WO2011081430A2 - 향상된 수용해도를 갖는 라파마이신 함유 고분자나노입자 주사제형 조성물 및 그 제조방법, 및 방사선 요법과 병용하기 위한 항암 조성물 - Google Patents

향상된 수용해도를 갖는 라파마이신 함유 고분자나노입자 주사제형 조성물 및 그 제조방법, 및 방사선 요법과 병용하기 위한 항암 조성물 Download PDF

Info

Publication number
WO2011081430A2
WO2011081430A2 PCT/KR2010/009476 KR2010009476W WO2011081430A2 WO 2011081430 A2 WO2011081430 A2 WO 2011081430A2 KR 2010009476 W KR2010009476 W KR 2010009476W WO 2011081430 A2 WO2011081430 A2 WO 2011081430A2
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
rapamycin
composition
polylactic acid
polymer nanoparticle
containing polymer
Prior art date
Application number
PCT/KR2010/009476
Other languages
English (en)
French (fr)
Other versions
WO2011081430A3 (ko
Inventor
강혜원
서민효
이사원
김봉오
최은경
정성윤
우하나
Original Assignee
주식회사 삼양사
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 주식회사 삼양사 filed Critical 주식회사 삼양사
Priority to EP10841262.8A priority Critical patent/EP2522338A4/en
Priority to JP2012547021A priority patent/JP2013516407A/ja
Priority to US13/519,914 priority patent/US20120276169A1/en
Priority to CN201080060367.2A priority patent/CN102740834B/zh
Publication of WO2011081430A2 publication Critical patent/WO2011081430A2/ko
Publication of WO2011081430A3 publication Critical patent/WO2011081430A3/ko
Priority to US14/231,355 priority patent/US9173841B2/en

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/4353—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • A61K31/436—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems the heterocyclic ring system containing a six-membered ring having oxygen as a ring hetero atom, e.g. rapamycin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A61K9/127—Liposomes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00

Definitions

  • the present invention relates to a rapamycin-containing polymer nanoparticle injectable composition having improved water solubility, and more particularly, to a rapamycin-containing injectable composition having a water solubility improved by solubilizing low-water-soluble rapamycin into polymer nanoparticles and a method for preparing the same. And anti-cancer compositions for use in combination with radiation therapy.
  • Rapamycin (molecular formula: C 51 H 79 NO 13 , molecular weight: 914.2) is a macrolide lactone compound, also known as sirolimus, which has immunosuppressive activity and commercialized as a transplant rejection inhibitor (Rapamune) in organ transplant patients. It is. Rapamycin is also used to suppress organ transplant rejection. It can also be used to treat ocular inflammation, restenosis and rheumatoid arthritis.
  • rapamycin has not only an immunosuppressive function but also an anticancer agent that destroys cancer cells by inducing apoptosis as an inhibitor of mammalian target of rapamycin (mTOR).
  • mTOR mammalian target of rapamycin
  • rapamycin has a very low solubility in water (1-2 ⁇ g / ml), so the absorption rate is very low when administered orally, and the change in bioavailability between individuals is very severe.
  • Rapamune tablets are introduced as a formulation containing rapamycin.
  • the tablet contains excipients such as sucrose, lactose, polyethylene glycol 8000, calcium sulfate, microcrystalline cellulose, Povidone, poloxamer 188, and glyceryl monooleate.
  • Rapamune® oral solutions also include Phosal 50 PG (phosphatitylcholine, propylene glycol, mono-glycerides, di-glycerides, ethanol, soybean fatty acids, ascorbyl palmitate) and polysorbate 80. Contains 2.5% ethanol.
  • the bioavailability (absolute bioavailability) is about 14%
  • the Rapamune tablet is orally administered
  • the Rapamune® solution is about 25% higher than the oral administration of the Rapamune® solution. Show utilization.
  • the bioavailability of both agents is low, below 20%, due to the low solubility of rapamycin in water.
  • U.S. Patent 5,559,121 discloses a capsule composition containing a solution in which rapamycin is dissolved in a mixed solution comprising surfactant polysorbate 80, N, N-dimethylacetamide and one of lecithin or phospholipid.
  • Patent 5,616, 588 discloses an injectable aqueous solution composition in which rapamycin is dissolved in an aqueous solution of propylene glycol at a concentration of 0.1 to 4 mg / ml and does not contain a nonionic surfactant.
  • the conventional rapamycin injectable aqueous solution there is a disadvantage in that the administration of the rapamycin injection solution is performed in a short time. At present there are no commercially available injection formulations.
  • Korean Patent 0160957 discloses a composition for inhibiting organ or tissue transplant rejection, which contains rapamycin in an amount effective to inhibit transplant rejection of an organ or tissue of a mammal.
  • this patent discloses the use of rapamycin in combination with oils such as olive oil, alcohols, propylene glycol and polyethylene glycols and surfactants such as cremopoa EL and polysorbate 80.
  • the present invention is to solve the problems of the prior art as described above, rapamycin-containing polymer nanoparticles that can be intravenous injection, subcutaneous / muscle injection using only an organic solvent, excellent biocompatibility, biodegradable polymers It is a technical subject to provide a particle injection composition, its manufacturing method, and anticancer composition for use in combination with radiation therapy.
  • the present invention to solve the above technical problem, (i) AB-type diblock copolymer composed of a hydrophilic block (A) and a hydrophobic block (B), (ii) a polylactic acid containing at least one carboxyl group at the terminal or Alkali metal salt of the derivative and (iii) Rapamycin as an active ingredient, wherein the rapamycin is enclosed in the micelle formed by the AB-type diblock copolymer and the alkali metal salt of polylactic acid or a derivative thereof. It provides a rapamycin-containing polymer nanoparticle injectable composition.
  • AB type diblock copolymer composed of hydrophilic block (A) and hydrophobic block (B), (ii) polylactic acid comprising at least one carboxyl group at the end or Alkali metal salts of derivatives and (iii) solubilizing rapamycin as an active ingredient in an organic solvent; (b) removing the organic solvent from the result of step (a); And (c) adding an aqueous medium to the resultant of step (b), a method for preparing a rapamycin-containing polymer nanoparticle injectable composition.
  • the AB-type diblock copolymer consisting of a hydrophilic block (A) and a hydrophobic block (B), (ii) a polylactic acid or derivative thereof containing at least one carboxyl group at the end Radiation therapy comprising an alkali metal salt and (iii) rapamycin as an active ingredient, wherein rapamycin is enclosed within nanoparticles formed by the AB-type diblock copolymer and the alkali metal salt of the polylactic acid or derivatives thereof.
  • An anticancer composition for use in combination with is provided.
  • the injectable composition may provide an injection solution having a solubility of rapamycin of 0.1 mg / ml or more upon reconstitution in an aqueous solution after drying.
  • a rapamycin injection composition capable of solubility of rapamycin of 0.1 mg / ml or more, containing no organic solvent, having excellent biocompatibility, and enabling intravenous injection and subcutaneous / muscle injection using only biodegradable polymers It can be obtained, the effect of significantly increasing the anticancer efficacy when administered in combination with the composition of the present invention can be expected.
  • Rapamycin-containing injectable compositions of the present invention can maximize the radiation effect by synergism, thereby reducing the toxicity caused during radiation treatment.
  • Rapamycin is a drug that has strong pharmacological activity such as immunosuppressive effect as well as radiosensitizing effect. It is one of the drugs with severe side effects, and because it is insoluble in water, it should be formulated using a solubilizer. Although most of the surfactants have the same toxicity as the hypersensitivity reaction, the rapamycin-containing injectable composition of the present invention does not cause toxicity of the solubilizer, and minimizes the dose of rapamycin to reduce side effects while minimizing side effects. Can be exercised.
  • FIG. 1 is an NMR spectrum of D, L-PLA-COONa according to Preparation Example 1.
  • FIG. 2 is an NMR spectrum of mPEG-PLA according to Preparation Example 2.
  • Figure 3 is a graph showing the body dynamic evaluation of the rapamycin-containing polymer nanoparticles obtained in Experimental Example 1.
  • Figure 4 is a graph showing the radiation sensitivity effect test results of the rapamycin-containing polymer nanoparticle composition obtained in Experimental Example 2.
  • FIG. 6 is a graph showing the results of in vivo kinetics of rapamycin-containing polymer nanoparticles obtained in Experimental Example 4.
  • FIG. 6 is a graph showing the results of in vivo kinetics of rapamycin-containing polymer nanoparticles obtained in Experimental Example 4.
  • rapamycin in the present invention includes both rapamycin, derivatives or analogs thereof and pharmaceutically acceptable salts thereof.
  • Derivatives or analogs of rapamycin specifically include, but are not limited to, benzoyl rapamycin, everolirimus, temsirolimus, pimetriomus, biolimus, and the like.
  • nanoparticle is a concept that collectively refers to particles of the nanometer level of the particle diameter, and includes micelles, mixed micelles, nanocapsules or nanospheres, the size level is not limited thereto, for example, 1 to 500nm It may be a particle diameter.
  • amphiphilic diblock copolymer (i) is an AB-type diblock copolymer composed of a hydrophilic block (A) and a hydrophobic block (B), and the hydrophilic block (A) is polyethylene glycol, and the hydrophobic Block (B) may be polylactic acid or a derivative thereof.
  • the polyethylene glycol of the hydrophilic block (A) may be polyethylene glycol, methoxy polyethylene glycol, and the like, but is not limited thereto, and specifically, methoxy polyethylene glycol.
  • the number average molecular weight of the hydrophilic block (A) is preferably 500 to 20,000 Daltons, more preferably 1,000 to 10,000 Daltons, even more preferably 1,000 to 5,000 Daltons. When the number average molecular weight of the hydrophilic block (A) is less than 500 Daltons, the hydrophilic portion may be smaller than the hydrophobic portion, so that the composition of the present invention may not be dissolved in water.
  • the content of the hydrophilic block (A) in the amphiphilic diblock copolymer is preferably 40 to 70% by weight, more preferably 50 to 65% by weight based on 100% by weight of the total diblock copolymer, It is advantageous in that it can stably maintain micelles of the amphiphilic diblock copolymer.
  • the polylactic acid or derivative thereof of the hydrophobic block (B) is, for example, polylactic acid, polylactide, polyglycolide, polymandelic acid, polycaprolactone, polydioxan-2-one, polyamino acid, poly At least one selected from the group consisting of orthoesters, polyanhydrides and copolymers thereof, and more specifically, polylactic acid, polylactide, polyglycolide, polymandelic acid, polycaprolactone or polydioxane It can be -2 degrees.
  • the polylactic acid or derivative thereof of the hydrophobic block (B) is a polylactic acid, polylactide, polycaprolactone, a copolymer of lactic acid and mandelic acid, a copolymer of lactic acid and glycolic acid, It may be at least one selected from the group consisting of a copolymer of lactic acid and caprolactone and a copolymer of lactic acid and 1,4-dioxane-2one.
  • the number average molecular weight of the hydrophobic block (B) is preferably 500 to 10,000 Daltons, more preferably 500 to 5,000 Daltons.
  • the content of the hydrophobic block (B) in the amphiphilic diblock copolymer is preferably 30 to 60% by weight, more preferably 35 to 50% by weight based on 100% by weight of the total diblock copolymer, It is advantageous in that it can stably maintain micelles of the amphiphilic diblock copolymer.
  • the alkali metal salt of polylactic acid or a derivative thereof containing at least one carboxyl group at the terminal serves to enhance the encapsulation efficiency of the drug by hardening the core inside the micelle containing the drug.
  • polylactic acid or derivative thereof including at least one carboxyl group at the terminal examples include polylactic acid, polylactide, polyglycolide, polymandelic acid, polycaprolactone, polyanhydride and copolymers thereof. One or more selected may be used. More specifically, the polylactic acid or derivatives thereof is polylactide, polyglycolide, polycaprolactone or copolymers thereof. According to a preferred embodiment of the present invention, the polylactic acid or derivative thereof is selected from the group consisting of polylactic acid, copolymers of lactic acid and mandelic acid, copolymers of lactic acid and glycolic acid, and copolymers of lactic acid and caprolactone There may be more than one.
  • the alkali metal salt of polylactic acid or a derivative thereof refers to a form in which the terminal carboxylic acid anion and the alkali metal ion of the polylactic acid or the derivative thereof are bonded by an ionic bond.
  • the alkali metal is preferably a monovalent metal selected from the group consisting of sodium, potassium and lithium, more preferably sodium.
  • the opposite terminal of the carboxyl group which is ion-bonded with the alkali metal ion is substituted with one selected from the group consisting of hydroxy, acetoxy, benzoyloxy, decanoyloxy, palmitoyloxy and alkoxy.
  • the opposite terminal of the carboxyl group which is ion-bonded with the alkali metal ion is substituted with one selected from the group consisting of hydroxy, acetoxy, benzoyloxy, decanoyloxy, palmitoyloxy and alkoxy.
  • polylactic acid alkali metal salt including at least one carboxyl group at the terminal of the present invention may be represented by the formula (1).
  • R is hydrogen, acetyl group, benzoyl group, decanoyl group, palmitoyl group, methyl group or ethyl group,
  • Z and Y are hydrogen, methyl group or phenyl group
  • M is sodium, potassium or lithium
  • n is an integer from 1 to 30,
  • n is an integer of 0 to 20
  • the salt of the polylactic acid or a derivative thereof may be represented by the following formula (2).
  • R is hydrogen, acetyl group, benzoyl group, decanoyl group, palmitoyl group, methyl group or ethyl group,
  • X is a methyl group
  • Y ' is hydrogen or a phenyl group
  • Z is hydrogen, methyl or phenyl
  • M is sodium, potassium or lithium
  • p is an integer from 0 to 25,
  • q is an integer from 0 to 25,
  • the alkali metal salt of the polylactic acid or derivatives thereof preferably has a water solubility of 20 mg / ml or more, and when dissolved in an aqueous medium, the hydrophilic portion of the carboxylic acid anion present in the molecule and the hydrophobic portion of the polylactic acid are balanced to form micelles. Get involved. Therefore, if the molecular weight is too large, the hydrophobic portion becomes large, so that it is difficult to associate hydrophilic anionic carboxylate anions, and micelles may not be formed well. On the contrary, if the molecular weight is too small, it is completely dissolved in water, making it difficult to form micelles themselves. .
  • the number average molecular weight of the alkali metal salt of the polylactic acid or derivatives thereof is 500 to 2,500 Daltons, specifically 1,000 to 2,000 Daltons. If the molecular weight is less than 500 Daltons may be completely dissolved in water to make the micelle formation difficult, and if the molecular weight exceeds 2,500 Daltons, the hydrophobicity is increased, so that it is difficult to dissolve in an aqueous solution, it may not be able to form micelles.
  • the rapamycin-containing polymer nanoparticle injectable composition of the present invention is 0.1 to 10% by weight of rapamycin, preferably 0.2 to 5% by weight, hydrophilic block (A) and hydrophobic block (B). 40 to 90% by weight, preferably 45 to 74% by weight, and 10 to 50% by weight of an alkali metal salt of polylactic acid or a derivative thereof containing at least one carboxyl group at the end, preferably Comprises 25 to 45% by weight.
  • the weight ratio of the AB-type diblock copolymer and the alkali metal salt of polylactic acid or a derivative thereof including at least one carboxyl group at the terminal thereof is from 9: 1 to 3: 7, more specifically 5: 1. ⁇ 1: 2.
  • divalent or trivalent metal ions may be further added to further improve the stability of the nanoparticles.
  • the divalent or trivalent metal ion reacts with the terminal monovalent alkali metal cation of the alkali metal salt of polylactic acid or a derivative thereof in the polymer nanoparticle to form a stronger ionic bond with the carboxyl group at the terminal of the polylactic acid or derivative.
  • an AB-type diblock copolymer composed of a hydrophilic block (A) and a hydrophobic block (B), and (ii) at least one carboxyl group at the terminal, the carboxy terminal A polylactic acid or a derivative thereof fixed with a divalent or trivalent metal ion and (iii) a rapamycin as an active ingredient, wherein the AB-type diblock copolymer and the polylactic acid or a derivative thereof form nanoparticles
  • a rapamycin-containing polymer nanoparticle injectable composition wherein the rapamycin is encapsulated inside.
  • polylactic acid or derivative thereof including at least one carboxyl group at the terminal those as described above may be used.
  • the divalent or trivalent metal ion is preferably a divalent or trivalent cation of a metal selected from the group consisting of calcium, magnesium, barium, chromium, iron, manganese, nickel, copper, zinc and aluminum, more preferably Is a divalent cation of calcium or magnesium.
  • the equivalent amount of divalent or trivalent metal ions may be adjusted according to the release rate of the drug encapsulated inside the polymer nanoparticles. Specifically, when the divalent or trivalent metal ions are contained in less than 1 equivalent to the equivalent of the carboxyl group of the polylactic acid alkali metal salt in the polymer nanoparticle composition, the number of the carboxyl terminal groups of the polylactic acid salt is less likely to be released. When it is included in an amount exceeding 1 equivalent, the number of carboxyl terminal groups of the polylactic acid salts is increased, thereby delaying the release rate of the drug.
  • the composition of the invention is preferably 0.1 to 10% by weight, more preferably rapamycin, based on the total weight of the composition 0.2 to 5 weight percent; 40 to 90% by weight of the aforementioned amphiphilic block copolymer, more preferably 45 to 74% by weight; And 10 to 50% by weight of polylactic acid or a derivative thereof containing at least one carboxyl group at the terminal, more preferably 25 to 45% by weight, wherein the divalent or trivalent metal ions are added to the polylactic acid or derivatives thereof. 0.01 to 10 equivalents, more preferably 1 to 2 equivalents, based on the terminal carboxyl equivalents.
  • the relative proportion of the amphiphilic block copolymer is too large, it has a micelle property rather than that of the polymer nanoparticles, which causes a problem in stability during dilution. If the relative ratio of the metal salt of polylactic acid or its derivative is too large, a divalent or trivalent metal is present. When ions are added, a uniformly dispersed nanoparticle solution cannot be obtained due to precipitation with a divalent or trivalent metal salt of polylactic acid or a derivative thereof.
  • the use of divalent or trivalent metal ions results in the drug being incorporated into the nanoparticles comprising the amphiphilic block copolymer and the polylactic acid or derivative thereof having the carboxy terminus fixed with a divalent or trivalent metal ion.
  • Encapsulated compositions can be obtained.
  • the composition of the invention may be in lyophilized or spray dried dry form. That is, the micelles are formed in an aqueous solution containing the above components, and then dried by freeze drying, spray drying, or the like to obtain a solid polymer nanoparticle composition.
  • the lyophilized composition it may further include polysaccharides, mannitol, sorbitol, lactose and the like as a lyophilization aid.
  • the lyophilization aid one or more selected from the group consisting of mannitol, sorbitol, lactose, trehalose and sucrose may be preferably used, more preferably mannitol and lactose.
  • rapamycin is physically associated with the hydrophobic block portion of the polymer described above to be located in the hydrophobic core of the nanoparticles formed in the aqueous solution, wherein the particle size of the rapamycin-containing polymer nanoparticles is Preferably it is in the range of 10 to 150 nm.
  • an injectable composition having a rapamycin concentration of at least 0.1 mg / ml, such as from 0.1 to 25 mg / ml, more specifically from 0.2 to 10 mg / ml. You can get it. If the rapamycin concentration is lower than 0.1 mg / ml, the desired level of rapamycin dosage effect cannot be obtained. If the rapamycin concentration is higher than 25 mg / ml, the viscosity of the aqueous solution is difficult to be injected at a temperature lower than room temperature. In one embodiment, an injectable composition is provided wherein the concentration of rapamycin is 0.1-25 mg / ml.
  • the rapamycin-containing polymer micelle injectable composition of the present invention may further contain pharmaceutical supplements and other therapeutically useful substances such as preservatives, stabilizers, hydrates or emulsifiers, salts and / or buffers for controlling osmotic pressure. It may contain.
  • injectable compositions of the invention may be administered rectally, topically, transdermally, intravenously, intramuscularly, intraperitoneally, subcutaneously, and the like.
  • the composition in the lyophilized form may be administered in the form of vascular injection by reconstitution in an aqueous medium such as distilled water for injection, 5% glucose and physiological saline.
  • AB type diblock copolymer composed of hydrophilic block (A) and hydrophobic block (B), (ii) polylactic acid comprising at least one carboxyl group at the end or Alkali metal salts of derivatives and (iii) solubilizing rapamycin as an active ingredient in an organic solvent; (b) removing the organic solvent from the result of step (a); And (c) adding an aqueous medium to the resultant of step (b), a method for producing a rapamycin-containing polymer nanoparticle composition.
  • the organic solvent in step (a) is dichloromethane, ethanol, methanol, propanol, acetone, acetonitrile, 1,2-propylene glycol, N-methylpyrrolidone, N, N-diacetamide, polyethylene glycol or its One or more selected from the group consisting of derivatives (molecular weight 300 to 600 daltons) and glycerin are preferably used.
  • Removal of the organic solvent in step (b) may be carried out by a conventional method, specifically, it may be evaporated using a vacuum evaporator.
  • aqueous medium distilled water, water for injection, physiological saline or an aqueous solution of lyophilization aid may be used.
  • a divalent or trivalent metal ion is added to the resultant to further fix the terminal group of polylactic acid or a derivative thereof (c It may further comprise step -1).
  • a aqueous solution containing divalent or trivalent metal ions may be added to the aqueous polymer micelle solution obtained in step (c), and stirred at room temperature for 30 minutes or more.
  • the divalent or trivalent metal ions may be added in the form of sulfate, hydrochloride, carbonate, phosphate and hydrate, specifically, calcium chloride, magnesium chloride, zinc chloride, aluminum chloride, iron chloride, calcium carbonate, magnesium carbonate, calcium phosphate
  • Magnesium phosphate, aluminum phosphate, magnesium sulfate, calcium hydroxide, magnesium hydroxide, aluminum hydroxide or zinc hydroxide may be added.
  • step (d) sterilizing the polymer nanoparticle composition obtained in the step (c) or (c-1); (E) filling a sterilized micelle aqueous solution in a predetermined amount in a container; And (f) lyophilizing the container filled in the step (e).
  • step (f) one or more selected from the group consisting of mannitol, sorbitol, lactic acid, trehalose and sucrose may be used as a lyophilization aid. More specifically, mannitol can be used.
  • the method may further include the step (g) of reconstitution with an aqueous solution such as distilled water, water for injection, saline, etc. to reconstitute the rapamycin-containing injection solution composition.
  • an anticancer composition for use with radiation therapy utilizing the rapamycin-containing polymer nanoparticle composition of the present invention.
  • the administration of rapamycin in the body is administered once at a dose of 30 mg / m 2 to 300 mg / m 2 , wherein the radiation is 5 times at 80 Gy daily Applicable
  • the anticancer composition of the present invention it is possible to slowly instill intravenously or subcutaneously or intramuscularly.
  • the anticancer composition of the present invention may be administered before or after irradiation at intervals of several minutes to several weeks.
  • Radiation that can be used in combination with the anticancer composition of the present invention includes, for example, ⁇ -rays, X-rays (external beams) and the like.
  • the amount of radiation may be irradiated in the range of about 1 to about 100 Gy, specifically about 5 to about 80, more specifically 10 to 50 Gy, but the dose range for radioisotopes is equivalent It depends on the half-life of the element and the intensity and type of radiation emitted.
  • the anticancer composition for use in combination with radiation therapy, utilizing the rapamycin-containing polymer nanoparticle composition of the present invention may be administered 1 minute to 7 days before irradiation.
  • the anticancer composition for use in combination with radiation therapy utilizing the rapamycin-containing polymer nanoparticle composition of the present invention is used for chemotherapy and radiotherapy by its administration over 4 to 12 weeks. It can be used in combination therapy that is carried out once to five times a week (for example, once a week, twice a week, three times a week, five times a week).
  • the rapamycin-containing polymer nanoparticle injection composition of the present invention is administered to the cancer cells of the mammal at the time of irradiation, before or after irradiation It can enhance the sensitivity to radiation treatment of cancer cells in mammals.
  • the polylactic acid alkali metal salt of the present invention was prepared according to a known method such as Korean Patent Application No. 2002-63955. That is, 1,000 g of D, L-lactic acid was put into a 2 L three-necked round bottom flask and a stirrer was installed. Then, the mixture was reacted for 1 hour while heating at 80 ° C. in an oil bath and depressurizing to 25 mmHg with a reduced pressure aspirator to remove excess water. The reaction temperature was raised to 160 ° C., and the reaction was terminated after the reaction was carried out for 7 hours under the reduced pressure of 5 to 10 mmHg.
  • A is the peak area of the methylene protons of D, L-polylactic acid
  • B is the peak area of the methylene proton of the polymer terminal D, L-lactic acid,
  • C is the peak area of the methylene protons of the dicarboxylic acid
  • N is the number of methylene protons of the dicarboxylic acid.
  • the resulting polymer was dissolved in methylene chloride and added to diethyl ether to precipitate the polymer.
  • the obtained polymer was dried in a vacuum oven for 48 hours.
  • the number average molecular weight of mPEG-PLA obtained through the above process was 2,000-1,750 Daltons, and it was confirmed to be AB type by 1 H-NMR of FIG. 2.
  • Rapamycin content of the prepared composition and the size measurement results of the polymer nanoparticles are as follows.
  • Example 1 the in vivo kinetics of the rapamycin-embedded nanoparticle composition was evaluated.
  • male Sprague-Dawley rats weighing 210-250 g were used, 5 mg / kg doses based on rapamycin at 5, 15, 30 minutes and 1, 2, 4, 8 after intravenous and subcutaneous injection. Every 24 hours, 0.3 ml of whole blood was collected into the tail artery. Collected whole blood was treated with protein precipitation (PPT, Progress in Pharmaceutical and Biomedical Analysis, Volume 5, 2003, Pages 199-254), followed by centrifugation to obtain 0.15 ml of clear supernatant, followed by LC / MS / MS method. The blood rapamycin concentration was analyzed.
  • PPT protein precipitation
  • the in vivo kinetic profile of rapamycin is shown in FIG. 3 and the in vivo kinetic parameters are shown in Table 1.
  • the C max of intravenous and subcutaneous administration was about 7 times higher than that of subcutaneous administration, and the half-life (t 1/2 ) in disappearance was about 3 hours, but the blood concentration at 24 hours was subcutaneous.
  • Cigars were about two times higher than intravenous administration. When the intravenous administration was 100, the bioavailability (F%) of subcutaneous administration was about 74%.
  • Cells were harvested from stored in liquid nitrogen and established in vitro cell culture. After harvesting the cells, the cells were washed with sterile discrete saturated saline (PBS) and the number of viable cells was measured. The cells were resuspended in sterile PBS at a concentration of 7 ⁇ 10 7 cells / ml.
  • PBS sterile discrete saturated saline
  • non-thymus mice (20-25 g, 8-week old) were injected subcutaneously with 0.1 ml of cell suspension containing 7 ⁇ 10 5 human lung cancer cells (A549).
  • A549 is a well known cancer that is resistant to chemotherapy, including radiation and some anticancer agents. After the cancer reached a certain size, three xenografts were transplanted three times to form a xenograft of 3 to 4 mm. Xenograft fragments were injected subcutaneously with 12 gauge trocane in the right flank of healthy nude (nu / nu) non-thymus mice (20-25 g, 8 weeks old).
  • the drug was administered and this time point was recorded as 1 day.
  • the mice were divided into 5 groups and the composition of Example 1 was administered at a 5 mg / kg dose of rapamycin through the tail vein daily for 5 days and the radioactivity of 2 Gy was examined after 3 hours.
  • the major and minor axis of the tumor was measured over time, from which the tumor volume was calculated by Equation 1 below.
  • the relative tumor volume was calculated as in Equation 2 below to evaluate the therapeutic effect.
  • Tumor volume (TV) 0.5 x L x W 2 (L: long axis, W: short axis)
  • Relative Tumor Volume (RTV) (Vt / Vo) x 100% (Vt: TV on t day, Vo: TV on day 0)
  • mice per treatment and 4 or more tumors per group were used.
  • the minimum tumor diameter was 4 or 30 mm 3 volumes. Animals that die within two weeks after the last drug administration were considered toxic killing and were excluded from the evaluation. Treatment groups that did not fully recover after more than 1 toxic killing per 3 animals or reduced average body weight by more than 15% were considered to be non-tumor efficacy.
  • the experimental results are shown in FIG. 4.
  • the anticancer efficacy of the composition alone group (PNP-Si) and the radiation alone group (IR) of Example 1 was better than that of the non-treated group (CONT) and the polymer nanoparticle carrier group (PNP). Cancer growth inhibition.
  • the combination of the composition of Example 1 and radiation treatment (IR + PNP-Si) compared to the CONT and PNP groups as well as the PNP-Si and IR groups, the anti-cancer effect was significantly increased, and the growth of cancer was almost suppressed. Appeared to stop.
  • rapamycin 25 mg of rapamycin, 1650 mg of mPEG-PLA of Preparation Example 2 and 825 mg of D, L-PLACOONa of Preparation Example 1 were completely dissolved in dichloromethane, and then the organic solvent was volatilized using a rotary depressurizer. Rapamycin concentration was added to the dry matter to 1.0 mg / ml to form a micelle. 100 mg / mL calcium chloride solution was further added to 67.5 mg of calcium chloride, followed by stirring. The solution was sterilized by 0.2 ⁇ m membrane filter paper and lyophilized into a vial. Rapamycin content of the prepared composition and the size measurement results of the polymer nanoparticles are as follows.
  • Example 2 Using the rapamycin-containing polymer nanoparticle composition of Example 2, the following experiment was performed to evaluate whether the inhibitory effect of cancer cells is maintained even after rapamycin is encapsulated in the polymer nanoparticles.
  • Lung cancer cells A549, NCI-H460 cell lines and breast cancer cells MDA-MB-231, MCF7 were cultured in DMEM (A549, MCF7), RPMI1640 (NCI-H460, MDA-MB-231) cell culture, respectively.
  • DMEM A549, MCF7
  • RPMI1640 NCI-H460, MDA-MB-231) cell culture
  • 50 cells serum experimental group, rapamycin free polymer nanoparticle composition
  • 100 cells rapamycin containing polymer nanoparticle composition, rapamycin
  • Cell culture was obtained by culturing for 14 days in the incubator. After fixing and staining the cells with 0.5% crystal violet solution, the number of generated colonies was counted. The plating efficiency was calculated using the number of cell colonies obtained from Saline experimental group (Equation 3).
  • the rapamycin-free polymer nanoparticle carrier has little effect on the cell proliferation ability, and the rapamycin-containing polymer nanoparticle composition (PNP-sirolimus) has a rapamycin itself.
  • the proliferation ability of cancer cells was significantly decreased. This is a result that can be seen that the drug is maintained even if the rapamycin is encapsulated in the polymer nanoparticles.
  • Example 2 The in vivo kinetics of the rapamycin-enclosed composition in Example 2 was evaluated in the same manner as in Experimental Example 1. However, a 10 mg / kg dose based on rapamycin was orally, intravenous or subcutaneous injection, and 15 ml of blood every 15, 30 minutes and 1, 2, 4, 8, 24, 48 hours were collected into the tail artery.
  • the AUC of the composition of Example 2 was higher than that of the AUC of rapamycin itself (Free sirolimus) by more than three times, indicating that the polymer nanoparticle composition of the present invention had blood retention.
  • the fact that the particulate drug carrier has blood retention is meant to have cancer tissue accumulation by EPR (Enhanced Permeability and Retention) effect, which means that the same effect can be obtained even at a low dose.
  • the bioavailability (BA%) was 100%, AUC level was 33% than intravenous administration, but the blood concentration was about 2 times or more at 24 and 48 hours. It was continuously maintained above the effective concentration.
  • the bioavailability was about 30%, indicating that the composition of the present invention exhibited higher bioavailability than conventional oral formulations (less than 20%).
  • the anticancer efficacy in the animal model of the rapamycin-containing polymer nanoparticle composition of Example 2 was evaluated as follows.
  • A549 cells a lung cancer cell line, were cultured in DMEM medium. The cells were harvested, washed with sterile discrete complete saline (PBS) and counted. The right thigh of healthy nude (nu / nu) non-thymus mice (20-25 g, 6 weeks old) was injected subcutaneously with 0.1 ml suspension containing 1 ⁇ 10 6 A549 cells. After three weeks the size of the carcinoma reached about 70 mm 3 , mice were divided into five groups and this time point was recorded as 1 day. From this point, a rapamycin-containing, non-containing polymer micelle composition was administered to each experimental group via tail vein injection at a dose of 20 mg / kg. From the day 1, measuring the long axis and shortening of the tumor twice a week from which the volume of the tumor was calculated by the equation (5). The weight of the mice was measured at the same time as the tumor volume.
  • PBS sterile discrete complete saline
  • Tumor volume 0.5 x length of major axis x length of minor axis 2
  • the rapamycin-containing polymer nanoparticle composition showed a significant growth retardation effect of A549 carcinoma compared to the control group and the vehicle-administered group, and administered three times a week for 4 weeks (q3d x 3 days x 4 weeks).
  • the anticancer efficacy was slightly better than that of the group administered once weekly for 4 weeks (qw x 4 weeks), but there was no significant difference. From this, it is judged that the formulation according to the present invention can exert efficacy even at a low dose in consideration of the toxic expression of the drug when the drug is administered in excess.
  • the weight change of the mice according to the drug administration tended to recover after completion of less than 10%, the group administered three times a week for four weeks was slower than the group administered once a week for four weeks.
  • the anticancer activity of the composition of Example 2 in combination with radiation therapy was evaluated in the same manner as in Experiment 2 and the experimental results are shown in FIG.
  • the dose was administered only 5 mg / kg daily for 5 days and then compared with the irradiated group (2Gy treatment) and the untreated group.
  • Example 2 Example 2
  • IR radiation alone treatment

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

본 발명은 향상된 수용해도를 갖는 라파마이신 함유 고분자 나노입자 주사제형 조성물, 보다 상세하게는 수용해도가 낮은 라파마이신을 고분자 나노입자로 가용화하여 수용해도를 향상시킨 라파마이신 함유 주사제형 조성물 및 그 제조방법, 및 방사선 요법과 병용하기 위한 항암 조성물에 관한 것이다.

Description

향상된 수용해도를 갖는 라파마이신 함유 고분자나노입자 주사제형 조성물 및 그 제조방법, 및 방사선 요법과 병용하기 위한 항암 조성물
본 발명은 향상된 수용해도를 갖는 라파마이신 함유 고분자 나노입자 주사제형 조성물, 보다 상세하게는 수용해도가 낮은 라파마이신을 고분자 나노입자로 가용화하여 수용해도를 향상시킨 라파마이신 함유 주사제형 조성물 및 그 제조방법, 및 방사선 요법과 병용하기 위한 항암 조성물에 관한 것이다.
라파마이신(분자식: C51H79NO13, 분자량: 914.2)은 실로리무스(sirolimus)로도 알려져 있는 마크로라이드 락톤계 화합물로서, 면역억제 활성을 갖고 있어 장기이식환자의 이식거부 억제제(Rapamune)로 상품화되어 있다. 또한 라파마이신은 장기이식 거부억제 외에도, 폐렴(pulmonary inflammation), 전신 홍반성 루푸스(systemic lupus erythematosis), 건선 등의 면역염증 피부질환(immunoinflammatory skin disorders), 면역염증 장질환(immunoinflammatory bowel disorders), 안 염증(ocular inflammation), 재협착(restenosis), 류마티스 관절염(rheumatoid arthritis) 등의 치료에도 사용할 수 있다.
최근 라파마이신이 면역억제제 기능뿐만 아니라 포유동물의 라파마이신 타겟(mTOR: mammalian target of rapamycin)의 억제제로서 세포예정사(apoptosis)를 유도하여 암세포를 파괴하는 항암제 기능이 있음을 보여주는 보고가 있다. 그러나, 라파마이신은 물에 대한 용해도가 매우 낮아서(1~2 ㎍/ml) 경구 투여 시 흡수율이 매우 낮고, 개체간 생체 이용율의 변화가 매우 심한 단점이 있다.
라파마이신을 포함하는 제형으로 Rapamune 정제가 소개되어 있다. 상기 정제는, 수크로스, 락토스, 폴리에틸렌글리콜 8000, 황산칼슘, 미세결정질 셀룰로스, 포비돈(Povidone), 폴록사머 188, 글리세릴 모노올리에이트 등의 부형제를 포함하고 있다. 또한 Rapamune　경구 용액제에는 Phosal 50 PG (포스파티틸콜린, 프로필렌글리콜, 모노-글리세라이드, 디-글리세라이드, 에탄올, 대두 지방산, 아스코빌 팔미테이트)과 폴리소르베이트 80이 포함되어 있으며, 1.5 ~ 2.5%의 에탄올을 포함하고 있다.
그러나, 상기 Rapamune 경구 용액제를 사람에게 경구투여 했을 때 생체이용율(absolute bioavailability)은 약 14% 정도이고, Rapamune 정제를 경구투여 했을 때는 Rapamune　용액제를 경구투여 했을 때 보다 상대적으로 약 25% 높은 생체 이용율을 보인다. 그러나 두 제제의 생체 이용율이 모두 20% 이하로 낮은데, 이는 라파마이신의 물에 대한 낮은 용해도에 기인한다.
따라서, 라파마이신을 다양한 가용화 기술을 이용하여 제제화하기 위한 여러 시도가 있어 왔다. 미국특허 5,559,121에는 계면활성제 폴리소르베이트 80, N,N-디메틸아세트아미드 및 레시틴 또는 포스포리피드 중의 하나를 포함하는 혼합용액에 라파마이신이 녹아 있는 용액을 함유하는 캡슐제제 조성물이 공지되어 있으며, 미국특허 5,616,588에는 라파마이신이 프로필렌글리콜 수용액에 0.1 ~ 4 mg/ml 농도로 녹아 있으며, 비이온성 계면활성제를 함유하지 않는 주사용 수용액 조성물이 공지되어 있다. 그러나, 기존의 라파마이신 주사용 수용액의 경우는 수용액의 안정성이 떨어져 빠른 시간 안에 투여가 이루어져야만 하는 단점이 있다. 현재로서는 상업적으로 시판되고 있는 주사제형은 없다.
한편 한국특허 0160957호에는 포유류의 기관 또는 조직의 이식거부를 억제하는데 유효한 양으로 라파마이신을 함유하는, 기관 또는 조직이식거부 억제용 조성물이 공지되어 있다. 그러나 이 특허는 라파마이신을 올리브오일과 같은 오일, 알코올, 프로필렌글리콜 및 폴리에틸렌글리콜 및 크레모포아 EL 및 폴리소르베이트 80 같은 계면 활성제와 함께 사용하는 경우를 공지하고 있다.
한편 미국특허 6,322,805와 6,616,941에는 난용성 약물을 가용화할 수 있는 기술로서 친수성 블록으로 폴리에틸렌글리콜(A)과 소수성 블록으로 폴리락타이드(B)가 A-B형태의 이중블록으로 결합된 양친성 블록 공중합체를 이용한 고분자 미셀이 공지되어 있다. 그러나 상기 고분자 미셀로 라파마이신을 가용화시킨 구체적인 예시는 제시하지 못하고 있다.
본 발명은 상기한 바와 같은 종래 기술의 문제점을 해결하고자 한 것으로서, 유기용매를 포함하지 않고, 생체적합성이 우수하며, 생분해성인 고분자만을 사용하여 정맥주사, 피하/근육주사가 가능한 라파마이신 함유 고분자 나노입자 주사제형 조성물, 그 제조방법 및 방사선 요법과 병용하기 위한 항암 조성물을 제공하는 것을 기술적 과제로 한다.
상기한 기술적 과제를 해결하고자 본 발명은, (i) 친수성블록(A)과 소수성블록(B)으로 구성된 A-B형 이중블록 공중합체, (ii) 말단에 적어도 하나의 카르복시기를 포함하는 폴리락트산 또는 그 유도체의 알칼리 금속염 및 (iii) 활성성분으로서 라파마이신을 포함하며, 여기에서 상기 A-B형 이중블록 공중합체과 폴리락트산 또는 그 유도체의 알칼리 금속염이 형성하는 미셀의 내부에 라파마이신이 봉입되는 것을 특징으로 하는, 라파마이신 함유 고분자 나노입자 주사제형 조성물을 제공한다.
본 발명의 다른 측면에 따르면, (a) (i) 친수성블록(A)과 소수성블록(B)으로 구성된 A-B형 이중블록 공중합체, (ii) 말단에 적어도 하나의 카르복시기를 포함하는 폴리락트산 또는 그 유도체의 알칼리 금속염 및 (iii) 활성성분으로서 라파마이신을 유기용매에 가용화 시키는 단계; (b) 상기 (a)단계의 결과물로부터 유기용매를 제거하는 단계; 및 (c) 상기 (b)단계의 결과물에 수성 매질을 가하는 단계를 포함하는, 라파마이신 함유 고분자 나노입자 주사제형 조성물의 제조방법이 제공된다.
본 발명의 또 다른 측면에 따르면, (i) 친수성블록(A)과 소수성블록(B)으로 구성된 A-B형 이중블록 공중합체, (ii) 말단에 적어도 하나의 카르복시기를 포함하는 폴리락트산 또는 그 유도체의 알칼리 금속염 및 (iii) 활성성분으로서 라파마이신을 포함하며, 여기에서 상기 A-B형 이중블록 공중합체와 상기 폴리락트산 또는 그 유도체의 알칼리 금속염이 형성하는 나노입자의 내부에 라파마이신이 봉입되는, 방사선 요법과 병용하기 위한 항암 조성물이 제공된다.
상기 주사제형 조성물은 건조 후 수용액에 재건시 라파마이신의 용해도가 0.1 mg/ml 이상인 주사액을 제공할 수 있다. 본 발명에 따르면, 라파마이신의 용해도가 0.1 mg/ml 이상 가능하며, 유기용매를 포함하지 않고, 생체적합성이 우수하며, 생분해성인 고분자만을 사용하여 정맥주사, 피하/근육주사가 가능한 라파마이신 주사제 조성물을 얻을 수 있으며, 본 발명의 조성물을 방사선 요법과 병용하여 투여 시 항암효능을 현저하게 높여주는 효과도 기대할 수 있다.
본 발명의 라파마이신 함유 주사제형 조성물은 상승작용에 의해 방사선 조사 효과를 극대화시킬 수 있으므로 방사선 치료시 유발되는 독성을 감소시킬 수 있다. 또한 라파마이신은 방사선 민감효과뿐만 아니라 면역억제작용 등 강력한 약리활성을 가지는 약물로 부작용도 심한 약물 중에 하나이고, 또한 물에 녹지 않기 때문에 가용화제를 사용하여 제제화해야 하는데 현재 주사제에 사용 중인 가용화제는 계면활성제로 대부분 과민반응과 같은 독성을 가지고 있지만, 본 발명의 라파마이신 함유 주사제형 조성물은 가용화제의 독성을 유발하지 않을 뿐 아니라 라파마이신의 용량을 최소화하여 부작용을 줄이면서 최대의 방사선 민감효과를 발휘할 수 있다.
도 1은 제조예 1에 따른 D,L-PLA-COONa의 NMR 스펙트럼이다.
도 2는 제조예 2에 따른 mPEG-PLA의 NMR 스펙트럼이다.
도 3은 실험예 1에서 얻은, 라파마이신 함유 고분자 나노입자의 체내동태 평가를 나타낸 그래프이다.
도 4는 실험예 2에서 얻은 라파마이신 함유 고분자 나노입자 조성물의 방사선 민감효과실험 결과를 나타낸 그래프이다.
도 5는 실험예 3에서 얻은 라파마이신 함유 고분자 나노입자의 시험관 내 항암활성실험 결과를 나타낸 그래프이다.
도 6은 실험예 4에서 얻은 라파마이신 함유 고분자 나노입자의 체내동태 실험 결과를 나타낸 그래프이다.
도 7은 실험예 5에서 얻은 라파마이신 함유 고분자 나노입자의 동물모델에서의 항암효능실험 결과를 나타낸 그래프이다.
도 8은 실험예 6에서 얻은 라파마이신 함유 고분자 나노입자의 동물모델에서의 방사선 민감효과 실험 결과를 나타낸 그래프이다.
이하, 본 발명에 대하여 보다 상세히 설명한다.
본 발명에 있어서 용어 "라파마이신" 은 라파마이신, 그의 유도체 또는 유사체 및 이들의 제약상 허용되는 염을 모두 포함한다. 라파마이신의 유도체 또는 유사체에는 구체적으로, 벤조일 라파마이신, 에버로리무스, 템시로리무스, 피메트로리무스, 비올리무스 등이 포함되나, 이에 제한되지는 않는다. 또한 용어 “나노입자”는 입경이 나노미터 수준의 입자를 총칭하는 개념으로 미셀, 혼합미셀, 나노캡슐 또는 나노스피어 등을 포함하며, 그 크기 수준은, 이로써 제한되는 것은 아니나, 예컨대 1 내지 500nm의 입경일 수 있다.
본 발명에 있어서 상기 양친성 이중블록 공중합체 (i)은, 친수성 블록(A)과 소수성 블록(B)으로 구성된 A-B형 이중블록 공중합체이며, 상기 친수성 블록(A)은 폴리에틸렌 글리콜이고, 상기 소수성 블록(B)은 폴리락트산 또는 그 유도체일 수 있다.
상기 친수성 블록(A)의 폴리에틸렌 글리콜은 폴리에틸렌 글리콜, 메톡시 폴리에틸렌 글리콜 등일 수 있으나, 이에 한정되지는 않으며, 구체적으로는 메톡시 폴리에틸렌 글리콜이다. 상기 친수성 블록(A)의 수평균 분자량은 바람직하게는 500 내지 20,000달톤이고, 보다 바람직하게는 1,000 내지 10,000달톤, 보다 더 바람직하게는 1,000 내지 5,000달톤이다. 친수성 블록(A)의 수평균 분자량이 500달톤 미만이면 소수성 부분에 비해 친수성 부분이 작아서 본 발명 조성물이 물에 용해되지 않을 수 있고, 20,000달톤을 초과하면 친수성 부분이 너무 커서 미셀 형성이 어렵다. 또한 상기 양친성 이중블록 공중합체 내의 친수성 블록(A)의 함량은, 이중블록 공중합체 전체 100중량%를 기준으로 바람직하게는 40 내지 70중량%, 보다 바람직하게는 50 내지 65중량%인 것이, 안정적으로 양친성 이중블록 공중합체의 미셀을 유지할 수 있다는 측면에서 유리하다.
상기 소수성 블록(B)의 폴리락트산 또는 그 유도체는, 예를 들어, 폴리락트산, 폴리락타이드, 폴리글리콜라이드, 폴리만델릭산, 폴리카프로락톤, 폴리디옥산-2-온, 폴리아미노산, 폴리오르소에스터, 폴리언하이드라이드 및 그들의 공중합체로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상일 수 있으며, 보다 구체적으로는 폴리락트산, 폴리락타이드, 폴리글리콜라이드, 폴리만델릭산, 폴리카프로락톤 또는 폴리디옥산-2온일 수 있다. 본 발명의 일 구체예에 따르면, 상기 소수성 블록(B)의 폴리락트산 또는 그 유도체는 폴리락트산, 폴리락타이드, 폴리카프로락톤, 락트산과 만델릭산의 공중합체, 락트산과 글리콜산의 공중합체, 락트산과 카프로락톤의 공중합체 및 락트산과 1,4-디옥산-2온의 공중합체로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상일 수 있다. 상기 소수성 블록(B)의 수평균 분자량은 바람직하게는 500 내지 10,000달톤, 보다 바람직하게는 500 내지 5,000달톤이다. 소수성 블록(B)의 수평균 분자량이 500달톤 미만이면 친수성 부분이 커서 미셀 형성이 되지 않는 문제가 있을 수 있고, 10,000달톤을 초과하면 소수성 부분이 커져서 조성물이 물에 가용화 되지 않는 문제가 있을 수 있다. 또한 상기 양친성 이중블록 공중합체 내의 소수성 블록(B)의 함량은, 이중블록 공중합체 전체 100중량%를 기준으로 바람직하게는 30 내지 60중량%, 보다 바람직하게는 35 내지 50중량%인 것이, 안정적으로 양친성 이중블록 공중합체의 미셀을 유지할 수 있다는 측면에서 유리하다.
본 발명에 있어서 상기 말단에 적어도 하나의 카르복시기를 포함하는 폴리락트산 또는 그 유도체의 알칼리 금속염은, 약물이 함유된 미셀의 코아 내부를 단단하게 하여 약물의 봉입 효율을 향상시키는 역할을 하게 된다.
상기 말단에 적어도 하나의 카르복시기를 포함하는 폴리락트산 또는 그 유도체로는 폴리락트산, 폴리락타이드, 폴리글리콜라이드, 폴리만델릭산, 폴리카프로락톤, 폴리언하이드라이드 및 이들의 공중합체로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상을 사용할 수 있다. 보다 구체적으로, 상기 폴리락트산 또는 그 유도체는 폴리락타이드, 폴리글리콜라이드, 폴리카프로락톤 또는 이들의 공중합체이다. 본 발명의 바람직한 일 구체예에 따르면, 상기 폴리락트산 또는 그 유도체는 폴리락트산, 락트산과 만델릭산의 공중합체, 락트산과 글리콜산의 공중합체 및 락트산과 카프로락톤의 공중합체로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상일 수 있다.
본 발명에 있어서 폴리락트산 또는 그 유도체의 알칼리 금속염이란, 상기한 바와 같은 폴리락트산 또는 그 유도체의 말단 카르복시산 음이온과 알칼리 금속이온이 이온결합으로 결합된 형태를 의미한다. 상기 알칼리 금속은 바람직하게는 나트륨, 칼륨 및 리튬으로 구성된 군으로부터 하나 이상 선택되는 일가 금속이며, 보다 바람직하게는 나트륨이다.
한편 상기 폴리락트산 또는 그 유도체의 알칼리 금속염에 있어서, 알칼리 금속이온과 이온결합한 카르복시기의 반대편 말단은, 히드록시, 아세톡시, 벤조일옥시, 데카노일옥시, 팔미토일옥시 및 알콕시로 이루어진 그룹 중에서 선택된 하나로 치환될 수 있다.
구체적으로, 본 발명의 말단에 적어도 하나의 카르복시기를 포함하는 폴리락트산 알칼리 금속염은 화학식 1로 나타낼 수 있다.
[화학식 1]
Figure PCTKR2010009476-appb-I000001
(상기 식에서,
A는
Figure PCTKR2010009476-appb-I000002
이고,
B는
Figure PCTKR2010009476-appb-I000003
,
Figure PCTKR2010009476-appb-I000004
또는
Figure PCTKR2010009476-appb-I000005
이고,
R은 수소, 아세틸기, 벤조일기, 데카노일기, 팔미토일기, 메틸기 또는 에틸기이며,
Z 및 Y는 수소, 메틸기 또는 페닐기이며,
M은 나트륨, 칼륨 또는 리튬이며,
n은 1~30의 정수이며,
m은 0~20의 정수이다.)
더욱 구체적으로는, 상기 폴리락트산 또는 그 유도체의 염은 하기 화학식 2로 나타낼 수 있다.
[화학식 2]
Figure PCTKR2010009476-appb-I000006
(상기 식에서,
R은 수소, 아세틸기, 벤조일기, 데카노일기, 팔미토일기, 메틸기 또는 에틸기이며,
X는 메틸기이며,
Y'는 수소 또는 페닐기이며,
Z는 수소, 메틸기 또는 페닐기이며
M은 나트륨, 칼륨 또는 리튬이며,
p는 0~25의 정수이며,
q는 0~25의 정수이며,
단, p+q는 5~25의 정수이다.)
상기 폴리락트산 또는 그 유도체의 알칼리 금속염은 바람직하게는 20 mg/ml 이상의 수용해도를 나타내며, 수성 매질에 용해되면 그 분자 내에 존재하는 카르복시산 음이온의 친수성 부분 및 폴리락트산의 소수성 부분이 균형을 이루어 미셀 형성에 관여하게 된다. 따라서, 그 분자량이 너무 크면 소수성 부분이 커져서 친수성을 나타내는 말단의 카르복시산 음이온끼리의 회합이 어려워 미셀이 잘 형성되지 않을 수 있고, 반대로 그 분자량이 너무 작으면 물에 완전히 용해되어 미셀 형성 자체가 어려워진다. 본 발명의 바람직한 일 구체예에 따르면, 상기 폴리락트산 또는 그 유도체의 알칼리 금속염의 수평균 분자량은 500 내지 2,500달톤, 구체적으로 1,000 내지 2,000달톤이다. 이 분자량이 500달톤 미만이면 물에 완전히 용해되어 미셀 형성 자체가 어려울 수 있고, 분자량이 2,500달톤을 초과하면 소수성이 커져서 수용액에서 용해가 어려워 미셀을 형성하지 못할 수도 있다.
본 발명의 바람직한 일 구체예에 따르면, 본 발명의 라파마이신 함유 고분자 나노입자 주사제형 조성물은 라파마이신 0.1~10중량%, 바람직하게는 0.2~5중량%, 친수성 블록(A)과 소수성 블록(B)으로 구성된 A-B형 이중블록 공중합체 40 ~ 90중량%, 바람직하게는 45 ~ 74중량%, 및 말단에 적어도 하나의 카르복시기를 포함하는 폴리락트산 또는 그 유도체의 알칼리 금속염 10 ~ 50중량%, 바람직하게는 25 ~ 45중량%을 포함한다.
본 발명의 일 구체예에서, A-B형 이중블록 공중합체와 말단에 적어도 하나의 카르복시기를 포함하는 폴리락트산 또는 그 유도체의 알칼리 금속염의 중량비는9:1~3:7, 보다 구체적으로는 5:1~1:2이다.
한편, 상기 양친성 블록 공중합체 및 폴리락트산 또는 유도체의 알칼리 금속염을 혼합하여 형성된 고분자 나노입자 조성물의 경우, 나노입자의 안정성을 더 향상시키기 위하여 2가 또는 3가의 금속이온이 추가로 첨가될 수 있다. 상기 2가 또는 3가 금속이온은 고분자 나노입자 내의 폴리락트산 또는 그 유도체의 알칼리 금속염의 말단 1가 알칼리금속 양이온과 치환반응하여 폴리락트산 또는 유도체 말단의 카르복실기와 보다 강한 이온 결합을 형성한다
따라서, 본 발명의 일 구체예에 따르면, (i) 친수성블록(A)과 소수성블록(B)으로 구성된 A-B형 이중블록 공중합체, (ii) 말단에 적어도 하나의 카르복시기를 포함하며, 이 카르복시 말단이 2가 또는 3가의 금속이온으로 고정된 폴리락트산 또는 그 유도체 및 (iii) 활성성분으로서 라파마이신을 포함하며, 여기에서 상기 A-B형 이중블록 공중합체와 상기 폴리락트산 또는 그 유도체가 형성하는 나노입자의 내부에 라파마이신이 봉입되는 것을 특징으로 하는, 라파마이신 함유 고분자 나노입자 주사제형 조성물이 제공된다.
상기 말단에 적어도 하나의 카르복시기를 포함하는 폴리락트산 또는 그 유도체로는 상기에서 설명한 바와 같은 것들을 사용할 수 있다.
상기 2가 또는 3가 금속이온에 의한 이온 결합은, 강한 결합력으로 인해 고분자 나노입자의 안정성을 더욱 향상시키는 역할을 한다. 상기 2가 또는 3가의 금속이온은, 바람직하게는 칼슘, 마그네슘, 바륨, 크롬, 철, 망간, 니켈, 구리, 아연 및 알루미늄으로 이루어진 군으로부터 선택된 금속의 2가 또는 3가 양이온이며, 보다 바람직하게는 칼슘 또는 마그네슘의 2가 양이온이다.
상기 2가 또는 3가 금속이온의 당량은 고분자 나노입자 내부에 봉입된 약물의 방출 속도에 따라 조절될 수 있다. 구체적으로는, 고분자 나노입자 조성물에서 폴리락트산 알칼리 금속염의 카르복시기의 당량에 대하여 상기 2가 또는 3가 금속이온이 1당량 미만으로 포함되면 폴리락트산염의 카르복시 말단기와 결합되는 수가 적어 약물의 방출 속도가 빨라지게 되며, 1당량을 초과하여 포함되면 폴리락트산염의 카르복시 말단기와 결합되는 수가 많아 약물의 방출 속도가 지연된다.
폴리락트산 또는 그 유도체의 카르복시기 말단이 2가 또는 3가 금속이온으로 고정된 경우, 본 발명의 조성물은 바람직하게는, 조성물의 전체 중량을 기준으로, 라파마이신 0.1 내지 10중량%, 보다 바람직하게는 0.2 내지 5중량%; 상기한 양친성 블록 공중합체 40 내지 90중량%, 보다 바람직하게는 45 내지 74중량%; 및 말단에 적어도 하나의 카르복시기를 포함하는 폴리락트산 또는 그 유도체 10 내지 50중량%, 보다 바람직하게는 25 내지 45중량%에 더하여, 상기한 2가 또는 3가 금속이온을 상기 폴리락트산 또는 그 유도체의 말단 카르복시기 당량에 대하여 0.01 내지 10당량, 보다 바람직하게는 1 내지 2당량으로 포함한다. 양친성 블록 공중합체의 상대적 비율이 너무 크면 고분자 나노입자로서의 성질 보다는 미셀의 성질을 가지기 때문에 희석 시 안정성에 문제가 생기며, 폴리락트산 또는 그 유도체의 금속염의 상대적 비율이 너무 크면 2가 또는 3가 금속이온 첨가 시 폴리락트산 또는 그 유도체의 2가 또는 3가 금속염으로 침전되어 균일하게 분산된 나노입자 용액을 얻을 수 없다.
상기한 바와 같이 2가 또는 3가 금속이온을 사용하면 결과적으로, 양친성 블록 공중합체 및 카르복시 말단이 2가 또는 3가의 금속이온으로 고정된 폴리락트산 또는 그 유도체를 포함하는 나노입자 내부에 약물이 봉입된 조성물을 얻을 수 있다.
본 발명의 일 구체예에서, 본 발명의 조성물은 동결건조 또는 분무 건조된 건조 형태일 수 있다. 즉, 상기한 성분들을 함유하는 수용액에서 미셀을 생성시킨 후 동결 건조, 분무 건조 등의 방법으로 건조하면 고체상의 고분자 나노입자 조성물을 얻을 수 있다. 동결건조 조성물의 경우, 동결 건조 보조제로서 다당류, 만니톨, 솔비톨, 락토스 등을 더 포함할 수 있다. 동결건조 보조제로는 바람직하게 만니톨, 솔비톨, 락토스, 트레할로스 및 슈크로스로 구성된 군으로부터 선택되는 하나 이상을 사용할 수 있으며, 보다 바람직하게는 만니톨 및 락토스를 사용한다.
본 발명의 조성물에 있어서 라파마이신은 상기 설명한 고분자의 소수성 블록 부분과 물리적으로 회합되어 수용액에서 상기 고분자가 형성하는 나노입자의 소수성 코아에 위치하게 되며, 이 때 라파마이신 함유 고분자 나노입자의 입자크기는 바람직하게는 10 ~ 150 nm 범위이다.
본 발명에 따른 건조형태의 조성물을 수성 매질에 재건(reconstitution)하면 라파마이신 농도가 0.1 mg/ml 이상, 예컨대 0.1 ~ 25 mg/ml, 보다 구체적으로는 0.2 ~ 10 mg/ml인 주사제형 조성물을 얻을 수 있다. 라파마이신 농도가 0.1 mg/ml 보다 낮으면 원하는 수준의 라파마이신 투약효과를 얻을 수 없고, 25 mg/ml보다 높으면 상온보다 낮은 온도에서 수용액의 점성이 높아 주사하기 어려움이 있다. 일실시예에서, 라파마이신의 농도가 0.1 ~ 25 mg/ml인 주사제형 조성물을 제공한다.
본 발명의 라파마이신 함유 고분자 미셀 주사제형 조성물은 상기한 성분들 이외에도 방부제, 안정화제, 수화제 또는 유화 촉진제, 삼투압 조절을 위한 염 및/또는 완충제 등의 약제학적 보조제 및 기타 치료적으로 유용한 물질을 추가로 함유할 수 있다. 본 발명의 주사제형 조성물은 직장, 국소, 경피, 정맥 내, 근육 내, 복강 내, 피하 등으로 투여될 수 있다. 본 발명의 일 구체예에 따르면, 동결건조 형태의 조성물을 주사용 증류수, 5% 포도당 및 생리 식염수 등과 같은 수성 매질로 재건하여 혈관 주사하는 형태로 투여할 수 있다.
본 발명의 다른 측면에 따르면, (a) (i) 친수성블록(A)과 소수성블록(B)으로 구성된 A-B형 이중블록 공중합체, (ii) 말단에 적어도 하나의 카르복시기를 포함하는 폴리락트산 또는 그 유도체의 알칼리 금속염 및 (iii) 활성성분으로서 라파마이신을 유기용매에 가용화 시키는 단계; (b) 상기 (a)단계의 결과물로부터 유기용매를 제거하는 단계; 및 (c) 상기 (b)단계의 결과물에 수성 매질을 가하는 단계를 포함하는, 라파마이신 함유 고분자 나노입자 조성물의 제조방법이 제공된다.
상기 단계 (a)에서 유기용매로는 디클로로메탄, 에탄올, 메탄올, 프로판올, 아세톤, 아세토니트릴, 1,2-프로필렌글리콜, N-메틸피롤리돈, N,N-디아세트아미드, 폴리에틸렌글리콜 또는 그 유도체(분자량 300 ~ 600 달톤) 및 글리세린으로 이루어지는 그룹에서 하나 이상 선택되는 것이 바람직하게 사용된다.
상기 단계 (b)에서 유기용매의 제거는 통상의 방법에 의해 수행될 수 있으며, 구체적으로는 진공 증발기를 사용하여 증발시킬 수 있다.
상기 (c)단계에서 수성 매질로는 증류수, 주사용수, 생리식염수 또는 동결건조 보조제 수용액이 사용가능하다.
본 발명의 라파마이신 함유 고분자나노입자 조성물의 제조방법은, 상기 (c) 단계 이후에, 그 결과물에 2가 또는 3가 금속이온을 첨가하여 폴리락트산 또는 그 유도체의 말단기를 더욱 고정시키는 (c-1)단계를 더 포함할 수 있다. 예컨대 상기(c) 단계에서 얻어진 고분자 미셀 수용액에 2가 또는 3가 금속이온을 포함한 수용액을 가하고, 실온에서 30분 이상 교반시킬 수 있다. 상기 2가 또는 3가 금속이온은 황산염, 염산염, 탄산염, 인산염 및 수화물의 형태로 첨가될 수 있으며, 구체적으로는 염화칼슘, 염화마그네슘, 염화아연, 염화알루미늄, 염화철, 탄산칼슘, 탄산마그네슘, 인산칼슘, 인산마그네슘, 인산알루미늄, 황산마그네슘, 수산화칼슘, 수산화마그네슘, 수산화알루미늄 또는 수산화아연이 첨가될 수 있다.
또한 본 발명의 라파마이신 함유 고분자 나노입자 조성물의 제조방법은, 상기 (c) 또는 (c-1) 단계에서 얻어진 고분자 나노입자 조성물을 멸균하는 단계 (d); 멸균된 미셀 수용액을 용기에 일정량씩 충진하는 단계 (e); 및 상기 (e)단계에서 충진된 용기를 동결건조하는 단계 (f)를 더 포함할 수 있다. 상기 (f)단계에서 동결건조시, 동결건조 보조제로 만니톨, 솔비톨, 락트산, 트레할로스 및 슈크로스로 구성된 군으로부터 선택되는 하나 이상을 사용할 수 있다. 보다 구체적으로는 만니톨을 사용할 수 있다. 또한, 상기 동결건조 후, 증류수, 주사용수, 생리식염수 등의 수용액으로 재건하여 재건된 라파마이신 함유 주사용액 조성물을 얻는 단계 (g)를 추가로 포함할 수 있다.
본 발명의 또 다른 측면에 따르면, 본 발명의 라파마이신 함유 고분자 나노입자 조성물을 활용한, 방사선 요법과 병용하기 위한 항암 조성물이 제공된다.
본 발명의 항암 조성물을 방사선 요법과 병용하여 투여할 경우, 라파마이신의 체내 투여는 30 mg/m2 내지 300 mg/m2의 투여량으로 1 회 투여하고, 이 때 방사선은 매일 80Gy로 5회 적용할 수 있다. 본 발명의 항암 조성물의 경우 천천히 점적 정맥주사 하거나 피하 또는 근육주사 하는 것이 가능하다.
본 발명에 따른 고분자 나노입자 조성물을 암을 이식시킨 동물실험에서 방사선과 함께 처리했을 경우 암에 대한 유효성이 현저히 향상된다. 예를 들어, 본 발명의 항암 조성물은 수분 내지 수주의 간격으로 방사선 조사의 전 또는 후에 투여될 수 있다. 투여 방법에서 본 발명의 항암 조성물과 방사선 치료 사이의 시간 간격은 치료를 위한 시간을 유의하게 연장하는 것이 바람직할 수 있고, 따라서 2개의 요법 사이에 수일 내지 수주의 간격차이가 있을 수 있다. 본 발명의 항암 조성물과 병용가능한 방사선은 예를 들어 γ-선, X-선 (외부 빔) 등을 포함한다. 본 발명의 일 구체예에서 방사선의 양은 약 1 내지 약 100 Gy 범위, 구체적으로 약 5 내지 약 80, 더 구체적으로 10 내지 50 Gy의 범위로 조사될 수 있으나, 방사성 동위원소에 대한 용량 범위는 동위원소의 반감기 및 방출된 방사선의 강도와 종류에 따라 결정된다.
본 발명의 일 구체예에 따르면, 본 발명의 라파마이신 함유 고분자 나노입자 조성물을 활용한, 방사선 요법과 병용하기 위한 항암 조성물은 방사선 조사 1분전 내지 7일전에 투여될 수 있다.
본 발명의 다른 구체예에 따르면, 본 발명의 라파마이신 함유 고분자 나노입자 조성물을 활용한, 방사선 요법과 병용하기 위한 항암 조성물은, 그 투여에 의한 화학요법과 방사선요법을 4주 내지 12주간에 걸쳐 주1회 내지 주5회(예컨대 주1회, 주2회, 주3회, 주5회) 병행 실시하는 병용요법에 사용될 수 있다.
본 발명의 또 다른 구체예에 따르면, 포유동물의 암세포의 방사선 치료 방법에 있어서, 포유동물의 암세포에 방사선 조사시, 조사전 또는 조사후에 본 발명의 라파마이신 함유 고분자 나노입자 주사제형 조성물을 투여하여 포유동물의 암세포의 방사선 치료에 대한 감수성을 증진시킬 수 있다.
이하 본 발명을 제조예, 실시예 및 실험예 등을 통하여 보다 상세히 설명하지만, 이들은 본 발명을 설명하기 위한 것이며, 본 발명의 범주가 이들에 의해 제한되는 것은 아니다.
제조예 1. D,L-PLA-COONa (수평균 분자량 1,200달톤)
본 발명의 폴리락트산 알칼리 금속염은 한국출원 제2002-63955호 등 공지의 방법대로 제조하였다. 즉, D,L-락트산 1,000g을 2 L의 삼구 둥근바닥 플라스크에 넣고 교반기를 장치하였다. 그런 다음, 80℃로 가열한 기름 중탕에서 가열 및 감압 아스피레이터로 25㎜Hg로 감압하면서 1시간 동안 반응시켜, 과량으로 존재하는 수분을 제거하였다. 반응 온도를 160℃로 상승시키고, 압력을 5~10㎜Hg로 감압한 조건에서, 7시간 반응시킨 후 반응을 종결하였다. 그 결과, 정제되지 않은 상태의 폴리락트산 646g을 얻었고, 하기 NMR 분석법으로 측정한 결과, 제조된 폴리락트산의 수평균 분자량은 1,200 달톤이었다. 상기 폴리락트산 500 g에 아세토니트릴 750 mL를 첨가하여 용해하였다. 여기에 탄산수소나트륨 수용액(0.1g/mL) 750 mL를 서서히 첨가하였다. 상온에서 2시간 동안 교반하여 고분자를 중화시켰다. 중화된 고분자 용액에 염화나트륨 75g을 첨가하여 층분리시켰다. 층분리된 유기용매층을 취한 다음, 유기용매를 분별증류하여 제거하여 폴리락트산 나트륨염을 제조하였다.
폴리락틱산 나트륨염에 대한 1H-NMR 측정결과는 도 1에 나타내었다.
<1H-NMR 스캔의 피크면적으로부터 수평균 분자량의 계산>
[계산식]
수평균 분자량 (달톤) = { (A + B) / (C/N) } X 72.1
상기 계산식에서,
A는 D,L-폴리락트산의 메틸렌 양성자의 피크 면적이고,
B는 고분자 말단 D,L-락트산의 메틸렌 양성자의 피크 면적이며,
C는 디카르복실산의 메틸렌 양성자의 피크 면적이고,
N은 디카르복실산의 메틸렌 양성자의 갯수이다.
제조예 2. mPEG-PLA (분자량 2,000-1,700달톤)
500g의 모노메톡시폴리에틸렌 글리콜 (수평균 분자량: 2,000)을 100 ml 2구 둥근바닥 플라스크에 가하고, 2 내지 3시간 동안 감압 하에 100℃로 가열하여 탈수하였다. 반응 플라스크에 건조 질소를 채우고, 주사기를 이용하여 반응 촉매인 스테이너스 옥토에이트 (Sn(Oct)2)를 D,L-락타이드의 약 0.1중량% (1g, 2.5mol)로 가하고, 30분 동안 교반한 후 130℃에서 1시간 동안 감압 (1mmHg)하여 촉매를 용해시킨 용매(톨루엔)을 제거하였다. 여기에 정제한 락타이드 1,375g을 가한 후, 130℃에서 18시간 가열하였다. 생성된 고분자를 메틸렌 클로라이드에 용해시킨 후 디에틸 에테르에 가하여 고분자를 석출시켰다. 얻어진 고분자를 진공 오븐에서 48시간 동안 건조하였다. 상기 과정을 통해 얻어진 mPEG-PLA의 수평균 분자량은 2,000-1,750달톤이며, 도 2의 1H-NMR에 의해 A-B 타입인 것으로 확인되었다.
실시예 1. 라파마이신 함유 D,L-PLA-COONa/mPEG-PLA 혼합 고분자 나노입자 조성물
라파마이신 20 mg, 제조예 2의 mPEG-PLA 895 mg, 제조예 1의 D,L-PLACOONa 329 mg을 에탄올에 가용화시킨 후 진공증발기로 유기용매를 증발시켰다. 상기 건조물에 라파마이신 농도가 2 mg/ml이 되도록 주사용 멸균수를 가하여 미셀을 형성하였다. 여기에 추가로 2가의 칼슘 금속이온을, D,L-PLACOONa 몰양의 1/2 몰양이 되도록 약 26 mg을 정제수에 녹인 후, 200 rpm으로 교반 중인 미셀 수용액에 점적 투하 시키면서 폴리락트산 염 말단기를 이온결합으로 고정시켜 라파마이신이 봉입된 고분자 나노입자를 형성시키고, 이 용액을 0.2 ㎛ 막여과지로 멸균여과 한 후 바이알에 넣어 동결건조하였다. 제조된 조성물의 라파마이신 함량 및 고분자 나노입자의 크기 측정결과는 아래와 같다.
- 함량: 99.8%
- 입자크기: 19.5 nm
실험예 1. 라파마이신 함유 고분자 나노입자의 체내동태 평가
실시예 1에서 라파마이신이 봉입된 나노입자 조성물의 체내동태를 평가하였다. 동물실험을 위해, 체중 210-250g의 웅성 스프래그-도울리 랫트를 사용하였고, 라파마이신 기준으로 5 mg/kg 용량을 정맥 및 피하주사 후 5, 15, 30분 및 1, 2, 4, 8, 24시간 마다 0.3 ml의 전혈을 꼬리 동맥으로 채혈하였다. 채혈한 전혈은 제단백 침전법(Protein Precipitation, PPT, Progress in Pharmaceutical and Biomedical Analysis, Volume 5, 2003, Pages 199-254)으로 처리 후 원심분리하여 0.15 ml의 맑은 상등액을 얻어 LC/MS/MS법으로 혈중 라파마이신 농도를 분석하였다.
① HPLC 조건
i) Analytical column: Zorbax XDB-C18 (2.1 × 100 mm, 3.5 mm, Agilent)
ii) Mobile phase: 10mM Ammonium acetate / MeOH (1/99, v/v)
iii) Flow rate: 0.3 mL/min
② Tandem Mass Spectrometry 조건
i) Ionization: Electro spray Ionization, Negative (ESI-)
ii) MS Method: Multiple Reaction Monitoring (MRM)
iii) Capillary Voltage: 2.95 kV
iv) Cone Voltage: 134 V
v) Collision Energy: 22 eV
vi) Source Temperature: 100℃
vii) Desolvation Temperature: 200℃
viii) Mass Transition: Sirolimus 912.6 → 321.4 amu
라파마이신의 체내동태 프로파일을 도 3에, 그 체내동태 파라메타를 표 1에 나타내었다. 정맥투여와 피하투여의 Cmax는 정맥투여 시가 피하투여 시보다 약 7배 높게 나타났으며 소실상에서의 반감기(t1/2)는 약 3시간으로 거의 유사하였으나 24시간에서의 혈중 농도는 피하투여 시가 정맥투여 시보다다 약 2배 정도 높았다. 정맥투여 시를 100으로 보았을 때 피하투여 시의 생체내 이용율 (F%)는 약 74%로 나타났다.
표 1
Figure PCTKR2010009476-appb-T000001
실험예 2. 라파마이신 함유 고분자 나노입자 조성물의 방사선 민감효과 평가
방사선 요법과 병용시 실시예 1의 조성물의 항암활성을 살펴보았다.
세포를 액체 질소에서 저장된 것으로부터 채취하고 시험관 내 세포배양으로 확립하였다. 세포를 수획한 후, 멸균 이산 완층 식염수(PBS)로 세척하고, 생존 세포 수를 측정하였다. 세포를 7 x 107 세포/ml의 농도로 멸균 PBS에 재현탁하였다.
건강한 누드(nu/nu) 비흉선 마우스(20-25 g, 8-주령)의 오른쪽 옆구리에 7 x 105 인간 폐암세포(A549)를 함유하는 0.1 ml의 세포현탁액을 피하 주사하였다. A549의 경우는 방사능과 일부 항암제를 포함하는 화학요법에 내성을 가진 암으로 잘 알려져 있다. 암이 일정한 크기에 도달한 후, 3회 이종 이식하여 3~4mm의 이종이식편을 형성하였다. 이종이식 단편을 건강한 누드(nu/nu) 비흉선 마우스(20-25 g, 8주령)의 오른쪽 옆구리에 12게이지 트로카 니들로 피하 주사하였다. 암 부피가 100~300mm3에 도달한 후, 약물을 투여하고 이 시점을 1일로 기록하였다. 1일에, 마우스를 5그룹으로 나누고 5일 동안 매일 실시예 1의 조성물을 꼬리 정맥을 통해 라파마이신 5 mg/kg 용량으로 투여하고 3시간 후 2Gy의 방사능을 조사하였다. 시간 경과에 따라 종양의 장축 및 단축을 측정하였으며, 이로부터 종양 부피를 하기 수학식 1에 의해 계산하였다. 또한, 치료효과를 평가하기 위해 상대적 종양 부피를 아래의 수학식 2와 같이 계산하였다.
[수학식 1]
종양부피(TV) = 0.5 x L x W2 (L: 장축, W: 단축)
[수학식 2]
상대적 종양부피(RTV) = (Vt/Vo) x 100% (Vt: t 일의 TV, Vo: 0 일의 TV)
실험을 유의한 것으로 인정하기 위하여, 처리당 4마리 이상의 마우스와 그룹당 4개 이상의 종양을 사용하였다. 처리개시 시점에서, 최소 종양 직경은 4 또는 30 mm3 부피이었다. 최종 약물투여 후, 2주 내에 죽는 동물을 독성사멸로 간주하고 평가에서 제외하였다. 3마리당 1마리 보다 많은 독성 사멸이나 평균체중이 15% 초과하여 감소한 후 완전히 회복되지 않는 처리군은 항종양 효능이 없는 것으로 간주하였다. 실험결과는 도 4에 나타내었다.
도 4에 나타낸 바와 같이 실시예 1의 조성물 단독투여 군(PNP-Si)과 방사선 단독치료 군(IR)의 항암효능은 무처리군 (CONT) 및 고분자나노입자 담체투여군 (PNP)에 비해서는 좋은 암 성장억제를 보였다. 하지만 실시예 1의 조성물과 방사선 치료를 병용한 군 (IR + PNP-Si)의 경우는 CONT 및 PNP군 뿐만 아니라 PNP-Si군 및 IR군에 비해서도 더욱 크게 항암효능을 발휘하여 암의 성장을 거의 멈추게 하는 것으로 나타났다.
실시예 2. 라파마이신 함유 D,L-PLA-COONa/mPEG-PLA 혼합 고분자나노입자 조성물
라파마이신 25 mg, 제조예 2의 mPEG-PLA 1,650 mg과 제조예 1의 D,L-PLACOONa 825 mg을 디클로로메탄에 완전히 녹인 후 회전식감압증류기를 이용하여 유기용매를 휘발시켰다. 상기 건조물에 라파마이신 농도가 1.0 mg/ml이 되도록 가하여 미셀을 형성하였다. 여기에 추가로 100 mg/mL 염화칼슘용액을 염화칼슘으로 67.5 mg이 되도록 취하여 가한 후 교반하였다. 이 용액을 0.2 ㎛ 막여과지로 멸균여과 한 후 바이알에 넣어 동결건조하였다. 제조된 조성물의 라파마이신 함량 및 고분자 나노입자의 크기 측정결과는 아래와 같다.
- 함량: 101.9%
- 입자크기: 19.7 nm
실험예 3. 라파마이신 함유 고분자나노입자 조성물의 시험관 내 항암활성 평가
실시예 2의 라파마이신 함유 고분자나노입자 조성물을 이용하여 라파마이신이 고분자 나노입자에 봉입된 후에도 암세포의 증식 억제 효과가 유지되는지 여부를 평가하기 위하여 다음의 실험을 실시하였다.
폐암세포인 A549, NCI-H460 세포주와 유방암 세포인 MDA-MB-231, MCF7을 각각 DMEM (A549, MCF7), RPMI1640 (NCI-H460, MDA-MB-231) 세포 배양액에서 배양하였다. 처리 하루 전에 각각 50개 (saline 실험군, 라파마이신 비함유 고분자 나노입자 조성물), 100개 (라파마이신 함유 고분자 나노입자 조성물, 라마파이신)의 세포를 6-well 배양 접시에 분주하였다. 배양기에서 24시간 동안 배양하여 세포를 배양 접시 바닥에 부착시켰다. 배양액을 제거하고 2 ml의 새로운 배양액에 각각 10, 100, 500 nM로 시료를 희석하여 세포에 처리하였다. 배양기에서 14일간 배양하여 세포 콜로니를 얻었다. 0.5%의 crystal violet 용액으로 세포를 고정 및 염색한 후, 생성된 콜로니의 수를 계수하였다. Saline 실험군에서 얻은 세포 콜로니 수를 이용하여 배양효율 (plating efficiency)을 계산하였다(수학식 3).
[수학식 3]
배양효율 (plating efficiency)
= saline 처리군의 콜로니 수/saline 처리군의 분주한 세포의 수 x 100
각 실험군에서의 생존분획 (surviving fraction)은 아래의 수학식 4에 의해 계산하였다.
[수학식 4]
생존분획 (surviving fraction)
= 처리군의 콜로니 수/(처리군의 분주한 세포의 수 x 배양효율/100)
실험 결과는 도 5에 나타내었다.
도 5 결과를 참조하면, 라파마이신 비함유 고분자나노입자 담체(vehicle)는 세포의 증식 능력에 미치는 영향이 거의 없으며, 라파마이신 함유 고분자나노입자 조성물 (PNP-sirolimus)는 라파마이신 자체 (rapamycin)와 동일하게 암세포의 증식 능력을 현저히 떨어뜨리는 것을 확인하였다. 이것은 라파마이신이 고분자 나노입자에 봉입이 되어도 약효가 유지됨을 알 수 있는 결과이다.
실험예 4. 라파마이신 함유 고분자나노입자 체내동태 평가
실시예 2에서 라파마이신이 봉입된 조성물의 체내동태를 실험예 1과 같은 방법으로 평가하였다. 다만, 라파마이신 기준으로 10 mg/kg 용량을 경구, 정맥 또는 피하주사 후 15, 30분 및 1, 2, 4, 8, 24, 48시간 마다 0.3 ml의 전혈을 꼬리 동맥으로 채혈하였다.
라파마이신 혈중농도 분석결과를 도 6에 나타내었고, 체내동태 파라메타를 표 2에 나타내었다.
표 2
Figure PCTKR2010009476-appb-T000002
정맥투여 시 실시예 2의 조성물의 AUC는 라파마이신 자체 (Free sirolimus)의 AUC에 비해 3배 이상 높게 나타나 본 발명의 고분자 나노입자 조성물이 혈중체류성을 가지는 것을 알 수 있었다. 입자성 약물전달체가 혈중체류성을 가진다는 의미는 EPR (Enhanced Permeability and Retention)효과에 의한 암조직 축적성을 가진다는 의미이며 저용량으로도 동일한 효과를 나타낼 수 있음을 의미한다.
한편 실시예 2의 조성물을 피하로 투여할 경우의 생체내 이용율 (BA%)은 100%로 정맥투여 시보다 AUC는 33%수준이었으나 24시간 및 48시간에서 혈중농도가 약 2배 이상으로 오랜 시간 지속적으로 유효농도이상으로 유지되었다. 경구투여 시 생체내 이용율은 약 30%로 나타나 기존의 경구제형 (20%미만) 보다 본 발명의 조성물이 더 높은 생체내 이용율을 나타내었다.
실험예 5: 라파마이신 함유 고분자나노입자 조성물의 암 이식 동물모델에서의 항암효능 평가
실시예 2의 라파마이신 함유 고분자나노입자 조성물에 대한 동물모델에서의 항암효능을 아래와 같이 평가하였다.
폐암 세포주인 A549 세포를 DMEM 배지에서 배양하였다. 세포를 수획한 후, 멸균 이산 완층 식염수 (PBS)로 세척하고 계수하였다. 건강한 누드 (nu/nu) 비흉선 마우스 (20-25g, 6주령)의 오른쪽 허벅지에 1 x 106개의 A549 세포를 함유하는 0.1 ml의 현탁액을 피하 주사하였다. 3주 후에 암종의 크기가 약 70 mm3에 도달한 후, 마우스를 다섯 그룹으로 나누고 이 시점을 1일로 기록하였다. 이 시점에서부터 20 mg/kg의 용량으로 라파마이신 함유, 비함유 고분자 미셀 조성물을 각각의 실험군에 꼬리 정맥주사를 통해 투여하였다. 1일부터 일주일에 2번씩 종양의 장축 및 단축을 측정하여 이로부터 종양의 부피를 수학식 5에 의해 계산하였다. 종양 부피 측정과 동시에 마우스의 몸무게도 측정하였다.
[수학식 5]
종양부피 = 0.5 x 장축의 길이 x 단축의 길이2
도 7에 나타낸 바와 같이, 라파마이신 함유 고분자나노입자 조성물은 콘트롤 군 및 Vehicle 투여군에 비해 현저한 A549 암종의 성장 지연 효과를 보였으며, 주 3회 4주간 투여한 군 (q3d x 3 days x 4 weeks)이 주 1회 4주간 투여한 군 (qw x 4 weeks)에 비해 항암효능이 약간 우수 하였으나 유의성 있는 차이는 보이지 않았다. 이것으로부터, 본 발명에 따른 제제는 약물의 과량 투여시 약물의 독성발현을 고려할 때 저용량으로도 효능을 발휘할 수 있으리라 판단된다. 한편, 약물 투여에 따른 마우스의 몸무게 변화는 10%미만으로 투여완료 후 회복되는 경향을 보였는데 주 3회 4주간 투여한 군이 주 1회 4주간 투여한 군에 비해 회복이 더디었다.
실험예 6. 라파마이신 함유 고분자나노입자 조성물의 방사선 민감 효과 평가
방사선 요법과 병용시 실시예 2의 조성물의 항암활성을 실험예 2와 동일한 방법으로 평가하였고 그 실험결과는 도 8에 나타내었다. 본 실험은 실험예 2에서와는 달리 용량을 매일 5일간만 5 mg/kg용량을 투여한 후 방사선 조사군 (2Gy 처리) 과 미처리 군을 비교하였다.
도 8에 나타낸 바와 같이 실시예 2의 조성물 단독투여 (실시예 2)과 방사선 단독치료(IR) 군은 컨트롤군 보다는 우수한 항암효능을 보였으나 실시예 2 군과 IR 군 사이에는 유의성 있는 차이를 보이지 않았다. 그러나, 실시예 2의 조성물을 투여하고 3시간 후 2 Gy의 방사선 조사를 군 (실시예 2 + IR)은 모든 대조군에 비해 높은 암 성장억제를 나타내었다.

Claims (16)

  1. (i) 친수성 블록(A)과 소수성 블록(B)으로 구성된 A-B형 이중블록 공중합체,
    (ii) 말단에 적어도 하나의 카르복시기를 포함하는 폴리락트산 또는 그 유도체의 알칼리 금속염, 및
    (iii) 활성성분으로서 라파마이신을 포함하며,
    여기에서 상기 A-B형 이중블록 공중합체와 폴리락트산 또는 그 유도체의 알칼리 금속염이 형성하는 미셀의 내부에 라파마이신이 봉입되는 것을 특징으로 하는, 라파마이신 함유 고분자 나노입자 주사제형 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 상기 이중블록 공중합체의 친수성 블록(A)의 수평균분자량이 500 내지 20,000 달톤이고, 소수성 블록(B)의 수평균분자량이 500 내지 10,000 달톤이며, 이중블록 공중합체 내의 친수성 블록(A)의 함량이 이중블록 공중합체 전체 100중량%를 기준으로 40 내지 70중량%인 것을 특징으로 하는, 라파마이신 함유 고분자 나노입자 주사제형 조성물.
  3. 제1항에 있어서, 상기 친수성 블록(A)이 폴리에틸렌 글리콜 또는 메톡시 폴리에틸렌 글리콜이고, 소수성 블록(B)가 폴리락트산, 폴리락타이드, 폴리글리콜라이드, 폴리만델릭산, 폴리카프로락톤, 폴리디옥산-2-온, 폴리아미노산, 폴리오르소에스터, 폴리언하이드라이드 및 그들의 공중합체로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상인 것을 특징으로 하는, 라파마이신 함유 고분자 나노입자 주사제형 조성물.
  4. 제1항에 있어서, 말단에 적어도 하나의 카르복시기를 포함하는 폴리락트산 또는 그 유도체가 폴리락트산, 폴리락타이드, 폴리글리콜라이드, 폴리만델릭산, 폴리카프로락톤, 폴리언하이드라이드 및 이들의 공중합체로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상이며, 그 수평균 분자량이 500 내지 2,500 달톤인 것을 특징으로 하는, 라파마이신 함유 고분자 나노입자 주사제형 조성물.
  5. 제1항에서, 상기 알칼리 금속이 나트륨, 칼륨 및 리튬으로 구성된 군으로부터 하나 이상 선택되는 일가 금속인 것을 특징으로 하는, 라파마이신 함유 고분자 나노입자 주사제형 조성물.
  6. 제1항에 있어서, 2가 또는 3가의 금속이온을 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 라파마이신 고분자 나노입자 주사제형 조성물.
  7. 제6항에 있어서, 2가 또는 3가의 금속이온이 칼슘, 마그네슘, 바륨, 크롬, 철, 망간, 니켈, 구리, 아연 및 알루미늄으로 이루어진 군으로부터 선택된 금속의 2가 또는 3가 양이온인 것을 특징으로 하는, 라파마이신 함유 고분자 나노입자 주사제형 조성물.
  8. 제1항에 있어서, A-B형 이중블록 공중합체와 말단에 적어도 하나의 카르복시기를 포함하는 폴리락트산 또는 그 유도체의 알칼리 금속염의 중량비가 9:1~3:7인 것을 특징으로 하는, 라파마이신 함유 고분자 나노입자 주사제형 조성물.
  9. 제1항에 있어서, 라파마이신의 농도가 0.1 ~ 25mg/ml로 재건하는 것을 특징으로 하는 라파마이신 함유 고분자 나노입자 주사제형 조성물.
  10. (a) (i) 친수성 블록(A)과 소수성 블록(B)으로 구성된 A-B형 이중블록 공중합체,
    (ii) 말단에 적어도 하나의 카르복시기를 포함하는 폴리락트산 또는 그 유도체의 알칼리 금속염 및 (iii) 활성성분으로서 라파마이신을 유기용매에 가용화시키는 단계;
    (b) 상기 (a)단계의 결과물로부터 유기용매를 제거하는 단계; 및 (c) 상기 (b)단계의 결과물에 수성 매질을 가하는 단계를 포함하는,
    라파마이신 함유 고분자 나노 입자 주사제형 조성물의 제조방법.
  11. 제10항에 있어서, 상기 (c) 단계 이후에, 그 결과물에 2가 또는 3가 금속이온을 첨가하는 (c-1)단계를 더 포함하는 것을 특징으로 하는, 라파마이신 함유 고분자 나노입자 주사제형 조성물의 제조방법.
  12. (i) 친수성 블록(A)과 소수성 블록(B)으로 구성된 A-B형 이중블록 공중합체,
    (ii) 말단에 적어도 하나의 카르복시기를 포함하는 폴리락트산 또는 그 유도체의 알칼리 금속염 및
    (iii) 활성성분으로서 라파마이신을 포함하며,
    여기에서 상기 A-B형 이중블록 공중합체과 상기 폴리락트산 또는 그 유도체의 알칼리 금속염이 형성하는 나노입자의 내부에 라파마이신이 봉입되는, 방사선 요법과 병용하기 위한 항암 조성물.
  13. 제12항에 있어서, 2가 또는 3가의 금속이온을 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는, 방사선 요법과 병용하기 위한 항암 조성물.
  14. 제12항에 있어서, 방사선 조사 1분전 내지 7일전에 투여되는 것을 특징으로 하는, 방사선 요법과 병용하기 위한 항암 조성물.
  15. 제12항에 있어서, 화학요법과 방사선요법을 4주 내지 12주간에 걸쳐 주1회 내지 주5회 병행 실시하는 병용요법에 사용되는 것을 특징으로 하는, 방사선 요법과 병용하기 위한 항암 조성물.
  16. 포유동물의 암세포의 방사선 치료 방법에 있어서, 포유동물의 암세포에 방사선 조사시, 조사전 또는 조사후에 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항의 라파마이신 함유 고분자 나노입자 주사제형 조성물을 투여하여 포유동물의 암세포의 방사선 치료에 대한 감수성을 증진시키는 것을 특징으로 하는 방법.
PCT/KR2010/009476 2009-12-30 2010-12-29 향상된 수용해도를 갖는 라파마이신 함유 고분자나노입자 주사제형 조성물 및 그 제조방법, 및 방사선 요법과 병용하기 위한 항암 조성물 WO2011081430A2 (ko)

Priority Applications (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP10841262.8A EP2522338A4 (en) 2009-12-30 2010-12-29 POLYMERNANOPARTICLE INJECTION FORMULATION COMPOSITION WITH RAPAMYCIN WITH IMPROVED WATER SOLUBILITY, METHOD OF MANUFACTURING THEREOF, AND ANTIBODY COMPOSITION FOR COMBINED USE WITH RADIO THERAPY
JP2012547021A JP2013516407A (ja) 2009-12-30 2010-12-29 改善された水溶解度を有するラパマイシン含有高分子ナノ粒子注射剤組成物及びその製造方法、並びに放射線療法と併用するための抗癌組成物
US13/519,914 US20120276169A1 (en) 2009-12-30 2010-12-29 Polymer nanoparticle injection formulation composition containing rapamycin with improved water solubility, preparation method thereof, and anticancer composition for combined use with radiotherapy
CN201080060367.2A CN102740834B (zh) 2009-12-30 2010-12-29 具有提升的水溶解度的含雷帕霉素的高分子纳米粒子注射剂型组合物及其制备方法，以及用于与放射线疗法联用的抗癌组合物
US14/231,355 US9173841B2 (en) 2009-12-30 2014-03-31 Polymer nanoparticle injection formulation composition containing rapamycin with improved water solubility, preparation method thereof, and anticancer composition for combined use with radiotherapy

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR20090134617 2009-12-30
KR10-2009-0134617 2009-12-30

Related Child Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
US13/519,914 A-371-Of-International US20120276169A1 (en) 2009-12-30 2010-12-29 Polymer nanoparticle injection formulation composition containing rapamycin with improved water solubility, preparation method thereof, and anticancer composition for combined use with radiotherapy
US14/231,355 Division US9173841B2 (en) 2009-12-30 2014-03-31 Polymer nanoparticle injection formulation composition containing rapamycin with improved water solubility, preparation method thereof, and anticancer composition for combined use with radiotherapy

Publications (2)

Publication Number Publication Date
WO2011081430A2 true WO2011081430A2 (ko) 2011-07-07
WO2011081430A3 WO2011081430A3 (ko) 2011-11-10

Family

ID=44227032

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/KR2010/009476 WO2011081430A2 (ko) 2009-12-30 2010-12-29 향상된 수용해도를 갖는 라파마이신 함유 고분자나노입자 주사제형 조성물 및 그 제조방법, 및 방사선 요법과 병용하기 위한 항암 조성물

Country Status (6)

Country Link
US (2) US20120276169A1 (ko)
EP (1) EP2522338A4 (ko)
JP (2) JP2013516407A (ko)
KR (1) KR101267813B1 (ko)
CN (1) CN102740834B (ko)
WO (1) WO2011081430A2 (ko)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2014111596A (ja) * 2012-12-03 2014-06-19 Manli International Ltd 癌を処置するためのウミロリムスおよびその誘導体の使用

Families Citing this family (29)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DK2365802T3 (da) 2008-11-11 2017-11-13 Univ Texas Mikrokapsler af rapamycin og anvendelse til behandling af cancer
US9283211B1 (en) 2009-11-11 2016-03-15 Rapamycin Holdings, Llc Oral rapamycin preparation and use for stomatitis
US20170079962A1 (en) * 2009-11-11 2017-03-23 Rapamycin Holdings, Llc Oral Rapamycin Preparation and Use for Stomatitus
KR20230104990A (ko) 2011-04-29 2023-07-11 셀렉타 바이오사이언시즈, 인크. 치료적 단백질에 대해 면역 반응을 감소시키는 관용원성합성 나노운반체
US10314594B2 (en) 2012-12-14 2019-06-11 Corquest Medical, Inc. Assembly and method for left atrial appendage occlusion
US10813630B2 (en) 2011-08-09 2020-10-27 Corquest Medical, Inc. Closure system for atrial wall
US10307167B2 (en) 2012-12-14 2019-06-04 Corquest Medical, Inc. Assembly and method for left atrial appendage occlusion
KR101508275B1 (ko) * 2011-12-16 2015-04-08 주식회사 삼양바이오팜 고분자 나노입자 수용액 조성물 및 그 제조방법
US9278090B2 (en) * 2012-09-05 2016-03-08 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Methods of preventing the development of mucositis and related disorders
US20140142689A1 (en) 2012-11-21 2014-05-22 Didier De Canniere Device and method of treating heart valve malfunction
EP2948134B1 (en) 2013-01-24 2020-03-04 Palvella Therapeutics, Inc. Compositions for transdermal delivery of mtor inhibitors
EP2968281B1 (en) 2013-03-13 2020-08-05 The Board of Regents of The University of Texas System Mtor inhibitors for prevention of intestinal polyp growth
CA2910578C (en) * 2013-05-03 2024-02-27 Selecta Biosciences, Inc. Local, concomitant administration of tolerogenic synthetic nanocarriers to reduce type i and type iv hypersensitivity
US9566443B2 (en) 2013-11-26 2017-02-14 Corquest Medical, Inc. System for treating heart valve malfunction including mitral regurgitation
CA2933908C (en) 2013-12-31 2024-01-30 Rapamycin Holdings, Llc Oral rapamycin nanoparticle preparations and use
US9700544B2 (en) 2013-12-31 2017-07-11 Neal K Vail Oral rapamycin nanoparticle preparations
HUP1400075A2 (hu) 2014-02-14 2015-08-28 Druggability Technologies Ip Holdco Jersey Ltd Sirolimus és származékainak komplexei, elõállítása és gyógyszerészeti kompozíciói
BR112017001601A2 (pt) 2014-09-07 2017-11-21 Selecta Biosciences Inc métodos e composições para atenuar as respostas imunes do vetor de transferência antiviral de modulação da expressão genética
US20160128987A1 (en) * 2014-11-05 2016-05-12 Selecta Biosciences, Inc. Methods and compositions related to synthetic nanocarriers with rapamycin in a stable, super-saturated state
US10842626B2 (en) 2014-12-09 2020-11-24 Didier De Canniere Intracardiac device to correct mitral regurgitation
KR101726728B1 (ko) 2015-07-28 2017-04-14 주식회사 삼양바이오팜 고분자 담체 함유 약학 조성물의 유연물질 분석 방법
IL267869B2 (en) 2017-01-06 2023-10-01 Palvella Therapeutics Inc Non-aqueous preparations of mTOR inhibitors and methods of use
BR112019018748A2 (pt) 2017-03-11 2020-04-07 Selecta Biosciences Inc métodos e composições relacionados ao tratamento combinado com anti-inflamatórios e nanocarreadores sintéticos compreendendo um imunossupressor
EP3755303A1 (en) * 2018-02-23 2020-12-30 Biotronik AG Parenteral formulation materials and methods for 40-o-cyclic hydrocarbon esters and related structures
US11000513B2 (en) 2018-07-02 2021-05-11 Palvella Therapeutics, Inc. Anhydrous compositions of mTOR inhibitors and methods of use
CN109646403B (zh) * 2019-01-11 2021-06-22 福州大学 一种无载体大环内酯类免疫抑制药物纳米粒的制备方法
CN110623925B (zh) * 2019-09-26 2021-06-25 严鹏科 一种雷帕霉素纳米缓释剂及其制备方法
CN115484931A (zh) * 2020-03-11 2022-12-16 西莱克塔生物科技公司 与合成纳米载体相关的方法和组合物
KR102584649B1 (ko) * 2021-07-13 2023-10-04 충북대학교 산학협력단 펜벤다졸 및 라파마이신이 봉입된 폴리에틸렌 글리콜-폴리카프로락톤 공중합체 마이셀 및 이의 용도

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5559121A (en) 1993-09-30 1996-09-24 American Home Products Corporation Rapamycin formulations for oral administration
US5616588A (en) 1993-09-30 1997-04-01 American Home Products Corporation Rapamycin formulation for IV injection
KR0160957B1 (ko) 1989-06-06 1998-12-01 로이 캘른 서 포유류에서 이식 거부를 억제시키는 라파마이신조성물
US6322805B1 (en) 1995-09-21 2001-11-27 Samyang Corporation Biodegradable polymeric micelle-type drug composition and method for the preparation thereof
KR20020063955A (ko) 2001-01-31 2002-08-07 엘지전자주식회사 음극선관용 전자총의 잔류유해가스 제거장치
US6616941B1 (en) 1999-08-14 2003-09-09 Samyang Corporation Polymeric composition for solubilizing poorly water soluble drugs and process for the preparation thereof

Family Cites Families (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
NZ251628A (en) * 1992-03-30 1996-07-26 American Home Prod Aqueous insectable rapamycin solution; product containing concentrate and diluent solutions
IL111003A0 (en) * 1993-09-30 1994-11-28 American Home Prod Multi-component oral rapamycin formulation
MXPA04003621A (es) * 2001-10-18 2004-07-30 Samyang Corp Composicion de micela polimerica con estabilidad mejorada.
CN100471886C (zh) * 2003-10-10 2009-03-25 株式会社三养社 两亲嵌段共聚物以及包含它的用于给药的聚合组合物
US7311901B2 (en) * 2003-10-10 2007-12-25 Samyang Corporation Amphiphilic block copolymer and polymeric composition comprising the same for drug delivery
KR20050064075A (ko) * 2003-12-23 2005-06-29 주식회사 삼양사 이트라코나졸을 유효성분으로 하는 약학적 조성물
NZ550856A (en) * 2004-05-06 2010-11-26 Samyang Corp Delivery system for bioactive agents on the basis of a polymeric drug carrier comprising an amphiphilic block polymer and a polylactic acid derivative
KR101118199B1 (ko) * 2004-12-20 2012-03-15 주식회사 삼양홀딩스 타크롤리무스를 가용화하기 위한 고분자 미셀 조성물
JP2008535927A (ja) * 2005-04-12 2008-09-04 ウィスコンシン アルムニ リサーチ ファンデイション ポリマー及びパッセンジャー薬のミセル組成物
SI2131821T1 (sl) * 2007-03-07 2018-11-30 Abraxis Bioscience, Llc Nanodelci, ki zajemajo rapamicin in albumin kot sredstvo proti raku

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR0160957B1 (ko) 1989-06-06 1998-12-01 로이 캘른 서 포유류에서 이식 거부를 억제시키는 라파마이신조성물
US5559121A (en) 1993-09-30 1996-09-24 American Home Products Corporation Rapamycin formulations for oral administration
US5616588A (en) 1993-09-30 1997-04-01 American Home Products Corporation Rapamycin formulation for IV injection
US6322805B1 (en) 1995-09-21 2001-11-27 Samyang Corporation Biodegradable polymeric micelle-type drug composition and method for the preparation thereof
US6616941B1 (en) 1999-08-14 2003-09-09 Samyang Corporation Polymeric composition for solubilizing poorly water soluble drugs and process for the preparation thereof
KR20020063955A (ko) 2001-01-31 2002-08-07 엘지전자주식회사 음극선관용 전자총의 잔류유해가스 제거장치

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
"PPT", PROGRESS IN PHARMACEUTICAL AND BIOMEDICAL ANALYSIS, vol. 5, 2003, pages 199 - 254
See also references of EP2522338A4

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2014111596A (ja) * 2012-12-03 2014-06-19 Manli International Ltd 癌を処置するためのウミロリムスおよびその誘導体の使用

Also Published As

Publication number Publication date
CN102740834A (zh) 2012-10-17
US20120276169A1 (en) 2012-11-01
KR101267813B1 (ko) 2013-06-04
JP2015078247A (ja) 2015-04-23
US20140212462A1 (en) 2014-07-31
EP2522338A2 (en) 2012-11-14
CN102740834B (zh) 2017-04-05
KR20110079518A (ko) 2011-07-07
US9173841B2 (en) 2015-11-03
WO2011081430A3 (ko) 2011-11-10
EP2522338A4 (en) 2013-09-18
JP2013516407A (ja) 2013-05-13

Similar Documents

Publication Publication Date Title
WO2011081430A2 (ko) 향상된 수용해도를 갖는 라파마이신 함유 고분자나노입자 주사제형 조성물 및 그 제조방법, 및 방사선 요법과 병용하기 위한 항암 조성물
CN112351976B (zh) 紫杉烷-脂类-多聚糖双型偶联体、其制备方法及用途
AU2020289730B2 (en) Pentaaza macrocyclic ring complexes possessing oral bioavailability
WO2010059001A2 (ko) 내성암 치료용 고분자 미셀 조성물 및 그 제조방법
EP2341774B1 (en) Treatment of neuroblastoma with multi-arm polymeric conjugates of 7-ethyl-10-hydroxycamptothecin
KR20080047972A (ko) 나프토퀴논계 화합물 함유 장 표적용 함암 조성물
WO2020022708A1 (ko) 비알콜성 지방간염의 예방 또는 치료용 약학 조성물
WO2012020989A2 (ko) 니코틴산 아데닌 디뉴클레오티드 인산 또는 그의 유도체를 포함하는 약학적 또는 화장료 조성물
WO2014051251A1 (en) Pvax copolymer and pvax microparticles comprising the same
IL263950B (en) A motorcycle containing an auxiliary lighting device for parking operations
CN112300099A (zh) 药物的缩酮衍生物及其制备方法、药物组合物和用途
WO2022131820A1 (ko) 아토피 피부염 예방 또는 치료용 항염증 펩타이드
EP4326260A1 (en) Pi3k inhibitors, nanoformulations, and uses thereof
WO2020067730A1 (ko) 독소루비신을 유효성분으로 하는 조성물 및 그 제조 방법
WO2015199454A1 (ko) 3,4,5-트리하이드록시벤조산, 이의 유도체 또는 이의 염을 유효성분으로 포함하는 수용체 티로신 키나아제 저해제 내성 항암제 조성물
KR101118199B1 (ko) 타크롤리무스를 가용화하기 위한 고분자 미셀 조성물
US3214337A (en) Methods of treating arteritis and delayed cicatrization
WO2021172870A1 (ko) 아토피 피부염 예방 또는 치료용 신규 펩타이드
WO2024043713A1 (ko) 자연살해세포 유래 엑소좀 및 생체적합성 고분자를 유효성분으로 포함하는 조성물 및 이의 용도
WO2024043716A1 (ko) 인간 세포 유래 미세소포체 및 히알루론산 또는 콜라겐을 포함하는 조성물 및 이의 용도
WO2019203400A1 (ko) 항암제 봉입 마이셀 제제 조성물
WO2022240036A1 (ko) 섬유화증의 예방 또는 치료용 약학적 조성물
WO2020091423A1 (ko) 파이토케미컬-프럭토올리고당 결합체, 이의 제조방법 및 이의 용도
CN106478655A (zh) 具有抗肿瘤活性的藤黄酸类化合物及其制备方法和用途
KR20140113063A (ko) 알파 리포산의 방사선 유발 섬유증 예방 또는 치료 용도

Legal Events

Date Code Title Description
WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 201080060367.2

Country of ref document: CN

121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 10841262

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 2010841262

Country of ref document: EP

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 2012547021

Country of ref document: JP

Ref document number: 13519914

Country of ref document: US

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE