CN117769422A - 治疗与监测帕金森病的方法 - Google Patents

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Abstract

本公开涉及用本文所提供的化合物治疗受试者的帕金森病的方法，包含所述化合物的药物组合物，以及监测受试者对所述治疗的反应的方法。

Description

治疗与监测帕金森病的方法
相关申请的交叉引用
本申请根据35 U.S.C.§119(e)要求2021年4月30日提交的美国临时申请第63/182,207号的权益，所述申请通过引用整体并入本文。
技术领域
本公开涉及用于治疗和/或监测帕金森病的方法。
背景技术
组合基因和生物化学证据表明神经退行性病症的发病机制中的某些激酶作用(Christensen,K.V.(2017)Progress in Medicinal Chemistry 56:37-80；Fuji,R.N.等人,(2015)Sci.Transl.Med.7(273):ra15；Taymans,J.M.等人,(2016)Curr.Neuropharm.14(3):214-225)。帕金森病是影响神经系统呈现运动和非运动症状的神经退行性疾病。尽管帕金森病的确切病因尚未知，但据认为基因和环境因素的组合促成了所述疾病的病因。涉及帕金森病的基因包括Park8，其编码富含亮氨酸的重复激酶2(LRRK2)，一种为帕金森病(PD)的关键治疗目标的复合信号传导蛋白。在帕金森病的家族性和非家族性(偶发性)形式中都发现了Park8的突变，并且LRRK2的增加的激酶活性涉及帕金森病的发病机制。LRRK2基因的突变是家族性帕金森病的最频繁基因学病因和溶酶体功能障碍的主要驱动者，其促使形成帕金森病发病机制和神经变性。(Chai C等人,Curr Genomics.2013；14:464-471；Healy DG等人,Lancet Neurol.2008；7:583-590；Henry AG等人,Human Mol.Gen.2015；24:6013-6028；Cookson MR等人,Nat.Rev.Neurosci.2016；11:791-797)。LRRK2调节溶酶体生成和功能，其在帕金森病中减弱并且可通过LRRK2抑制恢复，从而可能积极地改变具有基因LRRK2突变的患者以及患有偶发性帕金森病的患者的疾病进展。
组合基因和生物化学证据支持其中LRRK2激酶功能有关联地涉及PD的偶发性和家族性形式的发病机制的模型，并且因此LRRK2激酶抑制剂似乎适用于治疗(Christensen,K.V.(2017)Progress in Medicinal Chemistry 56:37-80)。抑制LRRK2的激酶活性作为帕金森病的治疗正在研究中(Fuji等人,2015；Taymans,J.M.等人,(2016)CurrentNeuropharmacology 14(3):214-225)。
已研究LRRK2激酶抑制剂以用于治疗阿尔茨海默病(Alzheimer's disease)、帕金森病、ALS和其他神经退行性疾病(Estrada,A.A.等人,(2015)Jour.Med.Chem.58(17):6733-6746；Estrada,A.A.等人,(2013)Jour.Med.Chem.57:921-936；Chen,H.等人,(2012)Jour.Med.Chem.55:5536-5545；Estrada,A.A.等人,(2015)Jour.Med.Chem.58:6733-6746；Chan,B.K.等人,(2013)ACS Med.Chem.Lett.4:85-90；US 8354420；US 8569281；US8791130；US 8796296；US 8802674；US 8809331；US 8815882；US 9145402；US 9212173；US9212186；US 9932325；WO 2011/151360；WO 2012/062783；WO 2013/079493)。
已知施用各种LRRK2激酶抑制剂会诱导溶酶体形态和与溶酶体相关的脂质的组织水平变化。因此，在猴中施用LRRK2抑制剂GNE-7915和GNE-0877使得尿液di-22:6-BMP减少(Fuji RN等人,(2015)Sci.Transl.Med.7(273):273ra215；Baptista MA等人,Baptista等人,(2020)Sci.Transl.Med.12(540))。
di-22:6-BMP是通常位于溶酶体和晚期胞内体的内部膜中的磷脂，并且负责溶酶体降解。也在LRRK2基因敲除小鼠肾脏的近端小管中观测到具有堆叠轮状膜和脂质的溶酶体的数目扩大和增加(Herzig MC等人,(2011)Hum.Mol.Genet.20(21):4209-4223)，表明溶酶体中的磷脂膜累积。药物诱导的磷脂病(PLD)是一种后天性溶酶体贮积病症，其特征在于磷脂和药物在不同组织如肾脏、心脏和肺中的溶酶体中过量累积(Shayman JA等人,(2013)Biochim.Biophys.Acta.1831(3):602-611；Atashrazm,F.(2016)Clinical Pharmacology:Advances and Applications 8:177-189)。
需要用于治疗和/或监测帕金森病的治疗进程的方法。
发明内容
以下简要概述并非旨在包括本发明的所有特征和方面，也不暗示本发明必须包括此发明内容中论述的所有特征和方面。
本公开涉及用于治疗帕金森病的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用约70至约800毫克/天之间的化合物I，N2-(3-(2-(2H-1,2,3-三唑-2-基)丙-2-基)-1-环丙基-1H-吡唑-5-基)-N4-乙基-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺：
或其药学上可接受的盐或氘化类似物。
在另一方面，提供了一种用于治疗帕金森病的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用药物组合物，其包含约70至约800毫克/天之间的化合物I：
或其药学上可接受的盐或氘化类似物，和药学上可接受的载体。
在一个方面，本公开提供了用约70至约225毫克/天的化合物I或其药学上可接受的盐或氘化类似物治疗帕金森病的方法。
在另一方面，本公开涉及用约70至约80毫克/天的化合物I或其药学上可接受的盐或氘化类似物治疗帕金森病的方法。
在其他方面，向受试者施用约70mg、约75mg、约80mg、约105mg、约130mg、约150mg、约225mg、约250mg、约300mg或约400mg。
在一个方面，经口施用化合物I或其药学上可接受的盐或氘化类似物。
在一个方面，化合物I或其药学上可接受的盐或氘化类似物是每天施用一次。
在另一方面，化合物I或其药学上可接受的盐或氘化类似物是每天施用两次。
在其他方面，本文所提供的方法是用于治疗人类。在其他方面，所述方法用于治疗家族性帕金森病。在其他方面，所述方法用于治疗偶发性帕金森病。
在又一方面，所述方法使得受试者的全血中的磷酸化S935LRRK2(pS935)减少。
在又一方面，所述方法使得受试者的外周血单核细胞(PBMC)中的磷酸化ras相关蛋白质Rab10(pRab10)减少。
在又一方面，所述方法使得受试者的尿液中的溶酶体脂质22:6-双[单酰基甘油]磷酸酯(BMP)减少。
在另一方面，提供了一种用于减少患有帕金森病的受试者的全血中的磷酸化S935LRRK2(pS935)的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用约70至800毫克/天之间的化合物I或其药学上可接受的盐或氘化类似物。
在一个方面，pS935减少了至少41％至97％。
在又一方面，提供了一种用于减少患有帕金森病的受试者的外周血单核细胞(PBMC)中的磷酸化ras相关蛋白质Rab10(pRab10)的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用约70至800毫克/天之间的化合物I或其药学上可接受的盐或氘化类似物。
在一个方面，pRab10减少了至少44％至97％。
在另一方面，提供了一种用于减少患有帕金森病的受试者的尿液中的溶酶体脂质22:6-双[单酰基甘油]磷酸酯(BMP)的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用约70至800毫克/天之间的化合物I或其药学上可接受的盐或氘化类似物。
在一个方面，BMP(22:6/22:6)或BMP(22:6/22:6)/肌酐减少了22％至86％或至少40％。
在另一方面，提供了LRRK2抑制剂用于治疗帕金森病的用途，其中所述抑制剂以约70至800毫克/天向有需要的受试者施用并且是化合物I或其药学上可接受的盐或氘化类似物。
在一个方面，提供了LRRK2抑制剂在制造用于治疗帕金森病的药剂中的用途，其中所述抑制剂以约70至800毫克/天向有需要的受试者施用并且是化合物I或其药学上可接受的盐或氘化类似物。
在另一方面，提供了通过检测患者样本中的磷酸化S935 LRRK2(pS935)、磷酸化ras相关蛋白质Rab10(pRab10)或溶酶体脂质22:6-双[单酰基甘油]磷酸酯(BMP)的减少来评估治疗的方法。
在一个方面，提供了一种监测受试者对本文所提供的治疗方法的反应的方法，所述方法包括：(a)测量用约70至800毫克/天之间的化合物I或其药学上可接受的盐或氘化类似物治疗的受试者的测试样本中的一个或多个pS935、pRab10和/或BMP物质的量；(b)比较在(a)中测量的一个或多个pS935、pRab10和/或BMP物质与一个或多个参考值之间的量差；以及(c)根据所述比较确定所述化合物、药物组合物或其给药方案是否提高一个或多个pS935、pRab10和/或BMP物质水平以用于治疗帕金森病。
在另一方面，所述方法还包括改变化合物I或其药学上可接受的盐或氘化类似物的给药剂量或频率，或向患者施用的疗法过程。
在又一方面，本发明涉及一种药物组合物，其包含70至800mg的化合物I，
或其药学上可接受的盐或氘化类似物，和药学上可接受的载体。
在另一方面，本发明涉及一种药物组合物，其包含约70至225mg的化合物I。
在又一方面，本发明涉及化合物I的药物组合物，其适用于施用约225毫克/天或高达800毫克/天。
在其他方面，本发明涉及一种药物组合物，其包含约70mg、约75mg、约80mg、约105mg、约130mg、约150mg、约225mg、约250mg、约300mg或约400mg的化合物I。
在另一方面，本发明涉及化合物I的药物组合物，其适用于口服施用。
在其他方面，本发明涉及化合物I的药物组合物，其适用于每天施用一次、两次或三次。
本发明的特征和优势将从本发明的优选实施方案的以下更特定描述显而易见，如附图中所示，其中在不同视图中，相同参考符号是指相同部分。附图未必按比例绘制，实际上重点一般放在说明本发明的原理上。
附图说明
本专利或申请文件含有至少一张彩图。在申请并支付必要费用后，专利局将提供带有彩图的此专利或专利申请公开的副本。
图1显示了所提出的LRRK2作用机制，比较了帕金森病细胞与经LRRK2抑制剂治疗的细胞。aSyn＝α-突触核蛋白；GBA＝β-葡萄糖脑苷脂酶；LRRK2＝富含亮氨酸的重复激酶2；Rabs＝Rab GTP酶。
图2显示了1期研究设计。此双盲、安慰剂对照1期研究包含健康志愿者中的单一递增剂量(SAD)和10天、14天和28天多重递增剂量(MAD)部分。BID＝每天两次；PBO＝安慰剂；QD＝每天一次。
图3显示了1b期研究设计。此研究为双盲、安慰剂对照、平行设计的1b期研究，其具有28天给药，在帕金森病患者中每天施用一次。
图4A和图4B显示了1期研究中的目标参与。BL＝基线；IQR＝四分位数范围；MAD＝多重递增剂量。图4A显示了全血pS935的减少百分比(基线至第10天)。图4B显示了全血pS935的减少百分比(基线至第14天)。缩写：IQR＝四分位数范围；pS935 LRRK2＝富含亮氨酸的重复激酶2丝氨酸935磷酸化；QD＝每天一次；BID-每天两次。
图5A和图5B显示了1期研究中的通路参与。图5A显示了来自PBMC的pRab10的减少百分比(基线至第10天)。图5B显示了来自PBMC的pRab10的减少百分比(基线至第14天)。
图6A和图6B显示了1b期研究中的目标和通路参与。图6A显示了全血pS935的减少百分比(基线至第28天)。图6B显示了来自PBMC的pRab10的减少百分比(基线至第28天)。
图7A和图7B显示了化合物I的1/1b期研究中的溶酶体参与。图7A显示了I期健康志愿者(B、D和E部分MAD群组)中BMP(22:6/22:6)的减少百分比(基线至第10天[B部分]、第28天[D部分]和第14天[E部分])。图7B显示了患有帕金森病的1b期患者中的尿液BMP(22:6/22:6)/肌酐的减少百分比(基线至第10天[B部分]、第28天[D部分]、和第14天[E部分])。BMP浓度相对于肌酐浓度归一化(ng/mg)。
图8显示了1b期研究中患有帕金森病的患者的人口统计数据和临床特征。H&Y，Hoehn和Yahr；MDS-UDPRS III，运动障碍协会-统一帕金森病评定量表；MAO-B，单胺氧化酶；PD，帕金森病；QD，每天一次。
图9显示了健康志愿者的1期研究中MAD群组中的治疗引发不良事件。*手术相关包括(以频率顺序)：手术性疼痛、手术性头痛、手术后并发症、穿刺部位疼痛、穿刺部位痒、导管部位疼痛、手术后不适、医疗器件皮炎、导管部位红斑。在≥1个TEAE的独立分析中，每个治疗组中≥2名受试者包括以下未列于上文的额外TEAE：耳痛(n＝2；105mg QD 10天群组)；鼻咽炎(n＝2；225mg QD 28天群组)；无症状COVID-19(n＝2；400mg BID14天群组)；嗜睡(n＝2；250mg BID 14天群组)。2名受试者也经历与腰椎穿刺相关的晕厥前兆(150和225mg QD28天群组各一名)。
图10显示了帕金森病患者的1b期研究中的治疗引发不良事件。GERD，胃食道逆流病；TEAE，治疗引发不良事件。a手术相关包括(以频率顺序)：手术性疼痛、手术后挫伤、手术后血肿和手术性头痛；b相同两名患者中出现的低血压和起立性低血压。
定义
除非另外定义，否则本文所用的所有技术和科学术语都具有与本发明所属领域的普通技术人员通常所了解相同的含义。虽然可在本发明的实践或测试中使用类似或等效于本文所述的方法和材料的任何方法和材料，但现在描述优选的方法和材料。通常，与细胞和分子生物学和化学结合使用的命名法以及其技术是本领域中众所周知并且常用的那些。未明确限定的某些实验技术通常根据本领域中众所周知的常规方法和如本说明书通篇中引用并论述的多个通用和更具体的参考文献中所述来进行。为清楚起见，以下术语定义如下。
词语“包含(comprise/comprising)”、“包括(include/including/include s)”在用于本说明书和权利要求书中时旨在指定所述特征、整数、组分或步骤的存在，但它们并不排除一种或多种其他特征、整数、组分、步骤或其群组的存在或添加。
术语“治疗(treat/treatment)”是指治疗性治疗和防治性或预防性措施两者，其中目标为预防或减缓(减轻)不当的生理变化或病症，例如溶酶体功能障碍病症的生长、发展或扩散。出于本发明的目的，有益或所要临床结果包括(但不限于)症状缓解、疾病程度减轻、疾病状况稳定(即不恶化)、疾病进展推迟或减缓、疾病状况改善或减轻和病征缓解(部分或完全)，所述结果是可检测或不可检测的。“治疗”也可意指与未接受治疗时的预计存活期相比延长的存活期。需要治疗者包括已患有疾患或病症者，以及易于患上疾患或病症者，或其中疾患或病症待预防者。
术语“约”指示值包括用于测定值的方法的固有误差变化或实验中存在的变化。术语“约”可指+/-10％的变化。
术语“量”是指分子、化合物或试剂(例如，pS935、pRab10或BMP分子)的水平或浓度。术语包括绝对量或浓度以及相对量或浓度。在一些实施方案中，参考标准(例如，内部pS935、pRab10或BMP标准)用于校准以便测定(例如，样本中)所存在的分子、化合物或试剂的绝对量或浓度和/或相对于对照归一化以便测定所存在的分子、化合物或试剂的相对量或浓度。
短语“治疗有效量”意指本发明化合物的如下量，其(i)治疗特定疾病、疾患或病症；(ii)减轻、改善或消除特定疾病、疾患或病症的一种或多种症状；或(iii)预防或延迟本文所述的特定疾病、疾患或病症的一种或多种症状发作。可例如通过评估疾病进展时间(TTP)和/或测定反应率(RR)来测量功效。
术语“检测”包括任何检测方式，包括直接和间接检测。
生物标志物的状态的“变化”或“调节”，包括LRRK2突变或BMP的量(当其在体外或体内发生时)通过使用在确定药效学中通常采用的一种或多种方法分析生物样本来检测，所述方法包括：(1)对生物样本的基因组DNA或逆转录PCR产物进行测序，由此检测一个或多个突变；(2)通过定量信息水平或评估拷贝数来评价基因表达水平；以及(3)通过免疫组织化学、免疫细胞化学、ELISA、或质谱分析来分析蛋白质，由此检测蛋白质的降解、稳定化或翻译后修饰，如磷酸化或泛素化。
术语“受试者”包括但不限于人类、小鼠、大鼠、天竺鼠、猴、狗、猫、马、牛、猪和绵羊。在一些实施方案中，受试者为人类。
术语“任选的”或“任选地”意指随后描述的事件或情形可发生或者可不发生，并且所述描述包括所述事件或情形发生的情况和所述事件或情形不发生的情况。
术语“包装说明书”用以指治疗产品的商业包装中通常包括的说明书，其含有关于适应症、用法、剂量、施用、禁忌和/或关于使用此类治疗产品的警告的信息。
本文中所给出的任何化合物或结构也旨在表示所述化合物的未经标记形式以及经同位素标记形式。除一个或多个原子由具有所选择的原子质量或质量数的原子代替以外，经同位素标记的化合物具有本文中所描绘的结构。可并入至所公开化合物中的实例包括氢、碳、氮、氧、磷、氟、氯和碘的同位素，分别例如2H、3H、11C、13C、14C、13N、15N、15O、17O、18O、31P、32P、35S、18F、36Cl、123I和125I。本公开的各种经同位素标记的化合物，例如并入如3H、13C和14C的放射性同位素的那些化合物。此类经同位素标记的化合物可适用于代谢研究、反应动力学研究、检测或成像技术(例如正电子发射断层摄影法(PET)或单光子发射计算机断层摄影法(SPECT)，包括药物或底物组织分布测定)或用于患者的放射性治疗。
本公开还包括本文中所描述的化合物的“氘化类似物”，其中连接至碳原子的1至n个氢被氘代替，其中n为分子中氢的数目。此类化合物表现出增加的代谢抗性，并且因此当向哺乳动物(特别是人类)施用时，适用于增加任何化合物的半衰期。参见例如Foster,“Deuterium Isotope Effects in Studies of Drug Metabolism”,TrendsPharmacol.Sci.5(12):524-527(1984)。此类化合物通过本领域中众所周知的手段来合成，例如通过采用其中一个或多个氢已被氘代替的起始物质。
本公开的经氘标记或取代的治疗性化合物可具有改进的DMPK(药物代谢和药物动力学)特性，所述特性与分布、代谢和排泄(ADME)相关。用较重同位素(例如氘)取代可得到由更大代谢稳定性产生的某些治疗性优点，例如增加的体内半衰期、降低的剂量需求和/或治疗指数改进。经18F、3H、11C标记的化合物可适用于PET或SPECT或其他成像研究。本公开的经同位素标记的化合物通常可通过进行方案中或下文所描述的实施例和制备中所公开的程序，通过用可容易获得的经同位素标记的试剂取代未经同位素标记的试剂来制备。应理解，在此上下文中，氘视为本文所描述的化合物的取代基。
可通过同位素增浓因子来定义此类较重同位素(具体为氘)的浓度。在本公开的化合物中，未具体指定为特定同位素的任何原子意在表示所述原子的任何稳定同位素。除非另外陈述，否则当位置被具体指定为“H”或“氢”时，应理解所述位置在其天然丰度同位素组成中具有氢。因此，在本公开的化合物中，具体指定为氘(D)的任何原子意在表示氘。
在许多情况下，本公开的化合物能够借助于氨基和/或羧基或与其类似的基团的存在而形成酸盐和/或碱盐。
还提供了本文中所描述的化合物的药学上可接受的盐。“药学上可接受”或“生理学上可接受”是指化合物、盐、组合物、剂型和其他物质适用于制备适用于兽医学或人类医药用途的药物组合物。
如本文中所用，短语“药学上可接受的盐”是指本发明的化合物的药学上可接受的有机或无机盐。示例性盐包括但不限于硫酸盐、柠檬酸盐、乙酸盐、草酸盐、氯化物、溴化物、碘化物、硝酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、酸性磷酸盐、异烟碱酸盐、乳酸盐、水杨酸盐、酸性柠檬酸盐、酒石酸盐、油酸盐、丹宁酸盐、泛酸盐、酒石酸氢盐、抗坏血酸盐、丁二酸盐、顺丁烯二酸盐、龙胆酸盐、反丁烯二酸盐、葡糖酸盐、葡糖醛酸盐、葡糖二酸盐、甲酸盐、苯甲酸盐、谷氨酸盐、甲磺酸盐(methanesulfonate/mesylate)、乙磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐和双羟萘酸盐(即1,1'-亚甲基-双(2-羟基-3-萘甲酸盐))。其他盐包括酸盐，如上文所描述的共晶形成物。药学上可接受的盐可涉及包括另一分子，如乙酸根离子、丁二酸根离子或其他抗衡离子。所述抗衡离子可为使母化合物上的电荷稳定的任何有机或无机部分。此外，药学上可接受的盐在其结构中可具有超过一个带电原子。多个带电原子为药学上可接受的盐的一部分的情况可具有多个抗衡离子。因此，药学上可接受的盐可具有一个或多个带电原子和/或一个或多个抗衡离子。
可通过本领域中可用的任何适合方法来制备所需药学上可接受的盐。例如，用无机酸或用有机酸处理游离碱，所述无机酸例如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等，所述有机酸例如乙酸、顺丁烯二酸、丁二酸、杏仁酸、甲磺酸、反丁烯二酸、丙二酸、丙酮酸、草酸、乙醇酸、水杨酸、吡喃糖酸(例如葡糖醛酸或半乳糖醛酸)、α羟基酸(例如柠檬酸或酒石酸)、氨基酸(例如天冬氨酸或谷氨酸)、芳族酸(例如苯甲酸或肉桂酸)、磺酸(例如对甲苯磺酸或乙磺酸)等。通常视为适用于由基础药物化合物形成药学上适用或可接受的盐的酸论述于例如Stahl PH,Wermuth CG编辑，Handbook of Pharmaceutical Salts；Properties,Selectionand Use，第2修订版(International Union of Pure and Applied Chemistry).2012,NewYork:Wiley-VCH；S.Berge等人,Journal of Pharmaceutical Sciences(1977)66(1)1 19；P.Gould,International J.of Pharmaceutics(1986)33 201 217；Anderson等人,ThePractice of Medicinal Chemistry(1996),Academic Press,New York；Remington'sPharmaceutical Sciences,第18版,(1995)Mack PublishingCo.,Easton PA和The OrangeBook(网站上的Food&Drug Administration,Washington,D.C.)中。这些公开内容通过引用并入本文。
短语“药学上可接受”指示物质或组成必须与构成制剂的其他成分和/或正用其治疗的哺乳动物在化学上和/或毒理学上相容。
如本文中所使用，“药学上可接受的载体”或“药学上可接受的赋形剂”或“赋形剂”包括任何和所有溶剂、分散介质、包衣、抗细菌和抗真菌剂、等渗和吸收延迟剂等。此类介质和药剂在药学活性物质中的用途在本领域中众所周知。除非任何常规介质或试剂与活性成分不相容，否则考虑将其用于治疗性组合物中。补充活性成分也可并入组合物中。
LRRK2活性的目标和通路生物标志物
溶酶体功能障碍是具有和不具有帕金森病(PD)的已知基因驱动子的患者中PD的中央病理生理学。增加的LRRK2激酶活性削弱了溶酶体功能并且驱动家族性PD。LRRK2抑制可恢复(PD)模型中的正常溶酶体功能并降低毒性。LRRK2的抑制可为许多形式的PD(包括特发性PD)的治疗学有益途径。LRRK2致病突变增加激酶活性。
可通过测量(例如，样本、细胞、组织和/或受试者中)磷酸化LRRK2(pS935)、磷酸化ras相关蛋白质Rab 10(pRab10)或双(单酰基甘油)磷酸酯(BMP)的丰度来测定LRRK2依赖性溶酶体功能的水平。
BMP
BMP是具有下式的(例如，在通常存在于溶酶体内的pH下)带负电荷的甘油磷脂：
BMP分子包含两个脂肪酸侧链。上式中的R和R'表示独立选择的饱和或不饱和脂族链，其中的每一者通常含有14、16、18、20或22个碳原子。当脂肪酸侧链为不饱和时，其可含有1、2、3、4、5、6个或更多个碳碳双键。此外，BMP分子可含有一个或两个烷基醚取代基，其中一个或两个脂肪酸侧链的羰基氧被两个氢原子代替。
本文中用以描述特定BMP物质的命名是指具有两个脂肪酸侧链的物质，其中脂肪酸侧链的结构指示于BMP格式中的括号内(例如，BMP(18:1_18:1))。标号遵循“脂肪酸碳原子数:双键数”的标准脂肪酸符号格式。“e-”前缀用于指示烷基醚取代基的存在，其中脂肪酸侧链的羰基氧被两个氢原子代替。例如，“BMP(16:0e_18:0)”中的“e”表示具有16个碳原子的侧链为烷基醚取代基。
BMP是异常的，原因在于其具有在其他甘油磷脂中未观测到的sn-1；sn-1'结构性构型(即，基于磷酸酯连接的甘油碳)。BMP的合成涉及多个酰化和二酰化步骤并且涉及转酰酶活性，其使甘油主链再定向并且产生异常结构性构型。据认为sn-1；sn-1'构型有助于BMP抵抗被许多磷脂酶裂解及其在晚期胞内体和溶酶体中的稳定性。虽然在许多不同细胞类型中发现低量的BMP，但BMP含量在巨噬细胞以及肝脏和其他组织类型中的溶酶体中显著较高。
与其作为消化细胞器的功能一致，在酸性pH(即，约4.6至约5的pH)下，溶酶体含有大量水解酶。通过细胞表面上的受体捕获各种细胞成分和外来抗原以吸收并递送至溶酶体。在细胞内，例如甘露糖-6-磷酸受体的受体结合来自生物合成通路的水解酶并且将其转移至溶酶体。所捕获的分子穿过称为胞内体的中间异质细胞器组，所述胞内体充当分选站，其中受体在水解酶之前再循环并且将其他材料导引至溶酶体。在此情况下，水解酶被活化并且消化非所要材料。特别是，成熟或“晚期”胞内体和溶酶体的内部膜含有大量BMP。
在溶酶体pH下带负电荷，BMP可与酸性pH下带正电荷并且需要水-脂质界面以供活化的内腔酸水解酶对接。通过以此方式结合，BMP可刺激多种溶酶体脂质降解酶，包括酸性神经磷脂酶、酸性神经酰胺酶、酸性磷脂酶A2和能够水解三酰甘油和胆固醇酯的酸性脂肪酶。
核内体膜为溶酶体膜的延续部分，并且其用以将材料分类并再循环回至质膜和内质网。因此，在肝脏中内化的低密度脂蛋白(LDL)到达晚期胞内体，其中成分胆固醇酯通过酸性胆固醇酯水解酶而水解。晚期胞内体内含有的富含BMP的膜的特征网络为胆固醇内稳定的重要要素，因为其通过充当游离胆固醇的收集和再分配点来调节胆固醇转运。例如，当溶酶体膜与抗BMP抗体一起温育时，会积聚大量胆固醇。
在本公开的方法的一些实施方案中，测量单一BMP物质的丰度。在一些实施方案中，测量两种或更多种BMP物质的丰度。在一些实施方案中，测量至少两种、三种、四种、五种或更多种BMP物质的丰度。当测量两种或更多种BMP物质的丰度时，可使用不同BMP物质的任何组合。
在一些情况下，当与另一种例如基于细胞的样本(例如，经培养细胞)与基于组织的样本或血液样本相比时，一种类型的样本中可差异性表达(例如，大体上充足的)一种或多种BMP物质。因此，在一些实施方案中，一种或多种BMP物质的选择(即，丰度的测量)取决于样本类型。在一些实施方案中，例如当样本(例如，测试样本和/或参考样本)为骨髓衍生的巨噬细胞(BMDM)时，一种或多种BMP物质包含BMP(18:1_18:1)。在其他实施方案中，例如当样本包含组织(例如，脑组织、肝脏组织)或血浆、尿液或CSF时，一种或多种BMP物质包含BMP(22:6_22:6)。
在一些实施方案中，内部BMP标准(例如，BMP(14:0_14:0))用于测量样本中一种或多种BMP物质的丰度和/或测定参考值(例如，测量参考样本中一种或多种BMP物质的丰度)。例如，可将已知量的内部BMP标准添加至样本(例如，测试样本和/或参考样本)中以充当校准点，使得可测定存在于样本中的一种或多种BMP物质的量。在一些实施方案中，用于从样本萃取或分离BMP的试剂(例如，甲醇)经“掺入”有内部BMP标准。通常，内部BMP标准将为并非天然存在于受试者中的BMP标准。
通常，将测试样本中一种或多种BMP物质中的每一者的丰度与一个或多个参考值(例如，对应参考值)进行比较。在一些实施方案中，在治疗前并且在治疗后的一个或多个时间点测量BMP值。在稍后时间点获得的丰度值可与在治疗前的值以及对照值(例如健康或患病对照的值)进行比较，以确定受试者如何对疗法有反应。一个或多个参考值可来自测试样本的对应于细胞、组织或流体的不同细胞、组织或流体。
在一些实施方案中，参考值为参考样本中测量的一种或多种BMP物质的丰度。参考值可为所测量的丰度值(例如，参考样本中测量的丰度值)或可由所测量的丰度值推导或外推。在一些实施方案中，例如当参考值获自多个样本或受试者群时，参考值为一系列值。此外，参考值可呈现为单一值(例如，所测量的丰度值、均值或中位值)或一系列值，具有或不具有标准偏差或误差标准。
在一些实施方案中，第一测试样本和第二测试样本都获自受试者(例如，目标受试者)已经治疗之后的受试者，即与第二测试样本相比，第一测试样本是在治疗期间的较早时间点获自受试者。在一些实施方案中，在用LRRK2抑制剂治疗受试者的帕金森病之前获得第一测试样本并且在用LRRK2抑制剂治疗受试者的病症之后获得第二测试样本(即，治疗后测试样本)。在一些实施方案中，从受试者获得超过一个(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多个)治疗前和/或治疗后测试样本。此外，获得的治疗前和治疗后测试样本的数目不必相同。
二-二十二碳六烯酰基(22:6)双(单酰基甘油)磷酸酯(di-22:6-BMP)是溶酶体功能和功能障碍的LRRK2依赖性指示物(Fuji等人,2015；Liu,N.等人,(2014)Toxicol.Appl.Pharmacol.279:467-476；US 8313949)，其具有以下结构：
并且命名为：(4E,7E,10E,13E,16E,19E)-二十二碳-4,7,10,13,16,19-六烯酸1-(((1-(((4E,7E,10E,13E,16E,19E)-二十二碳-4,7,10,13,16,19-六烯酰基)氧基)-2-羟基乙氧基)(l1-氧烷基)磷酰基)氧基)-3-羟基丙-2-基酯。所述类别的甘油磷酸酯脂质容易发生快速酰基迁移，导致磷酸酯交换和立构中心的外消旋化。
pRab10
在帕金森病(PD)的家族性和非家族性(偶发性)形式中都发现了编码富含亮氨酸的重复激酶2(LRRK2)的基因的突变。若干不同突变已被鉴定为病原性突变，包括突变11122V、Nl437H、Rl441C/G/H、RI 728H、Rl628P、Yl699C、G2019S、12020T、T2031S和G2385R，并且LRRK2中的其他突变与PD易感性相关。已发现LRRK2中的至少一些已知病原性突变会影响其激酶活性，并且因此，已提出LRRK2抑制剂作为PD的治疗。
若干蛋白质已被鉴定为LRRK2的可能生理底物，包括Rab10，其为Rab GTP酶家族的成员。在过表达LRRK2和Rab10的人类细胞中检测到Rab蛋白质的磷酸化。此外，相对于野生型LRRK2，在不同的PD相关LRRK2突变体中检测到Rab10的磷酸化增加。在存在LRRK2变体的情况下增强的Rab10磷酸化表明体内病原性变体中存在增加的LRRK2激酶活性。因此，在一些实施方案中，Rab10的磷酸化表示适用于鉴定LRRK2中具有病原性突变的患者的临床标志物：例如11122V、Nl437H、Rl441C/G/H、RI 728H、Rl628P、Yl699C、G2019S、I2020T、T2031S或G2385R突变，和在另一个实施方案中，Rl441C、Rl441G、Yl699C、G2019S或I2020T突变。
已产生特异性结合至磷酸化Rab10蛋白质的单克隆抗体，所述磷酸化Rab10蛋白质内源性表达于人类生物样本，例如人类外周血单核细胞中。参见2018年6月15日提交并且在2018年12月20日作为WO 2018/232278公布的PCT/US2018/037809，其出于所有目的通过引用整体并入本文。相比之下，回应于用LRRK2抑制剂治疗，已知抗磷酸化Rab10或磷酸化Rab8a的多克隆抗体并未表现出可检测磷酸化Rab10的显著减少。还已发现回应于用LRRK2抑制剂治疗，磷酸化Rab10和磷酸化Rab8a蛋白质的水平以剂量依赖型方式降低，如使用抗磷酸化Rab10单克隆抗体所测量。
pS935
上文提及的G2019S突变处于LRRK2的活化环中并且是PD的最常见遗传学病因。G2019S引起LRRK2激酶活性增加，从而产生毒性。LRRK2活性的标志物是丝氨酸935(pS935)的磷酸化。pS935响应于所有已知的LRRK2激酶抑制剂而减少并且因此是其适用的生物标志物。
BMP检测技术：在一些实施方案中，使用质谱分析(MS)来根据本公开的方法检测和/或测量一个或多个BMP物质的丰度。质谱分析是已确立的技术，其中化合物经离子化，并且通过其质荷比(简写为m/Q、m/q、m/Z或m/z)分选所得离子。可以气体、液体或固体形式存在的样本(例如，包含BMP分子)经离子化，并且所得离子接着加速通过电场和/或磁场，使其通过其质荷比分离。所述离子最终撞击离子检测器并且产生质谱图。所检测离子的质荷比以及其相对丰度可用于有时通过使(例如，整个或完整分子的)已知质量与所检测离子的质量相关联和/或通过识别在质谱图中检测到的模式来鉴定出一种或多种母化合物。
在一些实施方案中，高效液相色谱(HPLC)与质谱分析组合使用。HPLC通过在压力下迫使流动相中的分析物通过固定相(通常为密集填充柱)来提供高度分离。在已确立的LC/MS技术中，HPLC充当分离前端并且质谱分析充当表征后端。
pRab10和pS935检测
如上文针对BMP所论述，也可使用MS检测pRab10和pS935。然而，在本发明的一个实施方案中，如以下实施例中所描述，使用对所述分子具有特异性的抗体检测pRab10和pS935。所述抗体可用于免疫测定中的检测。一种此类商业测定由Rockville,Maryland的Meso Scale Diagnostics,LLC.(MSD)出售。
用于治疗帕金森病的方法
用于治疗至少部分由LRRK2介导的疾病或疾患的方法通常描述于美国专利第10,590,114号中，并且此类方法中使用的化合物描述于美国专利第9,932,325号中，所述专利都出于所有目的通过引用整体并入本文。
提供了一种用于治疗帕金森病的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用约70至800毫克/天之间的LRRK2抑制剂，即
或其药学上可接受的盐或氘化类似物。
日剂量可描述为每剂量或每天施用的化合物I或其药学上可接受的盐或氘化类似物的总量。化合物I或其药学上可接受的盐或氘化类似物的日剂量可在约70至800mg之间、在约70至225毫克/天之间或在约70与80毫克/天之间。
在特定实施方案中，剂量可为70、75、80、105、130、150、225、250、300或400mg。在一些实施方案中，化合物或其药学上可接受的盐或氘化类似物可每天一次(QD)施用。在其他实施方案中，施用为每天两次(BID)。
在一些实施方案中，提供了一种药物组合物，其包含约75mg的呈片剂形式的化合物I。
在一些实施方案中，向有需要的受试者施用两个各自包含约75mg的化合物I的片剂。在一些实施方案中，每天一次向有需要的受试者施用两个各自包含约75mg的化合物I的片剂，总剂量为约150毫克/天。
在一些实施方案中，向有需要的受试者施用三个各自包含约75mg的化合物I的片剂。在一些实施方案中，每天一次向有需要的受试者施用三个各自包含约75mg的化合物I的片剂，总剂量为约225毫克/天。
在其他实施方案中，本公开的化合物可与具有用于治疗帕金森病的活性的额外药剂组合施用。例如，在一些实施方案中，化合物可与适用于治疗帕金森病的一种或多种额外治疗剂组合施用。在一些实施方案中，所述额外治疗剂为左旋多巴(例如，)、多巴胺能激动剂(例如，罗宾奈索(Ropinerol)或普拉克索(Pramipexole))、儿茶酚-O-甲基转移酶(COMT)抑制剂(例如恩他卡朋(Entacapone))、L-单胺氧化酶(MAO)抑制剂(例如，司来吉兰(selegiline)或雷沙吉兰(rasagiline))或增加多巴胺释放的药剂(例如，唑尼沙胺(Zonisamide))。
用LRRK2抑制剂治疗帕金森病的方法
在一个实施方案中，提供了一种用于治疗帕金森病的方法，所述方法包括一天一次向有需要的受试者施用约75至225mg之间的化合物I：
在另一个实施方案中，提供了一种用于治疗帕金森病的方法，所述方法包括一天一次向有需要的受试者施用一种药物组合物，其包含约75至225mg之间的化合物I：
或其药学上可接受的盐或氘化类似物，和药学上可接受的载体。
用于减少患有帕金森病的受试者的全血中的磷酸化S935LRRK2(PS935)的方法
在一个实施方案中，提供了一种用于减少患有帕金森病的受试者的全血中的磷酸化S935 LRRK2(pS935)的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用约70至800毫克/天之间的化合物I：
或其药学上可接受的盐或氘化类似物。
在另一个实施方案中，提供了一种用于减少患有帕金森病的受试者的全血中的磷酸化S935 LRRK2(pS935)的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用一种药物组合物，其包含约70至800毫克/天之间的化合物I：
或其药学上可接受的盐或氘化类似物，和药学上可接受的载体。
用于减少患有帕金森病的受试者的外周血单核细胞(PBMC)中的磷酸化RAS相关蛋白质RAB10(PRAB10)的方法
在一个实施方案中，提供了一种用于减少患有帕金森病的受试者的外周血单核细胞(PBMC)中的磷酸化ras相关蛋白质Rab10(pRab10)的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用约70至800毫克/天之间的化合物I：
或其药学上可接受的盐或氘化类似物。
在另一个实施方案中，提供了一种用于减少患有帕金森病的受试者的外周血单核细胞(PBMC)中的磷酸化ras相关蛋白质Rab10(pRab10)的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用一种药物组合物，其包含约70至800毫克/天之间的化合物I：
或其药学上可接受的盐或氘化类似物，和药学上可接受的载体。
用于减少患有帕金森病的受试者的尿液中的溶酶体脂质22:6-双[单酰基甘油]磷酸酯(BMP)的方法
在一个实施方案中，提供了一种用于减少患有帕金森病的受试者的尿液中的溶酶体脂质22:6-双[单酰基甘油]磷酸酯(BMP)的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用约70至800毫克/天之间的化合物I：
或其药学上可接受的盐或氘化类似物。
在另一个实施方案中，提供了一种用于减少患有帕金森病的受试者的尿液中的溶酶体脂质22:6-双[单酰基甘油]磷酸酯(BMP)的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用一种药物组合物，其包含约70至800毫克/天之间的化合物I：
或其药学上可接受的盐或氘化类似物，和药学上可接受的载体。
LRRK2抑制剂用于治疗帕金森病的用途
提供了LRRK2抑制剂用于治疗帕金森病的用途，其中所述抑制剂以约70至800毫克/天向有需要的受试者施用并且为
或其药学上可接受的盐或氘化类似物。
LRRK2抑制剂在制造由于治疗帕金森病的药剂中的用途
提供了LRRK2抑制剂在制造用于治疗帕金森病的药剂中的用途，其中所述抑制剂以约70至800毫克/天向有需要的受试者施用并且为
或其药学上可接受的盐或氘化类似物。
用于监测对LRRK2抑制剂化合物的反应的方法
提供了一种用于监测受试者对本文所提供的治疗方法的反应的方法，所述方法包括：
(a)测量患有帕金森病的受试者的测试样本中的一个或多个pS935、pRab10或BMP物质的量，其中所述测试样本或受试者已用约70至800毫克/天之间的化合物I或其药学上可接受的盐或氘化类似物治疗；
(b)比较在(a)中测量的一个或多个BMP物质与一个或多个参考值之间的量差；以及
(c)根据所述比较确定LRRK2抑制剂化合物或其药物组合物或其给药方案是否提高一个或多个BMP物质水平以用于治疗帕金森病。
在一个实施方案中，所述方法还包括
(d)维持或调节向测试样本或受试者施用的化合物I或其药学上可接受的盐或氘化类似物的量或频率；以及
(e)向测试样本或受试者施用所述化合物或其药学上可接受的盐或氘化类似物。
在一个示例性实施方案中，一个或多个BMP物质包含BMP(22:6_22:6)。
在一个示例性实施方案中，LRRK2抑制剂为化合物I或其药学上可接受的盐或氘化类似物。
在一个示例性实施方案中，一个或多个BMP物质包含BMP(22:6_22:6)。
在上文所描述的方法的示例性实施方案中，在从参考受试者或参考受试者群获得的参考样本中测量参考值。
在上文所描述的方法的示例性实施方案中，参考受试者或参考受试者群为健康对照。
在上文所描述的方法的示例性实施方案中，参考受试者或参考受试者群不具有溶酶体功能障碍病症或降低水平的pS935、pRab10或BMP。
在上文所描述的方法的示例性实施方案中，相比于健康对照或与帕金森病无关的对照，患有帕金森病或处于患有帕金森病风险下的受试者在骨髓衍生的巨噬细胞中具有增加的pS935、pRab10或BMP物质水平。
在上文所描述的方法的示例性实施方案中，相比于健康对照或与帕金森病无关的对照，患有帕金森病或处于患有帕金森病风险下的受试者在肝脏、大脑、脑脊髓液、血浆或尿液中具有降低的pS935、pRab10或BMP物质水平。
在上文所描述的方法的示例性实施方案中，患有帕金森病或处于患有帕金森病风险下的受试者的测试样本中的pS935、pRab10或BMP物质的量与对照(例如健康对照或与帕金森病无关的对照)的参考值具有至少约1.2倍、1.5倍或2倍差异。
在上文所描述的方法的示例性实施方案中，患有帕金森病或处于患有帕金森病风险下的受试者的测试样本中的pS935、pRab10或BMP物质的量与对照(例如健康对照或与溶酶体功能障碍病症无关的对照)的参考值相比为约1.2倍至约4倍差异。
在上文所描述的方法的示例性实施方案中，参考值为治疗之前的pS935、pRab10或BMP物质值。
在上文所描述的方法的示例性实施方案中，相对于对照(例如健康对照或与溶酶体功能障碍病症无关的对照)的参考值，减少的pS935、pRab10或BMP物质水平比治疗之前的pS935、pRab10或BMP物质水平有所提高。
在上文所描述的方法的示例性实施方案中，减少的pS935、pRab10或BMP物质水平具有5％至90％，优选地约50％至70％，大于约50％或大于约70％的与对照相比的差异。
在上文所描述的方法的示例性实施方案中，测试或参考样本或一个或多个参考值包含或涉及细胞、组织、全血、血浆、血清、脑脊髓液、间质液、痰、尿液、淋巴或其组合。
在上文所描述的方法的示例性实施方案中，细胞为外周血单核细胞(PBMC)、骨髓衍生的巨噬细胞(BMDM)、视网膜色素上皮(RPE)细胞、血细胞、红细胞、白细胞、神经细胞、小胶质细胞、脑细胞、大脑皮层细胞、脊髓细胞、骨髓细胞、肝细胞、肾细胞、脾细胞、肺细胞、眼睛细胞、绒毛膜细胞、肌肉细胞、皮肤细胞、纤维母细胞、心脏细胞、淋巴结细胞或其组合。
在上文所描述的方法的示例性实施方案中，细胞为经培养细胞。
在上文所描述的方法的示例性实施方案中，组织包含脑组织、大脑皮层组织、脊髓组织、肝脏组织、肾脏组织、肌肉组织、心脏组织、眼睛组织、视网膜组织、淋巴结、骨髓、皮肤组织、血管组织、肺组织、脾脏组织、瓣膜组织或其组合。
在上文所描述的方法的示例性实施方案中，测试样本包含胞内体、溶酶体、胞外囊泡、胞泌体、微泡或其组合。
在上文所描述的方法的示例性实施方案中，一个或多个pS935、pRab10或BMP物质包含两个或更多个pS935、pRab10或BMP物质。
在上文所描述的方法的示例性实施方案中，测试样本包含血浆、尿液、脑脊髓液(CSF)和/或大脑或肝脏组织，并且一个或多个BMP物质包含BMP(22:6_22:6)。
在上文所描述的方法的示例性实施方案中，测试样本包含CSF或尿液并且一个或多个BMP物质包含BMP(22:6_22:6)。
在上文所描述的方法的示例性实施方案中，使用液相色谱-质谱法(LC-MS)、液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)、气相色谱-质谱法(GC-MS)、气相色谱-串联质谱法(GC-MS/MS)、酶联免疫吸附测定(ELISA)或其组合来测量一个或多个pS935、pRab10或BMP物质的丰度。
在上文所描述的方法的示例性实施方案中，当测量一个或多个pS935、pRab10或BMP物质的量时，使用内部pS935、pRab10或BMP标准。
在上文所描述的方法的示例性实施方案中，内部pS935、pRab10或BMP标准包含并非天然存在于受试者和/或参考受试者或参考受试者群中的pS935、pRab10或BMP物质。
在上文所描述的方法的示例性实施方案中，内部BMP标准包含BMP(14:0_14:0)。
在上文所描述的方法的示例性实施方案中，溶酶体功能障碍病症为与BMP表达、加工、糖基化、细胞吸收、运输和/或功能相关的病症。
在上文所描述的方法的示例性实施方案中，受试者在LRRK2表达基因中具有一个或多个突变。
在上文所描述的方法的示例性实施方案中，病症与组织中降低的BMP水平相关。
在上文所描述的方法的示例性实施方案中，病症与尿液中增加的BMP水平相关。
在上文所描述的方法的示例性实施方案中，病症与尿液中增加的BMP水平相关。
在上文所描述的方法的示例性实施方案中，受试者和/或参考受试者为人类、非人类灵长类动物、啮齿动物、狗或猪。
药物组合物和施用模式
本文提供了含有化合物I或其药学上可接受的盐或氘化类似物以及一种或多种选自载体、佐剂和赋形剂的药学上可接受的媒介物的药物组合物。适合的药学上可接受的媒介物可包括例如惰性固体稀释剂和填充剂、稀释剂(包括无菌水溶液和各种有机溶剂)、渗透增强剂、增溶剂和佐剂。此类组合物以医药领域中众所周知的方式制备。参见例如Remington's Pharmaceutical Sciences,Mace Publishing Co.,Philadelphia,Pa第17版(1985)；和Modern Pharmaceutics,Marcel Dekker,Inc.第3版(G.S.Banker和C.T.Rhodes编)。
口服施用可经由例如胶囊或片剂进行。在制造药物组合物中，活性成分通常通过赋形剂稀释和/或密封于此类载体内，其可呈胶囊、药囊、纸或其他容器形式。当赋形剂用作稀释剂时，其可以呈固体、半固体或液体材料形式，其充当活性成分的媒介物、载体或介质。适合的赋形剂的一些实例包括例如乳糖、右旋糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露糖醇、淀粉、阿拉伯胶(gum acacia)、磷酸钙、海藻酸盐、黄蓍胶、明胶、硅酸钙、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、纤维素、无菌水、糖浆和甲基纤维素。制剂可另外包括：润滑剂，如滑石、硬脂酸镁和矿物油；润湿剂；乳化剂和悬浮剂；防腐剂，如羟基苯甲酸甲酯和羟基苯甲酸丙酯；甜味剂；以及调味剂。
实施例
将结合以下实施例更好地理解本发明的组合物和工艺，所述实施例仅旨在作为说明并且不限制本发明的范围。本领域技术人员将清楚所公开实施方案的各种改变和修改，并且可在不偏离本发明精神和所附权利要求书的范围的情况下做出此类改变和修改，包括但不限于与本发明的工艺、制剂和/或方法相关的那些改变和修改。
疾病概述
PD是第二最常见的神经退行性疾病，影响大约1％至2％的65岁或超过65岁的个体(de Rijk MD等人,J Neurol Neurosurg Psychiatry.1997；62(1):10-5；Blin P等人,EurJ Neurol.2015；22(3):464-71)，并且预测发病率大体上随全球人口年龄而增加(DorseyER等人,Neurology.2007；68(5):384-6)。欧洲和北美洲的PD发病率估计分别介于66至12,500/100,000(von Campenhausen等人,Eur Neuropsychopharmacol.2005；15(4):473-90)之间和572/100,000(Marras等人,NPJ Parkinsons Dis.2018；4:21)。PD的发病率随着年龄增长而增加，年龄在50岁之前很少见(de Lau和Breteler,Lancet Neurol.2006；5(6):525-35；Twelves等人,Mov Disord.2003；18(1):19-31)。可预期35％的患者中在发病5年内、65％的患者在发病10年内并且80％的患者在发病15年内严重失能或死亡(Poewe,JNeurol.2006；253增刊7:VII2-6；Schrag和Bank,Mov Disord.2006；21(11):1839-43；MovDisord.2010；25增刊1:S131-5)。
当前批准用于PD的治疗改善运动症状但并不解决疾病的根本病因。随时间推移，这些症状疗法失去有效性并且其与副作用(例如运动困难和幻觉)的频率和严重程度增加相关。另外，非运动症状，包括抑郁、焦虑、睡眠障碍、认知障碍和痴呆，是PD的失能和共同特征，但当前疗法不能充分解决(Aarsland等人,Arch Neurol.1996；53(6):538-42；Truong等人,J Neurol Sci.2008；266(1-2):216-28；Lyons和Pahwa,Am J Manag Care.2011；17增刊12:S308-14；Khoo等人,Neurology.2013；80(3):276-81；Seppi等人,Mov Disord.2019；34(2):180-98；FDA2016)。因此，PD患者在伴随所述疾病生活数年至数十年内，必然经历日益严重的失能(Hely等人,Mov Disord.2005；20(2):190-9)。因此，存在对预防不能由当前疗法解决的进展性运动和非运动失能的有效疾病缓解疗法的显著需求。
LRRK2突变是已确立的PD病因，占家族性PD的大约4％至5％(Healy等人,LancetNeurol.2008；7(7):583-90；Chai C等人,Curr Genomics 2013；14(8):486-501)。家族性LRRK2突变是以具有不完全外显性的体染色体显性遗传模式传输(Marder等人,Neurology2015；85(1):89-95)。另外，LRRK2基因内的变体是遗传风险因素并且占“偶发性”PD病例的1％至2％(Healy,2008；Chai等人,Curr Genomic s 2013；14(8):486-501；Hernandez等人,J Neurochem 2016；139(增刊1):50-74；Cookson,Biochem Soc Trans.2016；44(6):1603-10)。
用研究性药剂治疗疾病的基本原理
化合物1是用于治疗PD患者的选择性的、口服生物可用的、CNS渗透的、可逆的LRRK2抑制剂。LRRK2激酶(一种以基因方式验证的目标)的抑制改善LRRK2-PD中以及iPD中潜在的溶酶体功能。化合物1可干预PD的重要疾病途径并且防止或阻止限定PD进展的运动和非运动失能的累积。
LRRK2编码含有鸟苷三磷酸酶(GTP酶)域、激酶域和若干潜在蛋白质-蛋白质相互作用域的多域蛋白质。LRRK2中的大多数经鉴定的病原性突变位于其催化域内，包括与LRRK2-PD相关的最常见突变G2019S。这些突变经由激酶域内的直接机制或经由间接机制增加LRRK2激酶活性(West等人,Human Mol Gen.2007；16(2):223-32；Sheng等人,Sci TranslMed.2012；4(164):164ra161)。G2019S点突变使LRRK2活性增加大约2倍，并且保护性LRRK2变体与LRRK2激酶活性的细微降低相关，从而表明LRRK2激酶活性的适当变化促成PD的寿命风险(Khan等人,Brain.2005；128(Pt 12):2786-96；Jaleel等人,Biochem J.2007；405(2):307-17；West等人,Human Mol Gen.2007；16(2):223-32；Sheng等人,Sci TranslMed.2012；4(164):164ra161；Steger等人,eLife.2016；5:e12813；Ross等人,LancetNeurol.2011；10(10):898-908)。
尽管确切的病原机制仍未知，但据认为LRRK2在内溶酶体系统中起胞内运输的作用(Henry等人,2015；Cookson等人,2015)。激活激酶的LRRK2突变的直接作用是增加RabGTP酶的磷酸化、胞内运输的重要调节子(Steger等人,2016)。据认为Rab磷酸化促进非活性Rab累积于溶酶体膜中并且因此干扰囊泡运输。溶酶体功能和细胞功能两者的改变与LRRK2突变相关。细胞数据显示细胞中G2019S突变LRRK2活性的抑制会逆转溶酶体异常(Khan等人,2005；West等人,2007；Sheng等人,2012；Steger等人,2016；Schapansky等人,NeurobiolDis.2018；111:26-35；Hockey等人,J Cell Sci.2015；128(2):232-8；Henry等人,2015；Wallings等人,Hum Mol Genet.2019a；28(16):2696-710；Rivero-Ríos等人,J BiolChem.2019；294(13):4738-58)。
当前证据支持用于校正疾病相关的溶酶体功能障碍的LRRK2抑制与LRRK2突变状态无关。如通过pS1292 LRRK2和Rab10苏氨酸73磷酸化(pT73 Rab10)所测量的LRRK2活性在iPD患者死后收集的大脑黑质中增加，从而表明LRRK2过度活性可驱动非LRRK2携带者群体中PD的发病机制(Di Maio等人,Sci Transl Med.2018；10(451):eaar5429)。溶酶体功能障碍可为胞内蛋白质累积的主要机制，从而导致α-突触核蛋白的累积和路易体的形成(iPD的主要病理学特征)(Dehay等人,Mov Disord.2013；28(6):725-32；Tofaris,MovDisord.2012；27(11):1364-9)。通过体外和体内研究表明LRRK2在α-突触核蛋白累积和随之而来的病变中的作用。表达G2019S-LRRK2的主要神经元培养物产生可通过LRRK2抑制剂治疗减少的α-突触核蛋白内含物。用过表达α-突触核蛋白的病毒体内感染PD的转基因G2019S-LRRK2大鼠模型可诱导多巴胺能神经元神经变性，并且这种变性可通过LRRK2抑制剂治疗减轻(Daher等人,J Biol Chem.2015；290(32):19433-44；Volpicelli-Daley等人,JNeurosci.2016；36(28):7415-27)。这进一步通过显示当过表达病原性α-突触核蛋白的PD鼠类模型中的LRRK2蛋白质水平减少50％时的显著病变预防的数据支持(Zhao等人,MolTher Nucleic Acids.2017；8:508-19)。这些数据强烈地支持以下概念：LRRK2高度活化可对溶酶体功能有影响并且促成iPD中的神经元变性，并且激酶抑制剂具有恢复溶酶体功能并改进iPD的情形中的患者结果的潜力。
另外，LRRK2抑制可校正与PD关联的其他基因变体相关的疾病相关溶酶体功能障碍。LRRK2激酶抑制可校正信号传导缺陷，包括与溶酶体运输分子VPS35和Rab29中的PD关联突变相关的磷酸化Rab10增加(Purlyte等人,EMBO J.2018；37(1):1-18；Mir等人,BiochemJ.2018；475(11):1861-83)。此外，编码葡糖神经酰胺酶β(GBA)的基因中携带同型接合功能损失型突变的患者患上溶酶体贮积病高歇氏病，而GBA中带有异型接合突变的受试者具有增加的PD风险。在来源于高歇氏病患者的纤维母细胞中，存在可通过LRRK2抑制部分校正的几乎完全丧失的溶酶体蛋白质转换活性。因此，抑制LRRK2激酶活性增加可缓解LRRK2介导的发病机制，包括溶酶体功能障碍以及与LRRK2过度活性无关的溶酶体功能障碍，从而支持化合物I在广泛PD患者群中的治疗潜力(Di Maio等人,2018，Ysselstein等人,NatCommun.2019；10(1):55702019，Sanyal等人,Front Neurosci.2020；14:442)。
总之，LRRK2活性经由其在溶酶体功能中的作用与PD(iPD和LRRK2-PD)病变的中心机制相关，并且例如化合物I的LRRK2激酶抑制剂代表一种新颖类别的治疗剂，其具有解决具有和不具有LRRK2突变的患者中PD的基础生物学的潜力。
实施例1：化合物I1期研究中的LRRK2激酶抑制
在健康志愿者的1期研究中，参与者的人口统计数据如下：
·在以下研究部分中，用单个或多个每天一次(QD)或每天两次(BID)剂量治疗184名HV(145名活性剂，39名安慰剂)长达28天：
οA部分(SAD；青年人HV；n＝48)：100％男性并且中值年龄为25(范围，18-50)岁；
οB部分(10天MAD；青年人HV；n＝80)：99％男性并且中值年龄为26.5(范围，18-50)岁；
οC部分(SAD；老年人HV；n＝8)：50％男性并且中值年龄为69(范围，67-74)岁；
οD部分(28天MAD；青年人HV；n＝17)：100％男性并且中值年龄为29(范围，18-39)岁；和
οE部分(14天MAD；青年人HV；n＝31)：100％男性并且中值年龄30(范围18-50)岁。
实施例2：帕金森病和LRRK2风险变体中的激酶活性
当前证据表明，LRRK2激酶活性的降低是治疗PD患者的可行治疗策略，无论是否与家族性LRRK2病原性突变相关。LRRK2中大多数鉴定的病原性突变经由激酶域内的直接机制或经由间接机制增加LRRK2激酶活性(West等人,2007；Sheng等人,2012)。如通过pS1292LRRK2和pT73 Rab10所测量，LRRK2激酶活性在患有iPD的患者死后收集的大脑黑质中增加，从而表明大脑中的LRRK2激酶过度活性可驱动非LRRK2突变携带者群体中PD的发病机制(DiMaio等人,2018)。另外，当前证据表明LRRK2抑制可校正疾病相关的溶酶体功能障碍，例如与LRRK2突变状态无关的经降低的GBA活性(Ysselstein等人,2019)。因此，例如化合物I的LRRK2激酶抑制剂表示一种新颖类别的治疗剂，其具有解决具有和不具有LRRK2突变的患者中PD的基础生物学的潜力。
LRRK2的最常见致病变体(G2019S)使得LRRK2激酶活性增加大约2倍；因此，归一化可预期LRRK2激酶活性降低50％。
LRRK2激酶抑制的药效学标志物pS935 LRRK2
全血中的pS935 LRRK2是用于定量化合物I临床研究中的LRRK2抑制的主要药效学标志物。已证明pS935 LRRK2对LRRK2激酶的药理学抑制敏感(Fell等人,J Pharmacol ExpTher.2015；355(3):397-409；Fuji等人,2015；Henderson等人,J Med Chem.2015；58(1):419-32)，并且可在用LRRK2抑制剂治疗后的人类受试者的全血中测量pS935 LRRK2的减少。此外，在动物研究中，pS935LRRK2的外周暴露反应紧密地对应于CNS的暴露反应(例如，pS935LRRK2外周平均减少50％对应于中央减少大约50％)，从而证实外周LRRK2抑制有可能反映人类受试者的大脑中的抑制。
由于PD的主要病理学研究结果在大脑中，因此直接定量CNS中的LRRK2抑制将优于定量外周LRRK2抑制作为药效学量度。因此，所述领域中的研究者正在开发用于定量CSF(一种将反映大脑中的LRRK2抑制)中的LRRK2磷酸化的测定。随着这些测定发展，其将在临床研究中实施以定量CNS中的LRRK2抑制并且测量人类受试者中的外周与中央LRRK2抑制之间的关系。
基于与LRRK2 G2019S点突变相关的激酶活性增加2倍，在>50％的研究受试者中，在低谷下全血pS935 LRRK2减少≥50％表示最小药效学目标。在迄今为止的临床研究中，已证明导致pS935 LRRK2平均减少85％至90％的暴露在健康受试者和患有PD的受试者中是安全的并且通常具有良好耐受性。具体来说，针对长达28天的暴露，潜在LRRK2中靶肾或肺部功能无明显变化。
通过LRRK2活性调节的溶酶体生物标志物BMP
在尿液中测量的溶酶体脂质BMP 22:6/22:6(在整个文献中称为“BMP”)表示校正LRRK2的下游溶酶体通路的机理性标志物。BMP是仅在晚期胞内体和溶酶体的管腔内囊泡上发现的溶酶体磷脂(Bissi g和Gruenberg,Cold Spring Harb Perspect Biol.2013；5(10):a016816)。患有遗传性或药物诱导的溶酶体功能病症的个体，包括具有G2019S LRRK2突变的那些个体，具有增加水平的尿液BMP(Lecomma ndeur等人,J Lipid Res.2017；58(7):1306-14；Alcalay等人,Mov Di sord.2013；28(14):1966-71)。已在动物模型和人类两者中显示LRRK2抑制会减少尿液BMP(Fuji等人,2015；Alcalay等人,2020；图4A、图6A、图7A、图7B)。
溶酶体功能障碍是PD的常见标志，并且假设旨在改进溶酶体稳态中的PD相关缺陷的治疗方法，包括LRRK2抑制，可有意义地影响疾病进展(Wallings等人,TrendsNeurosci.2019b；42(12):899-912)。尽管未必需要，但尿液BMP减少可指示调节PD患者中有缺陷的溶酶体通路。PD的主要病理学研究结果在CNS中；因此，治疗功效有可能需要调节CNS中的溶酶体通路。虽然有证据表明尿液BMP是溶酶体功能的量度，但这是外周标志物并且因此将研究CNS中LRRK2通路活性和溶酶体功能的额外生物标志物以进一步研究尿液BMP与中央溶酶体功能之间的关联。
实施例3：临床安全性
首先在健康受试者中的1期人类研究和在患有PD的受试者中的1b期研究的安全性数据概述于下文中。
健康受试者中的1期、安全性、耐受性、药物动力学和药效学研究
这是被设计用于测定化合物I在健康受试者中的安全性、耐受性、PK和药效学的1期随机化安慰剂对照的双盲FIH研究。来自多剂量群组(B、D和E部分)的非盲安全性数据概述于下文中。
在B部分中的多剂量之后的健康受试者中的安全性和耐受性
此研究的B部分是由连续多个递增剂量(MAD)群组构成。健康受试者登记在8个群组(群组B1-B8；n＝10/群组)中并且被施用化合物I15、30、45、70、105、150、225或300mg或安慰剂(4:1比率)QD，持续10天。
在B部分中，在健康受试者中，化合物I以高达300mg QD的多个剂量持续10天通常具有良好耐受性。未报告引起研究药物中断的死亡、其他SAE(严重不良事件)、AESI(特殊关注的不良事件)或治疗突发不良事件(TEAE)。总共有56名(86.2％)化合物I治疗的受试者和13名(86.7％)安慰剂治疗的受试者经历≥1个TEAE(图9)。化合物I治疗的受试者中最常见的TEAE是头痛(29名[45％]受试者)；手术相关(32名[49％]受试者)；疲乏(6名[9.2％]受试者)；和恶心(6名[9.2％]受试者)。在化合物I治疗的受试者中，55名(84.6％)经历≥1个轻度TEAE，9名(13.8％)受试者经历≥1个中度TEAE，并且没有受试者经历严重TEAE。
未观测到安全实验室、生命体征、ECG、神经检查、肺部功能测试(PFT)或哥伦比亚自杀严重程度评定量表(Columbia-Suicide Severity Rating Scale；C-SSRS)结果在临床上显著变化。
对pS935和pRab10的治疗效果
用于全血中的pS935和PBMC中的pRab10的程序：
样本制备
用于pS935测定的全血制备：
将冷冻的人类全血样本解冻并且直接溶解于96孔板(100μl全血样本与100μl溶解缓冲液)中。在MSD测定之前将样本短暂离心(在4℃下，2,500x g持续20分钟)。
用于pRab10测定的PBMC制备：
将血液收集至CPT-肝素钠管(BD BDAM362780)中并且接着遵循制造商的方案分离PBMC。通过在最高速度下离心使PBMC沉淀并且接着将其重悬于PBMC溶解缓冲液(具有PhosSTOP磷酸酶抑制剂[Roche 04906837001]、完整蛋白酶抑制剂[Roche 04693159001]和Benzonase[Sigma E8263]的1X细胞溶解缓冲液[CST目录#9803])中。将溶解物在冰上保持20分钟，接着在4℃下以最高速度离心20分钟。将上清液等分并储存于-80℃下以用于稍后的免疫测定分析。
MSD测定
使用EZ-LinkTM NHS-LC-LC-生物素(Thermo Fisher，#21343)对捕捉抗体进行生物素标记，并且使用磺基-TAG NHS-酯(MSD，R31AA-1)缀合检测抗体。在室温下在700rpm振荡(针对384孔，1000rpm)下用25μl(或针对384孔板为15μl)稀释于稀释剂100(MSD，R50AA-2)中的捕捉抗体包被96孔(或384孔)MSD GOLD小点抗生蛋白链菌素培养板(MSD L45SSA-1)持续1小时。在TBST洗涤(3X)后，将25μl样本添加至每个孔中(针对384孔为10μl)并且在4℃下在700rpm搅拌下温育过夜。在TBST洗涤(3X)后，将稀释于含有25％ MSD阻断剂A(MSDR93AA-1)的TBST中的25μl检测抗体(针对384孔为15μl)连同兔(Rockland AntibodiesD610-1000)和小鼠γ球蛋白级分(D609-0100)一起添加至每个孔。在室温下在700rpm下温育1小时后，接着TBST洗涤(3X)，添加150μl MSD读取缓冲液(MSD R92TC，用水1:1稀释)(针对384孔为35μl)，并且利用MSD Sector S 600读板。
表1.MSD测定中使用的抗体。
图4显示在低谷(给药前)下在稳定状态(群组B的第10天、群组D的第28天、群组E的第14天)下，相比于基线，化合物I治疗引起在最高剂量下≥80％的pS935稳固减少和在最低的临床相关剂量下≥50％减少。
图5显示在低谷(给药前)下，化合物I在稳定状态(群组B的第10天、群组D的第28天、群组E的第14天)下以最高剂量使得HV中的外周单核细胞(PBMC)中的Rab10的磷酸化(pRab10)(LRRK2激酶的直接底物)减少≥70％。
在D部分中的多剂量之后的健康受试者中的安全性和耐受性
D部分是由被施用化合物I 225mg(n＝13)或安慰剂(n＝4)QD持续28天的健康受试者的多剂量群组(群组D1)构成。
在D部分中，在健康受试者中，化合物I以225mg QD的剂量持续28天通常具有良好耐受性。未报告死亡、其他SAE或AESI。在第七剂量之后，安慰剂组中的一名受试者经历TEAE，导致研究药物中断(转氨酶增加；研究者认为严重程度适中并且与研究药物无关)。一名受试者在第八剂量之后出于个人原因撤回同意书并且被替换。总共有化合物I 225-mgQD组中的10名(77％)受试者和安慰剂组中的2名(50％)受试者经历≥1个TEAE(图9)。化合物I治疗的受试者中最常见的TEAE是头痛(3名[23％]受试者)和手术相关(3名[23％]受试者)。在化合物I治疗的受试者中，10名(77％)经历≥1个轻度TEAE并且没有受试者经历中度或重度TEAE。
未观测到安全实验室、生命体征、ECG、神经检查、PFT或C-SSRS结果的其他临床上显著变化。
在E部分中的多剂量之后的健康受试者中的安全性
E部分是由连续MAD群组构成。向群组E1中的健康受试者施用化合物I 150mg或安慰剂BID(4:1比率)持续14天(n＝9)并且向群组E2中的受试者施用化合物I 250mg或安慰剂BID(4:1比率)持续14天(n＝11)。向持续群组E3中的受试者施用化合物I 400mg或安慰剂BID(4:1比率)持续14天。群组E1和E2的非盲安全性数据概述于下文中。
基于群组E1和E2的非盲安全性数据，在健康受试者中，化合物I以150和250mg BID持续14天通常具有良好耐受性。未报告SAE或AESI。在E部分中出现两个研究药物相关的中断：一名受试者具有中度恶心、头痛、注意力不集中和腹泻(250mg BID)；第二名受试者具有严重头痛和伴有中度恶心的不适感(400mg)。一名受试者(250mg BID)提前中断研究；所述受试者在第3天由于恶心、头痛、注意力紊乱和腹泻的中度TEAE而撤回同意书，其都在发作当天用对乙酰氨基酚治疗后消退并且研究者认为与研究药物相关。
所有25名(100.0％)化合物I治疗的受试者和6名(100.0％)安慰剂治疗的受试者在研究中经历≥1个TEAE。化合物I治疗的受试者中最常见的TEAE是头痛(21名[84％]受试者对比4名[67％]安慰剂受试者)。据报告大多数TEAE的严重程度为轻度或中度。一名受试者(250mg BID)经历严重TEAE(手术性头痛；研究者认为与研究药物无关)。接受化合物I250mg BID的2名受试者报告有中度TEAE：头痛(n＝1)和头痛、恶心、注意力紊乱和腹泻(n＝1)。两名受试者报告有严重TEAE：手术性头痛(n＝1；250mg BID)；头痛和不适感(n＝1；40mgBID)。
未观测到生命体征、ECG、遥测统计学、安全实验室(包括肝脏和肾功能测试)、PFT、神经检查或C-SSRS结果的临床上显著变化。
实施例4：患有帕金森病的受试者的1b期、安全性、耐受性、药物动力学和药效学研究
参与者的人口统计数据
总共36名PD患者(26名活性剂，10名安慰剂)用高达300mg QD治疗28天(图8)。
这是被设计用于测定化合物I在患有PD的受试者中的安全性、耐受性、PK和药效学的1b期随机化安慰剂对照双盲研究。已完成此研究的实施并且临床研究报告正在进行中。在第1部分中，向受试者施用化合物I 80mg或安慰剂QD(1:1比率)持续28天(n＝8)。在第2部分中，向受试者施用化合物I 80或130mg或安慰剂QD(1:2:1比率)持续28天(n＝17)。在第3部分中，向受试者施用化合物I 300mg或安慰剂QD(4:1比率)持续28天(n＝11)。
基于非盲安全性数据，在患有PD的受试者中，化合物I以80、130或300mg QD持续28天通常具有良好耐受性(概述于图10中)。未报告SAE或AESI。两名(5.6％)受试者由于第一剂量之后的低血压TEAE而中断研究。对于这些受试者中的一者(130mg QD)，事件无症状并且研究者认为是严重的并且与研究药物无关。此受试者服用他苏洛辛(tamsulosin)直至事件之前的一天并且记录自主神经失调病史。对于第二名受试者(300mg QD)，事件为站立时的轻度症状并且研究者认为是轻度的并且与研究药物相关。两名额外受试者经历轻度起立性低血压(80mg QD)和轻度低血压加起立性低血压(300mg QD)的TEAE，其在服用研究药物时消退。
图6显示了在低谷(给药前)下在稳定状态(第28天)下，化合物I治疗在研究的所有剂量水平下使得全血中的pS935稳固减少。在低谷(给药前)下，化合物I在稳定状态下在所有剂量下减少PD患者中PBMC中的pRab10。
总共有23名(88.5％)化合物I治疗的受试者和5名(50％)安慰剂治疗的受试者在研究中经历≥1个TEAE(图10)。化合物I治疗的受试者中最常见的TEAE是头痛(11名[42％]受试者对比2名[20％]安慰剂受试者)。大多数TEAE的严重程度为轻度或中度。两名受试者经历严重TEAE：一名受试者具有低血压(130mg QD；由于预先存在的静态平衡而认为与研究药物无关)并且一名受试者具有头痛(300mg QD；认为与腰椎穿刺手术相关并且与研究药物无关)。5名(19％)化合物I治疗的受试者和1名(10.0％)安慰剂治疗的受试者经历中度TEAE：帕金森氏症(帕金森氏症状减少)(80mg QD；n＝1)、真菌皮肤感染(130mg QD；n＝1)、颈强直(130mg QD；n＝1)、头痛(130和300mg QD；n＝2)、肌痛(300mg QD；n＝1)和便秘(安慰剂QD；n＝1)。
未观测到安全实验室(包括肝脏和肾功能测试)、ECG、神经评估、生命体征、PFT或C-SSRS结果相对于基线的其他临床上显著个别变化或显著倾向。
用于进一步研究的剂量选择是基于在证实为安全并且具有良好耐受性的暴露下，化合物I血浆浓度与经证实的目标参与生物标志物的群体PK/药效学关系。
结论
安全性：在HV和PD患者中，化合物I以广泛范围的剂量持续长达28天通常具有良好耐受性。化合物I治疗的参与者中最常见的TEAE是头痛。在肺或肾功能中不存在临床上有意义的变化。
药物动力学：基于CSF/未结合的血浆比率，化合物I展现出高CSF渗透。在HV和PD患者中，用化合物I治疗在通常具有良好耐受性的剂量下实现稳固目标参与和通路参与。
药效学：在HV和PD患者两者中，通过化合物I治疗实现稳固目标和通路参与。另外，HV和PD患者两者中的化合物I治疗引起尿液中的溶酶体脂质BMP 22:6(一种溶酶体功能的标志物)的剂量依赖性减少。
迄今为止，未观测到剂量依赖性重要安全性问题，其中发现在超过200名受试者中，对于健康志愿者以高达400mg每天两次(BID)的剂量持续14天或对于225mg的剂量持续28天，化合物I是安全的并且通常具有良好耐受性。
实施例5：药物组合物
以干式造粒法制备含有与下表中所示的各组分混合的75mg化合物I的立即释放片剂形式。
表2
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本文中所提及的专利和科学文献建立本领域技术人员可获得的知识。本文中所引用的所有美国专利和公开或未公开的美国专利申请都通过引用并入。本文中所引用的所有公开的外国专利和专利申请特此通过引用并入。本文中所引用的所有其他公开的参考文献、文献、稿图和科学文献特此通过引用并入本文。
尽管出于清楚理解的目的，已借助于说明和实施例相当详细地描述前述本发明，但描述和实施例不应解释为限制本发明的范围。因此，全部适合修改和等同物可被认为落在如所附权利要求书所限定的本发明的范围内。

Claims (52)

1.一种用于治疗帕金森病的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用约70至800毫克/天之间的化合物I：
或其药学上可接受的盐或氘化类似物。
2.如权利要求1所述的方法，其中向所述受试者施用约70至225mg之间的所述化合物。
3.如权利要求1所述的方法，其中向所述受试者施用约70与80mg之间的所述化合物。
4.如权利要求1所述的方法，其中向所述受试者施用约70mg的所述化合物。
5.如权利要求1所述的方法，其中向所述受试者施用约75mg的所述化合物。
6.如权利要求1所述的方法，其中向所述受试者施用约80mg的所述化合物。
7.如权利要求1所述的方法，其中向所述受试者施用约105mg的所述化合物。
8.如权利要求1所述的方法，其中向所述受试者施用约130mg的所述化合物。
9.如权利要求1所述的方法，其中向所述受试者施用约150mg的所述化合物。
10.如权利要求1所述的方法，其中向所述受试者施用约225mg的所述化合物。
11.如权利要求1所述的方法，其中向所述受试者施用约250mg的所述化合物。
12.如权利要求1所述的方法，其中向所述受试者施用约300mg的所述化合物。
13.如权利要求1所述的方法，其中向所述受试者施用约400mg的所述化合物。
14.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述化合物是经口施用。
15.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述化合物是每天施用一次。
16.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述化合物是每天施用两次。
17.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述方法使得所述受试者的全血中的磷酸化S935 LRRK2(pS935)减少。
18.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述方法使得所述受试者的外周血单核细胞(PBMC)中的磷酸化ras相关蛋白质Rab10(pRab10)减少。
19.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述方法使得所述受试者的尿液中的溶酶体脂质22:6-双[单酰基甘油]磷酸酯(BMP)减少。
20.一种用于治疗帕金森病的方法，所述方法包括一天一次向有需要的受试者施用约75至225mg之间的化合物I：
21.如权利要求20所述的方法，其中向所述受试者施用约75mg的所述化合物。
22.如权利要求20或21所述的方法，其中向所述受试者施用约150mg的所述化合物。
23.如权利要求20-22中任一项所述的方法，其中向所述受试者施用约225mg的所述化合物。
24.一种用于减少患有帕金森病的受试者的全血中的磷酸化S935 LRRK2(pS935)的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用约70至800毫克/天之间的化合物I：
或其药学上可接受的盐或氘化类似物。
25.如权利要求24所述的方法，其中所述pS935减少了41％至97％。
26.一种用于减少患有帕金森病的受试者的外周血单核细胞(PBMC)中的磷酸化ras相关蛋白质Rab10(pRab10)的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用约70至800毫克/天之间的化合物I：
或其药学上可接受的盐或氘化类似物。
27.如权利要求26所述的方法，其中所述pRab10减少了44％至97％。
28.一种用于减少患有帕金森病的受试者的尿液中的溶酶体脂质22:6-双[单酰基甘油]磷酸酯(BMP)的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用约70至800毫克/天之间的化合物I：
或其药学上可接受的盐或氘化类似物。
29.如权利要求28所述的方法，其中BMP(22:6/22:6)/或BMP(22:6/22:6)//肌酐减少了22％至86％。
30.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述受试者为人类。
31.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述帕金森病为家族性的。
32.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述帕金森病为偶发性的。
33.一种LRRK2抑制剂用于治疗帕金森病的用途，其中所述抑制剂是以约70至800毫克/天向有需要的受试者施用并且为
或其药学上可接受的盐或氘化类似物。
34.LRRK2抑制剂在制造用于治疗帕金森病的药剂中的用途，其中所述抑制剂是以约70至800毫克/天向有需要的受试者施用并且为
或其药学上可接受的盐或氘化类似物。
35.一种药物组合物，所述药物组合物包含70-800mg的化合物I，
或其药学上可接受的盐或氘化类似物，和药学上可接受的载体。
36.如权利要求35所述的药物组合物，所述药物组合物包含约70-225mg的化合物I。
37.如权利要求35所述的药物组合物，所述药物组合物适用于施用约800毫克/天。
38.如权利要求35所述的药物组合物，所述药物组合物适用于施用约225毫克/天。
39.如权利要求35所述的药物组合物，所述药物组合物包含约70mg的化合物I。
40.如权利要求35所述的药物组合物，所述药物组合物包含约75mg的化合物I。
41.如权利要求35所述的药物组合物，所述药物组合物包含约80mg的化合物I。
42.如权利要求35所述的药物组合物，所述药物组合物包含约105mg的化合物I。
43.如权利要求35所述的药物组合物，所述药物组合物包含约130mg的化合物I。
44.如权利要求35所述的药物组合物，所述药物组合物包含约150mg的化合物I。
45.如权利要求35所述的药物组合物，所述药物组合物包含约225mg的化合物I。
46.如权利要求35所述的药物组合物，所述药物组合物包含约250mg的化合物I。
47.如权利要求35所述的药物组合物，所述药物组合物包含约300mg的化合物I。
48.如权利要求35所述的药物组合物，所述药物组合物包含约400mg的化合物I。
49.如权利要求35所述的药物组合物，所述药物组合物适用于口服施用。
50.如权利要求35所述的药物组合物，所述药物组合物适用于每天施用一次。
51.如权利要求35所述的药物组合物，所述药物组合物适用于每天施用两次。
52.如权利要求35所述的药物组合物，所述药物组合物适用于每天施用三次。
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