WO2013143497A1 - 一种高纯度环肽化合物及其制备方法和用途 - Google Patents

一种高纯度环肽化合物及其制备方法和用途 Download PDF

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WO2013143497A1
WO2013143497A1 PCT/CN2013/073508 CN2013073508W WO2013143497A1 WO 2013143497 A1 WO2013143497 A1 WO 2013143497A1 CN 2013073508 W CN2013073508 W CN 2013073508W WO 2013143497 A1 WO2013143497 A1 WO 2013143497A1
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刘石东
张兆利
王修胜
张晓�
焦广俊
何兵明
唐志军
季晓铭
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上海天伟生物制药有限公司
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Definitions

  • the present invention relates to a high purity cyclic peptide compound and a process for the preparation thereof, and to the use of such a high purity cyclic peptide compound.
  • Fungal infections have become a major cause of high morbidity and mortality in immunodeficient patients. In the past 20 years, the incidence of mold infection has increased significantly. High-risk populations of fungal infections include critically ill patients, surgical patients, and those with HIV infection, blood cancer, and other oncological diseases. Those who have been transplanted by organs are also at high risk of fungal infections.
  • Echinoglobin as a new class of antifungal drugs
  • Echinoglobin inhibits fungi by inhibiting the formation of 1, 3-beta glycosidic bonds, thereby reducing harm to the human body, reducing side effects as much as possible while efficient, so they are in use Safer than traditional antifungal drugs.
  • FK463 also known as micafungin sodium
  • R is sodium ion
  • a compound of the formula I II R is a sodium ion or a hydrogen ion
  • the present inventors analyzed the existing micaptophan hydrochloride preparation by HPLC, and found that the preparation mainly contained the impurity 6a, the impurity 7a, the impurity 8a, the impurity 9a and the impurity 10a, and the impurity 6a and the impurity 7a were prepared by the preparation column.
  • the impurity 8a, the impurity 9a and the impurity 10a were prepared in small amounts, and confirmed by MS and 1 H-NMR, and their structures are as shown in the formulas IVa, Va, Via, Wa, W [a:
  • Impurity 6a its chemical name 5- [ (IS, 2S, 3S) -4- [ (IS, 2R) -4-amino -1- [ [ (2S, 3S, 4S) -
  • the chemical name of the impurity 7a is 5-[(lS,2S)-2-[(3S,6S, 9S, 11R, 15S, 18S, 20R, 21R, 24S, 25S )-3-[(R)-2-carbamoyl-1-hydroxyethyl]-11,20,21,25-tetrahydroxy-15-[(1 -1-hydroxyethyl]-2, 5, 8, 14, 17, 23-hexacarbonyl-18-[4- [5-(4-pentyloxyphenyl)isoxazol-3-yl]benzamide]- 1, 4, 7, 13, 16 , 22- hexaazatricyclo[22.3.0.0 9 ' 13 ]27 ⁇ -6-yl]- 1,2-dihydroxyethyl]-2-hydroxybenzen
  • the MS and 3 ⁇ 4_NMR data for impurity 7a are as follows:
  • W003018615 describes a crystallization process of micafungin sodium (e.g., a compound of formula II) which has a certain purification effect.
  • micafungin sodium e.g., a compound of formula II
  • the purity of the commercially available micafungin sodium produced by the applicant Fujisawa Pharmaceutical Co., Ltd., which is obtained by the company Fujisawa Pharmaceutical Co., Ltd., is only about 98.0%, and there is a certain risk in clinical application.
  • micafungin-like structural analogs such as impurity 6, impurity 7, impurity 8, impurity 9, impurity 10, it can be judged that these structural analogs of micafungin are basically composed of the structure of the compound of formula I.
  • the analogs are chemically modified.
  • CN91104847 describes the purification separation of compounds of formula I, wherein the main purification means uses YMC GEL 0DS-AM 120 as a filler, and the compound of formula I is purified and separated using a high pressure preparative liquid phase. It can be seen from the structural formula of the compound of the formula I that the compound of the formula I is highly polar and hydrophilic, and has a weak retention on the YMC GEL 0DS-AM 120 filler.
  • the compound of formula I does not have a good purification effect in the preparation of a liquid phase under high pressure with a YMC GEL 0DS-AM 120 packing.
  • the purity of the compound of the formula I is only 97.51% by the purification method described in CN91104847.
  • the inventors have also tried a variety of purification methods commonly used in the field, including ion exchange resins, macroporous adsorption resins, and C18 silica-bonded reverse phase preparative chromatography and normal phase preparative chromatography of spherical silica gel for compounds of formula I.
  • the compound of formula I was obtained in a total purity of 99.0% or more.
  • the above-mentioned inventors can increase the purity of the compound of the formula I to a total purity of 99.0% or more (more preferably a total purity of 99.8% or more) by a purification means such as crystallization and/or recrystallization. 0. 25%. High yield during crystallization purification, very suitable for industrial production.
  • W09611210, W003018615 and W02004014879 report on the synthesis and purification process of micafungin.
  • W09611210 reported that the preparation column was used for separation and preparation, but this method requires a large amount of organic solvent, which causes serious pollution to the environment and is difficult to amplify production; and the purity of the obtained product is not high.
  • W003018615, W02004014879 are purified by crystallization, but the results of crystallization are not effective in removing impurities 6, impurities 7, impurities 8, impurities 9, and impurities 10.
  • Another object of the present invention is to provide a process for the preparation of the high purity material (compound of formula I).
  • a third object of the invention is to provide the use of said high purity material (compound of formula I).
  • a fourth object of the present invention is to provide another high purity substance (compound of formula II).
  • a fifth object of the present invention is to provide a process for the preparation of another high purity material (compound of formula II).
  • the present invention provides a high purity compound of formula I having a purity of greater than or equal to 99.0%; wherein R represents H or a cation capable of forming a pharmaceutically acceptable salt; preferably H, sodium or diisopropylethylamine ion.
  • the purity of the compound of formula I is greater than or equal to 99.2%.
  • the purity of the compound of formula I is greater than or equal to 99.5%.
  • the purity of the compound of formula I is greater than or equal to 99.8%.
  • Mobile phase A: 1000 ml water, 10 ml methanol, ⁇ ⁇ ⁇ trifluoroacetic acid
  • the content of the impurity A in the high-purity compound I is less than or equal to
  • the relative retention time (RRT) of the impurity A on the HPLC is about 0.45, that is, 0.40 ⁇ 0.22.
  • the content of the impurity A is less than or equal to 0. 10%.
  • the content of the impurity A is less than or equal to 0. 05%. 25% ⁇ The content of the impurity B is less than or equal to 0.25%.
  • the relative retention time of the impurity B on the HPLC (abbreviated as RRT) is about 0.65, that is, 0.65 ⁇ 0.22.
  • the content of the impurity B is less than or equal to 0.15%.
  • the content of the impurity B is less than or equal to 0. 10%.
  • the content of the impurity B is 0. 03% - 0 ⁇ 10%. O. 03% ⁇ The content of the impurity B is less than or equal to 0.03%. 25% ⁇ The content of the content of the impurity C is less than or equal to 0.25%.
  • the relative retention time (abbreviated as RRT) of the impurity C on the HPLC is about 0.88, that is, 0.88 ⁇ 0.22.
  • the relative retention time (abbreviated as RRT) of the impurity D on the HPLC is about 1. 08, that is, 1. 08 ⁇ 0. 02.
  • the content of the impurity D is less than or equal to 0.15%.
  • the content of the impurity D is less than or equal to 0.10%.
  • the content of the impurity D is 0. 04% - 0. 10%.
  • the content of the impurity D is less than or equal to 0.04%.
  • the content of the impurity E is less than or equal to 0.15%.
  • the relative retention time (abbreviated as RRT) of the impurity E on the HPLC is about 1.29, that is, 1.29 ⁇ 0.02.
  • the content of the impurity E is less than or equal to 0. 10%.
  • the content of the impurity E is less than or equal to 0. 05%. 1% ⁇ The content of the impurity F is less than or equal to 0.15%.
  • the relative retention time (abbreviated as RRT) of the impurity F on the HPLC is about 1.92, i.e., 1.92 ⁇ 0.02.
  • the other related impurities in the high purity compound of the formula I is less than or equal to 0.10%, and the other related impurities refer to impurities which may exist outside the AF. 05% ⁇ In another preferred embodiment of the present invention, the content of the other relevant impurities are less than or equal to 0. 05%.
  • the other relevant impurity content is 0%.
  • the inventors have surprisingly discovered that the compound of the formula I is dissolved in a mixed solution of water or a lower alcohol which is mutually soluble with water, and the solution containing the compound of the formula I is maintained in the vicinity of the saturated solubility. At this time, the pH of the solution is controlled to be within a predetermined range, and the compound of the formula I forms a crystal having excellent morphology. This crystallization process has a very good purification effect, thereby preparing a highly pure compound of the formula I. Further, since the compound of the formula I is a cyclic peptide compound, the peptide bond formed by the amino acid upon condensation is hydrolytically cleaved at a high temperature solution.
  • the compound of formula I should be controlled to a certain temperature range during crystallization to ensure that the cyclic peptide material does not undergo ring-opening degradation.
  • the preparation method has carried out a lot of detailed work on the screening of the crystallization solvent, wherein the crystal of the formula I forms crystals with excellent morphology in methanol, ethanol, n-propanol, isopropanol or a mixed solution, and the crystallization process has a good crystallization process. Purification effect. While crystallizing in a solvent such as acetone, acetonitrile or ethyl acetate, the compound of the formula I forms an amorphous precipitate, and the above precipitation process does not achieve the effect of purifying and removing impurities.
  • the preparation method of the present invention comprises the following steps:
  • the dissolution temperature in the step (a) is from 10 to 50 ° C, preferably from 20 to 40 V.
  • the total volume of the solution as described in the step (a) contains 10 to 500 mg/ml, preferably 100 to 400 mg/ml, of the compound of the formula I.
  • the pH of the solution in step (a) is controlled at 2. 0-5. 0, preferably 3. 5-4.
  • the temperature of the cooling described in the step (b) is -40 to 35 V, preferably -10 to 35 ° C, more preferably -5 to 30 ° C, and most preferably 5 to 10 ° C.
  • the volume ratio of the organic solvent (i) in the step (b) to the solution in the step (a) is from 0.1 to 50, preferably from 0.1 to 10, most preferably from 1 to 5.
  • organic solvent (i) described in the step (a) and/or (b) is a C1-C4 lower alcohol; preferably from: one or more of methanol, ethanol, n-propanol, isopropanol mixture.
  • step (b) the high purity compound of formula I obtained in step (b) is a crystal.
  • step (b) the following steps can also be performed:
  • steps (a) to (b) may be repeated once or more, preferably from 1 to 4 times.
  • steps (a) to (b) may be repeated once or more, preferably from 1 to 4 times.
  • the following steps are employed to obtain a high purity compound of formula I:
  • the dissolution temperature in the step (a) is from 10 to 50 ° C, preferably from 20 to 40 V.
  • the total volume of the solution as described in the step (a) contains 10 to 500 mg/ml, preferably 100 to 400 mg/ml, of the compound of the formula I.
  • the pH of the solution in step (a) is controlled at 2. 0-5. 0, preferably 3. 5-4.
  • the temperature of the cooling described in the step (b) is -10 to 35 ° C, preferably -5 to 30 V, and most preferably 5 to 10 °C.
  • the following procedure is employed to obtain a high purity compound of formula I:
  • the dissolution temperature in the step (a) is from 10 to 50 ° C, preferably from 20 to 40 ° C.
  • the total volume of the solution in the step (a) is 10 to 500 mg/ml, preferably 50 to 300 mg/ml, of the compound of the formula I.
  • the pH of the solution in step (a) is controlled at 2. 0-5. 0, preferably 3. 5-4.
  • the organic solvent (i) described in the step (b) is a C1-C4 lower alcohol; preferably from: a mixture of one or more of methanol, ethanol, n-propanol and isopropanol.
  • the volume ratio of the organic solvent (i) in the step (b) to the solution in the step (a) is from 0.1 to 50, preferably from 0.1 to 10, most preferably from 1 to 5.
  • the following steps are employed to obtain a high purity compound of formula I: (a) dissolving a compound of formula I in water to control the pH of the solution;
  • the dissolution temperature in the step (a) is from 10 to 50 ° C, preferably from 20 to 40 V.
  • the pH of the solution in the step (a) is controlled to be 2.0 to 5.0, preferably 3.5 to 4.5.
  • the organic solvent (i) described in the step (b) is a C1-C4 lower alcohol; preferably from: a mixture of one or more of methanol, ethanol, n-propanol and isopropanol.
  • the temperature of the cooling described in the step (b) is -40 to 35 V, preferably -10 to 35 ° C, more preferably -5 to 30 ° C, and most preferably 5 to 10 ° C.
  • volume ratio of the organic solvent (i) in the step (b) to the solution in the step (a) is from 0.1 to 50, preferably from 0.1 to 10, most preferably from 1 to 5.
  • the following procedure is employed to obtain a high purity compound of formula I:
  • the dissolution temperature in the step (a) is from 10 to 50 ° C, preferably from 20 to 40 V.
  • the volume ratio of the organic solvent (i) to water is from 0.01 to 100, preferably from 0.1 to 10, more preferably from 0.5 to 3.0.
  • the total volume of the solution as described in the step (a) contains 10 to 500 mg/ml, preferably 100 to 400 mg/ml, of the compound of the formula I.
  • the pH of the solution in the step (a) is controlled to be 2.0 to 5.0, preferably 3.5 to 4.5.
  • the organic solvent (i) described in the step (a) is a C1-C4 lower alcohol; preferably from: a mixture of one or more of methanol, ethanol, n-propanol and isopropanol.
  • the temperature of the cooling described in the step (b) is -40 to 35 °C, preferably -10 to 35 °C, more preferably -5 to 30 V, and most preferably 5 to 10 °C.
  • the following procedure is employed to obtain a high purity compound of formula I:
  • the dissolution temperature in the step (a) is from 10 to 50 ° C, preferably from 20 to 40 ° C.
  • the volume ratio of the organic solvent (i) to water is from 0.01 to 100, preferably from 0.1 to 10, more preferably from 0.5 to 3.0.
  • the total volume of the solution as described in the step (a) contains 10 to 500 mg/ml, preferably 100 to 400 mg/ml, of the compound of the formula I.
  • the pH of the solution in the step (a) is controlled to be 2.0 to 5.0, preferably 3.5 to 4.5.
  • volume ratio of the organic solvent (i) in the step (b) to the solution in the step (a) is 0.1 Up to 10, preferably 1 to 5.
  • organic solvent (i) described in the steps (a) and (b) is a C1-C4 lower alcohol; preferably from: a mixture of one or more of methanol, ethanol, n-propanol, isopropanol .
  • the following procedure is employed to obtain a high purity compound of formula I:
  • the dissolution temperature in the step (a) is from 10 to 50 ° C, preferably from 20 to 40 ° C.
  • the volume ratio of the organic solvent (i) to water is from 0.01 to 100, preferably from 0.1 to 10, more preferably from 0.5 to 3.0.
  • the total volume of the solution as described in the step (a) contains 10 to 500 mg/ml, preferably 100 to 400 mg/ml, of the compound of the formula I.
  • the pH of the solution in the step (a) is controlled to be 2.0 to 5.0, preferably 3.5 to 4.5.
  • the temperature of the cooling described in the step (b) is -40 to 35 °C, preferably -10 to 35 °C, more preferably -5 to 30 V, and most preferably 5 to 10 °C.
  • volume ratio of the organic solvent (i) in the step (b) to the solution in the step (a) is from 0.1 to 50, preferably from 0.1 to 10, most preferably from 1 to 5.
  • organic solvent (i) described in the steps (a) and (b) is a C1-C4 lower alcohol; preferably from: a mixture of one or more of methanol, ethanol, n-propanol, isopropanol .
  • the compounds of formula I prepared by the process provided by the present invention are of high purity and are therefore preferred for the preparation of compounds of formula II. High purity compound II
  • the present invention provides a high purity hydrazine compound having an HPLC purity of 98.8% or more, preferably 99.0% or more, more preferably 99.5% or more; wherein R represents H or can form a pharmaceutically acceptable salt.
  • Cation preferably H, sodium or diisopropylethylamine ion.
  • the purity and/or impurity content of the compound of formula II is calculated by dividing the area under the peak curve of the compound of formula II and/or a certain impurity in the HPLC diagram by the area under the total curve of the HPLC chart.
  • the liquid phase purity of the hydrazine compound is determined by an HPLC method, and the HPLC method is as follows:
  • the high purity compound of formula II has a content of impurity 6 (structure shown in formula IV) of less than 0.2%, preferably less than 0.1%, More preferably less than 0.05%; wherein R represents H or an upper acceptable salt is preferably H, sodium or diisopropylethylamine ion.
  • the high-purity compound of the formula II has a total content of impurity 7 (structure shown in Formula V) and impurity 8 (structure shown in Formula VI) of less than 0.5%, preferably Less than 0.3%, more preferably less than 0.1%; wherein R represents H or a cation capable of forming a pharmaceutically acceptable salt; preferably H, sodium ion or diisopropylethylamine ion.
  • the high purity compound of the formula II has a content of impurity 9 (structure as shown in formula VII) of less than 0.2%, preferably less than 0.1%; wherein R represents H
  • the cation which is capable of forming a pharmaceutically acceptable salt is preferably H, sodium or diisopropylethylamine ion.
  • the high purity compound of the formula II has a content of impurity 10 (structure as shown in formula VIII) of less than 0.2%, preferably less than 0.1%; wherein R represents H Or a cation capable of forming a pharmaceutically acceptable salt; preferably H, sodium or diisopropylethylamine ion.
  • the high purity compound of the formula II has a content of the impurity 11 of 0.15% or less, preferably 0.1% or less, and most preferably 0.05% or less.
  • the relative retention time (abbreviated as RRT) on HPLC was about 0.96, which is 0.96 ⁇ 0.02.
  • the content of the other related impurities in the high-purity ruthenium compound is 0.02% or less, preferably 0.01% or less, and most preferably 0%; Impurities that may be present outside of impurities 6-11.
  • a method for producing a high-purity compound of the formula II which comprises using the high-purity cyclic peptide compound according to any one of claims 1 to 11 as a raw material to prepare a compound of the formula II, wherein R represents H, diiso Propylethylamine or other cation capable of forming a pharmaceutically acceptable salt.
  • the use of a high purity compound of formula I is provided.
  • it can be used to conveniently prepare a high purity compound of the formula II, and R represents H, diisopropylethylamine or other cation capable of forming a pharmaceutically acceptable salt.
  • the highly purified compound of the formula I provided by the present invention can also be directly used for the preparation of a medicament for the treatment of fungal infections.
  • a pharmaceutical composition comprising a high purity compound of formula I, and a pharmaceutically acceptable carrier can be provided.
  • the use of a high purity compound of the formula I I is provided.
  • the high purity formula I I provided by the present invention can also be directly used for the preparation of a medicament for treating fungal infections.
  • a pharmaceutical composition comprising a high purity compound of formula II, and a pharmaceutically acceptable carrier can be provided.
  • a method of preparing a pharmaceutical composition comprising a high purity compound of formula II:
  • the high-purity compound of the present invention is mixed with a pharmaceutically acceptable carrier to obtain a pharmaceutical composition containing a high-purity compound of the formula II.
  • R represents hydrazine or a cation capable of forming a pharmaceutically acceptable salt, preferably hydrazine, sodium ion or diisopropylethylamine ion.
  • the pharmaceutically acceptable salt preferably includes a metal salt such as an alkali metal salt (e.g., sodium salt, potassium salt), alkaline earth a metal salt (such as a calcium salt, a magnesium salt, etc.), an ammonium salt, a salt formed with an organic base (e.g., a trimethylamine salt, a triethylamine salt, a pyridinium salt, a methylpyridine salt, a dicyclohexylammonium salt, a hydrazine, a hydrazine) -dibenzylethylenediamine salt, diisopropylethylamine salt, etc.), organic acid addition salts (such as formate, acetate, trifluoroacetate, maleate, tartrate, A Sulfonic acid salts, besylate, toluenesulfonate, etc.), inorganic acid addition salts (such as hydrochloride, hydrobromide, hydroiodide, sulf
  • R represents hydrazine or a cation capable of forming a pharmaceutically acceptable salt, preferably hydrazine, sodium ion or diisopropylethylamine ion.
  • the pharmaceutically acceptable salt preferably includes a metal salt such as an alkali metal salt (e.g., a sodium salt, a potassium salt), an alkaline earth metal salt (e.g., a calcium salt, a magnesium salt, etc.), an ammonium salt, and a salt formed with an organic base (e.g., trimethylamine).
  • a metal salt such as an alkali metal salt (e.g., a sodium salt, a potassium salt), an alkaline earth metal salt (e.g., a calcium salt, a magnesium salt, etc.), an ammonium salt, and a salt formed with an organic base (e.g., trimethylamine).
  • Salt triethylamine salt, pyridinium salt, methylpyridine salt, dicyclohexylammonium salt, hydrazine, ⁇ '-dibenzylethylenediamine salt, diisopropylethylamine salt, etc., organic acid addition salt (such as formate, acetate, trifluoroacetate, maleate, tartrate, methanesulfonate, besylate, tosylate, etc.), inorganic acid addition salts (such as hydrochloric acid) Salts, hydrobromide salts, hydroiodides, sulfates, phosphates, etc., salts with amino acids (such as arginine, aspartic acid, glutamic acid, etc.).
  • organic acid addition salt such as formate, acetate, trifluoroacetate, maleate, tartrate, methanesulfonate, besylate, tosylate, etc.
  • inorganic acid addition salts such as hydrochlor
  • purity of the compound as shown in Formula I As used herein, “purity of the compound as shown in Formula I”, “purity of Compound I” or “HPLC purity of Compound I” are used interchangeably and refer to the high performance liquid chromatography (HPLC) detection provided by the present invention. The measured percentage of the peak area of Compound I and the peak area of all peaks. As used herein, “purity of the compound as shown in the formula”, “purity of the compound II” or “HPLC purity of the compound II” are used interchangeably and refer to the high performance liquid chromatography (HPLC) provided in the present invention. The percentage of the sum of the peak area of the compound ⁇ and the peak area of all the peaks measured under the conditions of the test.
  • crude of a compound of formula I or “crude of compound I” is used interchangeably and refers to the content of compound I under the conditions of high performance liquid chromatography (HPLC) provided by the present invention. 98% mixture.
  • the crude product I can be obtained using methods available in the art. For example, but not limited to, the microbial fermentation product of the compound of formula III is used as a starting material. Deacylation by deacylation to form a semisynthetic derivative (e.g., a compound of formula I) which is isolated and purified to provide the crude compound I. See, for example, the methods for preparing the crude compound I described in US Pat. No.
  • RRT relative retention time
  • RRT relative retention time
  • high-performance liquid phase may have a certain systematic deviation due to system adaptability problems, resulting in a relative retention time (RRT) shift.
  • RRT relative retention time
  • the general rule is acceptable in the range of ⁇ 0. 02.
  • the range of relative retention time (RRT) for micafungin sodium and related impurities for injection As used herein, "lower alcohol of C1-C4" means an alcohol having a number of carbon atoms of 1-4.
  • salts preferably include: metal salts such as alkali metal salts (e.g., sodium salts, potassium salts), alkaline earth metal salts (e.g., calcium salts, magnesium salts, etc.), ammonium salts, and organic bases.
  • metal salts such as alkali metal salts (e.g., sodium salts, potassium salts), alkaline earth metal salts (e.g., calcium salts, magnesium salts, etc.), ammonium salts, and organic bases.
  • Salt such as trimethylamine salt, triethylamine salt, pyridinium salt, methylpyridine salt, dicyclohexylammonium salt, hydrazine, ⁇ '-dibenzylethylenediamine salt, diisopropylethylamine salt, etc.
  • organic acid addition salts such as formate, acetate, trifluoroacetate, maleate, tartrate, methanesulfonate, besylate, tosylate, etc.
  • inorganic acid plus a salt such as a hydrochloride, a hydrobromide, a hydroiodide, a sulfate, a phosphate, etc.
  • a salt formed with an amino acid such as arginine, aspartic acid, glutamic acid, etc.
  • the term "pharmaceutically acceptable carrier” refers to a carrier for the administration of a therapeutic agent, including various excipients and diluents.
  • the term refers to pharmaceutical carriers which are not themselves essential active ingredients and which are not excessively toxic after administration. Suitable carriers are well known to those of ordinary skill in the art. A full discussion of pharmaceutically acceptable excipients can be found in Remington's Pharmaceutical Scouts (Mack Pub. Co., NJ 1991).
  • Pharmaceutically acceptable carriers in the compositions may include liquids such as water, saline, glycerol and ethanol.
  • auxiliary substances such as disintegrants, wetting agents, emulsifiers, pH buffering substances and the like may also be present in these carriers.
  • the present invention greatly improves the purity of the compound of the formula I, greatly reduces impurities therein, and obtains a compound of the formula I of very high purity, solving the technical problems to be solved in the prior art.
  • the present invention selects a specific preparation condition by repeated experiments on preparation conditions, and produces an unexpected technical effect, and provides a method for preparing a high-purity compound of the formula I, and the method is very suitable for large-scale production. High yield.
  • the present invention provides a novel method for preparing a high purity compound of formula II, which utilizes a high purity precursor compound of formula I to prepare a compound of formula II, which greatly reduces the process pressure of the purification step of the compound of formula II, and utilizes simple purification.
  • the process yields a high purity final drug product of formula II, while yields are also greatly improved, resulting in unexpected technical effects.
  • FIG 1 shows an HPLC analysis of the crude compound of formula I
  • Figure 2 is a HPLC analysis of the high purity compound of Formula I obtained in Example 5;
  • Figure 6 is a HPLC analysis of the commercially available micaptofen sodium preparation in Comparative Example 8.
  • the unit of weight percent by volume in the present invention is well known to those skilled in the art and, for example, refers to the weight of the solute in a 100 ml solution.
  • Mobile phase A: 1000 ml water, 10 ml methanol, ⁇ ⁇ ⁇ trifluoroacetic acid
  • Example 2 The compound I obtained in Example 2 (Compound I prepared in Example 2, HPLC purity: 99.00%) was dissolved in a mixed solution of 19 ml of water and 16 ml of n-propanol at 40 ° C. Stirring, the compound I is completely dissolved. The pH of the acetic acid was adjusted to 2.0, the solution was cooled to 15 ° C, and the crystal of Compound I was precipitated, and stirring was continued at 15 ° C for 5 hours to gradually grow the crystal of Compound I. 70 ml of n-propanol was added dropwise, and after completion of the dropwise addition, the mixture was stirred at 15 ° C for 1 hour. The purity was 99.23% by HPLC. The compound I 3. 4g was obtained by HPLC. The relevant impurity content is shown in Table 3.
  • Example 1 The compound I obtained in Example 1 was dissolved in 8 ml of water, and the pH was adjusted to 3.8 by stirring with glacial acetic acid at 30 ° C to dissolve the compound I completely. 10 ml of n-propanol was slowly added dropwise, and the crystal of Compound I was precipitated, and stirring was continued at 15 ° C for 2 hours. Then, 35 ml of n-propanol was slowly added dropwise, and after completion of the dropwise addition, the solution containing the compound I was gradually lowered by 15 ° C, and further stirred for 2 hours to completely precipitate the crystal of the compound of the formula I. Filtration afforded a wet solid of the compound of formula I.
  • Example 1 At 60 ° C, 1. 6 g of the compound I obtained in Example 1 was dissolved in a mixed solution of 80 ml of water and 80 ml of ethanol, and stirred to completely dissolve the compound I. Adjust the pH to 2.8 for glacial acetic acid, then slowly cool to -20 ° C and continue stirring at -20 ° C for 2 hours. 450 ml of ethanol was slowly added dropwise, and after the completion of the dropwise addition, the mixture was further stirred for 2 hours to completely precipitate the crystal of the compound of the formula I. The purity was 98. 89% by HPLC. The compound I 1. 5 g was obtained by HPLC. The relevant impurity content is shown in Table 6.
  • Example 10 1.5 g of the compound I obtained in Example 10 was dissolved in 10 ml of water and stirred to completely dissolve the compound I.
  • the pH of the acetic acid was adjusted to 3. 5, the solution was cooled to 2 ° C, and stirring was continued at 2 ° C for 2 hours.
  • 40 ml of isopropanol was slowly added dropwise, and after completion of the dropwise addition, stirring was further carried out for 2 hours to completely precipitate crystals of the compound of the formula I. After filtration and vacuum drying, 1. 4 g of Compound I was obtained, and the purity was 99.41% by HPLC, and the relevant impurity content is shown in Table 10.
  • Example 11 1. 4 g of the compound I obtained in Example 11 was dissolved in 10 ml of water at 10 ° C, and stirred to completely dissolve the compound I. The pH of the acetic acid was adjusted to 3.5, the solution was cooled to 2 ° C, and stirring was continued for 2 hours at 2 ° C. 40 ml of isopropanol was slowly added dropwise, and after completion of the dropwise addition, stirring was further carried out for 2 hours to completely precipitate crystals of the compound of the formula I. And the purity of the relevant impurities is shown in Table 11. The purity of the compound is 99.73%, and the relevant impurity content is shown in Table 11. Table 11 Example 13
  • Example 12 At 10 ° C, 1. 3 g of the compound I obtained in Example 12 was dissolved in 10 ml of water and stirred to completely dissolve the compound I. The pH of the acetic acid was adjusted to 3. 5, the solution was cooled to 2 ° C, and stirring was continued at 2 ° C for 2 hours. 40 ml of isopropanol was slowly added dropwise, and after completion of the dropwise addition, stirring was further carried out for 2 hours to completely precipitate crystals of the compound of the formula I. After filtration and vacuum drying, 1. 2 g of compound I was obtained, and the purity was 99.90% by HPLC, and the relevant impurity content is shown in Table 12.
  • Example 2 At 0 ° C, 2.0 g of the compound I obtained in Example 1 was dissolved in a mixed solution of 5 ml of water and 15 ml of methanol, and stirred to completely dissolve the compound I. The pH of the acetic acid was adjusted to 4.5, and the solution was cooled to 10 ° C. The crystal of Compound I was precipitated, then slowly cooled to -40 ° C, and stirring was continued at -40 ° C for 2 hours. 80 ml of methanol was slowly added dropwise, and after completion of the dropwise addition, stirring was further carried out for 2 hours to completely precipitate crystals of the compound of the formula I. Filtration afforded a wet solid of the compound of formula I.
  • Example 1 0.5 g of the compound I obtained in Example 1 was dissolved in 10 ml of water and stirred to completely dissolve the compound I.
  • the pH of the acetic acid was adjusted to 5. 0, and the solution was cooled to 30 ° C.
  • the crystal of Compound I was precipitated, and then slowly cooled to 2 ° C, and stirring was continued at 2 ° C for 10 hours. Filtration afforded a wet solid of the compound of formula I.
  • Example 2 At 18 ° C, 2. g of the compound I obtained in Example 1 was dissolved in 7 ml of water, and the pH was adjusted to 3.8 with glacial acetic acid to dissolve the compound I completely. Slowly add 20 ml of acetone to stir for two hours to precipitate a solid, and observe the fixed microstructure under a microscope, which is almost a random solid. The resulting compound I was vacuum filtered by suction filtration. HPLC analysis of Compound I had a solid purity of 97.79%, of which the relevant major impurity content, see Table 17, showed almost no change.
  • the salt was dissolved in 30 ml of acetone and 30 ml of ethyl acetate, washed and filtered.
  • the chloroprenol diisopropylethylamine salt was removed by vacuum to remove the residual organic solvent, and the purity of micafungin diisopropylethylamine salt was 98.81%, yield 90.6%.
  • the peaks 5 minutes before the HPLC analysis were solvent peaks and reaction by-product 1-hydroxybenzotriazole (H0BT), which was easily removed in the purification process described in W02004014879.
  • the relevant main impurity content is shown in Table 18.
  • HP1 preparation column Prep Nova - Pak®HR 7. 8*300mm
  • the high purity of the compound of the formula II is prepared with a high purity of the compound of the formula II and the single impurity is less than 0.1%.
  • the high purity of the compound of the formula II is prepared with a high purity of the compound of the formula II and the single impurity is less than 0.1%.
  • the micafungin sodium salt was prepared from micafungin diisopropylethylamine salt by the procedure of Example 6 in W02004014879.
  • the micafungin diisopropylethylamine salt solid (0.77 mmol) prepared in Example 16 of the present application was dissolved in 15 ml of a 75% aqueous methanol solution. Og / ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ L stops collecting. The pH of the collected solution was adjusted to 6.0 with 0.1 mol/L sodium hydroxide.
  • the water was diluted to a concentration of 35% methanol, loaded, and pre-treated with 50 ml of HP20ss macroporous adsorption resin for adsorption.
  • 100 ml of the aqueous solution of methanol was washed with 35%, and then eluted with 80% aqueous methanol, and 80 ml of an aqueous methanol solution was used in an amount of 200 ml.
  • the concentration of micafungin sodium was greater than 0. 5g / L began to collect, eluted to the end less than 0. 5g / l stop collection, collect the concentration of micafungin containing sodium components, HPLC quantitative analysis of rice Caffeine sodium (0.90 mmol), yield 93%.
  • the dimethyl methacrylate sodium purity was 99. 00% by HPLC.
  • the reaction by-product 1-hydroxybenzotriazole (H0BT) was completely removed. See Table 23 for the relevant major impurity levels.
  • the micafungin sodium salt was prepared from micafungin diisopropylethylamine salt by the procedure of Example 6 in W02004014879.
  • the micafungin diisopropylethylamine salt solid (0.77 mmol) prepared in Comparative Example 3 of the present application was completely dissolved in 15 ml of a 75% aqueous methanol solution. Og / ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ L stops collecting. The pH of the collected solution was adjusted to 6.0 with 0.1 mol/L sodium hydroxide.
  • the water was diluted to a concentration of 35% methanol, loaded, and pre-treated with 50 ml of HP20ss macroporous adsorption resin for adsorption.
  • 100 ml of the aqueous solution of methanol was washed with 35%, and then eluted with 80% aqueous methanol, and 80 ml of an aqueous methanol solution was used in an amount of 200 ml.
  • the concentration of micafungin sodium was greater than 0. 5g / L began to collect, eluted to the end less than 0. 5g / l stop collection, collect the concentration of micafungin containing sodium components, HPLC quantitative analysis of rice Caffeine sodium (0.88 mmol), yield 91%.
  • the purity of the sodium micafungate was only 96.17% by HPLC.
  • the solid was obtained by vacuum distillation.
  • the reaction by-product 1-hydroxybenzotriazole (H0BT) was completely removed. See Table 24 for the relevant major impurity levels.
  • Example 20 and Comparative Example 4 From Example 20 and Comparative Example 4, it can be clearly obtained that the high-purity micafungin diisopropylethylamine salt prepared by using the high-purity compound of the formula I (purity of 99.0%) is subjected to a simple purification step, that is, The micafungin sodium having a purity of 98.99% can be obtained.
  • the compound of formula I prepared in Example 1 of US Pat. No. 5,376,634 purity: 97.51%
  • the prepared high-purity micafungin diisopropylethylamine salt the purity of micafungin sodium obtained by the same purification step is only 96. 17%.
  • the high purity of the compound of formula I to prepare micafungin sodium has a significant advantage in purity.
  • Example 21 Preparation of high-purity micafungin sodium with high-purity micafungin diisopropylethylamine salt
  • the micafungin sodium salt was prepared from micafungin diisopropylethylamine salt by the procedure of Example 6 in W02004014879.
  • the micafungin diisopropylethylamine salt solid (0.08 mmol) prepared in Example 17 of the present application was completely dissolved in 15 ml of an aqueous solution.
  • the smear of micafungin sodium is less than 1. 0g / L stop collection
  • the solution containing micafungin diisopropylethylamine salt is applied to 30ml of UBK510L ion exchange resin, eluted with purified aqueous solution, eluted to micafungin sodium below 1. 0g / L stop collecting .
  • the pH of the collected solution was adjusted to 6.0 with 0.1 mol/L sodium hydroxide.
  • the sample was loaded and pre-treated with 40 ml of SP-207ss macroporous adsorption resin for adsorption.
  • 120 ml was washed with a 35% aqueous solution of ethanol, and then eluted with an 80% aqueous solution of ethanol, and an amount of 150 ml of an 80% aqueous solution of ethanol was 150 ml.
  • the concentration of micafungin sodium was greater than 0. 5g / L began to collect, eluted to the end less than 0. 5g / l stop collection, collect the concentration of micafungin containing sodium components, HPLC quantitative analysis of rice 9% ⁇ Kafenfen sodium (0. 92mmol), yield 93.9%.
  • the dimethyl methacrylate sodium was purified by vacuum distillation. The purity of micafungin sodium was 99. 40%. The reaction by-product 1-hydroxybenzotriazole (H0BT) was completely removed. The relevant main impurity content is shown in Table 25. Table 25
  • the micafungin sodium salt was prepared from micafungin diisopropylethylamine salt by the procedure of Example 6 in W02004014879.
  • the micafungin diisopropylethylamine salt solid (0. 98 mmol) prepared in Comparative Example 3 of the present application was dissolved in 15 ml of an aqueous solution.
  • the smear of micafungin sodium is less than 1. 0g / L stop collection
  • the solution containing micafungin diisopropylethylamine salt is applied to 30ml of UBK510L ion exchange resin, eluted with purified aqueous solution, eluted to micafungin sodium below 1. 0g / L stop collecting .
  • the pH of the collected solution was adjusted to 6.0.
  • the sample was loaded and pre-treated with 40 ml of SP-207ss macroporous adsorption resin for adsorption.
  • Example 21 and Comparative Example 5 From Example 21 and Comparative Example 5, it can be clearly obtained that the high-purity micafungin diisopropylethylamine salt prepared by using the high-purity compound of the formula I (purity 99.23%) is subjected to a simple purification step, that is, Micafen sodium is obtained in a purity of 99.40%.
  • a simple purification step that is, Micafen sodium is obtained in a purity of 99.40%.
  • the compound of formula I prepared in Example 1 of US Pat. No. 5,376,634 purity: 97.51%
  • the prepared high-purity micafungin diisopropylethylamine salt the purity of micafungin sodium obtained by the same purification step is only 96. 16%.
  • the high purity of the compound of formula I to prepare micafungin sodium has a significant advantage in purity.
  • the micafungin diisopropylethylamine salt solid (1. Olmmol) prepared in Example 18 of the present application was completely dissolved in 15 ml of an aqueous solution.
  • the solution containing micafungin diisopropylethylamine salt is applied to 30ml
  • the UBK510L ion exchange resin was eluted with a purified aqueous solution, and eluted until the micafungin sodium was less than 1.0 g/L. 0 ⁇ The pH of the collected solution was adjusted to 6.0. The sample was loaded and pretreated with 40 ml of SP-700 macroporous adsorption resin. First, 100 ml of a 10% aqueous acetone solution was washed, followed by elution with an 80% aqueous acetone solution, and an 80% aqueous acetone solution was used in an amount of 150 ml. The concentration of micafungin sodium was greater than 0. 5g / L began to collect, eluted to the end less than 0.
  • the micafungin sodium salt was prepared from micafungin diisopropylethylamine salt by the procedure of Example 6 in W02004014879.
  • the micafungin diisopropylethylamine salt solid (1. Olmmol) prepared in Comparative Example 3 of the present application was completely dissolved in 15 ml of an aqueous solution.
  • the smear of micafungin sodium is less than 1. 0g / L stop collection
  • the solution containing micafungin diisopropylethylamine salt is applied to 30ml of UBK510L ion exchange resin, eluted with purified aqueous solution, eluted to micafungin sodium below 1. 0g / L stop collecting .
  • the pH of the collected solution was adjusted to 6.0 with 0.1 mol/L sodium hydroxide.
  • the sample was loaded and pretreated with 40 ml of SP-700 macroporous adsorption resin.
  • Example 22 a high purity compound of formula I is used (purity 99%)
  • the high-purity micafungin diisopropylethylamine salt after a simple purification step, can obtain a purity of 99.79% of micafungin sodium.
  • the compound of formula I prepared in Example 1 of US Pat. No. 5,376,634 purity: 97.51%
  • the prepared high-purity micafungin diisopropylethylamine salt the purity of micafungin sodium obtained by the same purification step is only 96. 29%.
  • the high purity of the compound of formula I to prepare micafungin sodium has a significant advantage in purity.
  • Example 23
  • the micafungin diisopropylethylamine salt solid (1. 04 mmol) prepared in Example 19 of the present application was completely dissolved in 15 ml of an aqueous solution.
  • the lapse of the collection of micafungin sodium is less than 1. 0g / L stop collection
  • the solution containing micafungin diisopropylethylamine salt was applied to 25ml of UBK510L ion exchange resin, eluted with purified aqueous solution, eluted to micafungin sodium below 1. 0g / L stop collection .
  • the pH of the collected solution was adjusted to 6.0 with 0.1 mol/L sodium hydroxide.
  • the sample was loaded and pre-treated with 40 ml of HP2MG macroporous adsorption resin for adsorption.
  • 200 ml of a 30% aqueous solution of ethanol was used, followed by elution with a 70% aqueous solution of ethanol, and a 70% aqueous solution of ethanol was used in an amount of 200 ml.
  • the concentration of micafungin sodium was greater than 0. 5g / L began to collect, eluted to the end less than 0. 5g / l stop collection, collect the concentration of micafungin containing sodium components, HPLC quantitative analysis of rice 5% ⁇ Caffeine sodium (0. 92mmol), yield 88. 5%.
  • the purity of micafungin sodium was 99.88%.
  • HPLC was analyzed by HPLC.
  • the reaction by-product 1-hydroxybenzotriazole (H0BT) was completely removed. See Table 29 for the relevant major impurity levels.
  • the micafungin sodium salt was prepared from micafungin diisopropylethylamine salt by the procedure of Example 6 in W02004014879.
  • the micafungin diisopropylethylamine salt solid (1. 04 mmol) prepared in Comparative Example 3 of the present application was completely dissolved.
  • the lapse of the collection of micafungin sodium is less than 1. 0g / L stop collection
  • the solution containing micafungin diisopropylethylamine salt was applied to 25ml of UBK510L ion exchange resin, eluted with purified aqueous solution, eluted to micafungin sodium below 1. 0g / L stop collection .
  • the pH of the collected solution was adjusted to 6.0.
  • Impurities 10 1. 11-1. 13 0. 21 0. 05
  • the purity of the high-purity micafungin sodium obtained by the present invention is significantly higher than that of the commercially available preparation product, in which the contents of impurity 6, impurity 7, impurity 8, impurity 9, impurity 10, and impurity 11 are both It is much lower than the commercially available preparation products.
  • the HPLC spectrum is shown in Figure 5, and the HPLC map of the commercially available preparation product is shown in Figure 6.
  • the lactose is dissolved in pure water (200 ml) under heating at less than 50 °C. After cooling to 20 ° C - the above, the high-purity compound I obtained in Example 3 was added to the lactose solution to avoid generation of bubbles under gentle stirring. After adding a 2% aqueous solution of citric acid (0.95 ml), a solution of 0.4% aqueous sodium hydroxide (about 24 ml) was added to adjust the pH to 5.5, and then diluted with pure water to give a given volume (250 ml). ). The resulting solution was dispensed into 100 10 ml vials of 2.5 ml each vial.

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Abstract

本发明公开了一种高纯度的环肽化合物，化学结构如式I所示，其中，R表示H或者能形成药学上可接受的盐的阳离子，纯度大于等于99.0%。还公开了上述高纯度环脂肽化合物的制备方法以及用途。

Description

一种高纯度环肽化合物及其制备方法和用途
技术领域
本发明涉及一种高纯度环肽化合物及其制备方法， 也涉及到这种高纯度环肽 化合物的用途。 背景技术
真菌感染已经成为免疫缺陷病人发病率和死亡率居高不下的主要原因。 在过 去的 20年里， 霉菌感染的发病率显著增加。 真菌感染的高危人群包括重症病人， 外科病人以及那些患有 HIV感染， 血癌和其它肿瘤疾病的病人。 那些经过器官移 植的病人同样是真菌感染的高危人群。
棘球白素作为一类新的抗真菌药物，
效果良好。 这类药物又以卡泊芬净和米卡芬净为代表。 棘球白素类药物通过抑制 1， 3- β糖苷键的形成来抑制真菌， 从而更好地减小了对人体的伤害， 在高效的同 时尽可能的降低了副作用， 因此它们在使用过程中比传统抗真菌药更安全。
FK463, 又名米卡芬净钠， 为如式 I I所示的化合物 （R为钠离子） ， 由日本 藤泽公司 ( Japan Fuj i saw a Toyama Co. , Ltd, Takaoka Plant ) 开发， 其商品名 为米开民 （Mycamine ) ， 目前作为静脉给药的抗真菌药在多个国家销售。 它是以 FR901379 , 如式 I II所示化合物 （R为钠离子或氢离子） 为前体通过酶解除掉侧 链后得到 FR179642 , 如式 I所示化合物， （R为氢离子或钠离子） ， （具体方法参 见美国专利 US5376634, EP0431350及中国专利 CN1161462C, )然后经过化学修饰 得到的， 具体制备及纯化方法参见专利公开 W09611210、 W09857923,
W02004014879 o
Figure imgf000003_0001
N2013/073508
Figure imgf000004_0001
然而，本发明人通过 HPLC对现有的米卡芬净制剂进行分析， 发现制剂中主要 含有杂质 6a、 杂质 7a、 杂质 8a， 杂质 9a和杂质 10a， 并通过制备柱对上述杂质 6a、 杂质 7a、 杂质 8a， 杂质 9a和杂质 10a进行小量制备， 经 MS以及 1 H-NMR进 行结构确证， 其结构如式 IVa、 Va、 Via, Wa、 W【a所示：
杂质 6a，其化学名 5- [ (IS, 2S, 3S) -4- [ (IS, 2R) -4-氨基 -1- [ [ (2S, 3S， 4S) -
2-氨甲酰 -3-羟基 -4-甲基 -1-吡咯基]羰基] -2-羟基 -4-氧代丁基]氨
基]- 3- [ [ [ (2S, 4R) -1- [ (2S, 3R) - 2- [ [ [ (2S, 4R) -4， 5-二羟基 - 1- [4- [5- [4- (戊氧基) 苯基] -3-异恶唑]苯甲酰基] -2-吡咯]羰基]氨基] -3-羟基丁酰基] -4-羟基 -2-吡咯] 羰基]氨基] -1， 2-二羟基 -4-氧代丁基] -2-羟基苯硫酸钠
Figure imgf000005_0001
IVa (杂质 6a)
杂质 6a的 MS与 ¾_NMR数据如下：
MS: 1314.5[M+Na] +
'H-NMR (DMS0-d6) :0.81— 1· 03 (6H， m) , 1.12 (3H, d)， 1.3—1· 7 (4H， m) , 1.7—2· 1 (5 H， m)， 2.11-2.41 (3H， m)， 2.52—2· 62 (1H， m)， 3.03—3· 14 (1H， m)， 3.62—4· 65 (15H, m)， 4.70-5.22 (10H, m)， 5.24 (1H， d)， 5.53 (1H， d)， 6.53—6· 71 (3H， m)， 7.12-7· 70 (7H， m) 7.82 (2H, d), 7.83-8.24 (5H, m) , 8.61-9.11 (2H, m) 杂质 7a的化学名为 5-[(lS,2S)-2-[(3S,6S, 9S， 11R, 15S, 18S, 20R, 21R, 24S, 25S)-3-[(R)-2-氨甲酰基 -1-羟基乙基] -11，20，21，25-四羟基-15-[(1 -1-羟基乙 基] -2, 5， 8， 14， 17, 23-六羰基 -18- [4- [5- (4-戊氧基苯基）异噁唑 -3-基]苯甲酰 胺]- 1， 4， 7， 13， 16， 22-六氮杂三环 [22.3.0.09'13]二十七垸- 6-基]- 1， 2-二羟乙 基] -2-羟基苯硫酸钠 f r、so3N3
Va (杂质 7a)
杂质 7a的 MS与 ¾_NMR数据如下：
MS: 1300.5[M+Na] +
-匿（DMSO- d6) :0.87 (3H, t)， 1.12 (3H, d)， 1.42-1.65 (4H, m) , 1.62—2· 16 (6H , m), 2.11-2.43 (3H， m)， 2.51—2· 65 (1H， m)， 3.04—3· 11 (1H， m)， 3.62—4· 63 (15H, m)， 4.71-5.23 (10H, m)， 5.24 (1H， d)， 5.69 (1H， d)， 6.51—6· 72 (3H， m)， 7.11—7· 74 (7H , m) , 7.83 (2H, d)， 7.84—8.11 (4H， m)， 8.26 (1H， d)， 8.61—9.12 (2H, m) 杂质 8a的化学名为 5-[(lS, 2S)-2-[(3S,6S, 9S, 11R, 15S, 18S, 20R, 21R, 24S，25S，26S)- 3- [(R)- 2-氨甲酰基- 1-羟基乙基]- 11， 20, 21, 25-四羟基
-15-[(1?)-1-羟甲基]-26-甲基-2，5，8， 14， 17， 23-六羰基 -18- [4- [5- (4-戊氧基苯 基）异噁唑 -3-基]苯甲酰胺] -1， 4， 7, 13, 16, 22-六氮杂三环 [22.3.0.09'13]二十七垸 -6-基] -1， 2-二羟基乙基] -2-羟基苯硫酸钠，
Figure imgf000006_0001
(杂质 8a) - ) -s] - ]
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Figure imgf000008_0001
la (杂质 10a)
杂质 10a的 MS与 ¾-NMR数据如下：
MS: 1298.4[M+Na] +
'H-NMR (DMS0-d6 )： 0.87—1.11 (6H， t)， 1.13 (3H, d)， 1· 41— 1· 61 (4H， m) , 1.62-2.17 (8H, m) , 2.11— 2.43 (3H， m) , 2.53-2.65 (1H, m) , 3· 05— 3· 11 (1H， m) , 3.62-4.63(14H, m) , 4· 71— 5· 23 (10H， m) , 5.26 (1H, d)， 5.69 (1H, d)，
6.53-6.72 (3H, m) , 7.11-7.72 (7H, m) , 7.81 (2H, d)， 7· 86— 8· 11 (4H， m) , 8.28 (1H d)， 8.62-9.12 (2H, m) 其中杂质 6a的含量高于 0.3%， 杂质 7a和 8a的总含量大于 0.6%， 杂质 9a 的含量高于 0.2%， 杂质 10a的含量高于 0.2%， 米卡芬净的含量只有 98.0%左右。 但是 FDA要求 API尽可能不含有杂质， 这样才能更安全地应用于临床。 例如： FDA 要求一些杂质的含量在 0.1%以下， 详细参见 ICH Good Manufacturing Practice Guide for Active Pharmaceutical Ingredients, Q7A, Current Step 4
Version (November 10,2000)。 W003018615描述了米卡芬净钠 （例如式 II所示的化合物） 的结晶方法， 该结 晶方法具有一定的纯化效果。 但是其申请人日本藤泽制药公司利用此方法获得的 米卡芬净生产的市售的米卡芬净钠制剂纯度只有 98.0%左右， 应用于临床存在一 定的风险性。
本领域众所周知，药物中间体的纯度越高，经过化学修饰最终药物产品的纯度 也会越高。 同样道理， 作为中间体的式 I化合物纯度越高， 经化学修饰得到的反 应后式 II化合物（FK463)纯度也会越高。如果经化学修饰得的式 II化合物（FK463) 纯度高， 那么就可以极大程度地减轻式 π化合物纯化步骤的工艺压力， 利用简便 的纯化工艺得到高纯度的最终药物产品， 式 II化合物 （FK463 ) 。 从米卡芬净结构 类似物， 例如杂质 6、 杂质 7、 杂质 8、 杂质 9、 杂质 10的结构中可以判断，上述 米卡芬净的这些结构类似物， 基本上是由式 I化合物的结构类似物经化学修饰反 应而来。
Figure imgf000009_0001
IV 杂质 6
Figure imgf000009_0002
H3C
V 杂质 7
( ο
、..— .■ 「s
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H3C ！ , I
VI 杂质 8
H3CZ、Z\,0
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VII 杂质 9
Figure imgf000010_0003
H3C -、.
~ Ί VIII 杂质 10 然而， 式 I化合物的结构类似物， 分离纯化的难度非常大， 尤其要在纯化过 程中同时兼顾纯度和收率， 就更加困难了。 CN91104847描述了式 I化合物的纯 化分离， 其中主要的纯化手段采用 YMC GEL 0DS-AM 120 作为填料， 利用高压制 备液相进行式 I化合物纯化分离。 从式 I化合物的结构式可以看出， 式 I化合物 的极性很强亲水性好， 在 YMC GEL 0DS-AM 120 填料上的保留性很弱。 因此式 I 化合物在以 YMC GEL 0DS-AM 120 填料高压制备液相也得不到很好的纯化效果。 利用 CN91104847描述的纯化方法， 得到的式 I化合物纯度只有 97. 51%。
此外， 发明人还尝试了多种本领域常用的纯化方法， 包括离子交换树脂、 大 孔型吸附树脂， 以及 C18硅胶键合的反相制备色谱和球型硅胶的正相制备色谱对 式 I化合物进行层析纯化， 都无法得到总纯度 99. 0%以上的式 I化合物。
通过结晶和 /或重结晶等纯化手段，本发明人可以将纯度 97%左右的式 I化合 物提高到总纯度 99. 0%以上， （更佳的总纯度 99. 8%以上）单一杂质均小于 0. 25%。 结晶纯化过程中收率高， 非常适合工业化生产。
W09611210, W003018615和 W02004014879报道了有关米卡芬净的合成以及纯 化工艺。 其中 W09611210报道采用制备柱进行分离制备， 但该方法需要大量的有 机溶剂， 对环境造成严重污染， 不易放大生产； 并且得到产物的纯度并不高。
W003018615, W02004014879采用结晶的方法进行纯化， 但结晶的结果不能有效去 除杂质 6、 杂质 7、 杂质 8、 杂质 9和杂质 10。
因此， 本发明人急切的希望在药物中间体阶段， 利用特定的纯化手段， 将药 物中间体即式 I化合物制备为高纯度中间体。 然后经过化学修饰得到高纯度的式 II化合物 （FK463 ) ， 制备符合 FDA要求的高纯度的米卡芬净。 发明内容
本发明的一个目的旨在提供一种高纯度的物质， 如式 I化合物。
本发明的另一个目的是提供所述高纯度的物质 （式 I化合物） 的制备方法。 本发明的第三个目的是提供所述高纯度的物质 （式 I化合物） 的用途。
本发明的第四个目的是提供另一种高纯度的物质 （式 II化合物） 。
本发明的第五个目的是提供另一种高纯度的物质（式 II化合物）的制备方法。 高纯度式 I化合物
本发明提供了一种高纯度的式 I化合物， 纯度大于等于 99. 0%; 其中， R表示 H 或者能形成药学上可接受的盐的阳离子； 优选 H、 钠离子或二异丙基乙胺离子。
在本发明的一个优选例中， 所述式 I化合物纯度大于等于 99. 2%。
在本发明的一个优选例中， 所述式 I化合物纯度大于等于 99. 5%。
在本发明的另一优选例中， 所述式 I化合物纯度大于等于 99. 8%。
其中， 所述式 I化合物的纯度用 HPLC测定。
其中， 所述式 I化合物纯度和 /或杂质含量的计算方法为： 在 HPLC图中式 I化合 物和 /或某个杂质的峰曲线下面积除以 HPLC图的总曲线下面积。 其中， 所述 HPLC测定方法如下：
色谱柱： ACE 3 AQ， 150 X 4. 6mm, 3 μ m
流动相： A: 1000ml水， 10ml甲醇， ΙΟΟ μ Ι三氟乙酸
Β: 600 ml水， 400ml 甲醇， ΙΟΟ μ Ι三氟乙酸 流速： 0. 55ml/min
柱温： 50 °C
梯度：
Figure imgf000012_0001
进样温度： 5°C
检测波长： 225nm
在本发明的另一优选例中 ， 所述高纯度式 I 化合物中杂质 A 的含量小于等于
0. 25%。
在本发明的另一优选例中 ， 所述杂质 A在 HPLC上的相对保留时间（简称 RRT)约 为 0. 45， 即 0. 45±0. 02。
在本发明的另一优选例中 ， 所述杂质 A的含量小于等于 0. 10%。
在本发明的另一优选例中， 所述杂质 A的含量小于等于 0. 05%。 在本发明的另一优选例中 ， 所述高纯度式 I 化合物中杂质 B 的含量小于等于 0. 25%。
在本发明的另一优选例中 ， 所述杂质 B在 HPLC上的相对保留时间（简称 RRT)约 为 0. 65， 即 0. 65±0. 02。
在本发明的另一优选例中 ， 所述杂质 B的含量小于等于 0. 15%。
在本发明的另一优选例中， 所述杂质 B的含量小于等于 0. 10%。
在本发明的另一优选例中， 所述杂质 B的含量为 0. 03%— 0· 10%。 在本发明的另一优选例中， 所述杂质 B的含量小于等于 0. 03%。 在本发明的另一优选例中， 所述高纯度式 I 化合物中杂质 C 的含量小于等于 0. 25%。
在本发明的另一优选例中， 所述杂质 C在 HPLC上的相对保留时间（简称 RRT)约 为 0. 88， 即 0. 88 ± 0. 02。
在本发明的另一优选例中，
在本发明的另一优选例中，
在本发明的另一优选例中，
在本发明的另一优选例中， 在本发明的另一优选例中，
0. 20% o
在本发明的另一优选例中， 所述杂质 D在 HPLC上的相对保留时间（简称 RRT)约 为 1. 08， 即 1. 08 ± 0. 02。
在本发明的另一优选例中， 所述杂质 D的含 小于等于 0. 15%。
在本发明的另一优选例中， 所述杂质 D的含 小于等于 0. 10%。
在本发明的另一优选例中， 所述杂质 D的含 为 0. 04%- 0. 10%。
在本发明的另一优选例中， 所述杂质 D的含 小于等于 0. 04%。
在本发明的另一优选例中， 所述高纯度式 I 化合物中杂质 E 的含量小于等于 0. 15%。
在本发明的另一优选例中， 所述杂质 E在 HPLC上的相对保留时间（简称 RRT)约 为 1. 29， 即 1. 29 ± 0. 02。
在本发明的另一优选例中， 所述杂质 E的含量小于等于 0. 10%。
在本发明的另一优选例中， 所述杂质 E的含量小于等于 0. 05%。 在本发明的另一优选例中， 所述高纯度式 I 化合物中杂质 F 的含量小于等于 0. 15%。
在本发明的另一优选例中， 所述杂质 F在 HPLC上的相对保留时间（简称 RRT)约 为 1. 92， 即 1. 92 ± 0. 02。
在本发明的另一优选例中，
在本发明的另一优选例中， 在本发明的另一优选例中， 其特征在于， 所述高纯度式 I化合物中其他相关杂质 含量均小于等于 0. 10%， 所述其他相关杂质指 A-F以外可能存在的杂质。 在本发明的另一优选例中， 所述其他相关杂质含量均小于等于 0. 05%。
在本发明的另一优选例中， 所述其他相关杂质含量为 0%。
高纯度式 I化合物的制备
发明人经过研究惊奇的发现， 式 I化合物溶解在水或与水相互溶解的低级醇 的混合溶液中， 且含式 I化合物的溶解液维持在饱和溶解度附近。 这时控制溶解 液的 pH在规定的范围内， 式 I化合物形成形态优异的晶体。此结晶过程具有很好 的纯化效果， 由此制备出高纯度的式 I化合物。 此外由于式 I化合物为环肽化合 物， 氨基酸在缩合时形成的肽键在高温溶液水解断裂。 因此式 I化合物在结晶的 过程中应该控制一定的温度范围， 以保证环肽物质不会开环降解。 本制备方法在 结晶溶剂的筛选方面做了大量细致的工作， 其中在甲醇、 乙醇、 正丙醇、 异丙醇 中或混合溶液中结晶， 式 I化合物形成形态优异的晶体， 结晶过程具有不错的纯 化效果。 而在像丙酮、 乙腈、 乙酸乙酯等溶剂中结晶， 式 I化合物形成无定形沉 淀， 且上述沉淀过程达不到纯化去除杂质的效果。 本发明所述制备方法包括以下步骤：
(a)将如式 I所示化合物粗品溶解在水或有机溶剂（ i )的水性溶液中， 控制溶解 液 pH;
(b) 通过降温和 /或添加有机溶剂（ i )得到所述高纯度式 I化合物。
其中， 步骤 （a) 中所述溶解的温度为 10 至 50°C， 优选 20至 40 V。
其中， 步骤 （a) 中所述有机溶剂（ i )的水性溶液中， 有机溶剂 （i ) 与水的体积 比 0. 01至 100， 优选 0. 1至 10， 更优选 0. 5-3. 0。
其中， 步骤 （a) 中所述溶解液的总体积计， 其中含有如式 I 所示化合物 10至 500mg/ml , 优选 100至 400mg/ml。
其中， 步骤 （a) 中所述溶解液 pH控制在 2. 0-5. 0， 优选 3. 5-4. 5。
其中， 步骤 （b) 中所述的降温的温度为 -40至 35 V， 优选 -10至 35°C， 更优 选 -5至 30 °C， 最优的 5至 10°C。
其中， 步骤 （b ) 中所述有机溶剂（ i )与步骤 （a) 所述溶解液的体积比为 0. 1 至 50， 优选 0. 1至 10， 最优选为 1至 5。
其中， 步骤（a)和 /或（b ) 中所述的有机溶剂（ i )为 C1-C4的低级醇； 优选自： 甲醇、 乙醇、 正丙醇、 异丙醇中的一种或多种的混合物。
其中， 步骤 （b) 得到的高纯度式 I化合物为晶体。
其中， 步骤 （b) 之后还可以进行以下步骤：
(c ) 离心或过滤；
(d) 去除溶剂和大部分水 （干燥） ， 得到高纯度式 I化合物。 其中， 步骤 （a) - (b) 可以重复一次或以上进行重结晶， 优选 1-4次。 在本发明的一个实施方式中， 采用以下步骤来获得高纯度式 I化合物：
(a) 将如式 I所示化合物溶解在水中， 控制溶解液 pH;
(b) 降低溶解液温度得到式 I化合物晶体；
(c ) 离心或过滤；
(d) 干燥，得到高纯度式 I化合物。
其中， 步骤 （a) 中所述溶解的温度为 10 至 50°C， 优选 20至 40 V。
其中， 步骤 （a) 中所述溶解液的总体积计， 其中含有如式 I 所示化合物 10至 500mg/ml , 优选 100至 400mg/ml。
其中， 步骤 （a) 中所述溶解液 pH控制在 2. 0-5. 0， 优选 3. 5-4. 5。
其中， 步骤 （b ) 中所述的降温的温度为 -10至 35°C， 优选 -5至 30 V， 最优的 5至 10°C。 在本发明的另一个实施方式中， 采用下述步骤来获得高纯度式 I化合物：
(a) 将如式 I所示化合物溶解在水中， 控制溶解液 pH;
(b) 加入有机溶剂（ i )使得式 I化合物晶体完全析出；
(c ) 离心或过滤；
(d) 干燥晶体，得到高纯度式 I化合物。
其中， 步骤 （a) 中所述溶解的温度为 10 至 50°C， 优选 20至 40 °C。
其中， 步骤 （a) 中所述溶解液的总体积计， 其中含有如式 I 所示化合物 10至 500mg/ml , 优选 50至 300mg/ml。
其中， 步骤 （a) 中所述溶解液 pH控制在 2. 0-5. 0， 优选 3. 5-4. 5。
其中， 步骤 （b) 中所述的有机溶剂（ i )为 C1-C4的低级醇； 优选自： 甲醇、 乙 醇、 正丙醇、 异丙醇中的一种或多种的混合物。
其中， 步骤 （b ) 中所述有机溶剂（ i )与步骤 （a) 所述溶解液的体积比为 0. 1 至 50， 优选 0. 1至 10， 最优选为 1至 5。 在本发明的另一个实施方式中， 采用下述步骤来获得高纯度式 I化合物： (a) 将如式 I所示化合物溶解在水中， 控制溶解液 pH;
(b) 降低溶液温度， 同时加入有机溶剂（ i )使得式 I化合物晶体完全析出；
(c ) 离心或过滤；
(d) 干燥晶体，得到高纯度式 I化合物。
其中， 步骤 （a) 中所述溶解的温度为 10 至 50°C， 优选 20至 40 V。
其中， 步骤 （a) 中所述溶解液的总体积计， 其中含有如式 I 所示化合物 10至
500mg/ml， 优选 50至 300mg/ml。 其中， 步骤 （a) 中所述溶解液 pH控制在 2.0-5.0， 优选 3.5-4.5。
其中， 步骤 （b) 中所述的有机溶剂（ i)为 C1-C4的低级醇； 优选自： 甲醇、 乙 醇、 正丙醇、 异丙醇中的一种或多种的混合物。
其中， 步骤 （b) 中所述的降温的温度为 -40至 35 V， 优选 -10至 35°C， 更优 选 -5至 30 °C， 最优的 5至 10°C。
其中， 步骤 （b) 中所述有机溶剂（ i )与步骤 （a) 所述溶解液的体积比为 0.1至 50， 优选 0.1至 10， 最优选为 1至 5。 在本发明的另一个实施方式中， 采用下述步骤来获得高纯度式 I化合物：
(a) 将如式 I所示化合物溶解在有机溶剂（ i)的水性溶液中， 控制溶解液 pH;
(b) 降低溶液温度使得式 I化合物晶体完全析出；
(c) 离心或过滤；
(d) 干燥晶体，得到高纯度式 I化合物。
其中， 步骤 （a) 中所述溶解的温度为 10 至 50°C， 优选 20至 40 V。
其中， 步骤 （a) 中所述有机溶剂（ i)的水性溶液中， 有机溶剂 （i) 与水的体积 比 0.01至 100， 优选 0.1至 10， 更优选 0.5-3.0。
其中， 步骤 （a) 中所述溶解液的总体积计， 其中含有如式 I 所示化合物 10至 500mg/ml , 优选 100至 400mg/ml。
其中， 步骤 （a) 中所述溶解液 pH控制在 2.0-5.0， 优选 3.5-4.5。
其中， 步骤 （a) 中所述的有机溶剂（ i)为 C1-C4 的低级醇； 优选自： 甲醇、 乙醇、 正丙醇、 异丙醇中的一种或多种的混合物。
其中， 步骤 （b) 中所述的降温的温度为 -40至 35 °C， 优选 -10至 35°C， 更优选 -5至 30 V， 最优的 5至 10°C。 在本发明的另一个实施方式中， 采用下述步骤来获得高纯度式 I化合物：
(a) 将如式 I所示化合物溶解在有机溶剂（ i)的水性溶液中， 控制溶解液 pH;
(b) 加入有机溶剂（ i )使得式 I化合物晶体完全析出；
(c) 离心或过滤；
(d) 干燥晶体，得到高纯度式 I化合物。
其中， 步骤 （a) 中所述溶解的温度为 10 至 50°C， 优选 20至 40 °C。
其中， 步骤 （a) 中所述有机溶剂（ i)的水性溶液中， 有机溶剂 （i) 与水的体积 比 0.01至 100， 优选 0.1至 10， 更优选 0.5-3.0。
其中， 步骤 （a) 中所述溶解液的总体积计， 其中含有如式 I 所示化合物 10至 500mg/ml , 优选 100至 400mg/ml。
其中， 步骤 （a) 中所述溶解液 pH控制在 2.0-5.0， 优选 3.5-4.5。
其中， 步骤 （b) 中所述有机溶剂（ i)与步骤 （a) 所述溶解液的体积比为 0.1 至 10， 优选为 1至 5。
其中， 步骤（a)和（b)中所述的有机溶剂（ i )为 C1-C4的低级醇； 优选自： 甲 醇、 乙醇、 正丙醇、 异丙醇中的一种或多种的混合物。 在本发明的另一个实施方式中， 采用下述步骤来获得高纯度式 I化合物：
(a) 将如式 I所示化合物溶解在有机溶剂（ i)的水性溶液中， 控制溶解液 pH;
(b) 降低溶液温度， 同时加入有机溶剂（ i)使得式 I化合物晶体完全析出；
(c) 离心或过滤；
(d) 干燥晶体，得到高纯度式 I化合物。
其中， 步骤 （a) 中所述溶解的温度为 10 至 50°C， 优选 20至 40 °C。
其中， 步骤 （a) 中所述有机溶剂（ i)的水性溶液中， 有机溶剂 （i) 与水的体积 比 0.01至 100， 优选 0.1至 10， 更优选 0.5-3.0。
其中， 步骤 （a) 中所述溶解液的总体积计， 其中含有如式 I 所示化合物 10至 500mg/ml , 优选 100至 400mg/ml。
其中， 步骤 （a) 中所述溶解液 pH控制在 2.0-5.0， 优选 3.5-4.5。
其中， 步骤 （b) 中所述的降温的温度为 -40至 35 °C， 优选 -10至 35°C， 更优选 -5至 30 V， 最优的 5至 10°C。
其中， 步骤 （b) 中所述有机溶剂（ i)与步骤 （a) 所述溶解液的体积比为 0.1 至 50， 优选 0.1至 10， 最优选为 1至 5。
其中， 步骤（a)和（b)中所述的有机溶剂（ i )为 C1-C4的低级醇； 优选自： 甲 醇、 乙醇、 正丙醇、 异丙醇中的一种或多种的混合物。 本发明提供的方法制备得到的式 I化合物纯度高，因此用于制备式 II化合物 将更好。 高纯度式 II化合物
本发明一方面提供了一种高纯度的式 Π化合物， 其 HPLC纯度大于等于 98.8%， 优选大于等于 99.0%， 更优选大于等于 99.5%; 其中， R表示 H或者能形 成药学上可接受的盐的阳离子； 优选 H、 钠离子或二异丙基乙胺离子。
其中， 所述式 II化合物的纯度用 HPLC测定。
其中， 所述式 II化合物纯度和 /或杂质含量的计算方法为： 在 HPLC图中式 II化合物和 /或某个杂质的峰曲线下面积除以 HPLC图的总曲线下面积。
所述式 Π化合物的液相纯度通过 HPLC方法测定， HPLC方法如下：
HPLC分析柱： YMC-0DS 250*4· 6mm, 5μ m
流动相： 乙腈： 磷酸盐缓冲液 =70 :45
洗脱程序： 等度 流速： 1.15ml/min
柱温： 35°C
检测波长： 210nm
运行时间： 45min
稀释液： 水的磷酸盐缓冲液 在本发明的一个优选例中， 所述高纯度的式 II化合物中杂质 6 (结构如式 IV 所示）的含量小于 0.2%， 较佳为小于 0.1%， 更佳为小于 0.05%; 其中， R表示 H 或者 上可接受的盐 优选 H、 钠离子或二异丙基乙胺离子。
Figure imgf000018_0001
iv 杂质 6
在本发明的另一优选例中， 所述高纯度的式 II化合物中杂质 7(结构如式 V 所示 )和杂质 8(结构如式 VI所示）的总含量小于 0.5%， 较佳为小于 0.3%， 更佳为 小于 0.1%; 其中， R表示 H或者能形成药学上可接受的盐的阳离子； 优选 H、 钠 离子或二异丙基乙胺离子。
Figure imgf000018_0002
V 杂质 7
Figure imgf000019_0001
VI 杂质 8 在本发明的另一优选例中，所述高纯度的式 II化合物中杂质 9(结构如式 VII 所示）的含量小于 0.2%， 较佳为小于 0.1%; 其中， R表示 H或者能形成药学上可 接受的盐的阳离 优选 H、 钠离子或二异丙基乙胺离子。
C 、 Ζ、
Figure imgf000019_0002
VII 杂质 9 在本发明的另一优选例中， 所述高纯度的式 II化合物中杂质 10(结构如式 VIII所示）的含量小于 0.2%， 较佳为小于 0.1%; 其中， R表示 H或者能形成药学 上可接受的盐的阳离子； 优选 H、 钠离子或二异丙基乙胺离子。 HCS
Figure imgf000020_0001
VIII 杂质 10 在本发明的另一优选例中， 所述高纯度的式 II化合物中杂质 11的含量小于 等于 0.15%， 较佳为小于等于 0.1%， 最佳为小于等于 0.05%， 所述杂质 11在 HPLC 上的相对保留时间（简称 RRT)约为 0.96， 即 0.96±0.02。 在本发明的另一优选例中，所述高纯度的式 Π化合物中其他相关杂质的含 均小于等于 0.02%， 较佳为小于等于 0.01%， 最佳为 0%; 所述其他相关杂质指杂 质 6-11以外可能存在的杂质。 高纯度式 II化合物的制备方法
一种制备高纯度式 II化合物的方法， 其特征在于， 使用如权利要求 1-11任 一所述的高纯度环肽化合物作为原料， 制备如式 II所示的化合物， R表示 H、 二异 丙基乙胺或者其他能形成药学上可接受的盐的阳离子。
、、
Figure imgf000020_0002
II 合成路线在多个专利如 W09611210, 9857923, 2604014879等中均有报道。 高纯度式 I化合物的用途及其组合物
在本发明中， 提供高纯度式 I化合物的用途。 一方面可以用于方便地制备高纯度 的式 II化合物， R表示 H、 二异丙基乙胺或者其他能形成药学上可接受的盐的阳离子。 另一方面， 本发明提供的高纯度式 I化合物也可以直接用于制备治疗真菌感 染的药物。 可以提供一种含有高纯度式 I化合物， 和药学上可接受的载体的药物 组合物。 高纯度式 II化合物的用途及其组合物
在本发明中， 提供高纯度式 I I化合物的用途。 本发明提供的高纯度式 I I化 合物也可以直接用于制备治疗真菌感染的药物。 可以提供一种含有高纯度式 II 化合物， 和药学上可接受的载体的药物组合物。 在本发明中， 提供含有高纯度式 II化合物的药物组合物的制备方法：
将本发明的高纯度式 II化合物和药学上可接受的载体混合， 得到含有高纯度式 II化合物的药物组合物。
如本文所用， "如式 I所示化合物"或 "式 I化合物"可以互换使用， 都是 指具有以下结构式
Figure imgf000021_0001
I
其中， R表示 Η或者能形成药学上可接受的盐的阳离子， 优选 Η、 钠离子或二 异丙基乙胺离子。
药学上可接受的盐优选： 包括金属盐例如碱金属盐 （如钠盐、 钾盐） 、 碱土 金属盐 （如钙盐、 镁盐等） 、 铵盐、 与有机碱形成的盐 （如三甲胺盐、 三乙胺盐、 吡啶盐、 甲基吡啶盐、 二环己铵盐、 Ν，Ν' -二苄基乙二胺盐、 二异丙基乙胺盐等） 等、 有机酸加成盐 （如甲酸盐、 乙酸盐、 三氟乙酸盐、 马来酸盐、 酒石酸盐、 甲 磺酸盐、 苯磺酸盐、 甲苯磺酸盐等） 、 无机酸加成盐 （如盐酸盐、 氢溴酸盐、 氢 碘酸盐、 硫酸盐、 磷酸盐等） 、 与氨基酸 （如精氨酸、 天冬氨酸、 谷氨酸等） 形 成的盐等。 如本文所用， "如式 II所示化合物"或 "式 II化合物 "可以互换使用， 都 是指具有
Figure imgf000022_0001
其中， R表示 Η或者能形成药学上可接受的盐的阳离子， 优选 Η、 钠离子或二 异丙基乙胺离子。
药学上可接受的盐优选： 包括金属盐例如碱金属盐 （如钠盐、 钾盐） 、 碱土 金属盐 （如钙盐、 镁盐等） 、 铵盐、 与有机碱形成的盐 （如三甲胺盐、 三乙胺盐、 吡啶盐、 甲基吡啶盐、 二环己铵盐、 Ν，Ν' -二苄基乙二胺盐、 二异丙基乙胺盐等） 等、 有机酸加成盐 （如甲酸盐、 乙酸盐、 三氟乙酸盐、 马来酸盐、 酒石酸盐、 甲 磺酸盐、 苯磺酸盐、 甲苯磺酸盐等） 、 无机酸加成盐 （如盐酸盐、 氢溴酸盐、 氢 碘酸盐、 硫酸盐、 磷酸盐等） 、 与氨基酸 （如精氨酸、 天冬氨酸、 谷氨酸等） 形 成的盐等。 如本文所用， "如式 I所示化合物的纯度" 、 "化合物 I的纯度"或 "化合物 I的 HPLC纯度"可以互换使用， 都是指在本发明提供的高效液相色谱 （HPLC) 检测 条件下， 测得的化合物 I的峰面积和所有峰的峰面积之和的百分比。 如本文所用， "如式 Π所示化合物的纯度" 、 "化合物 II的纯度"或 "化合 物 II的 HPLC纯度"可以互换使用， 都是指在本发明提供的高效液相色谱 （HPLC) 检测条件下， 测得的化合物 π的峰面积和所有峰的峰面积之和的百分比。 如本文所用， "如式 I所示化合物的粗品"或 "化合物 I的粗品"可以互换使 用， 都是指在本发明提供的高效液相色谱 （HPLC) 检测条件下， 化合物 I的含量 < 98 %的混合物。 可以使用本领域现有的方法得到化合物 I的粗品。 例如但不限于， 以微生物发酵产物式 III化合物为起始原料。 通过脱酰基酶去酰基化生成一种半合 成衍生物 （例如， 式 I化合物） ， 再经过分离纯化， 得到化合物 I的粗品。 参见 US5376634, EP0431350及 CN1161462C描述的制备化合物 I粗品的方法； 也可以 通过商业渠道获得， 例如但不限于， 如日本藤泽公司。 本文所用的术语"相对保留时间 (RRT)"是指在一定 HPLC条件下某峰相对于 主峰的保留时间之比， 例如， 在一定 HPLC条件下， 主峰的保留时间是 1分钟， 而另一峰的保留时间是 2分钟， 则后者的相对保留时间 (RRT)是 2。
本文所用的术语"相对保留时间 (RRT)"可以在规定的范围内波动。 众所周知， 高效液相由于系统适应性问题， 可能存在一定的系统偏差， 导致相对保留时间 (RRT)发生偏移。一般规定可以接受的范围在 ± 0. 02。例如国家食品药品监督管理 局进口药品注册标准， 对注射用米卡芬净钠及相关杂质的相对保留时间 (RRT)所 规定的范围。 如本文所用， "C1-C4的低级醇"是指碳原子数量在 1-4个的醇类物质。 如本文所用， "药学上可接受的盐" 优选： 包括金属盐例如碱金属盐 （如钠 盐、 钾盐） 、 碱土金属盐 （如钙盐、 镁盐等） 、 铵盐、 与有机碱形成的盐 （如三 甲胺盐、 三乙胺盐、 吡啶盐、 甲基吡啶盐、 二环己铵盐、 Ν，Ν' -二苄基乙二胺盐、 二异丙基乙胺盐等） 等、 有机酸加成盐 （如甲酸盐、 乙酸盐、 三氟乙酸盐、 马来 酸盐、 酒石酸盐、 甲磺酸盐、 苯磺酸盐、 甲苯磺酸盐等） 、 无机酸加成盐 （如盐 酸盐、 氢溴酸盐、 氢碘酸盐、 硫酸盐、 磷酸盐等） 、 与氨基酸 （如精氨酸、 天冬 氨酸、 谷氨酸等） 形成的盐等。 如本文所用， 术语 "药学上可接受的载体" 指用于治疗剂给药的载体， 包括 各种赋形剂和稀释剂。 该术语指这样一些药剂载体： 它们本身并不是必要的活性 成分， 且施用后没有过分的毒性。 合适的载体是本领域普通技术人员所熟知的。 在 Remington' s Pharmaceut ical Sc i ences (Mack Pub. Co.， N. J. 1991)中可找到 关于药学上可接受的赋形剂的充分讨论。 在组合物中药学上可接受的载体可包括 液体， 如水、 盐水、 甘油和乙醇。 另外， 这些载体中还可能存在辅助性的物质， 如崩解剂、 润湿剂、 乳化剂、 pH缓冲物质等。 本发明的主要优点在于：
1.本发明极大地提高了式 I化合物的纯度， 极大地减少了其中的杂质， 获得 了非常高纯度的式 I化合物， 解决了现有技术中迄待解决的技术问题。
2.本发明通过对制备条件的反复多次实验， 选择了特定的制备条件， 产生了 预想不到的技术效果， 提供了制备高纯度式 I化合物的方法， 且所述方法非常适 合规模化生产， 收率高。
3.本发明提供了一种制备高纯度式 I I化合物的新方法，利用高纯度的前体式 I化合物制备式 I I化合物， 极大程度地减轻了式 II化合物纯化步骤的工艺压力， 利用简便的纯化工艺得到高纯度的最终药物产品 式 II化合物， 同时收率也获 得了大幅度地提高， 产生了预料不到的技术效果。 附图说明
图 1所示为式 I化合物粗品的 HPLC分析图谱;
Figure imgf000024_0002
图 2所示为实施例 5获得的高纯度式 I化合物的 HPLC分析图谱； 其中
Figure imgf000024_0003
Figure imgf000024_0001
Figure imgf000024_0004
1 8. 518 0. 44 8752 0. 03
2 10. 519 0. 54 14586 0. 05
3 11. 145 0. 57 11669 0. 04
4 11. 990 0. 62 14597 0. 05
5 17. 980 0. 92 49594 0. 17
6 18. 709 0. 96 23338 0. 08
7 19. 425 1. 00 28925210
8 22. 089 1. 13 61263 0. 21
9 24. 550 1. 26 37925 0. 13 0 26. 333 1. 35 14593 0. 05 1 1. 63 11637 0. 04 示为比较例 3 获得的式 I I化合物的 HPLC分析图谱； 其中
Figure imgf000025_0001
保留时间 相对保留 峰面积 峰面积比值 （％) 峰高 时间
16. 692 0. 91 10836 0. 09 579
17. 456 0. 95 4044 0. 03 244 3 18. 441 1. 0 1 1541 182 99. 79 531701
4 20. 670 1. 12 6107 0. 05 250
5 22. 139 1. 20 4258 0. 04 184 o
图 6所示为比较例 8中市售米卡芬净钠制剂的 HPLC分析图谱； 其中
保留时间 相对保留时间 峰面积 峰面积比值 （％) 峰高
1 13. 298 0. 72 152314 0. 34 71 18
2 15. 690 0. 84 47990 0. 1 1 2493
3 16. 759 0. 90 318200 0. 71 14054
4 17. 682 0. 95 80605 0. 18 3880
5 18. 578 1. 0 43831048 98. 01 1881 149
6 20. 248 1. 09 125658 0. 28 4405
7 20. 688 1. 1 1 94283 0. 21 3923
8 24. 520 1. 32 28024 0. 06 1075
9 26. 834 1. 44 32031 0. 07 1080
10 31. 425 1. 69 10991 0. 02 331 具体实施方式
下面结合具体实施例， 进一步阐述本发明。 应理解， 这些实施例仅用于说明 本发明而不用于限制本发明的范围。 下列实施例中未注明具体条件的实验方法， 通常按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。 除非另外说明， 否则所有的百 分数、 比率、 比例、 或份数按重量计。
本发明中的重量体积百分比中的单位是本领域技术人员所熟知的， 例如是指 在 100毫升的溶液中溶质的重量。
除非另行定义， 文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉 的意义相同。 此外， 任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发 明方法中。 文中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。 所述式 I化合物的液相纯度通过 HPLC方法测定， HPLC方法如下：
色谱柱： ACE 3 AQ， 150 X 4. 6mm, 3 μ m
流动相： A: 1000ml水， 10ml甲醇， ΙΟΟ μ Ι三氟乙酸
Β: 600 ml水， 400ml 甲醇， ΙΟΟ μ Ι三氟乙酸
流速： 0. 55ml/min
柱温： 50 °C
梯度： 时间 流动相 A 流动相 B 分钟 % %
0 100 0
25 100 0
55 55 45
56 0 100
61 0 100
62 100 0
70 100 0 进样温度： 5 °C
检测波长： 225nm 所述式 Π化合物的液相纯度通过 HPLC方法测定， HPLC方法如下: HPLC分析柱： YMC-0DS 250*4. 6mm, 5 μ m
流动相： 乙腈： 磷酸盐缓冲液 =70 : 45
洗脱程序： 等度
流速： 1. 15ml/min
柱温： 35°C
检测波长： 210讓
运行时间： 45min
稀释液： 水的磷酸盐缓冲液
其中， 式 II化合物及其相关杂质相对保留时间
Figure imgf000027_0001
实施例 1 制备化合物 I粗品
参照美国专利 5376634实施例 1的方法， 制备制得化合物 I的固体粉末 76g，
HPLC测定含量 97. 51%, 参见图 1的 HPLC分析图谱。
表 1
Figure imgf000028_0001
实施例 2
制备高纯度式 I化合物
30°C下， 将 3. 6g由实施例 1制得的化合物 I粗品， 溶于 25ml水和 20ml正 丙醇的混合溶液中， 搅拌， 使化合物 I完全溶解。 冰乙酸调 pH至 3. 5， 将溶液冷 却至 15°C， 化合物 I的晶体析出， 在 15°C继续搅拌 5小时， 使得化合物 I的晶体 逐渐长大。 滴加正丙醇 90ml， 滴加完毕后， 在 15°C下搅拌 1小时。 抽滤， 真空 干燥， 得到化合物 I 3. 5g， 用 HPLC测定纯度为 99. 00%。其中主要相关杂质含量， 见表 2。
表 2
Figure imgf000028_0002
实施例 3
制备高纯度式 I化合物
40°C下，将 3. 5g由实施例 2制得的化合物 I (实施例 2制备的化合物 I， HPLC 纯度为 99. 00% ) ， 溶于 19ml水和 16ml正丙醇的混合溶液中， 搅拌， 使化合物 I 完全溶解。 冰乙酸调 pH至 2. 0， 将溶液冷却至 15°C， 化合物 I的晶体析出， 在 15°C继续搅拌 5小时， 使得化合物 I的晶体逐渐长大。 滴加正丙醇 70ml， 滴加完 毕后， 在 15°C下搅拌 1小时。 抽滤， 真空干燥， 得到化合物 I 3. 4g， 用 HPLC测 定纯度为 99. 23%。 其中相关杂质含量， 见表 3。
表 3
Figure imgf000028_0003
实施例 4
制备高纯度式 I化合物
40°C下， 用 8ml水和 7ml正丙醇的混合溶液， 冰乙酸调 pH至 5. 0， 继续溶解 化合物 I (实施例 3制备的化合物 I，HPLC纯度为 99. 23%) ， 搅拌， 使化合物 I 完全溶解。 将溶液冷却至 15°C， 化合物 I的晶体析出。 在 15°C继续搅拌 5小时， 使得化合物 I的晶体逐渐长大。 滴加正丙醇 30ml， 滴加完毕后， 在 15°C下搅拌 1 小时。 抽滤， 真空干燥， 得到化合物 I 3. 3g。 用 HPLC测定纯度为 99. 57%。 其中 相关杂质含量， 见表 4。
表 4
Figure imgf000029_0001
实施例 5
制备高纯度式 I化合物
40°C下， 用 8ml水和 7ml正丙醇的混合溶液， 冰乙酸调 pH至 4. 0， 继续溶解 化合物 I (实施例 4制备的化合物 I，HPLC纯度为 99. 57%) ， 搅拌， 使化合物 I 完全溶解。 将溶液冷却至 15°C， 化合物 I的晶体析出。 在 15°C继续搅拌 5小时， 使得化合物 I的晶体逐渐长大。 滴加正丙醇 30ml， 滴加完毕后， 在 15°C下搅拌 1 小时。 抽滤， 真空干燥， 得到化合物 I 3. 2g。 用 HPLC测定纯度为 99. 81%。 其中 相关杂质含量， 见表 5以及图 2的 HPLC分析图谱。
表 5
Figure imgf000029_0002
实施例 6
制备高纯度式 I化合物
30°C下， 将 2. 6g由实施例 1制得的化合物 I， 溶于 8ml水， 冰乙酸调 pH至 3. 8， 搅拌， 使化合物 I完全溶解。 缓慢滴加正丙醇 10ml， 化合物 I的晶体析出， 15 °C下继续搅拌 2小时。 然后缓慢滴加正丙醇醇 35ml，滴加完毕后， 将含有化合 物 I的溶解液慢慢降温 15°C， 再搅拌 2小时， 使得式 I化合物晶体完全析出。 抽 滤， 得到式 I化合物湿固体。 在 30°C下， 再用 8ml水， 冰乙酸调 pH至 3. 8， 继 续溶解化合物 I湿的固体， 搅拌， 使化合物 I完全溶解。 将溶液冷却至 15°C， 缓 慢滴加正丙醇 10ml， 化合物 I的晶体析出。 15°C下继续搅拌 2小时。 缓慢滴加正 丙醇 35ml，滴加完毕后， 再搅拌 2小时， 使得式 I化合物晶体完全析出。 抽滤， 得到式 I化合物湿固体。 重复上述重结晶步骤， 经过三次重结晶后。 抽滤， 将得 到的化合物 I， 进行真空干燥， 得到 2. 4g化合物 I。 总收率为 92. 3%， 化合物 I 经过 HPLC检测纯度为 99. 81%。 实施例 7
制备高纯度式 I化合物
30°C下， 将 1. 6g由实施例 1制得的化合物 I， 溶于 80ml水和 80ml乙醇的 混合溶液中， 搅拌， 使化合物 I完全溶解。 冰乙酸调 pH至 2. 8， 然后慢慢降温至 -20°C， -20°C下继续搅拌 2小时。 缓慢滴加乙醇 450ml，滴加完毕后， 再搅拌 2小 时， 使得式 I化合物晶体完全析出。 抽滤， 真空干燥， 得到化合物 I 1. 5g， 用 HPLC测定纯度为 98. 89%。 其中相关杂质含量， 见表 6。
表 6
Figure imgf000030_0001
实施例 8
制备高纯度式 I化合物
30°C下， 将 1. 5g由实施例 7制得的化合物 I， 溶于 80ml水和 80ml乙醇的 混合溶液中， 搅拌， 使化合物 I完全溶解。 冰乙酸调 pH至 3. 0， 然后慢慢降温至 -20°C， -20°C下继续搅拌 2小时。 缓慢滴加乙醇 450ml，滴加完毕后， 再搅拌 2小 时， 使得式 I化合物晶体完全析出。 抽滤， 真空干燥， 得到化合物 I 1. 4g， 用 HPLC测定纯度为 99. 36%。 其中相关杂质含量， 见表 7。
表 7
Figure imgf000030_0002
实施例 9
制备高纯度式 I化合物
30°C下， 将 1. 4g由实施例 8制得的化合物 I， 溶于 80ml水和 80ml乙醇的 混合溶液中， 搅拌， 使化合物 I完全溶解。 冰乙酸调 pH至 3. 0， 然后慢慢降温至 -20°C， -20°C下继续搅拌 2小时。 缓慢滴加乙醇 450ml，滴加完毕后， 再搅拌 2小 时， 使得式 I化合物晶体完全析出。 抽滤， 真空干燥， 得到化合物 I 1. 3g， 用 HPLC测定纯度为 99. 68%。 其中相关杂质含量， 见表 8。
表 8
Figure imgf000031_0001
实施例 10
制备高纯度式 I化合物
10°C下， 将 1. 8g由实施例 1制得的化合物 I， 溶于 10ml水中， 搅拌， 使化 合物 I完全溶解。 冰乙酸调 pH至 3. 5， 将溶液冷却至 2°C， 2°C下继续搅拌 2小 时。 缓慢滴加异丙醇 40ml，滴加完毕后， 再搅拌 2小时， 使得式 I化合物晶体完 全析出。 抽滤， 真空干燥， 得到 1. 5g化合物 I， 经过 HPLC检测纯度为 98. 89%， 其中相关杂质含量， 见表 9。
表 9
Figure imgf000031_0002
实施例 11
制备高纯度式 I化合物
10°C下， 将 1. 5g由实施例 10制得的化合物 I， 溶于 10ml水中， 搅拌， 使 化合物 I完全溶解。 冰乙酸调 pH至 3. 5， 将溶液冷却至 2°C， 2°C下继续搅拌 2 小时。 缓慢滴加异丙醇 40ml，滴加完毕后， 再搅拌 2小时， 使得式 I化合物晶体 完全析出。 抽滤， 真空干燥， 得到 1. 4g化合物 I， 经过 HPLC检测纯度为 99. 41%， 其中相关杂质含量， 见表 10。
表 10
Figure imgf000031_0003
实施例 12
制备高纯度式 I化合物
10°C下， 将 1. 4g由实施例 11制得的化合物 I， 溶于 10ml水中， 搅拌， 使 化合物 I完全溶解。 冰乙酸调 pH至 3. 5， 将溶液冷却至 2°C， 2°C下继续搅拌 2 小时。 缓慢滴加异丙醇 40ml，滴加完毕后， 再搅拌 2小时， 使得式 I化合物晶体 完全析出。 抽滤， 真空干燥， 得到 1. 3g化合物 I， 经过 HPLC检测纯度为 99. 73%， 其中相关杂质含量， 见表 11。 表 11
Figure imgf000032_0001
实施例 13
制备高纯度式 I化合物
10°C下， 将 1. 3g由实施例 12制得的化合物 I， 溶于 10ml水中， 搅拌， 使 化合物 I完全溶解。 冰乙酸调 pH至 3. 5， 将溶液冷却至 2°C， 2°C下继续搅拌 2 小时。 缓慢滴加异丙醇 40ml，滴加完毕后， 再搅拌 2小时， 使得式 I化合物晶体 完全析出。 抽滤， 真空干燥， 得到 1. 2g化合物 I， 经过 HPLC检测纯度为 99. 90%， 其中相关杂质含量， 见表 12。
表 12
Figure imgf000032_0002
实施例 14
制备高纯度式 I化合物
20°C下， 将 2. 0g由实施例 1制得的化合物 I， 溶于 5ml水和 15ml甲醇的混 合溶液中， 搅拌， 使化合物 I完全溶解。冰乙酸调 pH至 4. 5， 将溶液冷却至 10°C， 化合物 I的晶体析出， 然后慢慢降温至 -40°C， -40°C下继续搅拌 2小时。 缓慢滴 加甲醇 80ml，滴加完毕后， 再搅拌 2小时， 使得式 I化合物晶体完全析出。 抽滤， 得到式 I化合物湿固体。 在 20°C下， 用 5ml水和 16ml甲醇的混合溶液， 冰乙酸 调 pH至 4. 5， 继续溶解化合物 I湿的固体， 搅拌 30分钟， 使化合物 I完全溶解。 将溶液冷却至 10°C， 化合物 I的晶体析出， 然后慢慢降温至 -40°C， 在 -40°C下继 续搅拌 2小时。 缓慢滴加甲醇 80ml，滴加完毕后， 再搅拌 2小时， 使得式 I化合 物晶体完全析出。 抽滤， 得到式 I化合物湿固体。 重复上述重结晶步骤， 经过三 次重结晶后。抽滤， 将得到的化合物 I， 进行真空干燥， 得到 1. 5g化合物 I固体。 总收率为 89. 0%， 化合物 I经过 HPLC检测纯度为 99. 83%, 其中相关杂质含量， 见 表 13。
表 13
Figure imgf000032_0003
实施例 15 制备高纯度式 I化合物
50°C下， 将 5. 0g由实施例 1制得的化合物 I， 溶于 10ml水， 搅拌， 使化合 物 I完全溶解。 冰乙酸调 pH至 5. 0， 将溶液冷却至 30°C， 化合物 I的晶体析出， 再慢慢降温至 2°C， 2°C下继续搅拌 10小时。 抽滤， 得到式 I化合物湿固体。 50°C 下， 在 50°C下， 用 9ml水， 冰乙酸调 pH至 5. 0， 继续溶解化合物 I湿的固体， 搅拌 30分钟， 使化合物 I完全溶解。 溶液冷却至 30°C， 化合物 I的晶体析出， 再慢慢降温至 2°C， 2°C下继续搅拌 10小时。 抽滤， 得到式 I化合物湿固体。 重 复上述重结晶步骤， 经过三次重结晶后。 抽滤， 将得到的化合物 I， 进行真空干 燥， 得到 3. 0g化合物 I固体。 总收率为 85. 0%， 化合物 I经过 HPLC检测纯度为 99. 85%， 其中相关杂质含量， 见表 14。
表 14
Figure imgf000033_0001
比较例 1
pH对制备高纯度式 I化合物的影响
40°C下， 将 1. 8g由实施例 1制得的化合物 I， 溶于 8ml水和 6ml异丙醇的 混合溶液中， 搅拌， 使化合物 I完全溶解。 调 11至6. 5， 将溶液冷却至 20°C， 化 合物 I的固体析出， 20°C下继续搅拌 2小时。 缓慢滴加异丙醇 35ml，滴加完毕后， 再搅拌 2小时， 使得式 I化合物固体完全析出。 抽滤， 得到式 I化合物湿固体。 在 40°C下， 用 8ml水和 6ml异丙醇的混合溶液， 调 11至6. 5， 继续溶解化合物 I湿的固体， 搅拌， 使化合物 I完全溶解。 将溶液冷却至 20°C， 化合物 I的析出 固体， 20°C下继续搅拌 2小时。 缓慢滴加异丙醇 35ml，滴加完毕后， 再搅拌 2小 时， 使得式 I化合物固体完全析出。抽滤， 得到式 I化合物湿固体。重复上述"重 结晶"步骤， 经过四次 "重结晶"后。 抽滤， 将得到的化合物 I， 进行真空干燥， 得到 1. 5g化合物 I。 总收率为 83. 6%, 化合物 I经过 HPLC检测纯度为 98. 90%， 其中相关杂质含量， 见表 15。
表 15
Figure imgf000033_0002
比较例 1
不同溶剂对制备高纯度式 I化合物的影响 30°C下， 将 2. 4g由实施例 1制得的化合物 I， 溶于 7ml水， 冰乙酸调 pH至 3. 8， 搅拌， 使化合物 I完全溶解。 慢慢加入乙腈 15ml搅拌两小时有固体析出， 显微镜下观察固定的微观结构， 几乎是无规则固体。 抽滤， 将得到的化合物 I ， 进行真空干燥。 HPLC分析化合物 I固体纯度为 97. 57%， 其中相关主要杂质含量， 见表 16， 几乎无变化。
表 16
Figure imgf000034_0001
18°C下， 将 2. lg由实施例 1制得的化合物 I， 溶于 7ml水， 冰乙酸调 pH至 3. 8， 搅拌， 使化合物 I完全溶解。 慢慢加入丙酮 20ml搅拌两小时有固体析出， 显微镜下观察固定的微观结构， 几乎是无规则固体。 抽滤， 将得到的化合物 I ， 进行真空干燥。 HPLC分析化合物 I固体纯度为 97. 79%， 其中相关主要杂质含量， 见表 17， 几乎无变化。
表 17
Figure imgf000034_0002
实施例 16
用高纯度式 I化合物制备高纯度式 II化合物
参照 W02004014879中的米卡芬净合成工艺，由式 I化合物进行式 II化合物的 合成
将本申请实施例 2所得到的式 I化合物 （HPLC检测纯度为 99. 00%
(1. 00g， 1. 07匪 ol) ) 溶解于 DMF12ml，冰浴冷却至 0°C以下， 加入二异丙基乙胺
( 0. 22g, 1. 67mmol ) ,保持温度在 0°C，缓慢加入 MKC- 8 ( 1- [4- [5- (4-戊氧基苯基） 异噁唑 -3-基]苯甲酰氧基] -1H-1, 2, 3-苯并三氮唑) (0. 53g, 1. 14匪 ol)，反应升温 至 2-6°C， 反应 4小时， 反应结束后直接将 60ml乙酸乙酯加入反应液中， 继续搅 拌 1小时， 过滤， 得米卡芬净二异丙基乙胺盐。 将该盐溶于丙酮 30ml和乙酸乙酯 30ml，浆洗，过滤。 真空干燥米卡芬净二异丙基乙胺盐去除残留的有机溶剂， HPLC 分析米卡芬净二异丙基乙胺盐纯度为 98. 81%， 收率 90. 6%。 HPLC分析图谱上 5分 钟以前的色谱峰为溶剂峰和反应副产物 1-羟基苯并三唑（H0BT)，在 W02004014879 介绍的纯化工艺中很容易去除。 其中相关主要杂质含量， 见表 18。
表 18 杂质 未知 未知 未知 未知 杂质 6 杂质 7和 8 杂质 11 杂质 9 相对保留时 0. 4 0. 54 0. 57 0. 62 0. 72 0. 92 0. 96 1. 09 间
含量 ％ 0. 02 0. 03 0. 04 0. 03 0. 21 0. 20 0. 08 0. 13 杂质 杂质 10 未知 未知 未知
相对保留时 1. 13 1. 26 1. 35 1. 63
间
含量 ％ 0. 23 0. 13 0. 05 0. 04 实施例 17
用高纯度式 I化合物制备高纯度式 II化合物
参照 W02004014879中的米卡芬净合成工艺，由式 I化合物进行式 II化合物的 合成
将本申请实施例 3所得到的式 I化合物 （HPLC检测纯度为 99. 23%
(1. 00g， 1. 07匪 ol) ) 溶解于 DMF12ml，冰浴冷却至 0°C以下， 加入二异丙基乙胺 ( 0. 22g, 1. 67mmol ) ,保持温度在 0°C，缓慢加入 MKC- 8 ( 1- [4- [5- (4-戊氧基苯基） 异噁唑 -3-基]苯甲酰氧基] -1H-1, 2, 3-苯并三氮唑) (0. 53g, 1. 14匪 ol)，反应升温 至 2-6°C， 反应 4小时， 反应结束后直接将 60ml乙酸乙酯加入反应液中， 继续搅 拌 1小时， 过滤， 得米卡芬净二异丙基乙胺盐。 将该盐溶于丙酮 30ml和乙酸乙酯 30ml，浆洗，过滤。 真空干燥米卡芬净二异丙基乙胺盐去除残留的有机溶剂， HPLC 分析米卡芬净二异丙基乙胺盐纯度为 99. 15%， 收率 91. 6%。参见图 3的 HPLC分析 图谱， 其中 HPLC分析图谱上 5分钟以前的色谱峰为溶剂峰和反应副产物 1-羟基 苯并三唑（H0BT) , 在 W02004014879介绍的纯化工艺中很容易去除。其中相关主要 杂质含量， 见表 19。
表 19
Figure imgf000035_0001
参考例 1
式 II化合物粗品中杂质 6-10的制备 用实施例 1中获得的化合物 I的粗品作为原料，参照 W02004014879实施例中 的米卡芬净合成和纯化工艺，制备得到米卡芬净的钠盐约 23g。
将米卡芬净的钠盐约 5g，溶解于 50ml纯水，分 10批进样，通过制备柱（Pr印 Nova- Pak®HR 7· 8*300匪) 进行制备， 乙腈： 水 =70 : 45进行洗脱， 分别收集相对 保留时间为 0. 71-0. 74、 0. 90-0. 93、 1. 08-1. 10、 1. 11-1. 13的流出液， 分别进行 浓缩， 干燥， 经 MS和 1 Η-丽 R分析， 上述相对保留时间对应的杂质分别为杂质 6、 杂质 7和 8的混合物、 杂质 9以及杂质 10。 结构式分别如式 IV， 式 V， 式 VI， 式 VI I和式 VII I所示。
制备条件为：
HP1 制备柱： Prep Nova - Pak®HR 7. 8*300mm
流动相： 乙腈： 水 =70 : 45
洗脱程序： 等度
流速： 4ml/min
柱温： 35°C
运行时间： 40min
稀释液： 纯水 实施例 18
用高纯度式 I化合物制备高纯度式 II化合物且单一杂质均小于 0. 1%
参照 W02004014879中的米卡芬净合成工艺，由式 I化合物进行式 II化合物的 合成
将本申请实施例 4所得到的式 I化合物（HPLC检测纯度为 99. 57%
(1. 00g, 1. 07mmol) )，溶解于 DMF12ml,冰浴冷却至 0°C以下， 加入二异丙基乙胺 ( 0. 22g， 1. 67匪 ol ) ， 保持温度在 0°C， 缓慢加入 MKC- 8 ( 1- [4- [5- (4-戊氧基苯 基）异噁唑 -3-基]苯甲酰氧基] -1H-1, 2, 3-苯并三氮唑) (0. 53g， 1. 14匪 ol)，反应升 温至 2-6°C， 反应 4小时， 反应结束后直接将 60ml乙酸乙酯加入反应液中， 继续 搅拌 1小时， 过滤， 得米卡芬净二异丙基乙胺盐。 将该盐溶于丙酮 30ml和乙酸乙 酯 30ml，浆洗，过滤。 真空干燥米卡芬净二异丙基乙胺盐去除残留的有机溶剂， HPLC分析米卡芬净二异丙基乙胺盐纯度为 99. 49%， 收率 95. 1%。 其中相关主要杂 质含量， 见表 20。
表 20
杂质 未知 未知 未知 未知 杂质 杂质 7和 8 杂质 11 杂质 9
6
相对保留时间 0. 4 0. 54 0. 57 0. 62 0. 72 0. 92 0. 96 1. 09
含量 ％ 0. 01 0. 02 0. 02 0. 05 0. 0 0. 09 0. 06 0. 0 杂质 杂质 10 未知 未知 未知 相对保留时间 1. 13 1. 26 1. 35 1. 63
含量 ％ 0. 09 0. 08 0. 05 0. 04 实施例 19
用高纯度式 I化合物制备高纯度式 II化合物且单一杂质均小于 0. 1%
参照 W02004014879中的米卡芬净合成工艺，由式 I化合物进行式 II化合物的 合成
将本申请实施例 5所得到的式 I化合物（HPLC检测纯度为 99. 81%
(1. 00g, 1. 07匪 ol) )溶解于 DMF12ml,冰浴冷却至 0°C以下， 加入二异丙基乙胺 ( 0. 22g， 1. 67匪 ol ) ， 保持温度在 0°C， 缓慢加入 MKC- 8 ( 1- [4- [5- (4-戊氧基苯 基）异噁唑 -3-基]苯甲酰氧基] -1H-1, 2, 3-苯并三氮唑) (0. 53g, 1. 14匪 ol)，反应升 温至 2-6°C， 反应 4小时， 反应结束后直接将 60ml乙酸乙酯加入反应液中， 继续 搅拌 1小时， 过滤， 得米卡芬净二异丙基乙胺盐。 将该盐溶于丙酮 30ml和乙酸乙 酯 30ml，浆洗，过滤。 真空干燥米卡芬净二异丙基乙胺盐去除残留的有机溶剂， HPLC分析米卡芬净二异丙基乙胺盐纯度为 99. 80%， 收率 97. 5%。 其中相关主要杂 质含量， 见表 21。
表 21
Figure imgf000037_0001
比较例 3
用式 I化合物粗品制备式 II化合物
参照 W02004014879中的米卡芬净合成工艺，由式 I化合物进行式 II化合物的 合成
将本申请实施例 1所得到的式 I化合物（HPLC检测纯度为 97. 51% (10. 7mmol) ) 溶解于 DMF12ml，冰浴冷却至 0°C以下， 加入二异丙基乙胺 （ 2. 2g， 16. 7匪 ol ) ， 保 持温度在 0°C， 缓慢加入 MKC-8 ( 1- [4- [5- (4-戊氧基苯基）异噁唑 -3-基]苯甲酰氧 基] -1H-1, 2， 3-苯并三氮唑） (5. 3g， 11. 4mmol)，反应升温至 2- 6°C， 反应 4小时， 反应结束后直接将 600ml乙酸乙酯加入反应液中， 继续搅拌 1小时， 过滤， 得米 卡芬净二异丙基乙胺盐。 将该盐溶于丙酮 300ml和乙酸乙酯 300ml，浆洗，过滤。 真空干燥米卡芬净二异丙基乙胺盐去除残留的有机溶剂， HPLC分析米卡芬净二异 丙基乙胺盐纯度为 95. 75%， 摩尔收率 75. 2%。 参见图 4的 HPLC分析图谱， 其中 HPLC分析图谱上 5分钟以前的色谱峰为溶剂峰和反应副产物 1-羟基苯并三唑 (H0BT)，在 W02004014879介绍的纯化工艺中很容易去除。其中相关主要杂质含量， 见表 22。
表 22
Figure imgf000038_0001
实施例 20
用高纯度米卡芬净二异丙基乙胺盐制备高纯度米卡芬净钠
参照 W02004014879中的实施例 6制备工艺，由米卡芬净二异丙基乙胺盐制备 米卡芬净钠盐。
将本申请实施例 16制备的米卡芬净二异丙基乙胺盐固体（0. 97mmol)，全部溶 解在 15ml， 75%的甲醇水溶液中。 将含有米卡芬净二异丙基乙胺盐的溶解液， 上 样于 30ml UBK510L离子交换树脂上， 用 75%的甲醇水溶液洗脱， 洗脱至米卡芬净 钠低于 1. Og/L停止收集。 用 0. lmol/L的氢氧化钠控制收集液的 pH至 6. 0。 纯化 水稀释收集液至甲醇浓度为 35%， 上样， 用预先处理的 50mlHP20ss大孔吸附树脂 进行吸附。 先用 35%的甲醇水溶液洗涤 100ml，然后用 80%的甲醇水溶液洗脱， 80% 的甲醇水溶液用量 200ml。 洗脱收集， 米卡芬净钠大于 0. 5g/L开始收集， 洗脱至 末尾小于 0. 5g/l停止收集， 收集符合浓度规定的含有米卡芬净钠的组分， HPLC 定量分析米卡芬净钠（0. 90mmol)， 收率 93%。 避光， 直接减压蒸馏含有米卡芬净 钠的组分合并液， 得到固体， 真空干燥， HPLC分析米卡芬净钠纯度 99. 00%。 其中 反应副产物 1-羟基苯并三唑（H0BT)，被完全的去除。相关主要杂质含量，见表 23。
表 23
Figure imgf000038_0002
相对保留时间 1. 12 1. 20 1. 26 1. 35
含量 ％ 0. 23 0. 04 0. 09 0. 0 比较例 4
用比较例 3制备的二异丙基乙胺盐制备米卡芬净钠
参照 W02004014879中的实施例 6制备工艺，由米卡芬净二异丙基乙胺盐制备 米卡芬净钠盐。
将本申请比较例 3制备的米卡芬净二异丙基乙胺盐固体（0. 97mmol)， 全部溶 解在 15ml， 75%的甲醇水溶液中。 将含有米卡芬净二异丙基乙胺盐的溶解液， 上 样于 30ml UBK510L离子交换树脂上， 用 75%的甲醇水溶液洗脱， 洗脱至米卡芬净 钠低于 1. Og/L停止收集。 用 0. lmol/L的氢氧化钠控制收集液的 pH至 6. 0。 纯化 水稀释收集液至甲醇浓度为 35%， 上样， 用预先处理的 50mlHP20ss大孔吸附树脂 进行吸附。 先用 35%的甲醇水溶液洗涤 100ml，然后用 80%的甲醇水溶液洗脱， 80% 的甲醇水溶液用量 200ml。 洗脱收集， 米卡芬净钠大于 0. 5g/L开始收集， 洗脱至 末尾小于 0. 5g/l停止收集， 收集符合浓度规定的含有米卡芬净钠的组分， HPLC 定量分析米卡芬净钠（0. 88mmol)， 收率 91%。 避光， 直接减压蒸馏含有米卡芬净 钠的组分合并液， 得到固体， 真空干燥， HPLC分析米卡芬净钠纯度只有 96. 17%。 其中反应副产物 1-羟基苯并三唑（H0BT) , 被完全的去除。 相关主要杂质含量， 见 表 24。
表 24
Figure imgf000039_0001
从实施例 20和比较例 4可以明显的得出，利用高纯度式 I化合物（纯度 99. 0% ) 制备的高纯度米卡芬净二异丙基乙胺盐， 经过简单的纯化步骤， 即可得到纯度在 98. 99%的米卡芬净钠。 利用美国专利 5376634实施例 1制备的式 I化合物（纯度 97. 51%)， 制备的高纯度米卡芬净二异丙基乙胺盐， 经过相同的纯化步骤得到的米 卡芬净钠纯度只有 96. 17%。 高纯度式 I化合物制备米卡芬净钠在纯度上具有显著 的优势。 实施例 21 用高纯度米卡芬净二异丙基乙胺盐制备高纯度米卡芬净钠
参照 W02004014879中的实施例 6制备工艺，由米卡芬净二异丙基乙胺盐制备 米卡芬净钠盐。
将本申请实施例 17制备的米卡芬净二异丙基乙胺盐固体（0. 98mmol)，全部溶 解在 15ml水溶液中。 将含有米卡芬净二异丙基乙胺盐的溶解液， 上样于 30ml UBK510L离子交换树脂上， 用纯化水溶液洗脱， 洗脱至米卡芬净钠低于 1. 0g/L停 止收集。 用 0. lmol/L的氢氧化钠控制收集液的 pH至 6. 0。 上样， 用预先处理的 40ml SP-207ss大孔吸附树脂进行吸附。 先用 35%的乙醇水溶液洗涤 120ml，然后 用 80%的乙醇水溶液洗脱， 80%的乙醇水溶液用量 150ml。 洗脱收集， 米卡芬净钠 大于 0. 5g/L开始收集， 洗脱至末尾小于 0. 5g/l停止收集， 收集符合浓度规定的 含有米卡芬净钠的组分， HPLC定量分析米卡芬净钠（0. 92mmol)， 收率 93. 9%。 避 光， 直接减压蒸馏含有米卡芬净钠的组分合并液， 得到固体， 真空干燥， HPLC分 析米卡芬净钠纯度 99. 40%。其中反应副产物 1-羟基苯并三唑（H0BT) , 被完全的去 除。 相关主要杂质含量， 见表 25。 表 25
Figure imgf000040_0001
比较例 5
用比较例 3制备的二异丙基乙胺盐制备米卡芬净钠
参照 W02004014879中的实施例 6制备工艺，由米卡芬净二异丙基乙胺盐制备 米卡芬净钠盐。
将本申请比较例 3制备的米卡芬净二异丙基乙胺盐固体（0. 98mmol)， 全部溶 解在 15ml水溶液中。 将含有米卡芬净二异丙基乙胺盐的溶解液， 上样于 30ml UBK510L离子交换树脂上， 用纯化水溶液洗脱， 洗脱至米卡芬净钠低于 1. 0g/L停 止收集。 用 0. lmol/L的氢氧化钠控制收集液的 pH至 6. 0。 上样， 用预先处理的 40ml SP-207ss大孔吸附树脂进行吸附。 先用 35%的乙醇水溶液洗涤 120ml，然后 用 80%的乙醇水溶液洗脱， 80%的乙醇水溶液用量 150ml。 洗脱收集， 米卡芬净钠 大于 0. 5g/L开始收集， 洗脱至末尾小于 0. 5g/l停止收集， 收集符合浓度规定的 含有米卡芬净钠的组分， HPLC定量分析米卡芬净钠（0. 84mmol)， 收率 86. 1%。 避 光， 直接减压蒸馏含有米卡芬净钠的组分合并液， 得到固体， 真空干燥， HPLC分 析米卡芬净钠纯度只有 96. 16%。其中反应副产物 1-羟基苯并三唑（H0BT) , 被完全 的去除。 相关主要杂质含量， 见表 26。 表 26
Figure imgf000041_0001
从实施例 21和比较例 5可以明显的得出， 利用高纯度式 I化合物 （纯度 99. 23%) 制备的高纯度米卡芬净二异丙基乙胺盐， 经过简单的纯化步骤， 即可得 到纯度在 99. 40%的米卡芬净钠。 利用美国专利 5376634实施例 1制备的式 I化合 物（纯度 97. 51%)， 制备的高纯度米卡芬净二异丙基乙胺盐， 经过相同的纯化步骤 得到的米卡芬净钠纯度只有 96. 16%。 高纯度式 I化合物制备米卡芬净钠在纯度上 具有显著的优势。 实施例 22
用高纯度米卡芬净二异丙基乙胺盐制备单一杂质均小于 0. 1%的米卡芬净钠 参照 W02004014879中的实施例 6制备工艺，由米卡芬净二异丙基乙胺盐制备 米卡芬净钠盐。
将本申请实施例 18制备的米卡芬净二异丙基乙胺盐固体（1. Olmmol)，全部溶 解在 15ml水溶液中。 将含有米卡芬净二异丙基乙胺盐的溶解液， 上样于 30ml
UBK510L离子交换树脂上， 用纯化水溶液洗脱， 洗脱至米卡芬净钠低于 1. 0g/L停 止收集。 用 0. lmol/L的氢氧化钠控制收集液的 pH至 6. 0。 上样， 用预先处理的 40ml SP-700大孔吸附树脂进行吸附。 先用 30%的丙酮水溶液洗涤 100ml，然后用 80%的丙酮水溶液洗脱， 80%的丙酮水溶液用量 150ml。 洗脱收集， 米卡芬净钠大 于 0. 5g/L开始收集， 洗脱至末尾小于 0. 5g/l停止收集， 收集符合浓度规定的含 有米卡芬净钠的组分， HPLC定量分析米卡芬净钠（0. 92mmol)， 收率 91. 1%。 避光， 直接减压蒸馏含有米卡芬净钠的组分合并液， 得到固体， 真空干燥， HPLC分析米 卡芬净钠纯度 99. 79%。 其中反应副产物 1-羟基苯并三唑（H0BT) , 被完全的去除。 HPLC图谱见图 5 ，相关主要杂质含量， 见表 27。
表 27
Figure imgf000042_0001
比较例 6
用比较例 3制备的二异丙基乙胺盐制备米卡芬净钠
参照 W02004014879中的实施例 6制备工艺，由米卡芬净二异丙基乙胺盐制备 米卡芬净钠盐。
将本申请比较例 3制备的米卡芬净二异丙基乙胺盐固体（1. Olmmol)， 全部溶 解在 15ml水溶液中。 将含有米卡芬净二异丙基乙胺盐的溶解液， 上样于 30ml UBK510L离子交换树脂上， 用纯化水溶液洗脱， 洗脱至米卡芬净钠低于 1. 0g/L停 止收集。 用 0. lmol/L的氢氧化钠控制收集液的 pH至 6. 0。 上样， 用预先处理的 40ml SP-700大孔吸附树脂进行吸附。 先用 30%的丙酮水溶液洗涤 100ml，然后用 80%的丙酮水溶液洗脱， 80%的丙酮水溶液用量 150ml。 洗脱收集， 米卡芬净钠大 于 0. 5g/L开始收集， 洗脱至末尾小于 0. 5g/l停止收集， 收集符合浓度规定的含 有米卡芬净钠的组分， HPLC定量分析米卡芬净钠（0. 83mmol)， 收率 82. 1%。 避光， 直接减压蒸馏含有米卡芬净钠的组分合并液， 得到固体， 真空干燥， HPLC分析米 卡芬净钠纯度 96. 29%。 其中反应副产物 1-羟基苯并三唑（H0BT) , 被完全的去除。 相关主要杂质含量， 见表 28。
表 28
Figure imgf000042_0002
从实施例 22和比较例 6可以明显的得出， 利用高纯度式 I化合物 （纯度 99. 57%) 制备的高纯度米卡芬净二异丙基乙胺盐， 经过简单的纯化步骤， 即可得 到纯度在 99. 79%的米卡芬净钠。 利用美国专利 5376634实施例 1制备的式 I化合 物（纯度 97. 51%)， 制备的高纯度米卡芬净二异丙基乙胺盐， 经过相同的纯化步骤 得到的米卡芬净钠纯度只有 96. 29%。 高纯度式 I化合物制备米卡芬净钠在纯度上 具有显著的优势。 实施例 23
用高纯度米卡芬净二异丙基乙胺盐制备单一杂质均小于 0. 1%的米卡芬净钠 参照 W02004014879中的实施例 6制备工艺，由米卡芬净二异丙基乙胺盐制备 米卡芬净钠盐。
将本申请实施例 19制备的米卡芬净二异丙基乙胺盐固体（1. 04mmol)，全部溶 解在 15ml水溶液中。 将含有米卡芬净二异丙基乙胺盐的溶解液， 上样于 25ml UBK510L离子交换树脂上， 用纯化水溶液洗脱， 洗脱至米卡芬净钠低于 1. 0g/L停 止收集。 用 0. lmol/L的氢氧化钠控制收集液的 pH至 6. 0。 上样， 用预先处理的 40ml HP2MG大孔吸附树脂进行吸附。先用 30%的乙醇水溶液洗涤 200ml，然后用 70% 的乙醇水溶液洗脱， 70%的乙醇水溶液用量 200ml。 洗脱收集， 米卡芬净钠大于 0. 5g/L开始收集， 洗脱至末尾小于 0. 5g/l停止收集， 收集符合浓度规定的含有 米卡芬净钠的组分， HPLC定量分析米卡芬净钠（0. 92mmol)， 收率 88. 5%。 避光， 直接减压蒸馏含有米卡芬净钠的组分合并液， 得到固体， 真空干燥， HPLC分析米 卡芬净钠纯度 99. 88%。 其中反应副产物 1-羟基苯并三唑（H0BT) , 被完全的去除。 相关主要杂质含量， 见表 29。
表 29
Figure imgf000043_0001
比较例 7
用比较例 3制备的二异丙基乙胺盐制备米卡芬净钠
参照 W02004014879中的实施例 6制备工艺，由米卡芬净二异丙基乙胺盐制备 米卡芬净钠盐。
将本申请比较例 3制备的米卡芬净二异丙基乙胺盐固体（1. 04mmol)， 全部溶 解在 15ml水溶液中。 将含有米卡芬净二异丙基乙胺盐的溶解液， 上样于 25ml UBK510L离子交换树脂上， 用纯化水溶液洗脱， 洗脱至米卡芬净钠低于 1. 0g/L停 止收集。 用 0. lmol/L的氢氧化钠控制收集液的 pH至 6. 0。 上样， 用预先处理的 40ml HP2MG大孔吸附树脂进行吸附。先用 30%的乙醇水溶液洗涤 200ml，然后用 70% 的乙醇水溶液洗脱， 70%的乙醇水溶液用量 200ml。 洗脱收集， 米卡芬净钠大于 0. 5g/L开始收集， 洗脱至末尾小于 0. 5g/l停止收集， 收集符合浓度规定的含有 米卡芬净钠的组分， HPLC定量分析米卡芬净钠（0. 86mmol)， 收率 82. 7%。 避光， 直接减压蒸馏含有米卡芬净钠的组分合并液， 得到固体， 真空干燥， HPLC分析米 卡芬净钠纯度 96. 29%。 其中反应副产物 1-羟基苯并三唑（H0BT) , 被完全的去除。 相关主要杂质含量， 见表 30。
表 30
Figure imgf000044_0001
从实施例 23和比较例 7可以明显的得出， 利用高纯度式 I化合物 （纯度 99. 81%) 制备的高纯度米卡芬净二异丙基乙胺盐， 经过简单的纯化步骤， 即可得 到纯度在 99. 88%的米卡芬净钠。 利用美国专利 5376634实施例 1制备的式 I化合 物（纯度 97. 51%)， 制备的高纯度米卡芬净二异丙基乙胺盐， 经过相同的纯化步骤 得到的米卡芬净钠纯度只有 96. 29%。 高纯度式 I化合物制备米卡芬净钠在纯度上 具有显著的优势。 比较例 8
与市售制剂产品杂质含量比较
市售制剂产品： 商品名称： 米开民
通用名：注射用米卡芬净钠
厂家： 安斯泰来富山株式会社
批号： 0901 表 31 本发明制备高纯度式 I I化合物与市售制剂产品杂质含量比较
产物 相对保留时间 HPLC纯度 /HPLC含量
市售制剂产品 实施例 22 米卡芬净
(式 I I化 1. 0 98. 01% 99. 79
合物）
杂质 6 0. 71-0. 74 0. 34%
杂质 7 0. 90-0. 93
0. 71% 0. 09
杂质 8 0. 90-0. 93
杂质 9 1. 08-1. 10 0. 28
杂质 10 1. 11-1. 13 0. 21 0. 05
杂质 11 0. 94-0. 98 0. 18 0. 03
-: 表示未检测到该杂质
由表 31看出，本发明获得的高纯度的米卡芬净钠的纯度明显高于市售的制剂 产品， 其中杂质 6， 杂质 7、 杂质 8， 杂质 9、 杂质 10以及杂质 11的含量都大大 低于市售的制剂产品。其 HPLC图谱见附图 5，市售的制剂产品 HPLC图谱见附图 6。 实施例 24
化合物 I药物组合物的制备
Figure imgf000045_0001
将乳糖在低于 50°C加热下溶于纯水 （200ml ) 。 冷却至 20°C—下后， 向乳糖 溶液中加入实施例 3获得的高纯度化合物 I， 在温和搅拌下避免产生气泡。 在加 入 2%柠檬酸水溶液（0. 95ml )后，向溶液中加入 0. 4%氢氧化钠水溶液（约 24ml ) ， 以调节 pH5. 5， 然后用纯水稀释， 产生给定的体积 （250ml ) 。 将所得的溶液分装 到 100个 10ml体积的管形瓶中， 每个管形瓶 2. 5ml。 用常规方法， 用冻干机将各 个管形瓶中的溶液冻干， 以获得各含 25mg化合物 I的冻干组合物。 以上所述仅为本发明的较佳实施例而已， 并非用以限定本发明的实质技术内 容范围， 本发明的实质技术内容是广义地定义于申请的权利要求范围中， 任何他 人完成的技术实体或方法， 若是与申请的权利要求范围所定义的完全相同， 也或 是一种等效的变更， 均将被视为涵盖于该权利要求范围之中。

Claims

权 利 要 求
1.一种高纯度环肽化合物， 其结构如式 I所示， 其特征在于， 所述环肽化合 物纯度大于等于 99.0%， 其中， R表示 H或者能形成药学上可接受的盐的阳离子；
Figure imgf000046_0001
2. 如权利要求 l所述的高纯度环肽化合物， 其特征在于， 所述式 I化合物的 纯度用 HPLC测定。
3. 如权利要求 2所述的高纯度环肽化合物， 其特征在于， 所述 HPLC测定方 法为：
色谱柱： ACE 3 AQ， 150X4.6mm, 3 μ m;
流动相： A: 1000ml水， 10ml甲醇， ΙΟΟμ Ι三氟乙酸；
Β: 600 ml水， 400ml 甲醇， ΙΟΟμ Ι三氟乙酸；
流速： 0.55ml/min;
柱温： 50 °C;
梯度：
Figure imgf000046_0002
样品稀释剂： 纯水；
进样温度： 5°C;
检测波长： 225nm。
4. 如权利要求 1所述的高纯度环肽化合物， 其特征在于， 所述高纯度环肽化 合物中杂质 A的含量小于等于 0. 25%, 所述杂质 A在 HPLC上的相对保留时间约为 0. 45。
5. 如权利要求 1所述的高纯度环肽化合物， 其特征在于， 所述高纯度环肽化 合物中杂质 B的含量小于等于 0. 25%， 所述杂质 B在 HPLC上的相对保留时间约为
0. 65。
6. 如权利要求 1所述的高纯度环肽化合物， 其特征在于， 所述高纯度环肽化合 物中杂质 C的含量小于等于 0. 25%,所述杂质 C在 HPLC上的相对保留时间约为 0. 88。
7. 如权利要求 1所述的高纯度环肽化合物， 其特征在于， 所述高纯度环肽化合 物中杂质 D的含量小于等于 0. 20%,所述杂质 D在 HPLC上的相对保留时间约为 1. 08。
8. 如权利要求 1所述的高纯度环肽化合物， 其特征在于， 所述高纯度环肽化合 物中杂质 E的含量小于等于 0. 15%，所述杂质 E在 HPLC上的相对保留时间约为 1. 29。
9. 如权利要求 1所述的高纯度环肽化合物， 其特征在于， 所述高纯度环肽化合 物中杂质 F的含量小于等于 0. 15%，所述杂质 F在 HPLC上的相对保留时间约为 1. 92。
10. 如权利要求 1所述的高纯度环肽化合物， 其特征在于， 所述高纯度环肽化合 物中其他相关杂质含量均小于等于 0. 10%， 所述其他相关杂质指 A-F以外可能存在的 杂质。
11. 如权利要求 1-10任一所述的高纯度环肽化合物， 其特征在于， 所述式 I化 合物纯度和 /或杂质含量的计算方法为： 在 HPLC图中式 I化合物和 /或某个杂质的峰 曲线下面积除以 HPLC图的总曲线下面积。
12.—种制备如权利要求 1-11 任一所述的高纯度环肽化合物的方法， 其特征在 于， 所述的方法包括步骤：
(a) 将如式 I所示化合物粗品溶解在水或有机溶剂（ i )的水性溶液中， 控制溶 解液 pH;
(b) 通过降温和 /或添加有机溶剂（ i )得到所述高纯度环脂肽化合物。
13.如权利要求 12所述的制备方法， 其特征在于， 所述步骤（a)的溶解液 pH控 制在 2. 0-5. 0; 优选 3. 5- 4. 5。
14. 如权利要求 12所述的制备方法， 其特征在于， 所述步骤（a) 溶解液中式 I 化合物的浓度为 10-500mg/ml。
15.如权利要求 12所述的制备方法， 其特征在于， 所述步骤（a)和 /或 （b) 中有 机溶剂（ i )选自 C1-C4的低级醇； 优选自： 甲醇、 乙醇、 正丙醇、 异丙醇中的一种或 多种的混合物。
16. 如权利要求 12所述的制备方法， 其特征在于， 所述步骤 （a) - (b) 可以重 复一次或一次以上。
17. 一种如权利要求 1-11任一所述的高纯度式 I化合物的用途， 其特征在于， 用于制备高纯度的式 Π化合物； R
H C "〜-〜从、
II
18. 一种如权利要求 1一 11任一所述的高纯度式 I化合物的用途， 其特征在于， 用于制备治疗真菌感染的药物。
19. 一种药物组合物， 其特征在于， 所述的药物组合物中含有如权利要求 1一 11 任一所述的高纯度式 I化合物和药学上可接受的载体。
20. 一种如权利要求 19所述的药物组合物的制备方法， 其特征在于， 所述的方 法包括步骤：
将如权利要求 1一 11任一所述的高纯度式 I化合物和药学上可接受的载体混合， 得到如权利要求 19所述的药物组合物。
21. 一种高纯度的环脂肽化合物， 结构如式 II所示， 其特征在于， 所述环脂肽 化合物的纯度大于等于 98. 8%; 其中， R表示 H或者能形成药学上可接受的盐的阳 离子。
22. 如权利要求 21所述的式 II化合物， 其特征在于， 所述式 I I化合物的纯 度用 HPLC测定。
23. 如权利要求 21所述的式 II化合物， 其特征在于， 所述的式 I I化合物中 杂质 6的含量小于 0. 3%， 其结构如式 IV所示； 其中， R表示 H或者能形成药学上 可接受的盐的阳离子；
Figure imgf000049_0001
IV 杂质 6
24. 如权利要求 21所述的式 II化合物， 其特征在于， 所述式 I I化合物中杂 质 7禾 Π 8的总含量小于 0. 5%， V， 式 VI所示； 其中， R表示 H或者能 形成药学上可接受的盐的阳离子；
Figure imgf000049_0002
V 杂质 7
Figure imgf000049_0003
H3C O-H
VI 杂质 8
25. 如权利要求 21所述的式 II化合物， 其特征在于， 所述式 II化合物中杂 质 9含量小于 0.2%， 其结构如式 VII所示； 其中， R表示 H或者能形成药学上可 接受的盐的阳离子；
Figure imgf000050_0001
VII 杂质 9
26. 如权利要求 21所述的式 II化合物， 其特征在于， 所述式 II化合物中杂 质 10含量小于 0.2%， 其结构如式 VIII所示； 其中， R表示 H或者能形成药学上 可接受的盐的阳离子；
Figure imgf000050_0002
VIII 杂质 10
27. 如权利要求 21所述的式 II化合物， 其特征在于， 所述式 II化合物中 杂质 11的含量小于等于 0.15%,所述杂质 11在 HPLC上的相对保留时间约为 0.96。
28.如权利要求 21所述的式 II化合物， 其特征在于， 所述式 II化合物中其 他相关杂质含量均小于等于 0.02%; 所述其他相关杂质指杂质 6-11以外可能存在 的杂质。
29.一种制备权利要求 21-28任一所述高纯度式 I I化合物的方法， 其特征在 于， 使用如权利要求 1-11任一所述的高纯度式 I化合物作为原料， 制备如式 II所 示的化合物。
30. 一种如权利要求 21— 28任一所述的高纯度式 I I化合物的用途， 其特征 在于， 用于制备治疗真菌感染的药物。
31. 一种药物组合物， 其特征在于， 所述的药物组合物中含有如权利要求 21 - 28任一所述的高纯度式 I I化合物和药学上可接受的载体。
32. 一种如权利要求 31所述的药物组合物的制备方法， 其特征在于， 所述 的方法包括步骤：
将如权利要求 21— 28任一所述的高纯度式 I I化合物和药学上可接受的载体 混合， 得到如权利要求 31所述的药物组合物。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111378013A (zh) * 2018-12-29 2020-07-07 上海天伟生物制药有限公司 一种高纯度环肽化合物的制备方法

Families Citing this family (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102627688B (zh) * 2012-03-30 2014-12-31 上海天伟生物制药有限公司 一种高纯度环肽化合物及其制备方法和用途
CN102627689B (zh) * 2012-03-30 2014-08-06 上海天伟生物制药有限公司 一种环肽类化合物的水合物及其制备方法和用途
CN106518980B (zh) * 2013-08-28 2019-04-09 重庆乾泰生物医药有限公司 一种高纯度环己肽类化合物的制备方法
CN105254721B (zh) * 2014-05-13 2021-05-18 江苏豪森药业集团有限公司 米卡芬净的纯化转盐方法
US10138274B2 (en) * 2014-05-29 2018-11-27 Shanghai Techwell Biopharmaceutical Co., Ltd Crystal of cyclic peptide compound, preparation method for same and uses thereof
CN105777869B (zh) * 2014-12-24 2019-09-27 上海天伟生物制药有限公司 环肽类化合物的组合物
CN112110991A (zh) * 2014-12-24 2020-12-22 上海天伟生物制药有限公司 一种含氮杂环六肽前体的组合物及其制备方法和用途
CN106866790A (zh) * 2015-12-11 2017-06-20 北大方正集团有限公司 达托霉素RS-5/6、RS-7和RS-7a/7b杂质的制备方法
CN105968173B (zh) * 2016-06-28 2019-12-03 成都雅途生物技术有限公司 米卡芬净前体fr901379的纯化方法
WO2019066485A1 (ko) * 2017-09-27 2019-04-04 ㈜로제타엑소좀 크기 배제 크로마토그래피를 이용한 세포밖 소포체의 순도 분석 방법
CN108752430B (zh) * 2018-05-31 2022-02-18 杭州中美华东制药有限公司 米卡芬净钠新晶型及其制备方法
CN111434675A (zh) * 2019-01-11 2020-07-21 苏州纳微科技股份有限公司 一种米卡芬净母环的分离纯化方法
CN111044636A (zh) * 2019-12-30 2020-04-21 卓和药业集团有限公司 米卡芬净含量的分析方法
CN112710753A (zh) * 2020-12-18 2021-04-27 卓和药业集团有限公司 米卡芬净有关物质的分析方法
CN115785226A (zh) * 2021-09-09 2023-03-14 上海天伟生物制药有限公司 一种棘白菌素药物杂质及其制备、纯化方法和应用
CN115494184B (zh) * 2022-05-09 2023-07-28 浙江海正药业股份有限公司 一种同时检测药物中异丙苯磺酸甲酯、异丙苯磺酸乙酯的方法

Citations (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR901379A (fr) 1943-09-10 1945-07-25 Télégraphie par variations de fréquence
EP0431350A1 (en) 1989-11-13 1991-06-12 Fujisawa Pharmaceutical Co., Ltd. New polypeptide compound and a process for preparation thereof
US5376634A (en) 1990-06-18 1994-12-27 Fujisawa Pharmaceutical Co., Ltd. Polypeptide compound and a process for preparation thereof
WO1996011210A1 (en) 1994-10-07 1996-04-18 Fujisawa Pharmaceutical Co., Ltd. Cyclic hexapeptides having antibiotic activity
CN1161462A (zh) 1995-03-31 1997-10-08 大宇电子株式会社 带有温度补偿层的薄膜致动的反射镜阵列
WO1998057923A1 (fr) 1997-06-18 1998-12-23 Fujisawa Pharmaceutical Co., Ltd. Nouveau procede de preparation
WO2003018615A1 (fr) 2001-08-31 2003-03-06 Fujisawa Pharmaceutical Co., Ltd. Nouveau cristal de compose lipopeptidique cyclique
WO2004014879A1 (en) 2002-08-08 2004-02-19 Fujisawa Pharmaceutical Co., Ltd. New process
CN102432674A (zh) * 2010-09-29 2012-05-02 上海天伟生物制药有限公司 一种环脂肽化合物或其盐的纯化方法
CN102627688A (zh) * 2012-03-30 2012-08-08 上海天伟生物制药有限公司 一种高纯度环肽化合物及其制备方法和用途

Family Cites Families (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5336756A (en) * 1991-05-01 1994-08-09 Merck & Co., Inc. Process for crystalline cyclic lipopeptides
ATE338060T1 (de) * 1999-03-03 2006-09-15 Lilly Co Eli Bildung und anionenaustausch von inneren kristallinen ammoniumsalzen des echinocandins b
WO2002068456A1 (en) * 2001-02-26 2002-09-06 Fujisawa Pharmaceutical Co., Ltd. Echinocandin derivatives, pharmaceutical compositions containing same and use thereof as drugs
FR2833596B1 (fr) * 2001-12-14 2005-02-18 Aventis Pharma Sa Procede de preparation de derives d'echinocandine
EP2183271A1 (en) * 2008-06-25 2010-05-12 TEVA Gyógyszergyár Zártkörüen Müködö Részvénytársaság Caspofungin free of caspofungin impurity a
CN101648994B (zh) * 2009-08-06 2012-09-05 上海天伟生物制药有限公司 一种氮杂环己肽或其药学上可接受的盐及其制备方法和用途
CN102219832B (zh) * 2010-04-15 2013-08-21 上海天伟生物制药有限公司 一种氮杂环六肽或其盐的纯化方法
US8877777B2 (en) * 2010-09-30 2014-11-04 Shanghai Techwell Biopharmaceutical Co., Ltd. Process for purifying cyclolipopeptide compounds or the salts thereof
CN102775476B (zh) * 2011-05-12 2015-01-07 上海天伟生物制药有限公司 一种米卡芬净钠盐的制备方法
CN102952178B (zh) * 2011-08-24 2016-04-27 华北制药集团新药研究开发有限责任公司 一种高纯度棘白霉素类化合物的制备方法

Patent Citations (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR901379A (fr) 1943-09-10 1945-07-25 Télégraphie par variations de fréquence
EP0431350A1 (en) 1989-11-13 1991-06-12 Fujisawa Pharmaceutical Co., Ltd. New polypeptide compound and a process for preparation thereof
US5376634A (en) 1990-06-18 1994-12-27 Fujisawa Pharmaceutical Co., Ltd. Polypeptide compound and a process for preparation thereof
WO1996011210A1 (en) 1994-10-07 1996-04-18 Fujisawa Pharmaceutical Co., Ltd. Cyclic hexapeptides having antibiotic activity
CN1161462A (zh) 1995-03-31 1997-10-08 大宇电子株式会社 带有温度补偿层的薄膜致动的反射镜阵列
WO1998057923A1 (fr) 1997-06-18 1998-12-23 Fujisawa Pharmaceutical Co., Ltd. Nouveau procede de preparation
WO2003018615A1 (fr) 2001-08-31 2003-03-06 Fujisawa Pharmaceutical Co., Ltd. Nouveau cristal de compose lipopeptidique cyclique
WO2004014879A1 (en) 2002-08-08 2004-02-19 Fujisawa Pharmaceutical Co., Ltd. New process
CN102432674A (zh) * 2010-09-29 2012-05-02 上海天伟生物制药有限公司 一种环脂肽化合物或其盐的纯化方法
CN102627688A (zh) * 2012-03-30 2012-08-08 上海天伟生物制药有限公司 一种高纯度环肽化合物及其制备方法和用途

Non-Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
"Remington's Pharmaceutical Sciences", 1991, MACK PUB. CO.
BAO, YINGQIU ET AL.: "In vitro antifungal activity of caspofungin and micafungin against 8 species of dermatophyte", CHIN J MYCOL., vol. 4, no. 2, 30 April 2009 (2009-04-30), pages 73 - 77, 107, XP008175139 *
FENG, LIJUAN ET AL.: "Assaying the Susceptibility of Fluconazole-Resistant Candida Albicans to Common Antifungal Drugs", CHIN J DERM VENEREOL., vol. 23, no. 4, 30 April 2009 (2009-04-30), pages 193 - 195, 198, XP008175141 *
PFALLER, M. A. ET AL.: "In Vitro Susceptibility of Clinical Isolates of Aspergillus spp. to Anidulafungin, Caspofungin, and Micafungin: a Head-to-Head Comparison Using the CLSI M38-A2 Broth Microdilution Method", JOURNAL OF CLINICAL MICROBIOLOGY, vol. 47, no. 10, 31 October 2009 (2009-10-31), pages 3323 - 3325, XP055171771 *
QIAO, JIANJUN ET AL.: "In vitro antifungal activity of micafungin against clinical strains of Candida spp. and Aspergillus spp. isolated from China", CHIN J MYCOL., vol. 2, no. 1, 28 February 2007 (2007-02-28), pages 5 - 9, 13, XP008175140 *
See also references of EP2832745A4

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111378013A (zh) * 2018-12-29 2020-07-07 上海天伟生物制药有限公司 一种高纯度环肽化合物的制备方法
CN111378013B (zh) * 2018-12-29 2023-04-25 上海天伟生物制药有限公司 一种高纯度环肽化合物的制备方法

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