WO2021162030A1 - 薬剤性間質性肺炎の代謝物診断バイオマーカー - Google Patents

薬剤性間質性肺炎の代謝物診断バイオマーカー Download PDF

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WO2021162030A1
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lpc
interstitial pneumonia
induced interstitial
cases
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公亮 齊藤
齋藤　嘉朗
雨晨 孫
泰雄 大野
高司 泉
元信 佐藤
剛淑 西矢
正幸 花岡
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国立医薬品食品衛生研究所長が代表する日本国
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    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G—PHYSICS
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    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/92—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving lipids, e.g. cholesterol, lipoproteins, or their receptors

Definitions

  • the present invention relates to a method for assisting in the diagnosis of the onset and pathological condition of drug-induced interstitial pneumonia.
  • Drug-induced interstitial pneumonia is a general term for adverse inflammatory reactions of the lung interstitium caused by drugs.
  • interstitial pneumonia is divided into those with a clear cause such as pneumoconiosis and collagen disease and those with an idiopathic cause of unknown cause, and are further classified into various types. Differentiation of these is clinically important because each has different treatments and prognosis.
  • Non-Patent Document 1 Drug-induced interstitial pneumonia is diagnosed based on its similarity to known interstitial pneumonia such as idiopathic disease (Non-Patent Document 1).
  • DAD diffuse alveolar damage
  • Non-Patent Document 2 Drug-induced interstitial pneumonia is diagnosed based on its similarity to known interstitial pneumonia such as idiopathic disease
  • Non-Patent Document 2 Drug-induced interstitial pneumonia is diagnosed based on its similarity to known interstitial pneumonia such as idiopathic disease.
  • DAD diffuse alveolar damage
  • Non-Patent Document 2 Non-Patent Document 2
  • Non-Patent Document 2 Non-Patent Documents 1 and 2). Therefore, early detection and diagnosis are of particular importance for DAD.
  • Non-Patent Document 3 Non-Patent Document 3
  • Diagnosis of drug-induced interstitial pneumonia requires denying factors other than those caused by drugs, and it often takes time to confirm.
  • the use of biomarkers is useful because it imposes a burden.
  • KL-6 sialylated sugar chain antigen KL-6
  • SP-A pulmonary surfactant protein A
  • SP-D pulmonary surfactant protein D
  • KL-6, SP-D, and SP-A have a problem that they show high values for a long period of time even after the condition is improved (Non-Patent Documents 4 and 5), so that new biomarkers are required. .. So far, proteins such as UBE2T, HK1, PMSE1, USO1, IFI16, and GLTP (Patent Document 1) and autoantibodies (Patent Document 2) have been proposed and applied for patents as marker candidates.
  • An object of the present invention is to develop a biomarker for diagnosing and predicting drug-induced interstitial pneumonia, a disease state, and its type.
  • a metabolomics method that comprehensively analyzes more than 1,000 types of metabolite molecules such as amino acids, amino acid derivatives, and lipids using high performance liquid chromatography and mass spectrometer, targeting blood samples of patients with drug-induced interstitial pneumonia. Analysis was performed. Focusing on DAD and OP, from the ionic strength of each metabolite molecule, the metabolite molecule that fluctuates greatly in the acute phase of drug-induced interstitial pneumonia with respect to the convalescent phase group, statistically significant difference and effect size (Hedge's) The search was performed using g value) as an index.
  • plasma is a group of lipid molecules that are particularly reduced in the acute phase of DAD-type drug-induced interstitial pneumonia.
  • the lysophosphatidylcholine (LPC) molecule group is a metabolite molecule group that is particularly increased in the acute phase of DAD-type drug-induced interstitial pneumonia from serum. I found tryptophan.
  • the LPC molecule group has high accuracy (area under the curve: AUC) for the acute phase of DAD-type drug-induced interstitial pneumonia and the recovery phase of all patients with drug-induced interstitial pneumonia.
  • AUC area under the curve
  • non-symptomatic cases taking similar drugs were differentiated with high accuracy (area under the curve: AUC 0.929-0.971).
  • the acute phase of DAD-type drug-induced interstitial pneumonia and other lung diseases were also differentiated with high accuracy (area under the curve: AUC 0.892-0.978).
  • lung cancer cases lung non-tuberculous mycobacteriosis cases, idiopathic interstitial lung inflammation cases, collagen disease lung cases, COPD cases (chronic obstruction) Cases of sexual lung disease) and cases of bronchial asthma
  • kynurenine molecule group differentiated the acute phase of DAD-type drug-induced interstitial pneumonia from the recovery phase of all patients with drug-induced interstitial pneumonia with high accuracy (area under the curve: AUC 0.915-0.947).
  • the present invention has been completed based on these findings, and the gist thereof is as follows.
  • (1) To measure the level in a sample derived from a subject for at least one molecule selected from the molecular group included in the kynurenine pathway and / or at least one molecule selected from the lysophosphatidylcholine (LPC) molecular group.
  • Methods for testing for drug-induced interstitial pneumonia including.
  • (2) The method according to (1), wherein the measured value assists the pathological diagnosis of drug-induced interstitial pneumonia.
  • (3) The method according to (1), wherein the measured value assists in a specific diagnosis of drug-induced interstitial pneumonia.
  • the molecular group contained in the kynurenine pathway includes kynurenine, quinolinic acid, 3-hydroxyquinurenin, 3-hydroxyanthranyl acid, 2-amino-3-carboxymuconic acid semialdehyde, picolinic acid and tryptophan (1) to The method according to any one of (4).
  • the LPC molecule group is LPC (14: 0), LPC (15: 0), LPC (16: 0), LPC (16: 1), LPC (17: 0), LPC (18: 0), LPC (18: 1), LPC (18: 2), LPC (19: 0), LPC (20: 0), LPC (20: 3), LPC (20: 4), LPC (20: 5) and LPC
  • the method comprising determining the presence or absence of the onset of drug-induced interstitial pneumonia based on a measurement of b1 and / or a ratio calculated from a measurement of b1 of two molecules.
  • the method comprising determining the pathology of drug-induced interstitial pneumonia based on a measurement of b1 and / or a ratio calculated from a measurement of b1 of two molecules.
  • c1. Determine the presence or absence of drug-induced interstitial pneumonia based on the measured values of b1 and / or the ratio calculated from the measured values of b1 of the two molecules, and d1.
  • the method described above comprising treating a subject determined to have a high probability of developing drug-induced interstitial pneumonia with treatment for drug-induced interstitial pneumonia.
  • c1. Determine the pathology of drug-induced interstitial pneumonia based on the b1 measurements and / or the ratio calculated from the b1 measurements of the two molecules, and d1.
  • the method described above comprising treating a subject determined to be likely to be in the acute phase of drug-induced interstitial pneumonia with treatment for drug-induced interstitial pneumonia.
  • Plasma levels of LPC molecules in drug-induced interstitial pneumonia (acute and convalescent), non-onset of interstitial pneumonia, and other lung disease cases.
  • A Drug-induced interstitial pneumonia All acute cases, A-DAD, DAD-type drug-induced interstitial pneumonia Cases Acute phase, B, Drug-induced interstitial pneumonia recovery phase All cases, C, Drug-induced interstitial pneumonia non-onset cases, D, Lung cancer cases, E, Fungal lung inflammation cases, F, Bacterial infection cases , G, Pulmonary non-tuberculous mycobacteriosis cases, H, Idiopathic interstitial lung disease cases, I, Collagen disease lung cases, J, COPD cases, K, Bronchial asthma cases.
  • A Drug-induced interstitial pneumonia All acute cases, A-DAD, DAD-type drug-induced interstitial pneumonia Cases Acute phase, B, All cases of drug-induced interstitial pneumonia recovery phase, C, Patients taking drug-induced interstitial pneumonia, D, Lung cancer cases, F, Bacterial infection cases, G, Pulmonary non-tuberculous Cases of acidobacteria, H, idiopathic interstitial lung inflammation, I, collagen disease lung cases, J, COPD cases, K, bronchial asthma cases. Urinary concentration of quinolinic acid in drug-induced interstitial pneumonia (acute and convalescent). **, p ⁇ 0.01 for A-DAD, ⁇ , p ⁇ 0.01 for A. One-way ANOVA and post-hoc. Cases of interstitial lung inflammation All cases of acute phase, B, drug-induced interstitial pneumonia recovery phase.
  • the present invention measures the levels of at least one molecule selected from the lysophosphatidylcholine (LPC) molecule group and / or at least one molecule selected from the group of molecules contained in the kynurenine pathway in a sample derived from a subject.
  • LPC lysophosphatidylcholine
  • the drug-induced interstitial pneumonia may be DAD-type drug-induced interstitial pneumonia.
  • Drug-induced interstitial pneumonia is defined as a respiratory disorder that occurs during administration of a drug, which is related to the drug and has an inflammatory lesion in the interstitial region. Its pathogenic mechanism is largely unknown except for a few drugs, but it is basically believed to be due to direct toxicity or immune response. There is nothing specific to the clinical form of drug-induced interstitial pneumonia, characterized by clinical and imaging findings and histopathological patterns, basically based on similarities with interstitial pneumonia due to other causes. Is classified as.
  • DAD diffuse alveolar damage
  • HP hypersensitivity pneumonia
  • NSIP Nonspecific interstitial pneumonia
  • OP organizing pneumonia
  • the lysophosphatidylcholine (LPC) molecule group is a phospholipid having one fatty acid chain, which is the most abundant in the living body, is widely distributed in the living body, and is derived from phosphatidylcholine (PC), which is a phospholipid having two fatty acid chains. , Produced by being hydrolyzed by phosphatidase A. LPC itself is a component of cell membranes and extracellular vesicles and acts as a ligand for G protein-coupled receptors.
  • active phosphoripase A which is responsible for the production of LPC
  • phospholipases C and D which are responsible for the decomposition of LPC
  • stimuli such as inflammation and immune response, resulting in various types of arteriosclerosis, diabetes, cancer, etc. Its blood concentration fluctuates in various diseases.
  • the LPC molecule group is LPC (14: 0), LPC (15: 0), LPC (16: 0), LPC (16: 1), LPC (17: 0), LPC (18: 0), LPC (18). 1), LPC (18: 2), LPC (19: 0), LPC (20: 0), LPC (20: 3), LPC (20: 4), LPC (20: 5) and LPC (22: 6) should be included.
  • the number in parentheses following the LPC indicates the number of carbon atoms in the acyl group: the number of double bonds.
  • the kynurenine pathway is the main metabolic pathway of tryptophan, and from the substrate tryptophan, mainly kynurenine, 3-hydroxyquinurenin, 3-hydroxyanthranyl acid, 2-amino-3-carboxymuconic acid semialdehyde, quinolinic acid and picolinic acid. Are biosynthesized in order.
  • Enzymes responsible for the kynurenine pathway are distributed in a wide range of tissues, and some are produced by stimulation in the immune system and nervous system. It has also been reported that molecules contained in the produced kynurenine pathway act on the immune system and nervous system and are associated with the activity of these enzymes and the imbalance of intermediate metabolites and products.
  • the molecular group contained in the kynurenine pathway may include tryptophan, kynurenine, 3-hydroxyquinurenin, 3-hydroxyanthranylic acid, 2-amino-3-carboxymuconic acid semialdehyde, quinolinic acid and picolinic acid.
  • the subject is a mammal suspected of developing drug-induced interstitial pneumonia, but all mammals at risk of developing it may be targeted. It is typically human.
  • Samples derived from the subject include cells, tissues, body fluids, etc. obtained from the subject, specifically, the subject's blood (for example, whole blood, serum, plasma, plasma exchange external fluid, etc.), urine, bronchoalveolar lavage fluid, etc. Can be exemplified. Whole blood, serum or plasma obtained by a normal blood test (clinical test) may be used as a blood sample.
  • the sample derived from the subject should be plasma, and when measuring the molecule of the molecule group contained in the kynurenine pathway, the sample derived from the subject should be serum or urine. good.
  • the levels of at least one molecule selected from the lysophosphatidylcholine (LPC) molecule group and / or at least one molecule selected from the group of molecules contained in the kynurenine pathway in a sample derived from the subject taking measurement. Further, the ratio of the measured values of the two molecules may be calculated. For example, for a group of molecules contained in the kynurenine pathway excluding tryptophan, the ratio to the parent compound tryptophan is calculated from the measured level.
  • the measuring means a known method can be used without particular limitation, and liquid chromatography, mass spectrometer, ligand binding method, nuclear magnetic resonance spectrum method, thin layer chromatography method, colorimetric quantification method, etc. Examples of combinations thereof can be used.
  • a biomarker of interest is extracted by mixing an internal standard substance and an extract that do not exist in the living body with a blood or urine sample, and a two-component gradient and a reverse phase column, or a potassium hydroxide gradient. And then the biomarker molecules ionized by the HESI (heated electrosprayionization) method after separation using an anion exchange column are selected Reaction Monitoring by Precursorion and Production for each biomarker ion in positive ion mode or negative ion mode ( Full scan measurement with SRM) or precision mass was performed.
  • HESI heated electrosprayionization
  • the level of the sample derived from the subject may be measured by one type or a plurality of types. More accurate evaluation may be possible by referring to the measurement data of a plurality of molecules.
  • the molecular group contained in the kynurenine pathway can be accurately evaluated by referring to the ratio with the parent compound tryptophan obtained from the measurement data.
  • the level eg, concentration
  • the level is highly likely that drug-induced interstitial pneumonia has developed. When the level is high, it can be determined that the possibility of developing drug-induced interstitial pneumonia is low.
  • Kynurenine and molecules located downstream of its metabolic pathway eg, 3-hydroxyquinurenine, 3-hydroxyanthranyl acid, 2-amino-3-carboxymuconic acid semialdehyde, quinolinic acid, picolinic acid
  • the level (for example, concentration) is measured, and if the level is high, it is determined that there is a high possibility of developing drug-induced interstitial pneumonia, and if the level is low, drug-induced interstitial pneumonia is detected. It can be determined that the possibility of developing the disease is low.
  • the level for example, concentration
  • the level is measured, and if the level is low, it is determined that there is a high possibility of developing drug-induced interstitial pneumonia, and if the level is high. In addition, it can be determined that the possibility of developing drug-induced interstitial pneumonia is low.
  • the ratio of tryptophan to molecules located downstream of kynurenine and its metabolic pathway if the level is high, it is judged that there is a high possibility of developing drug-induced interstitial pneumonia, and the above level When is low, it can be determined that the possibility of developing drug-induced interstitial pneumonia is low.
  • the method of the present invention can assist in the diagnosis of drug-induced interstitial pneumonia (determination of the presence or absence of the onset of drug-induced interstitial pneumonia).
  • the present invention is a method for diagnosing drug-induced interstitial pneumonia. a1. Obtaining a sample from a subject, b1. Measuring the levels in a sample of subject origin for at least one molecule selected from the lysophosphatidylcholine (LPC) molecule group and / or at least one molecule selected from the group of molecules included in the kynurenine pathway. as well as c1.
  • LPC lysophosphatidylcholine
  • c1 Provided above are the methods comprising determining the presence or absence of the onset of drug-induced interstitial pneumonia based on a measurement of b1 and / or a ratio calculated from a measurement of b1 of two molecules.
  • the diagnosis of drug-induced interstitial pneumonia can be made based on the following criteria. At least one level (eg, concentration) of the molecule in a sample taken from a subject was measured and the ratio was determined to obtain a value higher (or lower) than a preset cutoff value or reference value. If so, the subject is assessed as developing drug-induced interstitial pneumonia.
  • Those skilled in the art can appropriately set the cutoff value and the reference value to be set in advance. For example, the 95% confidence interval of the quantitative value of the quantitative value of healthy subjects who do not develop drug-induced interstitial pneumonia or patients who do not develop drug-induced interstitial pneumonia, or set a cutoff value from the ROC curve. Can be done.
  • the cut-off value of metabolites is the concentration at which the Youden's Index [sensitivity- (100-specificity)] is maximized (sensitivity and specificity are highest). The following cutoff values can be set using the value) as an index.
  • the above ⁇ 15% is a variation value that takes into account variations in the analytical system, etc., and there is a variation of ⁇ 15% for each of the upper and lower limits of the numerical range of the above cutoff value, and also for the preferable value. sell.
  • ⁇ 15% is a variation value that takes into account variations in the analytical system, etc., and there is a variation of ⁇ 15% for each of the upper and lower limits of the numerical range of the above cutoff value, and also for the preferable value. sell.
  • the cutoff value and the reference value to the numerical values for the diagnosis of DAD-type drug-induced interstitial pneumonia, the diagnosis of DAD-type drug-induced interstitial pneumonia can be performed in the same manner.
  • the cut-off value of metabolites is the concentration at which the Youden's Index [sensitivity- (100-specificity)] is maximized (the value with the highest sensitivity and specificity). The following cutoff values can be set as indicators.
  • ⁇ 15% is a variation value that takes into account variations in the analytical system, etc., and there is a variation of ⁇ 15% for each of the upper and lower limits of the numerical range of the above cutoff value, and also for the preferable value. sell.
  • all plasma LPC molecules are significant in DAD-type drug-induced interstitial pneumonia acute phase cases (A-DAD) as compared with similar drug-administered drug-induced interstitial pneumonia non-onset cases (C). (Fig. 1, A-DAD vs C).
  • A-DAD drug-induced interstitial pneumonia acute phase cases
  • the kynurenine pathway molecules (quinurenine and quinolinic acid) and tryptophan molecules in the serum are compared with those who do not develop drug-induced interstitial pneumonia (C) in the acute phase of DAD-type drug-induced interstitial pneumonia (A-DAD).
  • C drug-induced interstitial pneumonia
  • A-DAD DAD-type drug-induced interstitial pneumonia
  • Fig. 2 A-DAD vs C
  • a significant increase and decrease were observed, respectively, as compared with the cases of non-onset of drug-induced interstitial pneumonia (C).
  • a vs C A vs C).
  • the method of the present invention can also be used for specific diagnosis of drug-induced interstitial pneumonia.
  • specific diagnosis refers to determining whether or not a subject has drug-induced interstitial pneumonia.
  • the method of the present invention can also be used for a specific diagnosis of DAD-type drug-induced interstitial pneumonia, in which case the "specific diagnosis” is whether or not the subject has a DAD pattern of interstitial pneumonia. Refers to determining whether or not. Since DAD is a particularly serious type of interstitial pneumonia, its availability for specific diagnosis of DAD has great clinical significance.
  • the level eg, concentration
  • the disease is a drug.
  • the cutoff value and the reference value can be set in advance.
  • the 95% confidence interval of the quantitative value of the cases of lung disease other than drug-induced interstitial pneumonia can be used as the reference value, or the cutoff value can be set from the ROC curve.
  • all plasma LPC molecules are DAD-type drug-induced interstitial pneumonia acute phase cases (A-DAD), lung cancer cases (D), pulmonary non-tuberculous mycobacteriosis cases (G), Significant reduction was observed compared with idiopathic interstitial lung disease cases (H), collagen disease lung cases (I), COPD cases (J), and bronchial asthma cases (K) (Fig. 1, A-DAD vs DK). ).
  • A-DAD drug-induced interstitial pneumonia acute phase cases
  • D pulmonary cancer cases
  • G pulmonary non-tuberculous mycobacteriosis cases
  • Significant reduction was observed compared with idiopathic interstitial lung disease cases (H), collagen disease lung cases (I), COPD cases (J), and bronchial asthma cases (K) (Fig. 1, A-DAD vs DK).
  • the entire LPC molecule group was used for lung cancer cases (D)
  • LPC was used for non-tuberculous mycobacteriosis cases (G).
  • quinurenin and molecules located downstream of its metabolic pathway eg, 3-hydroxyquinurenin, 3-hydroxyanthranyl acid, 2-amino-3-carboxymuconic acid semialdehyde, quinolinic acid, picolinic acid
  • level eg, concentration
  • the disease may be drug-induced interstitial pneumonia. If it is determined to be high and the level is lower than the cutoff value or the reference value, it can be determined that the disease is unlikely to be drug-induced interstitial pneumonia.
  • Those skilled in the art can appropriately set the cutoff value and the reference value to be set in advance.
  • the 95% confidence interval of the quantitative value of the cases of lung disease other than drug-induced interstitial pneumonia can be used as the reference value, or the cutoff value can be set from the ROC curve.
  • the cutoff value and the reference value can be set from the ROC curve.
  • the specific diagnosis of DAD-type drug-induced interstitial pneumonia can be performed in the same manner.
  • serum quinurenin molecules and quinophosphate molecules are used in DAD-type drug-induced interstitial pneumonia acute phase cases (A-DAD), lung cancer cases (D), bacterial infection cases (F), and lung non-tuberculosis.
  • the level (eg, concentration) in the sample from the subject is measured, and if the level is lower than the preset cutoff value or reference value, the disease may be drug-induced interstitial pneumonia. Is high, and when the level is higher than the cutoff value or the reference value, it can be determined that the disease is unlikely to be drug-induced interstitial pneumonia.
  • the cutoff value and the reference value can be set in advance. For example, the 95% confidence interval of the quantitative value of the cases of lung disease other than drug-induced interstitial pneumonia can be used as the reference value, or the cutoff value can be set from the ROC curve.
  • the specific diagnosis of DAD-type drug-induced interstitial pneumonia can be performed in the same manner.
  • a significant decrease was also observed in the serum tryptophan molecule except in the case of bacterial infection (F) (Fig. 2, A-DAD vs DK).
  • F bacterial infection
  • a significant decrease was observed for lung disease as in the case of DAD type (Fig. 2, A vs DK).
  • ⁇ 15% in the table below is a variation value that takes into account variations in analytical systems, etc., and there is a variation of ⁇ 15% for each of the upper and lower limits of the numerical range of appropriate values, and also for preferable values. It is possible.
  • cutoff values can be set using the concentration (the value at which the sensitivity and specificity are highest) as an index.
  • Upper row Appropriate value
  • Lower row Preferred value.
  • ⁇ 15% in the table below is a variation value that takes into account variations in analytical systems, etc., and there is a variation of ⁇ 15% for each of the upper and lower limits of the numerical range of appropriate values, and also for preferable values. It is possible.
  • the values measured in the method of the present invention can assist in the specific diagnosis of drug-induced interstitial pneumonia.
  • Subjects to be specifically diagnosed with drug-induced interstitial pneumonia should be in the acute phase of the disease.
  • acute phase of disease refers to the vicinity of the worst phase of disease.
  • the acute phase is diagnosed by a pulmonologist based on a combination of clinical symptoms, physical findings, blood test findings, chest imaging findings, respiratory function tests, pathological patterns, and other findings.
  • the method of the present invention can also be used for pathological diagnosis of drug-induced interstitial pneumonia.
  • disease diagnosis means the determination of the degree and change (severity, therapeutic effect, etc.) of the pathological condition of a subject diagnosed with drug-induced interstitial pneumonia.
  • the method of the present invention can also be used for pathological diagnosis of DAD-type drug-induced interstitial pneumonia.
  • the level eg, concentration
  • the drug-induced interstitial disease is observed.
  • the cutoff value and the reference value can appropriately set the cutoff value and the reference value to be set in advance.
  • the 95% confidence interval of the quantitative value of drug-induced interstitial pneumonia convalescent cases can be used as a reference value, or the cutoff value can be set from the ROC curve.
  • the cut-off value of metabolites is the concentration at which the Youden's Index [sensitivity- (100-specificity)] is maximized (the value at which sensitivity and specificity are highest).
  • the following cutoff values can be set as indicators.
  • the above ⁇ 15% is a variation value that takes into account variations in the analytical system, etc., and there is a variation of ⁇ 15% for each of the upper and lower limits of the numerical range of the above cutoff value, and also for the preferable value. sell.
  • the cut-off value of metabolites is the concentration that maximizes Youden's Index [sensitivity- (100-specificity)] (highest sensitivity and specificity). The following cutoff values can be set using the value) as an index.
  • ⁇ 15% is a variation value that takes into account variations in the analytical system, etc., and there is a variation of ⁇ 15% for each of the upper and lower limits of the numerical range of the above cutoff value, and also for the preferable value. sell.
  • all plasma LPC molecules were found in DAD-type drug-induced interstitial pneumonia acute phase cases (Fig. 1, A-DAD) as compared with all drug-induced interstitial pneumonia recovery phase cases (B).
  • a significant decrease was observed (Fig. 1, A-DAD vs B).
  • a significant decrease was observed in all cases of drug-induced interstitial pneumonia in the acute phase (A) as compared with all cases in the recovery phase of drug-induced interstitial pneumonia (Fig. 1, A vs B).
  • Kynurenine and molecules located downstream of its metabolic pathway eg, 3-hydroxyquinurenine, 3-hydroxyanthranyl acid, 2-amino-3-carboxymuconic acid semialdehyde, quinolinic acid, picolinic acid
  • Drug-induced interstitial pneumonia when the level (eg, concentration) is measured and, in some cases, the ratio to tryptophan is determined and the level or ratio is higher than a preset cutoff value or reference value. It can be determined that the possibility of being in the acute phase of drug-induced interstitial pneumonia is low when the level is lower than the cutoff value or the reference value. ..
  • Those skilled in the art can appropriately set the cutoff value and the reference value to be set in advance.
  • the 95% confidence interval of the quantitative value of drug-induced interstitial pneumonia convalescent cases can be used as a reference value, or the cutoff value can be set from the ROC curve.
  • the cutoff value and the reference value can be changed to the numerical values for the pathological diagnosis of DAD-type drug-induced interstitial pneumonia, the pathological diagnosis of DAD-type drug-induced interstitial pneumonia can be performed in the same manner.
  • the cut-off value of metabolites is the concentration at which the Youden's Index [sensitivity- (100-specificity)] is maximized (the value with the highest sensitivity and specificity).
  • the following cutoff values can be set as indicators.
  • Kynurenine 508.5 to 555.8 ng / ml ⁇ 15% (preferably 522.3 ng / ml ⁇ 15%), quinolinic acid: 84.4 to 96.1 ng / ml ⁇ 15% (preferably 90.7 ng / ml ⁇ 15%), kynurenine / Tryptophan ratio: 0.053 to 0.061 ⁇ 15% (preferably 0.056 ⁇ 15%).
  • the above ⁇ 15% is a variation value that takes into account variations in the analytical system, etc., and there is a variation of ⁇ 15% for each of the upper and lower limits of the numerical range of the above cutoff value, and also for the preferable value. sell.
  • the diagnosis of DAD-type drug-induced interstitial pneumonia can be performed in the same manner.
  • the DAD-type drug-induced interstitial pneumonia acute phase case (A-DAD) and the drug-induced interstitial disease of the examples described below From the ROC curve analysis for discrimination of all convalescent cases of qualitative pneumonia (B), the cut-off value of metabolites is the concentration with the maximum Youden's Index [sensitivity- (100-specificity)] (highest sensitivity and specificity). The following cutoff values can be set using the value) as an index.
  • Kynurenine 649.5 to 788.3 ng / ml ⁇ 15% (preferably 707.1 ng / ml ⁇ 15%), quinolinic acid: 93.4 to 155.9 ng / ml ⁇ 15% (preferably 125.1 ng / ml ⁇ 15%), kynurenine / Tryptophan ratio: 0.055 to 0.075 ⁇ 15% (preferably 0.064 ⁇ 15%).
  • the above ⁇ 15% is a variation value that takes into account variations in the analytical system, etc., and there is a variation of ⁇ 15% for each of the upper and lower limits of the numerical range of the above cutoff value, and also for the preferable value. sell.
  • serum kynurenine molecules and quinolinic acid molecules are significant in DAD-type drug-induced interstitial pneumonia acute phase cases (A-DAD) as compared with all drug-induced interstitial pneumonia recovery phase cases (B).
  • A-DAD DAD-type drug-induced interstitial pneumonia acute phase cases
  • B drug-induced interstitial pneumonia recovery phase cases
  • Fig. 2, A-DAD vs B and Fig. 3, A-DAD vs B serum kynurenine molecules and quinolinic acid molecules
  • the level (eg, concentration) in the sample from the subject is measured, and if the level is lower than the preset cutoff value or reference value, it is possible that the patient is in the acute phase of drug-induced interstitial pneumonia.
  • the cutoff value and the reference value can be set in advance. For example, the 95% confidence interval of the quantitative value of drug-induced interstitial pneumonia convalescent cases can be used as a reference value, or the cutoff value can be set from the ROC curve.
  • the pathological diagnosis of DAD-type drug-induced interstitial pneumonia can be performed in the same manner.
  • all cases (A) of the acute phase of drug-induced interstitial pneumonia and recovery of drug-induced interstitial pneumonia in the examples described below From the ROC curve analysis for discrimination of all stages (B), the cut-off value of metabolites is the concentration at which the Youden's Index [sensitivity- (100-specificity)] is maximized (the value with the highest sensitivity and specificity). The following cutoff values can be set as indicators.
  • Tryptophan 9.05 to 9.57 ⁇ g / ml ⁇ 15% (preferably 9.32 ⁇ g / ml ⁇ 15%).
  • the above ⁇ 15% is a variation value that takes into account variations in the analytical system, etc., and there is a variation of ⁇ 15% for each of the upper and lower limits of the numerical range of the above cutoff value, and also for the preferable value. sell.
  • the cut-off value of metabolites is the concentration with the maximum Youden's Index [sensitivity- (100-specificity)] (highest sensitivity and specificity). The following cutoff values can be set using the value) as an index. Tryptophan: 7.62-8.94 ⁇ g / ml ⁇ 15% (preferably 8.44 ⁇ g / ml ⁇ 15%).
  • ⁇ 15% is a variation value that takes into account variations in the analytical system, etc., and there is a variation of ⁇ 15% for each of the upper and lower limits of the numerical range of the above cutoff value, and also for the preferable value. sell.
  • serum tryptophan molecules were significantly reduced in DAD-type drug-induced interstitial pneumonia acute phase cases (A-DAD) compared to all drug-induced interstitial pneumonia recovery phase cases (B).
  • A-DAD drug-induced interstitial pneumonia acute phase cases
  • B drug-induced interstitial pneumonia recovery phase cases
  • Fig. 2, A-DAD vs B drug-induced interstitial pneumonia recovery phase cases
  • a significant decrease was observed in all cases of drug-induced interstitial pneumonia in the acute phase (A) as compared with all cases in the recovery phase of drug-induced interstitial pneumonia (Fig. 2, A vs B).
  • the present invention is a method for diagnosing drug-induced interstitial pneumonia. a1. Obtaining a sample from a subject, b1. Measuring the levels in a sample of subject origin for at least one molecule selected from the lysophosphatidylcholine (LPC) molecule group and / or at least one molecule selected from the group of molecules included in the kynurenine pathway. as well as c1. Provided above are the methods comprising determining the pathology of drug-induced interstitial pneumonia based on a measurement of b1 and / or a ratio calculated from a measurement of b1 of two molecules.
  • LPC lysophosphatidylcholine
  • At least one molecule selected from the lysophosphatidylcholine (LPC) molecule group and / or at least one molecule selected from the group of molecules contained in the kynurenine pathway is in the acute phase of drug-induced interstitial pneumonia.
  • Levels in samples from subjects determined to be likely are measured once or multiple times at different times, and in some cases the ratio of the measured values of the two molecules (eg, molecules included in the kynurenine pathway excluding tryptophan).
  • the ratio of one molecule selected from the group to tryptophan) is determined, and when the level and / or ratio changes to the cutoff value or close to the reference value, or to the cutoff value or above or below the reference value, treatment is performed.
  • the treatment has not recovered from the drug-induced interstitial pneumonia, or It can be determined that the recovery is inadequate.
  • the method of the present invention can be used not only for diagnosing the pathology of drug-induced interstitial pneumonia, but also for prognosis examination and confirmation of therapeutic effect.
  • the suspected drug should be discontinued immediately.
  • various tests such as sputum and serum infection tests, imaging tests, bronchoalveolar lavage tests, and pathological tests are performed in combination to confirm the diagnosis of drug-induced interstitial pneumonia.
  • severe drug-induced interstitial pneumonia such as DAD
  • administration of corticosteroids should be started immediately.
  • pulse therapy in which methylprednisolone 500 to 1000 mg / day is administered for 3 days, continue at 0.5 to 1.0 mg / kg / day in terms of prednisolone, and gradually decrease. ..
  • Mayoclinic offers general treatments for interstitial pneumonia such as drug treatment, oxygen therapy, lung rehabilitation, and lung transplantation (https://www.mayoclinic.org/diseases-conditions/interstitial). -lung-disease / diagnosis-treatment / drc-20353113).
  • Drug treatments include 1) concomitant use with corticosteroids (prednisolone, etc.) and their immunosuppressive drugs: expected to slow or stabilize the progression of interstitial pneumonia, 2) idiopathic lung fibers.
  • Disease treatments pri veneidone and nintedanib: expected to slow the progression of interstitial pneumonia).
  • gastric acid secretion inhibitors There are gastric acid secretion inhibitors (lansoprazole, omeprazole, etc .: prevention of reflux esophagitis reduces aspiration of gastric juice and suppresses exacerbation of lung damage). Oxygen therapy cannot prevent lung damage, but is expected to ease breathing, prevent and reduce complications due to decreased blood oxygen levels, and reduce blood pressure on the right side of the heart. Lung rehabilitation improves quality of life, including ease of daily living. Lung transplantation is a last resort for patients with severe interstitial pneumonia who have no other treatment options.
  • IPF which is a type of interstitial pneumonia
  • the number of patients is large and the prognosis is poor.
  • Nintedanib vascular endothelial cell growth factor receptor (VEGFR), fibroblast growth factor receptor (FGFR), platelet-derived growth factor receptor (PDGFR), etc.
  • VEGFR vascular endothelial cell growth factor receptor
  • FGFR fibroblast growth factor receptor
  • PDGFR platelet-derived growth factor receptor
  • IPF Inhibitor against tyrosine kinase
  • pirfenidone anti-fibroblasting effect
  • gastric acid secretion inhibitor suppressing exacerbation of lung damage by preventing reflux esophagitis.
  • warfarin an anticoagulant
  • imatinib a selective tyrosine kinase inhibitor of platelet-derived growth factor (PDGF)
  • PDGF platelet-derived growth factor
  • prednisone a selective tyrosine kinase inhibitor of platelet-derived growth factor (PDGF)
  • azathiopurine a selective tyrosine kinase inhibitor of platelet-derived growth factor (PDGF)
  • PDGF platelet-derived growth factor
  • ambrisentan a selective endothelin receptor antagonist
  • the present invention is a method for diagnosing and treating drug-induced interstitial pneumonia.
  • a1. Obtaining a sample from a subject, b1. Measuring the levels in a sample of subject origin for at least one molecule selected from the lysophosphatidylcholine (LPC) molecule group and / or at least one molecule selected from the group of molecules included in the kynurenine pathway.
  • c1. Determine the presence or absence of drug-induced interstitial pneumonia based on the measured values of b1 and / or the ratio calculated from the measured values of b1 of the two molecules, and d1.
  • Provided by the above method which comprises treating a subject who is determined to have a high possibility of developing drug-induced interstitial pneumonia with a drug-induced interstitial pneumonia.
  • the present invention is a method for diagnosing and treating drug-induced interstitial pneumonia.
  • a1. Obtaining a sample from a subject, b1. Measuring the levels in a sample of subject origin for at least one molecule selected from the lysophosphatidylcholine (LPC) molecule group and / or at least one molecule selected from the group of molecules included in the kynurenine pathway.
  • c1. Determine the pathology of drug-induced interstitial pneumonia based on the b1 measurements and / or the ratio calculated from the b1 measurements of the two molecules, and d1.
  • Provided by the above method which comprises treating a subject determined to be likely to be in the acute phase of drug-induced interstitial pneumonia with treatment of drug-induced interstitial pneumonia.
  • the present invention measures the levels of at least one molecule selected from the lysophosphatidylcholine (LPC) molecule group and / or at least one molecule selected from the group of molecules contained in the kynurenine pathway in a sample derived from a subject.
  • Kits for testing drug-induced interstitial pneumonia, including reagents that can be used, are also provided.
  • the kit of the present invention derives at least one molecule selected from the lysophosphatidylcholine (LPC) molecule group and / or at least one molecule selected from the group of molecules contained in the kynurenine pathway.
  • LPC lysophosphatidylcholine
  • Reagents for extraction from samples eg, methanol, acetonitrile, isopropanol, chloroform, and mixtures thereof, etc.
  • internal standard substances eg, LPC (12: 0), LPC (13: 0), LPC (18 :) 1-d7), quinurenin-d6, quinolinic acid-d3, tryptophan-d5), reagents for derivatization (for example, 3-aminopyridyl-N-hydroxysuccinimidylcarbamate (APDS)), instruction manual It is good to include a book.
  • the instruction manual should also describe the evaluation and / or discrimination (identification) criteria of acute exacerbation cases of drug-induced interstitial pneumonia and DAD-type drug-induced interstitial pneumonia. ..
  • the kit may include a column, a pretreatment filter, and in the case of a ligand binding method, a standard substance or an antibody.
  • the kit of the present invention can be used as a drug for diagnosing a disease.
  • Example 1 (1) Regarding human interstitial pneumonia samples used for sample analysis, four base hospitals (Shinshu University, Japan Medical University, Chiba University, Hiroshima University), National Institute of Pharmaceutical and Food Sanitation, Kihara Foundation, Astellas Pharmaceutical Co., Ltd. And Daiichi Sankyo collected and analyzed with the approval of each research ethics committee.
  • Plasma samples are 21 cases collected in the acute phase of patients with drug-induced interstitial pneumonia who show a diffuse alveolar injury (DAD) pattern in diagnostic imaging, and 21 cases who show other patterns. 83 patients collected during the period, 65 patients collected during the convalescent period of patients with drug-induced interstitial pneumonia, and drug-induced interstitial patients who received the same drugs as those who developed drug-induced interstitial pneumonia for 3 months or more.
  • DAD diffuse alveolar injury
  • Urine samples were collected in the acute phase of patients with drug-induced interstitial pneumonia who showed a diffuse alveolar injury (DAD) pattern in diagnostic imaging, and 10 cases with other patterns. There were 33 cases collected during the period and 32 cases collected during the convalescent period of patients with drug-induced interstitial pneumonia, which were used for the analysis of quinolinic acid.
  • DAD diffuse alveolar injury
  • Drug-induced interstitial pneumonia biomarker candidate metabolites include lipidomics analysis that comprehensively analyzes hydrophobic metabolites and hydrophilic metabolites. It was selected by search and verification using metabolome analysis. In addition, 45 cases of drug-induced interstitial pneumonia acute phase and 33 cases of drug-induced interstitial pneumonia recovery phase were included in the search, including 9 cases showing the DAD pattern. Therefore, 60 cases of drug-induced interstitial pneumonia acute phase and 34 cases of drug-induced interstitial pneumonia recovery phase were used, including 16 cases presenting with the DAD pattern.
  • 117 molecules were identified as promising biomarker candidates showing a significance probability of p ⁇ 0.05 and an absolute effect size of 0.8 or more in cases exhibiting the DAD pattern in hydrophobic metabolites, especially LPC molecules.
  • the group had a low significance p and showed a high effect size, and as a result of verification, 6 molecules of LPC (LPC (14: 0), LPC (16: 1), LPC (17: 0), LPC (18: 0)) , LPC (18: 2), LPC (20: 5)) showed a significance probability of p ⁇ 0.05 or less and an absolute effect size of 0.8 or more.
  • LPC (16: 0), LPC (18: 1), LPC (20: 3), LPC (20: 4), LPC (22: 6) A similar tendency was observed. Therefore, using the LPC molecule group as a drug-induced interstitial pneumonia biomarker, we quantified and evaluated eight species for which standard products are available and in high abundance.
  • hydrophilic metabolites as a result of the search, 14 molecules were identified as promising biomarker candidates showing a significance probability of p ⁇ 0.05 and an absolute value of 0.8 or more in cases showing a DAD pattern, and were verified.
  • the MS conditions were as follows.
  • the ion source type was HESI (heated electrospray ionization), and the ion mode was positive.
  • Set ion mode Spray voltage to 3500 V, Sheath Gas to 40 Arb, Aux Gas to 10 Arb, Sweep Gas to 1 Arb, Ion Transfer Tube Temp to 350 ° C, Vaporizer Temp to 250 ° C, and for each ion in Table 1.
  • SRM measurement by Precursor ion and Production ion was used. Cycle time was 1 sec, RF Lens was 100 V, Q1 Resolution was 0.7 FWHM, Q3 Resolution was 0.7 FWHM, CID Gas was 1.5 mTorr, and Chrom Filter was 3 sec.
  • the calibration line range of the measurement molecule is 1 ⁇ g / mL ⁇ 200 ⁇ g / mL for LPC (16: 0), 0.4 ⁇ g / mL ⁇ 80 ⁇ g / mL for LPC (18: 0) and LPC (18: 1), LPC. (14: 0), LPC (15: 0) and LPC (17: 0) 20 ng / mL --4000 ng / mL, LPC (19: 0) and LPC (20: 0) 2 ng / mL --400
  • the relative truth and accuracy were calculated using four types of Quality Control (QC) samples for each analytical unit at ng / mL, and the data for each analytical unit was 15% or less.
  • QC Quality Control
  • the measurement and analysis of Kynurenine molecules and Tryptophan molecules were carried out using a method originally developed using Thermo Fisher's high performance liquid chromatography (LC; U3000) / mass spectrometer (MS; TSQ Quantiva).
  • LC liquid chromatography
  • MS mass spectrometer
  • 50 ⁇ l of serum was mixed with 50 ⁇ l of water, and internal standard substances (stable isotopes of kynurenine and tryptophan (kynurenine-d6 and tryptophan-d5) to be measured (kynurenine-d6 and tryptophan-d5) were added at 12.5 and 100 ng / ml, respectively.
  • the protein component was removed by mixing with MeOH and passing through a 0.22 um filter plate.
  • the lipid component was removed by passing through a lipid-removing filter plate containing C18 as a filler.
  • the collected sample solution was tripled. It was diluted with a volume of water and 5 ⁇ l was introduced into LC / MS.
  • the LC conditions were as follows: 0.3% formic acid water for mobile phase A, 0.3% methanol for mobile phase B, and Triart Phenyl for separation column. (1.9 ⁇ m methanol, 2.1 x 100 mm, YMC) was used by heating to 45 ° C. The initial condition was set to B 20%, maintained for 0.5 minutes, then increased to B 100% in 2.5 minutes, 4 minutes.
  • the MS conditions were as follows.
  • the ion source type was HESI (heated electrospray ionization), the ion mode was positive ion mode, the Spray voltage was 3500 V, and the Sheath Gas was 40.
  • Arb and Aux Gas were set to 10 Arb, Sweep Gas was set to 1 Arb, Ion Transfer Tube Temp was set to 350 ° C, Vaporizer Temp was set to 250 ° C, and SRM measurement by Precursor ion and Production ion was used for each ion in Table 2. Cycle. Time was 0.5 sec, RF Lens was calibrated, Q1 Resolution was 0.7 FWHM, Q3 Resolution was 0.7 FWHM, CID Gas was 1.5 mTorr, and Chrom Filter was 3 sec.
  • Quinolinic acid is measured and analyzed using an analysis method originally developed using Thermo Fisher's ion chromatography (IC; Dionex ICS-5000 +) / high-resolution mass spectrometer (HRMS; Q-Exactive). rice field.
  • IC Thermo Fisher's ion chromatography
  • HRMS high-resolution mass spectrometer
  • IC Dionex ICS-5000 +
  • HRMS high-resolution mass spectrometer
  • the blood concentration was calculated by substituting the measured value of natural quinolinic acid into the calibration curve prepared with the measured value of quinolinic acid-d3.
  • sample preparation mix 20 ⁇ l of serum with 80 ⁇ l of water, mix with 400 ⁇ l of MeOH with the addition of an internal standard (hippuric acid-d5) at 18.4 ng / ml, and pass through a 0.22 ⁇ m filter plate.
  • the protein component was removed.
  • the lipid component was removed by passing a liquid-removing filter plate containing C18 as a filler.
  • the initial conditions were to set the KOH concentration to 10 mM, increase to 100 mM in 7 minutes, maintain 100 mM until 8 minutes, decrease to 10 mM in 8.1 minutes, and then maintain 10 mM until 10 minutes for equilibration.
  • MS conditions were used.
  • Ion source type is HESI (heated electrospray ionization)
  • ion mode is negative ion mode
  • Spray voltage is -2000 V
  • Sheath Gas is 40 Arb
  • Aux Gas is 10 Arb
  • Sweep Gas is 0 Arb
  • AUX Gas Heater Temp is 300 ° C.
  • the difference in urine concentration due to the difference in water intake before sample collection was corrected by using the probabilistic quotient normalization (PQN) method for the area value of each extracted component corrected with the internal standard substance.
  • the calibration line range of the measurement molecule is set to 20 ng / mL --4000 ng / mL for kynurenine, 0.15 ⁇ g / mL -30 ⁇ g / mL for tryptophan, and 3.3 ng / mL -836 ng / mL for quinolinic acid, and for each analytical unit.
  • Quality Control (QC) samples the relative authenticity and accuracy were calculated, and the data of the analytical unit with each of 15% or less was used.
  • FIG. 1 shows eight types of hydrophobic drug-induced interstitial pneumonia biomarkers (LPC molecule group; LPC (14: 0), LPC (15: 0), LPC (16: 0), LPC (17: 0), LPC.
  • the plasma concentrations of (18: 0), LPC (18: 1), LPC (19: 0), LPC (20: 0)) are shown by dot plots. All LPC molecules were significantly reduced in DAD-type drug-induced interstitial pneumonia acute phase cases (A-DAD) compared to all drug-induced interstitial pneumonia recovery phase cases (B) (A-DAD). vs B).
  • FIG. 2 shows the serum concentrations of three hydrophilic drug-induced interstitial pneumonia biomarkers (kynurenine pathway molecule group; kynurenine, tryptophan, and quinolinic acid) in a dot plot.
  • Kynurenine, tryptophan and quinolinic acid molecules were significantly increased in DAD-type drug-induced interstitial pneumonia acute phase cases (A-DAD) compared to all drug-induced interstitial pneumonia convalescent phase cases (B), respectively (kynurenine and quinolinic).
  • FIG. 3 shows the urinary concentration of quinolinic acid in a dot plot. Quinolinic acid molecules were significantly increased in DAD-type drug-induced interstitial pneumonia acute phase cases (A-DAD) compared to all drug-induced interstitial pneumonia recovery phase cases (B) (A-DAD vs. B).
  • the LPC molecule group showed 0.903-0.938, the kynurenine molecule showed 0.912, the tryptophan molecule showed 0.800, the quinolinic acid molecule showed 0.884, and the kynurenine / tryptophan showed 0.943, showing good discrimination performance.
  • Table 4 shows the ability to discriminate between all cases of drug-induced interstitial pneumonia acute phase (A) and all cases of drug-induced interstitial pneumonia recovery phase (B) by ROC analysis, also using plasma or serum concentrations. The obtained AUC values are summarized (B).
  • the LPC molecule group shows 0.714-0.821, the kynurenine molecule shows 0.827, the tryptophan molecule shows 0.747, the quinolinic acid molecule shows 0.808, and the kynurenine / tryptophan shows 0.870. Showed performance.
  • Serum kynurenine, tryptophan, and quinolinic acid molecules were significantly increased in DAD-type drug-induced interstitial pneumonia acute phase cases (A-DAD) compared with similar drug-administered drug-induced interstitial pneumonia non-onset cases (C).
  • A-DAD DAD-type drug-induced interstitial pneumonia acute phase cases
  • C drug-administered drug-induced interstitial pneumonia non-onset cases
  • LPC molecule group is 0.929-0.971
  • kynurenine molecule is 0.938
  • tryptophan The molecule was 0.802
  • the quinolinic acid molecule was 0.955
  • the kynurenine / tryptophan was 0.963, showing good discrimination performance (Table 3, C).
  • LPC molecule group is 0.743-0.849
  • kynurenine molecule is 0.851
  • tryptophan molecule is 0.760
  • quinolinic acid molecule was 0.901
  • kynurenine / tryptophan was 0.895
  • Serum kynurenine and quinolinic acid molecules are used in DAD-type drug-induced interstitial pneumonia acute phase cases (A-DAD), lung cancer cases (D), bacterial infection cases (F), and non-tuberculous mycobacteriosis cases (pulmonary non-tuberculous mycobacteriosis).
  • A-DAD DAD-type drug-induced interstitial pneumonia acute phase cases
  • D lung cancer cases
  • F bacterial infection cases
  • non-tuberculous mycobacteriosis cases pulmonary non-tuberculous mycobacteriosis.
  • Significant increase was observed compared to G), idiopathic interstitial lung inflammation (H), collagen disease lung case (I), COPD case (J), and bronchial asthma case (K).
  • a significant decrease was observed in cases other than infectious disease cases (F) (Fig. 2, A-DAD vs DK).
  • the LPC molecule group is lung cancer case (D), lung non-tuberculous 0.880-0.923 (D), 0.880-0.923 (D) for patients with acidobacterial disease (G), cases of idiopathic interstitial lung disease (H), cases of lung disease with collagen disease (I), cases of COPD (J), and cases of bronchial asthma (K), It shows 0.900-0.978 (G), 0.916-0.96 (H), 0.892-0.944 (I), 0.937-0.981 (J), 0.942-0.972 (K), and the kynurenine molecule is lung cancer case (D), bacterial infection case.
  • non-tuberculous mycobacteriosis case G
  • idiopathic interstitial lung disease case H
  • collagen disease lung case I
  • COPD case J
  • bronchial asthma case K
  • 0.910 D
  • 0.883 F
  • 0.941 G
  • 0.894 H
  • 0.856 I
  • 0.853 J
  • 0.954 K
  • tryptophan molecule is a case of non-tuberculous mycobacteriosis of the lung.
  • lung cancer case (D) idiopathic interstitial lung disease (H), bronchial asthma (K), 0.824 (G), 0.806 (H), 0.885 (K), quinolinic acid molecule is lung cancer case (D) , Bacterial infection case (F), Pulmonary non-tuberculous mycobacteriosis case (G), Idiopathic interstitial lung inflammation case (H), Collagen disease lung case (I), COPD case (J), Bronchial asthma case Compared to (K), 0.937 (D), 0.918 (F), 0.892 (G), 0.872 (H), 0.902 (I), 0.908 (J), 0.980 (K) are shown, and kynurenine / tryptophan is a lung cancer case ( D), Bacterial infection case (F), Pulmonary non-tuberculous mycobacteriosis case (G), Idiopathic interstitial lung inflammation case (H), Collagen disease lung case (I), COPD case (J), Bronchi For
  • the LPC molecule group is a case of non-tuberculous mycobacteriosis of the lung (G). ), Idiopathic interstitial lung disease (H), collagen disease lung case (I), COPD case (J), bronchial asthma case (K), 0.671-0.811 (G), 0.689-0.802 (H), It showed 0.699-0.823 (I), 0.709-0.812 (J), and 0.736-0.834 (K), and showed good discrimination performance for some molecules (Table 4, DK).
  • the kynurenine molecule is 0.820 (D) and 0.866 for lung cancer cases (D), non-tuberculous mycobacteriosis cases (G), idiopathic interstitial lung inflammation cases (H), and bronchial asthma cases (K).
  • B All convalescent cases of drug-induced interstitial pneumonia, C, Non-onset cases of drug-induced interstitial pneumonia, D, Lung cancer cases, E, Fungal lung inflammation cases, F, Bacterial infection cases, G, Pulmonary Non-tuberculous mycobacteriosis cases, H, idiopathic interstitial lung disease cases, I, collagen disease lung cases, J, COPD cases, K, bronchial asthma cases
  • the cut-off value for distinguishing / distinguishing between A and BK obtained from ROC curve analysis is the cut-off value of metabolites from the results of each ROC curve analysis, and the Youden's Index [sensitivity- (100-specificity)] Obtain the maximum concentration (the value with the highest sensitivity and specificity) as an index.
  • the values in the table below are: upper row: appropriate value, lower row: preferable value.
  • ⁇ 15% in the table is a fluctuation value that takes into account variations in the analytical system, etc., and there may be ⁇ 15% fluctuations for each of the upper and lower limits of the numerical range of appropriate values, and also for preferable values. ..
  • the cut-off value for distinguishing / distinguishing between A and BK obtained from ROC curve analysis is the cut-off value of metabolites from the results of each ROC curve analysis, and the Youden's Index [sensitivity- (100-specificity)] Obtain the maximum concentration (the value with the highest sensitivity and specificity) as an index.
  • the values in the table below are: upper row: appropriate value, lower row: preferable value.
  • ⁇ 15% in the table is a fluctuation value that takes into account variations in the analytical system, etc., and there may be ⁇ 15% fluctuations for each of the upper and lower limits of the numerical range of appropriate values, and also for preferable values. .. All publications, patents and patent applications cited herein are incorporated herein by reference in their entirety.
  • the present invention can be used for in vitro diagnostic agents, clinical tests, and the like.

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Abstract

薬剤性間質性肺炎、特にびまん性肺胞傷害（DAD）の診断及び病勢診断、鑑別診断するためのバイオマーカーの開発を行う。リゾホスファチジルコリン（LPC）分子群より選択される少なくとも１個の分子及び/又はキヌレニン経路に含まれる分子群より選択される少なくとも１個の分子について、被験者由来の試料におけるレベルを測定することを含む、薬剤性間質性肺炎の検査方法。

Description

薬剤性間質性肺炎の代謝物診断バイオマーカー
　本発明は、薬剤性間質性肺炎の発症や病勢の診断を補助するための方法に関する。
　薬剤性間質性肺炎は医薬品による肺の間質の炎症性有害反応の総称である。間質性肺炎は、医薬品の他に、じん肺、膠原病などの明確な原因によるものと、原因が不明な特発性のものに分けられ、さらに様々な病型に分類される。それぞれ治療法や予後が異なるため、これらを鑑別することは臨床上重要である。
　薬剤性間質性肺炎は、特発性等の既知の間質性肺炎との類似性に基づいて、病型の診断が行われる（非特許文献1）。薬剤性間質性肺炎の病型の中で、特に重篤な病型は、びまん性肺胞傷害（diffuse alveolar damage、DAD）である。DADは、急性呼吸窮迫症候群や特発性肺線維症の急性増悪症例に見られる典型的な病型であり(非特許文献２)、薬剤性においても、DADは治療反応性に乏しく予後が悪い（非特許文献１、２）。そのため、DADに対しては、早期の検出と診断が特に重要とされる。また、DAD以外の病型としては、器質化肺炎（organizing pneumonia、OP）、非特異性間質性肺炎（nonspecific interstitial pneumonia、NSIP）などが挙げられるが、どのパターンにも当てはまらない例や複数のパターンが混在する例など、画像検査や病理検査では分類が困難な例も存在し、画像パターン分類には限界がある（非特許文献3）
　薬剤性間質性肺炎の診断は、医薬品によるもの以外の要因を否定する必要があり、確定に時間を要することも多く、画像診断や病理診断だけでは経済的にも体力的にも患者に大きな負担を強いるため、バイオマーカーの利用が有用とされる。
　薬剤性間質性肺炎のバイオマーカーとしては、現在、シアル化糖鎖抗原KL-6（KL-6）、肺サーファクタントプロテインA（SP-A）、肺サーファクタントプロテインD（SP-D）が、診断の補助に利用されており、KL-6はDADに対する陽性率が高いことが知られている（非特許文献4, 5）。これらは、薬剤性間質性肺炎を反映する指標であるが、喫煙や間質性肺炎以外の疾患でも増加することもあり、肺障害の重症度とは相関しない。また、KL-6は、薬剤投与前値を基準に経過を追うことが推奨されているものの、既存の間質性肺炎の増悪や日和見感染症でも上昇する。すなわち、これらのマーカーは、薬剤性間質性肺炎、特にDAD型の薬剤性間質性肺炎に特異的ではなく、病型を鑑別するマーカーとしての有用性は低い。また、KL-6、SP-D、およびSP-Aは病状の改善後も長期間高値を示す（非特許文献4, 5）という問題があることから、新たなバイオマーカーが必要とされている。これまでに、UBE2T、HK1、PMSE1、USO1、IFI16、GLTPなどのタンパク質や（特許文献1）、自己抗体（特許文献2）などがマーカー候補として提案、特許申請されている。
薬剤性肺障害の診断・治療の手引き　日本呼吸器学会 急性間質性肺炎Acute interstitial pneumonia (AIP)　日呼吸会誌　42(1), -23-27, 2004 楠本昌彦　薬剤性肺障害のCT診断　肺癌　55,807-809.2015 Ishikawa N, et al., Utility of KL-6/MUC1 in the clinical management of interstitial lung diseases, Respiratory Investig. 50, 3-13, 2012 Kawase S, et al., Change in serum KL-6 level from baseline is useful for predicting life-threatening EGFR-TKIs induced interstitial lung disease, Respiratory Research, 12:97, 2011
特開2015-90323公報 国際公開WO2014/148429パンフレット
　本発明は、薬剤性間質性肺炎の診断、病勢、およびその病型を診断、予測するためのバイオマーカーの開発を行うことを目的とする。
　高速液体クロマトグラフィーと質量分析計を用いて1,000種以上のアミノ酸・アミノ酸誘導体・脂質等の代謝物分子を網羅的に解析するメタボロミクス法にて、薬剤性間質性肺炎患者の血液試料を対象に解析を行った。DADとOPに焦点を当て、各代謝物分子のイオン強度から、回復期群に対して薬剤性間質性肺炎の急性期で大きく変動する代謝物分子を、統計的有意差と効果量（Hedge’s g値）を指標に探索した。KL-6やSP-D値が変動を示していない検体が多数存在する中、測定した代謝物分子の中から、DAD型薬剤性間質性肺炎の急性期で特に減少する脂質分子群として血漿からリゾホスファチジルコリン（LPC）分子群を、血清からDAD型薬剤性間質性肺炎の急性期で特に増加する代謝物分子群としてキヌレニン分子群（キヌレニン経路に含まれるキヌレニン、キノリン酸）とその親化合物であるトリプトファンを見いだした。
　ROC曲線（Receiver Operatorating Characteristic curve）解析の結果、LPC分子群は、DAD型薬剤性間質性肺炎の急性期と薬剤性間質性肺炎患者全体の回復期を高い精度（area under the curve: AUC 0.903-0.938）で、同系医薬品服用の非発症例を高い精度（area under the curve: AUC 0.929-0.971）で、鑑別した。また、DAD型薬剤性間質性肺炎の急性期と他の肺疾患（肺がん症例、肺非結核性抗酸菌症症例、突発性間質性肺炎症例、膠原病肺症例、COPD症例（慢性閉塞性肺疾患症例）、気管支喘息症例）についても高い精度（area under the curve: AUC 0.892-0.978）で鑑別した。
一方、キヌレニン分子群は、DAD型薬剤性間質性肺炎の急性期と薬剤性間質性肺炎患者全体の回復期を高い精度（area under the curve: AUC 0.915-0.947）で鑑別した。また、DAD型薬剤性間質性肺炎の急性期と他の肺疾患（肺がん症例、肺非結核性抗酸菌症症例、突発性間質性肺炎症例、膠原病肺症例、COPD症例）についても高い精度（area under the curve: AUC 0.882-0.957）で鑑別した。LPC分子群及びキヌレニン分子群は、薬剤性間質性肺炎、特にDAD型薬剤性間質性肺炎に対する有用なバイオマーカーとなりうることが示された。
　本発明は、これらの知見に基づいて、完成されたものであり、その要旨は以下のとおりである。
（１）キヌレニン経路に含まれる分子群より選択される少なくとも１個の分子及び/又はリゾホスファチジルコリン（LPC）分子群より選択される少なくとも１個の分子について、被験者由来の試料におけるレベルを測定することを含む、薬剤性間質性肺炎の検査方法。
（２）測定値が薬剤性間質性肺炎の病勢診断を補助する（１）記載の方法。
（３）測定値が薬剤性間質性肺炎の特異的診断を補助する（１）記載の方法。
（４）薬剤性間質性肺炎がDAD型薬剤性間質性肺炎である（１）～（３）のいずれかに記載の方法。
（５）キヌレニン経路に含まれる分子群が、キヌレニン、キノリン酸、3-ヒドロキシキヌレニン、3-ヒドロキシアントラニル酸、2-アミノ-3-カルボキシムコン酸セミアルデヒド、ピコリン酸及びトリプトファンを含む（１）～（４）のいずれかに記載の方法。
（６）LPC分子群が、LPC(14:0), LPC(15:0), LPC(16:0), LPC(16:1), LPC(17:0), LPC(18:0), LPC(18:1), LPC(18:2), LPC(19:0), LPC(20:0), LPC(20:3), LPC(20:4), LPC(20:5)及びLPC(22:6)を含む（１）～（５）のいずれかに記載の方法。
（７）薬剤性間質性肺炎の診断方法であって、
a1. 被験者から試料を得ること、
b1. キヌレニン経路に含まれる分子群より選択される少なくとも１個の分子及び/又はリゾホスファチジルコリン（LPC）分子群より選択される少なくとも１個の分子について、被験者由来の試料におけるレベルを測定すること、及び
c1. b1の測定値及び/又は２つの分子のb1の測定値から算出した比に基づき、薬剤性間質性肺炎の発症の有無を判定すること
を含む前記方法。
（８）薬剤性間質性肺炎の診断方法であって、
a1. 被験者から試料を得ること、
b1. キヌレニン経路に含まれる分子群より選択される少なくとも１個の分子及び/又はリゾホスファチジルコリン（LPC）分子群より選択される少なくとも１個の分子について、被験者由来の試料におけるレベルを測定すること、及び
c1. b1の測定値及び/又は２つの分子のb1の測定値から算出した比に基づき、薬剤性間質性肺炎の病勢を判定すること
を含む前記方法。
（９）薬剤性間質性肺炎の診断及び治療方法であって、
a1. 被験者から試料を得ること、
b1. キヌレニン経路に含まれる分子群より選択される少なくとも１個の分子及び/又はリゾホスファチジルコリン（LPC）分子群より選択される少なくとも１個の分子について、被験者由来の試料におけるレベルを測定すること、
c1. b1の測定値及び/又は２つの分子のb1の測定値から算出した比に基づき、薬剤性間質性肺炎の発症の有無を判定すること、及び
d1. 薬剤性間質性肺炎を発症している可能性が高いと判定された被験者に薬剤性間質性肺炎の治療を施すこと
を含む前記方法。
（１０）薬剤性間質性肺炎の診断及び治療方法であって、
a1. 被験者から試料を得ること、
b1. キヌレニン経路に含まれる分子群より選択される少なくとも１個の分子及び/又はリゾホスファチジルコリン（LPC）分子群より選択される少なくとも１個の分子について、被験者由来の試料におけるレベルを測定すること、
c1. b1の測定値及び/又は２つの分子のb1の測定値から算出した比に基づき、薬剤性間質性肺炎の病勢を判定すること、及び
d1. 薬剤性間質性肺炎の急性期にある可能性が高いと判定された被験者に薬剤性間質性肺炎の治療を施すこと
を含む前記方法。
（１１）キヌレニン経路に含まれる分子群より選択される少なくとも１個の分子及び/又はリゾホスファチジルコリン（LPC）分子群より選択される少なくとも１個の分子について、被験者由来の試料におけるレベルを測定することができる試薬を含む、薬剤性間質性肺炎の検査のためのキット。
　今回見いだした代謝物の血液中、あるいは尿中濃度を、単独、あるいは複数項目を測定することにより、薬剤性間質性肺炎疑いの患者が薬剤性間質性肺炎、特にDADなのか否か、また患者の病勢や薬剤性間質性肺炎の活動性について、高い確度で診断することができる。
　本明細書は、本願の優先権の基礎である日本国特許出願、特願2020‐21306の明細書および／または図面に記載される内容を包含する。
薬剤性間質性肺炎（急性期と回復期）、間質性肺炎非発症例、他の肺疾患症例におけるLPC分子群の血漿中濃度。*, p < 0.05; **, p < 0.01; ***, p < 0.001; ****, p < 0.0001 for A-DAD, †, p < 0.05; ††, p < 0.01; †††, p < 0.001; ††††, p < 0.0001 for A. One-way ANOVA and post-hoc. A, 薬剤性間質性肺炎急性期全症例、A-DAD, DAD型薬剤性間質性肺炎症例急性期、B, 薬剤性間質性肺炎回復期全症例、C, 同系薬剤服薬薬剤性間質性肺炎非発症例、D, 肺がん症例、E,真菌性肺炎症例、F, 細菌感染症症例、G, 肺非結核性抗酸菌症症例、H, 特発性間質性肺炎症例、I, 膠原病肺症例、J, COPD症例、K, 気管支喘息症例。 薬剤性間質性肺炎（急性期と回復期）、間質性肺炎非発症例、他の肺疾患症例におけるKynurenine、Tryptophan及びQuinolinic acidの血清中濃度及び血中Kyrunine/Tryptophan比。*, p < 0.05; **, p < 0.01; ***, p < 0.001; ****, p < 0.0001 for A-DAD, †, p < 0.05; ††, p < 0.01; †††, p < 0.001; ††††, p < 0.0001 for A. One-way ANOVA and post-hoc. A, 薬剤性間質性肺炎急性期全症例、A-DAD, DAD型薬剤性間質性肺炎症例急性期、B, 薬剤性間質性肺炎回復期全症例、C, 同系薬剤服薬薬剤性間質性肺炎非発症例、D, 肺がん症例、F, 細菌感染症症例、G, 肺非結核性抗酸菌症症例、H, 特発性間質性肺炎症例、I, 膠原病肺症例、J, COPD症例、K, 気管支喘息症例。 薬剤性間質性肺炎（急性期と回復期）におけるQuinolinic acidの尿中濃度。**, p < 0.01 for A-DAD, ††, p < 0.01 for A. One-way ANOVA and post-hoc. A, 薬剤性間質性肺炎急性期全症例、A-DAD, DAD型薬剤性間質性肺炎症例急性期、B, 薬剤性間質性肺炎回復期全症例。
　以下、本発明の実施の形態を詳細に説明する。
　本発明は、リゾホスファチジルコリン（LPC）分子群より選択される少なくとも１個の分子及び/又はキヌレニン経路に含まれる分子群より選択される少なくとも１個の分子について、被験者由来の試料におけるレベルを測定することを含む、薬剤性間質性肺炎の検査方法を提供する。薬剤性間質性肺炎は、DAD型薬剤性間質性肺炎であってもよい。
　薬剤性間質性肺炎は、薬剤を投与中に起きた呼吸器系の障害のなかで，薬剤と関連があり、間質領域に炎症性病変のあるものと定義される。その発症機序は少数の薬剤を除いてほとんど不詳であるが、基本的には、直接毒性または免疫反応が原因と考えられている。薬剤性間質性肺炎の臨床病型に特異的なものはなく、臨床所見、画像所見と病理組織パターンとによって特徴づけられ、基本的に他の原因による間質性肺炎との類似性に基づいて分類される。一般的な傾向として、急性発症は、主にびまん性肺胞傷害（diffuse alveolar damage：DAD）型、過敏性肺炎（hypersensitivity pneumonia：HP）型の臨床像を取り、一方、亜急性～慢性発症は、非特異性間質性肺炎（nonspecific interstitial pneumonia：NSIP）型、器質化肺炎（organizing pneumonia：OP）型の臨床像を示すことが多い。これらのうちDAD型は治療反応性に乏しく予後不良で、回復しても線維化を残すため、その診断の臨床的意義が大きい。
　リゾホスファチジルコリン（LPC）分子群は、脂肪酸鎖を1本有するリン脂質であり、生体で最も多く存在し、また生体中に広く分布し、脂肪酸鎖を２本有するリン脂質であるホスファチジルコリン（PC）から、ホスフォリパーゼAによって加水分解されることで生じる。LPC自身は細胞膜や細胞外小胞の構成成分であり、Gタンパク質共役型受容体のリガンドとして作用する。また、LPCの生成を担う活性ホスフォリパーゼA、LPCの分解を担うホスフォリパーゼC及びD等は炎症や免疫反応等の刺激によって活性化されるため、動脈硬化、糖尿病、がん等の様々な疾患においてその血中濃度が変動する。
　LPC分子群は、LPC(14:0), LPC(15:0), LPC(16:0), LPC(16:1), LPC(17:0), LPC(18:0), LPC(18:1), LPC(18:2), LPC(19:0), LPC(20:0), LPC(20:3), LPC(20:4), LPC(20:5)及びLPC(22:6)を含むとよい。なお、LPCに続く()中の数字はアシル基中の炭素数：二重結合数を示している。
　キヌレニン経路とは、トリプトファンの主要代謝経路であり、基質のトリプトファンから、主にキヌレニン、3-ヒドロキシキヌレニン、3-ヒドロキシアントラニル酸、2-アミノ-3-カルボキシムコン酸セミアルデヒド、キノリン酸及びピコリン酸が順に生合成される。
　キヌレニン経路を担う酵素群は幅広い組織に分布しており、免疫系や神経系における刺激によって生成されるものがある。また、生成されたキヌレニン経路に含まれる分子が、免疫系や神経系に作用し、これら酵素の活性や中間代謝物や生成物の不均衡と関連することが報告されている。
　従って、キヌレニン経路に含まれる分子群は、トリプトファン、キヌレニン、3-ヒドロキシキヌレニン、3-ヒドロキシアントラニル酸、2-アミノ-3-カルボキシムコン酸セミアルデヒド、キノリン酸及びピコリン酸を含むとよい。
　本発明において、被験者は、薬剤性間質性肺炎の発症が疑われる哺乳動物であるが、発症の危険性が考えられるすべての哺乳動物を対象としてもよい。典型的にはヒトである。被験者由来の試料としては、被験者から得た細胞、組織、体液など、具体的には、被験者の血液（例えば、全血、血清、血漿、血漿交換外液など）、尿や気管支肺胞洗浄液などを例示することができる。通常の血液検査（臨床検査）で得られる全血、血清あるいは血漿を血液サンプルとして使用するとよい。LPC分子群の分子を測定する場合には、被験者由来の試料は血漿であるとよく、キヌレニン経路に含まれる分子群の分子を測定する場合には、被験者由来の試料は血清や尿であるとよい。
　本発明の方法において、リゾホスファチジルコリン（LPC）分子群より選択される少なくとも１個の分子及び/又はキヌレニン経路に含まれる分子群より選択される少なくとも１個の分子について、被験者由来の試料におけるレベルを測定する。さらに、２つの分子の測定値の比を算出してもよい。例えば、トリプトファンを除くキヌレニン経路に含まれる分子群については、測定したレベルからその親化合物であるトリプトファンとの比を算出する。測定する手段としては、特に限定されることなく公知の方法を用いることができ、液体クロマトグラフィー、質量分析計、リガンド結合法、核磁気共鳴スペクトル法、薄層クロマググラフィー法、比色定量法、それらの組み合わせなどを例示することができる。
　後述の実施例では、液体クロマトグラフィーと質量分析計を用いて、発明者らが独自に開発した分析法を用いた。その方法を簡単に説明すると、生体に存在しない内部標準物質と抽出液を血液あるいは尿検体と混和することで対象とするバイオマーカーを抽出し、２液グラジエントと逆相カラム、あるいは水酸化カリウムグラジエントと陰イオン交換カラムを用いて分離したのち、HESI（heated electrospray ionization）法でイオン化したバイオマーカー分子をpositive ion mode、あるいはnegative ion modeで各バイオマーカーイオンに対するPrecursor ionとProduct ionによるSelected Reaction Monitoring (SRM) あるいは精密質量によるFull scan測定を行った。
　被験者由来の試料におけるレベルを測定する分子は１種類でもよいし、複数種類であってもよい。複数の分子の測定データを参照することにより、より正確な評価が可能となりうる。また、キヌレニン経路に含まれる分子群については、測定データから得られる親化合物であるトリプトファンとの比を参照することによっても、正確な評価が可能となりうる。
　LPC(14:0), LPC(15:0), LPC(16:0), LPC(16:1), LPC(17:0), LPC(18:0), LPC(18:1), LPC(18:2), LPC(19:0), LPC(20:0), LPC(20:3), LPC(20:4), LPC(20:5)及びLPC(22:6)からなる群より選択される少なくとも１個のLPC分子について、被験者由来の試料中のレベル（例えば、濃度）を測定し、そのレベルが低い場合に、薬剤性間質性肺炎を発症している可能性が高いと判定し、前記レベルが高い場合に、薬剤性間質性肺炎を発症している可能性が低いと判定することができる。LPC(16:1), LPC(18:2),  LPC(20:3), LPC(20:4), LPC(20:5)及びLPC(22:6)についても同様である。
　キヌレニン及びその代謝経路下流に位置する分子（例えば、3-ヒドロキシキヌレニン、3-ヒドロキシアントラニル酸、2-アミノ-3-カルボキシムコン酸セミアルデヒド、キノリン酸、ピコリン酸）について、被験者由来の試料中のレベル（例えば、濃度）を測定し、そのレベルが高い場合に、薬剤性間質性肺炎を発症している可能性が高いと判定し、前記レベルが低い場合に、薬剤性間質性肺炎を発症している可能性が低いと判定することができる。
トリプトファンについて、被験者由来の試料中のレベル（例えば、濃度）を測定し、そのレベルが低い場合に、薬剤性間質性肺炎を発症している可能性が高いと判定し、前記レベルが高い場合に、薬剤性間質性肺炎を発症している可能性が低いと判定することができる。
　また、キヌレニン及びその代謝経路下流に位置する分子とトリプトファンの比を算出する場合は、そのレベルが高い場合に、薬剤性間質性肺炎を発症している可能性が高いと判定し、前記レベルが低い場合に、薬剤性間質性肺炎を発症している可能性が低いと判定することができる。
　よって、本発明の方法は、薬剤性間質性肺炎の診断（薬剤性間質性肺炎の発症の有無の判定）を補助することができる。本発明は、薬剤性間質性肺炎の診断方法であって、
a1. 被験者から試料を得ること、
b1. リゾホスファチジルコリン（LPC）分子群より選択される少なくとも１個の分子及び/又はキヌレニン経路に含まれる分子群より選択される少なくとも１個の分子について、被験者由来の試料におけるレベルを測定すること、及び
c1. b1の測定値及び/又は２つの分子のb1の測定値から算出した比に基づき、薬剤性間質性肺炎の発症の有無を判定すること
を含む前記方法を提供する。
　本発明の一つの例として、薬剤性間質性肺炎の診断は、以下のような基準で行うことができる。被験者から採取した試料における上記分子の少なくとも１個のレベル（例えば、濃度）を測定し、また比を求め、予め設定されたカットオフ値や基準値よりも高い（あるいは低い）値が得られた場合、被験者は薬剤性間質性肺炎を発症していると評価する。この予め設定するカットオフ値や基準値は、当業者が適宜設定することができる。例えば、薬剤性間質性肺炎を発症していない健常者又は同系薬剤服薬薬剤性間質性肺炎非発症例の定量値の95％信頼区間を基準値としたり、ROC曲線からカットオフ値を設定したりすることができる。一実施態様として、血漿あるいは血清試料を用いた薬剤性間質性肺炎の診断のために、後述の実施例の薬剤性間質性肺炎急性期症例全例(A)と同系薬剤服薬薬剤性間質性肺炎非発症例(C)の判別に関するROC曲線解析から、代謝物のカットオフ値をYouden’s Index［感度-（100-特異度）］が最大となる濃度（感度と特異度が最も高くなる値）を指標にして、以下のカットオフ値を設定することができる。LPC(14:0) ：332.7～391.2  ng/ml ±15%（好ましくは、370.9 ng/ml ±15%）、LPC(15:0) ：196.3～235.6 ng/ml ±15%（好ましくは、209.8 ng/ml ±15%）、LPC(16:0) ：36.98～39.77 μg/ml ±15%（好ましくは、38.88 μg/ml ±15%）、LPC(17:0) ：403.0～479.5 ±15%（好ましくは、439.7 ng/ml ±15%）、 LPC(18:0) ：9.21～11.37 μg/ml ±15%（好ましくは、10.01 μg/ml ±15%）、LPC(18:1) ：6.04～7.20 μg/ml ±15%（好ましくは、6.64 μg/ml ±15%）、LPC(19:0) ：39.13～45.89 ng/ml ±15%（好ましくは、41.5 ng/ml ±15%）、LPC(20:0) ：36.85～42.79 ng/ml ±15%（好ましくは、41.1 ng/ml ±15%）、キヌレニン：445.9～500.5 ng/ml ±15%（好ましくは、466.5 ng/ml ±15%）、キノリン酸：74.7～97.2 ng/ml ±15%（好ましくは、88.6 ng/ml ±15%）、トリプトファン：9.54～10.35 μg/ml ±15%（好ましくは、10.00 μg/ml ±15%）、キヌレニン/トリプトファン比：0.058～0.069 ±15%（好ましくは、0.064 ±15%）。上記の±15%は、分析系などのばらつきなどを考慮した変動値であり、上記のカットオフ値の数値範囲の上限及び下限のそれぞれについて、また好ましい値についても、±15%の変動がありうる。あるいは、過去の測定値と比較して、上記分子の少なくとも一つが上昇（あるいは下降）の傾向を辿った場合、薬剤性間質性肺炎の発症の可能性を疑う。カットオフ値や基準値をDAD型薬剤性間質性肺炎の診断のための数値に変更することで、同様に、DAD型薬剤性間質性肺炎の診断を行うことができる。一実施態様として、DAD型薬剤性間質性肺炎の診断のために、後述の実施例のDAD型薬剤性間質性肺炎急性期症例(A-DAD)と同系薬剤服薬薬剤性間質性肺炎非発症例(C)の判別に関するROC曲線解析から、代謝物のカットオフ値をYouden’s Index［感度-（100-特異度）］が最大となる濃度（感度と特異度が最も高くなる値）を指標にして、以下のカットオフ値を設定することができる。LPC(14:0) ：194.1～379.6 ng/ml ±15%（好ましくは、267.0 ng/ml ±15%）、LPC(15:0) ：136.4～215.5 ng/ml ±15%（好ましくは、177.6 ng/ml ±15%）、LPC(16:0) ：29.49～39.29 μg/ml ±15%（好ましくは、33.78 μg/ml ±15%）、LPC(17:0) ：320.7～479.5 ng/ml ±15%（好ましくは、383.3 ng/ml ±15%）、 LPC(18:0) ：8.34～11.82 μg/ml ±15%（好ましくは、9.86 μg/ml  ±15%）、LPC(18:1) ：7.43～9.93 μg/ml ±15%（好ましくは、8.23 μg/ml ±15%）、LPC(19:0) ：30.92～49.9 ng/ml ±15%（好ましくは、40.98 ng/ml ±15%）、LPC(20:0) ：22.84～33.82 ng/ml ±15%（好ましくは、26.13 ng/ml ±15%）、キヌレニン：456.6～649.4 ng/ml ±15%（好ましくは、537.9 ng/ml ±15%）、キノリン酸：63.9～162.8 ng/ml ±15%（好ましくは、109.9 ng/ml ±15%）、トリプトファン：8.02～10.61 μg/ml ±15%（好ましくは、9.33 μg/ml ±15%）、キヌレニン/トリプトファン比：0.055～0.082 ±15%（好ましくは、0.064 ±15%）。上記の±15%は、分析系などのばらつきなどを考慮した変動値であり、上記のカットオフ値の数値範囲の上限及び下限のそれぞれについて、また好ましい値についても、±15%の変動がありうる。
　後述の実施例では、いずれの血漿中LPC分子もDAD型薬剤性間質性肺炎急性期症例（A-DAD）において、同系薬剤服薬薬剤性間質性肺炎非発症例（C）と比べ、有意に減少が認められた（図１、A-DAD vs C）。また、薬剤性間質性肺炎急性期全症例（A）においても、同系薬剤服薬薬剤性間質性肺炎非発症例（C）と比べ、有意に減少が認められた（図１、A vs C）。
　血清中キヌレニン経路分子（キヌレニン及びキノリン酸）及びトリプトファン分子はDAD型薬剤性間質性肺炎急性期症例（A-DAD）において、同系薬剤服薬薬剤性間質性肺炎非発症例（C）と比べ、有意に増加及び減少が認められた（図２、A-DAD vs C）。また、薬剤性間質性肺炎急性期全症例（A）においても、同系薬剤服薬薬剤性間質性肺炎非発症例（C）と比べ、それぞれ有意に増加及び減少が認められた（図２、A vs C）。
　本発明の方法は、薬剤性間質性肺炎の特異的診断にも利用できる。本明細書において、「特異的診断」とは、被験者が、薬剤性間質性肺炎なのか否かを判定することを指す。本発明の方法は、DAD型薬剤性間質性肺炎の特異的診断にも利用することができ、その場合、「特異的診断」とは、被験者が、DADパターンの間質性肺炎なのか否かを判定することを指す。DADは、間質性肺炎の病型の中でも特に重篤な病型であるので、DADの特異的診断に利用できることは、臨床上の意義が大きい。LPC(14:0), LPC(15:0), LPC(16:0), LPC(16:1), LPC(17:0), LPC(18:0), LPC(18:1), LPC(18:2), LPC(19:0), LPC(20:0), LPC(20:3), LPC(20:4), LPC(20:5)及びLPC(22:6)からなる群より選択される少なくとも１個のLPC分子について、被験者由来の試料中のレベル（例えば、濃度）を測定し、そのレベルが予め設定されたカットオフ値や基準値よりも低い場合に、疾患が薬剤性間質性肺炎である可能性が高いと判定し、前記レベルが前記カットオフ値や基準値よりも高い場合に、疾患が薬剤性間質性肺炎である可能性が低いと判定することができる。この予め設定するカットオフ値や基準値は、当業者が適宜設定することができる。例えば、薬剤性間質性肺炎以外の肺疾患発症例の定量値の95％信頼区間を基準値としたり、ROC曲線からカットオフ値を設定したりすることができる。カットオフ値や基準値をDAD型薬剤性間質性肺炎の特異的診断のための数値に変更することで、同様に、DAD型薬剤性間質性肺炎の特異的診断を行うことができる。
　後述の実施例では、いずれの血漿中LPC分子もDAD型薬剤性間質性肺炎急性期症例（A-DAD）において、肺がん症例（D）、肺非結核性抗酸菌症症例（G）、特発性間質性肺炎症例（H）、膠原病肺症例（I）、COPD症例（J）、気管支喘息症例（K）と比べ、有意に減少が認められた（図１、A-DAD vs D-K）。また、薬剤性間質性肺炎急性期全症例（A）においても、肺がん症例（D）に対しては全LPC分子群が、肺非結核性抗酸菌症症例（G）に対してはLPC(19:0)、LPC(20:0)が、特発性間質性肺炎症例（H）に対してはLPC(14:0)、LPC(15:0)、LPC(16:0)、LPC(17:0)、LPC(18:0)、LPC(18:1)、LPC(20:0)が、膠原病肺症例（I）に対しては全LPC分子群が、COPD症例（J）に対してはLPC(14:0)、LPC(16:0)、LPC(18:0)、LPC(18:1)、LPC(20:0)が、気管支喘息症例（K）に対してはLPC(14:0)が、有意な減少が認められた（図１、A vs D-K）。
　キヌレニン及びその代謝経路下流に位置する分子（例えば、3-ヒドロキシキヌレニン、3-ヒドロキシアントラニル酸、2-アミノ-3-カルボキシムコン酸セミアルデヒド、キノリン酸、ピコリン酸）について、被験者由来の試料中のレベル（例えば、濃度）を測定し、またトリプトファンとの比を求め、そのレベルが予め設定されたカットオフ値や基準値よりも高い場合に、疾患が薬剤性間質性肺炎である可能性が高いと判定し、前記レベルが前記カットオフ値や基準値よりも低い場合に、疾患が薬剤性間質性肺炎である可能性が低いと判定することができる。この予め設定するカットオフ値や基準値は、当業者が適宜設定することができる。例えば、薬剤性間質性肺炎以外の肺疾患発症例の定量値の95％信頼区間を基準値としたり、ROC曲線からカットオフ値を設定したりすることができる。カットオフ値や基準値をDAD型薬剤性間質性肺炎の特異的診断のための数値に変更することで、同様に、DAD型薬剤性間質性肺炎の特異的診断を行うことができる。
　後述の実施例では、血清中キヌレニン分子及びキノリン酸分子はDAD型薬剤性間質性肺炎急性期症例（A-DAD）において、肺がん症例（D）、細菌感染症症例（F）、肺非結核性抗酸菌症症例（G）、特発性間質性肺炎症例（H）、膠原病肺症例（I）、COPD症例（J）、気管支喘息症例（K）と比べ、有意に増加が認められた（図２、A-DAD vs D-K）。また、薬剤性間質性肺炎急性期全症例（A）においても、肺疾患に対し、DAD型と同様に有意な増加が認められた（図２、A vs D-K）。
　トリプトファンについて、被験者由来の試料中のレベル（例えば、濃度）を測定し、そのレベルが予め設定されたカットオフ値や基準値よりも低い場合に、疾患が薬剤性間質性肺炎である可能性が高いと判定し、前記レベルが前記カットオフ値や基準値よりも高い場合に、疾患が薬剤性間質性肺炎である可能性が低いと判定することができる。この予め設定するカットオフ値や基準値は、当業者が適宜設定することができる。例えば、薬剤性間質性肺炎以外の肺疾患発症例の定量値の95％信頼区間を基準値としたり、ROC曲線からカットオフ値を設定したりすることができる。カットオフ値や基準値をDAD型薬剤性間質性肺炎の特異的診断のための数値に変更することで、同様に、DAD型薬剤性間質性肺炎の特異的診断を行うことができる。
　後述の実施例では、血清中トリプトファン分子においても、細菌感染症症例（F）以外で有意な減少が認められた（図２、A-DAD vs D-K）。また、薬剤性間質性肺炎急性期全症例（A）においても、肺疾患に対し、DAD型と同様に有意な減少が認められた（図２、A vs D-K）。
　一実施態様として、血漿あるいは血清試料を用いた薬剤性間質性肺炎の特異的診断のために、後述の実施例の薬剤性間質性肺炎急性期症例全例(A)と肺がん症例(D)、真菌性肺炎症例(E)、細菌感染症症例(F)、肺非結核性抗酸菌症症例(G)、特発性間質性肺炎症例(H)、膠原病肺症例(I)、COPD症例(J)又は気管支喘息症例(K)の判別に関するROC曲線解析から、代謝物のカットオフ値をYouden’s Index［感度-（100-特異度）］が最大となる濃度（感度と特異度が最も高くなる値）を指標にして、以下のカットオフ値を設定することができる。上段：適正な値、下段：好ましい値。下記の表中の±15%は、分析系などのばらつきなどを考慮した変動値であり、適正な値の数値範囲の上限及び下限のそれぞれについて、また好ましい値についても、±15%の変動がありうる。
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000001

　別の一実施態様として、血漿あるいは血清試料を用いたDAD型薬剤性間質性肺炎の特異的診断のために、後述の実施例のDAD型薬剤性間質性肺炎急性期症例全例(A-DAD)と肺がん症例(D)、真菌性肺炎症例(E)、細菌感染症症例(F)、肺非結核性抗酸菌症症例(G)、特発性間質性肺炎症例(H)、膠原病肺症例(I)、COPD症例(J)又は気管支喘息症例(K)の判別に関するROC曲線解析から、代謝物のカットオフ値をYouden’s Index［感度-（100-特異度）］が最大となる濃度（感度と特異度が最も高くなる値）を指標にして、以下のカットオフ値を設定することができる。上段：適正な値、下段：好ましい値。下記の表中の±15%は、分析系などのばらつきなどを考慮した変動値であり、適正な値の数値範囲の上限及び下限のそれぞれについて、また好ましい値についても、±15%の変動がありうる。
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000002
　よって、本発明の方法において測定される値は、薬剤性間質性肺炎の特異的診断を補助することができる。
　薬剤性間質性肺炎の特異的診断を行う対象となる被験者は、疾患の急性期にあるとよい。本明細書において、「疾患の急性期」とは、疾患の最悪期付近をいう。急性期であることは、臨床症状、身体所見、血液検査所見、胸部画像所見、呼吸機能検査、病理パターン等の所見の組み合わせにより、呼吸器専門医が診断する。
また、本発明の方法は、薬剤性間質性肺炎の病勢診断にも利用できる。本明細書において、「病勢診断」とは、薬剤性間質性肺炎と診断された被験者の、病態の程度や変化（重症度、治療効果等）の判断を意味する。本発明の方法は、DAD型薬剤性間質性肺炎の病勢診断にも利用することができる。LPC(14:0), LPC(15:0), LPC(16:0), LPC(16:1), LPC(17:0), LPC(18:0), LPC(18:1), LPC(18:2), LPC(19:0), LPC(20:0), LPC(20:3), LPC(20:4), LPC(20:5)及びLPC(22:6)からなる群より選択される少なくとも１個のLPC分子について、被験者由来の試料中のレベル（例えば、濃度）を測定し、そのレベルが予め設定されたカットオフ値や基準値よりも低い場合に、薬剤性間質性肺炎の急性期にある可能性が高いと判定し、前記レベルが前記カットオフ値や基準値よりも高い場合に、薬剤性間質性肺炎の急性期にある可能性が低いと判定することができる。この予め設定するカットオフ値や基準値は、当業者が適宜設定することができる。例えば、薬剤性間質性肺炎回復期症例の定量値の95％信頼区間を基準値としたり、ROC曲線からカットオフ値を設定したりすることができる。カットオフ値や基準値をDAD型薬剤性間質性肺炎の病勢診断のための数値に変更することで、同様に、DAD型薬剤性間質性肺炎の病勢診断を行うことができる。
一実施態様として、血漿試料を用いた薬剤性間質性肺炎の病勢診断のために、後述の実施例の薬剤性間質性肺炎急性期症例全例(A)と薬剤性間質性肺炎回復期全症例(B)の判別に関するROC曲線解析から、代謝物のカットオフ値をYouden’s Index［感度-（100-特異度）］が最大となる濃度（感度と特異度が最も高くなる値）を指標にして、以下のカットオフ値を設定することができる。LPC(14:0) ：284.1～325.7 ng/ml ±15%（好ましくは、291.0 ng/ml ±15%）、LPC(15:0) ：187.3～208.8 ng/ml ±15%（好ましくは、200.5 ng/ml ±15%）、LPC(16:0) ：39.39～42.34 μg/ml ±15%（好ましくは、40.89 μg/ml ±15%）、LPC(17:0) ：410.0～481.6 ng/ml ±15%（好ましくは、439.8 ng/ml ±15%）、 LPC(18:0) ：8.97～9.72 μg/ml ±15%（好ましくは、9.26 μg/ml ±15%）、LPC(18:1) ：8.04～8.64 μg/ml ±15%（好ましくは、8.28 μg/ml ±15%）、LPC(19:0) ：48.34～51.83 ng/ml ±15%（好ましくは、49.46 ng/ml ±15%）、LPC(20:0) ：30.48～33.40 ng/ml ±15%（好ましくは、32.47 ng/ml ±15%）。上記の±15%は、分析系などのばらつきなどを考慮した変動値であり、上記のカットオフ値の数値範囲の上限及び下限のそれぞれについて、また好ましい値についても、±15%の変動がありうる。
　カットオフ値や基準値をDAD型薬剤性間質性肺炎の診断のための数値に変更することで、同様に、DAD型薬剤性間質性肺炎の診断を行うことができる。一実施態様として、血漿試料を用いたDAD型薬剤性間質性肺炎の病勢診断のために、後述の実施例のDAD型薬剤性間質性肺炎急性期症例(A-DAD)と薬剤性間質性肺炎回復期全症例(B)の判別に関するROC曲線解析から、代謝物のカットオフ値をYouden’s Index［感度-（100-特異度）］が最大となる濃度（感度と特異度が最も高くなる値）を指標にして、以下のカットオフ値を設定することができる。LPC(14:0) ：226.9～299.1 ng/ml ±15%（好ましくは、260.2 ng/ml ±15%）、LPC(15:0) ：157.9～217.5 ng/ml ±15%（好ましくは、182.6 ng/ml ±15%）、LPC(16:0) ：29.62～38.29 μg/ml ±15%（好ましくは、33.53 μg/ml ±15%）、LPC(17:0) ：315.3～444.5 ng/ml ±15%（好ましくは、381.5 ng/ml ±15%）、 LPC(18:0) ：9.02～11.12 μg/ml ±15%（好ましくは、9.67 μg/ml ±15%）、LPC(18:1) ：7.39～8.70 μg/ml ±15%（好ましくは、8.23 μg/ml ±15%）、LPC(19:0) ：34.63～48.94 ng/ml ±15%（好ましくは、40.69 ng/ml ±15%）、LPC(20:0) ：23.20～32.97 ng/ml ±15%（好ましくは、28.05 ng/ml ±15%）。上記の±15%は、分析系などのばらつきなどを考慮した変動値であり、上記のカットオフ値の数値範囲の上限及び下限のそれぞれについて、また好ましい値についても、±15%の変動がありうる。
　後述の実施例では、いずれの血漿中LPC分子もDAD型薬剤性間質性肺炎急性期症例（図１、A-DAD）において、薬剤性間質性肺炎回復期全症例（B）と比べ、有意に減少が認められた（図１、A-DAD vs B）。また、薬剤性間質性肺炎急性期全症例（A）においても、薬剤性間質性肺炎回復期全症例と比べ、有意に減少が認められた（図１、A vs B）。
　キヌレニン及びその代謝経路下流に位置する分子（例えば、3-ヒドロキシキヌレニン、3-ヒドロキシアントラニル酸、2-アミノ-3-カルボキシムコン酸セミアルデヒド、キノリン酸、ピコリン酸）について、被験者由来の試料中のレベル（例えば、濃度）を測定し、場合によっては、さらに、トリプトファンとの比を求め、そのレベルや比が予め設定されたカットオフ値や基準値よりも高い場合に、薬剤性間質性肺炎の急性期にある可能性が高いと判定し、前記レベルが前記カットオフ値や基準値よりも低い場合に、薬剤性間質性肺炎の急性期にある可能性が低いと判定することができる。この予め設定するカットオフ値や基準値は、当業者が適宜設定することができる。例えば、薬剤性間質性肺炎回復期症例の定量値の95％信頼区間を基準値としたり、ROC曲線からカットオフ値を設定したりすることができる。カットオフ値や基準値をDAD型薬剤性間質性肺炎の病勢診断のための数値に変更することで、同様に、DAD型薬剤性間質性肺炎の病勢診断を行うことができる。
　一実施態様として、血清試料を用いた薬剤性間質性肺炎の病勢診断のために、後述の実施例の薬剤性間質性肺炎急性期症例全例(A)と薬剤性間質性肺炎回復期全症例(B)の判別に関するROC曲線解析から、代謝物のカットオフ値をYouden’s Index［感度-（100-特異度）］が最大となる濃度（感度と特異度が最も高くなる値）を指標にして、以下のカットオフ値を設定することができる。キヌレニン：508.5～555.8 ng/ml ±15%（好ましくは、522.3 ng/ml ±15%）、キノリン酸：84.4～96.1 ng/ml ±15%（好ましくは、90.7 ng/ml ±15%）、キヌレニン/トリプトファン比：0.053～0.061 ±15%（好ましくは、0.056 ±15%）。上記の±15%は、分析系などのばらつきなどを考慮した変動値であり、上記のカットオフ値の数値範囲の上限及び下限のそれぞれについて、また好ましい値についても、±15%の変動がありうる。
　カットオフ値や基準値をDAD型薬剤性間質性肺炎の診断のための数値に変更することで、同様に、DAD型薬剤性間質性肺炎の診断を行うことができる。一実施態様として、血清試料を用いたDAD型薬剤性間質性肺炎の病勢診断のために、後述の実施例のDAD型薬剤性間質性肺炎急性期症例(A-DAD)と薬剤性間質性肺炎回復期全症例(B)の判別に関するROC曲線解析から、代謝物のカットオフ値をYouden’s Index［感度-（100-特異度）］が最大となる濃度（感度と特異度が最も高くなる値）を指標にして、以下のカットオフ値を設定することができる。キヌレニン：649.5～788.3 ng/ml ±15%（好ましくは、707.1 ng/ml ±15%）、キノリン酸：93.4～155.9 ng/ml ±15%（好ましくは、125.1 ng/ml ±15%）、キヌレニン/トリプトファン比：0.055～0.075 ±15%（好ましくは、0.064 ±15%）。上記の±15%は、分析系などのばらつきなどを考慮した変動値であり、上記のカットオフ値の数値範囲の上限及び下限のそれぞれについて、また好ましい値についても、±15%の変動がありうる。
　後述の実施例では、血清中キヌレニン分子及びキノリン酸分子はDAD型薬剤性間質性肺炎急性期症例（A-DAD）において、薬剤性間質性肺炎回復期全症例（B）と比べ、有意に増加が認められた（図２、A-DAD vs B及び図３、A－DAD vs B）。また、薬剤性間質性肺炎急性期全症例（A）においても、薬剤性間質性肺炎回復期全症例と比べ、有意に増加が認められた（図２、A vs B及び図３、A－DAD vs B）。
　トリプトファンについて、被験者由来の試料中のレベル（例えば、濃度）を測定し、そのレベルが予め設定されたカットオフ値や基準値よりも低い場合に、薬剤性間質性肺炎の急性期にある可能性が高いと判定し、前記レベルが前記カットオフ値や基準値よりも高い場合に、薬剤性間質性肺炎の急性期にある可能性が低いと判定することができる。この予め設定するカットオフ値や基準値は、当業者が適宜設定することができる。例えば、薬剤性間質性肺炎回復期症例の定量値の95％信頼区間を基準値としたり、ROC曲線からカットオフ値を設定したりすることができる。カットオフ値や基準値をDAD型薬剤性間質性肺炎の病勢診断のための数値に変更することで、同様に、DAD型薬剤性間質性肺炎の病勢診断を行うことができる。
　一実施態様として、血清試料を用いた薬剤性間質性肺炎の病勢診断のために、後述の実施例の薬剤性間質性肺炎急性期症例全例(A)と薬剤性間質性肺炎回復期全症例(B)の判別に関するROC曲線解析から、代謝物のカットオフ値をYouden’s Index［感度-（100-特異度）］が最大となる濃度（感度と特異度が最も高くなる値）を指標にして、以下のカットオフ値を設定することができる。トリプトファン：9.05～9.57 μg/ml ±15%（好ましくは、9.32 μg/ml ±15%）。上記の±15%は、分析系などのばらつきなどを考慮した変動値であり、上記のカットオフ値の数値範囲の上限及び下限のそれぞれについて、また好ましい値についても、±15%の変動がありうる。
カットオフ値や基準値をDAD型薬剤性間質性肺炎の診断のための数値に変更することで、同様に、DAD型薬剤性間質性肺炎の診断を行うことができる。一実施態様として、血清試料を用いたDAD型薬剤性間質性肺炎の病勢診断のために、後述の実施例のDAD型薬剤性間質性肺炎急性期症例(A-DAD)と薬剤性間質性肺炎回復期全症例(B)の判別に関するROC曲線解析から、代謝物のカットオフ値をYouden’s Index［感度-（100-特異度）］が最大となる濃度（感度と特異度が最も高くなる値）を指標にして、以下のカットオフ値を設定することができる。トリプトファン：7.62～8.94 μg/ml ±15%（好ましくは、8.44 μg/ml ±15%）。上記の±15%は、分析系などのばらつきなどを考慮した変動値であり、上記のカットオフ値の数値範囲の上限及び下限のそれぞれについて、また好ましい値についても、±15%の変動がありうる。
　後述の実施例では、血清中トリプトファン分子はDAD型薬剤性間質性肺炎急性期症例（A-DAD）において、薬剤性間質性肺炎回復期全症例（B）と比べ、有意に減少が認められた（図２、A-DAD vs B）。また、薬剤性間質性肺炎急性期全症例（A）においても、薬剤性間質性肺炎回復期全症例と比べ、有意に減少が認められた（図２、A vs B）。
　よって、本発明の方法において測定される値は、薬剤性間質性肺炎の病勢診断を補助することができる。本発明は、薬剤性間質性肺炎の診断方法であって、
a1. 被験者から試料を得ること、
b1. リゾホスファチジルコリン（LPC）分子群より選択される少なくとも１個の分子及び/又はキヌレニン経路に含まれる分子群より選択される少なくとも１個の分子について、被験者由来の試料におけるレベルを測定すること、及び
c1. b1の測定値及び/又は２つの分子のb1の測定値から算出した比に基づき、薬剤性間質性肺炎の病勢を判定すること
を含む前記方法を提供する。
　さらに、リゾホスファチジルコリン（LPC）分子群より選択される少なくとも１個の分子及び/又はキヌレニン経路に含まれる分子群より選択される少なくとも１個の分子について、薬剤性間質性肺炎の急性期にある可能性が高いと判定された被験者由来の試料におけるレベルを１回又は異なる時期に複数回測定し、場合によっては、２つの分子の測定値の比（例えば、トリプトファンを除くキヌレニン経路に含まれる分子群より選択される１つの分子とトリプトファンとの比）を求め、レベル及び/又は比がカットオフ値もしくは基準値に近い、あるいはカットオフ値もしくは基準値以上または以下まで変化した場合に、治療により薬剤性間質性肺炎から回復したと判定し、前記レベルがカットオフ値もしくは基準値よりも高いあるいは低い状態のままの場合に、治療により薬剤性間質性肺炎から回復していない、あるいは、回復が不十分であると判定することができる。本発明の方法は、薬剤性間質性肺炎の病勢診断の他、予後の検査、治療効果の確認にも利用できる。
　被験者が薬剤性間質性肺炎を発症している可能性が高いと判断された場合には、被疑薬はすみやかに中止する。次いで、喀痰や血清の感染症検査、画像検査、気管支肺胞洗浄検査や病理検査などの各種検査を組み合わせて行い、薬剤性間質性肺炎の診断を確定させる。DADなど重症の薬剤性間質性肺炎では、すみやかに副腎皮質ステロイドの投与を開始する。日本呼吸器学会の治療指針では、メチルプレドニゾロン500～1000 mg/日を3日間投与するパルス療法を行い、プレドニゾロン換算で0.5～1.0 mg/kg/日で継続し、漸減することが推奨されている。漸減の速度に一定の基準はなく、治療反応性をみながら減らしていく。ステロイド治療に抵抗性、あるいは難治性の肺障害では、免疫抑制薬（シクロスポリン、タクロリムスなど）や好中球エラスターゼ阻害薬（シベレスタット）の投与、ポリミキシンB固定化線維カラム（PMX）療法などを組み合わせた集学的治療を行う。これらの治療は薬剤性肺障害に対するエビデンスに乏しく保険適用もないため、実際にはIPF（特発性肺線維症）の急性増悪やARDS（急性呼吸窮迫症候群）に準じて用いられる。呼吸不全には対しては、高流量酸素投与、非侵襲的陽圧換気療法、あるいは気管内挿管下での人工呼吸管理など、重症度に応じた対処を行う。
　米国では、薬剤性の間質性肺炎の発生頻度が日本ほど高くなく（RESPIRATORY INVESTIGATION, Dec 2013, 51(4):260-77）、間質性肺炎としては、薬剤性でなく特発性間質性肺炎がまず挙げられる。米国呼吸器学会（American Thoracic Society）では診断（病型等）に関するStatementは発表しているものの（AM J RESPIR CRIT CARE MED. Sep 2013;188(6):733-48）、一般的な病型に関する治療ガイドラインを有しておらず、基本的に各医療施設の方針に委ねられている。例えば、Mayo clinicでは、一般的な間質性肺炎の治療として、薬物治療、酸素療法、肺のリハビリテーション、肺移植が行われている（https://www.mayoclinic.org/diseases-conditions/interstitial-lung-disease/diagnosis-treatment/drc-20353113）。薬物治療としては、1) コルチコステロイド薬（プレドニゾロン等）及びその免疫抑制薬との薬剤と併用：間質性肺炎の進行を遅くする、または安定させると期待される、2) 特発性肺線維症治療薬（ピルフェニドンとニンテダニブ：間質性肺炎の進行を遅くすると期待される）。3）胃酸分泌抑制薬（ランソプラゾールやオメプラゾール等：逆流性食道炎の防止により胃液の誤嚥を低下させ、肺損傷悪化を抑制する）、がある。酸素療法は、肺の損傷を防ぐことはできないが、呼吸を楽にする、血中酸素濃度の低下による合併症を予防・軽減する、心臓の右側の血圧低下、が期待される。肺のリハビリテーションは、日常動作の容易性などQOLを改善する。肺移植は、他の治療選択肢がない重症間質性肺炎患者にとり、最後の手段である。
　一方、間質性肺炎の一種であるIPFに関しては、患者数も多く予後不良のため、臨床研究結果に基づき、米国呼吸器学会より治療ガイドラインが発表されている（AMERICAN JOURNAL OF RESPIRATORY AND CRINICAL CARE MEDICINE, JULY 2015. 192(2):e3-19）。IPFの治療薬として条件付きで推奨されている医薬品としては、ニンテダニブ（血管内皮細胞増殖因子受容体（VEGFR）、線維芽細胞増殖因子受容体（FGFR）、血小板由来成長因子受容体（PDGFR）等のチロシンキナーゼに対する阻害薬）、ピルフェニドン（抗繊維化作用）、胃酸分泌抑制薬（逆流性食道炎の防止による肺損傷悪化抑制）、がある。しかし、ワルファリン（抗凝固薬）、イマチニブ（血小板由来成長因子（PDGF）の選択的チロシンキナーゼ阻害剤）、プレドニゾン・アザチオプリン・N-アセチルシステインの組み合わせやアンブリセンタン（選択的エンドセリン受容体拮抗薬）はその有効性に疑問が持たれており、使用することは推奨されていないが、その使用を排除するものではない。
　本発明においては、間質性肺炎に対する上記の治療法を用いれはよい。
　本発明は、薬剤性間質性肺炎の診断及び治療方法であって、
a1. 被験者から試料を得ること、
b1. リゾホスファチジルコリン（LPC）分子群より選択される少なくとも１個の分子及び/又はキヌレニン経路に含まれる分子群より選択される少なくとも１個の分子について、被験者由来の試料におけるレベルを測定すること、
c1. b1の測定値及び/又は２つの分子のb1の測定値から算出した比に基づき、薬剤性間質性肺炎の発症の有無を判定すること、及び
d1. 薬剤性間質性肺炎を発症している可能性が高いと判定された被験者に薬剤性間質性肺炎の治療を施すこと
を含む前記方法を提供する。
　また、本発明は、薬剤性間質性肺炎の診断及び治療方法であって、
a1. 被験者から試料を得ること、
b1. リゾホスファチジルコリン（LPC）分子群より選択される少なくとも１個の分子及び/又はキヌレニン経路に含まれる分子群より選択される少なくとも１個の分子について、被験者由来の試料におけるレベルを測定すること、
c1. b1の測定値及び/又は２つの分子のb1の測定値から算出した比に基づき、薬剤性間質性肺炎の病勢を判定すること、及び
d1. 薬剤性間質性肺炎の急性期にある可能性が高いと判定された被験者に薬剤性間質性肺炎の治療を施すこと
を含む前記方法を提供する。
　本発明は、リゾホスファチジルコリン（LPC）分子群より選択される少なくとも１個の分子及び/又はキヌレニン経路に含まれる分子群より選択される少なくとも１個の分子について、被験者由来の試料におけるレベルを測定することができる試薬を含む、薬剤性間質性肺炎の検査のためのキットも提供する。
　一つの例として、本発明のキットは、リゾホスファチジルコリン（LPC）分子群より選択される少なくとも１個の分子及び/又はキヌレニン経路に含まれる分子群より選択される少なくとも１個の分子を被験者由来の試料から抽出するための試薬（例えば、メタノール、アセトニトリル、イソプロパノール、クロロホルム、及びこれらの混合液など）、内標準物質（例えば、LPC(12:0)、LPC(13:0)、LPC(18:1-d7)、キヌレニン-d6、キノリン酸-d3、トリプトファン-d5）、誘導体化するための試薬（例えば、３－アミノピリジル－N－ヒドロキシスクシンイミジルカルバメート（APDS）など））、取扱説明書などが含まれるとよい。取扱説明書には、キットの使用方法の他、薬剤性間質性肺炎やDAD型薬剤性間質性肺炎の急性増悪症例の評価及び／又は鑑別（識別）基準なども記載しておくとよい。その他、キットには、LC/MS分析の場合には、カラムや前処理フィルター、リガンド結合法であれば、標準物質や抗体などが含まれるとよい。
　本発明のキットは、疾病を診断するための医薬品として用いることができる。
　以下、実施例により本発明を更に詳細に説明する。
〔実施例１〕
（１）検体
　解析に用いたヒト間質性肺炎試料については、4箇所の拠点病院（信州大学、日本医科大学、千葉大学、広島大学）、国立医薬品食品衛生研究所、木原財団、アステラス製薬、及び第一三共において、各研究倫理委員会の承認を得て収集・解析した。
　医薬品による間質性肺炎の発症が疑われた患者に対して薬剤性間質性肺炎の急性期（最悪期付近）および回復期に採血を上記の拠点病院にて行った。入院時は早朝空腹時に、外来時は随時、採血・採尿した。血液検体は、各拠点病院において、患者の同意の下、血漿採取用の7 mLのEDTA-2K採血管を用いて採血を行い、速やかに混和後、1,300 g×10分（15℃～20℃）遠心分離を行った。また、血清採取用の凝固促進用シリカ微粒子採血管を用いて採決を行い、速やかに混和、室温で60分静置後、1,300 g×10分（15℃～20℃）遠心分離を行った。採取した血漿及び血清は-80℃にて凍結保存した。尿検体は、採尿用の紙コップを用いて中間尿を採取し、1,300 g×10分（15℃～20℃）で遠心分離を行い、-80℃にて凍結保存した。
　血漿検体は、薬剤性間質性肺炎の患者検体において、画像診断において、びまん性肺胞傷害（DAD）パターンを呈する症例の急性期に採取された21例、それ以外のパターンを呈する症例の急性期に採取された83例、薬剤性間質性肺炎の患者の回復期に採取された65例、薬剤性間質性肺炎を発症した患者と同様の医薬品を投与され3カ月以上薬剤性間質性肺炎を発症しなかった患者から採取された31例、肺がん患者から採取された74例、真菌・ウイルス性肺炎患者から採取された2例、細菌性肺炎患者から採取された17例、非結核性好酸菌症患者から採取された20例、特発性間質性肺炎患者から採取された41例、膠原病肺患者から採取された27例、慢性閉塞性肺疾患（COPD）患者から採取された15例、気管支喘息患者から採取された12例、が存在し、LPC分子群の解析に供した。
血清検体は、薬剤性間質性肺炎の患者検体において、画像診断において、びまん性肺胞傷害（DAD）パターンを呈する症例の急性期に採取された21例、それ以外のパターンを呈する症例の急性期に採取された81例、薬剤性間質性肺炎の患者の回復期に採取された62例、薬剤性間質性肺炎を発症した患者と同じ医薬品を投与され3カ月以上薬剤性間質性肺炎を発症しなかった患者から採取された30例、肺がん患者から採取された70例、細菌感染症患者から採取された15例、非結核性好酸菌症患者から採取された21例、特発性間質性肺炎患者から採取された45例、膠原病肺患者から採取された26例、慢性閉塞性肺疾患（COPD）患者から採取された15例、気管支喘息患者から採取された13例、が存在し、キヌレニン経路分子群の解析に供した。
尿検体は、薬剤性間質性肺炎の患者検体において、画像診断において、びまん性肺胞傷害（DAD）パターンを呈する症例の急性期に採取された10例、それ以外のパターンを呈する症例の急性期に採取された33例、薬剤性間質性肺炎の患者の回復期に採取された32例、が存在し、quinolinic acidの解析に供した。
（２）薬剤性間質性肺炎バイオマーカー候補代謝物の選定
　薬剤性間質性肺炎のバイオマーカー候補代謝物は、疎水性代謝物を網羅的に解析するリピドミクス解析と親水性代謝物を網羅的に解析するメタボローム解析を用いた探索・検証によって選定した。また、探索にはDADパターンを呈する9症例を含む、薬剤性間質性肺炎急性期症例45例、薬剤性間質性肺炎回復期症例33症例を、検証には、探索と一部検体を重複して、DADパターンを呈する16症例を含む、薬剤性間質性肺炎急性期症例60例、薬剤性間質性肺炎回復期症例34症例を用いた。探索の結果、疎水性代謝物では、DADパターンを呈する症例で、有意確率p < 0.05以下、かつ、効果量の絶対値0.8以上を示す有望なバイオマーカー候補として117分子が同定され、特にLPC分子群が有意確率pが低く、高い効果量を示し、検証の結果、6分子のLPC(LPC(14:0)、LPC(16:1)、LPC(17:0)、LPC(18:0)、LPC(18:2)、LPC(20:5)) が有意確率p < 0.05以下、かつ、効果量の絶対値0.8以上を示した。さらに、他の検出可能であった全てのLPC分子（LPC(16:0)、LPC(18:1)、LPC(20:3)、LPC(20:4)、LPC(22:6)）において同様の傾向が認められた。そこで、LPC分子群を薬剤性間質性肺炎バイオマーカーとして、標準品が入手可能かつ存在量が多い8種について定量し、評価を実施した。一方親水性代謝物では、探索の結果、DADパターンを呈する症例で、有意確率p < 0.05以下、かつ、効果量の絶対値0.8以上を示す有望なバイオマーカー候補として14分子が同定され、検証の結果、6分子 (phenylalanyl-tryptophan、tryptophan、kynurenine、citrulline、glycerophosphocholine、histidine)が有意確率p < 0.05以下、かつ、効果量の絶対値0.8以上を示した。さらに、tryptophan、kynurenineと同様にキヌレニン経路に属する分子であるquinolinic acidについても同様の傾向が認められた。そこで、キヌレニン経路分子群を薬剤性間質性肺炎バイオマーカーとして、標準品が入手可能かつ存在量が多い、tryptophan、kynurenine、quinolinic acidについて定量し、評価を実施した。
（３）バイオマーカーの定量手法
　LPC分子群の測定・解析は、ThermoFisher社の高速液体クロマトグラフィー（LC; U3000）/質量分析計（MS; TSQ Quantiva）を用いて独自に開発した分析法を用いて行った。サンプル調製は、血漿5 μlと、内部標準物質 (生体中から検出されないLPC（12:0）を2 ng/mlで添加したMeOHを混和し、0.22 umフィルタープレートを通液してタンパク成分を除去した。サンプル液は3 μlをLC/MSへ導入した。LC条件は以下を用いた。移動相Aには10 mMギ酸アンモニア水、移動相Bには10 mMギ酸アンモニアを添加した水：イソプロパノール（1:100）、分離カラムはInertCore C18（2.4 μm pore, 2.1 x 50 mm, GL Science）を50℃に熱して使用した。初期条件はB 35%に設定し、2.5分でB 100%まで上昇、3.4分までB 100%を維持、3.41分でB 35%まで下降、その後5分までB 35%を維持し平衡化を行った。分析時間中の0分から0.1分、0.5分から2.9分、4.3分から5分までをMSに導入し、それ以外の時間帯は廃液ラインにバルブを用いて切り替え廃液した。MS条件は以下を用いた。イオンソースタイプはHESI（heated electrospray ionization）、イオンモードはpositive ion mode、Spray voltageは3500 V、Sheath Gasは40 Arb、Aux Gasは10 Arb、Sweep Gasは1 Arb、Ion Transfer Tube Tempは350 ℃、Vaporizer Tempは250 ℃に設定し、表１の各イオンに対するPrecursor ionとProduct ionによるSRM測定を用いた。Cycle timeは1sec、RF Lensは100 V、Q1 Resolutionは0.7 FWHM、Q3 Resolutionは0.7 FWHM、CID Gasは1.5 mTorr、Chrom Filterは3 secを用いた。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000003
 　測定分子の検量線範囲は、LPC(16:0)が1 μg/mL - 200 μg/mL、LPC(18:0)及びLPC(18:1)が0.4 μg/mL - 80 μg/mL、LPC(14:0)、LPC(15:0)及びLPC(17:0)が20 ng/mL - 4000 ng/mL、LPC(19:0)及びLPC(20:0)が2 ng/mL - 400 ng/mLに設定し、分析単位ごとに4種類のQuality Control (QC)試料を用いて、その相対真度及び精度を算出し、それぞれ15%以下となった分析単位のデータを用いた。
Kynurenine分子及びTryptophan分子の測定・解析は、ThermoFisher社の高速液体クロマトグラフィー（LC; U3000）/質量分析計（MS; TSQ Quantiva）を用いて独自に開発した分析法を用いて行った。サンプル調製は、血清50 μlを水50 μlと混和し、さらに内部標準物質(測定対象としたkynurenine及びtryptophanの安定同位体（kynurenine-d6及びtryptophan-d5）を各12.5及び100 ng/mlで添加したMeOHと混和し、0.22 umフィルタープレートを通液してタンパク成分を除去した。その後C18を充填剤とした除脂質フィルタープレートを通液して脂質成分を除去した。回収したサンプル液を3倍量の水で希釈し、5 μlをLC/MSへ導入した。LC条件は以下を用いた。移動相Aには0.3 %ギ酸水、移動相Bには0.3 %ギ酸メタノール、分離カラムはTriart Phenyl（1.9 μm pore, 2.1 x 100 mm, YMC）を45℃に加温して使用した。初期条件はB 20%に設定し、0.5分まで維持後、2.5分でB 100%まで上昇、4分までB 100%を維持、4.1分でB 20%まで下降、その後5分までB 20%を維持し平衡化を行った。分析時間中の1.2分から3.5分までをMSに導入し、それ以外の時間帯は廃液ラインにバルブを用いて切り替え廃液した。MS条件は以下を用いた。イオンソースタイプはHESI（heated electrospray ionization）、イオンモードはpositive ion mode、Spray voltageは3500 V、Sheath Gasは40 Arb、Aux Gasは10 Arb、Sweep Gasは1 Arb、Ion Transfer Tube Tempは350 ℃、Vaporizer Tempは250 ℃に設定し、表２の各イオンに対するPrecursor ionとProduct ionによるSRM測定を用いた。Cycle timeは0.5sec、RF Lensはcalibrateした値、Q1 Resolutionは0.7 FWHM、Q3 Resolutionは0.7 FWHM、CID Gasは1.5 mTorr、Chrom Filterは3 secを用いた。
Quinolinic acidの測定・解析は、ThermoFisher社のイオンクロマトグラフィー(IC; Dionex ICS-5000+)/高分解能型質量分析計（HRMS; Q-Exactive）を用いて独自に開発した分析法を用いて行った。本血中濃度測定系では、血清中成分による顕著なマトリックス効果が確認されたため、検量線試料の調製には牛血清アルブミン溶液等の代替マトリックスではなく、正常ヒトプール血清を使用した。加えて、ヒト血清中には一定量のquinolinic acidが存在するため、本測定法では天然型のquinolinic acidとイオン化効率が同じであるquinolinic acid-d3を代替分子として検量線試料の調製を行ない、天然型quinolinic acidの測定値をquinolinic acid-d3の測定値で作製した検量線に代入することにより、その血中濃度の算出を行なった。サンプル調製は、、血清 20 μlを水 80 μlと混和し、さらに内部標準物質(hippuric acid-d5)を18.4 ng/mlで添加したMeOH 400 μlと混和し、0.22 μmフィルタープレートを通液してタンパク成分を除去した。その後C18を充填剤とした除脂質フィルタープレートを通液して脂質成分を除去した。回収したサンプル液100μlをエバポレーターで完全乾固し、蒸留水 80μl で再溶解した後、0.22 μm PVDFフィルターカラムに通液し、は 5μlをIC/MSへ導入した。IC条件は以下を用いた。移動相には水酸化カリウム(KOH)水溶液、分離カラムはDionex IonPac AS11-HC-4 μm IC column (2 × 250 mm, Thermo Fisher Scientific)を30℃に加温して使用した。初期条件はKOH濃度を10 mMに設定し、7分で100 mMまで上昇、8分まで100 mM維持、8.1分で10 mMまで下降、その後10分まで10 mMを維持し平衡化を行った。MS条件は以下を用いた。イオンソースタイプはHESI（heated electrospray ionization）、イオンモードはnegative ion mode、Spray voltageは-2000 V、Sheath Gasは40 Arb、Aux Gasは10 Arb、Sweep Gasは0 Arb、AUX Gas Heater Tempは300 ℃、Capillary Tempは350 ℃、RF Lensは35に設定し、表２の各イオンに対するPrecursor ionとProduct ionによるSRM測定を用いた。Automatic Gain Control(AGC) Targetは2×105、Maximum Injection time (IT)は100 msec、Isolation Window 1.0 m/z、Fixed First Massは50.0 m/z、Resolutionは17,500を用いた。尿中濃度測定においては、機器と主な分析条件は血中濃度と同様に行い、Precursor ionの精密質量によるFull scan測定を用いた。検体採取前の水分摂取量の違い等に起因する尿濃度の違いの補正は、内部標準物質で補正した各抽出成分のエリア値に対してprobabilistic quotient normalization(PQN)法を用いて行なった。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000004
 　測定分子の検量線範囲は、kynurenineが20 ng/mL - 4000 ng/mL、tryptophanが0.15 μg/mL - 30 μg/mL、quinolinic acid 3.3 ng/mL - 836 ng/mLに設定し、分析単位ごとに4種類のQuality Control (QC)試料を用いて、その相対真度及び精度を算出し、それぞれ15%以下となった分析単位のデータを用いた。
（４）薬剤性間質性肺炎バイオマーカーの性能（回復例との比較）
　図１は、疎水性薬剤性間質性肺炎バイオマーカー８種（LPC分子群；LPC(14:0)、LPC(15:0)、LPC(16:0)、LPC(17:0)、LPC(18:0)、LPC(18:1)、LPC(19:0)、LPC(20:0)）の血漿中濃度をドットプロットにて示したものである。いずれのLPC分子もDAD型薬剤性間質性肺炎急性期症例（A-DAD）において、薬剤性間質性肺炎回復期全症例（B）と比べ、有意に減少が認められた（A-DAD vs B）。また、薬剤性間質性肺炎急性期全症例（A）においても、薬剤性間質性肺炎回復期全症例と比べ、有意に減少が認められた（A vs B）。
図２は、親水性薬剤性間質性肺炎バイオマーカー３種（キヌレニン経路分子群；kynurenine、tryptophan、quinolinic acid）の血清中濃度をドットプロットにて示したものである。Kynurenine、tryptophan及びquinolinic acid分子はDAD型薬剤性間質性肺炎急性期症例（A-DAD）において、薬剤性間質性肺炎回復期全症例（B）と比べ、それぞれ有意に増加（kynurenine及びquinolinic acid）及び（Tryptophan）が認められた（A-DAD vs B）。また、薬剤性間質性肺炎急性期全症例（A）においても、薬剤性間質性肺炎回復期全症例と比べ、それぞれ有意に増加及び減少が認められた（A vs B）。
図３は、quinolinic acidの尿中濃度をドットプロットにて示したものである。Quinolinic acid分子はDAD型薬剤性間質性肺炎急性期症例（A-DAD）において、薬剤性間質性肺炎回復期全症例（B）と比べ、有意に増加が認められた（A-DAD vs B）。また、薬剤性間質性肺炎急性期全症例（A）においても、薬剤性間質性肺炎回復期全症例と比べ、有意に増加が認められた（A vs B）。
　表３は、これらの薬剤性間質性肺炎バイオマーカーの性能を評価するために、血漿中あるいは血清中濃度を用いて、特に重症度の高いDAD型薬剤性間質性肺炎急性期症例（A-DAD）と薬剤性間質性肺炎回復期全症例（B）の識別能をROC解析によって得られるAUC値をまとめた（B）。LPC分子群は0.903-0.938、kynurenine分子は0.912、tryptophan分子は0.800、quinolinic acid分子は0.884、kynurenine/tryptophanは0.943を示し、良好な識別性能を示した。表４は、同じく血漿中あるいは血清中濃度を用いて、薬剤性間質性肺炎急性期症例全症例（A）と薬剤性間質性肺炎回復期全症例（B）の識別能をROC解析によって得られるAUC値をまとめた（B）。LPC分子群は0.714-0.821、kynurenine分子は0.827、tryptophan分子は0.747、quinolinic acid分子は0.808、kynurenine/tryptophanは0.870を示し、LPC分子の一部、kynurenine、quinolinic acid及びkynurenine/tryptophanで良好な識別性能を示した。
（５）薬剤性間質性肺炎バイオマーカーの性能（非発症例との比較）
　いずれの血漿中LPC分子もDAD型薬剤性間質性肺炎急性期症例（A-DAD）において、同系薬剤服薬薬剤性間質性肺炎非発症例（C）と比べ、有意に減少が認められた（図１、A-DAD vs C）。また、薬剤性間質性肺炎急性期全症例（A）においても、同系薬剤服薬薬剤性間質性肺炎非発症例（C）と比べ、有意に減少が認められた（図１、A vs C）。
　血清中kynurenine、tryptophan及びquinolinic acid分子はDAD型薬剤性間質性肺炎急性期症例（A-DAD）において、同系薬剤服薬薬剤性間質性肺炎非発症例（C）と比べ、それぞれ有意に増加（kynurenine及びquinolinic acid）及び減少（Tryptophan）が認められた（図２、A-DAD vs C）。また、薬剤性間質性肺炎急性期全症例（A）においても、同系薬剤服薬薬剤性間質性肺炎非発症例（C）と比べ、それぞれ有意に増加（kynurenine及びquinolinic acid）及び減少（Tryptophan）が認められた（図２、A vs C）。
　血漿中あるいは血清中濃度を用いたDAD型薬剤性間質性肺炎急性期症例（A-DAD）との判別に関するROC解析のAUC値について、LPC分子群は0.929-0.971、kynurenine分子は0.938、tryptophan分子は0.802、quinolinic acid分子は0.955、kynurenine/tryptophanは0.963を示し、良好な識別性能を示した（表３、C）。血漿中あるいは血清中濃度を用いた薬剤性間質性肺炎急性期症例全症例（A）との判別に関するROC解析のAUC値について、LPC分子群は0.743-0.849、kynurenine分子は0.851、tryptophan分子は0.760、quinolinic acid分子は0.901、kynurenine/tryptophanは0.895を示し、LPC分子の一部、kynurenine、quinolinic acid及びkynurenine/tryptophanで良好な識別性能を示した（表４、C）。
（６）薬剤性間質性肺炎バイオマーカーの性能（肺疾患との比較）
　いずれの血漿中LPC分子もDAD型薬剤性間質性肺炎急性期症例（A-DAD）において、肺がん症例（D）、肺非結核性抗酸菌症症例（G）、特発性間質性肺炎症例（H）、膠原病肺症例（I）、COPD症例（J）、気管支喘息症例（K）と比べ、有意に減少が認められた（図１、A-DAD vs D-K）。また、薬剤性間質性肺炎急性期全症例（A）においても、肺がん症例（D）に対しては全LPC分子群が、肺非結核性抗酸菌症症例（G）に対してはLPC(19:0)、LPC(20:0)が、特発性間質性肺炎症例（H）に対してはLPC(14:0)、LPC(15:0)、LPC(16:0)、LPC(17:0)、LPC(18:0)、LPC(18:1)、LPC(20:0)が、膠原病肺症例（I）に対しては全LPC分子群が、COPD症例（J）に対してはLPC(14:0)、LPC(16:0)、LPC(18:0)、LPC(18:1)、LPC(20:0)が、気管支喘息症例（K）に対してはLPC(14:0)が、有意な減少が認められた（図１、A vs D-K）。
　血清中kynurenine及びquinolinic acid分子はDAD型薬剤性間質性肺炎急性期症例（A-DAD）において、肺がん症例（D）、細菌感染症症例（F）、肺非結核性抗酸菌症症例（G）、特発性間質性肺炎症例（H）、膠原病肺症例（I）、COPD症例（J）、気管支喘息症例（K）と比べ、有意に増加が認められ、tryptophan分子においても、細菌感染症症例（F）以外で有意な減少が認められた（図２、A-DAD vs D-K）。また、薬剤性間質性肺炎急性期全症例（A）においても、肺疾患に対し、それぞれDAD型と同様に有意な増加及び減少が認められた（図２、A vs D-K）。
　血漿中あるいは血清中濃度を用いたDAD型薬剤性間質性肺炎急性期症例（A-DAD）との判別に関するROC解析のAUC値について、LPC分子群は肺がん症例（D）、肺非結核性抗酸菌症症例（G）、特発性間質性肺炎症例（H）、膠原病肺症例（I）、COPD症例（J）、気管支喘息症例（K）に対し、0.880-0.923（D）、0.900-0.978（G）、0.916-0.96（H）、0.892-0.944（I）、0.937-0.981（J）、0.942－0.972（K）を示し、kynurenine分子は肺がん症例（D）、細菌感染症症例（F）、肺非結核性抗酸菌症症例（G）、特発性間質性肺炎症例（H）、膠原病肺症例（I）、COPD症例（J）、気管支喘息症例（K）に対し、0.910（D）、0.883（F）、0.941（G）、0.894（H）、0.856（I）、0.853（J）、0.954（K）を示し、tryptophan分子は肺非結核性抗酸菌症症例（G）、特発性間質性肺炎症例（H）、気管支喘息症例（K）に対し、0.824（G）、0.806（H）、0.885（K）を示し、quinolinic acid分子は肺がん症例（D）、細菌感染症症例（F）、肺非結核性抗酸菌症症例（G）、特発性間質性肺炎症例（H）、膠原病肺症例（I）、COPD症例（J）、気管支喘息症例（K）に対し、0.937（D）、0.918（F）、0.892（G）、0.872（H）、0.902（I）、0.908（J）、0.980（K）を示し、kynurenine/tryptophanは肺がん症例（D）、細菌感染症症例（F）、肺非結核性抗酸菌症症例（G）、特発性間質性肺炎症例（H）、膠原病肺症例（I）、COPD症例（J）、気管支喘息症例（K）に対し、0.925（D）、0.910（F）、0.969（G）、0.923（H）、0.908（I）、0.900（J）、0.977（K）を示し、いずれも良好な識別性能を示した（表３、D-K）。
　血漿中あるいは血清中濃度を用いた薬剤性間質性肺炎急性期症例全症例（A）との判別に関するROC解析のAUC値について、LPC分子群は、肺非結核性抗酸菌症症例（G）、特発性間質性肺炎症例（H）、膠原病肺症例（I）、COPD症例（J）、気管支喘息症例（K）に対し、0.671-0.811（G）、0.689-0.802（H）、0.699-0.823（I）、0.709-0.812（J）、0.736－0.834（K）を示し、一部の分子で良好な識別性能を示した（表４、D-K）。一方、kynurenine分子は肺がん症例（D）、肺非結核性抗酸菌症症例（G）、特発性間質性肺炎症例（H）、気管支喘息症例（K）に対し、0.820（D）、0.866（G）、0.816（H）、0.864（K）を示し、tryptophan分子は気管支喘息症例（K）に対し、0.866（K）を示し、quinolinic acid分子は肺がん症例（D）、気管支喘息症例（K）に対し、0.861（D）、0.925（K）を示し、kynurenine/tryptophanは肺がん症例（D）、細菌感染症症例（F）、肺非結核性抗酸菌症症例（G）、特発性間質性肺炎症例（H）、膠原病肺症例（I）、COPD症例（J）、気管支喘息症例（K）に対し、0.847（D）、0.817（F）、0.902（G）、0.854（H）、0.827（I）、0.827（J）、0.919（K）を示し、良好な識別性能を示した（表４、D-K）。

Figure JPOXMLDOC01-appb-T000005
 B, 薬剤性間質性肺炎回復期全症例、C, 同系薬剤服薬薬剤性間質性肺炎非発症例、D, 肺がん症例、E, 真菌性肺炎症例、F, 細菌感染症症例、G, 肺非結核性抗酸菌症症例、H, 特発性間質性肺炎症例、I, 膠原病肺症例、J, COPD症例、K, 気管支喘息症例

ROC曲線解析から得られるAとB-Kとの鑑別・判別のためのカットオフ値は、各ROC曲線解析の結果から、代謝物のカットオフ値をYouden’s Index［感度-（100-特異度）］が最大となる濃度（感度と特異度が最も高くなる値）を指標にして求める。下記の表中の数値は、上段：適正な値、下段：好ましい値。表中の±15%は、分析系などのばらつきなどを考慮した変動値であり、適正な値の数値範囲の上限及び下限のそれぞれについて、また好ましい値についても、±15%の変動がありうる。
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000006
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000007
ROC曲線解析から得られるAとB-Kとの鑑別・判別のためのカットオフ値は、各ROC曲線解析の結果から、代謝物のカットオフ値をYouden’s Index［感度-（100-特異度）］が最大となる濃度（感度と特異度が最も高くなる値）を指標にして求める。下記の表中の数値は、上段：適正な値、下段：好ましい値。表中の±15%は、分析系などのばらつきなどを考慮した変動値であり、適正な値の数値範囲の上限及び下限のそれぞれについて、また好ましい値についても、±15%の変動がありうる。
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000008
　本明細書で引用した全ての刊行物、特許および特許出願をそのまま参考として本明細書にとり入れるものとする。
　本発明は、体外診断薬、臨床検査などに利用できる。

Claims (11)

  1. キヌレニン経路に含まれる分子群より選択される少なくとも１個の分子及び/又はリゾホスファチジルコリン（LPC）分子群より選択される少なくとも１個の分子について、被験者由来の試料におけるレベルを測定することを含む、薬剤性間質性肺炎の検査方法。
  2. 測定値が薬剤性間質性肺炎の病勢診断を補助する請求項１記載の方法。
  3. 測定値が薬剤性間質性肺炎の特異的診断を補助する請求項１記載の方法。
  4. 薬剤性間質性肺炎がDAD型薬剤性間質性肺炎である請求項１～３のいずれかに記載の方法。
  5. キヌレニン経路に含まれる分子群が、キヌレニン、キノリン酸、3-ヒドロキシキヌレニン、3-ヒドロキシアントラニル酸、2-アミノ-3-カルボキシムコン酸セミアルデヒド、ピコリン酸及びトリプトファンを含む請求項１～４のいずれかに記載の方法。
  6. LPC分子群が、LPC(14:0), LPC(15:0), LPC(16:0), LPC(16:1), LPC(17:0), LPC(18:0), LPC(18:1), LPC(18:2), LPC(19:0), LPC(20:0), LPC(20:3), LPC(20:4), LPC(20:5)及びLPC(22:6)を含む請求項１～５のいずれかに記載の方法。
  7. 薬剤性間質性肺炎の診断方法であって、
    a1. 被験者から試料を得ること、
    b1. キヌレニン経路に含まれる分子群より選択される少なくとも１個の分子及び/又はリゾホスファチジルコリン（LPC）分子群より選択される少なくとも１個の分子について、被験者由来の試料におけるレベルを測定すること、及び
    c1. b1の測定値及び/又は２つの分子のb1の測定値から算出した比に基づき、薬剤性間質性肺炎の発症の有無を判定すること
    を含む前記方法。
  8. 薬剤性間質性肺炎の診断方法であって、
    a1. 被験者から試料を得ること、
    b1. キヌレニン経路に含まれる分子群より選択される少なくとも１個の分子及び/又はリゾホスファチジルコリン（LPC）分子群より選択される少なくとも１個の分子について、被験者由来の試料におけるレベルを測定すること、及び
    c1. b1の測定値及び/又は２つの分子のb1の測定値から算出した比に基づき、薬剤性間質性肺炎の病勢を判定すること
    を含む前記方法。
  9. 薬剤性間質性肺炎の診断及び治療方法であって、
    a1. 被験者から試料を得ること、
    b1. キヌレニン経路に含まれる分子群より選択される少なくとも１個の分子及び/又はリゾホスファチジルコリン（LPC）分子群より選択される少なくとも１個の分子について、被験者由来の試料におけるレベルを測定すること、
    c1. b1の測定値及び/又は２つの分子のb1の測定値から算出した比に基づき、薬剤性間質性肺炎の発症の有無を判定すること、及び
    d1. 薬剤性間質性肺炎を発症している可能性が高いと判定された被験者に薬剤性間質性肺炎の治療を施すこと
    を含む前記方法。
  10. 薬剤性間質性肺炎の診断及び治療方法であって、
    a1. 被験者から試料を得ること、
    b1. キヌレニン経路に含まれる分子群より選択される少なくとも１個の分子及び/又はリゾホスファチジルコリン（LPC）分子群より選択される少なくとも１個の分子について、被験者由来の試料におけるレベルを測定すること、
    c1. b1の測定値及び/又は２つの分子のb1の測定値から算出した比に基づき、薬剤性間質性肺炎の病勢を判定すること、及び
    d1. 薬剤性間質性肺炎の急性期にある可能性が高いと判定された被験者に薬剤性間質性肺炎の治療を施すこと
    を含む前記方法。
  11. キヌレニン経路に含まれる分子群より選択される少なくとも１個の分子及び/又はリゾホスファチジルコリン（LPC）分子群より選択される少なくとも１個の分子について、被験者由来の試料におけるレベルを測定することができる試薬を含む、薬剤性間質性肺炎の検査のためのキット。
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