WO2010005068A1 - 癌の治療及び予防用医薬組成物 - Google Patents

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文義 岡野
孝則 齋藤
井戸　隆喜
まさき 清水
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    • C07K2317/734—Complement-dependent cytotoxicity [CDC]

Definitions

  • the present invention relates to a novel pharmaceutical use of an antibody against CD179b or a fragment thereof as a therapeutic and / or preventive agent for cancer.
  • Cancer is a disease that occupies the top cause of all deaths, and the current treatment is a combination of radiation therapy and chemotherapy, mainly surgery. Despite the recent development of new surgical methods and the discovery of new anti-cancer drugs, the therapeutic results of cancer have not improved much except for some cancers. In recent years, advances in molecular biology and cancer immunology have identified antibodies that react specifically with cancer, cancer antigens that are recognized by cytotoxic T cells, genes that encode cancer antigens, There is an increasing expectation for a specific cancer therapy targeting cancer antigens (Non-patent Document 1).
  • Non-Patent Documents 4 to 4 9
  • clinical studies of cell therapy using immune cells that specifically react with cancer antigens and cancer-specific immunotherapy such as vaccines containing cancer antigens are being conducted targeting a part of them.
  • CD179b is a part of an alternative light chain of immunoglobulin, and is known to be expressed on the membrane surface of B cell progenitor cells (pre-B cells and pro-B cells). It disappears as B cells differentiate and is not expressed on mature B cells.
  • CD179b is known to be expressed in leukemia (pre-B cell leukemia) cells in which pre-B cells have become cancerous (Non-patent Documents 10 and 11).
  • CD179b is also expressed in lymphoma (pre-B cell lymphoma) cells in which pre-B cells have become cancerous, and is known to be usable as a diagnostic marker for pre-B cell lymphoma (Non-patent Document 12). ).
  • An object of the present invention is to identify a cancer antigen protein that is specifically expressed on the surface of a cancer cell, and to provide a use of an antibody targeting it as a therapeutic and / or prophylactic agent for cancer.
  • the present inventors have encoded a protein that binds to an antibody present in serum derived from a cancer-bearing organism by the SEREX method using serum from the same dog as the canine breast cancer tissue-derived cDNA library.
  • cDNA was obtained, and human CD179b having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 3 was prepared based on the human homologous gene of the obtained gene. It was found that CD179b is hardly expressed in normal tissues, whereas it is specifically expressed in breast cancer, leukemia and lymphoma cells. And it discovered that the antibody with respect to these CD179b impaired the cancer cell which expresses CD179b, and came to complete this invention.
  • the present invention has the following features.
  • the present invention relates to a CD179b protein having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 3, or an amino acid sequence having 60% or more sequence identity with the amino acid sequence, or a fragment thereof containing 7 or more consecutive amino acids,
  • the present invention provides a pharmaceutical composition for treating and / or preventing cancer, comprising an antibody having a chemical reactivity or a fragment thereof as an active ingredient.
  • the cancer is a cancer expressing the CD179b gene.
  • the cancer is breast cancer, leukemia or lymphoma.
  • the antibody is a monoclonal antibody or a polyclonal antibody.
  • the antibody is a human antibody, a humanized antibody, a chimeric antibody, a single chain antibody, or a bispecific antibody.
  • the antibody comprises a heavy chain variable region comprising amino acid sequences of SEQ ID NOs: 103, 104 and 102 and a light chain variable region comprising amino acid sequences of SEQ ID NOs: 106, 107 and 108, and CD179b
  • An antibody having immunological reactivity with a protein is an antibody having immunological reactivity with a protein.
  • the antibody comprises a heavy chain variable region comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 105 and a light chain variable region comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 109, and is immunologically reactive with the CD179b protein.
  • Antibody comprises a heavy chain variable region comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 105 and a light chain variable region comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 109, and is immunologically reactive with the CD179b protein.
  • the present invention further provides the following antibodies.
  • An antibody comprising a heavy chain variable region comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 105 and a light chain variable region comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 109, and having immunological reactivity with the CD179b protein.
  • the present invention further provides the following polypeptide or DNA.
  • (V) a polypeptide comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 105 or a DNA encoding the polypeptide.
  • Vi A polypeptide comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 109 or a DNA encoding the polypeptide.
  • (Ix) a heavy chain complementarity determining region (CDR) polypeptide selected from the group consisting of the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 103, 104 and 102 or DNA encoding the polypeptide.
  • CDR complementarity determining region
  • X a light chain complementarity determining region (CDR) polypeptide selected from the group consisting of the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 106, 107 and 108 or DNA encoding the polypeptide.
  • CDR complementarity determining region
  • the antibody against CD179b used in the present invention damages cancer cells. Therefore, antibodies against CD179b are useful for the treatment and prevention of cancer.
  • the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 3 in the sequence listing disclosed by the present invention is specifically present in the serum derived from a cancer-bearing dog by the SEREX method using the serum of the same affected dog as the canine mammary cancer-derived cDNA library. It is the amino acid sequence of CD179b isolated as a human homologous factor (homolog) of a polypeptide that binds to the antibody to be detected (see Example 1).
  • the antibody against CD179b used in the present invention may be any kind of antibody as long as it can exhibit antitumor activity.
  • monoclonal antibody for example, monoclonal antibody, polyclonal antibody, synthetic antibody, multispecific antibody, human antibody, humanized antibody , Chimeric antibodies, single chain antibodies (scFv), antibody fragments such as Fab and F (ab ′) 2 , and the like.
  • scFv single chain antibodies
  • antibody fragments such as Fab and F (ab ′) 2 , and the like.
  • an antibody capable of specifically binding to the CD179b protein is desirable, and when the subject is a human, it is a human antibody or a humanized antibody in order to avoid or suppress rejection. It is desirable.
  • CD179b protein specifically binds to CD179b protein and does not substantially bind to other proteins.
  • a commercially available antibody against CD179b may be used.
  • antibodies against human CD179b clones such as GA170, H-60, HP6054, A-19, C-16, SLC1, SLC2, SLC3, SLC4 and HSL11 are known and available.
  • the antitumor activity of the antibody that can be used in the present invention shows whether it exhibits cytotoxic activity via immune cells or complement to tumor cells that express the polypeptide in vitro. Can be evaluated by examining.
  • the subject to be treated and / or prevented for cancer in the present invention is a mammal such as a human, a pet animal, livestock, a sport animal, etc., and a preferred subject is a human.
  • cancer and “tumor” used in the present specification mean a malignant neoplasm and are used interchangeably.
  • the protein or fragment thereof used as a sensitizing antigen for obtaining an antibody against CD179b used in the present invention is not limited to the animal species from which it is derived, such as human, dog, cow, mouse, rat and the like. However, it is preferable to select in consideration of compatibility with the parent cell used for cell fusion. In general, a protein derived from a mammal is preferable, and a protein derived from a human is particularly preferable. For example, when CD179b is human CD179b, human CD179b protein or a partial peptide thereof, cells expressing human CD179b, and the like can be used.
  • CD179b The base sequence and amino acid sequence of human CD179b and its homologue are accessed, for example, by GenBank (US NCBI) and algorithms such as BLAST and FASTA (Karlinarand Altschul, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 87: 2264-2268, 1993; Altschul et al., Nucleic Acids Res., 25: 3389-3402, 1997).
  • CD179b is also referred to as ⁇ 5, IGLL1, Vpreb2, LOC608248, and the like, but in this specification, “CD179b” is used as a representative.
  • human CD179b is registered with numbers such as NM_152855 and NM_020070
  • mouse Vpreb2 is registered with a number such as NM_016983
  • dog LOC608248 is registered with a number such as XM_845215.
  • the sequence represented by SEQ ID NO: 1 or 3 is 50% to 100%, preferably 60% to 100%, more preferably 80% to 100%. %, More preferably 90% to 100%, most preferably 95% to 100%, eg 97% to 100%, 98% to 100%, 99% to 100% or 99.5% to 100% sequence identity
  • a target is a nucleic acid or protein comprising a sequence having
  • “% sequence identity” refers to the total number of amino acids (or bases) when two sequences are aligned (aligned) with the maximum similarity, with or without gaps. The percentage (%) of the same amino acid (or base) relative to.
  • the CD179b protein fragment has a length that is less than the total length of the protein from the amino acid length of the epitope (antigenic determinant), which is the smallest unit recognized by the antibody.
  • the length of the epitope is usually in the range of 7-12 amino acids in succession.
  • the above-mentioned polypeptide containing the human CD179b protein and its partial peptide can be synthesized according to chemical synthesis methods such as the Fmoc method (fluorenylmethyloxycarbonyl method) and the tBoc method (t-butyloxycarbonyl method). it can. Moreover, it can also synthesize
  • a polynucleotide encoding the above polypeptide is prepared, the polynucleotide is incorporated into an expression vector and introduced into a host cell, and the polypeptide is produced in the host cell. Thus, the desired polypeptide can be obtained.
  • the polynucleotide encoding the above polypeptide can be easily prepared by a known genetic engineering technique or a conventional method using a commercially available nucleic acid synthesizer.
  • DNA containing the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 1 is subjected to PCR using a pair of primers designed to amplify the nucleotide sequence described in SEQ ID NO: 1, using human chromosomal DNA or cDNA library as a template.
  • PCR reaction conditions can be set as appropriate. For example, one cycle of a reaction process consisting of 94 ° C. for 30 seconds (denaturation), 55 ° C. for 30 seconds to 1 minute (annealing), and 72 ° C.
  • Examples of the conditions include, but are not limited to, conditions of reacting at 72 ° C. for 7 minutes after 30 cycles.
  • appropriate probes and primers are prepared based on the nucleotide sequence and amino acid sequence information shown in SEQ ID NOs: 1 and 3 of the sequence listing in the present specification, and a human or other cDNA library is prepared using them. By screening, desired DNA can be isolated.
  • the cDNA library is preferably prepared from cells, organs or tissues expressing the protein of SEQ ID NO: 3. Examples of such cells and tissues are bone marrow, leukemia cells, breast cancer cells, lymphoma cells and the like. Operations such as the preparation of the probe or primer, construction of the cDNA library, screening of the cDNA library, and cloning of the gene of interest are known to those skilled in the art. For example, Sambrook et al., Molecular Cloning, second edition, This can be performed according to the method described in Current Protocols in Molecular Molecular Biology (1989). From the DNA thus obtained, DNA encoding the human CD179b protein and its partial peptide can be obtained.
  • the host cell may be any cell as long as it can express the polypeptide.
  • prokaryotic cells include Escherichia coli
  • examples of eukaryotic cells include monkey kidney cells COS 1 and Chinese hamster ovary.
  • an expression vector having a replication origin, a promoter, a ribosome binding site, a multicloning site, a terminator, a drug resistance gene, a nutritional complement gene and the like in the prokaryotic cell is used.
  • Examples of the expression vector for E. coli include pUC system, pBluescript II, pET expression system, pGEX expression system and the like.
  • an expression vector for a eukaryotic cell having a promoter, a splicing region, a poly (A) addition site and the like is used as an expression vector.
  • expression vectors include pKA1, pCDM8, pSVK3, pMSG, pSVL, pBK-CMV, pBK-RSV, EBV vector, pRS, pcDNA3, pMSG, pYES2, and the like.
  • a DNA encoding the above polypeptide is incorporated into such an expression vector, and after transforming a eukaryotic host cell with the vector, the resulting transformant is cultured, and the DNA encodes. Can be expressed in eukaryotic host cells.
  • pIND / V5-His, pFLAG-CMV-2, pEGFP-N1, pEGFP-C1, etc. are used as an expression vector, a His tag (eg (His) 6 to (His) 10 ), FLAG tag, myc tag
  • the polypeptide can be expressed as a fusion protein to which various tags such as HA tag and GFP are added.
  • a known method such as electroporation, calcium phosphate method, liposome method, DEAE dextran method, or microinjection can be used.
  • An antibody is usually a heteromultimeric glycoprotein comprising at least two heavy chains and two light chains. Apart from IgM, it is a heterotetrameric glycoprotein of about 150 kDa composed of two identical light (L) chains and two identical heavy (H) chains. Typically, each light chain is linked to the heavy chain by one disulfide covalent bond, but the number of disulfide bonds between the heavy chains of different immunoglobulin isotypes varies. Each heavy and light chain also has intrachain disulfide bonds. Each heavy chain has at one end a variable domain (VH region) followed by several constant regions. Each light chain has a variable domain (VL region) and one constant region at the opposite end.
  • VH region variable domain
  • VL region variable domain
  • the constant region of the light chain is aligned with the first constant region of the heavy chain, and the light chain variable domain is aligned with the variable domain of the heavy chain.
  • the variable domain of an antibody confers binding specificity on the antibody by exhibiting specific variability, in which a specific region is called a complementarity determining region (CDR).
  • CDR complementarity determining region
  • the relatively conserved portion of the variable region is called the framework region (FR).
  • the complete heavy and light chain variable domains each contain 4 FRs linked by 3 CDRs.
  • the three CDRs are called CDRH1, CDRH2, CDRH3 from the N-terminal in the heavy chain, and similarly called CDRL1, CDRL2, CDRL3 in the light chain.
  • CDRH3 is most important for the binding specificity of the antibody to the antigen.
  • the CDRs of each chain are held together in a state closer to the FR region, and contribute to the formation of an antigen binding site of the antibody together with the CDR from the other chain.
  • the constant region does not contribute directly to the binding of the antibody to the antigen, but is involved in various effector functions such as antibody-dependent cellular cytotoxicity (ADCC), phagocytosis through binding to Fc ⁇ receptors,
  • Figure 6 shows half-life / clearance rate through neonatal Fc receptor (FcRn), complement dependent cytotoxicity (CDC) through the C1q component of the complement cascade.
  • the anti-CD179b antibody in the present invention means an antibody having immunological reactivity with the full length or fragment of the CD179b protein.
  • immunological reactivity means the property of binding of an antibody and CD179b antigen in vivo, and the function of damaging (eg, killing, suppressing, or regressing) a tumor through such binding. , Is demonstrated. That is, the antibody used in the present invention is not limited as long as it can bind to the CD179b protein and damage tumors such as leukemia, lymphoma and breast cancer.
  • antibodies include monoclonal antibodies, polyclonal antibodies, synthetic antibodies, multispecific antibodies, human antibodies, humanized antibodies, chimeric antibodies, single chain antibodies, antibody fragments (eg, Fab and (Aab ′) 2 ), and the like.
  • the antibody can also be any class of immunoglobulin molecule, such as IgG, IgE, IgM, IgA, IgD and IgY, or any subclass such as IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1, IgA2, and the like.
  • the antibody may be further modified by glycosylation, acetylation, formylation, amidation, phosphorylation, PEGylation or the like.
  • the antibody is a monoclonal antibody
  • a mouse is immunized with the leukemia cell line Namalwa that expresses CD179b, the spleen is extracted from the mouse, the cells are separated, and the cells are fused with mouse myeloma cells. Then, a clone producing an antibody having a cancer cell growth inhibitory action is selected from the obtained fused cells (hybridoma). It can be prepared by isolating a monoclonal antibody-producing hybridoma having cancer cell growth inhibitory action, culturing the hybridoma, and purifying the antibody from the culture supernatant by a general affinity purification method.
  • a hybridoma producing a monoclonal antibody can also be produced, for example, as follows.
  • an animal is immunized with a sensitizing antigen according to a known method.
  • a sensitizing antigen is injected into a mammal intraperitoneally or subcutaneously.
  • the sensitizing antigen is diluted to an appropriate amount with PBS (Phosphate-Buffered Saline), physiological saline, or the like, and mixed with an appropriate amount of an ordinary adjuvant, for example, Freund's complete adjuvant, if necessary, and emulsified.
  • PBS Phosphate-Buffered Saline
  • physiological saline or the like
  • an ordinary adjuvant for example, Freund's complete adjuvant, if necessary, and emulsified.
  • the mammal is dosed several times every 4-21 days.
  • an appropriate carrier can be used during immunization with the sensitizing antigen.
  • immune cells are collected from the mammal and subjected to cell fusion. Can be mentioned.
  • Mammalian myeloma cells are used as the other parent cell to be fused with the immune cells.
  • This myeloma cell is known in various known cell lines such as P3U1 (P3-X63Ag8U1), P3 (P3x63Ag8.653) (J.JImmnol. (1979) 123, 1548-1550), P3x63Ag8U.1 (Current Topics in Microbiology and Immunology (1978) 81, 1-7), NS-1 (Kohler. G. and Milstein, C. Eur. J. Immunol. (1976) 6, 511-519), MPC-11 (Margulies.
  • the cell fusion between the immune cells and myeloma cells is basically performed by a known method such as the method of Kohler and Milstein et al. (Kohler. G. and Milstein, C., Methods Enzymol. (1981) 73, 3- 46) etc.
  • the cell fusion is performed, for example, in a normal nutrient culture medium in the presence of a cell fusion promoter.
  • a cell fusion promoter for example, polyethylene glycol (PEG), Sendai virus (HVJ), or the like is used as the fusion promoter, and an auxiliary agent such as dimethyl sulfoxide can be added and used to increase the fusion efficiency as desired.
  • the usage ratio of immune cells and myeloma cells can be arbitrarily set.
  • the number of immune cells is preferably 1 to 10 times that of myeloma cells.
  • the culture solution used for the cell fusion for example, RPMI1640 culture solution suitable for growth of the myeloma cell line, MEM culture solution, and other normal culture solutions used for this kind of cell culture can be used.
  • Serum replacement fluid such as fetal calf serum (FCS) can be used in combination.
  • a predetermined amount of the immune cells and myeloma cells are mixed well in the culture medium, and a PEG solution (for example, an average molecular weight of about 1000 to 6000) preliminarily heated to about 37 ° C. is usually 30-60% (
  • the desired hybridoma is formed by adding at a concentration of w / v) and mixing.
  • cell fusion agents and the like that are undesirable for the growth of the hybridoma are removed by sequentially adding an appropriate culture medium and centrifuging to remove the supernatant.
  • the hybridoma thus obtained is selected by culturing in a normal selective culture solution, for example, a HAT culture solution (a culture solution containing hypoxanthine, aminopterin and thymidine). Culturing with the HAT culture solution is continued for a sufficient time (usually several days to several weeks) for cells other than the target hybridoma (non-fusion cells) to die. Subsequently, the usual limiting dilution method is performed, and the hybridoma producing the target antibody is screened and single-cloned.
  • a normal selective culture solution for example, a HAT culture solution (a culture solution containing hypoxanthine, aminopterin and thymidine). Culturing with the HAT culture solution is continued for a sufficient time (usually several days to several weeks) for cells other than the target hybridoma (non-fusion cells) to die. Subsequently, the usual limiting dilution method is performed, and the hybridoma producing the target antibody is screened
  • human lymphocytes such as human lymphocytes infected with EB virus are sensitized in vitro with proteins, protein-expressing cells or lysates thereof. Lymphocytes can be fused with human-derived myeloma cells having permanent mitotic activity, for example, U266 (Registration No. TIB196) to obtain a hybridoma that produces a human antibody having a desired activity (for example, cell growth inhibitory activity).
  • the hybridoma producing the monoclonal antibody thus produced can be subcultured in a normal culture solution and can be stored for a long time in liquid nitrogen.
  • a desired antigen or a cell expressing the desired antigen is used as a sensitizing antigen and immunized according to a normal immunization method, and the resulting immune cell is fused with a known parent cell by a normal cell fusion method. And can be prepared by screening monoclonal antibody-producing cells (hybridomas) by a normal screening method.
  • a polyclonal antibody can be obtained, for example, as follows.
  • Serum is obtained by immunizing small animals such as mice, human antibody-producing mice, and rabbits with natural CD179b protein or recombinant CD179b protein expressed in a microorganism such as Escherichia coli as a fusion protein with GST or a partial peptide thereof.
  • This is prepared by, for example, purification using ammonium sulfate precipitation, protein A, protein G column, DEAE ion exchange chromatography, affinity column coupled with CD179b protein or synthetic peptide, or the like.
  • KM mice Korean Pharma / Medarex
  • Xeno mice Amgen
  • human antibody-producing mice When such mice are immunized with the CD179b protein or fragment thereof, fully human polyclonal antibodies can be obtained from blood.
  • spleen cells can be removed from the immunized mouse and a human monoclonal antibody can be prepared by a fusion method with myeloma cells.
  • the antigen can be prepared in accordance with, for example, a method using animal cells (Special Table 2007-530068) or a method using baculovirus (eg, WO 98/46777).
  • immunization may be performed by binding to an immunogenic macromolecule such as albumin.
  • a recombinant antibody produced by cloning an antibody gene from a hybridoma incorporating it into an appropriate vector, introducing it into a host, and using genetic recombination technology (for example, Carl, AK Borrebaeck, James, W. Larrick, rickTHERAPEUTIC MONOCLONAL ANTIBODIES, Published in the United Kingdom by MACMILLAN PUBLISHERS LTD, 1990).
  • genetic recombination technology for example, Carl, AK Borrebaeck, James, W. Larrick, rickTHERAPEUTIC MONOCLONAL ANTIBODIES, Published in the United Kingdom by MACMILLAN PUBLISHERS LTD, 1990.
  • V region variable region of the antibody
  • cDNA of the variable region (V region) of the antibody is synthesized from the hybridoma mRNA using reverse transcriptase. If DNA encoding the V region of the target antibody is obtained, it is ligated with DNA encoding the desired antibody constant region (C region) and incorporated into an expression vector.
  • DNA encoding the V region of the antibody may be incorporated into an expression vector containing DNA of the antibody C region. It is incorporated into an expression vector so as to be expressed under the control of an expression control region such as an enhancer or promoter.
  • host cells can be transformed with this expression vector to express the antibody.
  • the anti-CD179b antibody of the present invention is preferably a monoclonal antibody. However, it may be a polyclonal antibody, a genetically modified antibody (such as a chimeric antibody or a humanized antibody) and the like.
  • Monoclonal antibodies include human monoclonal antibodies, non-human animal monoclonal antibodies (eg, mouse monoclonal antibody, rat monoclonal antibody, chicken monoclonal antibody, etc.).
  • a monoclonal antibody can be produced by culturing a hybridoma obtained by fusion of spleen cells and myeloma cells from a non-human mammal (eg, mouse, human antibody-producing mouse, etc.) immunized with CD179b protein.
  • mouse monoclonal antibody # 8 was prepared and its antitumor effect was confirmed.
  • This antibody # 8 comprises a heavy chain variable (VH) region having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 105 and a light chain variable (VL) region having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 109, wherein the sequence is arranged in the VH region.
  • the amino acid sequences of SEQ ID NO: 103 (CDR1), SEQ ID NO: 104 (CDR2), and SEQ ID NO: 102 (CDR3) are included, and the VL region includes SEQ ID NO: 106 (CDR1), SEQ ID NO: 107 (CDR2), and SEQ ID NO: 108 (CDR3).
  • CDR1 CDR1
  • SEQ ID NO: 107 CDR2
  • SEQ ID NO: 108 CDR3
  • a chimeric antibody is an antibody prepared by combining sequences derived from different animals, such as a mouse antibody heavy chain, light chain variable region and human antibody heavy chain, light chain constant region antibody, etc. .
  • a chimeric antibody can be prepared using a known method. For example, a DNA encoding an antibody V region and a DNA encoding a human antibody C region are ligated, incorporated into an expression vector, and introduced into a host. It is obtained by producing.
  • Polyclonal antibodies include antibodies obtained by immunizing human antibody-producing animals (eg, mice) with CD179b protein.
  • a humanized antibody is a modified antibody also called a reshaped human antibody.
  • Humanized antibodies are constructed by transplanting CDRs of antibodies from immunized animals into the complementarity determining regions of human antibodies. The general gene recombination technique is also known.
  • oligos were prepared so that the DNA sequence designed to link the CDR of the mouse antibody and the framework region (FR) of the human antibody had an overlapping portion at the end. It is synthesized from nucleotides by PCR. The obtained DNA is obtained by ligating with a DNA encoding a human antibody constant region, then incorporating it into an expression vector, introducing it into a host and producing it (European Patent Application Publication No. EP 239400, International Patent Application Publication) No. WO 96/02576). As the FR of a human antibody linked through CDR, a complementarity determining region that forms a favorable antigen binding site is selected.
  • the amino acid of the framework region in the variable region of the antibody may be substituted so that the complementarity determining region of the reshaped human antibody forms an appropriate antigen-binding site (Sato, K. et al., Cancer Res. (1993) 53, 851-856). Moreover, you may substitute by the framework region derived from various human antibodies (refer international patent application publication number WO99 / 51743).
  • a region in which the complementarity determining region forms a favorable antigen binding site is selected. If necessary, the amino acid of the framework region in the variable region of the antibody may be substituted so that the complementarity determining region of the reshaped human antibody forms an appropriate antigen-binding site (Sato, K. et al., Cancer Res. (1993) 53, 851-856).
  • variable region e.g, FR
  • constant region amino acids in the variable region or constant region may be substituted with other amino acids.
  • the amino acid substitution is, for example, less than 15, less than 10, less than 8, less than 7, less than 6, less than 5, less than 4, less than 3, less than 2, or less than 2, preferably 1 to 5, more preferably 1 or 2 amino acids
  • the substituted antibody should be functionally equivalent to the unsubstituted antibody.
  • the substitution is preferably a conservative amino acid substitution, which is a substitution between amino acids with similar properties such as charge, side chain, polarity, aromaticity and the like.
  • Amino acids with similar properties include, for example, basic amino acids (arginine, lysine, histidine), acidic amino acids (aspartic acid, glutamic acid), uncharged polar amino acids (glycine, asparagine, glutamine, serine, threonine, cysteine, tyrosine), nonpolar It can be classified into sex amino acids (leucine, isoleucine, alanine, valine, proline, phenylalanine, tryptophan, methionine), branched chain amino acids (threonine, valine, isoleucine), aromatic amino acids (phenylalanine, tyrosine, tryptophan, histidine).
  • basic amino acids arginine, lysine, histidine
  • acidic amino acids aspartic acid, glutamic acid
  • uncharged polar amino acids glycine, asparagine, glutamine, serine, threonine, cysteine, tyrosine
  • modified antibody examples include antibodies bound to various molecules such as polyethylene glycol (PEG).
  • PEG polyethylene glycol
  • the substance to be bound is not limited. In order to obtain such a modified antibody, it can be obtained by chemically modifying the obtained antibody. These methods are already established in this field.
  • “functionally equivalent” means that the target antibody has the same biological or biochemical activity as the antibody of the present invention, specifically, a function of damaging a tumor, and is applied to humans. Sometimes refers to not essentially causing rejection. Examples of such activity include cell growth inhibitory activity or binding activity.
  • a method for introducing a mutation into the polypeptide is known.
  • a person skilled in the art can perform site-directed mutagenesis (Hashimoto-Gotoh, T. et al. (1995) Gene 152, 271-275, Zoller, MJ, and Smith, M. (1983) Methods Enzymol. 100 , 468-500, Kramer, W. et al. (1984) Nucleic Acids Res. 12, 9441-9456, Kramer W, and Fritz HJ (1987) Methods. Enzymol. 154, 350-367, Kunkel, TA (1985) Proc Natl Acad Sci USA. 82, 488-492, Kunkel (1988) Methods Enzymol. 85, 2763-2766) etc.
  • Antibodies can be prepared.
  • An antibody that recognizes an epitope of CD179b protein that is recognized by the anti-CD179b antibody can be obtained by methods known to those skilled in the art. For example, a method for determining an epitope of CD179b protein recognized by an anti-CD179b antibody by an ordinary method (for example, epitope mapping etc.) and producing an antibody using a polypeptide having an amino acid sequence contained in the epitope as an immunogen, The epitope of the antibody produced by the above method can be determined, and an antibody having the same epitope as that of the anti-CD179b antibody can be selected.
  • epitope of the antibody produced by the above method can be determined, and an antibody having the same epitope as that of the anti-CD179b antibody can be selected.
  • epitope refers to a polypeptide fragment having antigenicity or immunogenicity in a mammal, preferably a human, and the minimum unit thereof consists of about 7 to 12 amino acids.
  • the affinity constant Ka (k on / k off ) of the antibody of the present invention is preferably at least 10 7 M ⁇ 1 , at least 10 8 M ⁇ 1 , at least 5 ⁇ 10 8 M ⁇ 1 , at least 10 9 M ⁇ 1 , At least 5 ⁇ 10 9 M ⁇ 1 , at least 10 10 M ⁇ 1 , at least 5 ⁇ 10 10 M ⁇ 1 , at least 10 11 M ⁇ 1 , at least 5 ⁇ 10 11 M ⁇ 1 , at least 10 12 M ⁇ 1 , at least 10 Desirably 13 M -1 .
  • the antibody of the present invention can be conjugated with an antitumor agent.
  • the bond between the antibody and the antitumor agent is a group reactive with an amino group, carboxyl group, hydroxy group, thiol group (eg, succinimidyl group, formyl group, 2-pyridyldithio group, maleimidyl group, alkoxycarbonyl group). Group, hydroxy group, etc.).
  • antitumor agents include the following antitumor agents known in the literature, such as paclitaxel, doxorubicin, daunorubicin, cyclophosphamide, methotrexate, 5-fluorouracil, thiotepa, busulfan, improsulfan, piperosulfan, benzodopa (benzodopa) ), Carbocone, metredopa, uredopa, uretopa, altreamine, triethylene melamine, triethylenephosphoramide, triethylenethiophosphoramide, trimethylolothromine , Camptothecin, bryostatin, calistatin callystatin), cryptophysin 1, cryptophycin 8, dolastatin, duocarmycin, eleuterine, panclastatin, sarcodictin, spongestatin, chlorambucine, chloronaphazine, cholophosphamide, cholophosphamide Ifosfamide,
  • radioactive isotopes such as At 211 , I 131 , I 125 , Y 90 , Re 186 , Re 188 , Sm 153 , Bi 212 , P 32 , and Lu known in the literature are bound to the antibody of the present invention. It is also possible to do. It is desirable that the radioisotope is effective for tumor treatment and diagnosis.
  • the antibody of the present invention is an antibody having immunological reactivity with CD179b or an antibody that specifically recognizes CD179b.
  • the antibody should be an antibody having a structure such that little or no rejection is avoided in the subject animal to which it is administered.
  • examples of such antibodies include human antibodies, humanized antibodies, chimeric antibodies (eg, human-mouse chimeric antibodies), single chain antibodies, bispecific antibodies and the like when the target animal is human.
  • the heavy and light chain variable regions are derived from human antibodies, or the heavy and light chain variable regions are derived from non-human animal antibody complementarity determining regions (CDR1, CDR2 and CDR3).
  • a framework region derived from a human antibody, or the variable regions of the heavy and light chains are derived from a non-human animal antibody, and the constant regions of the heavy and light chains are human antibodies. It is a recombinant antibody that is derived from. Preferred antibodies are the previous two antibodies.
  • DNA encoding a monoclonal antibody against human CD179b (eg, human monoclonal antibody, mouse monoclonal antibody, rat monoclonal antibody, chicken monoclonal antibody, etc.) is cloned from antibody-producing cells such as hybridomas, and the light chain of the antibody is used as a template.
  • DNA encoding the variable region and the heavy chain variable region was prepared by RT-PCR method, etc., and Kabat EU numbering system (Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5Th Ed. Public Health Service, National Institute ofHealth Based on Bethesda, Md.
  • the sequences of the variable regions of the light and heavy chains or the sequences of CDR1, CDR2 and CDR3 are determined. Furthermore, DNA encoding each of these variable regions or DNA encoding each CDR is converted into a gene recombination technique (Sambrook et al., Molecular Molecular Cloning, Second Edition, Current Protocols in Molecular Molecular Biology (1989)) or DNA synthesizer. It is produced using.
  • the human monoclonal antibody-producing hybridoma can be prepared by immunizing a human antibody-producing animal (for example, mouse) with human CD179b and then fusing spleen cells excised from the immunized animal with myeloma cells. . Separately from this, DNA encoding the variable region and constant region of the light chain or heavy chain derived from a human antibody is prepared as necessary using a gene recombination technique or a DNA synthesizer.
  • the CDR sequence in the DNA encoding the light chain or heavy chain variable region derived from a human antibody is derived from a non-human animal (eg, mouse, rat, chicken, etc.) corresponding thereto.
  • DNA encoding humanized antibody by preparing DNA substituted with CDR sequence of antibody and ligating DNA obtained thereby with DNA encoding constant region of light chain or heavy chain derived from human antibody, respectively Can be produced.
  • DNA encoding the light chain or heavy chain variable region of an antibody derived from an animal other than a human is used.
  • a DNA encoding a chimeric antibody can be prepared by linking with a DNA encoding a region.
  • this antibody is an antibody in which a heavy chain variable region and a light chain variable region are linearly linked via a linker, DNA encoding the heavy chain variable region, DNA encoding the linker And a DNA encoding a light chain variable region can be combined to produce a DNA encoding a single chain antibody.
  • each of the heavy chain variable region and the light chain variable region is derived from a human antibody, or only the CDR is replaced by the CDR of an antibody derived from a non-human animal (eg, mouse, rat, chicken, etc.). Derived from human antibodies.
  • the linker is composed of 12 to 19 amino acids, and examples thereof include 15 amino acids (G 4 S) 3 (Kim, GB. Et al., Protein Engineering Design and Selection 2007, 20 (9): 425-432). .
  • this antibody is an antibody that can specifically bind to two different epitopes, such as DNA encoding heavy chain variable region A, light chain variable region B.
  • DNA, DNA encoding heavy chain variable region B, and DNA encoding light chain variable region A are joined in this order (however, DNA encoding light chain variable region B and DNA encoding heavy chain variable region B) Are linked via a DNA encoding a linker as described above), whereby a DNA encoding a bispecific antibody can be prepared.
  • each of the heavy chain variable region and the light chain variable region is derived from a human antibody, or only the CDR is replaced by the CDR of an antibody derived from a non-human animal (eg, mouse, rat, chicken, etc.). Derived from human antibodies.
  • Recombinant DNA produced as described above is incorporated into one or more appropriate vectors, introduced into host cells (eg, mammalian cells, yeast cells, insect cells, etc.), and (co) expressed (PJ Delves., ANTIBODY PRODUCTION ESSNIMAL TECHNIQUES., 1997 WILEY, P. Shepherd and C. Dean., Monoclonal Antibodies., 2000 OXFORD UNIVERSITY PRESS, JW Goding. Antibodies: principles and practice., 1993 ACADEMIC PRESS).
  • host cells eg, mammalian cells, yeast cells, insect cells, etc.
  • the antibody of the present invention produced by the above method includes, for example, the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 103, 104 and 102 in the heavy chain variable region, and the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 106, 107 and 108 in the light chain variable region. It is an antibody containing.
  • the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 103, 104 and 102 are CDR1, CDR2 and CDR3 of the mouse antibody heavy chain variable region, respectively
  • the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 106, 107 and 108 are respectively mouse antibody light chain CDR1, CDR2 and CDR3 of the variable region.
  • the humanized antibody, chimeric antibody, single chain antibody or bispecific antibody of the present invention is, for example, the following antibody.
  • variable region of the heavy chain comprises the amino acid sequence of SEQ ID NOs: 103, 104 and 102 and the amino acid sequence of the framework region derived from a human antibody
  • variable region of the light chain is the amino acid of SEQ ID NOs: 106, 107 and 108
  • An antibody comprising a sequence and an amino acid sequence of a framework region derived from a human antibody.
  • variable region of the heavy chain comprises the amino acid sequence of SEQ ID NOs: 103, 104 and 102 and the amino acid sequence of the framework region derived from a human antibody
  • constant region of the heavy chain comprises the amino acid sequence derived from a human antibody
  • light chain variable region comprises the amino acid sequence of SEQ ID NOs: 106, 107 and 108 and the human antibody-derived framework region amino acid sequence
  • the light chain constant region comprises the human antibody-derived amino acid sequence. antibody.
  • variable region of the heavy chain comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 105
  • constant region of the heavy chain comprises the amino acid sequence derived from a human antibody
  • variable region of the light chain comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 109
  • An antibody comprising a light chain constant region comprising an amino acid sequence derived from a human antibody.
  • human IgG1 heavy chain constant region has registration number J00228, human IgG2 Registration number J00230 for the heavy chain constant region, registration number X03604 for the human IgG3 heavy chain constant region, registration number K01316 for the human IgG4 heavy chain constant region, registration numbers V00557, X64135, X64133, etc. for the human light chain kappa constant region
  • sequences such as registration numbers X64132 and X64134 can be referred to.
  • the antibody preferably has a cytotoxic activity, and can thereby exert an antitumor effect.
  • a hybridoma capable of producing another human antibody or non-human animal antibody (eg, mouse antibody) against human CD179b is prepared, and the monoclonal antibody produced by the hybridoma is recovered, and has immunological binding properties and cytotoxic activity with human CD179b. It is determined whether or not the target antibody is used as an index. After identifying the target monoclonal antibody-producing hybridoma, DNAs encoding the variable regions of the heavy and light chains of the target antibody were prepared from the hybridoma and sequenced as described above. Use for production.
  • the antibody of the present invention has the specificity of specifically recognizing CD179b, in the sequence of the framework region and / or the constant region of each antibody of (i) to (iv) above, Alternatively, there may be several (preferably 1 or 2) amino acid substitutions, deletions or additions. Here, several means 2 to 5, preferably 2 or 3.
  • the present invention further provides DNA encoding the antibody of the present invention, DNA encoding the heavy chain or light chain of the antibody, or DNA encoding the variable region of the heavy chain or light chain of the antibody.
  • DNA includes, for example, a DNA encoding a heavy chain variable region including a base sequence encoding the amino acid sequence of SEQ ID NOs: 103, 104 and 102, and a base sequence encoding the amino acid sequence of SEQ ID NOs: 106, 107 and 108 DNA encoding the light chain variable region, and the like.
  • complementarity determining regions (CDRs) encoded by the DNA of these sequences are regions that determine the specificity of the antibody
  • sequences that encode other regions of the antibody May be a sequence derived from another antibody.
  • other antibodies include antibodies derived from organisms other than humans, but those derived from humans are preferable from the viewpoint of reducing side effects. That is, in the above DNA, the regions encoding the heavy chain and light chain framework regions and the constant regions preferably include a base sequence encoding a corresponding amino acid sequence derived from a human antibody.
  • DNA encoding the antibody of the present invention is a DNA encoding a heavy chain variable region comprising a base sequence encoding the amino acid sequence of SEQ ID NO: 105, and a region encoding the light chain variable region is SEQ ID NO: 109.
  • an example of the base sequence encoding the amino acid sequence of SEQ ID NO: 105 is the base sequence of SEQ ID NO: 110.
  • An example of the base sequence encoding the amino acid sequence of SEQ ID NO: 109 is the base sequence of SEQ ID NO: 111.
  • the region encoding each heavy chain and light chain constant region includes a base sequence encoding a corresponding amino acid sequence derived from a human antibody.
  • the DNA of the present invention can be obtained, for example, by the above method or the following method.
  • total RNA is prepared from a hybridoma related to the antibody of the present invention using a commercially available RNA extraction kit, and cDNA is synthesized by reverse transcriptase using a random primer or the like.
  • the cDNA encoding the antibody is amplified by a PCR method using oligonucleotides having conserved sequences as primers.
  • the sequence encoding the constant region can be obtained by amplifying a known sequence by the PCR method.
  • the base sequence of DNA can be determined by a conventional method by incorporating it into a sequencing plasmid or phage.
  • the anti-tumor effect of the anti-CD179b antibody used in the present invention on CD179b-expressing cancer cells is caused by the following mechanism.
  • ADCC Effector cell antibody dependent cytotoxicity
  • CDC Complement dependent cytotoxicity
  • the activity evaluation of the anti-CD179b antibody used in the present invention is carried out by measuring the above ADCC activity or CDC activity against cancer cells expressing CD179b in vitro as specifically shown in the Examples below. Can be evaluated.
  • the anti-CD179b antibody used in the present invention binds to the CD179b protein on cancer cells and exhibits antitumor action due to the above activity, it is considered useful for the treatment or prevention of cancer. That is, the present invention provides a pharmaceutical composition for treating and / or preventing cancer comprising an anti-CD179b antibody as an active ingredient.
  • the anti-CD179b antibody is used for the purpose of administering it to the human body (antibody treatment), it is preferable to use a human antibody or a humanized antibody in order to reduce immunogenicity.
  • the binding constant Ka (k on / k off ) is preferably at least 10 7 M ⁇ 1 , at least 10 8 M ⁇ 1 , at least 5 ⁇ 10 8 M ⁇ 1 , at least 10 9 M ⁇ 1 , at least 5 ⁇ 10 9 M ⁇ 1 , at least 10 10 M ⁇ 1 , at least 5 ⁇ 10 10 M ⁇ 1 , at least 10 11 M ⁇ 1 , at least 5 ⁇ 10 11 M ⁇ 1 , at least 10 12 M -1, is preferably at least 10 13 M -1.
  • the target of the pharmaceutical composition for the treatment and / or prevention of cancer of the present invention is not particularly limited as long as it is a cancer (cell) expressing the CD179b gene, but preferably from the group consisting of leukemia, lymphoma and breast cancer Selected cancers (cells), including, for example, breast cancer, complex breast cancer, malignant mixed breast tumor, intraductal papillary carcinoma, mastocytoma, chronic lymphocytic leukemia, digestion Tubular lymphoma, digestive lymphoma, small to medium cell lymphoma, and the like are also included.
  • the antibody or fragment thereof used in the present invention can be used for the cancer treatment and / or prevention method described above.
  • the antibody used in the present invention when used as a pharmaceutical composition, it can be formulated by methods known to those skilled in the art. For example, it can be used parenterally in the form of a sterile solution with water or other pharmaceutically acceptable liquid, or an injection of suspension.
  • a pharmacologically acceptable carrier or medium specifically, sterile water or physiological saline, vegetable oil, emulsifier, suspension, surfactant, stabilizer, flavoring agent, excipient, vehicle, preservative
  • a pharmaceutical preparation by combining with a binder or the like as appropriate and mixing in a unit dosage form generally required for pharmaceutical practice. The amount of active ingredient in these preparations is such that an appropriate volume within the indicated range can be obtained.
  • a sterile composition for injection can be formulated in accordance with normal pharmaceutical practice using a vehicle such as distilled water for injection.
  • Aqueous solutions for injection include, for example, isotonic solutions containing physiological saline, glucose and other adjuvants such as D-sorbitol, D-mannose, D-mannitol and sodium chloride.
  • Suitable solubilizers such as Alcohols, specifically ethanol, polyalcohols such as propylene glycol, polyethylene glycol, nonionic surfactants such as polysorbate 80 (TM), HCO-60 may be used in combination.
  • oily liquid examples include sesame oil and soybean oil, which may be used in combination with benzyl benzoate or benzyl alcohol as a solubilizing agent.
  • oily liquid examples include sesame oil and soybean oil, which may be used in combination with benzyl benzoate or benzyl alcohol as a solubilizing agent.
  • buffer for example, phosphate buffer, sodium acetate buffer, a soothing agent, for example, procaine hydrochloride, stabilizer, for example, benzyl alcohol, phenol, antioxidant.
  • the prepared injection solution is usually filled into a suitable ampoule.
  • Administration is oral or parenteral, preferably parenteral administration, and specific examples include injection, nasal administration, pulmonary administration, and transdermal administration.
  • injection form it can be administered systemically or locally by, for example, intravenous injection, intramuscular injection, intraperitoneal injection, subcutaneous injection, or the like.
  • the administration method can be appropriately selected depending on the age, symptoms, sex, etc. of the patient.
  • the dosage of the pharmaceutical composition containing the antibody or fragment thereof can be selected, for example, in the range of 0.0001 mg to 1000 mg per kg of body weight at a time. Alternatively, for example, the dose can be selected in the range of 0.001 to 100,000 mg / body per patient, but is not necessarily limited to these values.
  • the dose and administration method vary depending on the weight, age, symptoms, etc. of the patient, but can be appropriately selected by those skilled in the art.
  • the present invention further provides the following polypeptides and DNAs related to the above-mentioned antibodies.
  • V a heavy chain CDR polypeptide selected from the group consisting of the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 103, 104 and 102, and DNA encoding the polypeptide.
  • Vi a light chain CDR polypeptide selected from the group consisting of the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 106, 107 and 108, and DNA encoding the polypeptide.
  • polypeptides and DNA can be prepared using gene recombination techniques as described above.
  • Example 1 Identification of novel cancer antigen protein by SEREX method (1) Preparation of cDNA library Totally by acid-guanidinium-phenol-chloroform method (Acid guanidinium-Phenol-Chloroform method) from canine mammary cancer tissue excised by surgery RNA was extracted, and polyA RNA was purified using Oligotex-dT30 mRNA purification kit (Takara Shuzo) according to the protocol attached to the kit.
  • a canine mammary carcinoma-derived cDNA phage library was synthesized using the obtained mRNA (5 ⁇ g).
  • the cDNA phage library was prepared using cDNA Synthesis Kit, ZAP-cDNA Synthesis Kit, ZAP-cDNA GigapackIII Gold Cloning Kit (manufactured by STRATAGENE) according to the protocol attached to the kit.
  • the size of the prepared cDNA phage library was 2.99 ⁇ 10 5 pfu / ml.
  • the membrane was collected, immersed in TBS (10 mM Tris-HCl, 150 mM NaCl pH 7.5) containing 0.5% nonfat dry milk, and shaken at 4 ° C. overnight to suppress nonspecific reaction.
  • TBS 10 mM Tris-HCl, 150 mM NaCl pH 7.5
  • This filter was reacted with serum of a patient dog diluted 500 times at room temperature for 2 to 3 hours.
  • the serum pretreatment method is as follows. Specifically, ⁇ ZAP Express phage into which no foreign gene was inserted was infected with host E. coli (XL1-BLue MRF ′), and then cultured overnight at 37 ° C. on NZY plate medium. Next, a buffer of 0.2 M NaHCO 3 pH 8.3 containing 0.5 M NaCl was added to the plate and allowed to stand at 4 ° C. for 15 hours, and then the supernatant was recovered as an E.
  • E. coli / phage extract was passed through an NHS-column (GE Healthcare Bio-Science) to immobilize the E. coli / phage derived protein.
  • Serum dog serum was passed through and reacted with this protein-immobilized column, and antibodies adsorbed to E. coli and phage were removed from the serum.
  • the serum fraction passed through the column was diluted 500 times with TBS containing 0.5% nonfat dry milk, and this was used as an immunoscreening material.
  • phagemid host Escherichia coli prepared to have an absorbance OD 600 of 1.0 and 10 ⁇ l of the purified phage solution were mixed and reacted at 37 ° C. for 15 minutes, and 50 ⁇ l was treated with ampicillin (final concentration 50 ⁇ g / ml).
  • SOLR phagemid host Escherichia coli
  • the purified plasmid was analyzed for the full-length insert sequence by the primer walking method using the T3 primer set forth in SEQ ID NO: 94 and the T7 primer set forth in SEQ ID NO: 95.
  • the gene sequences described in the even numbers of SEQ ID NOs: 4 to 92 were obtained.
  • a homologous search program BLAST search http://www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/) is performed using the base sequence and amino acid sequence of this gene (odd numbers of SEQ ID NOs: 5 to 93). As a result of the homology search, it was found that all 45 genes obtained were genes encoding CD179b.
  • the homology among the 45 genes was 94 to 99% of the nucleotide sequence and 96 to 99% of the amino acid sequence.
  • the homology of this gene with the gene encoding the human homologous factor was 62 to 82% of the base sequence and 69 to 80% of the amino acid sequence in the region translated into the protein.
  • the base sequence of the human homologous factor is shown in SEQ ID NO: 1, and the amino acid sequences are shown in SEQ ID NOs: 2 and 3.
  • Gene pool cDNA (manufactured by Invitrogen), QUICK-Clone cDNA (manufactured by Clontech) and Large-Insert cDNA Library (manufactured by Clontech) were used as cDNAs for normal human tissues (brain, hippocampus, testis, colon, placenta). .
  • the PCR reaction was performed as follows using a primer specific for the obtained canine gene (described in SEQ ID NOs: 96 and 97) and a primer specific for the human homologous gene (described in SEQ ID NOs: 98 and 99).
  • the gene-specific primers having the base sequences shown in SEQ ID NOs: 96 and 97 are those that amplify numbers 32 to 341 in the base sequence of SEQ ID NO: 4, A region common to all the canine CD179b genes shown was amplified.
  • the gene-specific primer having the base sequences shown in SEQ ID NOs: 98 and 99 amplifies the region of bases 216 to 738 in the base sequence of SEQ ID NO: 1.
  • a GAPDH specific primer (described in SEQ ID NOs: 100 and 101) was also used. As a result, as shown in FIG. 1, the obtained canine gene was not expressed at all in healthy dog tissues, whereas strong expression was seen in canine breast cancer tissues.
  • reference number 1 on the vertical axis indicates the expression pattern of the gene identified above, and reference number 2 indicates the expression pattern of the GAPDH gene as a comparative control.
  • the suspension was suspended in PBS containing 5 ⁇ l of FITC-labeled rabbit anti-mouse IgG2a monoclonal antibody (BD Pharmingen) and 95 ⁇ l of 0.1% fetal calf serum, and left on ice for 1 hour. After washing with PBS, the fluorescence intensity was measured with a FACS caliber from Becton Dickinson.
  • the same operation as described above was prepared using mouse IgG2a Isotype control (MBL) instead of mouse anti-human CD179b antibody, and used as a control.
  • the cells to which the anti-human CD179b antibody was added all had a fluorescence intensity of 10% or more higher than that of the control, and from this, the CD179b protein was expressed on the cell membrane surface of the human cancer cell line. It was confirmed.
  • Example 2 Antitumor effect of antibody against CD179b on cancer cells (1) ADCC activity Next, it was examined whether an antibody against CD179b can damage tumor cells expressing CD179b. Evaluation was performed using a commercially available mouse antibody (clone name: GA170) against human CD179b. Three types of human leukemia cells in which expression of CD179b was confirmed in Example 1 (5), Namalwa, BDCM, and RPMI1788 (all purchased from ATCC) were collected in 10 6 50 ml centrifuge tubes, and 100 ⁇ Ci of chromium 51 And incubated at 37 ° C. for 2 hours.
  • the cytotoxic activity was obtained by mixing the antibody against CD179b used in the present invention with 10 3 leukemia cell lines incorporating mouse lymphocytes and chromium 51 and culturing for 4 hours, It is the result of measuring the amount of chromium 51 released into the culture medium after culturing and showing the cytotoxic activity against each leukemia cell line calculated by the following calculation formula * .
  • Cytotoxic activity (%) Amount of chromium 51 released from Namalwa, BDCM and RPMI1788 upon addition of antibody against CD179b and mouse lymphocytes ⁇ chrome 51 released from target cells added with 1N hydrochloric acid ⁇ 100.
  • the cytotoxic activity is the result showing the cytotoxic activity against each leukemia cell line calculated by the following calculation formula * , as in (1) above.
  • Cytotoxic activity (%) chromium 51 release from Namalwa, BDCM and RPMI1788 when antibody against CD179b and rabbit serum were added ⁇ chromium 51 release from target cells added with 1N hydrochloric acid ⁇ 100.
  • Example 3 Production of Monoclonal Antibody (1) Preparation of antigen protein Human CD179b protein was prepared by a lipofection method for animal cells.
  • the human CD179b gene (SEQ ID NO: 22) was introduced into the SRaIgG1Fc vector, which is a vector encoding the human IgG1Fc region, via the restriction enzyme sites XhoI and BamHI.
  • the SRaIgG1Fc vector is a vector in which a gene of a human IgG1Fc region is introduced into a pcDL-SRa296 vector (manufactured by DNAX).
  • plasmid was mixed with 60 ⁇ l of Lipofectamine 2000 (manufactured by Invitrogen), and OPTI-MEM (manufactured by Invitrogen) was further added to prepare a total volume of 3 ml, which was allowed to stand at room temperature for 20 minutes or more.
  • 3 ml of the above-mentioned plasmid mixture was added to CHO-K1 cells prepared in advance in 2 ⁇ 10 6 cells / 12 ml OPTI MEM, cultured at 37 ° C. under 5% CO 2 for 8 hours or longer, and CHO-S-SFM medium ( The culture was replaced with 10 ml (Invitrogen) and cultured for 4 to 5 days.
  • Protein A Sepharose HP manufactured by GE Healthcare. Protein A sepharose HP was fully equilibrated with 20 mM phosphate buffer (pH 7.4) /0.15 M NaCl (equilibration buffer / wash buffer), and the equilibration buffer was mixed 1: 1 with the culture supernatant. The solution was introduced. Next, after sufficiently washing with a washing buffer, elution was performed with 0.2 M Glycine buffer (pH 2.5). The eluate was neutralized by adding 1 M Tris (pH 9), and further buffer exchange operation was performed using 20 mM phosphate buffer (pH 7.4) /0.15 M NaCl by ultrafiltration, and human CD179b protein was obtained. Prepared.
  • the obtained spleen cells and mouse myeloma cells SP2 / 0 (purchased from ATCC) were mixed at a ratio of 10: 1, and 200 ⁇ l of RPMI 1640 medium containing 10% fetal calf serum heated to 37 ° C. and PEG 1500 ( A PEG solution prepared by mixing 800 ⁇ l (manufactured by Boehringer) was added, and the mixture was allowed to stand for 5 minutes for cell fusion.
  • the cells were suspended in 150 ml of RPMI 1640 medium (HAT selective medium) containing 15% fetal bovine serum to which 2% equivalent of Gibco's HAT solution was added, and a 96-well plate ( Nünku) 100 ⁇ l per well was seeded on 15 plates.
  • RPMI 1640 medium HAT selective medium
  • Gibco's HAT solution 2% equivalent of Gibco's HAT solution was added
  • Hybridomas were selected using as an index the binding affinity of the antibody produced by the prepared hybridomas to the human CD179b protein.
  • 100 ⁇ l of human CD179b protein solution 1 ⁇ g / ml prepared in (1) above was added per well of a 96-well plate and allowed to stand at 4 ° C. for 18 hours. Each well was washed three times with PBS-T, and then added with 400 ⁇ l of 0.5% BSA (Bovine Serum Albumin) solution (manufactured by Sigma) and allowed to stand at room temperature for 3 hours.
  • BSA Bovine Serum Albumin
  • hybridomas were added to the plate at a ratio of 0.5 per well of the 96-well plate and cultured. One week later, hybridomas forming a single colony in the well were observed. The cells in these wells were further cultured to obtain 60 cloned hybridoma lines.
  • hybridoma strains were selected using as an index the binding affinity of the antibodies produced by the 60 hybridoma strains to leukemia cells.
  • 100 ⁇ l of 1 mg / ml poly L lysine (manufactured by Sigma) -PBS solution was added to a 96-well plate and allowed to stand at room temperature for 30 minutes. The operation of removing the poly L lysine-PBS solution and filling each well with sterile distilled water was repeated three times, and then the plate was air-dried in a clean bench.
  • Human leukemia cell line Namalwa in which expression of CD179b has been confirmed was suspended in PBS ( ⁇ ) at 10 6 cells / ml, 100 ⁇ l per well of the plate was added, and allowed to stand at room temperature for 15 minutes. . After centrifugation at 1700 rpm for 5 minutes, the supernatant was removed, and 0.05 ⁇ l glutaraldehyde (manufactured by Sigma) -PBS solution was added at 100 ⁇ l per well and allowed to stand at room temperature for 10 minutes. After the wells were washed 3 times with PBS-T, 300 ⁇ l of a 0.5% BSA solution was added per well and allowed to stand at 4 ° C. for 18 hours.
  • the isotype of the anti-CD179b monoclonal antibody # 8 produced by the hybridoma strain # 8 selected above was determined by ELISA.
  • a subisotyping kit manufactured by Cosmo Bio
  • Example 4 Antitumor effect of anti-CD179b monoclonal antibody # 8 (1) Preparation of anti-CD179b monoclonal antibody # 8 Hybridoma strain # 8 was cultured with hybridoma SFM (Invitrogen). The culture solution was centrifuged at 1500 rpm for 10 minutes, and then passed through a filter system of 0.22 ⁇ m. For purification of the antibody, a Hitrap Protein A Sepharose FF (manufactured by GE Healthcare) column was used. The column was washed with PBS and equilibrated. Next, the culture supernatant was introduced into the column and then washed with PBS. Elution was carried out with 0.1MGlycine-HCl (pH 2.5) to obtain a purified antibody.
  • Hybridoma strain # 8 was cultured with hybridoma SFM (Invitrogen). The culture solution was centrifuged at 1500 rpm for 10 minutes, and then passed through a filter system of 0.22 ⁇ m. For purification of the antibody,
  • CDC activity Blood collected from rabbits was placed in an Eppendorf tube, allowed to stand at room temperature for 60 minutes, and then centrifuged at 3000 rpm for 5 minutes to prepare serum for measuring CDC activity. Collected Namalwa human leukemia cells in a centrifugal tube 106 50ml ml, incubated for 2 hours at 37 ° C. was added chromium 51 100 .mu.Ci, washed 3 times with RPMI medium containing 10% fetal bovine serum. Thereafter, the suspension was suspended in RPMI medium containing 50% of the rabbit serum prepared above, and 10 3 pieces were added per well of a 96-well V-bottom plate.
  • anti-CD179b monoclonal antibody # 8 was added and cultured at 37 ° C. under 5% CO 2 for 4 hours. After the culture, the amount of chromium 51 in the culture supernatant released from the damaged tumor cells was measured, and the CDC activity against Namalwa cells by anti-CD179b monoclonal antibody # 8 was calculated. As a result, 30.5% of CDC activity was confirmed against Namalwa. On the other hand, when the same operation was performed using an isotype control (clone name: ME07), the above activity was not detected. Accordingly, it was revealed that anti-CD179b monoclonal antibody # 8 can damage tumor cells expressing CD179b by CDC activity.
  • Antitumor effect in the mouse body Antitumor activity of the anti-CD179b monoclonal antibody # 8 in the tumor-bearing mouse body was evaluated.
  • the antibody used was a column-purified culture supernatant of hybridoma strain # 8 as described above.
  • Antitumor activity of anti-CD179b monoclonal antibody # 8 was evaluated using tumor-bearing mice transplanted with a human-derived cancer cell line expressing CD179b.
  • 20 nude mice BALB / c Slc-nu / nu, derived from Japan SLC
  • 10 6 Namalwa cells per mouse subcutaneously were transplanted with 10 6 Namalwa cells per mouse subcutaneously, and grown until the tumor was about 7 mm in diameter. I let you.
  • 10 tumor-bearing mice 10 7 lymphocytes isolated from peripheral blood of BALB / c mice (BALB / c Cr Slc, derived from Japan SLC) and 300 ⁇ g of anti-tumor were used per mouse.
  • CD179b monoclonal antibody # 8 was administered via the tail vein.
  • tumors increased to about 180%, 220%, 350%, and 420% on the 8th day, the 11th day, the 17th day, and the 20th day, respectively (see FIG. 2). From this result, it was shown that the obtained anti-CD179b monoclonal antibody # 8 exerts a strong antitumor effect in vivo against cancer cells expressing CD179b.
  • the size of the tumor was calculated by using a formula of major axis ⁇ minor axis ⁇ minor axis ⁇ 0.5.
  • Example 5 Cloning of variable region gene of anti-CD179b monoclonal antibody # 8 mRNA was extracted from hybridoma strain # 8 and subjected to RT-PCR using primers specific for mouse leader sequence and IgG3 antibody constant region. The heavy chain variable (VH) region and light chain variable (VL) region genes of anti-CD179b monoclonal antibody # 8 were obtained. The genes were cloned into pCR2.1 vector (Invitrogen) for sequencing.
  • RT-PCR MRNA was prepared from 10 6 hybridoma strains # 8 using mRNA micro purification kit (manufactured by GE Healthcare), and the resulting mRNA was reverse transcribed using SuperScript II 1st strand synthesis kit (manufactured by Invitrogen). cDNA was synthesized. These operations were performed according to the protocol attached to each kit.
  • Antibody genes were amplified by PCR using the obtained cDNA.
  • a primer specific to the mouse leader sequence SEQ ID NO: 112 and a primer specific to the mouse IgG3 constant region (SEQ ID NO: 113) were used.
  • a primer specific to the mouse leader sequence SEQ ID NO: 114 and a primer specific to the mouse ⁇ chain constant region (SEQ ID NO: 115) were used to obtain the gene for the VL region.
  • SEQ ID NO: 112 a primer specific to the mouse leader sequence
  • SEQ ID NO: 115 a primer specific to the mouse ⁇ chain constant region
  • a cDNA sample was added to 5 ⁇ l of 10 ⁇ EX Taq Buffer, 4 ⁇ l of dNTP Mixture (2.5 mM), 2 ⁇ l of each primer (1.0 ⁇ M) and 0.25 ⁇ l of Ex taq (5 units / ⁇ l), and the total amount was made 50 ⁇ l with sterilized water. After treatment at 94 ° C. for 2 minutes, denaturation at 94 ° C. for 1 minute, annealing at 58 ° C. for 30 seconds, and extension reaction at 72 ° C. for 1 minute were performed under 30 cycles.
  • the antibody of the present invention is useful for the treatment and / or prevention of cancer.

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Abstract

　癌細胞の表面に特異的に発現する癌抗原タンパク質として同定されたＣＤ１７９ｂタンパク質の連続する７以上のアミノ酸を含むポリペプチドと免疫学的反応性を有する抗体又はそのフラグメントは、癌の治療及び／又は予防のための医薬組成物として利用できる。

Description

癌の治療及び予防用医薬組成物
　本発明は、ＣＤ１７９ｂに対する抗体又はそのフラグメントの、癌の治療及び／又は予防剤等としての新規な医薬用途に関する。
　癌は全死亡原因の第一位を占める疾患であり、現在行われている治療は手術療法を主体に放射線療法と化学療法を組み合わせたものである。近年の新しい手術法の開発や新たな抗癌剤の発見にも関わらず、一部の癌を除いて、癌の治療成績はあまり向上していないのが現状である。近年、分子生物学や癌免疫学の進歩によって、癌に特異的に反応する抗体類、細胞障害性Ｔ細胞により認識される癌抗原類、癌抗原をコードする遺伝子類などが同定されており、癌抗原類をターゲットにした特異的癌治療法への期待が高まっている（非特許文献１）。
　癌治療法においては、副作用を軽減するため、その抗原として認識されるペプチド、ポリペプチド又はタンパク質は、正常細胞にはほとんど存在せず、癌細胞に特異的に存在していることが望ましい。１９９１年、ベルギー国Ｌｕｄｗｉｇ研究所のＢｏｏｎらは、自己癌細胞株と癌反応性Ｔ細胞を用いたｃＤＮＡ発現クローニング法によりＣＤ８陽性Ｔ細胞が認識するヒトメラノーマ抗原ＭＡＧＥ１を単離した（非特許文献２）。その後、癌患者の生体内で自己の癌に反応して産生される抗体が認識する腫瘍抗原を遺伝子の発現クローニングの手法を取り入れて同定する、ＳＥＲＥＸ（ｓｅｒｏｌｏｇｉｃａｌ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ａｎｔｉｇｅｎｓ　ｂｙ　ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｃｌｏｎｉｎｇ）法が報告され（非特許文献３；特許文献１）、この方法により、正常細胞にはほとんど発現がなく、癌に特異的に発現するいくつかの癌抗原が単離されている（非特許文献４～９）。さらに、その一部をターゲットにして、癌抗原に特異的に反応する免疫細胞を用いた細胞療法や、癌抗原を含むワクチンなどの癌特異的免疫療法の臨床試験が実施されている。
　一方、近年、癌細胞上の抗原タンパク質を標的にした、癌を治療するための各種抗体医薬が世の中に台頭してきた。癌特異的治療薬として一定の薬効が得られ注目されているが、標的となる抗原タンパク質の大部分は正常細胞にも発現するものであり、抗体投与の結果、癌細胞だけでなく、抗原が発現する正常細胞も障害されてしまい、その結果生じる副作用が問題になっている。従って、癌細胞表面に特異的に発現する癌抗原を同定し、それを標的とした抗体を医薬品として使用することができれば、より副作用の少ない抗体医薬による治療が可能になると期待される。
　ＣＤ１７９ｂは免疫グロブリンの代替軽鎖の一部であり、B細胞の前駆細胞（プレB細胞およびプロB細胞）の膜表面に発現していることが知られている。B細胞の分化に伴い消滅し、成熟B細胞では発現しない。しかしながら、ＣＤ１７９ｂは、プレB細胞が癌化した白血病（プレB細胞性白血病）細胞において発現していることが知られている（非特許文献１０，１１）。またＣＤ１７９ｂは、プレB細胞が癌化したリンパ腫（プレB細胞性リンパ腫）細胞においても発現しており、プレB細胞性リンパ腫の診断マーカーとして利用されうることが知られている（非特許文献１２）。しかしながら、プレB細胞性白血病細胞以外の白血病細胞、プレB細胞性リンパ腫以外のリンパ腫および乳癌細胞等において特異的に発現しているという報告はない。また、ＣＤ１７９ｂに対する抗体が癌の治療及び／又は予防に有用であることを示唆する報告はない。
米国特許第5698396号
秋吉毅，「癌と化学療法」、1997年、第２４巻、ｐ551-519 Bruggen P. et al., Science, 254:1643-1647(1991) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 92:11810-11813(1995) Int.J.Cancer,72:965-971(1997) Cancer Res., 58:1034-1041(1998) Int.J.Cancer,29:652-658(1998) Int.J.Oncol.,14:703-708(1999) Cancer Res., 56:4766-4772(1996) Hum. Mol. Genet６：33-39 (1997) Adv. Immunol., 63:1-41(1996) Blood, 92:4317-4324(1998) Modern Pathology,17:423-429(2004)
　本発明の目的は、癌細胞の表面に特異的に発現する癌抗原タンパク質を同定し、それを標的とした抗体の、癌の治療及び／又は予防剤としての用途を提供することである。
　本発明者らは、鋭意研究の結果、イヌの乳癌組織由来ｃＤＮＡライブラリーと同一患犬の血清を用いたＳＥＲＥＸ法により、担癌生体由来の血清中に存在する抗体と結合するタンパク質をコードするｃＤＮＡを取得し、取得した遺伝子のヒト相同性遺伝子を基にして、配列番号３で示されるアミノ酸配列を有するヒトＣＤ１７９ｂを作製した。そしてＣＤ１７９ｂが正常組織にはほとんど発現がなく、一方乳癌、白血病及びリンパ腫細胞に特異的に発現していることを見出した。そして、それらＣＤ１７９ｂに対する抗体が、ＣＤ１７９ｂを発現する癌細胞を障害することを見出し、本発明を完成させるに至った。
　したがって、本発明は、以下の特徴を有する。
　本発明は、配列番号３で表されるアミノ酸配列、又は該アミノ酸配列と６０％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列、を有するＣＤ１７９ｂタンパク質、又は連続する７以上のアミノ酸を含むその断片、と免疫学的反応性を有する抗体又はそのフラグメントを有効成分として含むことを特徴とする、癌の治療及び／又は予防のための医薬組成物を提供する。
　その実施形態において、上記癌は、ＣＤ１７９ｂ遺伝子を発現している癌である。
　別の実施形態において、上記癌は、乳癌、白血病又はリンパ腫である。
　別の実施形態において、抗体は、モノクローナル抗体又はポリクローナル抗体である。
　別の実施形態において、抗体は、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、単鎖抗体、又は二重特異性抗体である。
　別の実施形態において、上記抗体は、配列番号１０３、１０４及び１０２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と配列番号１０６、１０７及び１０８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む、かつ、ＣＤ１７９ｂタンパク質と免疫学的反応性を有する抗体である。
　別の実施形態において、上記抗体は、配列番号１０５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と配列番号１０９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む、かつ、ＣＤ１７９ｂタンパク質と免疫学的反応性を有する抗体である。
　本発明はさらに、以下の抗体を提供する。
　（ｉ）配列番号１０３、１０４及び１０２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と配列番号１０６、１０７及び１０８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む、かつ、ＣＤ１７９ｂタンパク質と免疫学的反応性を有する抗体。
　（ｉｉ）配列番号１０５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と配列番号１０９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む、かつ、ＣＤ１７９ｂタンパク質と免疫学的反応性を有する抗体。
　（ｉｉｉ）細胞障害活性を有する、上記（ｉ）及び（ｉｉ）の抗体。
　（ｉｖ）ヒト化抗体、キメラ抗体、単鎖抗体又は二重特異性抗体である、上記（ｉ）及び（ｉｉ）の抗体。
　本発明はさらに、以下のポリペプチド又はＤＮＡを提供する。
　（ｖ）配列番号１０５のアミノ酸配列を含むポリペプチド又は該ポリペプチドをコードするＤＮＡ。
　（ｖｉ）配列番号１０９のアミノ酸配列を含むポリペプチド又は該ポリペプチドをコードするＤＮＡ。
　（ｖｉｉ）配列番号１１０の塩基配列を含むＤＮＡ。
　（ｖｉｉｉ）配列番号１１１の塩基配列を含むＤＮＡ。
　（ｉｘ）配列番号１０３、１０４及び１０２のアミノ酸配列からなる群から選択される、重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）ポリペプチド又は該ポリペプチドをコードするＤＮＡ。
　（ｘ）配列番号１０６、１０７及び１０８のアミノ酸配列からなる群から選択される、軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）ポリペプチド又は該ポリペプチドをコードするＤＮＡ。
　本発明で用いられるＣＤ１７９ｂに対する抗体は、癌細胞を障害する。従って、ＣＤ１７９ｂに対する抗体は癌の治療や予防に有用である。
ＣＤ１７９ｂタンパクをコードする遺伝子の、正常組織及び腫瘍細胞株での発現パターンを示す図である。参照番号１；ＣＤ１７９ｂタンパクをコードする遺伝子の発現パターン、参照番号２；ＧＡＰＤＨ遺伝子の発現パターンを示す。 ＣＤ１７９ｂに対する抗体（抗ＣＤ１７９ｂモノクローナル抗体＃８）の、ＣＤ１７９ｂを発現するヒト癌細胞株Namalwaが移植されたヌードマウスに対する抗腫瘍効果を示す図である。参照番号３；抗ＣＤ１７９ｂモノクローナル抗体＃８を投与されたマウスの腫瘍の大きさを、参照番号４；ＰＢＳ（－）を投与されたマウスの腫瘍の大きさを示す。
　本発明が開示する配列表の配列番号３で示されるアミノ酸配列は、イヌ乳腺癌由来ｃＤＮＡライブラリーと同一患犬の血清を用いたＳＥＲＥＸ法により、担癌犬由来の血清中に特異的に存在する抗体と結合するポリペプチドのヒト相同因子（ホモログ）として単離された、ＣＤ１７９ｂのアミノ酸配列である（実施例１参照）。本発明で用いられるＣＤ１７９ｂに対する抗体は、抗腫瘍活性を発揮しうる限りいかなる種類の抗体であってもよく、例えば、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、合成抗体、多重特異性抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、単鎖抗体（ｓｃＦｖ）、抗体フラグメント、例えばＦａｂやＦ（ａｂ’）２、などを含む。これらの抗体及びそのフラグメントは、当業者に公知の方法により調製することが可能である。本発明においては、ＣＤ１７９ｂタンパク質と特異的に結合することが可能な抗体が望ましいし、また、被験者がヒトである場合には、拒絶反応を回避もしくは抑制するためにヒト抗体又はヒト化抗体であることが望ましい。
　ここで、「ＣＤ１７９ｂタンパク質と特異的に結合する」とは、ＣＤ１７９ｂタンパク質に特異的に結合し、それ以外のタンパク質と実質的に結合しないことを意味する。
　本発明において、ＣＤ１７９ｂに対する抗体は、市販のものを使用してもよい。ヒトＣＤ１７９ｂに対する抗体として、例えばＧＡ１７０、Ｈ－６０、ＨＰ６０５４、Ａ－１９、Ｃ－１６、ＳＬＣ１、ＳＬＣ２、ＳＬＣ３、ＳＬＣ４及びＨＳＬ１１などのクローンが知られており、入手可能である。
　本発明で用いることができる抗体の抗腫瘍活性は、後述するように、生体外で該ポリペプチドを発現する腫瘍細胞に対して、免疫細胞又は補体を介した細胞障害活性を示すか否かを調べることによって評価することができる。
　さらにまた、本発明における癌の治療及び／又は予防の対象である被験者は、ヒト、ペット動物、家畜類、競技用動物などの哺乳動物であり、好ましい被験者は、ヒトである。
　なお、本明細書で使用される「癌」及び「腫瘍」という用語は、悪性新生物を意味し、互換的に使用される。
　以下に、本発明に関する抗原の作製、抗体の作製、ならびに医薬組成物について説明する。
　＜抗体作製用抗原の作製＞
　本発明で用いられるＣＤ１７９ｂに対する抗体を取得するための感作抗原として使用されるタンパク質又はその断片は、ヒト、イヌ、ウシ、マウス、ラットなど、その由来となる動物種に制限されない。しかし細胞融合に使用する親細胞との適合性を考慮して選択することが好ましく、一般的には、哺乳動物由来のタンパク質が好ましく、特にヒト由来のタンパク質が好ましい。例えば、ＣＤ１７９ｂがヒトＣＤ１７９ｂの場合、ヒトＣＤ１７９ｂタンパク質やその部分ペプチド、ヒトＣＤ１７９ｂを発現する細胞などを用いることができる。
　ヒトＣＤ１７９ｂ及びそのホモログの塩基配列及びアミノ酸配列は、例えばＧｅｎＢａｎｋ（米国ＮＣＢＩ）にアクセスし、ＢＬＡＳＴ、ＦＡＳＴＡなどのアルゴリズム（Karlin and Altschul, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 87:2264-2268, 1993; Altschul et al., Nucleic Acids Res., 25:3389-3402, 1997）を利用することによって入手することができる。なお、ＣＤ１７９ｂは、λ５、ＩＧＬＬ１、Ｖｐｒｅｂ２、ＬＯＣ６０８２４８などとも別称されるが、本明細書では、「ＣＤ１７９ｂ」を代表して使用する。例えば、ヒトＣＤ１７９ｂは、例えばＮＭ＿１５２８５５、ＮＭ＿０２００７０など、マウスＶｐｒｅｂ２は、例えばＮＭ＿０１６９８３など、イヌＬＯＣ６０８２４８は、例えばＸＭ＿８４５２１５などの番号で登録されている。
　本発明では、ヒトＣＤ１７９ｂの塩基配列又はアミノ酸配列を基準とした場合、配列番号１又は３で表される配列と５０％～１００％、好ましくは６０％～１００％、より好ましくは８０％～１００％、さらに好ましくは９０％～１００％、もっとも好ましくは９５％～１００％、例えば９７％～１００％、９８％～１００％、９９％～１００％又は９９．５％～１００％の配列同一性を有する配列からなる核酸又はタンパク質がターゲットになる。ここで、「％配列同一性」は、２つの配列を、ギャップを導入するか又はギャップを導入しないで、最大の類似度となるようにアラインメント（整列）したとき、アミノ酸（又は塩基）の総数に対する同一アミノ酸（又は塩基）のパーセンテージ（％）を意味する。
　ＣＤ１７９ｂタンパク質の断片は、抗体が認識する最小単位であるエピトープ（抗原決定基）のアミノ酸長から、該タンパク質の全長未満の長さを有する。エピトープの長さは、通常、連続する７～１２アミノ酸の範囲である。
　上記した、ヒトＣＤ１７９ｂタンパク質やその部分ペプチドを含むポリペプチドは、例えば、Ｆｍｏｃ法（フルオレニルメチルオキシカルボニル法）、ｔＢｏｃ法（ｔ―ブチルオキシカルボニル法）等の化学合成法に従って合成することができる。また、各種の市販のペプチド合成機を利用して常法により合成することもできる。また、公知の遺伝子工学的手法を用いて、上記ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを調製し、該ポリヌクレオチドを発現ベクターに組み込んで宿主細胞に導入し、該宿主細胞中でポリペプチドを生産させることにより、目的とするポリペプチドを得ることができる。
　上記ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、公知の遺伝子工学的手法や市販の核酸合成機を用いた常法により、容易に調製することができる。例えば、配列番号１の塩基配列を含むＤＮＡは、ヒト染色体ＤＮＡ又はｃＤＮＡライブラリーを鋳型として使用し、配列番号１に記載した塩基配列を増幅できるように設計した一対のプライマーを用いてＰＣＲを行うことにより調製することができる。ＰＣＲの反応条件は適宜設定することができ、例えば、９４℃で３０秒間（変性）、５５℃で３０秒～１分間（アニーリング）、７２℃で２分間（伸長）からなる反応行程を１サイクルとして、例えば３０サイクル行った後、７２℃で７分間反応させる条件などを挙げることができるが、これに限定されない。また、本明細書中の配列表の配列番号１及び３にそれぞれ示される塩基配列及びアミノ酸配列の情報に基づいて、適当なプローブやプライマーを調製し、それを用いてヒトなどのｃＤＮＡライブラリーをスクリーニングすることにより、所望のＤＮＡを単離することができる。
　ｃＤＮＡライブラリーは、配列番号３のタンパク質を発現している細胞、器官又は組織から作製することが好ましい。そのような細胞や組織の例は、骨髄、白血病細胞、乳癌細胞、リンパ腫細胞などである。上記したプローブ又はプライマーの調製、ｃＤＮＡライブラリーの構築、ｃＤＮＡライブラリーのスクリーニング、ならびに目的遺伝子のクローニングなどの操作は当業者に既知であり、例えば、Sambrook et al., Molecular Cloning, 第２版, Current Protocols in Molecular Biology (1989)等に記載された方法に準じて行うことができる。このようにして得られたＤＮＡから、ヒトＣＤ１７９ｂタンパク質やその部分ペプチドをコードするＤＮＡを得ることができる。
　上記宿主細胞としては、上記ポリペプチドを発現可能な細胞であればいかなるものであってもよく、原核細胞の例としては大腸菌など、真核細胞の例としてはサル腎臓細胞ＣＯＳ　１、チャイニーズハムスター卵巣細胞ＣＨＯ、ヒト胎児腎臓細胞株ＨＥＫ　２９３、マウス胎仔皮膚細胞株ＮＩＨ３Ｔ３、等の哺乳動物培養細胞、出芽酵母、分裂酵母等の酵母細胞、カイコ細胞、アフリカツメガエル卵細胞などが挙げられるが、これらに限定されない。
　宿主細胞として原核細胞を用いる場合、発現ベクターとしては、原核細胞中で複製オリジン、プロモーター、リボソーム結合部位、マルチクローニングサイト、ターミネーター、薬剤耐性遺伝子、栄養相補遺伝子、等を有する発現ベクターを用いる。大腸菌用発現ベクターとしては、ｐＵＣ系、ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔＩＩ、ｐＥＴ発現システム、ｐＧＥＸ発現システムなどが例示できる。上記ポリペプチドをコードするＤＮＡをこのような発現ベクターに組み込み、該ベクターで原核宿主細胞を形質転換したのち、得られた形質転換体を培養すれば、前記ＤＮＡがコードしているポリペプチドを原核宿主細胞中で発現させることができる。この際、該ポリペプチドを、他のタンパク質（例えば、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）、グルタチオンＳ－トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）など）との融合タンパク質として発現させることもできる。
　宿主細胞として真核細胞を用いる場合、発現ベクターとしては、プロモーター、スプライシング領域、ポリ（Ａ）付加部位等を有する真核細胞用発現ベクターを用いる。そのような発現ベクターとしては、ｐＫＡ１、ｐＣＤＭ８、ｐＳＶＫ３、ｐＭＳＧ、ｐＳＶＬ、ｐＢＫ－ＣＭＶ、ｐＢＫ－ＲＳＶ、ＥＢＶベクター、ｐＲＳ、ｐｃＤＮＡ３、ｐＭＳＧ、ｐＹＥＳ２等が例示できる。上記と同様に、上記ポリペプチドをコードするＤＮＡをこのような発現ベクターに組み込み、該ベクターで真核宿主細胞を形質転換したのち、得られた形質転換体を培養すれば、前記ＤＮＡがコードしているポリペプチドを真核宿主細胞中で発現させることができる。発現ベクターとしてｐＩＮＤ／Ｖ５－Ｈｉｓ、ｐＦＬＡＧ－ＣＭＶ－２、ｐＥＧＦＰ－Ｎ１、ｐＥＧＦＰ－Ｃ１等を用いた場合には、Ｈｉｓタグ（例えば（Ｈｉｓ）６～（Ｈｉｓ）１０）、ＦＬＡＧタグ、ｍｙｃタグ、ＨＡタグ、ＧＦＰなど各種タグを付加した融合タンパク質として、上記ポリペプチドを発現させることができる。
　発現ベクターの宿主細胞への導入は、電気穿孔法、リン酸カルシウム法、リポソーム法、ＤＥＡＥデキストラン法、マイクロインジェクション、等の周知の方法を用いることができる。
　宿主細胞から目的のポリペプチドを単離精製するためには、公知の分離操作を組み合わせて行うことができる。例えば尿素などの変性剤や界面活性剤による処理、超音波処理、酵素消化、塩析や溶媒分別沈殿法、透析、遠心分離、限外ろ過、ゲルろ過、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、等電点電気泳動、イオン交換クロマトグラフィー、疎水クロマトグラフィー、アフニティークロマトグラフィー、逆相クロマトグラフィー等が挙げられるが、これらに限定されない。
　＜抗体の構造＞
　抗体は通常少なくとも２本の重鎖及び２本の軽鎖を含むヘテロ多量体糖タンパク質である。ＩｇＭは別として、２本の同一の軽（Ｌ）鎖及び２本の同一の重（Ｈ）鎖で構成される約１５０ｋＤａのヘテロ四量体糖タンパク質である。典型的には、それぞれの軽鎖は１つのジスルフィド共有結合により重鎖に連結されているが、種々の免疫グロブリンアイソタイプの重鎖間のジスルフィド結合の数は変動する。それぞれの重鎖及び軽鎖はまた鎖内ジスルフィド結合も有する。それぞれの重鎖は一方の端に可変ドメイン（ＶＨ領域）を有し、それにいくつかの定常領域が続く。それぞれ軽鎖は可変ドメイン（ＶＬ領域）を有し、その反対の端に１つの定常領域を有する。軽鎖の定常領域は重鎖の最初の定常領域と整列しており、かつ軽鎖可変ドメインは重鎖の可変ドメインと整列している。抗体の可変ドメインは特定の領域が相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる特定の可変性を示して抗体に結合特異性を付与する。可変領域の相対的に保存されている部分はフレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれている。完全な重鎖及び軽鎖の可変ドメインはそれぞれ３つのＣＤＲにより連結された４つのＦＲを含む。３つのＣＤＲは重鎖ではそのＮ末から順にＣＤＲＨ１，ＣＤＲＨ２，ＣＤＲＨ３、同様に軽鎖ではＣＤＲＬ１，ＣＤＲＬ２，ＣＤＲＬ３と呼ばれている。抗体の抗原への結合特異性には、ＣＤＲＨ３が最も重要である。また、各鎖のＣＤＲはＦＲ領域によって近接した状態で一緒に保持され、他方の鎖からのＣＤＲと共に抗体の抗原結合部位の形成に寄与する。定常領域は抗体が抗原に結合することに直接寄与しないが、種々のエフェクター機能、例えば、抗体依存性細胞性細胞障害活性（ＡＤＣＣ）への関与、Ｆｃγ受容体への結合を介した食作用、新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）を介した半減期／クリアランス速度、補体カスケードのＣ１ｑ構成要素を介した補体依存性細胞障害（ＣＤＣ）を示す。
　＜抗体の作製＞
　本発明における抗ＣＤ１７９ｂ抗体とは、ＣＤ１７９ｂタンパク質の全長又は断片と免疫学的反応性を有する抗体を意味する。ここで、「免疫学的反応性」とは、生体内で抗体とＣＤ１７９ｂ抗原とが結合する特性を意味し、このような結合を介して腫瘍を障害（例えば、死滅、抑制又は退縮）する機能、が発揮される。すなわち、本発明で使用される抗体は、ＣＤ１７９ｂタンパク質と結合して腫瘍、例えば白血病、リンパ腫及び乳癌、を障害することができるならば、その種類を問わない。
　抗体の例は、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、合成抗体、多重特異性抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、単鎖抗体、抗体フラグメント（例えばＦａｂや（Ａａｂ’）２）などを含む。また、抗体は、免疫グロブリン分子の任意のクラス、例えばＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ及びＩｇＹ、又は任意のサブクラス、例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２などである。
　抗体はさらに、グリコシル化、アセチル化、ホルミル化、アミド化、リン酸化、ペグ（ＰＥＧ）化などによって修飾されていてもよい。
　以下に、種々の抗体の作製例を示す。
　抗体がモノクローナル抗体であるときには、例えば、ＣＤ１７９ｂを発現する白血病細胞株Ｎａｍａｌｗａをマウスに投与して免疫し、同マウスより脾臓を抽出し、細胞を分離の上、該細胞とマウスミエローマ細胞とを融合させ、得られた融合細胞（ハイブリドーマ）の中から、癌細胞増殖抑制作用を持つ抗体を産生するクローンを選択する。癌細胞増殖抑制作用を持つモノクローナル抗体産生ハイブリドーマを単離し、当該ハイブリドーマを培養し、培養上清から一般的なアフィニティー精製法により抗体を精製することで、調製することが可能である。
　モノクローナル抗体を産生するハイブリドーマは、例えば以下のようにしても作製することができる。
　まず、公知の方法にしたがって、感作抗原を動物に免疫する。一般的方法として、感作抗原を哺乳動物の腹腔内又は皮下に注射することにより行われる。具体的には、感作抗原をＰＢＳ（Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ－Ｂｕｆｆｅｒｅｄ　Ｓａｌｉｎｅ）や生理食塩水等で適当量に希釈、懸濁したものに所望により通常のアジュバント、例えばフロイント完全アジュバントを適量混合し、乳化後、哺乳動物に４～２１日毎に数回投与する。また、感作抗原免疫時に適当な担体を使用することもできる。
　このように哺乳動物を免疫し、血清中に所望の抗体レベルが上昇するのを確認した後に、哺乳動物から免疫細胞を採取し、細胞融合に付すが、好ましい免疫細胞としては、特に脾細胞が挙げられる。
　前記免疫細胞と融合される他方の親細胞として、哺乳動物のミエローマ細胞を用いる。このミエローマ細胞は、公知の種々の細胞株、例えば、P3U1（P3-X63Ag8U1）、P3（P3x63Ag8.653）（J. Immnol.（1979）123, 1548-1550）、P3x63Ag8U.1（Current Topics in Microbiology and Immunology（1978）81, 1-7）、NS-1（Kohler. G. and Milstein, C. Eur. J. Immunol.（1976）6, 511-519）、MPC-11（Margulies. D.H. et al., Cell（1976）8, 405-415）、SP2/0（Shulman, M. et al., Nature（1978）276, 269-270）、FO（deSt. Groth, S. F. et al., J. Immunol. Methods（1980）35, 1-21）、S194（Trowbridge, I. S. J. Exp. Med.（1978）148, 313-323）、R210（Galfre, G. et al., Nature（1979）277, 131-133）等が好適に使用される。
　前記免疫細胞とミエローマ細胞との細胞融合は、基本的には公知の方法、たとえば、ケーラーとミルステインらの方法（Kohler. G. and Milstein, C.、Methods Enzymol.（1981）73, 3-46）等に準じて行うことができる。
　より具体的には、前記細胞融合は、例えば細胞融合促進剤の存在下に通常の栄養培養液中で実施される。融合促進剤としては、例えばポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、センダイウイルス（ＨＶＪ）等が使用され、更に所望により融合効率を高めるためにジメチルスルホキシド等の補助剤を添加使用することもできる。
　免疫細胞とミエローマ細胞との使用割合は任意に設定することができる。例えば、ミエローマ細胞に対して免疫細胞を１～１０倍とするのが好ましい。前記細胞融合に用いる培養液としては、例えば、前記ミエローマ細胞株の増殖に好適なＲＰＭＩ１６４０培養液、ＭＥＭ培養液、その他、この種の細胞培養に用いられる通常の培養液が使用可能であり、さらに、牛胎児血清（ＦＣＳ）等の血清補液を併用することもできる。
　細胞融合は、前記免疫細胞とミエローマ細胞との所定量を前記培養液中でよく混合し、予め３７℃程度に加温したＰＥＧ溶液（例えば平均分子量１０００～６０００程度）を通常３０－６０％（ｗ／ｖ）の濃度で添加し、混合することによって目的とするハイブリドーマを形成する。続いて、適当な培養液を逐次添加し、遠心して上清を除去する操作を繰り返すことによりハイブリドーマの生育に好ましくない細胞融合剤等を除去する。
　このようにして得られたハイブリドーマは、通常の選択培養液、例えばＨＡＴ培養液（ヒポキサンチン、アミノプテリン及びチミジンを含む培養液）で培養することにより選択される。上記ＨＡＴ培養液での培養は、目的とするハイブリドーマ以外の細胞（非融合細胞）が死滅するのに十分な時間（通常、数日～数週間）継続する。ついで、通常の限界希釈法を実施し、目的とする抗体を産生するハイブリドーマのスクリーニング及び単一クローニングを行う。
　また、ヒト以外の動物に抗原を免疫して上記ハイブリドーマを得る他に、ヒトリンパ球、例えばＥＢウィルスに感染したヒトリンパ球をｉｎ　ｖｉｔｒｏでタンパク質、タンパク質発現細胞又はその溶解物で感作し、感作リンパ球をヒト由来の永久分裂能を有するミエローマ細胞、例えばＵ２６６（登録番号ＴＩＢ１９６）と融合させ、所望の活性（例えば、細胞増殖抑制活性）を有するヒト抗体を産生するハイブリドーマを得ることもできる。
　このようにして作製されるモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマは、通常の培養液中で継代培養することが可能であり、また、液体窒素中で長期保存することが可能である。
　すなわち、所望の抗原や所望の抗原を発現する細胞を感作抗原として使用して、これを通常の免疫方法にしたがって免疫し、得られる免疫細胞を通常の細胞融合法によって公知の親細胞と融合させ、通常のスクリーニング法により、モノクローナルな抗体産生細胞（ハイブリドーマ）をスクリーニングすることによって作製できる。
　本発明で使用可能な抗体の別の例がポリクローナル抗体である。ポリクローナル抗体は、例えば、次のようにして得ることができる。
　天然のＣＤ１７９ｂタンパク質、あるいはＧＳＴとの融合タンパク質として大腸菌等の微生物において発現させた組換えＣＤ１７９ｂタンパク質、又はその部分ペプチドをマウス、ヒト抗体産生マウス、ウサギ等の小動物に免疫し血清を得る。これを、例えば、硫安沈殿、プロテインＡ、プロテインＧカラム、ＤＥＡＥイオン交換クロマトグラフィー、ＣＤ１７９ｂタンパク質や合成ペプチドをカップリングしたアフィニティーカラム等により精製することにより調製する。
　ここで、ヒト抗体産生マウスとしては、例えばＫＭマウス（キリンファーマ／Ｍｅｄａｒｅｘ）及びＸｅｎｏマウス（Ａｍｇｅｎ）が知られている。このようなマウスをＣＤ１７９ｂタンパク質又はその断片で免疫するときには、完全ヒトポリクローナル抗体を血液から得ることができる。また、免疫後のマウスから脾臓細胞を取出し、ミエローマ細胞との融合法によりヒト型モノクローナル抗体を作製することができる。
　抗原の調製は、例えば、動物細胞を用いた方法（特表２００７－５３００６８）やバキュロウイルスを用いた方法（例えば、ＷＯ９８／４６７７７など）などに準じて行うことができる。抗原の免疫原性が低い場合には、アルブミン等の免疫原性を有する巨大分子と結合させ、免疫を行えばよい。
　さらにまた、抗体遺伝子をハイブリドーマからクローニングし、適当なベクターに組み込んで、これを宿主に導入し、遺伝子組換え技術を用いて産生させた遺伝子組換え型抗体を用いることができる（例えば、Carl, A.K. Borrebaeck, James, W. Larrick, THERAPEUTIC MONOCLONAL ANTIBODIES, Published in the United   Kingdom by MACMILLAN PUBLISHERS LTD, 1990参照）。
　具体的には、ハイブリドーマのｍＲＮＡから逆転写酵素を用いて抗体の可変領域（Ｖ領域）のｃＤＮＡを合成する。目的とする抗体のＶ領域をコードするＤＮＡが得られれば、これを所望の抗体定常領域（Ｃ領域）をコードするＤＮＡと連結し、これを発現ベクターへ組み込む。又は、抗体のＶ領域をコードするＤＮＡを、抗体Ｃ領域のＤＮＡを含む発現ベクターへ組み込んでもよい。発現制御領域、例えば、エンハンサー、プロモーターの制御のもとで発現するよう発現ベクターに組み込む。次に、この発現ベクターにより宿主細胞を形質転換し、抗体を発現させることができる。
　本発明の抗ＣＤ１７９ｂ抗体は、モノクローナル抗体であることが好ましい。しかし、ポリクローナル抗体、遺伝子改変抗体（キメラ抗体、ヒト化抗体など）などであってもよい。
　モノクローナル抗体には、ヒトモノクローナル抗体、非ヒト動物モノクローナル抗体（例えばマウスモノクローナル抗体、ラットモノクローナル抗体、ニワトリモノクローナル抗体など）などが含まれる。モノクローナル抗体は、ＣＤ１７９ｂタンパク質を免疫した非ヒト哺乳動物（例えば、マウス、ヒト抗体産生マウスなど）からの脾細胞とミエローマ細胞との融合によって得られたハイブリドーマを培養することによって作製されうる。後述の実施例では、マウスモノクローナル抗体＃８が作製され、抗腫瘍効果が確認された。この抗体＃８は、配列番号１０５のアミノ酸配列を有する重鎖可変（ＶＨ）領域と、配列番号１０９のアミノ酸配列を有する軽鎖可変（ＶＬ）領域とを含み、ここで、該ＶＨ領域に配列番号１０３（ＣＤＲ１）、配列番号１０４（ＣＤＲ２）及び配列番号１０２（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列が含まれ、該ＶＬ領域に配列番号１０６（ＣＤＲ１）、配列番号１０７（ＣＤＲ２）及び配列番号１０８（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列が含まれる。
　キメラ抗体は、異なる動物由来の配列を組み合わせて作製される抗体であり、例えば、マウス抗体の重鎖、軽鎖の可変領域とヒト抗体の重鎖、軽鎖の定常領域からなる抗体などである。キメラ抗体の作製は公知の方法を用いて行うことができ、例えば、抗体Ｖ領域をコードするＤＮＡとヒト抗体Ｃ領域をコードするＤＮＡとを連結し、これを発現ベクターに組み込んで宿主に導入し産生させることにより得られる。
　ポリクローナル抗体には、ヒト抗体産生動物（例えば、マウス）にＣＤ１７９ｂタンパク質を免疫して得られる抗体が含まれる。
　ヒト化抗体は、再構成（ｒｅｓｈａｐｅｄ）ヒト抗体とも称される改変抗体である。ヒト化抗体は、免疫動物由来の抗体のＣＤＲを、ヒト抗体の相補性決定領域へ移植することによって構築される。その一般的な遺伝子組換え手法も知られている。
　具体的には、マウス抗体のＣＤＲとヒト抗体のフレームワーク領域（ｆｒａｍｅｗｏｒｋ　ｒｅｇｉｏｎ；ＦＲ）を連結するように設計したＤＮＡ配列を、末端部にオーバーラップする部分を有するように作製した数個のオリゴヌクレオチドからＰＣＲ法により合成する。得られたＤＮＡを、ヒト抗体定常領域をコードするＤＮＡと連結し、次いで発現ベクターに組み込んで、これを宿主に導入し産生させることにより得られる（欧州特許出願公開番号ＥＰ　２３９４００、国際特許出願公開番号ＷＯ９６／０２５７６参照）。ＣＤＲを介して連結されるヒト抗体のＦＲは、相補性決定領域が良好な抗原結合部位を形成するものが選択される。必要に応じ、再構成ヒト抗体の相補性決定領域が適切な抗原結合部位を形成するように抗体の可変領域におけるフレームワーク領域のアミノ酸を置換してもよい（Sato, K. et al., Cancer Res.（1993）53, 851-856）。また、様々なヒト抗体由来のフレームワーク領域に置換してもよい（国際特許出願公開番号ＷＯ９９／５１７４３参照）。
　ＣＤＲを介して連結されるヒト抗体のフレームワーク領域は、相補性決定領域が良好な抗原結合部位を形成するものが選択される。必要に応じ、再構成ヒト抗体の相補性決定領域が適切な抗原結合部位を形成するように、抗体の可変領域におけるフレームワーク領域のアミノ酸を置換してもよい（Sato, K. et al., Cancer Res.（1993）53, 851-856）。
　キメラ抗体やヒト化抗体を作製した後に、可変領域（例えば、ＦＲ）や定常領域中のアミノ酸を他のアミノ酸で置換等してもよい。
　アミノ酸の置換は、例えば１５未満、１０未満、８以下、７以下、６以下、５以下、４以下、３以下、又は２以下のアミノ酸、好ましくは１～５アミノ酸、より好ましくは１又は２アミノ酸、の置換であり、置換抗体は、未置換抗体と機能的に同等であるべきである。置換は、保存的アミノ酸置換が望ましく、これは、電荷、側鎖、極性、芳香族性などの性質の類似するアミノ酸間の置換である。性質の類似したアミノ酸は、例えば、塩基性アミノ酸（アルギニン、リジン、ヒスチジン）、酸性アミノ酸（アスパラギン酸、グルタミン酸）、無電荷極性アミノ酸（グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、トレオニン、システイン、チロシン）、無極性アミノ酸（ロイシン、イソロイシン、アラニン、バリン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファン、メチオニン）、分枝鎖アミノ酸（トレオニン、バリン、イソロイシン）、芳香族アミノ酸（フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、ヒスチジン）などに分類しうる。
　抗体修飾物としては、例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）等の各種分子と結合した抗体を挙げることができる。本発明の抗体修飾物においては、結合される物質は限定されない。このような抗体修飾物を得るには、得られた抗体に化学的な修飾を施すことによって得ることができる。これらの方法はこの分野において既に確立されている。
　ここで「機能的に同等」とは、対象となる抗体が本発明の抗体と同様の生物学的あるいは生化学的活性、具体的には腫瘍を障害する機能、を有すること、ヒトへの適用時に拒絶反応を本質的に起こさないことなどを指す。このような活性としては、例えば、細胞増殖抑制活性、あるいは結合活性を例示することができる。
　あるポリペプチドと機能的に同等なポリペプチドを調製するための、当業者によく知られた方法としては、ポリペプチドに変異を導入する方法が知られている。例えば、当業者であれば、部位特異的変異誘発法（Hashimoto-Gotoh, T. et al. (1995) Gene 152, 271-275、Zoller, MJ, and Smith, M.(1983) Methods Enzymol. 100, 468-500、Kramer, W. et al. (1984) Nucleic Acids Res. 12, 9441-9456、Kramer W, and Fritz HJ(1987) Methods. Enzymol. 154, 350-367、Kunkel,TA(1985) Proc Natl Acad Sci USA. 82, 488-492、Kunkel (1988) Methods Enzymol. 85, 2763-2766）などを用いて、本発明の抗体に適宜変異を導入することにより、該抗体と機能的に同等な抗体を調製することができる。
　上記抗ＣＤ１７９ｂ抗体が認識するＣＤ１７９ｂタンパク質のエピトープを認識する抗体は、当業者に公知の方法により得ることが可能である。例えば、抗ＣＤ１７９ｂ抗体が認識するＣＤ１７９ｂタンパク質のエピトープを通常の方法（例えば、エピトープマッピングなど）により決定し、該エピトープに含まれるアミノ酸配列を有するポリペプチドを免疫原として抗体を作製する方法や、通常の方法で作製された抗体のエピトープを決定し、抗ＣＤ１７９ｂ抗体とエピトープが同じ抗体を選択する方法などにより得ることができる。ここで、「エピトープ」は、哺乳動物、好ましくはヒトにおいて、抗原性又は免疫原性を有するポリペプチド断片を指し、その最小単位は、約７～１２アミノ酸からなる。
　本発明の抗体の親和定数Ｋａ（ｋｏｎ／ｋｏｆｆ）は、好ましくは、少なくとも１０７Ｍ－１、少なくとも１０８Ｍ－１、少なくとも５×１０８Ｍ－１、少なくとも１０９Ｍ－１、少なくとも５×１０９Ｍ－１、少なくとも１０１０Ｍ－１、少なくとも５×１０１０Ｍ－１、少なくとも１０１１Ｍ－１、少なくとも５×１０１１Ｍ－１、少なくとも１０１２Ｍ－１、少なくとも１０１３Ｍ－１であることが望ましい。
　本発明の抗体は、抗腫瘍剤とコンジュゲートすることができる。抗体と抗腫瘍剤との結合は、アミノ基、カルボキシル基、ヒドロキシ基、チオール基などと反応性の基（例えば、コハクサンイミジル基、ホルミル基、２－ピリジルジチオ基、マレイイミジル基、アルコキシカルボニル基、ヒドロキシ基など）をもつスペーサーを介して行うことができる。
　抗腫瘍剤の例は、文献等で公知の下記の抗腫瘍剤、すなわち、パクリタキセル、ドキソルビシン、ダウノルビシン、シクロホスファミド、メトトレキサート、５－フルオロウラシル、チオテパ、ブスルファン、インプロスルファン、ピポスルファン、ベンゾドーパ（ｂｅｎｚｏｄｏｐａ）、カルボコン、メツレドーパ（ｍｅｔｕｒｅｄｏｐａ）、ウレドーパ（ｕｒｅｄｏｐａ）、アルトレートアミン（ａｌｔｒｅｔａｍｉｎｅ）、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホラミド、トリエチレンチオホスホラミド（ｔｒｉｅｔｈｉｙｌｅｎｅｔｈｉｏｐｈｏｓｐｈｏｒａｍｉｄｅ）、トリメチローロメラミン（ｔｒｉｍｅｔｈｙｌｏｌｏｍｅｌａｍｉｎｅ）、ブラタシン、ブラタシノン、カンプトセシン、ブリオスタチン、カリスタチン（ｃａｌｌｙｓｔａｔｉｎ）、クリプトフィシン１、クリプトフィシン８、ドラスタチン、ズオカルマイシン、エレウテロビン、パンクラチスタチン、サルコジクチン（ｓａｒｃｏｄｉｃｔｙｉｎ）、スポンジスタチン、クロランブシル、クロロナファジン（ｃｈｌｏｒｎａｐｈａｚｉｎｅ）、コロホスファミド（ｃｈｏｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシドヒドロクロリド、メルファラン、ノベンビチン（ｎｏｖｅｍｂｉｃｈｉｎ）、フェネステリン（ｐｈｅｎｅｓｔｅｒｉｎｅ）、プレドニムスチン（ｐｒｅｄｎｉｍｕｓｔｉｎｅ）、トロフォスファミド（ｔｒｏｆｏｓｆａｍｉｄｅ）、ウラシルマスタード、カルムスチン、クロロゾトシン（ｃｈｌｏｒｏｚｏｔｏｃｉｎ）、フォテムスチン（ｆｏｔｅｍｕｓｔｉｎｅ）、ロムスチン、ニムスチン、ラニムスチン、カリケアマイシン（ｃａｌｉｃｈｅａｍｉｃｉｎ）、ダイネマイシン、クロドロネート、エスペラマイシン、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、オースラマイシン（ａｕｔｈｒａｍｙｃｉｎ）、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン（ｃａｃｔｉｎｏｍｙｃｉｎ）、カラビシン（ｃａｒａｂｉｃｉｎ）、カルミノマイシン、カルジノフィリン（ｃａｒｚｉｎｏｐｈｉｌｉｎ）、クロモマイシン、ダクチノマイシン、デトルビシン（ｄｅｔｏｒｂｉｃｉｎ）、６－ジアゾ－５－オキソ－Ｌ－ノルロイシン、アドリアマイシン（ＡＤＲＩＡＭＹＣＩＮ）、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マーセロマイシン（ｍａｒｃｅｌｌｏｍｙｃｉｎ）、マイトマイシンＣ、マイコフェノール酸（ｍｙｃｏｐｈｅｎｏｌｉｃ　ａｃｉｄ）、ノガラマイシン（ｎｏｇａｌａｍｙｃｉｎ）、オリボマイシン（ｏｌｉｖｏｍｙｃｉｎｓ）、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン（ｐｏｔｆｉｒｏｍｙｃｉｎ）、ピューロマイシン、ケラマイシン（ｑｕｅｌａｍｙｃｉｎ）、ロドルビシン（ｒｏｄｏｒｕｂｉｃｉｎ）、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン（ｔｕｂｅｒｃｉｄｉｎ）、ウベニメクス、ジノスタチン（ｚｉｎｏｓｔａｔｉｎ）、ゾルビシン（ｚｏｒｕｂｉｃｉｎ）、デノプテリン（ｄｅｎｏｐｔｅｒｉｎ）、プテロプテリン（ｐｔｅｒｏｐｔｅｒｉｎ）、トリメトレキセート（ｔｒｉｍｅｔｒｅｘａｔｅ）、フルダラビン（ｆｌｕｄａｒａｂｉｎｅ）、６－メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニン、アンシタビン、アザシチジン（ａｚａｃｉｔｉｄｉｎｅ）、６－アザウリジン（ａｚａｕｒｉｄｉｎｅ）、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン（ｅｎｏｃｉｔａｂｉｎｅ）、フロキシウリジン（ｆｌｏｘｕｒｉｄｉｎｅ）；アンドロゲン類、例えばカルステロン（ｃａｌｕｓｔｅｒｏｎｅ）、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトン（ｔｅｓｔｏｌａｃｔｏｎｅ）、アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタン、フロリン酸（ｆｒｏｌｉｎｉｃ　ａｃｉｄ）、アセグラトン、アルドホスファミドグリコシド、アミノレブリン酸、エニルウラシル、アムサクリン（ａｍｓａｃｒｉｎｅ）、ベストラブシル（ｂｅｓｔｒａｂｕｃｉｌ）、ビサントレン（ｂｉｓａｎｔｒｅｎｅ）、エダトラキセート（ｅｄａｔｒａｘａｔｅ）、デフォファミン（ｄｅｆｏｆａｍｉｎｅ）、デメコルシン（ｄｅｍｅｃｏｌｃｉｎｅ）、ジアジコン（ｄｉａｚｉｑｕｏｎｅ）、エルフォルニチン　（ｅｌｆｏｒｎｉｔｈｉｎｅ）、酢酸エリプチニウム（ｅｌｌｉｐｔｉｎｉｕｍ）、エポチロン（ｅｐｏｔｈｉｌｏｎｅ）、エトグルシド（ｅｔｏｇｌｕｃｉｄ）、レンチナン、ロニダミン（ｌｏｎｉｄａｍｉｎｅ）、メイタンシン（ｍａｙｔａｎｓｉｎｅ）、アンサミトシン（ａｎｓａｍｉｔｏｃｉｎｅ）、ミトグアゾン（ｍｉｔｏｇｕａｚｏｎｅ）、ミトキサントロン、モピダンモール（ｍｏｐｉｄａｎｍｏｌ）、ニトラエリン（ｎｉｔｒａｅｒｉｎｅ）、ペントスタチン、フェナメット（ｐｈｅｎａｍｅｔ）、ピラルビシン、ロソキサントロン（ｌｏｓｏｘａｎｔｒｏｎｅ）、ポドフィリン酸（ｐｏｄｏｐｈｙｌｌｉｎｉｃ　ａｃｉｄ）、２－エチルヒドラジド、プロカルバジン、ラゾキサン（ｒａｚｏｘａｎｅ）、リゾキシン、シゾフィラン、スピロゲルマニウム（ｓｐｉｒｏｇｅｒｍａｎｉｕｍ）、テニュアゾン酸（ｔｅｎｕａｚｏｎｉｃ　ａｃｉｄ）、トリアジコン（ｔｒｉａｚｉｑｕｏｎｅ）、ロリジン（ｒｏｒｉｄｉｎｅ）Ａ、アングイジン（ａｎｇｕｉｄｉｎｅ））、ウレタン、ビンデシン、ダカーバジン、マンノムスチン（ｍａｎｎｏｍｕｓｔｉｎｅ）、ミトブロニトール、ミトラクトール（ｍｉｔｏｌａｃｔｏｌ）、ピポブロマン（ｐｉｐｏｂｒｏｍａｎ）、ガシトシン（ｇａｃｙｔｏｓｉｎｅ）、ドキセタキセル、クロランブシル、ゲムシタビン（ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ）、６－チオグアニン、メルカプトプリン、シスプラチン、オキサリプラチン、カルボプラチン、ビンブラスチン、エトポシド、イホスファミド、マイトキサントロン、ビンクリスチン、ビノレルビン、ノバントロン（ｎｏｖａｎｔｒｏｎｅ）、テニポシド、エダトレキセート（ｅｄａｔｒｅｘａｔｅ）、ダウノマイシン、アミノプテリン、キセローダ（ｘｅｌｏｄａ）、イバンドロナート（ｉｂａｎｄｒｏｎａｔｅ）、イリノテカン、トポイソメラーゼインヒビター、ジフルオロメチロールニチン（ＤＭＦＯ）、レチノイン酸、カペシタビン（ｃａｐｅｃｉｔａｂｉｎｅ）、並びにそれらの薬学的に許容可能な塩又は誘導体を包含する。
　あるいは、本発明の抗体には、文献等で公知の、Ａｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２、Ｌｕなどの放射性同位体を結合することも可能である。放射性同位体は、腫瘍の治療や診断のために有効なものが望ましい。
　本発明の抗体は、ＣＤ１７９ｂと免疫学的反応性を有する抗体、あるいは、ＣＤ１７９ｂを特異的に認識する抗体である。該抗体は、それを投与する対象動物において拒絶反応がほとんど又はまったく回避されるような構造をもつ抗体であるべきである。そのよう抗体としては、例えば対象動物がヒトである場合、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体（例えばヒト－マウスキメラ抗体）、単鎖抗体、二重特異性抗体などが挙げられる。これらの抗体は、重鎖及び軽鎖の可変領域がヒト抗体由来のものであるか、あるいは、重鎖及び軽鎖の可変領域が非ヒト動物抗体由来の相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）とヒト抗体由来のフレームワーク領域からなるものであるか、あるいは、重鎖及び軽鎖の可変領域が非ヒト動物抗体由来のものであり、かつ、重鎖及び軽鎖の定常領域がヒト抗体由来のものである組換え型抗体である。好ましい抗体は、前２つの抗体である。
　これらの組換え型抗体は、次のようにして作製することができる。ハイブリドーマなどの抗体産生細胞からヒトＣＤ１７９ｂに対するモノクローナル抗体（例えば、ヒトモノクローナル抗体、マウスモノクローナル抗体、ラットモノクローナル抗体、ニワトリモノクローナル抗体など）をコードするＤＮＡをクローニングし、これを鋳型にして該抗体の軽鎖可変領域及び重鎖可変領域をコードするＤＮＡをＲＴ－ＰＣＲ法等により作製し、Ｋａｂａｔ　ＥＵ　ｎｕｍｂｅｒｉｎｇ　ｓｙｓｔｅｍ（Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5Th Ed. Public Health Service, National Institute of Health, Bethesda, Md.(1991)）に基づいて軽鎖及び重鎖の各可変領域の配列又は各ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３の配列を決定する。さらに、これらの各可変領域をコードするＤＮＡ又は各ＣＤＲをコードするＤＮＡを、遺伝子組換え技術（Sambrook et al., Molecular Cloning, 第２版, Current Protocols in Molecular Biology (1989)）又はＤＮＡ合成機を用いて作製する。ここで、上記ヒトモノクローナル抗体産生ハイブリドーマは、ヒト抗体産生動物（例えば、マウス）にヒトＣＤ１７９ｂを免疫したのち、該免疫動物から切除した脾細胞とミエローマ細胞とを融合させることによって作製することができる。これとは別に、必要に応じて、遺伝子組換え技術又はＤＮＡ合成機を用いてヒト抗体由来の軽鎖又は重鎖の可変領域及び定常領域をコードするＤＮＡを作製する。
　ヒト化抗体の場合には、ヒト抗体由来の軽鎖又は重鎖の可変領域をコードするＤＮＡ中のＣＤＲ配列を、それらに対応する、ヒト以外の動物（例えばマウス、ラット、ニワトリなど）由来の抗体のＣＤＲ配列と置換したＤＮＡを作製し、それによって得られたＤＮＡをそれぞれ、ヒト抗体由来の軽鎖又は重鎖の定常領域をコードするＤＮＡと連結することによって、ヒト化抗体をコードするＤＮＡを作製することができる。
　キメラ抗体の場合には、ヒト以外の動物（例えばマウス、ラット、ニワトリなど）由来の抗体の軽鎖又は重鎖の可変領域をコードするＤＮＡをそれぞれ、ヒト抗体由来の軽鎖又は重鎖の定常領域をコードするＤＮＡと連結することによって、キメラ抗体をコードするＤＮＡを作製することができる。
　単鎖抗体の場合には、この抗体は重鎖可変領域と軽鎖可変領域とをリンカーを介して直線状に連結された抗体であり、重鎖可変領域をコードするＤＮＡ、リンカーをコードするＤＮＡ、及び軽鎖可変領域をコードするＤＮＡを結合することによって単鎖抗体をコードするＤＮＡを作製することができる。ここで、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域はいずれも、ヒト抗体由来のものであるか、あるいは、ＣＤＲのみヒト以外の動物（例えばマウス、ラット、ニワトリなど）由来の抗体のＣＤＲによって置換されたヒト抗体由来のものである。また、リンカーは、１２～１９アミノ酸からなり、例えば１５アミノ酸の（Ｇ４Ｓ）３（Kim, GB. et al.,　Protein Engineering Design and Selection 2007, 20(9):425-432）が挙げられる。
　二重特異性抗体（ｄｉａｂｏｄｙ）の場合には、この抗体は２つの異なるエピトープと特異的に結合可能な抗体であり、例えば重鎖可変領域ＡをコードするＤＮＡ、軽鎖可変領域ＢをコードするＤＮＡ、重鎖可変領域ＢをコードするＤＮＡ、及び軽鎖可変領域ＡをコードするＤＮＡをこの順序で結合する（ただし、軽鎖可変領域ＢをコードするＤＮＡと重鎖可変領域ＢをコードするＤＮＡとは上記のようなリンカーをコードするＤＮＡを介して結合される。）ことによって二重特異性抗体をコードするＤＮＡを作製することができる。ここで、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域はいずれも、ヒト抗体由来のものであるか、あるいは、ＣＤＲのみヒト以外の動物（例えばマウス、ラット、ニワトリなど）由来の抗体のＣＤＲによって置換されたヒト抗体由来のものである。
　上記のようにして作製された組換えＤＮＡを、１つ又は複数の適当なベクターに組み込み、これを宿主細胞（例えば、哺乳動物細胞、酵母細胞、昆虫細胞など）に導入し、（共）発現させることによって組換え型抗体を作製することができる（P.J. Delves., ANTIBODY PRODUCTION ESSENTIAL TECHNIQUES., 1997 WILEY、P. Shepherd and C. Dean., Monoclonal Antibodies., 2000 OXFORD UNIVERSITY PRESS、J.W. Goding., Monoclonal Antibodies: principles and practice., 1993 ACADEMIC PRESS）。
　上記の方法によって作製される本発明の抗体は、例えば、重鎖可変領域に配列番号１０３、１０４及び１０２のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域に配列番号１０６、１０７及び１０８のアミノ酸配列を含む抗体である。ここで、配列番号１０３、１０４及び１０２のアミノ酸配列はそれぞれ、マウス抗体重鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３であり、また、配列番号１０６、１０７及び１０８のアミノ酸配列はそれぞれ、マウス抗体軽鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３である。したがって、本発明のヒト化抗体、キメラ抗体、単鎖抗体又は二重特異性抗体は、例えば以下の抗体である。
　（ｉ）重鎖の可変領域が配列番号１０３、１０４及び１０２のアミノ酸配列及びヒト抗体由来のフレームワーク領域のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖の可変領域が配列番号１０６、１０７及び１０８のアミノ酸配列及びヒト抗体由来のフレームワーク領域のアミノ酸配列を含む抗体。
　（ｉｉ）重鎖の可変領域が配列番号１０３、１０４及び１０２のアミノ酸配列及びヒト抗体由来のフレームワーク領域のアミノ酸配列を含み、かつ、重鎖の定常領域がヒト抗体由来のアミノ酸配列を含み、並びに、軽鎖の可変領域が配列番号１０６、１０７及び１０８のアミノ酸配列及びヒト抗体由来のフレームワーク領域のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖の定常領域がヒト抗体由来のアミノ酸配列を含んでなる抗体。
　（ｉｉｉ）重鎖可変領域に配列番号１０５のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域に配列番号１０９のアミノ酸配列を含む抗体。
　（ｉｖ）重鎖の可変領域が配列番号１０５のアミノ酸配列を含み、かつ、重鎖の定常領域がヒト抗体由来のアミノ酸配列を含む、並びに、軽鎖の可変領域が配列番号１０９のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖の定常領域がヒト抗体由来のアミノ酸配列を含んでなる抗体。
　なお、ヒト抗体重鎖及び軽鎖の定常領域及び可変領域の配列は、例えばＮＣＢＩ（米国：ＧｅｎＢａｎｋ、ＵｎｉＧｅｎｅなど）から入手可能であり、例えばヒトＩｇＧ１重鎖定常領域については登録番号Ｊ００２２８、ヒトＩｇＧ２重鎖定常領域については登録番号Ｊ００２３０、ヒトＩｇＧ３重鎖定常領域については登録番号Ｘ０３６０４、ヒトＩｇＧ４重鎖定常領域については登録番号Ｋ０１３１６、ヒト軽鎖κ定常領域については登録番号Ｖ００５５７、Ｘ６４１３５、Ｘ６４１３３など、ヒト軽鎖λ定常領域については登録番号Ｘ６４１３２、Ｘ６４１３４などの配列を参照することができる。
　上記抗体は、好ましくは、細胞障害活性を有しており、これによって抗腫瘍効果を発揮することができる。
　また、上記抗体における重鎖及び軽鎖の可変領域やＣＤＲの特定の配列は、単に例示を目的としたものであり、特定の配列に限定されないことは明らかである。ヒトＣＤ１７９ｂに対する別のヒト抗体又は非ヒト動物抗体（例えばマウス抗体）を産生しうるハイブリドーマを作製し、ハイブリドーマが産生するモノクローナル抗体を回収し、ヒトＣＤ１７９ｂとの免疫学的結合性及び細胞障害活性を指標として目的の抗体であるか否かを判定する。それによって目的のモノクローナル抗体産生ハイブリドーマを識別したのち、上記のとおり、該ハイブリドーマから目的の抗体の重鎖及び軽鎖の可変領域をコードするＤＮＡを作製し配列決定し、該ＤＮＡを別の抗体の作製のために利用する。
　さらに本発明の上記抗体は、ＣＤ１７９ｂを特異的に認識するという特異性を有する限り、上記（ｉ）から（ｉｖ）の各抗体の特にフレームワーク領域の配列及び／又は定常領域の配列において、１若しくは数個（好ましくは、１若しくは２個）のアミノ酸の置換、欠失又は付加があってもよい。ここで数個とは、２～５個、好ましくは２個又は３個を意味する。
　本発明はさらに、本発明の上記抗体をコードするＤＮＡ　、あるいは、上記抗体の重鎖又は軽鎖をコードするＤＮＡ、あるいは、上記抗体の重鎖又は軽鎖の可変領域をコードするＤＮＡも提供する。そのようなＤＮＡは、例えば、配列番号１０３、１０４及び１０２のアミノ酸配列をコードする塩基配列を含む重鎖可変領域をコードするＤＮＡ、配列番号１０６、１０７及び１０８のアミノ酸配列をコードする塩基配列含む軽鎖可変領域をコードするＤＮＡ、などを含む。
　これらの配列のＤＮＡによってコードされる相補性決定領域（ＣＤＲ）は、抗体の特異性を決定する領域であるため、抗体のそれ以外の領域（すなわち、定常領域及びフレームワーク領域）をコードする配列は他の抗体由来の配列であってもよい。ここで他の抗体とはヒト以外の生物由来の抗体も含むが、副作用低減の観点からはヒト由来のものが好ましい。すなわち、上記のＤＮＡでは、重鎖及び軽鎖の各フレームワーク領域及び各定常領域をコードする領域がヒト抗体由来の対応アミノ酸配列をコードする塩基配列を含むことが好ましい。
　さらに、本発明の抗体をコードするＤＮＡの別の例は、配列番号１０５のアミノ酸配列をコードする塩基配列を含む重鎖可変領域をコードするＤＮＡ、軽鎖可変領域をコードする領域が配列番号１０９のアミノ酸配列をコードする塩基配列を含むＤＮＡなどである。ここで、配列番号１０５のアミノ酸配列をコードする塩基配列の例は、配列番号１１０の塩基配列である。また、配列番号１０９のアミノ酸配列をコードする塩基配列の例は、配列番号１１１の塩基配列である。これらのＤＮＡでも、重鎖及び軽鎖の各定常領域をコードする領域がヒト抗体由来の対応アミノ酸配列をコードする塩基配列を含むことが好ましい。
　本発明のＤＮＡは、例えば上記の方法又は以下の方法で得ることができる。まず、本発明の抗体に関わるハイブリドーマから、市販のＲＮＡ抽出キットを用いて全ＲＮＡを調製し、ランダムプライマー等を用いて逆転写酵素によりｃＤＮＡを合成する。次いで既知のマウス抗体重鎖遺伝子及び軽鎖遺伝子の各可変領域において、それぞれ保存されている配列のオリゴヌクレオチドをプライマーに用いたＰＣＲ法によって、抗体をコードするｃＤＮＡを増幅させる。定常領域をコードする配列については、既知の配列をＰＣＲ法で増幅することによって得ることができる。ＤＮＡの塩基配列は、配列決定用プラスミド又はファージに組み込むなどして、常法により決定することができる。
　本発明で用いられる抗ＣＤ１７９ｂ抗体によるＣＤ１７９ｂ発現癌細胞に対する抗腫瘍効果は、以下の機序により起こると考えられる。
　ＣＤ１７９ｂ発現細胞のエフェクター細胞抗体依存的細胞障害性（ＡＤＣＣ）；
ＣＤ１７９ｂ発現細胞の補体依存的細胞障害性（ＣＤＣ）。
　従って、本発明で用いられる抗ＣＤ１７９ｂ抗体の活性評価は、以下実施例に具体的に示されるように、生体外でＣＤ１７９ｂを発現する癌細胞に対して上記ＡＤＣＣ活性又はＣＤＣ活性を測定することで評価することができる。
　本発明で用いられる抗ＣＤ１７９ｂ抗体は、癌細胞上のＣＤ１７９ｂタンパク質と結合し、上記活性によって、抗腫瘍作用を示すことから、癌の治療あるいは予防に有用であると考えられる。すなわち本発明は、抗ＣＤ１７９ｂ抗体を有効成分とする、癌の治療及び／又は予防のための医薬組成物を提供する。抗ＣＤ１７９ｂ抗体を人体に投与する目的（抗体治療）で使用する場合には、免疫原性を低下させるため、ヒト抗体やヒト化抗体にすることが好ましい。
　なお、抗ＣＤ１７９ｂ抗体と癌細胞表面上のＣＤ１７９ｂタンパク質との結合親和性が高い程、抗ＣＤ１７９ｂ抗体による、より強い抗腫瘍活性が得られる。従って、ＣＤ１７９ｂタンパク質と高い結合親和性を有する抗ＣＤ１７９ｂ抗体を獲得できれば、より強い抗腫瘍効果が期待でき、癌の治療及び／又は予防を目的とした医薬組成物として適応することが可能になる。高い結合親和性として、前述したように、結合定数Ｋａ（ｋｏｎ／ｋｏｆｆ）が、好ましくは、少なくとも１０７Ｍ－１、少なくとも１０８Ｍ－１、少なくとも５×１０８Ｍ－１、少なくとも１０９Ｍ－１、少なくとも５×１０９Ｍ－１、少なくとも１０１０Ｍ－１、少なくとも５×１０１０Ｍ－１、少なくとも１０１１Ｍ－１、少なくとも５×１０１１Ｍ－１、少なくとも１０１２Ｍ－１、少なくとも１０１３Ｍ－１であることが望ましい。
　＜医薬組成物＞
　本発明の癌の治療及び／又は予防のための医薬組成物の標的は、ＣＤ１７９ｂ遺伝子を発現している癌（細胞）であれば特に限定されないが、好ましくは白血病、リンパ腫、乳癌からなる群より選択される癌（細胞）であり、これらの癌には、例えば、乳腺癌、複合型乳腺癌、乳腺悪性混合腫瘍、乳管内乳頭状腺癌、肥満細胞腫、慢性型リンパ球性白血病、消化管型リンパ腫、消化器型リンパ腫、小～中細胞型リンパ腫、等も包含される。
　また本発明で用いられる抗体又はそのフラグメントは、上記に記載した癌の治療及び／又は予防方法に用いることができる。
　本発明で用いられる抗体を医薬組成物として用いる場合には、当業者に公知の方法で製剤化することが可能である。例えば、水もしくはそれ以外の薬学的に許容し得る液との無菌性溶液、又は懸濁液剤の注射剤の形で非経口的に使用できる。例えば、薬理学上許容される担体もしくは媒体、具体的には、滅菌水や生理食塩水、植物油、乳化剤、懸濁剤、界面活性剤、安定剤、香味剤、賦形剤、ベヒクル、防腐剤、結合剤などと適宜組み合わせて、一般に認められた製薬実施に要求される単位用量形態で混和することによって製剤化することが考えられる。これら製剤における有効成分量は指示された範囲の適当な容量が得られるようにするものである。
　注射のための無菌組成物は注射用蒸留水のようなベヒクルを用いて通常の製剤実施に従って処方することができる。
　注射用の水溶液としては、例えば生理食塩水、ブドウ糖やその他の補助薬を含む等張液、例えばＤ－ソルビトール、Ｄ－マンノース、Ｄ－マンニトール、塩化ナトリウムが挙げられ、適当な溶解補助剤、例えばアルコール、具体的にはエタノール、ポリアルコール、例えばプロピレングリコール、ポリエチレングリコール、非イオン性界面活性剤、例えばポリソルベート８０（ＴＭ）、ＨＣＯ－６０と併用してもよい。
　油性液としてはゴマ油、大豆油があげられ、溶解補助剤として安息香酸ベンジル、ベンジルアルコールと併用してもよい。また、緩衝剤、例えばリン酸塩緩衝液、酢酸ナトリウム緩衝液、無痛化剤、例えば、塩酸プロカイン、安定剤、例えばベンジルアルコール、フェノール、酸化防止剤と配合してもよい。調製された注射液は通常、適当なアンプルに充填させる。
　投与は、経口又は非経口、好ましくは非経口投与であり、具体的には、注射剤型、経鼻投与剤型、経肺投与剤型、経皮投与型などが挙げられる。注射剤型の例としては、例えば、静脈内注射、筋肉内注射、腹腔内注射、皮下注射などにより全身又は局部的に投与することができる。
　また、患者の年齢、症状、性別などにより適宜投与方法を選択することができる。抗体又はそのフラグメントを含有する医薬組成物の投与量としては、例えば、一回につき体重１ｋｇあたり０．０００１ｍｇから１０００ｍｇの範囲で選ぶことが可能である。あるいは、例えば、患者あたり０．００１～１０００００ｍｇ／ｂｏｄｙの範囲で投与量を選ぶことができるが、これらの数値に必ずしも制限されるものではない。投与量、投与方法は、患者の体重や年齢、症状などにより変動するが、当業者であれば適宜選択することが可能である。
　＜ポリペプチド及びＤＮＡ＞
　本発明は更に、上記抗体に関わる以下のポリペプチド及びＤＮＡも提供する。
　（ｉ）配列番号１０５のアミノ酸配列を含むポリペプチド、及び該ポリペプチドをコードするＤＮＡ。
　（ｉｉ）配列番号１０９のアミノ酸配列を含むポリペプチド、及び該ポリペプチドをコードするＤＮＡ。
　（ｉｉｉ）配列番号１１０の塩基配列を含むＤＮＡ。
　（ｉｖ）配列番号１１１の塩基配列を含むＤＮＡ。
　（ｖ）配列番号１０３、１０４及び１０２のアミノ酸配列からなる群から選択される、重鎖ＣＤＲポリペプチド、及び該ポリペプチドをコードするＤＮＡ。
　（ｖｉ）配列番号１０６、１０７及び１０８のアミノ酸配列からなる群から選択される、軽鎖ＣＤＲポリペプチド、及び該ポリペプチドをコードするＤＮＡ。
　これらのポリペプチド及びＤＮＡは、上記のとおり、遺伝子組換え技術を用いて作製することができる。
　以下、本発明を実施例に基づきより具体的に説明するが、本発明の範囲はこれらの具体例によって制限されないものとする。
　実施例１：ＳＥＲＥＸ法による新規癌抗原タンパクの同定
　（１）ｃＤＮＡライブラリーの作製
　手術により摘出したイヌの乳腺癌組織から酸－グアニジウム－フェノール－クロロホルム法（Ａｃｉｄ　ｇｕａｎｉｄｉｕｍ－Ｐｈｅｎｏｌ－Ｃｈｌｏｒｏｆｏｒｍ法）により全ＲＮＡを抽出し、Ｏｌｉｇｏｔｅｘ－ｄＴ３０　ｍＲＮＡ　ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ　Ｋｉｔ（宝酒造社製）を用いてキット添付のプロトコールに従ってポリＡ　ＲＮＡを精製した。
　この得られたｍＲＮＡ（５μｇ）を用いてイヌ乳腺癌由来ｃＤＮＡファージライブラリを合成した。ｃＤＮＡファージライブラリの作製にはｃＤＮＡ　Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　Ｋｉｔ，ＺＡＰ－ｃＤＮＡ　Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　Ｋｉｔ，ＺＡＰ－ｃＤＮＡ　ＧｉｇａｐａｃｋＩＩＩ　Ｇｏｌｄ　Ｃｌｏｎｉｎｇ　Ｋｉｔ（ＳＴＲＡＴＡＧＥＮＥ社製）を用い、キット添付のプロトコールに従ってライブラリーを作製した。作製したｃＤＮＡファージライブラリのサイズは２．９９×１０５ｐｆｕ／ｍｌであった。
　（２）血清によるｃＤＮＡライブラリーのスクリーニング
　上記作製したイヌ乳腺癌由来ｃＤＮＡファージライブラリを用いて、イムノスクリーニングを行った。具体的にはΦ９０×１５ｍｍのＮＺＹアガロースプレートに２３４０クローンとなるように宿主大腸菌（ＸＬ１－Ｂｌｕｅ　ＭＲＦ'）に感染させ、４２℃、３～４時間培養し、溶菌斑（プラーク）を作らせ、ＩＰＴＧ（イソプロピル－β－Ｄ－チオガラクトシド）を浸透させたニトロセルロースメンブレン（Ｈｙｂｏｎｄ　Ｃ　Ｅｘｔｒａ：　ＧＥ　Ｈｅａｌｔｈｅｃａｒｅ　Ｂｉｏ－Ｓｃｉｅｎｃｅ社製）でプレートを３７℃で４時間覆うことによりタンパク質を誘導・発現させ、メンブレンにタンパク質を転写した。その後メンブレンを回収し０．５％脱脂粉乳を含むＴＢＳ（１０ｍＭ　Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ，１５０ｍＭ　ＮａＣｌ　ｐＨ７．５）に浸し４℃で一晩振盪することによって非特異反応を抑制した。このフィルターを５００倍希釈した患犬血清と室温で２～３時間反応させた。
　上記患犬血清としては、上記乳腺癌を摘出された同一の患犬及び他の乳腺癌患犬より採取した血清計３検体をそれぞれ用いた。これらの血清は－８０℃で保存し、使用直前に前処理を行った。血清の前処理方法は、以下の方法による。すなわち、外来遺伝子を挿入していないλ　ＺＡＰ　Ｅｘｐｒｅｓｓ　ファージを宿主大腸菌（ＸＬ１－ＢＬｕｅ　ＭＲＦ'）に感染させた後、ＮＺＹプレート培地上で３７℃、一晩培養した。次いで０．５Ｍ　ＮａＣｌを含む０．２Ｍ　ＮａＨＣＯ３　ｐＨ８．３のバッファーをプレートに加え、４℃で１５時間静置後、上清を大腸菌／ファージ抽出液として回収した。次に、回収した大腸菌／ファージ抽出液をＮＨＳ－カラム　（ＧＥ　Ｈｅａｌｔｈｅｃａｒｅ　Ｂｉｏ－Ｓｃｉｅｎｃｅ社製）に通液して、大腸菌・ファージ由来のタンパク質を固定化した。このタンパク固定化カラムに患犬血清を通液・反応させ、大腸菌及びファージに吸着する抗体を血清から取り除いた。カラムを素通りした血清画分は、０．５％脱脂粉乳を含むＴＢＳにて５００倍希釈し、これをイムノスクリーニング材料とした。
　かかる処理血清と上記融合タンパク質をブロットしたメンブレンをＴＢＳ－Ｔ（０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０／ＴＢＳ）にて４回洗浄を行った後、二次抗体として０．５％脱脂粉乳を含むＴＢＳにて５０００倍希釈を行ったヤギ抗イヌＩｇＧ（Ｇｏａｔ　ａｎｔｉ　Ｄｏｇ　ＩｇＧ－ｈ＋Ｉ　ＨＲＰ　ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ：ＢＥＴＨＹＬ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社製）を、室温１時間反応させ、ＮＢＴ／ＢＣＩＰ反応液（Ｒｏｃｈｅ社製）を用いた酵素発色反応により検出し、発色反応陽性部位に一致するコロニーをΦ９０×１５ｍｍのＮＺＹアガロースプレート上から採取し、ＳＭ緩衝液（１００ｍＭ　ＮａＣｌ、１０ｍＭ　ＭｇＣｌＳＯ４、５０ｍＭ　Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ、０．０１％　ゼラチン　ｐＨ７．５）５００μｌに溶解させた。発色反応陽性コロニーが単一化するまで上記と同様の方法で、二次、三次スクリーニングを繰り返し、血清中のＩｇＧと反応する９２８２０個のファージクローンをスクリーニングして、４５個の陽性クローンを単離した。
　（３）単離抗原遺伝子の相同性検索
　上記方法により単離した４５個の陽性クローンを塩基配列解析に供するため、ファージベクターからプラスミドベクターに転換する操作を行った。具体的には宿主大腸菌（ＸＬ１－Ｂｌｕｅ　ＭＲＦ'）を吸光度ＯＤ６００が１．０となるよう調製した溶液２００μｌと、精製したファージ溶液２５０μｌ、さらにＥｘＡｓｓｉｓｔ　ｈｅｌｐｅｒ　ｐｈａｇｅ（ＳＴＲＡＴＡＧＥＮＥ社製）１μｌを混合した後３７℃で１５分間反応後、ＬＢ培地を３ｍｌ添加し３７℃で２．５～３時間培養を行い、直ちに７０℃の水浴にて２０分間保温した後、４℃、１０００×ｇ、１５分間遠心を行い上清をファージミド溶液として回収した。次いでファージミド宿主大腸菌（ＳＯＬＲ）を吸光度ＯＤ６００が１．０となるよう調製した溶液２００μｌと、精製したファージ溶液１０μｌを混合した後３７℃で１５分間反応させ、５０μｌをアンピシリン（終濃度５０μｇ／ｍｌ）含有ＬＢ寒天培地に播き３７℃一晩培養した。トランスフォームしたＳＯＬＲのシングルコロニーを採取し、アンピシリン（終濃度５０μｇ／ｍｌ）含有ＬＢ培地３７℃にて培養後、ＱＩＡＧＥＮ　ｐｌａｓｍｉｄ　Ｍｉｎｉｐｒｅｐ　Ｋｉｔ（キアゲン社製）を使って目的のインサートを持つプラスミドＤＮＡを精製した。
　精製したプラスミドは、配列番号９４に記載のＴ３プライマーと配列番号９５に記載のＴ７プライマーを用いて、プライマーウォーキング法によるインサート全長配列の解析を行った。このシークエンス解析により配列番号４～９２の偶数番号に記載の遺伝子配列を取得した。この遺伝子の塩基配列及びアミノ酸配列（配列番号５～９３の奇数番号）を用いて、相同性検索プログラムＢＬＡＳＴサーチ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ＢＬＡＳＴ／）を行い既知遺伝子との相同性検索を行った結果、得られた４５個全ての遺伝子がＣＤ１７９ｂをコードする遺伝子であることが判明した。４５個の遺伝子間の相同性は、塩基配列９４～９９％、アミノ酸配列９６～９９％であった。この遺伝子のヒト相同因子をコードする遺伝子との相同性は、タンパク質に翻訳される領域において、塩基配列６２～８２％、アミノ酸配列６９～８０％であった。ヒト相同因子の塩基配列を配列番号１に、アミノ酸配列を配列番号２及び３に示す。
　（４）各組織での遺伝子発現解析
　上記方法により得られた遺伝子に対しイヌ及びヒトの正常組織及び各種細胞株における発現をＲＴ－ＰＣＲ（Ｒｅｖｅｒｓｅ　Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ－ＰＣＲ）法により調べた。逆転写反応は以下の通り行なった。すなわち、各組織５０～１００ｍｇ及び各細胞株５～１０×１０６個の細胞からＴＲＩＺＯＬ試薬（ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社製）を用いて添付のプロトコールに従い全ＲＮＡを抽出した。この全ＲＮＡを用いてＳｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔ　Ｆｉｒｓｔ－Ｓｔｒａｎｄ　Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　Ｓｙｓｔｅｍ　ｆｏｒ　ＲＴ－ＰＣＲ（ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社製）により添付のプロトコールに従いｃＤＮＡを合成した。ヒト正常組織（脳、海馬、精巣、結腸、胎盤）のｃＤＮＡは、ジーンプールｃＤＮＡ（ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社製）、ＱＵＩＣＫ－Ｃｌｏｎｅ　ｃＤＮＡ（クロンテック社製）及びＬａｒｇｅ－Ｉｎｓｅｒｔ　ｃＤＮＡ　Ｌｉｂｒａｒｙ（クロンテック社製）を用いた。ＰＣＲ反応は、取得したイヌ遺伝子に特異的なプライマー（配列番号９６及び９７に記載）及びそのヒト相同遺伝子に特異的なプライマー（配列番号９８及び９９に記載）を用いて以下の通り行った。すなわち、逆転写反応により調製したサンプル０．２５μｌ、上記プライマーを各２μＭ、０．２ｍＭ各ｄＮＴＰ、０．６５ＵのＥｘＴａｑポリメラーゼ（宝酒造社製）となるように各試薬と添付バッファーを加え全量を２５μｌとし、Ｔｈｅｒｍａｌ　Ｃｙｃｌｅｒ（ＢＩＯ　ＲＡＤ社製）を用いて、９４℃－３０秒、６０℃－３０秒、７２℃－３０秒のサイクルを３０回繰り返して行った。なお、上記した配列番号９６及び９７に示す塩基配列を有する遺伝子特異的プライマーは、配列番号４の塩基配列中の３２番～３４１番を増幅するものであり、配列番号４～９２の偶数番号に示されるイヌＣＤ１７９ｂ遺伝子全てに共通の領域を増幅するものであった。また、配列番号９８及び９９に示す塩基配列を有する遺伝子特異的プライマーは配列番号１の塩基配列中の２１６番～７３８番塩基の領域を増幅するものであった。比較対照のため、ＧＡＰＤＨ特異的なプライマー（配列番号１００及び１０１に記載）も同時に用いた。その結果、図１に示すように、取得したイヌ遺伝子は、健常なイヌ組織では全く発現が見られず、一方イヌ乳癌組織で強い発現が見られた。ヒト相同遺伝子の発現では、ヒト正常組織で発現が確認できたのは骨髄のみで、ヒト癌細胞では白血病細胞株及び乳癌細胞株で発現が検出され、ＣＤ１７９ｂが白血病細胞株と乳癌細胞株に特異的に発現していることが確認された。
　なお、図１中、縦軸の参照番号１は、上記で同定した遺伝子の発現パターンを、参照番号２は、比較対照であるＧＡＰＤＨ遺伝子の発現パターンを示す。
　（５）癌細胞上での抗原タンパクの発現解析
　次にＣＤ１７９ｂ遺伝子の発現が確認された各癌細胞株について、その細胞表面上にＣＤ１７９ｂタンパクが発現しているかどうかを調べた。上記で遺伝子発現が認められた各ヒト癌細胞株それぞれ１０６細胞を１．５ｍｌのミクロ遠心チュ－ブにて遠心した。これに５μｌのマウス抗ヒトＣＤ１７９ｂ抗体（クローン名：ＧＡ１７０、Ｓａｎｔａ　Ｃｒｕｚ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社製）を添加し、さらに９５μｌの０．１％牛胎児血清を含むＰＢＳで懸濁後、氷上で１時間静置した。ＰＢＳで洗浄した後、５μｌのＦＩＴＣ標識ラビット抗マウスＩｇＧ２ａモノクロ－ナル抗体（ＢＤ　Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ社製）及び９５μｌの０．１％牛胎児血清を含むＰＢＳで懸濁し、氷上で１時間静置した。ＰＢＳで洗浄後、ベクトンディッキンソン株式会社のＦＡＣＳキャリバーにて蛍光強度を測定した。一方、上記と同様の操作を、マウス抗ヒトＣＤ１７９ｂ抗体の代わりにマウスＩｇＧ２ａ　Ｉｓｏｔｙｐｅ　ｃｏｎｔｒｏｌ（ＭＢＬ社製）を用いて調製し、コントロールとした。その結果、抗ヒトＣＤ１７９ｂ抗体を添加された細胞は、コントロールに比べて、いずれも蛍光強度が１０％以上強く、このことから、上記ヒト癌細胞株の細胞膜表面上にＣＤ１７９ｂタンパクが発現していることが確認された。
　実施例２：ＣＤ１７９ｂに対する抗体の癌細胞に対する抗腫瘍効果
　（１）ＡＤＣＣ活性
　次にＣＤ１７９ｂに対する抗体が、ＣＤ１７９ｂを発現する腫瘍細胞を障害することができるかどうかを検討した。市販のヒトＣＤ１７９ｂに対するマウス抗体（クローン名：ＧＡ１７０）を用いて評価を行った。実施例１（５）でＣＤ１７９ｂの発現が確認された３種類のヒト白血病細胞、Ｎａｍａｌｗａ、ＢＤＣＭ及びＲＰＭＩ１７８８（いずれもATCCから購入）をそれぞれ１０６個５０ｍｌ容の遠心チューブに集め、１００μＣｉのクロミウム５１を加え３７℃で２時間インキュベートした。その後１０％牛胎児血清を含むＲＰＭＩ培地で３回洗浄し、９６穴Ｖ底プレート１穴あたり１０３個ずつ添加した。これにＧＡ１７０をそれぞれ１μｇずつ添加し、さらにマウスの脾臓から分離したリンパ球をそれぞれ２ｘ１０５個ずつ添加して、３７℃、５％ＣＯ２の条件下で４時間培養した。培養後、障害を受けた腫瘍細胞から放出される培養上清中のクロミウム５１の量を測定し、ＧＡ１７０による各癌細胞に対するＡＤＣＣ活性を算出した。その結果、Ｎａｍａｌｗａ、ＢＤＣＭ及びＲＰＭＩ１７８８それぞれに対して、それぞれ３２．６％、３２．３％及び２８．３％のＡＤＣＣ活性が確認された。一方、ＧＡ１７０のアイソタイプコントロール（クローン名：６Ｈ３）を用いて同様の操作を行ったところ、上記活性は検出されなかった。従って、ＣＤ１７９ｂに対する抗体を用いたＡＤＣＣ活性により、ＣＤ１７９ｂを発現する腫瘍細胞を障害することができることが明らかになった。
　なお、細胞障害活性は、上記のように、本発明で用いられるＣＤ１７９ｂに対する抗体と、マウスリンパ球及びクロミウム５１を取り込ませた１０３個の各白血病細胞株とを混合して４時間培養し、培養後培地に放出されたクロミウム５１の量を測定して、以下計算式＊により算出した各白血病細胞株に対する細胞障害活性を示した結果である。
　＊式：細胞障害活性（％）＝ＣＤ１７９ｂに対する抗体及びマウスリンパ球を加えた際のＮａｍａｌｗａ、ＢＤＣＭ及びＲＰＭＩ１７８８からのクロミウム５１遊離量÷１Ｎ塩酸を加えた標的細胞からのクロミウム５１遊離量×１００。
　（２）ＣＤＣ活性
　ウサギから採血した血液をエッペンドルフチューブに入れ、室温で６０分間、静置した後３０００ｒｐｍで５分間、遠心分離することで、ＣＤＣ活性測定用の血清を調製した。３種類のヒト白血病細胞、Ｎａｍａｌｗａ、ＢＤＣＭ及びＲＰＭＩ１７８８をそれぞれ１０６個５０ｍｌ容の遠心チューブに集め、１００μＣｉのクロミウム５１を加え３７℃で２時間インキュベートした後、１０％牛胎児血清を含むＲＰＭＩ培地で３回洗浄した。その後上記で調製したウサギ血清を５０％含むＲＰＭＩ培地で懸濁し、９６穴Ｖ底プレート１穴あたり１０３個ずつ添加した。これにＧＡ１７０をそれぞれ１μｇずつ添加して、３７℃、５％ＣＯ２の条件下で４時間培養した。培養後、障害を受けた腫瘍細胞から放出される培養上清中のクロミウム５１の量を測定し、ＧＡ１７０による各癌細胞に対するＣＤＣ活性を算出した。その結果、Ｎａｍａｌｗａ、ＢＤＣＭ及びＲＰＭＩ１７８８それぞれに対して、それぞれ３０．５％、２１．２％及び３０．５％のＣＤＣ活性が確認された。一方、ＧＡ１７０のアイソタイプコントロール（クローン名：６Ｈ３）を用いて同様の操作を行ったところ、上記活性は検出されなかった。従って、ＣＤ１７９ｂに対する抗体を用いたＣＤＣ活性により、ＣＤ１７９ｂを発現する腫瘍細胞を障害することができることが明らかになった。
　なお、細胞障害活性は、上記（１）と同様、以下計算式＊により算出した各白血病細胞株に対する細胞障害活性を示した結果である。
　＊式：細胞障害活性（％）＝ＣＤ１７９ｂに対する抗体及びウサギ血清を加えた際のＮａｍａｌｗａ、ＢＤＣＭ及びＲＰＭＩ１７８８からのクロミウム５１遊離量÷１Ｎ塩酸を加えた標的細胞からのクロミウム５１遊離量×１００。
　実施例３：モノクローナル抗体の作製
　（１）抗原タンパクの調製
　ヒトＣＤ１７９ｂタンパクは動物細胞へのリポフェクション法により調製した。ヒトＣＤ１７９ｂ遺伝子（配列番号２２）を制限酵素サイトＸｈｏＩ及びＢａｍＨＩを介して、ヒトＩｇＧ１Ｆｃ領域をコードするベクターであるＳＲａＩｇＧ１Ｆｃベクターに導入した。ＳＲaＩｇＧ１Ｆｃベクターは、ｐｃＤＬ－ＳＲa２９６ベクター（ＤＮＡＸ社製）に、ヒトＩｇＧ１Ｆｃ領域の遺伝子を導入したベクターである。次に、プラスミド２４μｇをＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ２０００　（インビトロジェン社製）６０μｌと混合し、さらにＯＰＴＩ－ＭＥＭ（インビトロジェン社製）を添加し、総量３ｍｌになるように調製し室温で２０分以上静置した。予め２×１０６ｃｅｌｌｓ／１２ｍｌＯＰＴＩ　ＭＥＭに調製したＣＨＯ－Ｋ１細胞に上述のプラスミドの混合液３ｍｌを添加し、３７℃、５％ＣＯ２条件下８時間以上培養し、ＣＨＯ－Ｓ－ＳＦＭ培地（インビトロジェン社製）１０ｍｌに置き換え４～５日培養を行った。得られた培養上清中に生産される抗原タンパクの精製をＰｒｏｔｅｉｎＡ　ｓｅｐｈａｒｏｓｅ　ＨＰ（ＧＥヘルスケア社製）を用いて行った。ＰｒｏｔｅｉｎＡ　ｓｅｐｈａｒｏｓｅ　ＨＰを２０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）／０．１５Ｍ　ＮａＣｌ（平衡化緩衝液・洗浄緩衝液）で十分に平衡化し、培養上清に平衡化緩衝液を１：１で混合した溶液を導入した。次に、洗浄緩衝液で十分に洗浄した後、０．２Ｍ　Ｇｌｙｃｉｎｅ　緩衝液（ｐＨ２．５）で溶出を行った。溶出液には１Ｍ　Ｔｒｉｓ（ｐＨ９）を添加して中和し、さらに限外濾過により２０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）／０．１５Ｍ　ＮａＣｌを用いてバッファー交換操作を行い、ヒトＣＤ１７９ｂタンパクを調製した。
　（２）ハイブリドーマの取得
　（１）で調製した抗原タンパク（ヒトＣＤ１７９ｂタンパク）１００μｇを等量のＭＰＬ＋ＴＤＭアジュバント（シグマ社製）と混合し、これをマウス１匹当たりの抗原溶液とした。抗原溶液を６週齢Ｂａｌｂ／ｃマウス（日本ＳＬＣ社製）の腹腔内に投与後、１週間毎にさらに３回の投与を行い、免疫を完了した。最後の免疫から３日後に摘出した脾臓を、滅菌した２枚のスライドガラスに挟んで擂り潰し、ＰＢＳ（－）（日水社製）を用いて洗浄し１５００ｒｐｍで１０分間遠心して上清を除去する操作を３回繰り返して脾臓細胞を得た。得られた脾臓細胞とマウスミエローマ細胞ＳＰ２／０（ＡＴＣＣから購入）とを１０：１の比率にて混和し、そこに３７℃に加温した１０％ウシ胎児血清を含むＲＰＭＩ１６４０培地２００μｌとＰＥＧ１５００（ベーリンガー社製）８００μｌを混和して調製したＰＥＧ溶液を加えて５分間静置して細胞融合を行った。１７００ｒｐｍで５分間遠心し、上清を除去後、Ｇｉｂｃｏ社製のＨＡＴ溶液を２％当量加えた１５％ウシ胎児血清を含むＲＰＭＩ１６４０培地（ＨＡＴ選択培地）１５０ｍｌで細胞を懸濁し、９６穴プレート（ヌンク社製）各ウェル当たり１００μｌずつ、プレート１５枚に播種した。７日間、３７℃、５％ＣＯ２環境にて培養することで、脾臓細胞とミエローマ細胞が融合したハイブリドーマを得た。
　（３）ハイブリドーマの選抜
　作製したハイブリドーマが産生する抗体のヒトＣＤ１７９ｂタンパクに対する結合親和性を指標にハイブリドーマを選抜した。上記（１）で調製したヒトＣＤ１７９ｂタンパク溶液１μｇ／ｍｌを９６穴プレート１ウェル当たりに１００μｌ添加し、４℃にて１８時間静置した。各ウェルをＰＢＳ－Ｔで３回洗浄後、０．５％ＢＳＡ（Ｂｏｖｉｎｅ　Ｓｅｒｕｍ　Ａｌｂｕｍｉｎ）溶液（シグマ社製）を１ウェル当たり４００μｌ添加して室温にて３時間静置した。溶液を除いて、１ウェル当たり４００μｌのＰＢＳ－Ｔでウェルを３回洗浄後、上記（２）で得られたハイブリドーマの各培養上清を１ウェル当たり１００μｌ添加し、室温にて２時間静置した。ＰＢＳ－Ｔで各ウェルを３回洗浄した後、ＰＢＳで５０００倍に希釈したＨＲＰ標識抗マウスＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）抗体（インビトロジェン社製）を１ウェル当たり１００μｌ添加して室温にて１時間静置した。ＰＢＳ－Ｔでウェルを３回洗浄した後、ＴＭＢ基質溶液（Ｔｈｅｒｍｏ社製）を１ウェル当たり１００μｌ添加して１５～３０分間静置して発色反応を行った。発色後、１規定硫酸を１ウェル当たり１００μｌ添加して反応を停止させ吸光度計を用いて４５０ｎｍ－５９５ｎｍの吸光度値を測定した。その結果、吸光度値が最も高かった抗体を産生するハイブリドーマを選抜した。
　選抜したハイブリドーマを９６穴プレート１ウェル当たりに０．５個となるようにプレートに添加し培養した。１週間後、ウェル中に単一のコロニーを形成しているハイブリドーマが観察された。それらウェルの細胞をさらに培養して、クローニングされたハイブリドーマ株６０個を得た。
　次に上記６０個のハイブリドーマ株が産生する抗体の白血病細胞に対する結合親和性を指標にハイブリドーマ株を選抜した。９６穴プレートに１ｍｇ／ｍｌのポリＬリジン（シグマ社製）－ＰＢＳ溶液を１ウェル当たり１００μｌ添加して室温にて３０分静置した。ポリＬリジン－ＰＢＳ溶液を除いて、各ウェルに滅菌蒸留水を満たして捨てる操作を３回繰り返して、その後クリーンベンチ内にてプレートを風乾した。ＣＤ１７９ｂの発現が確認されているヒト白血病細胞株ＮａｍａｌｗａをＰＢＳ（－）中に１０６個／ｍｌとなるように懸濁し、上記プレート１ウェル当たり１００μｌを添加して室温にて１５分間静置した。１７００ｒｐｍで５分間遠心した後、上清を除去し、０．０５％グルタルアルデヒド（シグマ社製）－ＰＢＳ溶液を１ウェル当たり１００μｌ添加して室温にて１０分間静置した。ＰＢＳ－Ｔでウェルを３回洗浄した後、０．５％ＢＳＡ溶液を１ウェル当たり３００μｌ添加して４℃にて１８時間静置した。ＰＢＳ－Ｔでウェルを３回洗浄後、上記で得た６０個のハイブリドーマ株の各培養上清を１ウェル当たり１００μｌ添加して室温にて２時間静置した。上清を除去しＰＢＳ－Ｔでウェルを３回洗浄した後、ＰＢＳで５０００倍に希釈したＨＲＰ標識抗マウスＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）抗体を１ウェル当たり１００μｌ添加して室温にて１時間静置した。ＰＢＳ－Ｔにてウェルを３回洗浄した後、ＴＭＢ基質溶液（Ｔｈｅｒｍｏ社製）を１ウェル当たり１００μｌ添加して３０分間静置し発色反応を行った。発色後、１規定硫酸を１ウェル当たり１００μｌ添加して反応を停止させ吸光度計を用いて４５０ｎｍ～５９５ｎｍの吸光度値を測定した。その結果、最も吸光度値が高い、すなわち最も強く細胞に結合するモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ株＃８を選抜した。
　上記で選抜したハイブリドーマ株＃８が産生する抗ＣＤ１７９ｂモノクローナル抗体＃８のアイソタイプをＥＬＩＳＡ法により決定した。ハイブリドーマ株＃８の培養上清をサブアイソタイピングキット（コスモバイオ社製）により、その添付プロトコールに従い評価したところ、抗ＣＤ１７９ｂモノクローナル抗体＃８はＩｇＧ３であることが判明した。
　実施例４：抗ＣＤ１７９ｂモノクローナル抗体＃８の抗腫瘍効果
　（１）抗ＣＤ１７９ｂモノクローナル抗体＃８の調製
　ハイブリドーマ株＃８をハイブリドーマＳＦＭ（インビトロジェン社製）により培養した。培養液は１５００ｒｐｍ　１０ｍｉｎ遠心後、フィルターシステム０．２２μｍに通した。抗体の精製には、Ｈｉｔｒａｐ　ＰｒｏｔｅｉｎＡ　ＳｅｐｈａｒｏｓｅＦＦ（ＧＥヘルスケア社製）カラムを使用した。カラムをＰＢＳで洗浄し、平衡化した。次に、培養上清をカラムに導入し、その後ＰＢＳにて洗浄を行った。０．１ＭＧｌｙｃｉｎｅ－ＨＣｌ（ｐＨ２．５）で溶出を行い、精製抗体を得た。
　（２）生体外（細胞レベル）での抗腫瘍効果
　ＡＤＣＣ活性
　抗ＣＤ１７９ｂモノクローナル抗体＃８が、ヒトＣＤ１７９ｂを発現する腫瘍細胞を障害することができるかどうかを検討した。ヒトＣＤ１７９ｂの発現が確認されているヒト白血病細胞、Ｎａｍａｌｗａを１０６個５０ｍｌ容の遠心チューブに集め、１００μＣｉのクロミウム５１を加え３７℃で２時間インキュベートした。その後１０％牛胎児血清を含むＲＰＭＩ培地で３回洗浄し、９６穴Ｖ底プレート１穴あたり１０３個ずつ添加した。これに抗ＣＤ１７９ｂモノクローナル抗体＃８を２μｇ添加し、さらにマウスの脾臓から分離したリンパ球をそれぞれ２ｘ１０５個ずつ添加して、３７℃、５％ＣＯ２の条件下で４時間培養した。培養後、障害を受けた腫瘍細胞から放出される培養上清中のクロミウム５１の量を測定し、抗ＣＤ１７９ｂモノクローナル抗体＃８によるＮａｍａｌｗａ細胞に対するＡＤＣＣ活性を算出した。その結果、Ｎａｍａｌｗａに対して、それぞれ６０．６％のＡＤＣＣ活性が確認された。一方、アイソタイプコントロール（クローン名：ＭＥ０７）を用いて同様の操作を行ったところ、上記活性は検出されなかった。従って、抗ＣＤ１７９モノクローナル抗体＃８は、ＡＤＣＣ活性によりＣＤ１７９ｂを発現する腫瘍細胞を障害することができることが明らかになった。
　ＣＤＣ活性
　ウサギから採血した血液をエッペンドルフチューブに入れ、室温で６０分間、静置した後３０００ｒｐｍで５分間、遠心分離することで、ＣＤＣ活性測定用の血清を調製した。ヒト白血病細胞であるＮａｍａｌｗａを１０６個５０ｍｌ容の遠心チューブに集め、１００μＣｉのクロミウム５１を加え３７℃で２時間インキュベートした後、１０％牛胎児血清を含むＲＰＭＩ培地で３回洗浄した。その後上記で調製したウサギ血清を５０％含むＲＰＭＩ培地で懸濁し、９６穴Ｖ底プレート１穴あたり１０３個ずつ添加した。これに抗ＣＤ１７９ｂモノクローナル抗体＃８を２μｇ添加して、３７℃、５％ＣＯ２の条件下で４時間培養した。培養後、障害を受けた腫瘍細胞から放出される培養上清中のクロミウム５１の量を測定し、抗ＣＤ１７９ｂモノクローナル抗体＃８によるＮａｍａｌｗａ細胞に対するＣＤＣ活性を算出した。その結果、Ｎａｍａｌｗａに対して、３０．５％のＣＤＣ活性が確認された。一方、アイソタイプコントロール（クローン名：ＭＥ０７）を用いて同様の操作を行ったところ、上記活性は検出されなかった。従って、抗ＣＤ１７９ｂモノクローナル抗体＃８は、ＣＤＣ活性によりＣＤ１７９ｂを発現する腫瘍細胞を障害することができることが明らかになった。
　（３）マウス生体内における抗腫瘍効果
　抗ＣＤ１７９ｂモノクローナル抗体#8の担癌マウス生体内における抗腫瘍活性を評価した。使用した抗体は、上記と同様にハイブリドーマ株#8の培養上清をカラム精製したものを用いた。
　ＣＤ１７９ｂを発現するヒト由来の癌細胞株を移植した担癌マウスを用いて、抗ＣＤ１７９ｂモノクローナル抗体#8の抗腫瘍活性を評価した。２０匹のヌードマウス（BALB/c Slc-nu/nu、日本ＳＬＣ社由来）の背部皮下に、１匹あたり106個のNamalwa細胞を移植し、腫瘍が直径7mm程度の大きさになるまで成長させた。その内、１０匹の担癌マウスに対して、１匹あたり、BALB/cマウス（BALB/c Cr Slc、日本ＳＬＣ社由来）の末梢血から分離した107個のリンパ球と、300μｇの抗ＣＤ１７９ｂモノクローナル抗体#8をそれぞれ尾静脈から投与した。その後、２日間計３回、同量のマウスリンパ球及び抗体を各担癌マウスに尾静脈投与し、毎日腫瘍の大きさを計測することによって、抗腫瘍効果を評価した。一方、残り１０匹の担癌マウスに対して、上記抗体の代わりにＰＢＳ（－）を投与し、これをコントロール群とした。本検討の結果、抗ＣＤ１７９ｂ抗体を投与された群は、抗体投与開始時の腫瘍体積を１００％とした場合に、８日目には６５％にまで退縮し、１１日目，１７日目、２０日目には、それぞれ５２％，４５％、３５％にまで腫瘍が縮小した（図２参照）。一方、コントロール群では、８日目、１１日目、１７日目、２０日目にはそれぞれ、約１８０％，２２０％，３５０％，４２０％にまで腫瘍が増大した（図２参照）。この結果から、取得した抗ＣＤ１７９ｂモノクローナル抗体#8は、ＣＤ１７９ｂを発現する癌細胞に対して、生体内で強い抗腫瘍効果を発揮することが示された。なお、腫瘍の大きさは、長径×短径×短径×0.5の計算式を用いて、体積を算出した。
　実施例５：抗ＣＤ１７９ｂモノクローナル抗体＃８の可変領域遺伝子のクローニング
　ハイブリドーマ株＃８からｍＲＮＡを抽出し、マウス・リーダー配列及びＩｇＧ３の抗体定常領域に特異的なプライマーを使用したＲＴ－ＰＣＲ法により、抗ＣＤ１７９ｂモノクローナル抗体＃８の重鎖可変（ＶＨ）領域及び軽鎖可変（ＶＬ）領域の遺伝子を取得した。配列決定のために、それら遺伝子をｐＣＲ２．１ベクター（インビトロジェン社製）にクローニングした。
　（１）ＲＴ－ＰＣＲ　
　１０６個のハイブリドーマ株＃８から、ｍＲＮＡ　ｍｉｃｒｏ　ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｋｉｔ（ＧＥヘルスケア社製）を用いてｍＲＮＡを調製し、ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔＩＩ１ｓｔ　ｓｔｒａｎｄ　ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　ｋｉｔ（インビトロジェン社製）を用いて、得られたｍＲＮＡを逆転写してｃＤＮＡを合成した。これら操作は各キットの添付プロトコールに従って行った。
　得られたｃＤＮＡを用いて、ＰＣＲ法により抗体遺伝子の増幅を行った。
ＶＨ領域の遺伝子取得のために、マウス・リーダー配列に特異的なプライマー（配列番号１１２）及びマウスＩｇＧ３定常領域に特異的なプライマー（配列番号１１３）を使用した。またＶＬ領域の遺伝子取得のために、マウス・リーダー配列に特異的なプライマー（配列番号１１４）及びマウスκ鎖定常領域に特異的なプライマー（配列番号１１５）を使用した。これらプライマーはＪｏｎｅｓ　ＳＴ　ａｎｄ　Ｂｅｎｄｉｎｇ　ＭＭ　Ｂｉｏ／ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ９，８８－８９（１９９１）を参考に設計した。ＰＣＲは、Ｅｘ－ｔａｑ（タカラバイオ社製）を用いた。１０×ＥＸ　Ｔａｑ　Ｂｕｆｆｅｒ５μｌ、ｄＮＴＰ　Ｍｉｘｔｕｒｅ（２．５ｍＭ）４μｌ、プライマー（１．０μＭ）各２μｌ，Ｅｘ　ｔａｑ（５ｕｎｉｔｓ／μｌ）０．２５μｌにｃＤＮＡサンプルを加え、滅菌水により総量５０μｌとした。９４℃で２分処理後、変性９４℃１分、アニーリング５８℃３０秒、伸張反応７２℃１分の組み合わせで３０サイクルの条件で行った。
　（２）クローニング
　上記で得られた各ＰＣＲ産物を用いてアガロースゲルにて電気泳動を行い、ＶＨ領域及びＶＬ領域それぞれのＤＮＡバンドを切り出した。ＤＮＡ断片はＱＩＡｑｕｉｃｋＧｅｌｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎｋｉｔ（キアゲン社製）を用いてその添付プロトコールに従って行った。精製した各ＤＮＡはＴＡクローニングキット（インビトロジェン社製）を用いてｐＣＲ２．１ベクターにクローニングした。連結したベクターをＤＨ５ａコンピテントセル（ＴＯＹＯＢＯ社製）に定法に従い形質転換を行った。各形質転換体それぞれ１０クローンを培地（１００μｇ／ｍｌアンピシリン）で３７℃一晩培養後、各プラスミドＤＮＡをＱｉａｓｐｉｎ　Ｍｉｎｉｐｒｅｐ　ｋｉｔ（キアゲン社製）を用いて精製した。
　（３）配列決定
　ＶＨ領域及びＶＬ領域の遺伝子配列解析は、（２）のプラスミドＤＮＡをＭ１３フォワードプライマー（配列番号１１６）及びＭ１３リバースプライマー（配列番号１１７）を用いて、蛍光シーケンサー（ＡＢＩ社製ＤＮＡシーケンサー３１３０ＸＬ）により、ＡＢＩ社製のビッグダイターミネーターｖｅｒ３．１サイクルシーケンシングキットを用いて、その添付プロトコールに従い行った。その結果、各々の遺伝子配列が決定された（各々１０クローンで一致）。抗ＣＤ１７９ｂモノクローナル抗体＃８のＶＨ領域のアミノ酸配列を配列番号１０５に、ＶＬ領域のアミノ酸配列を配列番号１０９に示す。
　本発明の抗体は、癌の治療及び／又は予防のため有用である。
配列番号９４、９６～９９：プライマー
配列番号９５：Ｔ７プライマー
配列番号１００及び１０１：ＧＡＰＤＨプライマー
配列番号１１６及び１１７：プライマー

Claims (14)

  1. 　配列番号３で表されるアミノ酸配列、又は該アミノ酸配列と６０％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列、を有するＣＤ１７９ｂタンパク質、又は連続する７以上のアミノ酸を含むその断片、と免疫学的反応性を有する抗体又はそのフラグメントを有効成分として含むことを特徴とする、癌の治療及び／又は予防のための医薬組成物。
  2. 　前記癌が、乳癌、白血病又はリンパ腫である、請求項１に記載の医薬組成物。
  3. 　前記抗体が、モノクローナル抗体又はポリクローナル抗体である、請求項１又は２に記載の医薬組成物。
  4. 　前記抗体が、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、単鎖抗体又は二重特異性抗体である、請求項１～３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
  5. 　配列番号１０３、１０４及び１０２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と配列番号１０６、１０７及び１０８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む、かつ、ＣＤ１７９ｂタンパク質と免疫学的反応性を有する抗体。
  6. 　配列番号１０５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と配列番号１０９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む、かつ、ＣＤ１７９ｂタンパク質と免疫学的反応性を有する抗体。
  7. 　ヒト化抗体、キメラ抗体、単鎖抗体又は二重特異性抗体である、請求項５又は６に記載の抗体。
  8. 　前記抗体が、請求項５～７のいずれか１項に記載の抗体である、請求項１～４のいずれか１項に記載の医薬組成物。
  9. 　配列番号３で表されるアミノ酸配列、又は該アミノ酸配列と６０％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列、を有するＣＤ１７９ｂタンパク質、又は連続する７以上のアミノ酸を含むその断片、と免疫学的反応性を有する、請求項５～７のいずれか１項に記載の抗体又はそのフラグメントを用いた癌の治療及び／又は予防方法。
  10. 　配列番号１０５のアミノ酸配列を含むポリペプチド。
  11. 　配列番号１０９のアミノ酸配列を含むポリペプチド。
  12. 　配列番号１０３、１０４及び１０２のアミノ酸配列からなる群から選択される、重鎖ＣＤＲポリペプチド。
  13. 　配列番号１０６、１０７及び１０８のアミノ酸配列からなる群から選択される、軽鎖ＣＤＲポリペプチド。
  14. 　請求項１０～１３のいずれか１項に記載のポリペプチドをコードするＤＮＡ。
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