WO2010041637A1 - 液体クロマトグラフィ装置および液体クロマトグラフィ - Google Patents

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path switching
column
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敏克 酒井
明 瀬崎
高木　毅
卓也 與谷
高原　誠
岡　孝之
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アークレイ株式会社
積水メディカル株式会社
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Definitions

  • the present invention relates to a liquid chromatography apparatus and liquid chromatography used for blood tests, for example.
  • FIG. 14 shows an example of a conventional liquid chromatography apparatus (see, for example, Patent Document 1).
  • the liquid chromatography apparatus X shown in the figure includes a sample preparation means 91, a flow path switching valve 92, a manifold 93, a liquid feed pump 94, an analysis unit 95, and a control means 96.
  • the sample preparation means 91 generates a sample by diluting the specimen S such as blood with the diluent Ld. A certain amount of this sample is stored in the injection loop 92 b of the flow path switching valve 92.
  • the analysis unit 95 includes a prefilter 95a, a column 95b, and a photometric unit 95c. After a certain amount of sample is adsorbed on the packing material of the column 95b, the eluent La is fed from the manifold 93 by the liquid feed pump 94. The eluent La is supplied to the column 95b via the flow path switching valve 92. The sample adsorbed on the filler is desorbed by the eluent La and separated into each component in the column 95b.
  • the photometric unit 95c can analyze each separated component, for example, by measuring the absorbance.
  • the control means 96 performs drive control of the sample preparation means 91, the flow path switching valve 92, the manifold 93, and the analysis unit 95.
  • the eluent Lb is supplied from the manifold 93 to the column 95b via the flow path switching valve 92.
  • eluent Lb for example, one having a higher salt concentration than eluent La is used.
  • the eluent Lc is supplied from the manifold 93 via the flow path switching valve 92 to the column 95b.
  • the eluent Lc one having a lower salt concentration than the eluents La and Lb is used. Thereby, the salt concentration increased by the supply of the eluent Lb is reduced. After that, by supplying the eluent La again, the salt concentration of the column 95b can be adjusted to a concentration suitable for analysis.
  • the salt concentration Ds of the column 95b to which the eluents La, Lb, and Lc are sequentially supplied has a history as shown in FIG. That is, the column 95b switches from the eluent La to the eluent Lb at time T1, from the eluent Lb to the eluent Lc at time T2, and from the eluent Lc to the eluent La at time T3.
  • These eluents La, Lb, and Lc are switched by the manifold 93. In the switching operation by the manifold 93, it is inevitable that the eluents La, Lb, and Lc are mixed with each other.
  • the salt concentration does not switch instantaneously at times T1, T2, and T3, and a history of gradual change is followed. As a result, it took a considerable time until the salt concentration of the column 95b returned to a concentration suitable for analysis. In addition, a considerable amount of eluent was consumed before returning to the concentration of each eluent.
  • the present invention has been conceived under the circumstances described above, and it is an object of the present invention to provide a liquid chromatography apparatus and a liquid chromatography capable of shortening analysis time and reducing eluent consumption. To do.
  • the liquid chromatography apparatus includes a sample preparation means for preparing a sample from a specimen, a column for separating the components of the sample, and two or more types of eluents as a mobile phase. Separated by the column, an eluent supply means for supplying to the column, a first flow path switching valve capable of introducing a predetermined amount of the sample into the column and introducing the eluent into the column Controls the operation of the analysis means for analyzing the sample liquid comprising the sample components and the eluent, the sample preparation means, the eluent supply means, the first flow path switching valve, and the analysis means.
  • Control means, and the eluent supply means supplies two or more types of eluents to the first flow path switching valve in an unmixed state.
  • the first and second flow path switching valves of the present invention are switching valves such as injection valves, three-way valves, four-way valves, five-way valves, six-way valves, piston valves, plug valves, control valves, and Y-type valves. Etc., and has a structure that can be controlled neatly without mixing a plurality of eluents.
  • the eluent supply means has a second flow that can supply two types of first and second eluents supplied to different ports to the first flow path switching valve.
  • a flow path switching valve, and the control means supplies the first eluent to the column via the first flow path switching valve, so that the second flow path is provided during or after the analysis of the test liquid.
  • an injection loop for holding a fixed amount of the second eluent provided in the second flow path switching valve is provided in the first eluent. Control is continued to supply the first eluent to the injection loop until a certain amount of the second eluent is completely discharged from the injection loop while being connected to the path leading to the flow path switching valve.
  • an injection loop for holding a fixed amount of the second eluent provided in the second flow path switching valve is provided in the first eluent.
  • the eluent supply means includes a constant capacity pump that supplies the first eluent to the second flow path switching valve.
  • an object is to measure glycated hemoglobin using blood as the specimen.
  • the liquid chromatography provided by the second aspect of the present invention includes a step of preparing a sample from a specimen, a step of supplying the sample to a column via a first flow path switching valve, and two or more types as mobile phases A step of supplying the eluent to the column via the first flow path switching valve, and a step of supplying to the analysis means a test solution comprising the components of the sample and the eluent separated by the column. Measuring the absorbance of the test solution by the analyzing means, and supplying the two or more types of eluents to the first flow path switching valve in an unmixed state.
  • a certain amount of the second eluent stored in the second flow path switching valve connected to the first flow path switching valve is provided during or after the step of measuring the absorbance. At least a part of the first eluent introduced into the second flow path switching valve from a port different from the second eluent subsequently to the column via the first flow path switching valve.
  • the method further includes the step of washing the column by supplying.
  • an injection loop provided in the second flow path switching valve for holding a certain amount of the second eluent is replaced with the first flow path switching. While being connected to the path leading to the valve, the first eluent is continuously supplied to the injection loop until a certain amount of the second eluent is completely discharged from the injection loop.
  • an injection loop provided in the second flow path switching valve for holding a certain amount of the second eluent is replaced with the first flow path switching.
  • the first eluent is supplied to the injection loop until a part of a certain amount of the second eluent is discharged from the injection loop while being connected to the path leading to the valve, and then to the injection loop.
  • the first eluent is supplied in a state where the remaining part of the second eluent is left and a path different from the injection loop is connected to the path leading to the first flow path switching valve.
  • the first eluent is supplied to the second flow path switching valve using a constant capacity pump.
  • an object is to measure glycated hemoglobin using blood as the specimen.
  • FIG. 1 is a system configuration diagram showing an example of a liquid chromatography apparatus according to the present invention. It is a conceptual diagram which shows the flow path of the liquid chromatography apparatus shown in FIG. In the liquid chromatography apparatus shown in FIG. 1, it is a conceptual diagram which shows the state which introduce
  • FIG. 2 is a system configuration diagram illustrating a state in which a six-way valve is rotated in the liquid chromatography apparatus illustrated in FIG. 1.
  • FIG. 2 is a conceptual diagram showing a state where a six-way valve is rotated in the liquid chromatography apparatus shown in FIG. 1.
  • FIG. 2 is a conceptual diagram showing delivery of an eluent in the liquid chromatography apparatus shown in FIG. 1.
  • FIG. 1 is a system configuration diagram showing an example of a liquid chromatography apparatus according to the present invention. It is a conceptual diagram which shows the flow path of the liquid chromatography apparatus shown in FIG. In the liquid chromatography apparatus shown in FIG.
  • FIG. 2 is a system configuration diagram illustrating a state in which a six-way valve is rotated in the liquid chromatography apparatus illustrated in FIG. 1.
  • FIG. 2 is a conceptual diagram showing a state where a six-way valve is rotated in the liquid chromatography apparatus shown in FIG. 1.
  • FIG. 2 is a conceptual diagram showing delivery of an eluent in the liquid chromatography apparatus shown in FIG. 1. It is a graph which shows the log
  • FIG. 1 shows an example of a liquid chromatography apparatus according to the present invention.
  • the liquid chromatography apparatus A includes a sample preparation means 1, a flow path switching valve 2, a delivery means 3, a flow path switching valve 4, an analysis unit 5, and a control means 6.
  • the liquid chromatography apparatus A performs liquid chromatography on a specimen S such as blood.
  • the sample preparation means 1 generates a sample to be subjected to liquid chromatography by diluting a predetermined amount of the sample S collected from the blood collection tube Ts with a diluent Ld collected from the bottle Bd at a predetermined magnification.
  • the sample preparation means 1 has, for example, a needle-shaped nozzle for collecting the specimen S from the blood collection tube Ts, a collection pipe for collecting the diluent Ld from the bottle Bd, and a mixing and stirring means for mixing them.
  • the flow path switching valve 2 has, for example, a six-way valve 21 and an injection loop 22.
  • the hexagonal valve 21 has ports 21 a, 21 b, 21 c, 21 d, 21 e, 21 f and is rotatable with respect to the injection loop 22.
  • the ports 21a and 21b, the ports 21c and 21d, and the ports 21e and 21f are connected to each other by independent flow paths.
  • the port 21a is connected to the pipe P4
  • the port 21b is connected to the pipe P3
  • the ports 21c and 21f are connected to the injection loop 22
  • the port 21d is connected to the pipe P2
  • the port 21e is connected to the pipe P1.
  • the injection loop 22 is for storing a certain amount of the sample. In the present embodiment, the capacity of the injection loop 22 is, for example, about 3.4 ⁇ L.
  • the delivery means 3 and the flow path switching valve 4 constitute the eluent supply means referred to in the present invention.
  • the delivery means 3 is for delivering the eluent La contained in the bottle Ba to the flow path switching valve 4 and is provided in the pipe P5.
  • the delivery means 3 includes a plunger pump 31 and a damper 32.
  • the plunger pump 31 has a structure including a reciprocating plunger and a check valve, and corresponds to an example of a constant capacity pump.
  • the damper 32 functions to relieve pulsation generated by the plunger pump 31.
  • the flow path switching valve 4 has a six-way valve 41 and an injection loop 42, for example.
  • the six-way valve 41 has ports 41a, 41b, 41c, 41d, 41e, and 41f, and is rotatable with respect to the injection loop 42.
  • the ports 41a and 41b, the ports 41c and 41d, and the ports 41e and 41f are connected to each other by independent flow paths.
  • the port 41a is connected to the delivery means 3 via the pipe P5
  • the port 41b is connected to the flow path switching valve 2 via the pipe P3
  • the ports 41c and 41f are connected to the injection loop 42
  • the port 41d is connected to the pipe P7.
  • the port 41e is connected to the bottle Bb containing the eluent Lb through the pipe P6.
  • the eluent Lb has a salt concentration higher than that of the eluent La.
  • the injection loop 42 is for storing a certain amount of the eluent Lb. In the present embodiment, the capacity of the injection loop 42 is, for example, about 142 ⁇ L. This corresponds to the amount sent by the sending means 3 in 5 seconds.
  • the analysis unit 5 is connected to the flow path switching valve 2 through the pipe P4 and is a place for performing analysis by liquid chromatography.
  • the analysis unit 5 includes a prefilter 51, a column 52, and a photometric unit 53.
  • the pre-filter 51 prevents unwanted materials from entering the column 52.
  • the column 52 holds a filler for adsorbing the introduced sample.
  • the adsorbed sample is desorbed by the eluent La. Further, the desorbed sample and the eluent La flow through the column 52 as a desorbed liquid and are discharged.
  • the photometric unit 53 is configured to analyze the components of the sample by measuring the absorbance of the desorption liquid flowing from the column 53, for example, and corresponds to an example of the analyzing means referred to in the present invention.
  • the control means 6 controls the driving of the sample preparation means 1, the flow path switching valve 2, the delivery means 3, the flow path switching valve 4, and the analysis unit 5, respectively, for example for transmitting and receiving signals to and from the CPU and memory. It consists of an interface.
  • the control means 6 controls the processing for performing the analysis of the sample and the next analysis described below.
  • FIG. 2 schematically shows the flow path of the liquid chromatography apparatus A.
  • the sample SL is prepared by diluting the specimen S with the diluent Ld in the sample preparation means 1.
  • the sample SL is introduced into the injection loop 22.
  • This introduction is performed by, for example, a suction pump (not shown) arranged on the downstream side of the pipe P2.
  • the eluent Lb is introduced into the injection loop 42.
  • This introduction is performed by, for example, a suction pump (not shown) arranged on the downstream side of the pipe P7.
  • the six-way valve 21 of the flow path switching valve 2 is rotated, for example, 60 ° counterclockwise. Accordingly, the ports 21a and 21d are connected to the injection loop 22, the port 21b is connected to the pipe P4, the port 21c is connected to the pipe P3, the port 21e is connected to the pipe P2, and the port 21f is connected to the pipe P1.
  • the plunger pump 31 is driven to send the eluent La from the sending means 3 to the flow path switching valve 4.
  • the eluent La goes to the flow path switching valve 2 as shown in FIG. 5 via the ports 41a and 41b and the pipe P3.
  • a certain amount of sample SL stored in the injection loop 22 together with the eluent La is sent to the analysis unit 5.
  • the specific component contained in the sample SL is analyzed by the photometric unit 53.
  • the column 52 is attached with other components that are not the analysis target in addition to the specific component that is the analysis target. These other components are necessary for the measurement result under analysis or interfere with the subsequent analysis. For this reason, the control means 6 performs control for eluting and washing these other components.
  • the six-way valve 41 of the flow path switching valve 4 is rotated, for example, 60 ° clockwise.
  • the ports 41a and 41d are connected to the injection loop 42
  • the port 41b is connected to the pipe P5
  • the port 41c is connected to the pipe P3
  • the port 41e is connected to the pipe P7
  • the port 41f is connected to the pipe P6. It becomes.
  • the eluent La is delivered from the delivery means 3 toward the flow path switching valve 4.
  • a certain amount of eluent Lb stored in the injection loop 42 is sent out to the pipe P3.
  • the eluent Lb looks like it is sandwiched between the eluent La in the pipe P3 and the eluent La sent by the delivery means 3.
  • FIG. 10 shows the history of the salt concentration Ds of the column 52 in the above-described analysis and the processing for the next analysis.
  • Time T1 is the time when the tip of the eluent Lb shown in FIG. 9 has reached the column 52
  • time T2 is the time when the rear end of the eluent Lb has reached the column 52.
  • the salt concentration Ds changes sharply and shifts to the salt concentrations of the eluents La and Lb. The reason for this is as follows.
  • eluents La and Lb are supplied to the flow path switching valve 4 from separate ports. For this reason, there is no turbidity in the path leading to the flow path switching valve 4.
  • the eluent La is interrupted with a certain amount of eluent Lb by the rotation of the six-way valve 41.
  • the eluent La and the eluent Lb may only be turbid at the ends of the pipe P3 and the injection loop 42 having a very small diameter. This turbidity is very small as compared to the turbidity in the manifold 93 and the liquid feed pump 94 shown in FIG.
  • the salt concentration Ds can be sharply changed at time T1 and time T2.
  • the salt concentration in the column 52 is abruptly changed, it is not necessary to redundantly elapse the time until the salt concentration Ds returns to the desired concentration (salt concentration of the eluent La).
  • the system including the column 52 can be quickly returned to a state suitable for the next analysis, and the analysis time of liquid chromatography can be shortened. In addition, consumption of the eluent can be reduced.
  • control means 6 of the liquid chromatography apparatus A performs a control different from the above-described embodiment for the process for performing the next analysis.
  • the eluent La is sent out by the sending means 3 from the state shown in FIG. In this delivery, as shown in FIG. 11, the delivery of the eluent La is continued until a part of a predetermined amount of the eluent Lb stored in the injection loop 42 is discharged from the injection loop 42.
  • the plunger of the plunger pump 31 that is a constant displacement pump is reciprocated a predetermined number of times. Since the amount of the eluent La sent out while the plunger reciprocates once is constant (for example, 28 ⁇ L), the amount of the eluent La sent out when the plunger reciprocates a predetermined number of times is also constant.
  • the six-way valve 41 of the flow path switching valve 4 is rotated, for example, 60 ° counterclockwise. Then, the delivery of the eluent La by the delivery means 3 is continued. At this time, as shown in FIG. 13, the eluent Lb discharged from the injection loop 42 is sandwiched between the eluents La. Thereafter, the delivery of the eluent La by the delivery means 3 is further continued to elute and wash other components adhering to the column 52 with the eluent Lb, and the system including the column 52 is further removed from the eluent La. To make the column 52 and the like have a salt concentration suitable for the next analysis.
  • the history of the salt concentration Ds in the column 52 can be made similar to the history shown in FIG. 10, and the analysis time of liquid chromatography can be shortened.
  • switching between the rear end of the eluent Lb and the subsequent eluent La is based on the rotation of the six-way valve 41 of the flow path switching valve 4.
  • the contact time between the rear end of the eluent Lb and the eluent La is shortened as compared with the cases shown in FIGS.
  • the six-way valve 41 is rotated before the fixed amount of the eluent Lb stored in the injection loop 42 is discharged.
  • the amount of Lb is even smaller than the amount in the embodiment described above. Thereby, the time from the time T1 to the time T2 can be further shortened, which is preferable for shortening the analysis time.
  • the plunger pump 31 which is a constant capacity pump, the amount of the eluent Lb discharged from the injection loop 42 in FIG. 11 can be accurately grasped by counting the number of reciprocations of the plunger. .
  • This has the advantage that the eluent Lb in a minimum amount can be supplied from the viewpoint of shortening the analysis time without being insufficient for elution and washing of the other components.
  • liquid chromatography apparatus and liquid chromatography according to the present invention are not limited to the above-described embodiments.
  • the specific configurations of the liquid chromatography apparatus and the liquid chromatography according to the present invention can be varied in design in various ways.
  • the first and second eluents referred to in the present invention are not limited to those having different salt concentrations, and for example, those having different hydrogen ion concentration indices pH may be used.

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Abstract

　液体クロマトグラフィ装置Ａは、試料作製手段１と、試料の成分を分離するカラム５２と、溶離液Ｌａ，Ｌｂをカラム５２に供給する送出手段３を含む溶離液送出手段と、カラム５２に一定量の上記試料と溶離液Ｌａ，Ｌｂとを導入可能である、流路切替バルブ２と、カラム５２によって分離された上記試料の成分と上記溶離液Ｌａとからなる被検液の分析を行う分析手段と、制御手段６と、を備えており、上記溶離液供給手段は、溶離液Ｌａ，Ｌｂを非混合状態で、流路切替バルブ２に供給する。このような構成により、分析時間の短縮および溶離液消費の減少を図ることが可能である。

Description

液体クロマトグラフィ装置および液体クロマトグラフィ
　本発明は、たとえば血液検査に用いられる液体クロマトグラフィ装置および液体クロマトグラフィに関する。
　有機化学、生化学、医学などの分野において、近年、試料の分析方法として液体クロマトグラフィ装置が多用されている。図１４は、従来の液体クロマトグラフィ装置の一例を示している（たとえば特許文献１参照）。同図に示す液体クロマトグラフィ装置Ｘは、試料作製手段９１、流路切替バルブ９２、マニホールド９３、送液ポンプ９４、分析部９５、および制御手段９６を備えている。試料作製手段９１は、血液などの検体Ｓを希釈液Ｌｄによって希釈することにより試料を生成する。この試料は、流路切替バルブ９２のインジェクションループ９２ｂに一定量が蓄えられる。流路切替バルブ９２の六方バルブ９２ａが図示された状態からたとえば回転すると、この一定量の試料が分析部９５に送出される。分析部９５は、プレフィルター９５ａ、カラム９５ｂ、および測光ユニット９５ｃを有している。一定量の試料をカラム９５ｂの充填材に吸着させた後に、マニホールド９３から送液ポンプ９４によって溶離液Ｌａが送液される。この溶離液Ｌａは、流路切替バルブ９２を介してカラム９５ｂへと供給される。充填材に吸着された上記試料は溶離液Ｌａにより脱着され、カラム９５ｂ内で各成分に分離される。測光ユニット９５ｃは、たとえば吸光度を測定することにより、分離された各成分を分析することができる。制御手段９６は、試料作製手段９１、流路切替バルブ９２、マニホールド９３、および分析部９５の駆動制御を行う。
　上記分析においても、カラム９５ｂには、分析対象以外のその他の成分が残存する。このその他の成分を洗い流すことを目的として、マニホールド９３から流路切替バルブ９２を介して溶離液Ｌｂをカラム９５ｂへと供給する。溶離液Ｌｂとしては、溶離液Ｌａよりもたとえば塩濃度が高いものが用いられる。この後に、再び上述した分析を行うためには、カラム９５ｂをはじめとする系を溶離液Ｌａ程度の塩濃度に戻す必要がある。この塩濃度の調整を行うために、マニホールド９３から流路切替バルブ９２を介して溶離液Ｌｃがカラム９５ｂへと供給される。溶離液Ｌｃは、溶離液Ｌａ，Ｌｂよりも塩濃度が低いものが用いられる。これにより、溶離液Ｌｂの供給によって高くなった塩濃度を低下させる。この後に再び溶離液Ｌａを供給することにより、カラム９５ｂの塩濃度を分析に適した濃度とすることができる。
　しかしながら、溶離液Ｌａ，Ｌｂ，Ｌｃが順に供給されたカラム９５ｂの塩濃度Ｄｓは、図１５に示すような履歴となる。すなわち、カラム９５ｂでは時刻Ｔ１において溶離液Ｌａから溶離液Ｌｂに、時刻Ｔ２において溶離液Ｌｂから溶離液Ｌｃに、時刻Ｔ３において溶離液Ｌｃから溶離液Ｌａにそれぞれ切り替わる。これらの溶離液Ｌａ，Ｌｂ，Ｌｃの切り替えは、マニホールド９３によってなされる。マニホールド９３での切り替え動作においては、溶離液Ｌａ，Ｌｂ，Ｌｃが互いに混ざってしまうことが避けられない。この混濁によって、時刻Ｔ１，Ｔ２，Ｔ３において塩濃度が瞬時に切り替わらず、徐々に変化する履歴をたどる。この結果、カラム９５ｂの塩濃度が分析に適した濃度に復帰するまで、相当の時間を要していた。また、各溶離液の濃度に復帰するまでには相当量の溶離液を消費していた。
特開２００７－２４０５００号公報
　本発明は、上記した事情のもとで考え出されたものであって、分析時間の短縮および溶離液消費の減少を図ることが可能な液体クロマトグラフィ装置および液体クロマトグラフィを提供することをその課題とする。
　本発明の第１の側面によって提供される液体クロマトグラフィ装置は、検体から試料を作製する試料作製手段と、上記試料の成分を分離するカラムと、移動相としての２種類以上の溶離液を上記カラムに供給する溶離液供給手段と、上記カラムに一定量の上記試料を導入可能であり、かつ上記カラムに上記溶離液を導入可能である、第１流路切替バルブと、上記カラムによって分離された上記試料の成分と上記溶離液とからなる被検液の分析を行う分析手段と、上記試料作製手段、上記溶離液供給手段、上記第１流路切替バルブ、および上記分析手段の動作を制御する制御手段と、を備えており、上記溶離液供給手段は、２種類以上の溶離液を非混合状態で、上記第１流路切替バルブに供給することを特徴としている。本発明の第１および第２流路切替バルブは、インジェクションバルブ、３方弁,４方弁,５方弁,６方弁などの切替弁、ピストン弁、プラグ弁、コントロール弁、及びＹ形弁などを含み、複数の溶離液を混合することなく、切れよく制御できる構造を有するものである。
　本発明の好ましい実施の形態においては、上記溶離液供給手段は、互いに別々のポートに供給される２種類の第１および第２溶離液を上記第１流路切替バルブに供給可能な第２流路切替バルブを備えており、上記制御手段は、上記第１溶離液を上記第１流路切替バルブを介してカラムへ供給することにより上記被検液の分析の途中もしくは後に、第２流路切替バルブに蓄えられた一定量の第２溶離液の少なくとも一部と、これに引き続いて上記第２溶離液とは別のポートから上記第２流路切替バルブに導入した第１溶離液とを、上記第１流路切替バルブを介して上記カラムに供給するように制御する。
　本発明の好ましい実施の形態においては、上記第２溶離液の供給においては、上記第２流路切替バルブに備えられた一定量の上記第２溶離液を保持するためのインジェクションループを上記第１流路切替バルブに至る経路に接続した状態で、一定量の上記第２溶離液が上記インジェクションループからすべて排出されるまで上記インジェクションループに対して上記第１溶離液を供給し続ける制御を行う。
　本発明の好ましい実施の形態においては、上記第２溶離液の供給においては、上記第２流路切替バルブに備えられた一定量の上記第２溶離液を保持するためのインジェクションループを上記第１流路切替バルブに至る経路に接続した状態で、一定量の上記第２溶離液の一部が上記インジェクションループから排出されるまで上記インジェクションループに対して上記第１溶離液を供給した後に、上記インジェクションループに上記第２溶離液のその余の部分を残し、かつ上記インジェクションループとは別の経路を上記第１流路切替バルブに至る経路に接続した状態で、上記第１溶離液を供給する制御を行う。
　本発明の好ましい実施の形態においては、上記溶離液供給手段は、上記第１溶離液を上記第２流路切替バルブへと供給する定容量型ポンプを備えている。
　本発明の好ましい実施の形態においては、上記検体として血液を用い、グリコヘモグロビンを測定することを目的とする。
　本発明の第２の側面によって提供される液体クロマトグラフィは、検体から試料を作製する工程と、上記試料を第１流路切替バルブを介してカラムに供給する工程と、移動相としての２種類以上の溶離液を上記第１流路切替バルブを介して上記カラムに供給する工程と、上記カラムによって分離された上記試料の成分と上記溶離液とからなる被検液を分析手段に供給する工程と、上記分析手段によって上記被検液の吸光度を測定する工程と、を有し、上記２種類以上の溶離液を非混合状態で、上記第１流路切替バルブに供給することを特徴としている。
　本発明の好ましい実施の形態においては、上記吸光度を測定する工程の途中もしくは後に、上記第１流路切替バルブに接続された第２流路切替バルブに蓄えられた一定量の第２溶離液の少なくとも一部と、これに引き続いて上記第２溶離液とは別のポートから上記第２流路切替バルブに導入した第１溶離液とを、上記第１流路切替バルブを介して上記カラムに供給することにより、上記カラムを洗浄する工程をさらに有する。
　本発明の好ましい実施の形態においては、上記洗浄する工程においては、上記第２流路切替バルブに備えられた一定量の上記第２溶離液を保持するためのインジェクションループを上記第１流路切替バルブに至る経路に接続した状態で、一定量の上記第２溶離液が上記インジェクションループからすべて排出されるまで上記インジェクションループに対して上記第１溶離液を供給し続ける。
　本発明の好ましい実施の形態においては、上記洗浄する工程においては、上記第２流路切替バルブに備えられた一定量の上記第２溶離液を保持するためのインジェクションループを上記第１流路切替バルブに至る経路に接続した状態で、一定量の上記第２溶離液の一部が上記インジェクションループから排出されるまで上記インジェクションループに対して上記第１溶離液を供給した後に、上記インジェクションループに上記第２溶離液のその余の部分を残し、かつ上記インジェクションループとは別の経路を上記第１流路切替バルブに至る経路に接続した状態で、上記第１溶離液を供給する。
　本発明の好ましい実施の形態においては、上記第１溶離液の上記第２流路切替バルブへの供給を、定容量型ポンプを用いて行う。
　本発明の好ましい実施の形態においては、上記検体として血液を用い、グリコヘモグロビンを測定することを目的とする。
　本発明のその他の特徴および利点は、添付図面を参照して以下に行う詳細な説明によって、より明らかとなろう。
本発明に係る液体クロマトグラフィ装置の一例を示すシステム構成図である。 図１に示す液体クロマトグラフィ装置の流路を示す概念図である。 図１に示す液体クロマトグラフィ装置において、インジェクションループに溶離液を導入した状態を示す概念図である。 図１に示す液体クロマトグラフィ装置において、六方バルブを回転させた状態を示すシステム構成図である。 図１に示す液体クロマトグラフィ装置において、六方バルブを回転させた状態を示す概念図である。 図１に示す液体クロマトグラフィ装置において、溶離液の送出を示す概念図である。 図１に示す液体クロマトグラフィ装置において、六方バルブを回転させた状態を示すシステム構成図である。 図１に示す液体クロマトグラフィ装置において、六方バルブを回転させた状態を示す概念図である。 図１に示す液体クロマトグラフィ装置において、溶離液の送出を示す概念図である。 図１に示す液体クロマトグラフィ装置における、カラムの塩濃度の履歴を示すグラフである。 図１に示す液体クロマトグラフィ装置を用いた液体クロマトグラフィの他の例における、溶離液の送出を示す概念図である。 図１に示す液体クロマトグラフィ装置を用いた液体クロマトグラフィの他の例において、六方バルブを回転させた状態を示すシステム構成図である。 図１に示す液体クロマトグラフィ装置を用いた液体クロマトグラフィの他の例における、溶離液の送出を示す概念図である。 従来の液体クロマトグラフィ装置の一例を示すシステム構成図である。 図１４に示す液体クロマトグラフィ装置のカラムにおける塩濃度の履歴を示すグラフである。
　以下、本発明の好ましい実施の形態につき、図面を参照して具体的に説明する。
　図１は、本発明に係る液体クロマトグラフィ装置の一例を示している。本実施形態の液体クロマトグラフィ装置Ａは、試料作製手段１、流路切替バルブ２、送出手段３、流路切替バルブ４、分析部５、および制御手段６を備えている。この液体クロマトグラフィ装置Ａは、たとえば血液などの検体Ｓについて液体クロマトグラフィを行う。
　試料作製手段１は、採血管Ｔｓから採取した所定量の検体Ｓを、ボトルＢｄから採取した希釈液Ｌｄによって所定倍率で希釈することにより、液体クロマトグラフィを行う試料を生成する。試料作製手段１は、たとえば採血管Ｔｓから検体Ｓを採取するための針状のノズルや、ボトルＢｄから希釈液Ｌｄを採取する採取管、およびこれらを混合する混合撹拌手段を有する。
　流路切替バルブ２は、たとえば六方バルブ２１およびインジェクションループ２２を有する。六方バルブ２１は、ポート２１ａ，２１ｂ，２１ｃ，２１ｄ，２１ｅ，２１ｆを有しており、インジェクションループ２２に対して回転自在とされている。ポート２１ａ，２１ｂ、ポート２１ｃ，２１ｄ、およびポート２１ｅ，２１ｆは、それぞれが互いに独立した流路で連結されている。図示された状態においては、ポート２１ａが配管Ｐ４に、ポート２１ｂが配管Ｐ３に、ポート２１ｃ、２１ｆがインジェクションループ２２に、ポート２１ｄが配管Ｐ２に、ポート２１ｅが配管Ｐ１を介して試料作製手段１に、それぞれ接続されている。インジェクションループ２２は、一定量の上記試料を蓄えるためのものである。本実施形態においては、インジェクションループ２２の容量は、たとえば３．４μＬ程度とされている。
　送出手段３および流路切替バルブ４は、本発明で言う溶離液供給手段を構成している。送出手段３は、ボトルＢａに収容された溶離液Ｌａを流路切替バルブ４へと送出するためのものであり、配管Ｐ５に設けられている。送出手段３は、プランジャーポンプ３１およびダンパ３２からなる。プランジャーポンプ３１は、往復動するプランジャーと逆止弁とを備えた構造であり、定容量型ポンプの一例に相当する。ダンパ３２は、プランジャーポンプ３１によって生じる脈動を緩和する機能を果たす。
　流路切替バルブ４は、たとえば六方バルブ４１およびインジェクションループ４２を有する。六方バルブ４１は、ポート４１ａ，４１ｂ，４１ｃ，４１ｄ，４１ｅ，４１ｆを有しており、インジェクションループ４２に対して回転自在とされている。ポート４１ａ，４１ｂ、ポート４１ｃ，４１ｄ、およびポート４１ｅ，４１ｆは、それぞれが互いに独立した流路で連結されている。図示された状態においては、ポート４１ａが配管Ｐ５を介して送出手段３に、ポート４１ｂが配管Ｐ３を介して流路切替バルブ２に、ポート４１ｃ、４１ｆがインジェクションループ４２に、ポート４１ｄが配管Ｐ７に、ポート４１ｅが配管Ｐ６を介して溶離液Ｌｂが収容されたボトルＢｂに、それぞれ接続されている。本実施形態においては、溶離液Ｌｂは、その塩濃度が溶離液Ｌａよりも高い。インジェクションループ４２は、一定量の溶離液Ｌｂを蓄えるためのものである。本実施形態においては、インジェクションループ４２の容量は、たとえば１４２μＬ程度とされている。これは、５秒間に送出手段３によって送出される量に相当する。
　分析部５は、配管Ｐ４を介して流路切替バルブ２に接続されており、液体クロマトグラフィによる分析を行う場である。分析部５は、プレフィルター５１、カラム５２、および測光ユニット５３からなる。プレフィルター５１は、カラム５２に不要物が進入することを防止する。カラム５２は、導入された上記試料を吸着させるための充填材を保持している。この充填材に上記試料を吸着させた後に、カラム５２に溶離液Ｌａを注入させると、吸着された上記試料は溶離液Ｌａによって脱着される。さらに、脱着された上記試料と溶離液Ｌａは脱着液としてカラム５２内を流れて排出される。測光ユニット５３は、たとえば、カラム５３から流れる上記脱着液の吸光度を測定することにより上記試料の成分を分析するように構成されており、本発明で言う分析手段の一例に相当する。
　制御手段６は、試料作製手段１、流路切替バルブ２、送出手段３、流路切替バルブ４、および分析部５をそれぞれ駆動制御するものであり、たとえばＣＰＵおよびメモリと信号を送受信するためのインターフェースとからなる。制御手段６は、以下に述べる上記試料の分析および次の分析を行うための処理についての制御を行う。
　次いで、液体クロマトグラフィ装置Ａを用いた分析について、図１～図１０を参照しつつ、以下に説明する。
　まず、液体クロマトグラフィ装置Ａを、図１および図２に示す分析初期状態とする。図２は、液体クロマトグラフィ装置Ａの流路を模式的に表している。これらの図においては、試料作製手段１において検体Ｓが希釈液Ｌｄによって希釈されることにより試料ＳＬが準備されている。
　次いで、図１および図３に示すように、試料ＳＬをインジェクションループ２２へと導入する。この導入は、たとえば配管Ｐ２下流側に配置された吸引ポンプ（図示略）によって行う。また、このときに、溶離液Ｌｂをインジェクションループ４２へと導入する。この導入は、たとえば配管Ｐ７の下流側に配置された吸引ポンプ（図示略）によって行う。これらの導入により、インジェクションループ２２には一定量の試料ＳＬが、インジェクションループ４２には一定量の溶離液Ｌｂが、それぞれ蓄えられる。
　次いで、図４に示すように、流路切替バルブ２の六方バルブ２１をたとえば反時計回りに６０°回転させる。これにより、ポート２１ａ，２１ｄがインジェクションループ２２に、ポート２１ｂが配管Ｐ４に、ポート２１ｃが配管Ｐ３に、ポート２１ｅが配管Ｐ２に、ポート２１ｆが配管Ｐ１に、それぞれ接続される。この状態で、プランジャーポンプ３１を駆動させることにより送出手段３から溶離液Ｌａを流路切替バルブ４へと送出する。この溶離液Ｌａは、ポート４１ａ，４１ｂおよび配管Ｐ３を介して、図５に示すように流路切替バルブ２へと向かう。そして、図６に示すように、溶離液Ｌａとともにインジェクションループ２２に蓄えられた一定量の試料ＳＬが分析部５へと送られる。分析部５においては、測光ユニット５３によって試料ＳＬに含まれる特定成分の分析がなされる。
　この分析の途中または終えた状態においては、たとえばカラム５２には、分析対象となる特定成分以外に、分析対象外であるその他の成分が付着している。これらのその他の成分は、分析中の測定結果に必要なものであり、または、次の分析を阻害するものである。このため、制御手段６は、このその他の成分を溶出や洗浄させるための制御を行う。
　すなわち、図７に示すように、流路切替バルブ４の六方バルブ４１をたとえば時計回りに６０°回転させる。これにより、ポート４１ａ，４１ｄがインジェクションループ４２に、ポート４１ｂが配管Ｐ５に、ポート４１ｃが配管Ｐ３に、ポート４１ｅが配管Ｐ７に、ポート４１ｆが配管Ｐ６に、それぞれ接続され、図８に示す状態となる。この状態でプランジャーポンプ３１を駆動させることにより、送出手段３から流路切替バルブ４に向けて溶離液Ｌａを送出する。すると、インジェクションループ４２に蓄えられた一定量の溶離液Ｌｂが配管Ｐ３へと送り出される。この溶離液Ｌｂは、配管Ｐ３にあった溶離液Ｌａと送出手段３によって送られてきた溶離液Ｌａとによって挟まれた格好となる。
　そして、プランジャーポンプ３１の駆動をさらに継続することにより、図９に示すように一定量の溶離液Ｌｂのすべてがインジェクションループ４２から配管Ｐ３へと送り出される。この後は、送出手段３による溶離液Ｌａの送出を継続することにより、溶離液Ｌｂによってカラム５２に付着したその他の成分を溶出や洗浄し、さらにカラム５２をはじめとする系を溶離液Ｌａによって十分に満たすことにより、カラム５２などを次の分析を行うのに適した塩濃度とする。
　次に、液体クロマトグラフィ装置Ａおよび本実施形態の液体クロマトグラフィの作用について説明する。
　図１０は、上述した分析および次の分析のための処理におけるカラム５２の塩濃度Ｄｓの履歴を示している。時刻Ｔ１は、図９に示す溶離液Ｌｂの先端がカラム５２に到達した時刻であり、時刻Ｔ２は、溶離液Ｌｂの後端がカラム５２に到達した時刻である。時刻Ｔ１，Ｔ２のいずれにおいても、塩濃度Ｄｓが急峻に変化しており、溶離液Ｌａ，Ｌｂそれぞれの塩濃度に移行している。この理由として、以下が挙げられる。
　まず、流路切替バルブ４に対して溶離液Ｌａ，Ｌｂが別々のポートから供給される。このため、流路切替バルブ４に至る経路において互いに混濁することが一切無い。次に、図７および図８に示すように六方バルブ４１の回転によって、溶離液Ｌａに一定量の溶離液Ｌｂを割り込ませる格好となっている。この場合、溶離液Ｌａと溶離液Ｌｂとは、配管Ｐ３やインジェクションループ４２というきわめて小径である管において互いの端部が混濁する可能性があるのみである。この混濁は、たとえば図１４に示したマニホールド９３および送液ポンプ９４における混濁と比べてごく小さい。これにより、溶離液Ｌｂが溶離液Ｌａに挟まれた状態で過大な混濁を生じることなくカラム５２へと供給される。したがって、図１０に示すように時刻Ｔ１および時刻Ｔ２において塩濃度Ｄｓを急峻に変化させることができる。
　このようにカラム５２における塩濃度を急峻に変化させれば、塩濃度Ｄｓが所望濃度（溶離液Ｌａの塩濃度）に復帰するまで、冗長に時間を経過させる必要が無い。また、本実施形態においては、従来技術において３種類の溶離液Ｌａ，Ｌｂ，Ｌｃを用いていたのとは異なり、２種類の溶離液Ｌａ，Ｌｂを用いるのみである。したがって、次の分析を行うのに適した状態にカラム５２をはじめとする系を迅速に復帰させることが可能であり、液体クロマトグラフィの分析時間の短縮を図ることができる。また、溶離液の消費の減少を図ることができる。
　図１１～図１３は、本発明に係る液体クロマトグラフィの他の実施形態を示している。なお、これらの図において、上記実施形態と同一または類似の要素には、上記実施形態と同一の符号を付している。本実施形態においては、液体クロマトグラフィ装置Ａの制御手段６が、次の分析を行うための処理について、上述した実施形態とは異なる制御を行う。
　まず、図１～図８に示した分析および次の分析を行うための処理を行う。次いで図８に示した状態から、送出手段３によって溶離液Ｌａの送出を行う。この送出においては、図１１に示すように、インジェクションループ４２に蓄えられた一定量の溶離液Ｌｂの一部がインジェクションループ４２から排出されるまで、溶離液Ｌａの送出を継続する。具体的には、定容量型ポンプであるプランジャーポンプ３１のプランジャーを所定回数往復させる。このプランジャーが一往復する間に送り出される溶離液Ｌａの量は一定であるため（たとえば２８μＬ）、このプランジャーが所定回数往復したときに送り出される溶離液Ｌａの量もまた一定である。
　そして、図１１に示す状態から図１２に示すように、流路切替バルブ４の六方バルブ４１をたとえば反時計回りに６０°回転させる。そして、送出手段３による溶離液Ｌａの送出を継続する。このとき、図１３に示すように、インジェクションループ４２から排出された溶離液Ｌｂが溶離液Ｌａによって挟まれた格好となる。この後は、送出手段３による溶離液Ｌａの送出をさらに継続することにより、溶離液Ｌｂによってカラム５２に付着したその他の成分を溶出や洗浄し、さらにカラム５２をはじめとする系を溶離液Ｌａによって十分に満たすことにより、カラム５２などを次の分析を行うのに適した塩濃度とする。
　本実施形態によっても、カラム５２における塩濃度Ｄｓの履歴を図１０に示す履歴と類似したものとすることが可能であり、液体クロマトグラフィの分析時間の短縮を図ることができる。特に、溶離液Ｌｂの後端とそれに続く溶離液Ｌａとの切り替えは、流路切替バルブ４の六方バルブ４１の回転による。このため、図８および図９に示した場合よりも、溶離液Ｌｂの後端と溶離液Ｌａとの接触時間が短縮される。これにより、溶離液Ｌｂの後端と溶離液Ｌａとの混濁をさらに抑制することが可能であり、分析時間の短縮に好適である。
　また、分析対象以外のその他の成分を溶出できた後、インジェクションループ４２に蓄えられた一定量の溶離液Ｌｂのすべてを排出する前に六方バルブ４１を回転させるため、カラム５２に送られる溶離液Ｌｂの量は、上述した実施形態における量よりもさらに少ない。これにより、時刻Ｔ１から時刻Ｔ２に至る時間をさらに短縮することが可能であり、分析時間の短縮に好ましい。
　定容量型ポンプであるプランジャーポンプ３１を用いることにより、図１１においてインジェクションループ４２から排出された溶離液Ｌｂの量を、上記プランジャーの往復回数のカウントによって正確に把握することが可能である。これは、上記その他の成分の溶出や洗浄に不足なく、しかも分析時間短縮の観点から必要最低限の量の溶離液Ｌｂを供給可能であるという利点がある。
　本発明に係る液体クロマトグラフィ装置および液体クロマトグラフィは、上述した実施形態に限定されるものではない。本発明に係る液体クロマトグラフィ装置および液体クロマトグラフィの具体的な構成は、種々に設計変更自在である。
　本発明で言う第１および第２溶離液としては、互いの塩濃度が異なるものに限定されず、たとえば互いの水素イオン濃度指数ｐＨが異なるものを用いてもよい。

Claims (12)

  1. 　検体から試料を作製する試料作製手段と、
    　上記試料の成分を分離するカラムと、
    　移動相としての２種類以上の溶離液を上記カラムに供給する溶離液供給手段と、
    　上記カラムに一定量の上記試料を導入可能であり、かつ上記カラムに上記溶離液を導入可能である、第１流路切替バルブと、
    　上記カラムによって分離された上記試料の成分と上記溶離液とからなる被検液の分析を行う分析手段と、
    　上記試料作製手段、上記溶離液供給手段、上記第１流路切替バルブ、および上記分析手段の動作を制御する制御手段と、
    を備えており、
    　上記溶離液供給手段は、２種類以上の上記溶離液を非混合状態で、上記第１流路切替バルブに供給することを特徴とする、液体クロマトグラフィ装置。
  2. 　上記溶離液供給手段は、互いに別々のポートに供給される２種類の第１および第２溶離液を上記第１流路切替バルブに供給可能な第２流路切替バルブを備えており、
    　上記制御手段は、上記第１溶離液を上記第１流路切替バルブを介してカラムへ供給することにより上記被検液の分析の途中もしくは後に、第２流路切替バルブに蓄えられた一定量の第２溶離液の少なくとも一部と、これに引き続いて上記第２溶離液とは別のポートから上記第２流路切替バルブに導入した第１溶離液とを、上記第１流路切替バルブを介して上記カラムに供給するように制御する、請求項１に記載の液体クロマトグラフィ装置。
  3. 　上記第２溶離液の供給においては、上記第２流路切替バルブに備えられた一定量の上記第２溶離液を保持するためのインジェクションループを上記第１流路切替バルブに至る経路に接続した状態で、一定量の上記第２溶離液が上記インジェクションループからすべて排出されるまで上記インジェクションループに対して上記第１溶離液を供給し続ける制御を行う、請求項２に記載の液体クロマトグラフィ装置。
  4. 　上記第２溶離液の供給においては、上記第２流路切替バルブに備えられた一定量の上記第２溶離液を保持するためのインジェクションループを上記第１流路切替バルブに至る経路に接続した状態で、一定量の上記第２溶離液の一部が上記インジェクションループから排出されるまで上記インジェクションループに対して上記第１溶離液を供給した後に、上記インジェクションループに上記第２溶離液のその余の部分を残し、かつ上記インジェクションループとは別の経路を上記第１流路切替バルブに至る経路に接続した状態で、上記第１溶離液を供給する制御を行う、請求項２に記載の液体クロマトグラフィ装置。
  5. 　上記溶離液供給手段は、上記第１溶離液を上記第２流路切替バルブへと供給する定容量型ポンプを備えている、請求項４に記載の液体クロマトグラフィ装置。
  6. 　上記検体として血液を用い、グリコヘモグロビンを測定することを目的とする、請求項１に記載の液体クロマトグラフィ装置。
  7. 　検体から試料を作製する工程と、
    　上記試料を第１流路切替バルブを介してカラムに供給する工程と、
    　移動相としての２種類以上の溶離液を上記第１流路切替バルブを介して上記カラムに供給する工程と、
    　上記カラムによって分離された上記試料の成分と上記溶離液とからなる被検液を分析手段に供給する工程と、
    　上記分析手段によって上記被検液の吸光度を測定する工程と、を有し、
    　上記２種類以上の溶離液を非混合状態で、上記第１流路切替バルブに供給することを特徴とする、液体クロマトグラフィ。
  8. 　上記吸光度を測定する工程の途中もしくは後に、
    　上記第１流路切替バルブに接続された第２流路切替バルブに蓄えられた一定量の第２溶離液の少なくとも一部と、これに引き続いて上記第２溶離液とは別のポートから上記第２流路切替バルブに導入した第１溶離液とを、上記第１流路切替バルブを介して上記カラムに供給することにより、上記カラムを洗浄する工程をさらに有する、請求項７に記載の液体クロマトグラフィ。
  9. 　上記洗浄する工程においては、上記第２流路切替バルブに備えられた一定量の上記第２溶離液を保持するためのインジェクションループを上記第１流路切替バルブに至る経路に接続した状態で、一定量の上記第２溶離液が上記インジェクションループからすべて排出されるまで上記インジェクションループに対して上記第１溶離液を供給し続ける、請求項８に記載の液体クロマトグラフィ。
  10. 　上記洗浄する工程においては、上記第２流路切替バルブに備えられた一定量の上記第２溶離液を保持するためのインジェクションループを上記第１流路切替バルブに至る経路に接続した状態で、一定量の上記第２溶離液の一部が上記インジェクションループから排出されるまで上記インジェクションループに対して上記第１溶離液を供給した後に、上記インジェクションループに上記第２溶離液のその余の部分を残し、かつ上記インジェクションループとは別の経路を上記第１流路切替バルブに至る経路に接続した状態で、上記第１溶離液を供給する、請求項８に記載の液体クロマトグラフィ。
  11. 　上記第１溶離液の上記第２流路切替バルブへの供給を、定容量型ポンプを用いて行う、請求項１０に記載の液体クロマトグラフィ。
  12. 　上記検体として血液を用い、グリコヘモグロビンを測定することを目的とする、請求項７に記載の液体クロマトグラフィ。
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Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2669674A1 (en) 2012-05-30 2013-12-04 Arkray, Inc. Liquid chromatography apparatus, liquid chromatography analysis method, and liquid chromatography analysis program
CN103713055A (zh) * 2013-12-23 2014-04-09 聚光科技(杭州)股份有限公司 一种高浓度物质检测装置及方法
EP2835636A1 (en) 2013-08-07 2015-02-11 ARKRAY, Inc. Liquid chromotography device, liquid chromotography analysis process, and liquid chromotography analysis program
CN110741251A (zh) * 2017-07-05 2020-01-31 深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司 液相分析装置及用于该液相分析装置的分析方法

Families Citing this family (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR101365921B1 (ko) * 2011-09-02 2014-02-19 주식회사 아모그린텍 분석물질 분리장치 및 이를 이용한 분석물질 검출장치
CN103623612A (zh) * 2012-08-29 2014-03-12 奇复康药物研发(苏州)有限公司 一种加液球装置
CN103969349A (zh) * 2013-01-29 2014-08-06 深圳普门科技有限公司 一种检验仪器的冲洗方法及其检验仪器
EP3023782B1 (en) * 2013-07-17 2018-05-30 Sekisui Medical Co., Ltd. Sample analysis device and gradient liquid feed device
US10473632B2 (en) 2014-11-10 2019-11-12 Agilent Technologies, Inc. Metering device with defined enabled flow direction
US20190265206A1 (en) * 2015-10-20 2019-08-29 Waters Technologies Corporation Systems, methods and devices for cross-stream injection chromatography
US10371674B2 (en) * 2016-04-13 2019-08-06 Horiba Stec, Co., Ltd. Chromatograph sampler and method for operating chromatograph sampler
US10527594B2 (en) * 2016-04-20 2020-01-07 Arkray, Inc. Liquid chromatography measurement method, liquid chromatography measurement instrument, and liquid chromatography measurement program storage medium
AT519146B1 (de) 2016-10-05 2020-03-15 Univ Wien Tech Vorrichtung zur Analyse eines Feststoff-Probenmaterials
JP6895819B2 (ja) * 2017-06-26 2021-06-30 アークレイ株式会社 液体クロマトグラフィ装置
FR3105016B1 (fr) * 2019-12-23 2022-01-14 Commissariat Energie Atomique Dispositifs et procédés de mélange de liquides par va-et-vient entre pompe et cellule de mesure, et analyse physico-chimique des liquides ainsi mélangés
JP7499862B2 (ja) * 2020-02-24 2024-06-14 レコ コーポレイション 包括的２次元クロマトグラフィーのための分割流れモジュレータ
DE102020115737A1 (de) 2020-06-15 2020-07-30 Agilent Technologies Inc. Fluidversorgungsvorrichtungen und Fluidbauteil zum Bilden einer mobilen Phase für ein Probentrenngerät
JP2023067746A (ja) * 2021-10-29 2023-05-16 株式会社島津製作所 液体クロマトグラフシステムの洗浄方法および液体クロマトグラフシステム

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH05281222A (ja) * 1992-04-01 1993-10-29 Hitachi Ltd ヘモグロビン類の分析方法，分析装置およびそれに用いるカラム劣化抑制液
JP2003014719A (ja) * 2001-07-02 2003-01-15 Sekisui Chem Co Ltd 液体クロマトグラフ装置
JP2003107064A (ja) * 2001-09-28 2003-04-09 Shimadzu Corp 高速液体クロマトグラフ
JP2003247987A (ja) * 2002-02-27 2003-09-05 Shimadzu Corp 液体クロマトグラフシステム
JP2007240500A (ja) 2006-03-13 2007-09-20 Arkray Inc 液体クロマトグラフィ装置
WO2008035748A1 (fr) * 2006-09-22 2008-03-27 Arkray, Inc. Appareil d'analyse du sang

Family Cites Families (20)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3504799A (en) * 1968-04-02 1970-04-07 Beckman Instruments Inc Sample injector
USRE29454E (en) * 1972-06-26 1977-10-25 E. I. Du Pont De Nemours And Company Method for producing a gradient elution
US4116046A (en) * 1977-08-05 1978-09-26 Hoffmann-La Roche Inc. Liquid chromatography system
US4158630A (en) * 1978-02-24 1979-06-19 Stearns Stanley D Chromatographic multi-sample valving apparatus
US4274967A (en) * 1978-07-07 1981-06-23 Technicon Instruments Corporation Chromatographic apparatus and method
US4258630A (en) * 1978-07-25 1981-03-31 Northland Aluminum Products, Inc. Portable turntable for use in microwave ovens
US4478713A (en) * 1983-09-23 1984-10-23 Pharmuka Laboratoires Automatic installation for liquid chromatography
US4595496A (en) * 1984-06-29 1986-06-17 Millipore Corporation Liquid composition control
US4728434A (en) * 1984-07-05 1988-03-01 Magnetopulse Limited Liquid chromatography
US4699718A (en) * 1986-01-21 1987-10-13 Millipore Corporation Ion chromatography method and apparatus
JPS6336143A (ja) * 1986-07-30 1988-02-16 Tosoh Corp 安定型糖化ヘモグロビン測定方法および装置
US5135718A (en) * 1987-03-02 1992-08-04 Tosoh Corporation Apparatus for simultaneously analyzing vanillylmandelic acid, homovanillic acid and creatinine
GB2220369B (en) * 1988-06-10 1993-01-27 Inst Of Child Health Method for testing body fluids by low pressure liquid chromatography
JP2782470B2 (ja) 1990-07-20 1998-07-30 株式会社日立製作所 グリコヘモグロビンの分離方法および分離装置並びに分離カラム
US5468643A (en) 1991-08-28 1995-11-21 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Switching valve system for direct biological sample injection for LC analysis
JPH06511084A (ja) 1991-09-30 1994-12-08 パーセプティブ　バイオシステムズ　インコーポレイテッド 蛋白のクロマトグラフィーシステム
US5520817A (en) * 1994-10-04 1996-05-28 Biologica Co. Method of fractionating components in liquid chromatography
US7588725B2 (en) * 2001-04-25 2009-09-15 Biotrove, Inc. High throughput autosampler
GB2429785B (en) * 2004-05-21 2009-11-18 Waters Investments Ltd Closed loop flow control of a hplc constant flow pump to enable low-flow operation
JP4992401B2 (ja) 2006-12-06 2012-08-08 株式会社島津製作所 オートサンプラ洗浄機構

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH05281222A (ja) * 1992-04-01 1993-10-29 Hitachi Ltd ヘモグロビン類の分析方法，分析装置およびそれに用いるカラム劣化抑制液
JP2003014719A (ja) * 2001-07-02 2003-01-15 Sekisui Chem Co Ltd 液体クロマトグラフ装置
JP2003107064A (ja) * 2001-09-28 2003-04-09 Shimadzu Corp 高速液体クロマトグラフ
JP2003247987A (ja) * 2002-02-27 2003-09-05 Shimadzu Corp 液体クロマトグラフシステム
JP2007240500A (ja) 2006-03-13 2007-09-20 Arkray Inc 液体クロマトグラフィ装置
WO2008035748A1 (fr) * 2006-09-22 2008-03-27 Arkray, Inc. Appareil d'analyse du sang

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
See also references of EP2345896A4

Cited By (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2669674A1 (en) 2012-05-30 2013-12-04 Arkray, Inc. Liquid chromatography apparatus, liquid chromatography analysis method, and liquid chromatography analysis program
US20130319088A1 (en) * 2012-05-30 2013-12-05 Arkray, Inc. Liquid chromatography apparatus, liquid chromatography analysis method, and liquid chromatography analysis program
JP2014006241A (ja) * 2012-05-30 2014-01-16 Arkray Inc 液体クロマトグラフィ装置、液体クロマトグラフィ分析方法、および液体クロマトグラフィ分析プログラム
EP2835636A1 (en) 2013-08-07 2015-02-11 ARKRAY, Inc. Liquid chromotography device, liquid chromotography analysis process, and liquid chromotography analysis program
JP2015052592A (ja) * 2013-08-07 2015-03-19 アークレイ株式会社 液体クロマトグラフィ装置、液体クロマトグラフィ分析方法、及び液体クロマトグラフィ分析プログラム
US9643104B2 (en) 2013-08-07 2017-05-09 Arkray, Inc. Liquid chromatography device, liquid chromatography analysis process, and non-transitory computer-readable medium for liquid chromotography analysis
CN103713055A (zh) * 2013-12-23 2014-04-09 聚光科技(杭州)股份有限公司 一种高浓度物质检测装置及方法
CN110741251A (zh) * 2017-07-05 2020-01-31 深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司 液相分析装置及用于该液相分析装置的分析方法
CN110741251B (zh) * 2017-07-05 2022-09-09 深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司 液相分析装置及用于该液相分析装置的分析方法

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