WO2010104025A1 - 筋変性疾患の検出方法、及び治療効果判定方法 - Google Patents

筋変性疾患の検出方法、及び治療効果判定方法 Download PDF

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WO2010104025A1
WO2010104025A1 PCT/JP2010/053762 JP2010053762W WO2010104025A1 WO 2010104025 A1 WO2010104025 A1 WO 2010104025A1 JP 2010053762 W JP2010053762 W JP 2010053762W WO 2010104025 A1 WO2010104025 A1 WO 2010104025A1
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tetranor
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muscle degenerative
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裏出　良博
浩介 有竹
敏彦 丸山
慎也 鎌内
武田　伸一
昭則 中村
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財団法人大阪バイオサイエンス研究所
国立精神・神経センター総長が代表する日本国
大鵬薬品工業株式会社
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Definitions

  • the present invention relates to a method for early detection of a muscle degenerative disease and a method for predicting and / or judging a therapeutic agent and / or a therapeutic method.
  • myopathy A group of diseases accompanied by myopathy or myonecrosis is called myopathy.
  • Typical diseases include muscular dystrophy and muscular atrophy.
  • Muscular dystrophy is a generic name for inherited diseases in which muscles gradually weaken and muscles atrophy. Among them, progressive muscular dystrophy has the largest number of patients and is hereditary and causes progressive muscle weakness.
  • Muscle atrophy is a neurogenic disease caused by motor nerve disorders.
  • Duchenne muscular dystrophy the most common type of muscular dystrophy, is a disease that occurs only in boys due to sex-chromosomal recessive inheritance. . Usually, around 3-5 years old, abnormalities related to walking and standing, such as being unable to run and falling easily, appear and become unable to walk around 10 years old. Later, spinal deformities and joint contractures progress rapidly, often causing respiratory failure, sometimes heart failure, and pneumonia.
  • Tests for diagnosing muscular dystrophy include blood tests, nerve conduction tests, electromyograms, muscle biopsies, and DNA analysis.
  • the nerve conduction test is a test to check whether the cause of movement disorder or sensory disorder is due to peripheral neuropathy, and the site and extent of the disorder, and measures the speed at which stimulation is transmitted by electrically stimulating the nerve. Due to the nature of the test, a special device is required, and the nerves are directly electrically stimulated.
  • the electromyogram is an examination to check whether the movement disorder is derived from muscle or nerve, and the site and extent of the disorder. It requires a special device and is accompanied by pain caused by inserting a needle into the muscle. There is a painless electromyogram of the body surface, but it is forced to be restrained in the laboratory for measurement.
  • muscle biopsy requires the collection of muscle tissue, it is not an invasive and simple test.
  • DNA analysis is essential for the diagnosis of Duchenne or Becker muscular dystrophy caused by mutations in the dystrophin gene, but it is not applicable as a muscle degenerative disease and lacks versatility.
  • Creatine kinase is a common blood test. Creatine kinase is an enzyme mainly present in the soluble fraction of skeletal muscle and cardiac muscle, and leaks into the blood due to cell damage. In muscular dystrophy, skeletal muscle is damaged and necrotic, so it is diagnosed because blood creatine kinase shows a significantly high level.But blood creatine kinase level may also be high in other diseases, so this concentration alone Differential diagnosis is difficult, and other tests are performed at the same time.
  • Blood creatine kinase is also measured as a blood test in other progressive muscular dystrophy diseases and diseases in which muscles are damaged or necrotic due to neurological abnormalities. Not so, other markers of muscle damage or necrosis are needed.
  • Tetranor-PGDM 11,15-Dioxo-9 ⁇ -hydroxy-2,3,4,5-tetranorprostan-1,20-dioic acid
  • PGD 2 prostaglandin D 2
  • HPGDS hematopoietic prostaglandin D synthase
  • Tetranor-PGDM is detected at a high concentration as urinary excretion in patients with muscle degenerative diseases, and the Tetranor-PGDM concentration is significantly decreased by administration of an HPGDS inhibitor.
  • An object of the present invention is to provide a method for efficiently diagnosing myopathic diseases by measuring urinary Tetranor-PGDM, and a method for determining the therapeutic effects of these diseases and / or therapeutic methods. It is.
  • an object of the present invention is to provide a diagnostic kit for muscular degenerative diseases characterized by targeting Tetranor-PGDM.
  • Tetranor-PGDM a urinary PGD 2 metabolite
  • muscular dystrophy model animals compared to normal animals.
  • urinary excretion of Tetranor-PGDM decreased.
  • the present invention provides the following method for detecting a muscle degenerative disease, a diagnostic measurement kit for a muscle degenerative disease, and a kit for predicting and / or determining the effect of a therapeutic agent and / or treatment method for a muscle degenerative disease.
  • Item 1 A method for detecting a muscle degenerative disease, comprising a step of measuring the content of Tetranor-PGDM in a specimen separated from a subject.
  • Item 2. A method for determining the effect of a therapeutic agent and / or therapeutic method for a muscle degenerative disease, comprising a step of measuring the content of Tetranor-PGDM in a specimen separated from a patient with a muscle degenerative disease.
  • Item 3. Item 3. The method according to Item 1 or 2, wherein the specimen is urine.
  • Tetranor-PGDM can be measured by high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry (HPLC-MS / MS), enzyme immunoassay (EIA), radioimmunoassay (RIA), fluorescence immunoassay (FIA), and ELISA Item 4.
  • HPLC-MS / MS high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry
  • EIA enzyme immunoassay
  • RIA radioimmunoassay
  • FIA fluorescence immunoassay
  • ELISA Item 4 The method according to any one of Items 1 to 3, which is performed by an ELISA method or an enzymatic method.
  • Item 1 or 2 wherein the muscle degenerative disease is progressive muscular dystrophy, congenital muscular dystrophy, limb-girdle muscular dystrophy, facial scapulohumeral muscular dystrophy, myotonic muscular dystrophy, amyotrophic lateral sclerosis, or myopathy The method described in 1.
  • a diagnostic measurement kit for a muscle degenerative disease comprising an antibody against Tetranor-PGDM.
  • Item 7. A kit for predicting and / or determining the effect of a therapeutic agent and / or therapeutic method for muscle degenerative diseases, comprising an antibody against Tetranor-PGDM.
  • Item 8. Antibodies against Tetranor-PGDM, labeled Tetranor-PGDM, further anti-immunoglobulin antibodies as necessary, specimen dilutions, dilutions of antibodies or labeled Tetranor-PGDM, standard concentrations of Tetranor-PGDM, substrates for EIA, Item 8.
  • Tetranor-PGDM by measuring Tetranor-PGDM in a sample separated from a subject, it is possible to diagnose muscle degenerative diseases easily and early, and further, the therapeutic effect of therapeutic agents and / or therapeutic methods for these diseases. It can be determined effectively.
  • Tetranor-PGDM that increases in urine as a marker
  • it can be used as a diagnostic kit that can easily diagnose these diseases.
  • FIG. 1 It is a figure which shows the change of the urinary Tetranor-PGDM density
  • the figure on the left shows the change in urinary Tetranor-PGDM concentration when the HPGDS inhibitor was administered for about 1 year and then switched to the solvent administration, and the figure on the right shows that the solvent was administered for about 1 year after a view showing a change in Tetranor-PGDM concentration in urine of the inhibitor muscular dystrophy dog when switching the administration (CXMD J).
  • muscle degenerative diseases can be diagnosed using Tetranor-PGDM as an index, and the therapeutic effects of therapeutic agents and / or treatment methods for these diseases can be determined effectively. Furthermore, by using Tetranor-PGDM as a marker, it is possible to provide a kit for diagnosing these diseases, and a kit for predicting and / or determining the effects of therapeutic agents and / or therapeutic methods for myopathic diseases.
  • Tetranor-PGDM by measuring Tetranor-PGDM in a sample isolated from a subject suffering from or possibly suffering from a muscle degenerative disease, a disease associated with muscle damage or myonecrosis is detected. Can be detected or diagnosed. Specifically, when the concentration or content of Tetranor-PGDM in a specimen is higher than a predetermined value, it can be diagnosed as a myodegenerative disease.
  • the predetermined value of Tetranor-PGDM in the specimen separated from the subject can be determined by measuring the Tetranor-PGDM of the specimen of a healthy person and the specimen of a patient with myopathy.
  • the therapeutic drug and / or the method of determining the effect of the therapeutic method are Tetranor-PGDM in the specimen before the start of treatment / before the start of treatment treatment for patients with muscle degenerative diseases, and Tetranor after the start of treatment / after the start of treatment treatment treatment.
  • -Comparison of measured values of PGDM, treatment or therapeutic drug administration is effective if the measured value of Tetranor-PGDM in the sample is significantly or significantly lower after the start of treatment / after the start of treatment administration If there is no significant difference in the measured value of Tetranor-PGDM in the sample before and after the start of treatment / therapeutic drug administration and there is no significant trend, the treatment / treatment method is not effective. Determined.
  • a diagnostic kit using an antibody capable of detecting Tetranor-PGDM in a specimen can be provided.
  • the subject in the present invention includes mammals such as humans, monkeys, cows, horses, rats, mice, guinea pigs, rabbits, dogs, cats, sheep, goats, and the like, preferably humans.
  • Tetranor-PGDM measured by the method of the present invention is found as a urinary metabolite of PGD 2 . Tetranor-PGDM is also found in blood and feces.
  • the specimen separated from the subject in the present invention is preferably urine, feces, blood, plasma, serum, and more preferably urine.
  • measuring Tetranor-PGDM includes both detecting Tetranor-PGDM in a specimen and measuring its expression level, and whether or not the expression level is a predetermined value or more. In other words, in other words, the case where the expression is detected when the expression level is a predetermined value or more is also included.
  • Tetranor-PGDM can be measured by GC-MS, HPLC, high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry (HPLC-MS / MS), enzyme immunoassay (EIA), radioimmunoassay (RIA), Examples include fluorescence immunoassay (FIA), ELISA (ELISA), enzyme method, etc.
  • High-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry HPLC-MS / MS
  • anti-Tetranor-PGDM antibody due to its ease of operation
  • immunoassay methods using enzyme especially enzyme immunoassay (EIA), radioimmunoassay (RIA), fluorescent immunoassay (FIA), ELISA (ELISA), especially enzyme immunoassay (EIA) or ELISA
  • EIA enzyme immunoassay
  • RIA radioimmunoassay
  • FIA fluorescent immunoassay
  • ELISA enzyme immunoassay
  • EIA enzyme immunoassay
  • EIA enzyme immunoassay
  • RIA radioimmunoassay
  • FIA fluorescent immunoassay
  • ELISA ELISA
  • EIA enzyme immunoassay
  • EIA enzyme immunoassay
  • muscle degenerative diseases include progressive muscular dystrophy, congenital muscular dystrophy, limb-girdle muscular dystrophy, facial scapulohumeral muscular dystrophy, myotonic muscular dystrophy, amyotrophic lateral sclerosis, myopathy, fleshy, cardiomyopathy (Myocardial infarction), diabetic peripheral vascular disorder (vascular smooth muscle disorder), etc. are exemplified, preferably progressive muscular dystrophy, congenital muscular dystrophy, limb-girdle muscular dystrophy, facial scapulohumeral muscular dystrophy, myotonicity These are muscular dystrophy and amyotrophic lateral sclerosis, such as muscular dystrophy.
  • the therapeutic agent that can determine the therapeutic effect of a muscle degenerative disease is not particularly limited and can be any therapeutic agent, such as hematopoietic prostaglandin D synthase (HPGDS) inhibitor, prostaglandin.
  • HPGDS hematopoietic prostaglandin D synthase
  • Examples thereof include gin D receptor antagonists, preferably hematopoietic prostaglandin D synthase (HPGDS) inhibitors.
  • the concentration measurement of Tetranor-PGDM in a sample is preferably performed by an immunoassay because a large amount of sample can be easily measured simultaneously.
  • anti-Tetranor-PGDM antibodies examples include polyclonal antibodies and monoclonal antibodies with respect to antibodies.
  • Tetranor-PGDM may be administered to animals (rats, mice, guinea pigs, rabbits, dogs, cats, sheep, goats, etc.) and immunized to produce polyclonal or monoclonal antibodies.
  • PGDM bovine serum albumin
  • globulin globulin
  • thyroglobulin hemocyanin
  • hemocyanin etc.
  • animals rat, mouse, guinea pig, rabbit, dog, cat
  • a polyclonal antibody or a monoclonal antibody can be obtained by administering to a sheep, a goat, etc.) at an administration interval, collecting the serum of the animal after a predetermined period of time, and processing it by a known method.
  • Monoclonal antibody is specifically a monoclonal antibody-producing cell obtained from the spleen by immunizing an animal using Tetranor-PGDM, which was used in the preparation of the polyclonal antibody, combined with an appropriate protein as necessary, as an immunogen. And myeloma cells can be produced by a hybridoma prepared by cell fusion.
  • Hybridoma can be obtained by the following method. Tetranor-PGDM alone or its protein conjugate obtained as described above, together with Freund's complete adjuvant, is divided into several times, to appropriate mammals such as mice, rats, rabbits, etc. every 2-3 weeks. Immunize by intraperitoneal or intravenous or subcutaneous administration. Next, antibody-producing cells derived from the spleen and the like are fused with tumor cells that can grow in vitro such as myeloma cells. As a fusion method, it can be carried out with polyethylene glycol according to the usual method of Kohler and Milstein (Nature, vol. 256, 495 (1975)), or with Sendai virus.
  • a Tetranor-PGDM immunoassay is performed.
  • This immunoassay is preferably performed by a well-known competitive immunoassay for Tetranor-PGDM as the substance to be measured.
  • Enzyme immunoassay EIA
  • fluorescent immunoassay fluorescent immunoassay
  • luminescence immunoassay classified by labeling substance And radioimmunoassay (RIA).
  • RIA radioimmunoassay
  • labeled antigen is used in the competition method.
  • the labeling substance include enzymes, fluorescent substances, luminescent substances, and radioisotopes.
  • the method for binding the labeling substance and the antigen can be produced using a known method for making a covalent bond or a non-covalent bond.
  • the binding method include a method of creating a covalent bond using a condensing agent, a method of using various cross-linking agents, etc. (see, for example, “Protein Nucleic Acid Enzyme”, Supplement 31, pages 37 to 45 (1985)).
  • functional groups present in the antigen can be used.
  • a functional group such as a thiol group, amino group, carboxyl group or hydroxyl group is introduced by a conventional method, and then a labeled antigen is produced by the binding method.
  • a labeled antigen is produced by the binding method.
  • the noncovalent bonding method include a physical adsorption method.
  • Tetranor-PGDM is preferably measured by, for example, the immunoassay described below.
  • a labeled antigen that is bound or not bound to the antibody by competitively reacting with a predetermined amount of labeled Tetranor-PGDM, anti-Tetranor-PGDM antibody, or a specimen containing Tetranor-PGDM (particularly a urine specimen). Quantify Tetranor-PGDM in the specimen from the amount.
  • anti-immunoglobulin antibody Separation from labeled antigen that did not bind to the labeled antigen that was bound to the antibody, added anti-immunoglobulin antibody, (labeled antigen)-(anti-Tetranor-PGDM antibody)-(anti-immunoglobulin antibody) It can be carried out by precipitating and separating the complex and measuring the labeling substance bound to the complex or the labeling substance not bound. This method is called a two-antibody method, and can also be carried out by a method using a charcoal filter.
  • the anti-immunoglobulin antibody is also carried out by measuring an anti-immunoglobulin antibody bound to a solid phase, a labeled substance bound to the solid phase, or a labeled substance not bound.
  • the anti-immunoglobulin antibody can be bound to the solid phase by a well-known method such as a physical adsorption method, a chemical binding method using a crosslinking agent or a covalent bond, a binding method using an avidin-biotin bond, or the like.
  • the labeling substance is selected in accordance with the labeling substance.
  • the kit of the present invention contains an anti-Tetranor-PGDM antibody, and in a more preferred embodiment, contains a labeled Tetranor-PGDM or anti-Tetranor-PGDM antibody.
  • the kit includes EIA kits such as anti-immunoglobulin antibody that binds to anti-Tetranor-PGDM antibody, specimen diluent, diluted antibody or labeled Tetranor-PGDM, standard Tetranor-PGDM of known concentration, etc. Substrate, stop solution, etc. can be added.
  • Specimens for measuring Tetranor-PGDM used in the present invention include urine collected from humans in particular.
  • the measured value of Tetranor-PGDM in the specimen (particularly urine) before and after administration of the therapeutic agent is compared.
  • the sample may be a sample that accumulates urine for one day, or measurement can be performed using the collected sample as it is.
  • the collected urine may be stored at room temperature, but is preferably stored at a low temperature until it is used for measurement.
  • Tetranor-PGDM contained in the sample may be measured based on the total amount of the collected sample, or a part of the collected sample may be measured in consideration of correction by a reference material such as creatinine. Good.
  • the Tetranor-PGDM contained in the specimen is measured in consideration of correction by creatinine for a part of the collected specimen.
  • the specimen is urine
  • Tetranor-PGDM measurement is based on Tetranor-PGDM concentration in the urine of the patient before treatment treatment, under treatment management with treatment administration. -If the value of the PGDM concentration decreases with a significant or significant tendency from this predetermined value, it is determined that the therapeutic agent or therapeutic method is effective, and the therapeutic method or therapeutic agent administration is continued. If the value of Tetranor-PGDM concentration in urine does not decrease significantly or significantly, it is determined that the therapeutic method or therapeutic agent is not effective, and another therapeutic agent or therapeutic method is attempted.
  • Example 1 Materials and methods (1) Materials and specimens The following animals were used as muscular dystrophy model animals. Muscular dystrophy mouse: mdx (C57Bl / 10 ScSn, source: JAX Laboratories) Muscular dystrophy dog: CXMD J (CXMDJ, source: National Center for Psychiatry and Neurology) Moreover, the animal of the same strain was used as a comparative control animal. Wild-type mouse (C57BL / 10 ScSn, source: JAX Laboratories) Normal beagle dog (source: National Psychiatry & Neurology Center)
  • Test compound 1 available as a known hematopoietic prostaglandin D synthase (HPGDS) inhibitor as test compound: 4-benzhydryloxy-1- ⁇ 3- (1H-tetrazole -5-yl) -propyl ⁇ piperidine (Jpn. J. Pharmacol., 78, 1-10 (1998)), test compound 2; N-methoxy-N-methyl-4- (5-benzoylbenzimidazole-2- Ile-3,5-dimethylpyrrole-2-carboxamide (International Publication WO2007007778) was used.
  • HPGDS hematopoietic prostaglandin D synthase
  • Tetranor-PGDM-d6 (Cayman Chemical), which is a deuterium label of Tetranor-PGDM, as an internal standard.
  • the volume was adjusted to 2 mL with purified water and the pH was adjusted to 3.
  • Urine was injected into a Sep-Pak Vac C18 cartridge (Waters) previously equilibrated with 5 mL of acetonitrile and 5 mL of purified water.
  • the extract was washed with 5 mL of a 10% acetonitrile solution prepared with purified water and 10 mL of hexane, eluted with 5 mL of ethyl acetate, and dried under a nitrogen stream. The residue was dissolved in 100 ⁇ L of a 10% acetonitrile solution prepared with purified water to obtain a measurement sample.
  • Tetranor-PGDM The amount of Tetranor-PGDM was measured using the pretreated urine sample.
  • Prominence system system controller-CBM-20A, 2 liquid delivery units LC-20AD, online degasser DGU-20A 3 , column oven CTO-20A, autosampler with cooling function SIL-20AC, manufactured by Shimadzu Corporation
  • the flow rate was 0.2 mL / min with a concentration gradient of 0.2% formic acid or 0.01% to 0.2% acetic acid and acetonitrile or acetonitrile / methanol (90:10).
  • the column oven was set at 37 ° C, and the autosampler was set at 4 ° C.
  • the MS / MS section used a triple quadrupole mass spectrometer (4000 Q TRAP LC / MS / MS system, Applied Biosystems) using electrospray ionization as the ion source.
  • MRM Multiple Reaction Monitoring
  • MRM Multiple Reaction Monitoring
  • the parent ion of the target molecule is generated by electrospray ionization, the parent ion is separated by the first mass analyzer (Q1), and the parent ion is detected by CID (collision-induced dissociation) in the collision part (Q2) In the second mass analyzer (Q3), the fragment ions are separated, and the fragment ions are detected by the downstream detection unit.
  • Tetranor-PGDM mass number 328 is detected by further decomposing the generated m / z (mass number ⁇ charge) 327 ion by CID (collision-induced dissociation) and generating any of the product ions m / z 155, 143, and 109 It was done using.
  • the internal standard Tetranor-PGDM-d6 (mass number 334) is detected by further decomposing the generated m / z (mass number ⁇ charge) 333 ions by CID (collision-induced dissociation) and generating product ions m / z161, 149 , 109 was used. Data analysis was performed using Analyst Version 1.4.1 attached to MS / MS. From the prepared mass chromatogram, the area of Tetranor-PGDM-derived peaks was calculated, and each peak was quantified from a calibration curve prepared using a standard sample. In quantification, correction was performed using the area value of the Tetranor-PGDM-d6-derived peak introduced as an internal standard in order to correct the extraction efficiency and ionization efficiency for each analysis.
  • Symptom evaluation For evaluation of symptoms in mdx mice, the grip strength of the forelimbs was measured using a mouse grip strength measuring device (traction meter, manufactured by Brain Science Idea). One measurement was performed within 2 minutes, and the average value in 5 trials was calculated.
  • CXMD J showed a high urinary Tetranor-PGDM concentration Compared with normal dogs, CXMD J , a muscular dystrophy model dog, showed a high urinary Tetranor-PGDM concentration, and CXMD J administered test compound 2 The urinary Tetranor-PGDM concentration decreased (Table 1). This result indicates that the urinary Tetranor-PGDM concentration is a urinary marker associated with the onset of muscular dystrophy symptoms.
  • Urinary Tetranor-PGDM concentration in CXMD J decreased with HPGDS inhibitor administration
  • CXMD J which was switched to solvent administration
  • the symptom score was exacerbated.
  • CXMD J which was switched to inhibitor administration
  • This result shows that the fluctuation of urinary Tetranor-PGDM concentration can be an effect determination marker or a predictive marker by administration of a therapeutic agent for muscular dystrophy.

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Abstract

被験体から分離した検体中の11,15-Dioxo-9α-hydroxy- 2,3,4,5-tetranorprostan-1,20-dioic acid（以下、Tetranor-PGDM）を測定することにより、筋変性疾患を早期に検出でき、並びにこれら疾患の治療薬及び／又は治療方法の治療効果を判定することができる。

Description

筋変性疾患の検出方法、及び治療効果判定方法
　本発明は、筋変性疾患の早期検出方法、ならびに治療薬及び／又は治療方法の予測及び／又は判定方法に関する。
　筋障害あるいは筋壊死を伴う疾患群はミオパチーと呼ばれる。代表的な疾患として、筋ジストロフィー症、筋萎縮症がある。筋ジストロフィーは徐々に筋肉が弱くなり筋肉が萎縮していく遺伝性疾患の総称である。中でも、進行性筋ジストロフィーは最も患者数が多く、遺伝性で進行性筋力低下を来す。また、筋萎縮症は運動神経の障害によって起きる神経原性疾患である。
　筋ジストロフィーのうち最も患者数の多いデュシェンヌ型筋ジストロフィーは、性染色体劣性遺伝で男子だけに発症する疾患であり、人口10万人あたり３～５人、出生男児2000～3000人あたり１人といわれている。通常３～５歳頃、走れない、転びやすいなど歩行、起立に関する異常が発現し、10歳前後に歩行不能となる。その後、脊柱の変形や関節拘縮が急速に進行し、多くは呼吸不全、時に心不全、肺炎を起こす。
　筋ジストロフィー診断のための検査として、血液検査、神経伝導検査、筋電図、筋生検、DNA解析などがある。神経伝導検査は運動障害、知覚障害の原因が、末梢神経障害によるものか、またその障害部位や障害程度などを調べる検査であり、神経を電気刺激して刺激が伝わる速度を計測する。検査の性質上、特殊な装置を必要とし、神経を直接電気刺激するため、ビリビリ感、痛み、違和感を覚え、多少の苦痛を伴う。
　筋電図検査は運動障害が筋肉由来か神経由来か、またその障害部位や程度を調べる検査であり、特殊な装置を必要とし、筋肉に針を刺入することによる痛みを伴う。痛みを伴わない体表面筋電図検査もあるが、測定のために検査施設での拘束が余儀なくされる。
　筋生検では筋肉組織を採取する必要があるため、侵襲的であり簡便な検査とは言い難い。また、DNA解析はジストロフィン遺伝子の変異が原因であるデュシェンヌ型あるいはベッカー型筋ジストロフィーの診断には必須であるが、筋変成疾患としての適用はなく、汎用性に欠ける。
　血液検査としてはクレアチンキナーゼが一般的である。クレアチンキナーゼは骨格筋、心筋の可溶性分画に主として存在する酵素であり、細胞の損傷によって血液中に漏出する。筋ジストロフィーでは骨格筋が障害ならびに壊死することで、血液中クレアチンキナーゼが著しい高値を示すことから診断されるが、血液中クレアチンキナーゼ値は他の疾患でも高値を示すことがあるため、この濃度のみで鑑別診断は難しく、その他の検査も同時に行う。
　その他の進行性筋ジストロフィー症、神経の異常が原因で筋肉が障害あるいは壊死する疾患においても、血液検査として血液中クレアチンキナーゼの測定が行われるが、同様に筋障害あるいは筋壊死のみで高値を示すとはいえないため、その他の筋障害あるいは筋壊死のマーカーが必要である。
　従って、筋ジストロフィー等の筋変性疾患を、早期、且つ簡便に診断できる方法、或いは診断キットが望まれている。
　11,15-Dioxo-9α-hydroxy-2,3,4,5-tetranorprostan-1,20-dioic acid（以下、Tetranor-PGDM）は、プロスタグランジンD2（以下、PGD2）の代謝物として知られており、ヒトやマウスにおける炎症反応に伴って尿中排泄量が増加すること、さらにPGD2の生成を反映するマーカーであることが報告されている（非特許文献１）。
　一方、筋ジストロフィー等の筋変性疾患の変性部位ではPGD2の産生を触媒する造血器型プロスタグランジンD合成酵素（以下、HPGDS）の発現が亢進し、疾患の進行の防止及び改善には、PGD2が関与することが報告されている（特許文献１、非特許文献２）。
　しかしながら、Tetranor-PGDMが筋変性疾患の患者の尿中排泄物として高濃度で検出され、そのTetranor-PGDM濃度がHPGDS阻害剤の投与により有意に減少することは全く知られていない。
特開2005-119984号公報
J.Biol.Chem, Vol.283, No.2, 1179-1188(2008) Acta Neuropathol, 104, 377-384(2002)
本発明の目的は、尿中Tetranor-PGDMを測定することにより、筋変性疾患を効率的に診断する方法、さらにこれら疾患の治療薬及び／又は治療方法の治療効果を判定する方法を提供することである。
　さらに本発明の目的は、Tetranor-PGDMを対象とすることを特徴とする、筋変性疾患の診断用キットを提供することである。
上記目的を達成するために本発明者は鋭意研究を行い、次のような知見を得たことに基づいて、本発明を完成した。
１）正常動物に比較して、尿中PGD2代謝物であるTetranor-PGDMが、筋ジストロフィーモデル動物において増加していた。
２）筋ジストロフィーモデル動物に、公知のPGD2合成酵素阻害剤を投与することにより、Tetranor-PGDMの尿中排泄量が減少した。
　本発明は、以下の筋変性疾患の検出方法、筋変性疾患の診断測定用キットおよび筋変性疾患の治療薬及び／又は治療方法の効果予測及び／又は判定用キットを提供するものである。
項１．　被験体から分離した検体中のTetranor-PGDM含量を測定する工程を含む、筋変性疾患の検出方法。
項２．　筋変性疾患の患者から分離した検体中のTetranor-PGDM含量を測定する工程を含む、筋変性疾患に対する治療薬及び／又は治療方法の効果判定方法。
項３．　前記検体が尿である、項１又は２に記載の方法。
項４．　Tetranor-PGDMの測定が、高速液体クロマトグラフィー－タンデムマススペクトロメトリー法（HPLC-MS/MS）、酵素免疫測定法（EIA）、放射性免疫測定法（RIA）、蛍光免疫測定法（FIA）、エライザ法（ELISA）または酵素法により行われる、項１～３のいずれかに記載の方法。
項５．　筋変性疾患が進行性筋ジストロフィー症、先天性筋ジストロフィー症、肢帯型筋ジストロフィー症、顔面肩甲上腕型筋ジストロフィー症、筋強直性筋ジストロフィー症、筋萎縮性側索硬化症またはミオパチーである、項１又は２に記載の方法。
項６．　Tetranor-PGDMに対する抗体を含むことを特徴とする筋変性疾患の診断測定用キット。
項７．　Tetranor-PGDMに対する抗体を含むことを特徴とする筋変性疾患の治療薬及び／又は治療方法の効果予測及び／又は判定用キット。
項８．　Tetranor-PGDMに対する抗体、標識されたTetranor-PGDM、必要に応じてさらに抗イムノグロブリン抗体、検体希釈液、抗体ないし標識Tetranor-PGDMの希釈液、既知濃度の標準Tetranor-PGDM、EIA用の基質、EIA用の停止液からなる群から選ばれる少なくとも１種を含む項６又は７に記載のキット。
　本発明により、被験体から分離した検体中のTetranor-PGDMを測定することにより、簡便かつ早期に筋変性疾患を診断することができ、さらにこれら疾患の治療薬及び／又は治療方法の治療効果を効果的に判定することができる。
　さらに本発明により、筋変性疾患において、尿中に増加するTetranor-PGDMをマーカーとして用いることにより、これら疾患を簡便に診断することができる診断用キットとして利用することができる。
MdxマウスでのHPGDS阻害剤投与後の尿中Tetranor-PGDM濃度ならびに前肢握力の変化を示す図である。 左図は、HPGDS阻害剤を約１年間にわたり投与した後に、溶媒投与に切り替えた際の尿中Tetranor-PGDM濃度の変化を示した図であり、右図は、溶媒を約１年間にわたり投与した後に、阻害剤投与に切り替えた際の筋ジストロフィー犬 (CXMDJ) の尿中Tetranor-PGDM濃度の変化を示した図である。
　本発明では、Tetranor-PGDMを指標として、筋変性疾患の診断が可能であり、これら疾患の治療薬及び／又は治療方法の治療効果を効果的に判定することができる。さらにTetranor-PGDMをマーカーとして用いることによりこれら疾患の診断用キット、また筋変性疾患の治療薬及び／又は治療方法の効果予測及び／又は判定用キットを提供することができる。
　本発明の1つの実施形態によれば、筋変性疾患に罹患したもしくは罹患した可能性のある被験体から分離した検体中のTetranor-PGDMを測定することにより、筋障害あるいは筋壊死を伴う疾患を検出ないし診断することができる。具体的には、検体中のTetranor-PGDMの濃度あるいは含量が所定値よりも高い場合に筋変性疾患であると診断することができる。被験体から分離した検体中のTetranor-PGDMの所定値は、健常者の検体と筋変性疾患患者の検体のTetranor-PGDMを測定することにより決定できる。
　また、治療薬及び／又は治療方法の効果判定方法は、筋変性疾患の患者の治療開始前／治療薬投与開始前の検体中のTetranor-PGDMと、治療開始後／治療薬投与開始後のTetranor-PGDMの測定値を比較し、治療開始後／治療薬投与開始後の方が検体中のTetranor-PGDMの測定値が有意もしくは有意傾向をもって低下している場合に、治療ないし治療薬投与が有効であると判定し、検体中のTetranor-PGDMの測定値が治療開始／治療薬投与開始の前後で有意差が無く、有意傾向もない場合には、当該治療薬/治療方法は有効ではないと判定される。
　本発明の別の態様によれば、検体中のTetranor-PGDMを検出することができる抗体を用いた診断用キットを提供することができる。
　本発明における被験体とは、哺乳動物、例えばヒト、サル、ウシ、ウマ、ラット、マウス、モルモット、ウサギ、イヌ、ネコ、ヒツジ、ヤギなどが挙げられ、好ましくはヒトである。
　本発明の方法により測定されるTetranor-PGDMは、PGD2の尿中の代謝物として見出される。また、Tetranor-PGDMは、血液中及び糞便中にも見出される。
本発明における被験体から分離した検体とは、好ましくは尿、糞便、血液、血漿、血清であり、より好ましくは尿である。
　本発明における測定という語は、検出、定量及び半定量のいずれをも包含する。従って、「Tetranor-PGDMを測定する」とは、検体中のTetranor-PGDMを検出すること、及びその発現量を測定することの両者が包含され、さらに、発現量が所定値以上であるか否かを判別する場合、換言すれば、発現量が所定値以上の場合にその発現を検出する場合も包含される。
　Tetranor-PGDMを測定する方法としては、GC-MS、HPLC、高速液体クロマトグラフィー－タンデムマススペクトロメトリー法（HPLC-MS/MS）、酵素免疫測定法（EIA）、放射性免疫測定法（RIA）、蛍光免疫測定法（FIA）、エライザ法（ELISA）、酵素法等が例示され、高速液体クロマトグラフィー－タンデムマススペクトロメトリー法（HPLC-MS/MS）、或いは操作の簡便性から抗Tetranor-PGDM抗体を用いた免疫測定法、特に酵素免疫測定法（EIA）、放射性免疫測定法（RIA）、蛍光免疫測定法（FIA）、エライザ法（ELISA）が好ましく、特に酵素免疫測定法（EIA）或いはエライザ法（ELISA）が好ましい。
　筋変性疾患としては、進行性筋ジストロフィー症、先天性筋ジストロフィー症、肢帯型筋ジストロフィー症、顔面肩甲上腕型筋ジストロフィー症、筋強直性筋ジストロフィー症、筋萎縮性側索硬化症、ミオパチー、肉離れ、カルディオミオパチー（心筋梗塞）、糖尿病性末梢血管障害（血管平滑筋障害）等が例示され、好ましくは進行性筋ジストロフィー症、先天性筋ジストロフィー症、肢帯型筋ジストロフィー症、顔面肩甲上腕型筋ジストロフィー症、筋強直性筋ジストロフィー症等の、筋ジストロフィー症および筋萎縮性側索硬化症である。
　筋変性疾患の治療効果を判定することのできる治療薬としては、特に限定されずあらゆる治療薬を対象とすることができ、例えば造血器型プロスタグランジンD合成酵素（HPGDS）阻害剤、プロスタグランジンD受容体拮抗剤等が例示され、好ましくは造血器型プロスタグランジンD合成酵素（HPGDS）阻害剤である。
　Tetranor-PGDMの検体中の濃度測定は、多量の検体を同時に簡便に測定することができるため、免疫測定法で実施することが好ましい。
　免疫測定法ないしキットに用いることができる抗Tetranor-PGDM抗体としては、例えば、抗体に関してはポリクローナル抗体又はモノクローナル抗体等を挙げることができる。
　抗体の製造にあたっては、Tetranor-PGDMを動物（ラット、マウス、モルモット、ウサギ、イヌ、ネコ、ヒツジ、ヤギなど）に投与して免疫付与し、ポリクローナル抗体又はモノクローナル抗体を作製してもよく、Tetranor-PGDMを適当なタンパク質、例えば牛血清アルブミン（BSA）、グロブリン、サイログロブリン、ヘモシアニンなどと結合させた後、適当なアジュバントと懸濁混合して動物（ラット、マウス、モルモット、ウサギ、イヌ、ネコ、ヒツジ、ヤギなど）に投与間隔をあけて投与し、所定期間経過後動物の血清を採取し、公知の方法で処理をすることにより、ポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体を取得することができる。
　モノクローナル抗体は、具体的には、ポリクローナル抗体の作製時に用いたTetranor-PGDMを、必要に応じて適当なタンパク質と結合させて免疫原として用いて動物を免疫し、脾臓より得られるモノクローナル抗体産生細胞とミエローマ細胞とを細胞融合することによって作成されるハイブリドーマにより産生させることができる。
　ハイブリドーマは、次の方法で得ることができる。上述のようにして得たTetranor-PGDM単独あるいはそのタンパク質結合体をフロイントの完全アジュバンドとともに、数回に分けて、マウス、ラット、ウサギなどの適当な哺乳動物に、２～３週間おきに、腹腔内又は静脈内又は皮下投与することによって免疫する。次いで、脾臓などに由来する抗体産生細胞と、ミエローマ細胞などの試験管内で増殖可能な腫瘍細胞とを融合させる。融合方法としては、ケーラーとミルシュタインの常法（Nature、vol.256、495(1975））に従ってポリエチレングリコールによって行うことができ、又はセンダイウイルスなどによって行うこともできる。
　上記方法により得られる抗Tetranor-PGDM抗体を用いて、Tetranor-PGDMの免疫測定法を実施する。この免疫測定法としては、測定対象物質のTetranor-PGDMに対する周知の競合法による免疫測定法で行うことが好ましく、標識物質で分類した酵素免疫測定法（EIA）、蛍光免疫測定法、発光免疫測定法、放射免疫測定法(RIA)などを挙げることができる。EIA法が特に好ましい。
　通常、競合法には標識された抗原が用いられる。標識物質としては、例えば、酵素、蛍光物質、発光物質、放射性同位元素などである。標識物質と抗原との結合方法は、公知の共有結合又は非共有結合を作る方法を利用して製造することができる。結合の方法には、例えば縮合剤を用いて共有結合を作成する方法、各種架橋剤を用いる方法などを挙げることができる（例えば「蛋白質核酸酵素」別冊31号、37～45頁（1985）参照）。共有結合による方法では、抗原に存在する官能基を用いることができる他、例えばチオール基、アミノ基、カルボキシル基、水酸基などの官能基を常法により導入したのち、結合法により標識抗原を製造することができる。また非共有結合による方法としては物理吸着法などを挙げることができる。
　Tetranor-PGDMの測定は、例えば以下に記載の免疫測定法で実施することが好ましい。所定量の標識されたTetranor-PGDM、抗Tetranor-PGDM抗体、Tetranor-PGDMを含有する検体（特に尿検体）とを競合的に反応させ、抗体と結合した又は結合しなかった標識された抗原の量から検体中のTetranor-PGDMを定量する。
　抗体と結合した標識された抗原を結合しなかった標識された抗原との分離は、更に抗イムノグロブリン抗体を加えて、(標識抗原)－（抗Tetranor-PGDM抗体）－（抗イムノグロブリン抗体）複合体を沈殿させて分離して、複合体に結合している標識物質又は結合していない標識物質を測定することにより実施することができる。この方法は二抗体法と呼ばれ、チャーコールフィルターを用いた方法などによっても実施することもできる。抗イムノグロブリン抗体は、固相に結合させた抗イムノグロブリン抗体、固相に結合した標識物質又は結合していない標識物質を測定することによっても実施される。抗イムノグロブリン抗体は、周知の方法、例えば物理吸着法、架橋剤又は共有結合を利用した化学結合法、アビジン－ビオチン結合を利用した結合法などにより固相に結合させることができる。標識物質の測定にあたっては標識物質に対応して選択することは言うまでもない。
　本発明のキットには、抗Tetranor-PGDM抗体が含まれ、さらに好ましい実施形態では、標識されたTetranor-PGDM、抗Tetranor-PGDM抗体が含まれる。キットには、必要に応じて例えば抗Tetranor-PGDM抗体と結合する抗イムノグロブリン抗体、検体希釈液、抗体ないし標識Tetranor-PGDMの希釈液、既知濃度の標準Tetranor-PGDM等、EIA用のキットでは、基質、停止液等を加えることができる。
　本発明に使用するTetranor-PGDMの測定を実施する検体としては、特にヒトから採取される尿を挙げることができる。
　筋変性疾患患者の効果判定方法では、治療薬の投与前後の検体（特に尿）中におけるTetranor-PGDMの測定値を比較する。
　検体は、一日分を蓄尿した検体を用いてもよく、採取した検体をそのまま用いて測定を行うこともできる。採取した尿は室温で保存してもよいが、測定に用いるまで低温で保存することが好ましい。
　検体に含まれるTetranor-PGDMの測定は、採取される検体全量を基準として実施してもよいし、採取される検体の一部について、クレアチニンなどの基準物質による補正を考慮して実施してもよい。
　操作の簡便性から、検体に含まれるTetranor-PGDMの測定は、採取される検体の一部について、クレアチニンによる補正を考慮して実施することが好ましい。
　次に本発明に使用する所定値について説明する。
　筋変性疾患患者の治療効果判定の所定値については、健常者と患者の検体中のTetranor-PGDMを測定し、各々の測定値により、常法に従い治療効果の有無を判定する基準となる「所定値」を決定することができる。
　所定値を求めるときは、例えば検体が尿である場合、健常者と筋変性疾患患者の一日蓄尿あるいは定められた時刻に採取された尿を使用することが好ましい。
　Tetranor-PGDMの測定による治療効果の判定方法は、治療薬投与を伴う治療管理下において、治療薬投与前の患者の尿中に含まれるTetranor-PGDM濃度の値を所定値とし、尿中のTetranor-PGDM濃度の値がこの所定値よりも有意または有意傾向をもって低下する場合には治療薬ないし治療方法が有効であると判定されその治療法ないし治療薬投与を続ける。また、尿中のTetranor-PGDM濃度の値が有意または有意傾向をもって低下しない場合には治療方法ないし治療薬は有効ではないと判断し、他の治療薬ないし治療方法を試みることになる。
　以下、本発明を実施例を用いてより詳細に説明するが、本発明はこれら実施例に限定されない。
実施例１
１．材料及び方法
(1)材料および検体
筋ジストロフィーモデル動物として、以下の動物を使用した。
　筋ジストロフィーマウス：mdx （C57Bl/10 ScSn、入手先：JAX Laboratories）
　筋ジストロフィー犬　　：CXMDJ（CXMDJ、入手先：国立精神・神経センター）
また、比較対照動物として同系統の動物を使用した。
　Wild-type マウス（C57BL/10 ScSn、入手先：JAX Laboratories）
　正常ビーグル犬（入手先：国立精神・神経センター）
(2)被験化合物
　被験化合物として、公知の造血器型プロスタグランジンD合成酵素（HPGDS）阻害剤として入手可能な、被験化合物1；4-ベンズヒドリルオキシ-1-{3-(1H-テトラゾール-5-イル)-プロピル}ピペリジン（Jpn. J. Pharmacol., 78, 1-10 (1998)）、被験化合物2；N-メトキシ-N-メチル-4-(5-ベンゾイルベンゾイミダゾール-2-イル-3,5-ジメチルピロール-2-カルボキサミド（国際公開WO2007007778号公報）を用いた。
(3)マウス尿採取
　４週齢のmdxマウスを用いて、溶媒（0.5% メチルセルロース溶液）あるいは被験化合物1を30mg/kgの用量で5日間経口投与した。被験化合物1の投与開始前および投与5日後の尿は、マウス用代謝ケージを用いて約12時間採取した。また、比較対照として同週齢の同系統wild-typeマウスから尿を採取した。尿中クレアチニン濃度は測定キット（Ｌタイプワコー CRE・M、和光純薬）を用いて行った。
(4)犬尿採取
　CXMDJに溶媒（0.5%　メチルセルロース溶液）あるいは被験化合物2を約1年間経口投与した後、溶媒投与犬には被験化合物2を、また被験化合物2投与犬には溶媒投与を開始した。溶媒投与から被験化合物2投与への切り替え前に、被験化合物2投与から溶媒投与への切り替え前にそれぞれ尿を採取した。また、投与液を切り替え後は経時的に尿を採取した。また、比較対照として正常ビーグル犬から尿を採取した。
(5)尿の前処理
　採取したマウスあるいは犬の尿200μLに、内部標準としてTetranor-PGDMの重水素標識体であるTetranor-PGDM-d6（Cayman Chemical社）5ngを混合した。精製水で容量を2mLとし、pHを3に調整した。あらかじめアセトニトリル5mLおよび精製水5mLで平衡化したSep-Pak Vac C18カートリッジ（Waters）に尿を注入した。精製水で調製した10%アセトニトリル溶液5mLおよびヘキサン10mLで洗浄後、酢酸エチル5mLで溶出させ、窒素気流下で乾固した。残渣を精製水で調製した10%アセトニトリル溶液100μLに溶解し、測定サンプルとした。
(6)Tetranor-PGDMの測定
　前処理後の尿サンプルを用いて、Tetranor-PGDM量を測定した。測定には高速液体クロマトグラフィー－タンデムマススペクトロメトリー（HPLC-MS/MS）装置を使用した。HPLC装置として、Prominence system（システムコントローラ―CBM-20A、送液ユニットLC-20AD2台、オンライン脱気装置DGU-20A3、カラムオーブンCTO-20A、冷却機能付きオートサンプラーSIL-20AC、島津製作所製）、ガードカラムとしてInertsilODS3、内径2.1mm×長さ50mm（GLサイエンス社製）を、分離カラムにはInertsilODS3、内径2.1mm×長さ250mm（GLサイエンス社製）を使用し、移動相は0.01%～0.2%蟻酸あるいは0.01%～0.2%酢酸と、アセトニトリルあるいはアセトニトリル/メタノール(90:10)の濃度勾配で流速は0.2mL/minとした。カラムオーブンは37℃、オートサンプラーは4℃に設定した。MS/MS部はエレクトロスプレーイオン化をイオン源とする3連四重極型質量分析装置（4000 Q TRAP LC/MS/MS system、アプライドバイオシステムズ社製）を用いた。定量法としてはMRM (Multiple Reaction Monitoring)法を用いた。本法は、親イオン（プレカーサーイオン）とCID（衝突誘起解離）により生じたフラグメントイオンの質量から、真の親イオンのみを特異的に選択し、その面積から親イオンを正確に定量する方法であり、すなわちエレクトロスプレーイオン化法により目的分子の親イオンを生成し、1番目の質量分析器（Q1）で当該親イオンを分離し、衝突部（Q2）ではCID（衝突誘起解離）により当該親イオンに特徴的なフラグメントイオンを生成し、さらに2番目の質量分析器（Q3）では当該フラグメントイオンを分離し、その下流の検出部で当該フラグメントイオンを検出する。Tetranor-PGDM（質量数328）の検出は生成したm/z（質量数÷電荷）327のイオンをさらにCID（衝突誘起解離）によって分解し、生成するプロダクトイオンm/z155、143、109のいずれかを用いて行った。内部標準Tetranor-PGDM-d6（質量数334）の検出は生成したm/z（質量数÷電荷）333のイオンをさらにCID（衝突誘起解離）によって分解し、生成するプロダクトイオンm/z161、149、109のいずれかを用いて行った。データ解析はMS/MSに付属するソフトウェアAnalyst Version 1.4.1を用いて行った。作成されたマスクロマトグラムから、Tetranor-PGDM由来のピークについて面積計算を行い、標準試料を用いて作成した検量線より各ピークの定量を行った。定量の際には、分析毎の抽出効率およびイオン化効率を補正するために内部標準として導入したTetranor-PGDM-d6由来ピークの面積値を用いて補正を行った。
(7) 症状評価
　mdxマウスでの症状評価として、マウス用握力測定装置（トラクションメーター、ブレインサイエンスイデア製）を用いて前肢の握力を測定した。1回の測定を２分以内に行い、5回の試行における平均値を算出した。
２．結果
(1)mdxマウスで尿中Tetranor-PGDM濃度は高値を示す
　尿中クレアチニン濃度で補正したTetranor-PGDM濃度はwild-typeマウスにおいて6.8±1.0ng/mg Cre（平均値±標準誤差）であったが、mdxマウスでは17.8±0.8ng/mg Cre（平均値±標準誤差、p<0.0003）であり、約3倍の高値を示した。この結果は、尿中Tetranor-PGDM濃度が筋ジストロフィー症状発現に伴う尿中マーカーとなることを示している。
(2)HPGDS阻害剤はmdxマウスの症状を改善し、尿中Tetranor-PGDM濃度を減少させる
　次に、mdxマウスの症状に対するHPGDS阻害剤の作用を評価した。溶媒投与群では前肢握力の有意な変化はなかったが、被験化合物1を反復経口投与することでmdxマウスの前肢握力は有意に増加した（図１右）。同じmdxマウスでの尿中Tetranor-PGDM濃度を測定した結果、被験化合物1投与群では尿中Tetranor-PGDM濃度が有意に低下した（図１左）。この結果はmdxマウスでの症状改善と尿中Tetranor-PGDM濃度の変動が相関することを示している。
(3)CXMDJで尿中Tetranor-PGDM濃度は高値を示した
　正常犬に比べて、筋ジストロフィーモデル犬であるCXMDJでは尿中Tetranor-PGDM濃度は高値を示し、被験化合物2を投与したCXMDJでは尿中Tetranor-PGDM濃度が減少した（表１）。この結果は、尿中Tetranor-PGDM濃度が筋ジストロフィー症状発現に伴う尿中マーカーとなることを示している。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000001
  
(4)HPGDS阻害剤投与によりCXMDJでの尿中Tetranor-PGDM濃度は低下した
約１年間にわたり被験化合物2を経口投与した後に、溶媒投与に切り替えたCXMDJでは尿中Tetranor-PGDM濃度が増加し（図２左）、症状スコアが増悪していた。一方、約１年間にわたり溶媒を経口投与した後に、阻害剤投与に切り替えたCXMDJでは尿中Tetranor-PGDM濃度が低下し（図２右）、症状スコアが軽減していた。この結果は、尿中Tetranor-PGDM濃度の変動が筋ジストロフィー治療薬投与による効果判定マーカー、又は予測マーカーになりうることを示している。

Claims (8)

  1. 　被験体から分離した検体中のTetranor-PGDM含量を測定する工程を含む、筋変性疾患の検出方法。
  2. 　筋変性疾患の患者から分離した検体中のTetranor-PGDM含量を測定する工程を含む、筋変性疾患に対する治療薬及び／又は治療方法の効果判定方法。
  3. 　前記検体が尿である、請求項１又は２に記載の方法。
  4. 　Tetranor-PGDMの測定が、高速液体クロマトグラフィー－タンデムマススペクトロメトリー法（HPLC-MS/MS）、酵素免疫測定法（EIA）、放射性免疫測定法（RIA）、蛍光免疫測定法（FIA）、エライザ法（ELISA）または酵素法により行われる、請求項１～３のいずれかに記載の方法。
  5. 筋変性疾患が進行性筋ジストロフィー症、先天性筋ジストロフィー症、肢帯型筋ジストロフィー症、顔面肩甲上腕型筋ジストロフィー症、筋強直性筋ジストロフィー症、筋萎縮性側索硬化症またはミオパチーである、請求項１又は２に記載の方法。
  6. 　Tetranor-PGDMに対する抗体を含むことを特徴とする筋変性疾患の診断測定用キット。
  7. 　Tetranor-PGDMに対する抗体を含むことを特徴とする筋変性疾患の治療薬及び／又は治療方法の効果予測及び／又は判定用キット。
  8. Tetranor-PGDMに対する抗体、標識されたTetranor-PGDM、必要に応じてさらに抗イムノグロブリン抗体、検体希釈液、抗体ないし標識Tetranor-PGDMの希釈液、既知濃度の標準Tetranor-PGDM、EIA用の基質、EIA用の停止液からなる群から選ばれる少なくとも１種を含む請求項６又は７に記載のキット。
PCT/JP2010/053762 2009-03-09 2010-03-08 筋変性疾患の検出方法、及び治療効果判定方法 WO2010104025A1 (ja)

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