WO2012130136A1 - 胰高血糖素样肽-1类似物单体、二聚体及其制备方法与应用 - Google Patents

胰高血糖素样肽-1类似物单体、二聚体及其制备方法与应用 Download PDF

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WO2012130136A1
WO2012130136A1 PCT/CN2012/073173 CN2012073173W WO2012130136A1 WO 2012130136 A1 WO2012130136 A1 WO 2012130136A1 CN 2012073173 W CN2012073173 W CN 2012073173W WO 2012130136 A1 WO2012130136 A1 WO 2012130136A1
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analog
cysteine
seq
glucagon
peptide
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龚珉
徐为人
汤立达
付刚
邹美香
吴疆
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天津药物研究院
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    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/575—Hormones
    • C07K14/605—Glucagons
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    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Definitions

  • the present invention relates to the field of diabetes-related drugs, and in particular, to a GLP-1 analog dimer having an in vivo half-life of prolonged glucagon-like peptide (GLP-1).
  • GLP-1 GLP-1 analog dimer having an in vivo half-life of prolonged glucagon-like peptide
  • the present invention also relates to a process for the preparation of the GLP-1 analog dimer and its use in the preparation of a medicament for the treatment of diabetes drugs, for the treatment and/or prevention of stagnation. Background technique
  • Glucagon-like peptide-1 (GLP- 1 ) is a 37 amino acid polypeptide secreted mainly by small intestinal L cells. Its active form is
  • GLP-1 (7-37) OH and GLP-1 (7-36) NH 2 (Mojsov S, J Clin Invest. 1987 Feb; 79(2): 616-9). GLP-1 significantly reduces blood sugar after eating, stimulates insulin production, and also has a certain weight loss effect, and does not cause hypoglycemia (Drucker DJ, Diabetes. 1998 Feb; 47(2): 159-69 ). Recent studies have also shown that GLP-1 has pancreatic regeneration (Drucker DJ, 2003 Dec; 144(12): 5145-8). In addition, because GLP-1 is a fully humanized polypeptide, it has a large safety advantage as a clinical drug. However, the serum half-life of GLP-1 (7-37) is only 3-5 minutes, and multiple injections per day are very inconvenient in clinical use.
  • Another object of the present invention is to provide a process for the preparation of a GLP-1 analog dimer and a monomer thereof.
  • Still another object of the present invention is to provide a use of a GLP-1 analog dimer for the preparation of a medicament for treating diabetes, and the GLP-1 analog dimer in the preparation of a medicament for treating and/or preventing obesity Applications.
  • a further object of the present invention is to provide a pharmaceutical composition comprising a GLP-1 analogue dimer as an active ingredient, which comprises the above-mentioned GLP-1 analog dimer.
  • the pharmaceutical composition further comprises one or more pharmaceutically acceptable excipients
  • the pharmaceutical composition is preferably an injection, further preferably a lyophilized powder or a solution for injection.
  • the invention provides a glucagon-like peptide-1 analog monomer having the following formula I:
  • X 1Q is glycine or cysteine
  • X 15 is aspartic acid or cysteine
  • X 22 is glycine or cysteine
  • x 23 is leucine or cysteine
  • x 3 is leucine or cysteine
  • x 33 is valine or cysteine
  • x 1 () , x 15 , x 22 , x 23 , x 3 Only one of x and 33 is cysteine.
  • glucagon-like peptide-1 analog monomer as described above, which is selected from the group consisting of:
  • the present invention provides a glucagon-like peptide-1 analog dimer formed by the joining of two monomeric molecules conforming to Formula I, forming two of said dimers Individual monomers may be the same or different;
  • the analog dimer is linked by a disulfide bond formed by the monomer through cysteine Made.
  • the present invention provides a method for producing the glucagon-like peptide-1 analog monomer or dimer, which comprises Fmoc strategy solid phase synthesis of cysteine-containing glucagon-like peptide -1 analog monomer.
  • the cysteine of the produced glucagon-like peptide-1 analog monomer is further formed into a monomeric disulfide bond.
  • a step of. the present invention provides the use of a glucagon-like peptide-1 analog monomer or dimer as described above for the preparation of a medicament for the treatment and/or diabetes and diabetes related diseases.
  • the present invention provides the use of a glucagon-like peptide-1 analog monomer or dimer as described above for the preparation of a medicament for the treatment and/or prevention of obesity and obesity-related diseases.
  • the obesity and obesity-related diseases are obesity and obesity-related diseases caused by diabetes.
  • the present invention provides a pharmaceutical composition comprising a glucagon-like peptide-1 analog monomer or dimer as described above.
  • the pharmaceutical composition further comprises one or more pharmaceutically acceptable excipients.
  • the pharmaceutical composition is an injection.
  • the pharmaceutical composition is a lyophilized powder injection or a solution injection.
  • the present invention provides a glucagon-like peptide-1 analog monomer of the present invention or the glucagon-like peptide-1 analog dimer for treating and/or preventing diabetes, Diabetes-related diseases or obesity and obesity-related diseases.
  • the present invention provides a method of treating and/or preventing diabetes, a diabetes-related disease or an obesity and an obesity-related disease, the method comprising: administering to a subject a therapeutically effective amount of the present invention according to the present invention Glucagon-like peptide-1 analog monomer or glucagon-like peptide-1 analog dimer of the invention.
  • the obesity and obesity-related diseases are obesity and obesity-related diseases caused by diabetes.
  • the subject is a mammal, preferably a mammal. The following is a detailed description of the invention:
  • the formula of the cysteine-containing GLP-1 analogue monomer of the present invention is as follows:
  • the above cysteine-containing GLP-1 analog monomer is a synthetic sequence which is modified at amino acid 10, 15, 22, 23, 30 or 33 of GLP-1, and replaced by cysteine.
  • the original amino acid forms a GLP-1 analogue monomer containing cysteine, and the sequence is as follows:
  • the GLP-1 analog dimer is a cysteine-containing GLP-1 analog monomer which is formed by the formation of a disulfide bond by cysteine.
  • One of the above amino acid sequences may be selected as one of the monomers of the analog dimer, and the other sequence may be the same sequence or other sequence.
  • the pharmaceutical composition of the present invention is a pharmaceutical composition comprising a GLP-1 analog dimer which can be combined with one or more pharmaceutically acceptable excipients, the excipients comprising: a water-soluble filler, a pH adjuster , stabilizers, water for injection, osmotic pressure regulators, etc.
  • the water-soluble filler adjuvant of the present invention is one or more selected from the group consisting of mannitol, low molecular dextran, sorbitol, polyethylene glycol, glucose, lactose, galactose and the like.
  • the pH adjusting agent is one or more selected from the group consisting of non-volatile acids such as capric acid, phosphoric acid, lactic acid, tartaric acid, hydrochloric acid, and potassium hydroxide, sodium hydroxide or potassium hydroxide or ammonium hydroxide, and carbonic acid.
  • non-volatile acids such as capric acid, phosphoric acid, lactic acid, tartaric acid, hydrochloric acid, and potassium hydroxide, sodium hydroxide or potassium hydroxide or ammonium hydroxide, and carbonic acid.
  • Physiologically acceptable organic or inorganic acids and bases and salts such as sodium or potassium carbonate or ammonium carbonate, sodium hydrogencarbonate or potassium hydrogencarbonate or ammonium hydrogencarbonate.
  • the stabilizer is one or more selected from the group consisting of: EDTA-2Na, sodium thiosulfate, sodium metabisulfite, sodium sulfite, dipotassium hydrogen phosphate, sodium hydrogencarbonate, sodium carbonate, arginine, glutamic acid, polyethylene Alcohol 6000, polyethylene glycol 4000, sodium lauryl sulfate or trihydroxydecylaminodecane.
  • EDTA-2Na sodium thiosulfate
  • sodium metabisulfite sodium sulfite
  • sodium sulfite dipotassium hydrogen phosphate
  • arginine sodium carbonate
  • glutamic acid polyethylene Alcohol 6000
  • polyethylene glycol 4000 polyethylene glycol 4000
  • sodium lauryl sulfate or trihydroxydecylaminodecane Preferably, one or more of sodium metabisulfite, dipotassium hydrogen phosphate, arginine, polyethylene glycol 6000, and trishydroxyalkyla
  • the osmotic pressure adjusting agent is sodium chloride and/or potassium chloride.
  • the pharmaceutical composition of the present invention can be administered by intramuscular, intravenous or subcutaneous injection, and the preferred dosage form is a lyophilized powder or a solution for injection.
  • Preparation method of lyophilized injection Take appropriate amount of GLP-1 analog dimer solution, add water-soluble filler, stabilizer, osmotic pressure regulator, etc., add appropriate amount of water for injection, adjust pH to 4-8 to dissolve, Dilute to the appropriate concentration with water, add 0.1-0.5% activated carbon, stir at 0 - 10 °C for 10-20 minutes, decarburize, filter and sterilize by microporous membrane filtration, filtrate for partial packing, freeze-drying method, White loose mass, sealed, each specification contains a GLP-1 analog dimer between 5 g and 1 mg.
  • Preparation method of solution injection Take GLP-1 analog dimer solution or lyophilized powder, add water-soluble filler, stabilizer, osmotic pressure regulator, etc., add appropriate amount of water for injection, adjust pH to 4-8 Dissolve it, dilute to the appropriate concentration with water, add 0.1-0.5% activated carbon, stir at 0-10 °C for 10-20 minutes, decarburize, filter and sterilize by microporous membrane, the filtrate is divided, and the seal is obtained.
  • Each specification contains a GLP-1 analog dimer between 5 g and 1 mg.
  • the GLP-1 analog dimer of the present invention can be used in the preparation of a therapeutic drug for diabetes.
  • the composition of the present invention can be administered in the form of intravenous, intramuscular or subcutaneous injection.
  • the dosage will vary depending on the subject, mode of administration, symptoms and other factors.
  • the GLP-1 analog dimers of the invention are effective over a relatively wide dosage range. In the treatment of adults, the dose ranges from 5 g/person to 1 mg/person, once daily or once every few days.
  • the actual dose should be determined by the doctor according to the relevant circumstances, including the physical condition of the subject, the route of administration, age, weight, individual response of the patient to the drug, the severity of the patient's symptoms, etc., so the above dose range is The scope of the invention is not limited in any way.
  • the GLP-1 analog dimer of the present invention overcomes the problem of short half-life of GLP-1, and the half-life of the GLP-1 analog dimer provided in the body can reach 8 to 96 hours or more, compared with GLP administered alone.
  • the half-life of -1 (half-life is only 3-5 minutes) is significantly prolonged, greatly facilitating its clinical promotion and application.
  • Figure 1 shows the hypoglycemic test of the GLP-1 analog dimer in Example 2, wherein each time period from left to right is SEQ 1 / 1 , SEQ 1 / 2, SEQ 1/3, SEQ 1/4, SEQ 1 /5, SEQ 1/6, SEQ 1 7 and physiological saline;
  • Figure 2 shows the hypoglycemic test of the GLP-1 analog dimer in Example 3, wherein each time period from left to right is SEQ 2/1, SEQ 2/2, SEQ 2/3, SEQ 2/4, SEQ 2 /5, SEQ2/6, SEQ 2/7 and physiological saline;
  • Figure 3 shows the hypoglycemic test of the GLP-1 analog dimer in Example 4, wherein each time period from left to right is SEQ. 3/4, SEQ3/5, SEQ 3/6, SEQ3 and physiological saline.
  • Figure 4 shows the hypoglycemic test of the GLP-1 analog dimer in Example 5, wherein each time period from left to right is SEQ 4/5, SEQ 4/6, SEQ 4/7 and physiological saline;
  • Figure 5 shows the hypoglycemic test of the GLP-1 analog dimer in Example 6, wherein each time period is SEQ 5/6, SEQ 5/7 and physiological saline from left to right;
  • Figure 6 shows a hypoglycemic test of the GLP-1 analog dimer in Example 7, wherein each time period is SEQ 6/6, SEQ 6/7 and physiological saline from left to right;
  • Fig. 7 shows a hypoglycemic test of the GLP-1 analog dimer in Example 8, wherein each time period is SEQ 7/7 and physiological saline from left to right. The best way to implement the invention
  • mice used in the following examples were Kunming mice of 6-8 weeks, each weighing about 20 g.
  • Example 1 Solid phase synthesis of polypeptide
  • the synthesis of the cysteine-containing GLP-1 analog monomer of the present invention was carried out using a solid phase polypeptide synthesis method of the Fmoc strategy using a CS 336X type instrument manufactured by CSBio. The method of synthesis is carried out according to the manufacturer's instructions.
  • the prepared cysteine-containing GLP-1 analog monomer was purified using a HPLC C18 semi-preparative column, and the mobile phase was acetonitrile.
  • the dry powder of the GLP-1 analogue monomer containing cysteine is obtained by desalting and freeze-drying.
  • the disulfide bond in this embodiment is formed by ammonium hydrogencarbonate or other reducing agent.
  • Example 2 Hypoglycemic function associated with GLP-1 analog dimer (formed by SEO ID NO 1 and other GLP-1 analog monomers)
  • GLP-1 analog dimer employed is as follows:
  • the cysteine-containing GLP-1 analog monomers are the GLP-1 analog dimers of SEQ ID NO 1 and SEQ ID NO 1 , respectively ( SEQ 1 / 1 );
  • the cysteine-containing GLP-1 analog monomers are the GLP-1 analog dimers of SEQ ID NO 1 and SEQ ID NO 2, respectively ( SEQ 1/2 );
  • the cysteine-containing GLP-1 analog monomers are the GLP-1 analog dimers of SEQ ID NO 1 and SEQ ID NO 3, respectively ( SEQ 1/3 ) ;
  • the cysteine-containing GLP-1 analog monomers are SEQ ID NO 1 and SEQ ID NO, respectively.
  • the cysteine-containing GLP-1 analog monomers are the analog dimers of SEQ ID NO 1 and SEQ ID NO 5 ( SEQ 1/5 );
  • the cysteine-containing GLP-1 analog monomers are the GLP-1 analog dimers of SEQ ID NO 1 and SEQ ID NO 6 , respectively ( SEQ 1 / 6 );
  • the cysteine-containing GLP-1 analog monomer is the GLP-1 analog dimer of SEQ ID NO 1 and SEQ ID NO 7 (SEQ 1-7), respectively.
  • mice 200 ⁇ 7, 6/group, purchased from Shanghai Experimental Animal Center of Chinese Academy of Sciences.
  • the blank in this example is subcutaneous injection of physiological saline (Saline). 30 minutes after administration of 400 ⁇ ⁇ glucose injection to each mouse.
  • the blood glucose of the mice was measured at 2 hours, 24 hours, 48 hours, 72 hours, and 96 hours after the glucose injection, respectively, after the first measurement of blood glucose, each time thereafter The same dose of glucose was given again two hours before the blood glucose was measured.
  • Example 3 GLP-1 analog dimer (formed by SEO ID NO 2 and other GLP-1 analog monomers) associated hypoglycemic function.
  • GLP-1 analog dimer employed is as follows:
  • the cysteine-containing GLP-1 analog monomers are the GLP-1 analog dimers of SEQ ID NO 2 and SEQ ID NO 2, respectively ( SEQ 2/2 );
  • the cysteine-containing GLP-1 analog monomers are SEQ ID NO 2 and SEQ ID NO, respectively.
  • the cysteine-containing GLP-1 analog monomers are the GLP-1 analog dimers of SEQ ID NO 2 and SEQ ID NO 4, respectively ( SEQ 2/4 );
  • the cysteine-containing GLP-1 analog monomers are the GLP-1 analog dimers of SEQ ID NO 2 and SEQ ID NO 5, respectively ( SEQ 2/5 );
  • the cysteine-containing GLP-1 analog monomers are the GLP-1 analog dimers of SEQ ID NO 2 and SEQ ID NO 6 , respectively ( SEQ 2/6 );
  • the cysteine-containing GLP-1 analog monomers are the GLP-1 analog dimers of SEQ ID NO 2 and SEQ ID NO 7 (SEQ2 ⁇ ), respectively.
  • mice 200 ⁇ 7, 6/group, purchased from Shanghai Experimental Animal Center of Chinese Academy of Sciences.
  • the blank in this example is subcutaneous injection of physiological saline (Saline). 30 minutes after administration of 400 ⁇ ⁇ glucose injection to each mouse.
  • the blood glucose of the mice was measured at 2 hours, 24 hours, 48 hours, 72 hours, and 96 hours after the glucose injection. After the first measurement of blood glucose, the same dose of glucose was again given two hours before each blood glucose measurement.
  • GLP-1 analog dimer employed is as follows:
  • the cysteine-containing GLP-1 analog monomers are SEQ ID NO 3 and SEQ ID NO 4, respectively.
  • a GLP-1 analogue dimer SEQ 3/4 ) ;
  • the cysteine-containing GLP-1 analog monomers are the GLP-1 analog dimers of SEQ ID NO 3 and SEQ ID NO 5, respectively ( SEQ 3/5 ) ;
  • the cysteine-containing GLP-1 analog monomers are the GLP-1 analog dimers of SEQ ID NO 3 and SEQ ID NO 6 , respectively ( SEQ 3/6 ) ;
  • the cysteine-containing GLP-1 analog monomers are the GLP-1 analog dimers of SEQ ID NO 3 and SEQ ID NO 7 (SEQ. 3/7), respectively.
  • mice 200 ⁇ 7, 6/group, purchased from Shanghai Experimental Animal Center of Chinese Academy of Sciences.
  • the blank in this example is injection saline (Saline).
  • 400 glucose was injected into each mouse.
  • the blood glucose of the mice was measured at 2 hours, 24 hours, 48 hours, 72 hours, and 96 hours after the glucose injection. After the first measurement of blood glucose, the same dose of glucose was again given two hours before each blood glucose measurement.
  • GLP-1 analog dimer employed is as follows:
  • the cysteine-containing GLP-1 analog monomers are the GLP-1 analog dimers of SEQ ID NO 4 and SEQ ID NO 5, respectively ( SEQ 4/5 );
  • the cysteine-containing GLP-1 analog monomers are the GLP-1 analog dimers of SEQ ID NO 4 and SEQ ID NO 6 , respectively ( SEQ 4/6 ) ;
  • the cysteine-containing GLP-1 analog monomers are the GLP-1 analog dimers of SEQ ID NO 4 and SEQ ID NO 7 (SEQ. 4/7), respectively.
  • mice 200 ⁇ 7, 6/group, purchased from Shanghai Experimental Animal Center of Chinese Academy of Sciences.
  • the blank in this example is injection saline (Saline).
  • 400 glucose was injected into each mouse.
  • the blood glucose of the mice was measured at 2 hours, 24 hours, 48 hours, 72 hours, and 96 hours after the glucose injection. After the first measurement of blood glucose, the same dose of glucose was again given two hours before each blood glucose measurement.
  • GLP-1 analog dimer employed is as follows:
  • the cysteine-containing GLP-1 analog monomers are the GLP-1 analog dimers of SEQ ID NO 5 and SEQ ID NO 6 ( SEQ 5/6 );
  • the cysteine-containing GLP-1 analog monomers are the GLP-1 analog dimers of SEQ ID NO 5 and SEQ ID NO 7 (SEQ. 5/7), respectively.
  • mice 200 ⁇ 7, 6/group, purchased from Shanghai Experimental Animal Center of Chinese Academy of Sciences.
  • the blank in this example is injection saline (Saline).
  • 400 glucose was injected into each mouse.
  • the blood glucose of the mice was measured at 2 hours, 24 hours, 48 hours, 72 hours, and 96 hours after the glucose injection. After the first measurement of blood glucose, the same dose of glucose was again given two hours before each blood glucose measurement.
  • GLP-1 analog dimer employed is as follows:
  • the cysteine-containing GLP-1 analog monomer is the GLP-1 analog dimer of SEQ ID NO 6 and SEQ ID NO 7 (SEQ 6/7).
  • the analog dimer was dissolved in physiological saline at a concentration of 1 mg/mL and injected subcutaneously into mice (200 ⁇ 7, 6/group, purchased from Shanghai Experimental Animal Center of Chinese Academy of Sciences).
  • the blank in this example is Saline (Saline) was injected. After 30 minutes of administration, 400 glucose was injected into each mouse.
  • the blood glucose of the mice was measured at 2 hours, 24 hours, 48 hours, 72 hours, and 96 hours after the glucose injection. After the first measurement of blood glucose, the same dose of glucose was again given two hours before each blood glucose measurement.
  • GLP-1 analog dimer employed is as follows:
  • the cysteine-containing GLP-1 analog monomers are the GLP-1 analog dimers of SEQ ID NO 7 and SEQ ID NO 7 (SEQ 7/8), respectively.
  • the analog dimer was dissolved in physiological saline at a concentration of 1 mg/mL and injected subcutaneously into mice (200 ⁇ 7, 6/group, purchased from Shanghai Experimental Animal Center of Chinese Academy of Sciences).
  • the blank in this example is Saline (Saline) was injected. After 30 minutes of administration, 400 glucose was injected into each mouse.
  • the blood glucose of the mice was measured at 2 hours, 24 hours, 48 hours, 72 hours, and 96 hours after the glucose injection. After the first measurement of blood glucose, the same dose of glucose was again given two hours before each blood glucose measurement.

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Description

胰高血糖素样肽 -1类似物单体、 二聚体及其制备方法与应用 技术领域
本发明涉及糖尿病相关的药物领域， 具体而言， 本发明涉及一种具有延 长的胰高血糖素样肽（GLP-1 )类的体内半衰期的 GLP-1类似物二聚体。 本 发明还涉及该 GLP-1 类似物二聚体的制备方法以及其在制备治疗糖尿病药 物、 治疗和 /或预防月巴胖症的药物中的应用。 背景技术
胰高血糖素样肽- 1 ( glucagon-likepeptide- 1 , 以下筒称： GLP- 1 )是主要由 小肠 L细胞分泌的一种 37个氨基酸组成的多肽， 其活性形式为
GLP-l(7-37)OH和 GLP-1(7-36)NH2 (Mojsov S, J Clin Invest. 1987 Feb; 79(2): 616-9)。 GLP-1明显减低人用餐后的血糖， 能刺激胰岛素的产生， 同时还能 起到一定减肥效应，并且不会引起低血糖症（ Drucker D J, Diabetes. 1998 Feb; 47(2): 159-69)。 近期研究还表明 GLP-1有胰腺再生作用 （ Drucker D J, 2003Dec;144(12):5145-8)。 此外， 因为 GLP-1为完全人源化多肽， 作为临床 药物在安全上具有较大优势。 然而， GLP-1 ( 7-37 )的血清半衰期仅仅为 3-5 分钟， 每天多次注射给药在临床使用中非常不方便。
目前已经有不少研究采用 GLP-1类似物融合蛋白技术解决 GLP-1类似 物在体内的存留时间 ( CN90101167.3 、 CN200710018734.2、
CN200410054397.9、 CN01820232.2、 CN200380110152.7、 CN200510039265.3、 CN200610127237.1、 CN200910009642.7 ) , 然而， 现有的技术与临床理想的 目标还有很大距离，普遍都还没有达到临床标准,最近 Novo Norisk生产的利 拉鲁肽为 GLP-1类似物，其对 GLP-1进行了棕榈酸的修饰，并于 2009年于美 国上市。 但是利拉鲁肽也存在半衰期短的问题， 其剂型仍需每日注射。
因此， 目前需要解决 GLP-1在体内半衰期短的问题。 发明内容
针对临床上 GLP-1类似物在体内存留时间较短， 需要每天注射给药的缺 限， 本发明的一个目的是提供一种半衰期较长的 GLP-1的类似物二聚体及其 单体。 本发明的另一个目的是提供一种 GLP-1类似物二聚体及其单体的制备方 法。
本发明的又一个目的是提供一种 GLP-1类似物二聚体在制备治疗糖尿病 的药物中的应用， 以及该 GLP-1类似物二聚体在制备治疗和 /或预防肥胖症的 药物中的应用。
本发明的再一个目的是提供一种以 GLP-1类似物二聚体作为有效成分 的药用组合物， 其包含上述 GLP-1类似物二聚体。
其中， 所述的药物组合物还包含一种或多种药学上可接受的辅料， 并且 所述药物组合物优选为注射剂， 进一步优选为冻干粉针或溶液注射剂。 用于实现上述目的的技术方案如下：
一方面，本发明提供一种胰高血糖素样肽 -1类似物单体，所述单体具有 如下通式 I：
7HAEX10T FTSX15V SSYLE X22X23AAK EFIX30W LX33KGR G37;
其中， X1Q为甘氨酸或半胱氨酸， X15为天冬氨酸或半胱氨酸， X22为甘 氨酸或半胱氨酸， x23为亮氨酸或半胱氨酸、 x3。为丙氨酸或半胱氨酸， x33 为缬氨酸或半胱氨酸； 且 x1()、 x15、 x22、 x23、 x3。和 x33中仅有一个为半胱 氨酸。
如上所述的胰高血糖素样肽 -1类似物单体， 其选自：
SEQ ID NO 1： 7HAECT FTSDV SSYLE GQAAK EFIAW LVKGR G37 ,
SEQ ID NO 2: 7HAEGT FTSCV SSYLE GQAAK EFIAW LVKGR G37 , SEQ ID NO 3: 7HAEGT FTSCV SSYLE GQAAK EFIAW LVKGR G37 , SEQ ID NO 4: 7HAEGT FTSDV SSYLE CQAAK EFIAW LVKGR G37 , SEQ ID NO 5: 7HAEGT FTSDV SSYLE GCAAK EFIAW LVKGR G37 , SEQ ID NO 6: 7HAEGT FTSDV SSYLE GQAAK EFICW LVKGR G37 , 和
SEQ ID NO 7: 7HAEGT FTSDV SSYLE GQAAK EFIAW LCKGR G37。 另一方面，本发明提供一种胰高血糖素样肽 -1类似物二聚体，所述二聚 体由两个符合通式 I的单体分子连接形成， 形成所述二聚体的两个单体可以 相同或不同；
优选地， 所述类似物二聚体由所述单体通过半胱氨酸形成的二硫键连接 而成。 再一方面，本发明提供所述胰高血糖素样肽 -1类似物单体或二聚体的制 备方法， 所述方法包括 Fmoc策略固相合成含有半胱氨酸的胰高血糖素样肽 -1类似物单体。
优选地， 当制备胰高血糖素样肽 -1类似物二聚体时， 还包括将制得的 胰高血糖素样肽- 1类似物单体的半胱氨酸形成单体间二硫键的步骤。 又一方面， 本发明提供如前所述的胰高血糖素样肽 -1类似物单体或二 聚体在制备用于治疗和 /或糖尿病及糖尿病相关疾病的药物中的应用。 再一方面， 本发明提供如前所述的胰高血糖素样肽 -1类似物单体或二 聚体在制备用于治疗和 /或预防肥胖症及肥胖症相关疾病的药物中的应用。 优选地， 所述肥胖症及肥胖症相关疾病为由糖尿病引起的肥胖症及肥胖 症相关疾病。 还一方面， 本发明提供一种药物组合物， 所述药物组合物包含如前所述 的胰高血糖素样肽 -1类似物单体或二聚体。
优选地， 所述药物组合物中还包含一种或多种药学上可接受的辅料。 优选地， 所述药物组合物为注射剂。
更优选地， 所述药物组合物为冻干粉针剂或溶液注射剂。 再一方面，本发明提供一种本发明所述的胰高血糖素样肽 - 1类似 物单体或所述的胰高血糖素样肽 - 1 类似物二聚体治疗和 /或预防糖尿 病、 糖尿病相关疾病或肥胖症及肥胖症相关疾病。 又一方面， 本发明提供一种治疗和 /或预防糖尿病、 糖尿病相关 疾病或肥胖症及肥胖症相关疾病的方法， 所述方法包括， 向受试者 给予治疗有效量的根据本发明所述的胰高血糖素样肽 - 1 类似物单体 或本发明所述的胰高血糖素样肽 - 1类似物二聚体。 优选地， 所述肥胖症及肥胖症相关疾病为由糖尿病引起的肥胖 症及 巴胖症相关疾病。 优选地， 所述受试者为哺乳动物， 所述哺乳动物优选为人。 以下是本发明的详细描述：
( 1 )含有半胱氨酸的 GLP-1类似物单体
本发明所述的含有半胱氨酸的 GLP-1类似物单体的通式如下：
7HAEX10T FTSX15V SSYLE X22X23AAK EFIX30W LX33KGR G37。
如人源 GLP- 1的序列 7HAEGT FTSDV SSYLE GQAAK EFIAW LVKGR
G37。
上述含有半胱氨酸的 GLP-1类似物单体为人工合成序列，分别在 GLP-1 第 10、 15、 22、 23、 30或 33位氨基酸上进行了修饰， 由半胱氨酸取代了原 有的氨基酸， 形成含有半胱氨酸的 GLP-1类似物单体， 序列如下：
SEQ ID NO 1： 7HAECT FTSDV SSYLE GQAAK EFIAW LVKGR G37 ,
SEQ ID NO 2: 7HAEGT FTSCV SSYLE GQAAK EFIAW LVKGR G37 , SEQ ID NO 3 : 7HAEGT FTSCV SSYLE GQAAK EFIAW LVKGR G37 , SEQ ID NO 4: 7HAEGT FTSDV SSYLE CQAAK EFIAW LVKGR G37 , SEQ ID NO 5 : 7HAEGT FTSDV SSYLE GCAAK EFIAW LVKGR G37 , SEQ ID NO 6: 7HAEGT FTSDV SSYLE GQAAK EFICW LVKGR G37 ,
SEQ ID NO 7: 7HAEGT FTSDV SSYLE GQAAK EFIAW LCKGR G37。 GLP-1类似物二聚体为含有半胱氨酸的 GLP-1类似物单体通过半胱氨酸 形成二硫键连接而成。可以于上述氨基酸序列中选择一个作为类似物二聚体 的其中一条单体， 而与另一条可为同样的序列或其他序列。
( 2 )本发明的药用组合物
本发明的药用组合物为含有 GLP-1类似物二聚体可以与一种或多种药 学上可接受的辅料共同制成药用组合物， 这些辅料包括： 水溶性填充剂、 pH 调节剂、 稳定剂、 注射用水、 渗透压调节剂等等。
本发明所述的水溶性填充剂辅料为选自以下的一种或几种： 甘露醇、 低 分子右旋糖苷、 山梨醇、 聚乙二醇、 葡萄糖、 乳糖、 半乳糖等。
pH调节剂为选自以下的一种或几种： 枸橼酸、 磷酸、 乳酸、 酒石酸、 盐酸等非挥发性的酸以及氢氧化钾、 氢氧化钠或氢氧化钾或氢氧化铵、 碳酸 钠或碳酸钾或碳酸铵盐、碳酸氢钠或碳酸氢钾或碳酸氢铵盐等生理可接受的 有机或无机酸和碱及盐等。
稳定剂为选自以下的一种或几种： EDTA-2Na、 硫代硫酸钠、 焦亚硫酸 钠、 亚硫酸钠、 磷酸氢二钾、 碳酸氢钠、 碳酸钠、 精氨酸、 谷氨酸、 聚乙二 醇 6000、 聚乙二醇 4000、 十二烷基硫酸钠或三羟曱基氨基曱烷等。 优选焦 亚硫酸钠、 磷酸氢二钾、 精氨酸、 聚乙二醇 6000、 三羟曱基氨基曱烷中的一 种或几种。
渗透压调节剂是氯化钠和 /或氯化钾。
( 3 )注射剂的制备方法
本发明的药用组合物可以通过肌肉、 静脉内、 皮下注射途经进行给药， 优选的剂型为冻干粉或溶液注射剂。
冷冻干燥注射剂的制备方法： 取 GLP-1类似物二聚体溶液适量，加入水 溶性填充剂、 稳定剂、 渗透压调节剂等， 加入注射用水适量， 调节 PH值至 4-8使其溶解， 加水稀释至适当浓度， 加入 0.1-0.5%活性炭， 在 0 - 10°C下搅 拌 10-20分钟， 脱碳， 采用微孔滤膜过滤除菌， 滤液进行分装， 采用冷冻干 燥法， 制得白色疏松块状物， 封口即得， 每个规格含有 GLP-1类似物二聚体 在 5 g到 lmg之间。
溶液注射液的制备方法： 取 GLP-1类似物二聚体溶液或冻干粉适量， 加 入水溶性填充剂、 稳定剂、 渗透压调节剂等， 加入注射用水适量， 调节 pH 值至 4-8使其溶解， 加水稀释至适当浓度， 加入 0.1-0.5%活性炭， 在 0-10°C 下搅拌 10-20分钟， 脱碳， 采用微孔滤膜过滤除菌， 滤液进行分装， 封口即 得， 每个规格含有 GLP-1类似物二聚体在 5 g到 lmg之间。
( 4 ) 药用组合物的用途
本发明的 GLP-1类似物二聚体可以用在制备糖尿病治疗药物方面。具体 地， 本发明的组合物可以静脉、 肌肉或皮下注射剂形式给药。 剂量依治疗对 象、 给药方式、 症状及其它因素而改变。 本发明的 GLP-1类似物二聚体在相 当宽的剂量范围内是有效的。 在成人的治疗中， 剂量范围在 5 g/人 -lmg/人， 每日一次或每几日一次给药。 实际剂量应该由医生根据有关的情况来决定， 这些情况包括被治疗者的身体状态、 给药途径、 年龄、 体重、 患者对药物的 个体反应， 患者症状的严重程度等等， 因此上述剂量范围并不是以任何方式 限制本发明的范围。 本发明的 GLP-1类似物二聚体克服了 GLP-1半衰期短的问题， 所提供 的 GLP-1类似物二聚体在体内的半衰期可达到 8 ~ 96小时以上，较单独给药 的 GLP-1的半衰期（半衰期仅为 3-5分钟 )明显延长， 极大地便利了其临床 推广和应用。 附图的简要说明
以下， 结合附图来详细说明本发明的实施例， 其中：
图 1显示实施例 2中 GLP-1类似物二聚体的降血糖实验， 其中， 每个 时间段从左到右均依次为 SEQ1/1、 SEQl/2、 SEQl/3、 SEQl/4、 SEQl/5、 SEQ1/6, SEQ1/7和生理盐水；
图 2显示实施例 3中 GLP-1类似物二聚体的降血糖实验，其中，每个时 间段从左到右均依次为 SEQ2/1、 SEQ2/2、 SEQ2/3 , SEQ2/4, SEQ2/5 , SEQ2/6, SEQ2/7和生理盐水；
图 3显示实施例 4中 GLP-1类似物二聚体的降血糖实验，其中，每个时 间段从左到右均依次为 SEQ3/4、 SEQ3/5、 SEQ3/6、 SEQ3〃和生理盐水； 图 4显示实施例 5中 GLP-1类似物二聚体的降血糖实验，其中，每个时 间段从左到右均依次为 SEQ4/5、 SEQ4/6、 SEQ4/7和生理盐水；
图 5显示实施例 6中 GLP-1类似物二聚体的降血糖实验，其中，每个时 间段从左到右均依次为 SEQ5/6、 SEQ5/7和生理盐水；
图 6显示实施例 7中 GLP-1类似物二聚体的降血糖实验，其中，每个时 间段从左到右均依次为 SEQ6/6、 SEQ6/7和生理盐水；
图 7显示实施例 8中 GLP-1类似物二聚体的降血糖实验，其中，每个时 间段从左到右均依次为 SEQ7/7和生理盐水。 实施发明的最佳方式
可以理解的是， 在此描述的特定实施方式通过举例的方式来表示， 其并 不作为对本发明的限制。 在不偏离于本发明范围的情况下， 本发明的主要特 征可以用于各种实施方式。 本领域的技术人员将会意识到或能够确认， 仅仅 使用常规实验， 许多等同物都能应用于本文所描述的特定步骤中。 这些等同 物被认为处在本发明的范围之内， 并且被权利要求所覆盖。
在以下的实施例中， 未详细描述的各种过程和方法是本领域中公知的 常规方法。 以下实施例中所用的小鼠为 6-8周的昆明小鼠 , 每只重约 20g。 实施例 1：多肽的固相合成
使用 Fmoc策略的固相多肽合成方法，使用 CSBio公司生产的 CS 336X 型仪器进行本发明的含有半胱氨酸的 GLP-1类似物单体的合成。 合成的方 法按照生产商的仪器说明书进行。
将制得的含有半胱氨酸的 GLP-1类似物单体使用 HPLC C18半制备柱 进行纯化， 流动相为乙腈。 经脱盐及冷冻干燥得到含有半胱氨酸的 GLP-1 类似物单体干粉。本实施例中的二硫键通过碳酸氢铵或其他还原剂来形成。 实施例 2: GLP-1类似物二聚体 (由 SEO ID NO 1及其他 GLP-1类似 物单体形成）相关的降血糖功能
本实施例中， 采用的 GLP-1类似物二聚体如下：
含有半胱氨酸的 GLP-1类似物单体分别为 SEQ ID NO 1与 SEQ ID NO 1 的 GLP-1类似物二聚体（ SEQ1/1 ) ；
含有半胱氨酸的 GLP-1类似物单体分别为 SEQ ID NO 1 与 SEQ ID NO 2的 GLP-1类似物二聚体 ( SEQ1/2 ) ；
含有半胱氨酸的 GLP-1类似物单体分别为 SEQ ID NO 1 与 SEQ ID NO 3的 GLP-1类似物二聚体 ( SEQ1/3 ) ；
含有半胱氨酸的 GLP-1类似物单体分别为 SEQ ID NO 1 与 SEQ ID NO
4的 GLP-1类似物二聚体 ( SEQ 1/4 ) ；
含有半胱氨酸的 GLP-1类似物单体分别为 SEQ ID NO 1 与 SEQ ID NO 5的类似物二聚体 ( SEQ1/5 ) ；
含有半胱氨酸的 GLP-1类似物单体分别为 SEQ ID NO 1 与 SEQ ID NO 6的 GLP-1类似物二聚体 ( SEQ1/6 ) ；
含有半胱氨酸的 GLP-1类似物单体分别为 SEQ ID NO 1 与 SEQ ID NO 7的 GLP-1类似物二聚体 ( SEQ1/7 ) 。
分别将上述类似物二聚体（共计 7种）分别溶于生理盐水中， 浓度均为 1 mg/ mL, 皮下注射于小鼠（200 μΙ7只， 6只 /组， 购自中科院上海实验动物 中心） ， 本实施例中的空白为皮下注射生理盐水（Saline ) 。 给药 30分钟后 将 400 μβ葡萄糖注射于每只小鼠。 分别于葡萄糖注射后 2小时、 24小时、 48小时、 72小时及 96小时测定小鼠的血糖， 第一次测量血糖后， 以后每次 测血糖前两个小时再次给相同剂量的葡萄糖。
结果见图 1 , 结果显示上述的 GLP-1类似物二聚体具有较长的体内半衰 期。 实施例 3: GLP-1类似物二聚体 (由 SEO ID NO 2及其他 GLP-1类似 物单体形成）相关的降血糖功能。
本实施例中， 采用的 GLP-1类似物二聚体如下：
含有半胱氨酸的 GLP-1类似物单体分别为 SEQ ID N0 2 与 SEQ ID NO 2的 GLP-1类似物二聚体 ( SEQ2/2 ) ；
含有半胱氨酸的 GLP-1类似物单体分别为 SEQ ID NO 2 与 SEQ ID NO
3的 GLP-1类似物二聚体 ( SEQ2/3 ) ；
含有半胱氨酸的 GLP-1类似物单体分别为 SEQ ID NO 2 与 SEQ ID NO 4的 GLP-1类似物二聚体 ( SEQ2/4 ) ；
含有半胱氨酸的 GLP-1类似物单体分别为 SEQ ID NO 2 与 SEQ ID NO 5的 GLP-1类似物二聚体 ( SEQ2/5 ) ；
含有半胱氨酸的 GLP-1类似物单体分别为 SEQ ID NO 2 与 SEQ ID NO 6的 GLP-1类似物二聚体 ( SEQ2/6 ) ；
含有半胱氨酸的 GLP-1类似物单体分别为 SEQ ID NO 2与 SEQ ID NO 7 的 GLP-1类似物二聚体（ SEQ2〃 ) 。
分别将上述类似物二聚体（共计 6种）分别溶于生理盐水中， 浓度均为 lmg/mL, 皮下注射于小鼠（200μΙ7只， 6只 /组， 购自中科院上海实验动物 中心） ， 本实施例中的空白为皮下注射生理盐水（Saline ) 。 给药 30分钟后 将 400 μβ葡萄糖注射于每只小鼠。 分别于葡萄糖注射后 2小时、 24小时、 48小时、 72小时及 96小时测定小鼠的血糖， 第一次测量血糖后， 以后每次 测血糖前两个小时再次给相同剂量的葡萄糖。
结果见图 2, 结果显示上述的 GLP-1类似物二聚体具有较长的体内半衰 期。 实施例 4: GLP-1类似物二聚体 (由 SEO ID NO 3及其他 GLP-1类似 物单体形成）相关的降血糖功能
本实施例中， 采用的 GLP-1类似物二聚体如下：
含有半胱氨酸的 GLP-1类似物单体分别为 SEQ ID NO 3与 SEQ ID NO 4 的 GLP-1类似物二聚体（ SEQ3/4 ) ；
含有半胱氨酸的 GLP-1类似物单体分别为 SEQ ID NO 3 与 SEQ ID NO 5的 GLP-1类似物二聚体 ( SEQ3/5 ) ；
含有半胱氨酸的 GLP-1类似物单体分别为 SEQ ID NO 3 与 SEQ ID NO 6的 GLP-1类似物二聚体 ( SEQ3/6 ) ；
含有半胱氨酸的 GLP-1类似物单体分别为 SEQ ID NO 3 与 SEQ ID NO 7的 GLP-1类似物二聚体 ( SEQ3/7 ) 。
将上述类似物二聚体（共计 4种）分别溶于生理盐水中， 浓度均为 1 mg/mL, 皮下注射于小鼠（200μΙ7只， 6只 /组， 购自中科院上海实验动物中 心 ) ,本实施例中的空白为注射生理盐水（ Saline )。给药 30分钟后将 400 葡萄糖注射于每只小鼠。 分别于葡萄糖注射后 2小时、 24小时、 48小时、 72小时及 96小时测定小鼠的血糖， 第一次测量血糖后， 以后每次测血糖前 两个小时再次给相同剂量的葡萄糖。
结果见图 3 , 结果显示上述的 GLP-1类似物二聚体具有较长的体内半衰 期。 实施例 5: GLP-1类似物二聚体 (由 SEO ID NO 4及其他 GLP-1类似 物单体形成）相关的降血糖功能
本实施例中， 采用的 GLP-1类似物二聚体如下：
含有半胱氨酸的 GLP-1类似物单体分别为 SEQ ID NO 4与 SEQ ID NO 5 的 GLP-1类似物二聚体（ SEQ4/5 ) ；
含有半胱氨酸的 GLP-1类似物单体分别为 SEQ ID N0 4 与 SEQ ID NO 6的 GLP-1类似物二聚体 ( SEQ4/6 ) ；
含有半胱氨酸的 GLP-1类似物单体分别为 SEQ ID NO 4 与 SEQ ID NO 7的 GLP-1类似物二聚体 ( SEQ4/7 ) 。
将上述类似物二聚体（共计 3种）分别溶于生理盐水中，浓度均为 1 mg/L, 皮下注射于小鼠（200μΙ7只， 6只 /组， 购自中科院上海实验动物中心） ， 本 实施例中的空白为注射生理盐水（ Saline )。 给药 30分钟后将 400 葡萄糖 注射于每只小鼠。 分别于葡萄糖注射后 2小时、 24小时、 48小时、 72小时 及 96小时测定小鼠的血糖， 第一次测量血糖后， 以后每次测血糖前两个小 时再次给相同剂量的葡萄糖。
结果见图 4, 结果显示上述的 GLP-1类似物二聚体具有较长的体内半衰 期。 实施例 6: GLP-1类似物二聚体 (由 SEQ ID NO 5及其他 GLP-1类似 物单体形成）相关的降血糖功能
本实施例中， 采用的 GLP-1类似物二聚体如下：
含有半胱氨酸的 GLP-1类似物单体分别为 SEQ ID NO 5与 SEQ ID NO 6 的 GLP-1类似物二聚体（ SEQ5/6 ) ；
含有半胱氨酸的 GLP-1类似物单体分别为 SEQ ID NO 5 与 SEQ ID NO 7的 GLP-1类似物二聚体 ( SEQ5/7 ) 。
将上述类似物二聚体（共计 2种）分别溶于生理盐水中， 浓度均为 1 mg/mL, 皮下注射于小鼠（200μΙ7只， 6只 /组， 购自中科院上海实验动物中 心 ) ,本实施例中的空白为注射生理盐水（ Saline )。给药 30分钟后将 400 葡萄糖注射于每只小鼠。 分别于葡萄糖注射后 2小时、 24小时、 48小时、 72小时及 96小时测定小鼠的血糖， 第一次测量血糖后， 以后每次测血糖前 两个小时再次给相同剂量的葡萄糖。
结果见图 5结果显示上述的 GLP-1类似物二聚体具有较长的体内半衰 期。 实施例 7: GLP-1类似物二聚体 (由 SEO ID NO 6及其他 GLP-1类似 物单体形成）相关的降血糖功能
本实施例中， 采用的 GLP-1类似物二聚体如下：
含有半胱氨酸的 GLP-1类似物单体为 SEQ ID NO 6 与 SEQ ID NO 7的 GLP-1类似物二聚体（ SEQ6/7 ) 。
将此类似物二聚体溶于生理盐水中， 浓度为 1 mg/ mL, 皮下注射于小鼠 ( 200μΙ7只， 6只 /组， 购自中科院上海实验动物中心） ， 本实施例中的空白 为注射生理盐水（Saline )。给药 30分钟后将 400 葡萄糖注射于每只小鼠。 分别于葡萄糖注射后 2小时、 24小时、 48小时、 72小时及 96小时测定小鼠 的血糖， 第一次测量血糖后， 以后每次测血糖前两个小时再次给相同剂量的 葡萄糖。
结果见图 6, 结果显示上述的 GLP-1类似物二聚体具有较长的体内半衰 期。 实施例 8: GLP-1类似物二聚体 (由 SEO ID NO 7及 SEQ ID NO 7类 似物单体形成）相关的降血糖功能
本实施例中， 采用的 GLP-1类似物二聚体如下：
含有半胱氨酸的 GLP-1类似物单体分别为 SEQ ID NO 7 与 SEQ ID NO 7的 GLP-1类似物二聚体 ( SEQ7/8 ) 。
将此类似物二聚体溶于生理盐水中， 浓度为 I mg/ mL, 皮下注射于小鼠 ( 200μΙ7只， 6只 /组， 购自中科院上海实验动物中心） ， 本实施例中的空白 为注射生理盐水（Saline )。给药 30分钟后将 400 葡萄糖注射于每只小鼠。 分别于葡萄糖注射后 2小时、 24小时、 48小时、 72小时及 96小时测定小鼠 的血糖， 第一次测量血糖后， 以后每次测血糖前两个小时再次给相同剂量的 葡萄糖。
结果见图 7, 结果显示上述的 GLP-1类似物二聚体具有较长的体内半衰 期。

Claims

权 利 要 求
1、 一种胰高血糖素样肽 -1类似物单体， 其特征在于， 所述单体具有如 下通式：
7HAEX10T FTSX15V SSYLE X22X23AAK EFIX30W LX33KGR G37;
其中， X1Q为甘氨酸或半胱氨酸， X15为天冬氨酸或半胱氨酸， X22为甘 氨酸或半胱氨酸， X23为亮氨酸或半胱氨酸、 X3。为丙氨酸或半胱氨酸， X33 为缬氨酸或半胱氨酸； 且 X1()、 X15、 X22、 X23、 X3。和 X33中仅有一个为半胱 氨酸。
2、根据权利要求 1所述的胰高血糖素样肽 -1类似物单体，其特征在于， 所述单体选自：
SEQ ID NO 1： 7HAECT FTSDV SSYLE GQAAK EFIAW LVKGR G37 , SEQ ID NO 2: 7HAEGT FTSCV SSYLE GQAAK EFIAW LVKGR G37 , SEQ ID NO 3 : 7HAEGT FTSCV SSYLE GQAAK EFIAW LVKGR G37 ,
SEQ ID NO 4: 7HAEGT FTSDV SSYLE CQAAK EFIAW LVKGR G37 , SEQ ID NO 5 : 7HAEGT FTSDV SSYLE GCAAK EFIAW LVKGR G37 , SEQ ID NO 6: 7HAEGT FTSDV SSYLE GQAAK EFICW LVKGR G37 , 和
SEQ ID NO 7: 7HAEGT FTSDV SSYLE GQAAK EFIAW LCKGR G37。
3、 一种胰高血糖素样肽 -1类似物二聚体， 其特征在于， 所述二聚体由 两个权利要求 1或 2所述的单体连接形成，形成所述二聚体的单体可以相同 或不同；
优选地， 所述二聚体由所述单体通过半胱氨酸形成的二硫键连接而成。
4、 根据权利要求 1或 2所述胰高血糖素样肽 -1类似物单体或权利要求 3所述的胰高血糖素样肽 -1类似物二聚体的制备方法， 其特征在于， 所述方 法包括 Fmoc策略固相合成含有半胱氨酸的胰高血糖素样肽 -1类似物单体， 优选地， 当制备胰高血糖素样肽 -1类似物二聚体时， 还包括将制得的胰高 血糖素样肽 -1类似物单体的半胱氨酸形成单体间二硫键的步骤。
5、权利要求 1-2中任一项所述的胰高血糖素样肽 -1类似物单体或权利 要求 3所述的胰高血糖素样肽 -1类似物二聚体在制备用于治疗和 /或预防糖 尿病及糖尿病相关疾病的药物中的应用。
6、权利要求 1-2中任一项所述的胰高血糖素样肽 -1类似物单体或权利 要求 3所述的胰高血糖素样肽 -1类似物二聚体在制备用于治疗和 /或预防肥 胖症及肥胖症相关疾病的药物中的应用， 优选地， 所述肥胖症及肥胖症相关 疾病为由糖尿病引起的肥胖症及肥胖症相关疾病。
7、 一种药物组合物， 其特征在于， 所述药物组合物包含权利要求 1-2 任一项所述的胰高血糖素样肽 -1类似物单体或权利要求 3所述的胰高血糖 素样肽 -1类似物二聚体。
8、 根据权利要求 7所述的药物组合物， 其特征在于， 所述药物组合物 中还包含一种或多种药学上可接受的载体；
优选地， 所述药学上可接受的载体选自： 水溶性填充剂、 pH调节剂、 稳定剂、 注射用水和渗透压调节剂；
更优选地， 所述水溶性填充剂选自以下的一种或几种： 甘露醇、 低分子 右旋糖苷、 山梨醇、 聚乙二醇、 葡萄糖、 乳糖和半乳糖；
更优选地， 所述 pH调节剂为生理可接受的酸、 碱和 /或盐， 优选选自以 下的一种或几种：
非挥发性酸如枸橼酸、 磷酸、 乳酸、 酒石酸或盐酸，
碱如氢氧化钾、 氢氧化钠或氢氧化钾或氢氧化铵，
盐如碳酸钠或碳酸钾或碳酸铵盐， 碳酸氢钠或碳酸氢钾或碳酸氢铵盐； 更优选地， 所述稳定剂为选自以下的一种或几种： EDTA-2Na、 硫代硫 酸钠、 焦亚硫酸钠、 亚硫酸钠、 磷酸氢二钾、 碳酸氢钠、 碳酸钠、 精氨酸、 谷氨酸、 聚乙二醇 6000、 聚乙二醇 4000、 十二烷基硫酸钠或三羟曱基氨基 曱烷等， 进一步优选自： 焦亚硫酸钠、磷酸氢二钾、精氨酸、聚乙二醇 6000、 三羟曱基氨基曱烷中的一种或几种；
更优选地， 所述渗透压调节剂选自氯化钠和 /或氯化钾。
9、 根据权利要求 7或 8所述的药物组合物， 其特征在于， 所述药物组 合物为注射剂， 优选地， 所述药物组合物为冻干粉针剂或溶液注射剂。
10、 一种治疗和 /或预防糖尿病、 糖尿病相关疾病或肥胖症及肥 胖症相关疾病的方法， 所述方法包括， 向受试者给予治疗有效量的 根据权利要求 1 -2中任一项所述的胰高血糖素样肽 - 1类似物单体或权 利要求 3所述的胰高血糖素样肽 - 1类似物二聚体， 优选地， 所述肥胖 症及肥胖症相关疾病为由糖尿病引起的肥胖症及肥胖症相关疾病； 更优选地， 所述受试者为哺乳动物， 所述哺乳动物优选为人。
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