KR101596554B1 - 펩타이드계 물질의 결정체 및 그의 제조방법과 용도 - Google Patents

Abstract

본 발명은 일종의 펩타이드계 물질의 결정체 및 그의 제조방법과 용도를 공개하였다. 상기 결정체는 X선 분말 회절(XRPD) 패턴이 3.2±0.2°，5.4±0.2°，6.2±0.2°，9.3±0.2°의 2θ의 회절 각도에서 피크를 갖는다.

Description

펩타이드계 물질의 결정체 및 그의 제조방법과 용도{PREPARATION METHOD AND USE OF A CRYSTAL OF A PEPTIDE SUBSTANCE}

본 발명은 화합물의 결정체에 관한 것이며, 더 구체적으로는 일종의 펩타이드계 물질의 결정체 및 그의 제조방법과 용도에 관한 것이다.

최근, 일부 진균의 발효액에서 항진균 활성을 가진 사이클로펩타이드계 물질을 발견하였다. 이러한 펩타이드계는 주로 사이클로 헥사펩타이드이며, 일반적으로 에치노칸딘(Echinocandins)계 물질로 불리우며, 예를 들면, 폐렴구균용혈소, WF11899, 및 에치노칸딘 등이 있다. 이러한 사이클로펩타이드계 물질에 대한 화학적 개질을 통해 임상치료에 사용가능한 반 합성 항생물질을 얻을 수 있다.

하기의 화학식 I로 표시된 화합물은 발효를 통해 얻은 일종의 천연생성물이며, 사이클로 헥사펩타이드 구조를 가지고 있다. 일반적으로 하기의 화학식 II로 표시된 화합물의 합성 원료로 사용된다. 화학식 I로 표시 된 화합물의 제조방법은 미국특허5202309, 5194377 및 6610822에 공개된 제조방법을 참고로 한다.

화학식 II로 표시 된 화합물의 아세트산염은 일종의 펩타이드계 항생물로써 침습성 아스퍼질로시스증(Aspergillosis), 식도칸디다증, 칸디다균에 의한 복강내 농양, 흉막염, 복강감염, 및 호중구 감소증 환자의 불명확한 원인에 의한 발열 등의 치료에 사용된다. 화학식 II로 표시 된 화합물의 아세트산염(카스포푼진 아세테이트(caspofungin acetate), 상품명: CANCIDAS)은 현재 정맥 투약성 항 진균 약물로 여러 국가에서 판매되고 있다.

[화학식 I]

[화학식 II]

화학식 I 화합물은 결정이 어려우며, 일반적인 상황에서 무정형이다. 상기 화합물은 치료의 최종 용도 또는 화학식 II의 화합물의 중간체로써, 고순도의 결정을 얻을 것을 요구한다. 미국 특허US5336756에는 물, 프로판올을 함유한 결정용제로 사용하는 결정방법이 기재되어 있으며, 이 방법을 통해 결정체A를 얻을 수 있으며, X선 회절 패턴(X-ray diffraction pattern)이 2.16±0.2°，4.26±0.2°，8.06±0.2°，9.06±0.2°，13.34±0.2°，15.06±0.2°，17.70±0.2°，20.96±0.2°，26.28±0.2°의 2θ의 회절 각도에서 피크를 갖는다. 이 특허에서는 n-프로판올 외의 기타 용제는 결정에 적합하지 않으나 이 방법의 결정과정이 길고(12 내지 20시간), 수율(85.2%)이 비교적 낮아 산업화 생산에 적합하지 않다.

그리하여, 본 분야에서는 조작이 간단하고 신속하며, 결정 수율이 높은 화학식 I의 화합물의 결정을 제조하는 방법 및 상응한 결정을 절실하게 필요로 한다.

본 발명의 목적은 신규한 화학식 I 화합물 결정체를 제공하는데 있다.

본 발명의 다른 목적은 신규의 결정체의 제조방법을 제공하는데 있다.

본 발명의 또 다른 목적은 신규한 결정체의 용도를 제공하는데 있다.

본 발명의 첫번째 방면에서, 펩타이드계 물질의 결정체B를 제공하며, 그 구조는 화학식 I로 표시되며, 상기 결정B의 X선 회절 패턴(XRPD)은 3.2±0.2°，5.4±0.2°，6.2±0.2°，9.3±0.2°의 2θ의 회절 각도에서 피크를 갖는다.

[화학식 1]

다른 바람직한 실시예에서, 상기 결정체B는 시차 주사 열량계(DSC) 패턴에 있어서 155 내지 165℃에서 최대의 피크를 갖는다.

다른 바람직한 실시예에서, 상기 결정체B는 도면3에 표시된 적외선 스팩트럼을 갖는다.

본 발명의 두번째 방면에서, 상기 본 발명에서 제공하는 펩타이드계 물질의 결정체B의 제조방법을 제공하며, 하기의 단계를 포함한다.

(a)화학식 I로 표시 된 화합물을 유기용제(ⅰ)의 수용액에 용해시켜 용액a를 얻는 단계,

（b）온도 낮춤 및/또는 다른 저극성용제(ⅱ)의 첨가를 통해 펩타이드계 물질 결정체B를 얻는 단계.

상기 단계(a)에서, 용해 온도는 10 내지 80℃이며, 상기 단계(a)에서, 용액a의 총체적에 대하여 상기 화학식 I로 표시된 화합물은 20 내지 250m g/ml이며, 상기 유기용제(ⅰ)의 수용액의 총체적에 대하여, 물 0.1 내지 15v/v％를 함유하며, 상기 유기용제(ⅰ)는 C1-4알코올、C1-4케톤에서 선택되는 한가지 또는 여러가지 혼합물이며,유기용제（ⅱ）는 C3-7에스테르, 헥산, n-헵탄, n-펜탄, 디클로로메탄에서 선택되는 한가지 또는 여러가지의 혼합물이다.

다른 바람직한 실시예에서, 상기 유기용제(ⅰ)는 메탄올, 에탄올, 이소부탄올, 아세톤에서 선택되는 한가지 또는 여러가지의 혼합물이며, 유기용제(ⅱ)는 에틸 아세테이트, 이소프로필 아세테이트, 헥산, n-헵탄, n-펜탄, 디클로로메탄에서 선택되는 한가지 또는 여러가지의 혼합물이다.

다른 바람직한 실시예에서, 상기 유기용제(ⅰ)와 유기용제(ⅱ)의 체적비는 0.1 내지 10:1이다.

상기 방법에서, 상기 온도 낮춤은 단계(a)에서 얻은 용액의 온도를 30 내지 -50℃까지 낮추는 것을 말한다.

본 발명의 세번째 방면에서, 상기 본 발명에서 제공하는 펩타이드계 물질을 상기 화학식 Ⅱ로 표시된 화합물의 제조에 사용하는 용도를 제공한다.

[화학식 II]

상기 본 발명에서 제공하는 펩타이드계 물질의 결정체의 용도는 진균 감염 치료 약물의 제조에 사용하는 것이다.

본 발명의 네번째 방면에서, 약물의 조성물을 제공한다. 상기 약물 조성물에는 본 발명에서 제공하는 상기 펩타이드계 물질의 결정체와 약학적으로 허용가능한 담체를 포함한다.

본 발명의 다섯번째 방면에서, 본 발명의 약물 조성물의 제조방법을 제공한다. 상기 방법은 본 발명에서 제공하는 상기 펩타이드계 물질의 결정체와 약학적으로 허용가능한 담체를 혼합하여 본 발명의 약물 조성물을 얻는 단계를 포함한다.

본 발명에서는 조작이 간단하고, 신속하며 결정체의 수율이 높은 화학식 Ⅰ 화합물의 결정체의 제조방법 및 상응하게 얻은 결정체를 제공한다.

이상은 본 발명의 실질적인 기술내용 범위를 한정하는 것이 아니라 본 발명의 바람직한 실시예일뿐이며, 본 발명의 실질적 기술내용은 광범위하게 본 발명의 특허청구의 범위에 정의되어 있다. 임의이 타인이 완성한 기술 실체 또는 방법이 본 발명의 특허청구의 범위에 기재된 정의와 완전히 같거나 또는 등가적은 변경은 모두 본 발명의 특허청구의 보호범위내인 것으로 인정된다.

도 1은 본 발명의 화학식Ⅰ화합물 결정체B의 X선 회절 패턴을 나타낸다.
도 2는 화학식 Ⅰ의 화합물 결정체B의 시차 주사 열량계 분석(DSC)패턴을 나타낸다.
도 3은 화학식 Ⅰ의 화합물 결정체B의 적외선(IR) 패턴을 나타낸다.
도 4는 화학식 Ⅰ의 화합물 결정체B의 HPLC 패턴을 나타낸다.
도 5는 화학식 Ⅰ의 화합물 결정체A의 X선 회절 분말 패턴을 나타낸다.
도 6은 화학식 Ⅰ의 화합물의 무정형 분말의 HPLC 패턴을 나타낸다.
도 7은 화학식 Ⅰ의 화합물 결정체B의 현미경 사진을 나타낸다.
도 8은 화학식 Ⅰ의 화합물 결정체A의 현미경 사진을 나타낸다.

본 발명의 발명자는 광범위하고 깊은 연구를 거쳐, 일부 용제를 사용하여 높지 않은 온도하에서 화학식Ⅰ화합물를 용해시키면 잡질의 함량의 적은 결정체를 얻을 수 있으며, 결정체의 수율도 높음을 발견하였다.

본 발명의 화학식 Ⅰ의 화합물을 메탄올, 엔탄올, 프로판올 등 유기용제(ⅰ)의 수용액에 용해시킨 후, 용액의 온도를 낮추거나 또는 온도를 낮추는 동시에 유기용제(ⅱ)(예를 들면, 에틸 아세테이트, 프로필 아세테이트)를 첨가하여 결정체의 석출을 도와 최종적으로 결정체(B)를 얻는다. 미국 특허US5336756에서는 메탄올, 에탄올 등 알칸올은 결정에 적합하지 않다고 기재되어 있으나, 본 발명의 발명자는 실험을 통해, 이러한 용제를 사용하여 잡질의 함량이 적고, 결정형태가 양호한 결정을 얻을 수 있으며, 수율이 높음을 발견하였다.

화학식Ⅰ 화합물 결정체B의 제조

본 발명에서, 용어”결정체”는 분자 또는 원자 복합물의 특정한 배열형식의 고체를 가리킨다.

본 발명의 발명자는 적당한 용제로 화학식 Ⅰ 화합물을 용해시킨 후, 다른 용제를 사용하거나 및/또는 온도를 낮추는 방법으로 화학식Ⅰ 화합물을 용액에서 석출할 수 있음을 발견하였다.

이로써, 화학식Ⅰ화합물의 결정체의 제조방법을 제공하였으며, 상기 방법에는 하기 단계가 포함한다.

(a) 화학식 Ⅰ의 화합물을 유기용제(ⅰ)의 수용액에 용해시켜 용액a를 형성하는 단계,

(b) 온도 낮춤 및/또는 다른 일종의 저극성 용제(ⅱ)를 첨가하여 펩타이드계 물질 결정체B를 얻는 단계.

본 발명의 한 실시예에서, 하기 단계를 통해 화학식 Ⅰ의 화합물의 결정체를 얻는다.

(a) 화학식 Ⅰ로 표시된 화합물을 유기용제(ⅰ)의 수용액에 용해시켜 용액a를 형성하는 단계,

(b) 용액의 온도를 낮춰 화학식 Ⅰ화합물의 결정체B를 얻는 단계,

그 중, 단계(a)에서, 상기 화학식Ⅰ화합물을 용해하는 온도는 10 내지 80℃이며, 바람직하게는 30 내지 60℃이다.

그중, 단계(a)에서, 상기 용액a의 총체적에 대하여, 화학식Ⅰ로 표시된 화합물을 20 내지 250mg/ml를 포함하며, 바람직하게는 50 내지 200mg/ml를 포함한다.

그중, 단계(a)에서, 상기 용제(ⅰ)는 C1-4알코올, C1-4케톤에서 선택되는 한가지 또는 여러가지의 혼합물이며, 바람직하게는 메탄올, 에탄올, 이소부탄올, 아세톤에서 선택되는 한가지 또는 여러가지의 혼합물이다.

그중, 단계(a)에서, 상기 유기용제(ⅰ)의 수용액의 총 체적에 대하여, 0.1 내지 15v/v%, 바람직하게는 1 내지 12v/v%, 더 바람직하게는 4 내지 8v/v%의 물을 포함한다.

그중, 단계(b)에서, 상기 온도 낮춤의 온도는 30 내지 -50℃이며, 바람직하게는 30 내지 -10℃이며, 더 바람직하게는 25 내지 10℃이다.

본 발명의 다른 바람직한 실시예에서,단계(a)후에, 하기 단계에 따라 화학식 Ⅰ의 화합물의 결정체B를 얻는다.

(b’)용액의 온도를 낮추는 동시에 용제(ⅱ)를 첨가하여 화학식 Ⅰ 화합물 결정체B를 완전히 석출하는 단계.

그중, 단계(b’)에서, 상기 용제(ⅱ)는 C3-7에스테르, 헥산, n-헵탄, n-펜탄, 디클로로메탄에서 선택되는 한가지 또는 여러가지의 혼합물이며, 바람직하게는 에틸 아세테이트, 이소프로필 아세테이트, 헥산, n-헵탄, n-펜탄, 디클로로메탄에서 선택되는 한가지 또는 여러가지의 혼합물이다.

그중, 단계(b’)에서, 상기 온도는 30 내지 -50℃이며, 바람직하게는 30 내지 -10℃이며, 더 바람직하게는 25 내지 10℃이다.

그중, 단계(b’)에서, 상기 유기용제(ⅰ)와 유기용제(ⅱ)의 체적의 비는 1 내지 8이며, 바람직하게는 2 내지 5이며, 더 바람직하게는 3 내지 4이다.

본 발명에서 제공하는 방법을 통해 얻은 화학식 Ⅰ 화합물의 결정체B의 순도가 높아 화학식 Ⅱ 화합물의 제조에 유리하다.

화학식 I 화합물 결정체B의 동정 및 성질

본 발명의 발명자는 화학식 Ⅰ의 화합물 결정체를 얻은 후, 여러가지 방법 및 기기를 이용하여 그의 성질에 대하여 연구를 하였다.

“분말 X선 회절법”은 “X선 분말 회절법(XRPD)”이라고도 하며, 현재 각종 결정체의 구조(즉, 결정형)를 측정하는 통상의 실험방법이다. X선 분말 회절기를 사용하여, X선이 결정체를 통과할 경우 일련의 회절 패턴을 생성하며, 이 패턴에서 부동한 회절선 및 그의 강도는 일정한 구조를 가지고 있는 원자단에 의해 결정되며, 이를 통해 결정체의 구조를 확정한다.

결정체의 X선 분말 회절법으로 결정체를 측정하는 것은 본 분야의 통상의 기술이다. 예를 들면, Bruker D8 Advanced형의 X선 분말 회절기를 사용하여, 분 당 2°의 스캔 속도로 동 복사 타겟을 이용하여 패턴을 얻는다.

본 발명의 화학식 Ⅰ 화합물의 결정체B는 특정한 결정체의 형태를 가지고 있으며, X선 회절 패턴에서 특정한 피크를 가지고 있다. 구체적으로, 본 발명의 화학식 Ⅰ 화합물의 결정체는 X선 회절 패턴에서, 3.20±0.2°，5.42±0.2°，6.28±0.2°，9.28±0.2의 2θ의 회절 각도에서 피크를 갖는다. 더 바람직하게는, 본 발명의 화학식 I 화합물의 결정체의 X선 회절 패턴은 도면1과 거의 일치하다.

“시차 주사 열량분석”은 “시차 열량 주사분석”(DSC)은 가열과정에서, 측정물질과 기준물질 사이의 열량차 및 온도사이의 관계를 측정하는 일종의 기술이다. DSC패턴상의 피크의 위치, 형태, 수량은 물질의 성질과 연관되며, 정성분석을 하여 물질을 확인할 수 있다.

본 분야에서는 상기 방법을 이용하여 물질의 상변이 온도, 유리화 온도, 반응열 등 여러가지 파라미터를 측정할 수 있다.

물질이 비결정형일 경우, 흡열과정에서 명확한 융점이 없다. 그러나, 본 발명의 화학식 Ⅰ 화합물의 결정체는 명확한 융점이 있다. 즉, 흡열과정에서, 좁은 온도범위내에서 고상에서 액상으로 변한다.

DSC측정방법은 본 분야의 통상의 기술이다. 예하면, DSC Q20시차 주사 열량분석기를 사용하여 분당10℃의 승온속도로 25℃에서 200℃까지 올라가면서 결정체의 DSC의 주사 패턴을 얻는다.

본 발명의 한 실시예에서, DSC를 이용하여, 본 발명의 방법으로 얻은 화학식 Ⅰ 화합물의 결정체B는155 내지 165℃부근에서 최대 피크를 갖고 있으며, 바람직하게는 본 발명의 화학식 Ⅰ 화합물의 결정체B는 도 2와 거의 일치한 DSC패턴을 가지고 있으며, 더 바람직하게는163.63℃에서 최대의 피크를 가지고 있다.

또한 적외선 분광법으로 결정체의 구조를 확정할 수 있으며, 그 측정방법은 본 분야의 통상의 방법이다. 예하면, PE Specrum One B를 사용하여，KBr：시료=200：1로 압편하여，400 내지 4000cm-1 의 범위에서 스캔한다.

본 발명의 화학식Ⅰ화합물 결정체B는 이하 파장에서 특정적인 피크를 가진다: 3346.19cm^-1，2926.32cm^-1，2854.48cm^-1，2031.95cm^-1,1630.12cm^-1,1517.22cm^-1, 1440.26cm^-1,1378.47cm^-1,1339.47cm^-1,1316.48cm^-1,1235.39cm^-1,1196.46cm^-1, 1065.36cm^-1, 968.65cm^-1,913.77 cm^-1,839.57cm^-1 ，580.40cm^-1 ，551.40cm^-1. 바람직하게는 도면3과 거의 일치한 적외선 패턴을 가진다.

화학식 I 화합물의 결정체B의 용도 및 그의 조성물

본 발명에서는 화학식 Ⅰ 화합물 결정체B의 용도를 제공하며, 화학식 Ⅱ로 표시 된 화합물의 제조에 사용할 수 있다.

[화학식 II]

합성경로는 예를 들면, WO9747645，US5552521등 여러 개의 특허에 모두 기재되어 있다.

다른 방면에서, 본 발명에서 제공하는 화학식 Ⅰ 화합물의 결정체B는 진균감염을 치료하는 약물의 제조에도 직접적으로 사용할 수 있다. 화학식 Ⅰ 화합물의 결정체B와 약학적으로 허용가능한 담체를 포함한 약물조성물을 제공한다.

본 명세서에서는 사용하는 용어“약학적으로 허용가능한 담체”는 치료제 투약의 담체로 사용되며, 각종 부형제와 희석제를 포함한다. 이 용어는 그 자체가 필요한 활성성분이 아니나 투여 후 과도한 독성이 없는 약물의 담체를 가리킨다. 조성물에서 약학적으로 허용가능한 담체는 물, 염수, 글리세린 및 에탄올 등 액체를 포함한다. 또한 ,이러한 담체에는 보조성 물질인 붕해제, 습윤제, 유화제, pH완충물질 등이 존재할 수도 있다.

본 명세서에서 사용하는 “화학식 Ⅰ 화합물”과 “화학식 Ⅰ로 표시된 화합물”은 교환사용 가능하며, 모두 화학구조가 화학식Ⅰ과 같은 무정형 물질을 가리킨다. 본 분야의 통상의 방법으로 얻을 수 있으며, 예를 들면, 미국특허US5202309에 화합물Ⅰ의 제조방법이 기재되어 있으며, 상업적 경로를 통해 얻을 수도 있다. 예를 들면, Merck 회사 등에서 구매할 수 있으며, 이에 한정되지는 않는다.

본 발명의 장점은 다음과 같다.

1. 본 발명에서 화학식 Ⅰ 화합물의 신규 결정형을 얻었다.

2. 본 발명에서 제공하는 화학식 Ⅰ 화합물의 신규 결정형의 제조방법에서 결정체의 수율이 높다.

3. 발명에서 제공하는 화학식 Ⅰ 화합물의 신규 결정형의 제조방법은 잡질의 혼입을 피하며, 다음 단계의 합성에 유리하여 화학식 II 화합물의 순도를 제고시킨다.

4. 본 발명에서 제공하는 화학식 Ⅰ 화합물의 신규 결정형의 제조방법은 기존의 방법에 비해 더 높은 순도의 결정체를 얻을 수 있다.

아래에서는 구체적인 실시예를 결합하여 본 발명을 더욱 상세하게 설명하고자 한다. 이러한 실시예는 본 발명의 범위를 제한하는 것이 아니라 본 발명을 설명하기 위한 것이다. 아래 실시예에서 구체적인 조건을 표기하지 않은 실험방법은 일반적으로 통상적인 조건이나 또는 제조상에서 제안한 조건에 따라 실행한다. 특별한 설명이 없는 경우, 모든 백분비, 비율, 비례, 또는 부수는 중량으로 계산한 것이다.

본 발명에서 중량체적 백분비의 단위는 본 분야의 기술자가 숙지하고 있는 것이다. 예를 들면, 100ml의 용액중에 있는 용질의 중량이다.

특별한 설명이 없는 경우, 본 명세서에서 사용한 모든 전문용어 및 과학기술 용어는 본 분야의 기술자가 숙지하고 있는 의미와 동일한다. 또한, 기재된 내용과 유사하거나 균등한 방법 및 재료는 모두 본 발명의 방법에 사용할 수 있다. 본 명세서에 기재된 실시방법과 재료는 예시에 불과하다.

액상 순도는 HPLC방법을 통해 측정한 것이며, HPLC방법은 Journal of Industrial Microbiology & Biotechnology (2001),26,216-221에 기재된 방법에 따라 실시한다. 정상 HPLC방법은4.6mm*250mm의 실리카 겔 컬럼을 사용하며, 유동상은 에틸 아세테이트:메탄올:물=84：9：7이며，측정 파장은 278nm이다.

화합물 I의 제조

미국특허5202309에 기재된 방법을 통해 화합물 I 고체분말 146g을 얻었으며，HPLC측정 함량은 96.1%이다. 액상 순도는 도면6을 참고로 한다.

화학식 I 화합물의 결정체B의 제조

40℃하에， 실시예1에서 얻은 8g의 화합물Ⅰ을 38ml의 메탄올에 용해시킨 후, 물2ml을 넣고 1 내지 2시간을 교반시켜 화합물Ⅰ을 완전히 용해시켰다. 용액을 15℃까지 냉각시켜，화합물Ⅰ의 결정체B를 석출하였다. 이어서, 120ml의 이소프로필 아세테이트 천천히 적가하고, 15℃하에서 2시간을 교반하였다. 침출, 진공건조를 통해 화학식 I 화합물 결정체B 7.6g를 얻었으며，액상순도는 99.8%이다. XRPD, DSC, IR은 도 1 내지 3을 참고로 하며, 액상순도는 도 4를 참고로 한다.

화학식 I 화합물 결정체B의 제조

45℃하에，3.5g의 실시예1에서 얻은 화합물Ⅰ를 38ml의 에탄올에 용시킨 후, 물 2ml를 넣고，1 내지 2시간을 교반시켜 화합물Ⅰ를 완전히 용해시켰다. 용액을 -50℃까지 냉각시켜，화합물Ⅰ의 결정체B를 석출하였다. 이어서, 60ml의 이소프로필 아세테이트를 천천히 적가하고，-50℃에서 2시간을 교반시켰다. 침출, 진공건조를 통해 화학식 I 화합물 결정체B 3.35g을 얻었으며， 액상 순도는 99.8%이다. XRPD, DSC, IR은 도면 1 내지 3을 참고로 하며, 액상 순도는 도면4를 참고로 한다.

화학식 I 화합물 결정체B의 제조

40℃ 하에，2.5g의 실시예 1에서 얻은 화합물Ⅰ를 48ml의 아세톤에 용해시킨 후, 물 2ml를 넣고 1 내지 2시간을 교반시켜 화합물Ⅰ를 완전히 용해시켰다. 용액을 20℃까지 냉?히켜，화합물Ⅰ의 결정체B를 석출하였다. 이어서, 100ml의 에틸 아세테이트를 천천히 적가하고，20℃에서 2시간을 교반시켰다. 침출, 진공여과시켜 화학식 I 화합물 결정체B를 3.35g얻었으며，액상 순도는 99.8%이다. XRPD, DSC, IR는 도면 1 내지 3을 참고로 하고, 액상순도는 도면4를 참고로 한다.

화학식 I 화합물 결정체B의 제조

40℃ 하에，8g의 실시예1에서 얻은 화합물Ⅰ을 메탄올38ml에 용해키니 후, 물 2ml를 넣고，1 내지 2시간을 교반시켜 화합물Ⅰ를 완전히 용해시켰다. 용액을 -50 ℃까지 냉각시켜，화합물Ⅰ의 결정체B를 석출하였다. 침출, 진공건조를 통해 화학식 I 화합물 결정체B 4.9g을 얻었으며，액상 순도는 99.8%이다. XRPD, DSC, IR는 도면 1 내지 3을 참고로 하고, 액상 순도는 도면 4를 참고로 한다.

화학식 I 화합물 결정체B의 제조

40℃ 하에，8.4g의 실시예1에서 얻은 화합물Ⅰ를 99ml의 메탄올에 용해시킨 후，물1ml을 넣고 1 내지 2시간을 교반시켜 화합물Ⅰ를 완전히 용해시켰다. 용액을 15℃까지 냉각시켜，화합물Ⅰ의 결정형B를 석출하였다. 이어서, 260ml의 이소프로필 아세테이트를 천천히 적가하고，15℃에서 2시간을 교반하였다. 침출, 진공건조를 통해 화학식 I 화합물 결정체B 8.1g를 얻었으며，액상 순도는 99.8%이다. XRPD, DSC, IR는 도면 1 내지 3을 참고로 하며, 액상 순도는 도면4를 참고로 한다.

화학식I화합물의 결정체B의 제조

40℃ 하에，9.6g의 실시예1에서 얻은 화합물Ⅰ를 44ml의 메탄올에 용해시킨 후, 물6ml를 넣고，1 내지 2시간을 교반시켜 화합물Ⅰ을 완전히 용해시켰다. 용액을 15℃까지 냉각시켜 결정체B를 석출하였다. 이어서, 150ml의 이소프로필 아세테이트를 천천히 적가하고 15?C에서 2시간을 교반하였다. 침출, 진공건조를 통해 화학식I화합물 결정체B 9.2g을 얻었으며，액상 순도는 99.8%이다. XRPD, DSC, IR은 도 1 내지 3을 참고로 하며, 액상 순도는 도 4를 참고로 한다.

순도와 안정성 테스트

화학식I화합물 결정체A（미국특허5336756에 기재）를 비교예로 한다.

2.6g의 실시예1에서 얻은 화합물Ⅰ을 250ml의 둥근 바닥 플라스크에 넣고, 47.5ml의 n-프로판올을 첨가한 둥근 바닥 플라스크에 2.5ml의 물을 더 첨가하였다. 상기 둥근 바닥 플라스크를 60℃의 수욕에 넣고 교반하여 화합물Ⅰ을 완전히 용해시켰다. 실온（15 내지 20℃）에 1 내지 2일간 놓아두어 투명한 막대형 (rod-like) 결정상을 얻었다. 여과시켜 결정을 얻은 후, X선 분말 회절을 실시하였으며, 회절 패턴은 도면5를 참고로 한다. 5.58±0.2°, 8.82±0.2°, 9.70±0.2°, 16.22±0.2°, 19.54±0.2°, 20.28±0.2°, 22.42±0.2°, 및 23.62±0.2°의 2θ의 회절 각도에서 피크를 갖는다. 모액의 농도는 20.77g/l이며，결정체 수율은 58.4%이다（물질로만 계산）.보류시간 25.352와 28.205분에서 2가지 잡질이 생성되며, 순도는 97.7%로 낮아졌다.

하기 방법에 따라, 비교예, 실시예1 내지 4에서 얻은 시료의 순도 및 안정성을 비교하였다.

각각 비교예, 실시예1, 실시예2, 실시예3 및 실시예4의 시료를 취하여, 밀봉하여 25℃에서 14일간 두었다가 시료의 함량을 분석하였다(액상 순도).

결과는 하기 표를 참고로 한다.

	실험조건
시료	최초 시료 함량	25℃，14일 후 시료의 함량
비교예	97.7	95.6
실시예1	96.1	93.5
실시예2	99.8	99.6
실시예3	99.8	99.5
실시예4	99.8	99.5

상기 결과는 화학식Ⅰ화합물 결정체B가 더 우수한 안정성을 가지고 있음을 표명한다.

Claims (15)

1. (a) 화학식Ⅰ로 표시되는 화합물을 C_1-4알코올 및 C_1-4케톤으로 이루어지는 그룹에서 선택되는 하나 이상의 유기용제(ⅰ)의 수용액에 용해시켜 용액(a)을 얻는 단계;
   (b）상기 용액(a)의 온도를 낮추거나, C_3-7에스테르, 헥산, n-헵탄, n-펜탄 및 디클로로메탄으로 이루어지는 그룹에서 선택되는 하나 이상의 저극성 유기용제(ⅱ)를 용액(a)에 첨가하는 적어도 어느 하나를 통하여, 펩타이드계 물질 결정체(B)를 얻는 단계를 포함하여 구성되고;
   [화학식 Ⅰ]
   
   상기 유기용제(ⅰ)의 수용액의 총 체적에 대한 물의 함량이 0.1 내지 15v/v%인 것을 특징으로 하는, X선 회절 패턴에서 3.2±0.2°，5.4±0.2°，6.2±0.2°，9.3±0.2°의 2θ의 회절 각도에서 피크를 갖는 결정체(B)의 제조방법.
   
2. 제 1 항에 있어서,
   상기 단계(a)에서, 화학식Ⅰ로 표시되는 화합물의 용해 온도는 10 내지 80℃인것을 특징으로 하는 제조방법.
   
3. 제 1 항에 있어서,
   상기 단계(a)에서, 용액(a)의 총 체적에 대하여, 화학식 Ⅰ로 표시 된 화합물이 20 내지 250mg/ml 인 것을 특징으로 하는 제조방법.
   
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5. 제 1 항에 있어서,
   상기 유기용제(ⅰ)는 메탄올, 에탄올, 이소부탄올, 아세톤에서 선택되는 한가지 또는 여러가지의 혼합물이며, 유기용제(ⅱ)는 에틸 아세테이트, 이소프로필 아세테이트, 헥산, n-헵탄, n-펜탄, 디클로로메탄에서 선택되는 한가지 또는 여러가지의 혼합물인 것을 특징으로 하는 제조방법.
   
6. 제 1 항에 있어서,
   상기 유기용제(ⅰ)와 유기용제(ⅱ)의 체적비는 0.1 내지 10:1인 것을 특징으로 하는 제조방법.
   
7. 제 1 항에 있어서,
   상기 용액(a)의 온도를 낮추는 것은, 상기 단계(a)에서 얻은 용액의 온도를 30 내지 -50℃까지 낮추는 것임을 특징으로 하는 제조방법.
   
   
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