JP2003014719A - 液体クロマトグラフ装置 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 移動相をステップ的に速やかに切換えること
ができ、小型化及び低コスト化を果たし得るだけでな
く、測定時間の短縮、移動相の節約及び試料の高精度注
入を果たし得る液体クロマトグラフ装置を提供する。 【解決手段】 カラム１及び検出器２の上流に切換え部
材３が接続されており、切換え部材３に、第１，第２の
保持流路ｃ１，ｃ２が接続されており、かつ切換え部材
３に、切換え弁７を介して試料Ｘまたは洗浄液Ｙが供給
され、送液部材４により溶離液Ａが供給され、切換え弁
９を介して溶離液Ｂが供給されるように構成されてお
り、切換え部材３を切換えることにより、試料Ｘ、洗浄
液Ｙまたは溶離液Ａが第１の保持流路ｃ１を利用してカ
ラム１に供給され、または溶離液Ａ，溶離液Ｂが第２の
保持流路ｃ２を利用してカラム１に供給されるように構
成されている、液体クロマトグラフ装置。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、液体クロマトグラ
フ装置及び該液体クロマトグラフ装置を用いた測定方法
に関し、より詳細には、例えばヘモグロビン類などの測
定に好適に用いられる、ステップグラジュエント方式を
用いた液体クロマトグラフ装置及び測定方法に関する。

【０００２】

【従来の技術】従来、液体クロマトグラフィーにおい
て、複数の移動相を使用して測定する方法として、移動
相を所定のタイミングで切換えるステップグラジュエン
ト方式（段階溶出法）が広く用いられている。

【０００３】上記ステップグラジュエント方式で測定す
るための液体クロマトグラフ装置としては、低圧グラジ
ュエント方式のもの及び高圧グラジュエント方式のもの
が知られている。

【０００４】しかしながら、低圧グラジュエント方式で
は、送液ポンプが一台でよいものの、移動相の切換えを
ステップ的に速やかに行うことができないという問題が
あった。

【０００５】他方、高圧グラジュエント方式では、移動
相を速やかにステップ的に切換えることができるもの
の、移動相の種類に応じた送液ポンプを用意しなければ
ならなかった。従って、クロマトグラフ装置の小型化及
び低価格化を進めることができないという問題があっ
た。

【０００６】そこで、特開平７−２８０７８９号公報に
は、グラジュエント式の液体クロマトグラフ装置であっ
て、測定時間の短縮化、測定器の小型化及び低価格化を
図り得る構造が開示されている。

【０００７】この先行技術に記載の液体クロマトグラフ
装置では、第１の移動相を送液する送液ポンプと分離カ
ラムとを連結してなる流路において、送液ポンプと分離
カラムとの間に試料及び第２の移動相を上記流路に導く
ためのインジェクターが接続されている。このインジェ
クターは、試料または第２の移動相を吸引するサンプリ
ングノズルと、サンプリングノズルに連結された切換え
弁と、試料または第２の移動相を保持する液体保持流路
とを有する。切換え弁を切換えることにより、第１の移
動相が流路に流され、試料または第２の移動相が上記液
体保持流路に導かれる第１の切換え状態と、第１の移動
相を液体保持流路に導入し、かつ試料または第２の移動
相を液体保持流路から流路に導く第２の切換え状態とが
実現される。

【０００８】従って、高圧グラジュエント方式を用いて
いるため、複数の移動相をステップ的に速やかに切換え
ることができ、測定時間の短縮が果たされるとされてい
る。また、上記液体保持流路を用いることにより、送液
ポンプの台数を少なくすることができ、装置の小型化及
び低価格化が図られるとされている。

【０００９】

【発明が解決しようとする課題】しかしながら、特開平
７−２８０７８９号公報に記載の液体クロマトグラフ装
置では、液体保持流路に試料や第２の移動相を交互に導
く動作、並びに試料導入後の洗浄動作を順に実施する必
要があった。従って、総動作時間が測定時間内に収まる
ように測定条件を設定する必要があった。よって、測定
時間を短縮しようとした場合、測定条件に制約があっ
た。

【００１０】また、上記先行技術に記載の液体クロマト
グラフ装置では、上記液体保持流路に試料や第２の移動
相が交互に導かれるため、液体保持流路に至る流路部分
に存在していた移動相が、次の洗浄工程において洗浄液
に置換される。すなわち、置換される移動相が測定に使
用されないことになる。従って、移動相の無駄が多かっ
た。

【００１１】加えて、注入される試料の量と第２の移動
相の量が異なる場合には、注入量の多い方を満たすよう
に上記液体保持流路が構成されていなければならない。
上記先行技術の実施例の欄では、試料が１０μＬ、第２
の移動相が１５０μＬとされているが、この場合には液
体保持流路の容量は最低でも１５０μＬとしなければな
らない。他方、試料の注入に際し、気泡が注入されては
ならない。従って、試料の先端部が洗浄液で希釈される
ことになるので、上記のような小さな容量の液体保持流
路の該容量よりも少ない量の試料を高精度に注入するこ
とは非常に困難であった。そのため、試料の注入量のば
らつきが大きくならざるを得なかった。

【００１２】本発明の目的は、上述した従来技術の欠点
を解消し、移動相をステップ的に速やかに切換えること
ができ、装置の小型化及び低コスト化を果たし得るだけ
でなく、測定時間の短縮に際しての測定条件の制限が少
なく、移動相の無駄が少なく、かつ試料を高精度に注入
することができ、従って高精度に測定を行うことを可能
とする液体クロマトグラフ装置及び該液体クロマトグラ
フ装置を用いた測定方法を提供することにある。

【００１３】

【課題を解決するための手段】本発明の広い局面によれ
ば、少なくとも２種類の溶離液Ａ，Ｂを用いた液体クロ
マトグラフ装置であって、カラムと、前記カラムの下流
に配置されており、測定対象成分を検出するための検出
器と、前記カラムの上流に配置された流路切換え部材
と、試料もしくは洗浄液または溶離液Ａを一時的に保持
するための第１の保持流路と、溶離液Ａまたは溶離液Ｂ
を一時的に保持するための第２の保持流路とを備え、前
記流路切換え部材が、溶離液Ａを導入するための溶離液
Ａ導入ポートと、溶離液Ｂを導入するための溶離液Ｂ導
入ポートと、試料または洗浄液を導入するための試料等
導入ポートと、試料もしくは洗浄液を排出する試料等排
出ポートと、溶離液Ａまたは溶離液Ｂを排出する溶離液
排出ポートと、前記溶離液Ａ，Ｂまたは試料をカラムに
流出させるカラム接続ポートと、前記第１の保持流路の
一端に接続されており、第１の保持流路に試料もしくは
洗浄液または溶離液Ａを流出する第１の流出ポートと、
第１の保持流路の他端に接続されており、第１の保持流
路から試料もしくは洗浄液または溶離液Ａが流入される
第１の流入ポートと、前記第２の保持流路の一端に接続
されており、第２の保持流路に溶離液Ａまたは溶離液Ｂ
を流出する第２の流出ポートと、前記第２の保持流路の
他端に接続されており、第２の保持流路から溶離液Ａま
たは溶離液Ｂが流入される第２の流入ポートとを有し、
前記流路切換え部材は、第２の保持流路が、カラム接続
ポートに接続される第１の状態と、第１の保持流路がカ
ラム接続ポートに接続される第２の状態との間で切換え
られるように構成されている液体クロマトグラフ装置が
提供される。

【００１４】上記流路切換え部材としては、特に限定さ
れるわけではないが、本発明の特定の局面では十方バル
ブが用いられ、すなわち市販されている十方バルブを上
記流路切換え部材として用いることができる。

【００１５】本発明に係る液体クロマトグラフ装置は様
々な試料の分析に用いられ得るが、特に、測定対象成分
としてのヘモグロビン類を含む試料の測定に好適に用い
られる。

【００１６】本発明に係る測定方法は、本発明に従って
構成された液体クロマトグラフ装置を用いた測定方法で
あり、前記溶離液Ｂの溶出力が溶離液Ａの溶出力よりも
大きく、前記流路切換え部材を第２の状態として前記カ
ラム接続ポートに溶離液Ａを送液しつつ、試料をカラム
に導入した後、前記流路切換え部材を第１の状態に切換
えてカラムに溶離液Ｂを導入することを特徴とする。

【００１７】

【発明の実施の形態】以下、本発明の具体的な実施形態
を説明することにより、本発明をより詳細に説明する。

【００１８】図１は、本発明の一実施例に係る液体クロ
マトグラフ装置の概略構成図である。本実施例の液体ク
ロマトグラフ装置では、分離カラム１の下流側に検出器
２が配置されている。分離カラム１としては、試料及び
測定目的成分に応じた充填剤が充填されたものが用いら
れる。また、検出器２としては、分離カラム１から流出
してきた移動相中の目的成分を検出するための適宜の検
出装置が用いられる。

【００１９】分離カラム１の上流側には、流路切換え部
材３が配置されている。流路切換え部材３は、本実施形
態では、十方バルブを用いて構成されている。従って、
流路切換え部材３は１０個のポートを有する。１０個の
ポートの詳細は以下の通りである。

【００２０】まず、洗浄液または試料が導入される試料
等導入ポートａ、後述の第１の保持流路ｃ１の一端に接
続され、試料もしくは洗浄液または溶離液Ａを第１の保
持流路ｃ１に流出する第１の流出ポートｂ、溶離液Ａを
導入するための溶離液Ａ導入ポートｃ、第２の保持流路
ｃ２の一端に接続されており、第２の保持流路に溶離液
を流出する第２の流出ポートｄ、溶離液Ｂを導入するた
めの溶離液Ｂ導入ポートｅ、溶離液を排出するための溶
離液排出ポートｆ、第２の保持流路ｃ２の端部に接続さ
れており、第２の保持流路ｃ２から溶離液を流入させる
第２の流入ポートｇ、前述した分離カラム１に接続され
ており、分離カラム１に移動相溶離液Ａ，Ｂまたは試料
を与えるカラム接続ポートｈ、第１の保持流路ｃ１の端
部に接続されており、第１の保持流路ｃ１から試料もし
くは洗浄液または溶離液Ａが流入される第１の流入ポー
トｉ、洗浄液または試料を排出する試料等排出ポートｊ
とを備える。

【００２１】本実施形態の液体クロマトグラフ装置で
は、溶離液Ａ導入ポートｃに、送液部材４が接続されて
おり、該送液部材４により、溶離液Ａが溶離液Ａ導入ポ
ートｃに送液されるように構成されている。送液部材４
としては、例えば、プランジャー式ポンプなどの適宜の
液体移送手段を用いることができる。

【００２２】切換え部材３に溶離液Ａを供給する流路
と、切換え部材３から分離カラム１及び検出器２に至る
流路とが、この液体クロマトグラフ装置の主流路を構成
している。

【００２３】他方、試料等排出ポートｊには、試料等導
入部材５が接続されている。試料等導入部材５は、ポン
プなどの適宜の液体移送手段により構成されており、陰
圧により、試料または洗浄液等を切換え部材３に導入
し、かつ試料等排出ポートｊから外部に排出し得るよう
に構成されている。また、溶離液排出ポートｆには、同
様に、溶離液導入部材６が接続されている。溶離液導入
部材６は、同じくポンプなどにより構成されており、陰
圧により、溶離液Ｂを切換え部材３に導入し、かつ溶離
液Ａまたは溶離液Ｂを外部に排出するように構成されて
いる。

【００２４】試料等導入ポートａには切換え弁７が接続
されている。切換え弁７は、サンプリングノズル８に接
続されており、サンプリングノズル８の先端が試料Ｘ内
に浸漬した状態または洗浄液Ｙ内に浸漬した状態とを切
換え得るように構成されている。切換え弁７の上記切換
えは、モータや電磁弁などを用いて行われ得る。

【００２５】試料Ｘ及び洗浄液Ｙ内にそれぞれ浸漬され
た複数のサンプリングノズル８が設けられており、切換
え弁７によって接続が切換えられるように構成されても
よい。

【００２６】他方、溶離液Ｂ導入ポートｅには、切換え
弁９が接続されている。切換え弁９は、ノズル１０に連
結されている。図１では、ノズル１０の先端は溶離液Ｂ
に浸漬されているが、切換え弁９を切換えることによ
り、溶離液Ｂを溶離液Ｂ導入ポートｅに供給し得る図示
の状態及び供給しない状態を実現することができる。

【００２７】第１の保持流路ｃ１は、前述した第１の流
出ポートｂ及び第１の流入ポートｉ間に接続されてい
る。また、第２の保持流路ｃ２は、第２の流出ポートｄ
及び第２の流入ポートｇに接続されている。

【００２８】切換え部材３を構成する十方バルブは、第
１の保持流路ｃ１を、前述した主流路に接続した第２の
状態ＩＩと、第２の保持流路ｃ２が前述した主流路に接
続される第１の状態Ｉとで切換えられるように構成され
ている。また、第１の状態Ｉでは、溶離液Ｂ導入ポート
ｅと、溶離液排出ポートｆとを結ぶ流路ｐ３が切換え部
材３内において構成され、溶離液Ｂは外部に排出される
ように構成されている。また、第２の状態ＩＩでは、試
料等導入ポートａと、試料等排出ポートｊとが後述の流
路ｐ１により接続され、試料または洗浄液等が外部に排
出されるように構成される。

【００２９】第１の状態Ｉ及び第２の状態ＩＩにおける
切換え部材３内での状態及び各ポート内で構成される内
部の流路は後述の通りである。また、第１の保持流路ｃ
１への試料の導入は、第２の状態ＩＩにおいて、切換え
弁７を切換え、試料Ｘをサンプリングノズル８が吸入す
る状態とし、試料等導入部材５の陰圧を利用して行われ
る。また、第１の保持流路ｃ１の洗浄は、サンプリング
ノズル８から洗浄液Ｙを吸入し得るように切換え弁７を
切換え、同様に試料等導入部材５の陰圧を利用して洗浄
液が第１の保持流路ｃ１に流される。

【００３０】他方、第２の保持流路ｃ２への溶離液Ｂの
導入は、上記第１の状態Ｉにおいて、溶離液導入部材６
の陰圧を利用して行われる。なお、本実施例では、試料
等導入部材５及び溶離液導入部材６は、切換え部材３の
下流側に配置されており、上記のように陰圧を利用して
試料等または溶離液が流されるように構成されている
が、吸引及び吐出機能を有するピストンポンプなどを用
いることにより、切換え部材３の上流側に、試料等導入
部材５及び溶離液導入部材６を配置してもよい。すなわ
ち、切換え弁７と試料等導入ポートａとの間にピストン
ポンプなどからなる試料等導入部材５を接続してもよ
く、切換え弁９と溶離液Ｂ導入ポートｅとの間に同様に
ピストンポンプなどからなる溶離液導入部材６を配置し
てもよい。

【００３１】なお、本実施形態の液体クロマトグラフ装
置を構成する上記送液部材、試料等導入部材５及び溶離
液導入部材６を構成するポンプなどは市販のポンプを用
いて構成することができ、切換え部材３を構成する十方
バルブ、切換え弁７，９及び検出器２なども、市販され
ている十方バルブ、切換え弁及び液体クロマトグラフ用
検出器により構成され得る。

【００３２】また、自動測定を行うには、これらの各ユ
ニットを制御するコントローラーにより、以下の測定方
法における各切換え部材や切換え弁等の切換えのタイミ
ングを制御すればよい。

【００３３】次に、図２〜図１０を参照して本実施形態
の液体クロマトグラフ装置の測定方法を説明することに
より、上記切換え部材３の構造の詳細も明らかにする。
なお、図２〜図９は、この測定に際しての各動作ステッ
プにおける切換え部材３の状態と試料Ｘ、洗浄液Ｙ、溶
離液Ａ，Ｂの流れる状態を示す図であり、試料Ｘ、洗浄
液Ｙ、溶離液Ａ及び溶離液Ｂは、それぞれ、細い破線、
太い破線、実線及び二点鎖線で示されている。図１０
は、これらの各動作ステップにおける主流路における送
液内容を、切換え部材３の切換え状態、及び検出器によ
り得られるクロマトグラムの時間的変化を示す図であ
る。

【００３４】まず、図２に示すステップＳ１では、切換
え部材３は第１の状態Ｉとされている。図２において
は、切換え部材３の中央に、第１の状態であることを示
すＩが記されているが、以下の図３〜図９においても同
様に切換え部材３の切換え状態を切換え部材３の中央に
示すこととする。

【００３５】ステップＳ１においては、切換え部材３が
第１の状態に切換えられており、第２の保持流路ｃ２が
溶離液Ａ導入ポートｃと、カラム接続ポートｈに接続さ
れている。すなわち、第１の状態Ｉでは、切換え部材３
内において、第２の流出ポートｄと溶離液Ａ導入ポート
ｃとが接続されており、第２の流入ポートｇとカラム接
続ポートｈとが接続されている。従って、溶離液Ａは、
主流路の途中で第２の保持流路ｃ２を流れ、カラム１に
与えられる。従って、第２の保持流路ｃ２には溶離液Ａ
が満たされる。他方、ステップＳ１においては、第１の
保持流路ｃ１には、破線で示すように試料Ｘが満たされ
ている。この第１の保持流路ｃ１への試料Ｘの充填は後
述のステップＳ６〜８と同様にして行われるため、後ほ
ど詳細に説明する。

【００３６】ステップＳ１においては、試料等導入ポー
トａと、第１の流出ポートｂとが接続されており、第１
の流入ポートｉと試料等排出ポートｊとが接続されてい
る。そして、試料導入部材５を駆動することにより、試
料Ｘまたは洗浄液Ｙが搬送されるが、ステップＳ１にお
いては、上記のように第１の保持流路ｃ１に試料Ｘが満
たされており、試料Ｘの後ろに、洗浄液Ｙが配置されて
いる。この場合、サンプリングノズル８は、洗浄液Ｙに
浸漬されるように切換え弁７が切換えられている。従っ
て、図２にＹで示すように、試料Ｘの後ろから洗浄液Ｙ
が移送される。

【００３７】なお、第１の状態Ｉにおいては、溶離液Ｂ
導入ポートｅは、溶離液排出ポートｆと接続されてお
り、従って、溶離液Ｂは、溶離液導入部材６の陰圧によ
り、第２の保持流路ｃ２に満たされる。

【００３８】次に、ステップＳ２において、切換え部材
３が第１の状態Ｉから第２の状態ＩＩに切換えられる。
図３に示すように、第２の状態ＩＩでは、溶離液Ａ導入
ポートｃが第１の流出ポートｂに接続され、第１の流入
ポートｉがカラム接続ポートｈに接続される。従って、
溶離液Ａが第１の保持流路ｃ１側に向かって流れること
になり、該溶離液Ａに押されて、試料Ｘが分離カラム１
側に移動する。

【００３９】他方、試料等導入ポートａと、試料等排出
ポートｊとが接続され、試料または洗浄液は、試料排出
部材５の陰圧により外部に排出される。また、溶離液Ｂ
導入ポートは、第２の流出ポートｄに接続され、第２の
流入ポートｇが溶離液排出ポートｆに接続される。従っ
て、溶離液Ｂが、第２の保持流路ｃ２内に導入される。

【００４０】よって、ステップＳ３において、試料Ｘが
溶離液Ａに押されることにより、分離カラム１側に押し
出されていく。すなわち、図４に示すように、溶離液Ａ
が第１の保持流路ｃ１内に侵入するにつれて、試料Ｘが
分離カラム１側に流される。

【００４１】また、第２の保持流路ｃ２には、溶離液Ｂ
が流されるが、第２の保持流路ｃ２には、前回の測定に
際し溶離液Ａが満たされていたため、溶離液Ａと溶離液
Ｂとの混入を防止するために、空気を介在させて、溶離
液Ｂが流される。

【００４２】また、ステップＳ４では、流路ｐ１の試料
Ｘを置換して洗浄するために、切換え弁７が切換えら
れ、サンプリングノズル８が洗浄液８に浸漬され、洗浄
液８が流路ｐ１に向かって流される。この場合において
も、空気を送った後に、洗浄液Ｙが流される。動作が進
行するにつれて、図５に示すように、ステップ４におい
て、第１の保持流路ｃ１に溶離液Ａが満たされ、さらに
溶離液Ａが分離カラム１に向かって流れる。他方、第２
の保持流路ｃ２は溶離液Ｂで満たされる。なお、第２の
保持流路ｃ１に溶離液Ｂが満たされた後に、溶離液Ｂの
後に空気が位置するように、切換え弁９が切換えられ、
サンプリングノズル１０が溶離液Ｂに浸漬された状態か
ら空気を吸引する状態に切換えられる。

【００４３】このようにして、第２の保持流路ｃ２に溶
離液Ｂが充填される。

【００４４】次に、図６に示すように、ステップＳ５に
おいて、切換え部材３が第２の状態ＩＩから、第１の状
態Ｉに切換えられる。ステップＳ５においては、第２の
保持流路ｃ２が、再度溶離液Ａが供給されるように、第
２の保持流路ｃ２が分離カラム１に接続される。従っ
て、送液部材の駆動により溶離液Ａが第２の保持流路ｃ
２に向かって流されることになるため、溶離液Ａにより
溶離液Ｂが押し出され、第２の保持流路ｃ２から分離カ
ラム１側に向かって流れる。このステップＳ５において
は、溶離液導入部材６はその駆動が停止されている。

【００４５】次に、図７に示すように、ステップＳ６に
おいて、試料等導入部材５を駆動し、かつ切換え弁７を
切換え、サンプリングノズル８を洗浄液Ｙを吸引する状
態から試料Ｘを吸引する状態へ移動させる。この場合、
洗浄液Ｙから一旦引き出されたサンプリングノズル８
は、空気を吸引し、しかる後試料Ｘに浸漬された後に、
試料Ｘを吸引する。従って、図７に示すように、空気を
介在させた後、試料Ｘが第１の保持流路ｃ１に供給され
る。

【００４６】このようにして、第１の保持流路ｃ１に、
試料Ｘが充填されていく。この間、第２の保持流路ｃ２
には、溶離液Ａが順次満たされていき、溶離液Ｂは第２
の保持流路ｃ２から分離カラム１側に向かって押し出さ
れていく。

【００４７】次に、ステップＳ７では、図８に示すよう
に、上記のようにして試料Ｘが第１の保持流路ｃ１に満
たされている。しかる後、ステップＳ７において、切換
え弁７が切換えられ、サンプリングノズル８が洗浄液Ｙ
に再度浸漬される。この切換えに際し、サンプリングノ
ズル８は、試料Ｘから引き出された際に空気を吸入し、
しかる後洗浄液Ｙに浸漬される。従って、試料Ｘの後に
空気が吸引される（図８参照）。

【００４８】次に、図９に示すように、ステップＳ８に
おいて、切換え部材３が第１の状態Ｉから第２の状態Ｉ
Ｉに切換えられる。その結果、第１の保持流路ｃ１に溶
離液Ａが流れ、再度試料Ｘが分離カラム１側に流され
る。他方、洗浄液Ｙが流路ｐ１を洗浄するように切換え
部材３の試料等導入ポートに向かって流れる。

【００４９】図１０から明らかなように、上記ステップ
Ｓ１〜Ｓ８に従って液体クロマトグラフ装置を駆動する
ことにより、試料Ｘを分離カラムに導いた後、溶離液Ａ
及び溶離液Ｂを順に用いて、目的成分の溶出を行うこと
ができる。また、図１０から明らかなように、本実施形
態の液体クロマトグラフ装置では、上記のように第１，
第２の保持流路ｃ１，ｃ２を用い、試料あるいは溶離液
Ａ，Ｂの分離カラム１への供給のタイミングが切換えら
れるので、図１０から明らかなように、溶離液Ａと溶離
液Ｂとを高精度に階段状に供給することができ、溶離液
Ａ及び溶離液Ｂの溶出力を利用して目的とする成分を高
精度に検出することができる。

【００５０】しかも、本実施形態では、２つの保持流路
ｃ１，ｃ２を用いているため、第２の移動相を測定前に
置換する必要のないことがわかる。加えて、試料と溶離
液Ｂとが、異なる保持流路ｃ１，ｃ２を用いて供給され
るので、試料の量が少ない場合であっても、試料注入を
高精度に行うことができ、試料注入精度のばらつきを低
減することができる。

【００５１】なお、上記実施形態では、溶離液Ｂの溶出
力が溶離液Ａの溶出力よりも高くされている。もっと
も、本発明では、３種以上の溶離液を用いてもよく、そ
の場合には、溶離液Ａ，溶離液Ｂよりも溶出力の小さい
溶離液を溶離液Ａの前に流せばよく、溶離液Ａ，溶離液
Ｂよりも溶出の大きい溶離液は溶離液Ｂの後に流せばよ
い。

【００５２】さらに、上記実施形態では、ヘモグロビン
類の分離及び測定に用いた例を示したが、他の様々な成
分の分離及び測定に本発明に係る液体クロマトグラフ装
置を用いることができる。

【００５３】

【発明の効果】以上のように、本発明に係る液体クロマ
トグラフ装置では、カラム及び検出器の上流に流路切換
え部材が配置されており、該流路切換え部材を第２の状
態ＩＩとすることにより、第１の保持流路がカラムに接
続され、第１の状態Ｉとすることにより、第２の保持流
路をカラムに接続された状態とすることができる。従っ
て、本発明の測定方法に従って、第１の保持流路により
試料及び溶離液Ａをカラムに与えるように、かつ第２の
流路ｃ２により溶離液Ａ，Ｂの供給を行うことにより、
測定時間の短縮、測定前に溶離液を置き換える作業の省
略、並びに試料の注入量のばらつきの低減を果たすこと
ができる。よって、安価であり、かつ比較的短時間に、
目的とする成分を高精度に測定することが可能となる。

【図面の簡単な説明】

【図１】本発明の一実施形態に係る液体クロマトグラフ
装置の概略構成図。

【図２】本発明の一実施形態において、ステップＳ１に
おいて、試料Ｘが第１の液体保持流路に充填されている
状態を示す概略構成図。

【図３】本発明の一実施形態の測定方法のステップＳ２
において、試料が分離カラムに溶離液Ａにより押されて
移動する状態を示す概略構成図。

【図４】本発明の一実施形態に係る測定方法のステップ
Ｓ３において、第１の保持流路ｃ１に洗浄液が注入され
る工程を説明するための概略構成図。

【図５】本発明の一実施形態の測定方法のステップＳ４
において、第２の保持流路ｃ２が溶離液Ｂで満たされる
工程及び第１の保持流路ｃ１が洗浄される工程を説明す
るための概略構成図。

【図６】本発明の一実施形態の測定方法のステップＳ５
において、溶離液Ｂが分離カラムに与えられる工程を説
明するための概略構成図。

【図７】本発明の一実施形態に係る測定方法のステップ
Ｓ６において、第１の保持流路ｃ１に試料を導入する工
程及び第２の保持流路ｃ２に溶離液Ａを供給する工程を
示す概略構成図。

【図８】本発明の一実施形態の測定方法のステップＳ７
において、第１の保持流路ｃ１が試料により満たされて
いる状態及び第２の保持流路ｃ２が溶離液Ａにより満た
されている状態を示す概略構成図。

【図９】本発明の一実施形態の測定方法のステップＳ８
において、切換え部材が第２の状態に切換えられ、試料
がカラムに与えられる工程、及び流路ｐ３から試料が排
出される工程を説明するための概略構成図。

【図１０】本発明の一実施形態の測定方法における各動
作ステップと、切換え部材切換え状態と、主流量におけ
る送液内容と、検出されたクロマトグラムとの各時間変
化を示す図。

【符号の説明】

１…分離カラム ２…検出器 ３…切換え部材 ４…送液部材 ５…試料等導入部材 ６…溶離液導入部材 ７…切換え弁 ８…サンプリングノズル ９…切換え弁 １０…ノズル ａ…試料等導入ポート ｂ…第１の流出ポート ｃ…溶離液Ａ導入ポート ｃ１…第１の保持流路 ｃ２…第２の保持流路 ｄ…第２の流出ポート ｅ…溶離液Ｂ導入ポート ｆ…溶離液排出ポート ｇ…第２の流入ポート ｈ…カラム接続ポート ｉ…第１の流入ポート ｊ…試料等排出ポート

Claims (4)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 少なくとも２種類の溶離液Ａ，Ｂを用い
   た液体クロマトグラフ装置であって、 カラムと、 前記カラムの下流に配置されており、測定対象成分を検
   出するための検出器と、 前記カラムの上流に配置された流路切換え部材と、 試料もしくは洗浄液または溶離液Ａを一時的に保持する
   ための第１の保持流路と、溶離液Ａまたは溶離液Ｂを一
   時的に保持するための第２の保持流路とを備え、 前記流路切換え部材が、 溶離液Ａを導入するための溶離液Ａ導入ポートと、溶離
   液Ｂを導入するための溶離液Ｂ導入ポートと、試料また
   は洗浄液を導入するための試料等導入ポートと、試料も
   しくは洗浄液を排出する試料等排出ポートと、溶離液Ａ
   または溶離液Ｂを排出する溶離液排出ポートと、前記溶
   離液Ａ，Ｂまたは試料をカラムに流出させるカラム接続
   ポートと、前記第１の保持流路の一端に接続されてお
   り、第１の保持流路に試料もしくは洗浄液または溶離液
   Ａを流出する第１の流出ポートと、第１の保持流路の他
   端に接続されており、第１の保持流路から試料もしくは
   洗浄液または溶離液Ａが流入される第１の流入ポート
   と、前記第２の保持流路の一端に接続されており、第２
   の保持流路に溶離液Ａまたは溶離液Ｂを流出する第２の
   流出ポートと、前記第２の保持流路の他端に接続されて
   おり、第２の保持流路から溶離液Ａまたは溶離液Ｂが流
   入される第２の流入ポートとを有し、 前記流路切換え部材は、第２の保持流路が、カラム接続
   ポートに接続される第１の状態と、第１の保持流路がカ
   ラム接続ポートに接続される第２の状態との間で切換え
   られるように構成されている液体クロマトグラフ装置。
2. 【請求項２】 前記流路切換え部材が十方バルブである
   請求項１に記載の液体クロマトグラフ装置。
3. 【請求項３】 前記試料が測定対象成分としてのヘモグ
   ロビン類を含有する試料である請求項１または２に記載
   の液体クロマトグラフ装置。
4. 【請求項４】 請求項１〜３のいずれかに記載の液体ク
   ロマトグラフ装置を用いた測定方法であって、前記溶離
   液Ｂの溶出力が溶離液Ａの溶出力よりも大きく、前記流
   路切換え部材を第２の状態として前記カラム接続ポート
   に溶離液Ａを送液しつつ、試料をカラムに導入した後、
   前記流路切換え部材を第１の状態に切換えてカラムに溶
   離液Ｂを導入することを特徴とする、液体クロマトグラ
   フ装置を用いた測定方法。