组-伊文思蓝渗出量药物组） /伊文思蓝渗出量模型组 xlOO

2.2 本发明组合物对弗式完全佐剂诱导的大鼠足趾肿胀的影响 SD大鼠，雄性， 70只。在每只大鼠的左后爪踝关节处用笔划一横线做标记，用容积法测定足容积，按左后足趾容积测量值随机分为：①正常对照组，②模型组，③ 阿司匹林 200mg/kg,④ 双黄连口服液 6 ml/kg,⑤本发明组合物 1.75 g生药 /kg, ⑥本发明组合物 3.5 g生药 /kg, ⑦本发明组合物 7.0 g生药 /kg组共 7组，每组 10只。各组按体重灌胃给予药物 1 ml/100g体重，每日给药 1次，连续给药 3 d。正常对照组和模型组灌胃等体积蒸馏水。第 4天进行足趾肿胀造模及测定肿胀度试验，试验前 16-18h禁食不禁水。给予佐剂造模前，在按照上述同样的方法测定每只大鼠的左后足趾容积值作为其造模前足趾基础容积值。然后，除正常对照组外，其余各组大鼠左后足趾均皮下注射弗氏完全佐剂 0.2 ml/只以致炎，同时各给药组均分别给药 1次。正常对照组动物的足趾注射等容积的生理盐水。于给药后 1.0 h、 2.0 h、 4.0 h、 6.0 h分别测量大鼠左后足趾容积值。于造模后 3.0h各组再加强给药 1次。每只动物致炎后的足趾溶剂均与其各自的致炎前足趾容积比较，计算足趾容积差值。

各时间点足趾容积差值=致炎后不同时间点左后足趾容积值-致炎前足趾容积值

足趾容积差值抑制率（％ ) = (足趾容积差值模型组 -足趾容积差值药物组） /足趾容积差值模型组 xlOO

3实验结果

3.1本发明组合物对小鼠毛细血管通透性的影响

结果见表 5。

表 5 本发明组合物对醋酸诱导的小鼠扭体反应和腹腔毛细血管通透性增高的抑制作用（^±sd )

注：与模型组比较 ** P<0.01 , *** P<0.001 ; o内为弃去溶血动物后的动物数

表 5结果显示，阳性药阿司匹林和双黄连口服液均能明显抑制炎性渗出 ( PO.001 , PO.01 ), 阿司匹林尚具有明显的镇痛作用，表现为明显延长扭体出现的潜伏期和较少扭体次数（PO.01 , P<0.001 )。本发明组合物 2.5g生药 /kg 和 5.0g生药 /kg剂量均能明显抑制腹腔注射醋酸导致的腹痛扭体反应，扭体次数较模型组明显减少（PO.01 ), 2个剂量组的抑制率分别为 38.7%, 41.6%; 并能显著抑制醋酸导致的腹腔毛细血管通透性增加，降低伊文思蓝的渗出量 (与模型组比较 PO.01 ), 抑制率分别为 32.9%, 30.5%。

结果表明本发明组合物具有明显的镇痛抗炎作用。

3.2本发明组合物对弗式完全佐剂诱导的大鼠足趾肿胀的影响

结果见表 6。

表 6本发明组合物对弗式完全佐剂诱导的大鼠足趾肿胀的影响（ ±sd, n=10 )

注：与模型组比较 * P<0.05 , ** P<0.01 , *** P<0.001

表 6结果显示，模型组的足趾肿胀非常明显，造模后 lh即可见明显肿胀，随时间延长，肿胀程度增加，至少持续至给药后 6h (各时间点与正常对照组比较均有明显差异， PO.001 ); 阳性药阿司匹林和双黄连口服液均在给药后 2h开始显示出明显抑制组织肿胀的抗炎效果。本发明组合物 1.75、 3.5、 7.0g 生药 /kg 3个剂量组均呈现不同程度的减轻足趾肿胀的作用。其中， 7.0g生药 /kg 剂量组的起效时间为药后 2.0 h, 3.5g生药 /kg剂量组起效时间为药后 4.0 h, 1.75g生药 /kg剂量组的起效时间较迟，为给药后 6h。 3.5g生药 /kg和 7.0g生药 /kg剂量组的作用至少维持至给药后 6h。本发明组合物 1.75、 3.5、 7.0g生药 /kg 3个剂量组造模后 6小时作用最为明显，抑制率分别为 27.6、 32.4、 43.2% (与模型组比较分别 P<0.01、 P<0.001、 PO.001 ), 并显示出一定的量效关系。结果表明本发明组合物具有明显的抗炎作用。具体实施方式

实施例 1 颗粒剂

原料：金银花 600g, 金莲花 600g, 小秦艽花 200g, 板蓝根 1000g;

制备方法：取原料药，加 7倍量 70%乙醇回流提取三次，每次 1小时；合并提取液，滤过，回收乙醇并浓缩至相对密度为 1.30 ~ 1.34 ( 50°C测）的稠膏；取稠膏 80°C以下减压干燥,粉碎成细粉，加入辅料，混匀；干压制粒，共制 1000g, 即得；

规格：每袋 5g;

用法与用量：一日 3次，每次 1袋。

实施例 2 片剂

原料：金银花 550g, 金莲花 650g, 小秦艽花 180g, 板蓝根 l lOOg;

制备方法：取原料药，加 5倍量 90%乙醇回流提取 2次，每次 1.5小时；合并提取液，滤过，回收乙醇并浓缩至相对密度为 1.30 ~ 1.34 ( 50°C测）的稠膏；取稠膏减压干燥，粉碎成细粉，加入常规辅料，混匀；干压制粒，压片，即得。

实施例 3 胶嚢剂

原料：金银花 650g, 金莲花 550g, 小秦艽花 220g, 板蓝根 900g;

制备方法：取原料药，加 10倍量 50%乙醇回流提取 4次，每次 1小时；合并提取液，滤过，回收乙醇并浓缩至相对密度为 1.30 ~ 1.34 ( 50°C测）的稠膏；取稠膏减压干燥，粉碎成细粉，加入常规辅料，混匀；干压制粒，装入胶嚢，即得。

实施例 4 散剂

原料：金银花 500g, 金莲花 700g, 小秦艽花 150g, 板蓝根 1200g;

制备方法：取原料药，加 8倍量 60%乙醇回流提取 3次，每次 1小时；合并提取液，滤过，回收乙醇并浓缩至相对密度为 1.30 ~ 1.34 ( 50°C测）的稠膏；取稠膏按常规工艺，加入常规辅料制成散剂。

实施例 5 口 H液

原料：金银花 700g, 金莲花 500g, 小秦艽花 250g, 板蓝根 800g; 制备方法：取原料药，加 6倍量 75%乙醇回流提取 2次，每次 1.5小时；合并提取液，滤过，加入常规辅料制成口服液。

实施例 6

金银花提取物 500g, 金莲花提取物 700g, 小秦艽花提取物 150g, 板蓝根提取物 1200g;

取上述提取物粉碎为细粉，混匀，按照常规工艺制成颗粒剂；

所述金银花提取物、金莲花提取物、小秦艽花提取物和板蓝根提取物分别为金银花、金莲花、小秦艽花、板蓝根以 7倍量 70%乙醇回流提取三次，每次 1小时，合并提取液后回收乙醇得到的提取物。

实施例 7

金银花提取物 600g, 金莲花提取物 600g, 小秦艽花提取物 200g, 板蓝根提取物 1000g; 取上述提取物粉碎为细粉，混匀，按照常规工艺制成片剂；

所述金银花提取物、金莲花提取物、小秦艽花提取物和板蓝根提取物分别为金银花、金莲花、小秦艽花、板蓝根以 7倍量 70%乙醇回流提取三次，每次 1 小时，合并提取液后回收乙醇得到的提取物。

实施例 8

取金银花 135g, 金莲花 135g, 小秦艽花 45g, 板蓝根 225g, 加 10倍水煎煮 3次，每次 1小时，滤过，合并滤液，以 60%乙醇进行醇沉，回收乙醇即得。

实施例 9

取金银花 135g, 金莲花 135g, 小秦艽花 45g, 板蓝根 225g, 以 60%乙醇回流提取 3次，溶剂用量分别为 8、 5、 5倍量，每次 1小时，滤过，合并滤液，回收乙醇即得。

实施例 10

取金银花 135g, 金莲花 135g, 小秦艽花 45g,板蓝根 225g, 其中金银花、金莲花、小秦艽花合并用 6倍量 60%乙醇回流提取 3次，每次 1小时；板蓝根 10倍水煎 3次，每次 1小时，合并提取液以 60%乙醇醇沉，乙醇部分与三种花类提取液合并，回收乙醇即得。

实施例 11 绿原酸含量测定供试品溶液的制备：分别取实施例 9和 10的样品各 O.lg, 精密称量，置 25ml量瓶中，加入曱醇超声处理 20min, 再加曱醇至刻度，摇匀，滤过；取续滤液 3.0ml, 蒸干，残渣加 50%曱醇使溶解，转移至 10ml容量瓶中，加 50% 曱醇至刻度摇匀，即得。

对照品溶液：取绿原酸对照品加曱醇制成 0.04064mg /ml的绿原酸对照品溶液。

色谱条件：色谱柱： kromasil-C18柱；流动相：乙腈 -0.4%磷酸溶液（ 10： 90 ); 检测波长： 327nm; 流速 lml/min。

实验结果见表 7。

表 7 绿原酸含量

实施例 12 实施例 8-10组合物对流感病毒感染小鼠生存时间的影响 1 试验材料

供试品：实施例 8-10制备的组合物（均为 lg生药 /ml提取物）， -20°C冰箱保存，用时用蒸馏水配成 0.6g生药 /ml。

阳性对照药：达菲原料药，购于上海浦东英轩公司，用时用蒸馏水配制成 1.25mg/ml„

病毒株：流感病毒，由中国中医科学院基础理论研究所病毒室提供。实验动物:小鼠，品系: KM, 雄性，动物来源:北京维通利华实验动物技术有限公司，动物合格证号： SCXK (京) 2007-0001。

2 试 3全方法

2.1 剂量设置：

供试品给药组分别设 1 个剂量，即 24g 生药 /kg; 阳性药达菲的剂量为 50mg/kg/d, 为按体表面积折算的临床等效剂量。 2.2 动物分组

选择体重在 12-14g之间的健康 KM小鼠，随机分为 6组： ①正常对照， ②模型组， ③达菲 50mg/kg/d, ④实施例 8组， ⑤实施例 9组， ⑥实施例 10 组，对照组 12只，其他组 21只。

2.3 小鼠感染病毒

各组小鼠用乙醚轻度麻醉，以 15倍 LD₅。流感病毒液滴鼻感染小鼠，每只滴鼻体积为 60μ1, 每鼻孔 30μ1。

2.4给药途径

本试验的模型组、阳性药组及本发明各提取物组均采用灌胃给药方法。 2.5 给药方法及给药次数、时间：

本发明各提取物组、阴性对照及阳性对照组均于动物感染流感病毒之前 1 天开始给药，每日灌胃给药 2次，上、下午各给药 1次，给药体积为 0.2ml/10g 体重，连续 5天。阴性对照和正常对照组灌胃给予同体积蒸馏水。

2.6观察指标

记录各组的平均生存天数并计算延长率。

3 统计分析

生存时间的评价采用平均生存天数进行评估，数据以均值士标准差表示，组间比较用单因素方差分析 ( ANOVA )。

4 实验结果

结果见表 8。

表 8 本发明组合物不同工艺对流感病毒感染小鼠生存天数的影响（土 SD，天）

注：延长率（％ ) = (生存天数《 -生存天数模她） /生存天数模实施例 13 实施例 6组合物对流感病毒感染小鼠生存时间的影响 1 实验材料

1.1 实险药物：

本发明组合物颗粒剂（按实施例 6方法制备 ), 用蒸馏水将其配制成 0.5 g 生药 /ml;

达菲（上海浦东英轩公司 ), 用蒸馏水将其配制成 2.5mg/ml;

2 实验方法

选择体重在 13-15g之间的健康 ICR小鼠， 100只，雌雄各半，将动物随机分成： ①正常对照组， ②模型组， ③ 达菲 50mg/kg, ④ 抗病毒口服液 5 ml/kg, ⑤本发明组合物 5.0生药 /kg共 5组，每组 20只，雌雄各 10只。

各组均于动物感染流感病毒之前 1天开始给药，给药体积为 0.2ml/10g体重，每日灌胃给药 1次。次日，除正常对照组外，其余组的动物用乙醚轻度麻醉，以 15倍 LD₅。流感病毒液滴鼻感染小鼠，每只动物滴鼻体积为 35μ1, 以造成病毒性肺炎感染。感染当天以及随后 3天继续给药，共连续给药 5天。正常对照组和模型组灌胃给予同体积蒸馏水。连续给药 5天后停药，逐日观察动物生存情况，共观察 15天。记录动物生存天数并计算延长率。

延长率（％ ) = (生存天数药物组 -生存天数模型组） /生存天数模型组 xlOO

3 实验结果

结果见表 9。表 9 本发明组合物对流感病毒感染小鼠生存天数的影响（ ±sd)

注：与模型组比较 *P<0.05, **P<0.01, ***P<0.001

结果表明，模型组的生存时间为 11.3天，本发明组合物组使动物死亡时间延长至 13.4天，延长率为 17.5%, 与模型组比较有显著性意义（P<0.05)。表明本发明组合物对流感病毒感染导致的小鼠死亡具有保护作用。实施例 14 本发明实施例 1得到的组合物含量测定方法

1 仪器与试剂

仪器: Waters-600型高效液相色谱仪， Waters-2487检测器。 KQ100型超声波清洗器（昆山市超声波仪器厂）

试剂：乙腈为色谱纯、水为娃哈哈纯水，磷酸、曱醇为分析纯，其他试剂均为分析纯。

绿原酸对照品：购自德国 CarlRothKG.公司（对照品号 6385 ), 纯度： 99% 样品:本发明颗粒剂 (批号: 20100203; 20100316; 20100317; 20100318)。 2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱： Kromasil-C18, 5μηι, 4.6x250mm (北京分析仪器厂出品）；流动相：乙腈一 0.4%磷酸溶液（ 10： 90 );

柱温： 30 °C;

检测波长： 327 nm; 流速： 1.0 mL/min;

理论板数：按绿原酸峰计算应不低于 3000。

2.2 对照品溶液制备

取绿原酸对照品适量，精密称定，加 50%曱醇溶液制成每 lmL含 50 g的溶液，即得。

2.3 供试品溶液的制备

取本发明组合物颗粒剂（按实施例 1制备），研细，取约 O.lg, 精密称定，精密加曱醇 25 mL, 称定重量，超声处理 20分钟，取出，放冷，再称定重量，用曱醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液 10mL, 水浴蒸干，残渣加 50%曱醇使溶解，转移至 10mL量瓶中，加 50%曱醇至刻度，摇匀，滤过，即得。

2.4 空白溶液的制备

按原料药的比例，配制不含金银花的组合物和不含金银花和金莲花的组合物，分别按常规工艺制成颗粒剂；再按" 2.3供试品溶液制备方法 "项下制成不含金银花阴性溶液和不含金银花和金莲花的双阴性溶液。

2.5 测定法

分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性溶液和双阴性溶液各 10 L, 注入液相色谱仪，测定，即得。

结果表明，在上述色谱条件下，供试品溶液分离效果良好，绿原酸峰与相邻杂峰分离度大于 1.5。对照品和样品的高效液相色谱图见图 1、图 2。不含金银花阴性溶液与不含金银花和金莲花双阴性溶液在与绿原酸对照品相同保留时间处有非常微弱的峰出现，其峰面积分别仅占供试品峰面积的 0.45%和 0.166% 左右，远远低于 5%以下，故认为基本无干扰。结果见图 3、图 4。

2.6 方法 3全证

2.6.1线性关系考察

精密吸取绿原酸对照品 50%曱醇溶液（0.21mg/mL ) 0.5、 1.5、 3.0、 4.0、 5.0mL, 分别置入 10mL量瓶中，用 50%曱醇稀释至刻度，摇匀。精密吸取上述溶液各 ΙΟμΙ^, 注入液相色谱仪，测定峰面积，以绿原酸进样量（ g ) 为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，其回归方程为： Y=3093717.04X-9610.58 , r=0.9999。结果表明，绿原酸在 0.105 ~ 1.050 范围内有良好的线性关系。结果见表 10, 图 5。

表 10 绿原酸线性关系

2.6.2精密度试验

精密称取样品（批号： 20100203 )按" 2.3供试品溶液制备方法 "项下制成供试品溶液，重复进样 5次，测定峰面积，结果见表 11。

表 11 精密度试验结果

2.6.3 稳定性试验

精密称取样品（批号： 20100203 ), 按" 2.3供试品溶液制备方法 "项下制成供试品溶液，分别于制备后 0、 2、 4、 6、 10、 22小时，按" 2.1色谱条件"项下测定绿原酸峰面积，结果表明供试品溶液在 22小时内稳定，结果见表 12。稳定性试验结果

2.6.4 重复性试马全

取同一批次（批号： 20100203 )样品，按" 2.1.3"法制备供试品溶液，平行操作 6份，按" 2.1 色谱条件"项下测定绿原酸峰面积，求得相对标准偏差小于 5%, 结果见表 13。

表 13 重复性试验

2.6.5 回收率试马全

采用加样回收法，精密吸取绿原酸对照品曱醇溶液（ 0.208 mg/mL ) 3 mL, 6份，置已编号的 1 ~ 6号 60 mL圓底烧瓶中，低温水浴挥干曱醇。再取已知含量的同一批（批号： 20100203 )样品约 55mg左右，按" 2.3供试品溶液制备方法"项下制备供试品溶液，按" 2.1色谱条件"项下测定峰面积，按下式计算回收率，结果见表 14。

出绿原酸总量 -样品中绿原酸的含

回收率 ■χ 100%

加入绿原酸对照品 3 绿原酸回收率测定结果

2.6.6样品测定

取三批样品，按" 2.3供试品溶液制备方法 "项下制备供试品溶液", 色谱条件"项下测定绿原酸峰面积，结果见表 15。

表 15 样品测定结果

根据以上测定结果，结合中国药典金银花所含绿原酸的含量，暂定本每袋含绿原酸 (C₁₆H₁₈0₉)应不少于 30 mg。

Claims

权利要求书

1、一种治疗风热感冒的中: 组合物，其特征在于该中药组合物的原料组成为：

金银花 400-800重量份金莲花 400-800重量份

小秦艽花 100-300重量份板蓝根 700-1300重量份。

2、如权利要求 1所述的中: i组合物，其特征在于该中药组合物的原料 ] 组成为：

金银花 550-650重量份金莲花 550-650重量份

小秦艽花 180-220重量份板蓝根 900-1100重量份。

3、如权利要求 1所述的中: i组合物，其特征在于该中药组合物的原料 ] 组成为：

金银花 600重量份金莲花 600重量份

小秦艽花 200重量份板蓝根 1000重量份。

4、一种如权利要求 1-3任- -项所述中药组合物的制备方法，该方法为：按比例取原料药，采用有机溶剂提取。

5、如权利要求 4所述的制备方法，其特征在于所述有机溶剂为 50-90% 的乙醇。

6、如权利要求 1-3任一项所述中药组合物的制备方法，该方法为：按比例取原料药，采用水提醇沉法制备；其中所述醇沉浓度为 40-90%。

7、如权利要求 1-3任一项所述中药组合物的制备方法，该方法为：按比例取原料药，其中三种花类药材采用有机溶剂合并提取，得提取物 A; 板蓝根单独采用水提醇沉法制备得提取物 B; 合并提取物 A和 B, 即得；其中所述有机溶剂为 50-90%的乙醇；所述醇沉浓度为 40-90%。

8、一种治疗风热感冒的中药组合物，该中药组合物的原料药组成为：金银花提取物 400-800重量份金莲花提取物 400-800重量份小秦艽花提取物 100-300重量份板蓝根提取物 700-1300重量份。

9、如权利要求 8所述的中药组合物，其特征在于该中药组合物的原料药组成为：金银花提取物 550-650重量份金莲花提取物 550-650重量份小秦艽花提取物 180-220重量份板蓝根提取物 900-1100重量份。

10、如权利要求 8所述的中药组合物，其特征在于该中药组合物的原料药组成为：

金银花提取物 600重量份金莲花提取物 600重量份小秦艽花提取物 200重量份板蓝根提取物 1000重量份。

11、如权利要求 8-10任一所述的中药组合物，其特征在于所述金银花提取物、金莲花提取物、小秦艽花提取物、板蓝根提取物为乙醇提取物或水提醇沉提取物或乙醇提取物 /水提醇沉提取物进一步过大孔树脂柱得到的精制物。

12、如权利要求 11所述的中药组合物，其特征在于所述提取使用的乙醇为浓度 50-90%的乙醇。

13、如权利要求 11 所述的中药组合物，其特征在于所述醇沉浓度为 40-90%。

14、如权利要求 1-3、 8-10任一项所述中药组合物在制备治疗风热感冒药物中的应用。

15、如权利要求 1-3、 8-10任一项所述中药组合物在制备抑制流感病毒性药物中的应用。

16、如权利要求 1-3、 8-10任一项所述中药组合物在制备抗炎药物中的应用。