WO2009096445A1 - 神経幹細胞増殖促進剤 - Google Patents

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stem cells
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Hideyuki Onodera
Michio Ichimura
Kouji Baba
Tsutomu Agatsuma
Setsuya Sasho
Makoto Suzuki
Susumu Iwamoto
Shingo Kakita
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Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd.
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Definitions

  • Proliferation of stem cells and progenitor cells containing as an active ingredient a compound produced by Penicillium sp. CND1007 strain (FERM BP-10917) or a related compound thereof or a pharmaceutically acceptable salt thereof Relates to accelerators. Further, the present invention relates to a compound produced by Penicillium sp. CND1007 or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
  • Neurodegenerative diseases are diseases in which brain cells and peripheral nerve cells are damaged by genetic factors, environmental factors, aging factors, and the like. Specific examples include Parkinson's disease, Alzheimer's disease, triplet repeat disease, amyotrophic lateral sclerosis, multiple neuropathy, spinal cord injury, and cerebrovascular disorder.
  • the general treatment for these neurodegenerative diseases is a method of supplementing neurotransmitters lost due to nerve cell injury.
  • diseases for which the treatment is effective include Parkinson's disease and Alzheimer's disease. limited. Neurotransmitter replacement therapy cannot stop the progression of neuronal cell death.
  • Regenerative medicine that regenerates the central nervous system has been studied from the viewpoint of transplantation as a treatment that actively restores the function of dopaminergic neurons lost in Parkinson's disease.
  • a treatment method in which neural stem cells obtained from fetal brain and ES cells obtained from human fertilized eggs are cultured in large amounts in vitro and then differentiated into target neurons for use in transplantation (Stem Cells 2006) 24, p.1583-1593; The Journal of Neuroscience 2005, 25, p.4694-4705) is being studied, but it is accurate to the target neuron.
  • Examples of the low molecular weight compound that promotes proliferation of neural stem cells include salvianolic acid B (Japanese Patent Laid-Open No. 2006-76948), hedgehog signal agonist (“Journal of Biology”, 2002, Volume 1 , P. 10), selective serotonin reuptake inhibitors (Science, 2003, 301, 805-809; “Proceedings of the National Academy of Sciences” ⁇ The United States of America (Proceedings of the National Academy of Science of the United States of America), 2006, 103, p.8233-8238, metabotropic glutamate receptor antagonist ("Bio “Chemical and Biophysical Research Communications” (2004, 315, 493-496), PPAR ⁇ agonist ( The Journal of Biological Chemistry, 2006, 281, pp. 12673-12681, NMDA agonist (“Journal of Cell Science”, “Journal of Cell Science”, 2007, 120 volumes, pages 1358-1370) have been reported.
  • salvianolic acid B Japanese Patent Laid-Open No. 2006
  • sterol derivatives for example, the following compounds (A), (A1) and (1) to (6) are known.
  • indole and oxindole derivatives for example, the following compounds (7) and (8) are known.
  • quinazoline derivatives for example, the following compounds (9) to (11) are known (see Patent Documents 1 and 2 and Non-Patent Documents 1 to 9).
  • Japanese Patent Publication No. 5-79080 Japanese Patent Publication No. 8-5909 ⁇ Heterocycles '', 1985, 23, pp. 1607-1610 “Tetrahedron Letters”, 1979, 33, p.3119-3122 CAS Registry Database (CAS REGISTRY Database), Registry Number: 6048-74-4 ⁇ Agricultural and Biological Chemistry '', 1964, 28, p.788-795 "Journal of Natural Products", 1992, 55, pp.1588-1594 ⁇ Tetrahedron Letters '', 1995, 36, p.7471-7474 “Journal of American Chemical Society”, 2002, 124, p.14556-14557 “Angewandte Chemie International Edition”, 2007, 46, pp.2254-2256 “Journal of Chemical Society Perkin Transaction I”, 1995, p.2345-2353
  • the object of the present invention is useful as a neural stem cell proliferation promoter and the like, which contains a compound produced by Penicillium sp. CND1007 or a related compound thereof or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient, and the like. Another object is to provide a compound produced by Penicillium enisp. CND1007 or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
  • the present invention relates to the following (1) to (21).
  • a neural stem cell proliferation promoter containing a compound represented by any one of the following formulas (A1) to (A15) or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient containing a compound represented by any one of the following formulas (A1) to (A15) or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.
  • neural stem cells are cultured to proliferate neural stem cells, and neural stem cells are cultured from the culture.
  • a method for producing neural stem cells comprising collecting the neural stem cells.
  • neural stem cells are cultured to proliferate neural stem cells.
  • a method for producing a neuron comprising a step of collecting, a step of culturing the collected neural stem cells to differentiate into neurons, and collecting the neurons from the culture.
  • neural stem cells are cultured to proliferate neural stem cells.
  • a method for producing glial cells comprising the step of collecting, the step of culturing the collected neural stem cells to differentiate into glial cells, and collecting the glial cells from the culture.
  • a method of promoting proliferation of neural stem cells comprising contacting a compound produced by Penicillium sp. CND1007 or a pharmaceutically acceptable salt thereof with neural stem cells.
  • a method for promoting proliferation of neural stem cells comprising contacting a compound represented by any one of formulas (A1) to (A15) according to (3) or a pharmaceutically acceptable salt thereof with neural stem cells.
  • (11) Use of a compound produced by Penicillium sp. CND1007 or a pharmaceutically acceptable salt thereof for the production of a neural stem cell proliferation promoter.
  • a neural stem cell proliferation promoter comprising the compound according to (14) or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.
  • a neural stem cell proliferation promoter comprising as an active ingredient a compound represented by any one of the following formulas (A1) to (A3) and (A5) or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
  • a method for producing neural stem cells. (18) A step of culturing neural stem cells to proliferate neural stem cells in the presence of the compound according to (14) or (16) or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and collecting neural stem cells from the culture,
  • a method for producing a neuron comprising a step of culturing the neural stem cells obtained to differentiate into neurons and collecting the neurons from the culture.
  • a step of culturing neural stem cells to proliferate neural stem cells in the presence of the compound according to (14) or (16) or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and collecting neural stem cells from the culture A method for producing glial cells, comprising the step of culturing the differentiated neural stem cells to differentiate into glial cells and collecting the glial cells from the culture.
  • a method for promoting proliferation of neural stem cells comprising contacting the compound according to (14) or (16) or a pharmaceutically acceptable salt thereof with neural stem cells.
  • a neural stem cell proliferation promoter containing a compound produced by Penicillium sp. CND1007 or a related compound thereof or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient, and a Penicillium useful as a neural stem cell proliferation promoter A compound produced by sp. CND1007 strain or a pharmaceutically acceptable salt thereof is provided.
  • compositions of the present invention include, for example, pharmaceutically acceptable acid addition salts, metal salts, ammonium salts, organic amine addition salts, amino acid addition salts and the like.
  • pharmaceutically acceptable acid addition salt of the compound of the present invention include inorganic acid salts such as hydrochloride, hydrobromide, nitrate, sulfate and phosphate, acetate, oxalate and maleic acid.
  • Organic salts such as salts, fumarate, citrate, benzoate, methanesulfonate and the like
  • pharmaceutically acceptable metal salts include, for example, alkali metal salts such as sodium salt and potassium salt , Alkaline earth metal salts such as magnesium salts and calcium salts, aluminum salts, zinc salts and the like.
  • pharmaceutically acceptable ammonium salts include salts such as ammonium and tetramethylammonium.
  • acceptable organic amine addition salts include addition salts such as morpholine and piperidine, and pharmaceutically acceptable amino acid addition salts include, for example, Jin, glycine, phenylalanine, aspartic acid, addition salts, such as glutamic acid.
  • compounds (A) to (BB) are microorganisms belonging to the genus Penicillium and having the ability to produce compounds (A) to (BB) in a medium, and compounds (A) to (BB) are cultured in the culture solution. (BB) is produced and accumulated, and the compounds (A) to (BB) are collected from the culture broth.
  • any strain belonging to the genus Penicillium and capable of producing compounds (A) to (BB) can be used.
  • the ability to produce compounds (A) to (BB) can be obtained by mutant strains obtained by mutating these strains by artificial mutation methods such as ultraviolet irradiation, X-ray irradiation, mutagen treatment, or naturally-mutated mutant strains. If it has, it can be used for this invention.
  • Specific examples include Penicillium sp. CND1007 strain.
  • Penicillium sp. CND1007 was isolated from soil, and it was revealed from the mycological properties that it belongs to the genus Penicillium, which is a filamentous imperfect fungus.
  • Penicillium sp. CND1007 (FERM BP-10917) As of October 11, 2007, it has been deposited with the Patent Organism Depositary Center (National Institute of Advanced Industrial Science and Technology) (1st, 1st, 1st, 1st, 1st, Tsukuba, Ibaraki, Japan). Its bacteriological properties are as follows. (I) Macroscopic observation When cultured at 25 ° C. using a Czapek yeast agar medium, the diameter of the settlement reaches 30 to 35 mm on the seventh day of culture.
  • the surface of the settlement has radial grooves and is greyish green.
  • a yellow leachate is produced in the center.
  • the back of the village is bright yellow.
  • a yellow pigment is secreted into the agar medium.
  • the surface of the village is flat and bright grayish green.
  • the backside of the village has a dull reddish yellow color.
  • Microscopic observation Mycelium has partition walls and branches well. Conidial stalks are singly grown from basal or aerial hyphae.
  • the conidia pattern is smooth and has a partition wall, and is 250 to 500 ⁇ m long and 2.5 to 3.0 ⁇ m wide.
  • Metre is colorless, smooth, single cell, rectangular, 10-12.5 ⁇ m long and 3.0-4.0 ⁇ m wide.
  • the phialide is colorless, smooth, single cell, ampoule, 7-8 ⁇ m long, 2-2.5 ⁇ m wide.
  • a large number of conidia are produced in an endogeneous budding type from the tip of the phialide.
  • the conidia are single cells, spherical to subspherical, smooth or fine bites, and have a diameter of 2.5 to 3.0 ⁇ m. In this strain, only the anamorph described above was observed, and no teleomorph was observed.
  • this bacterium is "The Genera of Fungi Sporulating in Pure Culture, 2nd Edition" 2nd ed., Cramer Vaduz, JA Von Arx, 1974) ”, it belongs to the genus Penicillium of the filamentous imperfect fungus.
  • a usual method for culturing filamentous fungi is applied.
  • the medium any of a synthetic medium and a natural medium can be used as long as it contains a carbon source, a nitrogen source, inorganic salts, and the like that can assimilate microorganisms.
  • carbon source glucose, starch, dextrin, mannose, fructose, sucrose, lactose, xylose, arabinose, mannitol, molasses and the like are used alone or in combination. Furthermore, hydrocarbons, alcohols, organic acids and the like are also used depending on the assimilation ability of the bacteria.
  • nitrogen source ammonium chloride, ammonium nitrate, ammonium sulfate, sodium nitrate, urea, peptone, meat extract, yeast extract, dry yeast, corn steep liquor (CSL), soybean flour, casamino acid, etc. are used alone or in combination. .
  • sodium chloride, potassium chloride, magnesium sulfate, calcium carbonate, potassium dihydrogen phosphate, magnesium phosphate / octahydrate, ferrous sulfate, calcium chloride, manganese sulfate, zinc sulfate, copper sulfate, etc. as required Add inorganic salts.
  • components that promote the growth of the bacteria used and the production of the compound of the present invention for example, biosynthetic intermediates such as mevalonic acid and lanosterol
  • biosynthetic intermediates such as mevalonic acid and lanosterol
  • Examples of the culture method include a liquid culture method, and a deep stirring culture method is preferable.
  • Cultivation is performed at a temperature of 16 to 37 ° C., preferably 25 to 32 ° C., and pH 4 to 10, preferably pH 6 to 8.
  • Ammonia water or ammonium carbonate solution is used to adjust the pH of the medium. It is done.
  • Cultivation is usually completed in 1 to 10 days, but the compound of the present invention is produced and accumulated in the culture (in the culture medium and cells), and the cultivation is stopped when the production amount in the culture reaches the maximum. It is desirable.
  • Examples of the method for isolating and purifying the compound of the present invention accumulated in the culture broth from the culture broth include methods commonly used for isolating and purifying ordinary microbial metabolites from the culture broth. Specifically, add methanol, ethanol, 2-propanol, acetone, etc. directly to the culture and extract the target compound, or perform 2-layer partition extraction with 2-butanone, tert-butanol, n-butanol, etc. To extract the target compound. Alternatively, the culture is separated into a culture filtrate and cells by filtration, and the cells are further extracted with a solvent such as chloroform, acetone, methanol, and the like.
  • a solvent such as chloroform, acetone, methanol, and the like.
  • the obtained extract and / or culture filtrate is passed through a column filled with a polystyrene-based adsorbent such as Diaion HP-20, HP-20ss (manufactured by Mitsubishi Chemical Corporation) to adsorb the target compound, Elute with methanol, acetone, etc.
  • a polystyrene-based adsorbent such as Diaion HP-20, HP-20ss (manufactured by Mitsubishi Chemical Corporation) to adsorb the target compound, Elute with methanol, acetone, etc.
  • a polystyrene-based adsorbent such as Diaion HP-20, HP-20ss (manufactured by Mitsubishi Chemical Corporation) to adsorb the target compound, Elute with methanol, acetone, etc.
  • gel filtration using Sephadex LH-20, Toyopearl HW40, etc. column chromatography using octadecyl group-bonded silica gel (ODS), high performance
  • the compound (A) is a method described in, for example, JP-B-5-79080, “The Journal of Antibiotics”, 1988, 41, p.409-410. Can also be obtained. Further, compounds (A1) to (A15) which are derivatives thereof can be obtained according to the method described in, for example, JP-B-8-5909.
  • Some of the compounds of the present invention may have stereoisomers such as geometric isomers and optical isomers, tautomers, etc., but the compounds of the present invention and neural stem cell proliferation promoters include these. , Including all possible isomers and mixtures thereof.
  • a salt of the compound of the present invention it may be purified as it is when the compound of the present invention is obtained in the form of a salt. It may be isolated or purified by dissolving or suspending and forming a salt by adding an acid or a base.
  • the neural stem cell proliferation promoter of the present invention contains a substance that promotes the proliferation of neural stem cells, and examples of the substance that promotes the proliferation of neural stem cells include compounds produced by Penicillium sp. CND1007 strain, etc. Can be obtained by the method described above. More specifically, for example, the above compounds (A) to (BB), (A1) to (A15) and the like can be mentioned.
  • the neural stem cell proliferation promoter of the present invention can promote proliferation of neural stem cells when contacted with neural stem cells in vitro.
  • Stem cells refer to cells having multipotency to differentiate into a plurality of different types of cells and self-replicating ability to generate new stem cells by symmetrical or asymmetric division.
  • progenitor cells cells that enter a lineage of differentiation and are destined to undergo differentiation after a limited number of divisions.
  • neural stem cells since it is difficult to strictly distinguish neural stem cells from neural progenitor cells or glial progenitor cells, neural progenitor cells and glial progenitor cells are referred to as neural stem cells in the present invention.
  • the neural stem cell is not particularly limited, but is preferably an adult neural stem cell of the brain.
  • the brain may be the brain of any animal, but is preferably a mammal, more preferably a brain of a rat, mouse, monkey, human or the like.
  • Methods for obtaining adult neural stem cells from animals include, for example, “The Journal of Neuroscience, 1999, Vol. 19, p. 8487-8497”, “Jeans and Development (Genes and Development), 1996, Vol. 10, p.3129-3140 ”, etc., by removing a brain from an adult animal by a surgical technique to prepare a crude brain cell extract, The method of concentrating an adult stem cell from a liquid can be mention
  • biopsy can be used to collect tissue from the lateral ventricular wall of a neurological patient, prepare a crude brain cell extract, and concentrate adult stem cells from the extract.
  • the neural stem cell proliferation promoter of the present invention is characterized in that a neural stem cell is collected from a culture by promoting the proliferation of the neural stem cell by contacting the neural stem cell in vitro, culturing the neural stem cell, and culturing the neural stem cell. It can be used in a method for producing stem cells.
  • the compound having a neural stem cell proliferation promoting action of the present invention or a pharmaceutically acceptable salt thereof is used in vitro
  • the compound having a neural stem cell proliferation promoting action of the present invention or a pharmaceutically acceptable salt thereof the compound or a pharmaceutically acceptable salt thereof
  • a solution that can be dissolved.
  • the solution include water and dimethyl sulfoxide (DMSO). It can also be used by dissolving in various buffer solutions such as phosphate buffered saline (PBS).
  • DMSO dimethyl sulfoxide
  • PBS phosphate buffered saline
  • the neural stem cell proliferation promoter When adult neural stem cells are cultured in the presence of the neural stem cell proliferation promoter of the present invention, the neural stem cell proliferation promoter is added to 1 pmol / L to 1 mmol with respect to about 6.25 ⁇ 10 4 cells / cm 2 of adult neural stem cells. It is preferable to act at a concentration of / L.
  • the neural stem cell proliferation promoter of the present invention By contacting an adult neural stem cell with the neural stem cell proliferation promoter of the present invention and standing at 37 ° C. in an atmosphere of 5% CO 2 for 1 to 14 days every two days while changing the whole amount or a partial amount of the nerve, It can promote the proliferation of stem cells.
  • the medium may be any medium as long as it does not interfere with the growth promotion of neural stem cells.
  • a DMEM / F12 medium Invitrogen
  • 1% N-2 additive Invitrogen
  • it is preferable to use it.
  • the neural stem cells obtained by the above culture do not contain the neural stem cell proliferation promoter of the present invention, for example, 1 nmol / L to 1 mmol / L all-trans retinoic acid, 1 nmol / L to 1 mmol / L A medium containing forskolin or 0.1 ng / mL to 1 mg / mL platelet-derived growth factor (PDGF), etc., all or part every 2 days for 1 to 14 days at 37 ° C in a 5% CO 2 atmosphere It can be differentiated into neurons by static culture while changing the volume medium.
  • the neural stem cell proliferation promoter of the present invention for example, 1 nmol / L to 1 mmol / L all-trans retinoic acid, 1 nmol / L to 1 mmol / L A medium containing forskolin or 0.1 ng / mL to 1 mg / mL platelet-derived growth factor (PDGF), etc.
  • the medium may be any medium as long as it does not prevent differentiation into neurons.
  • a DMEM / F12 medium Invitrogen
  • N-2 additive Invitrogen
  • the neural stem cells obtained by the above culture do not contain the neural stem cell proliferation promoter of the present invention, for example, 0.1 ng / mL to 1 mg / mL leukemia inhibitory factor (LIF), or 0.1 ng / mL to 1 A medium containing mg / mL bone morphogenetic factor-2 (BMP-2), etc., at 37 ° C. in a 5% CO 2 atmosphere for 1 to 14 days, with the whole or a partial amount being changed every two days. It can be differentiated into glial cells by culturing.
  • LIF leukemia inhibitory factor
  • BMP-2 bone morphogenetic factor-2
  • the medium may be any medium as long as it does not prevent differentiation into glial cells.
  • a DMEM / F12 medium Invitrogen
  • N-2 additive Invitrogen
  • Neural stem cells, neurons, or glial cells obtained by the above culture can be collected from the culture medium and transplanted to a damaged site of a neurological disease patient by a surgical technique to be used for treatment of the neurological disease.
  • the neurological disease include Parkinson's disease, Alzheimer's disease, Down's syndrome, cerebrovascular disorder, stroke, spinal cord injury, triplet repeat disease, multiple sclerosis, amyotrophic lateral sclerosis, multiple neuropathy, epilepsy, anxiety disorder, Examples include schizophrenia, depression, and manic depression.
  • Test Example 1 Growth promoting effect of neural stem cells (1) Rat adult neural stem cell line ANSC-7 cells obtained by the method described in Reference Example 1 below were added with N-2 additive [5 ⁇ g / mL insulin (Sigma), 100 ⁇ g / mL usiapotransferrin (Sigma).
  • antibiotic mixture [0.05 U / mL penicillin, 0.05 ⁇ g / mL streptomycin (manufactured by Invitrogen)] suspended in DMEM / F12 medium (Invitrogen) (hereinafter referred to as assay medium) at a concentration of 1.7 ⁇ 10 5 cells / mL, and surfaced with polyornithine and laminin processed 96 seeded by 0.1 mL in well plates (Costar), 5% CO 2 atmosphere at 37 ° C., and cultured overnight.
  • assay medium DMEM / F12 medium
  • the plate was washed twice with PBS containing 0.3% Triton X-100 (manufactured by Nacalai Tesque) (hereinafter TBST), and 3.3 ⁇ mol / ml with 5% skim milk solution diluted with PBS containing 0.5% Triton X-100.
  • Hoechst 33342 manufactured by Nacalai Tesque prepared in L was added at 50 ⁇ L / well, and the nucleus was labeled overnight at 4 ° C. in the dark.
  • Compounds A, C and E each showed a growth promoting activity of 150% or more at 0.32 ⁇ mol / L.
  • Compounds A1, A2, A3, and A5 each showed a growth promoting activity of 160% or more at 0.32 ⁇ mol / L.
  • compounds B, D and F each showed a growth promoting activity of 140% or more at 1.0 ⁇ mol / L.
  • Test Example 2 Neural stem cell proliferation promoting action (2) Rat adult neural stem cell line ANSC-7 cells obtained by the method described in Reference Example 1 below were suspended in an assay medium at a concentration of 1.7 ⁇ 10 5 cells / mL, and 96-well plates surface-treated with polyornithine and laminin ( (Coaster Co., Ltd.) was seeded at 0.1 mL each, and cultured overnight at 37 ° C. in a 5% CO 2 atmosphere. Thereafter, 50 ⁇ L of the culture supernatant was removed, and 50 ⁇ L of test compound or DMSO (negative control) serially diluted with the assay medium so as to be twice the final concentration was added per well.
  • polyornithine and laminin (Coaster Co., Ltd.)
  • a viable cell count measuring reagent SF (Nacalai Tesque) was added to the culture medium per well. After culturing at 37 ° C. for 3 hours in a 5% CO 2 incubator, the mixture was stirred for 1 minute, and the absorbance at 490 nm (control wavelength: 655 nm) was measured using a microplate spectrophotometer Emax (manufactured by Molecular Devices). . The relative value in the test compound addition group was calculated with the measured value of the well in which the cells were not seeded being 0% and the measured value of the negative control being 100%.
  • Compounds A, C, E and L each showed a growth promoting activity of 130% or more at 0.32 ⁇ mol / L.
  • Compounds B, D, F, H and K each showed a growth promoting activity of 130% or more at 1.0 ⁇ mol / L.
  • Compound J showed a growth promoting activity of 125% or more at 3.2 ⁇ mol / L.
  • Test Example 3 Neural stem cell proliferation promoting action (3) The test was performed in the same manner as in Test Example 2.
  • Compounds U and V each showed 120% or more growth promoting activity at 1 nmol / L, and compounds W and X each showed 120% or more growth promoting activity at 10 nmol / L.
  • the tissue including the periventricular region is segmented to approximately 1 mm 3 using ophthalmic scissors and a scalpel, then 2.5 U / mL papain and 250 U / mL DNase (both manufactured by Worthington, Freehold, NJ)
  • the digestion reaction was carried out at 37 ° C. for 30 minutes in 5 mL Hanks buffer (HBSS buffer; Invitrogen) containing 1 U / mL neutral protease (Dispase, manufactured by Boehringer Mannheim).
  • the cell-tissue mixture obtained by the reaction was washed 3 times with DMEM (Invitrogen) containing 10% fetal calf serum (Hyclone), and then dissolved in DMEM containing 10% fetal calf serum. Undigested material was removed using a 10 ⁇ m nylon mesh.
  • the obtained crude cell extract was cultured overnight in a 37 ° C. incubator using a DMEM / F12 medium (manufactured by Invitrogen) containing 10% fetal calf serum on a 10 cm culture dish.
  • DMEM / F12 medium manufactured by Invitrogen
  • the medium was replaced with DMEM / F12 containing 1% N-2 additive (Invitrogen) and 20 ng / mL FGF2 (Peprotech) to start the culture.
  • half of the medium was replaced with DMEM / F12 containing fresh 1% N-2 supplement and 20 ng / mL FGF2, and the culture was continued.
  • CND1007 strain was inoculated into a first-type medium (10 mL) placed in a 70 mL test tube and cultured with shaking at 28 ° C. for 72 hours.
  • the first-type culture solution was inoculated in a second-type medium (475 mL) placed in a 2 L Erlenmeyer flask, 25 mL each, and similarly shaken for 72 hours.
  • a filter aid (Radiolite # 600, Showa Chemical Industry Co., Ltd.) was added to the obtained fermentation broth (64 L) at a ratio of 10% by weight, and then the culture filtrate and the cells were separated by suction filtration. 15 ⁇ L of methanol was added to the sorted cells and extracted twice at room temperature.
  • the extract (30 L) was concentrated under reduced pressure to 10 L and passed through a column packed with 2 L of Diaion HP20 (Mitsubishi Chemical Corporation) to adsorb the target compound. After washing with water, 40% methanol and 70% methanol, the target compound was eluted with 100% methanol and 30% acetone / methanol.
  • the eluate (6 L) was concentrated under reduced pressure to 1 L and then extracted three times with chloroform (1 L).
  • the eluates containing the same components are combined to obtain an eluate of 20 to 40% ethyl acetate / n-hexane (fraction 1), 60% Elution zone of ethyl acetate / n-hexane (fraction 2), Elution zone of 60-80% ethyl acetate / n-hexane (fraction 3), Elution zone of 80% ethyl acetate / n-hexane to ethyl acetate (fraction 4)
  • the fraction was fractionated into an ethyl acetate to 25% methanol / ethyl acetate elution section (fraction 5) and a 25% methanol / ethyl acetate elution section (fraction 6).
  • Fraction 1 (2.3 g) was passed through a column packed with neutral alumina (50 mL) and eluted with ethyl acetate to remove mixed higher fatty acids.
  • the residue (502 mg) obtained by concentrating the eluate was subjected to preparative high performance liquid chromatography (column SunFire TM Prep C18 OBD 10 ⁇ m (Waters), ⁇ 19 ⁇ 250 mm, column temperature 40 ° C, flow rate 10 mL / min. And step elution with 85 to 100% methanol aqueous solution] to obtain Compound C (57.0 mg), Compound G (12.6 mg) and Compound K (36.0 mg).
  • Fraction 2 (300 mg) was passed through a column packed with 20 mL of silica gel and eluted with a mixed solvent of n-hexane and ethyl acetate. Fractions containing the target compound were collected and concentrated, and the resulting residue (200 mg) was subjected to preparative high-performance liquid chromatography (column SunFire TM Prep C18 OBD 10 ⁇ m, ⁇ 19 ⁇ 250 mm, column temperature 40 ° C, flow rate 10 mL / min, stepwise elution with 85 to 100% aqueous methanol solution], compound L (15.4 mg), compound B (21.1 mg), compound D (40.0 mg), and compound E (44.6 mg) Obtained.
  • Fraction 3 (1.5 g) was fractionated by preparative high performance liquid chromatography [column SunFire TM Prep C18 OBD 10 ⁇ m, ⁇ 19 ⁇ 250 mm, column temperature 40 ° C, flow rate 10 mL / min, 85-100% methanol aqueous solution]
  • the compound B (9.2 mg) and the compound F (23.3 mg) were obtained respectively.
  • Fraction 4 (4.95 g) was recrystallized from methanol to obtain Compound A (4.0 g).
  • Fraction 5 (1.17 g) was subjected to silica gel column chromatography (methanol / chloroform and methanol / ethyl acetate), followed by preparative high performance liquid chromatography [column SunFire TM Prep C18 OBD 10 ⁇ m, ⁇ 19 ⁇ 250 mm, column temperature 40 ° C. And stepwise elution with a 40-100% aqueous methanol solution at a flow rate of 10 mL / min] to obtain Compound R (5.3 mg), Compound S (4.5 mg) and Compound T (10.4 mg), respectively.
  • Fraction 6 (4.01 g) was purified by silica gel column chromatography (methanol / ethyl acetate), alumina column chromatography (ethyl acetate) and preparative high performance liquid chromatography [column SunFire TM Prep C18 OBD 10 ⁇ m, ⁇ 19 ⁇ 250 mm, Column temperature: room temperature, flow rate: 10 mL / min, eluting stepwise with 45-95% acetonitrile aqueous solution], compound I (113.0 mg), compound M (3.4 mg), compound N (0.7 mg), compound O (2.0 mg), Compound P (6.1 mg) and Compound Q (7.1 mg) were obtained, respectively.
  • a filter aid was added to the obtained fermentation broth (3 L) at a ratio of 10% by weight, followed by suction filtration to separate the culture filtrate from the cells.
  • Methanol (2 L) was added to the sorted cells and sufficiently stirred and extracted, followed by filtration with a suction filter.
  • 2 L of methanol / acetone (1/1) was added to the residue, and extraction operation was performed again.
  • the extracts were combined, concentrated under reduced pressure, and passed through a column packed with 450 mL of Diaion HP-20 to adsorb the target compound. After washing with 30% aqueous methanol (0.9 L) and 70% aqueous methanol (1.35 L), the target compound was eluted with 1.35 L each of methanol and methanol / acetone (7/3).
  • Each eluate was concentrated under reduced pressure to obtain 250 mL of 80% aqueous methanol solution and 250 mL of 70% aqueous methanol solution. Each was washed twice with 100 mL of hexane, and after combining, water was added to form a 40% aqueous methanol solution (900 mL). Subsequently, the obtained aqueous solution was extracted with chloroform to obtain 2.21 g of a crude extract. The obtained crude extract was dissolved in methanol, a small amount of silica gel was added thereto, and methanol was distilled off to adsorb the crude extract onto silica gel.
  • the above crude extract adsorbed on silica gel is layered on a column packed with 200 mL of silica gel, washed with hexane / ethyl acetate (9/1) and chloroform (500 mL each), and then a mixed solvent of methanol / chloroform. Deployed.
  • the physicochemical data of the compounds A to T obtained in Examples 1 and 2 are as follows. Physicochemical data of Compound A FAB mass spectrum (m / z): 443 [M + H] + , 465 [M + Na] + .
  • sucrose (30 g / L), soluble starch (20 g / L), Corn Steep Liquor (CSL) (30 g / L), malt extract (20 g / L), and carbonate A medium (pH 5.0) composed of calcium (5 g / L) was used. Approximately 2 mL of a spore suspension of Penicillium sp.
  • CND1007 strain (3 x 10 8 cells / mL) is inoculated into first-class medium (50 mL) in a 250 mL Erlenmeyer flask and incubated at 25 ° C for 48 hours Shaking culture (stirring number: 220 rpm) was performed.
  • first-class medium 50 mL
  • second type medium 400 mL
  • shake culture 25 ° C. for 24 hours
  • the entire amount (about 390 mL) of the second type culture solution was inoculated into a fermentation medium (15 L) placed in a 30 L jar fermenter, and aerated and stirred for 24 hours at 25 ° C (stirring number: 100 rpm; Aeration flow rate: 10 L / min).
  • the third-type culture solution (about 3.9 L) was inoculated into the main fermentation medium (130 L) in a 200 L jar fermenter and aerated and stirred for 144 hours at 25 ° C (rotation: 150 rpm; aeration flow rate) : 75 L / min).
  • a filter aid (Radiolite # 600, Showa Kagaku Kogyo Co., Ltd.) was added to the obtained fermentation broth (about 120 L) at a ratio of 10% by weight, and then the culture filtrate and cells were separated by suction filtration. 30 L of methanol was added to the sorted cells and extracted twice at room temperature. The extract (60 L) was diluted with water (120 L) and passed through a column packed with 5 L of Diaion HP20 (Mitsubishi Chemical Corporation) to adsorb the target compound.
  • Diaion HP20 Mitsubishi Chemical Corporation
  • the residue (138 g) obtained by concentrating the extract under reduced pressure was passed through a column packed with 2 L of silica gel, and n-hexane (2 L x 2), 25% ethyl acetate / n-hexane (2 L x 2), 50% ethyl acetate / n-hexane (2 L x 2), 75% ethyl acetate / n-hexane (2 L x 2), ethyl acetate (2 L x 2), 25% methanol / ethyl acetate ( Elution stepwise with 2 L x 2), and 50% methanol / ethyl acetate (2 L x 2).
  • a fermentation broth (120 L) obtained in accordance with the method described in Example 3 was separated into a culture filtrate and cells by suction filtration. 30 L of methanol was added to the sorted cells and extracted twice at room temperature. The extract (60 L) was diluted with water (120 L) and passed through a column packed with 5 L of Diaion HP20 (Mitsubishi Chemical Corporation) to adsorb the target compound. After washing with 33% methanol (2 L x 4) and 66% methanol (2 L x 4), 100% methanol (2 L x 4), 33% acetone / methanol (2 L x 4) and 100% acetone ( The target compound was eluted with 2 L ⁇ 3).
  • the eluate (about 22 L) was concentrated under reduced pressure to about 8 L, diluted with water (about 7 L), and extracted three times with chloroform (10 L).
  • the residue obtained by concentrating the extract under reduced pressure (81.3 g) was passed through a column packed with 2.5 L of silica gel, and n-hexane (2 L x 3), 25% ethyl acetate / n-hexane (2 L x 2), 50% ethyl acetate / n-hexane (2 L x 2), 75% ethyl acetate / n-hexane (2 L x 2), ethyl acetate (2 L x 2), 25% methanol / ethyl acetate ( Elution stepwise with 2 L x 2), and 50% methanol / ethyl acetate (2 L x 2).
  • the physicochemical data of the compounds U to BB obtained in Examples 3 and 4 are as follows.
  • Neural stem cell proliferation promoter A DMSO solution of compound A (0.1 mmol / L) is prepared by a conventional method to obtain a neural stem cell proliferation promoter containing compound A.
  • Neural stem cell proliferation promoter A DMSO solution of compound C (0.5 mmol / L) is prepared by a conventional method to obtain a neural stem cell proliferation promoter containing compound C.
  • Neural stem cell proliferation promoter A DMSO solution of compound E (0.1 mmol / L) is prepared by a conventional method to obtain a neural stem cell proliferation promoter containing compound E.
  • Reference Example 2 Production of Compounds A1 to A15 and A Compounds A1 to A15 were produced by the method described in JP-B-8-5909. [Reference Example 3] Production of Compound A Compound A was produced by the method described in Example 1, and the fungus belonging to the genus Penicillium having the ability to produce the compound (Penicillium paxili KAC-1843) ), And isolated and purified from the culture solution.
  • a compound produced by Penicillium sp. CND1007 strain useful as a proliferation promoter for neural stem cells and neural progenitor cells, or a related compound thereof, or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and a neural stem cell proliferation promoter containing them Etc. can be provided.

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Abstract

　ペニシリウム・スピーシーズ（Penicillium sp.）CND1007株（FERM BP-10917）が産生する化合物またはその薬学的に許容される塩を有効成分として含有する神経幹細胞増殖促進剤、Penicillium sp. CND1007株が産生する新規な化合物またはその薬学的に許容される塩、Penicillium sp. CND1007株が産生する化合物またはその薬学的に許容される塩の存在下、神経幹細胞を培養して神経幹細胞を増殖させ、培養物中より神経幹細胞を採取することを特徴とする神経幹細胞の製造方法などを提供する。

Description

神経幹細胞増殖促進剤
　本発明は、ペニシリウム・スピーシーズ（Penicillium sp.）CND1007株（FERM BP-10917）が産生する化合物またはその関連化合物あるいはそれらの薬学的に許容される塩を有効成分として含有する幹細胞および前駆細胞の増殖促進剤に関する。更に、Penicillium sp. CND1007株が産生する化合物またはその薬学的に許容される塩に関する。
　神経変性疾患は、脳や末梢の神経細胞が遺伝的要因、環境要因、加齢要因などにより傷害を受ける疾患である。具体的には、パーキンソン病、アルツハイマー病、トリプレットリピート病、筋萎縮性側索硬化症、多発性ニューロパチー、脊髄損傷、脳血管障害などがあげられる。
　これら神経変性疾患に対する一般的な治療法は、神経細胞の傷害により失われた神経伝達物質を補充する方法であるが、該治療法が有効な疾患は現在のところ、パーキンソン病、アルツハイマー病などに限られている。また神経伝達物質補充療法では神経細胞死の進行を止めることはできない。
　中枢神経系を再生する再生医療は、パーキンソン病で失われたドーパミン作動性ニューロンの機能を積極的に回復させる治療法として移植という観点から検討が進められてきたが、中絶胎児脳を用いることに起因する様々な問題があり、一般的な利用には至っていない。また、胎児脳から取得した神経幹細胞やヒト受精卵から取得したＥＳ細胞を生体外で大量培養した後、目的のニューロンへ分化させて移植に用いるという治療法（ステム・セルズ（Stem Cells）2006年、24巻、p.1583-1593；ザ・ジャーナル・オブ・ニューロサイセンス（The Journal of Neuroscience）2005年、25巻、p.4694-4705）も検討されているが、目的とするニューロンへ正確に分化させる技術はまだ確立されていないこと、未分化の細胞によって奇形腫が形成されてしまうこと、また胎児由来の神経幹細胞やヒトＥＳ細胞を用いることに起因する問題もあり、臨床応用は進んでいない。従って、成体由来の神経幹細胞を生体外で培養し、移植に用いる手法が有望視されており、神経幹細胞の増殖を効率良く促進させる因子の探索が望まれている（ネイチャー・レビューズ・ニューロサイエンス（Nature Reviews Neuroscience）、2006年、7巻、p.395-406）。
　神経幹細胞の増殖を促進する低分子化合物としては、例えばサルビアノール酸Ｂ（特開2006-76948）、ヘッジホッグシグナルアゴニスト（「ジャーナル・オブ・バイオロジー(Journal of Biology)」、2002年、1巻、p.10）、選択的セロトニン再取り込み阻害薬（「サイエンス(Science)」、2003年、301巻、p.805-809；「プロシーディングス・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンス・オブ・ザ・ユナイテッド・ステイツ・オブ・アメリカ(Proceedings of the National Academy of Science of the United States of America)」、2006年、103巻、p.8233-8238）、代謝型グルタミン酸受容体拮抗剤（「バイオケミカル・アンド・バイオフィジカル・リサーチ・コミュニケーションズ(Biochemical and Biophysical Research Communications)」、2004年、315巻、p.493-496）、PPARγアゴニスト（「ザ・ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー(Journal of Biological Chemistry)」、2006年、281巻、p.12673-12681）、NMDAアゴニスト（「ジャーナル・オブ・セル・サイエンス(Journal of Cell Science)」、2007年、120巻、p.1358-1370）などが報告されている。
　一方、ステロール誘導体として、例えば以下の化合物（Ａ）、（Ａ１）および（１）～（６）が知られている。インドールおよびオキシインドール誘導体として、例えば以下の化合物（７）および（８）が知られている。キナゾリン誘導体として、例えば以下の化合物（９）～（１１）が知られている（特許文献１～２および非特許文献１～９参照）。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000005
 特公平５－７９０８０号公報 特公平８－５９０９号公報 「ヘテロサイクルズ(Heterocycles)」、1985年、23巻、p.1607-1610 「テトラへドロン・レターズ（Tetrahedron Letters）」、1979年、33巻、p.3119-3122 ＣＡＳレジストリー・データベース(CAS REGISTRY Database)、レジストリー番号：6048-74-4 「アグリカルチャラル・アンド・バイオロジカル・ケミストリー(Agricultural and Biological Chemistry)」、1964年、28巻、p.788-795 「ジャーナル・オブ・ナチュラル・プロダクツ(Journal of Natural Products)」、1992年、55巻、p.1588-1594 「テトラヘドロン・レターズ(Tetrahedron Letters)」、1995年、36巻、p.7471-7474 「ジャーナル・オブ・アメリカン・ケミカル・ソサイエティ(Journal of American Chemical Society)」、2002年、124巻、p.14556-14557 「アンゲバンテ・ケミィ・インターナショナル・エディション(Angewandte Chemie International Edition)」、2007年、46巻、p.2254-2256 「ジャーナル・オブ・ケミカル・ソサイエティ・パーキン・トランザクション　Ｉ(Journal of Chemical Society Perkin Transaction I)」、1995年、p.2345-2353
　本発明の目的は、Penicillium sp. CND1007株が産生する化合物またはその関連化合物あるいはそれらの薬学的に許容される塩を有効成分として含有する神経幹細胞増殖促進剤など、および神経幹細胞増殖促進剤として有用なPenicillium sp. CND1007株が産生する化合物またはその薬学的に許容される塩を提供することにある。
　本発明は、以下の（１）～（２１）に関する。
（１）　Penicillium sp. CND1007株が産生する化合物またはその薬学的に許容される塩を有効成分として含有する神経幹細胞増殖促進剤。
（２）Penicillium sp. CND1007株が産生する化合物が下記式（Ａ）～（ＢＢ）のいずれかで表される化合物である（１）記載の神経幹細胞増殖促進剤。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000006
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000007
（３）　下記式（Ａ１）～（Ａ１５）のいずれかで表される化合物またはその薬学的に許容される塩を有効成分として含有する神経幹細胞増殖促進剤。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000008
（４）　上記（１）～（３）のいずれかに記載の化合物またはその薬学的に許容される塩の存在下、神経幹細胞を培養して神経幹細胞を増殖させ、培養物中より神経幹細胞を採取することを特徴とする神経幹細胞の製造方法。
（５）　上記（１）～（３）のいずれかに記載の化合物またはその薬学的に許容される塩の存在下、神経幹細胞を培養して神経幹細胞を増殖させ、培養物中より神経幹細胞を採取する工程、採取された神経幹細胞を培養してニューロンへ分化させ、培養物中よりニューロンを採取する工程を含むニューロンの製造方法。
（６）　上記（１）～（３）のいずれかに記載の化合物またはその薬学的に許容される塩の存在下、神経幹細胞を培養して神経幹細胞を増殖させ、培養物中より神経幹細胞を採取する工程、採取された神経幹細胞を培養してグリア細胞へ分化させ、該培養物中よりグリア細胞を採取する工程を含むグリア細胞の製造方法。
（７）　下記式（Ｂ）～（ＢＢ）のいずれかで化合物またはその薬学的に許容される塩。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000009
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000010
（８）　Penicillium sp.CND1007株が産生する化合物またはその薬学的に許容される塩を神経幹細胞と接触させることを特徴とする神経幹細胞増殖促進方法。
（９）　Penicillium sp. CND1007株が産生する化合物が（２）記載の式（Ａ）～（ＢＢ）のいずれかで表される化合物である（８）記載の方法。
（１０）　（３）記載の式（Ａ１）～（Ａ１５）のいずれかで表される化合物またはその薬学的に許容される塩を神経幹細胞と接触させることを特徴とする神経幹細胞増殖促進方法。
（１１）　神経幹細胞増殖促進剤の製造のためのPenicillium sp.CND1007株が産生する化合物またはその薬学的に許容される塩の使用。
（１２）　Penicillium sp. CND1007株が産生する化合物が（２）記載の式（Ａ）～（ＢＢ）のいずれかで表される化合物である（１１）記載の使用。
（１３）　神経幹細胞増殖促進剤の製造のための（３）記載の式（Ａ１）～（Ａ１５）のいずれかで表される化合物またはその薬学的に許容される塩の使用。
（１４）　下記式（Ｃ）、（Ｄ）、（Ｅ）、（Ｆ）、（Ｊ）、（Ｕ）、（Ｖ）、（Ｗ）、（Ｘ）または（Ｙ）で表される化合物またはその薬学的に許容される塩。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000011
（１５）　（１４）記載の化合物またはその薬学的に許容される塩を有効成分として含有する神経幹細胞増殖促進剤。
（１６）　下記式（Ａ１）～（Ａ３）、（Ａ５）のいずれかで表される化合物またはその薬学的に許容される塩を有効成分として含有する神経幹細胞増殖促進剤。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000012
（１７）　（１４）または（１６）記載の化合物またはその薬学的に許容される塩の存在下、神経幹細胞を培養して神経幹細胞を増殖させ、培養物中より神経幹細胞を採取することを特徴とする神経幹細胞の製造方法。
（１８）　（１４）または（１６）記載の化合物またはその薬学的に許容される塩の存在下、神経幹細胞を培養して神経幹細胞を増殖させ、培養物中より神経幹細胞を採取する工程、採取された神経幹細胞を培養してニューロンへ分化させ、培養物中よりニューロンを採取する工程を含むニューロンの製造方法。
（１９）　（１４）または（１６）記載の化合物またはその薬学的に許容される塩の存在下、神経幹細胞を培養して神経幹細胞を増殖させ、培養物中より神経幹細胞を採取する工程、採取された神経幹細胞を培養してグリア細胞へ分化させ、該培養物中よりグリア細胞を採取する工程を含むグリア細胞の製造方法。
（２０）　（１４）または（１６）記載の化合物またはその薬学的に許容される塩を神経幹細胞と接触させることを特徴とする神経幹細胞増殖促進方法。
（２１）　神経幹細胞増殖促進剤の製造のための（１４）または（１６）記載の化合物またはその薬学的に許容される塩の使用。
　本発明により、Penicillium sp. CND1007株が産生する化合物またはその関連化合物あるいはそれらの薬学的に許容される塩を有効成分として含有する神経幹細胞増殖促進剤など、および神経幹細胞増殖促進剤として有用なPenicillium sp. CND1007株が産生する化合物またはその薬学的に許容される塩が提供される。
　以下、一般式（Ａ）で表される化合物を化合物（Ａ）という。他の式番号の化合物についても同様である。
　本発明の化合物の薬学的に許容される塩は、例えば薬学的に許容される酸付加塩、金属塩、アンモニウム塩、有機アミン付加塩、アミノ酸付加塩などを包含する。本発明の化合物の薬学的に許容される酸付加塩としては、例えば塩酸塩、臭化水素酸塩、硝酸塩、硫酸塩、リン酸塩などの無機酸塩、酢酸塩、シュウ酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、クエン酸塩、安息香酸塩、メタンスルホン酸塩などの有機酸塩などがあげられ、薬学的に許容される金属塩としては、例えばナトリウム塩、カリウム塩などのアルカリ金属塩、マグネシウム塩、カルシウム塩などのアルカリ土類金属塩、アルミニウム塩、亜鉛塩などがあげられ、薬学的に許容されるアンモニウム塩としては、例えばアンモニウム、テトラメチルアンモニウムなどの塩があげられ、薬学的に許容される有機アミン付加塩としては、例えばモルホリン、ピペリジンなどの付加塩があげられ、薬学的に許容されるアミノ酸付加塩としては、例えばリジン、グリシン、フェニルアラニン、アスパラギン酸、グルタミン酸などの付加塩があげられる。
　次に本発明の化合物の製造法について説明する。
　本発明の化合物のうち、化合物（Ａ）～（ＢＢ）は、ペニシリウム属に属し化合物（Ａ）～（ＢＢ）の生産能を有する微生物を培地に培養し、培養液中に化合物（Ａ）～（ＢＢ）を生成蓄積させ、該培養液から化合物（Ａ）～（ＢＢ）を採取することによって製造される。
　化合物（Ａ）～（ＢＢ）の生産能を有する微生物としては、ペニシリウム属に属し、化合物（Ａ）～（ＢＢ）の生産能を有する菌株であればいずれの菌株でも用いることができる。またこれらの菌株を人工的変異方法、例えば紫外線照射、Ｘ線照射、変異誘起剤処理などによって変異させた変異株または自然的に変異した変異株でも、化合物（Ａ）～（ＢＢ）の生産能を有するものであれば本発明に用いることができる。具体的には、例えばPenicillium sp. CND1007株があげられる。
　Penicillium sp. CND1007株は、土壌より分離したものであり、菌学的性質より、糸状不完全菌類のペニシリウム（Penicillium）属に所属することが明らかとなり、Penicillium sp. CND1007株（FERM BP-10917）として独立行政法人産業技術総合研究所　特許生物寄託センター(日本国茨城県つくば市東1丁目1番地1　中央第6)に2007年10月11日付けで寄託されている。その菌学的性質は次のとおりである。
（Ｉ）肉眼的観察
　ツァペックイースト寒天培地を用いて25℃で培養した場合、集落の直径は培養7日目で30～35 mmに達する。集落の表面は放射状の溝が認められ、灰色がかった緑色を呈する。中央部には黄色の浸出液が生産される。また、集落の裏面は明るい黄色を呈する。寒天培地中には黄色の色素を分泌する。麦芽エキス寒天培地を用いて25℃で培養した場合、集落の直径は培養7日目で35～40 mmに達する。集落の表面は平坦、明るい灰緑色を呈する。また、集落の裏面はくすんだ赤みの黄色を呈する。
（ＩＩ）顕微鏡的観察
　菌糸は隔壁を有し、良く分岐する。分生子柄は基底菌糸あるいは気中菌糸より単生する。分生子柄は平滑で隔壁を有し、長さ250～500 μm、幅2.5～3.0 μmである。分生子柄の先端に3～5本のメトレを形成し、各メトレの先端に4～7本のフィアライドを形成する。メトレは無色、平滑、単細胞、長方形、長さ10～12.5 μm、幅3.0～4.0 μmである。フィアライドは無色、平滑、単細胞、アンプル形、長さ7～8μm、幅2～2.5 μmである。分生子は、フィアライドの先端から内生出芽型様式で多数生ずる。分生子は単細胞、球形～亜球形、平滑もしくは微小な刺状を呈し、直径2.5～3.0 μmである。本菌株は上述したアナモルフのみ観察され、テレオモルフは観察されなかった。
　以上の菌学的性質より、分類学的位置については、本菌は、「ザ・ジェネラ・オブ・ファンジャイ・スポルレイティング・イン・ピュア・カルチャー　第2版 （The Genera of Fungi Sporulating in Pure Culture, 2nd ed., Cramer Vaduz, J.A. Von Arx, 1974）」に従えば、糸状不完全菌類のPenicillium属に所属する。
　本発明の化合物の生産菌の培養に際しては、通常の糸状菌の培養方法が適用される。培地としては、微生物の資化し得る炭素源、窒素源、無機塩類などを程よく含有する培地であれば合成培地、天然培地いずれでも使用できる。
　炭素源としては、グルコース、澱粉、デキストリン、マンノース、フルクトース、シュクロース、ラクトース、キシロース、アラビノース、マンニトール、糖蜜などが単独または組み合わせて用いられる。さらに、菌の資化能によっては炭化水素、アルコール類、有機酸なども用いられる。
　窒素源としては、塩化アンモニウム、硝酸アンモニウム、硫酸アンモニウム、硝酸ナトリウム、尿素、ペプトン、肉エキス、酵母エキス、乾燥酵母、コーン・スティープ・リカー（ＣＳＬ）、大豆粉、カザミノ酸などが単独または組み合わせて用いられる。
　そのほか、必要に応じて塩化ナトリウム、塩化カリウム、硫酸マグネシウム、炭酸カルシウム、リン酸二水素カリウム、リン酸マグネシウム・八水和物、硫酸第一鉄、塩化カルシウム、硫酸マンガン、硫酸亜鉛、硫酸銅などの無機塩類を加える。さらに、使用菌の生育や本発明の化合物の生産を促進する成分（例えば生合成中間体のメバロン酸やラノステロールなど）を適当に添加することができる。
　培養法としては、例えば液体培養法などがあげられ、好ましくは深部撹拌培養法が適している。培養は、16～37℃、好ましくは25～32℃の間の温度で、pH 4～10、好ましくはpH 6～8で行われ、培地のpH調整にはアンモニア水や炭酸アンモニウム溶液などが用いられる。培養は通常1～10日で完了するが、本発明の化合物が培養物中（培養液および菌体中）に生成蓄積され、培養物中の生成量が最大に達したときに培養を停止することが望ましい。
　培養液中に蓄積した本発明の化合物を培養液中から単離精製する方法としては、例えば通常の微生物代謝産物を培養液から単離精製するために常用される方法があげられる。具体的には、培養物に直接メタノール、エタノール、2-プロパノール、アセトンなどを加え、目的化合物の抽出を行うか、2-ブタノン、tert-ブタノール、n-ブタノールなどで2層分配抽出を行なうことにより目的化合物を抽出する。または培養物を濾過により培養濾液と菌体とに分け、さらに菌体をクロロホルム、アセトン、メタノールなどの溶媒で菌体成分を抽出する。得られた抽出液および／または培養濾液を、例えばダイヤイオンHP-20、HP-20ss(三菱化学社製)などのポリスチレン系吸着剤を充填したカラムに通塔して目的化合物を吸着させ、次いでメタノール、アセトンなどで溶出する。そして、例えばセファデックスLH-20、トヨパールHW40などを用いたゲルろ過、オクタデシル基結合型シリカゲル(ODS)などを用いたカラムクロマトグラフィーや高速液体クロマトグラフィー、シリカゲルカラムクロマトグラフィーなどにより単離精製し、本発明の化合物を得ることができる。
　また、化合物（Ａ）は、例えば特公平5-79080号、「ザ・ジャーナル・オブ・アンチバイオティクス(The Journal of Antibiotics)」、1988年、41巻、p.409-410などに記載の方法によっても得ることができる。
　更にその誘導体である化合物（Ａ１）～（Ａ１５）は例えば特公平8-5909号などに記載の方法に準じて得ることができる。
　本発明の化合物の中には、幾何異性体、光学異性体などの立体異性体、互変異性体などが存在し得るものもあるが、本発明化合物および神経幹細胞増殖促進剤は、これらを含め、全ての可能な異性体およびそれらの混合物を包含する。
　本発明の化合物の塩を取得したいとき、本発明の化合物が塩の形で得られるときはそのまま精製すればよく、また、遊離の形で得られるときは、本発明の化合物を適当な溶媒に溶解または懸濁し、酸または塩基を加えることにより塩を形成させて単離、精製すればよい。
　また、本発明の化合物およびその薬学的に許容される塩は、水または各種溶媒との付加物の形で存在することもあるが、これらの付加物も本発明に包含される。
　本発明の神経幹細胞増殖促進剤は、神経幹細胞の増殖を促進する物質を含有し、該神経幹細胞の増殖を促進する物質としては、例えばPenicillium sp. CND1007株が産生する化合物などがあげられ、それらは上記の方法により得ることができる。より具体的には、例えば、上記の化合物（Ａ）～（ＢＢ）、（Ａ１）～（Ａ１５）などがあげられる。
　本発明の化合物および本発明の神経幹細胞増殖促進剤に含有される化合物の具体例を第１表～第５表に示す。ただし、本発明の化合物などはこれらに限定されるものではない。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000013
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000014
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000015
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000016
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000017
　上記第１表～第５表に示された化合物のうち、例えばPenicillium sp. CND1007株が産生する化合物であり、その化学構造として、下記式（α）に示す基本骨格を有する化合物が好ましく、下記式（α）のＡ環部分にヒドロキシを有する化合物がより好ましい。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000018
　より具体的には、例えば、化合物Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｈ、Ｊ、Ｌ、Ｕ、Ｖ、Ｗ、Ｘなどが好ましく、化合物Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｕ、Ｖ、Ｗ、Ｘなどがより好ましい。
　次に、本発明の神経幹細胞増殖促進剤および神経幹細胞の製造方法について説明する。
　本発明の神経幹細胞増殖促進剤は、in vitroにおいて、神経幹細胞と接触させたとき、該神経幹細胞の増殖を促進することができる。
　幹細胞とは、複数の異なる種類の細胞に分化する多分化能と、対称的または非対称的な分裂によって新たな幹細胞を生み出す自己複製能とを有する細胞をいう。これに対し、ある分化の系譜に入り、限られた回数の分裂の後に分化を遂げるように運命づけられた細胞は前駆細胞と呼ばれる。しかし、神経幹細胞と神経前駆細胞またはグリア前駆細胞とを厳密に区別することは困難であるため、本発明では、神経前駆細胞、およびグリア前駆細胞を含めて神経幹細胞と称する。
　神経幹細胞は、特に限定されないが、脳の成体神経幹細胞が好ましい。
　脳は、いずれの動物の脳であってもよいが、好ましくは哺乳動物、より好ましくはラット、マウス、サル、ヒトなどの脳をあげることができる。
　動物から成体神経幹細胞を取得する方法としては、例えば“ザ・ジャーナル・オブ・ニューロサイエンス(The Journal of Neuroscience)、1999年、19巻、p.8487-8497”、“ジーンズ・アンド・デベロップメント(Genes and Development)、1996年、10巻、p.3129-3140”などに記載の方法に準じて、外科的手法によって成体動物から脳を摘出して、脳細胞粗抽出液を調製し、該粗抽出液から成体幹細胞を濃縮する方法をあげることができる。
　また、ヒトから成体神経幹細胞を取得する方法としては、例えば“エクスペリメンタル・セル・リサーチ(Experimental Cell Research)、2003年、289巻、p.378-383”に記載の方法に準じて、バイオプシーによって神経疾患患者の側脳室壁から組織を採取して、脳細胞粗抽出液を調製し、該抽出液から成体幹細胞を濃縮する方法をあげることができる。
　本発明の神経幹細胞増殖促進剤は、in vitroにおいて神経幹細胞と接触させ、該神経幹細胞を培養することにより神経幹細胞の増殖を促進させ、培養物から該神経幹細胞を採取することを特徴とする神経幹細胞の製造法に用いることができる。
　In vitroで本発明の神経幹細胞増殖促進剤を用いる場合、本発明の神経幹細胞の増殖促進作用を有する化合物またはその薬学的に許容される塩を、該化合物またはその薬学的に許容される塩を溶解することができる溶液に溶解して用いることが好ましい。該溶液としては、例えば水、ジメチルスルホキシド（DMSO）などをあげることができる。また、リン酸緩衝食塩水（PBS）などの各種緩衝液などに溶解して用いることもできる。
　本発明の神経幹細胞増殖促進剤存在下で成体神経幹細胞を培養する場合、6.25×104個／cm2程度の成体神経幹細胞に対して、該神経幹細胞増殖促進剤を1 pmol/L～1 mmol/Lの濃度で作用させることが好ましい。成体神経幹細胞と本発明の神経幹細胞増殖促進剤を接触させ、37℃で5％ＣＯ２雰囲気下、1～14日間、2日おきに全量または部分量培地交換しながら静置培養することで神経幹細胞の増殖を促進させることができる。
　該培地は、神経幹細胞の増殖促進を妨げない培地であればいずれの培地でもよいが、例えば1％のN-2添加物（インビトロジェン社製）を含むDMEM／F12培地（インビトロジェン社製）などを用いるのが好ましい。
　また、上記培養により取得される神経幹細胞を、本発明の神経幹細胞増殖促進剤を含有せず例えば1 nmol/L～1 mmol/Lのオールトランスレチノイン酸、1 nmol/L～1 mmol/Lのフォルスコリン、または0.1 ng/mL～1 mg/mLの血小板由来成長因子（PDGF）などを含有する培地で、37℃で5％ＣＯ２雰囲気下、1～14日間、2日おきに全量または部分量培地交換しながら静置培養することでニューロンへ分化させることができる。
　該培地は、ニューロンへの分化を妨げない培地であればいずれの培地でもよいが、例えば1％のN-2添加物（インビトロジェン社製）を含むDMEM／F12培地（インビトロジェン社製）などを用いるのが好ましい。
　さらに、上記培養により取得される神経幹細胞を、本発明の神経幹細胞増殖促進剤を含有せず、例えば0.1 ng/mL～1 mg/mLの白血病阻止因子（LIF）、または0.1 ng/mL～1 mg/mLの骨形成因子－２（BMP-２）などを含有する培地で、37℃で5％ＣＯ２雰囲気下、1～14日間、2日おきに全量または部分量培地交換しながら静置培養することでグリア細胞へ分化させることができる。
　該培地は、グリア細胞への分化を妨げない培地であればいずれの培地でもよいが、例えば1％のN-2添加物（インビトロジェン社製）を含むDMEM／F12培地（インビトロジェン社製）などを用いるのが好ましい。
　上記培養により取得される神経幹細胞、ニューロン、またはグリア細胞は、培地から回収し、神経疾患患者の障害部位へ外科的手法で移植することにより該神経疾患の治療に用いることができる。該神経疾患としては、例えばパーキンソン病、アルツハイマー病、ダウン症、脳血管障害、脳卒中、脊髄損傷、トリプレットリピート病、多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症、多発性ニューロパチー、てんかん、不安障害、統合失調症、鬱病、躁鬱病などをあげることができる。
　次に、代表的な化合物の増殖促進作用について試験例により具体的に説明する。以下の試験例は、例示の目的のみに提供される。従って、本発明の範囲は、下記試験例に限定されるものではない。
試験例1：神経幹細胞の増殖促進作用（１）
　下記の参考例１記載の方法で取得したラット成体神経幹細胞株ANSC-7細胞を、N-2添加物［5 μg/mLインシュリン（シグマ社製）、100 μg/mLウシアポトランスフェリン（シグマ社製）、6.3 ng/mLプロゲステロン（シグマ社製）、1.6 μg/mLプトレシン（シグマ社製）および5.2 ng/mLセレン酸ナトリウム（シグマ社製）］および抗生物質混合液［0.05 U/mLペニシリン、0.05 μg/mLストレプトマイシン（インビトロジェン社製）］を添加したDMEM／F12培地（インビトロジェン社製）（以下、アッセイ培地と称する）に1.7×105 個／mLの濃度で懸濁し、ポリオルニチンおよびラミニンで表面加工した９６穴プレート（コースター社製）に0.1 mLずつ播種して、37℃で5％ＣＯ２雰囲気下、一晩培養した。その後、50 μLの培養上清を除去し、アッセイ培地で終濃度の２倍になるように段階希釈した試験化合物、またはDMSO（陰性コントロール）を１ウェルあたり50 μL添加した。96時間培養後、50 μLの培養上清を除去し、4℃に冷却した15％中性緩衝ホルマリン液（和光純薬工業社製）を１ウェルあたり50 μL加え、１時間静置した。その後、0.3％ Triton X-100（ナカライテスク社製）を含むPBS（以下、TBST）を用いて２回洗浄し、0.5％ Triton X-100を含むPBSで希釈した5％スキムミルク溶液で3.3 μmol/Lに調製したヘキスト33342（ナカライテスク社製）を50 μL／ウェルで添加し、暗所、4℃で一晩、核を標識した。100 μL／ウェルのTBSTで2回、続いてPBSで1回洗浄した後、100 μL／ウェルのPBSに浸し、核染色された細胞の蛍光強度を蛍光光度計FDSS6000（浜松ホトニクス社製）で測定した。細胞を播種しないウェルの測定値を0％、陰性コントロールの測定値を100％とし、試験化合物添加群における相対値を算出した。
　化合物Ａ、ＣおよびＥは、それぞれ0.32 μmol/Lで150％以上の増殖促進活性を示した。また、化合物Ａ１、Ａ２、Ａ３およびＡ５は、それぞれ0.32 μmol/Lで160％以上の増殖促進活性を示した。更に、化合物Ｂ、ＤおよびＦは、それぞれ1.0 μmol/Lで140％以上の増殖促進活性を示した。
試験例２：神経幹細胞の増殖促進作用（２）
　下記の参考例１記載の方法で取得したラット成体神経幹細胞株ANSC-7細胞を、アッセイ培地に1.7×105 個／mLの濃度で懸濁し、ポリオルニチンおよびラミニンで表面加工した９６穴プレート（コースター社製）に0.1 mLずつ播種して、37℃で5％ＣＯ２雰囲気下、一晩培養した。その後、50 μLの培養上清を除去し、アッセイ培地で終濃度の2倍になるように段階希釈した試験化合物、またはDMSO（陰性コントロール）を１ウェルあたり50 μL添加した。96時間培養後、生細胞数測定試薬SF（ナカライテスク）を該培養液中に１ウェルあたり10 μL添加した。37℃で3時間、5％ＣＯ２インキュベーター内で培養後、1分間撹拌し、マイクロプレート分光光度計Emax（モレキュラー・デバイス社製）を用いて490 nmの吸光度（対照波長655 nm）を測定した。細胞を播種しないウェルの測定値を0％、陰性コントロールの測定値を100％とし、試験化合物添加群における相対値を算出した。
　化合物Ａ、Ｃ、ＥおよびＬは、それぞれ0.32 μmol/Lで130％以上の増殖促進活性を示した。また、化合物Ｂ、Ｄ、Ｆ、ＨおよびＫは、それぞれ1.0 μmol/Lで130％以上の増殖促進活性を示した。更に、化合物Ｊは、3.2 μmol/Lで125％以上の増殖促進活性を示した。
試験例３：神経幹細胞の増殖促進作用（３）
　試験は、試験例２と同様にして行った。化合物ＵおよびＶは、それぞれ１nmol/Lで120％以上の増殖促進活性を示し、化合物ＷおよびＸは、それぞれ10 nmol/Lで120％以上の増殖促進活性を示した。また、化合物Ｍは、0.32 μmol/Lで120％の増殖促進活性を示し、化合物Ｎは1 μmol/Lで120％の増殖促進活性を示した。更に、化合物Ｙ、ＡＡおよびＢＢは、それぞれ3.2 μmol/Lで120％の増殖促進活性を示した。
［参考例１］　ラット脳からの成体神経幹細胞の単離と培養
　７週齢のSprague Dawley ratをエーテル麻酔によって眠らせた後に断頭し、頭頂部より頭蓋骨を切開して脳を摘出した。摘出した脳から脳室周囲部位を含む組織を顕微鏡下で眼科用のはさみとピンセットを用いて分離した。脳室周囲部位を含む組織は眼科用はさみとメスを用いて1 mm3程度の断片にした後、2.5 U/mLのパパイン、250 U/mLのDNase（いずれもWorthington, Freehold, NJ社製）および1 U/mLの中性プロテアーゼ（Dispase、ベーリンガー・マンハイム社製）を含む5 mLのハンクス緩衝液（HBSS緩衝液；インビトロジェン社製）中で37℃、30分間消化反応を行なった。該反応により得られた細胞と組織の混合物を10％の胎仔牛血清（ハイクローン社製）を含むDMEM（インビトロジェン社製）で3回洗浄後、10％の胎仔牛血清を含むDMEMに溶解し、10 μmのナイロンメッシュを用いて未消化物を除去した。
　得られた細胞粗抽出液を、10 cmの培養皿上で10％の胎仔牛血清を含むDMEM／F12培地（インビトロジェン社製）を用いて37℃のインキュベーター中で１晩培養した。翌日、培地を1％のN-2添加物（インビトロジェン社製）と20 ng/mLのFGF2（ペプロテック社製）を含むDMEM／F12に置換して培養を開始した。3日に一度、培地の半分を新しい1％のN-2添加物と20 ng/mLのFGF2を含むDMEM／F12に置換し、培養を継続した。
　小型細胞の小さなコロニーが形成されたら1％のトリプシンで30秒から1分間程度処理し、剥がれた細胞を回収した。該細胞は、10 μg/mLのポリオルニチン（シグマ社製）を用いて室温で一晩、および5 μg/mLのマウスEHS腫瘍由来ラミニン（ベクトン・ディッキンソン社製）を用いて37℃で一晩コートしたマルチウェルの培養皿（フィッシャー・サイエンティフィク社製）上に撒き、培養を継続した。
　上記培養を続けることで、小型の突起を有し、厚みのある小型細胞が濃縮された。本細胞を成体神経幹細胞として上記の実験（試験例１～３）に使用した。
　以下、本発明を実施例および参考例によりさらに具体的に説明するが、本発明の範囲はこれらの実施例に限定されることはない。
　なお、下記実施例中の各化合物の物理化学データは、以下の機器類によって測定したものである。プロトン核磁気共鳴スペクトルでは、化合物および測定条件によって交換性プロトンが明瞭には観測されないことがある。シグナルの多重度の表記としては通常用いられるものを用いるが、brとは見かけ上幅広いシグナルであることを表す。
　1H NMRおよび13C NMR：Bruker DMX500 (500 および125 MHz)、JEOL Alpha400 (400および100 MHz)またはJEOL Lambda 300 (300および75 MHz)
　FAB-MS：JEOL JMS-HX/HX110A
　ESI-MS：Micromass ZMD
化合物Ａ～Ｇ、ＩおよびＫ～Ｔの製造
　第一種培地および第二種培地として、グルコース(20 g/L)、マッシュポテト(30 g/L)、および乾燥酵母エキス(5 g/L)を組成とする培地(pH 6.5)を用い、主発酵培地として、スクロース(30 g/L)、可溶性デンプン(20 g/L)、Corn Steep Liquor(CSL)(30 g/L)、および炭酸カルシウム(5 g/L)を組成とする培地(pH 5.0)を用いた。Penicillium sp. CND1007株を含む寒天一片を、70 mL容試験管に入れた第一種培地(10 mL)に植菌し、28℃で72時間振盪培養を行った。次に第一種培養液を、2 L容三角フラスコに入れた第二種培地(475 mL)に１本あたり25 mLずつ植菌し、同様に72時間振盪した。続いて第二種培養液を、30 L容ジャーファーメンター３基に分注した主発酵培地(約54 L)に1基あたり900 mLずつ植菌し、25℃で8日間攪拌培養(回転数250 rpm)を行った。また、第二種培養液を、2 L容三角フラスコ20本に分注した主発酵培地(約10 L)に1本あたり25 mLずつ植菌し、25℃で8日間攪拌培養(回転数220 rpm)を行った。
　得られた発酵培養液(64 L)に濾過助剤(ラジオライト#600、昭和化学工業社)を10重量%の割合で添加後、吸引ろ過により培養濾液と菌体とに分けた。分別した菌体に15 Lのメタノールを加え、室温で２回抽出した。抽出液(30 L)を10 Lまで減圧濃縮し、2 LのダイヤイオンHP20（三菱化学社製）を充填したカラムに通塔して目的化合物を吸着させた。水、40%メタノールおよび70%メタノールで洗浄した後、100%メタノールおよび30%アセトン／メタノールで目的化合物を溶出させた。溶出液(6 L)を1 Lまで減圧濃縮した後、クロロホルム(1 L)で３回抽出した。抽出液を減圧濃縮して得られた残渣(15 g)を500 mLのシリカゲルを充填したカラムに通塔し、n-ヘキサン、酢酸エチル、メタノールおよびそれらの混合溶媒を用いて段階的に溶出させた。各溶出液は、薄層クロマトグラフィーによって含有成分の検出を行ない、同一成分を含む溶出液を合一することにより、20～40% 酢酸エチル／n-ヘキサン溶出区（画分１）、60% 酢酸エチル／n-ヘキサン溶出区（画分２）、60～80% 酢酸エチル／n-ヘキサン溶出区（画分３）、80％酢酸エチル／n-ヘキサン～酢酸エチル溶出区（画分４）、酢酸エチル～25%メタノール／酢酸エチル溶出区（画分５）、25%メタノール／酢酸エチル溶出区（画分６）に分画した。
　画分１(2.3 g)を、中性アルミナ(50 mL)を充填したカラムに通塔し、酢酸エチルで溶出させることにより、混在する高級脂肪酸類を除去した。溶出液を濃縮して得られた残渣(502 mg)を分取高速液体クロマトグラフィー[カラムSunFireTM Prep C18 OBD 10 μm(Waters社), Φ19×250 mm、カラム温度 40℃、流速 10 mL/min、85～100％メタノール水溶液で段階的に溶出]で分離精製することにより、化合物Ｃ(57.0 mg)、化合物Ｇ(12.6 mg)および化合物Ｋ(36.0 mg)をそれぞれ得た。
　画分２(300 mg)を、20 mLのシリカゲルを充填したカラムに通塔し、n-ヘキサンと酢酸エチルの混合溶媒で溶出させた。目的化合物を含む画分を集めて濃縮し、得られた残渣(200 mg)を分取高速液体クロマトグラフィー[カラムSunFireTM Prep C18 OBD 10 μm, Φ19×250 mm、カラム温度 40℃、流速 10 mL/min、85～100％メタノール水溶液で段階的に溶出]により分離精製し、化合物Ｌ(15.4 mg)、化合物Ｂ(21.1 mg)、化合物Ｄ(40.0 mg)、および化合物Ｅ(44.6 mg)をそれぞれ得た。
　画分３(1.5 g)を、分取高速液体クロマトグラフィー[カラムSunFireTM Prep C18 OBD 10 μm, Φ19×250 mm、カラム温度 40℃、流速 10 mL/min、85～100％メタノール水溶液で段階的に溶出]により分離精製し、化合物Ｂ(9.2 mg)および化合物Ｆ(23.3 mg)をそれぞれ得た。
　画分４(4.95 g)を、メタノールから再結晶することにより、化合物Ａ(4.0 g)を得た。
　画分５(1.17 g)を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー(メタノール／クロロホルムおよびメタノール／酢酸エチル)、次いで分取高速液体クロマトグラフィー[カラムSunFireTM Prep C18 OBD 10 μm, Φ19×250 mm、カラム温度 40℃、流速 10 mL/min、40～100％メタノール水溶液で段階的に溶出]により分離精製し、化合物Ｒ(5.3 mg)、化合物Ｓ(4.5 mg)および化合物Ｔ(10.4 mg)をそれぞれ得た。
　画分６(4.01 g)を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー(メタノール／酢酸エチル)、アルミナカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル）および分取高速液体クロマトグラフィー[カラムSunFireTM Prep C18 OBD 10 μm, Φ19×250 mm、カラム温度 室温、流速 10 mL/min、45～95％アセトニトリル水溶液で段階的に溶出]により分離精製し、化合物Ｉ(113.0 mg)、化合物Ｍ(3.4 mg)、化合物Ｎ(0.7 mg)、化合物Ｏ(2.0 mg)、化合物Ｐ(6.1 mg)および化合物Ｑ(7.1 mg)をそれぞれ得た。
化合物Ｈ、Ｊの製造
　Penicillium sp. CND1007株を含む寒天一片を、70 mL容試験管に入れた実施例１に記載の第一種培地(10 mL)に植菌し、28℃で72時間振盪培養を行った。この第一種培養液を70 mL容試験管に入れた実施例１に記載の第二種培地(10 mL)に0.5 mLずつ植菌し、同様に72時間振盪した。得られた第二種培養液を300 mL容三角フラスコに入れた実施例１に記載の主発酵培地(50 mL)に5 mLずつ60本（合計3 L）植菌し、25℃で5日間攪拌培養(回転数220 rpm)を行った。
　得られた発酵培養液(3 L)に濾過助剤を10重量%の割合で添加後、吸引濾過を行って培養濾液と菌体とを分けた。分別した菌体にメタノール(2 L)を加えて充分に攪拌抽出し、吸引濾過機により濾過した。残渣にメタノール／アセトン(1／1)を2 L加え、再度、抽出操作を行った。抽出液を併合して、減圧下で濃縮後、450 mLのダイヤイオンHP-20を充填したカラムに通塔して目的化合物を吸着させた。30%メタノール水溶液(0.9 L)および70%メタノール水溶液(1.35 L)で洗浄後、メタノールおよびメタノール／アセトン(7／3)各1.35 Lで目的化合物を溶出させた。それぞれの溶出液を減圧下で濃縮し、250 mLの80%メタノール水溶液および250 mLの70%メタノール水溶液とした。それぞれを100 mLのヘキサンで2回洗浄し、合一後、水を加えて40%メタノール水溶液(900 mL)とした。次いで、得られた水溶液をクロロホルムで抽出し2.21 gの粗抽出物を得た。得られた粗抽出物をメタノールに溶解し、そこに少量のシリカゲルを加えメタノールを留去することにより粗抽出物をシリカゲルに吸着させた。200 mLのシリカゲルを充填したカラムの上に、上記のシリカゲルに吸着させた粗抽出物を重層し、ヘキサン／酢酸エチル(9／1)およびクロロホルム各500 mLで洗浄後、メタノール／クロロホルムの混合溶媒で展開した。0.67%メタノールおよび1.0%メタノールで溶出される画分を濃縮して得られた600.3 mgの褐色物質をメタノールに溶解し、生じた結晶を除去した母液について、同様に分取高速液体クロマトグラフィー[カラムSunFireTM Prep C18 OBD 10 μm, Φ19×250 mm、カラム温度 40℃、流速 10 mL/min、メタノール／アセトニトリル／水(30／40／30)で溶出]で分離精製し、保持時間26.5分に溶出する化合物Ｈ(2.1 mg)を得た。さらに、同様に分取高速液体クロマトグラフィー[カラムSunFireTM Prep C18 OBD 10 μm, Φ19×250 mm、カラム温度 40℃、流速 10 mL/min、メタノール／アセトニトリル／水(40／40／20)で溶出]で分離精製し、保持時間11.5分に溶出する化合物Ｊ(1.0 mg)を得た。
　上記実施例１および２で得られる化合物Ａ～Ｔの物理化学的データは以下の通りである。
化合物Ａの物理化学的データ
FAB マススペクトル(m/z)：443 [M+H]＋, 465 [M+Na]＋.
1H-NMR:δ(ppm, CD3OD)  0.85 (3H, s), 1.00 (1H, ddd, J = 13.4, 13.4, 3.7 Hz), 1.03 (3H, d, J = 6.8 Hz), 1.03 (3H, d, J = 6.8 Hz), 1.15 (1H, m), 1.28 (1H, dddd, J = 12.7, 12.7, 5.3, 3.3 Hz), 1.33 (1H, m), 1.35 (3H, s), 1.37 (1H, m), 1.57 (1H, dd, J = 15.3, 12.8 Hz), 1.58 (1H, m), 1.60 (1H, m), 1.69 (1H, m), 1.74 (1H, m), 1.75 (2H, m), 1.78 (1H, m), 1.79 (1H, m), 1.85 (1H, m), 1.87 (1H, m), 1.93 (1H, d, J = 13.3 Hz), 1.95 (1H, m), 2.00 (1H, m), 2.17 (1H, d, J = 9.3 Hz), 2.25 (1H, m), 2.28 (1H, s), 2.32 (1H, m), 3.30 (1H, m), 3.47 (1H, m), 3.93 (1H, br.s), 4.69 (1H, d, J = 1.3 Hz), 4.75 (1H, s), 5.36 (1H, s).
13C-NMR:δ(ppm, CD3OD)  13.21, 22.31, 22.31, 22.64, 27.63, 29.19, 29.71, 30.39, 31.43, 34.88, 35.16, 36.07, 38.19, 39.01, 40.69, 41.07, 49.56, 50.14, 55.40, 57.96, 60.04, 62.07, 71.47, 74.54, 86.95, 106.98, 107.96, 157.09.
化合物Ｂの物理化学的データ
FAB マススペクトル(m/z)：427 [M+H]＋, 409 [M‐H2O+H]＋.
高分解能FAB マススペクトル(m/z)：
　　実測値　427.3185
　　理論値　427.3212 (C28H43O3として).
1H-NMR:δ(ppm, CD3OD)  0.78 (3H, s), 1.04 (3H, d, J = 6.8 Hz), 1.04 (3H, d, J = 6.9 Hz), 1.12 (1H, ddd, J = 13.7, 13.7, 3.6 Hz), 1.25 (1H, m), 1.35 (3H, s), 1.37 (1H, m), 1.39 (1H, m), 1.40 (1H, m), 1.69 (1H, m), 1.71 (1H, m), 1.76 (1H, m), 1.78 (2H, m), 1.78 (2H, m), 1.83 (1H, m), 1.84 (1H, m), 1.84 (1H, m), 1.88 (1H, m), 2.00 (2H, m), 2.01 (1H, m), 2.18 (1H, d, J= 9.4 Hz), 2.25 (1H, m), 2.26 (1H, m), 2.32 (1H, br.s), 3.51 (1H, m), 4.40 (1H, s), 4.71 (1H, d, J = 1.3 Hz), 4.76 (1H, s), 5.17 (1H, s), 5.59 (1H, m).
13C-NMR:δ(ppm, CD3OD)  13.57, 22.33, 22.33, 24.21, 27.79, 28.17, 30.39,30.60, 32.00, 35.19, 35.19, 35.29, 38.26, 38.48, 41.18, 41.20, 49.77, 49.84, 57.33, 60.40, 71.47, 75.52, 87.64, 106.99, 107.03, 120.45, 135.06, 157.11.
化合物Ｃの物理化学的データ
FAB マススペクトル(m/z)：437 [M+Na]＋, 397 [M‐H2O+H]＋.
高分解能FAB マススペクトル(m/z)：
　　実測値　397.3475
　　理論値　397.3471 (C28H45Oとして)
　　実測値　437.3334
　　理論値　437.3395 (C28H46O2Naとして)
1H-NMR:δ(ppm, CD3OD)  0.70 (3H, s), 0.81 (3H, s), 1.03 (3H, d, J = 6.9 Hz), 1.03 (3H, d, J = 6.9 Hz), 1.09 (1H, m), 1.25 (1H, m), 1.26 (3H, s), 1.29 (1H, m), 1.36 (1H, m), 1.37 (1H, m), 1.47 (1H, m), 1.51 (1H, m), 1.54 (1H, m), 1.58 (1H, m), 1.61 (1H, m), 1.62 (1H, m), 1.63 (1H, m), 1.65 (1H, m), 1.66 (1H, m), 1.74 (1H, m), 1.74 (1H, m), 1.76 (2H, m), 1.78 (1H, m), 1.83 (1H, m), 1.84 (1H, m), 2.05 (1H, m), 2.11 (1H, m), 2.11 (1H, m), 2.25 (1H, m), 3.50 (1H, m), 4.67 (1H, d, J = 1.4 Hz), 4.73 (1H, s), 5.18 (1H, m).
13C-NMR:δ(ppm, CD3OD)  13.43, 14.10, 22.41, 22.41, 22.57, 23.30, 23.63, 25.96, 29.97, 30.83, 32.12, 35.24, 35.34, 38.35, 38.70, 41.28, 41.63, 43.64, 44.65, 50.83, 56.58, 59.69, 71.58, 75.90, 106.76, 118.96, 140.51, 157.76.
化合物Ｄの物理化学的データ
FAB マススペクトル(m/z)：395 [M‐H2O+H]＋.
高分解能FAB マススペクトル(m/z)：
　　実測値　395.3316
　　理論値　395.3314 (C28H43Oとして)
1H-NMR:δ(ppm, CD3OD)  0.76 (3H, s), 0.85 (3H, s), 1.03 (3H, d, J = 6.9 Hz), 1.03 (3H, d, J = 6.9 Hz), 1.09 (1H, m), 1.24 (1H, m), 1.25 (1H, m), 1.38 (1H, m), 1.41 (1H, m), 1.48 (1H, m), 1.62 (1H, m), 1.67 (1H, m), 1.70 (1H, m), 1.75 (1H, m), 1.77 (1H, m), 1.80 (2H, m), 1.81 (1H, m), 1.83 (1H, m), 1.85 (1H, m), 2.12 (1H, m), 2.14 (1H, m), 2.14 (1H, m), 2.21 (1H, m), 2.22 (1H, m), 2.25 (1H, m), 2.28 (1H, m), 3.51 (1H, m), 4.48 (1H, m), 4.68 (1H, d, J = 1.2 Hz), 4.75 (1H, s), 4.88 (1H, s), 4.92 (1H, d, J = 0.7 Hz), 5.86 (1H, m).
13C-NMR:δ(ppm, CD3OD)  13.28, 16.73, 22.30, 22.35, 22.53, 31.00, 32.20, 34.73, 35.08, 35.44, 37.73, 38.28, 38.75, 40.86, 41.46, 41.61, 44.85, 51.44, 56.90, 59.87, 71.55, 72.15, 107.19, 110.75, 120.48, 137.17, 150.20, 157.03.
化合物Ｅの物理化学的データ
FAB マススペクトル(m/z)：415 [M+H]＋、413 [M‐H]‐.
1H-NMR:δ(ppm, CD3OD)  0.72 (3H, s), 0.94 (3H, s), 0.99 (3H, d, J = 6.5 Hz), 1.02 (3H, d, J = 6.8 Hz), 1.03 (3H, d, J = 6.8 Hz), 1.17 (1H, dddd, J = 13.5, 10.7, 8.6, 4.8 Hz), 1.31 (1H, t, J= 9.5 Hz), 1.41 (1H, m), 1.43 (1H, m), 1.43 (1H, m), 1.46 (1H, m), 1.46 (1H, m), 1.46 (1H, m), 1.48 (1H, m), 1.59 (1H, dddd, J = 13.5, 10.9, 5.9, 2.7 Hz), 1.71 (1H, m), 1.73 (1H, m), 1.84 (1H, m), 1.93 (1H, ddd, J = 14.8, 10.2, 5.9 Hz), 2.03 (1H, m), 2.09 (1H, m), 2.13 (1H, m), 2.19 (1H, m), 2.21 (1H, m), 2.24 (1H, m), 2.30 (1H, ｍ), 2.41 (1H, m), 2.50 (1H, dd, J = 12.8, 3.4 Hz), 3.56 (1H, m), 4.66 (1H, d, J = 1.3 Hz), 4.72 (1H, s).
13C-NMR:δ(ppm, CD3OD)  11.48, 17.11, 19.13, 22.27, 22.27, 22.44, 22.81, 30.00, 30.88, 31.39, 32.07, 33.92, 34.93, 35.16, 35.90, 36.98, 37.22, 45.55, 47.13, 50.10, 55.52, 70.68, 106.96, 119.65, 146.22, 157.67, 173.11.
化合物Ｆの物理化学的データ
FAB マススペクトル(m/z)：413 [M+H]＋, 395 [M‐H2O+H]+.
高分解能FAB マススペクトル(m/z)：
　　実測値　413.3389
　　理論値　413.3419 (C28H45O2として)
1H-NMR:δ(ppm, CD3OD)  0.63 (3H, s), 1.00 (3H, d, J = 6.4 Hz), 1.02 (3H, d, J = 6.8 Hz), 1.03 (3H, d, J = 6.8 Hz), 1.15 (1H, m), 1.18 (1H, m), 1.20 (3H, s), 1.33 (1H, m), 1.33 (1H, m), 1.40 (1H, m), 1.43 (1H, m), 1.43 (1H, m), 1.43 (1H, m), 1.52 (1H, m), 1.59 (1H, m), 1.63 (1H, m), 1.88 (1H, m), 1.89 (1H, m), 1.93 (1H, m), 1.95 (1H, m), 1.95 (1H, m), 2.09 (1H, dd, J= 16.2, 3.7 Hz), 2.10 (1H, m), 2.12 (1H, m), 2.14 (1H, m), 2.23 (1H, m), 2.38 (1H, m), 2.42 (1H, m), 2.42 (1H, m), 2.51 (1H, m), 3.56 (1H, m), 4.65 (1H, d, J = 1.5 Hz), 4.72 (1H, s).
13C-NMR:δ(ppm, CD3OD)  11.75, 17.49, 19.28, 22.28, 22.44, 26.00, 26.51, 30.23, 32.00, 32.10, 34.92, 35.49, 35.92, 36.94, 37.24, 38.21, 39.65, 42.53, 43.46, 43.73, 49.57, 54.74, 70.58, 106.93, 134.04, 157.74, 168.71, 201.45.
化合物Ｇの物理化学的データ
1H-NMR:δ(ppm, CDCl3)  4.72 (1H, s), 4.66 (1H, s), 2.50 (1H, m), 2.46 (1H, m), 2.43 (1H, m), 2.41 (1H, m), 2.39 (1H, m), 2.37 (1H, m), 2.23 (2H, m), 2.21 (1H, m), 2.17 (1H, m), 2.15 (1H, m), 2.11 (1H, m), 2.09 (1H, m), 1.98 (1H, m), 1.89 (1H, m), 1.74 (1H, ddd, J = 13.1, 13.1, 5.8 Hz), 1.58 (1H, m), 1.46 (1H, m), 1.45 (1H, m), 1.37 (3H, s), 1.35 (2H, m), 1.18 (1H, m), 1.17 (1H, m), 1.03 (3H, d, J = 6.8 Hz), 1.02 (3H, d, J = 6.8 Hz), 0.98 (3H, d, J = 6.6 Hz), 0.63 (3H, s).
13C-NMR:δ(ppm, CDCl3)  208.9 (s), 197.5 (s), 163.0 (s), 156.7 (s), 134.0 (s), 106.1 (t), 53.5 (d), 48.3 (d), 43.7 (t), 42.52 (s), 42.46 (d), 42.3 (t), 38.2 (s), 37.9 (t), 36.1 (d), 35.8 (t), 35.7 (t), 34.6 (t), 33.8 (d), 31.1 (t), 29.2 (t), 25.7 (t), 24.8 (t), 22.0 (q), 21.9 (q), 18.9 (q), 16.4 (q), 11.5 (q).
化合物Hの物理化学的データ
FAB マススペクトル(m/z)：481 [M+Na]＋, 459 [M+H]＋, 341 [M‐H2O+H]+ , 457 [M‐H]ー.
高分解能FAB マススペクトル(m/z)：
　　実測値　459.3080
　　理論値　459.3110 (C28H43O5として)
1H-NMR:δ(ppm, CD3OD)  0.95 (3H, s), 1.02 (1H, m), 1.04 (3H, d, J = 6.8 Hz), 1.04 (3H, d, J = 6.8 Hz), 1.15 (1H, m), 1.33 (1H, m), 1.38 (1H, m), 1.47 (3H, s), 1.53 (1H, dd, J = 13.0, 3.9 Hz), 1.59 (1H, m), 1.64 (1H, dd, J = 15.4, 12.9 Hz), 1.72 (1H, m), 1.74 (1H, m), 1.79 (1H, m), 1.84 (1H, m), 1.85 (1H, m), 1.89 (1H, m), 1.89 (2H, m), 1.90 (1H, m), 2.01 (1H, m), 2.08 (1H, m), 2.18 (1H, d, J = 2.5 Hz), 2.28 (1H, m), 2.36 (1H, m), 2.40 (1H, m), 2.44 (1H, dd, J =7.5, 6.3 Hz), 3.36 (1H, d, J=5.8 Hz), 3.47 (1H, m), 4.12 (1H, dd, J = 4.4, 2.2 Hz), 4.74 (1H, d, J= 1.2 Hz), 4.79 (1H, s).
13C-NMR:δ(ppm, CD3OD)  12.98, 20.95, 22.29, 22.29, 27.69, 29.68, 29.83, 31.49, 35.14, 35.53, 35.93, 36.87, 38.28, 38.57, 39.01, 41.21, 50.69, 53.52, 54.92, 54.98, 55.50, 63.93, 71.42, 71.47, 85.84, 107.33, 156.54, 180.61.
化合物Ｉの物理化学的データ
ESI-MS m/z 435 [M+H]+
1H NMR:δ(ppm, CDCl3, 400 MHz)  9.72 (1H, br.s), 7.52 (1H, d, J = 8.5Hz), 6.66 (1H, d, J = 8.5Hz), 5.62 (1H, br.s), 3.19 (1H, d, J = 10.2Hz), 3.14 (1H, ddd, J = 8.4, 8.4, 3.5Hz), 2.93 (1H, d, J = 17.2Hz), 2.78 (1H, d, J = 17.4Hz), 2.77 (2H, s), 2.69 (1H, d, J = 10.2Hz), 2.61 (1H, ddd, J = 12.2, 9.1, 4.7Hz), 2.39 (1H, dd, J = 17.2, 8.6Hz), 2.17 (1H, m), 2.16 (1H, m), 1.98 (1H, dd, J = 11.8, 2.6Hz), 1.95 (2H, m), 1.50 (3H, s), 1.50 (3H, s), 1.47 (1H, ddd, J = 12.2, 11.0, 7.0Hz), 1.31 (3H, s), 1.23 (3H, s).
13C NMR:δ(ppm, CDCl3, 100 MHz)  194.15 (s), 173.69 (s), 157.60(s), 141.45 (s), 134.29 (s), 126.85 (d), 121.38 (s), 109.83 (d), 105.31 (s), 103.19 (s), 79.61 (s), 65.34 (s), 62.46 (t), 55.95 (s), 53.50 (t), 48.81 (t), 46.18 (d), 34.31 (s), 31.96 (t), 29.24 (t), 27.91 (q), 27.33 (t), 26.70 (q), 26.64 (q), 24.73(q), 22.89 (t).
化合物Ｊの物理化学的データ
FAB マススペクトル(m/z)：413 [M‐H2O+H]+ , 395 [M‐2H2O+H]+.
高分解能FAB マススペクトル(m/z)：
　　実測値　413.3422
　　理論値　413.3419 (C28H45O2として)
1H-NMR:δ(ppm, CD3OD)  0.85 (3H, s), 1.01 (3H, s), 1.03 (3H, d, J = 6.8 Hz), 1.04 (3H, d, J = 6.8 Hz), 1.09 (1H, m), 1.24 (1H, m), 1.24 (1H, m), 1.28 (3H, s), 1.38 (1H, m), 1.40 (1H, m), 1.51 (1H, m), 1.56 (1H, m), 1.56 (1H, m), 1.57 (1H, m), 1.62 (1H, m), 1.66 (1H, m), 1.67 (1H, m), 1.68 (1H, m), 1.75 (1H, m), 1.79 (2H, m), 1.80 (1H, m), 1.83 (1H, m), 2.05 (1H, m), 2.06 (1H, m), 2.10 (1H, m), 2.25 (1H, m), 2.25 (1H, m), 3.50 (1H, m), 4.43 (1H, m), 4.67 (1H, d, J = 1.2 Hz), 4.73 (1H, s), 5.84 (1H, m).
13C-NMR:δ(ppm, CD3OD)  13.26, 17.36, 22.32, 22.41, 22.41, 25.76, 29.80, 31.04, 32.19, 35.28, 35.38, 37.53, 38.26, 38.75, 41.44, 42.88, 43.47, 44.27, 51.26, 59.79, 60.50, 71.56, 71.56, 75.68, 106.76, 120.74, 137.10, 157.76.
化合物Ｋの物理化学的データ
ESI マススペクトル(m/z)：393.4 [M‐H2O+H]+.
1H-NMR:δ(ppm, CDCl3)  0.82 (3H, s), 1.04 (6H, d, J = 6.8 Hz), 1.06 (3H, s), 1.29 (1H, ddd, J = 12.7, 12.7, 4.2 Hz), 1.47 (1H, ddd, J = 14.4, 14.4, 4.4 Hz), 1.53 (1H, m), 1.68 (1H, m), 1.93‐1.82 (7H, m), 2.37‐2.12 (11H, m), 4.53 (1H, m), 4.68 (1H, s), 4.76(1H, s), 4.91 (1H, s), 4.96 (1H, s), 5.83 (1H, m).
13C-NMR:δ(ppm, CDCl3)  12.3, 16.5, 21.5, 21.9, 22.0, 30.2, 33.4, 34.1, 34.5, 36.4, 38.2, 38.8, 39.5, 40.1, 42.8, 43.6, 44.2, 49.5, 58.8, 71.6, 106.5, 110.4, 118.9, 136.3, 148.4, 155.8, 211.6.
化合物Ｌの物理化学的データ
ESI マススペクトル(m/z)：425.4 [M +H]+ , 407.4 [M‐H2O+H]+.
1H-NMR:δ(ppm, CDCl3)  0.92 (3H, s), 1.03 (6H, d, J=6.8 Hz), 1.30 (1H, m), 1.38 (3H, s), 1.52 (1H, m), 2.12‐1.72 (13H, m), 2.34‐2.21 (4H, m), 2.47 (1H, ddd, J = 14.2, 4.6, 2.2 Hz), 3.64 (1H, m), 4.37 (1H, s), 4.72 (1H, s), 4.76 (1H, s), 5.33 (1H, s), 5.59 (1H, dd, J = 5.6, 2.4 Hz), 5.76 (1H, m).
13C-NMR:δ(ppm, CDCl3)  16.3, 21.9, 21.9, 22.2, 26.7, 27.5, 29.5, 32.0, 34.0, 34.7, 37.2, 38.5, 39.8, 40.9, 45.9, 48.4, 55.2, 58.8, 70.7, 74.4, 86.0, 105.9, 106.5, 118.3, 119.3, 133.6, 140.9, 155.7.
化合物Ｍの物理化学的データ
1H-NMR:δ(ppm, CDCl3, 400 MHz)  7.97 (1H, br s), 7.33 (1H, d, J = 7.8 Hz), 7.25 (1H, d, J = 7.8 Hz), 7.09 (1H, t, J = 7.8 Hz), 6.77 (1H, d, J = 16.4 Hz), 6.26 (1H, d, J = 16.4 Hz), 5.69 (1H, br s), 3.28 (3H, s), 3.21 (1H, d, J = 10.0 Hz), 3.15 (1H, m), 2.96 (1H, d, J= 17.3 Hz), 2.81 (1H, d, J = 17.3 Hz), 2.69 (1H, d, J = 10.0 Hz), 2.62 (1H, m), 2.40 (1H, m), 2.19 (2H, m), 1.98 (1H, m), 1.95 (2H, m), 1.50 (1H, m), 1.440 (3H, s), 1.436 (3H, s), 1.33 (3H, s), 1.25 (3H, s).
13C-NMR:δ(ppm, CDCl3, 100 MHz)  173.7 (s), 141.7 (s), 136.6 (d), 134.2 (s), 127.7 (s), 124.6 (d), 120.6 (s), 120.0 (d), 119.9 (d), 117.3 (d), 103.8 (s), 75.4 (s), 65.4 (s), 62.4 (t), 55.9 (s), 53.5 (t), 50.6 (q), 46.2 (d), 34.3 (s), 32.0 (t), 29.4 (t), 27.9 (q), 27.3 (t), 26.2 (q), 26.1 (q), 24.9 (q), 22.9 (t).
化合物Ｎの物理化学的データ
1H-NMR:δ(ppm, CDCl3, 500 MHz)  10.31 (1H, br s), 7.77 (1H, d, J= 7.6 Hz), 7.64 (1H, d, J = 7.6 Hz), 7.14 (1H, t, J = 7.6 Hz), 6.93 (1H, t, J = 1.2 Hz), 5.68 (1H, br s), 3.22 (1H, d, J = 10.1 Hz), 3.15 (1H, m), 2.99 (1H, d, J = 17.2 Hz), 2.84 (1H, d, J = 17.2 Hz), 2.71 (1H, d, J = 10.1 Hz), 2.62 (1H, m), 2.38 (1H, m), 2.25 (3H, d, J = 1.2 Hz), 2.21 (1H, m), 2.15 (1H, m), 2.05 (3H, d, J = 1.2 Hz), 2.00 (1H, m), 1.95 (2H, m), 1.46 (1H, m), 1.36 (3H, s), 1.26 (3H, s).
13C-NMR:δ(ppm, CDCl3, 125 MHz)  193.3 (s), 173.6 (s), 155.3 (s), 143.3 (s), 136.1 (s), 128.6 (s), 123.8 (d), 123.6 (d), 121.2 (s), 121.0 (d), 118.5 (d), 102.8 (s), 65.4 (s), 62.5 (t), 56.0 (s), 53.5 (t), 46.2 (d), 34.4 (s), 32.0 (t), 29.3 (t), 28.0 (q), 27.9 (q), 27.3 (t), 24.8 (q), 22.9 (t), 21.1 (q).
化合物Ｏの物理化学的データ
1H-NMR:δ(ppm,CDCl3, 400 MHz)  7.83 (1H, br s), 7.29 (1H, d, J= 7.3 Hz), 7.05 (1H, t, J = 7.3 Hz), 6.98 (1H, d, J = 7.3 Hz), 5.67 (1H, br s), 5.42 (1H, m), 3.57 (2H, m), 3.21 (1H, d, J = 10.3 Hz), 3.15 (1H, m), 2.96 (1H, d, J = 17.1 Hz), 2.81 (1H, d, J = 17.1 Hz), 2.69 (1H, d, J = 10.3 Hz), 2.62 (1H, m), 2.40 (1H, m), 2.19 (2H, m), 1.97 (3H, m), 1.86 (3H, s), 1.79 (3H, d, J = 1.2 Hz), 1.48 (1H, m), 1.27 (3H, s), 1.21 (3H, s).
13C-NMR:δ(ppm, CDCl3, 100 MHz)  174.0 (s), 141.1 (s), 135.6 (s), 133.2 (s), 127.0 (s), 123.6 (s), 122.5 (d), 121.7 (d), 119.9 (d), 115.9 (d), 103.5 (s), 65.5 (s), 62.4 (t), 56.0 (s), 53.5 (t), 46.1 (d), 34.3 (s), 32.0 (t), 30.9 (t), 29.5 (t), 27.9 (q), 27.3 (t), 25.7 (q), 25.0 (q), 22.9 (t), 18.0 (q).
化合物Ｐの物理化学的データ
ESI-MS m/z 450.2 [M+H]+, 448.1 [M‐H]-.
1H-NMR:δ(ppm, CDCl3, 400 MHz)  9.20 (1H, br s), 7.54 (1H, br s), 7.42 (1H, d, J = 8.3 Hz), 6.54 (1H, d, J = 8.3 Hz), 3.62 (1H, d, J = 8.8 Hz), 3.32 (1H, t, J = 8.8 Hz), 3.14 (1H, m), 2.74 (1H, d, J = 16.6 Hz), 2.68 (1H, d, J = 16.6 Hz), 2.64 (1H, m), 2.48 (1H, d, J = 8.8 Hz), 2.32 (1H, d, J = 15.1 Hz), 2.21 (1H, m), 2.07 (1H, d, J = 15.1 Hz), 1.97 (3H, m), 1.67 (1H, dd, J= 12.7, 8.8 Hz), 1.50 (1H, m), 1.49 (3H, s), 1.47 (3H, s), 0.98 (3H, s), 0.78 (3H, s).
13C-NMR:δ(ppm, CDCl3, 100 MHz)  193.7 (s), 183.3 (s), 174.6 (s), 159.3 (s), 142.9 (s), 133.0 (d), 121.5 (s), 109.6 (d), 104.9 (s), 79.4 (s), 66.9 (s), 63.3 (s), 63.0 (t), 61.7 (s), 53.6 (t), 48.8 (t), 48.6 (d), 47.1 (s), 40.2 (t), 32.0 (t), 26.8 (q), 26.74 (q), 26.70 (t), 23.9 (t), 22.9 (q), 21.1 (q).
化合物Ｑの物理化学的データ
ESI-MS m/z450.2 [M+H]+.
1H-NMR:δ(ppm, CDCl3, 400 MHz)  10.54 (1H, s), 7.67 (1H, br s), 7.43 (1H, d, J = 8.3 Hz), 6.49 (1H, d, J = 8.3 Hz), 3.60 (1H, d, J= 8.8 Hz), 3.16 (1H, t, J = 7.8 HZ), 3.11 (1H, m), 2.86 (1H, d, J= 16.8 Hz), 2.63 (1H, m), 2.55 (1H, d, J = 16.8 Hz), 2.48 (1H, d, J= 8.8 Hz), 2.29 (1H, d, J = 15.4 Hz), 2.20 (1H, m), 2.08 (1H, d, J= 15.4 Hz), 1.96 (3H, m), 1.76 (3H, s), 1.65 (1H, dd, J = 12.7, 7.8 Hz), 1.50 (1H, m), 1.44 (3H, s), 0.94 (3H, s), 0.81 (3H, s).
13C-NMR:δ(ppm, CDCl3, 100 MHz)  196.7 (s), 182.3 (s), 174.8 (s), 159.5 (s), 147.0 (s), 134.2 (d), 118.3 (s), 108.3 (d), 103.9 (s), 66.8 (s), 64.2 (s), 63.2 (s), 62.9 (t), 56.9 (s), 53.5 (t), 51.5 (t), 48.7 (d), 47.2 (s), 40.2 (t), 32.1 (t), 26.73 (t), 26.68 (q), 23.92 (t), 23.88 (q), 23.1 (q), 21.0 (q).
化合物Ｒの物理化学的データ
ESI-MS m/z 442.2 [M-H2O+H]+, 458.2 [M‐H]-.
1H-NMR:δ(ppm, CDCl3, 400 MHz)  8.33 (1H, dd, J = 8.1, 1.5 Hz), 7.79 (1H, ddd, J = 8.3, 7.1, 1.5 Hz), 7.71 (1H, d, J = 8.3 Hz), 7.54 (1H, d, J = 7.8 Hz), 7.53 (1H, ddd, J = 8.1, 7.1, 1.5 Hz), 7.33 (1H, ddd, J = 7.8, 7.6, 1.2 Hz), 7.30 (1H, d, J = 7.3 Hz), 7.10 (1H, ddd, J = 7.6, 7.6, 1.2 Hz), 6.06 (1H, br s), 5.88 (1H, m), 5.28 (1H, s), 4.91 (1H, br s), 4.80 (1H, q, J = 6.6 Hz), 2.76 (1H, dd, J= 14.7, 3.7 Hz), 2.45 (1H, dd, J = 14.7, 9.0 Hz), 1.81 (3H, d, J= 6.6 Hz), 1.53 (3H, s), 1.42 (3H, s).
13C-NMR:δ(ppm, CDCl3, 125 MHz)  175.2 (s), 169.6 (s), 160.4 (s), 150.7 (s), 146.9 (s), 138.0 (s), 137.5 (s), 134.8 (d), 130.2 (d), 127.6 (d), 127.2 (d), 125.2 (d), 124.0 (d), 120.5 (s), 115.8 (d), 78.4 (d), 74.1 (s), 64.8 (s), 52.0 (d), 49.5 (d), 39.5 (t), 26.4 (q), 25.4 (q), 17.4 (q).
化合物Ｓの物理化学的データ
ESI-MS m/z 458.2 [M+H]+, 456.2 [M‐H]-.
1H-NMR:δ(ppm, CDCl3, 500 MHz)  8.29 (1H, dd, J = 7.9. 1.1 Hz), 7.79 (1H, ddd, J = 8.3, 7.1, 1.2 Hz), 7.73 (1H, dd, J = 8.3, 1.2 Hz), 7.50 (1H, ddd, J = 7.9, 7.1, 1.2 Hz), 7.49 (1H, d, J = 7.9 Hz), 7.34 (1H, d, J = 7.6 Hz), 7.28 (1H, ddd, J = 7.9, 7.7, 1.2 Hz), 7.20 (1H, br s), 7.06 (1H, ddd, J = 7.7, 7.6, 1.0 Hz), 5.74 (1H, dd, J = 8.0, 3.3 Hz), 5.21 (1H, s), 2.95 (1H, dd, J = 15.2, 3.3 Hz), 2.90 (1H, dd, J = 15.2, 8.0 Hz), 2.08 (3H, s), 1.39 (3H, s), 136 (3H, s).
13C-NMR:δ(ppm, CDCl3, 100 MHz)  175.4 (s), 170.6 (s), 160.9 (s), 150.2 (s), 146.7 (s), 137.8 (s), 137.5 (s), 135.0 (d), 130.2 (d), 128.0 (d), 127.8 (d), 127.0 (d), 125.2 (d), 124.3 (d), 120.7 (s), 115.6 (d), 81.2 (s), 79.1 (d), 74.8 (s), 65.1 (s), 52.8 (d), 42.1 (t), 27.3 (q), 26.0 (q), 25.0 (q).
化合物Ｔの物理化学的データ
ESI-MS m/z 444.2 [M+H]+, 442.1 [M‐H]-.
1H-NMR:δ(ppm, CDCl3, 400 MHz)  8.20 (1H, dd, J = 8.1, 1.2 Hz), 7.77 (1H, ddd, J = 7.1, 7.1, 1.5 Hz), 7.72 (1H, br s), 7.71 (1H, d, J= 7.1 Hz), 7.50 (1H, ddd, J = 8.1, 7.1, 1.2 Hz), 7.36 (1H, d, J = 7.6 Hz), 7.30 (1H, d, J = 7.3 Hz), 7.24 (1H, ddd, J = 7.6, 7.6, 1.2 Hz), 7.08 (1H, ddd, J = 7.6, 7.3, 1.0 Hz), 5.61 (1H, dd, J = 4.9, 2.2 Hz), 4.79 (1H, d, J = 1.2 Hz), 4.49 (1H, br s), 4.40 (1H, q, J= 6.8 Hz), 3.34 (1H, dd, J = 15.4, 4.9 Hz), 2.56 (1H, dd, J = 15.4, 2.2 Hz), 2.11 (3H, s), 1.59 (3H, d J = 6.8 Hz).
13C-NMR:δ(ppm, CDCl3, 100 MHz)  170.2 (s), 169.0(s), 160.1 (s), 149.7 (s), 146.8 (s), 138.7 (s), 136.3 (s), 135.1 (d), 130.2 (d), 127.9 (d), 127.8 (d), 126.9 (d), 125.8 (d), 123.4 (d), 120.3 (s), 116.4 (d), 82.6 (d), 77.3 (s), 71.6 (s), 63.2 (d), 54.1 (d), 37.4 (t), 24.8 (q), 17.3 (q).
化合物Ｕ、Ｖ、ＷおよびＸの製造
　フラスコ種培地としては、グルコース(20 g/L)、マッシュポテト(30 g/L)、および乾燥酵母エキス(5 g/L)を組成とする培地(pH 6.5)を用い、発酵培地としては、スクロース(30 g/L)、可溶性デンプン(20 g/L)、Corn Steep Liquor(CSL)(30 g/L)、麦芽エキス(20 g/L)、および炭酸カルシウム(5 g/L)を組成とする培地(pH 5.0)を用いた。Penicillium sp. CND1007株の胞子懸濁液(3 x 108個/mL)約2 mLを、250 mL容三角フラスコに入れた第一種培地(50 mL)に植菌し、25℃で48時間振盪培養(撹拌数:220 rpm)を行った。次に第一種培養液の全量(約50 mL)を2 L容三角フラスコに入れた第二種培地(400 mL)に植菌し、同様に25℃で24時間振盪培養(撹拌数:220 rpm)を行った。続いて第二種培養液の全量(約390 mL)を30 L容ジャーファーメンターに入れた発酵培地(15 L)に植菌し、25℃で24時間通気攪拌培養(撹拌数:100 rpm; 通気流量:10L/min)を行った。続いて第三種培養液(約3.9 L)を200 L容ジャーファーメンターに入れた主発酵培地(130 L)に植菌し、25℃で144時間通気攪拌培養(回転:150 rpm; 通気流量:75L/min)を行った。
　得られた発酵培養液(約120 L)に濾過助剤(ラジオライト#600、昭和化学工業社)を10重量%の割合で添加後、吸引ろ過により培養濾液と菌体とに分けた。分別した菌体に30 Lのメタノールを加え、室温で２回抽出した。抽出液(60 L)に水(120 L)を加えて希釈し、5 LのダイヤイオンHP20（三菱化学社製）を充填したカラムに通塔して目的化合物を吸着させた。33%メタノール(2 L x 4)および66%メタノール(2 L x 4)で洗浄した後、100%メタノール(2 L x 4)、33%アセトン／メタノール(2 L x 4)および100%アセトン(2 L)で目的化合物を溶出させた。溶出液(約18 L)を約5 Lまで減圧濃縮した後、水(約5 L)を加えて希釈し、クロロホルム(10 L)で２回抽出した。抽出液を減圧濃縮して得られた残渣(138 g)を2 Lのシリカゲルを充填したカラムに通塔し、n-ヘキサン(2 L x 2)、25% 酢酸エチル/n-ヘキサン(2 L x 2)、50% 酢酸エチル/n-ヘキサン(2 L x 2)、75% 酢酸エチル/n-ヘキサン(2 L x 2)、酢酸エチル(2 L x 2)、25% メタノール/酢酸エチル(2 L x 2)、および50% メタノール/酢酸エチル(2 L x 2)を用いて段階的に溶出させた。50%および75%酢酸エチル/n-ヘキサン溶出液を減圧濃縮して得られる残渣(16.6 g)をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(500 mL容; 0～100%酢酸エチル/n-ヘキサン)によって分画し、化合物Ｕ、Ｖ、ＷおよびＸを含む画分(4.88 g)を得た。化合物Ｕ、Ｖ、ＷおよびＸを含む画分(4.88 g)を分取高速液体クロマトグラフィー[カラムSunFireTM Prep C18 OBD 10 μm(Waters社), Φ19×250 mm、カラム温度 40℃、流速 10 mL/min、85～100％メタノール水溶液またはアセトニトリル水溶液で段階的に溶出]によって分離精製することにより、化合物Ｕ(1.7 mg)、化合物Ｖ(2.9 mg)、化合物Ｗ(10.7 mg)、および化合物Ｘ(3.4 mg)をそれぞれ得た。
化合物Ｅ、Y、Z、AA、およびBBの製造
　実施例３記載の方法に順じて得られた発酵培養液(120 L)を吸引ろ過により培養濾液と菌体とに分けた。分別した菌体に30 Lのメタノールを加え、室温で２回抽出した。抽出液(60 L)に水(120 L)を加えて希釈し、5 LのダイヤイオンHP20（三菱化学社製）を充填したカラムに通塔して目的化合物を吸着させた。33%メタノール(2 L x 4)および66%メタノール(2 L x 4)で洗浄した後、100%メタノール(2 L x 4)、33%アセトン／メタノール(2 L x 4)および100%アセトン(2 L x 3)で目的化合物を溶出させた。溶出液(約22 L)を約8 Lまで減圧濃縮した後、水(約7 L)を加えて希釈し、クロロホルム(10 L)で３回抽出した。抽出液を減圧濃縮して得られた残渣(81.3 g)を2.5 Lのシリカゲルを充填したカラムに通塔し、n-ヘキサン(2 L x 3)、25% 酢酸エチル/n-ヘキサン(2 L x 2)、50% 酢酸エチル/n-ヘキサン(2 L x 2)、75% 酢酸エチル/n-ヘキサン(2 L x 2)、酢酸エチル(2 L x 2)、25% メタノール/酢酸エチル(2 L x 2)、および50% メタノール/酢酸エチル(2 L x 2)を用いて段階的に溶出させた。50%酢酸エチル/n-ヘキサン溶出液を減圧濃縮して得られる残渣(2.4 g)にメタノールを添加し、析出した固体をろ取して、化合物Ｅ(約400 mg)を得た。次いで、ろ液を分取高速液体クロマトグラフィー[カラムSunFireTM Prep C18 OBD 10 μm(Waters社), Φ19×250 mm、カラム温度 40℃、流速 10 mL/min、85～100％アセトニトリル水溶液で段階的に溶出]によって分離精製することにより、化合物Ｙ(38.8 mg)、化合物Ｚ(12.1 mg)、化合物ＡＡ (23.4 mg)、および化合物ＢＢ (9.4 mg)をそれぞれ得た。
　上記実施例３および４で得られる化合物Ｕ～ＢＢの物理化学的データは以下の通りである。
化合物Ｕの物理化学的データ
1H NMRδ(ppm, CDCl3, 500 MHz)  4.73 (1H, s), 4.66 (1H, d, J = 1.4 Hz), 3.63 (1H, m), 2.49 (1H, m), 2.40 (1H, m), 2.26 (1H, m), 2.23 (1H, m), 2.21 (1H, m), 2.20 (1H, m), 2.09 (1H, m), 2.00 (1H, ddd, J= 13.1, 3.3, 3.3 Hz), 1.95 (1H, m), 1.91 (1H, m), 1.90 (1H, m), 1.74 (1H, m), 1.72 (1H, m), 1.63 (1H, m), 1.58 (1H, m), 1.51 (1H, m), 1.49 (1H, m), 1.47 (1H, m), 1.44 (1H, m), 1.34 (1H, ddd, J = 13.1, 2.9, 2.9 Hz), 1.28 (1H, m), 1.21 (1H, m), 1.20 (1H, m), 1.03 (3H, d, J = 6.8 Hz), 1.02 (3H, d, J= 6.9 Hz), 0.97 (3H, d, J = 6.7 Hz), 0.93 (3H, s), 0.85 (3H, s).
13C NMRδ(ppm, CDCl3, 125 MHz)  169.4 (s), 156.6 (s), 140.3 (s), 129.9 (s), 106.2 (t), 70.6 (d), 56.7 (d), 49.8 (d), 47.0 (d), 44.3 (s), 36.4 (t), 34.8 (d), 34.42 (t), 34.40 (t), 33.9 (2C, d & s), 31.4 (t), 30.9 (t), 30.3 (t), 27.8 (t), 22.6 (t), 22.0 (q), 21.9 (q), 20.7 (t), 19.0 (q), 18.8 (q), 13.2 (q).
化合物Ｖの物理化学的データ
1H NMRδ(ppm, CDCl3, 500 MHz)  5.76 (1H, m), 4.74 (1H, s), 4.67 (1H, d, J = 1.4 Hz), 3.64 (1H, m), 2.48 (1H, m), 2.43 (1H, dd, J = 12.7, 3.4 Hz), 2.35 (1H, m), 2.30 (2H, m), 2.24 (1H, m), 2.16 (1H, m), 2.12 (1H, m), 2.08 (1H, m), 1.94 (1H, m), 1.93 (1H, m), 1.76 (1H, m), 1.67 (1H, m), 1.63 (1H, m), 1.60 (1H, m), 1.59 (1H, m), 1.49 (1H, m), 1.47 (1H, m), 1.45 (1H, m), 1.23 (1H, m), 1.04 (3H, d, J = 6.7 Hz), 1.031 (3H, d, J= 6.8 Hz), 1.030 (3H, s), 0.98 (3H, d, J = 6.2 Hz), 0.87 (3H, s).
13C NMRδ(ppm, CDCl3, 125 MHz)  170.1 (s), 156.6 (s), 141.6 (s), 140.7 (s), 121.9 (s), 121.1 (d), 106.2 (t), 70.2 (d), 57.1 (d), 46.9 (s), 46.1 (d), 36.4 (t), 35.8 (t), 34.7 (s), 34.6 (t), 33.9 (2C, d), 33.4 (t), 30.9 (t), 30.8 (t), 30.1 (t), 22.0 (q), 21.9 (q), 21.2 (t), 18.9 (q), 17.5 (q), 15.6 (q).
化合物Ｗの物理化学的データ
1H NMRδ(ppm, CDCl3, 500 MHz)  4.71 (1H, s), 4.65 (1H, d, J = 1.4 Hz), 3.61 (1H, m), 2.36 (1H, t, J = 12.7 Hz), 2.35 (1H, t, J = 11.2 Hz), 2.22 (1H, m), 2.20 (1H, m), 2.09 (1H, m), 2.03 (1H, dd, J = 12.7, 3.4 Hz), 1.99 (1H, m), 1.92 (1H, m), 1.88 (1H, m), 1.87 (1H, m), 1.77 (1H, m), 1.62 (1H, m), 1.56 (1H, m), 1.55 (1H, m), 1.53 (1H, m), 1.50 (1H, m), 1.48 (1H, m), 1.44 (1H, m), 1.42 (1H, m), 1.41 (1H, m), 1.27 (1H, m), 1.17 (1H, m), 1.14 (1H, m), 1.11 (1H, m), 1.10 (1H, m), 1.08 (3H, s), 1.03 (3H, d, J = 6.8 Hz), 1.02 (1H, m), 1.01 (3H, d, J = 6.9 Hz), 0.96 (1H, m), 0.94 (3H, d, J = 6.6 Hz), 0.66 (3H, s).
13C NMRδ(ppm, CDCl3, 125 MHz)  212.1 (s), 156.8 (s), 106.1 (t), 70.8 (d), 55.3 (d), 54.9 (d), 50.0 (d), 48.9 (d), 46.9 (d), 46.1 (t), 42.6 (s), 38.8 (t), 38.0 (t), 36.1 (t), 36.0 (s), 35.6 (d), 34.7 (t), 33.8 (d), 31.1 (t), 31.0 (t), 28.4 (t), 25.0 (t), 22.0 (q), 21.91 (t), 21.89 (q), 18.8 (q), 12.1 (q), 11.9 (q).
化合物Ｘの物理化学的データ
1H NMRδ(ppm, CDCl3, 500 MHz)  5.92 (1H, d, J= 15.8 Hz), 5.58 (1H, dd, J = 15.8, 8.8 Hz), 4.84 (1H, s), 4.82 (1H, s), 3.61 (1H, m), 2.54 (1H, m), 2.35 (2H, t, J = 12.2 Hz), 2.18 (1H, m), 2.12 (1H, m), 2.03 (1H, dd, J = 12.2, 3.2 Hz), 1.97 (1H, m), 1.85 (1H, m), 1.77 (1H, m), 1.73 (1H, m), 1.63 (1H, m), 1.58 (1H, m), 1.52 (1H, m), 1.51 (1H, m), 1.50 (1H, m), 1.47 (1H, m), 1.46 (1H, m), 1.27 (1H, m), 1.21 (1H, m), 1.12 (1H, m), 1.10 (1H, m), 1.09 (3H, s), 1.08 (6H, d, J = 6.4 Hz), 1.06 (3H, d, J = 6.5 Hz), 1.02 (1H, m), 0.96 (1H, m), 0.69 (3H, s).
13C NMRδ(ppm, CDCl3, 125 MHz)  211.9 (s), 153.1 (s), 135.9 (d), 129.4 (d), 109.7 (t), 70.8 (d), 55.3 (d), 55.0 (d), 50.0 (d), 49.0 (d), 46.8 (d), 46.1 (t), 42.6 (s), 40.2 (d), 38.7 (t), 38.0 (t), 36.2 (t), 36.0 (s), 31.1 (t), 29.5 (d), 28.5 (t), 25.0 (t), 22.4 (q), 22.1 (q), 21.9 (t), 20.7 (q), 12.4 (q), 11.9 (q).
化合物Ｙの物理化学的データ
1H NMRδ(ppm, CDCl3, 500 MHz)  4.87 (1H, t, J= 2.7 Hz), 4.79 (1H, t, J = 6.8 Hz), 4.75 (1H, s), 4.68 (1H, d, J= 1.2 Hz), 3.67 (1H, m), 2.29 (1H, m), 2.24 (1H, m), 2.18 (1H, dd, J = 10.9, 7.7 Hz), 2.06 (1H, m), 2.01 (2H, m), 1.90 (1H, ddd, J = 13.3, 13.3, 5.9 Hz), 1.84 (1H, m), 1.83 (1H, m), 1.71 (1H, m), 1.67 (1H, m), 1.63 (1H, m), 1.61 (1H, m), 1.59 (2H, m), 1.53 (1H, m), 1.52 (1H, m), 1.41 (1H, dd, J= 13.1, 7.2 Hz), 1.37 (1H, m), 1.32 (3H, s), 1.26 (1H, m), 1.22 (3H, s), 1.19 (1H, m), 1.16 (1H, m), 1.034 (3H, d, J = 6.8 Hz), 1.032 (3H, d, J= 6.9 Hz), 0.71 (3H, s).
13C NMRδ(ppm, CDCl3, 125 MHz)  156.0 (s), 149.2 (s), 134.8 (s), 106.5 (t), 74.6 (s), 71.0 (d), 69.0 (d), 65.2 (d), 56.3 (d), 43.8 (d), 42.5 (s), 42.3 (t), 37.7 (t), 37.6 (t), 37.2 (s), 37.1 (d), 36.3 (t), 36.2 (t), 34.0 (d), 33.8 (t), 31.4 (t), 28.9 (t), 26.5 (q), 22.0 (q), 21.9 (q), 20.9 (q), 19.2 (t), 11.9 (q).
化合物Ｚの物理化学的データ
1H NMRδ(ppm, CDCl3, 500 MHz)  7.87 (1H, br s), 7.43 (1H, d, J = 7.7 Hz), 7.33 (1H, d, J = 8.0 Hz), 7.17 (1H, dd, J = 8.0, 7.2 Hz), 7.11 (1H, dd, J = 7.7, 7.2 Hz), 5.68 (1H, br s), 3.21 (1H, d, J = 10.3 Hz), 3.15 (1H, m), 2.96 (1H, d, J = 17.2 Hz), 2.81 (1H, d, J = 17.2 Hz), 2.70 (1H, d, J = 10.3 Hz), 2.62 (1H, m), 2.40 (1H, dd, J = 17.2, 8.6 Hz), 2.19 (1H, m), 2.16 (1H, m), 1.97 (1H, dd, J = 12.4, 3.2 Hz), 1.94 (2H, m), 1.48 (1H, m), 1.29 (3H, s), 1.22 (3H, s).
13C NMRδ(ppm, CDCl3, 125 MHz)  174.8 (s), 141.5 (s), 136.3 (s), 127.0 (s), 122.0 (d), 119.7 (d), 117.9 (d), 110.8 (d), 103.2 (s), 65.4 (s), 62.4 (t), 55.9 (s), 53.5 (t), 46.1 (d), 34.3 (s), 31.8 (t), 29.3 (t), 27.9 (q), 27.3 (t), 24.9 (q), 22.8 (t).
化合物ＡＡの物理化学データ
1H NMRδ(ppm, CDCl3, 500 MHz)  5.57(1H, d, J = 2.5 Hz), 5.27 (1H, dd, J = 15.3, 7.8 Hz), 5.16 (1H, dd, J = 15.3, 8.4 Hz), 3.94 (1H, m), 2.87 (1H, dd, J = 12.9, 9.0 Hz), 2.70 (1H, m), 2.68 (1H, m), 2.52 (1H, m), 2.50 (1H, m), 2.33 (1H, m), 2.23 (1H, m), 2.09 (1H, m), 1.93 (2H, m), 1.90 (1H, m), 1.87 (1H, m), 1.71 (1H, ddd, J = 13.1, 13.1, 5.3 Hz), 1.62 (1H, m), 1.54 (1H, m), 1.51 (1H, m), 1.49 (1H, m), 1.48 (1H, m), 1.44 (3H, s), 1.43 (1H, m), 1.04 (3H, d, J = 6.6 Hz), 0.92 (3H, d, J = 6.8 Hz), 0.88 (3H, s), 0.84 (3H, d, J = 6.8 Hz), 0.83 (3H, d, J = 6.8 Hz).
13C NMRδ(ppm, CDCl3, 125 MHz)  204.6 (s), 203.6 (s), 165.3 (s), 156.0 (s), 134.5 (d), 133.0 (d), 117.4 (d), 82.7 (s), 70.2 (d), 57.5 (d), 55.4 (d), 47.8 (t), 46.2 (s), 42.9 (d), 40.1 (d), 38.8 (t), 37.7 (t), 33.3 (t), 33.1 (d), 29.6 (t), 29.0 (t), 22.0 (t), 21.0 (q), 20.2 (q), 20.0 (q), 19.7 (q), 17.6 (q), 12.1 (q).
化合物ＢＢの物理化学データ
1H NMRδ(ppm, CDCl3, 500 MHz)  5.52(1H, d, J = 2.5 Hz), 5.27 (1H, dd, J = 15.3, 7.8 Hz), 5.16 (1H, dd, J = 15.3, 8.6 Hz), 4.47 (1H, m), 3.12 (1H, dd, J = 13.6, 3.7 Hz), 2.69 (1H, m), 2.52 (2H, m), 2.40 (1H, ddd, J = 13.6, 4.8, 1.6 Hz), 2.24 (1H, m), 2.18 (1H, m), 2.10 (1H, m), 2.06 (1H, m), 2.02 (1H, m), 1.90 (1H, m), 1.87 (1H, m), 1.72 (1H, m), 1.68 (1H, m), 1.61 (1H, m), 1.51 (1H, m), 1.49 (1H, m), 1.48 (1H, m), 1.46 (3H, s), 1.45 (1H, m), 1.04 (3H, d, J = 6.6 Hz), 0.92 (3H, d, J= 6.9 Hz), 0.89 (3H, s), 0.84 (3H, d, J = 6.8 Hz), 0.83 (3H, d, J= 6.8 Hz).
13C NMRδ(ppm, CDCl3, 125 MHz)  205.4 (s), 203.7 (s), 165.4 (s), 154.6 (s), 134.5 (d), 133.0 (d), 117.5 (d), 84.4 (s), 70.4 (d), 57.4 (d), 55.5 (d), 46.5 (t), 46.1 (s), 42.9 (d), 40.1 (d), 38.7 (t), 37.7 (t), 34.6 (t), 33.1 (d), 29.0 (t), 28.1 (t), 22.0 (t), 21.1 (q), 20.4 (q), 20.0 (q), 19.7 (q), 17.6 (q), 12.2 (q).
神経幹細胞の増殖促進剤
　常法により、化合物ＡのＤＭＳＯ溶液（0.1 mmol/L）を調製し、化合物Ａを含む神経幹細胞の増殖促進剤を得る。
神経幹細胞の増殖促進剤
　常法により、化合物ＣのＤＭＳＯ溶液（0.5 mmol/L）を調製し、化合物Ｃを含む神経幹細胞の増殖促進剤を得る。
神経幹細胞の増殖促進剤
　常法により、化合物ＥのＤＭＳＯ溶液（0.1 mmol/L）を調製し、化合物Ｅを含む神経幹細胞の増殖促進剤を得る。
［参考例２］　化合物Ａ１～Ａ１５およびＡの製造
　化合物Ａ１～Ａ１５は特公平8-5909に記載の方法により製造した。
［参考例３］　化合物Ａの製造
　化合物Ａは実施例１記載の方法により、該化合物の生産能を有するペニシリウム属に属する糸状菌（ペニシリウム・パキシリKAC-1843（微工研菌寄第8581号））を培養し、培養液から単離精製することにより得られた。
　本発明により、神経幹細胞および神経前駆細胞の増殖促進剤として有用なPenicillium sp. CND1007株が産生する化合物またはその関連化合物あるいはそれらの薬学的に許容される塩およびそれらを含有する神経幹細胞増殖促進剤などを提供することができる。

Claims (8)

  1. 　ペニシリウム・スピーシーズ（Penicillium sp.）CND1007株（FERM BP-10917）が産生する化合物またはその薬学的に許容される塩を有効成分として含有する神経幹細胞増殖促進剤。
  2. 　Penicillium sp. CND1007株が産生する化合物が下記式（Ａ）～（ＢＢ）のいずれかで表される化合物である請求項１記載の神経幹細胞増殖促進剤。
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000001
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000002
  3. 　請求項１または２記載の化合物またはその薬学的に許容される塩の存在下、神経幹細胞を培養して神経幹細胞を増殖させ、培養物中より神経幹細胞を採取することを特徴とする神経幹細胞の製造方法。
  4. 　下記式（Ｂ）～（ＢＢ）のいずれかで表される化合物またはその薬学的に許容される塩。
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000003
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000004
  5. 　Penicillium sp.CND1007株が産生する化合物またはその薬学的に許容される塩を神経幹細胞と接触させることを特徴とする神経幹細胞増殖促進方法。
  6. 　Penicillium sp. CND1007株が産生する化合物が請求項２記載の式（Ａ）～（ＢＢ）のいずれかで表される化合物である請求項５記載の方法。
  7. 　神経幹細胞増殖促進剤の製造のためのPenicilliumsp.CND1007株が産生する化合物またはその薬学的に許容される塩の使用。
  8. 　Penicillium sp. CND1007株が産生する化合物が請求項２記載の式（Ａ）～（ＢＢ）のいずれかで表される化合物である請求項７記載の使用。
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