WO2012065201A1 - Zusammensetzung umfassend ein peptid und ein hemmstoff der viralen neuraminidase - Google Patents

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peptide
inhibitor
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influenza
amino acids
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Bernhard Fischer
Rudolf Lucas
Hendrik Fischer
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Definitions

  • composition comprising a peptide and a
  • the present invention relates to pharmaceutical compositions for the treatment of influenza.
  • influenza is a severe disease of the respiratory tract and the whole organism caused by influenza viruses.
  • the influenza viruses belong to the family of orthomyxoviruses, which are characterized by a segmented RNA genome in negative strand orientation.
  • the human-relevant representatives are the influenza A and B viruses, in particular the subtype A is known to be the causative agent of high-febrile respiratory diseases.
  • all influenza viruses have a zoonitic potential, i. a transfer from the chicken or pig to humans is possible.
  • influenza periodically occurs as a pandemic, which usually originates in Southeast Asia and China and spreads from there worldwide. Influenza virus pandemics are associated with a high number of deaths not only in the elderly, but also in adolescents. According to the WHO, annual seasonal influenza causes approximately 3 to 5 million cases of severe illness worldwide, with a death rate of 250,000 to 500,000. The most common cause of death is influenza pneumonia resulting in respiratory failure, but also cardiovascular damage such as myocarditis (heart muscle inflammation) or pericarditis (Pericarditis) occur. An inflammation of the brain or meninges (meningoencephalitis) or the damage of other organ systems (especially kidney) come as a more frequent cause of death in question.
  • the incubation period is usually 4-5 days, but shorter.
  • the disease begins with the sudden onset of headache, chills, chills and coughing. High fever up to 41 ° C, muscle pain, loss of appetite and general feeling of weakness follow. This phase lasts about 3 days, after which the fever goes back and has mostly fallen to normal values from the sixth day, the virus is eliminated from the body. The cough may last for several weeks.
  • Severe, life-threatening influenza occurs when primary symptoms of viral interstitial (often hemorrhagic) pneumonia follow the symptoms described developed. It occurs in addition to weakened persons in about 25% of healthy or undamaged persons, and may take up to 2 weeks. Such pneumonia can be detected by the increase in lung weight.
  • Pneumonia may also be secondary to bacterial over-infection (including Streptococcus pneumoniae, Staphylococcus aureus and Haemophilus influenzae). Enabling factors for these complications include other lung diseases (eg asthma), immune deficiency, age (infants and ⁇ l ⁇ tere people), diabetes, lung injuries, smoking. People with these complications are therefore the primary target group for vaccination.
  • bacterial over-infection including Streptococcus pneumoniae, Staphylococcus aureus and Haemophilus influenzae.
  • Enabling factors for these complications include other lung diseases (eg asthma), immune deficiency, age (infants and ⁇ l ⁇ tere people), diabetes, lung injuries, smoking. People with these complications are therefore the primary target group for vaccination.
  • Influenza viruses enter the organism by droplet infection and infect by binding of the HA protein to terminal neuraminic acid residues on the epithelial cells of the oral, nasal and pharyngeal mucosa. From here they spread to the lower respiratory tract. Cell destruction can be observed in the ciliated epithelia and the mucous-producing skin layers of all areas of the respiratory tract. If primary, interstitial pneumonia develops, the virus is transmitted to the cells of the lung parenchyma. One finds strong swelling of the alveolar walls, whose epithelium is often completely removed by the cell destruction. Such swelling of lung tissue can be detected by the increase in lung weight.
  • vaccines against influenza A and B infections are available. These are killed viruses that are bred in chicken eggs and / or cell culture. The vaccine has reached its full effectiveness about two weeks after vaccination. Due to the high variability of influenza viruses, however, the vaccines need to be adjusted annually for aktu ⁇ ell circulating virus subtypes and subtype variants.
  • inhibitors of viral neuraminidase are used, which prevent the detachment of newly replicated virus particles from the host cell. They are preferably used shortly after successful and proven infection with influenza viruses in order to stem the spread of virus in the early phase of the infection (WO 2003/026567 A2).
  • the inhibitors of viral neuraminidase intervene only in the multiplication of viruses, but can not inactivate already existing in the body viruses. Neuraminidase inhibitors can only help to reduce the duration of the illness slightly (on average by one day in adults).
  • the present invention is intended to provide improved pharmaceutical compositions for the treatment of infections with influenza viruses.
  • the present invention relates to a composition
  • a composition comprising
  • a peptide which consists of 7-17 contiguous amino acids and the hexamer TX1EX2X3E, wherein Xi, X2 and X3 can be any natural or unnatural amino acid, said peptide having no TNF receptor binding activity and is cyclic Siert, and
  • neuraminidase inhibitors can be surprisingly improved if a peptide as defined above is used in combination with a neuraminidase inhibitor for the treatment of influenza infections.
  • a prophylactic use of the composition according to the invention is thus indicated.
  • the present invention has proven particularly efficient in the treatment of pneumonia caused by influenza viruses.
  • the peptides to be used according to the invention are known, for example, from European Patent EP 1 264 599 B1 (or from US 2007/299003 A, WO 94/18325 A1 or WO 2008/148545 A1) and have been described in the prior art for the treatment of fluid accumulations ( Pulmonary edema) and in particular for the reabsorption of these fluid collections.
  • these peptides are also useful in influencing the reverse flow of liquid across the endothelium of the capillaries into the epithelium of the lung and therefore can also be used to prevent and treat the hyperpermeability of epithelial cells and endothelial cells (WO 2010/099556 A).
  • peptides which are known per se and which are used according to the invention together with the neuraminidase inhibitor, have no TNF receptor binding activity (Hribar et al., Eur. J. Immunol., 1999; Elia et al., AJRCCM 2003; also: example part below) and are cyclized.
  • Preferred variants of these peptides consist of 7-17 contiguous amino acids and contain the hexamer TPEGAE (SEQ ID NO: 4).
  • WO 2010/099556 AI as well as EP 1 264 599 AI are directed to the treatment of certain pathological symptoms in the lung and not to the prevention and treatment of a disease with a particular pathogen, the use according to the present invention is one completely different:
  • the claimed peptides (inter alia, according to WO 2010/099556 AI) support the effect of Neuraminidasehemmer in a synergistic manner in the combination preparation according to the invention.
  • the use according to the present invention therefore aims directly at the infection by influenza viruses and not at general symptoms that can be triggered by several different pathogens (as described for example in WO 2010/099556 AI or in EP 1 264 599 AI the case is) .
  • neuraminidase inhibitors can only inhibit the multiplication of inbred avian viruses, it is not possible to reduce living viruses thereby;
  • neuraminidase inhibitors can only inhibit the multiplication of inbred avian viruses, it is not possible to reduce living viruses thereby;
  • the combination of neuraminidase inhibitors and the claimed peptides leads to a significant improvement in the control of influenza.
  • a person skilled in the art receives no suggestions for this combination, on the contrary:
  • the composition of the invention comprises a cyclized peptide consisting of a sequence of consecutive amino acids selected from the group consisting of
  • PKDTPEGAELKP Y (SEQ ID NO: 6)
  • the peptide in the composition comprises the amino acid sequence CGQRETPEGAEAKPWYC (SEQ ID NO: 1) and is cyclized via the C residues.
  • This particularly preferred peptide thus has the following amino acid sequence (SEQ ID No. 1)
  • the cyclization of the peptides of the invention may be e.g. either by direct cyclization via a disulfide bridge between the two C residues at the N and C terminus, or by coupling the peptide to a carrier via both cysteines.
  • the cysteine residues are preferably provided in the peptides according to the invention at the beginning and at the end of the molecule.
  • Other functional groups which achieve cyclization of the peptide may also be employed, e.g.
  • an acid group with an amine or alcohol leads to an amide or ester ring closure
  • the amino acids aspartic acid and glutamic acid can be cyclized with serine, threonine, tyrosine, asparagine, glutamine or lysine, preferably intramolecularly.
  • the cyclization of the peptide is preferably by a disulfide bridge between the C residues of the peptide (if present).
  • CGQRETPEGAEAKPWYC SEQ ID NO: 8
  • CGQRETPEGAEARPWYC SEQ ID NO: 9
  • CGQRETPEGAEAKPC SEQ ID NO: 10
  • CQRETPEGAEAKPWYC SEQ ID NO: 11
  • CGQRETPEGAEAKFWYC SEQ ID NO: 12
  • the cyclization can also be effected by binding of the peptide to carrier substances.
  • Carrier substances are all common pharmaceutically usable substances in question, which are able, for example, to enter into a covalent bond with the SH groups of cysteines (or with other naturally present or artificially introduced chemically reactive groups of the peptide), with common carrier proteins, such as keyhole limpet hemocyanin (KLH), tetanus toxin, etc., are particularly suitable. It is also possible to provide adjacent bifunctional radicals on the carrier (for example acid group in addition to amine or alcohol group).
  • cyclization encompasses both intramolecular ring closure and incorporation of a carrier (from which the bound peptide protrudes (by binding the N and C termini of the peptide to the carrier)), wherein the thus cyclized peptide shows the cyclic spatial structure and is stabilized accordingly.
  • Inhibitors of viral neuraminidase are known and have already been proven in the prevention and treatment of influenza.
  • Such viral neuraminidase inhibitors (such as zanamivir, oseltamivir, laninamivir or peramivir) prevent detachment of newly replicated viral particles from the host cell.
  • the virus spread in the early phase of the infection can be contained.
  • neuraminidase inhibitors intervene only in the multiplication of viruses, but can not inactivate already existing viruses in the body, so that often only the duration of the disease can be shortened slightly (on average by one day in adults). Above all, however, as a rule, the symptoms of influenza, in particular pneumonia, which usually leads to particular complications, can not be effectively combated or prevented.
  • Neuraminidase is an essential enzyme for the reproduction of the influenza virus and has been described as a "molecular scissors" responsible for the release of the virus.
  • Neuraminidase inhibitors include analogs of sialic acid, which represent a new class of second generation antiviral agents that exhibit activity against influenza A and B viruses.
  • Neuraminidase inhibitors according to the present invention may be all previously proposed compounds, such as summarized in US 2008/0063722 AI (also for preferred pharmaceutical formulations of such substances). These substances may inhibit at least one enzymatic activity of the neuro-inidase protein of a virulent strain of a type A or type B influenza virion. Such substances can be used both for the prophylaxis and for the treatment of influenza; however, in combination with the above-defined peptides according to the present invention, this effect is significantly improved.
  • neuraminidase inhibitors that can be used in the present composition are described, for example, in U.S. Patents 5,453,533, 5,763,483, 5,952,375, 5,958,973, 5,512,596, 5,886,213, 5,602,277, 6,410,594, 5,360,817, 5,866,601, 6,340,702, 6,451,766, 6,455,571, 6,593,314, 6,509,359 , 6,518,305 and 6,831,096.
  • Substances which are already used in humans (or at least in clinical trials are), and thus are particularly preferred are, for example, CS-8958 (RI 18958; US 2008/0063722 Al), zanamivir (GG167, RELENZA ®), peramivir (RWJ -270 201, BCX-1812), oseltamivir phosphate (Ro64-0796, GS4104), oseltamivir carboxylate (Ro64-0802, GS4071) and oseltamivir (GS4104, TAMIFLU ®).
  • the neuraminidase inhibitors are encompassed in all effective chemical forms, ie as salts, racemic, optically pure and / or saltless forms (also in the form of, for example, the enantiomer or diastereomer).
  • the viral neuraminidase inhibitor is zanamivir or oseltamivir; These substances are preferred because they are already used particularly successfully for treatment in humans.
  • the composition of the invention comprises a pharmaceutically acceptable carrier and is prepared as a pharmaceutical composition suitable for human administration.
  • a pharmaceutical composition refers to any composition comprising a neuraminidase inhibitor and a peptide as defined above (of course also suitable (ie, non-negatively interfering) mixtures of such substances) which prevents, ameliorates, or improves the conditions described herein
  • a pharmaceutical composition refers to a combination of composition comprising a neuraminidase inhibitor and a peptide as described above and a pharmaceutically acceptable carrier or excipient (both terms can be used interchangeably).
  • Suitable examples of carriers or excipients known to those skilled in the art are water, saline, sodium phosphate, sodium acetate, sodium carbonate, citrate, glycine, glycylglycine, histidine, lysine, arginine, TRIS and sodium citrate, or mixtures thereof.
  • Ringer's solution, dextrose solution or solutions can not be reducible sugar is ⁇ sets; Accordingly, mannitol, trehalose, sucrose, sorbitol, fructose, maltose, lactose or dextran, Hank's solution, fixed oils, ethyl oleate, 5% dextrose in saline, substances that improve isotonicity and chemical stability, buffers and preservatives are also suitable such carriers.
  • Other suitable carriers include any carrier that does not itself induce the production of antibodies harmful to the composition-sustaining individual, such as proteins, polysaccharides, polylactic acids, polyglycolic acids, polymeric amino acids and amino acid copolymers.
  • the relevant guidelines eg the (European or US) Pharmacopoeia
  • the peptide provided in the composition according to the invention can also be cyclized by direct covalent binding to these carriers.
  • the pharmaceutical composition according to the invention may be administered (as a medicament) with any suitable method which is within the knowledge of the person skilled in the art, in particular it is preferred to administer the peptide or composition according to the invention into the lung.
  • influenza plays a certain role in animals and the composition of the invention can of course be used for the prevention and prophylaxis in animals, but the focus of the present invention is in the Vorbeu ⁇ supply and treatment in humans, so of people already infected with influenza infected or in danger of becoming infected with this virus (especially in influenza epidemics or pandemics).
  • the preferred route of administration is inhalation (by aerosol) but also intravenous administration, instillation, oral administration or combinations thereof.
  • parenteral or oral administration becomes the drug of this invention in unit dosage form, such as a solution, suspension or emulsion, in conjunction with the pharmaceutically acceptable excipients defined above.
  • unit dosage form such as a solution, suspension or emulsion
  • the dosage and mode of administration may of course also depend on the particular individual in the individual case.
  • the respectively required effective amount is administered to the individual who needs the administration.
  • the "effective amount” is to be understood as an amount that is effective enough to achieve the intended therapeutic or prophylactic effect, eg to prevent further spread of the disease or to treat it effectively, which is usually based on an average patient however, the actual effective amounts of the components in the composition may be formulated to take into account the mode of administration and the age, weight, condition of the patient and degree and progression of the disease (eg, by means of a suitable conventional pharmacological protocol).
  • the pharmaceutically acceptable carrier in the composition of the invention is selected from water (more preferably: water for injection), saline, sodium phosphate, sodium acetate, sodium carbonate, citrate, glycine, glycylglycine, histidine, lysine, arginine, TRIS, sodium citrate, Ringer Solution, dextrose, mannitol, trehalose, sucrose, sorbitol, fructose, maltose, lactose or dextran, Hank's solution, fixed oils, ethyl oleate, substances that enhance isotonicity and chemical stability, preservatives, pharmaceutically acceptable proteins, polysaccharides, polylactic acids , Polyglycolic acids, polymeric amino acids and amino acid copolymers.
  • composition according to the invention can also be provided by providing the two active components, ie the neuraminidase inhibitors and the peptide, in spatially separate form, as described above, ie as a kit containing at least one neuraminidase inhibitor and one peptide (each in separate containers ). Accordingly, the present invention also relates to a kit comprising at least one neuraminidase inhibitor and a peptide (each in separate containers). The thereby enabled (spatially, but also temporally) separate administration of peptide and the inhibitor is especially preferred when different routes of administration of the two active components of the invention for the patient concerned are desired.
  • oseltamivir is usually given orally, but the peptide to be used according to the invention is usually inhaled.
  • concomitant administration is often desirable, for example zanamivir is also administered by inhalation.
  • an oral inhibitor is provided systemically by inhalation.
  • the peptide to be used according to the invention is difficult to mix together with the neuraminidase inhibitor, eg if the inhibitor is given iv or orally and the peptide is inhaled.
  • both inhibitor and peptide can be administered together by inhalation, with the inhibitor then entering directly into the lungs and possibly through the latter (influenza viruses are first present in the lung tissue).
  • kits comprising separate neuraminidase and peptide components
  • the features and preferred embodiments of the mixed composition described herein may also be provided in all combinations conceivable by those skilled in the art.
  • the medicament of the invention may be administered so that the peptide of the present invention is administered at a dose of between 1 ⁇ g / kg and 10 mg / kg, more preferably between 10 g / kg and 5 mg / kg, most preferably between 0.1 and 2 mg / kg.
  • it is given as a bolus dose.
  • continuous inhalation or infusion or repeated dose administration may also be used.
  • compositions according to the invention independently contain the peptide in an amount of from 1 g to 10 g, preferably from 10 g to 1 g, in particular from 1 mg to 100 mg, and the inhibitor of viral neuraminidase in an amount of from 1 g 10 g, preferably from 100 g to 1 g, in particular from 1 mg to 200 mg.
  • compositions according to the invention in liquid form contain, independently of one another, the peptide in an amount of from 1 g to 10 g, preferably from 10 pg to 1 g, in particular from 1 mg to 100 mg, and the inhibitor of viral neuraminidase in an amount of from 1 to 10 g, preferably from 100 pg to 1 g, in particular from 1 mg to 200 mg,
  • composition according to the invention may preferably also be administered in dry form by means of a powder inhaler.
  • powder inhalers which can be used in the present invention are described in U.S. Patents 4,995,385 and 4,069,819; already established products are SPINHALER ®, ROTAHALER ®, FLOW CAPS ®, ® INHALER, DISKHALER ® and Aerolizer® ®.
  • composition according to the invention can preferably also be administered as an aerosol by means of liquid nebulizer.
  • liquid nebulizer are established products such Aeroneb ® and Pari ®.
  • the composition according to the invention is characterized in that the peptide and / or the inhibitor of viral neuraminidase are present in a nebulizable powder formulation or in a nebulizable liquid formulation.
  • composition according to the invention is preferably used for the treatment and prophylaxis of infections with the influenza virus type A and type B, in particular type A.
  • the composition is also suitable for preventing or treating infections with any influenza virus strain which can cause this disease in an animal or in a human.
  • Corresponding databases with information on the various types of influenza are familiar to those skilled in the art, and in particular many isolated Type A strains have been described or even sequenced.
  • Fig. 1 the relative lung weight of C57BL / 6 mice on days 3, 5, 7 and 9 after infection with influenza A or (as control) without infection;
  • Fig. 2 the relative lung weight of C57BL / 6 mice on days 5, 7 and 9 after infection with influenza A and treatment with oseltamivir, treatment with the composition according to the invention and without treatment (with PBS, as a control);
  • the present examples demonstrate in a recognized experimental mouse model that the object of the present invention has been achieved by administering to influenza virus infected mice both a neuraminidase inhibitor and a combination of the neuraminidase inhibitor and the synthetic peptide AP301 (SEQ ID NO: 1) has been.
  • mice (strain C57BL / 6, 8 weeks old) were infected by nasal with influenza strain A (PR8 / 34) and a dosage of 150 PFU. On the 3rd, 5th, 7th and 9th day after the infection, the lungs were removed from each of eight mice and the relative lung weight was determined as a measure of pneumonia.
  • Laboratory mice (strain C57BL / 6, 8 weeks old) were infected by nasal with influenza strain A (PR8 / 34) and a dosage of 150 PFU. Subsequently, the test animals each received oral doses of 10 mg / kg oseltamivir (neuraminidase inhibitor) and intratracheal doses of 10 ⁇ g / test animal peptide AP301. The treatment was repeated on the 2nd and 4th day of testing. On the 5th, 7th and on the 9th day after infection ever ⁇ wells taken from 30 mice lungs and determines the relative lung weight as a measure of pneumonia. The results are shown graphically in FIG.
  • a pharmacological ex vivo safety study of the AP301 peptide in human whole blood was performed to determine if the AP301 peptide results in the release of the pro-inflammatory marker interleukin-6 (IL-6) from fresh whole blood (ie, whether APN 301 TNF specific inflammatory activity (ie, TNF receptor binding activity) or not).
  • IL-6 interleukin-6
  • the aim of this study was to determine the proinflammatory signal capacity of the AP301 peptide.
  • Whole blood cultures were used and the secretion of interleukin-6 (IL-6), a very sensitive marker of proinflammatory stimulation, quantified by ELISA.
  • IL-6 interleukin-6
  • Test system 25 ml of freshly drawn heparinized blood from
  • VB cultures were performed by pipetting 1 ml of VB into wells of 24-well plates. In each experiment, unstimulated and stimulated control cultures were included.
  • each well was mixed and the plates incubated at 37 ° C and 5% C0 2 for 24 hours. After incubation, the contents of each well were transferred to a fresh 1.5 ml microtube and centrifuged at 8000 to 9000 xg for 15 minutes. The supernatant from each sample was split individually into two 1.5 ml tubes and stored at -20 ° C until use.
  • Interleukin-6 was quantitated by a specific ELISA (Human IL-6 ELISA Set, BD Biosciences, Cat. No. 555220) using an anti-human IL-6 antibody as a capture antibody, a biotinylated anti-human IL- 6 Detection antibody, avidin-horseradish peroxidase conjugate as enzyme reagent and recombinant IL-6 as standard. Absorption measurement at 450 nm was performed with the Packard FusionReader.
  • the aim of this study was to determine the pro-inflammatory signaling capacity of the AP301 peptide.
  • Whole blood cultures were used and the secretion of IL-6, a highly sensitive marker of inflammatory pro-stimulation, was quantitated by ELISA.
  • neuraminidase inhibitor zanamivir
  • a combination of neuraminidase inhibitor zanamivir and peptide AP301.
  • Laboratory mice (strain C57BL / 6, 8 weeks old) were nasal infected with the influenza strain A (PR8 / 34) and a dosage of 150 PFU. Subsequently, the test animals each received nasal doses of 1.5 mg / kg zanamivir (neuraminidase inhibitor) and intratracheal doses of 50 g / test animal peptide AP301. The treatment was repeated on the 2nd and 4th day of testing.
  • zanamivir neuroaminidase inhibitor
  • neuraminidase inhibitor (zanamivir) had only a modest effect in reducing pneumonia, as measured by lung weight.
  • the AP301 peptide was given to influenza virus-infected mice, which significantly reduced pneumonia.
  • the peptides of the invention in combination with a neuraminidase inhibitor have a synergistic effect in the treatment of influenza infections.
  • WO 2010/099556 AI a treatment of various pulmonary symptoms is demonstrated, which are aimed at the hyperpermeability of epithelial cells and endothelial cells in such lung diseases.
  • WO 2010/099556 Al it has been found that the claimed peptides are excellently suitable for the prevention and treatment of these symptoms.
  • hyperpermeability of the epithelial cells and endothelial cells even at a infections with influenza viruses (as part of a pneumonia occurring with this infection) can be treated according to WO 2010/099556 Al, thereby constricting of the products contained ⁇ invention is of course not suggested.
  • WO 2010/099556 AI In the examples of WO 2010/099556 AI is experimentally shown that the peptides in the lung tissue: i) influence the content of reactive oxygen, ii) influence the effect of bacterial Gram-positive toxins "listeriolysin” and "pneumolysin” on hyperpermeability, inter alia by regulation of the content of phosphorylated myosin light chain, infiltration of leukocytes, activated protein Kinase C,
  • the lung as an organ, is one of the most important organs of all. If there is an increase in the relative lung weight, it is associated with damage to lung function, and this can not be compensated by any other organ. It is a characteristic of the healthy lungs to contain as many air-filled spaces (alveoli) as possible. As the relative lung weight increases, it is highly probable that the proportion of air-filled alveoli will decrease sharply, thereby curtailing lung function. Therefore, the relative lung weight is an important factor for the treatment of influenza.
  • the results shown with the experiments contained in the present application therefore impressively demonstrate the synergistic effect of the combination preparation according to the invention on the basis of an extremely critical and relevant parameter.
  • neuraminidase inhibitors can suppress the proliferation of influenza virus. Neuraminidase inhibitors do not lead to a reduction of live influenza viruses. So far, it has not been shown in the prior art that influenza virus leads to an increase of the relative lung weight leads. Only with the present OF INVENTION ⁇ dung is found, surprisingly, that the administration of a neuraminidase inhibitor to an influenza infection reduces the relative weight gain of the lung weight. In addition, it could be shown for the first time with the present invention that a simultaneous treatment of influenza virus-infected test animals with a combination of neuraminidase inhibitor and a peptide according to WO 2010/099556 AI to a significant and unpredictable synergistic effect on the relative lung weight leads.
  • neuraminidase inhibitors to inhibit the proliferation of influenza virus, but the already living viruses are not reduced, apparently the synergistic combination of neuraminidase inhibitor and a peptide according to the invention leads to a significant improvement in the treatment of influenza.

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Abstract

Beschrieben wird eine Zusammensetzung, umfassend - ein Peptid, welches aus 7-17 benachbarten Aminosäuren besteht und das Hexamer TX1EX2X3E umfasst, wobei X1, X2 und X3 jede natürliche oder nicht natürliche Aminosäure sein kann, wobei das Peptid keine TNF-Rezeptor-Bindungsaktivität aufweist und zyklisiert ist, und - ein Hemmstoff der viralen Neuraminidase.

Description

Zusammensetzung umfassend ein Peptid und ein
Hemmstoff der viralen Neuraminidase
Die vorliegende Erfindung betrifft pharmazeutische Zusammensetzungen zur Behandlung der Influenza.
Beim Menschen ist die Influenza eine durch Influenzaviren verursachte schwere Erkrankung der Atemwege und des gesamten Organismus. Die Influenzaviren gehören zur Familie der Orthomyxoviren, die durch ein segmentiertes RNA-Genom in Negativstrangorientierung gekennzeichnet sind. Die human relevanten Vertreter sind die Influenza-A und -B Viren, wobei insbesondere der Subtyp A als Erreger von hochfieberhaften Erkrankungen der Atemwege bekannt ist. Neben der tiermedizinischen Bedeutung besitzen alle Influenzaviren ein zoonitisches Potential, d.h. eine Übertragung vom Huhn oder Schwein auf den Menschen ist möglich.
Die Influenza tritt periodisch als Pandemie auf, die meist in Südostasien und China ihren Ursprung nimmt und sich von dort weltweit ausbreitet. Influenzavirenpandemien sind mit einer hohen Zahl von Todesfällen nicht nur bei älteren Personen, sondern auch bei Jugendlichen verbunden. Laut WHO resultieren aus der jährlichen saisonalen Influenza weltweit etwa 3 bis 5 Millionen Fälle von schwerer Erkrankung, mit einer Todesrate von 250000 bis 500000. Häufigste Todesursache ist die Influenzapneumonie mit resultierendem Lungenversagen, aber auch Herz-Kreislauf- Schädigungen wie Myokarditis (Herzmuskelentzündung) oder Perikarditis (Herzbeutelentzündung) kommen vor. Auch eine Entzündung des Gehirns bzw. der Gehirnhäute (Meningoencephalitis) oder die Schädigung anderer Organsysteme (insbesondere Niere) kommen als häufigere Todesursachen in Frage.
Die Inkubationszeit beträgt normalerweise 4-5 Tage, aber auch kürzer. Die Erkrankung beginnt mit dem plötzlichen Einsetzen von Kopfschmerzen, Kältegefühl, Schüttelfrost und Husten. Hohes Fieber bis 41°C, Muskelschmerzen, Appetitlosigkeit und allgemeines Schwächegefühl folgen. Diese Phase dauert etwa 3 Tage, danach geht das Fieber zurück und ist ab dem sechsten Tag meist auf normale Werte abgesunken, das Virus ist aus dem Körper eliminiert. Der Husten kann mehrere Wochen lang anhalten.
Eine schwere, lebensbedrohende Influenza tritt dann auf, wenn sich im Anschluss an die beschriebenen Symptome eine primäre virale interstitielle (oft hämorrhagische) Lungenentzündung entwickelt. Sie tritt neben geschwächten Personen auch bei etwa 25% der gesunden oder nicht vorgeschädigten Personen auf, und kann bis zu 2 Wochen dauern. Eine solche Lungenentzündung kann durch die Zunahme des Lungengewichtes nachgewiesen werden.
Lungenentzündungen können auch sekundär durch bakterielle Überinfektion (u.a. durch Streptococcus pneumoniae, Staphylococ- cus aureus und Haemophilus influenzae) entstehen. Begünstigende Faktoren für diese Komplikationen sind u.a. andere Lungenerkrankungen (z.B. Asthma), Immunschwäche, Alter (Kleinkinder und äl¬ tere Personen), Diabetes, Lungenverletzungen, Rauchen. Personen mit diesen Komplikationen sind daher die vorrangige Zielgruppe für die Vakzinierung.
Influenzaviren gelangen durch Tröpfcheninfektion in den Organismus und infizieren durch Bindung des HA-Proteins an endständige Neuraminsäurereste auf den Epithelzellen der Mund-, Nasen und Rachenschleimhaut. Von hier aus breiten sie sich in den unteren Respirationstrakt aus. Zellzerstörungen sind in den Flimmerepithelien und den schleimproduzierenden Hautschichten aller Bereiche des Respirationstraktes zu beobachten. Bildet sich eine primäre, interstitielle Lungenentzündung aus, wird das Virus auf die Zellen des Lungenparenchyms übertragen. Man findet starke Anschwellungen der Alveolarwände, deren Epithel durch die Zellzerstörung häufig vollkommen abgetragen ist. Eine solche Anschwellung von Lungengewebe kann durch die Zunahme des Lungengewichtes nachgewiesen werden.
Es existieren sowohl prophylaktische als auch therapeutische Behandlungen. So stehen Impfstoffe gegen Influenza-A und -B Infektionen zur Verfügung. Es handelt sich dabei um abgetötete Viren, die in Hühnereiern und/oder Zellkultur gezüchtet werden. Der Impfschutz hat etwa zwei Wochen nach der Impfung seine volle Wirksamkeit erreicht. Wegen der hohen Variabilität der Influenzaviren müssen die Impfstoffe jedoch jährlich an die aktu¬ ell zirkulierenden Virussubtypen bzw. Subtypvarianten angepasst werden .
Weiterhin finden Hemmstoffe der viralen Neuraminidase (Zanamivir, Oseltamivir) Anwendung, die die Loslösung von neu replizierten Viruspartikeln aus der Wirtszelle verhindern. Sie werden bevorzugt kurz nach erfolgter und nachgewiesener Infektion mit Influenzaviren eingesetzt, um die Virusausbreitung in der Frühphase der Infektion einzudämmen (WO 2003/026567 A2). Die Hemmstoffe der viralen Neuraminidase greifen jedoch nur in die Vermehrung der Viren ein, können aber bereits im Körper befindliche Viren nicht inaktivieren. Neuraminidasehemmer können nur dazu beitragen, dass die Krankheitsdauer geringfügig (im Mittel bei Erwachsenen um einen Tag) verkürzt wird.
Es ist das Ziel der vorliegenden Erfindung, die therapeutische Wirkung derartiger Hemmstoffe der Virusvermehrung deutlich zu erhöhen. Mit der vorliegenden Erfindung sollen verbesserte pharmazeutische Zusammensetzungen zur Behandlung von Infektionen mit Influenzaviren zur Verfügung gestellt werden.
Demgemäß betrifft die vorliegende Erfindung eine Zusammensetzung, umfassend
ein Peptid, welches aus 7-17 benachbarten Aminosäuren besteht und das Hexamer TX1EX2X3E umfasst, wobei Xi , X2 und X3 jede natürliche oder nicht natürliche Aminosäure sein kann, wobei das Peptid keine TNF-Rezeptor-Bindungsaktivität aufweist und zykli- siert ist, und
ein Hemmstoff der viralen Neuraminidase,
insbesondere zur Anwendung zur Verhinderung und Behandlung der Influenza .
Es wurde nur erfindungsgemäß festgestellt, dass die Wirkung von Neuraminidasehemmern überraschend verbessert werden kann, wenn ein Peptid, wie oben definiert, in Kombination mit einem Neuraminidasehemmer zur Behandlung von Influenza-Infektionen eingesetzt wird. Auch ein prophylaktischer Einsatz der erfindungsgemäßen Zusammensetzung ist dadurch angezeigt. Besonders effizient hat sich die vorliegende Erfindung bei der Behandlung von Lungenentzündungen erwiesen, die durch die Influenza-Viren bedingt ist.
Die erfindungsgemäß zu verwendenden Peptide sind beispielsweise aus dem europäischen Patent EP 1 264 599 Bl (oder aus der US 2007/299003 A, WO 94/18325 AI oder WO 2008/148545 AI) bekannt und wurden im Stand der Technik zur Behandlung von Flüssigkeitsansammlungen (Lungenödemen) und insbesondere zur Reabsorption dieser Flüssigkeitsansammlungen verwendet. Jedoch eignen sich diese Peptide überraschenderweise auch dazu, den entgegengerichteten Flüssigkeitsstrom über das Endothel der Kapillaren in das Epithel der Lunge zu beeinflussen und können daher auch zur Verhinderung und Behandlung der Hyperpermeabilität von Epithelzellen und Endothelzellen verwendet werden (WO 2010/099556 A) . Diese - an sich bekannten - Peptide, die erfindungsgemäß zusammen mit dem Neuraminidasehemmer zum Einsatz kommen, weisen keine TNF-Rezeptor-Bindungsaktivität auf (Hribar et al . , Eur. J. Immunol. 1999; Elia et al . , AJRCCM 2003; s. auch: Beispielteil unten) und sind zyklisiert. Bevorzugte Varianten dieser Peptide bestehen aus 7-17 benachbarten Aminosäuren und enthalten das He- xamer TPEGAE (SEQ ID Nr. 4) .
Während allerdings die WO 2010/099556 AI wie auch die EP 1 264 599 AI auf die Behandlung von bestimmten, pathologischen Symptomen in der Lunge abzielen und nicht auf die Verhinderung und Behandlung einer Erkrankung mit einem bestimmten Pathogen, ist die Verwendung gemäß der vorliegenden Erfindung eine komplett andere:
Wie sich nämlich im Zuge der Arbeiten zur vorliegenden Erfindung herausgestellt hat, unterstützen die anspruchsgemäßen Peptide (u.a. gemäß der WO 2010/099556 AI) die Wirkung der Neuraminidasehemmer in synergistischer Weise im erfindungsgemäßen Kombinationspräparat. Die Verwendung gemäß der vorliegenden Erfindung zielt daher direkt auf die Infektion durch Influenza- Viren ab und nicht auf allgemeine Symptome, die durch mehrere verschiedene Pathogene ausgelöst werden können (wie dies beispielsweise in der WO 2010/099556 AI oder in der EP 1 264 599 AI der Fall ist) .
Es ist zwar aus der Sicht eines Fachmannes auf diesem Gebiet klar, dass Neuraminidasehemmer nur die Vermehrung von In- luenzaviren hemmen können, jedoch bereits lebende Viren dadurch nicht reduziert werden können; es ist allerdings völlig überraschend und durch den Stand der Technik nicht nahegelegt, dass die Kombination aus Neuraminidasehemmern und den anspruchsgemäßen Peptiden zu einer wesentlichen Verbesserung der Bekämpfung der Influenza führt. Im Stand der Technik erhält ein Fachmann keinerlei Anregungen für diese Kombination, im Gegenteil:
In der WO 2003/026567 A2 ist beschrieben, dass die zur Behandlung der Influenza verwendeten Neuraminidasehemmer auch geeignet sind, Influenza-assoziierte bakterielle Infektionen zu verhindern. Ausgehend von diesem Dokument kann ein Fachmann daher überhaupt keine Veranlassung erkennen, zu Neuraminidasehemmern weitere Zusatzstoffe hinzuzufügen, die die antivirale Wirksamkeit bzw. die Effektivität einer Influenza-Behandlung verbessern . Bei einer besonders bevorzugten Ausführungsform der vorliegenden Erfindung umfasst die erfindungsgemäße Zusammensetzung ein zyklisiertes Peptid, bestehend aus einer Sequenz aufeinanderfolgender Aminosäuren, ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus
- QRETPEGAEAKPWY (SEQ ID Nr. 5)
- PKDTPEGAELKP Y (SEQ ID Nr. 6)
- CGQRETPEGAEAKPWYC (SEQ ID Nr. 1) und
- CGPKDTPEGAELKP YC (SEQ ID Nr. 7)
und Fragmenten von mindestens 7 Aminosäuren davon, welche Fragmente des Hexamer TPEGAE aufweisen.
Vorzugsweise umfasst das Peptid in der Zusammensetzung die Aminosäuresequenz CGQRETPEGAEAKPWYC (SEQ ID Nr. 1) und ist über die C-Reste zyklisiert. Dieses besonders bevorzugte Peptid hat somit folgende Aminosäuresequenz (SEQ ID Nr. 1)
(NH2 ) Cys-Gly-Gln-Arg-Glu-Thr-Pro-Glu-Gly-Ala-Glu-Ala-Lys-Pro- Trp-Tyr-Cys (COOH) . Dieses Peptid wird auch als „AP301" bezeichnet .
Die Zyklisierung der erfindungsgemäßen Peptide kann dabei z.B. entweder über eine direkte Zyklisierung über eine Disulfid- brücke zwischen den beiden C-Resten am N- und C-Terminus erreicht werden oder aber indem das Peptid über beide Cysteine an eine Trägersubstanz gekoppelt wird. Dabei werden in den erfindungsgemäßen Peptiden die Cysteinreste vorzugsweise am Anfang und am Ende des Moleküls vorgesehen. Auch andere funktionelle Gruppen, die eine Zyklisierung des Peptids erreichen, können eingesetzt werden, z.B. indem eine Säuregruppe mit einem Amin oder Alkohol zu einem Amid- oder Ester-Ringschluss führt (hierbei können z.B. die Aminosäuren Asparaginsäure und Glutaminsäure mit Serin, Threonin, Tyrosin, Asparagin, Glutamin oder Lysin, vorzugsweise intramolekular zyklisiert werden) . Die Zyklisierung des Peptids erfolgt vorzugsweise durch eine Disulfidbrücke zwischen den C-Resten des Peptids (wenn vorhanden) .
Weitere bevorzugte erfindungsgemäße Peptide sind daher beispielsweise CGQRETPEGAEAKPWYC (SEQ ID Nr. 8), CGQRETPEGAEARPWYC (SEQ ID Nr. 9), CGQRETPEGAEAKPC (SEQ ID Nr. 10), CQRETPEGAEAKPWYC (SEQ ID Nr. 11) oder CGQRETPEGAEAKFWYC (SEQ ID Nr. 12) .
Die Zyklisierung kann aber auch durch Bindung des Peptids an Trägersubstanzen erfolgen. Als derartige Zyklisierungs- Trägersubstanzen kommen alle gängigen pharmazeutisch verwendbaren Substanzen in Frage, die in der Lage sind, z.B. mit den SH- Gruppen der Cysteine (oder mit anderen natürlicherweise vorhandenen oder artifiziell eingeführten chemisch reaktiven Gruppen des Peptids) eine kovalente Bindung einzugehen, wobei gängige Trägerproteine, wie Keyhole limpet hemocyanin (KLH) , Tetanus- Toxin etc., sich besonders eignen. Auch können am Träger benachbarte bifunktionelle Reste vorgesehen werden (z.B. Säuregruppe neben Amin- oder Alkoholgruppe) . In diesem Zusammenhang ist wichtig, dass mit „Zyklisierung" sowohl der intramolekulare Ringschluss als auch die Einbindung eines Trägers umfasst ist (von dem das gebundene Peptid hervorragt (indem der N- und der C-Terminus des Peptids an den Träger gebunden ist) ) , wobei das derart zyklisierte Peptid die zyklische Raumstruktur zeigt und entsprechend stabilisiert ist.
Hemmstoffe der viralen Neuraminidase sind bekannt und haben sich bereits bei der Vorbeugung und Behandlung von Influenza bewährt. Derartige virale Neuraminidasehemmer (wie z.B. Zanamivir, Oseltamivir, Laninamivir oder Peramivir) verhindern die Loslösung von neu replizierten Viruspartikeln aus der Wirtszelle. Vor allem kurz nach erfolgter und nachgewiesener Infektion mit Influenzaviren kann damit die Virusausbreitung in der Frühphase der Infektion eingedämmt werden.
Diese Neuraminidasehemmer greifen jedoch nur in die Vermehrung der Viren ein, können aber bereits im Körper befindliche Viren nicht inaktivieren, so dass oft nur die Krankheitsdauer geringfügig (im Mittel bei Erwachsenen um einen Tag) verkürzt werden kann. Vor allem aber können damit in der Regel die Symptome der Influenza, insbesondere eine Lungenentzündung, die meist zu besonderen Komplikationen führt, nicht wirksam genug bekämpft bzw. verhindert werden.
Neuraminidase ist ein wesentliches Enzym für die Reproduktion des Influenza-Virus und sie ist als „molekulare Schere" beschrieben worden, die für die Freisetzung der Viren verantwortlich ist.
Neuraminidasehemmer umfassen Analoga der Sialinsäure, die eine neue Klasse der zweiten Generation antiviraler Mittel repräsentieren, die Wirksamkeit gegen Influenza A und B Viren zeigen. Neuraminidasehemmer gemäß der vorliegenden Erfindung können alle bislang hierfür vorgeschlagenen Verbindungen sein, wie z.B. in der US 2008/0063722 AI zusammengefasst (auch für bevorzugte pharmazeutische Formulierungen derartiger Substanzen) . Diese Stoffe können mindestens eine enzymatische Tätigkeit des Neurara- inidase-Proteins eines virulenten Stammes eines Influenza- Virions des Typs A oder des Typs B hemmen. Derartige Stoffe können sowohl zur Prophylaxe als auch zur Behandlung von Influenza verwendet werden; in Kombination mit den oben definierten Peptiden gemäß der vorliegenden Erfindung ist jedoch diese Wirkung signifikant verbessert.
Beispiele von Neuraminidasehemmern, die in der vorliegenden Zusammensetzung zum Einsatz kommen können, sind z.B. in den US- Patenten 5,453,533, 5,763,483, 5,952,375, 5,958,973, 5,512,596, 5,886,213, 5,602,277, 6,410,594, 5,360,817, 5,866,601, 6,340.702, 6,451,766, 6,455,571, 6,593,314, 6,509,359, 6,518,305 und 6,831,096 beschrieben. Substanzen, die bereits am Menschen eingesetzt werden (oder zumindest in der klinischen Erprobung sind) und demgemäß besonders bevorzugt sind, sind beispielsweise CS-8958 (RI 18958; US 2008/0063722 AI), Zanamivir (GG167, RELENZA®), Peramivir (RWJ-270201, BCX-1812), Oseltamivir-Phosphat (Ro64-0796, GS4104), Oseltamivir-Carboxylat (Ro64-0802, GS4071) oder Oseltamivir (GS4104, TAMIFLU®) . Selbstverständlich werden erfindungsgemäß die Neuraminidasehemmer in allen wirksamen chemischen Formen umfasst, also als Salze, racemische, optisch reine und/oder salzlose Formen (auch in Form des z.B. Enantiomers oder Diastereomers ) .
Vorzugsweise ist der Hemmstoff der viralen Neuraminidase Zanamivir oder Oseltamivir; diese Stoffe sind bevorzugt, weil sie bereits besonders erfolgreich zur Behandlung am Menschen eingesetzt werden.
Bevorzugter Weise umfasst die erfindungsgemäße Zusammensetzung einen pharmazeutisch akzeptablen Träger und ist als pharmazeutische Zusammensetzung hergerichtet, die zur Verabreichung am Menschen geeignet ist.
Der Ausdruck „eine pharmazeutische Zusammensetzung" bezieht sich auf jede Zusammensetzung, die einen Neuraminidasehemmer und ein Peptid, wie oben definiert, umfasst (natürlich auch geeignete (i.e. nicht miteinander negativ interferierende) Gemische derartiger Substanzen) , welche die hierin beschriebenen Zustände verhindert, verbessert oder heilt. Insbesondere bezieht sich der Ausdruck „eine pharmazeutische Zusammensetzung" auf eine Zusam- mensetzung, die einen Neuraminidasehemmer und ein Peptid, wie oben beschrieben, und einen pharmazeutisch akzeptablen Träger oder Exzipienten (beide Ausdrücke können austauschbar verwendet werden) aufweist. Geeignete Beispiele von Trägern oder Exzipienten, die dem Fachmann bekannt sind, sind Wasser, Kochsalzlösung, Natriumphosphat, Natriumacetat , Natriumcarbonat, Zitrat, Glycin, Glycylglycin, Histidin, Lysin, Arginin, TRIS und Natriumeitrat oder Mischungen davon. Natürlich können auch Ringer-Lösung, Dextrose-Lösung oder Lösungen nicht reduzierbarer Zucker einge¬ setzt werden; demgemäß eignen sich auch Mannit, Trehalose, Saccharose, Sorbit, Fruchtzucker, Maltose, Lactose oder Dextran, Hank-Lösung, fixierte Öle, Ethyloleat, 5% Dextrose in Kochsalzlösung, Substanzen, die die Isotonie und die chemische Stabilität verbessern, Puffer und Konservierungsmittel als derartige Träger. Andere geeignete Träger inkludieren jeden Träger, der nicht selbst die Produktion von Antikörpern, die für das die Zusammensetzung erhaltende Individuum schädlich sind, induziert, wie Proteine, Polysaccharide, Polymilchsäuren, Polyglykolsäuren, polymere Aminosäuren und Aminosäure-Copolymere . Bei der Formulierung der erfindungsgemäßen Zusammensetzung sind natürlich die einschlägigen Richtlinien (z.B. die (europäische oder US) Pharmakopoe) zu beachten. Dabei kann das in der erfindungsgemäßen Zusammensetzung vorgesehene Peptid auch durch direkte kovalente Bindung an diese Träger zyklisiert werden.
Die erfindungsgemäße pharmazeutische Zusammensetzung kann (als Medikament) mit jedem im Wissen des Fachmanns liegenden geeigneten Verfahren verabreicht werden, insbesondere ist bevorzugt, das erfindungsgemäß zu verwendende Peptid bzw. die erfindungsgemäße Zusammensetzung in die Lunge zu verabreichen. Obgleich Influenza auch bei Tieren eine gewisse Rolle spielt und die erfindungsgemäße Zusammensetzung natürlich auch zur Vorbeugung und Prophylaxe bei Tieren eingesetzt werden kann, liegt doch der Schwerpunkt der vorliegenden Erfindung auf der Vorbeu¬ gung und Behandlung am Menschen, also von Personen, die mit Influenza bereits infiziert worden sind oder die Gefahr laufen, sich mit diesem Virus zu infizieren (insbesondere bei Influenza- Epidemien oder -Pandemien) . Der bevorzugte Verabreichungsweg ist Inhalation (durch Aerosole) aber auch die intravenöse Gabe, Instillation, orale Gabe oder Kombinationen daraus. Bei inhalativer, parenteraler oder oraler Verabreichung wird das Medikament dieser Erfindung in Dosiseinheitsform, wie als Lösung, Suspension oder Emulsion, in Verbindung mit den oben definierten pharmazeutisch akzeptablen Exzipienten formuliert. Die Dosierung und Verabreichungsart kann jedoch natürlich auch im Einzelfall vom jeweiligen Individuum abhängen.
Dabei wird die jeweils erforderliche wirksame Menge an das Individuum, das die Verabreichung benötigt, verabreicht. Dabei ist die „wirksame Menge" als eine Menge zu verstehen, die wirksam genug ist, um den beabsichtigten therapeutischen oder prophylaktischen Effekt zu erzielen, also z.B. eine weitere Ausbreitung der Erkrankung zu verhindern oder wirksam zu behandeln. Dabei wird meist von einem durchschnittlichen Patienten ausgegangen, jedoch können die tatsächlichen wirkungsvollen Mengen der Komponenten in der Zusammensetzung so formuliert werden, dass die Art der Verabreichung und das Alter, Gewicht, Zustand des Patienten und Grad und Fortschritt der Erkrankung berücksichtigt werden (z.B. mittels eines passenden, herkömmlichen pharmakologischen Protokolls) .
Vorzugsweise ist daher der pharmazeutisch akzeptable Träger in der erfindungsgemäßen Zusammensetzung ausgewählt aus Wasser (besonders bevorzugt: Wasser für Injektion), Kochsalz, Natriumphosphat, Natriumacetat, Natriumcarbonat, Zitrat, Glycin, Gly- cylglycin, Histidin, Lysin, Arginin, TRIS, Natriumeitrat, Ringer-Lösung, Dextrose, Mannit, Trehalose, Saccharose, Sorbit, Fruchtzucker, Maltose, Lactose oder Dextran, Hank-Lösung, fixierte Öle, Ethyloleat, Substanzen, die die Isotonie und die chemische Stabilität verbessern, Konservierungsmittel, pharmazeutisch akzeptable Proteine, Polysaccharide, Polymilchsäuren, Polyglykolsäuren, polymere Aminosäuren und Aminosäure- Copolymere .
Auch kann die erfindungsgemäße Zusammensetzung bereitgestellt werden, indem die beiden Wirkkomponenten, also der Neura- minidasehemmer und das Peptid, wie oben beschrieben, in räumlich getrennter Form vorgesehen werden, also als Set, welches zumindest einen Neuraminidasehemmer und ein Peptid (jeweils in voneinander getrennten Behältnissen) umfasst. Demgemäß betrifft die vorliegende Erfindung auch ein Set, welches zumindest einen Neuraminidasehemmer und ein Peptid (jeweils in voneinander getrennten Behältnissen) umfasst. Die dadurch ermöglichte (räumlich, aber auch zeitlich) getrennte Gabe von Peptid und dem Hemmstoff ist vor allem dann bevorzugt, wenn verschiedene Verabreichungswege der beiden erfindungsgemäßen Wirkkomponenten für den betroffenen Patienten gewünscht sind. Beispielsweise wird Oselta- mivir zumeist oral gegeben, das erfindungsgemäß zu verwendende Peptid aber zumeist inhalativ. Es ist oft aber auch die gleichzeitige Gabe erwünscht, beispielsweise wird Zanamivir ebenfalls inhalativ verabreicht. Natürlich kann auch angezeigt sein, dass ein oraler Hemmstoff mittels Inhalation systemisch zur Verfügung gestellt wird. In manchen Fällen kann das erfindungsgemäß zu verwendende Peptid nur schwer mit dem Neuraminidasehemmer zusammengemischt werden, z.B. wenn der Hemmstoff i.v. oder oral gegeben wird und das Peptid inhalativ. In vielen Fällen kann aber sowohl Hemmstoff und Peptid zusammen inhalativ verabreicht werden, wobei der Hemmstoff dann direkt in die Lunge und gegebenenfalls durch diese ins Blut gelangt (Influenza-Viren sind zuerst im Lungengewebe präsent) .
In einem derartigen erfindungsgemäßen Set, umfassend getrennte Neuraminidase- und Peptid-Komponenten, können natürlich ebenfalls die hierin beschriebenen Merkmale und bevorzugten Ausführungsformen für die gemischte Zusammensetzung in allen für den Fachmann hieraus vorstellbaren Kombinationen vorgesehen werden .
Das erfindungsgemäße Medikament kann beispielsweise so verabreicht werden, dass das Peptid der vorliegenden Erfindung in einer Dosis von zwischen 1 μg/kg und 10 mg/kg, mehr bevorzugt zwischen 10 g/kg und 5 mg/kg, am meisten bevorzugt zwischen 0,1 und 2 mg/kg, gegeben wird. Vorzugsweise wird es als Bolus-Dosis gegeben. Es kann aber auch eine kontinuierliche Inhalation oder Infusion oder eine Verabreichung mittels wiederholter Gabe verwendet werden.
Besonders bevorzugte erfindungsgemäße Zusammensetzungen enthalten - unabhängig voneinander - das Peptid in einer Menge von 1 g bis 10 g, vorzugsweise von 10 g bis 1 g, insbesondere von 1 mg bis 100 mg, und den Hemmstoff der viralen Neuraminidase in einer Menge von 1 g bis 10 g, vorzugsweise von 100 g bis 1 g, insbesondere von 1 mg bis 200 mg.
Besonders bevorzugte erfindungsgemäße Zusammensetzungen in flüssiger Form enthalten - unabhängig voneinander - das Peptid in einer Menge von 1 g bis 10 g, vorzugsweise von 10 pg bis 1 g, insbesondere von 1 mg bis 100 mg, und den Hemmstoff der viralen Neuraminidase in einer Menge von 1 ]iq bis 10 g, vorzugsweise von 100 pg bis 1 g, insbesondere von 1 mg bis 200 mg,
und liegen in einem Volumen von 0,5 bis 10 ml, insbesondere in einem Volumen von 1 bis 5 ml, vor.
Die erfindungsgemäße Zusammensetzung kann vorzugsweise auch in Trockenform mittels Pulverinhalator verabreicht werden. Beispiele für derartige Pulverinhalatoren, die für die vorliegende Erfindung eingesetzt werden können, sind in den US-Patenten 4.995.385 und 4.069.819 beschrieben; bereits etablierte Produkte sind SPINHALER®, ROTAHALER®, FLOWCAPS®, INHALATOR®, DISKHALER® und AEROLIZER®.
Die erfindungsgemäße Zusammensetzung kann vorzugsweise auch als Aerosol mittels Flüssigkeitsvernebier verabreicht werden. Beispiele für derartige Flüssigkeitsvernebier sind etablierte Produkte wie Aeroneb® und Pari®.
Gemäß einer bevorzugten Ausführungsform ist die erfindungsgemäße Zusammensetzung dadurch gekennzeichnet, dass das Peptid und/oder der Hemmstoff der viralen Neuraminidase in einer vernebelbaren Pulverformulierung oder in einer vernebelbaren Flüssigformulierung vorliegen.
Die erfindungsgemäße Zusammensetzung wird vorzugsweise zur Behandlung und Prophylaxe von Infektionen mit dem Influenza- Virus Typ A und Typ B, insbesondere Typ A, eingesetzt. Jedoch ist die Zusammensetzung prinzipiell auch geeignet, Infektionen mit jedem möglichen Stamm des Influenza-Virus vorzubeugen oder zu behandeln, der diese Krankheit in einem Tier oder in einem Menschen verursachen kann. Entsprechende Datenbanken mit Informationen zu den verschiedenen Influenza-Typen sind den Fachleuten auf diesem Gebiet vertraut, insbesondere sind viele isolierte Stämme vom Typ A beschrieben oder sogar sequenziert.
Die Erfindung wird anhand der nachfolgenden Beispiele und der Zeichnungsfiguren, auf die sie aber selbstverständlich nicht beschränkt ist, näher erläutert.
Es zeigen:
Fig. 1: das relative Lungengewicht von C57BL/6-Mäusen an den Tagen 3, 5, 7 und 9 nach Infektion mit Influenza A bzw. (als Kontrolle) ohne Infektion;
Fig. 2: das relative Lungengewicht von C57BL/ 6-Mäusen an den Tagen 5, 7 und 9 nach Infektion mit Influenza A und Behandlung mit Oseltamivir, Behandlung mit der erfindungsgemäßen Zusammensetzung und ohne Behandlung (mit PBS; als Kontrolle) ;
Fig. 3: das relative Lungengewicht von C57BL/ 6-Mäusen an den Tagen 7 und 9 nach Infektion mit Influenza A und Behandlung mit Zanamivir, Behandlung mit der erfindungsgemäßen Zusammenset¬ zung und ohne Behandlung (mit PBS; als Kontrolle) .
Beispiele
Mit den vorliegenden Beispielen wird in einem anerkannten experimentellen Mausmodell gezeigt, dass die erfindungsgemäße Zielstellung erreicht wurde, indem an mit Influenza Virus infizierten Mäusen sowohl ein Neuraminidasehemmstoff als auch eine Kombination des Neuraminidasehemmstoffes und des synthetischen Peptids AP301 (SEQ. ID. Nr.l) verabreicht wurde.
Beispiel 1
Infektion mit Influenza Virus bewirkt die Herausbildung einer Lungenentzündung .
Labormäuse (Stamm C57BL/6, 8 Wochen alt) wurden per nasal mit dem Influenzastamm A (PR8/34) und einer Dosierung von 150 PFU infiziert. Am 3., am 5. , am 7. und am 9. Tag nach der Infektion wurden jeweils von acht Mäusen die Lungen entnommen und das relative Lungengewicht als Maß für die Lungenentzündung bestimmt .
Die Untersuchung ergab, dass mit zunehmender Dauer nach Infektion der Mäuse mit dem Influenza Virus das Lungengewicht im Vergleich mit Kontrolllungen stark zunahm. Die Ergebnisse sind in Fig. 1 graphisch dargestellt.
Beispiel 2
Behandlung der Lungenentzündung durch Verabreichung von Neurami- nidasehemmer oder Verabreichung einer Kombination aus Neurami- nidasehemmer und Peptid AP301.
Labormäuse (Stamm C57BL/6, 8 Wochen alt) wurden per nasal mit dem Influenzastamm A (PR8/34) und einer Dosierung von 150 PFU infiziert. Anschließend erhielten die Versuchstiere jeweils orale Gaben von 10 mg/kg Oseltamivir (Neuraminidasehemmstoff) und intratracheale Gaben von 10 μg/Testtier Peptid AP301. Die Behandlung wurde am 2. und 4. Testtag wiederholt. Am 5. , am 7. und am 9. Tag nach der Infektion wurden je¬ weils von 30 Mäusen die Lungen entnommen und das relative Lungengewicht als Maß für die Lungenentzündung bestimmt. Die Ergebnisse sind in Fig. 2 graphisch dargestellt.
Die Untersuchung ergab, dass der Neuraminidasehemmstoff nur eine moderate Wirkung zur Senkung der Lungenentzündung, gemessen durch das Lungengewicht, ausübte. Wurde jedoch den mit Influenza-Viren infizierten Mäusen zusätzlich zum Neuraminidasehemmstoff das Peptid AP301 verabreicht, konnte die Lungenentzündung wesentlich stärker reduziert werden.
Beispiel 3
Ex vivo Beurteilung der pro-inflammatorischen Eigenschaften des AP301 Peptids im menschlichen Vollblut.
Eine pharmakologische ex-vivo-Sicherheitsstudie hinsichtlich des AP301 Peptids im menschlichen Vollblut wurde durchgeführt, um festzustellen, ob das AP301-Peptid zur Freisetzung des pro-inflammatorischen Markers Interleukin-6 (IL-6) aus frischem Vollblut führt (d.h. ob APN 301 TNF-spezifische entzündliche Aktivität (i.e. TNF-Rezeptor-Bindungsaktivität ) zeigt oder nicht). In dieser Studie ist frisches Vollblut verwendet worden, hierbei handelt es sich um ein anerkanntes Vorhersagemodell für die Beurteilung der Entzündungsreaktion in vivo.
Zusammenfassung der Methodik
Es war das Ziel dieser Studie, die proinflammatorische Signal-Kapazität des AP301 Peptids zu bestimmen. Dabei wurden Vollblut-Kulturen verwendet und die Sekretion von Interleukin-6 (IL- 6) , ein sehr sensitiver Marker für proinflammatorische Stimulation, mittels ELISA quantifiziert.
Testsystem
Testsystem 25 ml frisch entnommenes heparinisiertes Blut von
5 gesunden Probanden (GP) wurde in den Tests verwendet .
Prüfgegenständ
Identifikation: AP301 Peptid (Dosis: 1 ng/ml bis 10 μg/ml; einmalige Verabreichung in Lösung)
Beschreibung: Weißes Pulver, Reinheit 96% Vollblut-Kulturen
Vollblut (VB) -Kulturen wurden durch Pipettieren von 1 ml VB in Vertiefungen von 24-Näpfchen-Platten durchgeführt. In jedem Experiment wurden unstimulierte und stimulierte Kontroll- Kulturen inkludiert.
Wenn möglich wurden die zu untersuchenden Substanzen und Stimulanzien immer in gleichem Volumen in jedem Näpfchen in einem gegebenen Experiment verwendet, welches nicht größer als 10% des Gesamtvolumens in einem Näpfchen ist. Unstimulierte Kontrollen erfolgten mit PBS. Volumeneinstellung und Verdünnungen für verschiedene Behandlungen wurden ebenfalls mit PBS durchgeführt.
Der Inhalt jedes Näpfchens wurde gemischt und die Platten bei 37 °C und 5% C02 für 24 Stunden inkubiert. Nach der Inkubation wurde der Inhalt jedes Näpfchens in ein frisches 1,5 ml Mikroröhrchen überführt und bei 8000 bis 9000 x g für 15 Minuten zentrifugiert . Der Überstand jeder Probe wurde einzeln auf zwei 1,5 ml Reaktionsgefäße aufgeteilt und bei -20°C bis zum Gebrauch gelagert .
Nachweis von Interleukin-6
Interleukin-6 wurde mittels eines spezifischen ELISA quantifiziert (Human IL-6 ELISA-Set, BD Biosciences, Cat . Nr. 555220) unter Einsatz eines Anti-Human-IL-6 Antikörpers als Fänger-Antikörper, eines biotinylierten anti-human IL-6 Detektions- antikörpers, Avidin-Meerrettichperoxidase-Konjugat als Enzym- Reagenz und rekombinantem IL-6 als Standard. Absorptionsmessung bei 450 nm wurde mit dem Packard FusionReader durchgeführt.
Datenanalyse
Die Ergebnisse jeder Platte wurden gespeichert und mit der FusionDataAnalysis Software ausgewertet.
Zusammenfassung der Ergebnisse der Studie
Es war das Ziel dieser Studie, die pro-inflammatorische Signalisierungs-Kapazität des AP301 Peptids zu bestimmen. Vollblut-Kulturen wurden verwendet und die Sekretion von IL-6, einem sehr sensitiven Marker für entzündliche Pro-Stimulation, wurde mittels ELISA quantifiziert.
Vollblutproben von fünf gesunden Probanden wurden entweder unstimuliert belassen (negative Kontrolle) , stimuliert mit hohen und niedrigen Dosen von LPS (positive Kontrollen) oder mit dem Peptid in neun halblogarithmischen Verdünnungen von 10 g/ml bis 1 ng/ml inkubiert. Die Ergebnisse sind in der nachfolgenden Tabelle dargestellt:
Tabelle: Freisetzung von Interleukin-6 aus frischem Vollblut bei Zugabe von Peptid AP301 und LPS
AP301 Peptid Positive Kontrolle (LPS)
Konzentration Konzentration von IL-6 (pg/ml, n = 5)
0 (Negativweniger als 0, 5 weniger als 0,5 kontrolle)
10 mg/ml weniger als 0, 5 195, 640
1 mg/ml weniger als 0, 5 108, 370
3 ng/ml weniger als 0,5 34, 867
1 ng/ml weniger als 0,5 nicht bestimmt
Die Ergebnisse zeigen deutlich, dass das AP301-Peptid keine nachweisbare Menge von IL-6-Sekretion bei keinem der getesteten Konzentrationen induzierte. Die positiven Kontrollen (LPS) führten zu einer starken Induktion der IL-6-Sekretion .
Diskussion
Die Versuche wurden durchgeführt, um festzustellen, ob das AP301-Peptid die Induktion einer pro-inflammatorischen Kaskade vermittelt. Readout-Parameter war die induzierte Sekretion von IL-6 in Vollblut-Kulturen aus fünf gesunden Spendern. Die Ergebnisse zeigten deutlich, dass das AP301-Peptid kein nachweisbares Niveau von IL-6 in den Spenderkulturen induzierte. Damit ist bewiesen, dass das AP301-Peptid keine pro-inflammatorische Antwort in dem gewählten ex vivo-Modell induziert und somit keine TNF- Rezeptor-Bindungsaktivität aufweist .
Beispiel 4
Behandlung der Lungenentzündung durch Verabreichung von Neurami- nidasehemmer (Zanamivir) oder Verabreichung einer Kombination aus Neuraminidasehemmer (Zanamivir) und Peptid AP301.
Labormäuse (Stamm C57BL/6, 8 Wochen alt) wurden per nasal mit dem Influenzastamm A (PR8/34) und einer Dosierung von 150 PFU infiziert. Anschließend erhielten die Versuchstiere jeweils nasale Gaben von 1,5 mg/kg Zanamivir (Neuraminidasehemmstoff) und intratracheale Gaben von 50 g/Testtier Peptid AP301. Die Behandlung wurde am 2. und 4. Testtag wiederholt.
Am 7. und am 9. Tag nach der Infektion wurden jeweils von 20 Mäusen die Lungen entnommen und das relative Lungengewicht als Maß für die Lungenentzündung bestimmt. Die Ergebnisse sind in Fig. 3 graphisch dargestellt.
Die Untersuchung ergab, dass der Neuraminidasehemmstoff (Zanamivir) nur eine moderate Wirkung zur Senkung der Lungenentzündung, gemessen durch das Lungengewicht, ausübte. Wurde jedoch den mit Influenza-Viren infizierten Mäusen zusätzlich zum Neuraminidasehemmstoff (Zanamivir) das Peptid AP301 verabreicht, konnte die Lungenentzündung wesentlich stärker reduziert werden.
Zusammenfassung
Die erfindungsgemäßen Peptide weisen in Kombination mit einem Neuraminidasehemmstoff eine synergistische Wirkung bei der Behandlung von Influenza-Infektionen auf.
In der WO 2010/099556 AI wird, wie erwähnt, eine Behandlung von verschiedenen pulmonären Symptomen belegt, die auf die Hy- perpermeabilität von Epithelzellen und Endothelzellen bei derartigen Lungenerkrankungen abzielen. Gemäß der WO 2010/099556 AI hat sich gezeigt, dass die beanspruchten Peptide zur Verhinderung und Behandlung dieser Symptome exzellent geeignet sind. Obgleich gemäß der WO 2010/099556 AI eine Hyperpermeabilität der Epithelzellen und Endothelzellen auch bei einer Infektionen mit Influenza-Viren (im Rahmen einer mit dieser Infektion auftretenden Pneumonie) behandelt werden kann, wird dadurch die vorlie¬ gende Erfindung selbstverständlich nicht nahegelegt. Die Möglichkeit der generellen Behandlung einer Influenza mit einem Kombinationspräparat, enthaltend diese Peptide, stellt eine völ¬ lig neue und erfinderische Lehre gegenüber der Eignung der Peptide zur Behandlung eines - fakultativ - mit Influenza auftretenden Symptoms dar.
Der grundlegende Unterschied ergibt sich auch durch einen Blick in die detaillierten Experimente gemäß der WO 2010/099556 AI: In den Beispielen der WO 2010/099556 AI wird experimentell dargestellt, dass die Peptide im Lungengewebe: i) Den Gehalt an reaktivem Sauerstoff beeinflussen, ii) die Wirkung von bakteriellen Gram-positiven Toxinen „Listeriolysin" und „Pneumolysin" auf eine Hyperpermeabili- tät beeinflussen, u.a. durch Regulation des Gehalts an phosphorylierter Myosin Light Chain, Infiltration von Leukozyten, aktivierter Protein Kinase C,
iii) nach Influenza-Infektion das Körpergewicht beeinflussen,
iv) nach Influenza-Infektion die Körpertemperatur beeinflusse,
v) nach Influenza-Infektion die Überlebensrate der Versuchstiere beinflussen.
Jedoch gibt es in der gesamten WO 2010/099556 AI keine experimentellen Hinweise darauf, dass die Infektion von Versuchstieren mit Influenza-Virus zu einer Veränderung des relativen Lungengewichts führt, und dass ein solcher Prozess durch Verabreichung des Peptides aufgehalten und behandelt werden kann. Es wird überhaupt erst mit der vorliegenden Erfindung gezeigt, dass die Infektion von Lungen von Testtieren mit Influenza-Virus zu einer wesentlichen Erhöhung des relativen Lungengewichts führt.
Die Lunge stellt als Organ eines der wichtigsten Organe überhaupt dar. Kommt es zu einer Erhöhung des relativen Lungengewichtes, ist die mit einer Schädigung der Lungenfunktion verbunden, und dies kann durch kein anderes Organ kompensiert werden. Es ist eine Eigenschaft der gesunden Lunge, möglichst viel luftgefüllte Räume (Alveolen) zu enthalten. Bei Zunahme des relativen Lungengewichts ist stark davon auszugehen, dass der Anteil an luftgefüllten Alveolen stark abnimmt und somit die Funktion der Lunge eingeschränkt wird. Daher stellt das relative Lungengewicht einen wesentlichen Faktor zur Behandlung der Influenza dar. Die mit den in der vorliegenden Anmeldung enthaltenen Experimenten gezeigten Resultate belegen daher eindrucksvoll den synergistischen Effekt des erfindungsgemäßen Kombinationspräparates anhand eines äußerst kritischen und relevanten Parameters .
Von den Neuraminidase-Inhibitoren ist bisher bekannt, dass diese die Vermehrung von Influenza-Virus unterdrücken können. Neuraminidase-Inhibitoren führen nicht zu einer Verringerung von lebenden Influenza-Viren. Bislang konnte im Stand der Technik nicht gezeigt werden, dass Influenza-Virus zu einer Erhöhung des relativen Lungengewichts führt. Erst mit der vorliegenden Erfin¬ dung wird überraschend gezeigt, dass die Gabe eines Neurami- nidase Inhibitors nach einer Influenza-Infektion die relative Gewichtszunahme des Lungengewichts verringert. Zusätzlich konnte mit der vorliegenden Erfindung erstmalig gezeigt werden, dass eine zeitgleiche Behandlung von mit Influenza-Virus infizierten Testtieren mit einer Kombination aus Neuraminidase-Inhibitor und einem Peptid gemäß der WO 2010/099556 AI zu einem deutlichen und nicht vorhersehbaren synergistischen Effekt auf das relative Lungengewicht führt. Während Neuraminidase-Inhibitoren die Vermehrung von Influenza-Virus hemmen soll, jedoch die bereits lebenden Viren nicht reduziert werden, führt offenbar die synergistische Kombination aus Neuraminidase-Inhibitor und einem erfindungsgemäßen Peptid zu einer wesentlichen Verbesserung der Influenza-Behandlung. Jedes der einzeln verabreichten Arzneimittel (Neuraminidase-Inhibitor und die anspruchsgemäßen Peptide) für sich allein führt nicht zu der mit der vorliegenden Erfindung gezeigten Wirkung.
Die vorliegende Erfindung kann daher durch die in der WO 2010/099556 AI geoffenbarten Ergebnisse in keiner Weise nahegelegt werden.
Zusammenfassung der Sequenzen:
SEQ ID Nr. 1 CGQRETPEGAEAKP YC
SEQ ID Nr. 2 KSPGGQRETPEGAEAKPWYE
SEQ ID Nr. 3 CGQREAPAGAAAKPWYC
SEQ ID Nr. 4 TPEGAE
SEQ ID Nr. 5 QRETPEGAEAKPWY
SEQ ID Nr. 6 PKDTPEGAELKPWY
SEQ ID Nr. 7 CGPKDTPEGAELKPWYC
SEQ ID Nr. 8 CGQKETPEGAEAKPWYC
SEQ ID Nr. 9 CGQRETPEGAEARPWYC
SEQ ID Nr. 10 CGQRETPEGAEAKPC
SEQ ID Nr. 11 CQRETPEGAEAKPWYC
SEQ ID Nr. 12 CGQRETPEGAEAKFWYC

Claims

Ansprüche :
1. Zusammensetzung, umfassend
ein Peptid, welches aus 7-17 benachbarten Aminosäuren besteht und das Hexamer TX1EX2X3E umfasst, wobei Xi , X2 und X3 jede natürliche oder nicht natürliche Aminosäure sein kann, wobei das Peptid keine TNF-Rezeptor-Bindungsaktivität aufweist und zyklisiert ist, und
ein Hemmstoff der viralen Neuraminidase .
2. Zusammensetzung nach Anspruch 1, wobei das Peptid aus 7-17 benachbarten Aminosäuren besteht und das Hexamer TPEGAE umfasst.
3. Zusammensetzung nach Anspruch 1 oder 2, wobei das zykli- sierte Peptid aus einer Sequenz aufeinander folgender Aminosäuren, ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus QRETPEGAEAKPWY, PKDTPEGAELKPWY, CGQRETPEGAEAKPWYC, CGPKDTPEGAELKPWYC und Fragmenten von mindestens 7 Aminosäuren davon, welche Fragmente das Hexamer TPEGAE aufweisen, besteht.
4. Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 1 bis 3, dadurch gekennzeichnet, dass das Peptid die Aminosäuresequenz CGQRETPEGAEAKPWYC umfasst und über die C-Reste zyklisiert ist.
5. Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 1 bis 4, dadurch gekennzeichnet, dass das Peptid durch eine Disulfidbrücke zwischen den C-Resten zyklisiert ist.
6. Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 1 bis 5, dadurch gekennzeichnet, dass der Hemmstoff der viralen Neuraminidase Zanamivir oder Oseltamivir ist.
7. Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 1 bis 6, dadurch gekennzeichnet, dass sie einen pharmazeutisch akzeptablen Träger umfasst und als pharmazeutische Zusammensetzung hergerichtet ist, die zur Verabreichung am Menschen geeignet ist.
8. Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 1 bis 7, dadurch gekennzeichnet, dass sie einen pharmazeutisch akzeptablen Träger umfasst, der ausgewählt ist aus Wasser, insbesondere Wasser für Injektion, Kochsalz, Natriumphosphat, Natriumacetat , Natriumcar- bonat, Zitrat, Glycin, Glycylglycin, Histidin, Lysin, Arginin, TRIS, Natriumeitrat, Ringer-Lösung, Dextrose, Mannit, Trehalose, Saccharose, Sorbit, Fruchtzucker, Maltose, Lactose oder Dextran, Hank-Lösung, fixierte Öle, Ethyloleat, Substanzen, die die Iso- tonie und die chemische Stabilität verbessern, Konservierungsmittel, pharmazeutisch akzeptable Proteine, Polysaccharide, Po- lymilchsäuren, Polyglykolsäuren, polymere Aminosäuren und Amino- säure-Copolymere .
9. Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 1 bis 8, dadurch gekennzeichnet, dass sie - unabhängig voneinander - das Peptid in einer Menge von 1 \iq bis 10 g, vorzugsweise von 10 ]iq bis 1 g, insbesondere von 1 mg bis 100 mg, und den Hemmstoff der viralen Neuraminidase in einer Menge von 1 ]iq bis 10 g, vorzugsweise von 100 \iq bis 1 g, insbesondere von 1 mg bis 200 mg,
umfasst .
10. Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 1 bis 9, dadurch gekennzeichnet, dass sie in flüssiger Form vorliegt und - unabhängig voneinander - das Peptid in einer Menge von 1 \iq bis 10 g, vorzugsweise von 10 g bis 1 g, insbesondere von 1 mg bis 100 mg, und
den Hemmstoff der viralen Neuraminidase in einer Menge von 1 iq bis 10 g, vorzugsweise von 100 pg bis 1 g, insbesondere von 1 mg bis 200 mg,
umfasst und in einem Volumen von 0,5 bis 10 ml, insbesondere in einem Volumen von 1 bis 5 ml, vorliegt.
11. Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 1 bis 10, dadurch gekennzeichnet, dass das Peptid und/oder der Hemmstoff der viralen Neuraminidase in einer vernebelbaren Pulverformulierung oder in einer vernebelbaren Flüssigformulierung vorliegen.
12. Set, umfassend die folgenden, jeweils in voneinander getrennten Behältnissen vorgesehenen Komponenten:
ein Peptid, welches aus 7-17 benachbarten Aminosäuren besteht und das Hexamer TXIEX2X3E umfasst, wobei Xi , X2 und X3 jede natürliche oder nicht natürliche Aminosäure sein kann, wobei das Peptid keine TNF-Rezeptor-Bindungsaktivität aufweist und zykli- siert ist, und
ein Hemmstoff der viralen Neuraminidase .
13. Set nach Anspruch 12, dadurch gekennzeichnet, dass die jeweils in voneinander getrennten Behältnissen vorgesehenen Komponenten wie in einem der Ansprüche 1 bis 11 definiert sind.
14. Zusammensetzung, umfassend
ein Peptid, welches aus 7-17 benachbarten Aminosäuren besteht und das Hexamer X1EX2X3E umfasst, wobei X: , X2 und X3 jede natürliche oder nicht natürliche Aminosäure sein kann, wobei das Peptid keine TNF-Rezeptor-Bindungsaktivität aufweist und zykli- siert ist, und
ein Hemmstoff der viralen Neuraminidase
zur Anwendung zur Verhinderung und Behandlung der Influenza.
15. Zusammensetzung, umfassend
ein Peptid, welches aus 7-17 benachbarten Aminosäuren besteht und das Hexamer TX1EX2X3E umfasst, wobei Xx , X2 und X3 jede natürliche oder nicht natürliche Aminosäure sein kann, wobei das Peptid keine TNF-Rezeptor-Bindungsaktivität aufweist und zykli- siert ist, und
ein Hemmstoff der viralen Neuraminidase
zur Anwendung bei einer Lungenentzündung, die durch die Influenza verursacht ist.
16. Set, umfassend die folgenden jeweils in voneinander getrennten Behältnissen vorgesehenen Komponenten:
ein Peptid, welches aus 7-17 benachbarten Aminosäuren besteht und das Hexamer TX1EX2X3E umfasst, wobei Xi , X2 und X3 jede natürliche oder nicht natürliche Aminosäure sein kann, wobei das Peptid keine TNF-Rezeptor-Bindungsaktivität aufweist und zykli- siert ist, und
ein Hemmstoff der viralen Neuraminidase
zur Anwendung zur Verhinderung und Behandlung der Influenza.
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